WO2024080768A1 - 이소퀴놀린 유도체를 유효성분으로 포함하는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

이소퀴놀린 유도체를 유효성분으로 포함하는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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WO2024080768A1
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peripheral neuropathy
present
mitophagy
isoquinoline derivative
acceptable salt
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PCT/KR2023/015689
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윤진호
조종현
이지현
임상우
최세명
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주식회사 알트메디칼
동아대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to the use of novel isoquinoline derivatives in the prevention, improvement, and/or treatment of peripheral neuropathy.
  • Peripheral neuropathy refers to a disease that causes various problems in bodily functions due to damage to the peripheral nervous system that spreads throughout the body, including the hands and feet.
  • Peripheral neuropathy is caused by diseases that directly or indirectly affect nerve tissue. Depending on the type of nerve tissue affected, it can be classified into sensory neuropathy, motor neuropathy, or autonomic neuropathy. can be distinguished. In the case of sensory neuropathy, the sense of touch or temperature changes is reduced, a tingling or burning pain is felt, and allodynia in the skin is experienced. Motor neuropathy is accompanied by loss of balance or muscle weakness, and autonomic neuropathy weakens the ability to control the bladder depending on the organ affected by the nerve, causing urinary incontinence or abnormal blood pressure and heartbeat.
  • CIPN chemotherapy-induced peripheral neuropathy
  • CIPN chemotherapy-induced peripheral neuropathy
  • CIPN As a representative acquired peripheral neuropathy, it occurs in more than 60% of patients receiving chemotherapy and causes serious symptoms such as sensory nerve abnormalities, pain from harmless stimuli (allodynia), and hyperalgesia (hyperalgesia).
  • CIPN has a very significant impact on the treatment and quality of life of cancer patients, but currently there is no cure for peripheral neuropathy, so only reducing the dose of anticancer drugs and switching to other anticancer drugs is being attempted.
  • CIPN dysfunction of axonal mitochondria
  • anticancer drugs such as Paclitaxel, Vincristine, Taxol, Cisplatin, and Bortezomib.
  • paclitaxel when treated with paclitaxel, phenomena such as a decrease in mitochondrial membrane potential, an increase in mitochondrial reactive oxygen species, a decrease in ATP synthesis, and mitochondrial structural abnormalities were confirmed in cell and animal models.
  • mitochondria play an essential role in energy production, neuroplasticity, and resistance to stress in nerve cells
  • mitochondrial dysfunction caused by anticancer drugs is believed to play an important role in the occurrence and progression of CIPN.
  • strategies to treat CIPN by improving mitochondrial dysfunction have not yet been developed.
  • mitophagy is an intracellular decomposition mechanism that removes damaged or unnecessary mitochondria. It surrounds damaged mitochondria with a membrane to form an autophagosome and fuses it with a lysosome to selectively remove damaged mitochondria. do.
  • This activity of mitophagy plays an important role in regulating mitochondrial homeostasis and maintaining tissue function in various cells, including neurons.
  • mitophagy in neurons has a protective effect against various stresses and is important for resistance to neurodegeneration.
  • a decrease in mitophagy activity has been observed in neurodegenerative diseases such as Alzheimer's dementia or Parkinson's disease, and in animal models of Alzheimer's dementia or Parkinson's disease, the promotion of mitophagy improves mitochondrial dysfunction and alleviates pathological symptoms.
  • CCCP mitochondrial dysfunction
  • FCCP mitochondrial membrane potential inhibitors
  • rotenone acts as a Complex I inhibitor.
  • the mitochondrial toxins induce mitophagy activity, which is a removal mechanism for damaged mitochondria, by directly inducing mitochondrial damage, but because they are highly toxic to cells, they cannot be used as drugs to promote mitophagy activity.
  • anticancer drugs including paclitaxel
  • peripheral neuropathy which causes pain and sensory abnormalities, at a high frequency, but there is no effective treatment for this, and it is pointed out as a major cause of the decline in the quality of life of cancer patients.
  • the present invention was devised to solve the above problems, and isoquinoline derivatives discovered through screening based on mitophagy activity can improve and alleviate the main symptoms of peripheral neuropathy by promoting mitophagy activity. It was completed after confirming that it can be used as a fundamental treatment for peripheral neuropathy.
  • the object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating peripheral neuropathy, which contains an isoquinoline derivative represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a kit for preventing or treating peripheral neuropathy, including a composition containing the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and instructions.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or improving peripheral neuropathy, comprising the isoquinoline derivative or a foodologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising an isoquinoline derivative represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a method for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising administering an isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to an individual in need thereof.
  • the present invention provides the use of the isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the prevention or treatment of peripheral neuropathy.
  • the present invention provides the use of the isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a drug for preventing or treating peripheral neuropathy.
  • the present invention provides a kit for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising the isoquinoline derivative represented by Formula 1, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the composition, and instructions.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving peripheral neuropathy, comprising the isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a foodologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may promote the activity of mitophagy, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may satisfy one or more characteristics selected from the group consisting of the following, but is not limited thereto:
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof can inhibit morphological degeneration of sensory nerves, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may increase the number of peripheral nerves, but is not limited thereto.
  • the peripheral neuropathy may be anticancer drug-induced peripheral neuropathy, but is not limited thereto.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of peripheral neuropathy.
  • Isoquinoline derivatives discovered through screening based on mitophagy activity exhibit an excellent mitophagy promoting effect, and thus can be used as a fundamental treatment for peripheral neuropathy. It was completed after confirming that it can be used.
  • the isoquinoline derivative according to the present invention not only treats hyperalgesia in an anticancer drug-induced peripheral neuropathy animal model, but also suppresses morphological changes in sensory nerves, which have been identified as the core cause of peripheral neuropathy, and distribution of peripheral nerves. It has been confirmed that the number can be increased.
  • the isoquinoline derivative according to the present invention is a fundamental therapeutic agent that can suppress the main symptoms and pathogenesis of peripheral neuropathy, especially anticancer drug-induced peripheral neuropathy, and is useful in the field of prevention, improvement, and/or treatment of the disease. It is expected that it will be utilized.
  • Figures 1A to 1C are the results of analyzing the effect of an isoquinoline derivative compound (referred to as "CD1-012", hereinafter the same) in promoting mitophagy activity in human normal lung cell lines according to an embodiment of the present invention ( Figure 1A, FACS results; Figure 1b, confocal microscope observation results; and Figure 1c, quantitative change measurement results of mitochondria using mito-YFP fluorescent protein).
  • CD1-012 isoquinoline derivative compound
  • Figures 2a and 2b show the results of analyzing the effect of CD1-012 on promoting mitophagy activity in the SH-SY5Y cell line ( Figure 2a) and the results of analyzing the effect of CD1-012 on promoting mitophagy activity in the Hela-Parkin cell line ( Figure 2b).
  • Figures 3a and 3b show the results of analyzing the mitophagy activity of BEAS-2B cells according to the treatment concentration ( Figure 3a) and treatment time ( Figure 3b) of CD1-012.
  • Figures 4a and 4b show the results confirming changes in mitophagy activity (Figure 4a) and autophagy activity (Figure 4b) of cells according to treatment with CD1-012.
  • Figure 5 shows the results of comparing the mitophagy activity promotion effect by concentration of CD1-012 and comparative examples palmit and berberine.
  • Figure 6 shows the results of analyzing the mitochondrial membrane potential and the level of mitochondrial reactive oxygen species after treating cells with CD1-012 or CCCP, a comparative example.
  • Figure 7 shows the results of analyzing the mitophagy promoting activity in the PINK1 knockdown cell line (shPINK1) of CD1-012 and CCCP, a comparative example.
  • Figure 8a shows the withdrawal response time (withdrawal latency) of the larvae to a heat probe after treating Drosophila larvae with an anticancer drug (paclitaxel) and/or CD1-012 to confirm the effect of CD1-012 in treating anticancer drug-induced peripheral neuropathy. Shows the measured results.
  • Figure 8b shows the results of measuring larval size after treating Drosophila larvae with anticancer drugs and/or CD1-012 to confirm the effect of CD1-012 on the growth of Drosophila larvae.
  • Figures 9a to 9c show the results of observing the morphology of C4da sensory neurons after treating fruit flies with anticancer drugs and/or CD1-012 to confirm the inhibitory effect of CD1-012 on sensory nerve degeneration caused by anticancer drugs (FIG. 9a), dendrites
  • FIG. 9a The results of measuring the total length of the branch ( Figure 9b) and the number of branch branches ( Figure 9c) are shown.
  • Figures 10a and 10b show the escape response of larvae to a heat probe after treating fruit flies with suppressed expression of ATG5 (Figure 10a) or ATG7 ( Figure 10b), mediators of the standard mitophagy pathway, with anticancer drugs and/or CD1-012. Shows the results of measuring time.
  • Figures 11a and 11b show the avoidance response of larvae to a heat probe after treatment of anticancer drugs and/or CD1-012 in fruit flies in which the expression of ULK1 (Figure 11a) or Rab9 ( Figure 11b), a mediator of the alternative mitophagy pathway, is suppressed. Shows the results of measuring time.
  • Figures 12a and 12b show the results of measuring pain sensitivity using the Von-Frey Hair test after treating mice with an anticancer drug (paclitaxel) and/or CD1-012 to confirm the effect of treating anticancer drug-induced peripheral neuropathy ( Fig. 12a ) and the results of confirming the peripheral nerve distribution of the sole (FIG. 12b).
  • an anticancer drug paclitaxel
  • CD1-012 to confirm the effect of treating anticancer drug-induced peripheral neuropathy
  • FIG. 12b the results of confirming the peripheral nerve distribution of the sole
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating peripheral neuropathy.
  • Isoquinoline derivatives discovered through screening based on mitophagy activity exhibit an excellent mitophagy promoting effect, thereby reducing the main symptoms of peripheral neuropathy. It was completed by confirming that it can be used as a fundamental treatment by improving the disease and blocking the pathogenesis.
  • the compound according to the present invention is an isoquinoline derivative with an identified mitophagy-specific promoting function, and has been confirmed to have no mitochondrial and cytotoxicity, and can improve mitochondrial dysfunction in an Alzheimer's dementia model through previous research. This has been confirmed.
  • the present inventors treated the Drosophila thermal hyperalgesia model with the compound to confirm the effect of the compound in treating peripheral neuropathy.
  • the symptoms of heat hyperalgesia caused by anticancer drugs were alleviated to normal levels, and the morphological changes in sensory nerves were found. was confirmed to be inhibited (Examples 5 and 6).
  • the compound improved heat hyperalgesia and increased the number of peripheral neuropathies in the soles of the feet Example 9).
  • the novel isoquinoline derivative according to the present invention can not only alleviate the main symptoms of peripheral neuropathy, but also effectively suppress the degeneration of sensory nerves and the decrease in distribution of peripheral nerves, which are the main causes of the disease. It is expected to be used as a fundamental treatment for diseases, especially anticancer drug-induced peripheral neuropathy.
  • the peripheral neuropathy treatment mechanism of the compound was confirmed through molecular-level experiments, it is expected that treatment of peripheral neuropathy can be achieved in various patient groups through appropriate use considering the molecular mechanism of the compound.
  • the purpose of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising an isoquinoline derivative represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient:
  • pharmaceutically acceptable salt includes salts derived from pharmaceutically acceptable inorganic acids, organic acids, or bases.
  • the term "pharmaceutically acceptable” means that the benefit/risk ratio is reasonable for use in contact with tissue of a subject (e.g., a human) without undue toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications. It refers to a compound or composition that is suitable for the following and is within the scope of sound medical judgment.
  • acids examples include hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, fumaric acid, maleic acid, phosphoric acid, glycolic acid, lactic acid, salicylic acid, succinic acid, toluene-p-sulfonic acid, tartaric acid, acetic acid, citric acid, methanesulfonic acid, formic acid. , benzoic acid, malonic acid, gluconic acid, naphthalene-2-sulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.
  • Acid addition salts can be prepared by conventional methods, for example, by dissolving the compound in an excessive amount of aqueous acid and precipitating the salt using a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, or acetonitrile. It can also be prepared by heating equimolar amounts of the compound and an acid or alcohol in water and then evaporating the mixture to dryness, or suction filtering the precipitated salt.
  • a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, or acetonitrile.
  • Salts derived from suitable bases may include, but are not limited to, alkali metals such as sodium and potassium, alkaline earth metals such as magnesium, and ammonium.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salt can be obtained, for example, by dissolving the compound in an excessive amount of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the undissolved compound salt, and then evaporating and drying the filtrate.
  • an appropriate silver salt eg, silver nitrate
  • the scope of the compound of the present invention may include not only pharmaceutically acceptable salts, but also all isomers, hydrates, and solvates that can be prepared by conventional methods.
  • the isoquinoline derivative is reacted with palmatine represented by Formula 2 or berberine represented by Formula 3 and a Lewis acid catalyst in an organic solvent, as shown in Scheme 1 below. It can be prepared through a manufacturing method including the step (step 1) of adding and reacting to produce an isoquinoline derivative compound represented by Chemical Formula 1.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt form thereof has a hydrophobic substituent (methoxy group) in the core structure of palmatine or berberine forming a hydrophilic substituent or an intermolecular hydrogen bond. It may be a derivative substituted with a functional group (hydroxy group) that can be provided.
  • the isoquinoline derivative according to the present invention is 2,3,5,10-tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]iso, respectively represented by the following formulas 1a to 1c.
  • Isoquinoline derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention are characterized by promoting the activity of mitophagy (i.e., activation of mitophagy).
  • mitochondria refers to an intracellular decomposition mechanism that removes damaged or unnecessary mitochondria.
  • Mitophagy forms an autophagosome when mitochondrial damage occurs and fuses with lysosomes to selectively decompose and remove damaged mitochondria.
  • Mitophagy decomposes and decomposes unnecessary components within the cell (old proteins, protein aggregates, organelles, pathogens that have infiltrated the cell, etc.) to generate macromolecular precursors and generate energy when the cell is in a state of nutritional deficiency. It is a mechanism that is distinct from autophagy, which is a recycling mechanism.
  • Mitophagy is regulated independently of regulatory signals such as nutrients, energy, and stress that regulate autophagy.
  • the mitophagy is divided into standard mitophagy (canonical mitophagy) and alternative mitophagy (alternative mitophagy or non-canonical mitophagy). While standard mitophagy involves ATG proteins such as ATG5 and ATG7, alternative mitophagy is independent of ATG proteins and is mediated by Ulk1/Rab9/Rip1.
  • the present inventors confirmed that the isoquinoline derivative according to the present invention exerts a more excellent mitophagy activation effect than other known mitophagy promoters, thereby improving the main symptoms of anticancer drug-induced peripheral neuropathy. It was confirmed that it suppresses the main causes of sensory nerve degeneration and peripheral nerve decline. Therefore, the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention can exert a particularly excellent therapeutic effect in patients with peripheral neuropathy with reduced mitophagy levels (eg, mitophagy levels of nerve cells).
  • the peripheral neuropathy treatment mechanism of the compound of the present invention is independent of ATG5 or ATG7, and the compound can treat peripheral neuropathy independent of the standard mitophagy pathway.
  • the compounds of the present invention can exert excellent therapeutic effects even in patients with peripheral neuropathy in whom the standard mitophagy pathway is inactivated due to mutations in the standard mitophagy pathway or other causes.
  • Mutations in the canonical mitophagy pathway include inactivation or reduced activity of the canonical mitophagy pathway, which includes the levels of proteins involved in the canonical mitophagy pathway (e.g., ATG proteins such as ATG5, ATG7, and ATG8) or This may be due to a decrease in activity.
  • the mechanism of the compound for treating peripheral neuropathy may depend on the alternative mitophagy pathway.
  • the compound may exert a therapeutic effect on peripheral neuropathy by promoting mitophagy through the alternative mitophagy pathway. Therefore, an excellent peripheral neuropathy treatment effect can be achieved when activating the alternative mitophagy pathway along with treatment with the above compound, but is not limited to this.
  • Examples of activation of the alternative mitophagy pathway include overexpression or activation of mediators of the alternative mitophagy pathway (ULK1, Rab9, etc.).
  • isoquinoline derivative or pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention may satisfy one or more characteristics selected from the group consisting of:
  • the isoquinoline derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can increase the level and/or activity (function) of mitochondria.
  • the improving effect of the compound according to the present invention on the level and/or activity of mitochondria may be achieved through the mitophagy activation effect of the compound. Therefore, the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention has particularly excellent therapeutic effects in patients with peripheral neuropathy in whom the level and/or function of mitochondria is reduced (e.g., the level and/or function of mitochondria in nerve cells). can be demonstrated.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be characterized by suppressing (alleviating, improving) morphological degeneration of sensory nerves.
  • the main cause of hyperalgesia in patients with peripheral neuropathy is a change in the shape of the sensory nerves.
  • the anticancer drug causes an increase in the length and number of dendrite arbors of sensory nerves, which can cause hyperalgesia.
  • the compound of the present invention can suppress an increase in the length of dendritic branches of a sensory nerve or an increase in the number of branches (i.e., the number of branches).
  • the sensory nerve may be a Class IV da (C4da) sensory nerve. Therefore, the compound of the present invention can exert a particularly excellent therapeutic effect in patients with peripheral neuropathy accompanied by morphological degeneration of sensory nerves (increase in the length or number of dendrite branches).
  • C4da Class IV da
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof can increase the number of peripheral nerves.
  • Peripheral neuropathy is caused by dysfunction of peripheral nerves and reduction of normal peripheral nerves, and it has been confirmed through specific examples that the compound of the present invention can increase the number and distribution of peripheral nerves. Therefore, the compound of the present invention can exert particularly excellent therapeutic effects in patients with peripheral neuropathy in whom the number or distribution of peripheral nerves is reduced.
  • the peripheral nerve may preferably be an intraepidermal nerve fiber (IENF).
  • peripheral neuropathy refers to a neurological disorder in which various problems in physical function occur due to damage or dysfunction of the peripheral nervous system.
  • Patients with peripheral neuropathy not only experience sensory abnormalities such as hyperalgesia, such as tingling in the feet, burning, numbness, and severe pain, but also cause loss of balance and damage to muscle strength.
  • Peripheral neuropathy is induced by various causes that directly or indirectly affect nerve tissue.
  • acute peripheral neuropathy can be caused by infections, autoimmune reactions, drugs, and toxic substances such as anticancer agents, while chronic peripheral neuropathy is induced by metabolic diseases such as diabetes, alcoholism, nutritional deficiencies, renal failure, and liver failure.
  • the peripheral neuropathy may be “chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN)” caused by an anticancer drug.
  • CIPN chemotherapy-induced peripheral neuropathy
  • This is a representative acquired peripheral neuropathy, which occurs in more than 60% of patients receiving anticancer treatment. In most cases, it develops depending on the cumulative dose of anticancer drugs, and causes symptoms such as sensory nerve abnormalities, pain from harmless stimuli (allodynia), and hyperalgesia (hyperalgesia). Causes severe pain.
  • the anticancer drugs There is no limitation to the anticancer drugs as long as they can cause dysfunction or damage to peripheral nerves, including platinum series, taxane series, vinca alkaloids, proteasome inhibitors, and bortezomib.
  • the anticancer drugs include Paclitaxel, Bortezomib, Oxaliplatin, Vincristine, Cisplatin, Taxol, Docetaxel, iXABEPILONE, It may be selected from Thalidomide, Velcade, Lenalidomide, etc.
  • the compound of the present invention can be used for the purpose of alleviating, improving, preventing, and/or treating peripheral neuropathic pain caused by the above anticancer agent.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising an isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may specifically promote the activity of mitophagy, but is not limited thereto.
  • the activity of mitophagy may be independent of any one or more selected from the group consisting of PINK1, ATG5, and ATG7, but is not limited thereto.
  • the activity of mitophagy may depend on ULK1 or Rap9, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof can inhibit morphological degeneration of sensory nerves, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof may increase the number of peripheral nerves, but is not limited thereto.
  • the peripheral neuropathy may be characterized as anticancer drug-induced peripheral neuropathy, but is not limited thereto.
  • the anticancer agent is paclitaxel, bortezomib, oxaliplatin, vincristine, cisplatin, taxol, docetaxel, drowning It may be any one selected from the group consisting of iXABEPILONE, Thalidomide, Velcade, and Lenalidomide, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or pharmaceutically acceptable salt thereof may be greater than 0 and 40 ⁇ M, but is not limited thereto.
  • the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof can improve mitochondrial dysfunction, but is not limited thereto.
  • the improvement of mitochondrial dysfunction may be any one selected from the group consisting of, but is not limited to:
  • the present invention provides a kit for preventing or treating peripheral neuropathy, including the pharmaceutical composition and instructions.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving peripheral neuropathy, comprising an isoquinoline derivative represented by Formula 1 or a foodologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the peripheral neuropathy may be anticancer drug-induced peripheral neuropathy, but is not limited thereto.
  • the content of the compound in the composition of the present invention can be appropriately adjusted depending on the symptoms of the disease, the degree of progression of the symptoms, the patient's condition, etc., for example, 0.0001 to 99.9% by weight, or 0.001 to 50% by weight, based on the total weight of the composition. However, it is not limited to this.
  • the content ratio is a value based on the dry amount with the solvent removed.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may further include appropriate carriers, excipients, and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions.
  • the excipient may be, for example, one or more selected from the group consisting of diluents, binders, disintegrants, lubricants, adsorbents, humectants, film-coating materials, and controlled-release additives.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention can be prepared as powder, granules, sustained-release granules, enteric-coated granules, solutions, eye drops, ellipsis, emulsions, suspensions, spirits, troches, perfumes, and limonadese according to conventional methods.
  • Carriers, excipients, and diluents that may be included in the pharmaceutical composition according to the present invention include lactose, dextrose, sucrose, oligosaccharides, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, and calcium. These include phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • Additives to tablets, powders, granules, capsules, pills, and troches according to the present invention include corn starch, potato starch, wheat starch, lactose, white sugar, glucose, fructose, di-mannitol, precipitated calcium carbonate, synthetic aluminum silicate, and phosphoric acid.
  • Excipients such as cellulose (HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, propylene glycol, casein, calcium lactate, and Primogel; Gelatin, gum arabic, ethanol, agar powder, cellulose acetate phthalate, carboxymethyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, glucose, purified water, sodium caseinate, glycerin, stearic acid, sodium carboxymethyl cellulose, sodium methyl cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, dextrin.
  • binders can be used, Hydroxypropyl methyl cellulose, corn starch, agar powder, methyl cellulose, bentonite, hydroxypropyl starch, sodium carboxymethyl cellulose, sodium alginate, calcium carboxymethyl cellulose, calcium citrate, sodium lauryl sulfate, silicic anhydride, 1-hydroxy Propylcellulose, dextran, ion exchange resin, polyvinyl acetate, formaldehyde-treated casein and gelatin, alginic acid, amylose, guar gum, sodium bicarbonate, polyvinylpyrrolidone, calcium phosphate, gelled starch, gum arabic, Disintegrants such as amylopectin, pectin, sodium polyphosphate, ethyl cellulose
  • soybean oil (Lubri wax), aluminum stearate, zinc stearate, sodium lauryl sulfate, magnesium oxide, Macrogol, synthetic aluminum silicate, silicic anhydride, higher fatty acids, higher alcohol, silicone oil, paraffin oil, polyethylene glycol fatty acid ether, Lubricants such as starch, sodium chloride, sodium acetate, sodium oleate, dl-leucine, and light anhydrous silicic acid may be used.
  • Additives to the liquid according to the present invention include water, dilute hydrochloric acid, dilute sulfuric acid, sodium citrate, sucrose monostearate, polyoxyethylene sorbitol fatty acid esters (twin esters), polyoxyethylene monoalkyl ethers, lanolin ethers, Lanolin esters, acetic acid, hydrochloric acid, aqueous ammonia, ammonium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, prolamine, polyvinylpyrrolidone, ethyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, etc. can be used.
  • a solution of white sugar, other sugars, or sweeteners, etc. may be used in the syrup according to the present invention, and if necessary, flavoring agents, colorants, preservatives, stabilizers, suspending agents, emulsifiers, thickening agents, etc. may be used.
  • Purified water can be used in the emulsion according to the present invention, and emulsifiers, preservatives, stabilizers, fragrances, etc. can be used as needed.
  • Suspensions according to the present invention include acacia, tragacantha, methylcellulose, carboxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, microcrystalline cellulose, sodium alginate, hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910, etc. Topics may be used, and surfactants, preservatives, stabilizers, colorants, and fragrances may be used as needed.
  • Injections according to the present invention include distilled water for injection, 0.9% sodium chloride injection, IV solution, dextrose injection, dextrose + sodium chloride injection, PEG, lactated IV solution, ethanol, propylene glycol, non-volatile oil - sesame oil.
  • solvents such as cottonseed oil, peanut oil, soybean oil, corn oil, ethyl oleate, isopropyl myristic acid, and benzene benzoate
  • Solubilizers such as sodium benzoate, sodium salicylate, sodium acetate, urea, urethane, monoethylacetamide, butazolidine, propylene glycol, Tween, nicotinic acid amide, hexamine, and dimethylacetamide
  • Weak acids and their salts acetic acid and sodium acetate), weak bases and their salts (ammonia and ammonium acetate), organic compounds, proteins, albumin, peptone, and buffering agents such as gums
  • Isotonic agents such as sodium chloride
  • Stabilizers such as sodium bisulfite (NaHSO 3 ) carbon dioxide gas, sodium metabisulfite (Na 2 S 2 O 5 ), sodium sulfite (Na 2 SO 3 ), nitrogen gas (N 2 ),
  • Suppositories according to the present invention include cacao oil, lanolin, witepsol, polyethylene glycol, glycerogelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, a mixture of stearic acid and oleic acid, Subanal, cottonseed oil, peanut oil, palm oil, cacao butter + Cholesterol, lecithin, Lanet wax, glycerol monostearate, Tween or Span, Imhausen, monolene (propylene glycol monostearate), glycerin, Adeps solidus, Buytyrum Tego -G), Cebes Pharma 16, Hexalide Base 95, Cotomar, Hydrocote SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), Hydro Hydrokote 25, Hydrokote 711, Idropostal, Massa estrarium (A, AS, B, C, D, E, I, T), Massa-MF, Massaupol, Masupol-15, Neosupostal-
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include the extract with at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and sucrose. ) or prepared by mixing lactose, gelatin, etc. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, oral solutions, emulsions, and syrups.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included.
  • Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate.
  • composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type, severity, activity of the drug, and the type of patient's disease. It can be determined based on factors including sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs used simultaneously, and other factors well known in the medical field.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art to which the present invention pertains.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to an individual through various routes. All modes of administration are contemplated, including oral administration, subcutaneous injection, intraperitoneal administration, intravenous injection, intramuscular injection, paraspinal space (intrathecal) injection, sublingual administration, buccal administration, intrarectal injection, vaginal injection. It can be administered by internal insertion, ocular administration, otic administration, nasal administration, inhalation, spraying through the mouth or nose, dermal administration, transdermal administration, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is determined depending on the type of drug as the active ingredient along with various related factors such as the disease to be treated, the route of administration, the patient's age, gender, weight, and severity of the disease.
  • the effective amount of the composition according to the present invention may vary depending on the patient's age, gender, and weight, and is generally administered at 0.001 to 150 mg, preferably 0.01 to 100 mg, per kg of body weight every day or every other day, or 1 It can be administered in 1 to 3 divided doses per day.
  • the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • “individual” refers to a subject in need of treatment for a disease, and more specifically, human or non-human primates, mice, rats, dogs, cats, horses, cows, etc. refers to mammals of
  • “administration” means providing a given composition of the present invention to an individual by any appropriate method.
  • prevention refers to any action that suppresses or delays the onset of the desired disease
  • treatment refers to the improvement or improvement of the desired disease and its associated metabolic abnormalities by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention. It refers to all actions that are beneficially changed, and “improvement” refers to all actions that reduce parameters related to the target disease, such as the degree of symptoms, by administering the composition according to the present invention.
  • the present invention provides a kit for preventing or treating peripheral neuropathy, comprising the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention.
  • kit refers to a tool used for the purpose of preventing or treating peripheral neuropathy, including the isoquinoline derivative of the present invention, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a composition containing the same.
  • the kit may include other components, compositions, solutions, devices, etc. commonly required for manufacturing, storing, and administering the materials.
  • the kit may include instructions instructing the properties of the isoquinoli derivative or its pharmaceutically acceptable salt according to the present invention, their appropriate use and storage, etc.
  • the present invention provides a method for producing the isoquinoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising the step of reacting palmatine or berberine with a Lewis acid catalyst in an organic solvent.
  • the manufacturing method includes adding a Lewis acid catalyst to palmatine represented by Formula 2 or berberine represented by Formula 3 to react the organic solvent, which can be represented as shown in Scheme 1 below.
  • the Lewis acid catalyst is BF 3 , BBr 3 , AlF 3 , AlCl 3 , AlBr 3 , TiCl 4 , TiBr 4 , TiI 4 , FeCl 3 , FeCl 2 , SnCl 2 , SnCl 4 , WCl metal halides such as 6 , MoCl 5 , SbCl 5 , TeCl 2 , and ZnCl 2 ; Et 3 Al, Et 2 AlCl, EtAlCl 2 , Et 3 Al 2 Cl 3 , (i-Bu) 3 Al, (i-Bu) 2 AlCl, (i-Bu)AlCl 2 , Me 4 Sn, Et 4 Sn, metal alkyl compounds such as Bu 4 Sn and Bu 3 SnCl; Metal alkoxy compounds such as Al(OR) 3-x Cl x or Ti(OR) 4-y Cl y (where R represents an alkyl group or an aryl group, x is 1 or
  • the organic solvent is dimethyl sulfoxide, dimethyl formamide, acetone, tetrahydrofuran, benzene, toluene, ether, methanol, hexane, cyclohexane, pyridine, acetic acid, carbon tetrachloride, chloroform, and dichloro. It may be one or more selected from the group consisting of methane and water, for example, dichloromethane, but is not limited thereto.
  • the Lewis acid catalyst may be added in an inert gas.
  • the Lewis acid catalyst may be added dropwise to palmatine or berberine dissolved in the organic solvent at about 0°C in an inert gas atmosphere, for example, under a nitrogen stream.
  • the reaction mixture is incubated at room temperature, for example, 20° C. to 28° C., for example, 24° C. to 26° C., for 10 to 14 hours, for example, 11 hours.
  • the reaction can be performed by stirring for 12 hours to 13 hours, and the completion of the reaction can be confirmed using, for example, TLC (thin-layer chromatography), but is not limited thereto.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving peripheral neuropathy, comprising the isoquinoline derivative or a foodologically acceptable salt thereof according to the present invention.
  • the food composition includes a health functional food composition.
  • the term “foodologically acceptable salt” includes salts derived from foodologically acceptable organic acids, inorganic acids, or bases.
  • the compound When the isoquinoline derivative of the present invention or a foodologically acceptable salt thereof is used as a food additive, the compound can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods.
  • the mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health, or therapeutic treatment). In general, when manufacturing food or beverages, the compound of the present invention may be added in an amount of 15% by weight or less, or 10% by weight or less, based on the raw materials. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range.
  • foods to which the above substances can be added include meat, sausages, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, These include alcoholic beverages and vitamin complexes, and include all health functional foods in the conventional sense.
  • the health drink composition according to the present invention may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like conventional drinks.
  • the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • a sweetener natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used.
  • the proportion of natural carbohydrates is generally about 0.01-0.20 g, or about 0.04-0.10 g per 100 mL of the composition of the present invention.
  • the composition of the present invention contains various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, It may contain carbonating agents used in carbonated drinks. Additionally, the composition of the present invention may contain pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice beverages, and vegetable beverages. These ingredients can be used independently or in combination. The ratio of these additives is not very important, but is generally selected in the range of 0.01-0.20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • “health functional food” is the same term as food for special health use (FoSHU), and refers to food with high medical and medical effects that has been processed to efficiently exhibit bioregulatory functions in addition to supplying nutrients. This means that the food can be manufactured in various forms such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, etc. to achieve useful effects in preventing or improving peripheral neuropathy.
  • the health functional food of the present invention can be manufactured by a method commonly used in the art, and can be manufactured by adding raw materials and components commonly added in the art.
  • it is made from food, so it has the advantage of not having any side effects that may occur when taking the drug for a long time, and it can be highly portable.
  • Isoquinoline derivative compound 2,3,5,10-tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinoline-7-ium bromide (2,3,9, 10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-iumbromide (CD1-012) was synthesized through the following process: palmatine (1.0 g, 2.92%) was added to a dried 250 mL round flask.
  • CCCP a representative mitophagy promoting compound
  • Palmatine (CAS Number: 3486-67-7) represented by the following formula (2) was used as Comparative Example 2.
  • Example 2-1 Analysis of the effect of promoting mitophagy activity
  • Figure 1a is the result of analysis using flow cytometry (FACS) (CD1-012 was treated with 15 ⁇ M for 24h), and Figure 1b is the result of analysis using a confocal microscope (CD1-012 was treated with 15 ⁇ M for 24h). treated with ⁇ M for 18 h), Figure 1c shows the results of measuring quantitative changes in mitochondria using mito-YFP fluorescent protein containing a targeting sequence that moves proteins to mitochondria (CD1-012 treated with 20 ⁇ M for 24 h) processed).
  • the group treated with CD1-012 had a significantly increased mitophagy activity compared to the untreated control group (con).
  • the mitophagy activity of the sample treated with CD-012 was representative. It was confirmed that the increase was as significant as that of samples treated with CCCP, a mitophagy promoting compound.
  • Example 2-2 Analysis of the effect of promoting mitophagy activity in various cell lines
  • Example 1 It was confirmed whether CD1-012 synthesized in Example 1 increases mitophagy activity in various cell lines.
  • the SH-SY5Y cell line, a human neuroblastoma cell line expressing Mitocheima fluorescent protein, and the cervical cancer HeLa cell line (Hela-Parkin), which expresses Parkin (E3 ligase) were treated with CD1-012 and the CCCP of Comparative Example 1.
  • the mitophagy activity of each sample was analyzed using flow cytometry (FACS), and the results are shown in Figures 2A and 2B.
  • Figure 2a shows the analysis results for the SH-SY5Y cell line
  • Figure 2b shows the analysis results for the Hela-Parkin cell line.
  • cells treated with the compound CD1-012 according to the present invention had significantly increased mitophagy activity compared to the control group (Con).
  • the above results show that the isoquinoline derivative according to the present invention can promote mitophagy activity in various cell lines.
  • Example 2-3 Analysis of mitophagy activity promotion effect according to treatment concentration and treatment time
  • Example 1 It was confirmed whether CD1-012 synthesized in Example 1 promoted mitophagy activity in a concentration- and time-dependent manner.
  • the BEAS-2B cell line expressing Mitocheima was treated with CD1-012 at various concentrations or at a constant concentration (15 ⁇ M) for different times, and then mitophagy activity was measured using a flow cytometer.
  • FIG. 3a The results of measuring mitophagy activity according to the treatment concentration of CD1-012 are shown in Figure 3a, and the results of measuring mitophagy activity by time are shown in Figure 3b.
  • mitophagy activity began to significantly increase in the group treated with CD1-012 at a concentration of 7.5 ⁇ M or higher compared to the untreated control group, and it was confirmed that it increased in a concentration-dependent manner up to a maximum treatment concentration of 17.5 ⁇ M. there was.
  • FIG. 3b mitophagy activity began to significantly increase 3 hours after treatment with CD1-012, and mitophagy activity was confirmed to be maximum after 18 hours.
  • This pattern of increased mitophagy means that CD1-012 increases mitophagy activity directly, rather than indirectly, in a concentration- and time-dependent manner.
  • Example 2-4 Confirmation of mitophagy-specific promoting activity
  • Example 1 It was confirmed whether CD1-012 synthesized in Example 1 specifically increased mitophagy activity.
  • the BEAS-2B cell line expressing Mitocheima was treated with CD1-012 (15 ⁇ M) or CCCP (10 ⁇ M) of Comparative Example 1 for 18 hours, and then mitophagy activity was analyzed by confocal microscopy.
  • the BEAS-2B cell line expressing Keima fluorescent protein was cultured in HBSS (Hanks' balanced salts solution) for 3 hours to induce starvation, and CD1-012 (starvation) was induced using a confocal microscope. Autophagy activity was measured by comparing samples treated with 15 ⁇ M) for 18 hours.
  • Example 2-5 Comparison of mitophagy activity promotion effects with berberine and palmitate
  • the isoquinoline derivative according to the present invention has a higher mitophagy promoting effect compared to the mitophagy promoting agents palmit and berberine.
  • BEAS-2B cell line a human normal lung cell line expressing Mitocheima fluorescent protein
  • CD1-012 palmit of Comparative Example 2
  • berberine of Comparative Example 3 a human normal lung cell line expressing Mitocheima fluorescent protein
  • the mitophagy activity of BEAS-2B reached its maximum when treated at a concentration of 400 ⁇ M for palmit and 80 ⁇ M for berberine, but the CD1-012 treatment group was treated with 10 ⁇ M of CD1- It was confirmed that when 012 was treated, it exhibited an equivalent level of mitophagy activity. As a result, the mitophagy promoting activity of CD1-012 was found to be about 8 times higher than that of berberine and about 40 times higher than that of palmit.
  • the CCCP-treated group had a significant decrease in mitochondrial membrane potential, whereas the CD1-012-treated group did not observe a decrease in mitochondrial membrane potential.
  • the CCCP-treated group showed a significant increase in mitochondrial reactive oxygen species levels, while the CD1-012-treated group showed no increase in mitochondrial reactive oxygen species.
  • the mitophagy activation function of the isoquinoline derivative according to the present invention is dependent on the PINK1-Parkin pathway.
  • the BEAS-2B cell line in which PINK1 was knocked down using short hairpin RNA (shRNA) was treated with CCCP (10 ⁇ M) or CD1-012 (15 ⁇ M) of Comparative Example 1 for 18 hours, and then Mitophagy activity was analyzed using flow cytometry (FACS).
  • the size of the fruit fly larvae was measured after treating them with paclitaxel and CD1-012.
  • the larvae treated with paclitaxel alone were about a size larger than the untreated control group. While it decreased by 28%, it only decreased by about 10% when treated with CD1-012 ( Figure 8b). This shows that the isoquinoline derivative according to the present invention does not significantly inhibit the growth of larvae.
  • the therapeutic effect of CD1-012 on peripheral neuropathy was confirmed using an animal model in which the expression of ATG5 or ATG7, which are essential genes of the canonical mitophagy pathway, the most representative mitophagy regulatory pathway, was suppressed.
  • Drosophila expressing shATG7 or shATG5 in the C4da sensory nerve and control fruit flies were treated in parallel with paclitaxel (20 ⁇ M) and CD1-012 (1 mM), and then subjected to heat treatment using a heat probe at 40°C. A probe assay was performed.
  • peripheral neuropathy mice In order to more clearly verify the effectiveness of the isoquinoline derivative according to the present invention in treating peripheral neuropathy, especially anticancer drug-induced peripheral neuropathy, an experiment was conducted using peripheral neuropathy mice. Specifically, CD1-012 was concurrently administered at a concentration of 10 mg/kg or 20 mg/kg to mice with peripheral neuropathy established by administration of an anticancer drug (paclitaxel), and sensitivity to pain was analyzed using the Von-frey hair test. As a result, while the anticancer drug-induced peripheral neuropathy mouse model showed symptoms of increased pain sensitivity, it was confirmed that the hyperalgesia symptoms were significantly improved in mice treated with CD1-012 (FIG. 12a).
  • an anticancer drug paclitaxel
  • the present inventors confirmed that the isoquinoline compound CD1-012, which has mitophagy-specific promoting activity, has a therapeutic effect on peripheral neuropathy, especially anticancer drug-induced peripheral neuropathy.
  • the compound of the present invention can improve hyperalgesia, a typical symptom of peripheral neuropathy, and effectively suppress degeneration of sensory nerves and reduction in distribution of peripheral nerves.
  • the excellent peripheral neuropathy treatment effect of CD1-012 was found to be dependent on the alternative mitophagy pathway by ULK1 and Rab9, while it was independent of the standard mitophagy pathway by ATG5 and ATG7, suggesting appropriate use considering the molecular mechanism. Through this, treatment of peripheral neuropathy can be achieved in various patient groups. Therefore, the novel isoquinoline derivative according to the present invention is a substance capable of fundamentally treating peripheral neuropathy, including anticancer drug-induced peripheral neuropathy, and is expected to be useful in the prevention and treatment of peripheral neuropathy.
  • the active substance according to the present invention can be formulated in various forms depending on the purpose.
  • the following is an example of several formulation methods containing the effective substance according to the present invention as an active ingredient, but the present invention is not limited thereto.
  • tablets were manufactured by tableting according to a conventional tablet manufacturing method.
  • a capsule was prepared by filling a gelatin capsule according to a typical capsule manufacturing method.
  • the active substance according to the present invention was dissolved in an appropriate volume of sodium chloride BP for injection, the pH of the resulting solution was adjusted to pH 3.5 using diluted hydrochloric acid BP, and the volume was adjusted using sodium chloride BP for injection and thoroughly mixed. .
  • the solution was filled into a 5 ml Type I ampoule made of transparent glass, sealed under an upper grid of air by dissolving the glass, and sterilized by autoclaving at 120°C for 15 minutes or more to prepare an injection solution.
  • a nasal absorbent According to a typical manufacturing method of a nasal absorbent, it is prepared to contain 3 mg of the active substance per 1 mL of saline water (0.9% NaCl, w/v, the solvent is purified water), filled into an opaque spray container, and sterilized to prepare a nasal absorbent. Manufactured.
  • the active substance according to the present invention can be manufactured into various types of health foods depending on the purpose.
  • the following is an example of a manufacturing method of some health foods containing the active substance according to the present invention as an active ingredient, and the present invention is not limited thereto.
  • Brown rice, barley, glutinous rice, and coix radish were gelatinized and dried using a known method, roasted, and then made into powder with a particle size of 60 mesh using a grinder.
  • Black beans, black sesame seeds, and perilla seeds were steamed and dried using a known method, roasted, and then made into powder with a particle size of 60 mesh using a grinder.
  • the active substance of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator to obtain a dry powder.
  • the dried powders of grains, seeds, and active substances prepared above were mixed in the following ratio.
  • Grains (34 parts by weight of brown rice, 19 parts by weight of coix radish, 20 parts by weight of barley),
  • Seeds (7 parts by weight perilla seeds, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),
  • the active substance according to the present invention can be manufactured into various types of health functional foods depending on the purpose.
  • the following is an example of a manufacturing method of some health functional foods containing the effective substance according to the present invention as an active ingredient, and the present invention is not limited thereto.
  • Vitamin A acetate 70 ⁇ g
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • Vitamin B12 0.2 ⁇ g
  • composition ratio of the above vitamin and mineral mixture is a mixture of ingredients relatively suitable for health functional foods in a preferred embodiment, but the mixing ratio may be modified arbitrarily, and the above ingredients are mixed according to a typical health functional food manufacturing method. Then, granules can be prepared and used to manufacture health functional food compositions according to conventional methods.
  • composition ratio is a preferred embodiment of mixing ingredients that are relatively suitable for beverages of preference, but the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand class, country of demand, and intended use.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of peripheral neuropathy.
  • Isoquinoline derivatives discovered through screening based on mitophagy activity exhibit an excellent mitophagy promoting effect, and thus can be used as a fundamental treatment for peripheral neuropathy. It was completed after confirming that it can be used.
  • the isoquinoline derivative according to the present invention not only treats hyperalgesia in an anticancer drug-induced peripheral neuropathy animal model, but also suppresses morphological changes in sensory nerves, which have been identified as the core cause of peripheral neuropathy, and distribution of peripheral nerves. It has been confirmed that the number can be increased.
  • the isoquinoline derivative according to the present invention is a fundamental therapeutic agent that can suppress the main symptoms and pathogenesis of peripheral neuropathy, especially anticancer drug-induced peripheral neuropathy, and is useful in the fields of prevention, improvement, and/or treatment of the disease. It is expected to be utilized, and its industrial applicability is acknowledged.

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Abstract

본 발명은 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것으로서, 미토파지 활성에 기반한 스크리닝을 통해 발굴된 이소퀴놀린 유도체가 우수한 미토파지 촉진 효과를 발휘하며, 이를 통해 말초신경병증의 근본적인 치료제로 활용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다. 구체적으로, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 항암제 유도성 말초신경병증 동물모델에서 통각과민증상을 치료할 뿐만 아니라, 말초신경병증의 핵심 병인으로 밝혀진 감각신경의 형태적 변화를 억제하고, 말초신경의 분포 및 수를 증가시킬 수 있음이 확인되었다. 따라서, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증의 주요 증상 및 병인을 억제할 수 있는 근본적인 치료제로서 상기 질병의 예방, 개선, 및/또는 치료 분야에서 유용하게 활용될 것으로 기대된다.

Description

이소퀴놀린 유도체를 유효성분으로 포함하는 말초신경병증의 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 신규한 이소퀴놀린 유도체의 말초신경병증의 예방, 개선, 및/또는 치료 용도에 관한 것이다.
본 출원은 2022년 10월 14일에 출원된 한국특허출원 제10-2022-0132390호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
말초신경병증 (peripheral neuropathy)은 손이나 발을 포함한 몸 전체에 퍼져있는 말초신경계의 손상으로 인해 신체 기능에 다양한 문제가 나는 질환을 지칭한다. 말초신경병증은 신경조직에 직간접적으로 영향을 주는 질병에 의해 발병하는데, 영향을 받는 신경조직의 종류에 따라 감각신경병증 (sensory neuropathy), 운동신경병증 (motor neuropathy), 자율신경증 (autonomic neuropathy)으로 구별할 수 있다. 감각신경병증의 경우 촉각이나 온도 변화에 대한 감각이 저하되거나, 따끔거리는 느낌 혹은 타는 듯한 통증을 느끼게 되고, 피부에서 이질통 등을 경험하게 된다. 운동신경병증은 균형감각의 손실 또는 근력 약화 등을 동반하며, 자율신경병증은 해당 신경이 미치는 기관에 따라 방광을 조절하는 기능이 약화되어 요실금을 경험하거나, 비정상적인 혈압 및 심장박동을 유발한다.　말초신경병증의 원인으로 다양한 요인들이 제시되었는데, 유전적 질환, 영양결핍, 대사 및 내분비계통의 질환, 당뇨병, 염증성 질환, 암 치료를 위한 항암제 투여 등이 발병 원인으로 알려져 있다. 이 중 항암제에 의해 발생하는 항암제 유도성 말초신경병증 (Chemotherapy-induced peripheral neuropathy; CIPN)은 대표적인 후천성 말초신경병증으로서, 항암치료를 받는 환자들 중 60% 이상에서 발생하며, 감각신경이상 및 무해자극 통증 (allodynia), 통각과민 (hyperalgesia)과 같은 심각한 증상을 야기한다. CIPN은 암환자의 치료와 삶의 질에 매우 중대한 영향을 미치지만, 현재로서는 말초신경병증의 치료제가 부재하여 항암제 용량을 줄이고, 다른 항암제로 전환하는 방법만이 시도되고 있다.
그동안의 연구에 따르면 Paclitaxel, Vincristine, Taxol, Cisplatin, Bortezomib 등의 항암제들에 의한 CIPN의 원인으로 축삭미토콘드리아의 기능이상이 지목되고 있다. 특히, 파클리탁셀 처리시 미토콘드리아 막전위의 감소, 미토콘드리아 활성산소의 증가, ATP 합성의 감소, 미토콘드리아 구조이상 등의 현상이 세포 및 동물모델에서 확인되었다. 신경세포에서 미토콘드리아가 에너지 생산, 신경가소성, 스트레스에 대한 저항성 등에 필수적인 역할을 담당한다는 것을 고려하면, 항암제에 의한 미토콘드리아 기능이상이 CIPN의 발생 및 진행에 중요한 역할을 한다고 여겨진다. 그러나, 아직까지 미토콘드리아 기능이상을 개선함으로써 CIPN을 치료하는 전략의 개발은 이루어지고 있지 않다.
한편, 미토파지 (mitophagy)는 손상되었거나 불필요한 미토콘드리아를 제거하는 세포 내 분해기전으로서, 손상된 미토콘드리아를 막으로 둘러싸 오토파고좀 (autophagosome)을 형성하고 이를 리소좀 (lysosome)과 융합하여 손상된 미토콘드리아를 선택적으로 제거한다. 이러한 미토파지의 활성은 신경세포를 비롯한 여러 세포들에서 미토콘드리아 항상성을 조절하고 조직의 기능을 유지하는데 중요한 역할을 한다. 뿐만 아니라, 신경세포에서 미토파지는 여러 스트레스에 대해 보호 효과를 나타내며 신경 퇴행에 대한 저항성에 중요하다는 것이 보고되고 있다. 최근에는, 알츠하이머성 치매나 파킨슨병 등의 신경퇴행성 질병들에서 미토파지의 활성 감소가 관찰되고 있으며, 알츠하이머성 치매 혹은 파킨슨병의 동물모델에서 미토파지 촉진이 미토콘드리아 기능이상을 개선하고 병리증상을 완화한다는 것이 실험적으로 검증되고 있다. 따라서, 신경세포의 변성이 원인이 되는 CIPN에서 미토파지를 촉진하는 것은 미토콘드리아 기능이상을 개선하고 통각과민 등의 증상을 치료할 수 있는 유력한 전략으로 기대된다. 그러나, 미토파지 촉진을 통한 CIPN 치료전략은 미토파지를 효과적으로 촉진할 수 있는 물질의 부재라는 기술적 한계로 인해 현재까지 시도되지 못하고 있다.
미토파지의 활성 촉진을 통해 질병 치료 효과를 발휘할 수 있는 미토파지 조절제를 발굴하기 위해서는 세포 및 생체 내에서 미토파지 변화를 손쉽게 측정할 수 있는 연구시스템이 필수적으로 필요하다. 그러나, 미토파지 활성을 민감하고 정량적으로 측정할 수 있는 실험적 방법의 부재로 인해, 미토파지 활성자체를 판독지표 (read-out)로 하는 미토파지 조절 화합물의 탐색은 수행된 적이 없었다. 지금까지 널리 사용되고 있는 LC3 기반 검출 방법은 미토파지의 초기단계인 오토파고좀 형성단계만을 측정할 수 있기 때문에 측정감도가 낮고 정량적 측정이 어려운 한계를 지니고 있다. 또한, 몇몇 연구그룹에서 시도된 제어물질 발굴시도도 대부분 PINK-Parkin의 미토콘드리아 이동이나, 미토파지 과정에서 일어나는 미토콘드리아의 분열 (fission) 등 간접적 판독지표들을 사용하여 실제 생리적 조건에서 미토파지 활성을 제어할 수 있는 물질을 발굴하지 못하고 있다.
현재 실험적으로 미토파지 활성을 유도하는 방법은 CCCP, FCCP, rotenone 등과 같이 미토콘드리아의 기능이상을 유도하는 소위 '미토콘드리아 독소들 (mitochondrial toxins)'을 처리하는 것이다. 그러나, 상기 CCCP와 FCCP는 미토콘드리아 막전위 저해제 (uncoupler)로서 미토콘드리아 막전위를 탈분극시키며, rotenone은 Complex I 저해제로 작용한다. 상기 미토콘드리아 독소들은 직접적으로 미토콘드리아 손상을 유도함으로써 손상된 미토콘드리아의 제거기전인 미토파지 활성을 유도하지만, 세포에 대한 독성이 강하기 때문에 미토파지 활성 촉진을 위한 약물로는 사용할 수 없는 제한이 있다.
상술한 바와 같이, 파클리탁셀을 비롯한 항암제들은 높은 빈도로 통증 및 감각이상을 초래하는 말초신경병증을 유발하지만 이의 효과적인 치료제가 없어 암환자의 삶의 질 저하의 주요 원인으로 지목되고 있다. 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 미토파지 활성에 기반한 스크리닝을 통해 발굴된 이소퀴놀린 유도체가 미토파지 활성을 촉진함으로써 말초신경병증의 주요 증상을 개선 및 완화할 수 있으며, 따라서 말초신경병증의 근본적인 치료제로 활용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다.
따라서, 본 발명의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000001
본 발명의 다른 목적은 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조성물, 및 설명서를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000002
뿐만 아니라, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 말초신경병증의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 상기 조성물, 및 설명서를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토파지의 활성을 촉진할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 특징을 만족할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다:
(a) 미토콘드리아의 막전위를 감소시킴;
(b) 미토콘드리아의 활성산소종 수준을 감소시킴; 및
(c) 미토콘드리아의 ATP 합성능을 증가시킴.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 감각신경의 형태적 변성을 억제할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 말초신경의 수를 증가시킬 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 상기 말초신경병증은 항암제 유도성 말초신경병증일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것으로서, 미토파지 활성에 기반한 스크리닝을 통해 발굴된 이소퀴놀린 유도체가 우수한 미토파지 촉진 효과를 발휘하며, 이를 통해 말초신경병증의 근본적인 치료제로 활용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다. 구체적으로, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 항암제 유도성 말초신경병증 동물모델에서 통각과민증상을 치료할 뿐만 아니라, 말초신경병증의 핵심 병인으로 밝혀진 감각신경의 형태적 변화를 억제하고, 말초신경의 분포 및 수를 증가시킬 수 있음이 확인되었다. 따라서, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증의 주요 증상 및 병인을 억제할 수 있는 근본적인 치료제로서 상기 질병의 예방, 개선, 및/또는 치료 분야에서 유용하게 활용될 것으로 기대된다.
도 1a 내지 1c는 본 발명의 일 구현예에 따른 이소퀴놀린 유도체 화합물 ("CD1-012"로 지칭함, 이하 동일)의 인간 정상 폐세포주에서의 미토파지 활성 촉진 효과를 분석한 결과이다 (도 1a, FACS 결과; 도 1b, 공초점현미경 관찰 결과; 및 도 1c, mito-YFP 형광단백질을 이용한 미토콘드리아의 양적변화 측정 결과).
도 2a 및 2b는 CD1-012의 SH-SY5Y 세포주에서의 미토파지 활성 촉진효과를 분석한 결과 (도 2a) 및 Hela-Parkin 세포주에서의 미토파지 활성 촉진효과를 분석한 결과 (도 2b)이다.
도 3a 및 3b는 CD1-012의 처리 농도 (도 3a) 및 처리 시간 (도 3b)에 따른 BEAS-2B 세포의 미토파지 활성을 분석한 결과이다.
도 4a 및 4b는 CD1-012의 처리에 따른 세포의 미토파지 활성 변화 (도 4a) 및 오토파지 활성 변화 (도 4b)를 확인한 결과이다.
도 5는 CD1-012과 비교예인 팔미트 및 베르베린의 농도별 미토파지 활성 촉진효과를 비교한 결과이다.
도 6은 CD1-012 또는 비교예인 CCCP를 세포에 처리한 후 미토콘드리아 막전위 및 미토콘드리아 활성산소의 수준을 분석한 결과를 나타낸다.
도 7은 CD1-012 및 비교예인 CCCP의 PINK1 knockdown 세포주 (shPINK1)에서의 미토파지 촉진 활성을 분석한 결과이다.
도 8a는 CD1-012의 항암제 유도성 말초신경병증 치료 효과를 확인하기 위해 초파리 유충에 항암제 (파클리탁셀) 및/또는 CD1-012를 처리한 후 열탐침에 대한 유충의 회피 반응 시간 (withdrawal latency)을 측정한 결과를 나타낸다.
도 8b는 CD1-012가 초파리 유충의 성장에 미치는 영향을 확인하기 위해 초파리 유충에 항암제 및/또는 CD1-012를 처리한 후 유충 크기를 측정한 결과를 나타낸다.
도 9a 내지 9c는 CD1-012의 항암제에 의한 감각신경 변성 억제 효과를 확인하기 위해 초파리에 항암제 및/또는 CD1-012를 처리한 후 C4da 감각신경의 형태를 관찰한 결과 (도 9a), 수상돌기 가지의 전체 길이 (도 9b) 및 가지 분지의 숫자 (도 9c)를 측정한 결과를 나타낸다.
도 10a 및 10b는 표준 미토파지 경로의 매개인자인 ATG5 (도 10a) 또는 ATG7 (도 10b)의 발현이 억제된 초파리에 항암제 및/또는 CD1-012를 처리한 후 열탐침에 대한 유충의 회피 반응 시간을 측정한 결과를 나타낸다.
도 11a 및 11b는 대체 미토파지 경로의 매개인자인 ULK1 (도 11a) 또는 Rab9 (도 11b)의 발현이 억제된 초파리에 항암제 및/또는 CD1-012를 처리한 후 열탐침에 대한 유충의 회피 반응 시간을 측정한 결과를 나타낸다.
도 12a 및 12b는 항암제 유도성 말초신경병증 치료 효과를 확인하기 위해 마우스에 항암제 (파클리탁셀) 및/또는 CD1-012를 처리한 후 통증에 대한 민감도를 Von-Frey Hair test로 측정한 결과 (도 12a) 및 발바닥의 말초신경 분포를 확인한 결과 (도 12b)를 나타낸다.
본 발명은 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것으로서, 미토파지 활성에 기반한 스크리닝을 통해 발굴된 이소퀴놀린 유도체가 우수한 미토파지 촉진 효과를 발휘하며, 이를 통해 말초신경병증의 주요 증상을 개선하고 병인을 차단하여 근본적인 치료제로 활용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화합물은 미토파지 특이적 촉진기능이 규명된 이소퀴놀린 유도체로서, 미토콘드리아 및 세포독성이 없음이 확인되었으며, 선행 연구를 통해 알츠하이머성 치매모델의 미토콘드리아 기능이상을 개선할 수 있음이 확인되었다.
또한, 본 발명자들은 상기 화합물의 말초신경병증 치료 효과를 확인하기 위해 초파리 열통각과민 모델에 상기 화합물을 처리한 결과, 항암제에 의한 열통각과민 증상이 정상 수준으로 완화되며, 감각신경의 형태적 변화가 억제되는 것을 확인하였다 (실시예 5 및 6). 또한, 마우스 말초신경병증 모델에서도 상기 화합물에 의해 열통각과민 증상이 개선되고 발바닥의 말초신경병증의 수가 증가하는 것을 확인하였다 (실시예 9).
나아가 상기 화합물의 우수한 말초신경병증 치료 효과는 ULK1 및 Rab9에 의한 대체 미토파지 경로에 의존적인 반면 ATG5 및 ATG7에 의한 표준 미토파지 경로에 비의존적인 것으로 나타났다 (실시예 7).
이와 같이, 본 발명에 따른 신규한 이소퀴놀린 유도체는 말초신경병증의 주요 증상을 완화할 뿐만 아니라 상기 질병의 주요 원인인 감각신경의 변성 및 말초신경의 분포 감소를 효과적으로 억제할 수 있는 바, 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증의 근본적인 치료제로 활용될 것으로 기대된다. 특히, 분자 수준의 실험을 통해 상기 화합물의 말초신경병증 치료 매커니즘이 확인된 바, 상기 화합물의 분자적 매커니즘을 고려한 적절한 사용을 통해 다양한 환자군에서 말초신경병증의 치료를 달성할 수 있을 것으로 예상된다.
이하, 본 발명에 대해 구체적으로 서술한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다:
[화학식 1]
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본 발명에서 용어, "약학적으로 허용 가능한 염"이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "약학적으로 허용 가능한"이라는 용어는 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 기타 문제점이나 합병증 없이 이득/위험 비가 합리적이어서 대상체 (예를 들어, 인간)의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 건전한 의학적 판단의 범주 이내인 화합물 또는 조성물을 의미한다.
적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.
적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.
본 발명의 화합물의 범위에는 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 이성질체, 수화물 및 용매화물이 모두 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체는 하기 반응식 1과 같이, 유기용매에 화학식 2로 표시되는 팔마틴 (palmatine) 또는 화학식 3으로 표시되는 베르베린 (berberine)과 루이스산 (Lewis acid) 촉매를 첨가하고 반응시켜, 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 화합물을 제조하는 단계 (단계 1);를 포함하는 제조방법을 통해 제조될 수 있다.
[반응식 1]
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본 발명의 일 구현예에서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태는 팔마틴 또는 베르베린의 코어 구조의 소수성 (hydrophobic) 치환기 (메톡시기)가 친수성 (hydrophilic) 치환기 또는 분자간 수소결합을 제공할 수 있는 작용기 (하이드록시기)로 치환된 유도체일 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 하기 화학식 1a 내지 1c로 각각 표시되는 2,3,5,10-테트라하이드록시-5,6-다이하이드로아이소퀴놀리노[3,2-a]아이소퀴놀린-7-이윰브로마이드(2,3,9,10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-ium bromide), 2,3,5,10-테트라하이드록시-5,6-다이하이드로아이소퀴놀리노[3,2-a]아이소퀴놀린-7-이윰하이드록사이드(2,3,9,10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-ium hydroxide), 및 2,3,5,10-테트라하이드록시-5,6-다이하이드로아이소퀴놀리노[3,2-a]아이소퀴놀린-7-이윰클로라이드(2,3,9,10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-ium chloride) 중에서 선택될 수 있다. 본 명세서에서, 상기 2,3,5,10-테트라하이드록시-5,6-다이하이드로아이소퀴놀리노[3,2-a]아이소퀴놀린-7-이윰브로마이드는 "CD1-012"로 지칭될 수 있다.
[화학식 1a]
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[화학식 1b]
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[화학식 1c]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000007
본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토파지의 활성을 촉진하는 것 (즉, 미토파지의 활성화)을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 용어 "미토파지 (mitophagy)"는 손상되었거나 불필요한 미토콘드리아를 제거하는 세포 내 분해기전을 지칭한다. 미토파지는 미토콘드리아의 손상이 발생한 경우 오토파고좀 (autophagosome)을 형성하고 리소좀과 융합하여 손상된 미토콘드리아를 선택적으로 분해하여 제거하는 역할을 한다. 미토파지는 세포가 영양결핍상태 등에 놓였을 때 거대분자 (macromolecular) 전구체를 생성하고 에너지를 생성하기 위해 세포 내의 불필요한 성분 (오래된 단백질, 단백질 집합체, 세포소기관, 세포에 침투한 병원균 등)을 분해 및 재활용하는 기작인 오토파지 (autophagy)와는 구별되는 기전이다. 미토파지는 오토파지를 조절하는 영양소, 에너지, 및 스트레스 등의 조절 신호와는 독립적으로 조절된다. 상기 미토파지는 표준 미토파지 (canonical mitophagy)와 대체 미토파지 (alternative mitophagy 혹은 non-canonical mitophagy)로 구별된다. 표준 미토파지는 ATG5 및 ATG7과 같은 ATG 단백질들이 관여하는 반면, 대체 미토파지는 ATG 단백질에 비의존적이며, Ulk1/Rab9/Rip1에 의해 매개된다.
본 발명자들은 구체적인 실시예를 통해 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체가 기타 공지된 미토파지 촉진제에 비해 더욱 우수한 미토파지 활성화 효과를 발휘하는 것을 확인하였으며, 이를 통해 항암제 유도성 말초신경병증의 주요 증상을 개선하고 주요 병인인 감각신경의 변성 및 말초신경의 감소를 억제하는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토파지 수준 (예컨대, 신경세포의 미토파지 수준)이 감소한 말초신경병증 환자에서 특히 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다.
특히, 구체적인 실시예에서 본 발명의 화합물의 말초신경병증 치료 매커니즘은 ATG5 또는 ATG7에 비의존적임이 확인된 바, 상기 화합물은 표준 미토파지 경로에 비의존적으로 말초신경병증을 치료할 수 있다. 즉, 본 발명의 화합물은 표준 미토파지 경로의 돌연변이 및 기타 원인에 의해 표준 미토파지 경로가 불활성화된 말초신경병증 환자에서도 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다. 상기 표준 미토파지 경로의 돌연변이란 표준 미토파지 경로의 불활성화 혹은 감소된 활성을 포함하며, 이는 표준 미토파지 경로에 관여하는 단백질들 (예컨대, ATG5, ATG7, 및 ATG8 등의 ATG 단백질)의 수준 또는 활성의 감소에 의한 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 구현예에서, 상기 화합물의 말초신경병증 치료 매커니즘은 대체 미토파지 경로에 의존적일 수 있다. 즉, 상기 화합물은 대체 미토파지 경로를 통해 미토파지를 촉진함으로써 말초신경병증에 대한 치료 효과를 발휘하는 것일 수 있다. 따라서, 상기 화합물의 처리와 함께 대체 미토파지 경로를 활성화하는 경우 우수한 말초신경병증 치료 효과가 달성될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 대체 미토파지 경로의 활성화의 예로는, 대체 미토파지 경로의 매개인자 (ULK1, Rab9 등)의 과발현 혹은 활성화 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 특징을 만족할 수 있다:
(a) 미토콘드리아의 막전위를 감소시킴;
(b) 미토콘드리아의 활성산소종 수준을 감소시킴; 및
(c) 미토콘드리아의 ATP 합성능을 증가시킴.
즉, 본 발명의 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토콘드리아의 수준 및/또는 활성 (기능)을 증가시킬 수 있다. 본 발명에 따른 화합물의 미토콘드리아의 수준 및/또는 활성의 개선 효과는 상기 화합물의 미토파지 활성화 효과를 통해 달성되는 것일 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토콘드리아의 수준 및/또는 기능 (예컨대, 신경세포의 미토콘드리아의 수준 및/또는 기능)이 감소한 말초신경병증 환자에서 특히 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 감각신경의 형태적 변성을 억제 (완화, 개선)하는 것을 특징으로 할 수 있다. 말초신경병증 환자에서 나타나는 통각과민현상은 감각신경의 형태 변화가 주된 원인인 것으로 알려져 있다. 예컨대, 항암제 유도성 말초신경병증에서 항암제는 감각신경의 수상돌기 가지 (dendrite arbor)의 길이 및 수의 증가를 유발하며, 이것이 통각과민을 야기할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 감각신경의 수상돌기 가지의 길이가 증가하는 것을 억제하거나, 가지의 수 (즉, 분지의 수)가 증가하는 것을 억제할 수 있다. 바람직하게는, 상기 감각신경은 Class IV da (C4da) 감각신경일 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 감각신경의 형태적 변성 (수상돌기 가지의 길이 또는 수의 증가)을 수반한 말초신경병증 환자에서 특히 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다.
상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 말초신경의 수를 증가시킬 수 있다. 말초신경병증은 말초신경의 기능 부전 및 정상 말초신경의 감소로 인해 야기되는데, 본 발명의 화합물은 구체적인 실시예를 통해 말초신경의 수 및 분포를 증가시킬 수 있음이 확인되었다. 따라서, 본 발명의 화합물은 말초신경의 수 또는 분포가 감소된 말초신경병증 환자에서 특히 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다. 상기 말초신경은 바람직하게는 표피내 신경섬유 (intraepidermal nerve fiber; IENF)일 수 있다.
본 발명에 있어서, "말초신경병증 (peripheral neuropathy)"은 말초신경계의 손상 또는 기능부전으로 인해 신체 기능에 다양한 문제가 나타나는 신경학적 장애를 지칭한다. 말초신경병증 환자는 발이 저린 증상, 화끈거림, 무감각, 심한 통증과 같은 통각과민증과 같은 감각 이상을 야기할 뿐만 아니라, 균형감각의 손실이나 근력의 손상을 야기하기도 한다. 말초신경병증은 신경조직에 직간접적인 영향을 미치는 다양한 원인에 의해 유도된다. 예컨대 급성 말초신경병증은 감염, 자가면역 반응, 약물, 항암제와 같은 독성 물질에 의해 발생할 수 있으며, 만성적 말초신경병증은 당뇨, 알코올 중독, 영양결핍, 신부전, 간부전 등의 대사성 질환에 의해 유도된다. 본 발명의 일 구현예에서, 말초신경병증은 항암제에 의해 발생하는 "항암제 유도성 말초신경병증 (Chemotherapy-induced peripheral neuropathy; CIPN)"일 수 있다. 이는 대표적인 후천성 말초신경병증으로서, 항암치료를 받는 환자들 중 60% 이상에서 발생하며, 대부분 항암제의 누적 용량에 따라 발병하고, 감각신경이상 및 무해자극 통증 (allodynia), 통각과민 (hyperalgesia)과 같은 심각한 통증을 야기한다. 상기 항암제는 말초신경의 기능부전이나 손상을 야기할 수 있는 것이라면 제한이 없으며, 플래티넘 (Platinum) 계열, 탁산 (Taxane) 계열, 빈카알카로이드 (vinca alkaloids), 프로테아좀 억제제 (proteasome inhibitors), 보르테조밉 (bortezomib), 및 탈리도마이드 (thalidomide) 등을 모두 포함하고, 이외에 임상, 약학, 또는 생의학적으로 사용 가능한 모든 항암제를 포함한다. 구체적으로, 상기 항암제는 파클리탁셀 (Paclitaxel), 보르테조밉 (Bortezomib), 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 빈크리스틴 (Vincristine), 시스플라틴 (Cisplatin), 탁솔 (Taxol), 도세탁셀 (Docetaxel), 익사베필론 (iXABEPILONE), 탈리도마이드 (Thalidomide), 벨케이드 (Velcade), 레날리도마이드 (Lenalidomide) 등으로부터 선택될 수 있다. 본 발명이 화합물은 상기 항암제에 의한 말초신경병증성 통증의 완화, 개선, 예방, 및/또는 치료 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토파지의 활성을 특이적으로 촉진할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미토파지의 활성은 PINK1, ATG5, 및 ATG7로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 비의존적일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미토파지의 활성은 ULK1 또는 Rap9에 의존적일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 감각신경의 형태적 변성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 말초신경의 수를 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 말초신경병증은 항암제 유도성 말초신경병증인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 항암제는 파클리탁셀 (Paclitaxel), 보르테조밉 (Bortezomib), 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 빈크리스틴 (Vincristine), 시스플라틴 (Cisplatin), 탁솔 (Taxol), 도세탁셀 (Docetaxel), 익사베필론 (iXABEPILONE), 탈리도마이드 (Thalidomide), 벨케이드 (Velcade), 및 레날리도마이드 (Lenalidomide)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 0 초과 40μM일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토콘드리아 기능이상을 개선시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미토콘드리아 기능이상의 개선은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:
(a) 미토콘드리아의 정상 막전위의 수준을 유지시킴;
(b) 미토콘드리아의 활성산소종 수준을 감소시킴; 및
(c) 미토콘드리아의 ATP 합성능을 증가시킴.
본 발명은 상기 약학적 조성물, 및 설명서를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 말초신경병증은 항암제 유도성 말초신경병증일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물 내의 상기 화합물의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO3) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na2S2O5), 아황산나트륨(Na2SO3), 질소가스(N2), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다. 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 0.001 내지 150 mg, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 질환의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
본 발명에 있어서 “키트 (kit)”는 본 발명의 이소퀴놀린 유도체, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 조성물을 포함함여 말초신경병증의 예방 또는 치료 목적으로 사용되는 도구를 의미한다. 상기 키트에는 상기 화합물 또는 조성물 외에도 상기 물질들의 제조, 보관, 투여 등에 통상적으로 필요한 다른 구성성분, 조성물, 용액, 장치 등이 포함될 수 있다. 예컨대, 상기 키트에는 본 발명에 따른 이소퀴놀리 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 특성, 이들의 적합한 사용 및 보관 등을 지시하는 설명서 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 유기용매에 팔마틴 또는 베르베린에 루이스산 촉매를 첨가하여 반응시키는 단계를 포함하는, 상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조방법을 제공한다.
구체적으로, 상기 제조방법은 유기용매에 상기 화학식 2로 표시되는 팔마틴 또는 상기 화학식 3으로 표시되는 베르베린에 루이스산 촉매를 첨가하여 반응시키는 단계를 포함하며, 이는 하기 반응식 1과 같이 나타낼 수 있다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000008
본 발명의 일 실시예에서, 상기 루이스산 촉매는 BF3, BBr3, AlF3, AlCl3, AlBr3, TiCl4, TiBr4, TiI4, FeCl3, FeCl2, SnCl2, SnCl4, WCl6, MoCl5, SbCl5, TeCl2, 및 ZnCl2 등의 금속 할로겐화물; Et3Al, Et2AlCl, EtAlCl2, Et3Al2Cl3, (i-Bu)3Al, (i-Bu)2AlCl, (i-Bu)AlCl2, Me4Sn, Et4Sn, Bu4Sn, 및 Bu3SnCl 등의 금속 알킬 화합물; Al(OR)3-xClx 또는 Ti(OR)4-yCly (이때, 상기 R은 알킬기 혹은 아릴기를 나타내고, x는 1 또는 2, y는 1 내지 3의 정수임) 등의 금속 알콕시 화합물 중 1 종 이상, 예를 들면, 금속 할로겐화물, 예를 들면, BBr3일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 유기용매는 다이메틸 설폭사이드, 다이메틸 포름아마이드, 아세톤, 테트라하이드로퓨란, 벤젠, 톨루엔, 에테르, 메탄올, 헥산, 시클로 헥산, 피리딘, 아세트산, 사염화탄소, 클로로포름, 디클로로 메탄 및 물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 종 이상, 예를 들면, 디클로로 메탄일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 루이스산 촉매는 불활성 기체 중에서 첨가되는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 루이스산 촉매는 상기 유기용매에 용해된 팔마틴 또는 베르베린에 약 0℃에서, 불활성 기체 분위기, 예를 들면, 질소기류 하에서, 적가 하는 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 루이스산 촉매를 첨가한 후, 상온, 예를 들면, 20℃ 내지 28℃, 예를 들면, 24℃ 내지 26℃에서 10 시간 내지 14 시간, 예를 들면, 11 시간 내지 13 시간, 예를 들면, 12 시간동안 교반하여 반응시킬 수 있고, 상기 반응의 종료는 예를 들면, TLC(thin-layer Chromatography)를 이용하여 확인할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 되는 염을 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물을 포함한다.
본 발명에서 용어, "식품학적으로 허용 가능한 염"이란 식품학적으로 허용되는 유기산, 무기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.
본 발명의 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 화합물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 명세서에 있어서, "건강기능식품"이란 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 말초신경병증의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 이소퀴놀린 유도체 화합물 CD1-012의 합성
본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체 화합물 2,3,5,10-테트라하이드록시-5,6-다이하이드로아이소퀴놀리노[3,2-a]아이소퀴놀린-7-이윰브로마이드 (2,3,9,10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-iumbromide; CD1-012)는 하기 과정을 통해 합성하였다: 건조된 250 mL 둥근 플라스크에 팔마틴(palmatine; 1.0 g, 2.92 mmol)을 40 mL의 무수 CH2Cl2에 녹이고, BBr3 용액(12.80 mL, 12.80 mmol)을 0℃에서 질소 기류 하에 첨가하여 반응용액을 제조하고, 상기 반응용액을 상온에서 12 시간 동안 교반 시킨 후, TLC를 이용하여 반응이 종결된 것을 확인하였다. 상기 반응이 종결된 반응용액에 10 mL의 MeOH를 첨가하여 30 분간 교반하고, 진공 농축기를 통해 농축시킨 후, CH2Cl2(100 mL x 5)을 이용하여 세척하고, 감압 하에서 건조하여, 고체 형태의 이소퀴놀린 유도체 화합물(2,3,9,10-Tetrahydroxy-5,6-dihydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-iumbromide; CD1-012)을 99% (1.09 g, 2.98 mmol)의 수득률로 수득하였고, 반응을 하기의 반응식 1a에 도시하였다:
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.71 (s, 1H), 10.62 (s, 1H) 9.98 (br, 1H), 9.74 (s, 1H), 9.23 (br, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 1H) 7.61 (d, J = 8.8 Hz 1H), 7.46 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.82 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H)
[반응식 1a]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000009
비교예 1. 카르보닐 시아니드 3-클로로페닐하이드라존 (Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone; CCCP)
대표적인 미토파지 촉진화합물인 CCCP를 비교예 1로 하였다.
비교예 2. 팔마틴 (Palmatine)
하기의 화학식 2로 표시되는 팔마틴 (Palmatine, CAS Number: 3486-67-7)을 비교예 2로 하였다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000010
비교예 3. 베르베린 (Berberine)
하기의 화학식 3으로 표시되는 베르베린 (Berberine, CAS Number: 633-65-8(Berberine-HCl) 또는 CAS Number: 2086-83-1(Berberine-HCl-2H2O))을 비교예 3으로 하였다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2023015689-appb-img-000011
실시예 2. CD1-012의 미토파지 활성 촉진 효과 분석
실시예 2-1. 미토파지 활성 촉진 효과 분석
실시예 1에서 합성된 CD1-012의 미토파지 활성 촉진 효과를 분석하기 위하여, 인간 정상폐세포주인 BEAS-2B 세포주에 미토케이마 형광단백질을 발현시키고, 본 발명의 화합물 CD1-012 (15 μM) 및 비교예 1의 CCCP (10 μM)를 각각 24 시간 처리한 후, 각각의 샘플의 미토파지 활성을 측정하고, 결과를 도 1a 내지 1c에 도시하였다.
구체적으로, 도 1a는 유세포분석기(FACS)를 이용한 분석 결과이고 (CD1-012를 15 μM로 24h 처리함), 도 1b는 공초점현미경(confocal microscope)를 이용한 분석 결과이며 (CD1-012를 15 μM로 18h 처리함), 도 1c는 미토콘드리아로 단백질을 이동시키는 표적서열(targeting sequence)를 포함한 mito-YFP 형광단백질을 사용하여 미토콘드리아의 양적변화를 측정한 결과이다 (CD1-012를 20 μM로 24h 처리함). 상기 결과들에 의하면 CD1-012가 처리된 그룹은 미처리 대조군 (con)에 비해 미토파지 활성이 현저하게 증가하였으며, 특히 도 1a에 나타난 바와 같이, CD-012를 처리한 샘플의 미토파지 활성이 대표적인 미토파지 촉진 화합물인 CCCP를 처리한 샘플만큼 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2-2. 다양한 세포주들에서의 미토파지 활성 촉진효과 분석
실시예 1에서 합성된 CD1-012가 다양한 세포주들에서 미토파지 활성을 증가시키는지 확인하였다. 이를 위해, 미토케이마 형광단백질을 발현하는 인간 신경모세포종 세포주인 SH-SY5Y 세포주 및 Parkin (E3 ligase)을 발현하는 자궁경부암 HeLa 세포주 (Hela-Parkin)에 CD1-012 및 비교예 1의 CCCP를 처리한 후, 유세포분석기 (FACS)를 사용하여 각 샘플의 미토파지 활성을 분석하고, 그 결과를 도 2a 내지 2b에 도시하였다.
구체적으로, 도 2a는 SH-SY5Y 세포주에 대한 분석 결과이고, 도 2b는 Hela-Parkin 세포주에 대한 분석 결과이다. 도 2a 내지 2b에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물 CD1-012가 처리된 세포는 대조군 (Con)과 비교하여 미토파지 활성이 현저히 증가하였다. 상기 결과는 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체가 다양한 세포주들에서 미토파지 활성을 촉진할 수 있음을 보여준다.
실시예 2-3. 처리 농도 및 처리 시간에 따른 미토파지 활성 촉진효과 분석
실시예 1에서 합성된 CD1-012가 농도 및 시간 의존적으로 미토파지 활성을 촉진하는지 확인하였다. 이를 위해, 미토케이마를 발현하는 BEAS-2B 세포주에 상기 CD1-012를 다양한 농도 또는 일정한 농도 (15 μM)로 시간을 달리하여 처리한 후, 유세포분석기를 이용하여 미토파지 활성을 측정하였다.
CD1-012의 처리 농도에 따른 미토파지 활성 측정 결과는 도 3a에, 시간별 미토파지 활성 측정 결과는 도 3b에 도시하였다. 도 3a에 나타난 바와 같이, CD1-012를 7.5 μM 이상의 농도로 처리한 그룹부터 미토파지 활성이 미처리 대조군 대비 유의미하게 증가하기 시작하였으며, 최대 처리 농도 17. 5 μM까지 농도의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 3b에 나타낸 바와 같이, CD1-012를 처리하고 3시간 후부터 유의미하게 미토파지 활성이 증가하기 시작하여 18 시간 후에는 미토파지 활성이 최대인 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 미토파지 증가 양상은 CD1-012가 간접적인 방식이 아닌 직접적으로 미토파지 활성을 농도, 시간 의존적인 방식으로 증가시킴을 의미한다.
실시예 2-4. 미토파지 특이적 촉진 활성 확인
실시예 1에서 합성된 CD1-012가 미토파지 활성만을 특이적으로 증가시키는지 확인하였다. 이를 위해, 미토케이마를 발현하는 BEAS-2B 세포주에 CD1-012 (15 μM) 또는 비교예 1의 CCCP (10 μM)를 18 시간 동안 처리한 후, 공초점 현미경으로 미토파지 활성을 분석하였다. 또한, 케이마 형광단백질을 발현하는 BEAS-2B 세포주를 HBSS (Hanks' balanced salts solution)에서 3시간 동안 배양하여 영양결핍상태 (starvation, starv.)를 유도하고, 공초점현미경을 이용해 CD1-012 (15 μM)를 18시간 동안 처리한 샘플과 비교하여 오토파지 활성을 측정하였다.
그 결과, 도 4a에 나타낸 바와 같이, CD1-012를 처리한 샘플은 CCCP를 처리한 샘플과 동일하게 미토파지의 활성을 촉진하는 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 4b에 나타낸 바와 같이, 영양결핍상태가 유도된 그룹은 높은 수준의 오토파지가 유도되었으나, CD1-012가 처리된 그룹은 미처리 대조군과 비교하여 오토파지 활성의 유의미한 차이가 없었다. 상기 결과는 본 발명의 화합물 CD1-012가 미토파지의 활성만을 특이적으로 증가시키는 물질임을 시사한다.
실시예 2-5. 베르베린 및 팔미트와의 미토파지 활성 촉진효과 비교
본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체가 미토파지 촉진제인 팔미트 및 베르베린과 비교하여 미토파지 촉진 효과가 더욱 높은지 확인하였다. 이를 위해, 미토케이마 형광단백질을 발현하는 인간 정상폐세포주인 BEAS-2B 세포주에 CD1-012, 비교예 2의 팔미트, 또는 비교예 3의 베르베린을 다양한 농도로 처리하고, 각 샘플의 미토파지 촉진활성을 비교하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 팔미트는 400 μM, 베르베린은 80 μM의 농도로 처리되었을 때 BEAS-2B의 미토파지 활성이 최대치에 도달하였으나, CD1-012 처리군은 10 μM의 CD1-012가 처리되었을 때 이와 동등한 수준의 미토파지 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 결과적으로, CD1-012의 미토파지 촉진활성은 베르베린의 약 8배, 팔미트의 약 40배 가량 높은 것으로 나타났다.
실시예 3. CD1-012의 미토콘드리아 기능이상 유도 여부 확인
본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체가 CCCP와 같이 미토콘드리아의 기능이상을 유도하는지 확인하였다. 이를 위해, 상기 CD1-012 (10 μM 또는 15 μM) 및 CCCP (10 μM)를 24시간 동안 처리한 후, 각 샘플의 미토콘드리아 막전위 (mitochondrial membrane potential) 및 미토콘드리아 활성산소의 수준을 분석하였다. 미토콘드리아의 막전위는 TMRM (tetramethylhodamine methyl ester) 어세이로 분석되었고, 미토콘드리아의 활성산소 (ROS)는 MitoSOX 어세이를 통해 분석되었다.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, CCCP가 처리된 그룹은 미토콘드리아의 막전위가 현저히 감소된 반면, CD1-012가 처리된 그룹은 미토콘드리아 막전위의 감소가 관찰되지 않았다. 또한, CCCP가 처리된 그룹은 미토콘드리아 활성산소 수준이 현저히 증가한 반면, CD1-012가 처리된 그룹은 미토콘드리아 활성산소가 증가하지 않은 것을 확인할 수 있었다. 상기 결과는 미토콘드리아 막전위를 감소시켜 미토콘드리아 기능이상을 유도함으로써 미토파지 활성을 증가시키는 CCCP와 달리, CD1-012는 미토콘드리아 기능이상을 유도하지 않는 화합물임을 보여준다.
실시예 4. CD1-012의 PINK1-Parkin 경로 비의존적 미토파지 활성화 확인
본 실시예에서는 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체의 미토파지 활성화 기능이 PINK1-Parkin 경로 의존적인지 확인하였다. 이를 위해, short hairpin RNA(shRNA)를 사용하여 PINK1을 knockdown시킨 BEAS-2B 세포주에 비교예 1의 CCCP (10 μM) 또는 CD1-012 (15 μM)를 18시간 동안 처리한 후, 각각의 샘플의 미토파지 활성을 유세포분석기 (FACS)를 사용하여 분석하였다.
그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, PINK1 knocdown 세포주 (shPINK1)에서 CCCP에 의한 미토파지 활성화는 대조군 세포주 (shNT)에 비해 현저히 감소하였으나, CD1-012에 의한 미토파지 활성화는 미처리 대조군과 비교하여 유의미한 차이를 보이지 않았다. 상기 결과는 본 발명에 다른 화합물이 스트레스성 미토파지를 매개하는 PINK1-Parkin 경로에 비의존적으로 미토파지를 활성화시키는 것임을 입증한다.
실시예 5. CD1-012의 말초신경병증 치료 효과 확인
이하의 실시예에서는 본 발명에 따른 신규 이소퀴놀린 유도체가 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증에 대해 치료 효과를 발휘하는지 확인하였다. 이를 위해, 파클리탁셀-유도성 말초신경병증 초파리 모델에서 열에 대한 감수성을 측정하였다. 최근 논문에 보고된 방법에 따라 (2020 PLoS One, 15(9):e0239126. doi: 10.1371/journal.pone.0239126.), 초파리 (w1118) 3령 유충에 파클리탁셀을 20 μM 농도로 48시간 처리하고 40℃의 열탐침을 유충 A4-A5 구획에 접촉한 뒤 유충이 특징적인 회피 반응을 보이는 시간 (withdrawl letency)을 측정하였다. 그 결과, 파클리탁셀이 처리된 후에는 회피반응 시간이 6.9초에서 4.5초로 35% 감소하는 통각과민 증상 (hyperalgesia)이 나타났다 (도 8a). 이어서, CD1-012의 말초신경병증 치료 효과를 확인하기 위해 초파리에 파클리탁셀 (20 μM)과 함께 CD-012를 1 mM 농도로 처리한 결과, 회피반응 시간이 4.5초에서 6.3초로 증가하였으며 이는 야생형의 91% 수준인 바, 파클리탁셀 처리에 의한 회피반응 시간의 감소가 CD-012에 의해 회복된 것을 확인할 수 있었다 (도 8a). 이러한 결과는 CD1-012가 항암제에 의해 유도되는 통각과민 증상을 치료하는 효과가 있음을 의미한다.
또한, 본 발명에 따른 화합물이 초파리의 성장에 미치는 영향이 있는지 확인하기 위해 초파리 유충에 파클리탁셀 및 CD1-012 처리 후 유충의 크기를 측정한 결과, 파클리탁셀이 단독 처리된 유충은 미처리 대조군 대비 크기가 약 28% 감소한 반면, CD1-012 처리시에는 약 10% 감소한 것에 그쳤다 (도 8b). 이는 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체가 유충의 성장을 크게 저해하지 않음을 보여준다.
실시예 6. CD1-012의 감각신경 형태변화 개선 효과 확인
초파리에 항암제 처리시 나타나는 열 통각과민 현상은 Class IV da (C4da) 감각신경의 수상돌기 가지 (dendrite arbor)의 형태 변화가 주된 원인인 것으로 보고된 바 있다 (2020 PLoS One, 15(9):e0239126. doi: 10.1371/journal.pone.0239126.; 2018 Dis Model Mech. 11(6):dmm032938. doi: 10.1242/dmm.032938.). 이들 연구에 따르면, 파클리탁셀과 같은 항암제는 C4da 감각신경의 수상돌기 가지 길이 및 가지 수의 증가를 일으키며, 이것이 통각과민을 야기한다. 이에, 본 실시예에서는 본 발명에 따른 이소퀴놀린 화합물이 항암제에 의해 유도되는 감각신경의 형태적 변화를 억제할 수 있는지 확인하였다.
C4da 감각신경의 수상돌기 가지 형태변화를 분석하기 위해 형광단백질 CD4-tdTomato를 C4da 신경특이적으로 발현시킨 초파리 (ppk 1a > CD1-tdTom)를 제작하고, 상기 초파리에 파클리탁셀 및 CD1-012를 처리한 후 C4da 감각신경 수상돌기 가지의 형태변화를 조사하였다. 그 결과, 파클리탁셀의 처리는 수상돌기 가지의 전체길이 (dendrite length) 및 수상돌기 가지 분지의 숫자 (branches)를 각각 22% 및 33% 증가시켜 감각신경의 형태적 변화가 유도된 것을 확인할 수 있었다. 반면, CD-012을 병행처리한 경우, 이와 같은 수상돌기 가지의 길이 및 분지의 수 증가가 현저하게 억제된 것으로 나타났다 (도 9a 내지 9c). 상기 결과들은 본 발명에 따른 화합물이 항암제에 의한 C4da 감각신경의 변성을 억제하여 통각과민 증상을 개선 및 치료할 수 있음을 입증한다.
실시예 7. CD1-012의 말초신경병증 치료효과의 ATG5 및 ATG7 비의존성 확인
본 실시예에서는 본 발명에 따른 화합물의 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증의 치료 기전을 확인하기 위한 실험을 진행하였다. 이를 위해, 가장 대표적인 미토파지 조절경로인 표준 미토파지 경로 (Canonical mitophagy pathway)의 필수 유전자들인 ATG5 또는 ATG7의 발현을 억제시킨 동물모델을 사용하여 CD1-012의 말초신경병증 치료 효과를 확인하였다. 구체적으로, C4da 감각신경에서 shATG7 또는 shATG5를 발현하는 초파리와 대조군 초파리 (야생형 초파리)에 파클리탁셀 (20 μM) 및 CD1-012 (1 mM)를 병행처리한 후, 40℃의 열탐침을 사용하여 heat probe assay를 실시하였다. 그 결과, ATG5 또는 ATG7의 발현이 억제되어 미토파지 경로가 차단된 초파리에서도 CD1-012 처리에 의한 항암제 유도성 말초신경병증 치료효과는 동일하게 관찰되었다 (도 10a 및 10b). 상기 결과는 본 발명에 따른 화합물은 표준 미토파지 경로에 비의존적인 방식으로 말초신경병증에 대한 치료 효과를 나타낸다는 것을 의미한다.
실시예 8. CD1-012의 말초신경병증 치료효과의 ULK1 및 Rab9 의존성 확인
이어서, CD1-012의 항암제 유도성 말초신경병증 치료효과의 분자기전을 이해하기 위해, 최근에 규명된 대체 미토파지경로 (Alternative mitophagy pathway)의 필수 유전자들인 ULK1 또는 Rap9의 발현을 억제한 후 CD1-012의 치료효과를 확인하였다. 이를 위해, C4da 감각신경에 shULK1 또는 shRap9를 발현하는 초파리와 대조군 초파리 (야생형 초파리)에 파클리탁셀 (20 μM) 및 CD1-012 (1 mM)를 병행처리한 후, 40℃의 열탐침을 사용하여 heat probe assay를 실시하였다. 그 결과, 대조군의 경우 파클리탁셀에 의한 말초신경병증 증상 (회피반응 시간의 감소)이 CD1-012에 의해 회복된 반면, ULK1 또는 Rap9의 발현이 억제된 초파리에서는 CD1-012에 의한 파클리탁셀-유도성 말초신경병증의 치료 효과가 완전히 억제된 것으로 나타났다 (도 11a 및 11b). 상기 결과는 CD1-012가 대체 미토파지 경로를 통해 미토파지를 촉진함으로써 말초신경병증에 대한 치료 효과를 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 9. 마우스 모델을 이용한 CD1-012의 말초신경병증 치료 효과 확인
본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체의 말초신경병증, 특히 항암제 유도성 말초신경병증 치료 효과를 보다 명확히 검증하기 위해 말초신경병증 마우스를 이용하여 실험을 진행하였다. 구체적으로, 항암제 (파클리탁셀)를 투여하여 수립한 말초신경병증 마우스에 CD1-012를 10 mg/kg 또는 20 mg/kg 농도로 병행투여한 후 통증에 대한 민감도를 Von-frey hair test로 분석하였다. 그 결과, 항암제 유도성 말초신경병증 마우스 모델은 통각 민감도가 증가하는 증상을 보인 반면, CD1-012가 병용된 마우스에서는 이와 같은 통각과민 증상이 현저히 개선되는 것을 확인하였다 (도 12a). 또한, 발바닥 (footpad)의 신경분포를 조사한 결과, 파클리탁셀이 투여된 말초신경병증 마우스 모델은 말초신경 (intraepidermal nerve fiber; IENF)의 수가 감소한 반면, CD1-012가 투여된 마우스는 정상 수준으로 회복된 것으로 나타났다 (도 12b). 상기 결과는 본 발명에 따른 화합물이 말초신경병증 초파리 모델은 물론 마우스 모델에서도 신경변성의 억제 및 통각과민 증상을 개선할 수 있음을 명확히 보여준다.
이상의 실시예에서 살펴본 바와 같이, 본 발명자들은 미토파지-특이적 촉진 활성이 있는 이소퀴놀린 화합물 CD1-012가 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증에 대한 치료 효과가 있음을 확인하였다. 본 발명의 화합물은 말초신경병증의 대표적인 증상인 통각과민 증상을 개선하고, 감각신경의 변성 및 말초신경의 분포 감소를 효과적으로 억제할 수 있다. 또한, CD1-012의 우수한 말초신경병증 치료 효과는 ULK1 및 Rab9에 의한 대체 미토파지 경로에 의존적인 반면 ATG5 및 ATG7에 의한 표준 미토파지 경로에 비의존적인 것으로 나타난 바, 분자적 매커니즘을 고려한 적절한 사용을 통해 다양한 환자군에서 말초신경병증의 치료를 달성할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 신규한 이소퀴놀린 유도체는 항암제 유도성 말초신경병증을 포함한 말초신경병증 근본적인 치료가 가능한 물질로서, 말초신경병증의 예방 및 치료에 유용하게 활용될 것으로 기대된다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.
[약제의 제조예]
본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<약제 제조예 1> 산제의 제조
유효물질 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<약제 제조예 2> 정제의 제조
유효물질 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<약제 제조예 3> 캡슐제의 제조
유효물질 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<약제 제조예 4> 주사제의 제조
유효물질 10 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 유효물질을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.
<약제 제조예 5> 경비흡수제 (Nasal spray)의 제조
유효물질 1.0 g
아세트산나트륨 0.3 g
메틸파라벤 0.1 g
프로필파라벤 0.02 g
염화나트륨 적량
HCl 또는 NaOH pH 조정 적량
정제수 적량
통상의 경비흡수제의 제조방법에 따라, 염수 (0.9% NaCl, w/v, 용매는 정제수) 1 mL당 유효물질 3 mg이 포함되도록 제조하고, 이를 불투명한 스프레이 용기에 충진하고 멸균시켜 경비흡수제를 제조하였다.
<약제 제조예 6> 액제의 제조
유효물질 100 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라, 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100 mL로 조절한 후 갈색 병에 충진하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.
건강식품의 제조예
본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태의 건강식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<건강식품 제조예 1> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 유효물질 0.01-1 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<건강식품 제조예 2> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 유효물질을 진공 농축기에서 감압농축하고 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 유효물질의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 34 중량부, 율무 19 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
유효물질 (2 중량부),
영지(1.5 중량부), 및
지황(1.5 중량부).
건강기능식품의 제조예
본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태의 건강기능식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강기능식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
<건강기능식품 제조예 1> 건강기능식품의 제조
유효물질 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능성 식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능성 식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능성 식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<건강기능식품 제조예 2> 건강 기능 음료의 제조
유효물질 100 mg
구연산 100 mg
올리고당 100 mg
매실농축액 2 mg
타우린 100 mg
정제수를 가하여 전체 500 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.
본 발명은 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것으로서, 미토파지 활성에 기반한 스크리닝을 통해 발굴된 이소퀴놀린 유도체가 우수한 미토파지 촉진 효과를 발휘하며, 이를 통해 말초신경병증의 근본적인 치료제로 활용될 수 있음을 확인하여 완성된 것이다. 구체적으로, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 항암제 유도성 말초신경병증 동물모델에서 통각과민증상을 치료할 뿐만 아니라, 말초신경병증의 핵심 병인으로 밝혀진 감각신경의 형태적 변화를 억제하고, 말초신경의 분포 및 수를 증가시킬 수 있음이 확인되었다. 따라서, 본 발명에 따른 이소퀴놀린 유도체는 말초신경병증, 특히, 항암제 유도성 말초신경병증의 주요 증상 및 병인을 억제할 수 있는 근본적인 치료제로서 상기 질병의 예방, 개선, 및/또는 치료 분야에서 유용하게 활용될 것으로 기대되는 바, 산업상 이용가능성이 인정된다.

Claims (17)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023015689-appb-img-000012
  2. 제1항에 있어서,
    상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토파지의 활성을 특이적으로 촉진하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 미토파지의 활성은 PINK1, ATG5, 및 ATG7로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 비의존적인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 미토파지의 활성은 ULK1 또는 Rap9에 의존적인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 감각신경의 형태적 변성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 말초신경의 수를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 말초신경병증은 항암제 유도성 말초신경병증인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 항암제는 파클리탁셀 (Paclitaxel), 보르테조밉 (Bortezomib), 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 빈크리스틴 (Vincristine), 시스플라틴 (Cisplatin), 탁솔 (Taxol), 도세탁셀 (Docetaxel), 익사베필론 (iXABEPILONE), 탈리도마이드 (Thalidomide), 벨케이드 (Velcade), 및 레날리도마이드 (Lenalidomide)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 0 초과 40μM인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 미토콘드리아 기능이상을 개선시키는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 미토콘드리아 기능이상의 개선은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인, 약학적 조성물:
    (a) 미토콘드리아의 정상 막전위의 수준을 유지시킴;
    (b) 미토콘드리아의 활성산소종 수준을 감소시킴; 및
    (c) 미토콘드리아의 ATP 합성능을 증가시킴.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 약학적 조성물, 및 설명서를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료용 키트.
  13. 하기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023015689-appb-img-000013
  14. 제13항에 있어서,
    상기 말초신경병증은 항암제 유도성 말초신경병증인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  15. 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 말초신경병증의 예방 또는 치료방법.
  16. 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 말초신경병증의 예방 또는 치료 용도.
  17. 말초신경병증의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 상기 화학식 1로 표시되는 이소퀴놀린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.
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