WO2023204264A1 - 液状医薬組成物 - Google Patents
液状医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2023204264A1 WO2023204264A1 PCT/JP2023/015717 JP2023015717W WO2023204264A1 WO 2023204264 A1 WO2023204264 A1 WO 2023204264A1 JP 2023015717 W JP2023015717 W JP 2023015717W WO 2023204264 A1 WO2023204264 A1 WO 2023204264A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- liquid pharmaceutical
- injection
- syringe
- test example
- Prior art date
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 226
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 220
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 231
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 231
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 144
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 144
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 144
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 claims description 26
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 abstract description 61
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 207
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 107
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 85
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 62
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 53
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 40
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 24
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 22
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 21
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 20
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 15
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 15
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 14
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 12
- 239000003721 gunpowder Substances 0.000 description 12
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 10
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 9
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 9
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 9
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 8
- YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N magnesium nitrate Chemical compound [Mg+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WWSJZGAPAVMETJ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-ethoxypyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)OCC WWSJZGAPAVMETJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-5-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1CC)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 5
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 229960001983 magnesium aspartate Drugs 0.000 description 5
- RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L magnesium;(2s)-2-amino-4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [H+].[H+].[Mg+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O.[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L 0.000 description 5
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 5
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CC LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 4
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 4
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 4
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 4
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 4
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- VWVRASTUFJRTHW-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(azetidin-3-yloxy)-4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound O=C(CN1C=C(C(OC2CNC2)=N1)C1=CN=C(NC2CC3=C(C2)C=CC=C3)N=C1)N1CCC2=C(C1)N=NN2 VWVRASTUFJRTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000567 combustion gas Substances 0.000 description 3
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- AXZAYXJCENRGIM-UHFFFAOYSA-J dipotassium;tetrabromoplatinum(2-) Chemical compound [K+].[K+].[Br-].[Br-].[Br-].[Br-].[Pt+2] AXZAYXJCENRGIM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- -1 fatty acid ester Chemical class 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229910001487 potassium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001044384 Mus musculus Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- IWOUKMZUPDVPGQ-UHFFFAOYSA-N barium nitrate Chemical compound [Ba+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O IWOUKMZUPDVPGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- MIVBAHRSNUNMPP-UHFFFAOYSA-N manganese(2+);dinitrate Chemical compound [Mn+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O MIVBAHRSNUNMPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 2
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N zinc nitrate Chemical compound [Zn+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QLTGEMIEWNAURK-DKWTVANSSA-L (2s)-2-aminobutanedioate;barium(2+) Chemical compound [Ba+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O QLTGEMIEWNAURK-DKWTVANSSA-L 0.000 description 1
- GYUKEMYHXWICKF-DKWTVANSSA-N (2s)-2-aminobutanedioic acid;calcium Chemical compound [Ca].OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GYUKEMYHXWICKF-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- KSNGEYQWLMRSIR-UHFFFAOYSA-L 2-hydroxypropanoate;manganese(2+) Chemical compound [Mn+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O KSNGEYQWLMRSIR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000557639 Araucaria bidwillii Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001340526 Chrysoclista linneella Species 0.000 description 1
- OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L Copper gluconate Chemical compound [Cu+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N Copper oxide Chemical compound [Cu]=O QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005751 Copper oxide Substances 0.000 description 1
- 229910021592 Copper(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010073753 Fear of injection Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- DKKCQDROTDCQOR-UHFFFAOYSA-L Ferrous lactate Chemical compound [Fe+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O DKKCQDROTDCQOR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 229910021577 Iron(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L Zinc gluconate Chemical compound [Zn+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- CANRESZKMUPMAE-UHFFFAOYSA-L Zinc lactate Chemical compound [Zn+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O CANRESZKMUPMAE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N Zirconium Chemical compound [Zr] QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- ITHZDDVSAWDQPZ-UHFFFAOYSA-L barium acetate Chemical compound [Ba+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O ITHZDDVSAWDQPZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- PECPTSUHUFWKDG-IYEMJOQQSA-L barium(2+);(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ba+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O PECPTSUHUFWKDG-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- HLKMEIITONDPGG-UHFFFAOYSA-L barium(2+);2-hydroxypropanoate Chemical compound [Ba+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O HLKMEIITONDPGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229910000416 bismuth oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229940034055 calcium aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910000431 copper oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- DYROSKSLMAPFBZ-UHFFFAOYSA-L copper;2-hydroxypropanoate Chemical compound [Cu+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O DYROSKSLMAPFBZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011642 cupric gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000019856 cupric gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N dibismuth;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Bi+3].[Bi+3] TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000004222 ferrous gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000013924 ferrous gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004225 ferrous lactate Substances 0.000 description 1
- 235000013925 ferrous lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010781 infectious medical waste Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L iron dichloride Chemical compound Cl[Fe]Cl NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MVFCKEFYUDZOCX-UHFFFAOYSA-N iron(2+);dinitrate Chemical compound [Fe+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O MVFCKEFYUDZOCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- LNOZJRCUHSPCDZ-UHFFFAOYSA-L iron(ii) acetate Chemical compound [Fe+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O LNOZJRCUHSPCDZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VRIVJOXICYMTAG-IYEMJOQQSA-L iron(ii) gluconate Chemical compound [Fe+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O VRIVJOXICYMTAG-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 1
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011654 magnesium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000011285 magnesium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940069446 magnesium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001755 magnesium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000015778 magnesium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003035 magnesium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- OVGXLJDWSLQDRT-UHFFFAOYSA-L magnesium lactate Chemical compound [Mg+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O OVGXLJDWSLQDRT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000626 magnesium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000015229 magnesium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004658 magnesium lactate Drugs 0.000 description 1
- IAKLPCRFBAZVRW-XRDLMGPZSA-L magnesium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;hydrate Chemical compound O.[Mg+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O IAKLPCRFBAZVRW-XRDLMGPZSA-L 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- OXHQNTSSPHKCPB-IYEMJOQQSA-L manganese(2+);(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Mn+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OXHQNTSSPHKCPB-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- UOGMEBQRZBEZQT-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);diacetate Chemical compound [Mn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UOGMEBQRZBEZQT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000476 molybdenum oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 231100000989 no adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- PQQKPALAQIIWST-UHFFFAOYSA-N oxomolybdenum Chemical compound [Mo]=O PQQKPALAQIIWST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000048 titanium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
- 229960000314 zinc acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000013904 zinc acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940062776 zinc aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011670 zinc gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000011478 zinc gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000306 zinc gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000011576 zinc lactate Substances 0.000 description 1
- 235000000193 zinc lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229940050168 zinc lactate Drugs 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- POEVDIARYKIEGF-CEOVSRFSSA-L zinc;(2s)-2-aminobutanedioate;hydron Chemical compound [Zn+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC(O)=O.[O-]C(=O)[C@@H](N)CC(O)=O POEVDIARYKIEGF-CEOVSRFSSA-L 0.000 description 1
- 229910052726 zirconium Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/06—Aluminium, calcium or magnesium; Compounds thereof, e.g. clay
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/32—Manganese; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
- A61M5/178—Syringes
- A61M5/30—Syringes for injection by jet action, without needle, e.g. for use with replaceable ampoules or carpules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本開示の課題は、少なくとも、下記の提供である。すなわち、注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性が得られる技術の提供であり、上記課題を、液状医薬組成物であって、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、液状医薬組成物で解決する。
Description
本開示は、液状医薬組成物に関する。
近年、薬液投与の医療機器に関して、針への恐怖症対策や、ユーザビリティの追求、感染性廃棄物量の低減等の観点から、無針注射器に対する関心が高まっている。一般的に、無針注射器は、圧縮ガスやバネの力を駆動力にして、ノズル先端から薬液を押し出し、生体内に薬液を投与するものとして知られている（非特許文献１）。また、点火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用した無針注射器が開発されている（特許文献１）。
点火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用した前記無針注射器は、瞬時に薬液を押し出して投与を行う事から、細胞の核やサイトゾルにまで薬液を送達させることを可能としたものである。前記無針注射器の有用性は、ドラッグデリバリーシステム（DDS）の観点からも注目されており、抗ガン作用のある、低分子、ペプチド、タンパク質、抗体などを用いた、種々の薬剤において応用の検討がなされている。特に、ワクチンや免疫の領域においては、前記無針注射器は、抗体価の上昇や細胞性免疫の誘導を可能とすることが報告されている（非特許文献２）。
ワクチンの領域においては、新型コロナウイルスSARS-CoV-2に対するワクチンの開発などの大きなブレイクスルーが発生している。該ワクチンの中でもmRNAを有効成分としたワクチンは、臨床試験における高い有効性が示された後（非特許文献３）、全世界にて使用され、大きなインパクトを与えた。前記mRNAワクチンは新規のモダリティであり、技術的な特異点であるとして期待されている。
一方で、核酸ワクチンは、十分な抗体価を得るにあたり、核酸に含まれる遺伝子の非常に高い発現を必要とする。実際に幅広く使用されているSARS-CoV-2に対する核酸ワクチンでは、いずれも、遺伝子発現の向上のために脂質ナノ粒子（Lipid NanoParticle, LNP）が使用されている。しかし、LNPの新規開発は多大な労力を必要とするのみならず、製造コストも大きい。また、LNPに用いられるポリエチレングリコール（PEG）に起因するアナフィラキシーショックなどの安全性に関する懸念も存在する。そのため、LNPを使用せずに遺伝子の発現を高める技術が切望されている。また、無針注射器を用いて遺伝子を含む核酸を注射対象に投与する場合も、LNPに匹敵する程の遺伝子の発現を達成すべく改良が進められている。
Clin. Cosmet. Investig. Dermatol., 2018 May 1;11:231-238
AAPS PharmSciTech., 2019 Dec 9;21(1):19
厚生労働省、ファイザー社の新型コロナワクチンについて、[ｏｎｌｉｎｅ]、 [令和４年３月１１日検索]、インターネット＜https://www.mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/vaccine_pfizer.html＞
本開示の課題は、少なくとも、下記の提供である。すなわち、注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性が得られる技術の提供である。
本発明者は、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器を用いて前記液状医薬組成物を注入対象に注入する際に、前記液状医薬組成物が２価の陽イオンを含み、該２価の陽イオンの濃度を総量で所定の範囲に設定することにより上記課題を解決できることを見出した。
本開示の一実施形態は、
液状医薬組成物であって、
核酸と２価の陽イオンとを含み、
前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、
液状医薬組成物である。
液状医薬組成物であって、
核酸と２価の陽イオンとを含み、
前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、
液状医薬組成物である。
前記液状医薬組成物は、前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数であることを好ましい態様としている。
また、前記液状医薬組成物は、前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されることが、注入対象にジェット注射によって注入されることであることを好ましい態様としている。
また、前記液状医薬組成物は、細胞性免疫誘導用であることを好ましい態様としている。
また、前記液状医薬組成物は、前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されることが、注入対象にジェット注射によって注入されることであることを好ましい態様としている。
また、前記液状医薬組成物は、細胞性免疫誘導用であることを好ましい態様としている。
本開示の他の一実施態様は、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器であって、
液状医薬組成物を収容した収容部と、
前記収容部と連通するノズル部であって、前記液状医薬組成物を注入対象に向けて射出するための射出口を有するノズル部と、
作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する加圧部と、
を備え、
前記液状医薬組成物が、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、
注入器である。
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器であって、
液状医薬組成物を収容した収容部と、
前記収容部と連通するノズル部であって、前記液状医薬組成物を注入対象に向けて射出するための射出口を有するノズル部と、
作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する加圧部と、
を備え、
前記液状医薬組成物が、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、
注入器である。
前記注入器は、前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数であることを好ましい態様としている。
また、本開示の他の一実施態様は、
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する方法である。
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する方法である。
前記方法は、前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数であることを好ましい態様としている。
本開示は、少なくとも、下記効果を奏しうる。すなわち、注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性が得られる技術を提供できるという効果を奏しうる。
各実施形態における各構成及びそれらの組み合わせ等は、一例であって、本開示の主旨から逸脱しない範囲内で、適宜、構成の付加、省略、置換、及びその他の変更が可能である。本開示は、実施形態によって限定されることはなく、クレームの範囲によってのみ限定される。また、本明細書に開示された各々の態様は、本明細書に開示された他のいかなる特徴とも組み合わせることができる。
本開示の一実施態様は、
液状医薬組成物であって、
核酸と２価の陽イオンとを含み、
前記２価の陽イオンの濃度が、総量で、0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、
液状医薬組成物である。
液状医薬組成物であって、
核酸と２価の陽イオンとを含み、
前記２価の陽イオンの濃度が、総量で、0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、
液状医薬組成物である。
（核酸）
本実施態様に係る液状医薬組成物が含む核酸は、注入対象において生理活性を発揮する核酸であれば特に制限されない。
前記核酸は、ＤＮＡでもＲＮＡでもよい。また、前記核酸は、タンパク質をコードする部分を含む核酸であってもよいし、タンパク質をコードする部分を含まない核酸（非コード核酸）であってもよい。また、前記液状医薬組成物に含まれる前記核酸は、一種でもよいし複数種でもよい。
本実施態様に係る液状医薬組成物が含む核酸は、注入対象において生理活性を発揮する核酸であれば特に制限されない。
前記核酸は、ＤＮＡでもＲＮＡでもよい。また、前記核酸は、タンパク質をコードする部分を含む核酸であってもよいし、タンパク質をコードする部分を含まない核酸（非コード核酸）であってもよい。また、前記液状医薬組成物に含まれる前記核酸は、一種でもよいし複数種でもよい。
前記核酸が、タンパク質をコードする部分を含む核酸である場合としては、下記が挙げられる。
例えば、前記核酸が遺伝子を含むＤＮＡであれば、タンパク質の産生のためのｍＲＮＡの合成（転写）の際の鋳型となるという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
また、前記核酸がｍＲＮＡであれば、タンパク質の合成（翻訳）の際の鋳型となるという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、産生するタンパク質の量で評価することができる。
例えば、前記核酸が遺伝子を含むＤＮＡであれば、タンパク質の産生のためのｍＲＮＡの合成（転写）の際の鋳型となるという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
また、前記核酸がｍＲＮＡであれば、タンパク質の合成（翻訳）の際の鋳型となるという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、産生するタンパク質の量で評価することができる。
また、前記生理活性は、産生したｍＲＮＡやタンパク質が増加又は減少したことに起因する、注入対象における変化に基づいて評価してもよい。例えば、注入対象が細胞性免疫の誘導され得る注入対象（例えば、個体（生体）等）であって、前記核酸が、細胞性免疫を誘導するタンパク質をコードする核酸であり、該細胞性免疫を誘導するタンパク質が増加することで、注入対象において細胞性免疫が誘導されるという変化が生じる場合には、前記核酸は細胞性免疫を誘導するという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、該注入対象における細胞性免疫の誘導量で評価することができる。また、前記細胞性免疫を誘導するタンパク質による再刺激（再感作）後の、該注入対象における細胞性免疫の誘導量で評価してもよい。
前記核酸が、タンパク質をコードする部分を含まない核酸である場合としては、下記が挙げられる。
例えば、注入対象がワクチンの投与され得る個体（生体）である場合であって、前記核酸がCpGモチーフを含むDNA (CpG DNA)やpolyinosine-polycytidylic acid (PolyI:C)であれば、ワクチンの効果を高めるためのアジュバントとしての生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、抗腫瘍効果（該効果は、例えば、腫瘍サイズの減少等で評価できる。）や免疫細胞の成熟度等で評価することができる。
また、前記核酸がsmall interfering RNA (siRNA)であれば、ｍＲＮＡを分解して配列特異的に標的遺伝子の発現を抑制するという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、該標的遺伝子に基づいて産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
また、前記核酸がアンチセンスDNAやアンチセンスRNAであれば、標的遺伝子のＲＮＡにハイブリダイズして、スプライシングの阻害や翻訳の阻害をするといった生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、該標的遺伝子に基づいて産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
例えば、注入対象がワクチンの投与され得る個体（生体）である場合であって、前記核酸がCpGモチーフを含むDNA (CpG DNA)やpolyinosine-polycytidylic acid (PolyI:C)であれば、ワクチンの効果を高めるためのアジュバントとしての生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、抗腫瘍効果（該効果は、例えば、腫瘍サイズの減少等で評価できる。）や免疫細胞の成熟度等で評価することができる。
また、前記核酸がsmall interfering RNA (siRNA)であれば、ｍＲＮＡを分解して配列特異的に標的遺伝子の発現を抑制するという生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、該標的遺伝子に基づいて産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
また、前記核酸がアンチセンスDNAやアンチセンスRNAであれば、標的遺伝子のＲＮＡにハイブリダイズして、スプライシングの阻害や翻訳の阻害をするといった生理活性を発揮するものであり、その生理活性は、定量的には、該標的遺伝子に基づいて産生するｍＲＮＡやタンパク質の量で評価することができる。
本実施態様における核酸は、注入対象に注入された際に該注入対象において生理活性を発揮し、安定して存在し、また、該注入対象を破壊するなどの悪影響がなければ、遊離の形態でもナノ粒子等の担体に固定されている形態でもよく、修飾されていてもよく、溶媒を含め、その態様は特に限定されない。
前記核酸は、天然物であってもよいし、人工的に合成されたものであってもよい。
後述の実施例では、前記核酸として、ＧＦＰ（Green Fluorescence Protein）遺伝子を含む遊離のプラスミドＤＮＡを用い、該ＧＦＰ遺伝子をレポーター遺伝子として用いた実施例や、レポータータンパク質としてのＧＦＰをコードしたｍＲＮＡを用いた実施例、オボアルブミン（Ovalbumin, OVA）をコードしたｍＲＮＡを用いた実施例を挙げている。
前記ＤＮＡが遺伝子を含む場合には、発現カセットや発現ベクターに該遺伝子が含まれた形態で設計されてよい。さらに、例えば、前記ＤＮＡが注入される注入対象および注入部位に適したプロモーターの制御下に遺伝子が配置されていてもよい。すなわち、いずれの態様においても公知の遺伝子工学的手法を用いることができる。例えば、後述の実施例では、発現ベクターとして、ＧＦＰ遺伝子を含むベクターであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）を用いた実施例を挙げている。当該プラスミドベクターは公知であり、当業者であれば入手可能である。発現ベクター及び組換えベクターのサブクローニングは公知の方法に従って行うことができる。
本実施態様において、「注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性が得られる」とは、核酸が発揮する生理活性を定量的な指標で評価した場合に、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にない液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）よりも、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、前記と同様に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）の方が大きいことをいう。
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にない液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）よりも、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、前記と同様に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）の方が大きいことをいう。
すなわち、例えば、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ｂ」とし、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂと同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ａ」とした場合に、
活性Ｂ ＜ 活性Ａ
の場合である。
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ｂ」とし、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂと同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ａ」とした場合に、
活性Ｂ ＜ 活性Ａ
の場合である。
また、本実施態様において、「注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性が得られる」とは、核酸が発揮する生理活性を定量的な指標で評価した場合に、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）よりも、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は前記と同様に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）の方が大きいことでもよい。
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）よりも、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で後述する所定の範囲内にある液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は前記と同様に注入したときの、該核酸が発揮する生理活性（該生理活性は、例えば、該生理活性を示す量であってよい。）の方が大きいことでもよい。
すなわち、例えば、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したとき（これを態様Ｃとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ｃ」とし、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃと同一条件としたとき（これを態様Ａとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ａ」とした場合に、
活性Ｃ ＜ 活性Ａ
であってもよい。
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したとき（これを態様Ｃとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ｃ」とし、
核酸を含み、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃと同一条件としたとき（これを態様Ａとする。）の、該核酸が発揮する生理活性を「活性Ａ」とした場合に、
活性Ｃ ＜ 活性Ａ
であってもよい。
前記核酸が発揮する生理活性を定量的な指標（例えば、発現の量、細胞性免疫の誘導量、抗腫瘍効果、免疫細胞の成熟度等）で評価する場合、該定量的な指標は、前記核酸が発揮する生理活性によって適宜設定すればよい。
前記定量的な指標は、例えば、前記核酸がＤＮＡであって遺伝子を含む場合であれば、例えば、それを鋳型として産生するｍＲＮＡやそのｍＲＮＡを鋳型として産生するタンパク質の量（通常は該遺伝子の発現量として評価される。）等が挙げられる。
また、例えば、前記核酸がｍＲＮＡであれば、例えば、それを鋳型として産生するタンパク質の量等が挙げられる。
また、例えば、前記核酸がｍＲＮＡであれば、例えば、それを鋳型として産生するタンパク質の量等が挙げられる。
すなわち、例えば、前記核酸がＤＮＡであって遺伝子を含む場合であり、前記定量的な指標が、該遺伝子の発現量である場合には、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ｂ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂ１と同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ａ１」とした場合に、
発現量Ｂ１ ＜ 発現量Ａ１
である。
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ｂ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂ１と同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ａ１」とした場合に、
発現量Ｂ１ ＜ 発現量Ａ１
である。
また、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したとき（これを態様Ｃ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ｃ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃ１と同一条件としたとき（これを態様Ａ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ａ１」とした場合に、
発現量Ｃ１ ＜ 発現量Ａ１
であってよい。
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃ１と同一条件としたとき（これを態様Ａ１とする。）の、該遺伝子の発現量を「発現量Ａ１」とした場合に、
発現量Ｃ１ ＜ 発現量Ａ１
であってよい。
また前記定量的な指標は、例えば、前記核酸が細胞性免疫を誘導するタンパク質をコードする核酸であり、前記定量的な指標が、細胞性免疫の誘導量である場合には、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂ２とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ｂ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂ１と同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａ１とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ａ１」とした場合に、
誘導量Ｂ１ ＜ 誘導量Ａ１
である。
このことは、前記該細胞性免疫を誘導するタンパク質の再刺激（再感作）後の、該注入対象における細胞性免疫の誘導量でも同様である。
前記細胞性免疫の誘導量とは、細胞性免疫の誘導の程度を示すものであればよく、例えば、後述する実施例のようにELISpotキットを用いたときのspot数等であってよい。
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM未満81.1 mM以上の液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したとき（これを態様Ｂ２とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ｂ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さくしたこと以外は態様Ｂ１と同一条件とし、前記と同様に液状医薬組成物を注入対象に注入したとき（これを態様Ａ１とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ａ１」とした場合に、
誘導量Ｂ１ ＜ 誘導量Ａ１
である。
このことは、前記該細胞性免疫を誘導するタンパク質の再刺激（再感作）後の、該注入対象における細胞性免疫の誘導量でも同様である。
前記細胞性免疫の誘導量とは、細胞性免疫の誘導の程度を示すものであればよく、例えば、後述する実施例のようにELISpotキットを用いたときのspot数等であってよい。
また、２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、有針注射器によって注射対象に注射したとき（これを態様Ｃ１とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ｃ１」とし、
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃ１と同一条件としたとき（これを態様Ａ１とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ａ１」とした場合に、
誘導量Ｃ１ ＜ 誘導量Ａ１
であってよい。
このことは、前記該細胞性免疫を誘導するタンパク質の再刺激（再感作）後の、該注入対象における細胞性免疫の誘導量でも同様である。
２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入したこと以外は態様Ｃ１と同一条件としたとき（これを態様Ａ１とする。）の、該細胞性免疫の誘導量を「誘導量Ａ１」とした場合に、
誘導量Ｃ１ ＜ 誘導量Ａ１
であってよい。
このことは、前記該細胞性免疫を誘導するタンパク質の再刺激（再感作）後の、該注入対象における細胞性免疫の誘導量でも同様である。
前記定量的な指標の評価方法としては、例えば、前記液状医薬組成物を注入対象に注入した後、該注入対象の全部又は一部を用いて、前記核酸が発揮する生理活性に従って適宜選択することができる。
例えば、後述の実施例のように、注入対象が個体（生体）であって、前記核酸が遺伝子を含むＤＮＡであり、注入部位周辺（すなわち、注入対象の一部）における該遺伝子の発現量を評価するような場合には、前記液状医薬組成物を注入対象に注入した後、該注入部位の周辺を取得し、前記核酸が発揮する生理活性に従って適宜選択することができる。
また、後述の実施例のように、公知の方法により、サンプルを調製しタンパク質の産生量をもって前記核酸が発揮する生理活性を評価することができる。後述の実施例では、産生するタンパク質がGFPタンパク質であるため、蛍光輝度を指標にして生理活性を評価している。
また、例えば、後述の実施例のように、注入対象が個体（生体）であり、前記核酸が細胞性免疫を誘導するタンパク質をコードする核酸であって、細胞性免疫の誘導量を評価するような場合には、前記液状医薬組成物を注入対象に注入した後、該個体（生体）そのもの（すなわち、注入対象の全部）を用い、細胞性免疫の誘導量を評価する公知の方法等を用いて、細胞性免疫の誘導量を評価することができる。
例えば、後述の実施例のように、注入対象が個体（生体）であって、前記核酸が遺伝子を含むＤＮＡであり、注入部位周辺（すなわち、注入対象の一部）における該遺伝子の発現量を評価するような場合には、前記液状医薬組成物を注入対象に注入した後、該注入部位の周辺を取得し、前記核酸が発揮する生理活性に従って適宜選択することができる。
また、後述の実施例のように、公知の方法により、サンプルを調製しタンパク質の産生量をもって前記核酸が発揮する生理活性を評価することができる。後述の実施例では、産生するタンパク質がGFPタンパク質であるため、蛍光輝度を指標にして生理活性を評価している。
また、例えば、後述の実施例のように、注入対象が個体（生体）であり、前記核酸が細胞性免疫を誘導するタンパク質をコードする核酸であって、細胞性免疫の誘導量を評価するような場合には、前記液状医薬組成物を注入対象に注入した後、該個体（生体）そのもの（すなわち、注入対象の全部）を用い、細胞性免疫の誘導量を評価する公知の方法等を用いて、細胞性免疫の誘導量を評価することができる。
また、本実施態様において、注入対象において生理活性を発揮する核酸を含有する液状医薬組成物を注入対象に注入した際に得られる生理活性は、長時間にわたって発揮されるものである。
前記核酸の種類や、注入対象、前記核酸が注入された注入対象において前記核酸が発揮する生理活性等によって前記生理活性が発揮される時期は異なり、通常、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から所定の時間が経過した後に発揮される。
前記生理活性の発揮が開始される時刻（始期）は、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻からできるだけ早い方が好ましいが、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から、例えば６時間後である。一方で、前記生理活性の発揮が終了する時刻（終期）は、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻からできるだけ遅い方が好ましいが、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から、例えば、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、１４日後である。
前記核酸の種類や、注入対象、前記核酸が注入された注入対象において前記核酸が発揮する生理活性等によって前記生理活性が発揮される時期は異なり、通常、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から所定の時間が経過した後に発揮される。
前記生理活性の発揮が開始される時刻（始期）は、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻からできるだけ早い方が好ましいが、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から、例えば６時間後である。一方で、前記生理活性の発揮が終了する時刻（終期）は、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻からできるだけ遅い方が好ましいが、前記液状医薬組成物が注入対象に注入された時刻から、例えば、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、１４日後である。
（２価の陽イオン）
本実施態様に係る液状医薬組成物における２価の陽イオンの濃度の総量が所定の範囲内であると、該液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入した際に、従来の液状医薬組成物を注入した場合に比べて高い生理活性が得られる。
本実施態様に係る液状医薬組成物における２価の陽イオンの濃度の総量が所定の範囲内であると、該液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入した際に、従来の液状医薬組成物を注入した場合に比べて高い生理活性が得られる。
前記所定の範囲の下限としては、例えば、0.0406 mM以上、0.203 mM以上、0.406 mM以上、0.492 mM以上、2.03 mM以上、3.47 mM以上、3.9 mM以上、4.06 mM以上、4.15 mM以上、4.92 mM以上、6.8 mM以上、40.6 mM以上、49.2 mM以上である。
前記液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性を得られるメカニズムは明らかではないが、下記のように推測される。なお、本開示は、下記推測によって限定されるものではない。
原子間力顕微鏡（Atomic Force Microscope, AFM）を用いた核酸研究や細胞分裂期の染色体凝縮の研究において、核酸は、マグネシウムイオンのような２価の陽イオンが共存することにより電荷的な架橋を誘起し、凝集する作用を有している事が良く知られている。
一方、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器による細胞内への核酸の送達は、注入を瞬時に行い高エネルギーを掛ける事により、核酸が細胞膜を物理的に通過することにより達成されるものである。細胞膜の構造はリン脂質の二重層膜であり、核酸が細胞膜を物理的に通過する場合には、レセプターや細胞膜への吸着を介したものとは異なり、粒子径などの立体障害が、通過の効率に大きく影響する事が明らかとなっている。事実として、ナノ粒子の細胞膜の直接的な通過は、小さな粒子径である事が望ましいと報告されている。
以上から、核酸と２価の陽イオンが共存する事で、核酸の粒子化と流体力学的径の減少が誘起され、核酸の細胞内への送達が効率化するものと推測される。そして、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器を用いた場合の細胞内への核酸の送達が効率化され、高い生理活性が得られると推測される。
以上に基づき、注入対象が細胞である場合又は細胞を含むものである場合には、前記２価の陽イオンの濃度の総量がより大きい方が、核酸の粒子化がされやすく、流体力学的径が減少しやすくなる結果、細胞内への核酸の注入量が増加しやすく、高い生理活性が得られやすくなると推測される。逆に言うと、前記２価の陽イオンの濃度の総量がより小さい方が、核酸の粒子化がされにくく、流体力学的径が減少しにくい結果、細胞内への核酸の注入量も増加しにくく、高い生理活性が得られにくいと推測される。
前記液状医薬組成物を注入対象に注入した際に高い生理活性を得られるメカニズムは明らかではないが、下記のように推測される。なお、本開示は、下記推測によって限定されるものではない。
原子間力顕微鏡（Atomic Force Microscope, AFM）を用いた核酸研究や細胞分裂期の染色体凝縮の研究において、核酸は、マグネシウムイオンのような２価の陽イオンが共存することにより電荷的な架橋を誘起し、凝集する作用を有している事が良く知られている。
一方、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器による細胞内への核酸の送達は、注入を瞬時に行い高エネルギーを掛ける事により、核酸が細胞膜を物理的に通過することにより達成されるものである。細胞膜の構造はリン脂質の二重層膜であり、核酸が細胞膜を物理的に通過する場合には、レセプターや細胞膜への吸着を介したものとは異なり、粒子径などの立体障害が、通過の効率に大きく影響する事が明らかとなっている。事実として、ナノ粒子の細胞膜の直接的な通過は、小さな粒子径である事が望ましいと報告されている。
以上から、核酸と２価の陽イオンが共存する事で、核酸の粒子化と流体力学的径の減少が誘起され、核酸の細胞内への送達が効率化するものと推測される。そして、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器を用いた場合の細胞内への核酸の送達が効率化され、高い生理活性が得られると推測される。
以上に基づき、注入対象が細胞である場合又は細胞を含むものである場合には、前記２価の陽イオンの濃度の総量がより大きい方が、核酸の粒子化がされやすく、流体力学的径が減少しやすくなる結果、細胞内への核酸の注入量が増加しやすく、高い生理活性が得られやすくなると推測される。逆に言うと、前記２価の陽イオンの濃度の総量がより小さい方が、核酸の粒子化がされにくく、流体力学的径が減少しにくい結果、細胞内への核酸の注入量も増加しにくく、高い生理活性が得られにくいと推測される。
また、前記所定の範囲の上限としては、例えば、81.1 mMより小さいこと、49.2 mM以下、40.6 mM以下、6.8 mM以下、4.92 mM以下、4.15 mM以下、4.06 mM以下、3.9 mM以下、3.47 mM以下、2.03 mM以下、0.492 mM以下、0.406 mM以下、0.203 mM以下である。
前記２価の陽イオンの濃度の総量がより小さい方が、前記液状医薬組成物が注入されることによる注入対象の負荷をできるだけ抑制することができる。例えば、注入対象が細胞である場合又は細胞を含むものである場合に、細胞が損傷したり死滅したりすることをできるだけ抑制することができる。
前記２価の陽イオンの濃度の総量がより小さい方が、前記液状医薬組成物が注入されることによる注入対象の負荷をできるだけ抑制することができる。例えば、注入対象が細胞である場合又は細胞を含むものである場合に、細胞が損傷したり死滅したりすることをできるだけ抑制することができる。
前記所定の範囲の上限と下限は、上限を採用する理由と下限を採用する理由とに鑑み、上記した上限の例と下限の例から選択した矛盾しない組み合わせであってよい。具体的には下記であってよい。
例えば、0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、0.0406 mM以上49.2 mM以下、0.0406 mM以上40.6 mM以下、0.0406 mM以上6.8 mM以下、0.0406 mM以上4.92 mM以下、0.0406 mM以上4.15 mM以下、0.0406 mM以上4.06 mM以下、0.0406 mM以上3.9 mM以下、0.0406 mM以上3.47 mM以下、0.0406 mM以上2.03 mM以下、0.0406 mM以上0.492 mM以下、0.0406 mM以上0.406 mM以下、または0.0406 mM以上0.203 mM以下であってよい。
また、例えば、0.203 mM以上81.1 mMより小さい、0.203 mM以上49.2 mM以下、0.203 mM以上40.6 mM以下、0.203 mM以上6.8 mM以下、0.203 mM以上4.92 mM以下、0.203 mM以上4.15 mM以下、0.203 mM以上4.06 mM以下、0.203 mM以上3.9 mM以下、0.203 mM以上3.47 mM以下、0.203 mM以上2.03 mM以下、0.203 mM以上0.492 mM以下、または0.203 mM以上0.406 mM以下であってよい。
また、例えば、0.406 mM以上81.1 mMより小さい、0.406 mM以上49.2 mM以下、0.406 mM以上40.6 mM以下、0.406 mM以上6.8 mM以下、0.406 mM以上4.92 mM以下、0.406 mM以上4.15 mM以下、0.406 mM以上4.06 mM以下、0.406 mM以上3.9 mM以下、0.406 mM以上3.47 mM以下、0.406 mM以上2.03 mM以下、または0.406 mM以上0.492 mM以下であってよい。
また、例えば、0.492 mM以上81.1 mMより小さい、0.492 mM以上49.2 mM以下、0.492 mM以上40.6 mM以下、0.492 mM以上6.8 mM以下、0.492 mM以上4.92 mM以下、0.492 mM以上4.15 mM以下、0.492 mM以上4.06 mM以下、0.492 mM以上3.9 mM以下、0.492 mM以上3.47 mM以下、または0.492 mM以上2.03 mM以下であってよい。
また、例えば、2.03 mM以上81.1 mMより小さい、2.03 mM以上49.2 mM以下、2.03 mM以上40.6 mM以下、2.03 mM以上6.8 mM以下、2.03 mM以上4.92 mM以下、2.03 mM以上4.15 mM以下、2.03 mM以上4.06 mM以下、2.03 mM以上3.9 mM以下、または2.03 mM以上3.47 mM以下であってよい。
また、例えば、3.47 mM以上81.1 mMより小さい、3.47 mM以上49.2 mM以下、3.47 mM以上40.6 mM以下、3.47 mM以上6.8 mM以下、3.47 mM以上4.92 mM以下、3.47 mM以上4.15 mM以下、3.47 mM以上4.06 mM以下、または3.47 mM以上3.9 mM以下であってよい。
また、例えば、3.9 mM以上81.1 mMより小さい、3.9 mM以上49.2 mM以下、3.9 mM以上40.6 mM以下、3.9 mM以上6.8 mM以下、3.9 mM以上4.92 mM以下、3.9 mM以上4.15 mM以下、または3.9 mM以上4.06 mM以下であってよい。
また、例えば、4.06 mM以上81.1 mMより小さい、4.06 mM以上49.2 mM以下、4.06 mM以上40.6 mM以下、4.06 mM以上6.8 mM以下、4.06 mM以上4.92 mM以下、または4.06 mM以上4.15 mM以下であってよい。
また、例えば、4.15 mM以上81.1 mMより小さい、4.15 mM以上49.2 mM以下、4.15 mM以上40.6 mM以下、4.15 mM以上6.8 mM以下、または4.15 mM以上4.92 mM以下であってよい。
また、例えば、4.92 mM以上81.1 mMより小さい、4.92 mM以上49.2 mM以下、4.92 mM以上40.6 mM以下、または4.92 mM以上6.8 mM以下であってよい。
また、例えば、6.8 mM以上81.1 mMより小さい、6.8 mM以上49.2 mM以下、または6.8 mM以上40.6 mM以下であってよい。
また、例えば、40.6 mM以上81.1 mMより小さい、または40.6 mM以上49.2 mM以下であってよい。
また、例えば、49.2 mM以上81.1 mMより小さい、であってよい。
また、例えば、0.203 mM以上81.1 mMより小さい、0.203 mM以上49.2 mM以下、0.203 mM以上40.6 mM以下、0.203 mM以上6.8 mM以下、0.203 mM以上4.92 mM以下、0.203 mM以上4.15 mM以下、0.203 mM以上4.06 mM以下、0.203 mM以上3.9 mM以下、0.203 mM以上3.47 mM以下、0.203 mM以上2.03 mM以下、0.203 mM以上0.492 mM以下、または0.203 mM以上0.406 mM以下であってよい。
また、例えば、0.406 mM以上81.1 mMより小さい、0.406 mM以上49.2 mM以下、0.406 mM以上40.6 mM以下、0.406 mM以上6.8 mM以下、0.406 mM以上4.92 mM以下、0.406 mM以上4.15 mM以下、0.406 mM以上4.06 mM以下、0.406 mM以上3.9 mM以下、0.406 mM以上3.47 mM以下、0.406 mM以上2.03 mM以下、または0.406 mM以上0.492 mM以下であってよい。
また、例えば、0.492 mM以上81.1 mMより小さい、0.492 mM以上49.2 mM以下、0.492 mM以上40.6 mM以下、0.492 mM以上6.8 mM以下、0.492 mM以上4.92 mM以下、0.492 mM以上4.15 mM以下、0.492 mM以上4.06 mM以下、0.492 mM以上3.9 mM以下、0.492 mM以上3.47 mM以下、または0.492 mM以上2.03 mM以下であってよい。
また、例えば、2.03 mM以上81.1 mMより小さい、2.03 mM以上49.2 mM以下、2.03 mM以上40.6 mM以下、2.03 mM以上6.8 mM以下、2.03 mM以上4.92 mM以下、2.03 mM以上4.15 mM以下、2.03 mM以上4.06 mM以下、2.03 mM以上3.9 mM以下、または2.03 mM以上3.47 mM以下であってよい。
また、例えば、3.47 mM以上81.1 mMより小さい、3.47 mM以上49.2 mM以下、3.47 mM以上40.6 mM以下、3.47 mM以上6.8 mM以下、3.47 mM以上4.92 mM以下、3.47 mM以上4.15 mM以下、3.47 mM以上4.06 mM以下、または3.47 mM以上3.9 mM以下であってよい。
また、例えば、3.9 mM以上81.1 mMより小さい、3.9 mM以上49.2 mM以下、3.9 mM以上40.6 mM以下、3.9 mM以上6.8 mM以下、3.9 mM以上4.92 mM以下、3.9 mM以上4.15 mM以下、または3.9 mM以上4.06 mM以下であってよい。
また、例えば、4.06 mM以上81.1 mMより小さい、4.06 mM以上49.2 mM以下、4.06 mM以上40.6 mM以下、4.06 mM以上6.8 mM以下、4.06 mM以上4.92 mM以下、または4.06 mM以上4.15 mM以下であってよい。
また、例えば、4.15 mM以上81.1 mMより小さい、4.15 mM以上49.2 mM以下、4.15 mM以上40.6 mM以下、4.15 mM以上6.8 mM以下、または4.15 mM以上4.92 mM以下であってよい。
また、例えば、4.92 mM以上81.1 mMより小さい、4.92 mM以上49.2 mM以下、4.92 mM以上40.6 mM以下、または4.92 mM以上6.8 mM以下であってよい。
また、例えば、6.8 mM以上81.1 mMより小さい、6.8 mM以上49.2 mM以下、または6.8 mM以上40.6 mM以下であってよい。
また、例えば、40.6 mM以上81.1 mMより小さい、または40.6 mM以上49.2 mM以下であってよい。
また、例えば、49.2 mM以上81.1 mMより小さい、であってよい。
前記２価の陽イオンとしては、例えば、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｂａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋等が挙げられ、好ましくは、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋である。また、前記液状医薬組成物に含まれる前記２価の陽イオンは、一種でもよいし複数種でもよい。
前記２価の陽イオンの供給源は、溶媒に溶解した際に前記２価の陽イオンを生じる「塩」であってよい。塩としては、例えば、塩化物塩、硫酸塩、硝酸塩、アスパラギン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩等が挙げられる。また、前記２価の陽イオンの供給源は、水和物の形態であってよい。
Ｍｇ２＋源としては、例えば、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、アスパラギン酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム等が挙げられる。汎用性の観点から、好ましくは、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、アスパラギン酸マグネシウムである。
Ｃａ２＋源としては、例えば、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、硝酸カルシウム、アスパラギン酸カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウム等が挙げられる。汎用性の観点から、好ましくは、塩化カルシウムである。
Ｂａ２＋源としては、例えば、塩化バリウム、硫酸バリウム、硝酸バリウム、アスパラギン酸バリウム、酢酸バリウム、乳酸バリウム、グルコン酸バリウム等が挙げられる。
Ｃｕ２＋源としては、例えば、塩化銅(II)、硫酸銅(II)、硝酸銅(II)、アスパラギン酸銅(II)、酢酸銅(II)、乳酸銅(II)、グルコン酸銅(II)等が挙げられる。
Ｆｅ２＋源としては、例えば、塩化鉄(II)、硫酸鉄(II)、硝酸鉄(II)、アスパラギン酸鉄(II)、酢酸鉄(II)、乳酸鉄(II)、グルコン酸鉄(II)等が挙げられる。
Ｍｎ２＋源としては、例えば、塩化マンガン(II)、硫酸マンガン(II)、硝酸マンガン(II)、アスパラギン酸マンガン(II)、酢酸マンガン(II)、乳酸マンガン(II)、グルコン酸マンガン(II)等が挙げられる。汎用性の観点から、好ましくは、硫酸マンガン(II)である。
Ｚｎ２＋源としては、例えば、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、硝酸亜鉛、アスパラギン酸亜鉛、酢酸亜鉛、乳酸亜鉛、グルコン酸亜鉛等が挙げられる。
（注入対象）
本実施態様における注入対象は、例えば、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系、個体（生体）等からなる群から選択される一以上であってよく制限はない。in vitro系、in vivo系、ex vivo系をはじめ、いずれであってよい。前記細胞塊は３次元培養で得られた細胞塊であってよく、前記器官（皮膚や臓器等）はオルガノイドであってよい。
本実施態様における注入対象は、例えば、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系、個体（生体）等からなる群から選択される一以上であってよく制限はない。in vitro系、in vivo系、ex vivo系をはじめ、いずれであってよい。前記細胞塊は３次元培養で得られた細胞塊であってよく、前記器官（皮膚や臓器等）はオルガノイドであってよい。
また、前記注入対象に対して注入がされる場合、それに含まれる下の階層に注入がされてもよい。すなわち、例えば、個体（生体）を注入対象とする場合、該個体（生体）に含まれる組織に注入がされてもよく、該個体（生体）に含まれる細胞に注入がされてもよく、両者に注入がされてもよい。また、組織を注入対象とする場合、該組織に含まれる細胞に注入がされてもよく、該組織に含まれる細胞間マトリックスに注入がされてもよく、両者に注入がされてもよい。
また、本実施態様における注入対象が、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系からなる群から選択される一以上である場合、個体（生体）に存在する状態での、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系からなる群から選択される一以上であってよく、個体（生体）に存在しない状態（例えば、個体（生体）から摘出や分離がされた状態や、個体（生体）外で作製された状態）での、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系からなる群から選択される一以上であってもよい。
また、本実施態様における注入対象は、iPS細胞（人工多能性幹細胞）などの幹細胞由来の、細胞、細胞シート、細胞塊、組織、器官（皮膚や臓器等）、器官系からなる群から選択される一以上であってもよく、これらは、個体（生体）に存在する状態であってもよく、個体（生体）に存在しない状態（例えば、個体（生体）から摘出や分離がされた状態や、個体（生体）外で作製された状態）であってもよい。前記細胞塊は３次元培養で得られた細胞塊であってよく、前記器官（皮膚や臓器等）はオルガノイドであってよい。
前記個体（生体）は、好ましくは哺乳動物の個体（生体）である。前記哺乳動物としては特に制限されないが、ヒトが挙げられ、また、ヒトを除く哺乳動物が挙げられる。ヒトを除く哺乳動物としては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、サル、イヌ、ネコ等が挙げられる。
また、本実施態様における注入対象が上記のいずれであっても、細胞に注入がされる場合には、該細胞の細胞質に注入がされてもよく、該細胞の細胞核に注入がされてもよく、該細胞の細胞質及び細胞核の両者に注入がされてもよい。
また、本実施態様における注入対象は特に制限されないが、好ましくは、哺乳動物の個体（生体）の皮膚内の皮内、皮下及びその下部にある筋層からなる群から選択される一以上である。この場合、注入器から皮膚表面に向けて前記液状医薬組成物を射出して皮膚に注入し、該皮膚内の皮内、皮下及びその下部にある筋層からなる群から選択される一以上に注入する方法を採用できる。
（液状医薬組成物）
本実施態様に係る液状医薬組成物において、前記核酸と前記２価の陽イオンは薬理学的に許容される液体（溶剤）に溶解された形態であってよい。前記薬理学的に許容される液体としては、例えば、水（例えば、注射用水など）やリン酸を用いた緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）（PBS (+)であってもよく、PBS (-)であってもよい。）等が挙げられる。
尚、本開示において、「溶解」は「懸濁」や「乳化」であってよく、「溶液」は「懸濁液」や「乳化液」であってよく、「溶剤」は「懸濁剤」や「乳化剤」であってよい。
本実施態様に係る液状医薬組成物において、前記核酸と前記２価の陽イオンは薬理学的に許容される液体（溶剤）に溶解された形態であってよい。前記薬理学的に許容される液体としては、例えば、水（例えば、注射用水など）やリン酸を用いた緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）（PBS (+)であってもよく、PBS (-)であってもよい。）等が挙げられる。
尚、本開示において、「溶解」は「懸濁」や「乳化」であってよく、「溶液」は「懸濁液」や「乳化液」であってよく、「溶剤」は「懸濁剤」や「乳化剤」であってよい。
本実施態様に係る液状医薬組成物は、前記核酸と前記２価の陽イオンとを含むほか、医薬組成物用無毒性担体と混合することができる。該担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
本実施態様に係る液状医薬組成物全量に対する前記核酸の含有量は、前記核酸の種類や、注入対象、前記核酸が注入された注入対象において前記核酸が発揮する生理活性等に基づいて適宜設定することができる。また、前記２価の陽イオンの含有量も考慮して適宜設定することができる。
また、注入対象への前記液状医薬組成物の注入量は、前記核酸の含有量や種類、注入対象、前記核酸が注入された注入対象において前記核酸が発揮する生理活性等に基づいて適宜設定することができる。また、前記２価の陽イオンの注入量も考慮して適宜設定することができる。
また、注入対象への前記液状医薬組成物の注入量は、前記核酸の含有量や種類、注入対象、前記核酸が注入された注入対象において前記核酸が発揮する生理活性等に基づいて適宜設定することができる。また、前記２価の陽イオンの注入量も考慮して適宜設定することができる。
本実施態様に係る液状医薬組成物のｐＨは、前記液状医薬組成物が注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入された際に、該注入対象において前記核酸が生理活性を発揮し、安定して存在し、また、該注入対象を破壊するなどの悪影響がなければ、特に制限されない。
本実施態様に係る液状医薬組成物は、ワクチンの形態であってよい。
本実施態様に係る液状医薬組成物は、細胞性免疫を誘導する用途に用いられることが好ましい。この場合、前記注入対象は、細胞性免疫の誘導され得る注入対象（例えば、個体（生体）等）であってよい。前記核酸は、細胞性免疫を誘導するタンパク質をコードする核酸であってよい。後述する実施例では、前記細胞性免疫を誘導するタンパク質としてオボアルブミン（Ovalbumin, OVA）を用いているが、細胞性免疫は異物に対する免疫反応であり、前記細胞性免疫を誘導するタンパク質はOVAのみに限定されるものではない。
前記細胞性免疫を誘導することは、細胞性免疫が誘導されることに起因する二次的な現象であってよい。例えば、インターフェロンγ（IFN-γ）の産生の誘導であってよい。
（注入器）
本実施態様における注入器としては、注射針を介することなく前記液状医薬組成物を前記注入対象に注入できる注入器を用いることができる。すなわち、前記液状医薬組成物は、前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されうる。
本実施態様における注入器としては、注射針を介することなく前記液状医薬組成物を前記注入対象に注入できる注入器を用いることができる。すなわち、前記液状医薬組成物は、前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されうる。
本実施態様における注入器において、「先端側」とは、注入器から前記液状医薬組成物が射出される射出口が配置されている側を意味し、「基端側」とは、注入器において先端側とは反対の側を意味するものであり、これらの文言は、特定の箇所や位置を限定的に指すものではない。
本実施態様における注入器では、前記液状医薬組成物を前記注入対象に対して射出するために、駆動部が射出エネルギーの付与を行う。本実施態様における注入器による「射出」は、前記駆動部による射出エネルギーを利用して、前記加圧部により、前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物が加圧されることで、前記液状医薬組成物が収容部の流路を流れることで実現される。射出エネルギーとしては、従来の注入器に用いられる射出エネルギーであってよく、例えば、火薬等の燃焼エネルギー、ガス発生剤等の発生エネルギー、圧電素子等の電気的エネルギー、ばね等の機械的エネルギー等を利用することができ、また、これらの形態のエネルギーを適宜組み合わせたエネルギーを利用することができる。
火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用する場合、火薬としては、例えば、ジルコニウムと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＺＰＰ）、水素化チタンと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＴＨＰＰ）、チタンと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＴｉＰＰ）、アルミニウムと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＡＰＰ）、アルミニウムと酸化ビスマスを含む火薬（ＡＢＯ）、アルミニウムと酸化モリブデンを含む火薬（ＡＭＯ）、アルミニウムと酸化銅を含む火薬（ＡＣＯ）、アルミニウムと酸化鉄を含む火薬（ＡＦＯ）のうち何れか一つの火薬、又はこれらのうち複数の組み合わせを含む火薬が挙げられる。これらの火薬の特徴としては、その燃焼生成物が高温状態では気体であっても常温では気体成分を含まないため、点火後燃焼生成物が直ちに凝縮を行う。それにより、前記液状医薬組成物の射出のための加圧過程において、該加圧時の燃焼生成物の温度を、点火薬の燃焼により、前記液状医薬組成物に掛かる圧力が最初のピーク射出力を迎えてから短時間に常温近傍まで推移させることができる。
また、ガス発生剤の発生エネルギーを射出エネルギーとして利用する場合、ガス発生剤としては、シングルベース無煙火薬（例えば、ニトロセルロース９８質量％、ジフェニルアミン０．８質量％、硫酸カリウム１．２質量％を含むシングルベース無煙火薬が挙げられる。）や、エアバッグ用ガス発生器やシートベルトプリテンショナ用ガス発生器に使用されている各種ガス発生剤を用いることも可能である。
火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用する場合、火薬としては、例えば、ジルコニウムと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＺＰＰ）、水素化チタンと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＴＨＰＰ）、チタンと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＴｉＰＰ）、アルミニウムと過塩素酸カリウムを含む火薬（ＡＰＰ）、アルミニウムと酸化ビスマスを含む火薬（ＡＢＯ）、アルミニウムと酸化モリブデンを含む火薬（ＡＭＯ）、アルミニウムと酸化銅を含む火薬（ＡＣＯ）、アルミニウムと酸化鉄を含む火薬（ＡＦＯ）のうち何れか一つの火薬、又はこれらのうち複数の組み合わせを含む火薬が挙げられる。これらの火薬の特徴としては、その燃焼生成物が高温状態では気体であっても常温では気体成分を含まないため、点火後燃焼生成物が直ちに凝縮を行う。それにより、前記液状医薬組成物の射出のための加圧過程において、該加圧時の燃焼生成物の温度を、点火薬の燃焼により、前記液状医薬組成物に掛かる圧力が最初のピーク射出力を迎えてから短時間に常温近傍まで推移させることができる。
また、ガス発生剤の発生エネルギーを射出エネルギーとして利用する場合、ガス発生剤としては、シングルベース無煙火薬（例えば、ニトロセルロース９８質量％、ジフェニルアミン０．８質量％、硫酸カリウム１．２質量％を含むシングルベース無煙火薬が挙げられる。）や、エアバッグ用ガス発生器やシートベルトプリテンショナ用ガス発生器に使用されている各種ガス発生剤を用いることも可能である。
本実施態様における注入器では、加圧部により、作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する。
前記加圧部による加圧は、例えば、前記収容部を破壊するなど、系を破壊することがない限り特に制限されず、通常の注入器における加圧条件を採用することができる。
ここで、前記圧力とは収容部内の圧力のことである。その測定方法は特に制限されないが、例えば、下記のようにして測定することができる。すなわち、特開２００５－２１６４０号公報に記載の測定方法のように、射出の力を、ノズルの下流に配置されたロードセルのダイアフラムに分散して与えるようにし、ロードセルからの出力は、検出増幅器を介してデータ採取装置にて採取されて、時間ごとの射出力（N）として記憶されるという方法によって測定する。このように測定された射出圧を、注入器の射出口３１aの面積によって除することで、射出圧を算出する。収容部の内圧測定による測定値は射出圧と同等であり、射出圧をもって収容部内の圧力とすることができる。
前記加圧部による加圧は、例えば、前記収容部を破壊するなど、系を破壊することがない限り特に制限されず、通常の注入器における加圧条件を採用することができる。
ここで、前記圧力とは収容部内の圧力のことである。その測定方法は特に制限されないが、例えば、下記のようにして測定することができる。すなわち、特開２００５－２１６４０号公報に記載の測定方法のように、射出の力を、ノズルの下流に配置されたロードセルのダイアフラムに分散して与えるようにし、ロードセルからの出力は、検出増幅器を介してデータ採取装置にて採取されて、時間ごとの射出力（N）として記憶されるという方法によって測定する。このように測定された射出圧を、注入器の射出口３１aの面積によって除することで、射出圧を算出する。収容部の内圧測定による測定値は射出圧と同等であり、射出圧をもって収容部内の圧力とすることができる。
上記駆動部による射出エネルギーはピストンを介してプランジャに伝えられ、プランジャが収容部内を摺動することで、収容部に収容されている前記液状医薬組成物がノズル部に形成された流路に沿って押し出され、最終的に射出口から注入対象に向けて射出される。
収容部には当初から前記液状医薬組成物が収容されていてもいなくてもよく、収容されていない場合には、射出口を有するノズルを介して前記液状医薬組成物を収容部内に吸引することにより収容することがきる。このように、収容部への収容操作を必要とする構成を採用することで、必要とする任意の前記液状医薬組成物を注入対象へ注入することが可能となる。そのため、本実施態様における注入器では、シリンジ部と注入器本体とは着脱可能に構成されていてよい。
本実施態様における、前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されることは、注入対象にジェット注射によって注入されることであってよい。
ここで、本開示において「ジェット注射」とは、注射針を介することのない注射であって、核酸と２価の陽イオンとを含み、かつ、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物が射出口から注入対象に向けて射出され、それにより注入対象の内と外との境界を貫通する貫通孔が形成され、該貫通孔を通じて液状医薬組成物を注入対象内に注入することができる高圧の超極微液流が生まれることを特徴とする、注射を指す。例えば、該注入対象が哺乳動物の個体（生体）である場合、該哺乳動物の個体（生体）の、例えば、皮膚を貫通することができる高圧の超極微液流が生まれることを特徴とする注射を指す。
ここで、本開示において「ジェット注射」とは、注射針を介することのない注射であって、核酸と２価の陽イオンとを含み、かつ、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい液状医薬組成物が射出口から注入対象に向けて射出され、それにより注入対象の内と外との境界を貫通する貫通孔が形成され、該貫通孔を通じて液状医薬組成物を注入対象内に注入することができる高圧の超極微液流が生まれることを特徴とする、注射を指す。例えば、該注入対象が哺乳動物の個体（生体）である場合、該哺乳動物の個体（生体）の、例えば、皮膚を貫通することができる高圧の超極微液流が生まれることを特徴とする注射を指す。
本実施態様における注入器は、注射針を介することなく注射液（液状医薬組成物等）を注入対象に注入することに用いることができる従来の注入器において、前記収容部に前記液状医薬組成物を収容させて得ることができる。そのような従来の注入器としては、例えば、国際公開第２０１９／１５６２３８号に記載の注入器、国際公開第２０１９／１５６２３９号に記載の注入器、国際公開第２０１９／１５６２３７号に記載の注入器、特許５９８９０３９号明細書に記載の注入器などが挙げられる。これらは前記ジェット注射が可能な注入器であるが、これらの他にも、前記ジェット注射が可能な市販の注入器（無針注射器）は多数存在する。例えば、Straits（Pharmajet社）、Tropis（Pharmajet社）、Vitajet (Bioject Medical Technologies Inc.)、Biojector 2000 (Bioject Medical Technologies Inc.)、Bioject Zetajet (Bioject Medical Technologies Inc.)、Glide（Glide Pharma社）、MediJector Vision（Antares社）、Sumaval DosePro（Zogenix社）、SQ Pen（Bespak社）、Injex（Equidyne社）、ヒアルロン酸シリンジ（BEAUTTO社、Amazon Standard Identification Number (ASIN): B08NCHTRHZ）等が挙げられる。
以下に、図面を参照して本実施形態の注入器の例として、注射器１（無針注射器）について説明する。なお、以下の実施形態の構成は例示であり、本実施形態の構成に限定されるものではない。なお、注射器１の長手方向における相対的な位置関係を表す用語として、「先端側」及び「基端側」を用いる。当該「先端側」は、後述する注射器１の先端寄り、すなわち射出口３１ａ寄りの位置を表し、当該「基端側」は、注射器１の長手方向において「先端側」とは反対側の方向、すなわち駆動部７側の方向を表している。また、本例示は、点火装置によって点火される火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして加圧に用いる例示であるが、本実施態様はこれに限定されるものではない。
（注射器１の構成）
図１は、注射器１の概略構成を示す図であり、注射器１のその長手方向に沿った断面図でもある。注射器１は、シリンジ部３とプランジャ４とで構成されるサブ組立体と、注射器本体６とピストン５と駆動部７とで構成されるサブ組立体とが一体に組み立てられた注射器組立体１０が、ハウジング（注射器ハウジング）２に取り付けられることで構成される。
図１は、注射器１の概略構成を示す図であり、注射器１のその長手方向に沿った断面図でもある。注射器１は、シリンジ部３とプランジャ４とで構成されるサブ組立体と、注射器本体６とピストン５と駆動部７とで構成されるサブ組立体とが一体に組み立てられた注射器組立体１０が、ハウジング（注射器ハウジング）２に取り付けられることで構成される。
上記の通り、注射器組立体１０は、ハウジング２に対して脱着自在となるように構成されている。注射器組立体１０に含まれるシリンジ部３とプランジャ４との間に形成される収容部３２には前記液状医薬組成物が充填され、そして、当該注射器組立体１０は、前記液状医薬組成物の射出を行う度に使い捨てられるユニットである。一方で、ハウジング２側には、注射器組立体１０の駆動部７に含まれる点火器７１に電力供給するバッテリ９が含まれている。バッテリ９からの電力供給は、ユーザがハウジング２に設けられたボタン８を押下する操作を行うことで、配線を介してハウジング２側の電極と、注射器組立体１０の駆動部７側の電極との間で行われることになる。なお、ハウジング２側の電極と注射器組立体１０の駆動部７側の電極とは、注射器組立体１０がハウジング２に取り付けられると、自動的に接触するように両電極の形状および位置が設計されている。またハウジング２は、バッテリ９に駆動部７に供給し得る電力が残っている限りにおいて、繰り返し使用することができるユニットである。なお、ハウジング２においては、バッテリ９の電力が無くなった場合には、バッテリ９のみを交換しハウジング２は引き続き使用してもよい。
次に、注射器組立体１０の詳細について説明する。まず、シリンジ部３及びプランジャ４を含むサブ組立体について説明すると、シリンジ部３は、その内部に前記液状医薬組成物を収容可能な空間である収容部３２が形成されている。より詳しくは、図１に示すように、シリンジ部３の軸方向に延びる内壁面に沿ってプランジャ４が摺動自在に配置されており、シリンジ部３の内壁面とプランジャ４によって収容部３２が画定されている。また、シリンジ部３は、収容部３２と連通するノズル部３１を有し、ノズル部３１の先端側に射出口３１ａが形成されている。ノズル部３１は、その流路断面積が収容部３２側から射出口３１ａ側に向かって徐々に減少しており、収容部３２に充填されている前記液状医薬組成物を射出口３１ａに導くための流路である。図１に示す例では、プランジャ４の先端側の形状は、ノズル部３１の形状と概ね一致している。
次に、注射器本体６、ピストン５、及び駆動部７を含むサブ組立体について説明する。ピストン５は、例えば金属製であり、駆動部７の点火器７１で生成される燃焼生成物（燃焼ガス）により加圧されて、注射器本体６の内部に形成されている貫通孔を摺動するように構成されている。注射器本体６は、概略円筒状の部材であり、その軸方向に延在する内壁面に沿ってピストン５が摺動自在に収容されている。なお、ピストン５は樹脂製でもよく、その場合、耐熱性や耐圧性が要求される部分には金属を併用してもよい。また、図１に示すように、ピストン５は、プランジャ４と一体に連結されている。
次に、駆動部７について説明する。図１に示すように、駆動部７は、注射器本体６における貫通孔を基準として基端側に固定されている。駆動部７は、電気式点火器である点火器７１を有している。点火器７１は、注射器本体６における貫通孔の内部を臨むように配置されており、その内部には点火薬が収容されている。点火薬としては、上掲の通り種々の火薬を採用することができる。また、点火薬は、例えば、適宜の薄肉金属によって形成された火薬カップに収容することができる。
次に、上記構成の注射器１の動作内容について説明する。図１に示すように、ハウジング２に対して注射器組立体１０を装着した状態で、ノズル部３１の射出口３１ａから前記液状医薬組成物を吸引する。これにより、前記液状医薬組成物を収容部３２内に充填することができる。この状態から、例えば、注射器１における射出口３１ａを注入対象に当接させた状態で、ユーザがハウジング２に設けられたボタン８を押下する操作を行うと、これをトリガとして、バッテリ９から駆動部７の点火器７１に作動電力が供給され、点火器７１が作動する。点火器７１が作動すると、点火薬が点火されることで燃焼し、燃焼生成物（火炎や燃焼ガスなど）が生成される。その結果、例えば点火器７１の火薬カップが開裂し、点火薬の燃焼ガスが注射器本体６における貫通孔内に放出される。これにより、注射器本体６の貫通孔内の圧力が急激に高まり、注射器本体６の先端側に向けてピストン５が押圧される結果、注射器本体６における貫通孔の内壁面に沿って先端側に向かってピストン５が摺動する。上記の通り、ピストン５と一体にプランジャ４が連結されているため、ピストン５に連動してプランジャ４もシリンジ部３の内壁面に沿って摺動することとなる。すなわち、プランジャ４がシリンジ部３の先端側に位置するノズル部３１に向かって押し込まれることで、前記液状医薬組成物が収容されている収容部３２の容積が減少し、急激に加圧されることとなる。その結果、収容部３２に充填されている前記液状医薬組成物がノズル部３１に押し込まれ、射出口３１ａから高圧で射出される。これにより、前記液状医薬組成物を、注入対象に注入することができる。
また、図１に示す注射器本体６内には、特に追加的な火薬成分は配置されていないが、ピストン５を介して前記液状医薬組成物にかける圧力推移を調整するために、点火器７１での火薬燃焼によって生じる燃焼生成物によって燃焼しガスを発生させるガス発生剤等を、点火器７１内や注射器本体６の貫通孔内に配置することもできる。点火器７１内にガス発生剤を配置する構成は、国際公開公報０１－０３１２８２号や特開２００３－２５９５０号公報等に開示されているように既に公知の技術である。また、ガス発生剤の一例としては、ニトロセルロース９８質量％、ジフェニルアミン０．８質量％、硫酸カリウム１．２質量％を含むシングルベース無煙火薬が挙げられる。また、エアバッグ用ガス発生器やシートベルトプリテンショナ用ガス発生器に使用されている各種ガス発生剤を用いることも可能である。貫通孔内に配置されるときのガス発生剤の寸法や大きさ、形状、特に表面形状を調整することで、該ガス発生剤の燃焼完了時間を変化させることが可能であり、これにより、前記液状医薬組成物にかける圧力推移を所望の推移、すなわち注入対象に前記液状医薬組成物が適切に到達し得る推移とすることができる。本実施態様では、必要に応じて使用されるガス発生剤なども駆動部７に含まれるものとする。本実施形態においては、プランジャ４およびピストン５を含んで「加圧部」が構成される。
本開示の他の実施態様は、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器であって、
液状医薬組成物を収容した収容部と、
前記収容部と連通するノズル部であって、前記液状医薬組成物を注入対象に向けて射出するための射出口を有するノズル部と、
作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する加圧部と、
を備え、
前記液状医薬組成物が、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、
注入器である。
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器であって、
液状医薬組成物を収容した収容部と、
前記収容部と連通するノズル部であって、前記液状医薬組成物を注入対象に向けて射出するための射出口を有するノズル部と、
作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する加圧部と、
を備え、
前記液状医薬組成物が、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、
注入器である。
本実施態様における注入器は、前記態様に記載した、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器において、前記収容部に前記態様に係る液状医薬組成物が収容された、注入器である。本実施態様の説明は、前記態様の説明を援用する。
本開示の他の実施態様は、
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する方法である。
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する方法である。
本実施態様に係る方法は、前記態様に記載した、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、前記態様に係る液状医薬組成物を注入対象に注入する方法である。本実施態様の説明は、前記態様の説明を援用する。
本実施態様に係る方法によって注入対象に液状医薬組成物が注入されると、前記態様に記載した通り、該注入対象において、該液状医薬組成物に含まれる前記核酸の生理活性が発揮される。
そのため、本実施態様に係る方法は、
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する工程を含む、
注入対象において核酸の生理活性を発揮させる方法であってよい。
そのため、本実施態様に係る方法は、
核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する工程を含む、
注入対象において核酸の生理活性を発揮させる方法であってよい。
以下に実施例を記載するが、いずれの実施例も、限定的な意味として解釈される実施例ではない。
以下の動物実験は、大阪大学医学部付属動物実験施設において行われ、大阪大学動物実験委員会により規定された大阪大学動物実験規定に従い実施した。
以下の動物実験は、大阪大学医学部付属動物実験施設において行われ、大阪大学動物実験委員会により規定された大阪大学動物実験規定に従い実施した。
〔試験例１〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、図２に示す最終濃度となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O）（ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、0.00406 mM (0.001 mg/ml)、0.0406 mM (0.01 mg/ml)、0.406 mM (0.1 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、40.6 mM (10 mg/ml)、又は203 mM (50 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
調製した液状医薬組成物を用いて、動的光散乱法（Dynamic Light Scattering, DLS）（マルバーン社、NANO-ZS）にて流体力学的径を測定した。平均力学径の測定は、1.0 mLの容量にて測定サンプルを調製し、プラスチック製のキュベットにて行った。測定結果は、散乱強度から算出したものを使用し、少なくとも5回の異なる測定を基に平均と標準偏差を求めた。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、図２に示す最終濃度となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O）（ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、0.00406 mM (0.001 mg/ml)、0.0406 mM (0.01 mg/ml)、0.406 mM (0.1 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、40.6 mM (10 mg/ml)、又は203 mM (50 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
調製した液状医薬組成物を用いて、動的光散乱法（Dynamic Light Scattering, DLS）（マルバーン社、NANO-ZS）にて流体力学的径を測定した。平均力学径の測定は、1.0 mLの容量にて測定サンプルを調製し、プラスチック製のキュベットにて行った。測定結果は、散乱強度から算出したものを使用し、少なくとも5回の異なる測定を基に平均と標準偏差を求めた。
〔比較試験例１－１〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例１と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例１と同様にした。
結果を図２に示す。比較試験例１－１では流体力学径が177 nmであったのに対し、試験例１ではMg2+濃度の増加とともに小さな流体力学径を示した。また、Mg2+濃度が1 mg/mL（Mg2+濃度が4.06 mM）以上においては、流体力学径は約100 nmとなった。これは、Mg2+濃度の増加とともに核酸の内部で電気的な架橋が進行し、分子内にて凝集が進行した結果であると考えられる。また、Mg2+濃度が1 mg/mL（Mg2+濃度が4.06 mM）以上の場合においては、核酸の電気的な架橋は十分に発生しており、流体力学径のさらなる低下に繋がらなかったものと考えられる。
〔比較試験例１－２〕
硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O）の代わりに、図３に示す最終濃度となるように塩化リチウム（LiCl）（ナカライテスク社）を用いたこと以外は、試験例１と同様にした。すなわち、Li+の最終濃度（括弧内はLiClの最終濃度を示す。）が、23.59 mM (1 mg/ml)、又は235.9 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O）の代わりに、図３に示す最終濃度となるように塩化リチウム（LiCl）（ナカライテスク社）を用いたこと以外は、試験例１と同様にした。すなわち、Li+の最終濃度（括弧内はLiClの最終濃度を示す。）が、23.59 mM (1 mg/ml)、又は235.9 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
〔比較試験例１－３〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Li+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例１と同様にした。当該比較試験例１－３は、実質的には比較試験例１－１と同一である。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Li+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例１と同様にした。当該比較試験例１－３は、実質的には比較試験例１－１と同一である。
結果を図３に示す。比較試験例１－３では流体力学径が162 nmであったのに対し、比較試験例１－２では、Li+濃度が増加しても153 nmまでにしか変化しなかった。これは、２価の陽イオンであるMg2+とは異なり、１価の陽イオンであるLi+では核酸の電気的な架橋が発生せず、核酸が粒子化しなかったためと考えられる。
以上の結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、核酸に電気的な架橋が発生し、核酸が粒子化することが明らかとなった。
〔試験例２〕
（液状医薬組成物の調製）
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgCl2・6H2Oの最終濃度を示す。）が、0.492 mM (0.1 mg/ml)、4.92 mM (1 mg/ml)、又は49.2 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
（液状医薬組成物の調製）
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgCl2・6H2Oの最終濃度を示す。）が、0.492 mM (0.1 mg/ml)、4.92 mM (1 mg/ml)、又は49.2 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
（マウスへの注入）
マウスに対してイソフルランによる吸引麻酔をした後、動物用バリカンを用いて背部の毛刈りをした。その後、該背部をアルコールにて消毒し、該背部の複数箇所に、下記注入器を用いて前記液状医薬組成物の注入を行った。一箇所あたり20 μLの前記液状医薬組成物を注入した。用いた注入器は、図１に記載された注入器（無針注射器）であり、直径0. 1 mmのノズル径の注入器である。該注入器の点火薬として25 mgのZPPを、ガス発生剤として40 mgのシングルベース無煙火薬（ニトロセルロース98質量％、ジフェニルアミン0.8質量％、硫酸カリウム1.2質量％を含む。）を使用した。
マウスに対してイソフルランによる吸引麻酔をした後、動物用バリカンを用いて背部の毛刈りをした。その後、該背部をアルコールにて消毒し、該背部の複数箇所に、下記注入器を用いて前記液状医薬組成物の注入を行った。一箇所あたり20 μLの前記液状医薬組成物を注入した。用いた注入器は、図１に記載された注入器（無針注射器）であり、直径0. 1 mmのノズル径の注入器である。該注入器の点火薬として25 mgのZPPを、ガス発生剤として40 mgのシングルベース無煙火薬（ニトロセルロース98質量％、ジフェニルアミン0.8質量％、硫酸カリウム1.2質量％を含む。）を使用した。
（遺伝子発現の評価）
注入して１日後に、同マウスを安楽死させた。その後、顕微鏡観察ができる厚さの皮膚片を該背部から採取し、松浪ガラスボトムディッシュに貼付した後、蛍光顕微鏡BZ-X710（キーエンス社製）にて観察を行った。明視野像（露光時間：1/350 s）とGFPチャンネルの蛍光像（露光時間：1/20 s）を取得し、必要に応じて重ね合わせの画像（明視野像＋蛍光像）を取得した。
注入して１日後に、同マウスを安楽死させた。その後、顕微鏡観察ができる厚さの皮膚片を該背部から採取し、松浪ガラスボトムディッシュに貼付した後、蛍光顕微鏡BZ-X710（キーエンス社製）にて観察を行った。明視野像（露光時間：1/350 s）とGFPチャンネルの蛍光像（露光時間：1/20 s）を取得し、必要に応じて重ね合わせの画像（明視野像＋蛍光像）を取得した。
〔比較試験例２〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物とした。それ以外は試験例２と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物とした。それ以外は試験例２と同様にした。
結果を図４に示す。比較試験例２と比較して、試験例２ではいずれのMg2+濃度においても、GFP由来の明らかに強い蛍光が観察された。
本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、図１に記載された注入器（無針注射器）による遺伝子導入の効率を向上させ、高い遺伝子発現をもたらす事が確認された。
本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、図１に記載された注入器（無針注射器）による遺伝子導入の効率を向上させ、高い遺伝子発現をもたらす事が確認された。
〔試験例３〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11～13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、0.00406 mM (0.001 mg/ml)、0.0406 mM (0.01 mg/ml)、0.203 mM (0.05 mg/ml)、0.406 mM (0.1 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、40.6 mM (10 mg/ml)、81.1 mM (20 mg/ml)、又は203 mM (50 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入は、試験例２と同様にした。また、明視野像（露光時間：1/350 s）とGFPチャンネルの蛍光像（露光時間：1/20 s）を取得し、必要に応じて重ね合わせの画像を取得した後、遺伝子発現の解析として、前記蛍光像を、解析アプリケーション（ハイブリッドセルカウント）（キーエンス社製）を用いて解析した。解析は、輝度設定10、領域指定offの条件にて実施した。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11～13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、0.00406 mM (0.001 mg/ml)、0.0406 mM (0.01 mg/ml)、0.203 mM (0.05 mg/ml)、0.406 mM (0.1 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、40.6 mM (10 mg/ml)、81.1 mM (20 mg/ml)、又は203 mM (50 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入は、試験例２と同様にした。また、明視野像（露光時間：1/350 s）とGFPチャンネルの蛍光像（露光時間：1/20 s）を取得し、必要に応じて重ね合わせの画像を取得した後、遺伝子発現の解析として、前記蛍光像を、解析アプリケーション（ハイブリッドセルカウント）（キーエンス社製）を用いて解析した。解析は、輝度設定10、領域指定offの条件にて実施した。
〔比較試験例３〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例３と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例３と同様に行った。
尚、無処理の場合（前記液状医薬組成物の注入をしなかった場合）、注入器として図１に記載された注入器（無針注射器）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合、注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合についても行った。
結果を表１に示す。尚、表中の「相対光度」は、試験例３と比較試験例３のそれぞれにおいて、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合の光度を1.00として換算した値である。
試験例３の条件間を比較すると、例えば、Mg2+濃度が0.0406 mM以上81.1 mMより小さい場合の光度は、Mg2+濃度が0である場合の光度よりも大きいことが示唆された。
また、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において遺伝子発現は増大した。相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、比較試験例３では最大で約1.6倍に留まった一方、試験例３では最大で約7.4倍であった。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合においてより顕著な現象であることが明らかとなった。
また、相対光度の結果をみると、試験例３では、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において遺伝子発現増大率は1を超える数値であった。さらには、これらに対応する比較試験例３の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例３ではより大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において特に得られる事が明らかとなった。
試験例３の条件間を比較すると、例えば、Mg2+濃度が0.0406 mM以上81.1 mMより小さい場合の光度は、Mg2+濃度が0である場合の光度よりも大きいことが示唆された。
また、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において遺伝子発現は増大した。相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、比較試験例３では最大で約1.6倍に留まった一方、試験例３では最大で約7.4倍であった。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合においてより顕著な現象であることが明らかとなった。
また、相対光度の結果をみると、試験例３では、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において遺伝子発現増大率は1を超える数値であった。さらには、これらに対応する比較試験例３の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例３ではより大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、Mg2+濃度が0.0406 mM～40.6 mMの範囲（MgSO4・7H2Oが0.01 mg/ml～10 mg/mlの範囲）において特に得られる事が明らかとなった。
〔試験例４〕
被験動物として11-13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）を用い、試験例３の液状医薬組成物のMg2+の最終濃度を0.406 mM (MgSO4・7H2O が0.1 mg/ml)とし、注入してから６時間後、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、又は１４日後に同マウスを安楽死させて実験を進めたこと以外は、試験例３と同様にした。
被験動物として11-13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）を用い、試験例３の液状医薬組成物のMg2+の最終濃度を0.406 mM (MgSO4・7H2O が0.1 mg/ml)とし、注入してから６時間後、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、又は１４日後に同マウスを安楽死させて実験を進めたこと以外は、試験例３と同様にした。
〔比較試験例４－１〕
前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例４と同様にした。
前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例４と同様にした。
〔比較試験例４－２〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例４と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例４と同様に行った。
〔比較試験例４－３〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例４と同様にした。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例４と同様にした。
結果を表２と図５に示す。尚、表中の「相対光度(1)」は、比較試験例４－１の光度を基準として試験例４の光度を換算した値であり、「相対光度(2)」は、比較試験例４－３の光度を基準として比較試験例４－２の光度を換算した値である。
試験例４の結果から、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後においては、いずれの場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合（比較試験例４－１）の光度より大きかった。
また、比較試験例４－２、比較試験例４－３では、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても非常に僅かなGFPの蛍光しか観察できず、弱い遺伝子発現であった。比較試験例４－１では、１日後において強い蛍光が観察され、３日後において僅かな蛍光となった。一方、試験例４では、１～５日後に強い蛍光が観察され、14日後に蛍光の観察が困難になった。これらの結果から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合の遺伝子発現の期間は、核酸溶液中にMg2+が存在することにより大きく延長される事が明らかとなった。
また、相対光度(1)及び相対光度(2)（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、いずれの場合も、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても1を超える値となった。さらには、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、相対光度(1)は相対光度(2)よりも大きな値を示した。このことから、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果が確認された。特に、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合であって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、前記液状医薬組成物を注入した2日後、3日後の遺伝子発現増大率は60を超える値となり、遺伝子発現が大きく向上する事が示された。
試験例４の結果から、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後においては、いずれの場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合（比較試験例４－１）の光度より大きかった。
また、比較試験例４－２、比較試験例４－３では、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても非常に僅かなGFPの蛍光しか観察できず、弱い遺伝子発現であった。比較試験例４－１では、１日後において強い蛍光が観察され、３日後において僅かな蛍光となった。一方、試験例４では、１～５日後に強い蛍光が観察され、14日後に蛍光の観察が困難になった。これらの結果から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合の遺伝子発現の期間は、核酸溶液中にMg2+が存在することにより大きく延長される事が明らかとなった。
また、相対光度(1)及び相対光度(2)（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、いずれの場合も、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても1を超える値となった。さらには、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、相対光度(1)は相対光度(2)よりも大きな値を示した。このことから、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果が確認された。特に、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合であって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、前記液状医薬組成物を注入した2日後、3日後の遺伝子発現増大率は60を超える値となり、遺伝子発現が大きく向上する事が示された。
〔試験例５〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O、ナカライテスク社）、硝酸マグネシウム（Mg(NO3)2・6H2O、ナカライテスク社）、又はアスパラギン酸マグネシウム（Angene International Limited社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O）についてはMg2+の最終濃度が4.92 mM（MgCl2・6H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、硝酸マグネシウム（Mg(NO3)2・6H2O）についてはMg2+の最終濃度が3.90 mM（Mg(NO3)2・6H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、アスパラギン酸マグネシウムについてはMg2+の最終濃度が3.47 mM（アスパラギン酸マグネシウムの最終濃度が1 mg/ml）となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O、ナカライテスク社）、硝酸マグネシウム（Mg(NO3)2・6H2O、ナカライテスク社）、又はアスパラギン酸マグネシウム（Angene International Limited社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O）についてはMg2+の最終濃度が4.92 mM（MgCl2・6H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、硝酸マグネシウム（Mg(NO3)2・6H2O）についてはMg2+の最終濃度が3.90 mM（Mg(NO3)2・6H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、アスパラギン酸マグネシウムについてはMg2+の最終濃度が3.47 mM（アスパラギン酸マグネシウムの最終濃度が1 mg/ml）となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
〔比較試験例５〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例５と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例５と同様に行った。
尚、注入器として図１に記載された注入器（無針注射器）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合、注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合についても行った。
結果を表３と図６に示す。表中の「相対光度」は、試験例５と比較試験例５のそれぞれにおいて、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合の光度を1.00として換算した値である。
試験例５の結果から、いずれのマグネシウム塩を用いた場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、いずれのマグネシウム塩を用いた場合も、Mg2+濃度が0である場合に比べて、遺伝子発現が増大した。相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例５では、いずれのマグネシウム塩を用いた場合も１を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例５の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例５では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、マグネシウム塩の種類によらず得られる事が明らかとなった。
試験例５の結果から、いずれのマグネシウム塩を用いた場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、いずれのマグネシウム塩を用いた場合も、Mg2+濃度が0である場合に比べて、遺伝子発現が増大した。相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例５では、いずれのマグネシウム塩を用いた場合も１を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例５の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例５では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、マグネシウム塩の種類によらず得られる事が明らかとなった。
〔試験例６〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化カルシウム（CaCl2・2H2O、ナカライテスク社）、硫酸マンガン(II)（MnSO4・5H2O、ナカライテスク社）、又は塩化リチウム（LiCl、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、塩化カルシウム（CaCl2・2H2O）についてはCa2+の最終濃度が6.8 mM（CaCl2・2H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、硫酸マンガン(II)（MnSO4・5H2O）についてはMn2+の最終濃度が4.15 mM（MnSO4・5H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、塩化リチウム（LiCl）についてはLi+の最終濃度が23.5 mM（LiClの最終濃度が1 mg/ml）となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように塩化カルシウム（CaCl2・2H2O、ナカライテスク社）、硫酸マンガン(II)（MnSO4・5H2O、ナカライテスク社）、又は塩化リチウム（LiCl、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、塩化カルシウム（CaCl2・2H2O）についてはCa2+の最終濃度が6.8 mM（CaCl2・2H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、硫酸マンガン(II)（MnSO4・5H2O）についてはMn2+の最終濃度が4.15 mM（MnSO4・5H2Oの最終濃度が1 mg/ml）、塩化リチウム（LiCl）についてはLi+の最終濃度が23.5 mM（LiClの最終濃度が1 mg/ml）となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
〔比較試験例６〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例６と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例６と同様に行った。
尚、注入器として図１に記載された注入器（無針注射器）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Ca2+濃度、Mn2+濃度、Li+濃度のいずれもが0）を用いた場合、注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Ca2+濃度、Mn2+濃度、Li+濃度のいずれもが0）を用いた場合についても行った。
結果を表４と図７に示す。表中の「相対光度」は、試験例６と比較試験例６のそれぞれにおいて、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Ca2+濃度、Mn2+濃度、Li+濃度のいずれもが0）を用いた場合の光度を1.00として換算した値である。
試験例６の条件間を比較すると、塩化カルシウム、硫酸マンガン(II)を用いた場合の光度は、いずれの濃度も0である場合の光度より大きかった。
また、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例６では、塩化カルシウム、硫酸マンガン(II)を用いた場合は１を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例６の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例６では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中に２価の陽イオンが存在する場合には、遺伝子発現増強効果が得られた一方で、核酸溶液中に１価のLi+が存在する場合には、遺伝子発現増大率は1を下回る結果となり、遺伝子発現増強効果が得られなかった。これらの結果はDLSの結果（試験例１、比較試験例１－１、比較試験例１－２、比較試験例１－３）とよく一致するものであった。この事から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、核酸溶液中に２価の陽イオンが存在する場合に特有の現象であり、核酸の粒子化によるものであることが支持された。
試験例６の条件間を比較すると、塩化カルシウム、硫酸マンガン(II)を用いた場合の光度は、いずれの濃度も0である場合の光度より大きかった。
また、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例６では、塩化カルシウム、硫酸マンガン(II)を用いた場合は１を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例６の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例６では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中に２価の陽イオンが存在する場合には、遺伝子発現増強効果が得られた一方で、核酸溶液中に１価のLi+が存在する場合には、遺伝子発現増大率は1を下回る結果となり、遺伝子発現増強効果が得られなかった。これらの結果はDLSの結果（試験例１、比較試験例１－１、比較試験例１－２、比較試験例１－３）とよく一致するものであった。この事から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、核酸溶液中に２価の陽イオンが存在する場合に特有の現象であり、核酸の粒子化によるものであることが支持された。
〔試験例７〕
核酸溶液中にMg2+が存在する場合の核酸の粒子化をAFMにより直接的に観察した。AFMによる測定は、日立ハイテク社製のAFM5000/AFM5300Eを用いて実施した。また、カンチレバーには、生体試料用のSI-DF20S（オリンパス社製）を使用した。
核酸溶液中にMg2+が存在する場合の核酸の粒子化をAFMにより直接的に観察した。AFMによる測定は、日立ハイテク社製のAFM5000/AFM5300Eを用いて実施した。また、カンチレバーには、生体試料用のSI-DF20S（オリンパス社製）を使用した。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、図８に示す最終濃度となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O）（ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)、又は40.6 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。これを新鮮なマイカ表面に滴下し、所定の時間、吸着させた後、エアブローにて乾燥させたものを使用した。
〔比較試験例７〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例７と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。その後、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAであるCMV-DASHER-GFP（ATUM社製）（溶媒：TE）（1.0 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度が0である液状医薬組成物を調製した。それ以外は試験例７と同様にした。
結果を図８に示す。
比較試験例７では200 nm前後の円状の構造が確認された。一方、試験例７では100 nm前後の粒子が観察された。これらの結果はDLSの結果（試験例１、比較試験例１－１、比較試験例１－２、比較試験例１－３）とよく一致するものであり、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、核酸は確かに粒子化する事が確認された。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合であって、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、核酸の粒子化によるものである事が支持された。
比較試験例７では200 nm前後の円状の構造が確認された。一方、試験例７では100 nm前後の粒子が観察された。これらの結果はDLSの結果（試験例１、比較試験例１－１、比較試験例１－２、比較試験例１－３）とよく一致するものであり、核酸溶液中にMg2+が存在する場合には、核酸は確かに粒子化する事が確認された。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合であって、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、核酸の粒子化によるものである事が支持された。
〔試験例８〕
試験例２において、図１に記載された注入器（無針注射器）の代わりにバネ式の無針注射器（BEAUTTO社、ヒアルロン酸シリンジ、Amazon Standard Identification Number (ASIN): B08NCHTRHZ）を用い、塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O）の代わりに硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を用いて、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)、又は40.6 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
試験例２において、図１に記載された注入器（無針注射器）の代わりにバネ式の無針注射器（BEAUTTO社、ヒアルロン酸シリンジ、Amazon Standard Identification Number (ASIN): B08NCHTRHZ）を用い、塩化マグネシウム（MgCl2・6H2O）の代わりに硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を用いて、GFP遺伝子を含むプラスミドDNAの最終濃度は0.5 mg/mLとなるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)、又は40.6 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
〔比較試験例８〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例８と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例８と同様に行った。
尚、注入器として前記バネ式の無針注射器を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合、注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合についても行った。
結果を表５と図９に示す。表中の「相対光度」は、試験例８と比較試験例８のそれぞれにおいて、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合の光度を1.00として換算した値である。
試験例８の結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の光度はいずれも、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、試験例８では、バネ式の無針注射器の射出条件として最適な条件を検討したわけではないことからいずれも低い遺伝子発現に留まったが、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、核酸溶液中にMg2+が存在する場合はいずれも1を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例８の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例８では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、点火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用した注入器に限定されず、バネ式の無針注射器でも得られることが示された。
試験例８の結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の光度はいずれも、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、試験例８では、バネ式の無針注射器の射出条件として最適な条件を検討したわけではないことからいずれも低い遺伝子発現に留まったが、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、核酸溶液中にMg2+が存在する場合はいずれも1を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例８の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例８では大きな値を示した。したがって、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果は、点火薬の燃焼エネルギーを射出エネルギーとして利用した注入器に限定されず、バネ式の無針注射器でも得られることが示された。
〔試験例９〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、レポータータンパク質としてのGFPをコードしたmRNA（unmodified）（OZ社製、フナコシCat#. MRNA15-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFPをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、又は40.6 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄balb/cマウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、レポータータンパク質としてのGFPをコードしたmRNA（unmodified）（OZ社製、フナコシCat#. MRNA15-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、GFPをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)、4.06 mM (1 mg/ml)、又は40.6 mM (10 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
マウスへの注入のほか、明視野像、蛍光像の取得、重ね合わせの画像の取得、遺伝子発現の解析は、試験例２と同様にした。
〔比較試験例９〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例９と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例９と同様に行った。
尚、注入器として図１に記載された注入器（無針注射器）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合、注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合についても行った。
結果を表６と図１０に示す。尚、表中の「相対光度」は、試験例９と比較試験例９のそれぞれにおいて、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いた場合の光度を1.00として換算した値である。
試験例９の条件間を比較すると、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の光度はいずれも、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、試験例９では、核酸溶液中にMg2+が存在する場合のいずれにおいても、強いGFPの蛍光が観察された。また、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例９では、核酸溶液中にMg2+が存在する場合はいずれも1を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例９の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例９では大きな値を示した。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合であって、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、mRNAを含めた広義の核酸において得られることが示された。
試験例９の条件間を比較すると、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の光度はいずれも、Mg2+濃度が0である場合の光度より大きかった。
また、試験例９では、核酸溶液中にMg2+が存在する場合のいずれにおいても、強いGFPの蛍光が観察された。また、相対光度（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、試験例９では、核酸溶液中にMg2+が存在する場合はいずれも1を超える値となった。さらには、これらに対応する比較試験例９の遺伝子発現増大率との比較においても、試験例９では大きな値を示した。本結果から、核酸溶液中にMg2+が存在する場合であって、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合における遺伝子発現増強効果は、mRNAを含めた広義の核酸において得られることが示された。
〔試験例１０〕
被験動物として11-13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）を用い、試験例９の液状医薬組成物のMg2+の最終濃度を2.03 mM (MgSO4・7H2O が0.5 mg/ml)とし、注入してから６時間後、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、又は１４日後に同マウスを安楽死させて実験を進めたこと以外は、試験例９と同様にした。
被験動物として11-13週齢雄balb/cマウス（日本クレア）を用い、試験例９の液状医薬組成物のMg2+の最終濃度を2.03 mM (MgSO4・7H2O が0.5 mg/ml)とし、注入してから６時間後、１日後、２日後、３日後、５日後、７日後、又は１４日後に同マウスを安楽死させて実験を進めたこと以外は、試験例９と同様にした。
〔比較試験例１０－１〕
前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例１０と同様にした。
前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例１０と同様にした。
〔比較試験例１０－２〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例１０と同様に行った。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例１０と同様に行った。
〔比較試験例１０－３〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例１０と同様にした。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用い、かつ、前記液状医薬組成物として比較試験例２で調製したものと同一のもの（Mg2+濃度が0）を用いたこと以外は、試験例１０と同様にした。
結果を表７と図１１に示す。尚、表中の「相対光度(1)」は、比較試験例１０－１の光度を基準として試験例１０の光度を換算した値であり、「相対光度(2)」は、比較試験例１０－３の光度を基準として比較試験例１０－２の光度を換算した値である。
試験例１０の結果から、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれの場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合（比較試験例１０－１）の光度よりも大きかった。
また、比較試験例１０－１では６時間後から強い蛍光が観察され、７日後において僅かな蛍光となった。一方で、試験例１０では６時間後から７日後に強い蛍光が観察され、１４日後に弱い蛍光となった。
また、相対光度(1)（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、いずれの場合も、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても1を超える値となった。さらには、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、相対光度(1)は相対光度(2)よりも大きな値を示した。このことから、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いて前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日において、核酸としてmRNAを用いた場合であっても、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果が確認された。
試験例１０の結果から、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれの場合の光度も、Mg2+濃度が0である場合（比較試験例１０－１）の光度よりも大きかった。
また、比較試験例１０－１では６時間後から強い蛍光が観察され、７日後において僅かな蛍光となった。一方で、試験例１０では６時間後から７日後に強い蛍光が観察され、１４日後に弱い蛍光となった。
また、相対光度(1)（遺伝子発現増大率ということがある。）の結果をみると、いずれの場合も、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても1を超える値となった。さらには、前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日後のいずれにおいても、相対光度(1)は相対光度(2)よりも大きな値を示した。このことから、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いて前記液状医薬組成物を注入した6時間後から14日において、核酸としてmRNAを用いた場合であっても、核酸溶液中にMg2+が存在する場合の遺伝子発現増強効果が確認された。
〔試験例１１〕
（液状医薬組成物の調製）
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄C57BL6マウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、オボアルブミン（Ovalbumin, OVA）をコードしたmRNA（OZ社製、フナコシCat#. MRNA42-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、OVAをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
（液状医薬組成物の調製）
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄C57BL6マウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、オボアルブミン（Ovalbumin, OVA）をコードしたmRNA（OZ社製、フナコシCat#. MRNA42-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、OVAをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が、2.03 mM (0.5 mg/ml)となるように液状医薬組成物を調製した。
（マウスへの注入）
11週齢雄C57BL6マウスに対してイソフルランによる吸引麻酔をした後、動物用バリカンを用いて背部の毛刈りをした。その後、該背部をアルコールにて消毒し、該背部の２箇所に、下記注入器を用いて前記液状医薬組成物の注入を行った。一箇所あたり20 μLの前記液状医薬組成物を注入した。用いた注入器は、図１に記載された注入器（無針注射器）であり、直径0.1 mmのノズル径の注入器である。該注入器の点火薬として25 mgのZPPを、ガス発生剤として40 mgのシングルベース無煙火薬（ニトロセルロース98質量％、ジフェニルアミン0.8質量％、硫酸カリウム1.2質量％を含む。）を使用した。
11週齢雄C57BL6マウスに対してイソフルランによる吸引麻酔をした後、動物用バリカンを用いて背部の毛刈りをした。その後、該背部をアルコールにて消毒し、該背部の２箇所に、下記注入器を用いて前記液状医薬組成物の注入を行った。一箇所あたり20 μLの前記液状医薬組成物を注入した。用いた注入器は、図１に記載された注入器（無針注射器）であり、直径0.1 mmのノズル径の注入器である。該注入器の点火薬として25 mgのZPPを、ガス発生剤として40 mgのシングルベース無煙火薬（ニトロセルロース98質量％、ジフェニルアミン0.8質量％、硫酸カリウム1.2質量％を含む。）を使用した。
（ELISpotアッセイ）
前記液状医薬組成物の注入から9日目にマウスを安楽死させ、脾臓を摘出した。摘出した脾臓に、ELISpot kit（Mouse IFN-γ Single-Color ELISPOT（CTL社製））に付属のメディウムを添加した後、セルストレーナーを用いて細胞懸濁液とした。その後、VersaLyse溶血試薬（ベックマン・コールター社）を用いて溶血と洗浄を行い、脾臓の細胞分散液を得た。細胞のカウントは、ディスポ細胞計算盤（C-Chip、Digital Bio社）を用いて実施した。
OVAのMHCクラスI分子のエピトープペプチド（アミノ酸配列：SIINFEKL（配列番号１）、ピーエイチジャパン社に合成を委託）に反応してINF-γを産生する細胞をELISpotアッセイ（Mouse IFN-γ Single-Color ELISPOT（CTL社製））にて検出した。具体的には、検出抗体がプレコートされたプレートに、100 μLの細胞分散液を所定の細胞数（5×105個）となるように播種し、続いてキットに付属のメディウムを用いて１穴あたりの全量を200 μＬにした。抗原による刺激をする場合は、抗原として40 μg/mLの前記ペプチド（アミノ酸配列：SIINFEKL（配列番号１））を含むメディウムを用いて１穴あたりの全量を200 μＬにした。その後、細胞を1晩培養し、プレートの呈色を行った。プレートの呈色は、キットに記載のプロトコールに従って実施した。
前記液状医薬組成物の注入から9日目にマウスを安楽死させ、脾臓を摘出した。摘出した脾臓に、ELISpot kit（Mouse IFN-γ Single-Color ELISPOT（CTL社製））に付属のメディウムを添加した後、セルストレーナーを用いて細胞懸濁液とした。その後、VersaLyse溶血試薬（ベックマン・コールター社）を用いて溶血と洗浄を行い、脾臓の細胞分散液を得た。細胞のカウントは、ディスポ細胞計算盤（C-Chip、Digital Bio社）を用いて実施した。
OVAのMHCクラスI分子のエピトープペプチド（アミノ酸配列：SIINFEKL（配列番号１）、ピーエイチジャパン社に合成を委託）に反応してINF-γを産生する細胞をELISpotアッセイ（Mouse IFN-γ Single-Color ELISPOT（CTL社製））にて検出した。具体的には、検出抗体がプレコートされたプレートに、100 μLの細胞分散液を所定の細胞数（5×105個）となるように播種し、続いてキットに付属のメディウムを用いて１穴あたりの全量を200 μＬにした。抗原による刺激をする場合は、抗原として40 μg/mLの前記ペプチド（アミノ酸配列：SIINFEKL（配列番号１））を含むメディウムを用いて１穴あたりの全量を200 μＬにした。その後、細胞を1晩培養し、プレートの呈色を行った。プレートの呈色は、キットに記載のプロトコールに従って実施した。
〔比較試験例１１－１〕
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄C57BL6マウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、オボアルブミン（Ovalbumin, OVA）をコードしたmRNA（OZ社製、フナコシCat#. MRNA42-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、OVAをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物とした。それ以外は試験例１１と同様にした。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物を図１に記載された注入器（無針注射器）で注入した比較試験例である。
PBS-tablet（タカラバイオ社製）（PBS(-)である。）を注射用水（大塚製薬株式会社製）に溶解して2倍のPBSを調製し、フィルター滅菌をした。調製した2倍のPBSに、被験動物である11週齢雄C57BL6マウス（日本クレア）に注入する際の濃度の2倍となるように硫酸マグネシウム（MgSO4・7H2O、ナカライテスク社）を溶解し、フィルター滅菌をした。その後、オボアルブミン（Ovalbumin, OVA）をコードしたmRNA（OZ社製、フナコシCat#. MRNA42-100）（溶媒：TE）（0.2 mg/mL）と1:1となるように混合して液状医薬組成物とした。すなわち、OVAをコードしたmRNAの最終濃度は0.1 mg/mL（１回の注入あたり2.0 μg）となるようにし、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物とした。それ以外は試験例１１と同様にした。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物を図１に記載された注入器（無針注射器）で注入した比較試験例である。
〔比較試験例１１－２〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、比較試験例１１－１と同様に行った。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物を有針注射器で注入した比較試験例である。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、比較試験例１１－１と同様に行った。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+濃度が0である液状医薬組成物を有針注射器で注入した比較試験例である。
〔比較試験例１１－３〕
液状医薬組成物として1倍のPBSを用いた。それ以外は試験例１１と同様にした。換言すれば、1倍のPBSである液状医薬組成物を図１に記載された注入器（無針注射器）で注入した比較試験例である。
液状医薬組成物として1倍のPBSを用いた。それ以外は試験例１１と同様にした。換言すれば、1倍のPBSである液状医薬組成物を図１に記載された注入器（無針注射器）で注入した比較試験例である。
〔比較試験例１１－４〕
無処理の場合（前記液状医薬組成物の注入をしなかった場合）についても準備した。
無処理の場合（前記液状医薬組成物の注入をしなかった場合）についても準備した。
〔比較試験例１１－５〕
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例１１と同様に行った。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が2.03 mM (0.5 mg/ml)である液状医薬組成物を有針注射器で注入した比較試験例である。
注入器として30G針の有針注射器（ミサワ医科工業株式会社製デンドロニクス針30G）を用いたこと以外は、試験例１１と同様に行った。換言すれば、OVAをコードしたmRNAを含み、Mg2+の最終濃度（括弧内はMgSO4・7H2Oの最終濃度を示す。）が2.03 mM (0.5 mg/ml)である液状医薬組成物を有針注射器で注入した比較試験例である。
結果を図１２に示す。
まず、図１２中の（Ａ）から分かるように、比較試験例１１－２、比較試験例１１－３、比較試験例１１－４ではspotを形成せず、細胞性免疫の誘導に至らなかった。一方、比較試験例１１－１では多くのspotを形成し、細胞性免疫が誘導された。
次に、図１２中の（Ｂ）から分かるように、比較試験例１１－１に比べて試験例１１では明らかに多くのSpotを形成し、細胞性免疫の誘導が向上した。すなわち、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いて同じように注入した場合であっても、核酸溶液中にMg2+が存在することで、マウス個体（生体）内でのタンパク質の発現量が増大し、細胞性免疫が増強したものと推測される。一方で、図１２中の（Ｃ）から分かるように、有針注射の場合には、核酸溶液中にMg2+が存在してもspot数の増加は確認されなかった。
本結果から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合に核酸ワクチンの効果が得られる事が明らかとなった。また、核酸溶液中にMg2+が存在することで細胞性免疫の誘導が向上し、核酸ワクチンの効果が向上する事が明らかとなった。
まず、図１２中の（Ａ）から分かるように、比較試験例１１－２、比較試験例１１－３、比較試験例１１－４ではspotを形成せず、細胞性免疫の誘導に至らなかった。一方、比較試験例１１－１では多くのspotを形成し、細胞性免疫が誘導された。
次に、図１２中の（Ｂ）から分かるように、比較試験例１１－１に比べて試験例１１では明らかに多くのSpotを形成し、細胞性免疫の誘導が向上した。すなわち、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いて同じように注入した場合であっても、核酸溶液中にMg2+が存在することで、マウス個体（生体）内でのタンパク質の発現量が増大し、細胞性免疫が増強したものと推測される。一方で、図１２中の（Ｃ）から分かるように、有針注射の場合には、核酸溶液中にMg2+が存在してもspot数の増加は確認されなかった。
本結果から、図１に記載された注入器（無針注射器）を用いた場合に核酸ワクチンの効果が得られる事が明らかとなった。また、核酸溶液中にMg2+が存在することで細胞性免疫の誘導が向上し、核酸ワクチンの効果が向上する事が明らかとなった。
１・・・・注射器、２・・・・ハウジング、３・・・・シリンジ部、４・・・・プランジャ、５・・・・ピストン、６・・・・注射器本体、７・・・・駆動部、８・・・・ボタン、９・・・・バッテリ、１０・・・・注射器組立体、３１・・・・ノズル部、３１ａ・・・射出口、３２・・・・収容部、７１・・・・点火器
Claims (8)
- 液状医薬組成物であって、
核酸と２価の陽イオンとを含み、
前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さく、
注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入される、
液状医薬組成物。 - 前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数である、請求項１に記載の液状医薬組成物。
- 前記注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって注入対象に注入されることが、注入対象にジェット注射によって注入されることである、請求項１又は２に記載の液状医薬組成物。
- 細胞性免疫誘導用である、請求項１又は２に記載の液状医薬組成物。
- 注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器であって、
液状医薬組成物を収容した収容部と、
前記収容部と連通するノズル部であって、前記液状医薬組成物を注入対象に向けて射出するための射出口を有するノズル部と、
作動時に前記収容部に収容されている前記液状医薬組成物を加圧することで前記射出口から前記液状医薬組成物を前記注入対象に向けて射出する加圧部と、
を備え、
前記液状医薬組成物が、核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81.1 mMより小さい、
注入器。 - 前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数である、請求項５に記載の注入器。
- 核酸と２価の陽イオンとを含み、前記２価の陽イオンの濃度が総量で0.0406 mM以上81. 1 mMより小さい、液状医薬組成物を、注射針を介することなく液状医薬組成物を注入対象に注入する注入器によって、注入対象に注入する方法。
- 前記２価の陽イオンが、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＺｎ２＋からなる群から選択される一又は複数である、請求項７に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2022-069625 | 2022-04-20 | ||
| JP2022069625 | 2022-04-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2023204264A1 true WO2023204264A1 (ja) | 2023-10-26 |
Family
ID=88419954
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/JP2023/015717 WO2023204264A1 (ja) | 2022-04-20 | 2023-04-20 | 液状医薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| WO (1) | WO2023204264A1 (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002511396A (ja) * | 1998-04-14 | 2002-04-16 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド製剤の無針投与 |
| JP2003520253A (ja) * | 2000-01-19 | 2003-07-02 | ジェンテリック， インコーポレーテッド | 細胞に核酸をトランスフェクトする方法 |
| JP2012509904A (ja) * | 2008-11-26 | 2012-04-26 | ユニバーシティ・オブ・カンザス | 核酸送達組成物および核酸送達法 |
-
2023
- 2023-04-20 WO PCT/JP2023/015717 patent/WO2023204264A1/ja unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002511396A (ja) * | 1998-04-14 | 2002-04-16 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド製剤の無針投与 |
| JP2003520253A (ja) * | 2000-01-19 | 2003-07-02 | ジェンテリック， インコーポレーテッド | 細胞に核酸をトランスフェクトする方法 |
| JP2012509904A (ja) * | 2008-11-26 | 2012-04-26 | ユニバーシティ・オブ・カンザス | 核酸送達組成物および核酸送達法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CUI ZHENGRONG, BAIZER LAWRENCE, MUMPER RUSSELL J.: "Intradermal immunization with novel plasmid DNA-coated nanoparticles via a needle-free injection device", JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM NL, vol. 102, no. 2, 1 April 2003 (2003-04-01), Amsterdam NL , pages 105 - 115, XP093100581, ISSN: 0168-1656, DOI: 10.1016/S0168-1656(03)00029-4 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2591770B1 (en) | Compositions for siRNA delivery and methods of manufacturing and using same | |
| KR102617833B1 (ko) | 인터류킨 17 수용체 mRNA의 특이적 녹다운을 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)를 제시하는 리포좀성 구형 핵산 (SNA) 구축물 | |
| CN107427466B (zh) | 从细胞膜衍生的纳米囊泡及其用途 | |
| EP3573656B1 (en) | Core/shell structure platform for immunotherapy | |
| JP5575593B2 (ja) | 注射器 | |
| JP2009507770A (ja) | 眼性疾患の治療への、熱ショックの使用 | |
| JP7280201B2 (ja) | 注入器 | |
| JP5794541B2 (ja) | 核内移行性を有する脂質膜構造体 | |
| KR20100015661A (ko) | 암의 표적 치료법의 돌연변이성 이탈의 표적 절제를 위한 조성물 및 방법 | |
| TW201919712A (zh) | 運送子(cargomers) | |
| CN106310293A (zh) | 在包括连续疏水相的载体中的脂质体在体内输送多核苷酸中的应用 | |
| AU2020364146A1 (en) | Silk fibroin-based microneedles and uses thereof | |
| JP2012524793A (ja) | 免疫調節性生体分子を組み合わせて送達するためのヒドロゲル | |
| JPWO2020219941A5 (ja) | ||
| Akita | Development of an SS-cleavable pH-activated lipid-like material (ssPalm) as a nucleic acid delivery device | |
| WO2023204264A1 (ja) | 液状医薬組成物 | |
| JPWO2005095621A1 (ja) | 人工磁性体による、遺伝子導入調節法およびシステム | |
| CN102007213B (zh) | 用于预防和/或逆转新发作的自身免疫性糖尿病的基于微球的组合物 | |
| WO2023224112A1 (ja) | 液状医薬組成物 | |
| JP2023091069A (ja) | 核酸導入キャリア、核酸導入キャリアセット、核酸導入組成物及び核酸導入方法 | |
| Kohane et al. | pH-triggered release of macromolecules from spray-dried polymethacrylate microparticles | |
| CN112999154B (zh) | 一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用 | |
| JP7280202B2 (ja) | 注入器及びそれを用いた注入対象への生体分子を含む溶液の注入方法 | |
| WO2019156239A1 (ja) | 注入器及びそれを用いた注入対象の細胞核内への生体分子を含む溶液の注入方法 | |
| JP5989039B2 (ja) | 注射器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 23791912 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |