WO2022114946A1 - Proteína andamio para la generación de proteínas quiméricas de unión a antígeno - Google Patents

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Liliana Noemí SÁNCHEZ CAMPOS
Salvador DUEÑAS ESPINOZA
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Definitions

  • the present invention relates to a small scaffold protein that can be used to generate chimeric proteins, and more specifically, relates to a novel scaffold sequence derived from a conotoxin, which is useful for generating chimeric binding proteins. to antigen by fusing the scaffold with a CDR3 from a vNAR domain, and which retain recognition of the antigen to which the vNAR was directed.
  • antigen-binding proteins as signaling or metabolic pathway blocking molecules has significantly improved the detection and treatment of various pathologies associated with the overexpression of metabolites, or the presence of altered metabolic pathways. Unlike most drugs or commercial signaling molecules, the use of antigen-binding proteins guarantees greater specificity of treatment or detection, since the proteins have a very high affinity for the binding site with the antigen. white antigen, so that, when used, in most cases, the presence of false positives in the detection, or a lack of specificity in the treatment, is avoided.
  • antigen-binding proteins are free of problems, since most of the available antigen-binding proteins are thermolabile, which makes their storage and transfer difficult, so that their use as marking agents, or treatment, is limited by the problems associated with the preparation of effective formulations that maintain protein stability without affecting its functionality.
  • detection kits, or drugs that include antigen-binding proteins as the active molecule must be stored under very strict temperature conditions and lose their stability quickly when they go from storage temperature to room temperature .
  • the present invention aims to provide a conotoxin-derived scaffold protein capable of serving as a framework for the generation of chimeric antigen-binding proteins.
  • a particular objective of the present invention is to provide a scaffold protein that, when inserted with a sequence of a CDR3 from a parental vNAR, retains the affinity for the antigen presented by the parental vNAR.
  • Another objective of the present invention is to provide a scaffold protein that allows obtaining chimeric proteins of a small size, preferably between 19 and 47 amino acids.
  • An additional objective of the present invention is to provide a scaffold protein that, by inserting a CDR3 sequence from a vNAR, has a greater capacity for tissue penetration and greater thermal stability.
  • Figure 1 illustrates a graph showing the results of the evaluation of the activity of the cal 14.1a scaffold, and how it loses its toxin activity when CDR3 of a vNAR is added.
  • Figure 2 shows a graph with the results of the recognition ELISA assay, where the interaction of the chimeric protein cal_P98Y with VEGF165 is shown.
  • Figure 3 shows a series of images in which the behavior of the HUVEC cell line is observed in in-vitro neutralization assays with cal_P98Y.
  • Figure 4 shows a graph summarizing the results of the in-vitro neutralization test with cal_P98Y.
  • the present invention provides a scaffold protein having the following amino acid sequence
  • the scaffold protein of SEQ ID NO:1 of the present invention can be used as a framework for the rational design of chimeric antigen-binding proteins, with a final size between 19 and 47 amino acids.
  • a fragment of a CDR3 of a parental vNAR with affinity for a specific antigen, with a length of between 7 and 35 amino acids between positions 11 and 12 is inserted into said scaffold protein, in such a way that so that a chimeric protein is obtained that maintains the affinity for the antigen to which the CDR3 of the parental vNAR was directed.
  • the generated chimeric protein is subjected to an in silic analysis process to determine its theoretical stability as well as its antigen binding strength.
  • the selection process consists of performing the modeling by homology of the chimeric protein with the MODELLER program. Subsequently, the refinement is carried out by means of molecular dynamics simulations with the NAMD program. Once the structures have been obtained, the protein-protein interaction analysis (Docking) is carried out with the ClusPro program, evaluating different union and orientation zones in order to find the optimal structural conformation through two docking stages.
  • the first stage consists in determining the contact patterns and the second stage is based on the energetic analysis of the contact regions of each one of the proteins in the ROSIE platform, using as a positive control, the interaction of the CDR3 of the parental vNAR with the antigenic molecule, to obtain a reference binding energy.
  • the generated chimeric proteins which have a binding force of between 85 and 150%, with respect to the reference binding force, are selected to be used.
  • the construction described above allows the chimeric protein formed to maintain the ability to bind to the same epitope of the parent antibody, without losing effectiveness.
  • the chimeric proteins obtained show an improvement in their thermal stability, which increases their resistance to temperature changes.
  • the scaffold protein of SEQ ID NO: 1 of the present invention even when it is based on the structure of a conotoxin, does not present any type of toxic activity, since it does not present any amino acid sequence associated with the activity of the toxin ( figure 1), so it can be used as a medicine in pathologies associated with the expression of a molecule or the blockage of a metabolic pathway.
  • the chimeric proteins obtained can be used in in vitro detection processes of antigenic molecules, such as, for example, those produced by the presence of a pathology.
  • the chimeric proteins obtained by the insertion of a fragment of a CDR3 of a vNAR with affinity for a specific antigen between amino acids 11 and 12 of SEQ ID NO: 1, have a much smaller size than that of an IgG-type antibody, Therefore, they are characterized by having greater penetration into tissues and also have two disulfide bonds in the scaffold protein, which considerably improve their thermal stability, so that when used as an active component of a drug, they allow obtaining a better rate of penetration into tissues and also significantly improve their thermal stability, which has repercussions on better handling and storage of the drug in which the chimeric proteins obtained with the present invention are used.
  • the chimeric proteins obtained using the scaffold protein of SEQ ID NO: 1 of the present invention can used in the manufacture of drugs intended to treat pathologies associated with the expression of a particular antigenic molecule produced by autoimmune diseases, infectious diseases, chronic-degenerative diseases and neoplasms.
  • chimeric proteins using the scaffold protein of SEQ ID NO: 1 of the present invention can be designed to interact with antigenic molecules produced in various pathologies.
  • the chimeric proteins obtained using the scaffold protein of SEQ ID NO:1 of the present invention can alternatively be used as in vitro antigen detection molecules. Due to their high thermal stability, the chimeric proteins obtained according to the teachings of the present invention can be placed in detection kits, being stored for longer periods than would be possible with other types of proteins.
  • Table 1 To make more evident the technical advantages obtained by using the scaffold protein of SEQ ID NO: 1 of the present invention, several chimeric proteins directed against different unrelated antigenic targets were generated, as shown in Table 1.
  • an ELISA assay was performed to identify the interaction of the chimeric protein cal_P98Y with VEGFi65 (figure 2). For this, the comparison was made with its parental VNAR. As can be seen in the graph shown in Figure 2, the chimeric protein has the ability to recognize the antigen against which the parental vNAR is directed. Finally, an in vitro neutralization test was performed. As can be seen in figure 3, VEGF generates angiogenesis.
  • FIG. 1 HUVEC cells are observed in culture medium, with little angiogenesis; in panel B, cells with more VEGF are observed, which is why Angiogenesis is increased; in panel C, cells plus VEGF plus the parental antibody can be seen, showing an inhibition of angiogenesis and; in panel D, cells plus VEGF plus the chimeric molecule are seen, and the inhibition of angiogenesis can be seen with respect to panel B.
  • Figure 4 shows the graphic representation of the four experimental conditions shown in the panels of the Figure 3, showing that the chimeric protein Cal_P98Y inhibits VEGF, which corroborates that the present invention allows functional chimeric proteins to be obtained.

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Abstract

Una proteína de andamio de SEQ ID NO: 1 derivada de una conotoxina, que no presenta residuos de aminoácidos asociados a la actividad tóxica de la conotoxina, y que puede ser usada para la generación de proteínas quiméricas de entre 19 a 47 aminoácidos, insertándole entre sus aminoácidos 11 y 12, fragmentos de un CDR3 de un vNAR con afinidad por un antígeno específico.

Description

PROTEÍNA ANDAMIO PARA LA GENERACIÓN DE PROTEÍNAS QUIMÉRICAS
DE UNIÓN A ANTÍGENO
Campo de la Invención La presente invención se refiere a una proteina andamio de tamaño pequeño que se puede utilizar para generar proteínas quiméricas, y más específicamente, se refiere a una novedosa secuencia andamio derivada de una conotoxina, que es útil para generar proteínas quiméricas de unión a antígeno al fusionar el andamio con un CDR3 proveniente de un dominio vNAR, y que conservan el reconocimiento del antígeno al cual estaba dirigido el vNAR.
Antecedentes de la Invención El uso de proteínas de unión a antígenos como moléculas de señalización o de bloqueo de rutas metabólicas, ha mejorado significativamente la detección y tratamiento de diversas patologías asociadas a la sobreexpresión de metabolitos, o la presencia de rutas metabólicas alteradas. A diferencia de la mayor parte de los medicamentos o moléculas de señalización comerciales, el uso de proteínas de unión a antígeno garantiza una mayor especificidad del tratamiento o de la detección, ya que las proteínas presentan una muy alta afinidad por el sitio de unión con el antígeno blanco, por lo que, al usarse, en la mayoría de los casos, se evita la presencia de falsos positivos en la detección, o una inespecificidad en el tratamiento.
Sin embargo, el uso de proteínas de unión a antígeno no está exento de problemas, ya que, la mayoría de las proteínas de unión a antígeno disponibles son termolábiles, por lo que se dificulta su almacenamiento y traslado, de forma que su uso como agentes de marcado, o de tratamiento, se ve limitado por las problemáticas asociadas con la preparación de formulaciones efectivas, que mantengan la estabilidad de la proteína sin afectar su funcionalidad. La gran mayoría de los kits de detección, o medicamentos que incluyen proteínas de unión a antígeno como molécula activa, deben de ser almacenados en condiciones de temperatura muy estrictas y pierden su estabilidad de forma rápida al pasar de la temperatura de almacenado a la temperatura ambiente.
Otra de las limitantes del gran tamaño de las proteínas de unión a antígeno convencionales, es que difícilmente pueden atravesar las barreras biológicas de los organismos pluricelulares, por lo que su efecto como tratamiento o medio de detección, se ve limitado a las capas superficiales del tejido donde son aplicadas. Por lo anterior, la mayoría de los tratamientos actuales requieren de múltiples aplicaciones de la proteína de unión a antígeno, así como de mecanismos alternos de aplicación que mejoren la tasa de penetración en el tejido para poder llevar a cabo su efecto. De cara a mejorar el uso de las proteínas de unión a antígeno como marcadores o agentes terapéuticos, se han tratado de llevar a cabo diversos tipos de modificaciones en las mismas, ya sea para mejorar su tasa de penetración, o para aumentar su estabilidad térmica frente a los cambios bruscos de temperatura; sin embargo, la mayoría de las modificaciones realizadas tienden a disminuir la fuerza de unión de la proteína con el sitio de unión del antígeno al cual está dirigida y, en muchos de los casos, se pierde por completo la funcionalidad de la proteína.
En vista de la problemática anterior, existe la necesidad de proporcionar una proteína de andamio de tamaño reducido, que se pueda usar como marco para la generación de proteínas quiméricas que conserven la afinidad por el sitio de unión, y que además permita usar fragmentos de tamaño pequeño de un CDR3 procedente de un vNAR con afinidad específica contra antígeno, a fin de obtener una proteína quimérica de tamaño pequeño, para que esté presente una mayor tasa de penetración en los tejidos.
Sumario de la Invención
Con el fin de superar las desventajas de las proteínas de unión a antígeno disponibles, la presente invención tiene por objetivo el proporcionar una proteína de andamio derivada de una conotoxina, capaz de servir como marco para la generación de proteínas quiméricas de unión a antígeno.
Un objetivo particular de la presente invención, es el proporcionar una proteína de andamio que al insertarle una secuencia de un CDR3 proveniente de un vNAR parental, conserve la afinidad por el antígeno que presentaba el vNAR parental. Otro objetivo de la presente invención, es el proporcionar una proteina de andamio que permita obtener proteínas quiméricas de un tamaño pequeño, preferentemente de entre 19 y 47 aminoácidos.
Un objetivo adicional de la presente invención, es el proporcionar una proteína de andamio que, al insertarle una secuencia de un CDR3 proveniente de un vNAR, presente una mayor capacidad de penetración a tejidos y una mayor estabilidad térmica.
Los objetivos antes citados, así como otros y las ventajas de la presente invención, vendrán a ser aparentes de la siguiente descripción detallada de la misma.
Descripción de las Figuras de la Invención
La figura 1, ilustra una gráfica en la que se muestran los resultados de la evaluación de la actividad del andamio cal 14.1a, y como éste pierde su actividad de toxina al agregarle el CDR3 de un vNAR.
La figura 2, muestra una gráfica con los resultados del ensayo ELISA de reconocimiento, donde se muestra la interacción de la proteína quimérica cal_P98Y con el VEGF165.
La figura 3, muestra una serie de imágenes en las que se observa el comportamiento de la línea celular HUVEC en ensayos de neutralización in-vitro con cal_P98Y. La figura 4, muestra una gráfica donde se resumen los resultados del ensayo de neutralización in-vitro con cal_P98Y. Descripción Detallada de la Invención
La presente invención proporciona una proteina andamio que presenta la siguiente secuencia de aminoácidos;
SEQ ID NO: 1 Gly-Asp-Cys-Pro-Pro-Trp-Cys-Gly-Ala-Arg-Cys- (XXX)-Cys
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 en donde (XXX) representa el sitio de inserción de la proteina andamio.
La proteina de andamio de SEQ ID NO:l de la presente invención, puede ser usada como marco para el diseño racional de proteínas quiméricas de unión a antígeno, con un tamaño final de entre 19 y 47 aminoácidos. Para obtener la proteína quimérica antes mencionada, a dicha proteína de andamio se le inserta un fragmento de un CDR3 de un vNAR parental con afinidad por un antígeno específico, con una longitud de entre 7 y 35 aminoácidos entre las posiciones 11 y 12, de tal manera que se obtiene una proteína quimérica que mantiene la afinidad por el antígeno al cual estaba dirigido el CDR3 del vNAR parental. La proteína quimérica generada se somete a un proceso de análisis ín sílíco para determinar su estabilidad teórica, así como su fuerza de unión al antígeno. El proceso de selección consiste en realizar el modelado por homología de la proteína quimérica con el programa MODELLER. Posteriormente, se lleva a cabo el refinamiento mediante simulaciones de dinámica molecular con el programa NAMD. Una vez obtenidas las estructuras, se procede a realizar el análisis de interacción proteína-proteína (Docking), con el programa ClusPro, evaluando diferentes zonas de unión y orientación con la finalidad de encontrar la conformación estructural óptima a través de dos etapas del docking. La primera etapa consiste en determinar los patrones de contacto y la segunda etapa se basa en el análisis energético de las regiones de contacto de cada una de las proteínas en la plataforma ROSIE, usando como control positivo, la interacción del CDR3 del vNAR parental con la molécula antigénica, para obtener una energía de unión de referencia. De esta manera las proteínas quiméricas generadas, que presentan una fuerza de unión de entre 85 y 150%, respecto a la fuerza de unión de referencia, se seleccionan para ser utilizadas . La construcción antes descrita permite a la proteína quimérica formada, mantener la capacidad de unirse al mismo epítopo del anticuerpo parental, sin perder efectividad. Además, debido al menor tamaño de la proteína quimérica obtenida, respecto al tamaño del anticuerpo parental, ésta presenta una mayor capacidad de penetración en los tejidos. Asimismo, debido a su conformación, las proteínas quiméricas obtenidas presentan una mejora en su estabilidad térmica lo que incrementa su resistencia a cambios de temperatura. La proteina de andamio de SEQ ID NO: 1 de la presente invención, aún cuando está basada en la estructura de una conotoxina, no presenta ningún tipo de actividad tóxica, ya que no presenta ninguna secuencia de aminoácidos asociada a la actividad de la toxina(figura 1), por lo que se puede usar como medicamento en patologías asociadas a la expresión de una molécula o el bloqueo de una ruta metabólica. Asimismo, las proteínas quiméricas obtenidas se pueden usar en procesos de detección ín vitro de moléculas antigénicas, tal como, por ejemplo, aquellas producidas por la presencia de una patología.
Las proteínas quiméricas obtenidas por la inserción de un fragmento de un CDR3 de un vNAR con afinidad por un antígeno específico entre los aminoácidos 11 y 12 de la SEQ ID NO: 1, tiene un tamaño mucho menor que el de un anticuerpo de tipo IgG, por lo que se caracterizan por tener una mayor penetración a tejidos y además presentan dos enlaces disulfuro en la proteína de andamio, que mejoran considerablemente su estabilidad térmica, por lo que al ser usadas como componente activo de un medicamento, permiten obtener una mejor tasa de penetración en los tejidos y además mejoran significativamente su estabilidad térmica, lo que repercute en un mejor manejo y almacenamiento del medicamento en el que se usan las proteínas quiméricas obtenidas con la presente invención.
Las proteínas quiméricas obtenidas usando la proteína de andamio de SEQ ID NO:l de la presente invención, pueden usarse en la fabricación de medicamentos destinados a tratar patologías asociadas a la expresión de una molécula antigénica particular producida por enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas, enfermedades crónico- degenerativas y neoplasias. Por ejemplo, las proteínas quiméricas que usan la proteína de andamio de SEQ ID NO: 1 de la presente invención, se pueden diseñar para interactuar con moléculas antigénicas producidas en diversas patologías. Además, las proteínas quiméricas obtenidas usando la proteína de andamio de SEQ ID NO:l de la presente invención, pueden ser usadas alternativamente como moléculas de detección de antígenos ín vitro. Debido a su alta estabilidad térmica, las proteínas quiméricas obtenidas de acuerdo con las enseñanzas de la presente invención, se pueden colocar en kits de detección, siendo almacenadas por periodos más prolongados que los que serían posibles con otro tipo de proteínas. Para hacer más evidentes las ventajas técnicas obtenidas al usar la proteina de andamio de SEQ ID NO: 1 de la presente invención, se generaron varias proteínas quiméricas dirigidas contra distintos blancos antigénicos no relacionados, como se muestra en la Tabla 1.
Tabla 1. Anticuerpos parentales usados y proteínas quiméricas generadas
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Una vez generadas las proteínas quiméricas a partir de la unión del fragmento seleccionado del anticuerpo parental elegido con la proteína de andamio de SEQ ID NO:l, se comparó su fuerza de unión ín sílíco con el sitio de unión respecto a la fuerza de unión con el sitio de unión de su anticuerpo parental. Asimismo, se valoró su estabilidad térmica de manera comparativa. Un resumen de los resultados obtenidos se muestra en la Tabla 2.
Tabla 2. Comparativa entre la fuerza de unión y la estabilidad térmica de los anticuerpos parentales contra sus proteínas quiméricas
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Como se puede apreciar, algunas de las proteínas quiméricas generadas, presentaron en conjunto una mayor fuerza de unión con el sitio de unión que sus anticuerpos parentales y, además, esta estrategia se probó con los tres tiburones que se utilizan actualmente para generar vNAR con propósitos comerciales, por lo que resulta evidente que la invención descrita se puede llevar acabo en cualquier especie adecuada de tiburón. Para demostrar la función de las proteínas quiméricas que se pueden obtener de acuerdo con las enseñanzas de la presente invención, se realizó la valoración in-vitro de la actividad del andamio cal 14.1a. El andamio "completo" tiene el efecto de inhibir la expresión del TNF en cultivo celular HUVEC. Como se puede apreciar en la figura 1, se observa el control negativo que no expresó TNF en el cultivo. Cuando se agregó LPS+IFN se incrementó la expresión de TNF, cuando solo se agregó el andamio, no hubo expresión, cuando se agregó el quimérico, no hay expresión. Estos dos últimos ensayos fueron sin LPS ni Interferón. Por otra parte, se observa el andamio "completo" más LPS e Interferón, y se ve como el andamio inhibió la expresión de TNF (función efectora de la toxina). Sin embargo, cuando se agregó la proteina quimérica más LPS e Interferón, no se observó la inhibición de la expresión de TNF. Por lo tanto, la proteina quimérica no inhibió, es decir, el andamio pierde su actividad biológica y sólo funciona como andamio para poder colocar otras secuencias.
En otra prueba, se realizó un ensayo de ELISA para identificar la interacción de la proteina quimérica cal_P98Y con el VEGFi65 (figura 2). Para ello se realizó la comparación con su VNAR parental. Como se puede apreciar en la gráfica mostrada en la figura 2, la proteina quimérica tiene la capacidad de reconocer el antigeno contra el cual va el vNAR parental. Finalmente, se realizó un ensayo de neutralización in vitro. Como se puede apreciar en la figura 3, el VEGF genera angiogénesis . En el panel A, se observan células HUVEC en medio de cultivo, con poca angiogénesis; en el panel B se observan células más VEGF, por lo que se incrementa la Angiogénesis; en el panel C, se aprecian células más VEGF más el anticuerpo parental, observándose una inhibición de la angiogénesis y; en el panel D, se ven células más VEGF más la molécula quimérica, y se aprecia la inhibición de la angiogénesis con respecto al panel B. En la figura 4, se muestra la representación gráfica de las cuatro condiciones experimentales mostradas en los paneles de la figura 3, pudiéndose observar que la proteina quimérica Cal_P98Y inhibe al VEGF, lo cual corrobora que la presente invención permite obtener proteínas quiméricas funcionales.
La presente invención se ha descrito de acuerdo con una de sus modalidades preferidas; sin embargo, será aparente para un técnico con conocimientos medios en la materia, que podrán hacerse modificaciones a la invención, sin apartarse de su espíritu y alcance.

Claims

REIVINDICACIONES
1.- Una proteina de andamio derivada de una conotoxina de SEQ ID NO: 1:
Gly-Asp-Cys-Pro-Pro-Trp-Cys-Gly-Ala-Arg-Cys- (XXX)-Cys 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 en donde (XXX) representa el sitio de inserción de la proteina de andamio.
2.- Una proteina quimérica de unión a antigeno caracterizada porque comprende la proteina de andamio de la reivindicación 1 y; un fragmento de entre 7 y 35 aminoácidos de un CDR3 de un vNAR con afinidad por un antigeno especifico, que se inserta en el sitio de inserción (XXX) entre los aminoácidos 11 y 12 de la SEQ ID NO: 1, con la condición de que dicho fragmento del CDR3 del vNAR genere una proteina quimérica que presente una fuerza de unión al antigeno de entre 85 y 150% con respecto a la fuerza de unión al antigeno del CRD3 del vNAR.
3.- La proteina quimérica de unión a antigeno de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque el fragmento insertado es un fragmento de CDR3 del vNAR de un tiburón.
4.- La proteina quimérica de unión a antigeno de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizada porque el fragmento de CDR3 del vNAR del tiburón, se selecciona del grupo consistente en fragmentos del CDR3 del vNAR de los tiburones Heterodontus fransisci, Orectolobus maculatus y Ginglymostoma cirratum.
5 .- Uso de la proteina de andamio de la reivindicación 1, para la generación de proteínas quiméricas de unión a antígeno, en donde a dicha proteina de andamio se le inserta entre los aminoácidos 11 y 12, un fragmento de entre 7 a 35 aminoácidos de un CDR3 de un vNAR con afinidad por un antigeno especifico.
6.- Uso de la proteina quimérica de acuerdo con la reivindicación 2, como medicamento.
7.- Una composición farmacéutica que comprende una proteina de andamio de acuerdo con la reivindicación 1 o una proteina quimérica de acuerdo con la reivindicación 2 y; un vehículo farmacéuticamente aceptable.
8.- La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, para el tratamiento de una patología asociada a la expresión de una molécula antigénica.
9.- La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada porque está adaptada para ser administrada de forma sistémica o localizada.
10.- La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizada porque la patología asociada a la expresión de una molécula antigénica se selecciona del grupo consistente en enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas, enfermedades crónico-degenerativas y neoplasias.
11.- Uso de la proteína de andamio de la reivindicación
1 o de la proteína quimérica de la reivindicación 2 para tratar una patología asociada a la expresión de una molécula antigénica.
12.- El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la proteina de andamio y la proteina quimérica están adaptadas para ser administradas de forma sistémica o localizada.
13.- El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la patología asociada a la expresión de una molécula antigénica se selecciona del grupo consistente en enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas, enfermedades crónico-degenerativas y neoplasias.
14.- Uso de la proteina de andamio de la reivindicación 1 o de la proteina quimérica de la reivindicación 2, en un kit para la detección ín vitro de moléculas antigénicas.
15.- Uso de la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, para el tratamiento de una patología asociada a la expresión de una molécula antigénica.
16.- El uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la patología asociada a la expresión de una molécula antigénica se selecciona del grupo consistente en enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas, enfermedades crónico-degenerativas y neoplasias.
17.- El uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la composición está adaptada para ser administrada de forma sistémica o localizada.
18.- Uso de la proteína quimérica de la reivindicación 2, para detectar o cuantificar antígenos.
19.- Uso de la proteína quimérica de la reivindicación
2, en la fabricación de pruebas de detección de agentes patógenos de mamíferos.
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