AT393385B - Dispersionspolymere, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung - Google Patents

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Description

AT 393 385 B
Die Eifindung betrifft Dispersionspolymere, Verfehlen zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung, wobei die Dispersionspolymere aus Latexpartikeln bestehen, die nach einem Saatpolymerisationsverfahren derart hergestellt worden sind, daß das eingesetzte Saatpolymerisat noch einen Anteil von 5 bis 50 Gew. % nicht auspolymerisierter Monomere enthält und die Saatpolymerisation mit Monomeren durchgeführt wird, wobei mindestens ein Monomer eine Acetalgruppen enthaltende Verbindung ist.
Man gewinnt daraus biologisch aktive Dispersionspolymere, indem man biologisch aktive Substanzen, die über freie Aminogruppen verfügen, an reaktive, von der Aldehydfunktion abgeleitete Gruppen auf der Oberfläche der erfindungsgemäßen Dispersionspolymerteilchen bindet. Diese biologisch aktiven Latexkonjugate sind geeignet für serologische oder immunologische Bestimmungsverfahren.
Es ist bekannt, die Empfindlichkeit serologischer oder immunologischer Bestimmungsverfahren durch die Verwendung von Indikator- oder Trägerteilchen zu erhöhen, die mitdem entsprechenden immunologischen Reagenz beladen sind. Als Trägermaterial können z.B. rote Blutkörperchen oder Zellen einer Zellkultur verwendet werden. Auch Latexpartikel mit einem Durchmesser von 0,02 bis 5 pm werden hierfür eingesetzt
Aus der Europäischen Patentschrift EP-A2-80614 sind Latexpartikel bekannt die über Säureamidgruppen gebundene Acetal-Funktionen enthalten. In einem wäßrigen Medium vorgefertigte Latexkeme werden mit Vinylmonomeren, die über Säureamidgruppen gebundene Acetal-Funktionen enthalten, angequollen und diese Vinylmonomeie, die ausreichend wasserunlöslich sein müssen, können dann ggf. zusammen mit hydrophilen Monomeren, copolymerisiertwerden.DerartigeReagenzienlassen sich zurnephelometrischenundturbidimetrischen Bestimmung von Proteinen einsetzen.
Zu diesem Zweck werden Antikörper gegen das zu bestimmende Protein an den Latex gebunden. Nach entsprechender Verdünnung des antikörperbeladenen Latex kann das so entstandene Reagenz zur Messung eingesetzt werden: Nach Inkubation mit dem zu bestimmenden Antigen bilden sich Agglutinate, die nephelometrisch oder turbidimetrisch gemessen werden können. Die erhaltenen Streulichtsignale sind recht niedrig und erlauben daher nach diesem StandderTechnikkeinegutreproduzietbareMessung.EineSteigerungderNachweisempfindlichkeit des Reagenzes und damit verbunden auch eine Erhöhung der Streulichtsignale während der Umsetzung zwischen einem Reagenz und dem nachzuweisenden Antigen ist nach dem Stand der Technik nicht ohne weiteres möglich.
Es wurde nun überraschend gefunden, daß die geschilderten Nachteile überwunden werden können, wenn man Trägerpartikel verwendet, die nach eine: Methode helgestellt sind, die dadurch gekennzeichnet ist, daß man vorgefertigte, nicht vollständig auspolymerisierte Latexkerne verwendet, bei denen noch ein beträchtlicher Anteil dereingesetztenMonomerennichtpolymerisiertist, die also einen hohenRestmonomergehalt aufweisen. Diese nicht vollständig auspolymerisierten, und somit im Monomer, z. B. Styrol, gequollenen Latexkeme weiden in einem wäßrigen Medium mit Acryl- oder Methacrylmonomeren, die über Säureamidgruppen gebundene Acetalgruppen enthalten, gegebenenfalls zusammen mit Acryl- oder Methacrylsäuremonomeren, copolymerisiert
Gegenstand der Erfindung sind somit Dispersionen, die Trägerteilchen aus Latex enthalten, die nach dem Saatdispersionsverfahren derart hergestellt worden sind, daß in dem verwendeten Saatlatex nur 5-50 Gew. % Restmonomergehalt verbleiben und auf deren Oberfläche eine Monomerenmischung aufpolymerisiert wurde, die Monomere der Foimel I
worin η = 1 - 6; R j = H, CHg und R2 und Rß gleich oder unterschiedlich sind mit l^, R3=- (C^m - CHg, m = 0 - 7 oder -2-
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wobei X, Y, Z = (CI^pCH^ und p = 1 - 3 sind, mit X, Y, Z gleich oder unterschiedlich oder 1*2» = Arylrest und gegebenenfalls Croton- und/oder Acryl- und/oder Methacrylsäure sowie gegebenenfalls das Monom«, aus dem die Saatpolymere gebildet sind, also z. B. Styrol enthält.
Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung der Dispersionen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man zunächst eine Latexdispersionssaat herstellt, indem man Monomere, wie z. B. Styrol, so polymerisiert, daß nur 30-90 Gew. % der eingesetzten Monomeren auspolymerisiert werden und danach das überschüssige Monomer, durch ausgiebige Dialyse abtrennt und sodann eine Monomerenmischung aufpolymerisiert. Diese Mischung enthält Verbindungen mit endständigen Acetalen der Formel I und gegebenenfalls Croton- und/oder Acryl- und/oder Methacrylmonomere sowie Monomere, aus denen das Saatpolymer gebildet ist, z. B. Styrol. Vorzugsweise wird der Saatlatex so polymerisiert, daß nur40-80 % der vorgelegten Monomeren auspolymerisiert wurden. Besonders bevorzugt ist ein Polymerisations verfahren für den Saatlatex, für das 50-70 % der vorgegebenen Monomeren auspolymerisiert wurden.
Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren «hält man somit Polymerkeme, die noch 5-50 Gew. % Monomeres, bezogen auf das Polymer, enthalten. Bevorzugt sind Präparationen, die 10-40 Gew. % Monomeres, bezogen auf Polymeres, enthalten. Besonders bevorzugt sind Präparationen, die 20-30 Gew. % Monomeres, bezogen auf Polymeres, «ithalten.
Die Latexpartikel, die als Saatdispersion für die erfindungsgemäßen Dispersion«! eingesetzt werden, sollen nicht-filmbildende Polymerisate sein. Unter „nicht-filmbildend“ werden Polymer-Latexteilchen verstanden, die keinen Film bilden und unter den Anwendungsbedingungen nicht zusammenfließen. Polymerisate aus carbocyclischen aromatisch«! Monovinylidenmonomeren, wie Styrol, Vinyltoluol und Vinylnaphthalin sowie Mischungen dieser Monom«en untereinander und/oder mit Methylmethacrylat und Acrylnitril sind bevorzugt. Besonders bevorzugte Saatdispersionen sind Polystyrol-Latices. Die Herstellung einer Polystyrolsaatdisp«sion «folgt nach an sich bekannten Verfahren.
Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Dispersionspolyme ren wird grundsätzlich ein vorgefertigter Latex mit Partikeldurchmesser von 0,02 bis 2 pm, vorzugsweise 0,05 bis 0,5 pm, mitetwa20-80% der Menge eines Emulgators versetzt, der zur maximalen monomolekularen Bedeckung der Latexoberfläche notwendig wäre. Messungen zur Bestimmung der Emulgatormenge, die zu ein« maximalen Bedeckung d« Latexoberfläche führt, w«den mit Hilfe eines Tensiometers durchgeführt. Sie sind zum Beispiel von I. Phrma und S.-R. Chen im Journal of Colloid and Interface Science, Vol. 74 (1979), S. 90-102und «stmaligvonS.H.Maron,M.E. Eid« undLN.UlevitchimJoumal of Colloid Interface Sciences, Vol. 9 (1954), S. 89-104, publizi«t worden.
InFragekommendeEmulgator«isindbeispielsweisePolyglycoleth«mitlangkettig«i, aliphatischen Alkoholen, die vorzugsweise 10-20 Kohlenstoffatome aufweisen, octer Alkylphenol, deren Alkylrest vorzugsweise 6-12 Kohlenstoffatome enthält, od« von Dialkylphenolen oder Trialkylphenolen, deren Alkylreste vorzugsweise verzweigte Alkylreste mit jeweils 3-12 Kohlenstoffatomen darstellen. Beispiele hierfür sind Umsetzungsprodukte von Äthytenoxyd mit Laurylalkohol, Stearylalkohol, Oleylalkohol, Kokosfettalkohol, Octylphenol, Nonylphenol, Diisopropylphenol, Triisopropylphenol, Di-t-butylphenol und Tri-t-butylphenol. Ethylenoxid-Propylenoxid Blockcopolymerisate sind ebenfalls geeignet
Von den ionischen Emulgatoren sind vor allem anionische Emulgatoren geeignet, insbesondere Alkali- oder Ammoniumsalze von Alkylsulfonaten oder Alkylarylsulfonaten sowie von den entsprechenden Sulfaten, Phosphaten od« Phosphonaten, die gegebenenfalls Oxyethylen-Einheiten zwischen dem jeweiligen Kohlenwasserstofffest und der anionischen Gruppe aufweisen. Beispiele hierfür sind Natriumdodecylsulfat, Natriumlaurylsulfat, Natriumoctylphenolglykolethersulfat, Natriumdodecylbenzolsulfonat, Natriumlauryldiglykolsulfat, Ammonium-tri-t-butylphenolpentaglykolsulfat und Ammonium-tri-t-butylphenoloctaglykolsulfet Bevorzugt eingesetzt wird Natriumdodecylsulfat
Die Polymerisation erfolgt nach an sich bekannten Verfehlen in Gegenwart eines radikalbildenden Initiators, z. B. ein« Peroxid-Verbindung od« einer aliphatischen Azoverbindung. Der Initiator ist bevorzugterweise wass«löslich;« wird in einer Menge von 0,05 bis 10 Gew. %, vorzugsweise 0,1 bis 3 Gew. % eingesetzt (bezogen auf dieGesamtmengeder Monomer«!). Bekannteradikalbildende Initiatoren sind zum Beispiel Wasserstoffperoxid, -3-
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Alkali- oder Ammoniumsalze der Peroxydischwefelsäure oder der Peroxydiphosphorsäuie, zum Beispiel Natriumperoxydisulfat Kaliumperoxydisulfat und Ammoniumperoxydisulfat, ferner Alkylhydroperoxide wie t-Butylhydroperoxid,DialkylperoxidewieDi-t-butylperoxid,DiacylperoxidewieDiacetylperoxid,Dilauroylperoxid und Dibenzoylperoxid sowie Azodiisobuttersäurenitril, Azodicarbonamid und Azo-gamma,gamma'-bis-5 (4-cyanvaleriansäure). Bevorzugt eingesetzt werdet die Alkali- oder Ammoniumsalze der Peroxidischwefelsäure, wie Natrium-, Kalium- und Ammoniumperoxidisulfat
Das Oxidationsmittel wird ggf. zusammen mit einem Reduktionsmittel eingesetzt, insbesondere mit einem Alkalisalz oder Erdalkalisalz einerreduzierend wirkenden schwefelhaltigen Säure; vorzugsweise eignen sich Sulfite, Bisulfite, Pyrosulfite, Dithionite, Thiosulfate und Formaldehydsulfoxylate. Gleichfalls verwendbar sind auch 10 Glukose und Ascorbinsäure.
Als Acetalgruppen enthaltende Monomere werden die Verbindungen der Formel I eingesetzt, bevorzugt verwendet man Acryl- oder Methacrylamidoalkylaldehyd-di-alkylacetal mit Alkyl = (¾ bis Cg. Ganz besonders geeignet sind Acryl- oder Methacrylamidoacetaldehyd-di-n-pentylacetal.
Dem eine Verbindung der Formel I enthaltenden Monomerengemisch können bis zu 30 Gew. %, bezogen auf 15 die Gesamtmischung, Styrol, Vinylnaphthalin oder Vinyltoluol zugegeben werden. Außerdem kann das Monomerengemisch gegebenenfalls zusätzlich bis zu 30 Gew. %, bezogen auf die Gesamtmischung, Methacrylsäure, Acrylsäure oder Crotonsäure enthalten.
Der Saatdispersion wird das Monomerengemisch in Mengen von 90 bis 5 Gew. %; vorzugsweise 40 bis 10 Gew. %, bezogen auf die Gesamtmenge von Saatdispersion und Monomerenmischung zugegeben. 20 Wichtig für das Gelingen derPolymerisation in Anwesenheit des Saatpolymeren ist, daß die Monomerenmischung unter ständigem Rühren der Suspension der Latexkeme bei Polymerisationsbedingungen, d. h. bei einer Temperatur von +10 °C bis+120 °C, vorzugsweise+50 °C bis+90 °C, zugetropft wird. Während des Zutropfens zieht ständig die hinzugegebene Menge der Monomere auf die schon fertigen=Saatlatexpartikel auf, wird dort polymerisiert und bildet somit Polymere um den Latexpartikel. 25 Anschließend wird das Polymerisat von überschüssigen Monomeren, Resten von Initiator und Emulgator nach bekannten Verfahren befreit. Vorteilhafterweise unterwirft man das Polymerisat einer Dialyse, zum Beispiel gegen NaHCOj-Lösung (0,01 bis 0,05 Gew. %).
Zur Herstellung der erfindungsgemäßen, biologisch aktiven Dispersionen, nachfolgend auch als Latexkonjugat bezeichnet, wirdeineSuspension der oben beschriebenen saatpolymerisierten Latexpartikel auf einen pH-Wert unter 30 5, vorzugsweise unter 3, eingestellt und mit dem zu bindenden immunologisch aktiven Material, wie zum Beispiel
Antikörper, Antigene oder Haptene, inkubiert
Die labilen Bindungen zwischen einer Aminogruppe des Proteins und dem freigesetzten Aldehyd auf dem erfindungsgemäßen Latexpartikel werden nach bekannten Verfahren reduziert Bevorzugt wird eine Lösung von Natriumcyanborhydrid in neutralem Puffer hierfür verwendet Man trennt eventuell ungebundenes immunologisch 35 aktives Material oder andere Verunreinigungen aus dem Reaktionsansatz ab. Dies geschieht zweckmäßigerweise durch Zentrifugieren oder Waschen auf geeigneten Membranen.
Die erfindungsgemäßen, saatpolymerisierten Latices zeichnen sich durch besondere Stabilität aus. Sie eignen sich zur Herstellung empfindlicher Reagenzien. Die erfindungsgemäßen Reagenzien können durch Lyophilisation getrocknet werden. 40 Reagenzien, hergestellt nach dem Stand der Technik, zeigen bei nephelometrischer oder turbidimetrischer
Messung eine Reaktion mit dem nachzuweisenden Antigen unter Agglutination und somit Erhöhung des Streulichtsignals bzw. der Extinktion in der Meßküvette. So wurde z. B. ein Reagenz zur Bestimmung von C-ieaktivem Protein, einem wichtigenEntzündungsparameter, unter Verwendung von Kaninchen-Antikörpern gegen C-reaktives Protein (CRP) hergestellt. Wird dieses Reagenz mit unterschiedlichen CRP-Konzentrationen umgesetzt und die 45 Streulichtsignale in einem Nephelometer nach 30 min. Inkubationszeit gemessen, so erhält man eine Standardkurve, die mit zunehmender CRP-Konzentration höhere Streulichtsignale zeigt Eine derartige Standardkurve ist in Fig. 1 dargestellt. Man sieht deutlich, daß für die eingesetzten Konzentrationen an CRP nur niedrige Streulichtsignale gemessen werden können. Damit im Zusammenhang steht eine geringe Empfindlichkeit der Messung, die untere Nachweisgrenze des Reagenzes liegt bei ca. 288 pg/l CRP; d. h., CRP-Konzentrationen im Bereich zwischen 50 36 pg/l und 288 pg/l können nicht mehr erfaßt weiden.
Das erfindungsgemäße Reagenz, hergestellt durch Bindung von Antikörpern beispielsweise gegen CRP an Latexpräparationen, gewonnen durch Saatpolymerisation auf nicht auspolymerisierten, Restmonomeren enthaltenden Polymeren, zeigt dagegen eine viel stärkere Agglutinationsreaktion nach Umsetzung mit CRP. Wird dieses erfindungsgemäße Reagenz mit unterschiedlichen CRP-Konzentrationen umgesetzt und werden nach 30 min. 55 Inkubationszeit die Streu lichtsignale in einem Nephelometer gemessen, so erhält man eine Standardkurve, die schon bei niedrigen CRP-Konzentrationen hohe Streulichtsignale zeigt Eine derartige Standardkurve ist in Fig. 2 dargestellt Man sieht, daß die Empfindlichkeit des Reagenzes so hoch ist daß auch niedrige CRP-Konzentrationen -4-
AT393385B bis 36 |Jg/l gemessen werden kämen. Hinzu kommt, daß die Streulichtsignale für CRP-Konzentrationen zwischen 36und2300pg/l sehr vielhöher sindals für einReagenz nachdem StandderTechnik. Das heißt, dieReproduzierbarkeit der Messung ist sehr viel besser als nach dem Stand der Technik.
Weitere eifindungsgemäße Reagenzien mit entsprechenden vorteilhaften Eigenschaften »hält man, wenn die erfindungsgemäßen Latexpräparationen beispielsweise mit Antikörpern gegen alpha-Fetopiotein (AFP), Ferritin, Human Placental Lactogen (HPL), Thyroxine bindendes Globulin (TBG), Immunglobulin E, ß2-Microglobulin und Schwangerschaft spezifisches ßj-Glycoprotein, Human chorionic Gonadotropin (ßHCG), beladen werden.
Auch monoklonale Antikörper lassen sich zur Herstellung der erfindungsgemäßen Reagenzien vorteilhaft einsetzen. Gleichermaßen können Latexpräparationen mit bakteriellen oder viralen Proteinen wie z. B. Streptolysin O, Streptococcus B Antigen, H. Influenza Antigen, Pneumococcus Antigen, Lues Antigen, Toxoplasmen Antigenen, HBsAg, Rubella Antigen, Herpes Antigen undTetanus Antigen beladen werden und die entsprechenden Antikörper durch diese Antigen beladenen, erfindungsgemäßen Reagenzien nachgewiesen werden.
Schließlich können in gleicher Weise Latexpräparationen gemäß der Erfindung mit derivatisierten Haptenen, z. B. Hormonen oder Arzneimitteln, wie Thyroxin (T4), Trijodothyronin (Tg), Cortisol, Progesteron, Testosteron, Gentamycin und Digoxin beladen weiden, wodurch man biologisch aktive Dispersionspolymere, also die erfindungsgemäßen Reagenzien, erhält, mit denen man durch Inhibitionsteste, also unter gleichzeitiger Verwendung geeigneter Antikörper, die Konzentration der genannten Haptene messen kann.
Die erfindungsgemäßen Latexpräparationen sind einfach herzustellen und schonend mit empfindlichen immunologisch aktiven Materialien zu einem diagnostischen Reagenz zu verknüpfen.
DieLatexkonjugatekönneninallen diagnostischen Ver£ahreneingesetztwerden,dieTeilchengrößenveränderungen messen, beispielsweise in qualitativen und semiquantitativen Bestimmungen von Substanzen mit Hilfe von visuellen Latexagglutinationstesten sowie in nephelometrischen oder turbidimefrischen Bestimmungen von Spuienproteinen im direkten oder kompetitiven Agglutinationstest oder im Latex-Hapten-Inhibitionstest.
Beispiele 1. Herstellung von Saatpolvmerisat
In ein zylindrisches Glasgefäß, ausgestattet mit Gasein- und Gasauslaßrohr sowie einem Magnetrührstab wurden 310 ml stickstoffgesättigtes bidestilliertes Wasser gegeben. Man gab 500 mg Natriumstearat hinzu und löste dieses durch Rühren. Weiterhin wurden 1,5 ml Ammoniak, 25 %ig hinzugegeben. Der pH wurde kontrolliert und betrug 11,09. Durch mehrfaches Evakuieren und Füllen mit Stickstoff wurde das Polymerisationsgefäß sauerstofffei gemacht. Unter ständigem Rühren wurde die Detergenz-Lösung mit Hilfe eines Wasserbades auf+70 °C erwärmt.
Anschließend gab man 90 ml frisch destilliertes Styrol unter Stickstoff mit Hilfe eines Tropftrichters mit Druckausgleich in das Polymerisationsgefäß. Bei + 70 °C wurde 15 min. zur Emulgation des Styrols gerührt. Anschließend wurde die Temperatur auf + 90 °C angehoben und eine weitere Stunde gerührt. Danach wurden 67,5 mg Kaliumperoxydisulfat gelöst in 50 ml stickstoffgesättigtem destillierten Wasser hinzugegeben. Man ließ 80 min. bei + 90 °C rühren. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch durch einen Faltenfilter filtriert.
Die filtrierte Dispersion wurde anschließend gegen 101 0,01 %ige Ammoniumhydrogencarbonat-Lösung (mit 0,01 % NH4HCO3; 0,01 Gew. % NaNg; mit 10,5 ml Ammoniak25 Gew. % in 101 auf pH 10,0 eingestellt) 50 Stunden lang dialy siert. Man erhielt410 ml Dispersion mit einem Trockengehalt von 12,8 g/100 g Dispersion. Somit sind etwa 60 % des eingesetzten Monomeren polymerisiert worden. Durch eine Verlängerung der Polymerisationszeit ließ sich erwartungsgemäß der Anteil des polymerisierten Styrols erhöhen. Der Gehalt an Styrol wurde mittels Gaschromatographie bestimmt. Durch eine Reduktion der Polymerisationszeit ließ sich dagegen der Anteil des aus-polymeriserten Styrols reduzieren. 2. Saatpolvmerisation unter Verwendung des nach Beispiel 1 hergestellten Polymeren
In ein zylindrisches Glasgefäß, ausgestattet mit Gasein- und Gasauslaßrohr sowie einem Magnetrührstab wurden 156,3 ml einer Polystyrol-Latex-Dispersion mit einem Feststoffgehalt von 12,8 Gew. % sowie238,7 ml destilliertes Wasser und 250 mg Natriumdodecylsulfat gegeben und durch Rühren gelöst. Durch mehrfaches Evakuieren und Füllen mit Stickstoff wurde das Polymerisationsgefäß sauerstofffrei gemacht. Die Latex-Detergenzmischung wurde unter ständigem Rühren auf + 70 °C in einem Wasserbad erhitzt.
Es wurde eine Monomerenmischung, hergestellt aus 2 ml Styrol, 2 ml Methacrylamidoacetaldehyd-di-n-pentylacetal und 1 ml Methacrylsäuie unter Stickstoff hinzugegeben. Anschließend ließ man unter Rühren 1 Stunde bei ca. 20 °C emulgieren.
Dann wurde der Polymerisationsansatz im Wassetbad auf + 70 °C »wärmt Nach 15 min. Rühren bei + 70 °C wurde die Copolymerisation gestartet Hierzu gab man 5 ml einer Kaliumperoxydisulfatlösung (16 mg/ml destilliertem Wasser) hinzu. Die Temperatur des Polymerisationsansatzes wurde auf + 70 °C gehalten. Es wurde 5 Stunden bei -5-

Claims (10)

  1. AT 393 385 B der genannten Temperatur gerührt Die Polymerisation war damit beendet und die Dispersion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mittels Faltenfilter filtriert Man erhielt 395 ml einer Latex-Suspension. Diese wurde anschließend 17 Stunden lang gegen eine NaHCOb-Lösung (0,25 g/1, pH 8-8,2) dialysiert Man erhielt415 ml einer Latex-Dispersion mit einem Feststoffgehalt von 6,8 Gew. %.
  2. 3. Bindung von Anti-CRP-Antikörnem an ein erfindungsgemäßes Polymerisat An ein Polymerisat hergestellt nach Beispiel 2, wurden Anti-CRP-Antikörper gebunden. Das verwendete Polymerisat wurde mit destilliertem Wasser auf einen Feststoffgehalt von 5,8 Gew. % verdünnt Ein Antiserum, gewonnen durch Immunisierung von Kaninchen mit aufgereinigtem CRP wurde nach bekannten Verfahren als Gammafiraktion isoliert Es wurde anschließend ankonzentriert bis ein Proteingehalt von 10 mg/ml erreicht war. 0,5 ml des obengenannten Polymerisates wurden mit 0,05 ml der Anti-CRP-Antikörper-Lösung gemischt. Dann wurden 0,025 ml einer 20 %igen wäßrigen Lösung von Eikosaoxyethylen-sorbitanlaurylsäureester (Tween 20) hinzugegeben und das Ganze nochmals gemischt Hierzu gab man 0,01 ml 1 N HCl, so daß ein pH-Wert von ca 2 erreicht wurde. Nach einer Inkubationszeit von 30 min. bei Raumtemperatur setzte man 0,125 ml gesättigte wäßrige Natriumhydrogenphosphat-Lösung (pH 6,5) und 0,125 ml wäßrige Natriumcyanborhydrid-Lösung (25 mg/ml) hinzu undmischtegut durch. Anschließenderfolgte einelnkubationvon einerStundebeiRaumtemperatur. Dieser Beladungsansatz wurde sodann 30 min. mit ca. 50.000 g zentrifugiert (Beckman Zentrifuge, 20.000UpM). Der Überstand wurde verworfen. Der Rückstand wurde in 0,75 ml eines Glycin-NaCl-Puffers (0,1 Mol Glycin, 0,17 Mol NaCl, 0,5 % Eikosaoxyethylen-sorbitanlaurylsäureester (Tween 20), pH 8,2) resuspendiert Anschließend erfolgteeineUltraschall-Behandlung (Bronson SonyfierB 15) für 2 Sekunden. Das soredispergierte Reagenz wurde im Volumenverhältnis 1:80 mit dem zuvor genannten Glycin-NaCl-Puffer verdünnt und nochmals für 30 Sekunden mit Ultraschall behandelt
  3. 4. Messung von CRP-Konzentrationen in Serumproben Das nach Beispiel 3 durch Bindung von Anti-CRP-Antikörpem an erfmdungsgemäßen Latexpräparationen hergestellte Reagenz zur Bestimmung von CRP wurde zur Messung von CRP in Patientenseren eingesetzt Als Standard wurde der LN-CRP-Standard (human) (Fa. Behringweike AG) verwendet Dieser CRP-Standard enthielt laut Packungsbeilage 86 mg/I CRP. Der Standard wurde in Glycin-Kochsalz-Puffer (0,1 Mbl Glycin, 0,17 M NaCl, pH 8,2) zunächstauf 23 mg/1 verdünnt und dann stufenweise auf jeweils das doppelte Volumen weiterverdünnt Man erhielt so eine Standardreihe mit abnehmenden CRP-Konzentrationen. Zur Messung wurden 10 μΐ Standaidserumverdünnungmitl50pleinesReaktionspuffers(0,lMolGlycin,0,17MolNaCl,4%Polyethylenglykol (PEG) 6000,0,5 % Eikoraoxyethylen-sorbitanlaurylsäureester (Tween 20, pH 8,2) und mit 50 μΐ Latex-CRP-Reagenz hergestellt nach Beispiel 3 in BLN-Küvetten (Fa. Behringwerke AG) gemischt und 30 min. bei Raumtemperatur inkubiert Die Küvetten wurden dann im Lasemephelometer (Fa. Behringwerke AG) gemessen. Die Referenzkurve für die Messung der Standardseren wurde auf halblogarithmischem Papier gezeichnet und daran wurden die Meßwerte für die Patientenseren ausgewertet Eine typische Referenzkurve ist in Fig. 2 dargestellt PATENTANSPRÜCHE 1. Dispersionspolymere, dadurch gekennzeichnet daß auf Latexpartikel, welche einen Restmonomergehalt von 5 bis 50 Gew. %, bezogen auf die Latexpartikel enthalten (Saatpolymere), ein Monomerengemisch auf polymerisiert wurde, das mindestens eine der Acetalgruppen enthaltenden Verbindungen der Formel I
    Formel I -6- AT 393 385 B worin η = 1 bis 6; Rj = H, CH3 und R2 und R3 gleich oder unterschiedlich sind mit R2, R3 = -(CH2)m-CH3 m = 0 bis 7 oder
    wobei X,Y,Z = (CH2)p-CH3und p = 1 bis 3 sind,V mit X, Y, Z gleich oder unterschiedlich oder R2, R3 = Arylrest und gegebenenfalls Crotonsäure und/oder Acrylsäure und/oder Methacrylsäure und/oder carbocyclische, aroma-tische Monovinylidenmonomere enthält. 2. Verfahren zur Herstellung von Dispersionspolymeren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Monomer zu 30 bis 90 Gew. % polymerisiert, die Zusammensetzung auf einen Gehalt von 0,5 bis 50 Gew. % Polymer anreichert, worauf man auf die Mischung aus Monomeren und Polymeren mindestens eine Verbindung der Formel I und zusätzlich 0 bis 30 Gew. %, bezogen auf die Mischung, Acryl-, Methacryl- und/oder Crotonsäure und/oder 0 bis 30 Gew. %, bezogen auf die Gesamtmischung, carbocyclische aromatische Vinylidenmonomere aufpolymerisiert.
  4. 3. Dispersionspolymere nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Saatpolymer Polystyrol-Latex ist
  5. 4. Dispersionspolymere nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Saatpolymer einen Restmonomergehalt von 10 bis 40 Gew. %, bezogen auf das Polymere, aufweist.
  6. 5. Dispersionspolymere nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Monomere der Formel I Acryl- oder Methacrylamidoalkylaldehyd-di-alkyl-acetal mit Alkyl = bis Cg eingesetzt sind.
  7. 6. Dispersionspolymere nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Monomer der Formel I Methacrylamidoacetaldehyd-di-n-pentylacetal verwendet wird.
  8. 7. Diagnostisches Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß es biologisch aktive Dispersionspolymere enthält, die aus Dispersionspolymeren nach Anspruch 1 und daran gebundenen Antikörpern, Antigenen oder Haptenen bestehen.
  9. 8. Verwendung eines diagnostischen Mittels nach Anspruch 7 zum diagnostischen Nachweis von Antigenen, Antikörpern oder Haptenen.
  10. 9. Verwendung eines diagnostischen Mittels nach Anspruch 7 in nephelometrischem und turbidimetrischem Verfahren sowie für Partikelzählverfahren. Hiezu 2 Blatt Zeichnungen -7-
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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EP0080614A2 (de) * 1981-11-13 1983-06-08 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Ein Latex, biologisch aktive Latexkonjugate und Verfahren zu ihrer Herstellung

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