WO2023068104A1 - がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む医薬 - Google Patents

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cancer
adjuvant
present
group
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健 高橋
浩和 岡田
大晃 夜久
健 石井
康司 小檜山
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国立大学法人京都大学
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    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs

Definitions

  • the present invention relates to a medicament containing a conjugate of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and an adjuvant.
  • Cancer immunotherapy has recently joined these existing therapies. Cancer immunity is triggered by Local Tumor Antigen Release (LTAR) and Local Innate Immune Activation (LIIA).
  • LTAR Local Tumor Antigen Release
  • LIIA Local Innate Immune Activation
  • In situ vaccines which aim to activate immunity by intervening in local treatment of tumors, can be said to be therapeutic methods that artificially enhance LIIA.
  • In situ vaccines are expected to have strong systemic anti-cancer effects while minimizing side effects, and will be a new therapeutic strategy for cancer immunity.
  • checkpoint inhibitors are currently the mainstream of cancer immunotherapy, and the response rate is not sufficient, and serious side effects are also a problem.
  • Photoimmunotherapy administers a drug containing a complex of a cancer antigen-specific antibody and a photosensitive molecule IR700dye, and irradiates the tumor with non-thermal near-infrared light to kill only tumor cells.
  • Patent Document 1 In September 2020, in Japan, ahead of the rest of the world, antibody formulation ASP1929, which is the EGFR antibody cetuximab with IR700dye added, and near-infrared laser irradiation equipment for unresectable locally advanced or locally recurrent head and neck cancer Photoimmunotherapy combined with is approved for insurance.
  • the mechanism of action of PIT is that photo-sensitive molecules excited by light irradiation change the structure of the cell membrane of cancer cells, resulting in cell rupture caused by water molecules flowing into cancer cells due to the difference in osmotic pressure. is. Therefore, since PIT releases a large amount of cancer antigens that have not undergone heat denaturation, an excellent LTAR effect can be expected. However, photoimmunotherapy has a total response rate of only about 40% in clinical trials. ing.
  • an object of the present invention is to improve the antitumor effect.
  • the present inventors previously reported that they had developed K3-SPG, a complex of humanized K-type CpG-ODN and schizophyllan, as a TLR9 ligand (International Publication No. 2016/152767).
  • This substance is an innate immune activating adjuvant that has a strong ability to induce type I IFN, and has the ability to induce antigen-specific cytotoxic T cells.
  • the present inventors used mice implanted with cancer cells to intratumorally administer photoimmunotherapy substances and adjuvants, and attempted photoimmunotherapy by near-infrared light irradiation. not only was it possible to almost eliminate the These effects were confirmed to be higher than those of photoimmunotherapy or administration of adjuvant alone.
  • a medicament for treating cancer comprising a conjugate of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and an adjuvant.
  • a medicament for treating cancer comprising a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, wherein the medicament excludes a Toll-like receptor 3 (TLR3) ligand Said medicament for administration in combination with an adjuvant.
  • TLR3 Toll-like receptor 3
  • a medicament for treating cancer comprising an adjuvant other than a Toll-like receptor 3 (TLR3) ligand, wherein the medicament is a conjugate of a photosensitive molecule and a molecule that binds to a cancer-specific cell surface molecule Said medicament for administration in conjunction with the body.
  • TLR3 Toll-like receptor 3
  • TLR9 Toll-like receptor 9
  • the medicament of [4], wherein the ligand for Toll-like receptor 9 (TLR9) is a complex of nucleic acid and polysaccharide.
  • the medicament of [6] or [7], wherein the K-type CpG oligodeoxynucleotide comprises the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO:1.
  • the medicament of [9], wherein the ⁇ -glucan is schizophyllan or lentinan.
  • a conjugate of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule is administered intratumorally or intravenously, and an adjuvant is administered intratumorally or intravenously, [ 13].
  • cancer comprising administering to the subject an effective amount of a conjugate of a binding molecule and a photosensitive molecule for a cancer-specific cell surface molecule and an adjuvant excluding ligands of Toll-like receptor 3 (TLR3) Method of treatment.
  • TLR3 Toll-like receptor 3
  • a kit for treating cancer comprising a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and an adjuvant excluding a Toll-like receptor 3 (TLR3) ligand.
  • kits for treating cancer comprising a complex of a binding molecule for a cancer-specific cell surface molecule and a photosensitive molecule, wherein the kit excludes a ligand for Toll-like receptor 3 (TLR3) Said kit for administration in combination with an adjuvant.
  • kit for treating cancer comprising an adjuvant other than a Toll-like receptor 3 (TLR3) ligand, wherein the kit includes a complex of a photosensitive molecule and a molecule binding to a cancer-specific cell surface molecule Said kit for administration in conjunction with the body.
  • a kit for treating cancer comprising a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule according to any one of [1] to [12], and an adjuvant.
  • the adjuvant is a Toll-like receptor 9 (TLR9) ligand.
  • TLR9 Toll-like receptor 9
  • the kit of [23] wherein the Toll-like receptor 9 (TLR9) ligand is a complex of nucleic acid and polysaccharide.
  • the nucleic acid comprises a K-type CpG oligodeoxynucleotide and polydeoxyadenylic acid.
  • the kit of [25] or [26], wherein the K-type CpG oligodeoxynucleotide comprises the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO:1.
  • the kit of [28], wherein the ⁇ -glucan is schizophyllan or lentinan.
  • the present invention can improve antitumor effects.
  • Figure 1 shows pancreatic cancer cell-transplanted mice in the no treatment group (Ctrl), the adjuvant administration group (K3-SPG), the photoimmunotherapy group (anti-CD44 Ab-IR700), and the combination therapy group (K3-SPG). /anti-CD44 Ab-IR700).
  • Figure 2 shows pancreatic cancer cell-transplanted mice in the no treatment group (Ctrl), the adjuvant administration group (K3-SPG), the photoimmunotherapy group (anti-CD44 Ab-IR700), and the combination therapy group (K3-SPG).
  • the treated side shows the mean change in size of the right dorsal tumor and the contralateral side shows the mean change in size of the left dorsal tumor.
  • Figure 3 shows pancreatic cancer cell-transplanted mice in the no treatment group (Ctrl), the adjuvant administration group (K3-SPG), the photoimmunotherapy group (anti-CD44 Ab-IR700), and the combination therapy group (K3-SPG). /anti-CD44 Ab-IR700) shows changes in the size of pancreatic cancer in each individual.
  • the treated side shows the mean change in size of the right dorsal tumor and the contralateral side shows the mean change in size of the left dorsal tumor.
  • Figure 4 shows the colon cancer cell-transplanted mice in the untreated group (Ctrl), the adjuvant administration group (K3-SPG), the photoimmunotherapy group (anti-CD44 Ab-IR700), and the combination therapy group (K3-SPG). /anti-CD44 Ab-IR700).
  • Figure 5 shows the non-treatment group (Ctrl), the adjuvant administration group (K3-SPG), the photoimmunotherapy group (anti-CD44 Ab-IR700), and the combination therapy group (K3-SPG) of mice transplanted with colon cancer cells.
  • FIG. 6 shows the left and right back tumors of mice implanted with pancreatic cancer cells, intratumoral administration of anti-CD44 Ab-IR700, near-infrared irradiation, and intravenous administration of Alexa647-K3-SPG.
  • FIG. 2 shows differential accumulation of Alexa647-K3-SPG in .
  • FIG. 4 is a diagram showing;
  • FIG. 4 is a diagram showing;
  • composition provides a pharmaceutical for treating cancer (hereinafter referred to as pharmaceutical (I) of the present invention), which comprises a conjugate of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and an adjuvant.
  • pharmaceutical (I) of the present invention comprises a conjugate of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and an adjuvant.
  • the present invention also provides a medicament for treating cancer (hereinafter referred to as the medicament (Ia) of the present invention) comprising a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, which comprises an adjuvant
  • a medicament for cancer treatment containing an adjuvant hereinafter referred to as the medicament (Ib) of the present invention
  • the medicament (Ib) of the present invention which is a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule.
  • a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule is a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule (hereinafter referred to as , a conjugate of a binding molecule and a photosensitive molecule of the invention).
  • a complex of a binding molecule and a photosensitive molecule of the present invention can be prepared according to conventionally known means.
  • a complex can be formed by linking via Bonds include non-covalent bonds such as electrostatic bonds, van der Waals bonds, hydrogen bonds and hydrophobic interactions, and covalent bonds such as amide bonds.
  • the conjugate of the binding molecule and photosensitive molecule of the present invention may contain one or more of the same molecules.
  • the conjugate of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention may contain two or more photosensitive molecules per one cancer-specific cell surface molecule binding molecule. .
  • Such conjugates are expected to have higher anti-tumor activity and lower dosage than conjugates containing only one photosensitive molecule.
  • the complex of a binding molecule and a photosensitive molecule of the present invention contains two or more cancer-specific cell surface molecule-binding molecules per photosensitive molecule.
  • Such a conjugate can target multiple types of cancers with different cancer-specific cell surface molecules with one type of conjugate, and can be used as a universal drug with a wide range of applications. can.
  • the cancer-specific cell surface molecule is a molecule that is expressed on the cell surface of cancer targeted by the drug (I) of the present invention.
  • Cancers targeted by the medicament (I) of the present invention include cancers expressing cancer-specific cell surface molecules and those accompanied by increased expression levels of genes encoding cancer-specific cell surface molecules.
  • cancer as used herein is used synonymously with the terms "(malignant) tumor” and "(malignant) neoplasm”, and includes sarcoma, mesothelioma, and reticuloendothelial system, lymphatic, or Diseases of interest are intended to include malignant diseases such as hematopoietic neoplastic disorders (eg, myeloma, lymphoma, or leukemia).
  • the medicament (I) of the present invention is administered intratumorally or intravenously, and in a preferred embodiment, the target lesion is preferably a solid tumor, regardless of the site where it is present.
  • solid cancers include head and neck cancer, oral cancer, thyroid cancer, esophageal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, breast cancer, liver cancer, bile duct cancer, and skin cancer.
  • the cancer-specific cell surface molecule is the above-mentioned molecule that is specifically expressed in cancer.
  • the term "specific” includes not only that the molecule is displayed only on the surface of the cancer cell membrane, but also that the molecule is present in a larger amount than in normal cells or tissues. The difference in quantitative factors may be, for example, about 2- to about 100-fold.
  • Such cancer-specific cell surface molecules include, for example, CD44, GPR87, EGFR, Mesothelin, Glypican-3, CEA, EpCAM, HER-2, CD133, integrin ⁇ v ⁇ 3, integrin ⁇ v ⁇ 6, laminin receptor, and the like. .
  • the cancer-specific cell surface molecule-binding molecule is not particularly limited as long as it binds to a molecule specifically expressed on the cancer cell surface targeted by the drug (I) of the present invention.
  • binding molecules include antibodies, binding peptides, nucleic acid aptamers, and the like, preferably antibodies.
  • Antibodies in the present invention include both polyclonal antibodies and monoclonal antibodies.
  • the antibody may include antibodies derived from any mammal, and may belong to any immunoglobulin class of IgG, IgA, IgM, IgD or IgE, but preferably IgG.
  • the antibody may be a commercially available antibody that binds to the cancer-specific cell surface molecule of interest or an antibody stored in a research institution. Alternatively, those skilled in the art can produce antibodies according to conventionally known methods.
  • antibodies In addition to the above-mentioned polyclonal antibodies, natural antibodies such as monoclonal antibodies (mAb), chimeric antibodies, humanized antibodies, and single-chain antibodies that can be produced using genetic recombination technology, these antibodies can also be used as antibodies. contains fragments of An antibody fragment means a partial region of the aforementioned antibody, and specifically includes Fab, Fab', F(ab') 2 , scAb, scFv, scFv-Fc, and the like.
  • a binding peptide is a peptide containing a specific motif sequence that has binding activity to a cancer-specific cell surface molecule, unlike an antibody.
  • Motif sequences include, for example, RGD motif sequences (target: integrin ⁇ v ⁇ 3), YIGSR motif sequences (target: laminin receptor), and the like.
  • One or more motif sequences may be contained in the binding peptide.
  • they may be the same motif sequence or may be mutually different motif sequences.
  • antibodies or fragments thereof and binding peptides are described with the left end as the N-terminus (amino terminus) and the right end as the C-terminus (carboxyl terminus) according to the convention of peptide designation.
  • Antibodies or fragments thereof and binding peptides used in the present invention may have a carboxyl group (-COOH), carboxylate ( -COO- ), amide ( -CONH2 ) or ester (-COOR) at the C-terminus. good too.
  • R in the ester includes, for example, C 1-6 alkyl groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl and n-butyl; C 3-8 cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl; C 6-12 aryl groups such as , ⁇ -naphthyl; phenyl-C 1-2 alkyl groups such as benzyl, phenethyl; C 7- such as ⁇ -naphthyl-C 1-2 alkyl groups such as ⁇ -naphthylmethyl 14 Aralkyl group; pivaloyloxymethyl group and the like are used.
  • C 1-6 alkyl groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl and n-butyl
  • C 3-8 cycloalkyl groups such as cyclopentyl and cyclohexyl
  • the antibodies or fragments thereof and the binding peptides used in the present invention include a protective group (e.g., a formyl group, a C 1-6 6- acyl group, etc.), pyroglutamic oxidation of the N-terminal glutamine residue that can be cleaved in vivo, substituents on the side chains of amino acids in the molecule (e.g.
  • -OH, -SH, an amino group, an imidazole group, an indole group, a guanidino group, etc. is protected with an appropriate protecting group (e.g., a C1-6 acyl group such as a formyl group, a C1-6 alkanoyl group such as an acetyl group, etc.).
  • an appropriate protecting group e.g., a C1-6 acyl group such as a formyl group, a C1-6 alkanoyl group such as an acetyl group, etc.
  • complex proteins such as so-called glycoproteins to which sugar chains are bound.
  • a nucleic acid aptamer in the present invention refers to a nucleic acid having binding activity to a cancer-specific cell surface molecule.
  • Nucleic acid aptamers can be RNA, DNA, modified nucleic acids or mixtures thereof.
  • Nucleic acid aptamers can also be in linear or circular form.
  • the sugar residue eg, ribose
  • Sites to be modified in the sugar residue include, for example, those in which the hydroxyl group at the 2'-, 3'- and/or 4'-position of the sugar residue is replaced with another atom.
  • the sugar residue can also be BNA: Bridged nucleic acid (LNA: Linked nucleic acid) in which a bridged structure is formed at the 2' and 4' positions.
  • BNA Bridged nucleic acid
  • Nucleic acid aptamers are isolated using the SELEX method and its modifications (e.g., Ellington et al., (1990), Nature, 346, 818-822; Tuerk et al., (1990), Science, 249, 505-510). can be made.
  • SELEX method Ellington et al., (1990), Nature, 346, 818-822; Tuerk et al., (1990), Science, 249, 505-510.
  • nucleic acid aptamers with stronger binding to cancer-specific cell surface molecules are enriched and selected. Therefore, by adjusting the number of rounds of the SELEX method and/or changing the competitive state, nucleic acid aptamers with different binding strengths, nucleic acid aptamers with different binding forms, and bases with the same binding strength and binding form can be obtained.
  • Nucleic acid aptamers that differ in sequence can be obtained.
  • the SELEX method includes an amplification process by PCR, and nucleic acid aptamers with more diverse sequences can be obtained by introducing mutations in the process, such as using manganese ions.
  • the base length of the nucleic acid aptamer obtained by the SELEX method is about 80 nucleotides, but it is a length that can be easily chemically synthesized (for example, the length that can be chemically synthesized is about 60 nucleotides or less, more preferably about 50 nucleotides or less). , more preferably 45 nucleotides or less).
  • Photosensitive molecules In conventionally known photosensitizers, the photosensitizer itself accumulates in tumors, and the energy difference between photoexcitation and light emission for the photosensitizer acts on mitochondria and the like. , oxidative stress substances such as singlet oxygen and free radicals that are produced damage cells and lead to apoptosis.
  • the photosensitive molecule used in the present invention is excited by externally irradiated light after adhering to the target cancer via the binding molecule for the cancer-specific cell surface molecule. The excited photosensitive molecules change from hydrophilic to hydrophobic and aggregate on the cell membrane together with binding molecules.
  • Adjuvant The complex of the binding molecule and photosensitive molecule of the present invention can rupture cancer cells to release large amounts of cancer antigens to the surroundings. This cancer antigen is taken up by dendritic cells and presented on MHC class I. Cancer antigens presented on dendritic cells can bind to cytotoxic T lymphocytes (CTLs) that express T cell receptors that can recognize them and transduce signals within the CTLs. . However, CTL is not sufficiently activated by itself. Adjuvants must activate dendritic cells via pattern recognition receptors for sufficient CTL activation. Therefore, the medicament (I) of the present invention contains an adjuvant (hereinafter referred to as the adjuvant of the present invention).
  • CTLs cytotoxic T lymphocytes
  • Adjuvants must activate dendritic cells via pattern recognition receptors for sufficient CTL activation. Therefore, the medicament (I) of the present invention contains an adjuvant (hereinafter referred to as the adjuvant of the present invention).
  • the aspect of the adjuvant of the present invention may be either nanoparticulate or non-nanoparticulate.
  • Nanoparticles are preferred.
  • the particle size of the nanoparticles is not particularly limited as long as it is less than 1 ⁇ m, preferably 10 nm to 200 nm, more preferably 20 nm to 100 nm.
  • the particle size can be measured using a particle size distribution analyzer such as Zetasizer Nano (Malvern).
  • particle size means an average particle size (number average) measured by a dynamic light scattering method.
  • the receptor of the adjuvant of the present invention is not particularly limited as long as it is a pattern recognition receptor expressed in innate immune cells such as dendritic cells.
  • pattern recognition receptors include Toll-like receptors (TLR), NOD-like receptors (NLR), RIG-I-like receptors (RLR), STING (stimulator of interferon genes), or C-type lectin receptors ( CLR) and the like, among which TLRs other than TLR3 or STING are preferred as receptors for the adjuvant of the present invention, and TLRs other than TLR3 are more preferred.
  • TLRs include TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, and TLR11, among which TLR9 is preferred.
  • TLR3 since TLR3 does not activate CTL as a receptor for the adjuvant of the present invention, it is excluded from the receptor for the adjuvant of the present invention.
  • ligands for pattern recognition receptors include cytokines such as GM-CSF, IL-2, IL-7 or IL-12, plant-derived components such as QS21, aluminum hydroxide, aluminum phosphate, aluminum chloride, and the like.
  • oil-in-water emulsions such as squalene, mixtures of squalene and tocopherol
  • water-in-oil emulsions such as Montanide ISA 51
  • synthetic polymers such as inulin and heme
  • 3- Lipid A lipid A
  • MPL O-desacyl-4'-monophosphoryl lipid A
  • bacterial proteins such as flagellin
  • nucleic acids such as CpG ODN
  • polysaccharides such as ⁇ -glucan, ⁇ -glucan, and lentinan
  • nucleic acids and Examples thereof include the aforementioned polysaccharide complexes, preferably polysaccharides, nucleic acids and polysaccharide complexes.
  • ligands for TLR3 are excluded from the adjuvants of the present invention.
  • adjuvants other than TLR3 ligands TLR9 ligands or STING ligands are preferable, and ligands for TLR9 are more preferable.
  • STING ligands include nucleic acids such as c-di-GMP and cGAMP (eg, 2'3'-cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate (2'3'-cGAMP)).
  • nucleic acids such as c-di-GMP and cGAMP (eg, 2'3'-cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate (2'3'-cGAMP)).
  • Preferred ligands for TLR9 are complexes of nucleic acids and polysaccharides (hereinafter referred to as complexes of nucleic acids and polysaccharides of the present invention).
  • the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention is not limited as long as it can bind to TLR9 and activate dendritic cells. nucleic acids).
  • the CpG oligonucleotides (CpG ODNs) included in the nucleic acids of the invention are short (approximately 20 base pairs), single-stranded, synthetic DNA fragments containing immunostimulatory CpG motifs that are dendriticized via TLR9. It is not particularly limited as long as it can activate cytotoxic cells (DCs) and thereby activate cytotoxic T lymphocytes (CTL).
  • the CpG ODN used in the present invention includes any of four types, K-type (also called B-type), D-type (also called A-type), C-type and P-type, each having different backbone sequences and immunostimulatory properties. may be used, but the K type is preferred.
  • K-type CpG ODN contains multiple unmethylated CpG motifs with a non-palindromic structure.
  • An unmethylated CpG motif refers to a short nucleotide sequence containing at least one cytosine (C)-guanine (G) sequence in which position 5 of cytosine in the cytosine-guanine sequence is unmethylated.
  • the K-type CpG ODN contained in the nucleic acid of the present invention is preferably humanized.
  • humanized is meant having agonistic activity towards human TLR9. Therefore, the nucleic acids of the present invention containing humanized K-type CpG ODN have dendritic cell activation functions unique to humans.
  • K-type CpG ODNs preferably used in the present invention are 10 nucleotides or more in length and have the formula: 5'N1N2N3T - CpG - WN4N5N63 ' (Where the central CpG motif is unmethylated, W is A or T, and N1 , N2 , N3 , N4 , N5 and N6 can be any nucleotide) contains a nucleotide sequence represented by
  • the K-type CpG ODN of the invention is 10 nucleotides or more in length and comprises the nucleotide sequence of the formula above.
  • the central 4-base CpG motif (T CpG W) may be contained in 10 nucleotides, and does not necessarily need to be positioned between N3 and N4 in the above formula.
  • N 1 , N 2 , N 3 , N 4 , N 5 and N 6 may be any nucleotides, N 1 and N 2 , N 2 and N 3 , N 3 and N 4
  • a combination of at least one (preferably one) of N4 and N5 , and N5 and N6 may be a two-base CpG motif.
  • any two consecutive bases in the central 4 bases (4th to 7th bases) are CpG motifs, The other two bases can be any nucleotide.
  • the K-type CpG ODN more preferably used in the present invention contains a non-palindromic structure containing one or more CpG motifs. More preferably used K-type CpG ODNs consist of non-palindromic structures containing one or more CpG motifs.
  • Humanized K-type CpG ODNs are generally characterized by a 4-base CpG motif consisting of TCGA or TCGT.
  • One humanized K-type CpG ODN may contain only one of these 4-base CpG motifs, or may contain two or more of them.
  • the K-type CpG ODN contained in the nucleic acid of the present invention contains 1, preferably 2, more preferably 3 or more 4-base CpG motifs consisting of TCGA or TCGT.
  • these 4-base CpG motifs may be the same or different. However, it is not particularly limited as long as it has agonistic activity to human TLR9.
  • the K-type CpG ODN contained in the nucleic acid of the present invention more preferably contains the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO:1.
  • the length of the K-type CpG ODN is not particularly limited as long as the nucleic acid of the present invention can activate dendritic cells, but usually 100 nucleotides or less (eg, 10 to 75 nucleotides), preferably 50 nucleotides or less. (eg, 10-40 nucleotides long), more preferably 30 nucleotides or less (eg, 10-25 nucleotides long), most preferably 12-25 nucleotides long.
  • the length of polydeoxyadenylic acid (dA) contained in the nucleic acid of the present invention is not particularly limited as long as it is long enough to form a triple helix structure together with the polysaccharide chain (preferably ⁇ -glucan). However, from the viewpoint of forming a stable triple helix structure, it is usually 20 nucleotides or longer, preferably 40 nucleotides or longer, more preferably 60 nucleotides or longer. Below, the length of poly dA is described for the case where the polysaccharide is ⁇ -glucan.
  • the amount of the nucleic acid of the present invention that binds per unit amount of ⁇ -glucan is increased, the variation in length during synthesis of the nucleic acid is avoided, and the efficiency of conjugation is improved.
  • the length of poly dA is preferably 20 to 60 nucleotides (specifically, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 or 60 nucleotides long), more preferably 30 to 50 nucleotides long (30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47, 48, 49, 50 nucleotides long), most preferably 30-45 nucleotides long (30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 nucleotides long). In particular, when the length is 30 nucleotides or more, good conjugation efficiency is exhibited.
  • the nucleic acid of the present the nucleic acid of the present
  • One molecule of the nucleic acid of the present invention may contain a plurality of K-type CpG ODNs and/or poly dA, but preferably contains one each of K-type CpG ODN and poly dA, most preferably consists of one K-type CpG ODN and one poly dA.
  • Exemplary CpG sequences include, but are not limited to, K3 CpG (SEQ ID NO: 1: 5'-ATCGACTCTCGAGCGTTCTC-3').
  • poly dA may be arranged on the 3' side of the K-type CpG ODN, or the K-type CpG ODN may be arranged on the 3' side of the poly dA. It is characterized in that dA is located on the 3' side of the K-type CpG ODN. Due to this arrangement, the nucleic acids of the invention may also have enhanced anti-cancer effects.
  • the K-type CpG ODN and poly dA may be directly linked by a covalent bond, or linked via a spacer sequence.
  • Spacer sequence means a nucleotide sequence containing one or more nucleotides inserted between two adjacent components. The length of the spacer sequence is not particularly limited as long as the nucleic acid of the present invention has the activity of activating dendritic cells. 3 nucleotides long.
  • the K-type CpG ODN and poly dA are directly covalently linked.
  • the nucleic acids of the present invention may have additional nucleotide sequences at their 5' and/or 3' ends.
  • the length of the additional nucleotide sequence is not particularly limited as long as the nucleic acid of the present invention has the activity of activating dendritic cells, but is usually 1 to 10 nucleotides long, preferably 1 to 5 nucleotides long, more preferably. is 1-3 nucleotides long.
  • the nucleic acid of the present invention does not contain such additional nucleotide sequences at the 5' and/or 3' ends. That is, the nucleic acids of the present invention preferably consist of K-type CpG ODN, poly dA and an optional spacer sequence, more preferably K-type CpG ODN and poly dA.
  • the nucleic acid of the present invention consists of a K-type CpG ODN (specifically, for example, an oligodeoxynucleotide consisting of a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1) and poly dA, and the K-type CpG ODN is At the 5' end of the oligodeoxynucleotide and poly dA at the 3' end, respectively.
  • K-type CpG ODN specifically, for example, an oligodeoxynucleotide consisting of a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1
  • poly dA poly dA
  • the oligodeoxynucleotide consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1, usually 20 to 60 nucleotides long (preferably 30 to 50 nucleotides long (30, 31, 32, 33, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 nucleotides long), more preferably 30 to 45 nucleotides long (30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 nucleotides long), most preferably 40 nucleotides long) poly dA-bound oligodeoxynucleotides be.
  • the nucleic acids of the present invention may be appropriately modified to be resistant to degradation in vivo (eg, degradation by exonucleases or endonucleases).
  • the modification comprises a phosphorothioate or phosphorodithioate modification. That is, some or all of the phosphodiester bonds in the nucleic acid of the present invention may be replaced with phosphorothioate bonds or phosphorodithioate bonds.
  • the nucleic acids of the present invention preferably contain modification with phosphorothioate bonds or phosphorodithioate bonds in the K-type CpG ODN, and more preferably all phosphodiester bonds of the K-type CpG ODN are phosphorothioate bonds. is replaced by Also, the nucleic acids of the present invention preferably contain phosphorothioate bonds or phosphorodithioate bonds in poly dA, more preferably all phosphodiester bonds of said poly dA are replaced with phosphorothioate bonds. .
  • all of the phosphodiester linkages of the humanized K-type CpG oligodeoxynucleotides and oligodeoxynucleotides, including polydeoxyadenylic acid, of the present invention are replaced with phosphorothioate linkages.
  • the nucleic acids of the invention are generally 20-60 nucleotides long (preferably 30-50 nucleotides long (30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 nucleotides long), more preferably 30-45 nucleotides long (30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 nucleotides long), most preferably 40 nucleotides long) binds wherein all phosphodiester bonds contained in the nucleic acid are replaced with phosphorothioate bonds.
  • phosphorothioate bonds are expected to enhance the activity of activating dendritic cells and enhance the anticancer activity in the nucleic acids of the present invention as well as resistance to degradation.
  • phosphorothioate bond is synonymous with phosphorothioate skeleton
  • phosphodiester bond is synonymous with phosphate skeleton.
  • the nucleic acid of the present invention may be single-stranded, double-stranded or triple-stranded, preferably single-stranded.
  • the nucleic acids of the present invention are preferably isolated.
  • isolated means that an operation has been performed to remove factors other than the target component, and that the state of being present in nature has been removed.
  • the purity of the "isolated nucleic acid” (percentage of the target nucleic acid weight to the total weight of the object to be evaluated) is usually 70% or higher, preferably 80% or higher, more preferably 90% or higher, and still more preferably 99%. % or more.
  • the nucleic acid of the present invention is useful as an adjuvant because it has excellent activity of activating dendritic cells. Furthermore, the nucleic acid of the present invention has the property of forming a triple helix structure together with two polysaccharide chains (preferably ⁇ -glucan), so it is useful for the preparation of the adjuvant of the present invention.
  • the nucleic acid of the present invention described above contains a K-type CpG ODN, it alone has poor dendritic cell activation activity. Therefore, the nucleic acid of the present invention can make up for the lack of activity by forming a complex with a polysaccharide.
  • the polysaccharide that forms a complex with the nucleic acid of the present invention includes ⁇ -glucan or ⁇ -glucan, with ⁇ -glucan being preferred.
  • Examples of the ⁇ -glucan used in the present invention include schizophyllan, scleroglucan, curdlan, perkiman, glyphoran, lentinan, laminaran, etc. Schizophyllan is more preferred.
  • Schizophyllan is a known soluble ⁇ -glucan derived from Suehirotake.
  • SPG consists of a ⁇ -(1 ⁇ 3)-D-glucan backbone and one ⁇ -(1 ⁇ 6)-D-glucosyl side chain for every three glucoses.
  • SPG has been used for more than 20 years as a clinical drug for intramuscular injection to enhance immunity against gynecologic cancer, and its safety in vivo has been confirmed.
  • the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention is formed by association of nucleic acid and polysaccharide via non-covalent or covalent bond such as electrostatic bond, van der Waals bond, hydrogen bond and hydrophobic interaction. be.
  • the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention preferably has a triple helix structure.
  • two of the three chains forming the triple helix structure are polysaccharide chains and one is the polydeoxyadenylic acid chain in the nucleic acid of the present invention.
  • the complex may partially contain a portion that does not form a triple helix structure.
  • compositional ratio of nucleic acid and polysaccharide in the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention can vary depending on the chain length of polydeoxyadenylic acid in the nucleic acid, the length of the polysaccharide, and the like. For example, when the lengths of polysaccharide chains and polydeoxyadenylic acid chains are equivalent, two polysaccharide chains and one nucleic acid of the present invention can associate to form a triple helix structure. In general, polydeoxyadenylic acid has a shorter chain length than polysaccharide chains, so that multiple nucleic acids of the present invention associate with two polysaccharide chains via polydeoxyadenylic acid to form a triple helix. can form structures.
  • the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention is a complex containing humanized K-type CpG ODN and ⁇ -glucan (e.g., lentinan, schizophyllan, scleroglucan, curdlan, perkiman, glyforan, laminaran), preferably , a complex consisting of a humanized K-type CpG ODN and a ⁇ -glucan (eg, schizophyllan).
  • humanized K-type CpG ODN and ⁇ -glucan e.g., lentinan, schizophyllan, scleroglucan, curdlan, perkiman, glyforan, laminaran
  • a complex consisting of a humanized K-type CpG ODN and a ⁇ -glucan eg, schizophyllan
  • 20 to 60 nucleotides specifically, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 or 60 nucleotides in length) to which polydeoxyadenylic acid is bound and all phosphodiester bonds are substituted with phosphorothioate bonds, and ⁇ -glucan (e.g.
  • schizophyllan e.g., K3-dA20-60-SPG
  • 30-50 nucleotides Specifically, 30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50
  • a complex e.g., K3-dA30-50-SPG
  • K3-dA30-50-SPG consisting of an oligodeoxynucleotide to which polydeoxyadenylic acid is bound and all phosphodiester bonds are substituted with phosphorothioate bonds, and ⁇ -glucan (e.g., schizophyllan)
  • 30 to 45 nucleotides specifically, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 nucleotides in length) to which polydeoxyadenylic acid is bound and all phosphodiester bonds are substitute
  • ⁇ -glucan which originally exists as a triple helix structure in nature, should be dissolved in an aprotic organic polar solvent (dimethyl sulfoxide (DMSO), acetonitrile, acetone, etc.) or an alkaline aqueous solution (sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonia, hydroxide). Calcium, etc.) to unwind into single strands.
  • aprotic organic polar solvent dimethyl sulfoxide (DMSO), acetonitrile, acetone, etc.
  • alkaline aqueous solution sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonia, hydroxide.
  • a solution of single-stranded ⁇ -glucan thus obtained and a solution of the nucleic acid of the present invention an aqueous solution, an aqueous buffer solution with a near-neutral pH, or an acidic aqueous buffer solution, preferably an aqueous solution or with a pH near-neutral) (buffer aqueous solution)
  • a solution of the nucleic acid of the present invention an aqueous solution, an aqueous buffer solution with a near-neutral pH, or an acidic aqueous buffer solution, preferably an aqueous solution or with a pH near-neutral
  • buffer aqueous solution buffer aqueous solution
  • Uncomplexed oligodeoxynucleotides can be removed by subjecting the resulting complex to purification by size exclusion chromatography, ultrafiltration, dialysis, or the like.
  • uncomplexed ⁇ -glucan can be removed by purifying the produced complex by anion exchange chromatography.
  • the complex can be appropriately purified by the above method.
  • Formation of the complex of the nucleic acid and polysaccharide of the present invention can be achieved by, for example, conformational change by CD (circular dichroism) spectrum, UV absorption shift by size exclusion chromatography, gel electrophoresis, microchip electrophoresis, and capillary electrophoresis. Although it can be confirmed by measurement, it is not limited to this.
  • the mixing ratio of the nucleic acid of the present invention and the polysaccharide can be appropriately set in consideration of the length of the poly dA chain and the like. be.
  • the nucleic acid-polysaccharide complex of the present invention exhibits the form of rod-shaped particles.
  • the particle size is equivalent to the size of the particles formed by the ⁇ -glucan (e.g., schizophyllan) used as a material naturally exhibiting a triple helix structure, and the average particle size is usually 10 to 100 nm, preferably 20 to 50 nm. is.
  • the particle size can be measured by a dynamic light scattering method at 80° C. using a Malvern Instruments Zeta Sizer after dissolving the composite in water.
  • the complex of nucleic acid and polysaccharide of the present invention is preferably isolated.
  • the purity of the "isolated complex" (percentage of the target complex weight to the total weight of the object to be evaluated) is usually 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, and still more preferably is over 99%.
  • the conjugate of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention and the adjuvant of the present invention obtained as described above can be provided as a medicament.
  • the medicament (I) of the present invention can be used as a liquid preparation as it is or in an appropriate dosage form, since both the complex of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention and the adjuvant of the present invention, which are active ingredients, have low toxicity.
  • the composition can be administered orally or parenterally (e.g., intratumoral administration, intravascular administration, etc.) to mammals with cancer, parenteral administration being preferred, and intratumoral administration being more preferred. preferable.
  • Examples of mammals to be administered include rodents such as mice, pets such as dogs, livestock such as pigs and horses, and primates such as humans, monkeys, orangutans and chimpanzees, etc. Humans are particularly preferred.
  • compositions for parenteral administration include, for example, injections, suppositories, etc.
  • Injections include dosage forms such as intratumoral injections, intravenous injections, intramuscular injections, drip injections, and the like. can be Such injections can be prepared according to known methods. Injections can be prepared, for example, by dissolving, suspending, or suspending the complex of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention and the adjuvant of the present invention in a sterile aqueous or oily liquid commonly used for injections. It can be prepared by emulsifying.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants, and the like.
  • propylene glycol polyethylene glycol
  • nonionic surfactants eg, polysorbate 80, HCO-50 (polyoxyethylene (50 mol) adduct of hydrogenated castor oil)
  • oily liquid for example, sesame oil, soybean oil, etc. may be used, and benzyl benzoate, benzyl alcohol, etc. may be used together as a solubilizing agent.
  • the prepared injection solution is preferably filled into a suitable ampoule.
  • Suppositories for rectal administration may be prepared by mixing the binding molecule and photosensitive molecule conjugate of the present invention and the adjuvant of the present invention with a conventional suppository base.
  • compositions for oral administration include solid or liquid dosage forms, specifically tablets (including sugar-coated tablets and film-coated tablets), pills, granules, powders, capsules (including soft capsules), Syrups, emulsions, suspensions and the like are included.
  • Such compositions are manufactured by known methods and may contain carriers, diluents or excipients commonly used in the pharmaceutical field.
  • Carriers and excipients for tablets include, for example, lactose, starch, sucrose and magnesium stearate.
  • the medicament (I) of the present invention can be administered, for example, directly to a tumor site or its periphery, or intravascularly (eg, intravenously).
  • the dosage can be appropriately determined by a doctor or a medical practitioner, taking into consideration the size of the tumor, age, weight, condition, etc. of the patient.
  • the conjugate of the binding molecule and photosensitive molecule of the present invention is a conjugate of an antibody and IR700
  • the dose of the conjugate can be, for example, 300 mg to 1,200 mg per 1 m 2 of body surface area when administered intravenously.
  • Intratumoral administration may range from 30 mg to 120 mg, depending on the size of the tumor.
  • the dose of K3-SPG can be, for example, 0.001, 1, 5, 10, 15, 100, or 1,000 mg/kg body weight per dose.
  • the number of administrations can also be appropriately determined by a doctor or a medical practitioner, taking into consideration the size of the tumor, age, weight, condition, etc. of the patient.
  • the medicament (I) of the present invention may be prepared as a formulation containing the complex of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention and the adjuvant of the present invention, respectively, or may be prepared as separate agents in one package. It may be prepared as a kit comprising.
  • the medicament (Ia) of the present invention is prepared as a kit that is provided in one package as a complex agent of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention and is used in combination with the adjuvant of the present invention.
  • the medicament (Ib) of the present invention is a kit provided in one package as an adjuvant agent of the present invention, and is prepared as a kit for combined use with the complex of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention.
  • the dosage and administration in the package insert states that one dosage and administration is to be used in combination with the complex of the binding molecule and the photosensitive molecule of the present invention or the adjuvant of the present invention. described as a mode.
  • the medicament (I), (Ia) or (Ib) of the present invention is a combination drug containing the binding molecule and photosensitive molecule complex of the present invention and the adjuvant of the present invention, respectively, the binding molecule of the present invention and The conjugate of the photosensitive molecule and the adjuvant of the invention are administered in co-administration by the same route of administration.
  • administration routes of the combination drug include intratumoral administration and intravenous administration.
  • the conjugate of the binding molecule and photosensitive molecule of the present invention and the adjuvant of the present invention can be administered simultaneously through the same route of administration, administration at different times through the same route of administration, simultaneous administration through different routes of administration, and administration at different times through different routes of administration.
  • Administration routes of the kit include, for example, intratumoral administration and intravenous administration.
  • a conjugate of a binding molecule and a photosensitive molecule of the invention may be administered intratumorally and an adjuvant of the invention may be administered intratumorally.
  • the binding molecule and photosensitive molecule conjugate of the invention may be administered intravenously and the adjuvant of the invention may be administered intratumorally.
  • the binding molecule and photosensitive molecule conjugate of the invention may be administered intravenously and the adjuvant of the invention may be administered intravenously.
  • a conjugate of a binding molecule and a photosensitive molecule of the invention may be administered intratumorally and an adjuvant of the invention may be administered intravenously.
  • the cancer lesion is irradiated with near-infrared rays.
  • the timing of near-infrared irradiation is usually 6 hours to 72 hours, preferably 12 hours to 60 hours, more preferably 18 hours to 48 hours after administration of the medicament (I) of the present invention. Preferably, it is 24 hours to 36 hours.
  • the wavelength of the near-infrared rays to be irradiated is not limited as long as it is suitable for exciting photosensitive molecules, but generally includes about 685 nm to about 695 nm.
  • the dose of far-infrared rays can be appropriately determined by a doctor or medical staff, and can be, for example, 10 J/cm 2 to 200 J/cm 2 .
  • the present invention provides a drug for treating cancer (hereinafter referred to as the drug (II) of the present invention), which comprises a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and a nanoparticle. do.
  • the medicament (II) of the present invention is a medicament for cancer treatment containing a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule, and can be used in combination with nanoparticles.
  • the medicament (II) of the present invention is a medicament for cancer treatment containing nanoparticles, which can be used in combination with a complex of a cancer-specific cell surface molecule-binding molecule and a photosensitive molecule. It may be a drug that can
  • the nanoparticles are, for example, nanoparticles having immunostimulatory activity or nanoparticles having anticancer activity. Nanoparticles with immunostimulatory activity include nanoparticulated adjuvants.
  • the above-described adjuvant of the present invention may be nanoparticulated, and is preferably a ligand for TLR9, and such a ligand is preferably a complex of nucleic acid and polysaccharide.
  • Nanoparticles having anticancer activity include, for example, nanoparticulated anticancer agents.
  • Anticancer agents include, but are not limited to, paclitaxel, cetuximab, gefitinib, cyclophosphamide, imatinib, cisplatin, afatinib, gemcitabine, lapatinib, erlotinib, docetaxel, Opdivo, taxol, veltuzumab, trastuzumab, panitumumab, rituximab and the like.
  • the cancer lesion is irradiated with near-infrared rays, similar to the drug (I) of the present invention.
  • the timing of irradiation with near-infrared rays, the wavelength of near-infrared rays, and the dose of far-infrared rays may be the same as in the pharmaceutical agent (I) of the present invention.
  • KPC-N cells established from genetically modified pancreatic cancer model mice (KrasLSL-G12D/+, Trp53LSL-R172H/+, Pdx1-Cre: KPC mice) were used as pancreatic cancer model cell lines.
  • MC38 cells were used as a colon cancer model cell line.
  • Photoimmunotherapy InVivoMAb-anti-mouse/human CD44 (clone IM7: BioXcell) was used as an antibody for photoimmunotherapy.
  • IRDye 700DX NHS (LI-COR) was used as a fluorescent dye for photoimmunotherapy.
  • IR700-binding CD44 antibody (anti-CD44 Ab-IR700) was prepared according to a previous report (Mitsunaga et al. Nat Med. 17, 2011) using IRDye 700DX NHS and InVivoMAb-anti-mouse/human CD44 for photoimmunotherapy. used as a substance.
  • MLL-III-690-1300mW-3%-LED (CNI) was used as an infrared irradiation device for exciting the fluorescent dye.
  • TLR9 ligand K3-SPG or Alexa647-K3-SPG prepared in the laboratory of Professor Takeshi Ishii, Institute of Medical Science, University of Tokyo was used.
  • K3-SPG is a TLR9 ligand and a complex of nucleic acids and polysaccharides.
  • This K3-SPG is a nanoparticulated adjuvant.
  • Alexa647-K3-SPG is Alexa647 labeled K3-SPG.
  • K3-SPG and Alexa647-K3-SPG were synthesized, for example, by the method described in WO2015/041318.
  • a CpG ODN (SEQ ID NO: 2: 5'-ATCGACTCTCGAGCGTTCTC-40mer A-3') in which poly dA is arranged on the 3' side of the K-type CpG ODN was synthesized, and the synthesized CpG ODN and SPG were complexed. bottom.
  • CpG ODNs of Examples are shown in Table 1 and were synthesized by Genedesign Co., Ltd. (s in the sequence of Table 1 is a phosphodiester bond between nucleosides replaced with a phosphorothioate bond. ).
  • This oligodeoxynucleotide was prepared using a conventional solid-phase phosphoramidite method (Nucleic Acids in Chemistry and Biology, 3. Chemical synthesis (1990) ed. G. Michael Blackburn and Michael J. Gait. Oxford University Press). Synthesized.
  • CpG ODN and SPG were conjugated by the following procedure. 7.22 mg of K3-dA40 was dissolved in water (3.7 mL). 15 mg of SPG was dissolved in 0.25 N NaOH (1 mL). After adding the SPG solution to the DNA and mixing well, 1 mL of 330 mM NaH2PO4 was added to the DNA/SPG solution and kept overnight at 4°C to complete complexation . The molar ratio (MSPG/MDNA) was fixed at 0.27. Complex formation was confirmed by a microchip electrophoresis device (SHIMADZU: MultiNA).
  • TLR3 ligand A TLR3 ligand PolyI:C (Poly(I:C) (HMW) VacciGrade TM : InvivoGen) was used.
  • Example 1 Photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy using a pancreatic cancer model
  • 1.5x10 6 KPC-N cells were transplanted into the subcutaneous left and right sides of the back of 6- to 8-week-old C57BL/6 mice.
  • tumors on the right side of the back of mice were treated with 100 ⁇ l of PBS in the untreated group, 10 ⁇ g of K3-SPG dissolved in 100 ⁇ l of PBS in the adjuvant-administered group, and 100 ⁇ l of PBS in the photoimmunotherapy group.
  • 5 ⁇ g of anti-CD44 Ab-IR700 was injected locally (intratumoral administration) into the combination therapy group, and 10 ⁇ g of K3-SPG and 5 ⁇ g of anti-CD44 Ab-IR700 dissolved in 100 ⁇ l of PBS were injected locally (intratumoral administration).
  • the tumor on the right side of the back was irradiated with 100 J/cm 2 of near-infrared rays (wavelength: 690 nm) (Fig. 1).
  • the sizes of the left and right tumors were monitored over time (Figs. 2 and 3).
  • the tumors on the right side of the back of mice continued to grow in the untreated group.
  • the tumor on the right side of the back once shrank, but then continued to grow slowly.
  • the tumor on the right side of the back continued to shrink immediately after administration, and eventually almost disappeared.
  • the tumors on the left side of the back of mice continued to grow in the same way as the tumors on the right side of the back in the untreated group.
  • the tumor on the left side of the back continued to grow, albeit at a slower rate than in the untreated group.
  • the tumor on the left side of the back continued to grow, but at a slower rate than the adjuvant administration group and the photoimmunotherapy group.
  • the disappearance of the right dorsal tumor in the combination therapy group was due to the direct destruction of the tumor by photoimmunotherapy, followed by the attack of the residual tumor by the strong anti-tumor immunity induced by the antigens released from the destroyed tumor and the adjuvant. It is considered to have been realized by the fact that In addition, since the growth rate of the tumor on the left side of the back in the combination therapy group was slower than that in the adjuvant administration group and the photoimmunotherapy group, anti-tumor immunity was induced more strongly in the combination therapy group than in the adjuvant administration group and photoimmunotherapy group. I know it was done.
  • the existing PIT was aimed at selective destruction of cancer cells, and was not aimed at inducing cancer immunity.
  • PIT does not directly amplify LIIA, but has no choice but to rely on normal in vivo reactions, so it has been thought that it is not sufficiently effective as an in situ vaccine.
  • the photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy of Example 1 can be expected to directly amplify LIIA and have excellent LTAR effects. That is, the photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy of Example 1 is an immunotherapy (cancer vaccine therapy) based on a new concept of stimulating cancer immunity by a mechanism of action completely different from that of checkpoint inhibitors.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Publication No. 2018-528268
  • FaDu cells treated with cetuximab IRDye 700DX were irradiated with light and co-cultured with human dendritic cells, and the collected human dendritic cells were treated with poly I:C.
  • Poly I:C is also not a TLR9 ligand and is not a complex of nucleic acids and polysaccharides. Therefore, the contents described in Patent Document 1 are different from the photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy of Example 1.
  • K3-SPG adjuvant administration group
  • anti-CD44 Ab-IR700 anti-CD44 Ab-IR700
  • N 4 in each group
  • the tumor on the right side of the back of mice was treated with 100 ⁇ l of PBS in the untreated group, 10 ⁇ g of K3-SPG dissolved in 100 ⁇ l of PBS in the adjuvant-administered group, and 100 ⁇ l of PBS in the photoimmunotherapy group.
  • 1 ⁇ g of anti-CD44 Ab-IR700 was injected locally (intratumoral administration) into the combination therapy group, and 10 ⁇ g of K3-SPG and 1 ⁇ g of anti-CD44 Ab-IR700 dissolved in 100 ⁇ l of PBS were injected locally (intratumoral administration).
  • the tumor on the right side of the back was irradiated with 100 J/cm 2 of near-infrared rays (wavelength: 690 nm) (Fig. 4).
  • the size of the tumor (calculated as major axis x minor axis x minor axis x 1/2) was monitored over time (Fig. 5).
  • the tumors on the right side of the back of mice continued to grow in the untreated group.
  • the tumor on the right side of the back continued to grow, albeit more slowly than in the untreated group.
  • the photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy of Example 2 is an immunotherapy (cancer vaccine therapy) based on a new concept of activating cancer immunity with a completely different mechanism of action from checkpoint inhibitors. It is possible to suppress side effects while inducing a systemic anti-tumor effect while treating the tumor locally.
  • Example 3 Photoimmunotherapy/adjuvant combination therapy using a pancreatic cancer model (2) 1.5 ⁇ 10 6 KPC-N cells were implanted subcutaneously on the left and right sides of the back of 6- to 8-week-old C57BL/6 mice. Seven days after cell transplantation, 5 ⁇ g of anti-CD44 Ab-IR700 dissolved in 100 ⁇ l of PBS was locally injected (intratumoral administration) into the tumor on the left side of the mouse's back. IR700 fluorescence signal within the tumor was monitored with the IVIS system on day 8 after implantation. Next, the left tumor was irradiated with 100 J/cm 2 of near-infrared rays (wavelength: 690 nm).
  • Alexa647-K3-SPG (10 ⁇ g) dissolved in 100 ⁇ l of PBS was intravenously administered (iv) through the penile vein. Furthermore, after 1 hour, the IVIS system monitored the fluorescence signal of Alexa647. As a result, intravenously administered Alexa647-K3-SPG was strongly accumulated in photoimmunotherapy-treated tumors, but hardly accumulated in photoimmunotherapy-untreated tumors (Fig. 6). That is, Alexa647-K3-SPG was selectively accumulated in photoimmunotherapy-treated tumors.
  • the subcutaneous tumor was irradiated with 100 J/cm 2 of near-infrared rays (wavelength: 690 nm) on days 9 and 10 after transplantation.
  • Tumor size (calculated as major axis x minor axis x minor axis x 1/2) was monitored over time.
  • CR mice CR mice
  • tumors disappeared completely in 4 out of 6 mice
  • tumors remained in 2 mice (nonCR mice) (Fig. 9).
  • 1.5x10 KPC-N cells were injected into each of the above 4 CR mice, 2 nonCR mice and 6 age-matched control mice.
  • the present invention can further improve the anti-tumor effect induced by photoimmunotherapy.
  • This application is based on Japanese Patent Application No. 2021-171961 (filing date: October 20, 2021) filed in Japan, the entire contents of which are incorporated herein.

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Abstract

本発明は抗腫瘍効果を向上させる医薬を提供する。

Description

がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む医薬
　本発明は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む医薬などに関する。
　がん疾患は患者数も多く増加傾向であり、手術、化学療法、放射線治療などの既存治療の成績は十分でない。近年、がん免疫療法がこれらの既存の治療法に加わった。がん免疫は、腫瘍局所抗原放出（Local Tumor Antigen Release: LTAR）と局所自然免疫活性化（Local Innate Immune Activation: LIIA）により起動される。腫瘍局所への治療に介入することによって免疫の賦活を狙うin situワクチンは、LIIAを人為的に増強する治療法といえる。In situワクチンは、副作用を最小限に抑えつつ、全身性の強い抗がん効果を得られることが期待でき、新たながん免疫の治療戦略となる。しかしながら、現在のがん免疫療法の主流はチェックポイント阻害剤であり、奏功率が十分といえず、重篤な副作用も問題となっている。
　光免疫療法（photoimmunotherapy: PIT）は、がん抗原特異的な抗体と光感受性分子IR700dyeとの複合体を含む薬剤を投与し、腫瘍局所に非熱性近赤外光を照射することによって腫瘍細胞のみを選択的に破壊する治療法である(特許文献１)。2020年9月、世界に先駆けてわが国で、切除不能な局所進行性又は局所再発性の頭頸部がんに対して、EGFR抗体セツキシマブにIR700dyeを付加した抗体製剤ASP1929と近赤外光レーザ照射機器を組み合わせた光免疫療法が保険承認された。PITの作用機序は、光照射によって励起された光感受性分子ががん細胞の細胞膜の構造を変化させた結果、浸透圧格差によってがん細胞内に流入した水分子によって細胞破裂を生じさせることである。従って、PITでは、熱変性を受けていない多量のがん抗原が放出されるため、優れたLTAR効果が期待できる。しかしながら、光免疫療法は、臨床試験での効果を示す奏功率が計４０％程度にとどまっており、制御性T細胞に対する光免疫療法との組み合わせや免疫チェックポイント阻害薬との併用などが試みられている。
特表2018-528268号公報
　従って、本発明の課題は、抗腫瘍効果を向上させることである。
　本発明者らは、以前TLR9リガンドとしてヒト化K型CpG-ODNとシゾフィランの複合体、K3-SPGを開発したことを報告した（国際公開第2016/152767号公報）。本物質は、強いI型IFN誘導能を有する自然免疫活性化アジュバントで、抗原特異的細胞障害性T細胞誘導能を有することから、将来的にウイルスやがんなどの疾患の予防または治療に応用が期待される。そこで本発明者らは、がん細胞を移植したマウスを用いて、光免疫療法用物質およびアジュバントを腫瘍内投与し、近赤外光照射によって光免疫療法を試みたところ、直接投与された腫瘍をほぼ消失させることができたばかりか、投与されていない腫瘍も縮退させることに成功した。そしてこれらの効果は、光免疫療法またはアジュバントの単独投与に比べて高いことを確認した。また、光免疫療法によって腫瘍が破壊された後、アジュバントを静脈内投与すると、全身投与にもかかわらず、アジュバントが腫瘍部にのみ選択的に集積することが確認された。さらに、光免疫療法用物質およびアジュバントを腫瘍内投与し、近赤外光照射によって光免疫療法を行ったマウスの中で完全寛解に至った個体は、再度がん細胞を移植しても、がん細胞の増殖はみられなかった。本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
　即ち、本発明は以下の通りである。
［１］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む、がん治療のための医薬。
［２］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体を含む、がん治療のための医薬であって、前記医薬がToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントと併用して投与するための前記医薬。
［３］Toll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントを含む、がん治療のための医薬であって、前記医薬が光感受性分子およびがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子の複合体と併用して投与するための前記医薬。
［４］アジュバントがToll様受容体9（TLR9）のリガンドである、［１］～［３］のいずれか１つに記載の医薬。
［５］Toll様受容体9（TLR9）のリガンドが核酸および多糖の複合体である、［４］に記載の医薬。
［６］核酸がK型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む核酸である、［５］に記載の医薬。
［７］K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドがヒト化されていることを特徴とする、［６］に記載の医薬。
［８］K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドが配列番号１で表されるヌクレオチド配列を含む、［６］または［７］に記載の医薬。
［９］多糖がβグルカンである、［５］～［８］のいずれか１つに記載の医薬。
［１０］βグルカンがシゾフィランまたはレンチナンである、［９］に記載の医薬。
［１１］アジュバントがSTINGのリガンドである、［１］～［３］のいずれか１つに記載の医薬。
［１２］STINGのリガンドがcGAMPである、［１１］に記載の医薬。
［１３］医薬がキットである、［１］～［１２］のいずれか１つに記載の医薬。
［１４］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体が、腫瘍内投与又は静脈内投与され、アジュバントが腫瘍内投与又は静脈内投与されることを特徴とする、［１３］に記載の医薬。
［１５］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントがそれぞれ静脈内投与されることを特徴とする、［１３］に記載の医薬。
［１６］対象にがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントの有効量を投与することを含む、がんの治療方法。
［１７］がんの治療に使用するためのがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバント。
［１８］がん治療のための医薬の製造におけるがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントの使用。
［１９］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントを含む、がん治療のためのキット。
［２０］がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体を含む、がん治療のためのキットであって、前記キットがToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントと併用して投与するための前記キット。
［２１］Toll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントを含む、がん治療のためのキットであって、前記キットが光感受性分子およびがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子の複合体と併用して投与するための前記キット。
［２２］［１］～［１２］のいずれか１つに記載のがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む、がん治療のためのキット。
［２３］アジュバントがToll様受容体9（TLR9）のリガンドである、［１９］～［２２］のいずれか１つに記載のキット。
［２４］Toll様受容体9（TLR9）のリガンドが核酸および多糖の複合体である、［２３］に記載のキット。
［２５］核酸がK型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む核酸である、［２４］に記載のキット。
［２６］K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドがヒト化されていることを特徴とする、［２５］に記載のキット。
［２７］K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドが配列番号１で表されるヌクレオチド配列を含む、［２５］または［２６］に記載のキット。
［２８］多糖がβグルカンである、［２４］～［２７］のいずれか１つに記載のキット。
［２９］βグルカンがシゾフィランまたはレンチナンである、［２８］に記載のキット。
［３０］アジュバントがSTINGのリガンドである、［１９］～［２２］のいずれか１つに記載のキット。
［３１］STINGのリガンドがcGAMPである、［３０］に記載のキット。
　本発明は、抗腫瘍効果を向上させることができる。
図１は、膵がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける治療スケジュールを示す図である。 図２は、膵がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける膵がんのサイズの平均値（N=6）の変化を示す図である。治療側は背部右側腫瘍のサイズの平均値の変化を示し、対側は背部左側腫瘍のサイズの平均値の変化を示す。 図３は、膵がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける各個体の膵がんのサイズの変化を示す図である。治療側は背部右側腫瘍のサイズの平均値の変化を示し、対側は背部左側腫瘍のサイズの平均値の変化を示す。 図４は、大腸がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける治療スケジュールを示す図である。 図５は、大腸がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける各個体の膵がんのサイズの変化およびその平均値（N=4）の変化を示す図である。 図６は、膵がん細胞を移植されたマウスの背部左側腫瘍にanti-CD44 Ab-IR700を腫瘍内投与し、近赤外線照射後、Alexa647-K3-SPGを静脈投与した場合における、背部左右腫瘍へのAlexa647-K3-SPGの集積の差を示す図である。 図７は、膵がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Control)、アジュバント投与群(2’3’-cGAMP)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(2’3’-cGAMP /anti-CD44 Ab-IR700)のそれぞれにおける膵がんのサイズの平均値（N=6）の変化を示す図である。 図８は、膵がん細胞を移植されたマウスの無治療群(Control)、PolyI:C投与群(PolyI:C)のそれぞれにおける膵がんのサイズの平均値（N=6）の変化を示す図である。 図９は、膵がん細胞を再度移植された無治療群(Control；N=6)、CR群（N=4）、nonCR群（N=2）のそれぞれにおける膵がんのサイズの変化を示す図である。
１．医薬
　本発明は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントを含む、がん治療のための医薬（以下、本発明の医薬(I)）を提供する。
　また、本発明は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体を含む、がん治療のための医薬（以下、本発明の医薬(Ia)）であって、アジュバントと併用することができる医薬を提供する。また、本発明は、アジュバントを含む、がん治療のための医薬（以下、本発明の医薬(Ib)）であって、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体と併用することができる医薬を提供する。がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体とアジュバントとの併用の態様は限定されず、対象とするがんの種類や治療ステージ等に応じて、当業者（例えば、医師）が様々な態様で実施することができる。
（１）がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体
　本発明の医薬(I)は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体（以下、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体）を含む。本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体の作製は、従来公知の手段に従って実施することができ、例えば、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子と光感受性分子を、適当な結合を介して連結することにより複合体とすることができる。結合としては、静電結合、ファンデルワールス結合、水素結合、疎水性相互作用などの非共有結合、アミド結合などの共有結合などが挙げられる。
　本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は同一の分子を１つ以上含んでいてもよい。ある実施態様では、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子１つに対して、光感受性分子が２つ以上含まれていてもよい。このような複合体は、光感受性分子を１つだけ含む複合体よりも抗腫瘍活性が高く、投与量を低減できることが期待される。また、別の実施態様では、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は、光感受性分子１つに対して、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子が２つ以上含まれていてもよい。このような複合体は、１種類の複合体で、異なるがん特異的細胞表面分子を有する複数の種類のがんを標的にすることができ、適用範囲が広いユニバーサルな医薬として使用することができる。
（１―１）がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子
　本発明においてがん特異的細胞表面分子は、本発明の医薬(I)が標的とするがんの細胞表面に発現する分子である。本発明の医薬(I)が標的とするがんとしては、がん特異的細胞表面分子を発現しているがんやがん特異的細胞表面分子をコードする遺伝子の発現レベルの上昇を伴うがんであれば特に制限されない。なお、ここでいう「がん」は、「（悪性）腫瘍」及び「（悪性）新生物」という用語と同義的に使用され、肉腫、中皮腫、及び細網内皮系、リンパ性、又は造血性の新生物障害（例えば、骨髄腫、リンパ腫、又は白血病）などの悪性疾患を対象疾患に含めることとする。本発明の医薬(I)は腫瘍内投与、または静脈内され、好ましい実施形態において、標的病変は固形がんが望ましいが、それが存在する部位を問わない。例えば、固形がんには、頭頚部がん、口腔がん、甲状腺がん、食道がん、胃がん、膵がん、大腸がん、肺がん、乳がん、肝がん、胆管がん、皮膚がん、膀胱がん、前立腺がん、子宮体部がん、子宮頸がん、卵巣がん、神経芽細胞腫、神経膠腫、黒色腫、肉腫、中皮種などが挙げられる。
　また、本発明においてがん特異的細胞表面分子は、上記のがんに特異的に発現する分子である。ここで特異的とは、該分子ががんの細胞膜の表面にのみ提示されていることのみならず、正常細胞または組織に比べて該分子が量的に多いことも含む。量的要素の違いとしては、例えば、約2～約100倍であってよい。そのようながん特異的細胞表面分子としては、例えば、CD44、GPR87、EGFR、Mesothelin、Glypican-3、CEA、EpCAM、HER-2、CD133、インテグリンαvβ3、インテグリンαvβ6、ラミニン受容体などが挙げられる。
　本発明においてがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子は、本発明の医薬(I)が標的とするがんの細胞表面に特異的に発現する分子に結合する分子であれば特に制限されない。そのような結合性分子としては、例えば、抗体、結合性ペプチドまたは核酸アプタマーなどが挙げられ、好ましくは、抗体が挙げられる。
　本発明において抗体は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体をともに包含する。また、当該抗体は、あらゆる哺乳動物由来の抗体を包含するものであってよく、さらに、IgG、IgA、IgM、IgDまたはIgEのいずれの免疫グロブリンクラスに属するものであってもよいが、好ましくはIgGである。当該抗体は目的のがん特異的細胞表面分子に結合する市販の抗体や研究機関に保存されている抗体を使用してもよい。あるいは、当業者であれば、従来公知の方法に従って、抗体を作製することができる。
　また、抗体には、前記のポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（mAb）等の天然型抗体、遺伝子組換技術を用いて製造され得るキメラ抗体、ヒト化抗体や一本鎖抗体に加えて、これらの抗体の断片が含まれる。抗体の断片とは、前述の抗体の一部分の領域を意味し、具体的にはFab、Fab’、F(ab’)2、scAb、scFv、またはscFv-Fc等を包含する。
　本発明において結合性ペプチドは、抗体と異なり、がん特異的細胞表面分子に対して結合活性を有する特定のモチーフ配列を含むペプチドである。モチーフ配列としては、例えば、RGDモチーフ配列（標的：インテグリンαvβ3）、YIGSRモチーフ配列（標的：ラミニン受容体）などが挙げられる。結合性ペプチドに含まれるモチーフ配列は１つであっても２つ以上であってもよい。また、２つ以上のモチーフ配列が含まれる場合、それらは同一のモチーフ配列であってもよいし、互いに異なるモチーフ配列であってもよい。
　なお、抗体またはその断片および結合性ペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がN末端（アミノ末端）、右端がC末端（カルボキシル末端）で記載される。本発明で用いられる抗体またはその断片および結合性ペプチドは、C末端がカルボキシル基（-COOH）、カルボキシレート(-COO-）、アミド（-CONH2）またはエステル（-COOR）の何れであってもよい。
　ここでエステルにおけるRとしては、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルなどのC1-6アルキル基；例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのC3-8シクロアルキル基；例えば、フェニル、α-ナフチルなどのC6-12アリール基；例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル－C1-2アルキル基；α－ナフチルメチルなどのα-ナフチル－C1-2アルキル基などのC7-14アラルキル基；ピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
　さらに、本発明で用いられる抗体またはその断片および結合性ペプチドには、N末端のアミノ酸残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのC1-6アルカノイルなどのC1-6アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成し得るN末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば-OH、-SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのC1-6アルカノイル基などのC1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
　本発明において核酸アプタマーは、がん特異的細胞表面分子に対して結合活性を有する核酸をいう。核酸アプタマーは、RNA、DNA、修飾核酸又はそれらの混合物であり得る。核酸アプタマーはまた、直鎖状又は環状の形態であり得る。
　核酸アプタマーがRNAである場合、安定性等を高めるため、各ヌクレオチドの糖残基（例、リボース）が修飾されたものであってもよい。糖残基において修飾される部位としては、例えば、糖残基の2’位、3’位及び/又は4’位のヒドロキシル基を他の原子に置き換えたものなどが挙げられる。修飾の種類としては、例えば、フルオロ化、アルコキシ化、O-アリル化、S-アルキル化、S-アリル化、アミノ化が挙げられる。
　また糖残基については、2’位及び4’位で架橋構造を形成したBNA:Bridged nucleic acid (LNA:Linked nucleic acid)とすることもできる。
　核酸アプタマーは、SELEX法およびその改良法(例えば、Ellington et al., (1990), Nature, 346, 818-822;Tuerk et al., (1990), Science, 249, 505-510)を用いて作製することができる。SELEX法ではラウンド数を増やすこと、または競合物質を使用することによって、がん特異的細胞表面分子に対してより結合力の強い核酸アプタマーが濃縮され、選別される。よって、SELEX法のラウンド数を調節したり、および／又は競合状態を変化させたりすることで、結合力が異なる核酸アプタマー、結合形態が異なる核酸アプタマー、結合力や結合形態は同じであるが塩基配列が異なる核酸アプタマーを得ることができる。また、SELEX法にはPCRによる増幅過程が含まれるが、その過程でマンガンイオンを使用するなどして変異を入れることで、より多様性に富んだ配列を有する核酸アプタマーを得ることができる。
　SELEX法で得られる核酸アプタマーの塩基長は80ヌクレオチド程度であるが、容易に化学合成ができる長さ（例えば、化学合成ができるのは約60ヌクレオチド以下であり、より好ましくは約50ヌクレオチド程度以下、さらに好ましくは45ヌクレオチド以下）まで短鎖化することが好ましい。
（１―２）光感受性分子
　従来公知の光増感剤では、光増感剤自体が腫瘍に蓄積し、光増感剤に対しての光励起と光放射のエネルギー差がミトコンドリアなどに作用した結果、生み出される一重項酸素、フリーラジカルなどの酸化ストレス物質が細胞を傷害し、アポトーシスに導かれる。一方、本発明において使用される光感受性分子は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子を介して目的のがんに接着後、光感受性分子が外部から照射される光によって励起される。励起された光感受性分子は親水性から疎水性に変化し、結合性分子と共に細胞膜上で凝集する。その結果、細胞膜の構造が破壊され、細胞膜内外の浸透圧格差によって細胞内に侵入した水分子が細胞を破裂させる。このメカニズムによって、光増感剤によるアポトーシスとは異なり、極めて短時間に細胞死（がん細胞の破裂）が引き起こされる。そのような光感受性分子としては、公知の分子を使用することができるが、例えば、サロタロカン（6-（｛［3-（｛（OC-6-13）-ビス（｛3-［ビス（3-スルホプロピル）（3-スルホナトプロピル）アザニウミル］プロピル｝ジメチルシラノラト-κO,κO'）［（フタロシアニナト（2-）κN29,κN30,κN31,κN32）-1-イル］シリコン｝オキシ）プロポキシ］カルボニル｝アミノ）ヘキサノイル（C70H96N11O24S6Si3；分子量：1,752.22））の四ナトリウム塩が挙げられる。
（２）アジュバント
　本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は、がん細胞を破裂させることによって周囲にがん抗原を多量に放出させることができる。このがん抗原は、樹状細胞に取り込まれ、MHCクラスI上に抗原提示される。樹状細胞上に提示されたがん抗原は、それを認識することができるT細胞受容体を発現する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)に結合し、CTL内にシグナルを伝達することができる。しかし、それだけではCTLは十分に活性化されない。CTLを十分に活性化させるためには、アジュバントがパターン認識受容体を介して樹状細胞を活性化する必要がある。従って、本発明の医薬(I)は、アジュバント（以下、本発明のアジュバント）を含む。ここで、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は、血管を通じてがん細胞に送達される場合、最初は血管の周囲に存在するがん細胞に最も多く集積すると考えられている。外部から照射される光によって複合体が集積したがん細胞は短時間で破裂に導かれる。その結果、血管周囲に潜在的な空間が形成され、血管の拡大が生じる。このような一連の変化により、最初は腫瘍組織内の血液量が増加し、それに伴って血流速度が低下して腫瘍間質圧が低下し、灌流が増加してナノサイズの粒子や薬剤が残された腫瘍組織に漏出することが報告されている（Nanoscale. 2016 July 07; 8(25): 12504-12509）。従って、本発明のアジュバントの様態としては、ナノ粒子でも非ナノ粒子でもどちらでもよいが、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体が静脈内投与される場合、本発明のアジュバントは、ナノ粒子であることが望ましい。ナノ粒子の粒子径は、1μm未満であれば特に制限は無いが、好ましくは10nm～200nmであり、より好ましくは20nm～100nmである。粒子径の測定は、例えばZetasizer Nano(Malvern社)などの粒度分布測定装置を用いて行うことができる。本明細書中、「粒子径」とは、動的光散乱法により測定した平均粒子径（個数平均）を意味する。
　本発明のアジュバントの受容体は、樹状細胞などの自然免疫細胞に発現するパターン認識受容体であれば特に制限されない。パターン認識受容体としては、例えば、Toll様受容体(TLR)、NOD様受容体(NLR)、RIG-I様受容体(RLR)、STING (stimulator of interferon genes)、またはC型レクチン受容体(CLR)などが挙げられ、そのなかでもTLR3を除くTLRまたはSTINGが本発明のアジュバントの受容体として好ましく、TLR3を除くTLRがより好ましい。また、TLRはTLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11などが挙げられるが、その中でもTLR9が好ましい。一方、TLR3は本発明のアジュバントの受容体としてCTLを活性化させないため、本発明のアジュバントの受容体から除かれる。
　また、パターン認識受容体のリガンドとしては、例えば、GM-CSF、IL-2、IL-７もしくはIL-12などのサイトカイン、QS21などの植物由来成分、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、塩化アルミニウムなどのアルミニウム塩、スクアレン、スクアレンとトコフェノールの混合物などの水中油滴エマルション（O/Wエマルション）、Montanide ISA 51などの油中水滴エマルション（W/Oエマルション）、イヌリン、ヘムなど合成ポリマー、3-O-desacyl-4’-monophosphoryl lipid A(MPL)などのリピドA(lipid A)、フラジェリンなどの細菌由来のタンパク質、CpG ODNなどの核酸、αグルカン、βグルカン、レンチナンなどの多糖、前記核酸および前記多糖の複合体などが挙げられ、好ましくは、多糖、核酸および多糖の複合体が挙げられる。
　以上から、本発明のアジュバントとしては、TLR3に対するリガンドは除かれる。また、TLR3リガンドを除くアジュバントのうち、TLR9のリガンドまたはSTINGのリガンドが好ましく、TLR9に対するリガンドがより好ましい。
　STINGのリガンドとしては、例えば、c-di-GMP、cGAMP（例：2’3’-cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate (2’3’-cGAMP)）などの核酸が挙げられる。
　TLR9のリガンドとしては、核酸および多糖の複合体（以下、本発明の核酸および多糖の複合体）が好ましい。
　本発明の核酸および多糖の複合体は、TLR9に結合し、樹状細胞を活性化しうるものであれば制限されないが、核酸としてK型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸（以下、本発明の核酸）を含むことが好ましい。
　本発明の核酸に含まれるCpGオリゴヌクレオチド(CpG ODN)は、免疫賦活性のCpGモチーフを含有する、短い(約20塩基対)、一本鎖の合成DNA断片であって、TLR9を介して樹状細胞(DCs)を活性化させ、それによって細胞傷害性Tリンパ球(CTL)を活性化しうるものであれば、特に制限されない。本発明で使用されるCpG ODNとしては、骨格配列及び免疫賦活特性がそれぞれ異なる、K型(B型とも呼ばれる)、D型(A型とも呼ばれる)、C型及びP型の４つの型のいずれが使用されてもよいが、K型が好ましい。
　K型CpG ODNは、非回文構造の、複数の非メチル化CpGモチーフを含有する。非メチル化CpGモチーフとは少なくとも１つのシトシン(C)－グアニン(G)配列を含む短いヌクレオチド配列であって、該シトシン－グアニン配列におけるシトシンの５位がメチル化されていないものを差す。
　本発明の核酸に含まれるK型CpG ODNは、好ましくはヒト化されている。「ヒト化」とは、ヒトTLR9に対するアゴニスト活性を有することを意味する。従って、ヒト化K型CpG ODNを含む本発明の核酸は、ヒトに対して特有の樹状細胞の活性化機能を有する。
　本発明において好適に用いられるK型CpG ODNは、10ヌクレオチド以上の長さであり、且つ式：
5’ N1N2N3T-CpG-WN4N5N63’
（式中、中央のCpGモチーフはメチル化されておらず、WはA又はTであり、N1、N2、N3、N４、N5及びN6はいかなるヌクレオチドであってもよい）で表されるヌクレオチド配列を含む。
　１つの実施形態において、本発明のK型CpG ODNは10ヌクレオチド以上の長さであり、上記式のヌクレオチド配列を含む。但し、上記式中、中央の４塩基のCpGモチーフ(T CpG W)は10ヌクレオチド中に含まれていれば良く、必ずしも上記式中、N3及びN4の間に位置する必要はない。また、上記式中、N1、N2、N3、N４、N5及びN6はいかなるヌクレオチドであっても良く、N1及びN2、N2及びN3、N3及びN4、N4及びN5、並びにN5及びN6の少なくともいずれか一つ（好ましくは一つ）の組み合わせは２塩基のCpGモチーフであっても良い。前記４塩基のCpGモチーフがN3及びN4の間に位置しない場合、上記式中、中央の４塩基（４～７番目の塩基）中の連続するいずれかの２塩基がCpGモチーフであり、他の２つの塩基はいかなるヌクレオチドであっても良い。
　本発明においてより好適に用いられるK型CpG ODNは１つまたは複数のCpGモチーフを含む非回文構造を含有する。更に好適に用いられるK型CpG ODNは１つまたは複数のCpGモチーフを含む非回文構造からなる。
　ヒト化K型CpG ODNは、一般的に、TCGA又はTCGTからなる４塩基のCpGモチーフを特徴とする。一つのヒト化K型CpG ODN中にこの４塩基のCpGモチーフが１つだけ含まれていてもよいし、２又は３個以上含まれていてもよい。好ましい実施形態において、本発明の核酸に含まれるK型CpG ODNは、１個、好ましくは２個、更に好ましくは３個以上、TCGA又はTCGTからなる4塩基のCpGモチーフを含む。該K型CpG ODNが２個以上の４塩基のCpGモチーフを有する場合、これらの４塩基のCpGモチーフは同一であっても異なっていてもよい。ただし、ヒトTLR9に対するアゴニスト活性を有する限り、特に限定されない。
　本発明の核酸に含まれるK型CpG ODNは、より好ましくは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列を含む。
　K型CpG ODNの長さは、本発明の核酸が樹状細胞を活性化できる限り、特に限定されないが、通常、100ヌクレオチド長以下（例えば、10～75ヌクレオチド長）、好ましくは50ヌクレオチド長以下（例えば、10～40ヌクレオチド長）、より好ましくは30ヌクレオチド長以下（例えば、10～25ヌクレオチド長）、最も好ましくは、12～25ヌクレオチド長である。
　本発明の核酸に含まれるポリデオキシアデニル酸(dA)の長さは、多糖鎖（好ましくはβグルカン）とともに三重螺旋構造を形成するのに十分な長さであれば特に限定されるものではないが、安定な三重螺旋構造を形成する観点からは、通常20ヌクレオチド長以上、好ましくは40ヌクレオチド長以上、より好ましくは60ヌクレオチド長以上である。以下、多糖がβグルカンである場合について説明するポリdAの長さを説明する。ポリdAは、長ければ長いほどβグルカンと安定な三重螺旋構造を形成するので、理論的には上限はないが、長すぎると、オリゴデオキシヌクレオチドの合成時の長さにバラつきが生じる原因となるので、通常、100ヌクレオチド長以下、好ましくは80以下である。一方、前記安定な三重螺旋構造の形成に加え、単位量のβグルカンあたりに結合する本発明の核酸量を増大させ、且つ該核酸の合成時の長さのばらつきの回避、複合化効率を図るという観点からは、ポリdAの長さは、好ましくは、20～60ヌクレオチド長（具体的には、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59又は60ヌクレオチド長）、より好ましくは、30～50ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50ヌクレオチド長）、最も好ましくは、30～45ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45ヌクレオチド長）である。特に、30ヌクレオチド長以上の場合、良好な複合化効率を示す。本発明の核酸は、ポリdAを含むことにより、２本のβグルカンとともに三重螺旋構造を形成する活性を有する。
　１分子の本発明の核酸には、複数個のK型CpG ODN及び/又はポリdAが含まれていてもよいが、好ましくは、K型CpG ODN及びポリdAが１つずつ含まれ、最も好ましくは、K型CpG ODN及びポリdAが１つずつからなる。
　例示的なCpGの配列としては、K3 CpG（配列番号１：5’-ATCGACTCTCGAGCGTTCTC-3’）等を挙げることができるがこれに限定されない。
　本発明の核酸は、ポリdAがK型CpG ODNの3’側に配置されていてもよいし、K型CpG ODNがポリdAの3’側に配置されていてもよいが、好ましくは、ポリdAがK型CpG ODNの3’側に配置されていることを特徴とする。この配置により、本発明の核酸が、抗がん作用も増強する可能性がある。
　本発明の核酸において、K型CpG ODNとポリdAとは、直接共有結合により連結されていてもよいし、スペーサー配列を介して連結されていてもよい。スペーサー配列とは、２つの近接した構成要素の間に挿入される１以上のヌクレオチドを含むヌクレオチド配列を意味する。スペーサー配列の長さは、本発明の核酸が、樹状細胞を活性化する活性を有する限り、特に限定されないが、通常1～10ヌクレオチド長、好ましくは1～5ヌクレオチド長、より好ましくは1～3ヌクレオチド長である。最も好ましくは、K型CpG ODNとポリdAとが、直接共有結合により連結される。
　本発明の核酸は、K型CpG ODN、ポリdA及び任意的なスペーサー配列に加え、その5’末端及び/又は3’末端に付加的なヌクレオチド配列を有していてもよい。該付加的なヌクレオチド配列の長さは、本発明の核酸が樹状細胞を活性化する活性を有する限り、特に限定されないが、通常1～10ヌクレオチド長、好ましくは1～5ヌクレオチド長、より好ましくは1～3ヌクレオチド長である。
　好ましい態様において、本発明の核酸は、このような5’末端及び/又は3’末端の付加的なヌクレオチド配列を含まない。即ち、本発明の核酸は、好ましくは、K型CpG ODN、ポリdA及び任意的なスペーサー配列からなり、更に好ましくは、K型CpG ODN及びポリdAからなる。
　最も好ましい態様において、本発明の核酸は、K型CpG ODN（具体的には、例えば、配列番号１で表されるヌクレオチド配列からなるオリゴデオキシヌクレオチド）及びポリdAからなり、K型CpG ODNが該オリゴデオキシヌクレオチドの5’末端に、ポリdAが3’末端に、それぞれ位置する。具体的には、配列番号１で表されるヌクレオチド配列からなるオリゴデオキシヌクレオチドの3’末端に、通常、20～60ヌクレオチド長（好ましくは、30～50ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50ヌクレオチド長）、より好ましくは、30～45ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45ヌクレオチド長）、最も好ましくは、４０ヌクレオチド長）のポリdAが結合したオリゴデオキシヌクレオチドである。
　本発明の核酸は、インビボにおける分解（例、エクソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼによる分解）に対して抵抗性となるように適切に修飾されていてもよい。好ましくは、該改変はホスホロチオエート修飾又はホスホロジチオエート修飾を含む。即ち、本発明の核酸中のリン酸ジエステル結合の一部又は全てが、ホスホロチオエート結合又はホスホロジチオエート結合により置換されていてもよい。
　本発明の核酸は、好ましくは、K型CpG ODNにおいて、ホスホロチオエート結合、または、ホスホロジチオエート結合による修飾を含み、より好ましくは、該K型CpG ODNのリン酸ジエステル結合の全てが、ホスホロチオエート結合に置換される。また、本発明の核酸は、好ましくは、ポリdAにおいて、ホスホロチオエート結合、または、ホスホロジチオエート結合を含み、より好ましくは、該ポリdAのリン酸ジエステル結合の全てが、ホスホロチオエート結合に置換される。更に好ましくは、本発明のヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含むオリゴデオキシヌクレオチドのリン酸ジエステル結合の全てが、ホスホロチオエート結合に置換される。最も好ましくは、本発明の核酸は、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド（例、配列番号１）の3’末端に通常、20～60ヌクレオチド長（好ましくは、30～50ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50ヌクレオチド長）、より好ましくは、30～45ヌクレオチド長（30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45ヌクレオチド長）、最も好ましくは、40ヌクレオチド長）のポリdAが結合した核酸であって、当該核酸に含まれる全てのリン酸ジエステル結合が、ホスホロチオエート結合に置換されている。ホスホロチオエート結合により、本発明の核酸において、分解に対する抵抗性のみならず、樹状細胞を活性化する活性の増強、ならびに抗がん活性の増強が期待されるからである。なお、本明細書におけるホスホロチオエート結合はホスホロチオエート骨格と同義であり、リン酸ジエステル結合はリン酸骨格と同義である。
　本発明の核酸は、１本鎖、２本鎖、３本鎖のいずれの形態でもよいが、好ましくは１本鎖である。
　本発明の核酸は、好ましくは単離されている。「単離」とは、目的とする成分以外の因子を除去する操作がなされ、天然に存在する状態を脱していることを意味する。「単離された核酸」の純度（評価対象物の総重量に占める目的とする核酸重量の百分率）は、通常70％以上、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、更に好ましくは99％以上である。
　本発明の核酸は、樹状細胞を活性化する優れた活性を有するので、アジュバントとして有用である。更に、本発明の核酸は、２本の多糖鎖（好ましくは、βグルカン）とともに三重螺旋構造を形成する性質を有するので、本発明のアジュバントの調製に有用である。
　上述の本発明の核酸は、K型CpG ODNを含むが、それ単独では、樹状細胞を活性化する活性に乏しい。そこで本発明の核酸は多糖と複合体を形成することによって、活性の不足を補うことができる。本発明の核酸と複合体を形成する多糖としては、αグルカンまたはβグルカンが挙げられるが、βグルカンが好ましい。
　本発明で用いられるβグルカンとしては、シゾフィラン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホラン、レンチナン、ラミナラン等を挙げることが出来、より好ましくはシゾフィランである。
　シゾフィラン(SPG)は、スエヒロタケ由来の公知の可溶性βグルカンである。SPGは、β-(1→3)-D-グルカンの主鎖と、各３個のグルコース当り１個のβ-(1→6)-D-グルコシル側鎖からなる。SPGは婦人科がんに対する免疫増強法の筋肉内注射製剤臨床薬として２０年以上の使用実績があり、生体内での安全性が確認されている。
　本発明の核酸および多糖の複合体とは、核酸および多糖が、静電結合、ファンデルワールス結合、水素結合、疎水性相互作用などの非共有結合又は共有結合を介して会合することにより形成される。
　本発明の核酸および多糖の複合体は、好ましくは、三重螺旋構造状である。好ましい態様において、当該三重螺旋構造を形成する３本の鎖のうち、２本は多糖鎖であり、１本は、上記本発明の核酸中のポリデオキシアデニル酸の鎖である。なお、当該複合体は一部に、三重螺旋構造を形成していない部分を含んでいても良い。
　本発明の核酸および多糖の複合体における、核酸と多糖の組成比は、核酸中のポリデオキシアデニル酸の鎖長、及び多糖の長さ等に応じて、変化しうる。例えば、多糖鎖と、ポリデオキシアデニル酸の鎖の長さが同等の場合には、２本の多糖鎖と、１本の本発明の核酸が会合し、三重螺旋構造を形成し得る。一般的には、多糖鎖に対して、ポリデオキシアデニル酸の鎖長は短いので、２本の多糖鎖に対して、複数の本発明の核酸がポリデオキシアデニル酸を介して会合し、三重螺旋構造を形成し得る。
　本発明の核酸および多糖の複合体は、ヒト化K型CpG ODN及びβグルカン（例、レンチナン、シゾフィラン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホラン、ラミナラン）を含有する複合体であり、好ましくは、ヒト化K型CpG ODN及びβグルカン（例、シゾフィラン）からなる複合体である。より好ましくは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列からなるオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に20～60ヌクレオチド長（具体的には、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59又は60ヌクレオチド長）のポリデオキシアデニル酸が結合し、かつリン酸ジエステル結合の全てがホスホロチオエート結合に置換されたオリゴデオキシヌクレオチド、及びβグルカン（例、シゾフィラン）からなる複合体（例、K3-dA20～60-SPG）であり、更に好ましくは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列からなるオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に30～50ヌクレオチド長（具体的には、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50ヌクレオチド長）のポリデオキシアデニル酸が結合し、かつリン酸ジエステル結合の全てがホスホロチオエート結合に置換されたオリゴデオキシヌクレオチド、及びβグルカン（例、シゾフィラン）からなる複合体（例、K3-dA30～50-SPG）であり、最も好ましくは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列からなるオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に30～45ヌクレオチド長（具体的には、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45ヌクレオチド長）のポリデオキシアデニル酸が結合し、かつリン酸ジエステル結合の全てがホスホロチオエート結合に置換されたオリゴデオキシヌクレオチド、及びβグルカン（例、シゾフィラン）からなる複合体（K3-dA30～45-SPG）である。
　本発明の核酸および多糖の複合体の調製方法に関しては、公知の手段、例えば、特開2008-100919号公報に記載された条件と同様に行うことができる。すなわち、本来は、天然で三重螺旋構造として存在するβグルカンを非プロトン性有機極性溶媒（ジメチルスルホキシド(DMSO)，アセトニトリル，アセトン等）またはアルカリ水溶液（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、水酸化カルシウム等）に溶解して一本鎖に解く。このようにして得られた一本鎖のβグルカンの溶液と本発明の核酸の溶液（水溶液、中性付近のpHの緩衝水溶液、又は酸性の緩衝水溶液、好ましくは、水溶液又は中性付近のpHの緩衝水溶液）とを混合し、必要に応じて再度pHを中性付近に調整後、適当時間保持する、例えば、5℃で一夜保持する。その結果、２本のβグルカン鎖と該核酸中のポリdA鎖が三重螺旋構造を形成することにより、本発明の核酸および多糖の複合体が形成される。生成した複合体に対して、サイズ排除クロマトグラフィーによる精製、限外濾過、透析等を行うことにより、複合体未形成のオリゴデオキシヌクレオチドを除くことができる。また、生成した複合体に対して、陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製を行うことにより、複合体未形成のβグルカンを除くことができる。上記の方法により、複合体を適宜精製することができる。
　本発明の核酸および多糖の複合体の形成は、例えばCD（円偏光二色性）スペクトルによるコンフォメーション変化、サイズ排除クロマトグラフィーによるUV吸収シフト、ゲル電気泳動、マイクロチップ電気泳動、キャピラリー電気泳動を測定することにより確認することができるが、これに限らない。
　本発明の核酸と多糖との混合比は、ポリdA鎖の長さ等を考慮して適宜設定することができるが、通常モル比(SPG/ODN)が0.02～2.0、好ましくは0.1～0.5である。
　一態様において、本発明の核酸と多糖の複合体は、竿状の粒子の形態を呈する。粒子径は、材料として用いるβグルカン（例、シゾフィラン） が天然で三重螺旋構造を呈することにより形成する粒子の径と同等であり、通常平均粒子径が10～100 nm、好ましくは20～50 nmである。該粒子径は、複合体を水に溶解し、Malvern Instruments Zeta Sizerを用いて80℃の条件で動的光散乱法により計測することができる。
　本発明の核酸と多糖の複合体は、好ましくは単離されている。「単離された複合体」の純度（ 評価対象物の総重量に占める目的とする複合体重量の百分率）は、通常70％以上、好ましくは80％以上、より好ましくは90％以上、更に好ましくは99％以上である。
２．医薬の投与(I)
　以上の通りに得られる本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントは、医薬として提供することができる。本発明の医薬(I)は、有効成分である本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体ならびに本発明のアジュバントが共に低毒性であるため、そのまま液剤として、または適当な剤型の医薬組成物として、がんを発症した哺乳動物に対して経口的または非経口的（例、腫瘍内投与、血管内投与など）に投与することができ、非経口投与が好ましく、腫瘍内投与がより好ましい。投与される哺乳動物としては、例えば、マウス等のげっ歯類、イヌ等のペット、ブタ、ウマ等の家畜、ヒト、サル、オランウータン及びチンパンジー等の霊長類等が挙げられ、特にヒトが好ましい。
　非経口投与のための医薬組成物としては、例えば、注射剤、坐剤等が用いられ、注射剤は腫瘍内注射剤、静脈注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤等の剤形を包含しても良い。このような注射剤は、公知の方法に従って調製できる。注射剤の調製方法としては、例えば、上記本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体ならびに本発明のアジュバントを通常注射剤に用いられる無菌の水性液、または油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製できる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液等が用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート80、HCO－50（polyoxyethylene（50mol）adduct of hydrogenated castor oil）〕等と併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が用いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等を併用してもよい。調製された注射液は、適当なアンプルに充填されることが好ましい。直腸投与に用いられる坐剤は、上記本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体ならびに本発明のアジュバントを通常の坐薬用基剤に混合することによって調製されてもよい。
　経口投与のための医薬組成物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられる。このような組成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有していても良い。錠剤用の担体、賦形剤としては、例えば、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムが用いられる。
　本発明の医薬(I)は、成人のがん患者に投与する場合、例えば、腫瘍部位またはその周辺部に直接、または血管内（例えば、静脈内）に投与することができる。その投与量は、腫瘍の大きさ、患者の年齢、体重、状態等を考慮して、医者または医療従事者が適宜決定することができる。本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体が抗体とIR700の複合体の場合、該複合体の投与量は、例えば、静脈内投与で体表面積1m2当たり300mg～1,200mgとすることができる。また、腫瘍内投与では、腫瘍径に依存するが、30mg～120mgとすることができる。また、本発明のアジュバントがK3-SPGの場合、K3-SPGの投与量は、例えば、１回あたり0.001、1、5、10、15、100、または1,000mg/kg体重とすることができる。投与回数も腫瘍の大きさ、患者の年齢、体重、状態等を考慮して、医者または医療従事者が適宜決定することができる。
　本発明の医薬(I)は、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントをそれぞれ含む配合剤として準備されてもよいし、それぞれを別々の剤として１つのパッケージに備えるキットとして準備されてもよい。また、本発明の医薬(Ia)は、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体の剤として１つのパッケージに備えるキットであって、本発明のアジュバントと併用するためのキットとして準備されてもよい。また、本発明の医薬(Ib)は、本発明のアジュバントの剤として１つのパッケージに備えるキットであって、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と併用するためのキットとして準備されてもよい。なお、併用するためのキットとして準備される場合、添付文書の用法・用量には、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体或いは本発明のアジュバントと併用することが1つの用法用量の態様として記載されている。
　本発明の医薬(I)、(Ia)または(Ib)が本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントをそれぞれ含む配合剤である場合、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントは、同一投与経路での同時投与で投与される。配合剤の投与経路としては、例えば、腫瘍内投与、静脈内投与などが挙げられる。
　本発明の医薬(I)が本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントをそれぞれを別々に備えるキットである場合、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体と本発明のアジュバントは、同一投与経路での同時投与、同一投与経路での時間差をおいての投与、異なる投与経路での同時投与および異なる投与経路での時間差をおいての投与のいずれであってもよい。キットの投与経路としては、例えば、腫瘍内投与、静脈内投与などが挙げられる。従って、ある態様においては、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は腫瘍内投与され、本発明のアジュバントは腫瘍内投与されてもよい。別の態様においては、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は静脈内投与され、本発明のアジュバントは腫瘍内投与されてもよい。さらに別の態様においては、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は静脈内投与され、本発明のアジュバントは静脈内投与されてもよい。またさらに別の態様においては、本発明の結合性分子および光感受性分子の複合体は腫瘍内投与され、本発明のアジュバントは静脈内投与されてもよい。
　本発明の医薬(I)が投与された後、がん病変部に近赤外線が照射される。近赤外線が照射される時期は、通常、本発明の医薬(I)が投与後、通常、6時間～72時間、好ましくは、12時間～60時間、より好ましくは、18時間～48時間、さらに好ましくは、24時間～36時間が挙げられる。照射される近赤外線の波長は、光感受性分子が励起されるために適した波長であれば制限されないが、通常、約685 nm～約695 nmが挙げられる。遠赤外線の照射量は、医者または医療従事者が適宜決定することができるが、例えば、10 J/cm2～200 J/cm2照射することができる。
３．医薬の投与(II)
　また、本発明は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにナノ粒子を含む、がん治療のための医薬（以下、本発明の医薬(II)）を提供する。また、本発明の医薬(II)は、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体を含む、がん治療のための医薬であって、ナノ粒子と併用することができる医薬であってもよい。また、本発明の医薬(II)は、ナノ粒子を含む、がん治療のための医薬であって、がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体と併用することができる医薬であってもよい。なお、ナノ粒子は、例えば、免疫賦活性を有するナノ粒子や抗がん活性を有するナノ粒子である。免疫賦活性を有するナノ粒子は、ナノ粒子化されたアジュバントが挙げられる。言い換えると、上述した本発明のアジュバントがナノ粒子化されていればよく、例えばTLR9に対するリガンドが好ましく、そのようなリガンドとしては、核酸および多糖の複合体が好ましい。抗がん活性を有するナノ粒子としては、例えば、ナノ粒子化された抗がん剤が挙げられる。抗がん剤としては、それらに限定されないが、例えば、パクリタキセル、セツキシマブ、ゲフィチニブ、シクロホスファミド、イマチニブ、シスプラチン、アファチニブ、ゲムシタビン、ラパチニブ、エルロチニブ、ドセタキセル、オプジーボ、タキソール、ベルツズマブ、トラスツズマブ、パニツムマブ、リツキシマブなどが挙げられる。
　本発明の医薬(II)が投与された後、本発明の医薬(I)と同様に、がん病変部に近赤外線が照射される。近赤外線が照射される時期、照射される近赤外線の波長、遠赤外線の照射量は、本発明の医薬(I)の場合と同様であってよい。
　以下に、本発明を実施例により説明する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
細胞株
　膵がんモデルの細胞株として、遺伝子改変膵がんモデルマウス（KrasLSL-G12D/+, Trp53LSL-R172H/+, Pdx1-Cre：KPC マウス）より樹立したKPC-N細胞を使用した。また、大腸がんモデルの細胞株として、MC38細胞を使用した。
光免疫療法
　光免疫療法のための抗体として、InVivoMAb-anti-mouse/human CD44（clone IM7： BioXcell社）を使用した。また、光免疫療法のための蛍光色素として、IRDye 700DX NHS（LI-COR社）を使用した。IRDye 700DX NHSとInVivoMAb-anti-mouse/human CD44を用いて既報（Mitsunaga et al. Nat Med. 17, 2011）に従い、IR700結合CD44抗体（anti-CD44 Ab-IR700）を作製し、光免疫療法用物質として使用した。また、蛍光色素を励起するための赤外線照射装置としてMLL-III-690-1300mW-3%-LED（CNI社）を使用した。
アジュバント
（１）TLR9リガンド
　東京大学医科学研究所石井健教授の研究室で作成されたK3-SPGまたはAlexa647-K3-SPGを使用した。K3-SPGは、TLR9リガンドであり、核酸及び多糖の複合体である。この、K3-SPGは、ナノ粒子化されたアジュバントである。Alexa647-K3-SPGは、Alexa647標識されたK3-SPGである。K3-SPG及びAlexa647-K3-SPGは、例えば、国際公開第2015/041318号に記載の方法で合成された。すなわち、ポリdAがK型CpG ODNの3’側に配置されたCpG ODN（配列番号2：5’-ATCGACTCTCGAGCGTTCTC-40mer A-3’）を合成し、合成したCpG ODNとSPGとを複合体化した。
　より具体的には、実施例のCpG ODNは、表１に示し、（株）ジーンデザインで合成された（表１の配列中のｓは、ヌクレオシド間のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に置換されていることを示す）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本オリゴデオキシヌクレオチドは、常法である固相ホスホロアミダイト法（Nucleic Acids in Chemistry and Biology, 3. Chemical synthesis (1990) ed. G. Michael Blackburn and Michael J. Gait. Oxford University Press）を用いて合成した。
　以下の手順でCpG ODNとSPGとを複合体化した。7.22 mgのK3-dA40を水(3.7mL)に溶解した。SPG 15 mgを0.25 N NaOH (1 mL)に溶解した。DNAにSPG溶液を加えよく混ぜたのちに、1 mLの330 mM NaH2PO4をDNA/SPG溶液に加え4℃にて一晩維持することにより複合体化を完了した。モル比（MSPG/MDNA）は、0.27に固定した。複合体の形成は、マイクロチップ電気泳動装置（SHIMADZU：MultiNA）によって確認した。
（２）STING
　STINGリガンドである2’3’-cGAMP（2’3’-cGAMP VacciGradeTM：InvivoGen社）を使用した。
（３）TLR3リガンド
　TLR3リガンドであるPolyI:C（Poly(I:C) (HMW) VacciGradeTM：InvivoGen社）を使用した。
実施例１　膵がんモデルを用いた光免疫療法/アジュバント併用療法（１）
　1.5x106個のKPC-N細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下の左右1カ所ずつに移植し、無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)の4群(各群N=6)を設定した。細胞移植後8日目のマウスの背部右側腫瘍に対し、無治療群にPBS 100 μl、アジュバント投与群にPBS 100 μlに溶解させたK3-SPG 10μg、光免疫療法群にPBS 100 μlに溶解させたanti-CD44 Ab-IR700 5μg、併用療法群にPBS 100 μlに溶解させたK3-SPG 10μgおよびanti-CD44 Ab-IR700 5μgをそれぞれ局所注入（腫瘍内投与）し、移植後9日目と10日目に背部右側腫瘍に近赤外線（波長690nm）を100 J/cm2照射した（図１）。経時的に左右の腫瘍のサイズ（長径×短径×短径×1/2で算出）をモニターした（図２、３）。
　その結果、マウスの背部右側腫瘍は、無治療群において終始増殖し続けた。また、アジュバント投与群、光免疫療法群では、背部右側腫瘍は、一旦縮小したものの、その後緩やかに増殖し続けた。しかし、併用療法群では、背部右側腫瘍は、投与直後から縮退しつづけ、最終的にほぼ消失に至った。また、マウスの背部左側腫瘍は、無治療群において背部右側腫瘍と同様に終始増殖し続けた。アジュバント投与群、光免疫療法群においても、背部左側腫瘍は、無治療群よりは緩やかであるものの、増殖し続けた。一方、併用療法群では、背部左側腫瘍は増殖し続けたものの、その速度はアジュバント投与群、光免疫療法群よりもさらに緩やかであった。
　併用療法群における背部右側腫瘍の消失は、光免疫療法によって腫瘍が直接的に破壊された後、破壊された腫瘍から放出された抗原とアジュバントによって強く誘導された抗腫瘍免疫により残余した腫瘍が攻撃されたことによって実現されたものと考えられる。また、併用療法群の背部左側腫瘍の増殖速度は、アジュバント投与群、光免疫療法群に比べて緩やかであるため、アジュバント投与群、光免疫療法群よりも併用療法群における抗腫瘍免疫が強く誘導されたことがわかる。
　ところで、既存のPITはがん細胞の選択的破壊を目的とし、がん免疫の誘導を目的としていなかった。言い換えると、PITはLIIAを直接増幅するものではなく、生体内の通常の反応に任せるしかないため、in situワクチンとしては十分な効果を奏さないと考えられてきた。一方、実施例１の光免疫療法/アジュバント併用療法は、LIIAを直接増幅し、かつ、優れたLTAR効果が期待できる。すなわち、実施例１の光免疫療法/アジュバント併用療法は、チェックポイント阻害剤とは全く異なる作用機序でがん免疫を賦活化する新たなコンセプトに基づく免疫療法（がんワクチン療法）である。このため、腫瘍局所への治療介入でありながら、全身性の抗腫瘍効果を誘導しつつ、副作用を抑えることできる。
　なお、特許文献１(特表2018-528268号)には、セツキシマブIRDye 700DXで処置したFaDu細胞を光照射してヒト樹状細胞と共培養し、採取したヒト樹状細胞をポリI:C処置した場合、光照射していない対照と比較して、増加したCD80およびCD86発現レベルを導くことが記載されているが、抗腫瘍効果を示すものではない。また、ポリI:Cは、TLR9リガンドではなく、核酸及び多糖の複合体ではない。従って特許文献１に記載の内容は、実施例１の光免疫療法/アジュバント併用療法とは異なるものである。
実施例２　大腸がんモデルを用いた光免疫療法/アジュバント併用療法
　1.5x106個のMC38細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下（右側1カ所）に移植し、無治療群(Ctrl)、アジュバント投与群(K3-SPG)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)の4群(各群N=4)を設定した。細胞移植後7日目のマウスの背部右側腫瘍に対し、無治療群にPBS 100 μl、アジュバント投与群にPBS 100 μlに溶解させたK3-SPG 10μg、光免疫療法群にPBS 100 μlに溶解させたanti-CD44 Ab-IR700 1μg、併用療法群にPBS 100 μlに溶解させたK3-SPG 10μgおよびanti-CD44 Ab-IR700 1μgをそれぞれ局所注入（腫瘍内投与）し、移植後8日目と9日目に背部右側腫瘍に近赤外線（波長690nm）を100 J/cm2照射した（図４）。経時的に腫瘍のサイズ（長径×短径×短径×1/2で算出）をモニターした（図５）。
　その結果、マウスの背部右側腫瘍は、無治療群において終始増殖し続けた。また、アジュバント投与群、光免疫療法群では、背部右側腫瘍は、無治療群に比べて緩やかではあるものの、増殖し続けた。しかし、併用療法群では、背部右側腫瘍は、投与直後から縮退しつづけ、最終的にほぼ消失に至った。
　実施例１の膵がんモデルと同様、併用療法群における背部右側腫瘍の消失は、光免疫療法によって腫瘍が直接的に破壊された後、腫瘍から放出された抗原とアジュバントによって強く誘導された抗腫瘍免疫によりさらに腫瘍が攻撃されたことによって実現されたものと考えられる。すなわち、実施例２の光免疫療法/アジュバント併用療法は、チェックポイント阻害剤とは全く異なる作用機序でがん免疫を賦活化する新たなコンセプトに基づく免疫療法（がんワクチン療法）であり、腫瘍局所への治療介入でありながら、全身性の抗腫瘍効果を誘導しつつ、副作用を抑えることできる。
実施例３　膵がんモデルを用いた光免疫療法/アジュバント併用療法（２）
　1.5x106個のKPC-N細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下の左右1カ所ずつに移植した。細胞移植後７日目のマウスの背部左側腫瘍に対し、PBS 100 μlに溶解させたanti-CD44 Ab-IR700 5μgを局所注入（腫瘍内投与）した。移植後8日目にIVISシステムで腫瘍内のIR700蛍光シグナルをモニターした。次に、左側腫瘍に近赤外線（波長690nm）を100J/cm2照射した。3分後にIVISシステムで腫瘍内におけるIR700蛍光シグナルをモニターした（近赤外線照射によりIR700蛍光シグナルは消失した）。1時間後、PBS 100 μlに溶解させたAlexa647-K3-SPG（10μg）を陰茎静脈より静脈投与（iv）した。さらに、1時間後、IVISシステムでAlexa647の蛍光シグナルをモニターした。その結果、静脈投与されたAlexa647-K3-SPGは、光免疫療法が施された腫瘍に強く集積し、光免疫療法が施されていない腫瘍にはほとんど集積しなかった（図６）。すなわち、光免疫療法が施された腫瘍にAlexa647-K3-SPGが選択的に集積していた。
実施例４　膵がんモデルを用いた光免疫療法/アジュバント併用療法（３）
　1.5x106個のKPC-N細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下に移植し、無治療群(Control)、アジュバント投与群(2’3’-cGAMP)、光免疫療法群(anti-CD44 Ab-IR700)、併用療法群(2’3’-cGAMP/anti-CD44 Ab-IR700)の4群(各群N=6)を設定した。細胞移植後6日目のマウスの腫瘍に対し、アジュバント投与群に2’3’-cGAMP 5μg、光免疫療法群にanti-CD44 Ab-IR700 5μg、併用療法群に2’3’-cGAMP 5μgおよびanti-CD44 Ab-IR700 5μgをそれぞれ局所注入（腫瘍内投与）し、移植後7日目と8日目に近赤外線（波長690nm）を100J/cm2照射した。経時的に腫瘍のサイズ（長径×短径×短径×1/2で算出）をモニターした。
　その結果、併用療法群で、アジュバント投与群、光免疫療法群と比べ、抗腫瘍効果の増強が確認された（図７）。
実施例５　TLR3リガンドによる抗腫瘍効果
　1.5x106個のKPC-N細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下に移植し、無治療群(Control)、polyI:C群の2群(各群N=6)を設定した。皮下移植後8日目のマウスの腫瘍に対し、polyI:C 50μgを局所注入（腫瘍内投与）した。経時的に腫瘍のサイズ（長径×短径×短径×1/2で算出）をモニターしたところ、polyI:Cによる抗腫瘍効果は認められなかった（図８）。
実施例６　アジュバント投与／光免疫療法併用療法による免疫記憶の誘導
　1.5x106個のKPC-N細胞を6～8週齢のC57BL/6マウスの背部皮下に移植し、無治療群(Control)、アジュバント投与／光免疫療法の併用療法群(K3-SPG/anti-CD44 Ab-IR700)の2群(各群N=6)を設定した。細胞移植後8日目のマウスの腫瘍に対し、無治療群にPBS 100 μl、併用療法群にPBS 100 μlに溶解させたK3-SPG 10μgおよびIR700結合抗CD44抗体（Ab-IR700）5μgをそれぞれ腫瘍内投与し、移植後9日目と10日目に皮下腫瘍に近赤外線（波長690nm）を100 J/cm2照射した。経時的に腫瘍のサイズ（長径×短径×短径×1/2で算出）をモニターした。
　その結果、無治療群では腫瘍は増殖し続けたが、併用療法群では6頭のうち４頭で腫瘍が完全消失し（CRマウス）、2頭で腫瘍が残存した（nonCRマウス）（図９）。
　さらに、移植後27日目に、上記の4頭のCRマウス、2頭のnonCRマウスおよびそれらのマウスに週齢をマッチさせた6頭のコントロールマウスに、それぞれ1.5x106個のKPC-N細胞を再度移植した。
　その結果、コントロールマウスでは再移植細胞の増殖を認めたが、4頭のCRマウスでは再移植細胞の生着を認めなかった（図９）。また、2頭のnonCRマウスでは再移植細胞の増殖を認めた。これらの結果から、併用治療群のうち強い抗腫瘍効果がみられたCRマウスでは、免疫記憶が誘導されたことが示唆された。
　本発明は、光免疫療法によって誘導される抗腫瘍効果をさらに向上させることができる。
　本出願は、日本で出願された特願2021-171961（出願日：令和3年10月20日）を基礎としており、その内容はすべて本明細書に包含されるものとする。

Claims (15)

  1. 　がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントを含む、がん治療のための医薬。
  2. 　がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体を含む、がん治療のための医薬であって、前記医薬がToll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントと併用して投与するための前記医薬。
  3. 　Toll様受容体3（TLR3）のリガンドを除くアジュバントを含む、がん治療のための医薬であって、前記医薬が光感受性分子およびがん特異的細胞表面分子に対する結合性分子の複合体と併用して投与するための前記医薬。
  4. 　アジュバントがToll様受容体9（TLR9）のリガンドである、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬。
  5. 　Toll様受容体9（TLR9）のリガンドが核酸および多糖の複合体である、請求項４に記載の医薬。
  6. 　核酸がK型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む核酸である、請求項５に記載の医薬。
  7. 　K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドがヒト化されていることを特徴とする、請求項６に記載の医薬。
  8. 　K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドが配列番号１で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載の医薬。
  9. 　多糖がβグルカンである、請求項５に記載の医薬。
  10. 　βグルカンがシゾフィランまたはレンチナンである、請求項９に記載の医薬。
  11. 　アジュバントがSTINGのリガンドである、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬。
  12. 　STINGのリガンドがcGAMPである、請求項１１に記載の医薬。
  13. 　医薬がキットである、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬。
  14. 　がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体が、腫瘍内投与又は静脈内投与され、アジュバントが、腫瘍内投与又は静脈内投与されることを特徴とする、請求項１３に記載の医薬。
  15. 　がん特異的細胞表面分子に対する結合性分子および光感受性分子の複合体ならびにアジュバントがそれぞれ静脈内投与されることを特徴とする、請求項１３に記載の医薬。
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