WO2022131322A1

WO2022131322A1 - 神経細胞賦活剤

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Publication number: WO2022131322A1
Application number: PCT/JP2021/046462
Authority: WO
Inventors: 淳高橋; 文平佐俣
Original assignee: 国立大学法人京都大学
Priority date: 2020-12-17
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2022-06-23
Also published as: US20240033332A1; JPWO2022131322A1; EP4265270A1

Abstract

本発明の目的は、脳神経細胞を賦活化する神経細胞賦活剤を開発し、提供することである。また、本発明のさらなる目的は、神経疾患の細胞移植において、移植した細胞の生着、該生着細胞の神経細胞への分化、及び該神経細胞の成熟のうち少なくとも１以上を促進する剤を提供することである。　リゾチーム（LYZ）、分泌型リンタンパク質1（SPP1）、プログラニュリン（PGrn）、カテプシンD（Ctsd）、カテプシンS（Ctss）、アポリポタンパク質D（Apod）、Sparc、CD52、マクロファージ発現遺伝子1（MPEG1）、C-Cモチーフケモカインリガンド2（CCL2）、シスタチンF（CST7）、Racファミリー低分子量GTPアーゼ2（RAC2）、セルピンファミリーAメンバー3（SERPINA3）、アノズミン1（ANOS1）、カリクレイン関連ペプチダーゼ6（KLK6）、α2-マクログロブリン（A2M）、GM14295、ガレクチン3結合タンパク質（LGALS3BP）、アポリポタンパク質C1（APOC1）、及びそれらのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、若しくはその活性断片、又はそれをコードする核酸を含む神経細胞賦活剤、及び前記剤を含む細胞移植補助剤を提供する。

Description

神経細胞賦活剤

　本発明は、神経細胞賦活剤、細胞移植補助剤、神経疾患の治療又は予防剤、及び神経疾患の治療用組成物等に関する。

　成体の脳において、神経細胞は一度失われると自然再生することが難しい。そのため、神経変性疾患、脳梗塞、頭部外傷等によって脳神経細胞ひいては脳機能が失われると、その脳機能を自然回復させることは極めて困難である。

　神経細胞の変性や脱落を伴う神経疾患に対する予防又は治療アプローチとして、神経細胞のさらなる細胞死を抑制する方法が試みられている。この方法は神経疾患の発症や進行を遅延させることを主な目的とする方法であり、一度失われた脳機能を回復させることは困難である。

　一方、脳機能の回復を目的として、移植によって神経細胞を補充する方法も行われている。ヒト神経細胞を用いる移植治療は、現在に至るまでに数百例が実施されている。そのような例としては、1980年代から行われている、パーキンソン病患者を対象とするヒト胎児中脳腹側組織移植を挙げることができる。

　しかしながら、一般に神経疾患の移植治療における移植細胞の生着率は低く、さらに神経細胞に分化して十分に成熟する細胞の割合は非常に低いため、このことが治療効果の大きな妨げとなっていた。

Peron S, et al., J Neurosci. 2017,37(7):1820-1834.

　本発明の課題は、脳神経細胞を賦活化する神経細胞賦活剤を開発し、提供することである。また、本発明のさらなる課題は、神経疾患の細胞移植において、移植した細胞の生着、該生着細胞の神経細胞への分化、及び該神経細胞の成熟のうち少なくとも１以上を促進する剤を提供することである。

　上記技術的背景の下、本発明者らは鋭意研究の結果、Cst7、Spp1、A2m、Apoc1、Ccl12、Lyz2、Klk6、Gm11428、Cd52、Lgals3bp、Mpeg1、Rac2、Serpina3n、及びGm14295等が、神経細胞の軸索の伸長を促進する効果、神経軸索側枝を増大させる効果、神経細胞に対する細胞死抑制効果、及び神経細胞数を増加させる効果等の神経細胞賦活効果を有することを見出した。さらに、本発明者らは、Lyz2が、マウスを用いた中脳腹側組織の線条体への細胞移植において、移植細胞に由来するドパミン作動性神経細胞の密度を大幅に増大させることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明は、当該知見に基づくものであって以下を提供する。

（１）タンパク質若しくはその活性断片又はそれをコードする核酸を含む神経細胞賦活剤であって、前記タンパク質が、リゾチーム（LYZ）、分泌型リンタンパク質1（SPP1）、プログラニュリン（PGrn）、カテプシンD（Ctsd）、カテプシンS（Ctss）、アポリポタンパク質D（Apod）、Sparc、CD52、マクロファージ発現遺伝子1（MPEG1）、C-Cモチーフケモカインリガンド2（CCL2）、シスタチンF（CST7）、Racファミリー低分子量GTPアーゼ2（RAC2）、セルピンファミリーAメンバー3（SERPINA3）、アノズミン1（ANOS1）、カリクレイン関連ペプチダーゼ6（KLK6）、α2-マクログロブリン（A2M）、GM14295、ガレクチン3結合タンパク質（LGALS3BP）、アポリポタンパク質C1（APOC1）、及びそれらのオルソログからなる群から選択される、前記剤。
（２）前記神経細胞が、脳神経細胞である、（１）に記載の剤。
（３）前記神経細胞賦活が、軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起の伸長促進である、（１）又は（２）に記載の剤。
（４）前記神経細胞賦活が、神経細胞変性及び／又は神経細胞死の抑制である、（１）又は（２）に記載の剤。
（５）（１）～（４）のいずれかに記載の剤を含む、細胞移植補助剤。
（６）（１）～（４）のいずれかに記載の剤を含む、神経疾患の治療又は予防剤。
（７）前記疾患が神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（６）に記載の剤。
（８）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（７）に記載の剤。
（９）（６）～（８）のいずれかに記載の剤を含む、神経疾患の治療又は予防用組成物。
（１０）脳神経細胞を賦活化する方法であって、（１）～（４）のいずれかに記載の剤を被験体に投与する工程を含む、方法。
（１１）被験体において神経疾患を治療又は予防する方法であって、（６）～（８）のいずれかに記載の剤、又は（９）に記載の組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
（１２）前記疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（１１）に記載の方法。
（１３）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（１２）に記載の方法。
（１４）神経疾患の治療及び／又は予防における使用のための、（１）～（４）のいずれかに記載の剤。
（１５）前記疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（１４）に記載の剤。
（１６）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（１５）に記載の剤。
（１７）神経疾患の治療及び／又は予防するための医薬の製造における、（１）～（４）のいずれかに記載の剤の使用。
（１８）前記疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（１７）に記載の使用。
（１９）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（１８）に記載の使用。

（１'）下記タンパク質または前記タンパク質をコードする核酸を含む、細胞移植補助剤であって、前記タンパク質が、リゾチーム（LYZ）、分泌型リンタンパク質1（SPP1）、プログラニュリン（PGrn）、カテプシンD（Ctsd）、カテプシンS（Ctss）、アポリポタンパク質D（Apod）、Sparc、CD52、マクロファージ発現遺伝子1（MPEG1）、C-Cモチーフケモカインリガンド2（CCL2）、シスタチンF（CST7）、Racファミリー低分子量GTPアーゼ2（RAC2）、セルピンファミリーAメンバー3（SERPINA3）、アノズミン1（ANOS1）、カリクレイン関連ペプチダーゼ6（KLK6）、α2-マクログロブリン（A2M）、GM14295、ガレクチン3結合タンパク質（LGALS3BP）、アポリポタンパク質C1（APOC1）、及びそれらのオルソログからなる群から選択される、細胞移植補助剤。
（２'）前記細胞が神経幹細胞、神経前駆細胞、及び神経細胞からなる群から選ばれる１以上の細胞である、（１'）に記載の細胞移植補助剤。
（３'）前記神経幹細胞、神経前駆細胞、及び神経細胞が、多能性幹細胞から分化誘導された細胞である、（２'）に記載の細胞移植補助剤。
（４'）細胞移植と同時、又は移植後にレシピエントに投与される、（１'）～（３'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤。
（５'）移植細胞と混合して用いられる、（１'）～（４'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤。
（６'）神経疾患の治療に用いられる、（１'）～（５'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤。
（７'）前記疾患が神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（６'）に記載の細胞移植補助剤。
（８'）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（７'）に記載の細胞移植補助剤。
（９'）（１'）～（８'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤、及び移植用の細胞を含む、神経疾患の治療用組成物。
（１０'）レシピエントに細胞を移植する方法であって、（１'）に記載の細胞移植補助剤をレシピエントに投与する細胞移植補助剤投与工程、及び細胞をレシピエントに移植する細胞移植工程を含む、方法。
（１１'）前記細胞が神経幹細胞、神経前駆細胞、及び神経細胞からなる群から選ばれる１以上の細胞である、（１０'）に記載の方法。
（１２'）前記神経幹細胞、神経前駆細胞、及び神経細胞が、多能性幹細胞から分化誘導された細胞である、（１１'）に記載の方法。
（１３'）細胞移植補助剤投与工程を細胞移植工程と同時、又は細胞移植工程の後に行う、（１０'）～（１２'）のいずれかに記載の方法。
（１４'）細胞移植補助剤を移植細胞と混合して投与する、（１０'）～（１３'）のいずれかに記載の方法。
（１５'）レシピエントにおける神経疾患を治療する方法であって、（１'）に記載の細胞移植補助剤をレシピエントに投与する細胞移植補助剤投与工程、及び細胞をレシピエントに移植する細胞移植工程を含む、方法。
（１６'）前記神経疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（１５'）に記載の方法。
（１７'）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（１６'）に記載の方法。
（１８'）神経疾患の治療における使用のための、（１'）～（５'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤。
（１９'）前記神経疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（１８'）に記載の細胞移植補助剤。
（２０'）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（１９'）に記載の細胞移植補助剤。
（２１'）神経疾患を治療するための医薬の製造における、（１'）～（５'）のいずれかに記載の細胞移植補助剤の使用。
（２２'）前記神経疾患が、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、（２１'）に記載の使用。
（２３'）前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、（２２'）に記載の使用。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2020-209492号及び日本国特許出願番号2020-209568号の開示内容を包含する。

　本発明の神経細胞賦活剤によれば、脳神経細胞を賦活化することができる。また、本発明の細胞移植補助剤によれば、移植した細胞に由来する神経細胞の数、密度、および成熟度のうち少なくとも１以上について促進効果が得られる。これにより、移植効果の向上が期待される。

胎生13.5日目のマウスの大脳皮質組織から作製された細胞凝集体を示す図である。皮質傷害モデルに細胞凝集体を移植した結果を示す図である。図2Aは皮質傷害直後に細胞凝集体を移植した結果を示す。図2Bは皮質傷害7日後に細胞凝集体を移植した結果を示す。ドナー由来の細胞のみが抗GFP抗体を用いて染色されている。皮質傷害直後（d0）又は皮質傷害7日後（d7）に細胞移植した後、移植細胞の神経軸索に由来する蛍光強度を線条体内において定量した結果を示す図である。皮質傷害7日後に細胞移植を受けたマウスにおいて、第1頚神経からFast blueによる逆行性標識を行った結果を示す図である。図4Aと図4Bは、上のパネルにおいて枠で示す領域の拡大図を示す。矢頭は、移植片におけるGFP陽性かつFast blue陽性の細胞体（すなわち、移植片に由来し、かつ脊髄に軸索を投射している神経細胞の細胞体）を示す。皮質傷害7日後にて遺伝子発現が増加又は減少した遺伝子として抽出された各因子について、皮質傷害直後（0日目）と比較した、皮質傷害7日後における遺伝子発現の倍率変化を示す図である。各因子の組換えタンパク質による、マウス大脳皮質由来の神経細胞に対する神経軸索伸長促進効果を示す図である。図6Aは、各因子の組換えタンパク質の存在下で培養した神経細胞を示す。矢頭は、細胞体の位置を示す。図6Bは、TAU陽性神経軸索長の定量結果を示す。エラーバーは標準偏差を示し、＊はP＜0.05、＊＊はP＜0.01、＊＊＊はP＜0.001（一元配置分散分析（One-way ANOVA））を示す。ブレビバチルス発現システムを用いて発現し、Hisタグ精製及びタンパク質濃縮を行ったマウスLYZ2（mLYZ2）組換えタンパク質を、SDS-PAGE及びCBB染色により検出した結果を示す図である。ブレビバチルス発現システムを用いて発現し、Hisタグ精製及びタンパク質濃縮を行ったmLYZ2組換えタンパク質を、ウェスタンブロッティングにより検出した結果を示す図である。ブレビバチルス発現システムを用いて発現し、Hisタグ精製及びタンパク質濃縮を行ったmLYZ2組換えタンパク質による神経軸索伸長促進作用を示す図である。エラーバーは標準偏差を示し、＊＊＊はP＜0.001（ステューデントｔ検定）を示す。 TAU陽性神経軸索の伸長が、市販のmLYZ2組換えタンパク質によって促進された結果を示す図である。図10Aは、各濃度のmLYZ2組換えタンパク質の存在下で培養した神経細胞を示す。図10Bは、TAU陽性神経軸索長の定量結果を示す。 TAU陽性神経軸索の神経軸索側枝の数が、市販のmLYZ2組換えタンパク質によって増加した結果を示す図である。ヒトES細胞由来大脳皮質オルガノイドに由来する神経細胞のTAU陽性神経軸索の伸長が、ヒトLYZ（hLYZ）によって促進された結果を示す図である。図12Aは、各濃度のhLYZ存在下で培養した神経細胞を示す。図12Bは、TAU陽性神経軸索長の定量結果を示す。ヒトES細胞由来ドパミン神経細胞のTAU陽性神経軸索の伸長が、hLYZによって促進された結果を示す図である。図13Aは、各濃度のhLYZ存在下で培養した神経細胞を示す。図13Bは、TAU陽性神経軸索長の定量結果を示す。マウス大脳皮質に由来するTAU陽性神経細胞の細胞総数が、市販のmLYZ2組換えタンパク質によって増加した結果を示す図である。図14Aは、mLYZ2の非存在下又は存在下で培養した神経細胞を示す。図14Bは、TAU陽性神経軸索長の定量結果を示す。ヒトiPS細胞由来大脳皮質オルガノイドに由来するTAU陽性神経細胞の細胞総数が、市販のhLYZ組換えタンパク質によって増加した結果を示す図である。胎仔マウス中脳腹側組織を移植したマウスにおいて、1か月後に移植片中のTH陽性細胞（ドパミン陽性細胞）の密度を解析した図である。細胞移植と同時にmLYZ2組換えタンパク質を投与した群（Lyz）と投与しなかった群（Ctrl）の結果を示す。ヒトES細胞由来ドパミン神経前駆細胞を線条体に移植したSCIDマウスにおいて、3か月後に移植片のサイズを解析した図である。細胞移植前の培養時にヒトLyz組換えタンパク質を培養培地に添加した群（Lyz）と添加しなかった群（Ctrl）の結果を示す。図17Aは、Ctrl群とLyz群の移植片を矢印で示す。図17Bは、移植片のサイズを示す。各群において横方向の線は平均値を示す。＊はP＜0.05（ステューデントｔ検定）を示す。ヒトiPS細胞由来大脳皮質オルガノイドから解離して得られた細胞をヒトLYZ組換えタンパク質（500ng/mL）の存在下で培養した場合の軸索長の経時的変化を示す図である。図18Aは、LYZ非存在下（Ctrl）及びLYZ存在下（Lyz 500 ng/mL）での軸索の様子を示す。写真左下のスケールバーは200μmを示す。図18Bは、培養0日目～7日目（0～168 hr）における軸索長の経時的変化を示す。縦軸に示す軸索長は、取得した画像の単位面積（mm²）に含まれる神経軸索長の合計値（mm）を示す。各因子の存在下での培養7日目における軸索長の定量結果を示す。図中、CathDはカテプシンD（Ctsd）、CathSはカテプシンS（Ctss）を示す。図中に示す各因子の量は、培地1 mLにおける量を示す。エラーバーは標準偏差を示し、＊はP＜0.05（One-way ANOVA with Holm-Sidak's post hoc analysis）を示す。培養7日目における細胞生存率をAlamar Blueにより評価した結果を示す。図中、CathDはカテプシンD（Ctsd）、CathSはカテプシンS（Ctss）を示す。図中に示す各因子の量は、培地1 mLにおける量を示す。図中、「Ctrl mean」は候補因子を添加しなかった細胞を示し、「1％ Triton mean」は界面活性剤（1％Triton）処理によって人為的に傷害を与えた細胞を示す。エラーバーは標準偏差を示す。細胞毒（H₂O₂）条件下での細胞生存率をAlamar Blueにより評価した結果を示す。図中、CathDはカテプシンD（Ctsd）、CathSはカテプシンS（Ctss）を示す。図中に示す各因子の量は、培地1 mLにおける量を示す。エラーバーは標準偏差を示し、＊はP＜0.05（One-way ANOVA with Holm-Sidak's post hoc analysis）を示す。

１．神経細胞賦活剤
１－１．概要
　本発明の第1の態様は、神経細胞賦活剤である。本態様の神経細胞賦活剤は、LYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparc等のタンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそれらのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は当該タンパク質をコードする核酸を含む。本発明の神経細胞賦活剤によれば、脳神経細胞に対する軸索伸長促進効果や細胞死抑制効果等が得られる。

１－２．定義
　本明細書において「神経細胞賦活（神経細胞賦活化）」とは、神経幹細胞または神経前駆細胞の神経細胞への分化促進、並びに、神経細胞の生存、分化、成熟、他の神経細胞との接続、回路形成、若しくは機能を促進する効果、又は神経細胞への傷害に対して神経細胞の生存、分化、成熟、他の神経細胞との接続、回路形成、若しくは機能を保護する効果を意味する。神経細胞賦活化には、限定しないが、神経突起（例えば、軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起）の伸長及び再生促進、スパインの形成及び伸長、神経細胞の変性の抑制、及び神経細胞に対する細胞死抑制等が例示される。なお、軸索側枝又は樹状突起の伸長促進には、例えば神経突起長の増大や、枝分かれの促進等が含まれる。

　本明細書において「神経細胞」は、神経系譜の細胞である限り特に限定しない。神経系は、中枢神経系（脳若しくは脊髄）及び末梢神経系に分けられるが、特に断りのない場合、神経細胞は中枢神経系又は末梢神経系を問わない。なお、神経系譜の細胞には、活動電位を発生しないが神経系に接続して入力する細胞（例えば、視細胞）も含まれる。また、神経細胞に分化し得る能力を有する限り細胞の分化段階は限定せず、また分化した神経細胞の成熟段階も限定しない。例えば、細胞は、神経幹細胞、神経前駆細胞、未成熟な神経細胞、又は成熟した神経細胞であってもよい。さらに、神経細胞の細胞種は限定せず、例えばドパミン作動性神経細胞、ノルアドレナリン作動性神経細胞、セロトニン作動性神経細胞、グルタミン酸作動性神経細胞、GABA作動性神経細胞、コリン作動性神経細胞、又はヒスタミン作動性神経細胞等であってもよい。また、特に断りのない場合、神経細胞は、生体（例えば脳）に由来する神経細胞、又は人為的に作製された神経細胞を問わない。生体に由来する神経細胞として、例えば、生体の任意の領域（例えば脳）において存在又は機能する神経細胞、生体（例えば脳）の任意の領域から単離された神経細胞等が挙げられる。人為的に作製された神経細胞には、ES細胞やiPS細胞等の（多能性）幹細胞から分化誘導して得られる神経細胞等が挙げられる。また、本態様においては、神経細胞は、特に断りのない場合、生体内に存在している（例えば、脳に内在している、若しくは脳内に移植されている）か、又は生体外で培養されているかは問わない。

　本明細書において「脳神経細胞」とは、上記の神経細胞のうち、脳の任意の領域において存在又は機能し得る神経細胞である。脳神経細胞が脳において存在又は機能し得る領域は限定せず、例えば、大脳(大脳皮質、大脳白質、大脳基底核)、小脳(小脳皮質、小脳核)、及び／又は脳幹(間脳、中脳、橋、延髄)であってもよい。脳神経細胞として、例えば、大脳皮質の神経細胞、小脳皮質の神経細胞、神経核の神経細胞等が挙げられ、前記神経核には大脳基底核のような複数の神経核を包含する神経核も含まれる。本明細書において、好適な神経細胞は脳神経細胞であり、より好ましくは大脳皮質の神経細胞、及び／又は中脳の神経細胞である。大脳皮質の神経細胞としては、一次運動野の神経細胞が好ましく、特に好ましくは一次運動野第V層の上位運動神経細胞である。中脳の神経細胞としては、腹側被蓋野の神経細胞が好ましく、特に好ましくは黒質に存在するドパミン作動性神経細胞である。

　本明細書において「複数個」とは、2以上の整数、例えば、2～10個、2～7個、2～5個、2～4個又は2～3個の整数をいう。

　本明細書において「変異型タンパク質」とは、野生型タンパク質のアミノ酸配列に由来し、かつ野生型タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する任意のタンパク質をいう。変異型タンパク質の例として、スプライシングバリアント、SNPs等に基づく突然変異体、タンパク質の活性断片等が挙げられる。変異型タンパク質には、野生型タンパク質のアミノ酸配列に基づいて作製された、野生型タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する人工タンパク質も含まれ得る。

　本明細書において「活性断片」とは、タンパク質の一部領域を含み、かつその断片が全長タンパク質の活性の50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、98％以上、又は同等以上を保持するポリペプチド断片をいう。活性断片のアミノ酸長は、タンパク質の活性を保持する限り特に制限しない。

　本明細書において「アミノ酸同一性」とは、比較する2つのポリペプチドのアミノ酸配列において、アミノ酸残基の一致数が最大となるように、必要に応じて一方又は双方に適宜ギャップを挿入して整列化（アラインメント）したときに、全アミノ酸残基数における一致アミノ酸残基数の割合（％）をいう。

　本明細書において「(アミノ酸の）置換」とは、天然のタンパク質を構成する20種類のアミノ酸間において、電荷、側鎖、極性、芳香族性等の性質の類似する保存的アミノ酸群内での置換をいう。例えば、低極性側鎖を有する無電荷極性アミノ酸群（Gly, Asn, Gln, Ser, Thr, Cys, Tyr）、分枝鎖アミノ酸群（Leu, Val, Ile）、中性アミノ酸群（Gly, Ile, Val, Leu, Ala, Met, Pro）、親水性側鎖を有する中性アミノ酸群（Asn, Gln, Thr, Ser, Tyr，Cys）、酸性アミノ酸群（Asp, Glu）、塩基性アミノ酸群（Arg, Lys, His）、芳香族アミノ酸群（Phe, Tyr, Trp）内での置換が挙げられる。これらの群内でのアミノ酸置換であれば、ポリペプチドの性質に変化を生じにくいことが知られているため好ましい。

１－３．構成
１－３－１．構成成分
　本発明の神経細胞賦活剤は、以下の表１及び表１'に記載するLYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、表３、５、７、及び９に記載する各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質（本明細書において「神経細胞賦活因子」と表記する；後述の第２態様で説明するように神経細胞賦活因子は「移植補助因子」ということもできる）、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸（本明細書において「神経細胞賦活因子をコードする核酸」と表記する）を必須の有効成分として包含する。例えば、本発明の神経細胞賦活剤は、LYZ、CST7、CCL12、CD52、MPEG1、RAC2、SPP1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。ある実施形態では、本発明の神経細胞賦活剤は、上述のLYZ、SPP1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。好ましい実施形態では、本発明の神経細胞賦活剤は、上述のLYZ、SPP1、PGrn及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。より好ましい実施形態では、本発明の神経細胞賦活剤は、上述のLYZ、SPP1、及びPGrnの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。さらにより好ましい実施形態では、本発明の神経細胞賦活剤は、上述のLYZ及びPGrnのいずれかのタンパク質、その活性断片、並びにそのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。特に好ましい実施形態では、本発明の神経細胞賦活剤は、上述のLYZ、その活性断片、並びにそのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記LYZ、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。それぞれの有効成分について以下で具体的に説明をする。

（LYZ及びLYZオルソログ）
　リゾチーム（lysozyme; LYZ）は、配列番号2で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型LYZタンパク質；配列番号2で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型LYZタンパク質と同等以上の活性を有する変異型LYZタンパク質；又は配列番号2で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型LYZタンパク質と同等以上の活性を有する変異型LYZタンパク質であってもよい。

　LYZオルソログは、配列番号2で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号1で示すアミノ酸配列からなるマウスLYZ2タンパク質）であってもよい。

（CD52及びCD52オルソログ）
　CD52は、配列番号4で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型CD52タンパク質；配列番号4で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CD52タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CD52タンパク質；又は配列番号4で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CD52タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CD52タンパク質であってもよい。

　CD52オルソログは、配列番号4で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有するヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号3で示すアミノ酸配列からなるマウスCD52タンパク質）であってもよい。

（MPEG1及びMPEG1オルソログ）
　マクロファージ発現遺伝子1（Macrophage expressed gene 1; MPEG1）は、配列番号7で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型MPEG1タンパク質；配列番号7で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型MPEG1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型MPEG1タンパク質；又は配列番号7で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型MPEG1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型MPEG1タンパク質であってもよい。

　MPEG1オルソログは、配列番号7で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号5若しくは6で示すアミノ酸配列からなるマウスMPEG1タンパク質）であってもよい。

（CCL2及びCCL2オルソログ）
　C-Cモチーフケモカインリガンド2（C-C motif chemokine ligand 2; CCL2）は、配列番号9で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型CCL2タンパク質；配列番号9で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CCL2タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CCL2タンパク質；又は配列番号9で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CCL2タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CCL2タンパク質であってもよい。

　CCL2オルソログは、配列番号9で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号8で示すアミノ酸配列からなるマウスCCL12タンパク質）であってもよい。

（CST7及びCST7オルソログ）
　シスタチンF（Cystatin F; CST7）は、配列番号11で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型CST7タンパク質；配列番号11で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CST7タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CST7タンパク質；又は配列番号11で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型CST7タンパク質と同等以上の活性を有する変異型CST7タンパク質であってもよい。

　CST7オルソログは、配列番号11で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号10で示すアミノ酸配列からなるマウスCST7タンパク質）であってもよい。

（RAC2及びRAC2オルソログ）
　Racファミリー低分子量GTPアーゼ2（Rac family small GTPase 2; RAC2）は、配列番号13で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型RAC2タンパク質；配列番号13で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型RAC2タンパク質と同等以上の活性を有する変異型RAC2タンパク質；又は配列番号13で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型RAC2タンパク質と同等以上の活性を有する変異型RAC2タンパク質であってもよい。

　RAC2オルソログは、配列番号13で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号12で示すアミノ酸配列からなるマウスRAC2タンパク質）であってもよい。

（SERPINA3及びSERPINA3オルソログ）
　セルピンファミリーAメンバー3（Serpin family A member 3; SERPINA3）は、配列番号15で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型SERPINA3タンパク質；配列番号15で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型SERPINA3タンパク質と同等以上の活性を有する変異型SERPINA3タンパク質；又は配列番号15で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型SERPINA3タンパク質と同等以上の活性を有する変異型SERPINA3タンパク質であってもよい。

　SERPINA3オルソログは、配列番号15で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号14で示すアミノ酸配列からなるマウスSERPINA3Nタンパク質）であってもよい。

（ANOS1及びANOS1オルソログ）
　アノズミン1（anosmin 1; ANOS1）は、配列番号17で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型ANOS1タンパク質；配列番号17で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型ANOS1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型ANOS1タンパク質；又は配列番号17で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型ANOS1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型ANOS1タンパク質であってもよい。

　ANOS1オルソログは、配列番号17で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号16で示すアミノ酸配列からなるマウスGM11428タンパク質）であってもよい。

（KLK6及びKLK6オルソログ）
　カリクレイン関連ペプチダーゼ6（Kallikrein related-peptidase 6; KLK6）は、配列番号19～23のいずれかで示すアミノ酸配列からなるヒト野生型KLK6タンパク質；配列番号19～23のいずれかで示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型KLK6タンパク質と同等以上の活性を有する変異型KLK6タンパク質；又は配列番号19～23のいずれかで示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型KLK6タンパク質と同等以上の活性を有する変異型KLK6タンパク質であってもよい。

　KLK6オルソログは、配列番号19～23のいずれかで示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号18で示すアミノ酸配列からなるマウスKLK6タンパク質）であってもよい。

（A2M及びA2Mオルソログ）
　α2-マクログロブリン（alpha-2-macroglobulin; A2M）は、配列番号25～28のいずれかで示すアミノ酸配列からなるヒト野生型A2Mタンパク質；配列番号25～28のいずれかで示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型A2Mタンパク質と同等以上の活性を有する変異型A2Mタンパク質；又は配列番号25～28のいずれかで示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型A2Mタンパク質と同等以上の活性を有する変異型A2Mタンパク質であってもよい。

　A2Mオルソログは、配列番号25～28のいずれかで示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号24で示すアミノ酸配列からなるマウスA2Mタンパク質）であってもよい。

（GM14295及びGM14295オルソログ）
　GM14295（Predicted gene 1429）は、配列番号29で示すアミノ酸配列からなるマウス野生型GM14295タンパク質；配列番号29で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、マウス野生型GM14295タンパク質と同等以上の活性を有する変異型GM14295タンパク質；又は配列番号29で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、マウス野生型GM14295タンパク質と同等以上の活性を有する変異型GM14295タンパク質であってもよい。

　GM14295オルソログは、配列番号29で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、マウス以外の種のオルソログであってもよい。なお、ヒトではGM14295オルソログが知られていない。

（SPP1及びSPP1オルソログ）
　分泌型リンタンパク質1（secreted phosphoprotein 1; SPP1;オステオポンチンとも呼ばれる）は、配列番号35若しくは36で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型SPP1タンパク質；配列番号35若しくは36で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型SPP1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型SPP1タンパク質；又は配列番号35若しくは36で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型SPP1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型SPP1タンパク質であってもよい。

　SPP1オルソログは、配列番号35若しくは36で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号30～34のいずれかで示すアミノ酸配列からなるマウスSPP1タンパク質）であってもよい。

（LGALS3BP及びLGALS3BPオルソログ）
　ガレクチン3結合タンパク質（Galectin 3 binding protein; LGALS3BP）は、配列番号38で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型LGALS3BPタンパク質；配列番号38で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型LGALS3BPタンパク質と同等以上の活性を有する変異型LGALS3BPタンパク質；又は配列番号38で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型LGALS3BPタンパク質と同等以上の活性を有する変異型LGALS3BPタンパク質であってもよい。

　LGALS3BPオルソログは、配列番号38で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号37で示すアミノ酸配列からなるマウスLGALS3BPタンパク質）であってもよい。

（APOC1及びAPOC1オルソログ）
　アポリポタンパク質C1（Apolipoprotein C1; APOC1）は、配列番号41～44のいずれかで示すアミノ酸配列からなるヒト野生型APOC1タンパク質；配列番号41～44のいずれかで示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型APOC1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型APOC1タンパク質；又は配列番号41～44のいずれかで示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型APOC1タンパク質と同等以上の活性を有する変異型APOC1タンパク質であってもよい。

　APOC1オルソログは、配列番号41～44のいずれかで示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号39若しくは40で示すアミノ酸配列からなるマウスAPOC1タンパク質）であってもよい。

（PGrn及びPGrnオルソログ）
　プログラニュリン（Progranulin; PGrn又はGrn）は、配列番号90で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型PGrnタンパク質；配列番号90で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型PGrnタンパク質と同等以上の活性を有する変異型PGrnタンパク質；又は配列番号90で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型PGrnタンパク質と同等以上の活性を有する変異型PGrnタンパク質であってもよい。

　PGrnオルソログは、配列番号90で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号89で示すアミノ酸配列からなるマウスPGrnタンパク質）であってもよい。

（Ctsd及びCtsdオルソログ）
　カテプシンD（Cathepsin D; Ctsd）は、配列番号92で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型Ctsdタンパク質；配列番号92で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Ctsdタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Ctsdタンパク質；又は配列番号92で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Ctsdタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Ctsdタンパク質であってもよい。

　Ctsdオルソログは、配列番号92で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号91で示すアミノ酸配列からなるマウスCtsdタンパク質）であってもよい。

（Ctss及びCtssオルソログ）
　カテプシンS（Cathepsin S; Ctss）は、配列番号95又は96で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型Ctssタンパク質；配列番号95又は96で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Ctssタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Ctssタンパク質；又は配列番号95又は96で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Ctssタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Ctssタンパク質であってもよい。

　Ctssオルソログは、配列番号95又は96で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号93又は94で示すアミノ酸配列からなるマウスCtssタンパク質）であってもよい。

（Apod及びApodオルソログ）
　アポリポタンパク質D（Apolipoprotein D; Apod）は、配列番号100で示すアミノ酸配列からなるヒト野生型Apodタンパク質；配列番号100で示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Apodタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Apodタンパク質；又は配列番号100で示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Apodタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Apodタンパク質であってもよい。

　Apodオルソログは、配列番号100で示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号97～99のいずれかで示すアミノ酸配列からなるマウスApodタンパク質）であってもよい。

（Sparc及びSparcオルソログ）
　Sparcタンパク質は、配列番号103～105のいずれかで示すアミノ酸配列からなるヒト野生型Sparcタンパク質；配列番号103～105のいずれかで示すアミノ酸配列において１若しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Sparcタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Sparcタンパク質；又は配列番号103～105のいずれかで示すアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、より好ましくは96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ヒト野生型Sparcタンパク質と同等以上の活性を有する変異型Sparcタンパク質であってもよい。

　Sparcオルソログは、配列番号103～105のいずれかで示すアミノ酸配列と60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上、若しくは99％以上で、100％未満の同一性を有するアミノ酸配列を有する、ヒト以外の種のオルソログ（例えば配列番号101又は102で示すアミノ酸配列からなるマウスSparcタンパク質）であってもよい。

　神経細胞賦活因子、それに対応するNCBIアクセッション番号、及び配列番号を以下の表１及び表１'に例示する。後述の第２態様で説明するように、表１及び表１'に例示する神経細胞賦活因子は、移植補助因子ということもできる。

　上述した神経細胞賦活因子は、例えばリポフェクション、細胞膜透過性ペプチド（例えば、HIV由来のTAT、ポリアルギニン、BP100、Penetratin、pVEC、pAntp、VP22、Transportan、R7、MPG、及びPep-1）との融合、マイクロインジェクションなどの手法によって細胞内に導入してもよい。

（前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸）
　「前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸」（本明細書において「神経細胞賦活因子をコードする核酸」とも表記する）は、上記いずれかの神経細胞賦活因子をコードする核酸をいう。神経細胞賦活因子をコードする核酸は、LYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、若しくはSparc、そのいずれかに由来する上記変異型タンパク質、そのいずれかの活性断片、又はそのいずれかの上記オルソログをコードする核酸であり、DNA又はRNAを問わない。神経細胞賦活因子をコードするDNAは、神経細胞賦活因子をコードする遺伝子、又はその転写産物を鋳型として作製されたcDNAであってもよい。神経細胞賦活因子をコードするRNAは、mRNA前駆体（pre-mRNA）及び成熟mRNAのいずれも包含するが、実質的には成熟mRNAを意味する。

　神経細胞賦活因子をコードするDNA（神経細胞賦活因子をコードするcDNA）の具体例として、ヒト野生型LYZタンパク質をコードする、配列番号46で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型LYZ2タンパク質をコードする、配列番号45で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CD52タンパク質をコードする、配列番号48で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CD52タンパク質をコードする、配列番号47で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型MPEG1タンパク質をコードする、配列番号51で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型MPEG1タンパク質をコードする、配列番号49若しくは50で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CCL2タンパク質をコードする、配列番号53で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CCL12タンパク質をコードする、配列番号52で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CST7タンパク質をコードする、配列番号55で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CST7タンパク質をコードする、配列番号54で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型RAC2タンパク質をコードする、配列番号57で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型RAC2タンパク質をコードする、配列番号56で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型SERPINA3タンパク質をコードする、配列番号59で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型SERPINA3Nタンパク質をコードする、配列番号58で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型ANOS1タンパク質をコードする、配列番号61で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型GM11428タンパク質をコードする、配列番号60で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型KLK6タンパク質をコードする、配列番号63～67のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型KLK6タンパク質をコードする、配列番号62で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型A2Mタンパク質をコードする、配列番号69～72のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型A2Mタンパク質をコードする、配列番号68で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型GM14295タンパク質をコードする、配列番号73で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型SPP1タンパク質をコードする、配列番号79若しくは80で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型SPP1タンパク質をコードする、配列番号74～78のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型LGALS3BPタンパク質をコードする、配列番号82で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型LGALS3BPタンパク質をコードする、配列番号81で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型APOC1タンパク質をコードする、配列番号85～88のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型APOC1タンパク質をコードする、配列番号83若しくは84で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型PGrnタンパク質をコードする、配列番号107で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型PGrnタンパク質をコードする、配列番号106で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Ctsdタンパク質をコードする、配列番号109で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Ctsdタンパク質をコードする、配列番号108で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Ctssタンパク質をコードする、配列番号112若しくは113で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Ctssタンパク質をコードする、配列番号110若しくは111で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Apodタンパク質をコードする、配列番号117で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Apodタンパク質をコードする、配列番号114～116のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Sparcタンパク質をコードする、配列番号120～122のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；及びマウス野生型Sparcタンパク質をコードする、配列番号118若しくは119のいずれかで示す塩基配列からなるDNAが挙げられる。

　また、神経細胞賦活因子をコードするmRNAには、上記いずれかの塩基配列において、t（チミン）をu（ウラシル）に置換した塩基配列をコーディング領域（翻訳領域）として含むmRNAが挙げられる。神経細胞賦活因子をコードするmRNAは、前記コーディング領域に加えて、5'末端のキャップ構造、3'末端のポリA鎖、開始コドン上流の5’非翻訳領域（5' UTR）、及び／又は終止コドン下流の3’非翻訳領域（3' UTR）等を含んでもよい。5' UTR及び／又は3' UTR等には、mRNAからの翻訳量を調節するための配列が含まれていてもよく、例えば3' UTRには、mRNAからの翻訳量を増大させる配列（例えばウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（WPRE）等）が含まれていてもよい。
　神経細胞賦活因子をコードする核酸、それに対応するNCBIアクセッション番号、及び配列番号を以下の表２及び表２'に例示する。後述の第２態様で説明するように、表２及び表２'に例示する神経細胞賦活因子をコードする核酸は、移植補助因子をコードする核酸ということもできる。

　本発明の神経細胞賦活剤において、神経細胞賦活因子をコードする核酸は、DNAであってもRNAであってもよい。核酸がDNAの形態である場合、遺伝子発現ベクターに含まれていてもよい。核酸がDNAの形態である場合、エレクトロポレーション、リポフェクション、リポソーム、マイクロインジェクションなどの手法によって細胞内に導入してもよい。
　「遺伝子発現ベクター」とは、遺伝子や遺伝子断片を発現可能な状態で含み、その遺伝子等の発現を制御できる発現単位をいう。

　本態様において「発現可能な状態」とは、プロモーターの制御下である下流域に神経細胞賦活因子をコードする遺伝子等を配置していることをいう。したがって、ベクターが導入された細胞（例えば脳神経細胞）において、プロモーターによって神経細胞賦活因子の発現が誘導される。

　本態様において遺伝子発現ベクターは、被験体の体内（例えば脳神経細胞）で複製かつ発現が可能な様々な発現ベクターを利用することができる。例えば、ウイルスベクター、プラスミドベクター、及び人工染色体ベクターが例示される。ウイルスベクターは、細胞（例えば脳の細胞）に感染可能であり、当該細胞において神経細胞賦活因子を発現し得るものであれば、特に限定しない。例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター等が例示される。プラスミドベクターは、哺乳動物細胞で複製可能なベクターであれば、特に限定しない。具体的なプラスミドベクターとしては、例えば、pCMV6-XL3、pEGFP-C1、pGBT-9、pcDNA、pcDM8、pREP4等が例示される。人工染色体ベクターとしては、例えばヒト人工染色体（HAC）、酵母人工染色体（YAC）、細菌人工染色体（BAC、PAC）等が例示される。

　プロモーターは、細胞（例えば脳神経細胞）内で遺伝子発現を誘導する活性を有するプロモーターである。例えば、CMVプロモーター（CMV-IEプロモーター）、LTRプロモーター、SV40プロモーター、RSVプロモーター、HSV-TKプロモーター、EF1αプロモーター、Ubプロモーター、メタロチオネインプロモーター、SRαプロモーター、又はCAGプロモーター等が例示される。

　遺伝子発現ベクターは、プロモーター以外の制御配列及び／又はレポーター遺伝子等を含んでもよい。制御配列としては、発現制御配列（例えばエンハンサー、リボソーム結合配列、ターミネーター、ポリA付加シグナル等）、イントロン配列、ヌクレアーゼ認識配列（例えば、制限酵素認識配列、Cre組換え酵素によって認識されるloxP配列、ZFNやTALEN等の人工ヌクレアーゼの標的となる配列、又はCRISPR/Cas9システムの標的となる配列等）、複製起点配列（SV40複製起点配列等）等が挙げられる。レポーター遺伝子としては、例えば、GFPやRFP等の蛍光タンパク質をコードする遺伝子や、ルシフェラーゼ遺伝子等が例示される。

　遺伝子発現ベクターには、遺伝子をコードする核酸を染色体内に挿入するため、又は染色体に挿入された核酸を必要に応じて切除するために、発現カセット（プロモーター、遺伝子配列、及びターミネーターを含む遺伝子発現単位）の前後に、トランスポゾン配列を有していてもよい。トランスポゾン配列として特に限定されないが、piggyBacが例示される。トランスポゾンを用いて染色体内に発現カセットを導入するためには、トランスポゼースを当該発現カセットを有するベクターと供に同細胞へ導入することが望ましい。本発明において、トランスポゼースを導入するためには、前述のベクターに当該トランスポゼースをコードする核酸を含有させてもよく、また、他のベクターに当該トランスポゼースをコードする核酸を含有させ、同時に細胞へ導入しても良い。さらに、当該トランスポゼースをコードする遺伝子産物を直接導入しても良い。本発明において、好ましいトランスポゼースは、上述のトランスポゾン配列へ対応するトランスポゼースであり、好ましくはpiggyBacトランスポゼースである。
　核酸がRNAの形態である場合、エレクトロポレーション、リポフェクション、マイクロインジェクションなどの手法によって細胞内に導入してもよい。
　一実施形態において、神経細胞賦活剤において有効成分は複数種又は複数形態で含まれていてもよい。

　他の態様において、本発明の神経細胞賦活剤で用いられる神経賦活因子は、以下の表３、５、７、及び９に示されるタンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質であってもよい。また、表３、５、及び７に示されるタンパク質をコードする核酸、及びそれに対応するNCBIアクセッション番号を以下の表４、６、及び８に例示する。後述の第２態様で説明するように、表３、５、７、及び９に例示する神経細胞賦活因子は、移植補助因子ということもできる。また、表４、６、及び８に例示する神経細胞賦活因子をコードする核酸は、移植補助因子をコードする核酸ということもできる。

　神経細胞賦活剤に含まれる有効成分の含有量は、有効成分の種類や形態（タンパク質、DNA又はRNA等の核酸）、神経細胞賦活剤の剤形、並びに後述する溶媒や担体の種類によって異なる。したがって、それぞれの条件を勘案して適宜定めればよい。通常は、単回適用量の神経細胞賦活剤に有効量の有効成分が含有されるように調整されている。しかし、有効成分の薬理効果を得る上で、被験体に神経細胞賦活剤を大量に投与する必要がある場合、被験体の負担軽減のために数回に分割して投与することもできる。この場合、有効成分の量は、総合量で有効量を含んでいればよい。

　本態様において「有効量」とは、有効成分としての機能を発揮する上で必要な量であって、かつそれを適用する被験体に対して有害な副作用をほとんど又は全く付与しない量をいう。この有効量は、被験体の情報、適用経路、及び適用回数等の様々な条件によって変わり得る。本発明の神経細胞賦活剤を医薬として使用する場合、有効成分の含有量は、最終的には、医師又は薬剤師等の判断によって決定される。例えば、本発明の神経細胞賦活剤を0.01 ng～10,000 ng、0.1 ng～1,000 ng、又は1 ng～100 ng、例えば1 ng、10 ng、20 ng、50 ng、若しくは100 ng使用してもよい。

　本明細書において「被験体」とは、本発明の神経細胞賦活剤の適用対象となる生体である。例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、ダチョウ等）、競走馬、愛玩動物（イヌ、ネコ、ウサギ等）、実験動物（マウス、ラット、モルモット、サル、マーモセット等）等が該当する。好ましくはヒト（この場合、特に「被験者」という）であり、例えば神経疾患を有する、又は神経疾患を発症する可能性のあるヒトが該当する。

　本明細書において、「被験体の情報」とは、被験体の特徴や状態に関する様々な情報である。例えば、年齢、体重、性別、全身の健康状態、疾患の有無、疾患の進行度や重症度、薬剤感受性、併用薬物の有無及び治療に対する耐性等が挙げられる。

　一実施形態において、神経細胞賦活は、軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起の伸長促進である。また、別の実施形態において、神経細胞賦活は、神経細胞変性の抑制及び／又は神経細胞死の抑制である。

１－３－２．剤形
　本発明の神経細胞賦活剤の剤形は、特に限定しない。被験体の体内で有効成分を失活させることなく目的の部位にまで送達できる形態であればよい。

　具体的な剤形は、後述する適用方法によって異なる。適用方法は、非経口投与と経口投与に大別することができるので、それぞれの投与法に適した剤形にすればよい。

　投与方法が非経口投与であれば、好ましい剤形は、対象部位への直接投与又は循環系を介した全身投与が可能な液剤である。液剤の例としては、注射剤が挙げられる。注射剤は、前記賦形剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、pH調節剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。また、有効成分の徐放や、局所的な作用を目的として、生体内に埋め込み可能な人工細胞外マトリックスとして製剤化してもよい。

　投与方法が経口投与であれば、好ましい剤形は、固形剤（錠剤、カプセル剤、ドロップ剤、トローチ剤を含む）、顆粒剤、粉剤、散剤、液剤（内用水剤、乳剤、シロップ剤を含む）が挙げられる。固形剤であれば、必要に応じて、当該技術分野で公知の剤皮を施した剤形、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠にすることができる。

　なお、上記各剤形の具体的な形状、大きさについては、いずれもそれぞれの剤形において当該分野で公知の剤形の範囲内にあればよく、特に限定はしない。本発明の神経細胞賦活剤の製造方法については、当該技術分野の常法に従って製剤化すればよい。

１－３－３．適用方法
　本発明の神経細胞賦活剤の適用経路は、経口投与でも、非経口投与でもよい。経口投与法は、一般に全身投与であるが、非経口投与法は、さらに局所投与と全身投与に細分できる。局所投与には、例えば、脳内投与、脳室内投与等が該当し、全身投与には、例えば、静脈内投与（静注）及び動脈内投与が該当する。本発明の神経細胞賦活剤を局所投与する場合には、注射等で脳、例えば、大脳（例えば前頭葉や側頭葉）、脳幹、中脳、若しくは黒質や、網膜若しくは眼球に直接投与するか、又は脳室内に投与してもよい。また、全身投与する場合には、静注すればよい。投与量は、有効成分が奏効する上で有効な量であればよい。有効量は、前述のように被験体情報に応じて適宜選択される。

１－４．効果
　本発明の神経細胞賦活剤によれば、神経細胞（例えば脳神経細胞）を賦活化することで神経細胞の生存、分化、成熟等を促進する効果（例えば、軸索伸長促進効果や、軸索側枝数を増大させる効果）や、神経細胞への傷害に対する保護効果（例えば、神経細胞死の抑制効果や、神経細胞の変性抑制効果）が提供される。それ故、本発明の神経細胞賦活剤は、神経細胞成熟促進剤、神経細胞分化促進剤、神経突起伸長促進剤（軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起の伸長促進剤）、神経細胞保護剤、神経細胞死抑制剤、及び／又は神経細胞変性抑制剤としても使用することができる。

２．細胞移植補助剤
２－１．概要
　本発明の第2の態様は、細胞移植補助剤である。本態様の細胞移植補助剤は、第1態様に記載の神経細胞賦活剤を含む。より具体的には、本態様の細胞移植補助剤は、LYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparc等のタンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそれらのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は当該タンパク質をコードする核酸を含み、細胞移植を補助する目的で用いられる。

２－２．定義
　本明細書において「細胞移植補助」とは、生体内に移植した細胞の生着、所望の細胞への分化、当該分化レベル等の、細胞移植における一般的な評価基準のうち、少なくも１以上を促進して細胞移植を補助することを意味する。より具体的には、移植した細胞に由来する所望細胞の数、密度、または所望細胞としての成熟度の促進による細胞移植の補助であってもよい。

　本明細書において好適に用いることができる「移植細胞（移植用の細胞）」の例としては、神経細胞、及び神経細胞に分化し得る細胞が挙げられる。神経細胞に分化し得る細胞としては、例えば神経幹細胞や神経前駆細胞が挙げられる。移植細胞は、生体由来の細胞（対象となる動物の生体組織から採取された細胞）又は人為的に作製された細胞を問わない。移植細胞は、レシピエントと組織適合型が一致または許容範囲内であることが好ましく、例えば、レシピエントの細胞、組織適合型が許容範囲であるドナーに由来する細胞、組織適合型が許容範囲外であるドナー細胞から遺伝子編集技術を用いて作製された細胞のいずれであってもよい。

　本明細書において「神経幹細胞」とは、神経細胞やグリア細胞に分化しうる多分化能を有し、かつ自己複製能を有する幹細胞をいう。また、「神経前駆細胞」とは、神経細胞にのみ分化する能力を有する未分化細胞をいう。本明細書において、神経幹細胞又は神経前駆細胞の種類は特に限定されず、目的の神経細胞に分化できる限り、いずれの神経幹細胞又は神経前駆細胞も使用することができる。

　本明細書において「多能性幹細胞」とは、生体に存在する様々な細胞に分化可能である多能性を有し、かつ増殖能をも併せもつ幹細胞をいう。限定しないが、例えば胚性幹（ES）細胞、核移植により得られるクローン胚由来の胚性幹（ntES）細胞、精子幹細胞（GS細胞）、胚性生殖細胞（EG細胞）、人工多能性幹（iPS）細胞、培養線維芽細胞や骨髄幹細胞由来の多能性細胞（Muse細胞）等が挙げられる。

　本明細書において、「人為的に作製された細胞」とは、例えば、多能性幹細胞から分化誘導して得られる細胞や、ダイレクトリプログラミング法によって多能性幹細胞を経由せずに体細胞から直接誘導された細胞である。多能性幹細胞から分化誘導して得られる細胞は、例えばヒト多能性幹細胞から作製されたオルガノイドの細胞であってもよい。

　本明細書において「神経細胞の成熟」とは、限定しないが、例えば神経突起（例えば、軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起）の伸長、スパインの形成及び伸長、並びに他の神経細胞または標的細胞とのシナプス形成や回路形成が挙げられる。軸索側枝又は樹状突起の伸長促進には、例えば神経突起長の増大や、枝分かれの促進等が含まれる。

２－３．構成
２－３－１．構成成分
　本発明の細胞移植補助剤は、第1態様に記載の神経細胞賦活剤を含む。より具体的には、本発明の細胞移植補助剤は、上記表１及び表１'に記載するLYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、上記表３、５、７、及び９に記載する各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質（本明細書において「移植補助因子」と表記する；上述の第１態様で説明したように移植補助因子は神経細胞賦活因子ということもでき、本明細書においてこれらの用語は互換的に用いることができる）、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸（本明細書において「移植補助因子をコードする核酸」と表記する；例えば、上記表２、表２'、表４、表６、及び表８に記載する核酸が挙げられる。上述の第１態様で説明したように移植補助因子をコードする核酸は神経細胞賦活因子をコードする核酸ということもでき、本明細書においてこれらの用語は互換的に用いることができる）を必須の有効成分として包含する。それぞれの有効成分については、第1態様において「神経細胞賦活因子」又は「神経細胞賦活剤をコードする核酸」として記載した内容に準じる。例えば、本発明の細胞移植補助剤は、LYZ、CST7、CCL12、CD52、MPEG1、RAC2、SPP1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。ある実施形態では、本発明の細胞移植補助剤は、上述のLYZ、SPP1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。好ましい実施形態では、本発明の細胞移植補助剤は、上述のLYZ、SPP1、PGrn及びSparcの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。より好ましい実施形態では、本発明の細胞移植補助剤は、上述のLYZ、SPP1、及びPGrnの各タンパク質、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。さらにより好ましい実施形態では、本発明の細胞移植補助剤は、上述のLYZ及びPGrnのいずれかのタンパク質、その活性断片、並びにそのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。特に好ましい実施形態では、本発明の細胞移植補助剤は、上述のLYZ、その活性断片、並びにそのオルソログからなる群から選択されるタンパク質、又は前記LYZ、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸を必須の有効成分として包含する。それぞれの有効成分については、第1態様の記載に準じるため、ここでのさらなる説明は省略する。

　移植補助因子、それに対応するNCBIアクセッション番号、及び配列番号の例は、上記表１及び表１'に例示される神経細胞賦活因子に準じるものとし、ここでの説明は省略する。

　移植補助因子は、例えばリポフェクション、細胞膜透過性ペプチド（例えば、HIV由来のTAT、ポリアルギニン、BP100、Penetratin、pVEC、pAntp、VP22、Transportan、R7、MPG、及びPep-1）との融合、マイクロインジェクションなどの手法によって移植細胞又は移植細胞から分化した細胞内に導入してもよい。

　本態様において「前記タンパク質、前記活性断片、若しくは前記オルソログをコードする核酸」（本明細書において「移植補助因子をコードする核酸」とも表記する）は、上記いずれかの移植補助因子をコードする核酸をいう。移植補助因子をコードする核酸は、LYZ、CD52、MPEG1、CCL2、CST7、RAC2、SERPINA3、ANOS1、KLK6、A2M、GM14295、SPP1、LGALS3BP、APOC1、PGrn、Ctsd、Ctss、Apod、若しくはSparc、そのいずれかに由来する上記変異型タンパク質、そのいずれかの活性断片、又はそのいずれかの上記オルソログをコードする核酸であり、DNA又はRNAを問わない。移植補助因子をコードするDNAは、移植補助因子をコードする遺伝子、又はその転写産物を鋳型として作製されたcDNAであってもよい。移植補助因子をコードするRNAは、mRNA前駆体（pre-mRNA）及び成熟mRNAのいずれも包含するが、実質的には成熟mRNAを意味する。

　移植補助因子をコードするDNA（移植補助因子をコードするcDNA）の具体例として、ヒト野生型LYZタンパク質をコードする、配列番号46で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型LYZ2タンパク質をコードする、配列番号45で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CD52タンパク質をコードする、配列番号48で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CD52タンパク質をコードする、配列番号47で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型MPEG1タンパク質をコードする、配列番号51で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型MPEG1タンパク質をコードする、配列番号49若しくは50で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CCL2タンパク質をコードする、配列番号53で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CCL12タンパク質をコードする、配列番号52で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型CST7タンパク質をコードする、配列番号55で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型CST7タンパク質をコードする、配列番号54で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型RAC2タンパク質をコードする、配列番号57で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型RAC2タンパク質をコードする、配列番号56で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型SERPINA3タンパク質をコードする、配列番号59で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型SERPINA3Nタンパク質をコードする、配列番号58で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型ANOS1タンパク質をコードする、配列番号61で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型GM11428タンパク質をコードする、配列番号60で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型KLK6タンパク質をコードする、配列番号63～67のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型KLK6タンパク質をコードする、配列番号62で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型A2Mタンパク質をコードする、配列番号69～72のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型A2Mタンパク質をコードする、配列番号68で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型GM14295タンパク質をコードする、配列番号73で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型SPP1タンパク質をコードする、配列番号79若しくは80で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型SPP1タンパク質をコードする、配列番号74～78のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型LGALS3BPタンパク質をコードする、配列番号82で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型LGALS3BPタンパク質をコードする、配列番号81で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型APOC1タンパク質をコードする、配列番号85～88のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型APOC1タンパク質をコードする、配列番号83若しくは84で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型PGrnタンパク質をコードする、配列番号107で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型PGrnタンパク質をコードする、配列番号106で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Ctsdタンパク質をコードする、配列番号109で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Ctsdタンパク質をコードする、配列番号108で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Ctssタンパク質をコードする、配列番号112若しくは113で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Ctssタンパク質をコードする、配列番号110若しくは111で示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Apodタンパク質をコードする、配列番号117で示す塩基配列からなるDNA；マウス野生型Apodタンパク質をコードする、配列番号114～116のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；ヒト野生型Sparcタンパク質をコードする、配列番号120～122のいずれかで示す塩基配列からなるDNA；及びマウス野生型Sparcタンパク質をコードする、配列番号118若しくは119のいずれかで示す塩基配列からなるDNAが挙げられる。

　また、移植補助因子をコードするmRNAには、上記いずれかの塩基配列において、t（チミン）をu（ウラシル）に置換した塩基配列をコーディング領域（翻訳領域）として含むmRNAが挙げられる。移植補助因子をコードするmRNAは、前記コーディング領域に加えて、5'末端のキャップ構造、3'末端のポリA鎖、開始コドン上流の5’非翻訳領域（5' UTR）、及び／又は終止コドン下流の3’非翻訳領域（3' UTR）等を含んでもよい。5' UTR及び／又は3' UTR等には、mRNAからの翻訳量を調節するための配列が含まれていてもよく、例えば3' UTRには、mRNAからの翻訳量を増大させる配列（例えばウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（WPRE）等）が含まれていてもよい。
　移植補助因子をコードする核酸、それに対応するNCBIアクセッション番号、及び配列番号の例は、上記表２及び表２'に例示される神経細胞賦活因子をコードする核酸に準じるものとし、ここでの説明は省略する。

　本発明の細胞移植補助剤において、移植補助因子をコードする核酸は、DNAであってもRNA（例えばmRNA）であってもよい。核酸がDNAの形態である場合、遺伝子発現ベクターに含まれていてもよい。核酸は、エレクトロポレーション、リポフェクション、リポソーム、マイクロインジェクションなどの手法によって移植細胞又は移植細胞から分化した細胞内に導入してもよい。

　本態様において「発現可能な状態」とは、プロモーターの制御下である下流域に移植補助因子をコードする遺伝子等を配置していることをいう。したがって、ベクターが導入された細胞（例えば移植細胞）において、プロモーターによって移植補助因子の発現が誘導される。

　本態様において遺伝子発現ベクターは、移植細胞又は移植細胞から分化した細胞（例えば神経細胞）で複製かつ発現が可能な様々な発現ベクターを利用することができる。例えば、ウイルスベクター、プラスミドベクター、及び人工染色体ベクターが例示される。ウイルスベクターは、細胞（例えば脳の細胞）に感染可能であり、当該細胞において移植補助因子を発現し得るものであれば、特に限定しない。例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター等が例示される。プラスミドベクターは、哺乳動物細胞で複製可能なベクターであれば、特に限定しない。具体的なプラスミドベクターとしては、例えば、pCMV6-XL3、pEGFP-C1、pGBT-9、pcDNA、pcDM8、pREP4等が例示される。人工染色体ベクターとしては、例えばヒト人工染色体（HAC）、酵母人工染色体（YAC）、細菌人工染色体（BAC、PAC）等が例示される。

　本態様においてプロモーターは、移植細胞又は移植細胞から分化した細胞（例えば神経細胞）内で遺伝子発現を誘導する活性を有するプロモーターである。例えば、CMVプロモーター（CMV-IEプロモーター）、LTRプロモーター、SV40プロモーター、RSVプロモーター、HSV-TKプロモーター、EF1αプロモーター、Ubプロモーター、メタロチオネインプロモーター、SRαプロモーター、又はCAGプロモーター等が例示される。

　核酸がRNAの形態である場合、エレクトロポレーション、リポフェクション、マイクロインジェクションなどの手法によって細胞内に導入してもよい。
　一実施形態において、細胞移植補助剤において有効成分は複数種又は複数形態で含まれていてもよい。

　他の態様において、本発明の細胞移植補助剤で用いられる移植補助因子は、上記表３、５、７、及び９に示されるいずれかの神経細胞賦活因子、そのいずれかの活性断片、並びにそのいずれかのオルソログからなる群から選択されるタンパク質であってもよい。また、上記表３、５、及び７に示される神経細胞賦活因子に対応する移植補助因子をコードする核酸、及びそれに対応するNCBIアクセッション番号は上記表４、表６、及び表８に例示される神経細胞賦活因子をコードする核酸に準じるものとし、ここでの説明は省略する。

　細胞移植補助剤に含まれる有効成分の含有量は、有効成分の種類や形態（タンパク質、DNA又はRNA等の核酸）、細胞移植補助剤の剤形、並びに後述する溶媒や担体の種類によって異なる。したがって、それぞれの条件を勘案して適宜定めればよい。通常は、単回適用量の細胞移植補助剤に有効量の有効成分が含有されるように調整されている。しかし、有効成分の薬理効果を得る上で、被験体に細胞移植補助剤を大量に投与する必要がある場合、被験体の負担軽減のために数回に分割して投与することもできる。この場合、有効成分の量は、総合量で有効量を含んでいればよい。

　本態様において「有効量」とは、有効成分としての機能を発揮する上で必要な量であって、かつそれを適用する被験体に対して有害な副作用をほとんど又は全く付与しない量をいう。この有効量は、被験体の情報、適用経路、及び適用回数等の様々な条件によって変わり得る。本発明の細胞移植補助剤を医薬として使用する場合、有効成分の含有量は、最終的には、医師又は薬剤師等の判断によって決定される。例えば、移植細胞10万個に対して、本発明の細胞移植補助剤を0.01 ng～10,000 ng、0.1 ng～1,000 ng、又は1 ng～100 ng、例えば1 ng、10 ng、20 ng、50 ng、若しくは100 ngで使用してもよい。

　本態様において「被験体」とは、本発明の細胞移植補助剤の適用対象となる生体である。例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、ダチョウ等）、競走馬、愛玩動物（イヌ、ネコ、ウサギ等）、実験動物（マウス、ラット、モルモット、サル、マーモセット等）等が該当する。好ましくはヒト（この場合、特に「被験者」という）であり、例えば神経疾患を有する、又は神経疾患を発症する可能性のあるヒトが該当する。特に、細胞移植の対象となる被験体を「レシピエント」という。

２－３－２．剤形
　本発明の細胞移植補助剤の剤形は、特に限定しない。被験体の体内で有効成分を失活させることなく移植部位や神経損傷部位等の目的の部位にまで送達できる形態であればよい。

　投与方法が非経口投与であれば、好ましい剤形は、移植部位や神経損傷部位等の対象部位への直接投与又は循環系を介した全身投与が可能な液剤である。液剤の例としては、注射剤が挙げられる。注射剤は、前記賦形剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、pH調節剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。また、有効成分の徐放や、局所的な作用を目的として、生体内に埋め込み可能な人工細胞外マトリックスとして製剤化してもよい。

　なお、上記各剤形の具体的な形状、大きさについては、いずれもそれぞれの剤形において当該分野で公知の剤形の範囲内にあればよく、特に限定はしない。本発明の細胞移植補助剤の製造方法については、当該技術分野の常法に従って製剤化すればよい。

２－３－３．適用方法
　本発明の細胞移植補助剤の適用経路は、経口投与でも、非経口投与でもよい。経口投与法は、一般に全身投与であるが、非経口投与法は、さらに局所投与と全身投与に細分できる。局所投与には、例えば、脳内投与、脳室内投与、移植細胞の移植部位またはその近傍への投与、前記移植部位に投射する神経細胞の細胞体が存在する部位への投与等が挙げられる。前記移植部位としては、「脳神経細胞」の項で例示した部位が例示される。全身投与には、例えば、静脈内投与（静注）及び動脈内投与が挙げられる。投与量は、有効成分が奏効する上で有効な量であればよい。有効量は、前述のように被験体情報に応じて適宜選択される。

　本発明の細胞移植補助剤の投与時期は限定せず、細胞移植の前、細胞移植と同時、細胞移植の後、またはこれらの組み合わせであってよい。ここで「細胞移植」とは、「移植用細胞をレシピエントの体内に導入する行為」を指してもよい。また、「細胞移植と同時」とは、「細胞移植を行う日と同日」の意であり、好ましくは「細胞移植のための工程開始から工程終了まで」である。例えば、本発明の細胞移植補助剤は、細胞移植の前後6時間以内、4時間以内、2時間以内、1時間以内にレシピエントに投与してもよい。また、「細胞移植の前」には、予め細胞移植補助剤で移植用細胞を処理し、当該処理後の移植用細胞を移植する態様も含まれる。好ましい実施形態の一例では、細胞移植の前に移植用細胞を本発明の細胞移植補助剤で処理してもよい。例えば、細胞移植の前に移植用細胞を本発明の細胞移植補助剤の存在下で一定期間培養してもよい。本発明の細胞移植補助剤の存在下で培養する期間は限定せず、例えば2時間以上、12時間以上、1日以上、2日以上、3日以上、4日以上、1週間以上、又は2週間以上であってもよい。細胞移植前の培養条件は限定せず、例えば移植細用細胞10万個に対して0.01 ng～10,000 ng、0.1 ng～1,000 ng、又は1 ng～100 ng、例えば1 ng、10 ng、20 ng、50 ng、若しくは100 ngの細胞移植補助剤を含む培養液中で移植用細胞を培養してもよい。

　一実施形態では、細胞移植の前に本発明の細胞移植補助剤で処理した移植用細胞をレシピエントに移植するのと同時に、本発明の細胞移植補助剤をレシピエントに投与してもよい。

　本発明の細胞移植補助剤の投与回数は限定せず、単回投与又は複数回投与のいずれであってもよい。例えば本発明の細胞移植補助剤を細胞移植後に投与する場合、移植後の任意の時点において単回投与又は複数回投与を行ってもよい。

　本発明の細胞移植補助剤を細胞移植後に投与する場合、本発明の細胞移植補助剤は、好ましくは持続投与してもよい。例えば、細胞移植後において、2週間に1回以上、1週間に1回以上、例えば2日に1回以上、毎日1回以上、又は毎日2回以上、本発明の細胞移植補助剤をレシピエントに投与してもよい。

　一実施形態において、本発明の細胞移植補助剤は、移植細胞と混合して用いることができる。例えば、本発明の細胞移植補助剤をタンパク質又は核酸として移植細胞を含む細胞懸濁液又は細胞塊に混合してもよい。本発明の細胞移植補助剤をタンパク質として移植細胞に混合する場合、タンパク質を細胞懸濁液又は細胞塊に直接添加してもよく、又はタンパク質を埋め込んだ徐放性マトリックスとして添加してもよい。徐放性マトリックスは限定しないが、細胞外マトリックス等の天然由来材料（例えばコラーゲン）、生体適合性の合成材料等が挙げられる。

　本発明の細胞移植補助剤と移植細胞との混合比は、移植細胞に対する効果が維持される限り限定しない。例えば、移植細胞10万個に対して、本発明の細胞移植補助剤を0.01 ng～10,000 ng、0.1 ng～1,000 ng、又は1 ng～100 ng、例えば1 ng、10 ng、20 ng、50 ng、若しくは100 ngの比率で混合することができる。

　一実施形態において、本発明の細胞移植補助剤は、移植細胞自身が一過的または継続して前記細胞移植補助剤を発現できるよう、細胞移植前に移植細胞に導入して用いてもよい。例えば、移植補助因子をタンパク質として、リポフェクション、細胞膜透過性ペプチドとの融合、マイクロインジェクション等の手法によって移植細胞内に導入してもよい。また、移植補助因子を核酸として、エレクトロポレーション、リポフェクション、リポソーム、マイクロインジェクションなどの手法によって移植細胞内に導入してもよい。

３．神経疾患の治療又は予防剤
３－１．概要
　本発明の第3の態様は、神経疾患の治療又は予防剤（以下、「治療／予防剤」と表記する）である。本態様の治療／予防剤は、第1態様の神経細胞賦活剤を含み、神経変性疾患、頭部外傷、及び脳梗塞等の神経疾患を治療又は予防することができる。

３－２．構成
３－２－１．構成成分
　本発明の治療／予防剤は、必須の構成成分として有効成分を含み、さらに選択成分として溶媒、薬学的に許容可能な担体、又は他の薬剤を包含することができる。本発明の治療／予防剤は、有効成分のみで構成されていてもよい。しかし、剤形形成を容易にし、有効成分の薬理効果及び／又は剤形を維持するためには後述する薬学的に許容可能な担体を包含した医薬として構成されていることが好ましい。

　本発明の治療／予防剤における有効成分は、本発明の神経細胞賦活剤であり、その構成については第1態様で既に詳述している。そのため、以下では選択成分についてのみ説明する。

（溶媒）
　本発明の治療／予防剤は、必要に応じて薬学的に許容可能な溶媒中に溶解することができる。「薬学的に許容可能な溶媒」とは、製剤技術分野において通常使用する溶媒をいう。例えば、水若しくは水溶液、又は有機溶剤が挙げられる。水溶液には、例えば、生理食塩水、ブドウ糖又はその他の補助剤を含む等張液、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液が挙げられる。補助剤には、例えば、D-ソルビトール、D-マンノース、D-マンニトール、塩化ナトリウム、その他にも低濃度の非イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等が挙げられる。有機溶剤には、エタノールが挙げられる。

（担体）
　本発明の治療／予防剤は、必要に応じて薬学的に許容可能な担体を含むことができる。「薬学的に許容可能な担体」とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤、ヒト血清アルブミン等が挙げられる。

　賦形剤には、例えば、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖、金属塩、クエン酸、酒石酸、グリシン、ポリエチレングリコール、プルロニック、カオリン、ケイ酸、又はそれらの組み合わせが挙げられる。

　結合剤には、例えば、植物デンプンを用いたデンプン糊、ペクチン、キサンタンガム、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック、パラフィン、ポリビニルピロリドン又はそれらの組み合わせが挙げられる。

　崩壊剤としては、例えば、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が挙げられる。
　充填剤としては、ワセリン、前記糖及び／又はリン酸カルシウムが例として挙げられる。

　乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。
　流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。

　上記の他にも、必要であれば医薬組成物等において通常用いられる可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、分散剤、界面活性剤、無痛化剤、安定剤、吸収促進剤、増量剤、付湿剤、保湿剤、湿潤剤、吸着剤、矯味矯臭剤、崩壊抑制剤、コーティング剤、着色剤、保存剤、防腐剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤、等張化剤等を適宜含むこともできる。

　担体は、被験体体内で酵素等による前記有効成分の分解を回避又は抑制する他、製剤化や投与方法を容易にし、剤形及び薬効を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。
　本発明の治療／予防剤の剤形及び適用方法については、第1態様の記載に準じるため、ここでの説明を省略する。

３－２－２．対象疾患
　本発明の治療／予防剤が対象とする神経疾患は、神経細胞の変性や脱落、細胞死を伴う疾患である限り、特に限定しない。例えば、神経変性疾患、脳腫瘍、頭部外傷、脳挫傷、虚血、脳血管障害、てんかん、多発性硬化症等が挙げられる。

　神経変性疾患は、神経細胞の構造や機能が傷害を受けて進行的に欠落する疾患である。神経変性疾患は、脳内への異常タンパク質の蓄積や、神経細胞死を伴う疾患であってもよい。具体的な神経変性疾患としては、限定しないが、筋委縮性側索硬化症、原発性側索硬化症、パーキンソン病、FTDP-17、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ハンチントン病、ジストニア、脳内鉄沈着を伴う神経変性症、前頭側頭葉変性症、特発性基底核石灰化症、本態性振戦、Perry症候群、軽度認知障害（MCI）、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病、レビー小体型認知症、ダウン症候群、多系統委縮症、大脳皮質変性症、プリオン病、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症等が挙げられる。本発明の治療／予防剤の対象となる疾患は、好ましくは、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症である。

　虚血（虚血性疾患）には、脳血管性認知症、脳血管性パーキンソン症候群、脳アミロイドアンギオパチー、虚血性視神経障害、後述する脳血管障害、並びに虚血病態を伴う他の疾患（例えば、髄膜炎、脳炎、脳膿瘍等）が挙げられる。

　脳血管障害には、例えば、脳卒中、脳梗塞、脊髄梗塞、脳静脈洞血栓症、脳血管攣縮症候群、脳血管炎、脳出血、くも膜下出血、もやもや病、脳動静脈瘻、脳動静脈奇形、脳動脈瘤、頸部／脳動脈解離等が挙げられる。

　本発明の治療／予防剤が対象とする神経疾患は、好ましくは、神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、又は虚血である。

３－３．効果
　本発明の治療／予防剤によれば、脳神経細胞等の神経細胞を賦活化し、その生存、分化、成熟等を促進することによって、及び／又は神経細胞を保護することによって、神経疾患を治療又は予防することができる。

４．神経疾患の治療用組成物
４－１．概要
　本発明の第4の態様は、神経疾患の治療用組成物（以下、単に「治療用組成物」と表記する）である。本態様の治療用組成物は、第2態様の細胞移植補助剤及び移植用の細胞を含み、神経疾患の治療を目的として使用することができる。

４－２．構成
４－２－１．構成成分
　本発明の治療用組成物は、必須の構成成分として有効成分を含み、さらに選択成分として溶媒、薬学的に許容可能な担体、又は他の薬剤を包含することができる。本発明の治療用組成物は、有効成分のみで構成されていてもよい。しかし、剤形形成を容易にし、有効成分の薬理効果及び／又は剤形を維持するためには後述する薬学的に許容可能な担体を包含した医薬として構成されていることが好ましい。

　本発明の治療用組成物における有効成分は、本発明の細胞移植補助剤、及び移植用の細胞（移植細胞）である。細胞移植補助剤と移植細胞の構成については第2態様で既に詳述している。そのため、以下では選択成分についてのみ説明する。

（溶媒）
　本発明の治療用組成物は、必要に応じて薬学的に許容可能な溶媒中に溶解することができる。「薬学的に許容可能な溶媒」は、第3態様の記載に準じるものとする。

（担体）
　本発明の治療用組成物は、必要に応じて薬学的に許容可能な担体を含むことができる。「薬学的に許容可能な担体」は、第3態様の記載に準じるものとする。

　本発明の治療用組成物の剤形及び適用方法については、第2態様の記載に準じるため、ここでの説明を省略する。

４－２－２．対象疾患
　本発明の治療用組成物が対象とする神経疾患は、神経細胞の変性や脱落、細胞死を伴う疾患である限り、特に限定しない。本発明の治療用組成物が対象とする神経疾患は、第3態様に記載の対象疾患に準じるものとし、ここでの説明は省略する。

　本発明によれば、上述の神経細胞賦活剤を含むキットが提供される。また、本発明によれば、本発明の細胞移植補助剤及び移植用の細胞を含むキットが提供される。
　本発明によれば、上述の神経細胞賦活剤を対象に投与する工程を含む、神経疾患を治療又は予防する方法が提供される。また、本発明によれば、上述の細胞移植補助剤をレシピエントに投与する細胞移植補助剤投与工程、及び細胞をレシピエントに移植する細胞移植工程を含む、レシピエントに細胞を移植する方法も提供される。
　本発明によれば、上述の神経細胞賦活剤を対象に投与する工程を含む、神経疾患を治療又は予防する方法が提供される。また、本発明によれば、神経疾患を治療するための医薬の製造における上述の細胞移植補助剤の使用も提供される。

＜実施例１：大脳皮質傷害モデルへの細胞移植＞
（目的）
　皮質傷害の直後又は7日後の脳に細胞移植を行い、移植細胞の生着や軸索伸長の効率を比較する。移植結果が宿主脳環境の違いによってどのように変化するのかを検討する。

（方法と結果）
（１）脳皮質組織に由来する細胞凝集体の作製
　胎生13.5日目のGFPマウス（C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)、清水実験材料）の脳から大脳皮質組織を摘出し、セルソーターで生細胞のみを分取した。得られた生細胞をDMEM/F12培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、2-mercaptoethanol（0.1 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）、Y-27632（30 μM））中で1日間培養した。培養後に得られた細胞凝集体を図1に示す。

（２）皮質傷害モデルへの細胞凝集体の移植
　生後11週齢の免疫不全マウス（C.B-17/Icr-scid/scidJcl、日本クレア）を用いて皮質傷害モデルを作製した。Bregmaより吻側及び外側方向に2.0 mmの位置に生検トレパン及びアスピレーターを用いて脳表より1 mmの深さを傷害した。

　皮質傷害の直後又は7日後に、上記（１）の細胞凝集体70個を傷害部位に移植した。移植から2か月後に潅流固定を行い、切片厚30 μmで凍結脳切片を作製した。得られた脳切片に対して抗GFP抗体（#04404-26、ナカライテスク）を用いて免疫染色を行い、移植された細胞凝集体に由来する細胞の分布を観察した。その結果、皮質傷害直後の細胞移植では、GFP陽性の移植細胞の生着がほとんど見られなかった（図2A）。一方、皮質傷害7日後に移植した場合には、移植細胞の生着及び軸索伸長の促進が認められた（図2B）。

　図2の免疫組織染色結果を定量的に比較するために、In cell analyzerを用いて線条体内におけるGFP免疫染色シグナル（蛍光強度）を数値化した。その結果、皮質傷害7日後に移植した群で、同側線条体におけるGFP陽性の移植片由来神経軸索の分布が亢進していることが示された（図3）。

（３）皮質脊髄投射の検証
　移植細胞に由来する神経細胞の軸索が皮質脊髄投射をし得るか否かを検証した。
　上記（２）において皮質傷害7日後に細胞移植を受けたマウスの一部で、潅流固定7日前に逆行性標識試薬であるFast blue（#17740、Polysciences社）を4％濃度で第1頚神経（C1）に投与した（0.3μl×16か所、計4.8μl）。潅流固定後の凍結脳切片において、移植片の中のGFP陽性の細胞体がFast blueで逆行性標識されるか否かを検証した。その結果、移植片の中にGFP陽性かつFast blue陽性の細胞体が認められた（図4、矢頭）。よって、移植細胞に由来する神経細胞がC1領域まで神経軸索を伸長して投射し得ることが示された。

＜実施例２：大脳皮質傷害モデルの遺伝子発現解析１＞
（目的）
　皮質傷害の直後（0日目）又は7日後の脳における遺伝子発現を比較する。
（方法と結果）
　実施例１と同様の方法で、C57BL/6NCrSlcマウス（清水実験材料）から皮質傷害モデルを作製した。皮質傷害の直後（0日目、傷害後5～10分後）又は7日後に、皮質傷害部位を含む周囲約0.5mmの領域を摘出し、CAGE解析によってマウス大脳皮質細胞における遺伝子発現を解析した。皮質傷害の直後（0日目）及び7日後について、それぞれn=5のマウスを用いた。以下に述べる（１）又は（２）の基準によりスクリーニングを行い、候補因子を抽出した。

（１）皮質傷害7日後で遺伝子発現が高かった因子
　皮質傷害の直後（0日目）と7日後の遺伝子発現の結果から、皮質傷害7日後で遺伝子発現が高かった候補因子を以下の4つの基準(a)～(d)を用いて抽出した。
　(a) 0日目vs. 7日目でLog Fold change（FC）が3.0以上である、
　(b) p value≦0.05かつ7日目のCPM値が15以上である、
　(c) SignalPとSecretomePの少なくとも一方でシグナル配列を有することが予測され、かつWoLF PSORTでその配列が細胞外に位置することが予測される、かつ
　(d) 文献に基づき、遺伝子機能が炎症又は免疫系を介したアポトーシスやファゴサイトーシス等に関連しない。

　なお、上記の「CPM（count-per-million）値」は各遺伝子の総リード数を示す。「Log Fold change（FC）」は、0日目の平均カウント値に対する7日後の平均カウント値の対数変化を示す。「p value≦0.05」は、独立なn=5回の解析において、0日目と7日後におけるCPM値の差が有意であったことを示す。

　上記基準を用いたスクリーニングの結果、Cst7、Spp1、A2m、Apoc1、Ccl12、Lyz2、Klk6、Gm11428、Cd52、Lgals3bp、Mpeg1、Rac2、Serpina3nの13因子が抽出された（図5）。

（２）皮質傷害7日後で遺伝子発現が低かった因子
　皮質傷害の直後（0日目）と7日後の遺伝子発現の結果から、皮質傷害7日後で遺伝子発現が低かった候補因子を以下の4つの基準(e)～(h)を用いて抽出した。
　(e) 0日目vs. 7日目でLog FCが-2.0以下である、
　(f) p value≦0.05かつ0日目のCPM値が15以上である、
　(g) SignalPとSecretomePの少なくとも一方でシグナル配列を有することが予測され、かつWoLF PSORTでその配列が細胞外に位置することが予測される、かつ
　(h) 文献に基づき、遺伝子機能が炎症又は免疫系を介したアポトーシスやファゴサイトーシス等に関連しない。
　上記基準を用いたスクリーニングの結果、Gm14295が抽出された（図5）。

＜実施例３：皮質傷害モデルの遺伝子発現解析２＞
（目的）
　実施例２の遺伝子発現解析結果に基づき、さらなる候補因子を同定する。
（方法）
　以下のデータベース：The human secretome and membrane proteome（https://www.proteinatlas.org/humanproteome/tissue/secretome）を用いて遺伝子／タンパク質の分類を行った。その結果、膜タンパク質＆分泌因子（116遺伝子）、分泌因子（772遺伝子）、膜タンパク質（3,422遺伝子）が抽出された。なお、「膜タンパク質＆分泌因子」とは、分泌型アイソフォームと膜結合型アイソフォームを含む複数のタンパク質アイソフォーム（スプライスバリアント）をコードする遺伝子が該当する。

　抽出された因子を母集団として、実施例２の遺伝子発現解析結果から、皮質傷害7日後で遺伝子発現が高かった因子をスクリーニングした。具体的には、皮質傷害の直後（0日目）と7日後の遺伝子発現の結果から、皮質傷害7日後で遺伝子発現が高かった候補因子を以下の基準：(a1)かつ(b)、又は(a2)かつ(b)を用いて抽出した。
　(a1) 膜タンパク質＆分泌因子と分泌因子：0日目vs. 7日目でLog Fold change（FC）が2.0以上である、
　(a2) 膜タンパク質：0日目vs. 7日目でLog Fold change（FC）が2.5以上である、
　(b) p value≦0.05かつ7日目のCPM値が10以上である。

（結果）
　抽出された因子を以下の表９に示す。

＜実施例４：各因子による神経軸索伸長促進効果＞
（目的）
　培養細胞を用いて各因子の組換えタンパク質を作製し、in vitroで皮質神経細胞に対する軸索伸長促進効果を検証する。

（方法）
（１）組換えタンパク質を含む培養上清の調製
　実施例２で同定された計14因子の機能解析を行うために、以下の方法で組換えタンパク質を作製した。各因子のマウス由来全長配列をクローニングして発現ベクターに組み込み、プラスミド抽出後にHEK293T細胞へのトランスフェクションを行った。次いで1～2日間の回復培養を行った後、トランスフェクション培地とDMEM/F12培地（DMEM/F12 with L-Glutamine、Penicillin/Streptomycin、N2-supplement、B27-supplement）とを1対1で混合した培地で1日間培養し、さらにDMEM/F12培地（DMEM/F12 with L-Glutamine、Penicillin/Streptomycin、N2-supplement、B27-supplement培地）で1日間培養した。培養上清を0.22μmフィルターでろ過した後、冷凍保存した。

（２）神経軸索伸長促進効果の検証
　胎生14.5日目のマウス（C57BL/6NCrSlc、清水実験材料）の脳から大脳皮質組織を摘出し、セルソーターで生細胞のみを分取した。次いで、得られた細胞を、Poly-L-LysineとLN511（0.5μg/cm²）でコーティングしたプレート上に5,000 cells/cm²の細胞密度で播種した。DMEM/F12培地（DMEM/F12 with L-Glutamine、Penicillin/Streptomycin、N2-supplement、B27-supplement）と上記（１）で得られた各々の培養上清とを1対1で混合した培地中で2日間培養した後に、抗TAU抗体（MAB3420、Merck Millipore社）による免疫染色を行い、神経軸索を可視化して、神経軸索長を定量した。

（結果）
　各種組換えタンパク質の結果を図6に示す。CCL12、CD52、CST7、LYZ2、MPEG1、RAC2、A2M、GM11428、GM14295、KLK6、SERPINA3N、SPP1では、コントロールと比べてTAU陽性神経軸索長の亢進が認められた（図6）。

　なお、以降の実施例では、上記因子の中からLYZ2を一例として選択し、さらなる機能解析を行った。以降の実施例でLYZ2について見出された効果は、他の因子についても同様に得られるものと考えられる。

＜実施例５：マウスLYZ2組換えタンパク質による神経軸索伸長促進効果＞
（目的）
　上記因子の中から一例としてLYZ2を選択し、ブレビバチルス発現システムを用いて発現及び精製したマウスLYZ2（mLYZ2）組換えタンパク質、並びに市販のmLYZ2組換えタンパク質を使用して、mLYZ2の機能解析を行う。

（方法と結果）
（１）ブレビバチルス発現システムを用いたmLYZ2組換えタンパク質の調製
　ブレビバチルス発現システムを用いて発現させたmLYZ2組換えタンパク質に対して、Hisタグ精製及びタンパク質濃縮を行った。精製及び濃縮後の試料に対してSDS-PAGE及びCBB染色を行い、mLYZ2組換えタンパク質が得られたことが確認された（図7）。さらに、抗LYZ2抗体（LS-C295234-100、LSBio社）を用いたウェスタンブロッティングによって、mLYZタンパク質が検出された（図8）。

（２）ブレビバチルス発現システムで調製されたmLYZ2組換えタンパク質の機能解析
　胎生14.5日目のマウス（C57BL/6NCrSlc、清水実験材料）の脳から大脳皮質組織を摘出し、セルソーターで生細胞のみを分取した。次いで、得られた細胞を、Poly-L-LysineとLN511-E8 fragment（0.5μg/cm²）でコーティングしたプレート上に2,000 cells/cm²の細胞密度で播種した。上記（１）で調製したmLYZ2組換えタンパク質を終濃度10%の割合で添加したNeurobasal培地（Neurobasal medium with 2mM L-Glutamine、1×Penicillin/Streptomycin、1×B27-supplement、10 μM Y-27632）で3日間培養した後に、抗TAU抗体（MAB3420、Merck Millipore社）による免疫染色を行い、神経軸索長を定量した。その結果、mLYZ2組換えタンパク質による神経軸索の伸長促進作用が認められた（図9）。

（３）市販mLYZ2組換えタンパク質を用いた機能解析
　市販のmLYZ2組換えタンパク質（MBS1022200、MyBiosource社）を用いて軸索伸長作用をさらに検証した。胎生14.5日目のマウスから皮質組織を摘出し、酵素処理後にPoly-L-LysineとLN511-E8 fragment（0.5μg/cm²）でコーティングしたプレート上に細胞を播種した。市販mLYZ2組換えタンパク質を0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mLで添加した培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×））中で6日間の培養後に抗TAU抗体による免疫染色及び評価を行った。その結果、市販のmLYZ2を使用した場合においても、神経軸索が伸長すること（図10）、及び神経軸索側枝が増加すること（図11）が示された。

＜実施例６：ヒトLYZ組換えタンパク質による神経軸索伸長効果＞
（目的）
　ヒトLYZ（hLYZ）組換えタンパク質によるヒト神経細胞（ヒト大脳皮質神経細胞、及びヒトドパミン神経細胞）に対する効果を検証する。

（方法と結果）
（１）ヒトES細胞由来大脳皮質オルガノイド
　ヒトLYZ（hLYZ）組換えタンパク質として、市販のhLYZ（ab158839、Abcam社）を用いた。文献（Sakaguchi, H., et al., Stem Cell Reports., 2019, 13(3):458-473.）に記載の方法に従って作製したヒトES細胞由来大脳皮質オルガノイドを酵素処理によって分散した後、0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1,000 ng/mLのhLYZを添加した培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）、Y-27632（10 μM）））中で細胞を3日間培養した。次いで、抗TAU抗体を用いた免疫染色によってTAU陽性神経軸索を可視化して、神経軸索長を定量した。その結果、ヒトES細胞由来大脳皮質オルガノイドに由来する神経細胞のTAU陽性神経軸索がhLYZによって伸長することが示された（図12）。

（２）ヒトES細胞由来ドパミン神経細胞
　文献（Kriks S., et al., Nature, 2011, 480(7378):547-51.）に記載の方法に従って、37日間分化誘導を行い、酵素処理によって分散したヒトES細胞由来ドパミン神経細胞を、0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1,000 ng/mLのhLYZを添加した培地（Neurobasal medium supplemented with GlutaMAX-I（1%）、B27-supplement（1×）、Y-27632（10 μM）））中で3日間培養した。次いで、抗TAU抗体を用いた免疫染色によってTAU陽性神経軸索を可視化して、神経軸索長を定量した。その結果、ヒトES細胞由来ドパミン神経細胞のTAU陽性神経軸索がhLYZによって伸長することが示された（図13）。

＜実施例７：神経細胞の細胞数への影響＞
（目的）
　市販マウスLYZ2組換えタンパク質（mLYZ2）及びヒトLYZ組換えタンパク質（hLYZ）によるTAU陽性神経細胞の細胞総数への影響を検討する。

（方法と結果）
（１）マウス大脳皮質神経細胞に対するmLYZ2の効果
　0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mLの市販mLYZ2組換えタンパク質（MBS1022200、MyBiosource社）を添加した培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×））中にて、妊娠14日目のBlack6/Nマウス大脳皮質細胞を、6日間培養した。次いで、抗TAU抗体を用いた免疫染色によってTAU陽性神経細胞の神経軸索長とその細胞総数を定量した。その結果、TAU陽性神経細胞の細胞総数が増加することが示された（図14）。この結果から、mLYZ2が神経細胞死抑制効果を有することが示された。

（２）ヒト神経細胞に対するhLYZの効果
　分化誘導46日目のヒトiPS細胞由来大脳皮質オルガノイド（Kriks S., et al., Nature, 2011, 480(7378):547-51.に記載の方法に従って作製）を酵素処理して得られた細胞を、0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mLの市販hLYZ（ab158839、Abcam社）を添加した培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）、Y-27632（10 μM）））中にて、13日間培養した。次いで、抗TAU抗体を用いた免疫染色によってTAU陽性神経細胞の神経軸索長とその細胞総数を定量した。その結果、神経細胞の細胞総数が増加することが示された（図15）。
　この結果から、hLYZが神経細胞死抑制効果を有することが示された。

＜実施例８：マウスLYZ2組換えタンパク質の移植細胞に対する効果＞
（目的）
　胎仔マウスの脳から分離した細胞の集団を成体マウスの脳に移植する際に、同時にマウスLYZ2組換えタンパク質（mLYZ2）を投与する。移植した細胞の生着や神経細胞分化に対するmLYZ2の効果を検討する。

（方法と結果）
　妊娠11日目の胎仔マウス（C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)、清水実験材料）の脳から、ドパミン神経前駆細胞を含む中脳腹側組織を取り出した。酵素処理を行った後、終濃度10 μM Y-27632を含むPBSで10万個の細胞を含む細胞懸濁液を調整した。この細胞懸濁液にmLYZ2（20 ng）を加えて、生後12週齢のBlack6/Nマウス（雄）の線条体に移植した。細胞懸濁液にmLYZ2を加えずに移植したマウスを対照群とした。

　移植1か月後に潅流固定を行い、凍結脳切片を作製した。その後、ドパミン陽性細胞を標識する抗TH抗体（AB152、Merck Millipore社）を用いて免疫染色を行い、移植片に含まれるドパミン陽性細胞の数を計測して該細胞密度を算出した。結果を図16に示す。

　図16に示されるように、移植細胞をmLYZ2とともに移植した実験群（図16、Lyz）では、対照群（図16、Ctrl）と比較してドパミン陽性細胞の密度が大幅に増大した（図16）。
　よって、mLYZ2が細胞移植補助剤として使用できることが示された。

＜実施例９：ヒトLyz組換えタンパク質の移植細胞に対する効果＞
（目的）
　ヒトES細胞由来のドパミン神経前駆細胞をヒトLyz組換えタンパク質存在下で一定期間培養した後、成体マウスの脳に移植する。移植した細胞の生着に対するヒトLyzの効果を検討する。

（方法と結果）
　ヒトES細胞（Kh-ES1）からドパミン神経前駆細胞を文献（Doi D, et al., Stem Cell Reports, 2014, 6;2(3):337-50.）に記載の方法で作製した。培養18日目から100 ng/mLのヒトLyz組換えタンパク質（Recombinant Human Lysozyme protein；abcam/ab158839）を培養培地に添加して細胞培養を行った。培養29日目のドパミン神経前駆細胞に対して酵素処理を行った後、終濃度10 μM Y-27632を含むPBSで20万個の細胞を含む細胞懸濁液を調製した。なお、本実施例では追加でLyzを細胞懸濁液に添加しなかった。この細胞懸濁液を生後16週の免疫不全マウス（SCIDマウス；清水実験材料株式会社、C.B-17/lcrHsd-Prkdcscid）の線条体に移植した（Lyz群）。培養培地にLyzを加えずに培養したドパミン神経前駆細胞を移植したマウスを対照群（Ctrl）とした。

　細胞移植から3か月後に、潅流固定を行い、凍結脳切片を作製した後、抗体染色によって移植細胞を標識することによって移植片を可視化した。抗体染色は、マウス抗hNCAM抗体（Santa Cruz社、sc-106）を希釈倍率1:500で使用した。Lyz群と対照群で移植片の大きさを比較した結果を図17に示す。
　図17に示されるように、Lyz存在下で培養したドパミン神経前駆細胞（Lyz群）は、Lyz非存在下で培養した細胞（対照群）と比較して移植片のサイズが有意に増大していた。この結果から、Lyzで前処理した細胞の移植で有意に細胞生着が促進されることが示された。

＜実施例１０：さらなる候補因子による神経軸索伸長促進効果及び細胞死抑制効果の評価＞
（目的）
　7種類の候補因子：リゾチーム（LYZ）、分泌型リンタンパク質1（SPP1又はOsteopontin）、プログラニュリン（PGrn）、カテプシンD（Cathepsin D; Ctsd）、カテプシンS（Cathepsin S; Ctss）、アポリポタンパク質D（Apod）、及びSparcについて、神経軸索伸長促進効果及び細胞死抑制効果を評価する。

（方法と結果）
（１）候補因子
　各候補因子にはヒト組換えタンパク質を使用した。具体的には、ヒトLYZ組換えタンパク質はRecombinant Human Lysozyme protein（abcam、ab158839）、ヒトSPP1組換えタンパク質はRecombinant Human Osteopontin (OPN) Protein（R＆D Systems、1433-OP-050/CF）、ヒトPGrn組換えタンパク質はRecombinant Human Progranulin Protein（R＆D Systems、2420-PG-050）、ヒトCtsd組換えタンパク質はRecombinant Human Cathepsin D Protein（R＆D Systems、1014-AS-010）、ヒトCtss組換えタンパク質はRecombinant Human Cathepsin S Protein（R＆D Systems、1183-CY-010）、ヒトApod組換えタンパク質はRecombinant Human Apolipoprotein D Protein（Novus Biologicals、NBP1-99548）、ヒトSparc組換えタンパク質はRecombinant Human SPARC Protein（R＆D Systems、941-SP-050）を使用した。

（２）神経軸索伸長促進効果の評価
　分化誘導42～70日目のヒトiPS細胞（S2WCB3）由来大脳皮質オルガノイド（Kriks S., et al., Nature, 2011, 480(7378):547-51.に記載の方法に従って作製）をNeuron Dissociation Solutions（FUJIFILM）を用いて解離した細胞を、ラミニン（LM511-E8）で表面をコートした96ウェルプレートに20,000細胞／cm²の細胞密度で播種した。培地（DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）、Y-27632（10 μM）））中にて、0日目～7日目まで7日間培養を行った。

　細胞を播種して1日後の培養1日目に、上記（１）の各候補因子を培地中に添加し、各候補因子の存在下で7日目まで培養を続けた。なお、各因子は、1 well（200μl）の最終濃度が図１８～図２１中に示す濃度になるように培地で希釈して使用した。7日間の培養中、IncuCyteを用いてライブセルイメージングを行い、各細胞の軸索長について経時的な変化を測定した。

　結果を図18～19に示す。図18は、Lyzを培地に添加した場合の軸索長の経時的変化を示す。100 ng/mL、250 ng/mL、及び500 ng/mLのLyzを培地に添加した場合、Lyzの添加量が多いほど軸索長の伸長効果が大きいことが示された（図18B）。図19は、各因子の存在下での培養7日目における軸索長の測定結果を示す。Lyz存在下で軸索長が増大することが示された。また、PGrn、Spp1、又はSparc存在下でも軸索長が増大する傾向が見られた。

（３）細胞生存率の評価
　上記（２）の培養7日目におけるライブセルイメージング終了後に細胞生存率をAlamar Blueアッセイにより評価した。測定方法は、分化誘導47日～70日の大脳皮質オルガノイドを分散し、40,000細胞/cm²の密度でラミニン（LM511-E8）コートしたディッシュ上に播種した。このときの培地組成は、DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）、Y-27632（10 μM）とした。播種後、24時間培養した後に各種タンパク質を添加、直後に0.1mM H₂O₂を添加して24時間後の細胞生存率を評価した。このときの培地組成は、DMEM/F12 supplemented with L-Glutamine（2 mM）、B27-supplement（1×）、N2-supplement（1×）、Penicillin/Streptomycin（1×）とした。Alamar Blueアッセイは、alamarBlue（登録商標） Cell Viability Reagent（Thermo Fisher Scientific、DAL1025）を使用して試薬添付の方法により行った。対照群として、候補因子を添加しなかった細胞（図20、Ctrl mean）、及び界面活性剤（1％Triton）処理によって人為的に傷害を与えた細胞（図20、1％ Triton mean）についても評価を行った。
　細胞生存率の評価結果を図20に示す。用いた候補因子の全てにおいて、コントロールに比べて、細胞生存率が上昇する傾向が見られた。特に、Lyz及びPGrnでその傾向が高かった。

（４）細胞毒（H₂O₂）条件下での細胞生存率の評価
　上記（２）と同様の方法により、分化誘導42～70日目のヒトiPS細胞由来大脳皮質オルガノイドから解離した細胞を、96ウェルプレートに40,000細胞／cm²の細胞密度で播種した。播種から24時間培養後、0.1 mM H₂O₂及び上記（１）の各候補因子を培地中に添加した。0.1 mM H₂O₂及び各候補因子の存在下で24時間培養後、上記（３）と同様の方法でAlamar Blueアッセイにより細胞生存率を測定した。

　結果を図21に示す。図21の結果から、細胞毒（H₂O₂）条件下での細胞生存率がPGrnにより上昇することが示された。Spp1、Sparc、又はLyzを用いた場合にも、細胞毒（H₂O₂）条件下での細胞生存率が上昇する傾向が見られた。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims

　タンパク質若しくはその活性断片又はそれをコードする核酸を含む神経細胞賦活剤であって、
　前記タンパク質が、リゾチーム（LYZ）、分泌型リンタンパク質1（SPP1）、プログラニュリン（PGrn）、カテプシンD（Ctsd）、カテプシンS（Ctss）、アポリポタンパク質D（Apod）、Sparc、CD52、マクロファージ発現遺伝子1（MPEG1）、C-Cモチーフケモカインリガンド2（CCL2）、シスタチンF（CST7）、Racファミリー低分子量GTPアーゼ2（RAC2）、セルピンファミリーAメンバー3（SERPINA3）、アノズミン1（ANOS1）、カリクレイン関連ペプチダーゼ6（KLK6）、α2-マクログロブリン（A2M）、GM14295、ガレクチン3結合タンパク質（LGALS3BP）、アポリポタンパク質C1（APOC1）、及びそれらのオルソログからなる群から選択される、前記剤。
　前記神経細胞が、脳神経細胞である、請求項１に記載の剤。
　前記神経細胞賦活が、軸索、軸索側枝、及び／又は樹状突起の伸長促進である、請求項１又は２に記載の剤。
　前記神経細胞賦活が、神経細胞変性の抑制及び／又は神経細胞死の抑制である、請求項１又は２に記載の剤。
　請求項１～４のいずれか一項に記載の剤を含む、細胞移植補助剤。
　請求項１～４のいずれか一項に記載の剤を含む、神経疾患の治療又は予防剤。
　前記疾患が神経変性疾患、脳腫瘍、多発性硬化症、てんかん、頭部外傷、脳梗塞、脳卒中、及び虚血からなる群から選択される、請求項６に記載の剤。
　前記神経変性疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、レビー小体型認知症、脊髄小脳変性症、進行性核上性麻痺、及び皮質基底核変性症からなる群から選択される、請求項７に記載の剤。