WO2024063576A1 - Kras 저해 물질로서 신규한 퀴나졸린 화합물 - Google Patents

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WO2024063576A1
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alkyl
mmol
fluoro
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chloro
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홍창희
이진희
이주연
박종선
김진웅
홍수정
홍성준
송행진
윤홍철
안경미
박준태
이정우
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일동제약(주)
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    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to novel quinazoline compounds as KRAS inhibitors, and more specifically, to novel quinazoline compounds useful as KRAS protein inhibitors, isomers thereof, and pharmaceutical compositions for cancer treatment containing the same.
  • the RAS gene is responsible for signal transduction within the mitogen activated protein kinase (MAPK) and phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) pathways, and is known as an oncogene due to frequent mutations.
  • the RAS gene family is divided into KRAS, NRAS, and HRAS, three genes encoding four proteins: splice variants K-Ras4A and K-Ras4B, N-Ras, and H-Ras.
  • K-Ras is the most frequently mutated isoform in Ras-induced cancer (86%), followed by N-Ras (11%) and H-Ras (3%) (Non-patent Document 1).
  • Non-patent Document 2 Oncogenic changes in KRAS are observed in 15.95% of cancers including pancreatic cancer, lung cancer, colon adenocarcinoma, colorectal cancer, and rectal adenocarcinoma.
  • Gain-of-function missense mutations mostly located at codons 12, 13, and 61, constitutively activate RAS proteins and are detected in various types of human cancer. 98% of tumor Ras mutations are found in active site amino acid residues G12, G13, and Q61, and these mutations impair intrinsic and GAP-mediated GTP hydrolysis, resulting in abnormal activation of downstream signaling (Non-patent Document 3) . K-Ras G12 mutations (89%) predominate in human cancers, followed by G13 mutations (9%) and Q61 mutations (1%).
  • Codon 12 mutations include codon 12 Gly ⁇ Asp (G12D) (36%), codon 12 Gly ⁇ Val (G12V) (23%), and codon 12 Gly ⁇ Cys (G12C) (14%), and G12D is codon 12 It is the most common mutation among the 12 mutations. Additionally, mutations at codon 13 Gly ⁇ Asp (G13D) (7%) and codon 61 Gln ⁇ His (Q61H) (0.6%) are also observed (Non-patent Document 1).
  • KRAS may be an efficient target for cancer therapy.
  • the present inventors developed a new KRAS inhibitor and completed the present invention.
  • Non-patent Document 2 J Cancer Metastasis Treat 2021;7:26
  • the present invention provides novel quinazoline compounds useful as KRAS protein inhibitors, isomers, and pharmaceutically acceptable salts thereof, and pharmaceutical compositions for cancer treatment containing the same, and manufacturing methods and intermediates for providing the same.
  • one aspect of the present invention is a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or thereof.
  • Pharmaceutically acceptable salts are provided.
  • Another aspect of the present invention is a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof. It provides a pharmaceutical composition containing a.
  • Another aspect of the present invention is a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a manufacturing method for producing a and intermediates used therefor are provided.
  • the present invention provides novel quinazoline compounds useful as KRAS protein inhibitors, isomers, and pharmaceutically acceptable salts thereof, and pharmaceutical compositions for cancer treatment containing the same.
  • One aspect of the present invention is a compound of the following formula (1), or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof. to provide:
  • R 1 and R 2 are each independently hydrogen, C 1-6 alkyl, or halogen
  • X 3 is a bond, C 1-6 alkylene, C 3-8 cycloalkylene, or -(C 1-3 alkyl)-(C 3-8 cycloalkyl)-(C 1-3 alkyl)-, which each independently substituted or unsubstituted with C 1-3 alkyl;
  • b is an integer from 0 to 1;
  • X 1 is C 3 each substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from C 1-3 alkyl, halogen, amino, -N(C 1-3 alkyl) 2 , and -NH(C 1-3 alkyl) -6 cycloalkyl or -(C 1-4 alkylene)-(C 3-6 cycloalkyl);
  • X 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl
  • X 1 and X 2 are combined to form a ring of the following formula (2);
  • two or more R 3 on adjacent atoms are combined with each other to form a C 3-6 cycloalkyl, heteroaryl, aryl, or heterocycle, and are fused together with a compound of Formula 2 and are substituted with 1 to 4 R 4 or Forming an unsubstituted fused ring;
  • L 3 is a bond, -C 1-4 alkyl-, -C 1-4 alkyl-NH-, -NH-, or -N(C 1-3 alkyl)-;
  • R 5 is each independently hydrogen, halogen, or C 1-3 alkyl
  • o is an integer from 1 to 8;
  • W is a bond in the compound of Formula 2 above, or is selected from -(CH 2 )mO-(CH 2 )n-, -(CH 2 )mN-(CH 2 )n-, and -(CH 2 )n- Which one;
  • n is an integer from 0 to 4.
  • n is an integer from 0 to 2
  • Heteroaryl, heterocycle, or fused heteroaryl each contains one or more of N, S, or O as a heteroatom.
  • halogen is halogen, C 1-6 alkyl, haloC 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 1-6 alkoxy, hydroxy, cyano, amino, -NH(C 1- C 6 alkyl) and -N (C 1-3 alkyl) C 7-20 fused heteroaryl or C 6-15 aryl unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from 2 ;
  • R 1 and R 2 are halogen
  • X 3 is C 1-3 alkylene substituted or unsubstituted with C 1-3 alkyl or -(C 1-3 alkyl)-(C 3-8 cycloalkyl)-(C 1-3 alkyl)-;
  • b is an integer from 0 to 1;
  • X 1 is C 3 each substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from C 1-3 alkyl, halogen, amino, -N(C 1-3 alkyl) 2 , and -NH(C 1-3 alkyl) -6 cycloalkyl or -(C 1-4 alkylene)-(C 3-6 cycloalkyl),
  • X 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl
  • X 1 and X 2 combine to form a 4-10 membered heterocycle or 4-10 membered fused heteroaryl, which
  • X 1 and It can form a single heterocycle or a 4- to 10-membered fused heteroaryl.
  • halogen is halogen, C 1-6 alkyl, haloC 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 1-6 alkoxy, hydroxy, cyano, amino, -NH(C 1- C 6 alkyl) and -N (C 1-3 alkyl) substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from 2 ,
  • R 1 is fluorine or chlorine
  • R 2 may be fluorine.
  • X 3 is C 1-6 alkylene, C 3-8 cycloalkylene, or -(C 1-3 alkylene)-(C 3-8 cyclopropylene)-(C 1-3 alkylene)-;
  • X 1 is C 3 each substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from C 1-3 alkyl, halogen, amino, -N(C 1-3 alkyl) 2 , and -NH(C 1-3 alkyl) -6 cycloalkyl or -(C 1-4 alkylene)-(C 3-6 cycloalkyl), and X 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; or
  • It may form a 4- to 10-membered fused heteroaryl that is unsubstituted or substituted 1 to 4 times with hydroxy, halogen, or C 1-3 alkyl.
  • R 1 is fluorine or chlorine
  • R 2 is fluorine
  • X 3 is -CH 2 -, -C(C 1-3 alkyl)-, or ego;
  • b is 0 or 1;
  • X 2 is hydrogen or C 1-3 alkyl
  • the compound of Formula 1 is any one selected from the group consisting of the following compounds, or stereoisomers, diastereomers, enantiomers, atropisomers, solvates, and isotopic variants thereof. , a tautomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Another aspect is to use the compound according to any one of the preceding claims, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of cancer comprising the composition as an ingredient.
  • the pharmaceutical composition may exhibit KRAS protein inhibitory activity.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine, unless otherwise specified.
  • alkyl refers to a straight-chain or branched, saturated, monovalent hydrocarbon group.
  • alkylene used herein refers to a divalent straight-chain or branched hydrocarbon group having (-CH 2 -) n , and includes methylene, ethylene, propylene, butylene, isobutylene, etc. It is not limited to.
  • alkenyl refers to a monovalent hydrocarbon group containing at least one carbon-carbon double bond, where each double bond has an E- or Z -type configuration. You can.
  • alkynyl refers to a monovalent hydrocarbon radical containing at least one carbon-carbon triple bond.
  • alkoxy refers to a straight-chain or branched hydrocarbon residue linked by oxygen.
  • aryl refers to an aromatic group that may be substituted or unsubstituted, and includes monocyclic, bicyclic, or more than bicyclic aromatic groups that may be substituted or unsubstituted. and may include unsaturated or partially saturated aryl, for example, C 6-15 aryl, for example, phenyl, biphenyl, naphthyl, toluyl, or naphthalenyl, but are limited thereto. no.
  • heteroaryl refers to a monocyclic or bicyclic group containing one or more heteroatoms selected from N, O, and S, or bicyclic or more, substituted or unsubstituted. It refers to an aromatic group that can include unsaturated or partially saturated aryl, and may include, for example, C 4-15 heteroaryl. For example, it may be pyridinyl, pyrazinyl, triazinyl, imidazole, or pyranyl, but is not limited thereto.
  • fused heteroaryl refers to an unsaturated or partially saturated, substituted or unsubstituted ring system in which the heteroaryl group is linked in a fused manner with another aryl, heteroaryl or heterocycloalkyl group.
  • it may include a C 8-20 heteroaryl, for example, a 9-membered, 10-membered, 11-membered, 12-membered, 13-membered, 14-membered or 15-membered benzo-fused heteroaryl group.
  • a fused heteroaryl can form a 5+5 membered, 5+6 membered, 5+7 membered, 6+6 membered, or 6+7 membered fused ring system.
  • fused heteroaryls include, for example, benzothiazole, benzthiazolinyl, benzothiophenyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, benzothionyl, indolyl, isoindolinyl, indazolinyl, benzyl.
  • It may be imidazolinyl, benzoxazolinyl, benzisoxazolinyl, benzthiadiazolinyl, benzoxadiazolinyl, benztriazolinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, or quinazolinyl, but is limited thereto. no.
  • the term “partially saturated” refers to containing at least one saturated site, i.e., at least one single bond, within an aryl, heteroaryl, or fused heteroaryl ring as defined above.
  • the term “unsaturated” refers to an aryl, heteroaryl, or fusedheteroaryl ring as defined above that does not contain a saturated site, i.e., a single bond.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated, monocyclic, bicyclic, or polycyclic hydrocarbon ring that may be substituted or unsubstituted, and bridged cycloalkyl , fused cycloalkyl, and spirocycloalkyl.
  • it may include C 3-10 cycloalkyl or C 3-6 cycloalkyl, for example, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, or cycloheptyl, but is not limited thereto.
  • heterocycle refers to a saturated or partially unsaturated, which may be substituted or unsubstituted, containing one or more heteroatoms selected from N, O, and S. refers to a monocyclic, bicyclic, or polycyclic non-aromatic ring, and includes bridged heterocycles, fused heterocycles, and spiroheterocycles.
  • C 4-15 heterocycloalkyl such as piperidinyl, piperazinyl, pyrrolidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl. It may be (tetrahydro-2H-pyranyl), imidazolidinyl, or pyrrolidin-2-one, but is not limited thereto.
  • fused heterocycle or “fused cycloalkyl” refers to a substituted or unsubstituted ring system, unless otherwise specified. Depending on the number of rings, it can be classified into bicyclic, tricyclic, tetracyclic, or more polycyclic fused cycloalkyl. Fused cycloalkyls are polycyclic rings in which each ring shares an adjacent pair of carbon atoms with the other ring, and one or more rings may share one or more double bonds, but none of these rings has a fully conjugated ⁇ -electron system. Refers to cycloalkyl and may include, for example, C 3-20 fused cycloalkyl.
  • bicyclic fused cycloalkyl is also referred to as “bicycloalkyl” and can be bicycloalkyl in the 5+6 form or bicycloalkyl in the 6+6 form, depending on the number of atoms forming each of the two rings being fused. You can.
  • fused heterocycloalkyl refers to a substituted or unsubstituted fused cycloalkyl containing one or more heteroatoms selected from N, O, and S, such as C 8-20 It may include heterofused cycloalkyl.
  • bicyclic fused heterocycloalkyl is also referred to as “heterobicycloalkyl” and is either 5+6 fused heterobicycloalkyl or 6+6 fused heterobicyclo, depending on the number of atoms making up each of the two rings being fused. It may be alkyl. For example, it may be hexahydro-1H-pyrrolizine, but is not limited thereto.
  • stereoisomer may mean a compound of the present invention or a salt thereof that has the same chemical or molecular formula but is optically or sterically different.
  • enantiomer refers to various stereoisomers and geometric isomers that may exist for the compound according to the present invention.
  • Compounds of Formula 1 according to one aspect of the present invention may have an asymmetric carbon center (asymmetric carbon) and therefore may exist as enantiomers ( R or S isomers), racemates, diastereomers, or any mixtures thereof. , all these isomers and mixtures are included within the scope of the present invention.
  • the compounds described herein may have chiral centers and, unless otherwise stated, each chiral center may independently be in the R-configuration or the S-configuration or mixtures thereof. Accordingly, the compounds described herein include optical isomers enriched or resolved at any or all asymmetric atoms. Racemic mixtures of the R-enantiomer and the S-enantiomer, and enantiomeric stereoisomeric mixtures comprising the R- and S-enantiomers as well as the individual optical isomers are substantially free of their enantiomeric or diastereomeric partners. Can be isolated or synthesized, and all such stereoisomers are within the scope of the present technology.
  • optically active or racemic forms may be isolated in optically active or racemic forms.
  • Methods for preparing optically active forms such as resolution of racemic forms, synthesis from optically active starting materials, or use of chiral auxiliaries, are well known in the art.
  • atropisomer refers to all stereoisomers that can be separated from each other. It is an isomer that occurs when the single bond formed between carbon and carbon among the bonds that make up the compound cannot rotate freely due to a bulky substituent. Refers to stereoisomers resulting from an asymmetric axis, confined around a single bond where rotational barriers exist that are sufficiently high to allow discrimination of isomeric species, including complete isolation of stable non-interconverting diastereomeric or enantiomeric species. Can be created from rotation.
  • Compounds according to one embodiment may generate atropisomers with a high probability.
  • Compounds according to one embodiment may also include “tautomeric” forms.
  • the tautomeric forms result from the exchange of a single bond with an adjacent double bond and the concomitant transfer of the proton.
  • Tautomeric forms include prototropic tautomers, which are isomeric protonation states with the same empirical formula and total charge.
  • the tautomeric forms may be in equilibrium or sterically fixed in one form by appropriate substitution.
  • a compound according to one embodiment may include an “isotope variant.”
  • the present disclosure also provides isotopic labels identical to the compounds described herein except that one or more atoms are replaced by an atom having an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number normally found in nature ("isotope").
  • Contains compounds that are Compounds of the present disclosure may also contain non-natural proportions of atomic isotopes at one or more atoms constituting such compounds.
  • isotopes that can be incorporated into the compounds described herein include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, fluorine and chlorine, such as 2 H (“D”), 3 H, 13 C, 14 C.
  • the compounds described herein may have one or more H atoms replaced with deuterium.
  • reference to or description of a particular element such as hydrogen or H is meant to include all isotopes of that element.
  • the R group is defined as containing hydrogen or H
  • deuterium and tritium are also included.
  • Deuterated starting materials are readily available and applied to the synthetic methods described herein to provide for the synthesis of deuterium containing compounds. A large number of deuterium containing reagents and building blocks are commercially available from chemical suppliers such as Aldrich Chemical Co.
  • solvate may include a molecular complex comprising a compound of Formula 1 and one or more pharmaceutically acceptable solvent molecules, such as ethanol or water. Complexes where the solvent molecule is water are also referred to as “hydrates.”
  • the term “pharmaceutically acceptable salt” includes any salt as long as it has low toxicity to the human body and does not adversely affect the biological activity and physicochemical properties of the parent compound.
  • Kirsten Rat Sarcoma Virus Oncogene Homolog is a GTPase that integrates signals from outside the cell into intracellular proliferation and survival signals and is a molecule of Ras, Rho, Rab, Arf, and Ran. It is one of the small GTPase family. It receives signals from several receptor tyrosine kinases, especially EGFR at the top level, and transmits signals mainly to Raf and PI3K at the bottom through the GTPase cycle of KRAS, thereby regulating various processes including cell proliferation. .
  • the GTPase cycle combines with an effector protein in an activated state with GTP bound through the action of guanine nucleotide exchange factors (GEF), and becomes in an inactivated state with GDP bound through the action of GTPase-activating protein (GAP).
  • GEF guanine nucleotide exchange factors
  • KRAS KRAS codons 12, 13, and 61
  • KRAS G12D KRAS G12V
  • KRAS G12C KRAS G13D
  • KRAS Q61H mutations KRAS G12D, KRAS G12V, KRAS G12C, KRAS G13D, and KRAS Q61H mutations. It relates to a novel KRAS inhibitor compound that does not work.
  • One aspect of the present invention is to use a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of cancer comprising the composition as an ingredient.
  • the composition comprises a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof. It may be included in a therapeutically effective amount.
  • the composition comprises a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • other therapeutic drugs may be included.
  • the composition may further include a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • the composition comprises a compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof. It may contain either silver or other therapeutic drugs in the range of 0.005% to 100%, and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient may be included in the balance.
  • the compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof, or A pharmaceutical composition containing this can be used for cancer treatment.
  • the compound of Formula 1, or a stereoisomer, diastereomer, enantiomer, atropisomer, solvate, isotopic variant, tautomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof, or A pharmaceutical composition containing it may exhibit KRAS protein inhibitory activity.
  • the compounds and pharmaceutical compositions of the present disclosure may be provided in any suitable administration route and dosage form acceptable in the pharmaceutical arts.
  • the structure of the synthesized compound can be verified by methods known to those skilled in the art, such as nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy and/or mass spectroscopy.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • the numerical range expressed using the term “to” includes a range including the numerical values written before and after the term “to” as the lower limit and upper limit, respectively.
  • Example 1 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclopentyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((S)-1-methylpyrrolidine- Preparation of 2-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine
  • reaction mixture was degassed with argon for 15 minutes, then PdCl 2 (dppf) ⁇ DCM (0.011 g, 0.0135 mmol) was added at room temperature.
  • the reaction mixture was stirred at 100° C. for 16 hours in a sealed tube. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction mixture was quenched with water and extracted with ethyl acetate (2 x 50 mL).
  • Step 9) Compound of Example 1: 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclopentyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((S)-1- Preparation of methylpyrrolidin-2-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine
  • Example 2 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetra Preparation of hydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine
  • Step 2) Intermediate 5 of Example 2 : 7-bromo-6-chloro-N-((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-p Preparation of rollizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-amine
  • reaction mixture was diluted with ethyl acetate (10 mL) and filtered through a pad of Celilte. The organic layer was washed with water (5 mL) and brine solution (5 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • reaction mixture was heated to 120° C. in the microwave for 1 hour. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction (TLC), the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (10 mL) and filtered through a pad of Celite.
  • Step 4) Compound of Example 2: 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((2R,7aS)- Preparation of 2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine
  • the reaction mixture was allowed to warm to room temperature for 4 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction (TLC), the reaction mixture was concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound. The crude compound was purified by Prep-HPLC to obtain the compound of Example 2 (0.015 g, yield: 16.4%) as a white solid.
  • reaction mixture was quenched with ice-cold water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 25 mL). The combined organic layers were washed with brine solution (5 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • the reaction mixture was stirred at 100°C for 16 hours in a sealed tube. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction mixture was quenched with ethyl acetate (50 mL) and filtered through a bed of Celite. The EtOAc layer was washed with water (10 mL) and brine solution, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to give the crude compound. The crude compound was purified by Prep-HPLC to obtain the compound of Example 3 (0.04 g, yield: 11.3%) as a white solid.
  • reaction mixture was diluted with ice-cold water (25 mL), extracted with ethyl acetate (2 x 25 mL), and the combined organic layers were washed with brine solution (25 mL).
  • Step 4) Compound of Example 5: 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)amino)-8-fluoroquinazolin-7-yl)-7-fluo Preparation of lobenzo[d]thiazol-2-amine
  • Example 6 Example 6: 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((S)-1-methyl Preparation of pyrrolidin-2-yl) methoxy) quinazolin-7-yl) naphthalen-2-ol
  • Step 2) Compound of Example 6: 4-(6-chloro-4-(((1-(dimethylamino)cyclobutyl)methyl)amino)-8-fluoro-2-(((S)-1- Preparation of methylpyrrolidin-2-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)naphthalen-2-ol
  • Triisopropyl ((6-(methoxymethoxy)-8-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane-2-) in THF (10 mL, 10 vol) TBAF (1.00 g, 3.82 mmol) was added to a stirred solution of 1)naphthalen-1-yl)ethynyl)silane (Intermediate 1A of Example 7) (1.00 g, 2.02 mmol) at 0°C. The reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 16 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC.
  • reaction mixture was heated to 100° C. in a sealed tube and stirred for 16 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction was diluted with ethyl acetate (10 mL) and filtered through a Celite bed. The organic layer was washed with water (5 mL) and brine solution (2 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • Example 8 4-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((S)-1-methyl Preparation of pyrrolidin-2-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol
  • tert-butyl (7-fluoro-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzo[d]thiazol-2-yl ) Carbamate (0.14 g, 0.36 mmol) and Ruphos Pd-G 3 (0.02 g, 0.03 mmol) were added at room temperature and degassed again under N 2 gas for 5 minutes.
  • the reaction mixture was heated to 100° C. and stirred for 16 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction mixture was quenched with water (25 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 25 mL).
  • Example 9-SM 7-Bromo-2,4,6-trichloro-8-fluoro-quinazoline
  • Example 9-SM 300 mg, 1.0 eq
  • azepane 0.10 mL, 1 eq
  • DIPEA 0.32 mL, 2.0 eq
  • water was added to the reaction mixture and extracted with EA.
  • the combined organic layers were dried over magnesium sulfate, filtered, and concentrated to obtain 4-(azepan-1-yl)-7-bromo-2,6-dichloro-8-fluoro-quinazoline (Intermediate 1 of Example 9, 348 mg, yield: 98%) was obtained.
  • Example 10 1-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2 -Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-3-methylpiperidin-3-ol
  • Pd(PPh 3 ) 4 (0.065 g, 0.057 mmol) was added here at room temperature, and the reaction mixture was heated to 80° C. and stirred for 16 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction mixture was filtered through a Celite pad using ethyl acetate (20 mL) as a washing solvent to obtain a filtrate, which was washed with water (20 mL) and dried over anhydrous Na 2 SO 4 After concentration under reduced pressure, the crude compound was obtained.
  • Step 2) Compound of Example 10: 1-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R ,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-3-methylpiperidin-3-ol Preparation
  • Example 11 1-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-6,8-difluoro-2-(((2R,7aS)-2- Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one
  • Step 6) Compound of Example 11: 1-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-6,8-difluoro-2-(((2R, Preparation of 7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one
  • Example 12 4-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2 -Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol
  • reaction mixture was diluted with ice-cold water (25 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 25 mL), and the separated organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • Example 12 The crude compound was purified by silica gel (100-200 mesh) column chromatography and eluted with 30% ethyl acetate in petroleum ether to give 4-(7-bromo-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R ,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol( Intermediate 5) of Example 12 (0.30 g, yield: 77%) was obtained as a light yellow viscous liquid.
  • Step 4) Compound of Example 12: 4-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R ,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol
  • Example 13 4-(6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2 -Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol
  • the progress of the reaction mixture was monitored by TLC and LC-MS. After completion of the reaction, the reaction mixture was diluted with water (25 mL) and extracted with DCM (2 x 50 mL), the combined organic layers were dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give the crude compound. got it The crude compound was purified by silica gel (100-200 mesh) column chromatography and eluted with 40% ethyl acetate in petroleum ether to give 4-(7-bromo-6-chloro-2-(ethylthio)-8-fluoroquina.
  • Pd(PPh 3 ) 4 (0.051 g, 0.04 mmol) was added here at room temperature, and the reaction mixture was heated to 110° C. and stirred for 16 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. After completion of the reaction, the reaction mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 20 mL), the combined organic layers were dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain The compound was obtained.
  • reaction mixture was diluted with ice-cold water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 20 mL), the combined organic layers were dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Step 7) Compound of Example 13: 4-(6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-2-(((2R ,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)-6-methyl-1,4-oxazepan-6-ol manufacturing
  • Example 15 4-(6-chloro-8-fluoro-4-(((1S,2S)-2-fluorocyclopropyl)(methyl)amino)-2-(((2R,7aS)-2 Preparation of -fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-5-ethyl-6-fluoronaphthalen-2-ol
  • reaction mixture was diluted with water (80 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 80 mL), and the combined organic layers were washed with brine solution, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and filtered. The liquid was concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • the reaction mixture was diluted with ice-cold water (25 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 25 mL), and the combined organic layers were washed with brine solution (10 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 Filtered and evaporated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • the crude compound was purified by silica gel (100-200 mesh) column chromatography using 5% ethyl acetate in petroleum ether as eluent to give 7-bromo-6-chloro-2-(ethylthio)-8-fluoro-N.
  • Step 3) Step 1) Intermediate 3 of Example 15: 6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-2-(ethylthio) Preparation of -8-fluoro-N-((1S,2S)-2-fluorocyclopropyl)-N-methylquinazolin-4-amine
  • reaction mixture was evaporated under reduced pressure to obtain a residue, which was diluted with water (15 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 15 mL), and the combined organic layers were washed with brine solution (10 mL).
  • reaction mixture was diluted with ice-cold water (20 mL) and extracted with ethyl acetate (2 x 20 mL), and the combined organic layers were washed with brine solution, dried over anhydrous Na 2 SO 4 and filtered. The filtrate was filtered.
  • Step 6) Preparation of the compound of Example 15: 4-(6-chloro-8-fluoro-4-(((1S,2S)-2-fluorocyclopropyl)(methyl)amino)-2-((( 2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-5-ethyl-6-fluoronaphthalen-2-ol manufacturing
  • Example 15a (0.005 g, yield: 5%) as an off-white solid
  • Example 15b (0.004 g, yield: 4%) as an off-white solid.
  • Example 16 1-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2 -Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one
  • reaction mixture was diluted with water (80 mL) and the solution was extracted with DCM (40 mL x 3). The organic phase was washed with brine (20 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated to dryness in vacuo to give a yellow oil.
  • reaction mixture was stirred at room temperature for 5 hours.
  • the reaction mixture was diluted with water (80 mL) and the solution was extracted with DCM (40 mL x 3).
  • the organic phase was washed with brine (20 mL), dried over anhydrous Na-SO 4 , filtered and concentrated to dryness in vacuo to give a yellow oil.
  • Step 7) Compound of Example 16: 1-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6-chloro-8-fluoro-2-(((2R ,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one manufactured
  • Example 17 1-(6-Chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-hydroxynaphthalen-1-yl)-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2 -Preparation of fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one
  • the reaction mixture was diluted with water (30 mL), extracted with DCM (2 x 30 mL), and the obtained organic layer was washed with brine (30 mL). Afterwards, it was dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude compound.
  • the obtained crude compound was purified by silica gel (100-200 mesh) column chromatography using 20% ethyl acetate in petroleum ether as an eluent to obtain the desired compound, 1-(7-bromo-6-chloro-2-(ethylthio)-8.
  • the extracted organic layer was washed with brine (30 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • the crude compound was purified by silica gel (100-200 mesh) column chromatography using 16% ethyl acetate in petroleum ether as an eluent to obtain the desired compound, 1-(6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3). -(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-2-(ethylthio)-8-fluoroquinazolin-4-yl)azepan-3-one (intermediate 5 of Example 17) (0.05 g, Yield: 18%) was obtained as a yellow solid.
  • Example 18 4-(6-chloro-8-fluoro-4-(3-fluoroazepan-1-yl)-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-p Preparation of rollizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-5-ethyl-6-fluoronaphthalen-2-ol
  • Step 4) Preparation of Intermediate 2 of Example 18: 4-(benzyloxy)-6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)- 8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazoline
  • Step 5) Preparation of Intermediate 3 of Example 18: 6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-8-fluoro-2- (((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-ol
  • Step 6) Preparation of Intermediate 4 of Example 18: 6-chloro-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-8-fluoro-4- (3-fluoroazepan-1-yl)-2-(((2R, 7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazoline
  • reaction mixture was diluted with water (80 mL) and the solution was extracted with DCM (40 mL x 3). The organic phase was washed with brine (20 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated to dryness in vacuo to give a yellow oil.
  • Step 7) Preparation of the compound of Example 18: 4-(6-chloro-8-fluoro-4-(3-fluoroazepan-1-yl)-2-(((2R,7aS)-2-fluoro tetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-5-ethyl-6-fluoronaphthalen-2-ol
  • Step 2) Intermediate 2 of Example 20: tert-butyl(4-(6,8-difluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizine-7a( Preparation of 5H)-yl)methoxy)-4-hydroxyquinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-yl)carbamate
  • Step 4) Compound of Example 20: 1-(7-(2-amino-7-fluorobenzo[d]thiazol-4-yl)-6,8-difluoro-2-(((2R, Preparation of 7aS)-2-fluorohexahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-4-yl)azepan-3-one
  • Example 21 4-(6-Chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)- 4-((R)-6-methyl-5,6-dihydroimidazo[1,5-a]pyrazin-7(8H)-yl)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d ]Preparation of thiazol-2-amine
  • Example 21a compound (5.66 mg, yield: 10%) as a white solid
  • Example 21b compound (6.02 mg, yield) : 11%) was obtained as a white solid.
  • MS: m/z 641.3 (M+H + , ESI+)
  • MS: m/z 641.3 (M+H + , ESI+)
  • Example 22 4-(6-Chloro-8-fluoro-4-(6-fluoro-6-methyl-1,4-oxazepan-4-yl)-2-(((2R,7aS)- Preparation of 2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine
  • 6-Fluoro-6-methyl-1,4-oxazepane hydrochloride (269 mg, 1.589 mmol) and 7-bromo-2,4,6-trichloro-8-fluoroquinazoline in DCM (5 mL)
  • TEA 612 mg, 6.052 mmol
  • the reaction mixture was stirred under N 2 for 2 hours at room temperature.
  • the reaction was diluted with water (10 mL) and the solution was extracted with DCM (10 mL x 3).
  • the organic phase was dried over Na 2 SO 4 (s), filtered and concentrated under reduced pressure.
  • reaction was diluted with H 2 O (50 mL) and the solution was extracted with ethyl acetate (30 mL x 3). The organic phase was washed with brine (50 mL), dried over Na 2 SO 4 (s), filtered and concentrated.
  • Step 7) Compound of Example 22: 4-(6-chloro-8-fluoro-4-(6-fluoro-6-methyl-1,4-oxazepan-4-yl)-2-((( 2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[d]thiazol-2-amine manufacture of
  • Example 23 2-Amino-4-(6-chloro-8-fluoro-4-(6-hydroxy-6-methyl-1,4-oxazepan-4-yl)-2-(((2R ,7aS)-2-methoxytetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl)methoxy)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[b]thiophene-3-carbonitrile manufacture of
  • 6-Methyl-1,4-oxazepan-6-ol hydrochloride (507 mg, 3.026 mmol) and 7-bromo-2,4,6-trichloro-8-fluoroquinazoline ( TEA (1224 mg, 12.104 mmol) was added to the stirred solution (1000 mg, 3.026 mmol), and then stirred at room temperature under nitrogen for 2 hours. After the reaction was completed, the reaction mixture was diluted with ice-cold water (10 mL) and extracted with DCM (30 mL x 2).
  • reaction mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with ethyl acetate (3 x 15 mL). The separated organic layer was washed with brine (40 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • reaction mixture was diluted with water (40 mL) and extracted with ethyl acetate (3 x 20 mL). The separated organic layer was washed with brine (30 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • Example 25 2-Amino-4-(6-chloro-2-(((S)-1-(2,2-difluoroethyl)azetidin-2-yl)methoxy)-8-fluoro Preparation of -4-(6-hydroxy-6-methyl-1,4-oxazepan-4-yl)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[b]thiophene-3-carbonitrile
  • 6-Methyl-1,4-oxazepan-6-ol hydrochloride (Intermediate 1 of Example 23) (534 mg, 3.186 mmol) and 7-bromo-2,4-dichloro-6,8 in DCM (10 mL) - TEA (967 mg, 9.558 mmol) was added to a stirred solution of difluoroquinazoline (1.0 g, 3.186 mmol) and stirred at room temperature under N 2 gas for 2 hours. After completion of the reaction, it was diluted with water (60 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL x 3).
  • reaction mixture was diluted with water (80 mL) and extracted with DCM (40 mL x 3). The obtained organic layer was washed with brine (20 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the crude compound.
  • Step 7) Preparation of SM-2 of Example 31: tert-butyl(4-(6-chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrroli gin-7a(5H)-yl)methoxy)-4-hydroxyquinazoline- 7-yl)-3-cyano-7-fluorobenzo[b]thiophen-2-yl)carbamate
  • reaction mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with DCM (15 mL x 3). The obtained organic layer was washed with brine (10 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain the desired compound, tert-butyl (4-(6-chloro-8-fluoro-4-(8-fluoro).
  • Example 32 2-Amino-4-(6-chloro-8-fluoro-2-(((2R,7aS)-2-fluorotetrahydro-1H-pyrrolizin-7a(5H)-yl) methoxy)-4-(3-methyl-3,4-dihydro-2,6-naphthyridin-2(1H)-yl)quinazolin-7-yl)-7-fluorobenzo[b]thiophene -Manufacture of 3-carbonitrile
  • Assay Buffer (20mM HEPES pH 7.4, 150mM NaCl, 5mM MgCl 2 , 1mM DTT, 0.05% BSA, 0.0025% NP40)
  • KRAS protein was diluted with assay buffer to reach 1.5 times the final concentration, then Tb cryptate anti-GST antibody was mixed and 10 ⁇ L was added to each assay well (final concentration was 20 ⁇ L for all KRAS WT , KRAS G12D , and KRAS G12V) . nM).
  • the compound was dissolved in DMSO and diluted to prepare 100 times the final concentration.
  • HTRF signals were analyzed approximately 25 minutes after the start of the reaction (G12V reacted for 60 minutes).
  • Nucleotide exchange activity is expressed as a percentage difference compared to the DMSO reaction value, and the IC 50 value was calculated based on the four-parameter logistic equation in GraphPad 4.0 software.
  • test compounds were dissolved in 10mM stock, and the reference compounds BI-2582 and MRTX1133 (MedChemExpress) were dissolved in DMSO at 10mM and 1mM stocks, respectively.
  • NanoBRET KRAS (WT, G12D or G12V)-NanoLuc Fusion vector and tracer K-2 were purchased from Promega, and HEK293 cell line was purchased from ATCC.
  • HEK293 cells used EMEM medium supplemented with 10% FBS and 100 ⁇ g/mL penicillin-streptomycin, and were cultured at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO 2 and 95% air.
  • the reference compound Staurosporine was purchased from Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI), and CellTiter-Glo® 2.0 Luminescent cell viability assay reagent (cat# G9243) was purchased from Promega (Madison, WI).
  • AsPC-1 and SW480 cell lines were purchased from American Type Culture Collection (Manassas, VA).
  • AsPC-1 cells were cultured with RPMI-1640 (ATCC, cat#30-2001) and SW480 cells were cultured with DMEM (ATCC cat#30-2002), supplemented with 10% FBS (Sigma-Aldrich, cat#F2442) and 100 ⁇ g/ml.
  • a medium supplemented with mL of penicillin-streptomycin was used. Cells were cultured at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO 2 and 95% air.
  • test compound and reference compound Staurosporine were dissolved in DMSO solution to prepare 20mM (test compound) and 10mM (control compound Staurosporine) in the source plate and diluted with DMSO to 3 fold and 10 doses.
  • Luminescence signals were measured with Envision 2104 Multilabel Reader (PerkinElmer, Santa Clara, CA), and the number of surviving cells was measured through quantification of ATP present in each culture.
  • the IC 50 value was calculated based on the sigmoidal dose-response equation in the GraphPad Prism 4 program.
  • NADPH and UDPGA are simultaneously treated as coenzymes for metabolic reactions, for a total of 45 or 90 minutes37 The metabolic reaction proceeds under °C conditions.
  • the final concentration of the test substance in the final reaction solution is 1 ⁇ M.
  • a certain amount of the reaction solution is taken according to the planned time from the start of the initial reaction, and methanol containing the internal standard is added in an amount 4 times the volume of the reaction solution to determine the protein. It precipitates. Samples extracted through protein precipitation are centrifuged and the supernatant is injected into LC-MS/MS for quantitative analysis.
  • the intrinsic clearance (CLint) of the new derivative for rat and human microsomes was calculated, and classified as low, medium, or high CLint according to the CLint classification criteria for each test species. Presented by level.

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Abstract

본 발명은 KRAS 저해 물질로서 신규한 퀴나졸린 화합물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 KRAS 단백질 저해제로서 유용한 신규한 퀴나졸린 화합물, 이성질체, 및 이를 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

KRAS 저해 물질로서 신규한 퀴나졸린 화합물
본 발명은 KRAS 저해 물질로서 신규한 퀴나졸린 화합물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 KRAS 단백질 저해제로서 유용한 신규한 퀴나졸린 화합물, 이의 이성질체, 및 이를 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물에 관한 것이다.
RAS 유전자는 미토겐 활성화 단백질 키나아제(mitogen activated protein kinase, MAPK) 및 포스파티딜이노시톨 3 키나아제(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K) 경로 내에서 신호 전달을 담당하며, 빈번한 돌연변이로 인해 종양 유전자로서 알려져 있다. RAS 유전자 패밀리는 KRAS, NRAS, 및 HRAS로 분류되는데, 이들 세 개의 유전자는 네 개의 단백질 즉, 스플라이스 변이체 K-Ras4A 및 K-Ras4B와, N-Ras 및 H-Ras를 인코딩한다. K-Ras는 Ras 유발 암(86%)에서 가장 빈번하게 돌연변이된 동형체(mutated isoform)이며 N-Ras(11%) 및 H-Ras(3%)가 그 뒤를 잇는다(비특허문헌 1). 예를 들어 췌장암, 폐암, 결장 선암종(colon adenocarcinoma), 결장직장암 및 직장 선암종(rectal adenocarcinomas)을 포함하는 암의 15.95%에서 KRAS의 발암성 변화가 관찰된다(비특허문헌 2).
대부분 코돈 12, 13, 61에 위치하는 기능 획득 오류 돌연변이(gain-of-function missense mutation)는 RAS 단백질을 항시(constitutively) 활성화하며, 다양한 유형의 인간 암에서 검출된다. 종양 Ras 돌연변이의 98%가 활성 부위 아미노산 잔기 G12, G13 및 Q61에서 발견되며, 이들 돌연변이는 고유(intrinsic) 및 GAP 매개 GTP 가수분해를 손상시켜 하위 신호 전달을 비정상적으로 활성화시킨다(비특허문헌 3). K-Ras G12 돌연변이(89%)가 인간 암에서 우세하며, G13 돌연변이(9%) 및 Q61 돌연변이(1%)가 그 뒤를 잇는다. 코돈 12 돌연변이 형태로는 코돈 12 Gly→Asp (G12D) (36%), 코돈 12 Gly→Val (G12V) (23%), 코돈 12 Gly→Cys (G12C) (14%)가 있으며, G12D는 코돈 12 변이 중에서 가장 흔한 돌연변이다. 또한, 코돈 13 Gly→ Asp (G13D) (7%) 및 코돈 61 Gln→His (Q61H) (0.6%)의 돌연변이도 관찰된다(비특허문헌 1).
악성종양에서 KRAS의 잘 알려진 역할과 다양한 종양 유형에서 KRAS의 돌연변이 보고는 KRAS가 암 치료를 위한 효율적인 타겟이 될 수 있음을 보여준다. 본 발명자들은 새로운 KRAS 저해제를 개발하여 본 발명을 완성하였다.
[선행기술문헌]
[비특허문헌]
(비특허문헌 1) Scientific Reports 6(1):21949
(비특허문헌 2) J Cancer Metastasis Treat 2021;7:26
(비특허문헌 3) Cancer Biol Ther. 2006 August; 5(8): 928-932
본 발명은 KRAS 단백질 저해제로서 유용한 신규한 퀴나졸린 화합물, 이성질체, 및 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 이를 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물, 이를 제공하기 위한 제조 방법 및 중간체를 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 양상은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양상은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양상은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 제조하기 위한 제조 방법 및 이에 사용되는 중간체를 제공한다.
본 발명은 KRAS 단백질 저해제로서 유용한 신규한 퀴나졸린 화합물, 이성질체, 및 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 이를 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
퀴나졸린 화합물
본 발명의 일 양상은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000001
화학식 1에서,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000002
는 치환 또는 비치환된 C7-20융합헤테로아릴 또는 치환 또는 비치환된 C6-15아릴이고;
R1 및 R2는 서로 독립적으로 각각 수소, C1-6알킬, 또는 할로겐이고;
X3는 결합, C1-6알킬렌, C3-8사이클로알킬렌, 또는 -(C1-3알킬)-(C3-8사이클로알킬)-(C1-3알킬)- 이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 C1-3알킬로 치환 또는 비치환되고;
Y1은 아미노, -NH(C1-6알킬), -N(C1-3알킬)2, 또는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의 C3-20헤테로사이클이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, -(CH2)0-3-(C1-6알콕시), 시아노, 아미노, NH(C1-6알킬), N(C1-3알킬)2, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고,
b는 0 내지 1의 정수이고;
X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고;
X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
선택적으로 X1과 X2가 결합하여 하기 화학식 2의 고리를 형성하고;
[화학식 2]
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000003
각각의 R3은 수소, 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3알켄일, C1-3할로알킬, -L3-NH2, -NH(C1-3알킬), -N(C1-3알킬)2, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -C(O)N(R5)2, -NHC(0)H, -CN, 아릴, -(CH2)1-2S(O)2N(R5)2, -NH-S(O)2N(R5)2, -O-S(O)2N(R5)2, -S(O)2R5, 및 -C(O)NH2로부터 독립적으로 선택된 어느 하나이고; 또는
선택적으로 인접한 원자 상의 2개 이상의 R3은 서로 결합하여 C3-6사이클로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 또는 헤테로사이클을 형성하고, 화학식 2의 화합물과 함께 융합되어 1 내지 4개의 R4로 치환 또는 비치환되는 융합 고리를 형성하고;
L3은 결합, -C1-4알킬-, -C1-4알킬-NH-, -NH-, 또는 -N(C1-3알킬)-이고;
R4는 각각 독립적으로 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 옥소(=O), -N(R5)2, -N(R5)C(O)R5, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -C(O)N(R5)2, 헤테로아릴, 또는 -CN이고;
R5는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 C1-3알킬이고;
o는 1 내지 8의 정수이고;
W는 상기 화학식 2의 화합물에서 결합이거나, -(CH2)m-O-(CH2)n-, -(CH2)m-N-(CH2)n-, 및 -(CH2)n- 로부터 선택되는 어느 하나이고;
n은 0 내지 4의 정수이고;
m은 0 내지 2의 정수이고,
헤테로아릴, 헤테로사이클, 또는 융합헤테로아릴은 각각 N, S 또는 O 중 어느 하나 이상을 헤테로 원자로 포함한다.
일 구현 예에서,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000004
는 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, 하이드록시, 시아노, 아미노, -NH(C1-C6알킬) 및 -N(C1-3알킬)2 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는 C7-20융합헤테로아릴 또는 C6-15아릴이고;
R1 및 R2는 할로겐이고;
X3는 C1-3알킬로 치환되거나 비치환된 C1-3알킬렌 또는 -(C1-3알킬)-(C3-8사이클로알킬)-(C1-3알킬)- 이고;
Y1은 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의 C3-20헤테로사이클로알킬이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
b는 0 내지 1의 정수이고;
X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고,
X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
X1과 X2가 결합하여 4-10원의 헤테로사이클 또는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성하고, 이들은
하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3할로알킬, -NH(C1-3알킬), -N(C1-3알킬)2, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -CN, 및 -C(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 비치환될 수 있다.
일 구현 예에서, X1과 X2가 결합하여 4-10원의 헤테로사이클, 5-10원의 헤테로아릴, 또는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성할 수 있고, 바람직하게는 4-10원의 헤테로사이클 또는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성할 수 있다.
일 구현 예에서,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000005
는 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, 하이드록시, 시아노, 아미노, -NH(C1-C6알킬) 및 -N(C1-3알킬)2 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000006
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000007
, 또는
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000008
일 수 있다.
일 구현 예에서,
R1은 불소 또는 염소이고;
R2는 불소일 수 있다.
일 구현 예에서,
X3는 C1-6알킬렌, C3-8사이클로알킬렌, 또는 -(C1-3알킬렌)-(C3-8사이클로프로필렌)-(C1-3알킬렌)- 이고;
Y1은 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되고, N 또는 O 중 어느 하나의 헤테로원자를 포함하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭의 C3-20헤테로사이클인 화합물.
일 구현 예에서,
b는 0 이고; 또는
b는 1 이고, 이 때 화학식 1에서 -O-X3-Y1은 각각 독립적으로 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는,
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,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000010
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000011
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000012
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000013
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000014
, 또는
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000015
중 어느 하나인 것인 화합물.
일 구현 예에서,
X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고, X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
X1과 X2가 결합하여 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3알켄일, 또는 옥소(=O)로 1 내지 4회 치환되거나 비치환되는 4-10원의 헤테로사이클을 형성하거나, 또는
하이드록시, 할로겐, 또는 C1-3알킬로 1 내지 4회 치환되거나 비치환되는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성할 수 있다.
일 구현 예에서, X1과 X2가 결합하여 화학식 1에서 -NX1X2의 질소와 함께
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000016
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000017
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000018
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000019
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000020
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000021
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000022
, 및
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000023
중에서 선택되는 융합 고리를 형성하고, 이들은 서로 독립적으로 각각 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 및 옥소(=O) 중에서 선택되는 1 내지 4개의 치환기로 치환되거나 비치환될 수 있다.
일 구현 예에서,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000024
는 나프틸, 벤조티아졸, 또는 벤조티오펜이고, 이들은 각각 할로겐, C1-3알킬, 하이드록시, 시아노, 및 아미노, 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
R1은 불소 또는 염소이고;
R2는 불소이고;
X3는 -CH2-, -C(C1-3알킬)-, 또는
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000025
이고;
Y1은 아제티딘, 피롤리딘, 피롤리지딘, 2-옥사바이사이클로[2.1.1]헥산, 또는 옥사바이사이클로[2.1.1]헥산이고, 이들은 각각 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
b는 0 또는 1이고;
X1은 C3-6사이클로알킬 또는 -CH2-(C3-6사이클로알킬)이고, 이들은 각각 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
X2는 수소 또는 C1-3알킬이고; 또는
X1과 X2가 결합하여 피페리딘, 아제판, 옥사제판, 부분적으로 불포화된 이미다조[1,5-a]피라진, 또는 부분적으로 불포화된 2,6-나프티리딘을 형성하고, 이들은 서로 독립적으로 각각 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 및 옥소(=O) 중에서 선택되는 1 내지 4개의 치환기로 치환 또는 비치환될 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 화학식 1의 화합물은 하기 화합물로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000026
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000027
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000028
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000029
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000030
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Figure PCTKR2023014439-appb-img-000032
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,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000034
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Figure PCTKR2023014439-appb-img-000035
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000036
,
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,
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,
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Figure PCTKR2023014439-appb-img-000053
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Figure PCTKR2023014439-appb-img-000054
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000055
,
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000056
, 및
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000057
.
다른 일 양상은 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현 예에서, 상기 약학적 조성물은 KRAS 단백질 저해 활성을 나타낼 수 있다.
정의
본 명세서에서 사용된 용어 "할로겐"은 다른 언급이 없으면, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬"은 다른 언급이 없으면, 직쇄형 또는 분지형의 포화된 1가의 탄화수소기를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬렌"은(-CH2-)n를 갖는 2가 직쇄형 또는 분지형 탄화수소기를 말하며, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌, 이소부틸렌 등을 들 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 사용된 용어 "알켄일"은 다른 언급이 없으면, 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 함유하는 1가의 탄화수소기를 말하며, 각각의 이중결합은 E- 또는 Z-형의 입체 배치 형태를 가질 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "알킨일"은 다른 언급이 없으면, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합을 함유하는 1가의 탄화수소 라디칼을 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알콕시"는 다른 언급이 없으면, 직쇄형 또는 분지형 탄화수소 잔기가 산소로 연결된 것을 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "아릴"은 다른 언급이 없으면, 치환 또는 비치환될 수 있는 방향족기를 말하며, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의, 치환 또는 비치환될 수 있는 방향족기를 포함하며, 불포화 또는 부분적으로 포화된 아릴을 포함하고, 예컨대 C6-15아릴을 포함할 수 있고, 예를 들어 페닐, 비페닐, 나프틸, 톨루일, 또는 나프탈렌일 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로아릴"은 다른 언급이 없으면, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의, 치환 또는 비치환될 수 있는 방향족기를 말하며, 불포화 또는 부분적으로 포화된 아릴을 포함하고, 예컨대 C4-15헤테로아릴을 포함할 수 있다. 예를 들어, 피리딘일, 피라진일(pyrazinyl), 트리아진일(triazinyl), 이미다졸, 또는 피란일(pyranyl) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "융합헤테로아릴"은 상기 헤테로아릴기가 또 다른 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬기와 융합된 방식으로 연결된, 불포화 또는 부분적으로 포화된, 치환 또는 비치환된 고리 시스템을 말한다. 예컨대 C8-20헤테로아릴을 포함할 수 있고, 예를 들어, 9원, 10원, 11원, 12원, 13원, 14원 또는 15원의 벤조-융합된 헤테로아릴기일 수 있다. 예를 들어, 융합헤테로아릴은 5+5원, 5+6원, 5+7원, 6+6원, 또는 6+7원의 융합 고리 시스템을 이룰 수 있다. 또한, 융합헤테로아릴은 예를 들어, 벤조티아졸, 벤즈티아졸린일, 벤조티오펜일, 벤조퓨란일, 이소벤조퓨란일, 벤조티오닐, 인돌일, 이소인돌린일, 인다졸린일, 벤즈이미다졸린일, 벤즈옥사졸린일, 벤즈이속사졸린일, 벤즈티아디아졸릴, 벤즈옥사디아졸린일, 벤즈트리아졸린일, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 또는 퀴나졸린일 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "부분적으로 포화된"은 상기 정의된 아릴, 헤테로아릴, 또는 융합헤테로아릴 고리 내에 적어도 하나의 포화 사이트 즉, 적어도 하나의 단일 결합을 포함하는 것을 말한다. 본 명세서에서 용어, "불포화된"은 상기 정의된 아릴, 헤테로아릴, 또는 융합헤테로아릴 고리 내에 포화 사이트, 즉, 단일 결합을 포함하지 않는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "사이클로알킬"는 다른 언급이 없으면, 치환 또는 비치환될 수 있는, 포화 또는 부분 불포화의, 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 폴리사이클릭 탄화수소 고리를 말하며, 브릿지사이클로알킬, 융합사이클로알킬, 스피로사이클로알킬을 포함한다. 예컨대 C3-10사이클로알킬 또는 C3-6사이클로알킬을 포함할 수 있고, 예를 들어 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 또는 사이클로헵틸 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클로알킬"는 다른 언급이 없으면, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는, 치환 또는 비치환될 수 있는, 포화 또는 부분 불포화의, 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 폴리사이클릭 비방향족 고리를 말하며, 브릿지헤테로사이클, 융합헤테로사이클, 스피로헤테로사이클을 포함한다. 예컨대 C4-15헤테로사이클로알킬을 포함할 수 있고, 예를 들어 피페리딘일, 피페라진일, 피롤리딘일, 모르폴린일, 티오모르폴린일, 테트라하이드로푸란일(tetrahydrofuranyl), 테트라하이드로피란일(tetrahydro-2H-pyranyl), 이미다졸리딘일, 또는 피롤리딘-2-온(pyrrolidin-2-one) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "융합헤테로사이클" 또는 "융합사이클로알킬"는 다른 언급이 없으면, 치환 또는 비치환된 고리 시스템을 말한다. 고리 개수에 따라 이환형, 삼환형, 사환형 또는 그 이상의 다환형 융합사이클로알킬로 구분될 수 있다. 융합사이클로알킬은 각각의 고리가 다른 고리와 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하고, 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 공유할 수 있지만, 이들 고리들 중 어느 것도 완전한 공액 π-전자 시스템을 갖지는 않는 다환 사이클로알킬을 말하며, 예컨대 C3-20융합사이클로알킬을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이환형 융합사이클로알킬은 "바이사이클로알킬"로도 지칭되고, 융합되는 두 개의 고리를 각각 이루는 원자의 수에 따라 5+6 형태의 바이사이클로알킬 또는 6+6 형태의 바이사이클로알킬일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "융합헤테로사이클로알킬"는 다른 언급이 없으면, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는, 치환 또는 비치환된 융합사이클로알킬을 말하며, 예컨대 C8-20헤테로융합사이클로알킬을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이환형 융합헤테로사이클로알킬은 "헤테로바이사이클로알킬"로도 지칭되고, 융합되는 두 개의 고리를 각각 이루는 원자의 수에 따라 5+6 융합 헤테로바이사이클로알킬 또는 6+6 융합 헤테로바이사이클로알킬일 수 있다. 예를 들어, 헥사하이드로-1H-피롤리진(hexahydro-1H-pyrrolizine)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "입체 이성질체"는 동일한 화학식 또는 분자식을 가지지만 광학적 또는 입체적으로 다른 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미할 수 있다. 본 명세서에서 용어 "거울상이성질체"는 본 발명에 따른 화합물에 대하여 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체와 기하 이성질체를 말한다.
본원에 기재된 화합물은 비대칭 중심, 기하학적 중심(예를 들어, 이중 결합), 또는 둘 모두를 가질 수 있다. 특정 입체화학 또는 이성질체 형태가 구체적으로 표시되지 않는 한, 모든 키랄, 부분입체 이성질체, 라세미 형태 및 구조의 모든 기하 이성질체 형태가 의도된다.
본 발명의 일 양상에 따른 화학식 1의 화합물들은 비대칭 탄소중심(부제탄소)을 가질 수 있으므로 거울상이성질체(R 또는 S 이성질체), 라세미체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 임의의 혼합물로서 존재할 수 있으며, 이들 모든 이성질체 및 혼합물은 본 발명의 범위에 포함된다.
본원에 기재된 화합물은 키랄 중심을 가질 수 있고, 달리 언급하지 않는 한 각각의 키랄 중심은 독립적으로 R-배열 또는 S-배열 또는 이들의 혼합물일 수 있는 것으로 이해된다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화합물은 임의의 또는 모든 비대칭 원자에서 농축되거나(enriched) 분리된(resolved) 광학 이성질체를 포함한다. R-거울상이성질체 및 S-거울상이성질체의 라세미 혼합물, 및 R- 및 S-거울상이성질체뿐만 아니라 개별 광학 이성질체를 포함하는 거울상-농축 입체 이성질체 혼합물은 이들의 거울상이성질체 또는 부분입체 이성질체 파트너가 실질적으로 없도록 단리 또는 합성될 수 있으며, 이러한 입체 이성질체는 모두 본 기술의 범위 내에 있다.
비대칭적으로 치환된 원자를 함유하는 본 개시내용의 화합물은 광학 활성(optically active) 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 라세미 형태의 분리(resolution), 광학 활성 출발 물질로부터의 합성, 또는 키랄 보조제의 사용과 같은 광학 활성 형태를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "회전장애이성질체"는 서로 분리될 수 있는 모든 입체 이성질체를 말한다. 화합물을 구성하는 결합 가운데 탄소와 탄소가 이루는 단일 결합이 부피가 큰 치환기에 의해 자유롭게 회전하지 못하여 나타나는 이성질체이다. 비대칭 축으로부터 생성된 입체이성질체를 지칭하며, 안정한 비-상호전환 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 종의 완전한 단리를 포함하여, 이성질체 종의 구별을 허용하기에 충분히 높은 회전 장벽이 존재하는 단일 결합 주위의 제한된 회전으로부터 생성될 수 있다.
일 구현 예에 따른 화합물은 높은 확률로 회전장애이성질체가 발생할 수 있다.
일 구현 예에 따른 화합물은 또한 "호변이성질체" 형태를 포함할 수 있다. 호변 이성질체 형태는 단일 결합과 인접한 이중 결합의 교환 및 수반되는 양성자의 이동으로 인해 발생한다. 호변이성질체 형태는 동일한 실험식 및 총 전하를 갖는 이성질체 양성자화 상태인 프로토트로픽 호변이성질체를 포함한다. 호변 이성질체 형태는 평형 상태에 있거나 적절한 치환에 의해 한 형태로 입체적으로 고정될 수 있다.
일 구현 예에 따른 화합물은 "동위원소변형체"를 포함할 수 있다. 본 개시내용은 또한 하나 이상의 원자가 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자("동위원소")로 대체된다는 점을 제외하고는 본원에 기재된 화합물과 동일한 동위원소 표지된 화합물을 포함한다. 본 개시내용의 화합물은 또한 그러한 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 본원에 기재된 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예를 들어 2H("D"), 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F 및 36Cl 를 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 화합물은 중수소로 대체된 하나 이상의 H 원자를 가질 수 있다. 일반적으로, 수소 또는 H와 같은 특정 원소에 대한 언급 또는 서술은 해당 원소의 모든 동위원소를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, R기(group)가 수소 또는 H를 포함하는 것으로 정의되면 중수소 및 삼중수소도 포함된다. 중수소화 출발 물질은 쉽게 입수할 수 있으며 중수소 함유 화합물의 합성을 제공하기 위해 본원에 기술된 합성 방법에 적용된다. 많은 수의 중수소 함유 시약 및 빌딩 블록이 Aldrich Chemical Co.와 같은 화학 공급업체에서 상업적으로 이용 가능하다.
본 명세서에서 사용된 용어 "용매화물"은 화학식 1의 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 용매 분자, 예를 들어 에탄올 또는 물을 포함하는 분자 복합체를 포함할 수 있다. 상기 용매 분자가 물인 복합체는 "수화물"로도 지칭된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 인체에 독성이 낮고 모화합물의 생물학적 활성과 물리화학적 성질에 악영향을 주지 않는 한 임의의 염을 포함한다.
요소를 설명하는 맥락에서 단수 관사 및 유사한 지시어는 여기에 달리 표시되거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
KRAS 단백질 저해제
키르스텐 랫트 육종 바이러스 종양유전자 동종체(Kirsten Rat Sarcoma Oncogene Homolog, KRAS)는 세포 외부의 신호를 세포 내 증식 및 생존 신호로 통합하는 GTP 가수분해효소(GTPase)이고 Ras, Rho, Rab, Arf, Ran의 small GTPase family 중 하나이다. 여러 수용체 타이로신 인산화 효소(receptor tyrosine kinase), 특히 상위에 EGFR로부터의 신호를 전달받아 KRAS의 GTPase cycle을 통해 하위로는 주요하게 Raf, PI3K로 신호를 전달함으로써, 세포증식을 포함한 다양한 프로세스를 조절한다.
GTPase cycle은 Guanine nucleotide exchange factors(GEF)의 작용으로 GTP가 결합된 활성화 상태에서 effector 단백질과 결합을 하게 되며, GTPase-activating protein(GAP)과 작용하여 GDP가 결합된 불활성화 상태가 된다.
KRAS GTP/GDP 결합부위외에도 GTP/GDP 결합에 관련된 단백질 구조 변환에 관련된 swich I/II가 보고되어 GTPase cycle을 저해할 수 있음이 증명되었다.
KRAS의 암과의 관련성이 보고되어 왔고, KRAS 활성을 저해하기 위한 다양한 시도가 있었지만 직접적인 drug 타겟으로 가능성은 낮게 보였다. 하지만 Sotorasib, Adagrasib이 비소세포폐암에서 승인되면서 약물 개발 가능성이 확인되었다.
본 개시 내용의 화합물은 KRAS를 저해하는 화합물로서 KRAS 코돈 12, 13, 61 중 어느 하나의 돌연변이, 예컨대 KRAS G12D, KRAS G12V, KRAS G12C, KRAS G13D 및 KRAS Q61H 돌연변이 중 적어도 하나 이상을, 하지만 이에 한정되지는 않는 신규한 KRAS 저해제 화합물에 관한 것이다.
약학적 조성물
본 발명의 일 양상은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현 예에서, 상기 조성물은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료적 유효량으로 포함할 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 조성물은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 이외에 다른 치료 약물을 더 포함할 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 더 포함할 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 조성물은 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 또는 다른 치료 약물 중 어느 하나를 0.005% 내지 100%의 범위로 포함할 수 있고, 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제가 잔부 범위로 포함될 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 암 치료를 위한 용도로 사용될 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 KRAS 단백질 저해 활성을 나타낼 수 있다.
투여 경로 및 투여 형태
본 개시 내용의 화합물 및 약학적 조성물은 제약 분야에서 허용 가능한 임의의 적합한 투여 경로 및 투여 형태로 제공될 수 있다.
제조 방법
본 개시내용의 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성기술을 이용하여 합성될 수 있다. 본 개시내용의 일부 화합물 및/또는 중간체는 상업적으로 입수가능하거나, 문헌에 공지되어 있거나, 통상의 기술자가 공지된 유기 합성기술 중 적절한 합성 방법을 선택하여 제조할 수 있다. 본 개시내용의 일부 화합물은 본 명세서에 기재된 반응식, 실시예 또는 중간체를 사용하여 합성될 수 있다. 통상의 기술자는 본 명세서에 기술된 합성 방법으로부터 반응 시간, 시약의 당량 수 및/또는 온도가 변형될 수 있고, 상이한 후처리 및/또는 정제 기술을 이용할 수 있음을 인식할 수 있다.
합성된 화합물의 구조는 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예를 들어 핵 자기 공명(NMR) 분광법 및/또는 질량 분광법에 의해 검증될 수 있다.
일반 정보
별도의 언급이 없는 한 상용 공급업체에서 얻은 시약 및 용매를 정제 또는 건조 없이 사용했다. 1H NMR은 내부 표준으로 사용되는 TMS와 함께 Bruker 400 MHz를 사용하여 기록되었다. LCMS 분석은 SQD-2 질량 검출기(Single quadruple)가 장착된 Waters UPLC에서 수행되었으며, HPLC 분석은 WATERS에서 수행되었다: Acquity UPLC H CLASS 및 Acquity Arc 시스템(with PDA & amp; ELSD Detector), Prep-SFC는 Prep SFC-150, Prep SFC-200(WATERS) 및 Sepiatec-200(SEPIATEC)에서 수행되었으며, 분취용 HPLC(Prep-HPLC)는 Shimadzu 및 Waters에서 수행되었다.
본 명세서에 기재된 수치는 명시하지 않아도 "약"의 의미를 포함하는 것으로 간주한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "약"은 소정의 값 또는 범위의 5% 이내, 바람직하게는 1% 내지 2% 이내를 의미한다.
본 명세서에서 용어 "내지"를 이용하여 표시된 수치 범위는 용어 "내지" 전과 후에 기재되는 수치를 각각 하한 및 상한으로서 포함하는 범위를 포함한다.
본 명세서의 본문 내에서 인용된 모든 참조, 간행물, 발행된 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 여기에 포함된다.
이하, 본 발명을 하기 합성 반응식, 실시예 또는 시험예에 의해 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1의 합성 반응식
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실시예 1: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 1의 중간체 2: 2-아미노-4-브로모-5-클로로-3-플루오로벤조산의 제조
DMF(실온에서 230 mL, 10 vol) 중 2-아미노-4-브로모-3-플루오로벤조산(실시예 1의 SM-1)(23.0 g, 98.2 mmol)의 교반 용액에 NCS(15.7 g, 117.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 30분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고 진공 하에 건조시켜 조 화합물, 2-아미노-4-브로모-5-클로로-3-플루오로벤조산(실시예 1의 중간체 2)(23.0 g, 조 화합물)을 회백색(off-white) 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 6.76-6.96(m, 2H), 7.69(d, J = 1.6 Hz, 1H), 13.45(brs, 1H). MS(LCMS): 268.22 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 1의 중간체 3: 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-티옥소-2,3-디하이드로퀴나졸린-4(1H)-온의 제조
SOCl2(230 mL, 10 vol) 중 2-아미노-4-브로모-5-클로로-3-플루오로벤조산(실시예 1의 중간체 2)(23.0 g, 85.6 mmol)의 용액을 75℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 아세톤(250 mL, 11 mL)에 용해시킨 다음 실온에서 NH4SCN(7.84 g, 102.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 85℃로 가열하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 디에틸 에테르로 세척하여 원하는 화합물 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-티옥소-2,3-디하이드로퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 1의 중간체 3)(21 g, 조 화합물)을 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86(s, 1H), 12.73(s, 1H), 12.97(brs, 1H). MS(LC-MS): 309.13 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 1의 중간체 4: 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4(1H)-온의 제조
DMF(120 mL, 10 vol) 중 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-티옥소-2,3-디하이드로퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 1의 중간체 3)(12.0 g, 38.77 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(4.27 g, 30.07 mmol)를 첨가한 다음 MeI(1.93 mL, 30.07 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 1의 중간체 4)(12 g, 조 화합물)을 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 323.21 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 1의 중간체 5: 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린의 제조
POCl3(96 mL, 8 vol) 중 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 1의 중간체 4)(12 g, 37.2 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DIPEA(12 mL, 1 vol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화하고 에틸 아세테이트(2 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린(실시예 1의 중간체 5)(3.0 g, 23 %)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 2.71(s, 3H), 8.23(d, J = 2.0 Hz, 1H). MS(LC-MS): 341.24 m/z [M+H].
단계 5) 실시예 1의 중간체 6: 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4-아민의 제조
1,4-디옥산(10 mL, 20 vol) 중 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린(실시예 1의 중간체 5)(0.5 g, 1.46 mmol)의 교반 용액에 실온에서 실시예 1의 중간체 A(0.249 g, 1.7543 mmol) 및 DIPEA(0.38mL, 2.19mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 15% MeOH로 용출하여 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 6)(0.6g, 92%)을 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.64(brs, 4H), 1.72(brs, 4H), 2.39(brs, 3H), 2.50-2.52(m, 6H), 3.78(brs, 2H), -8.41(m, 1H), 8.56(s, 1H). MS(LC-MS): 447.53 m/z [M+H].
단계 6) 실시예 1의 중간체 7: 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸술포닐)퀴나졸린-4-아민의 제조
THF 및 물(10 mL 및 5 mL)(2:1)의 용매 혼합물 중 7-브로모-6-클로로-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸티오)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 6)(0.65 g, 1.4541 mmol)의 교반 용액에 옥손(oxone)(0.885 g, 5.8165 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸설포닐)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 7)(0.55 g, 조 화합물)을 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS (LC-MS): 479.58 m/z [M+H].
단계 7) 실시예 1의 중간체 9: (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민의 제조
톨루엔(10 mL, 18.2 vol) 중 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-(메틸설포닐)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 7)(0.55 g, 1.15 mmol) 및 실시예 1의 중간체 8(0.264 g, 2.29 mmol)의 교반 용액에 NaOtBu(0.165 g, 1.72 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온이 되도록 하고 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2)-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 9)(0.07 g, 12%)를 얻었다. MS(LC-MS): 514.53 m/z [M+H].
단계 8) 실시예 1의 중간체 11: 터트-부틸 (4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(5.0 mL, 71.5 vol) 및 물(1.0mL, 14.3vol) 중 (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 1의 중간체 9)(0.07 g, 0.136 mmol)의 교반 용액에 실온에서 실시예 1의 중간체 10(0.08 g, 0.2030 mmol), Na2CO3(0.043 g, 0.4056 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 15분 동안 탈기시킨 다음, PdCl2(dppf)·DCM(0.011 g, 0.0135 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물 터트-부틸(4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸))아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 1의 중간체 11)(0.09 g, 조 화합물)를 얻었다. MS(LCMS): 602.65 m/z [M-Boc+H].
단계 9) 실시예 1의 화합물: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
DCM(5 mL, 41.7 vol) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로펜틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 1의 중간체 11)(0.120 g, 0.17 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 TFA(0.02 mL, 0.3418 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 6시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화하고 DCM(2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 1의 화합물(0.015 g, 14%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.62-1.69(m, 11H), 1.88-1.97(m, 1H), 2.16(q, J = 8.40 Hz, 1H), 2.28(s, 6H), 2(s, 3H), 2.55-2.60(m, 1H), 2.92-2.96(m, 1H), 3.67-3.76(m, 2H), 4.14-4.20(m, 1H), 4.35(dd, J = 10.8, 4.8 Hz, 1H), 7.06(t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25(dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 1H), 7.91(s, 2H), 8.09(brs, 1H), 8.39(s, 1H). MS(LC-MS): 602.30 m/z [M+H].
실시예 2의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000059
실시예 2: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 2의 중간체 3 : 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민의 제조
DCM(10 mL, 10 vol) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 2의 중간체 1)(1.00 g, 3.02 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 DIPEA(1.6 mL, 9.08 mmol)을 첨가한 다음, 0℃에서 1-(아미노메틸)-N,N-디메틸사이클로부탄-1-아민(실시예 2의 중간체 2)(0.38 g, 3.02 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온으로 가온되도록 하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후(TLC), 반응 혼합물을 DCM(20 mL)으로 희석하고 빙냉수(10 mL)로 켄칭하였다. 유기층을 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 ACN 세척으로 정제하여 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 2의 중간체 3)(0.9 g, 수율: 70.6%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.69-1.73(m, 2H), 2.00(brs, 4H), 2.26(brs, 6H), 3.85(brs, 2H), 8.63(d, J = 1.75 Hz, 1H), 8.88(brs, 1H). MS(LC-MS): 421.48 m/z [M+H]+.
단계 2) 실시예 2의 중간체 5 : 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민의 제조
DMF(1 mL, 5 vol) 및 THF(1 mL, 5 vol)의 용매 혼합물 중 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 2의 중간체 5)(0.2 g, 0.476 mmol)의 교반 용액에 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(실시예 2의 중간체 4)(0.091 g, 0.57 mmol), DABCO(0.053 g, 0.47 mmol) 및 Cs2CO3(0.46 g, 1.42 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료(TLC) 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석하고 셀라이트(Celilte) 패드를 통해 여과하였다. 유기층을 물(5 mL) 및 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 ACN 세척으로 정제하여 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 2의 중간체 5)(0.07 g, 수율: 27%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.75-1.84(m, 4H), 1.65-1.69(m, 2H), 1.96-2.20(m, 7H), 2.20(s, 6H), 2.81-2. m, 1H), 3.00-3.03(m, 1H), 3.08(d, J = 8.25 Hz, 2H), 3.81(d, J = 4.75 Hz, 2H), 4.02(d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.20-5.23(s, 1H), 8.35(brs, 1H), 8.49(d, J = 1.50 Hz, 1H). MS(LC-MS): 542.75 m/z [MH]+.
단계 3) 실시예 2의 중간체 7: 터트-부틸 (터트-부톡시카르보닐)(4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(4 mL, 40 vol) 및 물(1 mL, 10 vol)의 용매 혼합물 중 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 2의 중간체 5)(0.1 g, 0.184 mmol)의 탈기 용액에 터트-부틸(터트-부톡시카르보닐)(7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 2의 중간체 6)(0.13 g, 0.27 mmol), Cs2CO3(0.18 g, 0.55 mmol), 및 Pd(dppf)Cl2·DCM(0.01 g, 0.01 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브에서 1시간 동안 120℃로 가열하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료(TLC) 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석하고 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기층을 물(5 mL) 및 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압하에 농축하여 조 화합물 터트-부틸(터트-부톡시카르보닐)(4-(6-클로로- 4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 2의 중간체 7)(0.12 g, 수율: 조 화합물)을 회백색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 832.97 m/z [M+H]+.
단계 4) 실시예 2의 화합물: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
DCM(1 mL, 8.4 vol) 중 터트-부틸 (터트-부톡시카르보닐)(4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 2의 중간체 7)(0.12 g, 0.144 mmol)의 교반 용액에 TFA(0.1mL, 0.84vol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온으로 가온되도록 하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료(TLC) 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 2의 화합물(0.015 g, 수율: 16.4%)을 백색 고체로 얻었다.1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.71-1.85(m, 5H), 1.94-2.02(m, 6H), 2.21(s, 6H), 2.54-2.55(s, 1H), 2.84(s, 1H), 2.81-2.8, 1H), 3.00(s, 1H), 3.06-3.09(m, 2H), 3.84(dd, J = 11.60, 5.60 Hz, 2H), 4.03(d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.11(d J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 및 5.33(s, 1H), 7.05(t, J = 9.20 Hz, 1H), 7.24(dd, J = 8.40, 5.60 Hz, 1H), 7.89(s, 2H) 8.29(t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.38(d, J = 1.20 Hz, 1H). MS(LC-MS) m/z 632.32 [M+H]+.
실시예 3의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000060
실시예 3: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
단계 1) 실시예 3의 중간체 3 : 1-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
DCM(10 mL) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 3의 중간체 1)(1.00 g, 3.02 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(1.17 g, 9.08 mmol)를 0℃에서 첨가한 다음, DCM(2 mL, 5.9 vol) 중 3-메틸피페리딘-3-올(실시예 3의 중간체 2)(0.34 g, 3.02 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응의 완료(TLC) 후, 반응 혼합물을 빙냉수(10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 디에틸 에테르로 연화처리(trituration)하여 1-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 3의 중간체 3)(0.65 g, 수율: 26.27%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.13(s, 3H), 1.59-1.70(m, 3H), 1.97-2.00(m, 1H), 3.18-3.24(m, 1H), 3.46(d, J = 13.26 Hz, 1H), 3.95(d, J = 13.26 Hz, 1H), 4.27(d, J = 13.01 Hz, 1H), 4.70(s, 1H), 8.29(s, 1H). MS(LC-MS): 408.41 m/z [M+H]+.
단계 2) 실시예 3의 중간체 5: 1-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
DMF(10 mL, 13.4 vol) 및 THF(10 mL, 13.4 vol)의 용매 혼합물 중 1-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 3의 중간체 3)(0.75 g, 1.84 mmol)의 교반 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올(실시예 3의 중간체 4)(0.63 g, 5.52 mmol), DABCO(0.28 g, 1.84 mmol) 및 Cs2CO3(1.8 g, 5.52 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응의 완료(TLC) 후, 반응 혼합물을 빙냉수(10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 ACN 세척하여 정제하여 1-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 3의 중간체 5)(0.6 g, 수율: 66.8%)를 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.11(s, 3H), 1.56-1.70(m, 6H), 1.91-1.98(m, 2H), 2.14-2.18(m, 1H), 2.36(s, 3H), 2.53-2.58(m, 1H), 2.93-2.96(m, 1H), 3.16-3.19(m, 1H), 3.37-3.40(m, 1H), 3.83(d, J = 13.51 Hz, 1H), 4.10-4.17(m, 2H), 4.34-4.39(m, 1H), 4.62(d, J = 2.40Hz, 1H), 8.16(s, 1H). MS(LC-MS): 487.68 m/z [M+H]+.
단계 3) 실시예 3의 화합물 : 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린 -4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
1,4-디옥산(4 mL, 13.4 vol) 및 물(1 mL, 3.3 vol)의 용매 혼합물 중 1-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 3의 중간체 5)(0.3 g, 0.61 mmol)의 교반 용액에 터트-부틸 (7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 3의 중간체 6)(0.36 g, 0.92 mmol), Cs2CO3(0.60 g, 1.85 mmol), Pd(dppf)Cl2·DCM(0.05 g, 0.061 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 켄칭하고 셀라이트 베드를 통해 여과하였다. EtOAc 층을 물(10 mL) 및 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 3의 화합물(0.04 g, 수율: 11.3%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.13(d, J = 5.75 Hz, 3H), 1.69-1.60(m, 6H), 1.92-1.96(m, 2H), 2.17(q, J = 8.76 Hz, 1H), 2.35(s, 3H), 2.55-2.58(m, 1H), 2.92-2.95(m, 1H), 3.23(m, 1H), 3.42-3.47(m, 1H), 3.82-3.88(m, 1H), 4.10-4.17(m, 2H), 4.34-4.39(m, 1H), 4.66(d, J = 9.20 Hz, 1H), 7.05(t, J = 8.63 Hz, 1H), 7.22-7. m, 1H), 7.93(brs, 2H), 8.05(d, J = 13.01 Hz, 1H). MS(LC-MS): 575.31 m/z [M+H]+.
실시예 4의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000061
실시예 4: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 4의 중간체 3: 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민의 제조
DCM(5.0 mL, 10 vol) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 4의 중간체 1)(0.5 g, 1.513 mmol)의 빙냉 용액에 DIPEA(0.8 mL, 4.53 mmol)를 첨가한 후 1-(아미노메틸)-N,N-디메틸사이클로부탄-1-아민(실시예 4의 중간체 2)(0.213 g, 1.66 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉수로 켄칭하고 DCM(30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 ACN 세척으로 정제하여 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 4의 중간체 3)(0.5 g, 78%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.64-1.73(m, 2H), 1.94-1.99(m, 4H), 2.19(s, 6H), 3.81(s, 2H), 8.62(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.81(brs, 1H). MS(LCMS): 421.51 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 4의 중간체 5: (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민의 제조
DMSO(5.0 mL, 10 vol) 중 7-브로모-2,6-디클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 4의 중간체 3)(0.5 g, 1.193 mmol)의 교반 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올(실시예 4의 중간체 4)(1.1 g, 9.56 mmol)을 첨가하고, 이어서 KF(1.03 g, 17.89 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 8시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고 EtOAc(50 mL)로 추출했다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 ACN 세척으로 정제하여 (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 4의 중간체 5)(0.3 g, 50%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.63-1.68(m, 5H), 1.89-1.98(m, 5H), 2.19(s, 6H), 2.36(s, 3H), 2.56-2.59(m, 2H), 2.92-2.95(m, 1H), 3.76-3.86(m, 2H), 4.19(dd, J = 10.4, 6.0 Hz, 1H), 4.35(dd, J = 10.4, 4.8 Hz, 1H), 8.34(d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.50(s, 1H). MS(LC-MS): 500.66 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 4의 화합물: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
1,4-디옥산(1.6 mL, 10 vol) 및 물(0.4 mL, 3 vol)의 용매 혼합물 중 (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 4의 중간체 5)(0.15 g, 0.3 mmol)의 교반 용액에 터트-부틸(7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 4의 중간체 6)(0.177 g, 0.449 mmol) 및 Cs2CO3(0.292 g, 0.898 mmol)를 첨가하고 아르곤으로 10분 동안 탈기하고, 이어서 실온에서 PdCl2(dppf)·DCM(0.024 g, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 100℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC 및 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과했다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 4의 화합물(0.019 g, 11%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, MeOD-d4) δ 1.79-1.89(m, 5H), 2.04-2.23(m, 5H), 2.35-2.42(m, 6H), 2.55(s, 3H), 2.86(brs, 1H), 3.09-3.14(m, 1H), 4.02(t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.47(t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.58(brs, 1H), 6.98(t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.20(q, J = 5.6Hz, 1H), 8.16(d, J = 1.6 Hz, 1H). MS(LC-MS): 588.38 m/z [M+H].
실시예 5의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000062
실시예 5: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 5의 중간체 1: 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린의 제조
SOCl2(25 mL, 50 vol) 중 7-브로모-6-클로로-8-플루오로퀴나졸린-4(3H)-온 실시예 5의 SM(0.50 g, 1.80 mmol)의 교반 용액에 DMF(0.015 mL, 0.18 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 18시간 동안 교반했다. 반응의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻고, 잔류물을 물(20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출했다. 합한 유기층을 염수 용액(20 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르(pet 에테르) 중 25% 에틸 아세테이트로 용출하여 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 5의 중간체 1)(0.37 g, 수율: 70%))을 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39(d, J = 1.61 Hz, 1H), 9.22(s, 1H). MS(LC-MS): 294.89 m/z [M-Boc+H].
단계 2) 실시예 5의 중간체 3: 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민의 제조
DCM(10 mL, 20 vol) 중 7-브로모-4,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 5 중간체 1)(0.50 g, 1.69 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(0.44 mL, 2.53 mmol) 및 1-(아미노메틸)-N,N-디메틸사이클로부탄-1-아민(0.26 g, 2.02 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(40 mL)로 켄칭하고 DCM(40 mL) 중 10% 메탄올로 추출하고, 분리된 유기층을 염수 용액(30 mL)으로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과하고 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 10% 메탄올로 용출하여 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 5의 중간체 3)(0.50 g, 수율: 76%)을 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.67(t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.98(t, J = 7.2 Hz, 4H), 2.23(brs, 6H), 3.88(d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.36(brs, 1H), 8.55(s, 1H), 8.60(d, J = 2.01 Hz, 1H). MS(LC-MS): 387.19 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 5의 중간체 5: 터트-부틸 (4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산과 물(4:1 mL)의 용매 혼합물에 7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로퀴나졸린-4-아민(실시예 5의 중간체 3(0.46 g, 1.18 mmol)의 교반 용액에 Na2CO3(0.38 g, 3.55 mmol) 및 터트-부틸 (7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 5의 중간체 4)(0.70 g, 1.78 mmol)를 실온에서 첨가하고 질소 하에 15분 동안 탈기시켰다. 여기에 Pd(PPh3)4(0.14 g, 0.12 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃로 가열하고 18시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(25 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 염수 용액(25 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 4% 메탄올로 용출하여 터트-부틸(4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 5의 중간체 5)(0.40 g, 수율: 59%)를 황색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 575.49 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 5의 화합물: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
DCM(5.0 mL 및 14 vol) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 5의 중간체 5)(0.36 g, 0.63 mmol)의 교반 용액에 TFA(0.96 mL, 12.5 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 36시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액(30 mL)으로 켄칭하고 DCM(2 x 30 mL) 중 10% 메탄올로 추출하고 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과하고 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 20% 메탄올로 용출하여 실시예 5의 화합물(0.04 g, 수율: 13%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.63-1.71(m, 2H), 1.90-2.05(m, 4H), 2.22(s, 6H), 3.89(t, J = 5.60 Hz, 2H), 7.06(dd, J = 9.20, 8.40 Hz, 1H), 7.28(dd, J = 8.80, 6.02 Hz, 1H), 7.91(s, 2H), 8.29(t, J = 6.40 Hz, 1H), 8.49(d, J = 1.21 Hz, 1H), 8.55(s, 1H). MS(LC-MS): 475.23 m/z [M+H].
실시예 6의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000063
실시예 6: 실시예 6: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)나프탈렌-2-올의 제조
단계 1) 실시예 6의 중간체 2: 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-2-올의 제조
1,4-디옥산(10 mL, 10 vol) 중 4-브로모나프탈렌-2-올(실시예 6의 중간체 1(1.0 g, 4.48 mmol)의 교반 용액에 KOAC(0.88 g, 8.965 mmol)를 첨가한 후 B2Pin2(1.7 g, 6.694 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 20분 동안 탈기시키고, 이어서 Pd(dppf)Cl2·DCM(0.366 g, 0.448 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 90℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석한 후, 물(50 mL)로 세척하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 5% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-2-올(실시예 6의 중간체 2)(0.3 g, 25%)을 갈색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.37(s, 12H), 7.23(d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.32(t, J = 1.2 Hz, 1H), 7.38(t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.58(d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.69(d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.48(d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.66(s, 1H). MS(LCMS): 271.36 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 6의 화합물: 4-(6-클로로-4-(((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)아미노)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)나프탈렌-2-올의 제조
1,4-디옥산(1.8 mL, 12 vol) 및 물(0.2 mL, 1 vol)의 용매 혼합물에 (S)-7-브로모-6-클로로-N-((1-(디메틸아미노)사이클로부틸)메틸)-8-플루오로-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-아민(실시예 4의 중간체 5)(0.15 g, 0.30 mmol)의 교반 용액에 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-2-올(실시예 6의 중간체 2)(0.122 g, 0.452 mmol) 및 Na2CO3(0.095 g, 0.896 mmol)을 첨가하고 아르곤으로 10분 동안 탈기시키고, 이어서 실온에서 Pd(PPh3)4(0.035 g, 0.030 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC 및 LCMS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 합한 유기층을 물(5 mL), 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4(0.05 g)로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 6의 화합물(0.038 g, 17%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, MeOD-d4): δ 1.80-1.88(m, 5H), 2.05-2.22(m, 5H), 2.32-2.36(m, 1H), 2.38(s, 6H), 2.54(s, 3H), 2.84(t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.08-3.13(m, 1H), 4.04(s, 2H), 4.47-4.49(m, 2H), 7.03(d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.19-7.21(m, 1H), 7.25(d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.38-7.42(m, 1H), 7.74(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.24(d, J = 1.6 Hz, 1H). MS(LC-MS): 564.61 m/z [M+H].
실시예 7의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000064
실시예 7: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
단계 1) 실시예 7의 중간체 1B: 2-(8-에티닐-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란의 제조
THF(10 mL, 10 vol) 중 트리이소프로필((6-(메톡시메톡시)-8-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-1-일)에티닐)실란(실시예 7의 중간체 1A)(1.00 g, 2.02 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 TBAF(1.00 g, 3.82 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후(TLC), 반응 혼합물을 빙냉수(10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출하였다. 분리된 유기층을 염수 용액(5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여 조 화합물 2-(8-에티닐-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(실시예 7의 중간체 1B)(0.8 g, 수율: 조 화합물)을 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3): δ 0.89(t, J = 7.20 Hz, 3H), 1.05(s, 3H), 1.23-1.29(m, 4H), 1.44(s, 6H), 3.02-3.06(m, 1H), 3.50-3.53(m, 2H), 5.30(t, J = 8.80 Hz, 1H), 7.34-7.44(m, 2H), 7.65-7.74(m, 1H).
단계 2) 실시예 7의 중간체 1: 2-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란의 제조
메탄올(10 mL, 12.5 vol)중 2-(8-에티닐-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(실시예 7의 중간체 1B)(0.8 g, 2.42 mmol)의 교반 용액에 10% Pd/C(0.2 g)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 기체 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후(TLC), 반응 혼합물을 셀라이트 베드를 통해 여과하고, 여액을 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 20% 에틸 아세테이트로 용출하여 2-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(실시예 7의 중간체 1)(0.6 g, 72.4%)을 담황색 액체로 얻었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3)은 합리적으로 순수(reasonably pure)했다. MS(LC-MS): 343.68 m/z [M+H]+.
단계 3) 실시예 7의 중간체 2: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린- 4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
2,4-디옥산(1.6 mL)과 물(0.4 mL)의 용매 혼합물(4:1 mL) 중 1-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(0.2 g, 0.411 mmol)의 교반 용액에 2-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란(실시예 7의 중간체 1)(0.21 g, 0.61 mmol), KotBu(0.23 g, 2.05 mmol) 및 Pd(pph3)4(0.047 g, 0.041 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석하고 셀라이트 베드를 통해 여과하였다. 유기층을 물(5 mL) 및 염수 용액(2 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 1-(6-클로로-7-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 7의 중간체 2)(0.03 g, 수율: 12%)을 회백색 고체로 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)는 합리적으로 순수(reasonably pure)했다. MS(LC-MS): 623.91 m/z [M+H]+.
단계 4) 실시예 7의 화합물: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
1,4-디옥산(1 mL, 16.6 vol) 중 1-(6-클로로-7-(8-에틸-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(실시예 7의 중간체 2)(0.06 g, 0.09 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 1,4-디옥산(1mL) 중 4M HCl을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후(TLC), 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 7의 화합물(0.006 g, 수율: 11%)을 백색 고체로 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.87-0.88(m, 3H), 1.16(d, J = 12.8 Hz, 3H), 1.23(s, 2H), 1.66-1.75(m, 6H), 2.07(s, 2H), 2.28-2.33(m, 2H), 3.10(s, 2H), 3.41(s, 2H), 3.89(t, J = 12.0 Hz, 1H), 4.04-4.10(m, 1H), 4.30(brs, 1H), 4.41(s, 1H), 4.71-4.80(m, 1H), 6.86(d, J = 2.63 Hz, 1H), 7.06(s, 1H), 7.12(d, J = 6.50 Hz, 1H), 7.28(d, J = 2.50 Hz, 1H), 7.37(t, J = 7.20 Hz, 1H), 7.67(d, J = 7.60 Hz, 1H), 8.11-8.18(m, 1H), 9.92(d, J = 3.20 Hz, 1H), 이성질체의 혼합물이 관찰된다. MS(LC-MS): 577.37 m/z [M+H]+.
실시예 8의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000065
실시예 8: 4-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
단계 1) 실시예 8의 중간체 3: 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(15 mL) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(1.50 g, 4.54 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(1.17 g, 9.08 mmol) 및 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 8의 중간체 2)(0.72 g, 4.31 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 4시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(25 mL)로 켄칭하고 DCM(100 mL)으로 추출하였다. 분리된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 20% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 8의 중간체 3의 화합물)(0.60 g, 수율: 31%)을 회백색 고체로 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.15(s, 3H), 3.55(d, J = 4.25 Hz, 2H), 3.63-3.69(m, 1H), 3.84(d, J=14.8 Hz, 1H), 3.86-3.93(m, 1H), 3.97-4.03(m, 1H), 4.16(d, J = 15.01 Hz, 1H), 4.26-4.32(m, 1H), 5.30(s, 1H), 8.81(d, J = 1.50 Hz, 1H). MS(LC-MS): 424.46 m/z [M+H]+.
단계 2) 실시예 8의 중간체 5: 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF(5 mL) 및 THF(5 mL)의 용매 혼합물 중 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 8의 중간체 3의 화합물)(0.50 g, 1.18 mmol) (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올(실시예 8의 중간체 4)(0.16 g, 1.42 mmol)의 교반 용액에 Cs2CO3(1.15 g, 3.55 mmol) 및 DABCO(0.13 g, 1.18 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(15 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 감압하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 디에틸 에테르(2 x 10 mL)로 세척하고 감압 하에 농축하여 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 8의 중간체 5의 화합물)(0.3 g, 수율: 50%)를 담황색 점성 액체로 얻었다.
MS(LC-MS): 503.66 m/z [M+H]+.
단계 3) 실시예 8의 중간체 7: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(3 mL) 및 물(1.5 mL)의 용매 혼합물 중 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 8의 중간체 5의 화합물)(0.15 g, 0.30 mmol)의 교반 용액에 실온에서 K3PO4(0.19 g, 0.89 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 N2 가스 하에서 10분 동안 탈기시켰다. 여기에 터트-부틸 (7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(0.14 g, 0.36 mmol) 및 루포스(Ruphos) Pd-G3(0.02 g, 0.03 mmol)을 실온에서 첨가하고, 다시 N2 가스 하에서 5분 동안 탈기시켰다. 반응 혼합물을 100℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(25 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 감압 하에 농축하여 조 화합물 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 8의 중간체 7의 화합물)(0.15 g, 수율: 조 화합물)를 담황색 점성 액체로 얻었다.
MS(LC-MS): 691.93 m/z [M+H]+.
단계 4) 실시예 8의 화합물: 4-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(3 mL, 20 vol) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸)-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 8의 중간체 7의 화합물)(0.15 g, 0.21 mmol)의 교반 용액에 TFA(0.3 mL)를 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화하고 DCM(3 x 25 mL) 중 10% 메탄올로 추출하였다. 결합된 유기물을 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 감압하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 8의 화합물(0.008 g, 수율: 6%)을 회백색 고체로 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.14(d, J = 2.8 Hz, 3H), 1.74-1.78(m, 3H), 2.03(brs, 1H), 2.51(s, 3H), 3.13-3.16(m, 1H), 3.55(s, 2H), 3.70-3.74(m, 2H), 3.83-4.02(m, 2H), 4.10-4.16(m, 2H), 4.12-4.32(m, 2H), 4.41(brs, 2H), 5.28(dd, J = 8.00, 5.50 Hz, 1H), 7.04-7.09(m, 1H), 7.21-7.28(m, 1H), 7.93(d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.53(d, J = 12.8 Hz, 1H). MS(LC-MS): 591.40 m/z [M+H]+.
실시예 9의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000066
실시예 9: 4-(아제판-1-일)-6-클로로-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)퀴나졸린의 제조
단계 1) 실시예 9의 중간체 1: 4-(아제판-1-일)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-퀴나졸린의 제조
디옥산 중 용해된 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로-퀴나졸린(실시예 9-SM, 300 mg, 1.0 eq), 아제판(0.10 mL, 1 eq), 및 DIPEA(0.32 mL, 2.0 eq)의 용액을 실온에서 4 시간동안 교반하였다. 반응 종결 후 반응 혼합물에 물을 첨가하고 EA로 추출하였다. 합한 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 필터 후 농축하여 4-(아제판-1-일)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-퀴나졸린(실시예 9의 중간체 1, 348 mg, 수율: 98%)을 얻었다.
단계 2) 실시예 9의 중간체 2: 4-(아제판-1-일)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]퀴나졸린의 제조
THF(8.85 mL) 및 DMF(8.85 mL) 중 4-(아제판-1-일)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-퀴나졸린(실시예 9의 중간체 1, 348 mg, 1.0 eq), [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올(0.32 mL, 3.0 eq), 1,4-디아자바이사이클로[2.2.2]옥탄(99 mg, 1.0 eq), 및 탄산세슘(865 mg, 3.0 eq)의 혼합물을 질소 하에 실온에서 23시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물에 물을 첨가하고 EA로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(brine)로 세척하고 황산마그네슘으로 건조, 필터 후 농축한 후, MPLC로 정제하여 4-(아제판-1-일)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]퀴나졸린(실시예 9의 중간체 2, 288 mg, 수율; 69%)을 얻었다.
단계 3) 실시예 9의 화합물: 4-(아제판-1-일)-6-클로로-7-(8-클로로-1-나프틸)-8-플루오로-2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]퀴나졸린의 제조
디옥산(3.34 mL) 및 물(0.84 mL) 중 4-(아제판-1-일)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]퀴나졸린(실시예 9의 중간체 2, 288 mg, 1.0 eq), 2-(8-클로로-1-나프틸)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(241 mg, 2.0 eq), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(48 mg, 0.1 eq), 및 칼륨 터트-부톡사이드(234 mg, 5.0 eq) 혼합물을 100℃에서 6시간동안 교반하였다. 반응 종결 후 반응 혼합물에 물을 첨가하고 EA로 추출하였다. 합한 유기층은 황산소듐으로 건조, 필터 후 농축하고, Prep-HPLC로 정제하여 실시예 9의 화합물(0.001 g, 수율: 4%)을 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 8.21(dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 8.11(dd, J = 8.3, 1.4 Hz, 1H), 7.99(d, J =1.6 Hz, 1H), 7.73(dd, J = 8.3, 7.1 Hz, 1H), 7.68 - 7.53(m, 3H), 7.50(dd, J = 7.1, 1.3 Hz, 1H), 4.39(dd, J = 10.9, 4.9 Hz, 1H), 4.20(dd, J = 10.9, 6.3 Hz, 1H), 3.94(pd, J = 6.9, 2.8 Hz, 4H), 3.00(s, 1H), 2.77 - 2.62(m, 1H), 2.41(s, 3H), 2.26(s, 1H), 1.92(d, J = 9.4 Hz, 5H), 1.77 - 1.52(m, 7H). LCMS(M+H)+ 553.00 순도 95(%)
실시예 10의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000067
실시예 10: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
단계 1) 실시예 10의 중간체 2: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-하이드록시-3-메틸피페리딘-1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트
1,4-디옥산 및 물(4:2, 6.0 mL)의 용매 혼합물에 1-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올(0.30 g, 0.57 mmol) 및 터트-부틸(7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 10 의 중간체 1)(0.334 g, 0.85 mmol)의 교반 용액에 Na2CO3(0.18 g, 1.69 mmol)을 실온에서 첨가하고 N2 가스 하에서 10분 동안 탈기시켰다. 여기에 Pd(PPh3)4(0.065 g, 0.057 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)를 세척 용매로 사용하여 셀라이트 패드를 통해 여과하여 여액을 얻은 후, 여액을 물(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 3-10% MeOH로 용출하여 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-하이드록시-3-메틸피페리딘-1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸- 2-일)카바메이트(실시예 10의 중간체 2)(0.27 g, 수율: 66%)를 담황색 점성 액체로 얻었다. MS(LC-MS): 719.49 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 10의 화합물: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-3-메틸피페리딘-3-올의 제조
DCM(2.5 mL, 10 vol) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R, 7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-하이드록시-3-메틸피페리딘-1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸 -2-일)카바메이트(실시예 10의 중간체 2)(0.25 g, 0.38 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 TFA(0.5 mL)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 농축하고 감압 하에 톨루엔(2 x 10 mL)과 공동 증류하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 10의 화합물(0.065 g, 수율: 28%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.14(d, J = 5.50 Hz, 3H), 1.60-1.81(m, 6H), 2.00-2.12(m, 4H), 2.83(q, J = 8.40 Hz, 1H), 3.01(s, 1H), 3.08(d, J = 8.25 Hz, 2H), 3.20-3.25(m, 1H), 3.44(dd, J = 13.01, 6.50 Hz, 1H), 3.85(dd, J = 12.88, 7.88 Hz, 1H), 3.97-4.01(m, 1H), 4.06-4.14(m, 2H), 4.67(d, J = 9.76 Hz, 1H), 5.21-5.34(m, 1H), 7.06(t, J = 8.63 Hz, 1H), 7.22-7.25(m, 1H), 7.93(d, J = 6.50Hz, 2H), 8.06(d, J = 12.76 Hz, 1H). MS(LC-MS): 619.37 m/z [M+H].
실시예 11의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000068
실시예 11: 1-(7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
단계 1) 실시예 11의 중간체 2: 4-(벤질옥시)-7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린의 제조
DCM(40 mL) 중 7-브로모-2,4-디클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린(2 g, 6.371 mmol)의 교반 용액에 BnOH(689 mg, 6.371 mmol)과 TEA(1.93 g, 19.113 mmol)을 첨가하고 아르곤 하에 상온에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(80 mL)을 넣어 희석시키고, DCM(3 x 20 mL)으로 유기층을 추출하였다. 얻은 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 석유 에테르 중 30% 에틸 아세테이트 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피로 정제하여 원하는 화합물 4-(벤질옥시)-7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린(2.1 g, 수율: 85%)을 흰색 고체로 얻었다. MS: m/z = 386.9(M+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 11의 중간체 3: 4-(벤질옥시)-7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린의 제조
1,4-디옥산(10 mL) 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린(1.6 g, 4.15 mmol)과 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(660 mg, 4.15 mmol)의 교반 용액에 DIEA(1.08 g, 8.30 mmol)를 첨가하고 아르곤 가스 하에 100℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 = 3:1 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 4-(벤질옥시)-7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(650 mg, 수율: 35%)을 얻었다. MS: m/z = 510.0(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 11의 중간체 4: 4-(벤질옥시)-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2- 플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린의 제조
톨루엔(6 mL)과 물(1 mL)의 혼합 용액 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(250 mg, 0.49 mmol)과 2-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(284 mg, 0.79 mmol)의 교반 용액에 Cs2CO3(474 mg, 1.47 mg), Pd2(dba) 2(45 mg, 0.049 mmol), Anthphos(35 mg, 0.098 mmol)을 첨가하고 아르곤 가스 하에 100℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물을 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 4-(벤질옥시)-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2- 플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(189 mg, 수율: 60%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 662.4(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 11의 중간체 5: 7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진- 7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올의 제조
이소프로필알코올(1 mL)과 에틸 아세테이트(1 mL)의 혼합 용액 중 4-(벤질옥시)-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H -피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(150 mg, 0.23 mmol)의 교반 용액에 Pd/C(30 mg)을 첨가하고 수소 가스 하에 상온에서 20분 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 원하는 화합물 7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올(113 mg, 수율: 86%)을 추가 정제 과정 없이 얻었다. MS: m/z = 572.3(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 11의 중간체 6: 1-(7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H -피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
아세토니트릴(3 mL) 중 7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올(110 mg, 0.19 mmol), 아제판-3-온(34mg, 0.23 mmol), pyBOP(296 mg, 0.57 mmol) 및 DIEA(74 mg, 0.57 mmol)를 첨가하고 아르곤 가스 하에 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물을 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 = 1:2 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 1-(7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H -피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(106 mg, 수율: 80%)을 얻었다. MS: m/z = 667.4(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 11의 화합물: 1-(7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
1,4 디옥산 중 4 M 염산 혼합 용액(1 mL) 중 1-(7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진- 7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(106 mg)의 교반 용액을 아르곤 가스 하에 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물을 아세토니트릴/ 50% 물(0.1%포름산) 용출 조건의 C18 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 실시예 11의 화합물(8.53 mg, 8.61%)을 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 10.07 (brs, 1H), 8.28 (s, 0.32 H, FA), 7.86 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 9.1, 6.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.32 (m, 2H), 7.01 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 54.7 Hz, 1H), 4.57 - 4.43 (m, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 2H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 3.14 - 2.96 (m, 4H), 2.87 - 2.77 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 1H), 2.12 - 1.70 (m, 12H), 0.76 (t, J = 7.3 Hz, 3H). MS: m/z = 623.4(M+H+, ESI+)
실시예 12의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000069
실시예 12: 4-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
단계 1) 실시예 12의 중간체 3: 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(10 mL, 10 vol) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(실시예 12의 중간체 1)(1.00 g, 3.05 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(1.18 g, 9.15 mmol)를 0 ℃에서 첨가한 후, 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 12의 중간체 2)(0.38 g, 2.90 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고 물(30 mL)로 세척하고, 분리된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 60% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 12의 중간체 3)을 담황색 고체로 얻었다(0.70 g, 수율: 54%). MS(LC-MS): 524.11 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 12의 중간체 5: 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6 -메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF 및 THF(1:1, 2.0 mL)의 용매 혼합물에 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 12의 중간체 3)(0.30 g, 0.71 mmol)의 교반 용액에 Cs2CO3(0.70 g, 2.14 mmol) 및 DABCO(0.08 g, 0.71 mmol)를 실온에서 첨가하고, 이어서 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(실시예 12의 중간체 4)(0.14 g, 0.86 mmol)을 실온에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(25 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하고, 분리된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 30% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 12의 중간체 5)(0.30 g, 수율: 77%)을 담황색 점성 액체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.13(s, 3H), 1.73-1.88(m, 3H), 1.99-2.04(m, 2H), 2.09-2.19(m, 1H), 2.79-2.85(m, 1H), 3.00-3.11(m, 3H), 3.53(d, J = 2.75 Hz, 2H), 3.61-3.67(m, 1H), 3.80(d, J = 14.76 Hz, 1H), 3.87-4.12(m, 5H), 4.21-4.27(m, 1H), 5.20-5.35(m, 2H), 8.65(d, J = 1.50 Hz, 1H). MS(LC-MS): 547.39 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 12의 중간체 7: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산 및 물(2:1, 6.0 mL)의 용매 혼합물에 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 12의 중간체 5)(0.30 g, 0.55 mmol) 및 터트-부틸(7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 12의 중간체 6)(0.26 g, 0.66 mmol)의 교반 용액에 Na2CO3(0.12 g, 1.09 mmol)을 실온에서 첨가하고 N2 가스 하에서 15분 동안 탈기시켰다. 여기에 Pd(PPh3)4(0.063 g, 0.05 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(5 mL)를 세척 용매로 사용하여 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 물(25 mL)로 세척하고, 분리된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 농축하였다. 조 화합물 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 12의 중간체 7)(0.13 g, 조 화합물)를 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 735.75 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 12의 화합물: 4-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올
DCM(3.0 mL, 23 vol) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2)-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(실시예 12의 중간체 7)(0.13 g, 0.18 mmol)의 교반 용액에 TFA(0.1 mL)를 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻었고, 잔류물을 톨루엔과 함께 공증류(co-distilled)하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 12의 화합물(0.02 g, 수율: 17%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 1.14(d, J = 3.50 Hz, 3H), 1.73-1.86(m, 3H), 1.99-2.12(m, 3H), 2.82(dd, J = 14.0, 8.00 Hz, 1H), 3.01(s, 1H), 3.07~3.11(m, 2H), 3.55(brs, 3H), 3.65~3.72(m, 1H), 3.85(dd, J = 14.63, 11.38 Hz, 1H), 3.91-3.96(m, 1H), 3.98-4.02(m, 1H), 4.06-4.17(m, 2H), 4.20-4.29(m, 1H), 5.20-5.35(m, 2H), 7.03-7.08(m, 1H), 7.21-7.25(m, 1H), 7.93(d, J = 7.25 Hz, 2H), 8.51(d, J = 12.01 Hz, 1H). MS(LC-MS): 635.30 m/z [M+H].
실시예 13의 합성 반응식
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실시예 13: 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
단계 1) 실시예 13의 중간체 4: 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4(1H)-온의 제조
DMF(48 mL, 10 vol) 중 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-티옥소-2,3-디하이드로퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 1의 중간체 3)(4.80 g, 15.5 mmol)의 교반 용액에 K2CO3(1.50 g, 10.9 mmol)을 첨가한 후, 이어서 EtI(0.87 mL, 10.9 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(30 mL)로 켄칭한 다음, 형성된 고체를 여과하여 여과물을 얻고, 여과물을 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출했다. 합친 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 13의 중간체 4)(3.20 g, 조 화합물)을 담갈색 점성 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 337.10 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 13의 중간체 5: 7-브로모-4,6-디클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린의 제조
POCl3(27 mL, 10 vol) 중 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4(1H)-온(실시예 13의 중간체 4)(2.70 g, 8.01 mmol)의 교반 용액에 실온에서 DIPEA(2.7 mL, 1 vol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃로 가열하고 4시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 NaHCO3 용액(50 mL)으로 켄칭하고 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 3% MeOH로 용출하여 7-브로모-4,6-디클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린(실시예 13의 중간체 5)(1.50 g, 53%)을 연한 황색 고체로 얻었다. 화합물은 추가 분석 없이 다음 단계에서 그대로 사용되었다.
단계 3) 실시예 13의 중간체 7: 4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(5.0 mL, 10 vol) 중 7-브로모-4,6-디클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린(실시예 13의 중간체 5)(0.50g, 1.41mmol) 및 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 6)(3.50mL, 19.7 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(3.50 mL, 19.7 mmol) 및 BOP-Cl(0.54 g, 2.12 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC 및 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(25 mL)로 희석하고 DCM(2 x 50 mL)으로 추출하고, 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중의 40% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 7)(0.30 g, 수율: 47%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.31(s, 3H), 1.43(t, J = 7.38 Hz, 3H), 3.23(q, J = 7.50 Hz, 2H), 3.50-3.55(m, 2H), 3.65 -3.74(m, 2H), 3.83-3.93(m, 2H), 4.12(q, J = 7.25 Hz, 1H), 4.24(d, J = 15.01 Hz, 1H), 5.00(s, 1H), 8.05(d, J = 2.00 Hz, 1H). MS(LC-MS): 450.20 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 13의 중간체 9: 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1 ,4-옥사제판-6-올의 제조
1,4-디옥산 및 H2O(2.0 mL, 10 vol)의 혼합물에 4-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 7)(0.20 g, 0.44 mmol) 및 2-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(실시예 13의 중간체 8)(0.197 g, 0.53 mmol)의 교반 용액에 KOtBu(0.15 g, 1.34 mmol)를 첨가했다. 실온에서 N2 가스로 15분 동안 탈기시켰다. 여기에 Pd(PPh3)4(0.051 g, 0.04 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃로 가열하고 16시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 35% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 9)(0.14 g, 수율: 53%)을 연한 황색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 604.31 m/z [M+H].
단계 5) 실시예 13의 중간체 10: 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1 ,4-옥사제판-6-올의 제조
ACN 및 H2O의 혼합물(3:1, 1.4 mL, 10 vol) 중 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 9)(0.14 g, 0.23 mmol)의 교반 용액에 옥손(0.712 g, 2.32 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 두고 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(15 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축하여 조 화합물 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 10)(0.13 g, 조 화합물)을 연황색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 636.32 m/z [M+H].
단계 6) 실시예 13의 중간체 12: 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
THF(2.0 mL, 13 vol) 중 ((2R)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(실시예 13의 중간체 11)(0.045 g, 0.28 mmol)의 교반 용액에 NaH(14.2 g, 0.59 mmol)를 0℃에서 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 여기에 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 10)(0.15 g, 0.24 mmol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 화합물 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 12)(0.13 g, 조 화합물)를 갈색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LCMS): 701.43 m/z [M+H].
단계 7) 실시예 13의 화합물: 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
1,4-디옥산(2.0 mL, 15 vol) 중 4-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 13의 중간체 12)(0.13 g, 0.18 mmol)의 교반 용액에 4M HCl을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC로 정제하여 실시예 13의 화합물(0.015 g, 수율: 13%)을 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 0.74(q, J = 7.50 Hz, 3H), 1.13-1.16(m, 3H), 1.73-1.88(m, 3H), 1.97-2.26(m, 4H), 2.53-2.60(m, 1H), 2.82(q, J = 6.00 Hz, 1H), 300-3.09(m, 3H), 3.56(d, J = 2.50 Hz, 2H), 3.67-3.91(m, 2H), 3.95-4.04(m, 3H), 4.09-4.32(m, 3H), 5.20-5.34(m, 2H), 6.91(d, J = 2.50 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.77(dd, J = 9.01, 6.00 Hz, 1H), 8.56-8.61(m, 1H), 9.95(s, 1H). MS(LC-MS): 657.32 m/z [M+H]. 참고: Prep-HPLC에 의해 실시예 13a, 실시예 13b와 실시예 13c가 분리되었다.
실시예 13a: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.75(t, J = 7.38 Hz, 3H), 1.13(s, 3H), 1.73-1.85(m, 3H), 2.00-2.13(m, 3H), 2.21- 2.28(m, 1H), 2.54-2.60(m, 1H), 2.81(q, J = 6.00 Hz, 1H), 3.01-3.09(m, 3H), 3.56(d, J = 1.00 Hz, 2H), 3.72 -3.78(m, 1H), 3.92-4.02(m, 4H), 4.08-4.13(m, 2H), 4.23-4.30(m, 1H), 5.20-5.34(m, 2H), 6.90(d, J = 1.50 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.77(dd, J = 9.26, 6.00 Hz, 1H), 8.56(s, 1H), 9.96(s, 1H). MS(LC-MS): 657.40 m/z [M+H].
실시예 13b: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.72(t, J = 7.38 Hz, 3H), 1.15(s, 3H), 1.73-1.86(m, 3H), 1.96-2.05(m, 2H), 2.10- 2.22(m, 2H), 2.53(brs, 1H), 2.80(q, J = 6.00H z, 1H), 3.00-3.10(m, 3H), 3.56(d, J = 2.50 Hz, 2H), 3.66-3.71(m, 1H), 3.81(d, J = 14.76 Hz, 1H), 3.93-4.04(m, 3H), 4.08-4.12(m, 1H), 4.20(d, J = 14.76 Hz, 1H), 4.27- 4.33(m, 1H), 5.18-5.32(m, 2H), 6.90(d, J = 2.50 Hz, 1H), 7.31-7.36(m, 2H), 7.76(dd, J = 9.26, 6.00Hz, 1H), 8.59(s, 1H), 9.40-10.45(m, 1H). MS(LC-MS): 657.40 m/z [M+H].
실시예 13c: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.73(t, J = 7.38 Hz, 3H), 1.16(s, 3H), 1.72-1.85(m, 3H), 1.98-2.08(m, 2H), 2.10- 2.22(m, 2H), 2.53-2.55(m, 1H), 2.82(q, J = 6.00 Hz, 1H), 3.00(s, 1H), 3.06-3.10(m, 2H), 3.56(d, J = 2.75 Hz, 2H), 3.66~3.73(m, 1H), 3.81(d, J = 15.01 Hz, 1H), 3.93~4.02(m, 3H), 4.10~4.22(m, 2H), 4.28~4.34(m, 1H), 5.20-5.34(m, 2H), 6.91(d, J = 2.75 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.77(dd, J = 9.13, 6.13 Hz, 1H), 8.61(s, 1H), 9.95(s, 1H). MS(LC-MS): 657.40 m/z [M+H].
실시예 15의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000071
실시예 15: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)(메틸)아미노)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-5-에틸-6-플루오로나프탈렌-2-올의 제조
단계 1) 실시예 15의 중간체 1: 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)퀴나졸린-4-아민의 제조
DCM(12 mL, 20 vol) 중 7-브로모-4,6-디클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린(실시예 13의 중간체 5)(0.60 g, 1.70 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(0.90 mL, 5.10 mmol)를 0℃에서 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 여기에 (1S,2S)-2-플루오로사이클로프로판-1-아민(0.38 g, 3.40 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃로 가열하고 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 80 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축하고 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메시) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트로 용출하여 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 1)(0.48 g, 수율: 71%)을 담황색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 393.99 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 15의 중간체 2: 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민의 제조
DMF(9.0 mL, 20 vol)) 중 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 1)(0.45 g, 1.14 mmol)의 교반 용액에 NaH(0.09 g, 2.29 mmol)를 -10℃에서 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 여기에 -10℃에서 MeI(0.08 mL, 1.37 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(25 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하고, 합친 유기층을 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 감압 하에서 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 5% 에틸 아세테이트를 용리액으로 사용하여 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 2)(0.25 g, 수율: 54%)를 갈색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 407.97 m/z [M+H].
단계 3) 단계 1) 실시예 15의 중간체 3: 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민의 제조
1,4-디옥산 및 물(3:1, 10 mL)의 용매 혼합물에 7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 2)(0.25 g, 0.61 mmol) 및 2-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(0.330 g, 0.90 mmol)의 교반 용액에 실온에서 KOtBu(0.20 g, 1.84 mmol)을 첨가하고 N2 하에서 5분 동안 탈기시켰다. 여기에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(0.10 g, 0.09 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃로 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 용액(15 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트로 용출하여 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 3)(0.12 g, 수율: 35%)을 갈색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 562.19 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 15의 중간체 4: 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민의 제조
ACN 및 H-2O의 용매 혼합물(2:1, 14.4 mL) 중 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 3)(0.12 g, 0.20 mmol)의 교반 용액에 옥손(0.14 g, 0.44 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켜 잔류물을 얻었고, 잔류물을 물(15 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 15 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 증발시켜 조 화합물 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 4)(0.12 g, 조 화합물)을 담황색 고체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LC-MS): 594.36 m/z [M+H].
단계 5) 실시예 15의 중간체 5: 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-N-메틸퀴나졸린-4-아민의 제조
DMF(2.0 mL, 20 vol) 중 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(0.032 g, 0.20 mmol)의 교반 용액에 NaH(0.013 g, 0.34 mmol)를 -10℃에서 첨가하고 20분 동안 교반하였다. 여기에 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 4)(0.10 g, 0.17 mmol)를 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여액을 여과하였다. 감압 하에 농축하여 조 화합물 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 5)(0.10 g, 조 화합물) 담황색 점성 액체로 얻었다. 조 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다. MS(LCMS): 659.28 m/z [M+H].
단계 6) 실시예 15의 화합물 제조: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)(메틸)아미노)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-5-에틸-6-플루오로나프탈렌-2-올의 제조
DCM(2.0 mL, 20 vol) 중 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-N-((1S,2S)-2-플루오로사이클로프로필)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-N-메틸퀴나졸린-4-아민(실시예 15의 중간체 3)(0.10 g, 0.15 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 1,4-디옥산(0.2 mL) 중 4M HCl을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 반응의 진행을 TLC로 모니터링하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 화합물을 얻었다. 미정제물을 분취용 HPLC로 정제하여 실시예 15a(0.005 g, 수율: 5%)를 회백색 고체로 얻고, 실시예 15b(0.004 g, 수율: 4%)를 회백색 고체로 얻었다.
실시예 15a: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.74(t, J = 7.26 Hz, 3H), 0.83-0.87(m, 1H), 1.13-1.20(m, 1H), 1.47-1.68(m, 2H), 1.75-1.87(m, 2H), 1.91-2.12(m, 3H), 2.18-2.28(m, 1H), 2.82(q, J = 6.40 Hz, 1H), 2.98-3.12(m, 3H), 3.23- 3.25(m, 3H), 3.99(d, J = 10.40 Hz, 1H), 4.03-4.12(m, 2H), 4.79-4.98(m, 1H), 5.20-5.33(m, 1H), 6.94(d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.78(dd, J = 8.80, 6.00 Hz, 1H), 8.43(s, 1H), 9.94(s, 1H). MS(LC-MS): 615.30 m/z [M+H].
실시예 15b: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.75(t, J = 7.26 Hz, 3H), 0.84-0.87(m, 1H), 1.45-1.61(m, 2H), 1.71-1.86(m, 3H), 1.95-2.07(m, 2H), 2.08-2.16(m, 1H), 2.23-2.30(m, 1H), 2.82(q, J = 6.40 Hz, 1H), 3.00(s, 1H), 3.06-3.12(m, 2H), 3.22(s, 3H), 3.90-4.11(m, 3H), 4.64-4.84(m, 1H), 5.20-5.33(m, 1H), 6.94(d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.77(dd, J = 9.20, 6.00 Hz, 1H), 8.42(s, 1H), 9.99(s, 1H). MS(LC-MS): 615.30 m/z [M+H].
실시예 16의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000072
실시예 16: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
단계 1) 실시예 16의 SM-2: 아제판-3-온 염산염의 제조
DCM(10 mL) 중 터트-부틸 3-옥소아제판-1-카르복실레이트(1.0 g, 4.69 mmol)의 용액에 4 M HCl/디옥산(5.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 3시간 동안. 용매를 감압 하에 제거하여 원하는 생성물인 아제판-3-온 염산염(600 mg, 수율: 86%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z =114.1(M+H+, ESI+). 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 2) 실시예 16의 SM-4: 4-(벤질옥시)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린의 제조
DCM(10 mL) 중 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(1.36 g, 4.12 mmol)의 혼합물에 TEA(1.14 mL, 8.23 mmol) 및 BnOH(0.43 mL, 4.12 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. N2 하에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100 mL)로 희석하고 용액을 DCM(40 mL x 3)으로 추출했다. 유기 상을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축 건조시켜 황색 고체를 얻었다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르로 용출하여 목적 생성물 4-(벤질옥시)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린(1.39 g, 수율: 84.2%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z =402.9(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 16의 SM-5: 4-(벤질옥시)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린의 제조
디옥산(10 mL) 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린(1.29 g, 3.23 mmol) 및 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(1.03 g, 6.48 mmol)의 혼합물 에 DIEA(1.06 mL, 6.45 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시켰고 침전물이 형성되었다. 혼합물을 여과하고 필터 케이크(filter cake )를 MTBE(10 mL x 2)로 세척하고, 진공에서 건조하여 원하는 생성물인 4-(벤질옥시)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(501 mg, 수율: 29.7%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 525.9(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 16의 중간체 1: 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
7 mL의 디옥산에 용해된 4-(벤질옥시)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린( 180 mg, 0.34 mmol), 터트-부틸 (7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(271 mg, 0.69 mmol), K3PO4(219 mg, 1.03 mmol), KF(40 mg, 0.69 mmol) 및 DPEphos-PdCl2(49 mg, 0.068 mmol)의 혼합물을 N2로 3회 퍼징하고, 105℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석하고 용액을 DCM(40 mL x 3)으로 추출했다. 유기 상을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축 건조시켜 황색 오일을 얻었다. 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(177 mg, 수율: 72.5%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 713.3(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 16의 중간체 2: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
EtOAc/IPA = 1:1(6 mL) 중 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(177 mg, 0.25 mmol)의 혼합물에 Pd/C(36 mg, 60%)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2(15 psi)에서 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이로 여과하고 여액을 수집하고 진공에서 농축 건조하여 원하는 생성물인 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(109 mg, 조 생성물)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 622.2(M+H+, ESI+). 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 6) 실시예 16의 중간체 3: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판- 1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
ACN/THF=2:3(10 mL) 중 터트-(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(110 mg, 0.18 mmol) 및 아제판-3-온 염산염(31.4 mg, 0.21 mmol) mL)의 용액에 PyBop(277 mg, 0.53 mmol) 및 DIEA(111 uL, 0.67 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석하고 용액을 DCM(40 mL x 3)으로 추출했다. 유기 상을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na-SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축 건조시켜 황색 오일을 얻었다. 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:3으로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2 -플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판-1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(150 mg, 조 생성물)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 716.4(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 16의 화합물: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온 제조
HCl/디옥산(6 mL) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판-1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(122 mg, 0.17 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축 건조시켜 황색 오일을 얻었다. 황색 오일을 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: XBridge XBridge C18, 19*250 mm, 10 um; Moblie 상 A: 10 mmol NH4HCO3/H2O, B:ACN, 유속: 20 mL/분; 구배: 50%~60%; 머무름 시간: 15분 중 8-9분)을 통해 원하는 생성물인 실시예 16의 화합물(2.72 mg, 수율: 2.6%)을 백색 고체로 얻었다.
MS: m/z = 617.3(M+H+, ESI+)
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.01(s, 1H), 7.92(s, 2H), 7.27~7.20(m, 1H), 7.11~7.03(m, 1H), 5.27(d, J = 52.6 4.53~4.46(m, 2H), 4.18~3.98(m, 4H), 3.11~3.00(m, 4H), 2.88~2.77(m, 2H), 2.11~1.93(m, 5H), 1.88 - 1.70(m, 5H).
실시예 17의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000073
실시예 17: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
단계 1) 실시예 17의 중간체 3: 1-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
DCM(10 mL, 20 vol) 중 7-브로모-4,6-디클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린(실시예 17의 중간체 1)(0.50 g, 1.40 mmol)의 용액에 아제판-3-온(실시예 17의 중간체 2)(0.16 g, 1.40 mmol)과 DIPEA(1.46 mL, 8.42 mmol)를 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 50℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 진행을 TLC와 LC-MS로 확인하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석하고 DCM(2 x 30 mL)로 추출하여 얻은 유기층을 염수(30 mL)로 세척하였다. 이 후 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 석유 에테르 중 20% 에틸 아세테이트를 용출액으로 사용한 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 1-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 3)(0.53 mg, 수율: 87%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, MeOD) δ 1.37(t, J = 7.26 Hz, 3H), 1.80-1.87(m, 2H), 1.96-2.02(m, 2H), 2.52-2.55(m, 2H), 3.10-3.16(m, 2H), 4.15-4.18(m, 2H), 4.47(s, 2H), 8.08(d, J = 2.00 Hz, 1H). MS(LC-MS): 432.13 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 17의 중간체 5: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
1,4-디옥산(4 mL)과 물(1 mL)의 혼합 용액 중 1-(7-브로모-6-클로로-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 3)(0.20 g, 0.46 mmol)의 교반 용액에 2-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란(실시예 17의 중간체 4)(0.20 g, 0.55 mmol), K3PO4(0.29 g, 1.39 mmol)을 상온에서 첨가하고 아르곤 가스로 15분 동안 탈기 시켰다. 반응 혼합물에 Ruphos Pd G3(0.04 g, 0.05 mmol)를 첨가하고 밀봉하여 100℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 진행은 LC-MS를 통해 확인하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 물(30mL)을 이용하여 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)를 이용해 추출하였다. 추출한 유기층을 염수(30mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 석유 에테르 중 16% 에틸 아세테이트를 용출액으로 사용한 실리카겔(100-200 메쉬) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물인 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 5)(0.05 g, 수율: 18%)을 황색 고체로 얻었다.
단계 3) 실시예 17의 중간체 6: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
아세토니트릴(4 mL)과 물(1 mL)의 혼합 용액 중 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸티오)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 5)(0.10 g, 0.17 mmol)의 교반 용액에 옥손(0.42 g, 1.36 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하여 18 시간 동안 교반하였다. 반응 진행은 TLC와 LC-MS로 확인하였다. 반응 완료된 후, 반응 혼합물은 물(20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 25 mL)로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(25 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물 실시예 17의 중간체 6: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 6)(0.10 g)을 얻었다. 얻은 조 화합물은 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS(LC-MS): 618.21 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 17의 중간체 8: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
톨루엔(2.0 mL, 23 vol) 중 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(실시예 17의 중간체 7)(0.03 g, 0.17 mmol)의 교반용액에 NaOtBu((0.016 g, 0.17 mmol)을 0℃에서 첨가하고 10분간 교반하였다. 이 후, 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(에틸술포닐)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 6)(0.085 g, 0.14 mmol)을 0℃에서 첨가하고 상온으로 가온하여 1시간 동안 교반하였다. 반응 진행은 TLC와 LC-MS로 확인하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물은 빙냉수(30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(2 x 30 mL)로 추출하였다. 얻은 유기층은 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 8)(0.11 g)을 얻었다. 얻은 조 화합물은 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS(LCMS): 683.36 m/z [M+H].
단계 5) 실시예 17의 화합물: 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
DCM(1.0 mL, 9 vol) 중 1-(6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H- 피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(실시예 17의 중간체 8)(0.11 g, 0.16 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산 중 4M 염산 용액(0.2 mL)을 0℃에서 첨가하고 30 분 동안 교반하였다. 반응 진행은 TLC를 통해 확인하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 Prep-HPLC((Shimadzu, 컬럼: X-Bridge 19X150 mm, 5 μm; 이동상 A: 0.1% FA/H2O, B: ACN; 유속: 19 ml/min) 및 SFC(prep SFC-150, 컬럼: Cellulose-SC(250 X 30 X 5 ㎛), %CO2: 60%, %공용매: 40%, IPA 중 0.5% MeONH3, 유속: 100 g/min) 정제하여 실시예 17a(0.0025 g, 수율: 2%), 실시예 17b(0.0034 g, 수율: 3%)를 얻었다.
실시예 17a: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.71-0.76(m, 3H), 1.75-1.83(m, 4H), 1.97-2.07(m, 4H), 2.10-2.29(m, 3H), 2.81(q, J = 8.00 Hz, 1H), 2.99-3.02(m, 1H), 3.05-3.10(m, 1H), 4.00-4.10(m, 2H), 4.14-4.20(m, 1H), 4.36-4.58(m, 3H), 5.20-5.33(m, 1H), 6.86-6.94(m, 1H), 7.32-7.38(m, 2H), 7.78(dd, J = 9.01, 6.00 Hz, 1H), 8.05-8.06(m, 1H), 9.98(s, 1H), 4 Protons are merged in solvent peak. MS(LC-MS): 639.32 m/z [M+H].
실시예 17b: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 0.74(t, J = 7.38 Hz, 3H), 1.75-1.87(m, 5H), 1.96-2.06(m, 4H), 2.10-2.12(m, 1H), 2.15-2.27(m, 1H), 2.49(brs, 4H), 2.81(q, J = 6.40 Hz, 1H), 2.99-3.10(m, 2H), 3.98-4.20(m, 4H), 4.47-4.58(m, 2H), 5.20-5.33(m, 1H), 6.91(d, J = 2.50 Hz, 1H), 7.33-7.38(m, 2H), 7.78(dd, J = 9.01, 6.00 Hz, 1H), 8.06(d, J = 1.00 Hz, 1H), 9.97(brs, 1H). MS(LC-MS): 639.28 m/z [M+H].
실시예 18의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000074
실시예 18: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(3-플루오로아제판-1-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-5-에틸-6-플루오로나프탈렌-2-올의 제조
단계 1) 실시예 18의 SM-2의 제조: 터트-부틸 3-하이드록시아제판-1-카르복실레이트
MeOH(10 mL) 중의 터트-부틸 3-옥소아제판-1-카르복실레이트(1.0 g, 4.69 mmol)의 용액에 NaBH4(264.81 mg, 7.03 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃ 내지 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸 3-하이드록시아제판-1-카르복실레이트(900 mg, 수율: 90%)를 무색 오일로 얻었다. MS: m/z = 216.2(M+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 18의 SM-3의 제조: 터트-부틸 3-플루오로아제판-1-카르복실레이트
DCM(5 mL) 중 터트-부틸 3-하이드록시아제판-1-카르복실레이트(500mg, 2.32mmol)의 용액에 DAST(748 mmg, 4.64 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸 3-플루오로아제판-1-카르복실레이트(438 mg, 수율: 90%)를 황색 오일로 얻었다. MS: m/z = 162.0(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 18의 SM-4의 제조: 3-플루오로아제판 염산염
DCM(4 mL) 중 터트-부틸 3-플루오로아제판-1-카르복실레이트(500 mg, 2.31 mmol)의 용액에 4M HCl/디옥산(4 mL, 16 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 원하는 생성물인 3-플루오로아제판 염산염(285 mg, 수율: 81%)을 무색 오일로 얻었다. MS: m/z = 118.1(M+H+, ESI+). 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 4) 실시예 18의 중간체 2의 제조: 4-(벤질옥시)-6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로 -1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린
디옥산/H2O(10 mL/1.5 mL) 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(300 mg, 0.57 mmol) 및 2-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란(329 mg, 0.91 mmol)의 용액에 Cs2CO3(555 mg, 1.71 mmol), Pd2(dba)3(52 mg, 0.057 mmol) 및 Antphos(42 mg, 0.114 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 60℃에서 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2:1로 용출하여 원하는 생성물인 4-(벤질옥시)-6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(170 mg, 수율: 50%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 678.4(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 18의 중간체 3의 제조: 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올
에틸 아세테이트/IPA=1:1(8 mL) 중 4-(벤질옥시)-6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(160 mg, 0.24 mmol)의 혼합물에 Pd/C(32 mg, 60%)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 H2(15psi) 하에서 15분 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 셀라이트로 여과하고, 여액을 진공에서 농축 건조하여 원하는 생성물인 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올(160 mg, 조 생성물)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 588.3(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 18의 중간체 4의 제조: 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-4-(3-플루오로아제판-1-일)-2-(((2R, 7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린
ACN(5 mL) 중 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H -피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-올(140 mg, 0.24 mmol) 및 3-플루오로아제판 염산염(44 mg, 0.29 mmol)의 용액에 PyBop(372 mg, 0.71 mmol) 및 DIEA(0.15 mL, 0.91 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석하고 용액을 DCM(40 mL x 3)으로 추출했다. 유기 상을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축 건조시켜 황색 오일을 얻었다. 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:2로 용출하여 원하는 생성물인 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-4-(3-플루오로아제판-1-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(70 mg, 조 생성물)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 686.5(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 18의 화합물 제조: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(3-플루오로아제판-1-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-5-에틸-6-플루오로나프탈렌-2-올
4 M HCl/디옥산/ACN=1:1(2 mL) 중 6-클로로-7-(8-에틸-7-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-8-플루오로-4-(3-플루오로아제판-1-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(60 mg, 0.087 mmol)의 혼합물을 실온에서 0.5 h 동안 교반시켰다. 반응물을 진공에서 농축 건조시켜 황색 고체를 얻었다. 황색 고체를 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFireSunfire C18, 19*250 mm, 10um; Moblie 상 A: 0.1% FA/H2O, B: ACN, 유속:20 mL/분, 구배: 20%~30%)로 정제하여 실시예 18의 화합물(5.38 mg, 수율: 9.6%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 643.40(M+H+, ESI+)
실시예 20의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000075
실시예 20: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로헥사하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
단계 1) 실시예 20의 중간체 1: 터트-부틸(4-(4-(벤질옥시)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
1,4 디옥산(5 mL) 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(실시예 11의 중간체 3)(200 mg, 0.39 mmol), 터트-부틸 (7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(240 mg, 0.63 mmol)의 교반 용액에 K3PO4(248 mg, 1.17 mmol), Pd(DPEPhos)Cl2(28 mg, 0.039 mmol) 및 KF(45 mg, 0.78 mmol)를 첨가하고 아르곤 가스 하에서 105℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물을 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(185 mg, 수율: 66%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 696.2(M+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 20의 중간체 2: 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
이소프로필알코올(1 m)과 에틸 아세테이트(1 mL)의 혼합 용액 중 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(150 mg, 0.22 mmol)의 교반 용액에 Pd/C(30 mg)를 첨가하고 수소 가스 하에 상온에서 20분 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 원하는 화합물 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(100 mg, 수율: 75%)를 얻었다. 얻은 화합물은 추가 정제 과정 없이 다음 반응에 사용하였다. MS: m/z = 606.3(M+H+, ESI+).
단계 3) 실시예 20의 중간체 3: 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판 -1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
아세토니트릴(3 mL) 중 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7- 일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(80 mg, 0.13 mmol)의 교반 용액에 아제판-3-온(30 mg, 0.16 mmol), pyBOP(245 mg, 0.39 mmol) 및 DIEA(50 mg, 0.39 mmol)를 첨가하고 아르곤 가스 하에 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 = 1:2 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판 -1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(65 mg, 수율: 72%)를 얻었다. MS: m/z = 701.3(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 20의 화합물: 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로헥사하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온의 제조
DCM(1 mL) 중 터트-부틸(4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-옥소아제판 -1-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(50 mg, 0.07 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산 중 4 M 염산 혼합 용액(1 mL)을 첨가하고 아르곤 가스 하에 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 prep-HPLC(Waters 2767/Qda, Column: Xbridge C18 19*250mm, 10 um; 이동상 A: 10mmol NH4HCO3, B: ACN; 유속: 20 ml/min; 구배: 52%~52%; 머무름 시간: 16분 중 6.4-9.2분)로 정제하여 원하는 화합물 1-(7-(2-아미노-7-플루오로벤조[d]티아졸-4-일)-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로헥사하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)아제판-3-온(1.16 mg, 2.75%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 2H), 7.78 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.08 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 56.5 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 4.19 - 4.11 (m, 2H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 3.10 - 2.97 (m, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.17 - 1.67 (m, 12H). MS: m/z =601.3(M+H+, ESI+)
실시예 21 (실시예 21a 및 실시예 21b)의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000076
실시예 21: 4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 21의 중간체 2: 에틸 (R)-1-(2-((터트-부톡시카르보닐)아미노)프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트의 제조
THF(200 mL) 중 에틸 1H-이미다졸-5-카르복실레이트(20.0g, 142.7 mmol) 및 터트-부틸(R)-(1-하이드록시프로판-2-일)카바메이트(20.83 g, 118.9 mmol)의 용액에 PPh3(53.01 g, 202.1 mmol) 및 DIAD(40.86 g, 202.1 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 에틸 아세테이트로 용출하여 원하는 생성물인 에틸 (R)-1-(2-((터트-부톡시카르보닐)아미노)프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트(7.1 g, 수율: 20.0%)를 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 198.1(M-Boc+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 21의 중간체 3: 에틸 (R)-1-(2-아미노프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트의 제조
DCM(50 mL) 중 에틸(R)-1-(2-((터트-부톡시카르보닐)아미노)프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트(7.1g, 23.88mmol)의 용액에 염산 1,4-디옥산 용액(59.7 mL, 238.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 물(20 mL)에 용해시키고 용액을 NaHCO3(aq)를 사용하여 pH를 8로 조정했다. 용액을 DCM(150 mL x 2)으로 추출했다. 유기상을 Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 원하는 생성물인 에틸(R)-1-(2-아미노프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트(4.1 g, 수율: 87%)를 황색 오일로 얻었다. MS: m/z = 198.0(M+H+, ESI+). 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계 3) 실시예 21의 중간체 4: (R)-6-메틸-6,7-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-8(5H)-온의 제조
반응을 모니터링하고 MeOH(30 mL) 중의 에틸(R)-1-(2-아미노프로필)-1H-이미다졸-5-카르복실레이트(3.0 g, 15.19 mmol)의 용액에 MeONa(aq)(5.63 mL, 30.39 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 용액의 pH를 2N HCl(aq)을 사용하여 pH 7로 조정했다. 용액을 DCM(150 mL)으로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4(s)로 건조시키고 여과했다. 여액을 감압 하에 농축하여 원하는 생성물인 (R)-6-메틸-6,7-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-8(5H)-온(2.1 g, 수율: 91%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 152.1(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 21의 중간체 5: (R)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로이미다조[1,5-a]피라진의 제조
THF(30 mL) 중 (R)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로이미다조[1,5-a]피라진(2.1 g, 13.84 mmol)의 용액에 LAH(THF 중 1M, 83.1 mL, 83.05 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 N2 하에 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 H2O(10 mL) 및 Na2SO4(20 g)로 켄칭했다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 농축하였다. 용액을 DCM(30 mL)으로 희석하였다. 유기상을 분리하고 Na2SO4(s) 상에서 건조하고 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 MeOH/DCM=1:9로 용출하여 원하는 생성물인 (R)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로이미다조[1,5-a]피라진(520 mg, 수율: 27%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 198.1(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 21의 중간체 6: (R)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-4-(6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린의 제조
DCM(20 mL) 중 (R)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로이미다조[1,5-a]피라진(507 mg, 3.70 mmol)과 (R)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로이미다조[1,5-a]피라진(1.95 g, 5.91 mmol)의 용액에 TEA(1497 mg, 14.80 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 DCM(30 mL)으로 희석하였다. 용액을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4(s) 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 원하는 생성물인 (R)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-4-(6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린(770 mg, 수율: 48%)을 갈색 고체로 얻었다. MS: m/z = 432.0(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 21의 중간체 7: 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸 -5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린의 제조
DMF(7mL) 중 (R)-7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로-4-(6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린(650 mg, 1.5 mmol) 및 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(384 mg, 2.41 mmol)의 용액 Cs2CO3(1.47 g, 4.52 mmol) 및 DABCO(338 mg, 3.02 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 H2O(50 mL)로 희석하였다. 용액을 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출했다. 유기 상을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:3으로 용출하여 원하는 생성물인 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로)-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린(340 mg, 수율: 40%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 555.1(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 21의 중간체 8: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)- 6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
디옥산(5 mL) 중 7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린(300 mg, 0.5415 mmol) 및 터트-부틸(7-플루오로-4-(4,4, 5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(426.9 mg, 1.083 mmol)의 용액 K3PO4(344.1 mg, 1.623 mmol), KF(63 mg, 1.083 mmol) 및 PdCl2(DPEphos)(78 mg, 0.1083 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 105℃에서 8시간 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 역상으로 정제하여 원하는 생성물인 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(60 mg, 수율: 14%)를 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 741.4(M+H+, ESI+)
단계 8) 실시예 21a 화합물 및 실시예 21b 화합물의 제조
염산 1,4-디옥산 용액(0.2 mL, 0.809 mmol) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-((R)-6-메틸-5,6-디하이드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(60 mg, 0.0809 mmol)의 용액을 N2 하에서 16시간 동안 실온에서 교반했다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: XBridge XBridge C18 19*250mm, 10um; 이동상 A: 0.05% NH3H2O/H2O, B: ACN; 유속: 20 mL/분; 구배: 38%~38%, 머무름 시간: 16분 중 6-11분)을 통해 원하는 생성물인 실시예 21a 화합물(5.66 mg, 수율: 10%)을 백색 고체로 얻고 실시예 21b 화합물(6.02 mg, 수율: 11%)를 백색 고체로 얻었다.
실시예 21a: 1H NMR(400M Hz, DMSO-d6) δ 8.00(s, 1H), 7.89(s, 2H), 7.66(s, 1H), 7.30 - 7.20(m, 1H), 7.07(t, J = 9.0 Hz, 1H), 6.86(s, 1H), 5.38 - 4.93(m, 4H), 4.48 - 4.36(m, 1H), 4.27 - 4.17(m, 1H), 4.16 - 4.00(m, 2H), 3.12 - 3.00(m, 3H), 2.87 - 2.78(m, 1H), 2.14 - 1.94(m, 3H), 1.88 - 1.72(m, 3H), 1.26(d, J = 6.5 Hz, 3H). MS: m/z = 641.3(M+H+, ESI+)
실시예 21b: 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99(s, 1H), 7.93(s, 2H), 7.68(s, 1H), 7.28 - 7.19(m, 1H), 7.14 - 7.03(m, 1H), 6.97~6.81(m, 1H), 5.37~4.99(m, 4H), 4.46 - 4.40(m, 1H), 4.26 - 4.20(m, 1H), 4.14 - 4.03(m, 2H), 3.12 - 3.02(m, 3H), 2.93 - 2.78(m, 1H), 2.15 - 1.97(m, 3H), 1.87 - 1.69(m, 3H), 1.26(d, J = 6.7 Hz, 3H). MS: m/z = 641.3(M+H+, ESI+)
실시예 22의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000077
실시예 22: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
단계 1) 실시예 22의 중간체 2: 터트-부틸 6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트의 제조
DCM(10 mL) 중 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올 염산염(500 mg, 2.982 mmol) 및(Boc)2O(1301 mg, 5.965 mmol)의 용액에 TEA(603 mg, 5.965 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 N2 하에서 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 물(10 mL)로 희석하였다. 용액을 DCM(20 mL x 2)으로 추출했다. 유기상을 Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하여 원하는 생성물인 터트-부틸 6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트(600 mg, 수율: 86.9%)를 무색 오일로 얻었다. MS: m/z = 232.2(M+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 22의 중간체 3: 터트-부틸 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트의 제조
DCM(5 mL) 중 터트-부틸 6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트(550 mg, 2.378 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST(766 mg, 4.756 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 0℃에서 H2O(10 mL)로 켄칭하였다. 용액을 DCM(20 mL x 3)으로 추출했다. 유기 상을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트(465 mg, 수율: 58.3%)를 황색 오일로 얻었다. MS: m/z = 134.1(M-Boc+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 22의 중간체 4: 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판 염산염의 제조
DCM(6 mL) 중 터트-부틸 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-카르복실레이트(450 mg, 1.928 mmol)의 용액에 염산 1,4-디옥산 용액(4M, 4.8 mL, 19.28mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 생성물로 원하는 생성물인 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판 염산염(300 mg, 수율: 91%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 134.0(M+H+, ESI+). 조 생성물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 4) 실시예 22의 중간체 5: 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판의 제조
DCM(5 mL)중 6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판 염산염(269 mg, 1.589 mmol) 및 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(500 mg, 0.513 mmol)의 용액에 TEA(612 mg, 6.052 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 물(10 mL)로 희석하고, 용액을 DCM(10 mL x 3)으로 추출했다. 유기상을 Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2:1로 용출하여 원하는 생성물인 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판(400 mg, 수율: 61%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 427.8(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 22의 중간체 6: 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판의 제조
DMF(10 mL) 중 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판(400 mg, 0.936 mmol) 및 ((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(238.4 mg, 1.498 mmol)의 용액에 Cs2CO3(915.2 mg, 2.809 mmol) 및 DABCO(210.1 mg, 1.873 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 H2O(50 mL)로 희석하고, 용액을 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출했다. 유기상을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4(s)로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:4로 용출하여 원하는 생성물인 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판(280 mg, 수율: 56%)을 백색 고체로 얻었다. MS: m/z = 551.0(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 22의 중간체 7: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트의 제조
디옥산(10 mL) 중 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판(270 mg, 0.491 mmol) 및 터트-부틸(7-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3, 2-디옥사보롤란-2-일) 벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(387.2 mg, 0.982 mmol)의 용액에 K3PO=(312.3 mg, 1.473 mmol), KF(57.1 mg, 0.982 mmol), PdCl2(DPEphos)(70.3 mg, 0.0982 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 105℃에서 6시간 동안 교반하였다. 유기상을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:3으로 용출하여 원하는 생성물인 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-플루오로-6-메틸) -1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(270 mg, 수율: 74.5%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 737.5(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 22의 화합물: 4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진 -7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-아민의 제조
DCM(2 mL) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-플루오로-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)카바메이트(100mg, 0.135mmol)의 용액에 염산 1,4-디옥산 용액(0.4 mL, 1.35 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda 컬럼: Pursuit XRs 10 C18 250*21.2mm, 10um; 이동상 A: 0.1% FA/H2O, B: ACN; 유속: 20 mL/분; 구배: 18-23% 머무름 시간: 16분 중 7-9.2분) 원하는 생성물인 실시예 22 화합물(27.70 mg, 수율: 32%)를 황색 고체로 얻었다.
MS: m/z = 637.3(M+H+, ESI+)
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26(brs, 0.16H, FA), 8.10~8.03(m, 1H), 7.92(s, 2H), 7.27~7.19(m, 1H), 7.06(t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.27(d, J = 53.9 Hz, 1H), 4.57~4.36(m, 1H), 4.24~4.09(m, 3H), 4.06~3.70(m, 6H), 3.11~2.98(m, 3H), 2.87~2.77(m, 1H), 2.14~1.94(m, 3H), 1.89~1.70(m, 3H), 1.37(d, J = 21.6 Hz, 3H).
실시예 23의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000078
실시예 23: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 23의 중간체 2: 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(20 mL) 중 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올 염산염(507 mg, 3.026 mmol)과 7-브로모-2,4,6-트리클로로-8-플루오로퀴나졸린(1000 mg, 3.026 mmol)의 교반 용액에 TEA(1224 mg, 12.104 mmol)를 첨가한 다음, 질소 하에 상온에서 2 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(10 mL)로 희석하고 DCM(30 mL x 2)로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수 용액(10 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 감압 농축하여 원하는 생성물 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 23의 중간체 2)(1.25 g, 수율: 96.8%)을 갈색 고체로 얻었다. MS: m/z = 425.9(M+H+, ESI+). 얻은 생성물은 정제 과정 없이 다음 반응에 사용하였다.
단계 2) 실시예 23의 중간체 3: 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF(10 mL) 중 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(400 mg, 0.96 mmol)과 ((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(160 mg, 0.96 mmol)의 교반 용액에 Cs2CO3(936 mg, 2.88 mmol)와 DABCO(216 mg, 1.92 mmol) 를 첨가한 다음, 아르곤 하에 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 빙냉수(30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1로 용출하여 원하는 생성물 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 23의 중간체 3)(358 mg, 수율: 72%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 561.1(M+H+, ESI+).
단계 3) 실시예 23의 중간체 4: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(10 mL) 중 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6 -메틸-1,4-옥사제판-6-올(200mg, 0.35 mmol)과 터트-부틸(3-시아노-4-(5,5-디메틸-1,3,2-디옥사보리난-2-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카르브-디옥산메이트(220 mg, 0.56 mmol)의 교반 용액에 K3PO4(240 mg, 1.05 mmol), Pd(DPEPhos)Cl2(50 mg, 0.070 mmol), KF(40 mg, 0.70 mmol)를 첨가한 후, 아르곤 하에 105℃에서 4 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:2로 용출하여 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)- 2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 23의 중간체 4)(30 mg, 수율: 12%)을 얻었다. MS: m/z = 771.3(M+H+, ESI+).
단계 4) 실시예 23의 화합물: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
DCM(1 mL) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((2R,7aS)-2-메톡시테트라하이드로 -1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(30 mg, 0.038 mmol)의 교반 용액에 4M 염산 1,4-디옥산 용액(0.5 mL)을 첨가한 후, 아르곤 하에 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔류물을 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFire SunFire C18 19*250mm, 10 um; 이동상 A: 0.1% FA/H2O, B: ACN; 유속: 20 ml/min; 구배: 27%~35%; 머무름 시간: 16분 중 8.8-10.5분)를 통해 정제하여 실시예 23의 화합물(2.5 mg, 수율: 11%)을 얻었다. MS: m/z = 671.3(M+H+, ESI+). 1H NMR(400 MHz, MeOD-d4) δ 8.53(brs, 0.9 H, FA), 8.41(d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.24 - 7.18(m, 1H), 7.04(t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.48 - 4.28(m, 4H), 4.15(brs, 1H), 4.10 - 3.95(m, 2H), 3.93 - 3.80(m, 2H), 3.70 - 3.61(m, 2H), 3.47 - 3.33(m, 6H), 3.24 - 3.08(m, 2H), 2.37 - 2.27(m, 1H), 2.20 - 2.02(m, 4H), 2.00 - 1.88(m, 1H), 1.26(s, 3H).
실시예 24의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000079
실시예 24: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 24의 중간체 1: 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸 -1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF(5 mL) 중 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 23의 중간체 2)(400mg, 0.941mmol) 교반 용액에(S)-(2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(144g, 0.941mmol)과 Cs2CO3(920 mg, 2.823 mmol) and DABCO(211 mg, 1.882 mmol)를 상온에서 첨가하고 3시간 동안 아르곤 하에 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 15 mL)로 추출하였다. 분리된 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM : 메탄올 = 15:1로 용출하여 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸 -1,4-옥사제판-6-올(실시예 24의 중간체 1)(410 mg, 수율: 64%)을 흰색 고체로 얻었다. MS: m/z = 543.1(M+H+, ESI+)
단계 2) 실시예 24의 중간체 2: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-2- 메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(3 mL) 중 4-(7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 24의 중간체 1)(200mg, 0.369mmol)의 교반 용액에 터트-부틸 (3-시아노-4-(5,5-디메틸-1,3,2-디옥사보리난-2-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(298 mg, 0.738 mmol), Pd(DPEPhos)Cl2(53 mg, 0.074 mmol), KF(43 mg, 0.738 mmol) 및 K3PO4(235 mg, 1.107 mmol)를 첨가하고 아르곤 하에 105℃에서 12 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(40 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 20 mL)로 추출하였다. 분리된 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물은 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM : 메탄올 = 6:1로 용출하여 2: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 24의 중간체 2)(90 mg, 수율: 29%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 753.3(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 24의 화합물: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
염산/1,4-디옥산 혼합 용액(3 mL) 중 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)-2-(((S)-2-메틸렌테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(70 mg, 0.093 mmol)의 교반 용액을 N2 가스 하에 상온에서 16 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물은 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFire Sunfire C18, 19*250mm, 10 um; 이동상 A: 0.1%FA/H2O, B: ACN; 유속: 20ml/min; 구배: 15-23%; 머무름 시간: 7.7-9.1min of 16 min)로 정제하여 실시예 24의 화합물(3.08 mg, 수율: 5%)을 흰색 고체로 얻었다. MS: m/z = 653.2(M+H+, ESI+) 1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 8.54(d, J = 27.2 Hz, 1H), 8.39(brs, 1H, FA), 8.12(s, 2H), 7.29 - 7.20(m, 1H), 7.16(t, J = 9.0 Hz, 1H), 4.90(s, 2H), 4.30 - 4.18(m, 1H), 4.12 - 3.84(m, 7H), 3.75 -3.65(m, 2H), 3.62 - 3.50(m, 2H), 3.19(d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.02 - 2.97(m, 1H), 2.62 - 2.56(m, 1H), 2.35(d, J = 15.2 Hz, 1H), 1.96 - 1.66(m, 4H), 1.18 - 1.10(m, 3H).
실시예 25의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000080
실시예 25: 2-아미노-4-(6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 25의 중간체 1: 4-(7-브로모-6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6 -메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF(10 mL) 중 4-(7-브로모-2,6-디클로로-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 23의 중간체 2)(400 mg, 0.96 mmol)과 (S)-(1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메탄올(144 mg, 0.96 mmol)의 교반 용액에 Cs2CO3 (936 mg, 2.88 mmol) and DABCO(216 mg, 1.92 mmol)를 첨가한 후, 아르곤 가스 하에 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(20 mL x 3)로 추출하였다. 분리된 유기층을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카 겔컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 25% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 25의 중간체 1)(372 mg, 수율: 72%)을 얻었다MS(LC-MS): 541.0 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 25의 중간체 2: 터트-부틸(4-(6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(10 mL) 중 4-(7-브로모-6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 25의 중간체 1)(200 mg, 0.37 mmol), 터트-부틸 (3-시아노-4-(5,5-디메틸-1,3,2-디옥사보리난-2-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(220 mg, 0.59 mmol) 의 교반 용액에 K3PO4(240 mg, 1.11 mmol), Pd(DPEPhos)Cl2(50 mg, 0.074 mmol), 및 KF(40 mg, 0.74 mmol)를 첨가하고 아르곤 가스 하에 105℃에서 4 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트로 용출하여 터트-부틸(4-(6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 25의 중간체 2)(102 mg, 수율: 36%)을 얻었다MS(LC-MS): 751.3 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 25의 화합물: 2-아미노-4-(6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
DCM(1 mL) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-2-(((S)-1-(2,2-디플루오로에틸)아제티딘-2-일)메톡시)-8-플루오로-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 25의 중간체 2)(40 mg, 0.053 mmol)의 교반 용액에 4 M 염산/1,4-디옥산 혼합 용액(0.5 mL)을 첨가하고 아르곤 가스 하에 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFire SunFire C18 19*250mm, 10 um; 이동상 A: 0.1% FA/H2O, B: ACN; 유속: 20 ml/min; 구배: 27%~35%; 머무름 시간: 16분 중 9.2-10.0 분)로 정제하여 실시예 25의 화합물(2.7 mg, 수율: 8%)을 얻었다. MS(LC-MS): 651.3 m/z [M+H]. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 - 8.49(m, 1H), 8.46(brs, 1.09 H, FA), 8.11(s, 2H), 7.29 - 7.22(m, 1H), 7.20 - 7.12(m, 1H), 5.95(t, J = 55.3 Hz, 1H), 5.42 - 5.20(m, 1H), 4.44 - 4.06(m, 4H), 4.02 - 3.82(m, 3H), 3.74 - 3.58(m, 4H), 3.09 - 2.98(m, 2H), 2.78 - 2.70(m, 1H), 2.12 - 1.98(m, 2H), 1.14(d, J = 8.3 Hz, 3H).
실시예 26의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000081
실시예 26: 2-아미노-4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 26의 중간체 1: 4-(7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DCM(10 mL) 중 6-메틸-1,4-옥사제판-6-올 염산염(실시예 23의 중간체 1)(534mg, 3.186mmol) 및 7-브로모-2,4-디클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린(1.0g, 3.186mmol)의 교반 용액에 TEA(967 mg, 9.558 mmol)를 첨가하고 N2 가스 하에 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 물(60 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트로 용출하여 4-(7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(1.2 g, 수율: 49%)를 흰색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 409.9 m/z [M+H].
단계 2) 실시예 26의 중간체 2: 4-(7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올의 제조
DMF(5 mL) 중 4-(7-브로모-2-클로로-6,8-디플루오로퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 26의 중간체 1)(500mg, 1.224mmol)의 교반 용액에((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메탄올(195 mg, 1.224 mmol), Cs2CO3(1.20 g, 3.672 mmol) 및 DABCO(275 mg, 2.448 mmol)를 상온에서 첨가하고 아르곤 가스 하에 3 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 물(40 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(50 mL x 3)로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 10% 메탄올로 용출하여 4-(7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 26의 중간체 2)(640 mg, 수율: 82%)를 흰색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 533.0 m/z [M+H].
단계 3) 실시예 26의 중간체 3: 터트-부틸(3-시아노-4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트의 제조
1,4-디옥산(3 mL) 중 4-(7-브로모-6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-4-일)-6-메틸-1,4-옥사제판-6-올(실시예 26의 중간체 2)(300 mg, 0.565 mmol)의 교반 용액에 터트-부틸 (3-시아노-4-(5,5-디메틸-1,3,2-디옥사보리난-2-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(456 mg, 1.129 mmol), Pd(DPEPhos)Cl2(81 mg, 0.113 mmol), KF(66 mg, 1.129 mmol) 및 K3PO4(360 mg, 1.695 mmol)를 첨가하고, 아르곤 가스 하에 105℃에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 물(50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시킨 후 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 DCM 중 11% 메탄올로 용출하여 터트-부틸 (3-시아노-4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 26의 중간체 3)(110 mg, 수율: 24%)를 황색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 743.4 m/z [M+H].
단계 4) 실시예 26의 화합물: 2-아미노-4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
염산/1,4-디옥산 혼합 용액(5 mL) 중 터트-부틸 (3-시아노-4-(6,8-디플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(6-하이드록시-6-메틸-1,4-옥사제판-4-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 26의 중간체 3)(90mg, 0.121mmol)의 교반 용액을 N2 가스 하에 상온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 Prep-HPLC(Waters 2767 컬럼: Xbridge C18,19*250mm, 10μm; 이동상 A: 10 mmol NH4HCO3/H2O, B: ACN; 유속: 20 ml/min; 구배:42-42%; 머무름 시간: 16분 중 7.1-10 분)로 정제하여 실시예 26의 화합물(11.69 mg, 수율: 15%)를 흰색 고체로 얻었다. MS(LC-MS): 643.1 m/z [M+H]. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 - 8.04(m, 3H), 7.39 - 7.29(m, 1H), 7.16(t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.39 - 5.17(m, 2H), 4.33 - 4.20(m, 1H), 4.15 - 4.06(m, 2H), 4.04 - 3.68(m, 5H), 3.61 - 3.51(m, 2H), 3.16 - 2.98(m, 3H), 2.90 - 2.74(m, 1H), 2.17 - 1.98(m, 3H), 1.89 - 1.73(m, 3H), 1.14(d, J = 9.2 Hz, 3H).
실시예 31의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000082
실시예 31: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(8-플루오로-3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 31의 중간체 2의 제조: 3-브로모-4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘
메탄올(60 mL) 중 3-브로모-5-플루오로이소니코틴알데히드(6 g, 29.41 mmol)의 교반 용액을 10분 간 상온에서 방치한 후 황산(3 mL, 55.87 mmol)을 적가하고 질소 가스 하에 50℃에서 16 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 상온으로 냉각하고 탄산수소나트륨 수용액(250 mL)으로 중화하였다. 이 후 에틸 아세테이트(150 mL x 3)로 추출하여 얻은 유기층을 무수 Na2CO3로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 원하는 화합물 3-브로모-4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘(실시예 31의 중간체 2)(7.5 g)을 얻었다. 얻은 화합물은 추가 정제 과정 없이 다음 반응에 사용하였다. MS: m/z = 251.8(M+H+, ESI+).
단계 2) 실시예 31의 중간체 3의 제조: 4-(디메톡시메틸)-5-플루오로니코틴알데히드
테트라하이드로퓨란(70 mL) 중 3-브로모-4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘(7.5 g, 30.12 mmol)의 교반 용액을 질소 가스 하에 -78℃에서 10 분 동안 교반하였다. 이 후, n-부틸리튬(2.5 M, 16 mL, 39.03 mmol)을 적가하고 질소 가스 및 -78℃를 유지하여 2시간 동안 반응 혼합물을 교반하였다. 반응 혼합물에 DMF(14.4 mL)를 가하고 1시간 추가 교반한 뒤, 염화 암모늄 수용액(250 mL)을 가하여 반응을 종결시켰다. 혼합액에 에틸 아세테이트(150 mL x 3)를 가하고 염수(50 mL)로 세척하여 유기층을 추출하였다. 얻은 유기층은 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물인 4-(디메톡시메틸)-5-플루오로니코틴알데히드(실시예 31의 중간체 3)(2.15 g, 수율: 35.9%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z =199.9(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 31의 중간체 4의 제조: (E)-4-(디메톡시메틸)-3-플루오로-5-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘
니트로메탄(12.6 mL) 중 4-(디메톡시메틸)-5-플루오로니코틴알데히드(2.15 g, 10.80 mmol)의 혼합 용액을 질소 가스 하에 100℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 석유 에테르 중 5% 에틸 아세테이트 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물인(E)-4-(디메톡시메틸)-3-플루오로-5-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘(실시예 31의 중간체 4)(1.75 g, 수율: 63.2 %)을 얻었다. MS: m/z =257.0(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 31의 중간체 5의 제조: 터트-부틸 (1-(4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트
메탄올(15 mL) 중(E)-4-(디메톡시메틸)-3-플루오로-5-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘(1.5 g, 5.854 mmol)의 교반 용액에 Raney Ni(882 mg, 15. 028 mmol)을 첨가하고 수소 가스 하에 30℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이후 메탄올 중 암모니아 혼합 용액(2.2 mL, 15.396 mmol)을 가한 뒤 수소 가스 하에 30℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 완료된 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하여 얻은 필터 케이크(filter cake)를 메탄올(3 x 10 mL)로 세척하였다. 이 후 여액을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 위 잔류물에 THF(10 mL)을 가한 교반 용액에(Boc)2O(3.83 g, 17.562 mmol) 와 DIEA(2.27 g,17.562 mmol)를 첨가하고 질소 가스 하에 30℃에서 2 시간 동안 추가 교반하였다. 반응이 종결된 후 반응 혼합물을 여과하여 얻은 필터 케이크(filter cake)를 메탄올(3 x 5 mL)을 가하여 세척하였다. 세척하여 얻은 여액을 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 석유 에테르 중 43% 에틸 아세테이트 용출 조건의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물인 터트-부틸 (1-(4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트(실시예 31의 중간체 5)(500 mg, 26%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 329.1(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 31의 중간체 6의 제조: 8-플루오로-3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘
1,4 디옥산/4 M 염산 혼합 용액(1.0 mL, 3.805 mmol) 및 6 M 염산 용액(1.8 mL, 10.654 mmol) 중 터트-부틸 (1-(4-(디메톡시메틸)-5-플루오로피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트(250 mg, 0.761 mmol)의 교반 용액을 아르곤 가스 하에 10℃에서 16 시간 동안 교반시켰다. 이 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물에 메탄올(3 mL)을 가하고 NaBH3CN(100 mg, 1.68 mmol)을 0℃에서 첨가하여 아르곤 가스 하에 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응 혼합물에 물(30 mL)을 가하여 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 15 mL)로 추출하여 유기층을 얻었다. 얻은 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 DCM 중 2 % 메탄올을 용출 조건으로 한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 8-플루오로-3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘(실시예 31의 중간체 6)(5 mg, 수율: 4.0%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 167.1(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 31의 SM-1의 제조: 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시 )퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트
1,4 디옥산(7 mL) 중 4-(벤질옥시)-7-브로모-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린(실시예 16의 SM-5)(200 mg, 0.38 mmol), 터트-부틸 (3-시아노-4-(5,5-디메틸-1,3,2-디옥사보리난-2-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(310 mg, 0.77 mmol), K3PO4(240 mg, 1.1 mmol), KF(44 mg,, 0.76 mmol) 및 DPEphos-PDCl2(55 mg, 0.08 mmol)의 혼합 용액을 질소 가스로 세 번 탈기하고 105℃에서 10 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응 혼합물을 물(80 mL)로 희석하고 DCM(40 mL x 3)으로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물을 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 = 1:2의 용출 조건을 이용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(140 mg, 수율: 49.8%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 736.7(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 31의 SM-2의 제조: 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린- 7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트
에틸아세테이트/이소프로필알코올(1:1, 6 mL) 중 터트-부틸 (4-(4-(벤질옥시)-6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린- 7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(130 mg, 0.177 mmol)의 혼합 용액에 Pd/C(26 mg)을 상온에서 첨가하고 수소 가스(15 psi) 하에서 30분 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 셀라이트를 이용하여 여과하고 여액을 감압농축하여 원하는 화합물 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 31의 SM-2)(130 mg)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 646.2(M+H+, ESI+). 얻은 화합물은 별도의 정제 과정 없이 다음 반응에 이용하였다.
단계 8) 실시예 31의 중간체 7의 제조: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-4-(8-플루오로-3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트
아세토니트릴(1 mL) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 31의 SM-2)(10 mg, 0.016 mmol)의 혼합 용액에 PyBOP(24 mg, 0.046 mmol), 8-플루오로-3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘(3 mg, 0.018 mmol) 및 DIEA(9.7 uL, 0.059 mmol)를 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석하고 DCM(15 mL x 3)으로 추출하였다. 얻은 유기층을 염수(10 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 원하는 화합물인 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(8-플루오로-3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(10 mg)를 얻었다. MS: m/z = 794.6(M+H+, ESI+). 얻은 화합물은 별도의 정제 과정 없이 다음 반응에 이용하였다.
단계 9) 실시예 31의 의 화합물: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-4-(8-플루오로-3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
1,4-디옥산 중 염산 혼합 용액(2 mL)에 터트-부틸(4-(6-클로로-8-플루오로-4-(8-플루오로-3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(10 mg, 0.013 mmol)을 첨가하고 1 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 갈색 고체의 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 Prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFireSunfire C18, 19*250 mm, 10um; 이동상 A: 0.03% TFA/H2O, B: ACN, 유속: 20 mL/min; 구배:70%~80%) 정제하여 실시예 31의 화합물(0.1 mg, 수율: 1.1%)을 얻었다. MS: m/z = 694.0(M+H+, ESI+)
실시예 32의 합성 반응식
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000083
실시예 32: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
단계 1) 실시예 32의 중간체 2: 3-브로모-4-(디메톡시메틸)피리딘의 제조
메탄올(120 mL) 중 3-브로모이소니코틴알데히드(5 g, 26.880 mmol)의 혼합 용액을 아르곤 가스 하에 상온에서 10 분 동안 방치하였다. 이 후 황산(10.4g, 106 mmol)을 0℃에서 20분 동안 적가하고, 상온에서 22 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물에 탄산수소나트륨(400 mL)을 0℃에서 가하여 중화시키고 에틸 아세테이트(200 mL x 2)로 유기층을 추출하였다. 얻은 유기층에 염수(200 mL)를 가하여 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 원하는 화합물 3-브로모-4-(디메톡시메틸)피리딘(실시예 32의 중간체 2)(5.5 g)을 얻었다. MS: m/z = 233.9(M+H+, ESI+) 얻은 화합물은 추가 정제 과정 없이 다음 반응에 이용하였다.
단계 2) 실시예 32의 중간체 3: 4-(디메톡시메틸)니코틴알데히드의 제조
테트라하이드로퓨란(180 mL) 중 3-브로모-4-(디메톡시메틸)피리딘(5.5 g, 23.699 mmol)의 혼합 용액을 아르곤 가스 하에 -78℃에서 10 분 동안 방치하였다. 이 후 n- 부틸 리튬 용액(2.5 M, 17 mL, 42.658 mmol)을 0℃에서 30분 동안 적가하고 다시 -78℃에서 2시간 동안 교반하고 DMF(9.25 mL, 113.755 mmol)을 첨가하여 2 시간 동안 추가 교반하였다. 반응이 완료된 후, 염화 암모늄 수용액(200 mL)을 가하여 종결시키고, 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)를 가하여 유기층을 얻었다. 얻은 유기층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(35%) 용출 조건을 사용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 4-(디메톡시메틸)니코틴알데히드(실시예 32의 중간체 3)(1.3 g, 수율: 30%)를 얻었다. MS: m/z = 182.1(M+H+, ESI+)
단계 3) 실시예 32의 중간체 4:(E)-4-(디메톡시메틸)-3-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘의 제조
니트로메탄(10 mL) 중 4-(디메톡시메틸)니코틴알데히드(1.3 mg, 7.175 mmol)의 혼합 용액에 암모늄 아세테이트(221 mg, 2.870 mmol)을 아르곤 가스 하에 상온에서 첨가하고 100℃에서 16 시간 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 얻은 잔류물은 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(32%)를 용출 조건으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 (E)-4-(디메톡시메틸)-3-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘(실시예 32의 중간체 4)(1.2 g, 수율: 70%)를 얻었다. MS: m/z = 239.0(M+H+, ESI+)
단계 4) 실시예 32의 중간체 5: 터트-부틸(1-(4-(디메톡시메틸)피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트의 제조
메탄올(19 mL) 중 (E)-4-(디메톡시메틸)-3-(2-니트로프로프-1-엔-1-일)피리딘(600 mg, 2.518 mmol)의 혼합 용액에 Raney Ni(1.25 g, 21.298 mmol) 및 메탄올 중 암모니아 혼합 용액(5 mL, 35.252 mmol)을 첨가하고 수소 가스 하에 30℃에서 13 시간 동안 교반하였다. 이 후, (Boc)2O(1.65 g, 7.554 mmol)를 상온에서 첨가하고 30℃에서 2 시간 동안 추가 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고 얻은 필터 케이크(filter cake)를 메탄올(3 x 20 mL)을 가하여 세척하였다. 세척하여 얻은 여액을 감압 농축하고 석유 에테르 중 에틸 아세테이트(46%)를 용출 조건으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 정제하여 원하는 화합물인 터트-부틸 (1-(4-(디메톡시메틸)피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트(실시예 32의 중간체 5)(290 mg, 수율: 37%)를 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 311.1(M+H+, ESI+)
단계 5) 실시예 32의 중간체 6: 3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘의 제조
1,4-디옥산 중 4 M 염산 용액(3.7 mL, 14.944 mmol)/6 M 염산 용액(1.9 mL, 11.208) 중 터트-부틸(1-(4-(디메톡시메틸)피리딘-3-일)프로판-2-일)카바메이트(290 mg, 0.934 mmol)를 아르곤 가스 하에 10℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 이 후 반응 혼합물을 감압 농축하고 메탄올(3 mL)을 가하였다. 위 반응 혼합물에 NaBH3CN(1.06 g, 16.812 mmol)을 아르곤 가스 하에 0℃에서 첨가한 뒤 2 시간 동안 추가 교반하였다. 반응이 완료된 후 물(30 mL)을 가하여 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 15 mL)을 이용하여 유기층을 추출하였다. 얻은 유기층에 염수(30 mL)을 가하여 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 조 화합물을 얻었다. 얻은 조 화합물은 C18 실리카겔 크로마토 그래피(이동상: 물 중 아세토니트릴/0.1%암모니아, 구배: 10%~40%, 시간: 15 분) 로 정제하여 원하는 화합물 3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘(실시예 32의 중간체 6)(46 mg, 수율: 33%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 149.1(M+H+, ESI+)
단계 6) 실시예 32의 중간체 7: 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-메틸- 3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트의 제조
아세토니트릴(3 mL) 중 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-하이드록시퀴나졸린- 7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 31의 SM-2)(55 mg, 0085 mmol)의 교반 용액에 PyBOP(133 mg, 0.26 mmol), 3-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-2,6-나프티리딘(실시예 32의 중간체 6)(15 mg, 0.10 mmol) 및 DIEA(54 uL, 0.32 mmol)을 첨가하고 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 물(80 mL)을 가하여 희석시키고 DCM(40 mL x 3)을 가하여 유기층을 추출하였다. 추출한 유기층을 염수(20 mL)를 가하여 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시키고 여과 및 감압농축하여 조 화합물을 얻었다. 조 화합물은 DCM/메탄올 = 2:1를 용출 조건으로 하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 32의 중간체 7)(15 mg)를 얻었다. MS: m/z = 776.4(M+H+, ESI+)
단계 7) 실시예 32의 화합물: 2-아미노-4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-메틸-3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)퀴나졸린-7-일)-7-플루오로벤조[b]티오펜-3-카르보니트릴의 제조
1,4-디옥산 중 염산 용액(4 mL)에 터트-부틸 (4-(6-클로로-8-플루오로-2-(((2R,7aS)-2-플루오로테트라하이드로-1H-피롤리진-7a(5H)-일)메톡시)-4-(3-메틸- 3,4-디하이드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)퀴나졸린-7-일)-3-시아노-7-플루오로벤조[b]티오펜-2-일)카바메이트(실시예 32의 중간체 7)(15 mg, 0.155 mmol)를 첨가하고 상온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응 혼합물을 감압 농축하고 prep-HPLC(Waters 2767/Qda, 컬럼: SunFire C18, 19*250 mm, 10um; 이동상 A: 0.1% FA/H2O, B:ACN, 유속 :20 ml/min; 구배:70%~80%) 정제하여 실시예 32의 화합물(0.5 mg, 수율: 3.8%)을 얻었다. MS: m/z = 676.4(M+H+, ESI+)
이와 유사한 방법으로 각 실시예 기재 화합물 제조에 적절한 시료를 사용하여 하기 표 1의 실시예 1 내지 32의 화합물을 제조하였다.
[표 1]
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시험예
<시험예 1: KRAS Nucleotide Exchange Assay>
시험 목적
KRASWT, KRASG12D, KRASG12V 돌연변이의 SOS1 매개 Nucleotide 교환 활성에 대한 화합물의 억제 효과 평가
시험 원리
라벨이 부착되지 않은 KRAS 결합 GDP와 형광 라벨이 부착된 GTP의 SOS1 매개 교환을 모니터링하는 방법으로, 공여체 Tb cryptate로 표지된 GST 항체와 수용체 DY-647P1 GTP가 근접하게 있을 때 두 형광체 사이의 에너지 전달을 기반으로 검출한다.
시험조건 및 절차
재료
GST-tagged KRAS WT 또는 돌연변이 단백질 (amino acids 2-169),
SOS1(amino acids 564-1049),
Labeled GTP (GTP-DY-647P1),
Assay Buffer (20 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.05% BSA, 0.0025% NP40)
시험 절차
1. KRAS 단백질을 assay buffer로 희석하여 최종 농도의 1.5배가 되도록 한 후 Tb cryptate anti-GST 항체를 혼합하여 각 assay well에 10 μL씩 첨가하였다(최종 농도는 KRASWT, KRASG12D, KRASG12V 모두 20 nM).
2. 화합물을 DMSO로 용해 후 희석하여 최종 농도의 100배로 준비하였다.
3. ECHO acoustic dispenser (Beckman)를 이용하여 assay well에 화합물을 분주하고, KRAS/Ab 혼합물과 부드럽게 섞으며 60분 동안 배양하였다.
4. SOS1과 labeled GTP를 섞고 assay buffer로 최종 농도의 3배로 희석하고 5 μL의 용액을 assay well에 첨가하여 반응을 개시하였다 (labeled GTP의 최종 농도는 0.15 μM, SOS1의 최종 농도는 WT에서 7.5 nM, G12D에서 12.5 nM, G12V에서 50 nM). Blank well에는 assay buffer와 labeled GTP만 넣었다.
5. Pherastar Plate Reader(BMG)를 사용하여 Ex/Em=(337/665; 337/620)에서 반응을 모니터링하였다.
6. 반응 개시 후 약 25분에서 HTRF 신호를 분석하였다(G12V는 60분 반응).
7. Nucleotide 교환 활성은 DMSO 반응 값 대비 차이를 퍼센트로 표현하며, IC50값은 GraphPad 4.0 software에서 four-parameter logistic 방정식을 기반으로 계산하였다.
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000095
시험 결과를 표 2에 나타내었다.
[표 2]
시험 결과
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000096
<시험예 2: KRAS NanoBRET Assay>
시험 목적
KRAS(WT, G12D 또는 G12V) HEK293 세포에 대한 화합물의 NanoBRET 표적 결합 평가
시험 조건 및 절차
화합물 제조
시험화합물은 10 mM stock으로 용해되었으며 기준화합물인 BI-2582 및 MRTX1133 (MedChemExpress)는 각 10 mM과 1 mM stock으로 DMSO에 용해되었다.
세포배양
NanoBRET KRAS(WT, G12D 또는 G12V)-NanoLuc Fusion vector와 tracer K-2는 Promega 제품으로, HEK293 cell line은 ATCC에서 구입하였다. HEK293 세포는 10% FBS와 100 μg/mL 페니실린-스트렙토마이신이 첨가된 EMEM 배지를 사용하고, 5% CO2와 95% 공기의 가습 대기에서 37℃로 배양하였다.
시험 절차
1. HEK293 Cell에 NanoBRET KRAS (WT, G12D 또는 G12V)-NanoLuc Fusion Vector를 transfection 한다.
2. Phenol red가 없는 Opti-MEM에서 transfection된 cell의 density를 2 Х 105 cells/mL로 조정하하고 20x K-2 tracer를 cell과 섞는다.
3. 384 well에 cell과 tracer mixture를 분주하고 37℃, 5% CO2 배양기에 한 시간 둔 후, 상온에서 15분 방치한다.
4. Substrate와 시험화합물 용액을 cell과 tracer를 분주한 384 well에 처리하고 15분간 상온에서 반응한다.
5. Envision 2104 plate reader를 사용하여 공여체 emission wavelength (460 nm)와 수용체 emission wavelength (600 nm)에서 측정한다.
6. 수용체 emission 값(600 nm)을 공여체 emission 값(460 nm)으로 나누어 BRET ratio를 계산하고 tracer가 포함되지 않은 BRET ratio를 소거하여 background를 보정한다.
7. DMSO 처리 시 BRET ratio 대비 화합물 처리 시 BRET ratio *100으로 BRET 반응을 계산한다.
8. GraphPad Prism 4 program에서 sigmoidal dose-response 방정식에 기반하여 IC50 값을 산출한다.
시험 결과를 표 3에 나타내었다.
[표 3]
시험 결과
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000097
<시험예 3: Cell proliferation assay>
시험 목적
72시간 동안 AsPC-1 pancreatic cancer(KRAS G12D mutation) 또는 SW480 colon cancer(KRAS G12V mutation) 세포에서 시험 화합물의 세포 생존성 테스트
시험조건 및 절차
재료
기준화합물 Staurosporine은 Sigma-Aldrich(Saint Louis, MI)로부터 구입하였고, CellTiter-Glo® 2.0 Luminescent cell viability assay reagent (cat# G9243)은 Promega(Madison, WI)에서 구입하였다. AsPC-1 및 SW480 cell line은 American Type Culture Collection (Manassas, VA)에서 구입했다. AsPC-1 세포는 RPMI-1640(ATCC, cat#30-2001), SW480 세포는 DMEM(ATCC cat#30-2002)으로 배양되었으며, 10% FBS(Sigma-Aldrich, cat#F2442)와 100 μg/mL의 페니실린-스트렙토마이신(Sigma-Aldrich, cat#P4333)을 첨가한 배지를 사용하였다. 세포들은 5%의 CO2와 95%의 공기의 가습된 대기에서 37℃로 배양되었다.
시험절차
1. 시험화합물과 기준화합물 Staurosporine을 DMSO 용액에 용해하여 Source Plate에서 20 mM(시험화합물)과 10 mM(대조화합물 Staurosporine)을 제조하고 DMSO로 3 fold, 10 dose로 희석하였다.
2. Source Plate에서 10개 용량의 125 nL 시험화합물 또는 25 nL 기준화합물을 Echo 655를 이용해서 384-well 배양 plate(VWR, cat#82050-076)의 well에 분주하였다.
3. 384-well 세포 배양 Plate에 2000개의 AsPC-1 또는 SW480 세포가 포함된 배양액 25 μL를 각각 분주하였다.
4. 세포는 화합물과 함께 37℃, 5% CO2 조건에서 72시간 동안 배양하였다.
5. Plate의 각 well에 CellTiter-Glo 2.0 시약을 25 μL씩 첨가하였다.
6. 내용물을 orbital shaker에 2분간 혼합한 후 15분간 상온에서 Luminescence 시그널을 안정화하였다.
7. Luminescence 시그널은 Envision 2104 Multilabel Reader (PerkinElmer, Santa Clara, CA)로 측정되었으며, 생존하는 세포의 수는 각 배양액에 존재하는 ATP의 정량화를 통해 측정되었다.
8. GraphPad Prism 4 program에서 Sigmoidal dose-response 방정식에 기반하여 IC50 값을 계산하였다.
시험 결과를 표 4에 나타내었다.
[표 4]
시험 결과
Figure PCTKR2023014439-appb-img-000098
<시험예 4: in vitro microsomes 대사안정성 평가>
시험절차
mouse, human liver microsomes를 이용하여 유도체의 Phase Ⅰ (CYP) 및 Phase Ⅱ (UGT) 대사에 대한 안정성을 평가하기 위하여 대사 반응의 조효소로서 NADPH 및 UDPGA를 동시 처리하며, 총 45분 또는 90분 간 37℃ 조건에서 대사 반응을 진행한다.
이 때 최종 반응액 내 시험물질의 최종 농도는 1 μM이며, 최초 반응 개시 시점으로부터 계획한 시간에 따라 반응액을 일정량 취하고, 반응액 용적의 4배만큼 내부표준물질을 함유한 메탄올을 첨가하여 단백 침전한다. 단백 침전을 통해 추출한 시료는 원심분리한 후 상등액을 LC-MS/MS에 주입하여 정량 분석한다.
각 시료의 LC-MS/MS 분석으로 얻어진 신규 유도체의 피크면적을 내부표준물질의 피크면적으로 나눈 비(peak area ratio)를 산출하고, 0분 시료의 peak area ratio 대비 각 시간 대별 시료의 peak area ratio의 백분율로서 대사안정성(%)을 산출한다.
각 반응시간 별 대사안정성의 프로파일로부터 얻어진 elimination rate constant를 이용하여 rat, human microsomes에 대한 신규 유도체의 intrinsic clearance(CLint)를 산출하고, 각 시험 종별 CLint 분류 기준에 따라 low, medium 또는 high CLint 로서 그 수준을 구분하여 제시한다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 구체예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 바람직한 실시예 및 다양한 대안적인 실시예를 참조하여 구체적으로 도시되고 설명되었지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 형태 및 세부사항의 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 1의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000099
    화학식 1에서,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000100
    는 치환 또는 비치환된 C7-20융합헤테로아릴 또는 치환 또는 비치환된 C6-15아릴이고;
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 각각 수소, C1-6알킬, 또는 할로겐이고;
    X3는 결합, C1-6알킬렌, C3-8사이클로알킬렌, 또는 -(C1-3알킬)-(C3-8사이클로알킬)-(C1-3알킬)- 이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 C1-3알킬로 치환 또는 비치환되고;
    Y1은 아미노, -NH(C1-6알킬), -N(C1-3알킬)2, 또는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의 C3-20헤테로사이클이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, -(CH2)0-3-(C1-6알콕시), 시아노, 아미노, NH(C1-6알킬), N(C1-3알킬)2, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고,
    b는 0 내지 1의 정수이고;
    X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고;
    X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
    선택적으로 X1과 X2가 결합하여 하기 화학식 2의 고리를 형성하고;
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000101
    각각의 R3은 수소, 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3알켄일, C1-3할로알킬, -L3-NH2, -NH(C1-3알킬), -N(C1-3알킬)2, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -C(O)N(R5)2, -NHC(0)H, -CN, 아릴, -(CH2)1-2S(O)2N(R5)2, -NH-S(O)2N(R5)2, -O-S(O)2N(R5)2, -S(O)2R5, 및 -C(O)NH2로부터 독립적으로 선택된 어느 하나이고; 또는
    선택적으로 인접한 원자 상의 2개 이상의 R3은 서로 결합하여 C3-6사이클로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 또는 헤테로사이클을 형성하고, 화학식 2의 화합물과 함께 융합되어 1 내지 4개의 R4로 치환 또는 비치환되는 융합 고리를 형성하고;
    L3은 결합, -C1-4알킬-, -C1-4알킬-NH-, -NH-, 또는 -N(C1-3알킬)-이고;
    R4는 각각 독립적으로 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 옥소(=O), -N(R5)2, -N(R5)C(O)R5, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -C(O)N(R5)2, 헤테로아릴, 또는 -CN이고;
    R5는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 C1-3알킬이고;
    o는 1 내지 8의 정수이고;
    W는 상기 화학식 2의 화합물에서 결합이거나, -(CH2)m-O-(CH2)n-, -(CH2)m-N-(CH2)n-, 및 -(CH2)n- 로부터 선택되는 어느 하나이고;
    n은 0 내지 4의 정수이고;
    m은 0 내지 2의 정수이고,
    헤테로아릴, 헤테로사이클, 또는 융합헤테로아릴은 각각 N, S 또는 O 중 어느 하나 이상을 헤테로 원자로 포함한다.
  2. 청구항 1에 있어서,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000102
    는 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, 하이드록시, 시아노, 아미노, -NH(C1-C6알킬) 및 -N(C1-3알킬)2 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는 C7-20융합헤테로아릴 또는 C6-15아릴이고;
    R1 및 R2는 할로겐이고;
    X3는 C1-3알킬로 치환되거나 비치환된 C1-3알킬렌 또는 -(C1-3알킬)-(C3-8사이클로알킬)-(C1-3알킬)- 이고;
    Y1은 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 바이사이클릭 이상의 C3-20헤테로사이클로알킬이고, 이들은 서로 독립적으로 각각 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
    b는 0 내지 1의 정수이고;
    X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고,
    X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
    X1과 X2가 결합하여 4-10원의 헤테로사이클 또는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성하고, 이들은
    하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3할로알킬, -NH(C1-3알킬), -N(C1-3알킬)2, 옥소(=O), -O-(C1-3알킬), -(C1-3알킬)-OH, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3알킬), -CN, 및 -C(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 비치환되는 것인 화합물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000103
    는 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C2-6알켄일, C1-6알콕시, 하이드록시, 시아노, 아미노, -NH(C1-C6알킬) 및 -N(C1-3알킬)2 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000104
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000105
    , 또는
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000106
    인 것인 화합물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    R1은 불소 또는 염소이고;
    R2는 불소인 것인 화합물.
  5. 청구항 1에 있어서,
    X3는 C1-6알킬렌, C3-8사이클로알킬렌, 또는 -(C1-3알킬렌)-(C3-8사이클로프로필렌)-(C1-3알킬렌)- 이고;
    Y1은 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되고, N 또는 O 중 어느 하나의 헤테로원자를 포함하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭의 C3-20헤테로사이클인 화합물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    b는 0 이고; 또는
    b는 1 이고, 이 때 화학식 1에서 -O-X3-Y1은 각각 독립적으로 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환되거나 또는 비치환되는,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000107
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000108
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000109
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000110
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000111
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000112
    , 또는
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000113
    중 어느 하나인 것인 화합물.
  7. 청구항 1에 있어서,
    X1은 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 각각 치환되거나 비치환되는 C3-6사이클로알킬 또는 -(C1-4알킬렌)-(C3-6사이클로알킬)이고, X2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; 또는
    X1과 X2가 결합하여 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, C1-3알켄일, 또는 옥소(=O)로 1 내지 4회 치환되거나 비치환되는 4-10원의 헤테로사이클을 형성하거나, 또는
    하이드록시, 할로겐, 또는 C1-3알킬로 1 내지 4회 치환되거나 비치환되는 4-10원의 융합헤테로아릴을 형성하는 것인 화합물.
  8. 청구항 1에 있어서, X1과 X2가 결합하여 화학식 1에서 -NX1X2의 질소와 함께
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000114
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000115
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000116
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000117
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000118
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000119
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000120
    , 및
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000121
    중에서 선택되는 융합 고리를 형성하고, 이들은 서로 독립적으로 각각 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 및 옥소(=O) 중에서 선택되는 1 내지 4개의 치환기로 치환되거나 비치환되는 것인 화합물.
  9. 청구항 1에 있어서,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000122
    는 나프틸, 벤조티아졸, 또는 벤조티오펜이고, 이들은 각각 할로겐, C1-3알킬, 하이드록시, 시아노, 및 아미노, 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
    R1은 불소 또는 염소이고;
    R2는 불소이고;
    X3는 -CH2-, -C(C1-3알킬)-, 또는
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000123
    이고;
    Y1은 아제티딘, 피롤리딘, 피롤리지딘, 2-옥사바이사이클로[2.1.1]헥산, 또는 옥사바이사이클로[2.1.1]헥산이고, 이들은 각각 할로겐, C1-3알킬, 할로C1-3알킬, C1-3알콕시, =CH2, =O, 및 =S 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
    b는 0 또는 1이고;
    X1은 C3-6사이클로알킬 또는 -CH2-(C3-6사이클로알킬)이고, 이들은 각각 C1-3알킬, 할로겐, 아미노, -N(C1-3알킬)2, 및 -NH(C1-3알킬) 중에서 선택되는 어느 하나 이상의 치환기로 치환 또는 비치환되고;
    X2는 수소 또는 C1-3알킬이고; 또는
    X1과 X2가 결합하여 피페리딘, 아제판, 옥사제판, 부분적으로 불포화된 이미다조[1,5-a]피라진, 또는 부분적으로 불포화된 2,6-나프티리딘을 형성하고, 이들은 서로 독립적으로 각각 하이드록시, 할로겐, C1-3알킬, 및 옥소(=O) 중에서 선택되는 1 내지 4개의 치환기로 치환 또는 비치환되는 것인 화합물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은 하기 화합물로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000124
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000125
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000126
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000127
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000128
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000129
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000130
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000131
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000132
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000133
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000134
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000135
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000136
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000137
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000138
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000139
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000140
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000141
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000142
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000143
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000144
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000145
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000146
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000147
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000148
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000149
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000150
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000151
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000152
    .
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000153
    ,
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000154
    , 및
    Figure PCTKR2023014439-appb-img-000155
    .
  11. 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 부분입체 이성질체, 거울상이성질체, 회전장애이성질체, 이의 용매화물, 이의 동위원소변형체, 이의 호변이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 치료를 위한 약학적 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, KRAS 단백질 저해 활성을 나타내는 것인 약학적 조성물.
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