AR125466A1 - Composiciones y métodos de inserción dirigida de genes in vivo mediada por nucleasa para el tratamiento de trastornos genéticos - Google Patents

Abstract

Se proporciona un sistema dual de vectores para el tratamiento de un trastorno genético. El sistema incluye (a) un vector de edición génica que comprende un casete de expresión que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifican una nucleasa y secuencias regulatorias que direccionan la expresión de la nucleasa en una célula efectora que comprende un gen PCSK9; y (b) un vector de donante que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un producto exógeno para la expresión desde el sitio de PCSK9, donde la secuencia de ácidos nucleicos insertada no codifica PCSK9, donde el sistema comprende, además, secuencias que direccionan la nucleasa a sitios del gen PCSK9 nativo específicos, y donde el PCSK9 nativo en la célula efectora opcionalmente se elimina o se reduce luego de la dosificación con el sistema dual de vectores. Reivindicación 1: Un sistema para tratar un trastorno genético, el sistema caracterizado porque comprende: (a) un vector de edición de genes que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifica una nucleasa que se dirige al gen PCSK9; y (b) un vector donante que comprende un casete transgénico que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un transgén y secuencias reguladoras que dirigen la expresión del transgén en la célula efectora, comprendiendo el vector donante además los brazos 5’ y 3’ de recombinación dirigida por homología (HDR) al casete del transgén, en el que el transgén no es PCSK9. Reivindicación 2: El sistema según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además secuencias reguladoras que dirigen la expresión de la nucleasa en una célula efectora que comprende un gen PCSK9. Reivindicación 7: El sistema según la reivindicación 6, caracterizado porque el vector de edición de genes comprende además un sgRNA que comprende al menos 20 nucleótidos, que se une específicamente a un sitio objetivo en el gen PCSK9, siendo dicho sitio objetivo 5’ con respecto a un motivo adyacente al protoespaciador (PAM) que es reconocido específicamente por el Cas9. Reivindicación 8: El sistema según la reivindicación 6, caracterizado porque el vector donante comprende además un sgRNA que comprende una región semilla de al menos 20 nucleótidos, en el que el sgRNA se une específicamente a un sitio objetivo en el gen PCSK9, siendo dicho sitio objetivo 5’ con respecto a un motivo adyacente al protoespaciador. (PAM) que es específicamente reconocido por el Cas9. Reivindicación 9: El sistema según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, caracterizado porque comprende además un promotor de RNA polimerasa.