WO2022164336A1 - Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы - Google Patents

Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы Download PDF

Info

Publication number
WO2022164336A1
WO2022164336A1 PCT/RU2021/000035 RU2021000035W WO2022164336A1 WO 2022164336 A1 WO2022164336 A1 WO 2022164336A1 RU 2021000035 W RU2021000035 W RU 2021000035W WO 2022164336 A1 WO2022164336 A1 WO 2022164336A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
gel
pharmaceutically acceptable
carboxymethyl cellulose
acceptable salt
dialysis
Prior art date
Application number
PCT/RU2021/000035
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Антон Николаевич ВЕНЖИК
Денис Александрович НИКОЛАЕВ
Ирина Викторовна РОМАНОВА
Original Assignee
Акционерное общество "Медтехнопроект"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Акционерное общество "Медтехнопроект" filed Critical Акционерное общество "Медтехнопроект"
Publication of WO2022164336A1 publication Critical patent/WO2022164336A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/40—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material
    • A61L27/44—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix
    • A61L27/48—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix with macromolecular fillers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/08—Materials for coatings
    • A61L31/10—Macromolecular materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B15/00—Preparation of other cellulose derivatives or modified cellulose, e.g. complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B15/00—Preparation of other cellulose derivatives or modified cellulose, e.g. complexes
    • C08B15/02—Oxycellulose; Hydrocellulose; Cellulosehydrate, e.g. microcrystalline cellulose
    • C08B15/04—Carboxycellulose, e.g. prepared by oxidation with nitrogen dioxide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B15/00—Preparation of other cellulose derivatives or modified cellulose, e.g. complexes
    • C08B15/10—Crosslinking of cellulose

Definitions

  • the present invention relates to the field of pharmacy, clinical or experimental medicine, or veterinary medicine, namely to a method for obtaining a non-toxic gel based on carboxymethyl cellulose by modifying carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt with cross-linking agents from the group of substituted epoxy compounds and amino acids and using it in various fields of medicine, including as a release agent and implants.
  • Carboxymethylcellulose is a biopolymer consisting of p-(1->4) p-glucose monomers linked by glycosidic bonds, in which some hydroxyl groups are replaced by carboxyl groups (Fig. 1).
  • the sodium salt of carboxymethyl cellulose is widely used in the pharmaceutical, food and cosmetic industries as a thickener, viscosity regulator, plasticizer, filler, as well as in the manufacture of implantable medical devices [1].
  • carboxymethylcellulose has such qualities as biocompatibility, non-immunogenicity, hypoallergenicity and bioavailability; at the same time, due to the presence of a large number of hydroxyl and carboxyl groups, various chemical and physical interactions (hydrogen bonds, ionic bonds, electrostatic bonds, van der Waals forces) are formed between the polymer chains of carboxymethyl cellulose, which directly determines the formation of a gel-like structure, directly depending on the concentration of carboxymethyl cellulose, the length of polymer chains, the degree of substitution, and the presence of metal ions [2].
  • hydrophilic bonds hydrophilionic bonds
  • electrostatic bonds van der Waals forces
  • a separate advantage of this biopolymer is due to the production process of carboxymethyl cellulose: it is obtained synthetically from plant materials, which thus ensures the almost complete absence of bacterial endotoxins, residual protein and provides a low bioburden, which is especially important for implantable medical devices [3].
  • hyaluronic acid is more hygroscopic than carboxymethylcellulose.
  • edema occurs, associated with the absorption of a significant amount of water molecules.
  • Fillers based on carboxymethyl cellulose are deprived of this drawback, which is confirmed by clinical trials [3].
  • modifying crosslinkers based on substituted epoxy compounds including 1,4-butanediol diglycidyl ether; polyethylene glycol diglycidyl ether, polypropylene glycol diglycidyl ether
  • This group of modifying cross-linking agents is widely used in the production of intradermal fillers and implants based on hyaluronic acid; in particular, over the course of 15 years of clinical use of 1,4-butanediol diglycidyl ether, clinical safety has been confirmed with a residual content of less than 0.0001% [6].
  • due to the large number of substances from the group of substituted epoxides their use, due to their different molecular weight, structure and reactivity, makes it possible to create products with different degrees of biodegradation, which is important for various applications.
  • polyethylene glycol diglycidyl ether as a crosslinking agent for carboxymethyl cellulose for use in medical devices is described in a patent [2]. Also currently on the commercial market there is an intradermal implant based on modified carboxymethyl cellulose by reaction with 1,4-butanediol diglycidyl ether [3].
  • the patent [10] describes the possibility of using a modifying crosslinking agent based on substituted epoxy compounds using polypropylene glycol diglycidyl ether.
  • the technical solutions presented above are characterized by a limitation associated with the purification and deactivation of the modified gel from the remnants of cross-linking agents.
  • the resulting gel contains residues of an unreacted modifying crosslinker, and, most importantly, residues of crosslinkers that have reacted at only one epoxy group with a carboxymethylcellulose molecule.
  • isomerization reactions of the remaining epoxy group may occur to form an aldehyde group, which is highly toxic.
  • the objective of the present invention is to develop a new effective method for obtaining a modified carboxymethyl cellulose gel.
  • the technical result of the present invention is the development of a new effective method for obtaining a gel by modifying carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt, which has low toxicity; said process according to the invention is highly scalable and produces low toxicity and high purity biocompatible gels.
  • the gel obtained by the method of the invention can find wide application in medicine, including surgery and aesthetic medicine, in particular for use as a filler for medical implants, carrier substance, lubricant and/or release barrier, anti-adhesion gel or intradermal filler.
  • a method for obtaining a gel based on modified carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt which includes the following steps: a substituted oxirane agent; b) neutralizing the free epoxy groups in the modified carboxymethyl cellulose or a pharmaceutically acceptable salt thereof obtained in step a) and neutralizing the crosslinker residues by adding an amino acid or a combination of at least two amino acids to the reaction mixture obtained in step a); c) removal of amino acid residues and/or cross-linking agent by dialyzing the gel obtained after step b) in sodium phosphate physiological buffer solution or water for injection.
  • 1,4-butanediol diglycidyl ether with a molecular weight of 202.25 Da is used as the substituted oxirane; polyethylene glycol diglycidyl ether with a molecular weight of 500 Da; or polypropylene glycol diglycidyl ether with a molecular weight of 380 Da or 640 Da.
  • the molecular weight of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt in step a) is between 50,000 Da and 1,000,000 Da.
  • the degree of substitution of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt in step a) is 50-150.
  • the pharmaceutically acceptable salt is the sodium salt.
  • step a) is carried out in a basic medium at a pH value in the range of 8 to 14 units and at a temperature in the range of +4 °C to +60 °C.
  • step b) is carried out in a basic medium at a pH value in the range from 8 to 14 units and at a temperature in the range from +4 °C to +60 °C.
  • step a) is carried out within 1 hour to 48 hours.
  • step b) is carried out within 1 hour to 24 hours.
  • the amino acid is independently selected and is glycine, alanine, valine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, serine, threonine, cysteine, asparagine, glutamine, tyrosine, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine and/or taurine.
  • reaction mixture is neutralized to pH 6.0-8.5 using an inorganic or organic acid.
  • the inorganic or organic acid is independently selected and is hydrochloric acid, acetic acid, citric acid, or lactic acid.
  • the dialysis in step c) is carried out using a cellulose membrane with a cutoff of 12,000 Da.
  • the mass concentration of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt in the solution at stage a) is from 2 to 12 mass%.
  • the mass concentration of the crosslinking agent in the solution at stage a) is from 0.1 to 10 mass%.
  • the mass concentration of an amino acid or a combination of at least two amino acids in step b) ranges from 0.2% to 14 mass%.
  • the gel obtained after dialysis is adjusted with water for injection or sodium phosphate physiological buffer solution to the concentration of modified carboxymethylcellulose required for medical use, but not more than 2 times, since the degree of swelling of the modified gel is limited and with greater dilution, gel exfoliation.
  • the subject of the present invention is also a gel based on a modified carboxymethyl cellulose or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use as a filler for medical implants, a carrier substance, a lubricant and/or an anti-adhesion barrier, an anti-adhesion gel or an intradermal filler obtained by the method according to the invention.
  • the gel further comprises at least one pharmaceutically acceptable excipient. More specifically, the pharmaceutically acceptable excipient is selected from a diluent, buffer, preservative, antioxidant, or isotonic agent.
  • the solvent is water for injection.
  • the buffer is a sodium phosphate physiological buffer.
  • the mass concentration of the modified carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt is at least 1 mass. % and not more than 12 mass. %.
  • Figure 1 Structural formula of the carboxymethylcellulose sodium salt molecule.
  • FIG. 7 Subcutaneous administration of the gel according to the invention to BALB/c mice. Photographs of the injection site at days 16 and 35 after administration to two mice per group (upper and lower panels). Preparation 1 - gel obtained according to Example 1; Preparation 2 - gel obtained according to Example 2; Preparation 3 - gel obtained according to Example 3.
  • Figure 8 Administration of the gel according to the invention to BALB/c mice in the groin.
  • crosslinked means the covalent bonding of molecules of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt using crosslinking agents.
  • crosslinking agent means a chemical agent, a modifying agent, which is used in the covalent chemical bonding of molecules of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt.
  • Dalton or “Da” means the off-system unit of molecular weight recommended by IUPAC, equivalent to the molar mass of a substance, expressed in grams per mole.
  • degree of substitution refers to the number of hydroxyl groups (-OH) substituted by carboxymethyl groups in a chain of 100 units of glucose residues (CH2COONa). With complete substitution of all hydroxyl groups, the degree of substitution is 300, in the absence of carboxymethyl groups (that is, in the original cellulose) it is 0.
  • the term "guaranteed level of sterility” or “sterility assurance level” or “SAL” means the probability of survival of a microorganism on the equipment after sterilization.
  • SAL is a quantitative value, usually in the range from 10' 6 to 10' 3 . A sterilization process with a level of 10' 6 is more efficient than a sterilization process with a level of 10' 3 .
  • Carboxymethylcellulose is a polymer derived from cellulose, in which the carboxylmethyl group (-CH-COOH) is connected by hydroxyl groups of glucopyranose monomers; the general formula is [CbH 7 O2 (OH) s-x (OCH2COOH) x] p, where x ⁇ u003d 0.02-1.5).
  • pharmaceutically acceptable salt refers to those salts which, within the limits of medical judgment, are suitable for use in contact with human and animal tissues without undue toxicity, irritation, allergic reaction, etc., and meet a reasonable ratio of benefit. and risk, for example sodium, potassium, magnesium salts of carboxymethyl cellulose.
  • Substituted epoxide, or substituted oxirane, or epoxy compound is a group of chemicals related to cross-linking agents, which has a functional group in the form of a saturated three-membered heterocycle, a cyclic ether, in which an oxygen atom is attached to two adjacent carbon atoms.
  • the substituted oxirane is 1,4-butanediol diglycidyl ether, polyethylene glycol diglycidyl ether, or polypropylene glycol diglycidyl ether.
  • 1,4-butanedioldiglycidyl ether or 1,4-bis(2,3-epoxypropyloxy)butane is a cross-linking agent, a substituted epoxide, with the formula C10H18O4.
  • Polyethylene glycol diglycidyl ether is a cross-linking agent, a substituted epoxide, with the general formula CsHbOg-O hHdS p-CsHbO.
  • Polypropylene glycol diglycidyl ether is a cross-linking agent, a substituted epoxide, with the general formula CsH5O2-(C2H3(CH3)O)n-C3H5O, in particular, the average molecular weight of which can be 380 Da and 640 Da.
  • amino acid in this document refers to an organic compound, the molecule of which simultaneously contains carboxyl and amine groups, in particular variants, amino acids are selected from 20 standard (proteinogenic) a-amino acids (including D-, L-forms or racemates), in particular , the amino acid is independently selected and is glycine, alanine, valine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tryptophan, serine, threonine, cysteine, asparagine, glutamine, tyrosine, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, and/or histidine (for with the exception of proline).
  • amino acid as used herein refers to a sulfur-containing amino acid lacking a carboxyl group, in particular taurine.
  • sodium phosphate physiological buffer solution means a buffer solution prepared according to the following recipe (based on 1 liter of the final solution): the following components are added to water for injection with a volume of 800 ml: NaCI weighing 8 g, KCI weighing 0, 2 g, NagHPO4 weighing 1.44 g and KH2PO4 weighing 0.24 g, and mixed until all components. After that, the volume of the resulting solution is brought up to 1 liter with water for injection.
  • the method for obtaining a non-toxic gel based on carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt, modified chemically by reaction with cross-linking agents based on substituted epoxides and amino acids consists in creating covalent ether bonds between the molecules of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt as a result of introducing cross-linking agents into in the form of substituted epoxides and further by covalent binding of the residues of free epoxy groups in the composition of the cross-linked carboxymethyl cellulose with the amino acid, after which the resulting gel undergoes the stage of deactivation and removal of the residual amount of the cross-linking agent due to the reaction with the amino acid and the dialysis process.
  • Amino acids are nucleophilic agents due to the presence of an amino group in their structure, as a result of which they are attached to the free epoxy groups of the modified composition, thus blocking their further isomerization; the use of amino acids as nucleophilic agents, in particular, is due to their biological compatibility, as a result of which they do not exhibit toxicity; the choice of a particular amino acid for the embodiment of the invention is determined by the method of sterilization of the device, medical application and economic cost.
  • the modified gel is brought to the required parameters in terms of the ionic strength of the solution, osmolality, and pH. So, after the stage of cross-linking in the main medium and the addition of an amino acid to free epoxy groups, the stage of neutralization with an acid solution takes place; the dialysis step in physiological sodium phosphate buffer or water for injection, in addition to purification, helps to achieve these osmolality values to physiological values or those values that are necessary for a particular medical application.
  • the main raw material for obtaining the gel according to the invention is carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt, in particular sodium, potassium or magnesium, which, according to this invention, can be used in the mass concentration range from 2% to 12% in the initial solution, since at a lower concentration, the distance between the molecules is too large and cross-linking of molecules does not occur; at higher concentrations, the solubility of carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt is difficult; the degree of substitution can be in the range from 50 to 150, since at values less than 50 carboxymethyl cellulose or its pharmaceutically acceptable salt is not soluble in neutral environment, which reduces the degree of swelling of the polymer after the crosslinking step, and at values above 150, carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt has too little hydroxyl groups that participate in the reaction with the crosslinking agent, which leads to insufficient viscosity; the molecular weight may in particular be in the range of 50,000 Da to 1,000,000 Da.
  • the crosslinkers may be any of the substituted oxiranes, including but not limited to the following: 1,4-butanediol diglycidyl ether; polyethylene glycol diglycidyl ether; polypropylene glycol diglycidyl ether.
  • the use of cross-linking agents, according to this invention, is possible in the range of mass concentrations from 0.1% to 10% in the initial solution. At a lower concentration, an effective reaction between molecules does not occur, at a higher concentration, excessive cross-linking of molecules occurs, unsuitable for medical use.
  • the molecular weight of some compounds from the group of substituted epoxides including polyethylene glycol diglycidyl ether and polypropylene glycol diglycidyl ether, due to the chemical characteristics of these substances may vary; in particular, according to this invention, polyethylene glycol diglycidyl ether with a molecular weight of 500 Da, polypropylene glycol diglycidyl ether with an average molecular weight of 380 Da and 640 Da can be used for the manufacture of products.
  • any inorganic base can be used as the base, in particular sodium hydroxide or potassium hydroxide. Its amount is determined by the pH value, which should be in the range of 8-14 units.
  • a pre-weighed mass of carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt is added to a container with a stock solution (pH of which is above 8 units), while the mass concentration of carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt in the stock solution is from 2% to 12%, and mix until complete dissolution at a temperature not higher than plus 60 °C.
  • the mass concentration of the crosslinking agent in the reaction mixture can be from 0.1 to 10%.
  • an amino acid is added to the obtained mixture, while the mass concentration of the amino acid in the reaction mixture is from 0.2% to 14%, and mixing is carried out. At lower concentrations, the cytotoxicity of the gel is comparable to that of a gel without amino acid addition; at higher concentrations, cytotoxicity does not change.
  • the mixing time of the mixture with the amino acid should be at least 1 hour; the temperature must not exceed 60 °C. After that, the reaction mixture is neutralized by adding acid to the value pH value in the range from 6.0 to 8.5. Any inorganic or organic acid can be used as the neutralizing acid, in particular hydrochloric acid or acetic acid or citric acid or lactic acid.
  • the resulting modified gel is subjected to a dialysis process in sodium phosphate physiological buffer solution or in water for injection, so the final value of pH, ionic strength of the solution and osmolality take on physiological values or those values that are necessary for a particular medical application.
  • the resulting gel is homogenized by stirring, if necessary, the required amount of water for injection or sodium phosphate physiological buffer is added according to the target concentration of the modified carboxymethyl cellulose in the finished product, depending on the medical application, but not more than 2 times, since the degree of swelling of the modified gel is limited and at higher dilutions gel separation will be observed.
  • the mass concentration of modified carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt cannot be higher than 12% (in the case of using carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt with a concentration of 12% in the initial solution and without diluting the resulting modified gel) and below 1% (in the case of using carboxymethylcellulose or its pharmaceutically acceptable salt with a concentration of 2% in the original solution and with a maximum two-fold dilution of the resulting modified gel).
  • the resulting modified gel is mixed or homogenized until homogeneous.
  • the resulting gel can enter the packaging stage, where two methods of packaging and sterilization are possible: filtration through a filter with a pore size of 0.22 microns and filling into a packaging container, which includes the primary packaging of the “container-capping” system, or filling without filtration into packaging container and moist heat sterilization.
  • the gel according to the present invention may additionally include at least one pharmaceutically acceptable excipient used in the creation of pharmaceutical compositions, in particular a solvent (in particular, water for injection), a buffer (in particular, sodium phosphate physiological buffer solution), a preservative , antioxidant, isotonic agents.
  • a solvent in particular, water for injection
  • a buffer in particular, sodium phosphate physiological buffer solution
  • preservative antioxidant, isotonic agents.
  • the gel obtained in this way is non-toxic and biocompatible, which allows it to be used in various fields of medicine, including: 1) in surgery as a filler for various medical implants, in particular for interspinous dynamic implants used in degenerative diseases of the spine, and also as a filler for breast implants;
  • the modified composition can be used by applying to medical devices before operations in order to reduce pain and damaging effects on organs, as well as a lubricant and / or anti-adhesion barrier during joint operations in order to reduce friction between organs and reduce the likelihood of inflammatory reactions;
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 3.5 g of glycine was added, the mixture was stirred for one hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a solution of hydrochloric acid with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8, 5.
  • the reaction mixture in the form of a gel was placed in a sterile dialysis bag of an appropriate size (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 liter container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer.
  • Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 60 °C for 1 hour at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.1 g of leucine was added, the mixture was stirred for an hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a solution of concentrated acetic acid to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container. The container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 60 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting mixture was stirred at 4 °C for 48 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 7 g of alanine was added, the mixture was stirred for an hour at a temperature of plus 4 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a 60% citric acid solution to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container. The container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 4 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was made up to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and dispensed into syringes intended for pre-filling and sealed, after which they were sterilized with moist heat with a sterilization mode of 20 minutes at a temperature of 121 ° C.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.1 g of phenylalanine, 4 g of lysine and 2 g of isoleucine were added, the mixture was stirred for one hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a 90% lactic acid solution to pH values of 6 .0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and stoppered, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization regimen of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.5 g of taurine, 2 g of histidine and 3 g of arginine were added, the mixture was stirred for an hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a solution of hydrochloric acid with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the reaction mixture in the form of a gel was placed in a sterile dialysis bag of the appropriate size (pore size corresponds to a cut-off limit of 12,000 Da) and placed in a 1 liter container. The container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was made up to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and aseptically filled into syringes.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.1 g of methionine, 0.5 g of tryptophan, 0.8 g of serine and 2 g of threonine were added, the mixture was stirred for an hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with hydrochloric acid solution molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was made up to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and aseptically filled into syringes.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.2 g of cysteine, 0.5 g argnine, 2 g of glutamic acid the mixture was stirred for one hour at a temperature of 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized with a solution of hydrochloric acid with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was made up to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and aseptically filled into syringes.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • 0.5 g of asparagine, 0.8 g of glutamine, 1.5 g of tyrosine and 0.4 g of aspartic acid were added, the mixture was stirred for one hour at 20 °C at a stirring speed of 40 rpm, and then neutralized hydrochloric acid solution with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the gel was made up to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and aseptically filled into syringes.
  • Example 12 Comparative sample without adding amino acids.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • the reaction mixture was neutralized with a solution of hydrochloric acid with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5.
  • the gel reaction mixture was then placed in an appropriately sized sterile dialysis bag (pore size corresponds to a cut-off of 12,000 Da) and placed in a 1 L container.
  • the container was filled with sodium phosphate physiological buffer solution. Dialysis was carried out at a temperature of plus 20 °C, the total dialysis time was 24 hours.
  • the resulting gel can be packaged. More specifically, after dialysis, the modified gel was brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and filled into syringes intended for pre-filling and sealed, after which it was sterilized with moist heat with a sterilization mode of 20 min at a temperature of 121 °C.
  • Example 13 Comparative sample without dialysis and without addition of amino acids.
  • the resulting mixture was stirred at a temperature of 20 °C for 19 hours at a stirring speed of 40 rpm.
  • the reaction mixture was neutralized with a solution of hydrochloric acid with a molar concentration of 1 M to pH values from 6.0 to 8.5; brought to a volume of 100 ml with sodium phosphate physiological buffer solution and packaged in syringes intended for pre-filling, after which they were sealed and sterilized with moist heat with a sterilization mode of 20 minutes at a temperature of 121 °C.
  • the gel obtained according to Examples 1-3 of the present invention was injected into three different anatomical points characterized by different microenvironments: subcutaneously in the side, in the inguinal region, intraperitoneally in BALB/c mice.
  • Samples prepared in accordance with Examples 1-3 of the present method were administered to mice at 50 ⁇ l subcutaneously in the side. This introduction models the biodegradation subcutaneous cosmetic fillers.
  • the subcutaneous tissue is represented mainly by fibroblasts. After 35 days, all samples are at the injection site (Fig. 7). The size of the administered drugs is slightly reduced. The inflammatory process was not observed.
  • mice line BALB/c samples prepared in accordance with Examples 1 - 3 of this method was injected with 100 ⁇ l into the tissue in the area of the 3rd fat pad.
  • the cellular component is represented by adipose and epithelial cells, as well as fibroblasts. This introduction simulates tissue replacement reconstruction.
  • Biodegradation analysis was carried out on the 16th day after administration. All samples were at the injection site in approximately the same volume (Fig. 8). The formation of capillaries around and inside the preparations is visualized. No signs of inflammation were found.
  • mice line BALB/c samples prepared in accordance with Examples 1-3 of the present method were injected with 200 ⁇ l during surgery for the induction of adhesions.
  • Peritoneal exudate contains a significant amount of macrophages, granulocytes and lymphocytes.
  • the samples prepared in accordance with Examples 1-3 of the present method were absorbed by macrophages and quickly removed from the cavity.
  • Sample 1, obtained according to Example 1 was absent after 1 day; sample 3, obtained according to Example 3, was absent after 2 days; sample 2, obtained according to Example 2, was not registered after 3 days (table. 1).
  • Table 1 The results of the study of the antiadhesion activity of the preparations of the modified sodium salt of carboxymethyl cellulose obtained by the method according to the invention.
  • MiaPaCa-2 pancreatic cell lines were grown in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), penicillin, streptamycin, and glutamine. The cells were removed from the plates with a solution of 0.05% trypsin-EDTA, and the concentration was determined. To determine the toxicity of the gel according to the invention, the MTT test was used. [9]. The cytotoxicity of the preparations was assessed using the standard 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) test, as described in [9]. Various dilutions of preparations (from 10 to 1280 times) were prepared in a culture medium. Cells were added at 5 thousand/well.
  • II cytotoxicity index
  • Table 2 Analysis of the proliferation of MiaPaCa-2 cells in the presence of gels based on the modified sodium salt of carboxymethyl cellulose.
  • the gel obtained by the method according to the invention is characterized by low toxicity, in particular, the lowest toxicity is Sample 1 prepared in accordance with Example 1, the toxicity of Sample 2 and Sample 3 is comparable and below the IC50, which corresponds to low toxicity drugs.
  • the use of amino acids and dialysis has a synergistic effect: the toxicity of Sample 5 (prepared with dialysis, without the addition of amino acids) is higher than the toxicity of Samples 1-3, and the toxicity of Sample 4, prepared without dialysis and without the addition of amino acids, is significantly higher than all the others. samples and this product is toxic.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Composite Materials (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области фармации, клинической или экспериментальной медицины или ветеринарии, а именно к способу получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы путем реакции с модифицирующими сшивающими агентами из группы замещенных эпоксидных соединений и аминокислотами и использованию их в различных сферах медицины, в том числе в качестве противоспаечного геля и имплантатов. Предложенный способ позволяет получить нетоксичный гель на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы. Это достигается путем ковалентной связывания молекул карбоксиметилцеллюлозы или ее фармацевтически приемлемой соли сшивающими агентами из группы замещенных эпоксидных соединений и добавления аминокислот с целью нейтрализации свободных эпоксидных групп в составе сшитой карбоксиметилцеллюлозы и нейтрализации остатков сшивающего агента. Использование диализа позволяет дополнительно удалить из состава остаточное количество сшивающего агента и продуктов реакции свободного сшивающего агента и аминокислот.

Description

Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбокси мети л цел л юл озы
Область техники
Настоящее изобретение относится к области фармации, клинической или экспериментальной медицины, или ветеринарии, а именно к способу получения нетоксичного геля на основе карбоксиметилцеллюлозы путем модифицирования карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли сшивающими агентами из группы замещенных эпоксидных соединений и аминокислотами и использования его в различных сферах медицины, в том числе в качестве антиадгезионного средства и имплантатов.
Уровень техники
Карбоксиметилцеллюлоза представляет собой биополимер, состоящий из связанных гликозидными связями по положениям р-(1— >4) мономеров р-глюкозы, в которых некоторые гидроксильные группы замещены на карбоксильные группы (фиг. 1). Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы широко используется в фармацевтической, пищевой и косметической промышленности в качестве загустителя, регулятора вязкости, пластификатора, наполнителя, а также при изготовлении имплантируемых медицинских изделий [1].
Широкое применение карбоксиметилцеллюлозы обусловлено ее свойствами: являясь биополимером, карбоксиметилцеллюлоза обладает такими качествами, как биосовместимость, неиммуногенность, гипоаллергенность и биодоступность; в то же время, благодаря наличию большого количества гидроксильных и карбоксильных групп, между полимерными цепями карбоксиметилцеллюлозы образуются различные химические и физические взаимодействия (водородные связи, ионные связи, электростатическое связи, силы Ван-дер-Ваальса), что и обусловливает формирование гелеобразной структуры, напрямую зависящую от концентрации карбоксиметилцеллюлозы, длины полимерных цепей, степени замещения и наличию ионов металлов [2]. Таким образом, возможно создание широкого спектра продуктов с заданной вязкостью и густотой, что и обусловливает удобство в использовании биополимеров на основе карбоксиметилцеллюлозы.
Отдельное преимущество данного биополимера обусловлено процессом производства карбоксиметилцеллюлозы: ее получают синтетически из растительного сырья, что, таким образом, обеспечивает практически полное отсутствие бактериальных эндотоксинов, остаточного белка и обеспечивает низкую бионагрузку, что особенно важно для имплантируемых медицинских изделий [3].
Среди прочих применений в медицине, особо широкое применение карбоксиметилцеллюлозы проявляется при изготовлении противоспаечных рассасывающихся гелей и антиадгезионных средств [4,5], интрадермальных филлеров, а также имплантатов [3], что, таким образом, подчеркивает клиническую безопасность данного биополимера.
Спаечный процесс после операций, в особенности на органах брюшной полости, является актуальной медицинской задачей, что связано с большой частотой его развития - 67-93% [8]. Наиболее современным и эффективным средством борьбы со спайкообразованием является интраоперационная профилактика, которая заключается во введении временных искусственных «барьеров», а именно гелей на основе карбоксиметилцеллюлозы (например, «Oxiplex®»). Преимуществом использования карбоксиметилцеллюлозы при изготовлении противоспаечного геля является тот факт, что данные медицинские изделия показывают лучшие результаты по противоспаечной активности среди полимеров [5].
Среди дермальных филлеров, применяемых в качестве имплантатов, широкое применение получили филлеры на основе коллагена и гиалуроновой кислоты, в том числе химически модифицированные. Однако их существенными недостатками является наличие в составе исходного сырья с повышенным содержанием бактериальных эндотоксинов и остаточного белка, наличие которых обусловлено с их животным/микробиологическим происхождением, что, как считается, является одним из основных факторов возникновения аллергических и воспалительных реакций [6]. Именно поэтому карбоксиметилцеллюлоза является перспективным веществом для создания имплантатов или филлеров, что подтверждается их клиническим применением [3].
Также стоит отметить, что гиалуроновая кислота является более гигроскопичным веществом, чем карбоксиметилцеллюлоза. Вследствие этого, при использовании гиалуроновой кислоты в качестве филлера происходит возникновение отека, связанного с поглощением значительного количества молекул воды. Этого недостатка лишены филлеры на основе карбоксиметилцеллюлозы, что подтверждается клиническими испытаниями [3].
Однако в зависимости от медицинского назначения и терапевтических целей требуется регулирование степени биодеградации имплантируемых биополимеров. Для того, чтобы регулировать степень биодеградации карбоксиметилцеллюлозы в тканях организма, зачастую используют химические методы модификации, а именно использование сшивающих агентов, которые образуют ковалентные связи между полимерными цепями карбоксиметилцеллюлозы. Такая модификация существенно уменьшает скорость биодеградации, так как сшитые производные биополимера менее склонны к гидролизному распаду, в то же время повышая механические свойства материала, что увеличивает продолжительность полезного эффекта от их применения.
Из уровня техники известно использование модифицирующих сшивающих агентов, на основе замещенных эпоксидных соединений (включающих 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир; полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир, полипропиленгликольдиглицидиловый эфир) (фиг. 2-4). Данная группа модифицирующих сшивающих агентов широко применяется при производстве интрадермальных филлеров и имплантатов на основе гиалуроновой кислоты; в частности, на протяжении 15 лет клинического использования 1 ,4-бутандиолдиглицидилового эфира была подтверждена клиническая безопасность при соблюдении остаточного содержания менее 0,0001% [6]. Помимо этого, вследствие большого количества веществ из группы замещенных эпоксидов, их использование вследствие разной молекулярной массы, структуры и реакционной способности позволяет создавать продукты с различной степенью биодеградации, что важно для различных сфер применения.
Использование полиэтиленгликольдиглицидилового эфира в качестве сшивающего агента для карбоксиметилцеллюлозы с целью использования в медицинских изделиях описано в патенте [2]. Также на данный момент на коммерческом рынке присутствует интрадермальный имплантат на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы путем реакции с 1,4-бутандиолдиглицидиловым эфиром [3].
В патенте [10] описана возможность использования модифицирующего сшивающего агента на основе замещенных эпоксидных соединений с использованием полипропиленгликольдиглицидилового эфира.
Однако представленных выше технические решения характеризуются ограничением, связанным с очисткой и дезактивацией модифицированного геля от остатков сшивающих агентов. После проведения химической модификации сшивающими агентами в полученном геле содержатся остатки непрореагировавшего модифицирующего сшивающего агента, и, что особенно важно, остатки сшивающих агентов, которые прореагировали только по одной эпоксидной группе с молекулой карбоксиметилцеллюлозы. В таком случае может происходить реакции изомеризации оставшейся эпоксидной группы с образованием альдегидной группы, которая обладает высокой токсичностью. Именно поэтому важно отметить, что в результате использования модифицирующих сшивающих агентов требуется очистка от остаточного свободного количества сшивающих агентов и дезактивации свободных эпоксидных групп частично прореагировавших сшивающих агентов, что в приведенных технических решениях не используется. Именно поэтому при использовании таких технических решений по их способам применения существует вероятность возникновения осложнений, связанная с повышенной токсичностью.
Раскрытие сущности изобретения
Задачей настоящего изобретения является разработка нового эффективного способа получения геля модифицированной карбоксиметилцеллюлозы.
Техническим результатом настоящего изобретения является разработка нового эффективного способа получения геля путем модификации карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли, который обладают низкой токсичностью; указанный способ по изобретению хорошо масштабируем и позволяют получить низкотоксичные и биосовместимые гели с высокой степенью чистоты. Гель, полученный способом по изобретению, может найти широкое применение в медицине, в том числе хирургии и эстетической медицине, в частности для использования в качестве наполнителя для медицинских имплантатов, вещества-носителя, лубриканта и/или антиадгезионного барьера, противоспаечного геля или интрадермального филлера.
Указанный технический результат достигается за счет осуществления способа получения геля на основе модифицированной карбоскиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии: а) создание ковалентных связей между молекулами карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли посредством осуществления в растворе взаимодействия карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли с сшивающим агентом, представляющим собой замещенный оксиран; б) нейтрализация свободных эпоксидных групп в модифицированной карбоксиметилцеллюлозе или её фармацевтически приемлемой соли, полученной на стадии а), и нейтрализация остатков сшивающего агента посредством добавления аминокислоты или комбинации, по меньшей мере, двух аминокислот в реакционную смесь, полученную на стадии а); в) удаление остатков аминокислоты и/или сшивающего агента посредством осуществления диализа полученного после проведения стадии б) геля в натрийфосфатном физиологическом буферном растворе или воде для инъекций.
В частных вариантах воплощения изобретения в качестве замещенного оксирана используется 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 202,25 Да; полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 500 Да; или полипропиленгликольдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 380 Да или 640 Да.
В частных вариантах воплощения изобретения молекулярная масса карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли на стадии а) составляет от 50 000 Да до 1 000 000 Да.
В частных вариантах воплощения изобретения степень замещения карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли на стадии а) составляет 50-150.
В частных вариантах воплощения изобретения фармацевтически приемлемая соль представляет собой натриевую соль.
В частных вариантах воплощения изобретения стадию а) осуществляют в основной среде при значении водородного показателя pH в диапазоне от 8 до 14 единиц и при температуре в диапазоне от +4 °C до +60 °C. В частных вариантах воплощения изобретения стадию б) осуществляют в основной среде при значении водородного показателя pH в диапазоне от 8 до 14 единиц и при температуре в диапазоне от +4 °C до +60 °C.
В частных вариантах воплощения изобретения стадию а) осуществляют в течение от 1 часа до 48 часов.
В частных вариантах воплощения изобретения стадию б) осуществляют в течение от 1 часа до 24 часов.
В частных вариантах воплощения изобретения аминокислота выбирается независимо и представляет собой глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, триптофан, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глутамин, тирозин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин, гистидин и/или таурин.
В частных вариантах воплощения изобретения после проведения стадии б) реакционную смесь нейтрализуют до значения водородного показателя pH 6, 0-8, 5 с использованием неорганической или органической кислоты.
В частных вариантах воплощения изобретения неорганическая или органическая кислота выбирается независимо и представляет собой хлороводородную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту.
В частных вариантах воплощения изобретения диализ на стадии в) осуществляется с использованием целлюлозной мембраны с пределом отсечения 12000 Да.
В частных вариантах воплощения изобретения массовая концентрация карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли в растворе на стадии а) составляет от 2 до 12 массовых %.
В частных вариантах воплощения изобретения массовая концентрация сшивающего агента в растворе на стадии а) составляет от 0,1 до 10 массовых %.
В частных вариантах воплощения изобретения массовая концентрация аминокислоты или комбинации, по меньшей мере, двух аминокислот на стадии б) составляет от 0,2% до 14 массовых %.
В частных вариантах воплощения изобретения полученный после диализа гель доводят водой для инъекций или натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором до требуемой для медицинского применения концентрации модифицированной карбоксиметилцеллюлозы, но не более чем в 2 раза, так как степень набухания модифицированного геля ограничена и при большем разбавлении будет наблюдаться расслоение геля.
Предметом настоящего изобретения также является гель на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли для использования в качестве наполнителя для медицинских имплантатов, вещества- носителя, лубриканта и/или антиадгезионного барьера, противоспаечного геля или интрадермального филлера, полученный способом по изобретению. В частных вариантах воплощения изобретения гель дополнительно включает по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Более конкретно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество выбирается из растворителя, буфера, консерванта, антиоксиданта или изотонического агента.
В частных вариантах воплощения изобретения растворитель представляет собой воду для инъекций.
В частных вариантах воплощения изобретения буфер представляет собой натрийфосфатном физиологический буфер.
В частных вариантах воплощения изобретения массовая концентрация модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли составляет не менее 1 масс. % и не более 12 массовых. %.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
Краткое описание чертежей
Фигура 1. Структурная формула молекулы натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы.
Фигура 2. Химическая схема реакции сшивания натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы посредством использования модифицирующего сшивающего агента 1 ,4-бутандиолдиглицидилового эфира; R = Н, CHzCOONa.
Фигура 3. Химическая схема реакции сшивания натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы посредством использования модифицирующего сшивающего агента полиэтиленгликольдиглицидилового эфира; R = Н, СНгСООИа.
Фигура 4. Химическая схема реакции сшивания натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы посредством использования модифицирующего сшивающего агента полипропиленгликольдиглицидилового эфира; R = Н, СНгСООМа.
Фигура 5. Химическая схема реакции нейтрализации аминокислотой остатков свободных эпоксидных групп в модифицированной сшивающим агентом карбоксиметилцеллюлозе на примере взаимодействия с глицином и полипропиленгликольдиглицидиловым эфиром в качестве модифицирующего сшивающего агента.
Фигура 6. Химическая схема реакции замещенного оксирана на примере полипропиленгликольдиглицидилового эфира с аминокислотой на примере глицина.
Фигура 7. Подкожное введение геля по изобретению мышам линии BALB/c. Фотографии места введения на 16 и 35 дни после введения двум мышам в группе (верхняя и нижняя панели). Препарат 1 - гель, полученный по Примеру 1 ; Препарат 2 - гель, полученный по Примеру 2; Препарат 3 - гель, полученный по Примеру 3.
Фигура 8. Введение геля по изобретению мышам линии BALB/c в паховую область. Препарат 1 - гель, полученный по Примеру 1 ; Препарат 2 - гель, полученный по Примеру 2; Препарат 3 - гель, полученный по Примеру 3. Фигура 9. Анализ пролиферации клеток MiaPaCa-2 в присутствии геля на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы. Данные приведены в виде индекса цитотоксичности (II), определенного по формуле ll=1-ODexp/ODCont. Образец 1 - гель, полученный по Примеру 1 ; Образец 2 - гель, полученный по Примеру 2; Образец 3 - гель, полученный по Примеру 3; Образец 4 - гель сравнения, полученный по Примеру 13 (без использования аминокислот, без диализа); Образец 5 - гель сравнения, полученный по Примеру 12 (без использования аминокислот, с диализом).
Определения и термины
Для лучшего понимания изобретения ниже приведены термины, использованные в настоящем описании изобретения.
Термины «включает» и «включающий» означают в описании данного изобретения «включает, помимо всего прочего», то есть указанные термины не истолковываются как «состоит только из».
Термины «сшитый», «сшивка» означает ковалентное связывание молекул карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли с использованием сшивающих агентов.
Термин «сшивающий агент» означает химический агент, модифицирующий агент, который используется при ковалентном химическом связывании молекул карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли.
Термин «Дальтон» или «Да» означает внесисистемную единицу измерения молекулярной массы, рекомендованную к применению ИЮПАК, эквивалентную молярной массе вещества, выраженной в граммах на моль.
Термин «степень замещения» означает число гидроксильных групп (-ОН), замещенных карбоксиметильными группами в цепи, состоящей из 100 звеньев остатков глюкозы (CH2COONa). При полном замещении всех гидроксильных групп степень замещения равна 300, при отсутствии карбоксиметильных групп (то есть в исходной целлюлозе) равна 0.
Термин «гарантированный уровень стерильности» или «sterility assurance level» или «SAL» означает вероятность выживания микроорганизма на оборудовании после стерилизации. Термин «SAL» является количественной величиной, обычно в пределах от 10‘6 до 10'3. Процесс стерилизации с уровнем 10'6 более эффективен, чем процесс стерилизации с уровнем 10'3.
Карбоксиметилцеллюлоза - полимер, производное целлюлозы, в котором карбоксилметильная группа (-СНг-СООН) соединяется гидроксильными группами глюкопиранозных мономеров; общая формула - [СбН7О2(ОН)з-х(ОСН2СООН)х]п, где х = 0,02- 1 ,5). Карбоксиметилцеллюзы натриевая соль, или натрий карбоксиметилцеллюлозы - анионная форма карбоксиметилцеллюлозы; общая формула - [СбН?О2(ОН)з- x(OCH2COONa)x]n, где х = 0,02-1,50.
Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к таким солям, которые, в рамках проведенного медицинского заключения, пригодны для использования в контакте с тканями человека и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.д., и отвечают разумному соотношению пользы и риска, к примеру натриевая, калиевая, магниевая соли карбоксиметилцеллюзы.
Замещенный эпоксид, или замещенный оксиран, или эпоксидное соединение - группа химических веществ, относящихся к сшивающим агентам, имеющая в своем составе функциональную группу в виде насыщенного трехчленного гетероцикла, циклического эфира, в котором к двум соседним атомам углерода присоединяется атом кислорода. В частных вариантах воплощения изобретения замещенный оксиран представляет собой 1 ,4-бутандиолдиглицидиловый эфир, полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир или полипропиленгликольдиглицидиловый эфир.
1 ,4-бутандиолдиглицидиловый эфир или 1,4-бис(2,3-эпоксипропилокси)бутан - сшивающий агент, замещенный эпоксид, с брутто-формулой С10Н18О4.
Полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир - сшивающий агент, замещенный эпоксид, с общей формулой СзНбОг-О гНдС п-СзНбО.
Полипропиленгликольдиглицидиловый эфир - сшивающий агент, замещенный эпоксид, с общей формулой СзН5О2-(С2Нз(СНз)О)п-СзН5О, в частности, средняя молекулярная масса которого может быть 380 Да и 640 Да.
Под термином «аминокислота» в настоящем документе понимается органическое соединение, в молекуле которого одновременно содержатся карбоксильные и аминные группы, в частных вариантов аминокислоты выбираются из 20 стандартных (протеиногенных) а-аминокислот (включая D-, L-формы или рацематы), в частности, аминокислота выбирается независимо и представляет собой глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, триптофан, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глутамин, тирозин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин и/или гистидин (за исключением пролина). Помимо этого, под термином аминокислота в настоящем документе понимают серосодержащую аминокислоту, в которой отсутствует карбоксильная группа, в частности, таурин.
В настоящем документе под термином «натрий-фосфатный физиологический буферный раствор» понимается буферный раствор приготовленный по следующей рецептуре (из расчета на 1 литр итогового раствора): в воду для инъекций объемом 800 мл добавляются следующие компоненты: NaCI массой 8 г, KCI массой 0,2 г, №гНРО4 массой 1 ,44 г и КН2РО4 массой 0,24 г, и перемешиваются до полного растворения всех компонентов. После этого объем полученного раствора доводится водой для инъекций до 1 л.
Осуществление изобретения
Способ получения нетоксичного геля на основе карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли, модифицированной химически путем реакции со сшивающими агентами на основе замещенных эпоксидов и аминокислоты, согласно изобретению, заключается в создании ковалентных эфирных связей между молекулами карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли в результате введения сшивающих агентов в виде замещенных эпоксидов и далее путем ковалентного связывания остатков свободных эпоксидных групп в составе сшитой карбоксиметилцеллюлозы с аминокислотой, после чего полученный гель проходит стадию дезактивации и удаления остаточного количества сшивающего агента за счет реакции с аминокислотой и диализного процесса.
Аминокислоты являются нуклеофильными агентами за счет наличия в их структуре аминогруппы, в результате чего они присоединяются к свободным эпоксидным группам модифицированной композиции, таким образом блокируя их дальнейшую изомеризацию; использование аминокислот в качестве нуклеофильных агентов, в частности, обусловлено их биологической совместимостью, вследствие чего они не проявляют токсичности; выбор конкретной аминокислоты для воплощения изобретения обусловливается методом стерилизации изделия, медицинским применением и экономической себестоимостью.
На всем протяжении технологического процесса производства модифицируемый гель доводится до требуемых показателей по параметрам ионной силы раствора, осмоляльности, водородного показателя pH. Так, после стадии сшивки в основной среде и присоединения аминокислоты к свободным эпоксидным группам идет стадия нейтрализации раствором кислоты; стадия диализа в физиологическом натрийфосфатном физиологическом буфере или воде для инъекций помимо очистки способствует достижению данных показателей осмоляльности до физиологических значений либо тех значений, которые необходимы для конкретного медицинского применения.
Основным сырьем для получения геля по изобретению является карбоксиметилцеллюлоза или её фармацевтически приемлемая соль, в частности натриевая, калиевая или магниевая, которая, согласно данному изобретению, может использоваться в диапазоне массовых концентраций от 2 % до 12 % в исходном растворе, так как при более низкой концентрации расстояние между молекулами слишком велико и не происходит сшивания молекул; при более высоких концентрациях растворимость карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли затруднена; степень замещения может быть в диапазоне от 50 до 150, так как при значениях меньше 50 карбоксиметилцеллюлоза или её фармацевтически приемлемая соль не растворяется в нейтральной среде, что снижает степень набухания полимера после стадии сшивки, а при значениях выше 150 карбоксиметилцеллюлоза или её фармацевтически приемлемая соль имеет слишком малое количество гидроксильных групп, которые участвуют в реакции со сшивающим агентом, что приводит к недостаточной вязкости; молекулярная масса может быть, в частности, в диапазоне от 50 000 Да до 1 000 000 Да.
Сшивающими агентами могут выступать любые соединения из группы замещенных оксиранов, включая следующие (но не ограничивающиеся ими): 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир; полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир; полипропиленгликольдиглицидиловый эфир. Использование сшивающих агентов, согласно данному изобретению, возможно в диапазоне массовых концентраций от 0,1 % до 10 % в исходном растворе. При меньшей концентрации не происходит эффективная реакция между молекулами, при более высокой - происходит чрезмерная сшивка молекул, непригодная для медицинского применения. Молекулярная масса некоторых соединений из группы замещенных эпоксидов, включая полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир и полипропиленгликольдиглицидиловый эфир, вследствие химических особенностей данных веществ может варьироваться; в частности, согласно данному изобретению, для изготовления изделий может быть использован полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 500 Да, полипропиленгликольдиглицидиловый эфир со средней молекулярной массой 380 Да и 640 Да.
В качестве основания может использоваться любое неорганическое основание, в частности гидроксид натрия или гидроксид калия. Его количество определяется величиной показателя pH, который должен быть в диапазоне 8-14 ед.
В общем случае для производства геля, согласно данному изобретению, предварительно взвешенная масса карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли добавляется в емкость с основным раствором (pH которого выше 8 ед.), при этом массовая концентрация карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли в основном растворе составляет от 2% до 12%, и перемешивается до полного растворения при температуре не выше плюс 60 °C.
После этого к полученному раствору добавляется сшивающий агент при постоянном перемешивании до получения гомогенной смеси. Массовая концентрация сшивающего агента в реакционной смеси может составлять от 0,1 до 10%.
После процесса химической сшивки к полученной смеси добавляется аминокислота, при этом массовая концентрация аминокислоты в реакционной смеси составляет от 0,2% до 14%, и осуществляется перемешивание. При более низких концентрациях цитотоксичность геля сравнима с гелем без добавления аминокислоты; при более высоких концентрациях цитотоксичность не изменяется. Время перемешивания смеси с аминокислотой должно составлять не менее 1 часа; температура не должна превышать 60 °C. После этого реакционная смесь нейтрализуется путем добавления кислоты до значения водородного показателя pH в диапазоне значений от 6,0 до 8,5. В качестве нейтрализующей кислоты может быть использована любая неорганическая или органическая кислота, в частности хлороводородная кислота, или уксусная кислота, или лимонная кислота, или молочная кислота. Затем полученный модифицированный гель подвергается процессу диализа в натрий-фосфатном физиологическом буферном растворе, либо в воде для инъекций, таким образом итоговое значение водородного показателя pH, ионной силы раствора и осмоляльности принимают физиологические значения либо те значения, которые необходимы для конкретного медицинского применения.
После процедуры диализа полученный гель гомогенизируется путем перемешивания, при необходимости добавляется требуемое количество воды для инъекции или натрий-фосфатного физиологического буфера согласно целевому показателю концентрации модифицированной карбоксиметилцеллюлозы в готовом изделии в зависимости от медицинского применения, но не более чем в 2 раза, так как степень набухания модифицированного геля ограничена и при большем разбавлении будет наблюдаться расслоение геля. Таким образом, массовая концентрация модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или ее фармацевтически приемлемой соли не может быть выше 12% (в случае использования карбоксиметилцеллюлозы или ее фармацевтически приемлемой соли концентрацией 12 % в исходном растворе и без разбавления полученного модифицированного геля) и ниже 1% (в случае использования карбоксиметилцеллюлозы или ее фармацевтически приемлемой соли концентрацией 2 % в исходном растворе и с максимальным двукратным разбавлением полученного модифицированного геля).
Полученный модифицированный гель перемешивается или гомогенизируется до однородного состояния.
Далее полученный гель может поступать на стадию фасовки, где возможно два метода фасовки и стерилизации: фильтрование через фильтр с размером пор 0,22 мкм и розливом в фасовочную емкость, включающую в себя первичную упаковку системы «контейнер-укупорка», либо розлив без фильтрации в фасовочную емкость и стерилизация влажным теплом.
Гель, согласно настоящему изобретению, дополнительно может включать по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, используемое при создании фармацевтических композиций, в частности растворитель (в частности, вода для инъекций), буфер (в частности, натрий-фосфатный физиологический буферный раствор), консервант, антиоксидант, изотонические агенты.
Полученный таким образом гель является нетоксичным и биосовместимым, что позволяет использовать его в различных областях медицины, включающих в себя: 1) в хирургии в качестве наполнителя для различных медицинских имплантатов, в частности для межостистых динамических имплантатов, применяемых при дегенеративных заболеваниях позвоночника, а также в качестве наполнителя для грудных имплантатов;
2) в качестве вещества-носителя при использовании систем доставки лекарственных средств и систем контролирования высвобождения лекарственных средств, в том числе при доставке токсичных веществ в химиотерапии;
3) при лечении травм и оперировании, связанных с возникновением пустот и потери объема ткани разных органов, что может влиять на функционирование данного органа, а именно в качестве заполняющего пустоты состава;
4) в качестве лубриканта и/или антиадгезионного барьера при хирургических вмешательствах; в данном случае модифицированный состав может использоваться путем нанесения на медицинские изделия перед операциями с целью снижения болевых и повреждающих действий на органы, а также в качестве лубриканта и/или антиадгезионного барьера при операциях на суставах с целью снижения трения между органами и снижением вероятности воспалительных реакций;
5) в качестве противоспаечного геля при хирургических вмешательствах;
6) в качестве интрадермального филлера для коррекции косметических дефектов.
Реализацию способа получения геля модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли по изобретению можно проиллюстрировать на следующих примерах:
Пример 1.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 4 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 1 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 3,5 г глицина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты с молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После этого реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буфером. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа. После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 2.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 4 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида калия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 500 Да) массой 2,5 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 3,5 г глицина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты с молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 3.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 4 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили полипропиленгликольдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 380 Да) массой 2 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 3,5 г глицина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты с молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 4.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 50). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили полипропиленгликольдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 640 Да) массой 5 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 2 г валина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили водой для инъекций. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 5.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 6 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 50000 Да, степень замещения 100). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 60 °C в течение 1 часа при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,1 г лейцина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором уксусной кислоты концентрированной до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 60 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 6.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 1 000 000 Да, степень замещения 150). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 2,75 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 4 °C в течение 48 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 7 г аланина, смесь перемешивали в течение часа при температуре плюс 4 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором лимонной кислоты концентрацией 60% до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 4 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 7.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 3 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 300000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,1 г фенилаланина, 4 г лизина и 2 г изолейцина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором молочной кислоты 90% до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 8.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 50000 Да, степень замещения 150). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,5 г таурина, 2 г гистидина и 3 г аргинина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам асептически.
Пример 9.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 50000 Да, степень замещения 150). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,1 г метионина, 0,5 г триптофана, 0,8 г серина и 2 г треонина, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам асептически.
Пример 10.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 50000 Да, степень замещения 150). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,2 г цистеина, 0,5 г аргнина, 2 г глутаминовой кислоты, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам асептически.
Пример 11.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 1 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 50000 Да, степень замещения 150). Затем в колбу добавили 1%-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 0,05 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции добавили 0,5 г аспарагина, 0,8 г глутамина, 1 ,5 г тирозина и 0,4 г аспарагиновой кислоты, смесь перемешивали в течение часа при температуре 20 °C при скорости перемешивания 40 об/мин, и затем нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа гель довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам асептически.
Пример 12. Образец сравнения без добавления аминокислот.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 4 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 1 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции реакционную смесь нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5. После реакционная смесь в виде геля была помещена в стерильный диализный мешок соответствующего размера (размер пор соответствует пределу отсечения в 12000 Да) и поместили в емкость объемом 1 л. Емкость заполнили натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором. Диализ вели при температуре плюс 20 °C, общее время диализа составило 24 часа.
После проведения диализа полученный гель может быть расфасован. Более конкретно, после диализа модифицированный гель довели до объема 100 мл натрийфосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения и укупорили, после чего простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 13. Образец сравнения без диализа и без добавления аминокислот.
В круглодонную колбу (100 мл), снабженную верхнеприводной мешалкой с редуктором, поместили 4 г натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (молекулярная масса 380000 Да, степень замещения 75). Затем в колбу добавили 1 %-ый раствор по массе гидроксида натрия в воде для инъекций в количестве 50 мл. Проводили растворение карбоксиметилцеллюлозы в щелочном растворе в течении 1 часа при температуре 20 °C и перемешивании при 50-60 об/мин. После полного растворения добавили 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир (молекулярная масса 202,25 Да) массой 1 г. Полученную смесь перемешивали при температуре 20 °C в течение 19 часов при скорости перемешивания 40 об/мин. После проведения реакции реакционную смесь нейтрализовали раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 М до значений показателя pH от 6,0 до 8,5; довели до объема 100 мл натрий-фосфатным физиологическим буферным раствором и расфасовали по шприцам, предназначенным для предварительного наполнения, после чего укупорили и простерилизовали влажным теплом с режимом стерилизации 20 мин при температуре 121 °C.
Пример 14. Исследование биодеградации in vivo
Для определения продолжительности биодеградации геля, полученного по Примерам 1 - 3 настоящего изобретения, вводили в три различные анатомические точки, характеризующиеся различным микроокружением: подкожно в бок, в паховую область, внутрибрюшинно мышам линии BALB/c.
Образцы, приготовленные в соответствии с Примерами 1-3 настоящего способа, вводили мышам по 50 мкл подкожно в бок. Данное введение моделирует биодеградацию подкожных косметических филлеров. Подкожная клетчатка представлена в основном фибробластами. По истечении 35 дней все образцы находятся на месте введения (фиг. 7). Размер введенных препаратов незначительно уменьшается. Воспалительного процесса не наблюдалось.
Мышам линии BALB/c образцы, приготовленные в соответствии с Примерами 1 - 3 настоящего способа, вводили по 100 мкл в ткань в область 3-ей жировой подушки. Клеточный компонент представлен жировыми и эпителиальными клетками, а также фибробластами. Данное введение моделирует заместительную реконструкцию тканей. Анализ биодеградации провели на 16 день после введения. Все образцы находились в месте введения примерно в том же объеме (фиг. 8). Визуализируется формирование капилляров вокруг и внутри препаратов. Признаков воспаления не выявили.
Мышам линии BALB/c образцы, приготовленные в соответствии с Примерами 1-3 настоящего способа, вводили по 200 мкл при проведении операции по индукции спаечного процесса. Перитонеальный экссудат содержит значительное количество макрофагов, гранулоцитов и лимфоцитов. При внутрибрюшинном введении образцы, приготовленные в соответствии с Примерами 1-3 настоящего способа, поглощались макрофагами и быстро выводились из полости. Образец 1, полученный по Примеру 1 , отсутствовал уже через 1 день; образец 3, полученный по Примеру 3, отсутствовал через 2 дня; образец 2, полученный по Примеру 2, не регистрировался через 3 дня (табл. 1).
Таблица 1 - Результаты исследования противоспаечной активности препаратов модифицированной натриевой соли карбоксиметил целлюлозы, полученной способом по изобретению. Образец 1 - гель, полученный по Примеру 1 ; образец 2 - гель, полученный по Примеру 2; образец 3 - гель, полученный по Примеру 3.
Figure imgf000021_0001
Таким образом, результаты проведенных исследований продемонстрировали возможность использования гелей, полученных способом по изобретению, для различных медицинских применений.
Пример 15. Исследование токсичности in vitro.
Линии клеток поджелудочной железы MiaPaCa-2 выращивали в среде DMEM с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка (FCS), пенициллин, стрептамицин, глютамин. Клетки снимали с планшетов раствором 0.05% трипсина-ЭДТА, определяли концентрацию. Для определения токсичности геля по изобретению использовали МТТ тест [9]. Цитотоксичность препаратов оценивалась с помощью стандартного 3-(4,5-диметил-2- тиазолил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолиум бромид (МТТ) теста, как описано в [9]. Различные разведения препаратов (от 10 до 1280 раз) готовили в культуральной среде. Клетки вносили по 5 тыс/лунку. В качестве контроля служили необработанные клетки. Планшеты инкубировали в течение 72 ч. За последние 6 ч в каждую лунку добавляли по 5 мг/мл МТТ в количестве 10 мкл. После инкубации культурную среду удаляли и в каждую лунку добавляли 100 мкл диметилсульфоксида. Планшеты инкубировали при встряхивании в течение 15 мин для растворения образовавшегося формазана. Оптическая плотность считывалась на спектрофотометре при 540 Нм. По кривым титрования рассчитана цитотоксическая концентрация, дающая 50% максимального токсического эффекта (IC50). Данные приведены в виде индекса цитотоксичности (II), определенный по формуле Н=1-ООехр/ООсоп1(фиг. 9). Результаты теста представлены в Таблице 2.
Таблица 2 - Анализ пролиферации клеток MiaPaCa-2 в присутствии гелей на основе модифицированной натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы. Данные приведены в виде индекса цитотоксичности (II), определенного по формуле ll=1-ODexp/ODCont- Образец 1 - гель, полученный по Примеру 1 ; Образец 2 - гель, полученный по Примеру 2; Образец 3 - гель, полученный по Примеру 3; Образец 4 - гель сравнения, полученный по Примеру 13 (без использования аминокислот, без диализа); Образец 5 - гель сравнения, полученный по Примеру 12 (без использования аминокислот, с диализом).
Figure imgf000022_0001
На основе данных МТТ-теста было установлено, что гель, полученный способом по изобретению, характеризуются низкой токсичностью, в частности, самым низкотоксичным является Образец 1 , приготовленный в соответствии с Примером 1 , токсичность Образца 2 и Образца 3 сравнима и ниже IC50, что соответствует низкотоксичным препаратам. Важно отметить, что использование аминокислот и диализа обладает синергетическим эффектом: токсичность Образца 5 (приготовленного с диализом, без добавления аминокислот) выше, чем токсичность Образцов 1-3, а токсичность Образца 4, приготовленного без диализа и без добавления аминокислот, существенно выше всех остальных образцов и данный препарат является токсичным.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.
Список литературы, которая включена в настоящее описание изобретения в качестве ссылок:
1) Behra J.S., Mattsson J., Cayre О. J., Robles E.S.J., Tang H., Hunte T.N. Characterization of Sodium Carboxymethyl Cellulose Aqueous Solutions to Support Complex Product Formulation: A Rheology and Light Scattering Study //ACS Applied Polymer Materials. - 2019. - V. 1(3). - P. 344-358.
2) US 9,682,167 B2, дата публикации 20.06.2017.
3) Leonardis M, Palange A. New-generation filler based on cross-linked carboxymethylcellulose: study of 350 patients with 3-year follow-up. // Clin Interv Aging. - 2015. - V. 10 - P. 147-155.
4) US 7,265,098 B2, дата публикации 04.09.2007.
5) EP1508344 B1 , дата публикации 25.10.2006.
6) Kablik J, Monheit GD, Yu L, Chang G, Gershkovich J. Comparative physical properties of hyaluronic acid dermal fillers. // Dermatol Surg. - 2009. - V.1 - P. 302-312.
8) Risberg B. Adhesions: preventive strategies. // Eur J Surg Suppl. - 1997. - V. 577. - P. 32-39.
9) Коновалова M.B., Курек Д.В., Дурнев E.A., Литвинец С. Г., Варламов В.П. Деградация in vitro пектин-хитозановых криогелей // Известия Уфимского научного центра РАН, 2016, №3(1), с.42-45.
10) US 9,352,046В2, дата публикации 11.05.2015.

Claims

Формула изобретения
1. Способ получения геля на основе модифицированной карбоскиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии: а) создание ковалентных связей между молекулами карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли посредством осуществления в растворе взаимодействия карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли с сшивающим агентом, представляющим собой замещенный оксиран; б) нейтрализация свободных эпоксидных групп в модифицированной карбоксиметилцеллюлозе или её фармацевтически приемлемой соли, полученной на стадии а), и нейтрализация остатков сшивающего агента посредством добавления аминокислоты или комбинации, по меньшей мере, двух аминокислот в реакционную смесь, полученную на стадии а); в) удаление остатков аминокислоты и/или сшивающего агента посредством осуществления диализа полученного после проведения стадии б) геля в натрийфосфатном физиологическом буферном растворе или воде для инъекций.
2. Способ по п. 1 , в котором в качестве замещенного оксирана используется 1 ,4- бутандиолдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 202,25 Да; полиэтиленгликольдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 500 Да; или полипропиленгликольдиглицидиловый эфир с молекулярной массой 380 Да или 640 Да.
3. Способ по п. 1 , в котором молекулярная масса карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли на стадии а) составляет от 50 000 Да до 1 000 000 Да.
4. Способ по п. 1 , в котором степень замещения карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли на стадии а) составляет 50-150.
5. Способ по п.1 , в котором фармацевтически приемлемая соль представляет собой натриевую соль.
6. Способ по п. 1 , в котором стадию а) осуществляют в основной среде при значении водородного показателя pH в диапазоне от 8 до 14 и при температуре в диапазоне от +4 °C до +60 °C.
7. Способ по п. 1 , в котором стадию б) осуществляют в основной среде при значении водородного показателя pH в диапазоне от 8 до 14 и при температуре в диапазоне от +4 °C до +60 °C.
8. Способ по п. 1 , в котором стадию а) осуществляют в течение от 1 часа до 48 часов.
9. Способ по п. 1 , в котором стадию б) осуществляют в течение от 1 часа до 24 часов.
10. Способ по п.1 , в котором аминокислота выбирается независимо и представляет собой глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, триптофан, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глутамин, тирозин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин, гистидин и/или таурин.
11. Способ по п.1 , в котором после проведения стадии б) реакционную смесь нейтрализуют до значения водородного показателя pH 6, 0-8, 5 с использованием неорганической или органической кислоты.
12. Способ по п.11 , в котором неорганическая или органическая кислота выбирается независимо и представляет собой хлороводородную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту.
13. Способ по п. 1 , в котором диализ на стадии в) осуществляется с использованием целлюлозной мембраны с пределом отсечения 12000 Да.
14. Способ по п. 1 , в котором диализ на стадии в) осуществляется не менее 24 часов.
15. Способ по п. 1 , в котором массовая концентрация карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли в растворе на стадии а) составляет от 2 до 12 массовых %.
16. Способ по п.1 , в котором массовая концентрация сшивающего агента в растворе на стадии а) составляет от 0,1 до 10 массовых %.
17. Способ по п.1 , в котором массовая концентрация аминокислоты или комбинации, по меньшей мере, двух аминокислот на стадии б) составляет от 0,2% до 14 массовых %.
18. Гель на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли для использования в качестве наполнителя для медицинских имплантатов, вещества-носителя, лубриканта и/или антиадгезионного барьера, противоспаечного геля или интрадермального филлера, полученный способом по любому из пп.1-17.
19. Гель по п.18, который дополнительно включает по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
20. Гель по п.19, в котором фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество выбирается из растворителя, буфера, консерванта, антиоксиданта и/или изотонического агента.
21. Гель по п.18, в котором массовая концентрация модифицированной карбоксиметилцеллюлозы или её фармацевтически приемлемой соли составляет не менее 1 масс. % и не более 12 массовых %.
22. Гель по п. 20, в котором растворитель представляет собой воду для инъекций.
23. Гель по п. 20, в котором буфер представляет собой натрий-фосфатном физиологический буфер.
PCT/RU2021/000035 2021-01-28 2021-01-29 Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы WO2022164336A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021101900A RU2759295C1 (ru) 2021-01-28 2021-01-28 Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы и применение их в медицине
RU2021101900 2021-01-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022164336A1 true WO2022164336A1 (ru) 2022-08-04

Family

ID=78607183

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2021/000035 WO2022164336A1 (ru) 2021-01-28 2021-01-29 Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2759295C1 (ru)
WO (1) WO2022164336A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080070997A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 Machiko Takigami Preparation of gels derived from carboxymethyl cellulose alkali metal salt
RU2352584C1 (ru) * 2007-09-06 2009-04-20 Общество с ограниченной ответственностью "Линтекс" Способ получения геля на основе карбоксиметилцеллюлозы

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080070997A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 Machiko Takigami Preparation of gels derived from carboxymethyl cellulose alkali metal salt
RU2352584C1 (ru) * 2007-09-06 2009-04-20 Общество с ограниченной ответственностью "Линтекс" Способ получения геля на основе карбоксиметилцеллюлозы

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PALANTÖKEN S., BETHKE K., ZIVANOVIC V., KALINKA G., KNEIPP JANINA, RADEMANN KLAUS: "Cellulose hydrogels physically crosslinked by glycine: Synthesis, characterization, thermal and mechanical properties", JOURNAL OF APPLIED POLYMER SCIENCE, JOHN WILEY & SONS, INC., US, vol. 137, no. 7, 15 February 2020 (2020-02-15), US , XP055961055, ISSN: 0021-8995, DOI: 10.1002/app.48380 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2759295C1 (ru) 2021-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7014845B2 (ja) 多糖によって架橋されているタンパク質の調製および／または調合物
US10064889B2 (en) Mercapto-modified biocompatible macromolecule derivatives with low degree of mercapto-modification and the cross-linked materials and uses thereof
JP5657545B2 (ja) 注射用容器内で架橋した注射用ヒドロゲルの調製方法
DK175661B1 (da) Polysaccharidestere
JP6106686B2 (ja) 水不溶性ゲル組成物およびその製造方法
WO2010059279A2 (en) Hydrogel tissue adhesive formed from aminated polysaccharide and aldehyde-functionalized multi-arm polyether
US9833539B2 (en) E-polylysine hydrogel and preparation method and application thereof
HU204858B (en) Process for producing bridge bonded esters of hyaluronic acid
WO2015017340A2 (en) Low swell tissue adhesive and sealant formulations
CN105324486B (zh) 透明质酸的制造方法和含有通过上述制造方法制造的透明质酸的防粘连用组合物
CA2758907A1 (en) Polysaccharide derivative and hydrogel thereof
CN113577246B (zh) 一种预防瘢痕粘连的组合物、术后防粘连材料及应用
RU2759295C1 (ru) Способ получения нетоксичных гелей на основе модифицированной карбоксиметилцеллюлозы и применение их в медицине
RU2804641C2 (ru) Способ получения модифицированной гиалуроновой кислоты и ее солей
CN114514267A (zh) 包含透明质酸和聚乙二醇的生物相容性水凝胶
JP2017528296A (ja) グリコサミノグリカンおよびタンパク質を含む組成物
KR20230112488A (ko) 성상 안정성이 확보된 포비돈요오드와 트리메틸키토산을 함유하는 3중복합 창상피복재의 제조방법
CZ31571U1 (cs) Hydrofilní polyamidový biokompatibilní gel

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21923473

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21923473

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1