JPS5944266A - 免疫吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生体免疫機能に起因する各種疫患と密接な＋
３Ｌ＋保全もつと考えら））、ている自己抗体および／
または免疫複合体を特異的に吸着除去する吸着ｔｌに関
する、 周知の如く、血液中に発現する自己抗体および／または
免疫複合体は、癌、免疫増殖性症候群、および慢性関節
リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、
あるいはアレルギー、臓器移植時の拒絶反応等の生体免
疫機能に関係した疾患および現象の原因あるいは進行と
密接な関係をもっていると考えられている。

そこで、血液、血漿等の体液成分から、上記自己抗体お
よび／捷たは免疫複合体に特異的に吸着除去することに
よって、上記の如き疾患の進行全防止し、症牡ヲ軽減せ
しめ、さらには治癒を早めることが期待されている。

従来、このような目的に供し得る吸着材としては、プロ
ティンＡ’に不溶性担体に固定させた吸着材、アクリル
醒エステル系多孔性樹脂（例えばＸＡＤ−７，ロームア
ントノ・−ス社製）するいはカルボキシメチルセルロー
ス等の陽イオン交換体が提案されている。

しかしながら、プロティンＡａ−不溶性担体に固定させ
ｆｃｅ着材は、免疫グロブリンおよび／壕りは免疫複合
体に管外的吸着能を有するものの、黄色ブドウ球菌由来
の生理活性タンパクηであるため、原料確保が困■１で
製品コストがか＼るというネオ１点があり、捷だ、活性
か不安定なため、固定化時の取扱い、固定化佐の保有等
による失活奮起こし易い欠点があシ、さらに体液に接触
せしめて使用する際に、プロティンＡｍ出による弊害が
生じる危険があり、加えて、失活會抑えつ＼滅菌するこ
とが困難であるという１虞がめった、′−！１こ、アク
リル酸エステル系多孔性（☆・１脂およびカルボキシメ
チルセルロースは、吸着能が小Ｃく、その上、吸Ｎ特異
性が低いという欠点があり、さらに体液中のアルブミン
をも吸着するので、浸透圧の嚢常全きたし、安全な治僚
器として利用することは不可箭であった、 本発明の目的は、上記の如き従来技術に基づく吸着４２
の開題点に鑑み、一般的に普及ｂｊ能であり、自己抗体
および／または免疫ゆ合体ケ画い動電で特嚢旧に吸着し
、非特異的な成形が少なく、安全性があり、滅菌操作も
簡単に行なうことかでき、体液浄化あるいは再生用に適
した吸着材を提供しようとするものである、 本発明者らは、上記目的に沿って鋭意ωＦ究した結果、
自己抗体、免疫複合体は良く吸着するのであるが、通常
の免疫グロブリン、補体、フィブリノーゲン等の非特異
吸着があシ、また、凝固線溶系、補体系を活性化するた
め、体液浄化の口重に使われていなかった、表面にシラ
ノール基を持つ多孔性ｑＩＪ質に対して、そのシラノー
ル基の一部をブロック、すなわち、吸着性が強く、凝固
線溶系や補体系全活性化する性質ケ持つシラノール基の
表面密度を均一に下げてやることにより、驚くべきこと
に、自己抗体、免疫複合体の吸着性はあ１り下げずに非
特異的な吸着を抑制し、さらには凝固線溶系、補体系の
活性化も抑制できること全見出し、本発明を完成するに
至った。

すなわち、本発明は、表１ｍにシラノール基を持つ多孔
性物質であって、全シラノール２Ｈｏ　　ｓｉブロック
してなることを％徴とする自己抗体および／または免役
複合体の吸着材である、ここで言う表面にシラノール基
金持つ多孔性物質とは、多孔質シリカゲル、多孔質ガラ
スのように、表面にシラノール基金持ち、かつ、微細孔
構造がその内部まで網目のように形成されているものを
言う。細孔の太きさは、蛋白が自由に細孔内部に入るこ
とができる大きさであることが好ましく、半均細孔孔径
で２５０から２５００Ｘの範囲が望ましい。また、細孔
の表面積は、大きいほど悪性物質全吸着できる表面が増
えるので好ましいが、少なくとも１０　ｍ”７９以上で
あることが望ましい。

ここで、細孔の平均孔径は、水銀圧入法（例えば、触媒
工学講座−４、触媒測定法、触媒学会編、地六書館、６
９頁から７３頁）により得られる水銀圧入曲線から計算
によって求められる値を言い、細孔の表面積は窒累ガス
を用いたＢＥＴ法（同５０負から５８頁）によシ測定さ
れる値を言う、本発明に用いる、表面にシラノール基金
待つ多孔性物質の形状は、特に限定されるものではない
が、吸着材製造時の取扱い易さ、使用時の取扱い性から
考えて、粒径か２５がら２５０ｕμｍの粒子牡であるこ
とが好ましい。

本発明で対象とする吸篇物質は、自己抗体および／また
は免疫複合体であるが、より詳細に説明すると、リウマ
チ因子、抗核抗体、抗Ｄ　Ｎ　Ａ　Ｊ＞−＋：体、抗赤
血球抗体、抗赤血球抗体、Ｉ〕Ｌ旧小板抗体、抗アセチ
ルコリンレセクター抗体、Ｊｆｌｌ　’ＩＮ脱髄抗体、
抗→ノイログロプリン抗体、抗マイクロシーム抗体、抗
太腸抗体等の自己抗体、免役グロブリン間または免疫グ
ロブリンと他の′１匁負負喝に抗原および抗原様６勿質
との複合体等である、これらの６」でも特に本発明の対
象とする吸着物質として好ましいものは、自己免疫疾患
の原因およＯ・進行と深い係わ９ケもつ自己抗体および
／または免疫張合体である。

全シラノール基の一部を均一にブロックする方法全例示
すると、多孔性物質表面のシラノール基に対し化学的に
結合することができる物質であって、結合した後には１
．［ｆｎ檗蛋白質に対して殆んど相互作用力な示さない
物質を化学的に反応させる方法が準けられる。このよう
にしてシラノール基音ブロックすると、ブロックされた
シラノール基は、血漿蛋白質に対して電気的引力も斥力
も与え難くなシ、また、化学的反応性も低くなシ、物理
的吸着力も低くなる、シラノール基をブロックするのに
通した物質の例を挙げると、トリクロロシラン、メチル
トリクロロシラン、エチルトリクロロシラン等であシ、
また、反応性の高い官能基を持ったシランカップリング
畑でも、多孔性物質に結合した汝、官能基を低反応性に
改質してし捷えはよい。例えば、γアミノプロピルトリ
エトキシシランやγクリシトキシプロビルトリメトキシ
シラン等を多孔性物質に結合後、Ｉ　タ／　−Ａ、アミ
ン、グリシン等の低分子−級アミン化合物で官能基金ブ
ロックしてし−まえはよい。

多孔性物質表面の全シラノール基のうち、ブロックする
割合は、全体の６０％から９０％の範囲内が好捷しい。

ブロックする割合が３０％より小さくなると非特異的な
吸着、すなわち、通常の免疫グロブリン、補体、フィブ
リノーゲン等の吸着が多くなり、凝固線溶系、補体系が
活性化されてしまうようになる。−また、ブロックする
割合が大きくなると自己抗体、免疫複合体等の悪（Ｉ’
吻質を吸着する訃力が落ちてしまう。より望址しい範囲
は４５Ｌｆ）から７５％である。

本発明の免疫吸着材は、体液の導出入口を備えた容器内
に充填保持されて使用されるのが一般的である。

第１図において、１は本発明免疫吸着材を納めてなる吸
着装置の一例を示すものであり、円筒２の一端開口部に
、内側にフィルター３を張ったバッキング４全介して体
液導入口を有するキャップ６をネジ嵌合し、円筒２の他
端開口部に内側にフィルター３′ヲ張ったバッキング４
′ヲ介して体液導出ロアを有するキャップ８をネジ嵌合
して容器を形成し、フィルター６および３′の間隙に吸
着材を充填保持させて吸着材層９全形成してなるもので
ある。

吸着材層９には、本発明の免疫吸着材全単独で充填して
もよく、他の吸着材と混合もしくは積層してもよい。他
の吸着材としては、例えばＤＮＡのような悪性物質（抗
原）の吸着材や、幅広い吸着能を有する活性炭等を用い
ることができる。これにより吸着材の相乗効果によるよ
シ広範な臨床効果が期待できる。吸着材層９の容積は、
体外循環に用いる場合、５０〜４０〇−程度が適当であ
る。本発明の装置全体外循環で用いる場合には、大路次
の二通りの方法がある。一つには、体内から取り出した
血液全遠心分離器もしくは脱型血漿分離器を使用して、
血漿成分と血球成分とに分離した後、血漿成分を該装置
に通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にも
どす方法であり、他の一つは体内から取り出した血液を
直接核装置に通過させ、浄化する方法である。

また、血液もしくは血漿の通過速度については、該吸着
材の吸着能率が非常に畠いため、吸着材の粒度會粗くす
ることができ、また充填度金低くできるので、吸着材層
の形状の如何にか＼わりなく、高い通過速度を与えるこ
とができる。そのため多量の体液処理をすることができ
る。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、筐た断続的に通液使用してもよい。

本発明の免役吸着材は、以上述べてきたように、体液中
の自己抗体および／または免疫複合体を、高い効率かつ
特異的に吸着除去し、非常にコンパクトであると共に、
簡便かつ安全である。

シラノール基を持つ多孔性物質のシラノール基の一部金
修飾して血漿蛋白質との相互作用力が小さい化合物にお
きかえたため、血漿蛋白中の通常の免疫グロブリンフィ
ブリノーゲン、補体等、重要な役割りを持つ成分を非特
異的に吸着することが少なく、高い効率で自己抗体、免
疫複合体を吸着でき、でらにωを固線溶、補体系を活性
化することが少ない。

１だ、シリカ系の多孔性物質を用いる場合には、物理的
、機械的強度に優れ、吸着材の調製、取扱いによるカケ
、クダケが極めて少ない。また硬質であるため高流速で
体液を流すことができる。。その上、耐熱性を有するた
め、通常の滅菌法（エチレンオキザイドガス滅菌、高圧
蒸気等熱滅菌、γ線滅菌等）も容易に、かつ確実に実施
できるという効果を併せもっている。

本発明は、自己血漿等の体液を浄化、再生する一般的な
用法に適用可能であシ、生体免疫機能に関係した疾患の
安全で確実な治療、特に慢性関節リウマチ、全身性エリ
テマトーデス等の自己免疫疾患の治療に有効である。

また、本発明の吸着材は、装置に充填して治療器として
用いられるにとソまらず、自己抗体、免疫複合体の分離
、精製用吸着材およびこれらの測定用基材としても極め
て有効に利用できる。

以下実施例により、本発明の実施の態様をより詳細に説
明する。

実施例１ 平均細孔孔径がｓ　ｏ　ｏ　！、細孔の表面積が１５０
コ／りのシリカゲル１５２をγアミノプロピルトリエト
キシシランの１０重重量子セトン溶液４００ｖｌ中に入
れ、室温で４時間、振とうしながら反応させた。その後
、充分量のアセトンで洗浄し、５０℃で乾燥した後、ト
リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ｐＨ８
）中に入れ、室温で２時間、振とうしながら反応させ、
その後、充分量のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ　、　
Ｉ）Ｈ７，２）で洗浄し、免疫吸着材を得た。

上記した方法で得た吸着材Ａｒｎ１を第１図の如き容器
内（内径ＩＱＩＩＩＪ長さｓ　ｏ　ｍａｎ　）に収納し
、吸着装置を作成し、第２図に示す実験系を用いて慢性
関節リウマチ患者血漿の吸着実験を行なった。

すなわち、容器１０に慢性関節リウマチ患者のＡＣＤ加
血漿１１’（ｚｌ　２ｒｎｌ入れ、ポンプ１２によシ毎
分０．４ｒｒｔの流速で汲み出し、免疫吸着装置１に送
り、ドリップチャンバー１５およびサンプリング口１６
を経て、容器１０に返送されるようにチューブ１４を配
設した。

上記装置により、血液を３時間循環させた後、血漿全サ
ンプリング踵血漿中の蛋白質を分析した。

分析項目はりウマチ因子（感作赤血球凝−集反応、ＲＡ
ＨＡテスト、富士臓器段による）、免疫複合体（Ｃ＋　
　同相法ＥＩＡによる）、免役グロブリンＧ１フィブリ
ノーゲンおよび補体Ｃ３（シングル・ラジアル・イミュ
ノデイフユージョン法による）の５点を調べた。

その結果、リウマチ因子は患者血漿タイターが６４０で
あったのに対［７、吸着後では４０に下がり、免疫複合
体は１８ｐｆ／／ｍｅが８ｐＹ／ｍｅに下がったのに対
し、免疫グロブリンＧは１５５０１ｎ９／ｄ／が１３９
０　ｍｇｌｄｉに、フィブリノーゲンは２９０ｍ＝；／
　／　ｄｌが２８０　ｍｙ／ｄｅに、補体Ｃ３は９０ｍ
ｇ／、ｇ３が７５　ｍｙ　／　ｄｌＸに下がっただけで
あった。

すなわち、自己抗体であるリウマチ因子および免疫複合
体を特異的に吸着した。

次に、凝固糸の活性化を求めるためにカオリンの代わ９
に、本実施例の吸着材を用いた活性化部分トロンボプラ
スチン時間（Ａ−Ｐ’ｌ”Ｔ　）　ｆｆｉ測定した。

その結果、吸着材を使用したＡ　−Ｐ　Ｔ　Ｔは７５秒
であり、カオリ／を使用したＡ−ＰＴＴは３５秒でアリ
、部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ　）　ｆ１７７
秒であった。

すなわち、吸着材を用いたＡ−ＰＴＴとＰＴＴが略同じ
時間であり、吸着材による凝固糸の活性化はみられなか
った。

実施例２ 平均細孔孔径がａｏｏＸ、細孔の表面積が９０ゴ／２の
シリカゲル１５２をエチルトリクロロシランの１０重量
％アセトン溶液４００　ｍｌ中に入れ、室温で４時間振
とうしながら反応させた。その後、充分量のアセトンで
洗浄し、５０℃で乾燥した後、充分量のリン酸緩衝生理
食塩水（ＰＢＳ　、　ｐＨ７，２）で洗浄し、免疫吸着
材を得た。

上記した方法で得た吸着材４ゴを第１図の如き容器内（
内径１０　ｒｔｎム、長さ５０１１１１１１　）に収納
し、吸着装置を作成し、第２図に示す実験系を用いて慢
性関節リウマチ患者血漿の吸着実験を行なった。

すなわち、容器１０に慢性関節リウマチ患者のＡＣＤ加
血漿ｉ１ｉ１２ｍｌ入れ、ポンプ１２によシ毎分０．４
ｍｅの流速で汲み出し、免疫吸着装置１に送シ、ドリッ
プチャンバー１５およびサンプリング口１３を経て、容
器１０に返送されるようにチューブ１４を配設した。

上記装置により、血液を３時間循環さぜた後、血漿全サ
ンプリングし、血漿中の蛋白質を分析した。

分析項目はりウマチ因子（感作赤血球凝集反応。

ＲＡＨＡテスト、富士臓器製による）、免疫複合体（Ｃ
＋、固相法ＥＩＡによる）、免疫グロブリンＧ、フィブ
リノーゲンおよび補体Ｃ５（シングル・ラジアル・イミ
ュノデイフユージョン法による）の５点を調べた。

その結果、リウマチ因子は患者血漿タイターが６４０で
あったのに対し、吸着後では８０に下がシ、免疫複合体
は１８μ？　／　ｍｌ！が１０　ｐ、ｆｌ　／　ｍｌに
下がったのに対し、免疫グロブリンＧは１５５０〃曖／
ｄｌが１４１０　ｍｌ／ｄｉに、フィブリノーゲンは２
９０　ｍｇ／ｄｌカ２７８　ｎｑ／ｄｌに、補体Ｃｓ＃
１９゜ｍｇ／　ｃａｌが７８ｍゾ／ｄｉに下がっただけ
であった。

すなわち、自己抗体であるリウマチ因子および免疫複合
体を特異的に吸着した。

次に、凝固系の活性化を求めるためにカオリンの代わシ
に、本実施例の吸着材を用いた活性化部分トロンボプラ
スチン時間（Ａ−ＰＴＴ）ｉ測定した。

その結果、吸肘材全使用したＡ　−Ｉ）　Ｔ　Ｔは７８
秒であり、カオリンを使用したＡ−ＰＴＴは６５秒であ
り、部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ　）は７７秒
であった。

すなわち、吸后材全用いたＡ−ＰＴＴとＰＴＴが略同じ
時間であり、吸着材による凝固系の活性化はみらノしな
かった。

【図面の簡単な説明】

第１図は本冗明の免疫吸腐月を納めてなる吸着装置の一
９ｌＪ　ｋ　７Ｆ：ツー貼面図、第２図は実施例で用い
た実験装置を示″ｊ模式図である。 １・・・・・・免役吸着装置　２・・・・・・円面　６
，６′・・・・・・フ１ルター　４．４′・・・・・・
パラキンク　５・・・・・・体液導入口　６・・・・・
・キャップ　７・・・・・体液、導出口８・・・・・・
キャップ　９・・・・・・吸着材　１０・・・・・・容
器１１・・・・・・血漿１２・・・・・・ポンプ　１６
・・・・・・サンプリング口　１４・・・・・・チュー
ブ　１５・・・・・・ドリップチャンバー 第１図 第２図 ４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １゜表面にシラノール基を持つ多孔性物質であって、全
   シラノール基の一部をブロックしてなることを特徴とす
   る自己抗体および／捷たは免疫複合体の吸着材。 ２、多孔性物質の平均細孔孔径が２５０から２５００人
   の範囲にあり、かつ、細孔の表面積が１　［１ｍ２７ｇ
   以上である特許請求の範囲第１ｍ記載の自己抗体および
   ７寸たは免疫′ｆ１合体の吸着拐。 ３、全シラノール基の６０から９０％全ブロックしてな
   る特許請求の範囲第１珀記載の自己抗体および／または
   免疫複合体の吸着相。