WO2022124397A1 - ミノガの採卵器並びにそれを用いたミノガの交配方法及び採卵方法 - Google Patents

ミノガの採卵器並びにそれを用いたミノガの交配方法及び採卵方法 Download PDF

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WO2022124397A1
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egg
bagworm
female
mating
moth
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PCT/JP2021/045524
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French (fr)
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太陽 吉岡
良子 一木
恒徳 亀田
隆行 松田
惇 伊藤
章宗 浅沼
Original Assignee
国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
興和株式会社
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A01K67/04—Silkworms

Definitions

  • the present invention relates to a bagworm egg collector and a simple and efficient bagworm mating method and egg collection method using the same.
  • Bagworms which are larvae of moths belonging to the family Psychidae, hide in a spindle-shaped or cylindrical nest (Bagnest) made by entwining leaf pieces and branch pieces with spit threads and feed on them. They live with their nests during the entire larval stage, such as moving along with their nests.
  • the bagworm silk thread spit out by this bagworm has been attracting attention in recent years as a novel animal natural fiber having extremely high usefulness (Patent Document 1 and Non-Patent Document 1).
  • bagworm silk thread In order to industrialize bagworm silk thread, it is indispensable to establish breeding techniques such as mass breeding and successive breeding of bagworms.
  • breeding techniques such as mass breeding and successive breeding of bagworms.
  • the bagworm silk industry has just entered its dawn, and breeding techniques are still under development.
  • the acquisition of bagworms depends solely on field wildcrafting, which is a major obstacle to the industrialization of bagworm silk threads. Therefore, there is an urgent need to develop artificial mating techniques and spawning techniques for bagworms.
  • silk moth which is the same lepidopteran larva and has already been established in the sericulture industry. I can't.
  • bagworms pupate in the nests spent in the larval stage without producing cocoons like silk moths during metamorphosis from larvae to pupae.
  • the head is turned upside down in the nest and pupates, and the emerged male moths escape by making a hole in the lower end of the nest, while the female moths escape after emergence (Fig. 1A).
  • Fig. 1A Do not take off, and because he has completely lost his ability to move, he ends his life in the nest without going out to the outside world.
  • the female moth emits a sex pheromone from the lower end opening of the nest, and the male moth attracted to the female moth reaches the nest where the female moth lurks (Fig. 1B-c) and then the lower end of the nest for mating.
  • the abdomen is inserted through the opening (Fig. 1B-d).
  • the female moth's copulation hole is located in the innermost part of the nest and inside the pupal shell. Therefore, the male moth extends the abdomen and inserts it between the female moth abdomen and the pupal shell in the nest, and further searches for the copulatory hole at the tip of the female moth abdomen to establish copulation (FIG. 1C).
  • the female moth lays eggs in the pupal shell, and the eggs are retained in the pupal shell until hatching.
  • Bagworms can also be artificially copulated.
  • a method of artificially inserting the abdomen of the male moth into the lower end opening of the nest where the female moth lurks is only used (Non-Patent Document 2).
  • Non-Patent Document 2 a method of artificially inserting the abdomen of the male moth into the lower end opening of the nest where the female moth lurks.
  • An object of the present invention is to develop and provide a simple and efficient mating method for bagworms and a device for executing the method.
  • An object of the present invention is to develop and provide a method for easily collecting eggs from bagworms and a method for preparing a large amount of first-instar bagworms.
  • the present inventors first developed a method for seeing through the inside of the pupal shell using an X-ray apparatus. With this method, the inside of the nest and the inside of the pupal shell can be observed even from the outside of the nest.
  • the X-ray equipment is very complicated to carry in and install, and it takes time and effort to perform fluoroscopy.
  • the running cost is very high, and the influence on the living body and cells by X-ray irradiation cannot be excluded. Therefore, it was not realistic to implement the project in terms of efficiency and cost.
  • the present inventors attempted forced copulation in which the female bagworm moth was taken out from the nest and pupal shell, and then the female moth and the abdominal end of the male moth were in direct contact with each other.
  • mating can be forcibly established by opening the grasping device at the abdominal end of the male moth with tweezers or the like and grasping the abdominal end of the female moth.
  • the bagworm moth does not have an organ shaped to grasp the female abdomen like a grasper. Therefore, the copulation success rate was extremely low in the hand pairing method such as the silk moth.
  • a bagworm egg collector consisting of a tubular container, which has an insertion hole having an inner diameter for accommodating an adult bagworm, an accommodating portion capable of accommodating all or part of the abdomen of the adult female, and an egg after spawning.
  • the egg collector having an egg-retaining part for holding the egg.
  • the egg collector according to (1), wherein the egg-retaining portion has a ventilation means.
  • the egg collector according to (1) or (2), wherein the egg-retaining portion has a detachable egg-receiving means for accommodating and collecting eggs after spawning.
  • a method for mating Minoga in which an adult female Minoga is inserted into the insertion hole of the Minoga egg collector according to any one of (1) to (7) from the abdominal end, and the abdomen is inserted into the insertion hole.
  • the mating method comprising a mating step of fitting and a mating step of inserting and mating the abdominal end of an adult female imago between the insertion hole and the abdomen of the adult female imago.
  • (11) A method for collecting eggs of Minoga, in which an adult female Minoga separated from the nest and pupal shell is inserted into the insertion hole of the Minoga egg collector according to any one of (1) to (7) from the abdominal end.
  • the above-mentioned egg collection method including an egg-laying step of spawning.
  • a method for preparing first-instar bagworms which is a heat-retaining step of keeping the bagworm eggs obtained by the method of collecting bagworm eggs according to (11) or (12) in the egg-retaining part, and the first-age hatched.
  • the preparation method including the first-instar bagworm recovery step of recovering bagworms.
  • the above-mentioned preparation method including a heat-retaining step for keeping warm.
  • This specification includes the disclosure of Japanese Patent Application No. 2020-205316, which is the basis of the priority of the present application.
  • bagworm eggs can be easily obtained in large quantities.
  • the first-instar bagworm can be easily prepared in large quantities.
  • A It is a figure which shows the morphology (a) of the female moth of Eumeta varieum taken out from the nest, and the pupal shell (b) thereof.
  • B It is an image of mating of Eumeta varieum in the field. In the figure, c indicates a nest containing a female moth, and d indicates a male moth.
  • C It is a conceptual diagram that penetrates the female moth nest of Eumeta varieum during mating.
  • Female moths (0103) such as Eumeta varieties hide their heads (0105) in the pupal shell (0102) in the nest with the head (0105) facing downward with the opening of the nest (0101), and even after emergence, they are in the nest in the larval stage. Spend a lifetime in.
  • the male moth (0104) is capable of flying and is attracted to the sex pheromones emitted by the female moth to reach the nest where the female moth lurks.
  • the abdomen (0106) is inserted into the nest through the opening below the nest, and while extending the abdomen, the copulation hole at the end of the abdomen of the female moth in the innermost part of the pupal shell is searched for. Then, the pupa is inserted into the copulation hole and copulation is established.
  • FIG. 1 It is a figure which shows the artificial mating of Eumeta varieum using the bagworm egg collector of this invention.
  • A It is a figure when the female moth of Eumeta varieum is placed in the bagworm egg collector of the present invention. This figure shows a bagworm egg collector made by improving a 1.5 mL tube.
  • B It is a figure in which the abdominal end of a male moth is inserted between the female moth shown in A and the bagworm egg collector, and artificial mating is performed.
  • C It is a figure which shows the pair of Eumeta varieties during mating with the bagworm egg collector of this invention. In the figure, it can be seen that the copulation is established by the arrow.
  • FIG. 1 It is a figure which shows the female moth abdominal end (0401) and the egg mass (0402) which laid eggs in the egg holding part of the bagworm egg collector of this invention.
  • the egg mass consists of an average of 1000-3000 eggs.
  • B It is a figure which shows the first-instar bagworm of Eumeta varieum hatched after the heat insulation step by the preparation method of the first-instar bagworm of this invention.
  • the first-instar bagworms (arrows) that have escaped to the outside of the bagworm egg collector are shown.
  • the first-instar bagworm is then recovered by the first-instar bagworm recovery step.
  • a sponge stopper is used as a ventilation means.
  • A is a figure showing one embodiment of the bagworm egg collector of the present invention provided with the egg receiving means. This figure shows a configuration in which a thin film is pushed into an egg collector as an egg receiving means.
  • B to D illustrate the placement of female bagworms (B), spawning (C), and recovery of egg mass (D).
  • E is an expanded view of the egg receiving means removed from the bagworm egg collector, showing the recovered egg mass (0604).
  • the first aspect of the present invention is a bagworm egg collector.
  • the egg collector of the present invention is composed of a tubular container. According to the egg collector of the present invention, not only the artificial mating of bagworms is facilitated and the mating efficiency thereof is improved, but also easy and stable egg collection becomes possible.
  • Minoga is a general term for moths belonging to the order Lepidoptera and the family Psychidae.
  • bagworm refers to an adult bagworm, male or female, regardless of gender.
  • female adult (individual) and male adult (individual) are often referred to as “female moth” and “male moth”, respectively.
  • the female moth is a wingless and legless morphological species.
  • wingless and legless morphological species refers to a bagworm species having a form in which a female moth has degenerated wings and legs.
  • This wingless, legless morphological species also includes species in which the sensory organs such as compound eyes, tactile sensations, and mouth organs are degenerated and the external morphology becomes maggot-like.
  • the genus including such wingless and legless morphological species is not limited, but for example, species belonging to Eumeta, Mahasena, Metura, Thiridopteryx and the like are preferable.
  • Eumeta japonica Eumeta minuscula
  • Mahasena aurea sanders case moth
  • evergreen bagworm Thyridopteryx ephemeraeformis
  • Bactworm is a general term for bagworm larvae regardless of species, sex, and age.
  • first-instar bagworm refers to a bagworm during the period from hatching to the first molting.
  • the "nest (of the bagworm)" is a nest in which the bagworm nests, and is composed of a silk thread spit out by the bagworm itself and a material such as a leaf piece or a branch piece spelled by the silk thread.
  • the nest is a bagworm that can wrap the whole body of the bagworm, and has a spindle-shaped, cylindrical, conical or other shape. Bagworms basically hide in this nest during the larval stage, and as a general rule, a part of the insect body is exposed from the opening of the nest only when feeding or moving. In addition to molting, pupation is also performed in the nest. In addition, female bagworms of some species of bagworm live in the nest throughout their lives, including emergence, and mating is also carried out through the lower end opening of the nest.
  • the "pupal shell” means the outer shell in the pupal stage.
  • the pupal shell of bagworm is referred to.
  • the pupal shell is composed of cuticle and has rigidity that retains the original spindle shape even after the emergence of bagworms, as shown in FIGS. 1A-b.
  • insect pupae are destroyed with emergence, but in female bagworms of some species of bagworm, the pupae are removed after opening an open opening that exposes part of the head and chest even after emergence. Stay inside it without.
  • the pupal shell becomes the spawning bed, and the female moth lays eggs in the pupal shell.
  • the bagworm egg collector (0201) of the present invention includes an insertion hole (0202), an accommodating portion (0203), and an egg holding portion (0204) as essential components, and a lid portion (0205).
  • the spawning table (0206) is included as a selective component.
  • the bagworm egg collector (0201) of the present invention is composed of a tubular container.
  • tubular container refers to a container having a tubular shape and having an internal space capable of accommodating adult female bagworms. Further, in the bagworm egg collector, at least one end of the tubular container is open, and the internal space is in contact with the outside world through the opening.
  • the external shape of the bagworm egg collector is not particularly limited as long as it is a tubular shape having a storage portion (0203), an egg retention portion (0204), and an insertion hole (0202), which will be described later.
  • a parallel tube shape for example, a columnar shape or a prismatic shape
  • a cone shape for example, a spindle shape
  • the short axis cross section gradually decreases toward the end.
  • Conical shape, or pyramid shape or a combination thereof.
  • the "short-axis cross section” means a cross-section including a short axis orthogonal to the long axis of the bagworm egg collector.
  • the bagworm egg collector of the present invention is an artificial bagworm that imitates the bagworm shell of the bagworm, except when the natural bagworm shell of the bagworm itself is used, the external shape of the bagworm egg collector is a natural pupa.
  • the same or similar shape to the shell is preferred.
  • a spindle shape including a substantially spindle shape
  • a conical shape including a substantially conical shape
  • the bagworm egg collector may have a branched tubular structure. In that case, each branch end can be provided with an accommodating portion (0203), an egg holding portion (0204), and an insertion hole (0202).
  • the size of the bagworm egg collector is not particularly limited.
  • the length in the major axis depends on the type of bagworm used, the size of the individual, and the length of the constituent parts.
  • the lengths of the accommodating portion (0203) and the egg-retaining portion (0204), which will be described later, may be taken into consideration and appropriately determined.
  • the length in the minor axis direction that is, the width (outer diameter) of the bagworm egg collector also differs depending on the type of bagworm used, the individual size, and the constituent parts.
  • the size of the insertion hole (0202), the accommodating portion (0203), and the egg-retaining portion (0204), which will be described later, may be taken into consideration and appropriately determined.
  • the width of the bagworm egg collector does not have to be uniform as a whole as in the cylindrical shape, but changes gradually from the top to the bottom of the egg-retaining portion as in the spindle shape shown in FIG. You may.
  • At least the width of the bagworm egg collector needs to be longer because the insertion hole must have an inner diameter that can accommodate the abdomen of the bagworm that accommodates it, and the containment must have an inner diameter that can accommodate the abdomen of the female moth.
  • a large species such as Eumeta varieum
  • it may be in the range of 4 mm to 19 mm, 5 mm to 18 mm, 6 mm to 17 mm, or 7 mm to 16 mm, and is medium-sized such as Eumeta varieum.
  • For seeds it may be in the range of 3 mm to 15 mm, 4 mm to 12 mm, or 5 mm to 10 mm.
  • the thickness of the bagworm egg collector is not limited. It may be determined as appropriate in consideration of the manufacturing cost, rigidity of the material, and the like.
  • the average thickness may be 0.5 mm or more, 0.6 mm or more, 0.7 mm or more, 0.8 mm or more, 0.9 mm or more, 1.0 mm or more, 1.2 mm or more, or 1.5 mm or more. It is preferably 3.0 mm or less, 2.8 mm or less, 2.5 mm or less, 2.2 mm or less, or 2.0 mm or less. Further, the thickness may be uniform as a whole, or may be different depending on the part.
  • the material of the bagworm egg collector is not particularly limited. It may be composed of a natural material, an artificial material, or a combination thereof.
  • natural materials include, for example, pupal shells of Minoga itself, metals (including alloys), minerals, animal-derived materials (including bones, teeth, fangs, horns, shells, scales, and horns), and plant-derived materials. (Including wood, bamboo, stems, and plant pieces) and the like.
  • the artificial material include synthetic resin (including thermoplastic resin, thermosetting resin and synthetic rubber), ceramics (including ceramics and hollow), glass, paper, carbon fiber and the like.
  • the synthetic resin include polyethylene, polypropylene, polystyrene, vinyl acetate, cellulose acetate, acrylic resin, polycarbonate and the like.
  • the material of the bagworm egg collector is preferably a transparent material or a translucent material in whole or in part. This is because the position of the copulation hole of the female moth housed in the bagworm egg collector, the establishment and cancellation of mating, and the presence or absence of spawning can be visually confirmed from the outside.
  • transparent material refers to a material having a very high light transmittance. Due to this property, the other side can be clearly seen through the material. Specific examples of the transparent material include glass, polyethylene, polystyrene, polycarbonate, acrylic resin and the like.
  • the term "translucent material” refers to a material that has the property of transmitting light. Although the light transmittance is lower than that of the transparent material, the state on the opposite side can be sufficiently confirmed through the material.
  • Specific examples of the translucent material include, but are not limited to, polypropylene and the like.
  • the female is housed in the same manner as the transparent material by providing fine holes in the housing part (0203) and / or the egg holding part (0204) of the egg collector.
  • the moth can be visually observed from the outside, and at the same time, the air permeability of the accommodating portion and the egg-retaining portion can be improved.
  • the diameter of the pores in such a microporous material may be 10 nm to 500 ⁇ m, 12 nm to 400 ⁇ m, 15 nm to 300 ⁇ m, 18 nm to 200 ⁇ m, 20 nm to 150 ⁇ m, 25 nm to 120 ⁇ m, or 30 nm to 100 ⁇ m.
  • the number of holes is not limited. It may be determined as appropriate in consideration of the shape, size, rigidity, and internal visibility of the housing portion and the egg holding portion of the egg collector.
  • tubular container having the above-mentioned shape, size, and material and which can be used as a bagworm egg collector
  • a tubular container having the above-mentioned shape, size, and material and which can be used as a bagworm egg collector
  • a bagworm egg collector examples include a 1.5 mL tube, a conical tube, a centrifuge tube, and the like.
  • Insertion hole The "insertion hole” (0202) is a hole opened in a tubular container for accommodating a female moth in the storage portion (0203) described below in a bagworm egg collector. After emergence, the bagworm moth makes a hole in the head side of the pupal shell so that a part of the body can be exposed from the pupal shell.
  • the insertion hole is a hole that imitates the opening in the artificial pupal shell minoga egg collector.
  • the insertion hole has an inner diameter that fits with the abdomen of the female moth of the bagworm.
  • the insertion hole is configured to be able to grip a part of the abdomen of the female moth to be inserted into the accommodation.
  • This inner diameter may be about the same as the opening diameter of the female moth pupal shell in nature.
  • the width of the abdomen of the female moth to be accommodated is sufficient.
  • the "female moth abdominal width" is the width in the cross section including the short axis orthogonal to the long axis of the female moth abdomen.
  • the abdominal width of the female moth is not constant because it expands and contracts during mating and spawning to perform peristaltic movements. Therefore, the inner diameter of the insertion hole may be the average abdominal width of the female moth.
  • the "average abdominal width of a female moth” means an average abdominal width calculated from the abdominal width of the female moth during expansion and the abdominal width of contraction. Since it is sufficient to fit the female moth abdomen and the insertion hole, this average abdominal width does not have to be an exact value and may be an approximate value.
  • the average abdominal width of the female moth is preferably the one immediately before being placed in the bagworm egg collector. Since the average abdominal width of the female moth varies depending on the type and individual of the bagworm, it may be appropriately determined according to the female bagworm of the bagworm to be used.
  • the inner diameter of the insertion hole of the Minoga egg collector of the present invention is approximately within the range of 9.0 mm ⁇ 4.0 mm, 9.0 mm ⁇ 3.0 mm, or 9.0 mm ⁇ 2.0 mm when using Ominoga, and Chaminoga is used.
  • the range may be approximately 7.5 mm ⁇ 5.5 mm, 7.5 mm ⁇ 4.0 mm, 7.5 mm ⁇ 3.0 mm, or 7.5 mm ⁇ 2.0 mm.
  • the shape of the insertion hole is not limited, but considering that the cross section of the female moth abdomen of the present invention is substantially circular or substantially elliptical, the shape of the insertion hole fitted therein is also substantially circular or substantially elliptical. Is preferable.
  • the accommodating portion The "accommodating portion” (0203) is a portion capable of accommodating the abdomen of the female moth inserted through the insertion hole (0202).
  • the containment unit is an essential component of the bagworm egg collector (0201) and has an internal space for accommodating female moths. This internal space imitates the space inside the pupal shell where the female moth lurks after emergence in the artificial pupal shell Minoga egg collector.
  • the storage portion includes an opening as the insertion hole in the bagworm egg collector and is coupled to the egg retention portion (0204) described later.
  • accommodating means accommodating all or part of the abdomen of the female moth of the bagworm in the internal space.
  • the shape of the housing is not particularly limited. As described above, in the artificial pupal shell, for example, a tubular shape is preferable in view of imitating the inside of the pupal shell.
  • the inner diameter of the accommodating portion is also not limited, but is preferably equal to or less than the maximum abdominal width of the accommodating female moth.
  • the internal space of the accommodating portion has at least a shape and size in which the abdomen of the accommodating female moth can peristaltic.
  • the length of the long axis of the accommodating part may be longer than the abdomen of the female moth to be accommodated.
  • the length may be longer than that.
  • the length of the long axis of the accommodating portion differs depending on the type of bagworm, and may be determined by appropriately considering the total length of the female moth abdomen of the accommodating species.
  • the total length of the abdomen of the female moth of Eumeta varieum is in the range of 10.0 mm to 30.0 mm, 12.0 mm to 26.0 mm, 14.0 mm to 24.0, 16.0 mm to 22.0 mm, and 5.0 mm to 26.0 mm, 14.0 mm for Eumeta varieum. It is in the range of ⁇ 24.0 and 16.0mm ⁇ 22.0.
  • Egg-retaining part The "egg-retaining part” (0204) is a part that holds eggs after spawning.
  • the egg-retaining part is an essential component of the bagworm egg collector (0201), and is connected to and integrated with the storage part (0203). However, both may be separable, or may be made of a material different from that of the accommodating portion.
  • the egg-retaining section is provided below the storage section, that is, at the bottom of the bagworm egg collector, and holds and stores the laid eggs at least until the end of egg laying by the female moth or until the eggs hatch.
  • the size of the egg-retaining part is not particularly limited as long as it has an internal space that can hold the egg.
  • the length of the internal space may have a size of, for example, 2 mm or more, 3 mm or more, 5 mm or more, 10 mm or more, or 15 mm or more, 30 mm or less, 25 mm or less, or 20 mm or less. Therefore, the length of the egg-retaining portion may be longer than or equal to the length of the internal space.
  • an extra space of several mm or more is usually formed from the tail end of the female moth to the bottom of the egg collector. This surplus space may be used as the internal space of the egg-retaining portion.
  • the shape of the egg-retaining part is not particularly limited as long as it can hold the egg.
  • a vessel having a conical shape, a pyramid shape, and a round bottom shape may be used.
  • the egg-retaining part may include an egg-receiving means as a selective means.
  • the "egg-receiving means” is a means that functions to store eggs after spawning in the egg-retaining part and to collect eggs from the bagworm egg collector. It is placed inside the egg-retaining part and is configured to be removable from the egg-retaining part.
  • the shape of the egg receiving means is not limited. It may have an internal shape of the egg-retaining portion, a bag-shaped shape along the inside of the bagworm egg collector, a sheet-shaped shape used by pushing into the egg-retaining portion, or a combination thereof.
  • the sheet-shaped egg receiving means is convenient because the egg mass inside the egg-retaining part can be easily collected by simply pulling it out from the upper part of the egg-retaining part or the upper part of the bagworm egg collecting device and spreading it.
  • the form of the egg receiving means is not particularly limited, but usually a thin layer film, cloth, non-woven fabric, net, or a combination thereof may be used so that the space inside the egg-retaining portion can be maintained. In the case of a thin film, it may have one or more holes.
  • the material of the egg receiving means is not limited.
  • synthetic resin plastic, synthetic rubber
  • natural resin natural rubber
  • cellulose paper, plant fiber
  • animal fiber hair, silk thread, leather, collagen, gelatin
  • glass glass fiber
  • carbon fiber etc.
  • a transparent material or a translucent material that can confirm the presence or absence of spawning and the state inside the egg-retaining part is preferable.
  • the wrap film for food packaging has excellent transparency and is particularly suitable.
  • Materials for food wrap films include, but are not limited to, for example, polyvinylidene chloride (PVDC), polyvinyl chloride (PVC), polyethylene (PE), or polymethylpentene (PMP).
  • FIG. 6 shows a specific example of the configuration of the egg receiving portion.
  • a and B in this figure show a bagworm egg collector (0601) in which an egg receiving means (0602) composed of a thin film is arranged in the entire interior including an egg holding portion.
  • a female bagworm (0603) is inserted into this bagworm egg collector and mated with a male individual, and then eggs are laid in the egg-retaining part.
  • the obtained egg mass (0604) is collected by removing the female individual after spawning and then pulling it upward together with the egg receiving portion (0602) as shown by D to separate it from the bagworm egg collector (0601). After separation, the egg mass (0604) can be easily collected by expanding the sheet-shaped egg receiving portion (0602) as shown by E.
  • the egg-retaining part may include a ventilation means (0207) as an optional means.
  • the "ventilation means” is an opening provided to ensure ventilation in the internal space of the egg-retaining portion.
  • the ventilation means is composed of one or more holes and / or slits that open to the outside world.
  • a hole its size is not limited, but it is preferable that its maximum width is smaller than the diameter of the egg in terms of the function of holding the egg.
  • the length and width thereof are not limited, but it is preferable that the maximum width is smaller than the diameter of the egg as in the case of the hole.
  • a hole or slit with a maximum width larger than the diameter of the egg is provided, use a breathable material such as a filter, mesh, sponge, etc. to prevent the egg from falling or the hatched first-instar bagworm from escaping. It is desirable to block. Further, the egg-retaining portion itself may be made of a breathable material.
  • the lid portion The "cover portion” (0205) is a selective component of the bagworm egg collector (0201) and is a portion that closes the insertion hole (0202).
  • a lid that closes the insertion hole is not always necessary. However, by removing the female moth after spawning and opening the insertion hole, it is possible to prevent excessive drying of the egg in the egg-retaining part and escape of the hatched first-instar bagworm by providing a lid. ..
  • the shape, size, and material of the lid are not particularly limited as long as the insertion hole can be closed.
  • the material may be a non-breathable material, for example, natural rubber, synthetic resin, or the like, but a breathable material is preferable. Examples thereof include a porous material (sponge), a filter, a plant material (paper, etc.), and a thread ball (cotton ball, hemp ball, yarn ball, silk ball, etc.).
  • the configuration for closing the insertion hole is not limited. It may be a push-in type such as a cork stopper or a rubber stopper, or a screw-in type such as a screw cap.
  • the lid portion may be an integrated type with a bagworm egg collector, or may be a detachable separate type.
  • the egg collection table "egg collection table” (0206) is a selective component of the bagworm egg collection device (0201), and is a table for arranging and fixing the egg collection device so that the insertion hole (0202) of the bagworm egg collection device faces upward. Is.
  • “Upper” here means that the insertion hole of the bagworm egg collector is larger than 0 degrees and 90 degrees or less with respect to the horizontal plane, preferably the insertion hole is 45 degrees to 90 degrees and 60 degrees to 90 degrees with respect to the horizontal plane. Degree, 70-90 degree, 80-90 degree, or 85-90 degree. 80-90 degrees is more suitable.
  • the direction of the insertion hole can be freely set.
  • the surface is covered with the scales of the female moth and the egg mass falls from the insertion hole even if there is no female moth.
  • the egg collection table may be an integrated type with a bagworm egg collector or a detachable separate type.
  • separate types include racks, stands, or cases in which one or more bagworm egg collectors can be placed and held upright or tilted.
  • the second aspect of the present invention is a method for mating bagworms.
  • the bagworm mating is artificially established by using the bagworm egg collector according to the first aspect. According to the method of the present invention, problems in the conventional artificial bagworm mating method can be solved, and bagworm mating can be easily and efficiently established.
  • the bagworm mating method of the present invention includes a mating step and a mating step as essential steps. Hereinafter, each step will be described.
  • the “fitting step” is a step of inserting a bagworm moth from the insertion hole of the bagworm egg collector according to the first aspect. As a result, the abdomen of the female moth and the insertion hole are fitted (FIG. 3A).
  • the female moth used in the method of this embodiment is an individual before spawning. It is desirable to be an uncopulated individual.
  • the type of bagworm is not limited, but a wingless and legless morphology in which the female moth has a maggot-like morphology is preferable.
  • naked female moths separated from the nest and pupal shell are used.
  • the method for separating the female moth from the nest and the pupal shell is not particularly limited.
  • the nest in which the female moth lurks is cut open with scissors or the like, the opening of the pupal shell is broken and widened, and then the female moth is pulled out using tweezers or the like.
  • the female moth may be taken out by the above method after waiting for emergence and after the female moth has emerged to make a hole in the pupal shell.
  • the "mating step” is a step of artificially inserting the abdominal end of a male moth into a minoga egg collector after the mating step to induce mating of male and female minoga. By this step, bagworm mating is established.
  • the male moth uses the same type of bagworm as the female moth used in the fitting step.
  • the male moth may be an uncopulated individual or a mated individual. Since a male moth can mate with a female moth multiple times, the male moth once used for artificial mating can be used again for artificial mating with another female moth.
  • the male moth is fitted into the Minoga egg collector, and the abdominal end of the male moth is artificially inserted between the fixed female moth abdomen and the insertion hole.
  • the insertion method is not limited.
  • a male moth may be held by hand and its abdominal end may be inserted between the female moth's abdomen and the insertion hole (Fig. 3B).
  • the male moth with the abdomen inserted then stretches its abdomen by itself, searches for the copulation hole of the female moth, and copulation is established (Fig. 3C). If the male moth cannot find the mating hole of the female moth well, the orientation and insertion position of the male moth may be finely adjusted by hand or the like to guide the male moth to facilitate mating.
  • the bagworm egg collector is made of a transparent material or a translucent material, it is convenient because it is easy to visually check the inside state.
  • the state of the female moth can be grasped unlike the conventional method.
  • an egg collector made of transparent material not only can the male moth copulator be accurately guided to the female moth's copulation hole, but also the establishment and cancellation of copulation can be visually confirmed, resulting in a leap in copulation efficiency. Can be improved.
  • a third aspect of the present invention is a method for collecting eggs of bagworm.
  • the method of the present invention is a method of obtaining a large amount of eggs from bagworms by using the bagworm egg collector according to the first aspect. According to the method of the present invention, a large amount of bagworm eggs can be easily and stably obtained.
  • the method for collecting eggs of Minoga of the present invention includes a mating step, a mating step, and an egg-laying step as essential steps, and also includes a male moth removing step and a female moth removing step as selective steps.
  • the fitting step and the mating step are the same as the fitting step and the mating step in the bagworm mating method of the second aspect. That is, the bagworm egg collection method of this aspect is a method that follows the method of mating bagworms of the second aspect. Therefore, here, the description of the steps described in detail in the second aspect will be omitted, and the spawning step and the male moth removing step characteristic of this embodiment will be described below.
  • male moth removal step is a step of removing a male individual after a mating step. It is a selective step in the bagworm egg collection method and, if necessary, prior to the next egg-laying step.
  • the male moth Normally, after the mating process, the male moth voluntarily releases the mating, returns the elongated abdomen to its original position, and separates from the female moth. Therefore, after the mating step, it may be left as it is until the next spawning step.
  • the male moth can be artificially separated and removed. In this case, after confirming that the male moth's copulation device and the female moth's copulation hole are separated and the copulation is released, the male moth is forcibly removed before it voluntarily separates. To remove the male moth, pull out the abdomen of the male moth while being careful not to remove the female moth from the bagworm egg collector, and then peel it off from the bagworm egg collector. The separated male moth can be used again in the mating step of another female moth as described above.
  • the "egg-laying process” is a process of laying eggs in the egg-retaining part of the egg-collecting device after the mating process.
  • An essential step in the bagworm egg collection method which is performed after the mating step or after the subsequent selective step of removing male moths.
  • the temperature and humidity conditions from the establishment of mating to the start of spawning and during spawning are not so strict and are not particularly limited as long as they are within the active temperature range of bagworms.
  • the temperature is preferably in the range of 20 to 25 ° C. and the humidity is preferably in the range of 45 to 70%.
  • the female moth after mating is left untreated, it will start laying eggs within 24 hours after mating, and the dropped eggs will be retained in the egg-retaining part as an egg mass.
  • Female moths lay about 1000-3000 eggs at a time, and the eggs become lumps. By recovering this egg mass, it is possible to easily and in large quantities obtain bagworm eggs, which have been difficult to obtain efficiently and stably in the past.
  • the eggs can be collected in the state of eggs, the egg cleaning process, which was difficult in the past, becomes easy. Since this treatment can be eradicated and disinfected, even if the female parent moth is infected with bacteria or viruses, it is possible to prevent vertical transmission from the female parent moth and horizontal transmission due to contact between eggs.
  • the material of the bagworm egg collector is a transparent material or a translucent material, it is possible to accurately grasp the amount of eggs laid in units of the number of eggs.
  • the laid eggs can be stored as they are in the egg-retaining section without being collected.
  • Female moth removal step is a step of removing female moths remaining in the Minoga egg collector after the egg-laying step. It is a selective step in the bagworm egg collection method and can be performed after the egg-laying step if necessary.
  • Female moths that have finished spawning use their own scales to cover and harden the surface so that the eggs do not fall.
  • the female moth itself serves as a lid for the pupal shell opening until just before hatching, and the egg mass is retained inside the pupal shell and the egg mass is prevented from falling from the opening.
  • the female moth used in the Minoga egg collector of the present invention also serves as a lid that closes the insertion hole as it is after spawning, but the Minoga egg collector does not require a lid by the female moth itself because the egg mass does not fall from the insertion hole.
  • the insect body of the female moth that is no longer needed after spawning is removed from the bagworm egg collector.
  • the removal method is not limited.
  • the female moth may be picked up from the bagworm egg collector using tweezers or the like.
  • a lid is installed in the insertion hole after removing the female moth, if necessary.
  • a fourth aspect of the present invention is a method for preparing a first-instar bagworm. According to the method of the present invention, bagworms, which have not been obtained in a unified manner other than field collection, can be easily and stably obtained as a large amount of first-instar bagworms. As a result, it becomes possible to carry out successive breeding of large-scale bagworms.
  • Methods of this embodiment is carried out by either (1) a method using a bagworm egg collector or (2) a method of collecting eggs from the bagworm egg collector.
  • the bagworm eggs obtained by the bagworm egg collection method of the third aspect using the bagworm egg collector of the first aspect are hatched in the egg-retaining part of the bagworm egg collector. It is a method of managing and recovering bagworms after hatching at the first instar. This method includes a heat insulating step and a first-instar bagworm recovery step as essential steps.
  • the "heat insulation step” is a step of insulating the bagworm egg mass.
  • the heat retention temperature is not particularly limited as long as it is a temperature that maintains or promotes the development of eggs. Normally, bagworm eggs can develop in the range of 15 ° C to 35 ° C. Therefore, it may be within this temperature range. For example, it may be in the range of 18 ° C to 32 ° C or 20 ° C to 30 ° C.
  • the egg to be kept warm in this step is an egg mass obtained by the bagworm egg collection method of the third aspect, and is kept warm as it is in the egg holding part of the bagworm egg collector used for egg collection.
  • the heat insulation may be performed at the predetermined temperature in the room where the bagworm egg collector is installed or in the incubator.
  • the heat insulation period is not limited, but usually it may be the period until the eggs hatch after spawning.
  • the period from spawning to hatching may vary depending on the type of bagworm and hatching conditions.
  • Eumeta varieum is approximately 14 to 30 days, for example, 17 to 26 days, and Eumeta varieum is approximately 11 to 30 days, for example, 14. It will be from 1 day to 27 days.
  • bagworm egg collector By using a transparent material or a translucent material for the bagworm egg collector, it is possible to visually track the state of the eggs in the egg-retaining part from the time of spawning to the time of hatching, and it is possible to visually track the state of the eggs in the egg-retaining part. When corrosion, drying, etc. occur, it can be quickly found and dealt with.
  • bagworm hatching occurs several times over several days, but by being able to visualize the process up to hatching, it is possible to accurately grasp the start and end times of hatching, and after hatching accordingly. It is also possible to prepare the breeding environment of the bagworm in advance.
  • the “first-instar bagworm recovery step” is a step of recovering the first-instar bagworm hatched in the egg-retaining section from the egg-retaining section after the heat-retaining step.
  • the recovery method is not limited, but the recovery technique of the first-instar silk moth in the sericulture industry can be applied.
  • the first-instar bagworm in the egg-retaining part may be swept up with a feather brush or a brush and moved to a place where the bagworm is raised. After migration, the first-instar bagworms start nesting immediately using the nest material. This makes it possible to obtain a large amount of first-instar bagworms, which was difficult with conventional techniques.
  • the bagworm eggs obtained by the bagworm egg collection method of the third aspect using the bagworm egg collector of the first aspect are used as the egg-retaining part of the bagworm egg collector. It is a method of collecting bagworms from the ground, managing them until hatching, and collecting bagworms after hatching at the first instar. In this method, an egg recovery step and a heat insulation step are included as essential steps, and a first-instar bagworm recovery step is included as a selection step.
  • the “egg recovery step” is a step of collecting the eggs obtained by the bagworm egg collection method of the third aspect from the egg-retaining portion.
  • the eggs after the spawning step are taken out from the insertion hole or from the other mouth of the bagworm egg collector and collected.
  • the method of collecting from the egg-retaining part is not limited.
  • the sweeping method may be applied, or the entire egg mass may be scooped up with a small spatula such as an earpick.
  • the eggs can be washed away from the egg-retaining part with water or a buffer and collected.
  • the "heat insulation step” is a step of keeping the bagworm eggs warm.
  • the heat insulating step is basically the same as the method described in the heat insulating step of (1-1), but the heat insulating step of (1-1) is performed in that the egg is not kept warm inside the egg holding section but outside the bagworm egg collector. Is different.
  • the method of keeping warm outside the bagworm egg collector is not particularly limited, but it is desirable to keep warm in a place where appropriate humidity is maintained in order to prevent excessive humidity and drying. For example, there is a method in which the collected eggs are transferred together with the egg mass onto a paper such as a silk moth spawning mount, and the mount serving as a pedestal is moistened to prevent drying while keeping the eggs warm at the heat retention temperature.
  • First-instar bagworm recovery step The recovery of the first-instar bagworm after hatching can be performed according to the method described in the first-instar bagworm recovery step of (1-2) above. For example, it may be swept up with a feather moth or the like and moved to a place that becomes a bagworm moth.
  • the bagworm eggs collected in the egg collection step can be obtained in large quantities in the breeding container without collecting the first-instar larvae hatched after the heat retention step by, for example, placing them in the breeding container. Therefore, this step is a selection step and may be carried out as needed.
  • Example 1 Artificial mating of bagworms using a bagworm egg collector> (Purpose) Artificial mating of bagworms is performed using the bagworm egg collector of the present invention. (Method and result) The last-instar larvae of Eumeta varieum collected in the field were emerged in a natural environment, and the obtained male and female moths were used.
  • the bagworm egg collector of the present invention a 1.5 mL tube (Eppendorf) with the cap cut off was used. At this time, the inner diameter of the insertion hole is 9.7 mm, and the length (the length of the long axis of the egg collector) in which the accommodating part and the egg holding part are integrated is 30 mm.
  • the female moth was taken out from the nest and pupal shell using scissors and tweezers, and the abdominal end was inserted from the insertion hole of the bagworm egg collector and fixed to the bagworm egg collector (Fig. 3A).
  • the male moth abdomen When the male moth abdomen is inserted between the insertion hole and the female moth abdomen, the male moth spontaneously extends the abdomen toward the female moth's mating hole, and the female moth also perturbs the abdomen contained in the accommodation. Then, the abdominal end of the male moth was guided to its own mating hole, and mating within the containment was established. Since the 1.5 mL tube is made of polypropylene, which is a translucent material, it was possible to visually confirm the establishment of copulation in the housing from the outside (Fig. 3C).
  • Example 2 Bagworm egg collection using a bagworm egg collector>
  • Bagworm eggs are collected using the bagworm egg collector of the present invention.
  • Method and result After mating the male and female bagworm moths in the bagworm egg collector by the method of Example 1, the male moths were manually removed from the egg collector. With the female moths left in the egg collector, the bagworm was kept warm at a temperature of 24 ° C. with the insertion hole of the bagworm egg collector facing upward. About half a day after the mating was established, the female moth started laying eggs in the egg-retaining part, and about half a day later, about 2000 eggs were obtained.
  • FIG. 4 shows a state about 3 hours after the start of spawning.
  • Example 3 Large-scale preparation of first-instar bagworm> (Purpose) A large amount of first-instar bagworms are prepared from the bagworm eggs collected using the bagworm egg collector of the present invention. (Method and result) The eggs obtained in Example 2 were kept warm in the egg-retaining part for 21 days at 24 ° C. in the egg mass state as shown in FIG. 5A. By this method, the target first-instar bagworm could be hatched in large quantities with a high hatching rate of 90% or more (Fig. 5B).
  • Example 4 Bagworm egg collector provided with egg receiving means> (Purpose) To verify the effect on egg laying and hatching in the egg receiving means of the bagworm egg collector of the present invention. (Method) For the bagworm egg collector of the present invention, a 1.5 mL tube (Eppendorf) with a cap cut off was used as in Example 1. A transparent thin film (wrap film for food packaging: poly wrap: Ube Film Co., Ltd .: polyethylene) cut into a square of 80 mm ⁇ 80 mm was pushed into this tube along the inner wall of the tube to serve as an egg receiving means. The actual state is shown in FIG. 6A. A tube without egg receiving means was used as a control.
  • Example 1 After inserting the female moth and mating with the male moth in the same manner as in Example 1, the presence or absence of spawning, the visibility of the egg in the egg-retaining part from the outside, the difficulty of collecting the egg, the number of fertilization, the number of successful hatching, and the hatching. The success rate was evaluated and calculated. (result) The results are shown in Table 1. For fertilization, an egg in which bagworm embryogenesis was confirmed was judged to be a fertilized egg. The hatching success rate was defined as the ratio of the number of successful hatchings to the number of fertilized fertilizations. From Table 1, it was clarified that the bagworm egg collector having the egg receiving means does not affect the egg laying.
  • the egg receiving means is a transparent material, it is possible to confirm the presence or absence and the state of the egg mass inside the egg-retaining part from the outside as long as the egg-retaining part is also a transparent material. Further, regarding the collection of eggs, when the egg receiving means is provided, the egg mass can be easily collected only by pulling out the egg receiving means from the bagworm egg collector and spreading it as shown in FIG. 6E. On the other hand, when there is no egg receiving means, it is difficult to perform operations such as inverting the bagworm egg collector and scraping the egg mass from the insertion hole.

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Abstract

ミノガの簡便、かつ効率的な交配方法、及びそれを実行するための装置を開発し、提供することである。また、ミノガから容易に採卵する方法を開発し、提供することである。　管状容器からなるミノガの採卵器、及びそれを用いたミノガの交配方法と採卵方法を提供する。

Description

ミノガの採卵器並びにそれを用いたミノガの交配方法及び採卵方法
　本発明は、ミノガの採卵器並びにそれを用いた簡便、かつ効率的なミノガの交配方法及び採卵方法に関する。
　ミノガ科（Psychidae）に属する蛾の幼虫であるミノムシ（bag worm)は、吐糸した糸で葉片や枝片を絡めて作製した紡錘形又は円筒形の巣（Bag nest）の中に潜み、摂食の際も巣ごと移動する等、全幼虫期を巣と共に生活する。このミノムシが吐糸するミノムシ絹糸は、極めて有用性の高い新規動物性天然繊維として、近年、注目を集めている（特許文献１及び非特許文献１）。
　ミノムシ絹糸を産業化する上で、ミノムシの大量飼育及び累代飼育等の飼育技術の確立は不可欠である。しかし、ミノムシ絹糸産業は黎明期を迎えたばかりであり、飼育技術は未だ開発途上にある。ミノムシの入手は、専ら野外採集に依存しており、ミノムシ絹糸の産業化における大きな障害となっている。それ故に、ミノガの人工交配技術及び産卵技術の開発は急務となっている。ミノムシ飼育には、同じチョウ目の幼虫であり、既に養蚕業で確立されたカイコの飼育技術を適用することが考えられるが、ミノガの交尾様式と産卵様式は、カイコガのそれと著しく異なるため適用することができない。
　カイコガの場合、雌成虫個体（本明細書では、しばしば「雌蛾」と表記する）と雄成虫個体（本明細書では、しばしば「雄蛾」と表記する）が接触可能となるように、羽化後の雌雄の蛾を箱等の制限された空間内に入れるだけで自然交尾を誘導することができる。また、雌雄の蛾の腹部末端を人為的に強制接触させて交尾を成立させるハンドペアリング法により、人工交配することも可能である。さらに、交尾後の雌蛾を紙の上に配置すれば、雌蛾は後食することなく、紙上に産卵を開始するため、採卵は産卵後の紙を回収するだけで足り、非常に容易である。
　一方、ミノガの場合、多くの種で成虫の形態が雌雄で著しく異なる。雄蛾はいずれの種も一般的な蛾の形態を有しているが、雌蛾は一見すると蛾とは認識できない極めて特異な形態を有している。特に、オオミノガやチャミノガ等のようにミノガ科（Psychidae）の中で進化的に新しい種では、雌蛾は運動器官や感覚器のほとんどを退化させており、翅、脚、複眼、触覚、口器等を失った蛆虫様の形態を有する（図１A-ａ）。
　また、ミノガは、幼虫から蛹への変態時に、カイコのような繭を作製せずに幼虫期に過ごした巣の中で蛹化する。前蛹期に巣の中で頭部を巣の下方に向けて逆さ状態で蛹化し、羽化した雄蛾は巣下端に穴を開けて脱出するが、雌蛾は羽化後も蛹殻（図１A-ｂ）を脱ぎ捨てず、また移動能力を完全に喪失しているため外界に出ることなく一生を巣内で終える。
　上記のような特殊な生態のため、ミノガの交尾様式や産卵様式も極めて特異である。雌蛾は、巣の下端開口部から頭部を出して性フェロモンを放出し、それに誘引された雄蛾は、雌蛾が潜む巣（図１Ｂ-ｃ）に到達後、交尾のため巣の下端開口部より腹部を挿入する（図１Ｂ-ｄ）。ところが、雌蛾の交尾孔は巣の最奥部の、しかも蛹殻内部に位置している。そこで、雄蛾は、腹部を伸長して巣内の雌蛾腹部と蛹殻との間に差し込み、さらに雌蛾腹部先端の交尾孔を探り当てて交尾を成立させる（図１Ｃ）。交尾後の雌蛾は蛹殻内に産卵し、卵は孵化まで前記蛹殻内で保持される。
　ミノガも人工交配は可能である。ただし、カイコガのようなハンドペアリング法ではなく、雌蛾が潜む巣の下端開口部に雄蛾の腹部を人為的に差し込む方法が用いられているに過ぎない（非特許文献２）。この方法は、巣内の雌蛾の状態を把握できないだけでなく、雌蛾の交尾孔の位置が巣の外部から確認できないため、雄蛾の交尾器を雌蛾の交尾孔に的確に誘導できず、交尾効率が非常に低いという問題があった。また、交尾の成立と解除も目視で確認できないため、交尾が未成立でもペアリングを解除してしまい受精卵を採取できない問題や、逆に交尾中の個体の強制的なペアリング解除によって雌の交尾孔を損傷させてしまう等の問題があった。さらに、産卵の有無も巣の外部からは確認できず、交配後の雌蛾の巣を切り開き、蛹殻内部の卵塊を確認なければならなかった。もしも、産卵前に開巣した場合には、再度の採卵ができないという問題もあった。
WO2019/003364
大崎茂芳, 2002, 繊維学会誌（繊維と工業）, 58: 74-78 澤田定広, 荒川良, 2002, Jpn.J.Ent（NS）,5（4）:111-119
　本発明の課題は、ミノガの簡便、かつ効率的な交配方法、及びそれを実行するための装置を開発し、提供することである。
　本発明の課題は、ミノガから容易に採卵する方法、及び初齢ミノムシを大量に調製する方法を開発し、提供することである。
　上記課題を解決するために、本発明者らは、まず、X線装置を用いて蛹殻内部を透視する方法を開発した。この方法であれば巣の外部からであっても巣内、及び蛹殻内の様子を観察できる。しかし、X線装置は機材の搬入、及び設置が非常に煩雑な上に、透視の実行までに時間や手間を要する。また、装置のみならずランニングコストも非常に高額な上、X線照射による生体や細胞への影響も排除できない。したがって、効率面やコスト面において事業実施をする上で、現実的とはいえなかった。
　続いて、本発明者らはミノガの雌蛾を巣及び蛹殻から取り出した後、その雌蛾と雄蛾の腹部末端を直接接触させる強制交尾を試みた。カイコガの場合、雄蛾の腹部末端にある把握器をピンセット等で開いて雌蛾の腹部末端を把持させることで強制的に交尾を成立させることができる。ところが、ミノガの雄蛾は、把握器のような雌の腹部を把握する形状の器官を持たない。そのため、カイコガのようなハンドペアリング法では交尾成功率が極めて低かった。
　そこで、雌蛾を巣から取り出した後、蛹殻を保持した状態で交配を行った。その結果、非常に高い確率で交尾が成立した。これにより、ミノガの交尾には巣は必要ないが、雌蛾が蛹殻を保持していることが重要なことが明らかとなった。また、この蛹殻は人工物であっても天然の蛹殻と同様の効果を有することがわかった。それ故に、透明素材や複数の微細孔を有する不透明素材の疑似蛹殻を用いれば、雌蛾の交尾孔の位置を外部から確認できるので、角度や向きを微調整して、雄蛾の交尾器を的確に雌蛾の交尾孔に誘導することができる。さらに、交尾の成立や解除、及び産卵の有無も目視で確認できる。これによって、交尾過程が観察でき、交尾成功率や採卵効率を飛躍的に向上させることが可能となった。また、人工蛹殻内に着脱可能な補助部材を配置することで、人工蛹殻からの卵の取り出しが容易になる。さらに、人工蛹殻に通気孔を備えることで、人工蛹殻内の卵が蒸れやカビの発生を抑えることができる。加えて、得られた卵の洗浄処理が容易になるため、除菌や消毒により経卵伝染を防除することができる。本発明は、それらの新規知見に基づくものであり、以下を提供する。
　（１）管状容器からなるミノガの採卵器であって、ミノガ雌成虫が嵌合する内径を有する挿入孔、前記雌成虫の腹部の全部又は一部を収容可能な収容部、及び産卵後の卵を保持する保卵部を有する前記採卵器。
　（２）前記保卵部が通気手段を有する、（１）に記載の採卵器。
　（３）前記保卵部がその内部に産卵後の卵を収容及び回収するための着脱可能な受卵手段を有する、（１）又は（２）に記載の採卵器。
　（４）前記挿入孔を塞ぐ蓋部を有する、（１）又は（２）に記載の採卵器。
　（５）前記管状容器の全部又は一部が透明素材又は透光性素材で構成されている、（１）～（３）のいずれかに記載の採卵器。
　（６）前記受卵手段が透明素材又は透光性素材からなる薄層フィルムで構成されている、（１）～（５）のいずれかに記載の採卵器。
　（７）前記挿入孔が上方を向くように前記採卵器を配置する採卵台を備える、（１）～（４）のいずれかに記載の採卵器。
　（８）ミノガの交配方法であって、ミノガ雌成虫個体を（１）～（７）のいずれかに記載のミノガの採卵器の挿入孔に腹部末端から挿入し、その腹部を前記挿入孔に嵌合させる嵌合工程、及び前記挿入孔と前記雌成虫個体腹部の間にミノガ雄成虫個体の腹部末端を挿入して交尾させる交尾工程を含む前記交配方法。
　（９）前記ミノガは、雌成虫個体が無翅無脚形態種である、（８）に記載の交配方法。
　（１０）前記雌成虫個体が未交尾個体である、（８）又は（９）に記載の交配方法。
　（１１）ミノガの採卵方法であって、巣及び蛹殻から分離したミノガ雌成虫個体を（１）～（７）のいずれかに記載のミノガの採卵器の挿入孔に腹部末端から挿入し、その腹部を前記挿入孔に嵌合させる嵌合工程、前記挿入孔と前記雌成虫個体腹部の間にミノガ雄成虫個体の腹部末端を挿入して交尾させる交尾工程、及び前記採卵器の保卵部内に産卵させる産卵工程を含む前記採卵方法。
　（１２）産卵工程後の雌個体を除去する雌除去工程をさらに含む、（１１）に記載の採卵方法。
　（１３）初齢ミノムシの調製方法であって、（１１）又は（１２）に記載のミノガの採卵方法で得られたミノガの卵を前記保卵部内で保温する保温工程、及び孵化した初齢ミノムシを回収する初齢ミノムシ回収工程を含む前記調製方法。
　（１４）初齢ミノムシの調製方法であって、（１１）又は（１２）に記載のミノガの採卵方法で得られたミノガの卵を前記保卵部から回収する卵回収工程、及び回収した卵を保温する保温工程を含む前記調製方法。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2020-205316号の開示内容を包含する。
　本発明のミノガ採卵器を用いたミノガの交配方法によれば、ミノガの簡便、かつ効率的な人工交配が可能となる。
　本発明のミノガ採卵器を用いたミノガの採卵方法によれば、ミノガの卵を容易、かつ大量に入手することができる。
　本発明のミノガ初齢ミノムシの調製方法によれば、初齢ミノムシを簡便、かつ大量に調製することができる。
A：巣から取り出したオオミノガの雌蛾の形態（ａ）及びその蛹殻（ｂ）を示す図である。B：オオミノガの野外での交尾画像である。図中、cは雌蛾の入った巣を、またｄは雄蛾を示す。C：交尾中のオオミノガの雌蛾巣内を透過した概念図である。オオミノガ等の雌蛾（0103）は、頭部（0105）を巣（0101）の開口部がある下方に向けて、巣内の蛹殻（0102）内に潜み、羽化後も幼虫期の巣内で一生を過ごす。雄蛾（0104）は、飛翔が可能であり、雌蛾が発する性フェロモンに引き寄せられて雌蛾が潜む巣に辿り着く。雌蛾の巣に到達した雄蛾は、巣下方の開口部から腹部（0106）を巣内に挿入し、腹部を伸長させながら、蛹殻の最奥部の雌蛾腹部末端の交尾孔を探り当てて、交尾器を交尾孔に挿入し、交尾が成立する。 本発明のミノガ採卵器の概念図である。本発明のミノガ採卵器に配置した時の雌蛾と産卵された卵塊を破線で示す。 本発明のミノガ採卵器を用いたオオミノガの人工交配を示す図である。A：オオミノガの雌蛾を本発明のミノガ採卵器に配置したときの図である。この図では、1.5mLチューブを改良して作製したミノガ採卵器を示している。B：Aで示した雌蛾とミノガ採卵器の間に雄蛾の腹部末端を挿入し、人工交配を行っている図である。C：本発明のミノガ採卵器で交尾中のオオミノガのペアを示す図である。図中、矢印で交尾が成立しているのがわかる。 本発明のミノガ採卵器の保卵部に産卵するオオミノガの雌蛾腹部末端（0401）と産卵された卵塊（0402）を示す図である。卵塊は平均1000～3000個の卵からなる。 本発明のミノガ採卵器を用いたオオミノガの初齢ミノムシの調製を示す図である。A：本発明のミノガの採卵方法によって採卵された大量のオオミノガの卵塊を本発明のミノガ採卵器の保卵部で保温している図である。B：本発明の初齢ミノムシの調製方法により、保温工程後に孵化したオオミノガの初齢ミノムシを示す図である。ミノガ採卵器の保卵部内の大量の初齢ミノムシの他、ミノガ採卵器外部に脱出した初齢ミノムシ（矢印）を示している。初齢ミノムシは、この後、初齢ミノムシ回収工程により回収される。この図のミノガ採卵器では、通気手段としてスポンジ栓が使用されている。 本発明のミノガ採卵器における受卵手段の構成、及びその使用概念図を示す図である。Aは受卵手段を備えた本発明のミノガ採卵器の一実施形態を示した図である。この図では、薄層フィルムを受卵手段として採卵器に内部全体に押し込んだ構成を示している。B～Dは、雌ミノガの配置（B)、産卵（C)、及び卵塊の回収（D)を図示している。Eは、ミノガ採卵器から取り外した受卵手段を広げた図で、回収した卵塊（0604）を示している。
１．ミノガ採卵器
１－１．概要
　本発明の第１の態様は、ミノガの採卵器である。本発明の採卵器は、管状容器で構成されている。本発明の採卵器によれば、ミノガの人工交配を容易にし、その交尾効率を向上させるだけでなく、容易かつ安定的な採卵が可能になる。
１－２．用語の定義
　本明細書で頻用する以下の用語について定義する。
　「ミノガ」とは、チョウ目（Lepidoptera）ミノガ科（Psychidae）に属する蛾の総称をいう。本明細書では、特段の断りのない限り、ミノガと記載した場合には、雌雄を問わずミノガの成虫を指すものとする。また、本明細書では、しばしば「雌成虫（個体）」及び「雄成虫（個体）」を、それぞれ「雌蛾」及び「雄蛾」と表記する。
　本明細書で対象とするミノガの種類は限定しないが、雌蛾が無翅無脚形態種であることが好ましい。ここで、「無翅無脚形態種」とは、雌蛾が翅や脚を退化させた形態を有するミノガの種をいう。この無翅無脚形態種は、さらに、複眼、触覚、口器等の感覚器も退化させ、外部形態が蛆虫状となる種を含む。そのような無翅無脚形態種を含む属として、限定はしないが、例えば、Eumeta、Mahasena、Metura、Thyridopteryx等に属する種が好ましい。具体的には、例えば、オオミノガ（Eumeta japonica）、チャミノガ（Eumeta minuscula）、ニトベミノガ（Mahasena aurea）、saunders case moth (Metura elongatus)、evergreen bagworm (Thyridopteryx ephemeraeformis)が挙げられる。
　「ミノムシ」とは、種類、雌雄、及び齢を問わず、ミノガの幼虫の総称をいう。本明細書において「初齢ミノムシ」とは、孵化後、最初の脱皮を行うまでの期間のミノムシをいう。
　本明細書において「（ミノムシの）巣」とは、ミノムシが営巣した巣であって、ミノムシが自ら吐糸した絹糸とそれで綴った葉片や枝片等の素材で構成されている。巣はミノムシの全身を包むことのできる袋状で、紡錘形、円筒形、円錐形等の形態をなす。ミノガは、幼虫期には基本的にこの巣内に潜伏し、原則として摂食時や移動時にのみ巣の開口部から虫体の一部を露出させる。また、脱皮のみならず、蛹化も巣の中で行われる。さらに、ミノガの一部の種の雌蛾は、羽化も含め生涯を通して巣内で生活し、交尾も巣の下端開口部を介して行われる。
　本明細書において「蛹殻」とは、蛹期における外殻をいう。本明細書では、特段の断りのない限り、ミノガの蛹殻を指す。蛹殻はクチクラで構成され、図１A-ｂに示すように、ミノガの羽化脱出後も元の紡錘形状を保持した剛性を有する。通常、昆虫の蛹殻は羽化と共に破棄されるが、ミノガの一部の種の雌蛾では、羽化後も頭部と胸部の一部を露出可能な開口部を開けた後、蛹殻を脱ぎ捨てることなく、その内部に留まる。また、そのような生態を有するミノガでは、蛹殻が産卵床となり、雌蛾は蛹殻内に産卵する。
１－３．構成
　本発明のミノガ採卵器の構成を図２に示す。この図で示すように、本発明のミノガ採卵器（0201）は、挿入孔（0202）、収容部（0203）、及び保卵部（0204）を必須の構成要素として含み、蓋部（0205）又は産卵台（0206）を選択的構成要素として含む。以下、それぞれの構成について、具体的に説明をする。
１－３－１．ミノガ採卵器
　（１）構造
　本発明のミノガ採卵器（0201）は、管状容器で構成されている。本明細書において「管状容器」とは、管状の形状を有し、ミノガの雌成虫を収容し得る内部空間を備えた容器をいう。また、ミノガ採卵器において、管状容器の少なくとも一端は開口しており、前記内部空間はその開口部を介して外界と接する。
　ミノガ採卵器の外部形状は、後述する収容部（0203）、保卵部（0204）、及び挿入孔（0202）を備えた管状形状である限り、特に限定はしない。例えば、ミノガ採卵器の短軸断面が全体にわたりほぼ同一な並行管形状（例えば、円柱形状、又は角柱形状）、短軸断面が端部に向かって徐々に小さくなる錐体形状（例えば、紡錘形状、円錐形状、又は角錐形状）、又はその組み合わせであってもよい。ここで「短軸断面」とは、ミノガ採卵器の長軸に直交する短軸を含む断面をいう。本発明のミノガ採卵器は、ミノガ自身の天然蛹殻を使用する場合を除いて、ミノガの蛹殻を模した人工蛹殻であることを鑑みれば、ミノガ採卵器の外部形状は、天然の蛹殻に同一又は類似の形状が好ましい。例えば、紡錘形状（略紡錘形状を含む）又は円錐形状（略円錐形状を含む）が挙げられる。又は、ミノガ採卵器が枝分かれした管状構造であってもよい。その場合、それぞれの分岐端部に収容部（0203）、保卵部（0204）、及び挿入孔（0202）を備えることができる。
　ミノガ採卵器の大きさは特に限定はしない。長軸方向の長さは、使用するミノガの種類、個体サイズ、及び構成する部の長さによって異なる。後述する収容部（0203）、及び保卵部（0204）の長さを勘案し、適宜定めればよい。通常は1.5cm以上、2.0cm以上、2.5cm以上、3.0cm以上、3.5cm以上、4.0cm以上、又は4.5cm以上、10cm以下、9cm以下、8cm以下、7cm以下、6.5cm以下、6.0cm以下、5.5cm以下、又は5.0cm以下であればよい。一方、短軸方向の長さ、すなわちミノガ採卵器の幅（外径）も使用するミノガの種類、個体サイズ、及び構成する部によって異なる。後述する挿入孔（0202）、収容部（0203）、及び保卵部（0204）における大きさを勘案し、適宜定めればよい。また、ミノガ採卵器の幅は、円筒形のように全体で均一である必要はなく、図２で示す紡錘型のように、保卵部の上部から底部に向かって徐々に短くなるように変化してもよい。挿入孔は収容するミノガ雌蛾腹部を嵌合可能な内径を有し、かつ収容部は雌蛾腹部を収容可能な内径を有する必要があるため、少なくともミノガ採卵器の幅はそれらよりも長い必要がある。限定はしないが、例えば、オオミノガのような大型種の場合、4mm～19mmの範囲、5mm～18mmの範囲、6mm～17mmの範囲、又は7mm～16mmの範囲であればよく、チャミノガのような中型種の場合、3mm～15mm、4mm～12mm、又は5mm～10mmの範囲にあればよい。
　ミノガ採卵器の厚さは限定しない。製造コスト、素材の剛性等を勘案し、適宜定めればよい。例えば、平均厚は0.5mm以上、0.6mm以上、0.7mm以上、0.8mm以上、0.9mm以上、1.0mm以上、1.2mm以上、又は1.5mm以上であればよい。好ましくは3.0mm以下、2.8mm以下、2.5mm以下、2.2mm以下、又は2.0mm以下である。また、全体が均一な厚さであってもよいし、部によって異なる厚さであってもよい。
　（２）材質
　ミノガ採卵器の材質は、特に限定はしない。天然素材又は人工素材、それらの組み合わせで構成されていてもよい。ここで、天然素材には、例えば、ミノガ自身の蛹殻、金属（合金を含む）、鉱物、動物由来素材（骨、歯、牙、角、甲羅、鱗、及び角を含む）、植物由来素材（木材、竹、茎、植物片を含む）等が挙げられる。人工素材には、例えば、合成樹脂（熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂、合成ゴムを含む）、陶磁器（セラミックス、ホーローを含む）、ガラス、紙、炭素繊維等が挙げられる。また、合成樹脂には、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、酢酸ビニル、酢酸セルロース、アクリル樹脂、及びポリカーボネート等が挙げられる。
　ミノガ採卵器の材質は、その全部又は一部が透明素材又は透光性素材で構成されていることが好ましい。これは、ミノガ採卵器内に収容した雌蛾の交尾孔の位置、交尾成立とその解除、並びに産卵の有無を外部から目視により確認できるためである。
　本明細書において「透明素材」とは、光透過率が非常に高い性質を有する素材をいう。この性質により、素材を通して反対側がはっきりと透けて見える。透明素材の具体例として、ガラス、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、アクリル樹脂等が挙げられる。
　本明細書において「透光性素材」とは、光を透過する性質を有する素材をいう。透明素材に比べて光透過率が低いものの、その素材を通して反対側の状態を十分に確認することができる。透光性素材の具体例として、限定はしないが、ポリプロピレン等が挙げられる。
　一方、不透明素材や非透光性素材であっても、採卵器の収容部（0203）及び／又は保卵部（0204）に微細な孔を設けることによって、透明素材等と同様に収容した雌蛾を外部から目視することができ、同時に収容部や保卵部の通気性を向上させることができる。そのような微細多孔素材における孔の直径は10nm～500μm、12nm～400μm、15nm～300μm、18nm～200μm、20nm～150μm、25nm～120μm、又は30nm～100μmであればよい。孔の数は限定しない。採卵器の収容部及び保卵部の形状、大きさ、剛性、及び内部視認度合を勘案し、適宜定めればよい。
　上記に挙げた形状、大きさ、及び材質を有し、ミノガ採卵器として利用できる管状容器の例として、1.5ｍLチューブ、コニカルチューブ、遠心管等が挙げられる。
１－３－２．挿入孔
　「挿入孔」（0202）は、ミノガ採卵器において、雌蛾を次述の収容部（0203）に収容するため管状容器に開口した孔である。ミノガの雌蛾は、羽化後に、蛹殻の頭部側に孔を開けて、蛹殻から体の一部を露出可能な状態にする。挿入孔は、人工蛹殻のミノガ採卵器において、その開口部を模した孔となる。
　挿入孔は、ミノガの雌蛾腹部と嵌合する内径を有する。挿入孔は、収容部へ挿入される雌蛾の腹部の一部を把持可能なように構成されている。この内径は、自然界における雌蛾の蛹殻の開口部直径と同程度でよい。通常は、収容する雌蛾の腹幅にすれば足りる。「雌蛾の腹幅」とは、雌蛾腹部の長軸に直交する短軸を含む断面における幅である。ただし、雌蛾の腹幅は交尾時や産卵時に膨張及び収縮させて蠕動運動を行うため一定ではない。したがって、挿入孔の内径は、雌蛾の平均腹幅とすればよい。「雌蛾の平均腹幅」とは、雌蛾腹部の膨張時の腹幅と収縮の腹幅から算出される平均的な腹幅をいう。雌蛾腹部と挿入孔を嵌合できれば足りるため、この平均腹幅は厳密な値である必要はなく概算値で良い。雌蛾の平均腹幅はミノガ採卵器に収容直前のものであることが好ましい。雌蛾の平均腹幅はミノガの種類や個体によっても異なるため、使用するミノガの雌蛾に合わせて適宜定めればよい。例えば、限定はしないが、オオミノガであれば3.0mm～15.0mm、4.0mm～12.0mm、又は5.0mm～9.0mmであり、チャミノガであれば、2.0mm～13.0mm、2.5mm～12.5mm、又は3.0mm～12.0mmである。したがって、本発明のミノガ採卵器の挿入孔の内径は、オオミノガを使用する場合にはおおよそ9.0mm±4.0mm、9.0mm±3.0mm、又は9.0mm±2.0mmの範囲内、またチャミノガを使用する場合には、おおよそ7.5mm±5.5mm、7.5mm±4.0mm、7.5mm±3.0mm、又は7.5mm±2.0mmの範囲内となるようにすればよい。
　挿入孔の形状は限定しないが、本発明の雌蛾腹部の断面が略円形又は略楕円形であることを鑑みれば、それと嵌合する挿入孔の形状も同様に略円形又は略楕円形であることが好ましい。
１－３－３．収容部
　「収容部」（0203）は、前記挿入孔（0202）から挿入した雌蛾の腹部を収容可能な部である。収容部は、ミノガ採卵器（0201）における必須の構成要素であって、雌蛾を収容するための内部空間を有する。この内部空間は、人工蛹殻のミノガ採卵器においては雌蛾が羽化後に潜む蛹殻内部の空間を模す。収容部は、ミノガ採卵器において、前記挿入孔としての開口部を含み、また後述の保卵部（0204）と結合する。
　本明細書において「収容する」とは、前記内部空間にミノガの雌蛾腹部の全部又は一部を収めることをいう。
　収容部の形状は特に限定はしない。前述のように人工蛹殻では、蛹殻内部を模していることを鑑みれば、例えば、筒状が好ましい。収容部の内径も限定されるものではないが、収容する雌蛾の最大腹幅以下が好ましい。
　収容部の内部空間は、少なくとも収容した雌蛾の腹部が蠕動運動可能な形状と大きさを有することが好ましい。
　一方、収容部の長軸の長さは、収容する雌蛾腹部以上の長さがあればよい。例えば、雌蛾腹部の3/4を収容部に収容する場合、その長さ以上であればよい。また、雌蛾腹部の全部を収容する場合、腹部全長以上の長さがあればよい。したがって、収容部長軸の長さは、ミノガの種類によって異なり、収容する種の雌蛾腹部の全長から適宜勘案して決定すればよい。例えば、オオミノガの雌蛾腹部の全長は10.0mm～30.0mm、12.0mm～26.0mm、14.0mm～24.0、16.0mm～22.0mmの範囲内であり、チャミノガであれば5.0mm～26.0mm、14.0mm～24.0、16.0mm～22.0の範囲内である。
１－３－４．保卵部
　「保卵部」（0204）は、産卵後の卵を保持する部である。保卵部は、ミノガ採卵器（0201）における必須の構成要素であって、前記収容部（0203）と連結されて、一体化されている。ただし、両者は分離可能であってもよいし、また収容部と異なる材質で構成されていてもよい。
　保卵部は、前記収容部の下方、すなわちミノガ採卵器の底部に備えられ、産卵された卵を、少なくとも雌蛾による産卵終了時まで、又は卵が孵化するまで保持、及び保管する。
　保卵部の大きさは、卵を保持できる内部空間を有した大きさであれば特に限定はしない。内部空間の長さは、例えば2mm以上、3mm以上、5mm以上、10mm以上、又は15mm以上、30mm以下、25mm以下、又は20mm以下となる大きさを有していればよい。したがって、保卵部の長さは、前記内部空間の長さ以上あればよい。
　前記収容部と保卵部が一体化されている場合では、収容部に雌蛾を収容した際に雌蛾の尾端から採卵器底部までに、通常、数mm以上の余剰空間ができる。この余剰空間を保卵部の内部空間としてもよい。
　保卵部の形状は、卵を保持できれば特に限定はしない。例えば、円錐形状、角錐形状、丸底形状を有する器であればよい。
　保卵部は、選択的手段として受卵手段を含んでいてもよい。「受卵手段」とは保卵部内で産卵後の卵の収容、及びミノガ採卵器から卵の回収に機能する手段である。保卵部内部に配置され、保卵部からの着脱が可能なように構成されている。
　受卵手段の形状は限定しない。保卵部内部形状、又はミノガ採卵器内部に沿った袋状でもよいし、保卵部内部に押し込む形で使用するシート状、又はその組み合わせであってもよい。例えば、シート状の受卵手段は、保卵部上部、又はミノガ採卵器上部から引き抜き、広げるだけで保卵部内部の卵塊を容易に回収できるので便利である。
　受卵手段の形態も特に限定はしないが、保卵部内部の空間を維持できるように、通常は薄層フィルム、布、不織布、網、又はその組み合わせであってもよい。薄層フィルムの場合、1又は複数の孔を有していてもよい。
　受卵手段の素材は限定しない。例えば、合成樹脂（プラスチック、合成ゴム）、天然樹脂（天然ゴム）、セルロース（紙、植物繊維）、動物繊維（毛、絹糸、皮革、コラーゲン、ゼラチン）、ガラス（グラスファイバー）、及びカーボンファイバー等が挙げられる。また産卵の有無や保卵部内部の状態を確認できる透明素材、又は透光性素材が好ましい。食品包装用ラップフィルムは、透明性に優れており特に好適である。食品用ラップフィルムの素材には、例えば、ポリ塩化ビニリデン（PVDC)、ポリ塩化ビニル（PVC）、ポリエチレン（PE)、又はポリメチルペンテン（PMP）が知られるが、これらに限定はしない。
　受卵部の構成の具体例を図６に示す。この図のＡ及びＢでは、薄層フィルムで構成された受卵手段（0602）を保卵部を含む内部全体に配置したミノガ採卵器（0601）を示している。Ｂ及びＣで示すように、このミノガ採卵器にミノガの雌個体（0603）を挿入して雄個体と交尾させた後、保卵部内に産卵をさせる。得られた卵塊（0604）の回収は、産卵後の雌個体を除去した後に、Ｄで示すように受卵部（0602）ごと上方に引き上げて、ミノガ採卵器（0601）と分離する。分離後、Ｅで示すようにシート状の受卵部（0602）を広げれば、卵塊（0604）を容易に回収することができる。
　保卵部は、選択的手段として通気手段（0207）を含んでいてもよい。「通気手段」とは、保卵部の内部空間における通気性を確保するために設置される開口部である。通気手段は、外界に開口する一又は複数の孔、及び／又はスリットによって構成されている。孔の場合、その大きさは限定しないが、卵を保持する機能上、その最大幅は卵の直径よりも小さいことが好ましい。また、スリットの場合、その長さや幅は限定しないが、孔と同様に最大幅は卵の直径よりも小さいことが好ましい。卵の直径よりも大きい最大幅の孔やスリットを備える場合、卵の落下や孵化した初齢ミノムシの脱出等を防ぐため、通気性のある素材、例えば、フィルター、メッシュ、スポンジ等で孔やスリットを塞ぐことが望ましい。また、保卵部そのものが通気性素材で構成されていてもよい。
　通気手段を備えることで、保卵部内の温度上昇や過湿状態を回避することが可能となる。その結果、蒸れ等による卵の腐敗やカビの発生のような卵の発生段階に望ましくない影響を及ぼす事象を防ぐことができる。
１－３－５．蓋部
　「蓋部」（0205）は、ミノガ採卵器（0201）における選択的な構成要素で、前記挿入孔（0202）を塞ぐ部である。挿入孔を塞ぐ蓋は必ずしも必要ではない。しかし、産卵後の雌蛾を除去し、挿入孔が開放されることによる保卵部内の卵の過度な乾燥や、孵化した初齢ミノムシの逃亡を、蓋部を備えることで防止することができる。
　蓋部は挿入孔を塞ぐことができれば、その形状、大きさ、素材は特に限定はしない。例えば、挿入孔の直径以上の幅を有し、収容部以下の長さがあればよい。素材は非通気性素材、例えば、天然ゴム、合成樹脂等であってもよいが、通気性素材が好ましい。例えば、多孔質素材（スポンジ）、フィルター、植物素材（紙等）、糸玉（綿玉、麻玉、毛糸玉、絹玉等）が挙げられる。挿入孔を塞ぐ構成も限定はしない。コルク栓やゴム栓のような押し込み式であってもよいし、スクリューキャップのようなねじ込み式であってもよい。
　蓋部は、ミノガ採卵器と一体化型でもよいし、着脱可能な分離型でもよい。
１－３－６．採卵台
　「採卵台」（0206）は、ミノガ採卵器（0201）における選択的な構成要素で、ミノガ採卵器の挿入孔（0202）が上方を向くように前記採卵器を配置し、固定する台である。
　ここで言う「上方」とは、ミノガ採卵器の挿入孔が水平面に対して0度より大きく90度以下であること、好ましくは挿入孔が水平面に対して45度～90度、60度～90度、70～90度、80～90度、又は85～90度であることをいう。80～90度がより好適である。
　自然界では、ミノガの蛹殻は下方に向かって開口している。蛹殻底部は、その開口部よりも上部に位置するため、蛹殻に産卵された卵塊は、そのままでは開口部より落下し得る。そこで、雌蛾は産卵後に卵が落下しないよう自らの鱗粉で卵の表面を覆い固めるとともに、自らの身体で蛹殻開口部を塞ぎ、卵の保護に務め、孵化直前に死亡し、巣から落下する。孵化した初齢幼虫は、開放された蛹殻開口部及び巣の下方開口部を介して外界に脱出する。
　一方、本発明のミノガ採卵器には、挿入孔の方向を自由に設定できる。つまり、採卵台により蛹殻底部に相当する保卵部を上方に向くように設置することで、雌蛾の鱗粉による表面の覆い固めや雌蛾の存在がなくても挿入孔からの卵塊の落下がないという大きな利点がある。
　採卵台は、ミノガ採卵器と一体化型でもよいし、着脱可能な分離型でもよい。分離型の例として、例えば、ミノガ採卵器を1つ以上配置し、それを直立状態又は傾斜状態で保持可能なラック、スタンド、又はケースが挙げられる。
２．ミノガの交配方法
２－１．概要
　本発明の第２の態様は、ミノガの交配方法である。本発明の方法は、第１態様に記載のミノガ採卵器を用いて、ミノガの交尾を人為的に成立させる。本発明の方法によれば、従来のミノガの人工交配方法における問題点を解決し、容易、かつ効率的にミノガの交尾を成立させることができる。
２－２．方法
　本発明のミノガの交配方法は、嵌合工程、及び交尾工程を必須の工程として含む。以下、それぞれの工程について説明する。
２－２－１．嵌合工程
　「嵌合工程」は、ミノガの雌蛾を第１態様に記載のミノガ採卵器の挿入孔から挿入する工程である。これにより雌蛾腹部と前記挿入孔が嵌合する（図３A）。
　本態様の方法に使用する雌蛾は産卵前の個体である。未交尾個体であることが望ましい。ミノガの種類は限定しないが、雌蛾が蛆状の形態を有する無翅無脚形態種が好適である。
　本工程では、巣及び蛹殻から分離した裸状態の雌蛾を用いる。巣及び蛹殻から雌蛾を分離する方法は、特に限定はしない。例えば、雌蛾を傷つけないように、雌蛾が潜む巣をハサミ等で切り開き、蛹殻は開口部を崩し広げた後、ピンセット等を用いて、雌蛾を引き出す方法が挙げられる。また、蛹期に巣から蛹を取り出した後、羽化を待ち、雌蛾が羽化して蛹殻に孔を開けた後で、前記方法で雌蛾を取り出してもよい。
　裸状態にした雌蛾をミノガ採卵器の挿入孔から挿入し、腹部が挿入孔と嵌合するまで押し込めばよい。
２－２－２．交尾工程
　「交尾工程」は、嵌合工程後のミノガ採卵器に雄蛾の腹部末端を人為的に挿入して雌雄のミノガの交尾を誘導する工程である。本工程により、ミノガの交尾が成立する。
　本態様の方法で、雄蛾は前記嵌合工程で使用する雌蛾と同種のミノガを使用する。雄蛾は、未交尾個体、又は交尾済み個体を問わない。雄蛾は複数回雌蛾と交尾が可能であるため、一度人工交配に使用した雄蛾を再度別の雌蛾との人工交配に使用することもできる。
　前記嵌合工程後に、ミノガ採卵器に嵌合し、固定化された雌蛾腹部と挿入孔の間に雄蛾の腹部末端を人為的に挿入する。挿入方法は限定しない。例えば、雄蛾を手で持ち、その腹部末端を雌蛾腹部と挿入孔の間に差し込めばよい（図３B）。腹部を挿入した雄蛾は、その後、自ら腹部を伸ばして、雌蛾の交尾孔を探り当て、交尾が成立する（図３C）。雄蛾が雌蛾の交尾孔をうまく探り当てることができない場合、雄蛾の向きや挿入位置を手等で微調整して、交尾しやすいように誘導してもよい。このとき、ミノガ採卵器は透明素材又は透光性素材で構成されていると、内部の様子を目視で確認しやすいので便利である。
２－３．効果
　本発明のミノガの交配方法によれば、従来法と異なり、雌蛾の状態を把握できる。また透明素材等の採卵器を使用することで、雄蛾の交尾器を雌蛾の交尾孔に的確に誘導することができるだけでなく、交尾の成立と解除も目視で確認できるので交尾効率を飛躍的に向上させることが可能となる。
３．ミノガの採卵方法
３－１．概要
　本発明の第３の態様は、ミノガの採卵方法である。本発明の方法は、第１態様に記載のミノガ採卵器を用いることで、ミノガから大量の卵を得る方法である。本発明の方法によれば、大量のミノガの卵を容易かつ安定的に入手することができる。
３－２．方法
　本発明のミノガの採卵方法は、嵌合工程、交尾工程、及び産卵工程を必須の工程として含み、また雄蛾除去工程、及び雌蛾除去工程を選択的工程として含む。このうち、嵌合工程、及び交尾工程は、前記第２態様のミノガ交配方法における嵌合工程、及び交尾工程と同一である。つまり、本態様のミノガ採卵方法は、第２態様のミノガの交配方法に引き続き行われる方法である。そこで、ここでは、第２態様で詳述している工程についての説明は省略し、本態様に特徴的な産卵工程及び雄蛾除去工程について、以下で説明をする。
３－２－１．雄蛾除去工程
　「雄蛾除去工程」は、交尾工程後、雄個体を除去する工程である。ミノガの採卵方法における選択的工程で、必要に応じて、次の産卵工程に先立ち行われる。
　通常、雄蛾は、交尾工程後、自発的に交尾を解除し、伸長した腹部を元に戻して雌蛾から離れる。したがって、交尾工程後、次の産卵工程までは、そのまま放置しておけばよい。一方で、本工程で、人為的に雄蛾を分離し、除去することもできる。この場合、雄蛾の交尾器と雌蛾の交尾孔が離れ、交尾が解除されたことを確認した後、雄蛾が自発的に離れる前に強制的に除去をする。雄蛾の除去は、雌蛾をミノガ採卵器から外さないように気を付けながら雄蛾腹部を引き出した後、ミノガ採卵器から引き剥がせばよい。分離した雄蛾は、上述のように再度別の雌蛾の交尾工程に使用することができる。
３－２－２．産卵工程
　「産卵工程」は、交尾工程後、採卵器の保卵部内に産卵させる工程である。ミノガの採卵方法における必須の工程で、交尾工程後、又はそれに続く選択的工程である雄蛾除去工程後に行われる。交配成立から産卵開始及び産卵中の温湿度条件は、それほど厳密ではなく、ミノガの活動温度範囲内であれば特に限定はしない。好ましくは温度20～25℃、湿度45～70%の範囲であればよい。
　交尾後の雌蛾は、特別な処置なしに放置しておけば、交配後24時間以内に産卵を開始し、産み落とされた卵は卵塊としてそのまま保卵部に保持される。雌蛾は一度に約1000～3000個の卵を産卵し、卵は卵塊状態となる。この卵塊を回収すれば、従来効率的に、安定して入手することが難しかったミノガの卵を容易、かつ大量に入手することができる。
　また、卵の状態で回収できることから、従来困難であった卵の洗浄処理が容易になる。この処理によって除菌や消毒ができることから雌親蛾が細菌やウイルスに感染していた場合も雌親蛾からの垂直感染や卵どうしの接触による水平感染を防除することが可能となる。
　さらに、ミノガ採卵器の素材を透明素材又は透光性素材にすれば、産卵量を個数の単位で正確に把握することも可能となる。産卵された卵は、回収せずに、そのまま保卵部内で保存することも可能である。
３－２－３．雌蛾除去工程
　「雌蛾除去工程」は、産卵工程後、ミノガ採卵器に残る雌蛾を除去する工程である。ミノガの採卵方法における選択的工程で、必要に応じて産卵工程後に行うことができる。
　産卵を終えた雌蛾は、自らの鱗粉を使って卵が落下しないよう表面を覆い固める。また、孵化直前まで雌蛾自身が蛹殻開口部の蓋となり、蛹殻内部に卵塊を留めると共に開口部からの卵塊の落下を防ぐ。本発明のミノガ採卵器に使用した雌蛾も産卵後にそのまま挿入孔を塞ぐ蓋になるが、ミノガ採卵器では挿入孔からの卵塊の落下はないため、雌蛾自身による蓋は不要である。
　そこで、本工程では、産卵後に不要となった雌蛾の虫体をミノガ採卵器から除去する。除去方法は限定しない。例えば、ピンセット等を用いてミノガ採卵器から雌蛾をつまみ出せばよい。雌蛾を除去した後の挿入孔には、必要に応じて蓋部を設置する。
３－３．効果
　本発明のミノガの採卵方法によれば、交尾後の雌蛾に効率的に産卵させることができ、また従来方法と比較して、産卵の確認や、卵の回収も極めて容易になる。
４．初齢ミノムシの調製方法
４－１．概要
　本発明の第４の態様は、初齢ミノムシの調製方法である。本発明の方法によれば、これまで野外採取以外にまとまった入手方法がなかったミノムシを、大量の初齢ミノムシとして、簡便、かつ安定的に入手することができる。それによって、ミノムシの大量飼育の累代飼育が可能となる。
４－２．方法
　本態様の方法は、以下の（１）ミノガ採卵器を用いる方法、又は（２）ミノガ採卵器から卵を回収する方法のいずれかで行われる。
（１）ミノガ採卵器を用いる方法
　この方法は、前記第１態様のミノガ採卵器を用いて第３態様のミノガ採卵方法で得られたミノガの卵を、ミノガ採卵器の保卵部内で孵化まで管理し、孵化後のミノムシを初齢で回収する方法である。
　この方法では、保温工程と初齢ミノムシ回収工程を必須の工程として含む。
　（１－１）保温工程
　「保温工程」は、ミノガの卵塊を保温する工程である。保温温度は、卵の発生を維持、又は促進する温度であれば特に限定はしない。通常、ミノガの卵は、15℃～35℃の範囲内で発生し得る。したがって、この温度の範囲内にあればよい。例えば、18℃～32℃、又は20℃～30℃の範囲であればよい。
　本工程で保温する卵は、第３態様のミノガ採卵方法で得られた卵塊であり、採卵に用いたミノガ採卵器の保卵部内でそのまま保温する。保温はミノガ採卵器を設置した室内又は恒温器内を前記所定の温度にして行えばよい。
　保温期間は限定しないが、通常は、産卵後卵が孵化するまでの期間でよい。産卵後、孵化までの期間は、ミノガの種類や孵化条件によって変動し得る。限定はしないが、例えば、前記所定の温度で保温した場合、オオミノガであれば概ね14日間～30日間、例えば、17日間～26日間、またチャミノガであれば概ね11日間～30日間、例えば、14日間～27日間となる。
　ミノガ採卵器の素材を透明素材又は透光性素材とすることで、産卵後孵化に至るまでの間、保卵部内の卵の状態を視覚的に追跡することができ、カビの発生、卵の腐乱、乾燥等が生じた場合に迅速に発見、及び対応することができる。また、他、ミノムシの孵化は数日間をわたり数回に分けて生じるが、孵化までの過程を可視化できることにより孵化の開始時期と終了時期を正確に把握することが可能となり、それに合わせて孵化後の飼育環境を事前に整えることもできる。
　（１－２）初齢ミノムシ回収工程
　「初齢ミノムシ回収工程」は、前記保温工程後、保卵部内で孵化した初齢ミノムシを保卵部から回収する工程である。回収方法は限定しないが、養蚕業での初齢カイコの回収技術を応用することができる。例えば、保卵部内の初齢ミノムシを羽箒や筆を用いて掃立て、ミノムシを育成する場所に移せばよい。初齢ミノムシは、移動後、巣材を利用して直ちに巣の作製を開始する。これにより、従来技術では困難であった大量の初齢ミノムシの入手が可能となる。
（２）ミノガ採卵器から卵を回収する方法
　この方法は、前記第１態様のミノガ採卵器を用いて第３態様のミノガ採卵方法で得られたミノガの卵を、ミノガ採卵器の保卵部から回収し、外部で孵化まで管理し、孵化後のミノムシを初齢で回収する方法である。この方法では、卵回収工程と保温工程を必須の工程として、また初齢ミノムシ回収工程を選択工程として含む。
　（２－１）卵回収工程
　「卵回収工程」は、第３態様のミノガ採卵方法で得られた卵を保卵部から回収する工程である。本工程では、産卵工程後の卵を挿入孔から、又はミノガ採卵器の他の口部から取り出し、回収する。保卵部からの回収方法は、限定しない。例えば掃立ての方法を応用してもよいし、耳かきのような小ヘラで卵塊ごと掬い取ってもよい。又は、水やバッファで卵を保卵部から洗い流して回収することもできる。
　（２－２）保温工程
　「保温工程」は、ミノガの卵を保温する工程である。保温工程は、前記（１－１）の保温工程に記載の方法に原則準ずるが、卵の保温を保卵部内ではなく、ミノガ採卵器の外部で行う点で前記（１－１）の保温工程と異なる。ミノガ採卵器の外部で保温する方法は特に限定はしないが、過度の過湿や乾燥を防ぐため、適切な湿度が保持された場所で保温することが望ましい。例えば、カイコの産卵台紙のような紙の上に回収した卵を卵塊ごと移し、台座となる台紙を湿らせて乾燥を防ぎながら前記保温温度で保温する方法が挙げられる。
　（２－３）初齢ミノムシ回収工程
　孵化後の初齢ミノムシの回収は、前記（１－２）の初齢ミノムシ回収工程に記載の方法に準じて行うことができる。例えば、羽箒等を用いて掃立て、ミノムシの蚕座となる場所に移せばよい。
　本実施形態では、卵回収工程で回収したミノガの卵を、例えば、飼育容器内に設置することで保温工程後に孵化した初齢幼虫を回収することなく、その飼育容器内で大量に入手できる。それ故に、本工程は、選択工程であり必要に応じて実施すればよい。
＜実施例１：ミノガ採卵器を用いたミノガの人工交配＞
（目的）
　本発明のミノガ採卵器を用いてミノガの人工交配を行う。
（方法及び結果）
　野外採集したオオミノガの終齢幼虫を自然環境下で羽化させて、得られた雄蛾と雌蛾を使用した。
　本発明のミノガ採卵器には、キャップを切り取った1.5mLチューブ（エッペンドルフ社）を用いた。この時の挿入孔の内径は9.7mmであり、収容部と保卵部が一体化した長さ（採卵器長軸の長さ）は30mmである。
　雌蛾は、巣及び蛹殻からハサミとピンセットを用いて取り出し、前記ミノガ採卵器の挿入孔から腹部末端を挿入し、ミノガ採卵器に固定させた（図３A）。
　次に、雄蛾の腹部末端を手操作により、前記雌蛾腹部と挿入孔の間に差し込んだ（図３B）。
　挿入孔と雌蛾腹部の間に雄蛾腹部を挿入すると雄蛾は、自発的に雌蛾の交尾孔を目指して腹部を伸長させると共に、雌蛾も収容部内に収容された腹部を蠕動運動させて、雄蛾の腹部末端を自らの交尾孔に誘導し、収容部内での交尾が成立した。1.5mLチューブは透光性素材のポリプロピレンで構成されるため、外部から目視で収容部内での交尾成立を確認することができた（図３C）。
　また、自然界では、図１B及びCで示すように、蛹殻開口部が下方を向いているため、雄蛾は必ず逆さ状態で交尾を行う。しかし、図３Cで示す本実施例の結果から、雄蛾は自然状態と上下反転した状態であっても交尾を達成できることも明らかとなった。これにより、ミノガ採卵器の挿入孔を上方に向けておくことが可能となり、交尾時や交尾後の操作や管理が飛躍的に簡便になった。
＜実施例２：ミノガ採卵器を用いたミノガの採卵＞
（目的）
　本発明のミノガ採卵器を用いてミノガの採卵を行う。
（方法及び結果）
　実施例１の方法によりオオミノガの雄蛾と雌蛾をミノガ採卵器内で交配させた後、雄蛾を採卵器から手操作により取り除いた。採卵器内に雌蛾を残した状態で、ミノガ採卵器の挿入孔を上方に向けたままで、温度24℃で保温静置した。交配成立の約半日後より雌蛾は保卵部内に産卵を開始し、さらに約半日後には2000個程度の卵が得られた。図４は産卵開始から約3時間後の様子である。
＜実施例３：初齢ミノムシの大量調製＞
（目的）
　本発明のミノガ採卵器を用いて採取したミノガの卵より初齢ミノムシを大量に調製する。
（方法及び結果）
　実施例２で得られた卵を、図５Aに示すように卵塊状態のまま、保卵部内で24℃にて21日間保温した。この方法により、目的の初齢ミノムシを90％以上の高い孵化率で大量に孵化させることができた（図５B）。
＜実施例４：受卵手段を備えたミノガ採卵器＞
（目的）
　本発明のミノガ採卵器の受卵手段における産卵や孵化への影響を検証する。
（方法）
　本発明のミノガ採卵器には、実施例１と同様にキャップを切り取った1.5mLチューブ（エッペンドルフ社）を用いた。このチューブ内に80mm×80mmの方形に裁断した透明薄層フィルム（食品包装用ラップフィルム：ポリラップ：宇部フィルム株式会社：ポリエチレン）をチューブ内壁に沿うように押し込み、受卵手段とした。実際の状態を図６Ａに示す。対照には受卵手段のないチューブを用いた。
　実施例１と同様に雌蛾を挿入し、雄蛾と交尾させた後、産卵の有無、外部から保卵部内の卵の可視性、卵の回収の難易、受精数、孵化成功数、及び孵化成功率について評価、及び算出した。
（結果）
　結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 　受精は、ミノムシの胚発生が確認できた卵を受精卵と判断した。
　孵化成功率は、受精数に対する孵化成功数の割合とした。
　表１より、受卵手段を有するミノガ採卵器も産卵には影響しないことが明らかとなった。また、受卵手段が透明素材であれば、保卵部も透明素材である限り、保卵部内部の卵塊の有無や状態を外部から確認することは可能なことも明らかとなった。さらに、卵の回収については、受卵手段を有する場合、ミノガ採卵器から受卵手段を引き抜き、図６Ｅで示すように広げるだけで卵塊を容易に回収することができる。一方、受卵手段がない場合、ミノガ採卵器を反転させたり、挿入孔から卵塊を掻き出したりする等の操作が必要で、困難であった。また、受精や孵化成功数、それらから算出される孵化成功率については、受卵手段のない場合よりも若干の低下はみられるものの、受卵手段が交尾や産卵後の卵に対する影響はほとんどないことも明らかとなった。
　以上の結果から、本発明のミノガ採卵器を使用した採卵において、産卵後の卵塊をミノガ採卵器から回収する場合には、受卵手段を備えたミノガ採卵器が効率的である。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (14)

  1. 　管状容器からなるミノガの採卵器であって、
    　ミノガ雌成虫が嵌合する内径を有する挿入孔、
    　前記雌成虫の腹部を収容可能な収容部、及び
    　産卵後の卵を保持する保卵部
    を有する前記採卵器。
  2. 　前記保卵部が通気手段を有する、請求項１に記載の採卵器。
  3. 　前記保卵部がその内部に産卵後の卵を収容及び回収するための着脱可能な受卵手段を有する、請求項１又は２に記載の採卵器。
  4. 　前記挿入孔を塞ぐ蓋部を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の採卵器。
  5. 　前記管状容器の全部又は一部が透明素材又は透光性素材で構成されている、請求項１～４のいずれか一項に記載の採卵器。
  6. 　前記受卵手段が透明素材又は透光性素材からなる薄層フィルムで構成されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の採卵器。
  7. 　前記挿入孔が上方を向くように前記採卵器を配置する採卵台を備える、請求項１～６のいずれか一項に記載の採卵器。
  8. 　ミノガの交配方法であって、
    　ミノガ雌成虫個体を請求項１～７のいずれか一項に記載のミノガの採卵器の挿入孔に腹部末端から挿入し、その腹部を前記挿入孔に嵌合させる嵌合工程、及び
    　前記挿入孔と前記雌成虫個体腹部の間にミノガ雄成虫個体の腹部末端を挿入して交尾させる交尾工程
    を含む前記交配方法。
  9. 　前記ミノガは、雌成虫個体が無翅無脚形態種である、請求項８に記載の交配方法。
  10. 　前記雌成虫個体が未交尾個体である、請求項８又は９に記載の交配方法。
  11. 　ミノガの採卵方法であって、
    　巣及び蛹殻から分離したミノガ雌成虫個体を請求項１～７のいずれか一項に記載のミノガの採卵器の挿入孔に腹部末端から挿入し、その腹部を前記挿入孔に嵌合させる嵌合工程、
    　前記挿入孔と前記雌成虫個体腹部の間にミノガ雄成虫個体の腹部末端を挿入して交尾させる交尾工程、及び
    　前記採卵器の保卵部内に産卵させる産卵工程
    を含む前記採卵方法。
  12. 　産卵工程後の雌個体を除去する雌除去工程をさらに含む、請求項１１に記載の採卵方法。
  13. 　初齢ミノムシの調製方法であって、
    　請求項１１又は１２に記載のミノガの採卵方法で得られたミノガの卵を前記保卵部内で保温する保温工程、及び
    　孵化した初齢ミノムシを回収する初齢ミノムシ回収工程
    を含む前記調製方法。
  14. 　初齢ミノムシの調製方法であって、
    　請求項１１又は１２に記載のミノガの採卵方法で得られたミノガの卵を前記保卵部から回収する卵回収工程、及び
    　回収した卵を保温する保温工程
    を含む前記調製方法。
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