WO2021251460A1 - Cafを有するがんを処置するための組成物 - Google Patents

Cafを有するがんを処置するための組成物 Download PDF

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WO2021251460A1
WO2021251460A1 PCT/JP2021/022086 JP2021022086W WO2021251460A1 WO 2021251460 A1 WO2021251460 A1 WO 2021251460A1 JP 2021022086 W JP2021022086 W JP 2021022086W WO 2021251460 A1 WO2021251460 A1 WO 2021251460A1
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heavy chain
light chain
nos
amino acid
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PCT/JP2021/022086
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哲治 仲
聡 世良田
Original Assignee
国立大学法人高知大学
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    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Definitions

  • This disclosure relates to technologies, methods, drugs, etc. for the treatment or prevention of new cancers.
  • Non-Patent Document 1 Some refractory tumors have cancer-related fibroblasts (CAFs) that form a tumor interstitial barrier, and this interstitial barrier inhibits drug delivery.
  • CAFs cancer-related fibroblasts
  • Non-Patent Document 1 No effective therapeutic agent has been found for cancers having CAF targeting CAF (for example, refractory tumors).
  • the present disclosure provides compositions and the like for treating cancers having CAF (eg, refractory tumors).
  • CAF eg, refractory tumors.
  • the present inventors have CAF expressing Glypican-1 (GPC-1) and a complex (antibody drug conjugate; ADC) of an anti-GPC-1 antibody and a drug having cytotoxic activity. It has been found that cancers with these can be effectively treated. There has never been a case of treating cancer with CAF by targeting GPC-1, and the complex of anti-GPC-1 antibody and a drug having cytotoxic activity has CAF. It is a surprising result to be able to treat cancer.
  • GPC-1 Glypican-1
  • ADC antibody drug conjugate
  • the invention of the present application provides the following.
  • (Item 1) A composition for treating cancer having cancer-related fibroblasts (CAFs), wherein the composition is a composite of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity.
  • a composition comprising a body.
  • (Item 2) The composition according to item 1, wherein the cancer has interstitium.
  • (Item 3) The composition according to item 1 or 2, wherein the content of the interstitium in the cancer is at least about 30%.
  • (Item 4) The composition according to any one of items 1 to 3, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof is operably linked to the drug having cytotoxic activity via a linker.
  • the drug having cytotoxic activity comprises monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), DM1, DM4, calikeamycin, duocarmycin, pyrolobenzodiazepine (PBD), and a topoisomerase inhibitor.
  • MMAE monomethyl auristatin E
  • MMAF monomethyl auristatin F
  • DM1, DM4 calikeamycin
  • duocarmycin pyrolobenzodiazepine
  • PBD pyrolobenzodiazepine
  • a topoisomerase inhibitor a topoisomerase inhibitor.
  • the composition according to any one of items 1 to 4 selected from the group.
  • the composition according to any one of items 1 to 5, wherein the drug having cytotoxic activity is cell membrane penetrating.
  • Item 7) The composition according to any one of items 1 to 6, wherein the agent having cytotoxic activity is selected from MMAE, PBD, Eribulin, SN-38, D
  • the composition according to item 8 wherein the drug efflux transporter is MDR-1.
  • the linker is selected from the group consisting of an enzyme-cleaving linker, an acid instability linker, and a disulfide linker.
  • (Item 12) The composition according to item 11, wherein the linker is a cleavage-type linker cleaved by cathepsin B.
  • (Item 13) The composition according to any one of items 1 to 12, wherein the CAF expresses Glypican-1.
  • the cancers are esophageal cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, lung cancer, head and neck cancer, breast cancer, uterine smooth muscle tumor, prostate cancer, scirrhous gastric cancer, bile duct cancer, and colon cancer or these.
  • (Item 15) The composition according to any one of items 1 to 14, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof has an internalizing activity.
  • the antibody is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) Positions 33-61, 339-358, and 388-42, or positions of SEQ ID NOs: 2, 33-61, or 388-42, or (D) Positions 33 to 61, 339 to 358, 388 to 421, and 430 to 530 of SEQ ID NO: 2, The composition according to any one of items 1 to 15, which binds to an epitope of.
  • Antibodies containing amino acid sequences (B) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (C) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (D) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (E) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (F) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 29, 30 and 31, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (G) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 35, 36 and 37, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (H) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (N) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 83, 84 and 85, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (R) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 110, 111 and 112, respectively.
  • the composition according to any one of items 1 to 17.
  • composition for treating cancer which comprises a complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity, wherein the cancer is a cancer-related fibroblast (CAF).
  • CAF cancer-related fibroblast
  • the composition is administered.
  • a composition for treating a cancer that heterogeneously expresses GPC-1 which comprises a complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity. Including, composition.
  • (Item 1A) A method for treating cancer with cancer-related fibroblasts (CAFs) in a subject, wherein the method comprises an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity. A method comprising administering the complex to the subject.
  • (Item 2A) The method of item 1A, wherein the cancer has interstitium.
  • (Item 3A) The method of item 1A or 2A, wherein the content of the interstitium in the cancer is at least about 30%.
  • (Item 4A) The method according to any one of items 1A to 3A, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof is operably linked to the drug having cytotoxic activity via a linker.
  • the drug having cytotoxic activity comprises monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), DM1, DM4, calikeamycin, duocarmycin, pyrolobenzodiazepine (PBD), and a topoisomerase inhibitor.
  • MMAE monomethyl auristatin E
  • MMAF monomethyl auristatin F
  • DM1, DM4 calikeamycin
  • duocarmycin pyrolobenzodiazepine
  • PBD pyrolobenzodiazepine
  • a topoisomerase inhibitor a topoisomerase inhibitor.
  • the drug having cytotoxic activity is cell membrane permeability.
  • Item 7A The method according to any one of items 1A to 6A, wherein the agent having cytotoxic activity is selected from MMAE, PBD, Eribulin, SN-38, Dxd, and DM4.
  • (Item 8A) The method according to any one of items 1A to 7A, wherein the drug having cytotoxic activity serves as a substrate for a drug excretion transporter.
  • (Item 9A) 8. The method of item 8A, wherein the drug efflux transporter is MDR-1.
  • (Item 10A) The method according to item 8A or 9A, wherein the drug having cytotoxic activity that serves as a substrate for the drug excretion transporter is MMAE.
  • (Item 11A) The method of item 4, wherein the linker is selected from the group consisting of an enzyme-cleaving linker, an acid instability linker, and a disulfide linker.
  • (Item 12A) The method of item 11A, wherein the linker is a cleavage type linker that is cleaved by cathepsin B.
  • (Item 13A) The method according to any one of items 1A to 12A, wherein the CAF expresses Glypican-1.
  • (Item 14A) The cancers are esophageal cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, lung cancer, head and neck cancer, breast cancer, uterine smooth muscle tumor, prostate cancer, scirrhous gastric cancer, bile duct cancer, and colon cancer or these.
  • the method according to any one of items 1A to 13A which is selected from any combination.
  • (Item 15A) The method according to any one of items 1A to 14A, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof has an internalizing activity.
  • the antibody is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) Positions 33-61, 339-358, and 388-42, or positions of SEQ ID NOs: 2, 33-61, or 388-42, or (D) Positions 33 to 61, 339 to 358, 388 to 421, and 430 to 530 of SEQ ID NO: 2, The method according to any one of items 1A to 15A, which binds to an epitope of.
  • (Item 17A) The method according to any one of items 1A to 16A, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof binds to the epitopes at positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2.
  • (Item 18A) The anti-GPC-1 antibody or its antigen-binding fragment is described below.
  • Antibodies containing amino acid sequences (B) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (C) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (D) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (E) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (F) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 29, 30 and 31, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (G) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 35, 36 and 37, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (H) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (N) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 83, 84 and 85, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (R) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 110, 111 and 112, respectively.
  • (Item 19A) A method for treating cancer in a subject, wherein the method tests for whether the cancer has cancer-related fibroblasts (CAFs) and the CAF significantly reduces GPC-1.
  • a method comprising the step of administering to the subject a complex of an anti-GPC-1 antibody or antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity when expressed.
  • (Item 20A) A method for treating a cancer that heterogeneously expresses GPC-1 in a subject, wherein the method is a complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity.
  • a method comprising the step of administering to the subject.
  • (Item 1B) Use of an anti-GPC-1 antibody or a complex of an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity in the manufacture of a pharmaceutical product for treating a cancer having cancer-related fibroblasts (CAF).
  • CAF cancer-related fibroblasts
  • (Item 2B) The use according to item 1, wherein the cancer has interstitium.
  • (Item 3B) The use according to item 1B or 2B, wherein the content of the stroma in the cancer is at least about 30%.
  • (Item 4B) The use according to any one of items 1B to 3B, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof is operably linked to the drug having cytotoxic activity via a linker.
  • the drug having cytotoxic activity comprises monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), DM1, DM4, calikeamycin, duocarmycin, pyrolobenzodiazepine (PBD), and a topoisomerase inhibitor.
  • MMAE monomethyl auristatin E
  • MMAF monomethyl auristatin F
  • DM1, DM4 calikeamycin
  • duocarmycin pyrolobenzodiazepine
  • PBD pyrolobenzodiazepine
  • a topoisomerase inhibitor Use according to any one of items 1B-4B selected from the group.
  • the agent having cytotoxic activity is cell membrane permeability.
  • Item 7B The use according to any one of items 1B to 6B, wherein the agent having cytotoxic activity is selected from MMAE, PBD, Eribulin, SN-38, Dxd, and DM4.
  • (Item 8B) The use according to any one of items 1B to 7B, wherein the drug having cytotoxic activity serves as a substrate for a drug excretion transporter.
  • (Item 9B) The use according to item 8B, wherein the drug efflux transporter is MDR-1.
  • (Item 10B) The use according to item 8B or 9B, wherein the drug having cytotoxic activity that serves as a substrate for the drug efflux transporter is MMAE.
  • (Item 11B) The use according to item 4B, wherein the linker is selected from the group consisting of an enzyme cleavage type linker, an acid instability linker, and a disulfide linker. (Item 12B) 11B.
  • the cancers are esophageal cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, lung cancer, head and neck cancer, breast cancer, uterine smooth muscle tumor, prostate cancer, scirrhous gastric cancer, bile duct cancer, and colon cancer or these. Use according to any one of items 1B to 13B, selected from any combination.
  • (Item 15B) The use according to any one of items 1B to 14B, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof has an internalizing activity.
  • the antibody is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) Positions 33-61, 339-358, and 388-42, or positions of SEQ ID NOs: 2, 33-61, or 388-42, or (D) Positions 33 to 61, 339 to 358, 388 to 421, and 430 to 530 of SEQ ID NO: 2, The use according to any one of items 1B to 15B, which binds to an epitope of.
  • Antibodies containing amino acid sequences (B) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (C) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (D) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (E) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (F) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 29, 30 and 31, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (G) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 35, 36 and 37, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (H) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (N) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 83, 84 and 85, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (R) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 110, 111 and 112, respectively.
  • (Item 1C) A complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity for treating cancer having cancer-related fibroblasts (CAF).
  • (Item 2C) The complex according to item 1C, wherein the cancer has interstitium.
  • (Item 3C) The complex according to item 1C or 2C, wherein the content of the interstitium in the cancer is at least about 30%.
  • (Item 4C) The complex according to any one of items 1C to 3C, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof is operably linked to the drug having cytotoxic activity via a linker.
  • the drug having cytotoxic activity comprises monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), DM1, DM4, calikeamycin, duocarmycin, pyrolobenzodiazepine (PBD), and a topoisomerase inhibitor.
  • MMAE monomethyl auristatin E
  • MMAF monomethyl auristatin F
  • DM1, DM4 calikeamycin
  • duocarmycin pyrolobenzodiazepine
  • PBD pyrolobenzodiazepine
  • a topoisomerase inhibitor a topoisomerase inhibitor.
  • the complex according to any one of items 1C to 5C, wherein the drug having cytotoxic activity is cell membrane penetrating.
  • Item 7C The complex according to any one of items 1C to 6C, wherein the agent having cytotoxic activity is selected from MMAE, PBD, Eribul
  • (Item 8C) The complex according to any one of items 1C to 7C, wherein the drug having cytotoxic activity serves as a substrate for a drug excretion transporter.
  • (Item 9C) The complex according to item 8C, wherein the drug efflux transporter is MDR-1.
  • (Item 10C) The complex according to item 8C or 9C, wherein the drug having cytotoxic activity that serves as a substrate for the drug excretion transporter is MMAE.
  • (Item 11C) The complex according to item 4C, wherein the linker is selected from the group consisting of an enzyme-cleaving linker, an acid instability linker, and a disulfide linker.
  • the cancers are esophageal cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, lung cancer, head and neck cancer, breast cancer, uterine smooth muscle tumor, prostate cancer, scirrhous gastric cancer, bile duct cancer, and colon cancer or these.
  • (Item 15C) The complex according to any one of items 1C to 14C, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof has an internalizing activity.
  • the antibody is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) Positions 33-61, 339-358, and 388-42, or positions of SEQ ID NOs: 2, 33-61, or 388-42, or (D) Positions 33 to 61, 339 to 358, 388 to 421, and 430 to 530 of SEQ ID NO: 2, The complex according to any one of items 1C to 15C, which binds to an epitope of.
  • (Item 17C) The complex according to any one of items 1C to 16C, wherein the anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof binds to the epitopes at positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2.
  • (Item 18C) The anti-GPC-1 antibody or its antigen-binding fragment is described below.
  • Antibodies containing amino acid sequences (B) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (C) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (D) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (E) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (F) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 29, 30 and 31, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (G) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 35, 36 and 37, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (H) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (N) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 83, 84 and 85, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (R) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 110, 111 and 112, respectively.
  • the complex according to any one of items 1C to 17C.
  • (Item 19C) A complex of an anti-GPC-1 antibody or antigen-binding fragment thereof for treating a cancer with a drug having cytotoxic activity, and whether the cancer has cancer-related fibroblasts (CAF).
  • CAF cancer-related fibroblasts
  • a complex characterized in that the complex is administered if CAF is significantly expressing GPC-1.
  • (Item 20C) A complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity for treating a cancer that expresses GPC-1 heterogeneously.
  • a complex of an anti-GPC-1 antibody and a drug having cytotoxic activity which is effective for cancer having CAF, and a therapeutic / preventive technique based on the complex are provided.
  • Such complexes are extremely effective in treating refractory tumors.
  • FIG. 1 shows the results of immunohistochemical staining in pancreatic cancer.
  • FIG. 2 shows a schematic diagram of the bystander effect of GPC1-ADC.
  • FIG. 3 shows a schematic diagram of an exemplary ADC structure.
  • FIG. 4 shows the antigen affinity analysis of GPC1-ADC and unlabeled antibody by FACS.
  • FIG. 5 shows the results of the intracellular internalization assay (upper panel) and intracellular localization analysis (lower panel) of GPC1-ADC. The left bar of each group in the graph shows 4 ° C and the right bar shows 37 ° C.
  • FIG. 6 shows the results of an in vitro ADC assay using GPC1-ADC.
  • FIG. 7 shows a schematic diagram of the culture supernatant transfer assay.
  • FIG. 1 shows the results of immunohistochemical staining in pancreatic cancer.
  • FIG. 2 shows a schematic diagram of the bystander effect of GPC1-ADC.
  • FIG. 3 shows a schematic
  • FIG. 8 shows the results of the culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC.
  • the left bar of each group shows Control-ADC-TE8 cells (culture supernatant), and the right bar shows GPC1-ADC-TE8 cells (culture supernatant).
  • FIG. 9 shows confirmation of GPC1 expression in pancreatic cancer PDX (PK645) which is GPC1 negative in pancreatic cancer cells and GPC1 positive in CAF, and humanized GPC1-ADC (MMAE) in pancreatic cancer PDX (PK645).
  • PK645 pancreatic cancer PDX
  • MMAE humanized GPC1-ADC
  • FIG. 10 shows confirmation of GPC1 expression in pancreatic cancer PDX (PK565) in which GPC1 is unevenly expressed, and in vivo efficacy test of humanized GPC1-ADC (MMAE) in pancreatic cancer PDX (PK565). The result of is shown. There was no significant change in body weight in either group.
  • FIG. 11 shows confirmation of GPC1 expression in esophageal cancer PDX (ESCC14) in which GPC1 is uniformly expressed, and in vivo drug efficacy test of humanized GPC1-ADC (MMAE) in esophageal cancer PDX (ESCC14). The results are shown. There was no significant change in body weight in either group. Tumor volume decreased at 10 mg / kg GPC1-ADC (MMAE) and 3 mg / kg GPC1-ADC (MMAE), with tumors approximately 0 mm 3 in both groups and increased in PBS.
  • FIG. 11 shows confirmation of GPC1 expression in esophageal cancer PDX (ESCC14) in which GPC1 is uniformly expressed, and in vivo drug efficacy test of humanized GPC1-ADC (MMAE) in esophageal cancer PDX (ESCC14). The results are shown. There was no significant change in body weight in either group. Tumor volume decreased at 10 mg / kg GPC1-
  • FIG. 12 shows confirmation of GPC1 expression in esophageal cancer PDX (ESCC2) in which GPC1 is uniformly expressed, and in vivo drug efficacy test of humanized GPC1-ADC (MMAE) in esophageal cancer PDX (ESCC2). The results are shown. There was no significant change in body weight in either group. Tumor volume decreased slightly at GPC1-ADC (MMAE) 10 mg / kg, increased at GPC1-ADC (MMAE) 3 mg / kg, GPC1-ADC (MMAE) 1 mg / kg, and PBS, and increased at GPC1-ADC (MMAE). ) 3 mg / kg, GPC1-ADC (MMAE) 1 mg / kg, and PBS in that order.
  • MMAE humanized GPC1-ADC
  • FIG. 13 shows a schematic diagram of the culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC.
  • an anti-GPC1 monoclonal antibody clone 01a033
  • FIG. 14 shows the results of the culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC.
  • FIG. 15 shows the detection results of apoptosis in cancer cells and CAF of pancreatic cancer PDX (PK645). The scale shows 25 ⁇ m. Arrows indicate apoptosis.
  • FIG. 16 shows the confirmation result of the expression of MDR-1 in the CAF of PK645.
  • Figure 17 shows an IC 50 of MMAE and MMAF in PK645-CAF in the presence of MDR-1 inhibitors.
  • FIG. 18 shows the results of a culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC using an MDR-1 inhibitor.
  • the left bar of each group in the graph shows Control-ADC PK645 CAF (culture supernatant), and the right bar shows GPC1-ADC PK645 CAF (culture supernatant).
  • Glypican-1 glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchored cell surface proteoglycans, and have heparan sulfate. It is a thing. It has been implicated in cell adhesion, migration, lipoprotein metabolism, growth factor activity regulation and blood coagulation inhibition. It is said to bind to several fibroblast growth factors (FGFs) such as FGF-1, FGF-2 and FGF-7. Glypican-1 is said to function as an extracellular chaperone of VEGF165 and help restore the ability to bind receptors after oxidation.
  • FGFs fibroblast growth factors
  • Glypican-1 is registered with UniProt as accession number P35052 (see http://www.uniprot.org/uniprot/P35052), and in NCBI, NP_002072.2 (precursor amino acid sequence). In NM_002081.2. All of these are information that can be used herein, and that information is incorporated herein by reference. For Glypican-1, see David G et al. , J Cell Biol.
  • the nucleic acid sequence (full length) of human Glypican-1 is represented by SEQ ID NO: 1, and the amino acid sequence is represented by SEQ ID NO: 2.
  • the nucleic acid sequence (overall length) of mouse Glypican-1 is represented by SEQ ID NO: 3, and the amino acid sequence is represented by SEQ ID NO: 4.
  • Glypican-1 As used herein, “Glypican-1", “GPC-1” or “GPC1” may be assigned to a particular sequence number or accession number as long as it meets the specific purposes of the present disclosure. Not only the protein having the amino acid sequence described (or the nucleic acid encoding it), but also its functionally active analogs or derivatives, or its functionally active fragments, or homologues thereof, or high stringency conditions. Alternatively, it is understood that, under low stringency conditions, a nucleic acid-encoded variant that hybridizes to the nucleic acid encoding this protein can also be used in the present disclosure.
  • derivatives are preferably not intended to be limiting, but are substantially relative to the protein of interest (eg, Glypican-1, antibody).
  • Such molecules include, in various embodiments, sequences that are aligned over amino acid sequences of the same size or by a computer homology program known in the art. At least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical or such molecules.
  • the encoding nucleic acid is capable of hybridizing to a sequence encoding a component protein under (highly) stringent, moderately stringent, or non-stringent conditions.
  • Glypican-1 chimpanzees (K7B6W5), rats (Macamulatta) (F6VPW9), mice (Mus mammals) (Q9QZF2), rats (Rattus53)
  • Glypican-1 protein is known to be expressed in many non-human animals such as Rattus norvegicus (F1P150). Therefore, these animals, especially mammals, are also within the scope of the present disclosure. It is understood to enter.
  • the functional domain of Glypican-1 eg, the extracellular domain (about 500 amino acids, containing 12 cysteine residues) and the C-terminal hydrophobic region (GPI-anchor domain) are conserved. Is preferable.
  • protein protein
  • polypeptide oligopeptide
  • peptide refers to a polymer of amino acids of any length.
  • the polymer may be linear, branched or cyclic.
  • the amino acid may be natural or non-natural, or may be a modified amino acid.
  • the term may also include those assembled into a complex of multiple polypeptide chains.
  • the term also includes naturally or artificially modified amino acid polymers. Such modifications include, for example, disulfide bond formation, glycosylation, lipidation, acetylation, phosphorylation or any other manipulation or modification (eg, conjugation with a labeling component).
  • amino acid is a general term for organic compounds having an amino group and a carboxyl group.
  • amino acid sequence may be chemically modified.
  • any amino acid in the amino acid sequence may form a salt or a solvate.
  • any amino acid in the amino acid sequence may be L-type or D-type.
  • the protein according to the embodiment of the present disclosure contains the above-mentioned "specific amino acid sequence”.
  • Chemical modifications that amino acids contained in proteins undergo in vivo include, for example, N-terminal modification (eg, acetylation, myristoylation, etc.), C-terminal modification (eg, amidation, glycosylphosphatidylinositol addition, etc.), or side chain. Modifications (eg, phosphorylation, sugar chain addition, etc.) are known. Amino acids may be natural or non-natural as long as they meet the purposes of the present disclosure.
  • polynucleotide As used herein, "polynucleotide”, “oligonucleotide” and “nucleic acid” are used interchangeably herein to refer to a polymer of nucleotides of any length. The term also includes “oligonucleotide derivatives" or “polynucleotide derivatives”. The "oligonucleotide derivative” or “polynucleotide derivative” refers to an oligonucleotide or polynucleotide containing a derivative of a nucleotide or having an unusual bond between nucleotides, and is used interchangeably.
  • oligonucleotide examples include, for example, 2'-O-methyl-ribonucleotide, an oligonucleotide derivative in which a phosphate diester bond in an oligonucleotide is converted into a phosphorothioate bond, and a phosphate diester bond in an oligonucleotide.
  • oligonucleotide derivative in which cytosine in the oligonucleotide is replaced with C-5 propynyl citosine
  • oligo An oligonucleotide derivative in which cytosine in a nucleotide is replaced with phenoxazine-modified cytosine, an oligonucleotide derivative in which ribose in DNA is replaced with 2'-O-propylribose, and ribose in an oligonucleotide is 2.
  • nucleic acid sequences are also conservatively modified variants (eg, degenerate codon substitutions) and complementary sequences, as are the expressly indicated sequences. Is intended to be included.
  • the degenerate codon substituent creates a sequence in which the third position of one or more selected (or all) codons is replaced with a mixed base and / or deoxyinosine residue.
  • nucleic acid is also used interchangeably with genes, cDNAs, mRNAs, oligonucleotides, and polynucleotides.
  • nucleotide may be natural or non-natural.
  • the "gene” refers to a factor that defines a genetic trait, and the “gene” may refer to a "polynucleotide", an “oligonucleotide”, and a “nucleic acid”.
  • homology of a gene means the degree of identity of two or more gene sequences to each other, and generally, having “homology” means a high degree of identity or similarity. Say. Therefore, the higher the homology of two genes, the higher the identity or similarity of their sequences. Whether or not the two genes have homology can be examined by direct sequence comparison or, in the case of nucleic acids, hybridization methods under stringent conditions. When directly comparing two gene sequences, the DNA sequences are typically at least 50% identical, preferably at least 70% identical, and more preferably at least 80%, 90%. , 95%, 96%, 97%, 98% or 99% are homologous.
  • a “homologous” or “homologous gene product” is a protein in another species, preferably a mammal, that exerts the same biological functions as the protein components of the complex further described herein. Means. Such homologues are also sometimes referred to as “ortholog gene products.” It is understood that such homologues, homologous gene products, ortholog gene products and the like can also be used as long as they meet the purposes of the present disclosure.
  • Amino acids can be referred to herein by either their generally known three-letter symbols or the one-letter symbols recommended by the IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Communication. Nucleotides can also be referred to by the generally recognized one-letter code.
  • comparisons of amino acid and base sequence similarity, identity and homology are calculated using default parameters using BLAST, a tool for sequence analysis.
  • the identity search can be performed using, for example, NCBI's BLAST 2.2.28 (issued 2013.4.2).
  • the value of identity in the present specification is usually the value when the above BLAST is used and aligned under the default conditions. However, if a higher value is obtained by changing the parameter, the highest value is used as the identity value. When identity is evaluated in multiple regions, the highest value among them is set as the identity value. Similarity is a numerical value that takes into account similar amino acids in addition to identity.
  • “90% or more” may be, for example, 90, 95, 96, 97, 98, 99, or 100% or more, and is within the range of any two of them. May be good.
  • the above-mentioned "homology” may be calculated by calculating the ratio of the number of amino acids homologous in an amino acid sequence between two or a plurality of amino acids according to a method known in the art. Before calculating the ratio, the amino acid sequences of the amino acid sequences to be compared are aligned, and a gap is introduced in a part of the amino acid sequence if necessary for maximizing the ratio of the same amino acid.
  • the term "functional equivalent” refers to any entity that has the same target function but a different structure with respect to the original entity of interest.
  • the functional equivalent of "Glypican-1" or its antibody is not Glypican-1 or its antibody itself, but in variants or variants of Glypican-1 or its antibodies (eg, amino acid sequence variants, etc.). It has the biological action of Glypican-1 or its antibody, and at the time of action, it changes to Glypican-1 or its antibody itself or a variant or variant of this Glypican-1 or its antibody.
  • Can include eg, including nucleic acids encoding Glypican-1 or its antibodies themselves or variants or variants of Glypican-1 or its antibodies, and vectors, cells, etc.
  • Glypican-1 or an antibody thereof can be used in the same manner as Glypican-1 or an antibody thereof, without particular mention.
  • Functional equivalents can be found by searching databases and the like.
  • searching means finding another nucleobase sequence having a specific function and / or property by utilizing one nucleobase sequence electronically, biologically, or by other methods.
  • BLAST Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)
  • FASTA Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad.
  • Bio searches include stringent hybridization, macroarrays with genomic DNA attached to nylon membranes or the like, or microarrays (microarray assays) attached to glass plates, PCR and in situ hybridization, and the like. Not limited. As used herein, it is intended that the genes used in the present disclosure should also include the corresponding genes identified by such electronic and biological searches.
  • one or more amino acids inserted, substituted or deleted, or added to one or both ends of the amino acid sequence can be used.
  • "insertion, substitution or deletion of one or more amino acids in an amino acid sequence, or addition to one or both ends” is a well-known technical technique such as a site-specific mutagenesis method. It means that the modification has been made by a method or by a natural mutation, such as by substituting a plurality of amino acids that can occur naturally.
  • the modified amino acid sequence may include, for example, 1 to 30, preferably 1 to 20, more preferably 1 to 9, still more preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 2 amino acids inserted, substituted, or missing. It can be lost, or added to one or both ends.
  • the modified amino acid sequence is preferably an amino acid sequence in which the amino acid sequence has one or more (preferably one or several or 1, 2, 3, or 4) conservative substitutions in the Glypican-1 amino acid sequence. May be.
  • conservative substitution means substituting one or more amino acid residues with another chemically similar amino acid residue so as not to substantially alter the function of the protein. For example, there is a case where one hydrophobic residue is replaced with another hydrophobic residue, a case where one polar residue is replaced with another polar residue having the same charge, and the like. Functionally similar amino acids capable of making such substitutions are known in the art for each amino acid.
  • non-polar (hydrophobic) amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine, and methionine.
  • polar (neutral) amino acid examples include glycine, serine, threonine, tyrosine, glutamine, asparagine, and cysteine.
  • positively charged (basic) amino acids examples include arginine, histidine, lysine and the like.
  • negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid.
  • the "anti-Glypican-1 antibody” comprises an antibody having binding to Glypican-1.
  • the method for producing this anti-Glypican-1 antibody is not particularly limited, and for example, Glypican-1 may be produced by immunizing mammals or birds.
  • An "antigen-binding fragment" of an anti-Glypican-1 antibody refers to a fragment of an antibody that retains its ability to bind Glypican-1.
  • antigen-binding fragments include, but are not limited to, single chain antibodies, scFv, Fab fragments, F (ab') 2 fragments, and the like.
  • the anti-Glypican-1 antibody according to one embodiment of the present invention may be a monoclonal antibody.
  • a monoclonal antibody can act on Glypican-1 more efficiently than a polyclonal antibody. From the viewpoint of efficiently producing an anti-Glypican-1 monoclonal antibody, it is preferable to immunize chickens with Glypican-1.
  • the antibody class of the anti-Glypican-1 antibody according to one embodiment of the present disclosure is not particularly limited, but may be, for example, IgM, IgD, IgG, IgA, IgE, or IgY.
  • the anti-Glypican-1 antibody according to one embodiment of the present disclosure may be an antibody fragment having an antigen-binding activity (hereinafter, may be referred to as an “antigen-binding fragment”). In this case, there are effects such as increased stability or antibody production efficiency.
  • the anti-Glypican-1 antibody may be a fusion protein.
  • This fusion protein may be one in which a polypeptide or oligopeptide is bound to the N- or C-terminal of the anti-Glypican-1 antibody.
  • the oligopeptide may be a His tag.
  • the anti-Glypican-1 antibody according to one embodiment of the present disclosure may be, for example, an antibody obtained through a step of immunizing an organism with a purified Glypican-1, Glypican-1 expressing cell, or a Glypican-1 containing lipid membrane. good. From the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on Glypican-1 positive cancer, it is preferable to use Glypican-1 expressing cells for immunity.
  • the anti-Glypican-1 antibody is an antibody having a CDR set of an antibody obtained through a step of immunizing an organism with purified Glypican-1, Glypican-1 expressing cells or a lipid membrane containing Glypican-1. May be. From the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on Glypican-1 positive cancer, it is preferable to use Glypican-1 expressing cells for immunity.
  • the CDR set is a set of heavy chain CDRs 1, 2, and 3, and light chain CDRs 1, 2, and 3.
  • the "Glypican-1 expressing cell” may be obtained, for example, by introducing a polynucleotide encoding Glypican-1 into a cell and then expressing Glypican-1.
  • Glypican-1 contains a Glypican-1 fragment.
  • the "Glypican-1 containing lipid membrane” may be obtained, for example, by mixing Glypican-1 and a lipid bilayer membrane.
  • Glypican-1 contains a Glypican-1 fragment.
  • the anti-Glypican-1 antibody according to one embodiment of the present disclosure is an antibody obtained through a step of immunizing a chicken with an antigen, or a CDR set of the antibody, from the viewpoint of enhancing the therapeutic effect on Glypican-1 positive cancer.
  • Antibodies with are preferred.
  • the anti-Glypican-1 antibody of the present disclosure may have any binding force as long as the object is achieved.
  • the anti-Glypican-1 antibody of the present disclosure may have internalization activity and / or ADC activity even if it has a low affinity for Glypican-1.
  • the KD value (kd / ka) is 1.0 ⁇ 10-7 (M) or less, 1.0 ⁇ 10-8 (M) or less, 1.0 ⁇ 10-9 (M) or less, or 1.0. It can be x10-10 (M) or less.
  • the binding force of the anti-Glypican-1 antibody for diagnostic or companion reagent purposes is 1.0 ⁇ 10-8 (M) or less in KD value (kd / ka).
  • the anti-Glypican-1 antibody may be an antibody that binds to a wild type or a variant of Glypican-1. Mutants include those due to differences in DNA sequences between individuals.
  • the amino acid sequence of wild-type or mutant Glypican-1 is preferably 80% or more, more preferably 90% or more, more preferably 95% or more, and particularly preferably 98% or more with respect to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2. Has the homology of.
  • an "antibody” includes a molecule or a population thereof capable of specifically binding to a specific epitope on an antigen. Further, the antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. Antibodies can be present in various forms, eg, full-length antibody (antibody with Fab and Fc regions), Fv antibody, Fab antibody, F (ab') 2 antibody, Fab'antibody, diabody, single chain.
  • Chain (single chain) antibody eg, scFv), sc (Fv) 2 (single chain (Fv) 2), scFv-Fc, dsFv, multivalent specific antibody (eg, oligo-specific antibody, bivalent specific antibody) ), Diabodies, antigen-binding peptides or polypeptides, chimeric antibodies (eg, mouse-human chimeric antibodies, chicken-human chimeric antibodies, etc.), mouse antibodies, chicken antibodies, humanized antibodies, human antibodies, or their equivalents. It may be one or more forms selected from the group consisting of (or equivalents).
  • Antibodies also include antibody-modified or antibody-unmodified products. The antibody modification may have an antibody bound to various molecules such as polyethylene glycol.
  • the antibody modification can be obtained by chemically modifying the antibody using a known method. Further, such an antibody may be covalently linked or recombinantly fused to an enzyme such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase, alpha-galactosidase, or the like.
  • the anti-Glypican-1 antibody used in the present disclosure may bind to the Glypican-1 protein, regardless of its origin, type, shape, or the like.
  • known antibodies such as non-human animal antibodies (eg, mouse antibodies, rat antibodies, camel antibodies), human antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies and the like can be used.
  • monoclonal or polyclonal can be used as an antibody, but a monoclonal antibody is preferable.
  • the binding of the antibody to the Glypican-1 protein is preferably a specific binding.
  • Antibodies also include antibody-modified or antibody-unmodified products.
  • the antibody modification may have an antibody bound to various molecules such as polyethylene glycol.
  • the antibody modification can be obtained by chemically modifying the antibody using a known method.
  • the "polyclonal antibody” is used in mammals (eg, rats, mice, rabbits, cows, monkeys, etc.), birds, etc., for example, in order to induce the production of an antigen-specific polyclonal antibody. It can be produced by administration of an immunogen containing the antigen of interest.
  • the administration of the immunogen may be injecting one or more immunogens and, if desired, an adjuvant.
  • the adjuvant may be used to increase the immune response and may include Freund's adjuvant (complete or incomplete), mineral gel (aluminum hydroxide, etc.), surface active material (lysolecithin, etc.), and the like. .. Immune protocols are known in the art and may be carried out by any method that elicits an immune response, depending on the host organism of choice (Protein Experiment Handbook, Yodosha (2003): 86-91). .).
  • a "monoclonal antibody” is an antibody corresponding to substantially a single epitope, except for antibodies in which the individual antibodies constituting the population have mutations that can occur spontaneously in small amounts. Including the case where. Alternatively, the individual antibodies that make up the population may be substantially identical, except for antibodies that have mutations that can occur spontaneously in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific and differ from conventional polyclonal antibodies, which typically contain different antibodies corresponding to different epitopes. In addition to its specificity, monoclonal antibodies are useful in that they can be synthesized from hybridoma cultures that are not contaminated with other immunoglobulins.
  • the description "monoclonal” may indicate that it is obtained from a substantially homogeneous population of antibodies, but does not imply that the antibody must be produced in any particular way.
  • the monoclonal antibody may be prepared by the same method as the hybridoma method described in "Kohler G, Milstein C., Nature. 1975 August 7; 256 (5517): 495-497.”.
  • the monoclonal antibody may be prepared by a method similar to the recombinant method described in US Pat. No. 4,816,567.
  • the monoclonal antibody is "Clackson et al., Nature. 1991 Aug 15; 352 (6336): 624-628.”, Or "Marks et al., J MolBiol.
  • any method known in the art can be used, and for example, the following can be exemplified as the construction of a typical mass production system for antibodies and antibody production. That is, CHO cells are transfected with an H-chain antibody expression vector and an L-chain antibody expression vector, cultured using the selective reagents G418 and Zeocin, and cloned by the limiting dilution method. After cloning, clones expressing the antibody stably are selected by the ELISA method. The selected CHO cells are expanded and cultured, and the culture supernatant containing the antibody is collected. Antibodies can be purified from the collected culture supernatant by purifying Protein A or Protein G.
  • the humanized antibody of the present disclosure can be obtained as a polyclonal fully human antibody by immunizing a human antibody-producing mouse with an antigen of interest, from which a monoclonal state can be obtained before use in the present disclosure.
  • a "humanized antibody” comprises, for example, one or more CDRs derived from a non-human species, a framework region (FR) derived from human immunoglobulin, and a constant region derived from human immunoglobulin. It is an antibody that binds to a desired antigen. Humanization of the antibody can be performed using various techniques known in the art (Almagro et al., Front Bioscii. 2008 Jan 1; 13: 1619-1633.). For example, CDR graphing (Ozaki et al., Blood. 1999 Jun 1; 93 (11): 3922-3930.), Re-surfing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci US A.
  • FR shuffle Damscroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr; 44 (11): 3049-3060. Epub 2007 Jan 22.
  • amino acid residues in the human FR region may be replaced with the corresponding residues from the CDR donor antibody. This FR substitution can be carried out by a method well known in the art (Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24; 332 (6162): 323-327.).
  • FR residues important for antigen binding may be identified by modeling the interaction between CDRs and FR residues.
  • sequence comparison may be used to identify anomalous FR residues at specific positions.
  • humanized antibodies may be produced as described in the production examples of the present disclosure. Specifically, it may be screened from a heavy chain-fixed V ⁇ library in which the CDRs of non-human-derived antibodies are graphed into the human heavy chain framework. In this method of humanization, the heavy chain CDR is unchanged, but the light chain CDR can.
  • a "heavy chain” is typically the main component of a full-length antibody. Heavy chains are usually attached to light chains by disulfide and non-covalent bonds. In the domain on the N-terminal side of the heavy chain, there is a region called a variable region (VH) in which the amino acid sequence is not constant even for antibodies of the same type and the same class, and in general, VH has a large specificity and affinity for an antigen. It is known to contribute. For example, when a VH-only molecule was prepared in "Reiter et al., J Mol Biol. 1999 Jul 16; 290 (3): 685-98.”, It was specifically bound to the antigen with high affinity. Is described. Furthermore, in “Wolfson W, Chem Biol. 2006 Dec; 13 (12): 1243-1244.”, It is found that among camel antibodies, only heavy chain antibodies having no light chain are present. Has been described.
  • a "CDR (complementarity determining region)" is a region of an antibody that actually contacts an antigen to form a binding site.
  • the CDRs are located on the Fv of the antibody, which includes the variable region: heavy chain variable region (VH) and light chain variable region (VL).
  • CDRs include CDR1, CDR2, and CDR3 consisting of about 5 to 30 amino acid residues.
  • the heavy chain CDR contributes to the binding of the antibody to the antigen.
  • CDR3 has the highest contribution to the binding of the antibody to the antigen.
  • the antibody binding ability was increased by modifying the heavy chain CDR3.
  • the Fv region other than the CDR is called the framework region (FR), which consists of FR1, FR2, FR3 and FR4, and is relatively well conserved among the antibodies (Kabat et al., "Sequence of Proteins of Immunological Interest”. US Dept. Health and Human Services, 1983.). That is, it can be said that the factor that characterizes the reactivity of the antibody lies in the CDR, and in particular, the heavy chain CDR.
  • the definition of Kabat (Sequences of Properties of Imperial Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, National Institutes of Health, Bethesda, Bethesda, I. ., 1987; 196: 901-917) may be adopted.
  • the definition of Kabat is adopted as a preferred example, but is not necessarily limited to this.
  • the determination may be made in consideration of both the definition of Kabat and the definition of Chothia. It can also be a CDR.
  • the term "antigen” refers to any substrate that can be specifically bound by an antibody molecule.
  • immunogen refers to an antigen capable of initiating lymphocyte activation that produces an antigen-specific immune response.
  • epitope or "antigen determinant” refers to a site in an antigen molecule to which an antibody or lymphocyte receptor binds. Methods of determining epitopes are well known in the art, and such epitopes can be determined by one of ordinary skill in the art when the primary sequence of nucleic acid or amino acid is provided. It is understood that the antibodies of the present disclosure can be similarly utilized even with antibodies having other sequences as long as the epitopes are the same.
  • the antibody used in the present specification may be any specific antibody as long as false positives are reduced.
  • “Cancer” covered by this disclosure includes lung cancer, esophageal cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, kidney cancer, adrenal cancer, biliary tract cancer, breast cancer, colon cancer, small bowel cancer, etc.
  • ovarian cancer includes, for example, ovarian serous adenocarcinoma, or ovarian clear cell line cancer.
  • Uterine cancer includes, for example, endometrial cancer, or cervical cancer.
  • Head and neck cancers include, for example, oral cancer, pharyngeal cancer, laryngeal cancer, nasal cavity cancer, sinus cancer, salivary adenocarcinoma, or thyroid cancer.
  • Lung cancer includes, for example, non-small cell lung cancer or small cell lung cancer.
  • the malignant tumor may be PD-L1 positive.
  • Esophageal cancer is used in a normal sense and is used in a broad sense including cancer in the esophagus.
  • Esophageal cancer includes, but is not limited to, squamous cell carcinoma, adenocarcinoma, and lymph node metastasis site. It is understood that about half of Japanese esophageal cancers occur near the center of the esophagus in the chest, and then 1/4 occur in the lower part of the esophagus. ..
  • this disclosure can be used as an indicator of esophageal cancer as a whole, including squamous cell carcinoma, adenocarcinoma, and lymph node metastasis sites.
  • pancreatic cancer refers to a malignant tumor originating from the pancreas, but generally refers to pancreatic duct cancer, and also includes tumors of other parts of the pancreas.
  • cervical cancer is a type of cervical cancer, and cervical cancer includes cervical cancer and uterine body cancer, and cervical cancer is the cervical region at the entrance of the uterus. It is generated from the part called.
  • lung cancer is a malignant tumor derived from epithelial cells that develops in the lung, and includes small cell lung cancer and non-small cell lung cancer.
  • Non-small cell lung cancer includes adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, and the like. I have large cell carcinoma.
  • head and neck cancer is a tumor of the head and neck, and refers to a tumor formed in a part from the face to the neck, for example, a part such as the nose, mouth, throat, upper chin, lower chin, and ears. ..
  • breast cancer is a tumor that occurs in the breast, and includes ductal cancer, lobular cancer, and the like.
  • uterine leiomyosarcoma refers to uterine sarcoma that forms in the smooth muscle of the uterus. Uterine leiomyosarcoma can be histologically diagnosed by cell density, cell division count, cell atypia, and the presence or absence of coagulative necrosis of tumor cells.
  • prostate cancer means a tumor that forms in the prostate.
  • “skills gastric cancer” is an intractable malignant tumor that develops in the stomach and progresses so as to infiltrate into the stomach wall and stomach tissue, and as it progresses, the stomach wall becomes hard and thick. Unlike normal gastric cancer, it does not create lesions such as ulcers, so it is difficult to detect by visual examination such as endoscopy.
  • cholangiocarcinoma is a tumor that develops in the bile duct, including intrahepatic cholangiocarcinoma that occurs in the bile duct inside the liver, hilar region cholangiocarcinoma that occurs in the hilar region outside the liver, and liver. It is classified as a distal cholangiocarcinoma that occurs in the outer distal part.
  • colonal cancer refers to cancer that develops in the mucous membrane inside the large intestine. Some colorectal cancers develop as cancer in the process of growing benign polyps, while others develop by directly transforming normal cells of the mucosa into cancer cells.
  • cancer-assisted fibroblasts refers to fibroblasts constituting the interstitium of cancer.
  • CAF produces a lot of extracellular matrix such as collagen, which makes the interstitium of cancer very hard, and as a result, the blood vessels are crushed (collapse), so that the anticancer drug is efficient. Prevents penetration. The crushing of blood vessels also induces hypoxia in the cancerous tissue and further increases the malignancy of the cancer cells.
  • the increase in interstitial hardness itself is one of the factors that increase the growth and infiltration ability of cancer cells (the ability to spread to surrounding tissues).
  • CAF produces many growth factors that act on cancer cells to promote their growth and infiltration and suppress the antitumor immune response.
  • a cancer "interstitium” is a tissue that surrounds cancer cells in a cancer tissue and contains CAF as a major constituent, and other constituents include immune cells and bone marrow-derived cells.
  • Tumor refers to tissue containing blood vessels, lymph vessels, extracellular matrix produced by CAF, and the like.
  • the "content rate" of interstitium in cancer refers to the ratio of interstitium in the total area of cancer tissue by histopathological analysis. Content can be calculated by identifying interstitial and / or non-interstitial regions (cancer cell regions). Examples of the method for identifying the stroma include, but are not limited to, immunohistochemical staining using an antibody against a protein specifically expressed in the stroma, for example, an antibody against ⁇ -SMA. Methods for identifying cancer cell regions include observing cancer-specific structures (eg, ductal structures in pancreatic cancer), antibodies to proteins specifically expressed in cancer cells, eg, epithelial cells.
  • cancer-specific structures eg, ductal structures in pancreatic cancer
  • antibodies to proteins specifically expressed in cancer cells eg, epithelial cells.
  • the “content rate” is calculated by observing a cancer-specific structure (for example, a ductal structure in pancreatic cancer) to identify a cancer cell region, unless otherwise specified. Refers to things.
  • Tumor tissue slices are subjected to immunohistochemical staining using HE staining, anti-GPC1 antibody, anti- ⁇ -SMA antibody, or the like.
  • the image is observed by microscopic observation, and the range of cancer cells (ductal structure) and CAF (fibroblast-like structure) is measured.
  • (3) Calculate the area occupied by cancer cells and CAF in the entire field of view under a microscope.
  • subject refers to an organism subject to the diagnosis, detection, or treatment of the present disclosure (for example, an organism such as a human being, cells taken from an organism, blood, serum, etc.). ..
  • sample refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, serum or the like. Those skilled in the art can appropriately select a preferable sample based on the description in the present specification.
  • drug As used herein, “drug”, “drug” or “factor” (both of which correspond to agents in English) are used interchangeably in a broad sense and as long as the intended purpose can be achieved. It may also be a substance or other element (eg, energy such as light, radioactivity, heat, electricity). Such substances include, for example, proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (eg, cDNA, DNA such as genomic DNA, RNA such as mRNA), poly.
  • cDNA DNA such as genomic DNA
  • RNA such as mRNA
  • Substances that bind to Glypican-1 can also be such agents.
  • Factors specific to a polynucleotide typically include polynucleotides that are complementary to the sequence of the polynucleotide with certain sequence homology (eg, 70% or more sequence identity). Examples include, but are not limited to, polypeptides such as transcription factors that bind to the promoter region.
  • Factors specific to a polypeptide typically include an antibody or derivative thereof or an analog thereof (eg, a single chain antibody) specifically directed to the polypeptide, wherein the polypeptide is a receptor.
  • an antibody or derivative thereof or an analog thereof eg, a single chain antibody
  • the polypeptide is a receptor.
  • a specific ligand or receptor in the case of a ligand, a substrate thereof when the polypeptide thereof is an enzyme, and the like can be mentioned, but the present invention is not limited thereto.
  • cell membrane permeability means that a molecule (eg, polypeptide, sugar, lipid, nucleic acid, other hydrocarbon, low molecular weight compound, etc.) forms a plasma membrane inside or outside the cell in a significant or effective amount. Refers to the ability to pass through.
  • a molecule eg, polypeptide, sugar, lipid, nucleic acid, other hydrocarbon, low molecular weight compound, etc.
  • drug excretion transporter refers to a transmembrane protein for transporting intracellular drugs and other unwanted substances out of the cell.
  • diagnosis identifies various parameters associated with a disease, disorder, condition (eg, esophageal cancer), etc. in a subject and determines the current or future of such disease, disorder, condition. To do.
  • condition within the body can be investigated and such information can be used to formulate a disease, disorder, condition, treatment to be administered or prophylaxis in the subject.
  • various parameters such as a method can be selected.
  • diagnosis in a narrow sense means diagnosing the current state, but broadly includes “early diagnosis”, “predictive diagnosis”, “preliminary diagnosis” and the like.
  • the diagnostic method of the present disclosure is industrially useful because it can be used from the body and can be carried out without the hands of medical personnel such as doctors.
  • "predictive diagnosis, pre-diagnosis or diagnosis” may be particularly referred to as "support” in order to clarify that it can be carried out without the hands of medical personnel such as doctors.
  • the term "detective agent (agent)” or “test agent (agent)” means any agent that can detect or inspect a target object in a broad sense.
  • the "diagnostic agent (agent)” means any agent capable of diagnosing a target condition (for example, a disease such as esophageal cancer) in a broad sense.
  • treatment refers to a disease or disorder (eg, esophageal cancer) that, in the event of such a condition, prevents the exacerbation of such disease or disorder, preferably maintains the status quo. More preferably, it refers to alleviation, more preferably withdrawal, and includes the ability to exert a symptom-improving effect or a preventive effect on a patient's disease or one or more symptoms associated with the disease. Diagnosis in advance and appropriate treatment is called “companion treatment”, and the diagnostic agent for that purpose is sometimes called “companion diagnostic agent”.
  • the "therapeutic agent (drug)” means any drug that can treat a target condition (for example, a disease such as esophageal cancer) in a broad sense.
  • the "therapeutic agent” may be a pharmaceutical composition comprising an active ingredient and one or more pharmacologically acceptable carriers.
  • the pharmaceutical composition can be produced, for example, by mixing the active ingredient with the above carrier and using any method known in the technical field of pharmaceutics.
  • the therapeutic agent is not limited in the form of use as long as it is used for treatment, and may be an active ingredient alone or a mixture of an active ingredient and an arbitrary ingredient.
  • the shape of the carrier is not particularly limited, and may be, for example, a solid or a liquid (for example, a buffer solution).
  • the therapeutic agent for esophageal cancer includes a drug (preventive agent) used for prevention of esophageal cancer or an agent for suppressing the growth of esophageal cancer cells.
  • prevention means to prevent a certain disease or disorder (for example, esophageal cancer) from becoming such a condition before it becomes such a condition.
  • the agents of the present disclosure can be used to make a diagnosis, and if necessary, the agents of the present disclosure can be used to prevent, for example, esophageal cancer, or to take preventive measures.
  • the "preventive drug (drug)” means any drug that can prevent a target condition (for example, a disease such as esophageal cancer) in a broad sense.
  • interaction refers to two substances, such as an intermolecular force (Van der Waals force), a hydrogen bond, or a hydrophobic interaction between one substance and the other substance. Etc.). Normally, the two substances that interact with each other are in an associated or bound state. The detection, testing and diagnosis of the present disclosure can be achieved utilizing such interactions.
  • detection or “quantification” of polynucleotide or polypeptide expression includes, for example, binding or interaction of a mRNA to a detection agent, test agent or diagnostic agent (including application as a companion reagent). It can be achieved using appropriate methods, including measurement and immunological measurement methods. Examples of the molecular biological measurement method include Northern blotting, dot blotting, PCR and the like. Examples of immunological measurement methods include ELISA method using a microtiter plate, RIA method, immunofluorescence method, luminescence immunoassay (LIA), immunoprecipitation method (IP), immunodiffusion method (SRID), and immunity.
  • DNA arrays are widely outlined in (Shujunsha ed., Cell Engineering Separate Volume "DNA Microarrays and Latest PCR Methods"). For protein arrays, see Nat Genet. It is described in detail in 2002 Dec; 32 Supplement: 526-532.
  • the method for analyzing gene expression includes, but is not limited to, RT-PCR, RACE method, SCSP method, immunoprecipitation method, two-hybrid system, and invitro translation.
  • RT-PCR RT-PCR
  • RACE method RACE method
  • SCSP method immunoprecipitation method
  • two-hybrid system two-hybrid system
  • invitro translation Such further analytical methods are described, for example, in the Genome Analysis Experimental Method / Yusuke Nakamura Lab Manual, edited by Yusuke Nakamura Yodosha (2002), and all of these descriptions are incorporated herein by reference. Will be done.
  • “reduction” or “suppression” of an activity, expression product eg, protein, transcript (RNA, etc.)
  • a synonym thereof is a reduction in the quantity, quality or effect of a particular activity, transcript or protein. , Or the activity to reduce.
  • “disappearing” out of the decrease it means that the activity, expression product, etc. are below the detection limit, and in particular, it may be called “disappearing”.
  • “disappearance” is included in “decrease” or “suppression”.
  • label refers to an entity (eg, substance, energy, electromagnetic wave, etc.) for identifying a molecule or substance of interest from others.
  • a labeling method include an RI (radioisotope) method, a fluorescence method, a biotin method, a chemiluminescence method and the like.
  • the labels are labeled with fluorescent substances having different fluorescence maximum wavelengths. The difference in the maximum wavelength of fluorescence emission is preferably 10 nm or more.
  • Alexa TM Fluor is a water-soluble fluorescent dye obtained by modifying coumarin, rhodamine, fluorescein, cyanine, etc., and is a series that supports a wide range of fluorescent wavelengths. It is stable, bright, and has low pH sensitivity.
  • Examples of the combination of fluorescent dyes having a maximum fluorescence wavelength of 10 nm or more include a combination of Alexa TM 555 and Alexa TM 633, a combination of Alexa TM 488 and Alexa TM 555, and the like.
  • any cyanine dye for example, Cy3, Cy5, etc. of the CyDyeTM series
  • rhodamine 6G reagent 2-acetylaminofluorene (AAF)
  • AAF 2-acetylaminofluorene
  • AAIF iodine derivative of AAF
  • the fluorescent substance having a difference in fluorescence emission maximum wavelength of 10 nm or more include a combination of Cy5 and Rhodamine 6G reagent, a combination of Cy3 and fluorescein, a combination of Rhodamine 6G reagent and fluorescein, and the like.
  • such a label can be used to modify an object of interest so that it can be detected by the detection means used. Such modifications are known in the art and those skilled in the art can optionally implement such methods depending on the label and the subject of interest.
  • in vivo refers to the inside of a living body. In a particular context, “in vivo” refers to the location where the substance of interest should be placed.
  • in vitro refers to a state in which a part of a living body is removed or released “in vitro” (for example, in vitro) for various research purposes. A term that contrasts with in vivo.
  • ex vivo refers to a series of actions that are performed outside the body but are intended to be returned to the body afterwards for a certain procedure. Also in the present disclosure, it is possible to envision an embodiment in which cells in a living body are treated with the agent of the present disclosure and returned to a patient again.
  • kits are a unit that is usually divided into two or more sections and is provided with parts to be provided (for example, a test drug, a diagnostic drug, a therapeutic drug, an antibody, a label, a manual, etc.).
  • the form of this kit is preferred when the purpose is to provide a composition such that it should not be mixed and provided for stability and the like, and it is preferable to mix and use immediately before use.
  • kits are preferably instructions or instructions describing how to use the provided parts (eg, test agents, diagnostic agents, therapeutic agents, or how reagents should be treated).
  • the kit When the kit is used as a reagent kit in the present specification, the kit usually includes an instruction manual or the like that describes how to use a test drug, a diagnostic drug, a therapeutic drug, an antibody, or the like. Is included.
  • the "instruction” describes the method of using this disclosure to a doctor or another user.
  • This instruction sheet contains words instructing the detection method of the present disclosure, how to use a diagnostic agent, or administration of a medicine or the like.
  • the instruction sheet may include words instructing administration to the esophagus (for example, by injection) orally as the administration site.
  • This instruction is prepared and approved by the regulatory agency of the country in which this disclosure is implemented (eg, Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan, Food and Drug Administration (FDA) in the United States, etc.). It is clearly stated that it has been received.
  • the instruction sheet is a so-called package insert, which is usually provided in a paper medium, but is not limited thereto, and is in the form of, for example, an electronic medium (for example, a homepage provided on the Internet, an e-mail). But can be provided.
  • intracellular transfer refers to a substance in which a cell binds to an antigen by endocytosis or phagocytosis via a substance bound to the antigen on the cell surface.
  • a substance that binds to Glypian-1 having such activity causes the target active ingredient to be intracellularly transferred to cells expressing Glypian-1 on the cell surface, thereby achieving the desired effect.
  • the desired effect of the ingredients can be produced in Glypian-1 expressing cells.
  • the active ingredient of interest include, but are not limited to, agents having cytotoxic activity, anticancer agents, contrast agents, siRNA, antisense nucleic acids, ribozymes and the like.
  • the term "complex” means any construct that includes two or more parts.
  • the other portion may be a polypeptide and may be other substances (eg, sugars, lipids, nucleic acids, other hydrocarbons, low molecular weight compounds, etc.).
  • two or more portions constituting the complex may be bonded by covalent bonds or other bonds (for example, hydrogen bonds, ionic bonds, hydrophobic interactions, van der Waals forces, etc.). It may have been done. Therefore, as used herein, the term "complex” includes molecules formed by linking a plurality of molecules such as polypeptides, nucleic acids, lipids, sugars, and low molecular weight compounds. It was
  • linker refers to a molecule that connects at least two components and spatially separates them. Examples of the linker include, but are not limited to, an enzyme-cleaving linker, an acid instability linker, and a disulfide linker.
  • Enzyme-cleaving linker refers to a linker that is cleaved by an enzyme present in the cell.
  • Acid-instability linker refers to a linker that is cleaved under conditions of intracellular endosome or lysosome production.
  • disulfide linker refers to a linker that is cleaved in an intracellular reducing environment.
  • the term "antibody drug conjugate (ADC)” refers to an antigen-binding fragment of an antibody chemically linked to one or more active ingredients of interest.
  • the ADC is operably linked via a linker.
  • "operably linked” refers to a relationship in which the linked components can be actuated to perform their function.
  • the target active ingredient that may be contained in the ADC includes, but is not limited to, a drug having cytotoxic activity, an anticancer agent, a contrast agent, siRNA, an antisense nucleic acid, a ribozyme, and the like. What can be used as a linker may be a cleaved linker or a non-cleavable linker.
  • cleaved linker examples include, but are not limited to, a linker having a cleavage sequence by a proteolytic enzyme, an acid instability linker, and a disulfide linker.
  • non-cleavable linker examples include, but are not limited to, an MCC linker.
  • cell-damaging activity refers to, for example, causing pathological changes in cells, not only direct trauma, but also DNA cleavage, base dimer formation, chromosomal cleavage, and cell division. It refers to causing cell death by directly or indirectly blocking the function of cells due to any structural or functional damage to the cells such as system damage or decreased activity of various enzymes. Therefore, examples of the "drug having cytotoxic activity” include, but are not limited to, alkylating agents, tumor necrosis factor inhibitors, intercalators, microtubule inhibitors, kinase inhibitors, proteasome inhibitors, and topoisomerase inhibitors. Agents and the like can be mentioned.
  • IC 50 50% inhibitory concentration
  • affinity refers to the equilibrium constant for the reversible binding of, represented by the equilibrium dissociation constant (K D value).
  • the equilibrium dissociation constant can be measured by surface plasmon resonance (SPR) methods, such as Biacore®. In addition, it may be measured by MP-SPR Navi TM (BioNavis), OpenPlex (Horiba), Smart SPR (RIBM).
  • SPR surface plasmon resonance
  • the K D values indicated unless otherwise specified, it refers to a value measured by surface plasmon resonance (SPR) method.
  • the present disclosure is a composition for treating cancer having cancer-related fibroblasts (CAFs), wherein the composition is an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • CAFs cancer-related fibroblasts
  • the cancers that can be treated by the compositions of the present disclosure may have interstitium.
  • Stroma commonly found in refractory tumors, acts as a barrier and interferes with drug delivery.
  • Cancer-related fibroblasts (CAFs) form an interstitial barrier.
  • the compositions of the present disclosure have an interstitial content of at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%. It can treat cancer that is at least about 80%, or at least about 90%.
  • the content rate can be determined by histopathological analysis from the proportion of interstitium in the total area.
  • the cancer may be a GPC-1 positive cancer or a GPC-1 negative cancer.
  • the compositions of the present disclosure are advantageous as they can also treat GPC-1 negative cancers (cancers that have CAF but cancer cells do not express GPC-1).
  • GPC-1 negative cancers cancers that have CAF but cancer cells do not express GPC-1 1.
  • the complex is internalized and the cytotoxic drug released in CAF penetrates into the surrounding cancer cells, and the CAF's It can kill surrounding cancer cells.
  • CAF can express GPC-1. Therefore, the anti-GPC-1 antibody or its antigen-binding fragment used in the complex of the present disclosure may be any antibody as long as it can specifically bind to GPC-1 and be internalized into cells. .. In some embodiments, the antibodies of the present disclosure or antigen-binding fragments thereof may have activity to internalize to cells expressing GPC-1.
  • the epitope of an anti-Glypican-1 antibody or antigen-binding fragment thereof having intracellular translocation (internalization) activity against Glypican-1 positive cells is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and / or positions 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) 430 to 530 positions of SEQ ID NO: 2 (d) 33 to 61 positions of SEQ ID NO: 2, 339 to 358 positions, and / or 388 to 421 positions, (E) SEQ ID NOs: 2 at positions 339-358 and / or 430-530, or (f) SEQ ID NOs: 2 at positions 33-61, 339-358, and / /.
  • the epitope of the anti-Glypican-1 antibody or its antigen-binding fragment having the activity of intracellular translocation to Glypican-1 positive cells is as follows: (A) Positions 33 to 61 of SEQ ID NO: 2, (B) Positions 339 to 358 and 388 to 421 of SEQ ID NO: 2, (C) 33-61, 339-358, and 388-42 of SEQ ID NO: 2, or (d) 33-61, 339-358, 388-421, and 430-530 of SEQ ID NO: 2. , Or may include this.
  • the anti-GPC-1 antibody or antigen-binding fragment thereof can be operably linked via a linker to a drug having cytotoxic activity.
  • Drugs with cytotoxic activity include monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), DM1, DM4, calikeamycin, duocarmycin, pyrolobenzodiazepines (PBD), and topoisomerase inhibitors.
  • MMAE monomethyl auristatin E
  • MMAF monomethyl auristatin F
  • agents having cytotoxic activity are preferably those having a bystander effect.
  • Bystander refers to the effect that a drug released in a cancer cell permeates the cell membrane and is effective against surrounding cancer cells. Therefore, in some embodiments, the agent having cytotoxic activity can be cell membrane permeable.
  • the drug having a cytotoxic activity having a bystander effect include, but are not limited to, MMAE, PBD, Eribulin, SN-
  • a drug having cytotoxic activity can be a substrate for a drug efflux transporter.
  • CAF expresses a drug efflux transporter, and the cytotoxic drug that is the substrate of the drug efflux transporter is released extracellularly and cancer. Can be delivered to cells.
  • the drug efflux transporter can be MDR-1.
  • the agent having cytotoxic activity that is a substrate for a drug efflux transporter can be MMAE.
  • the agent having cytotoxic activity is that the agent having cytotoxic activity is cell membrane permeable or can be a substrate for a drug efflux transporter.
  • the drug having cytotoxic activity is cell membrane permeable and serves as a substrate for a drug excretion transporter.
  • a drug excretion transporter such an agent can be MMAE.
  • the linker may be one that is cleaved in cancer cells, and examples thereof include enzyme-cleaving linkers, acid instability linkers, and disulfide linkers.
  • the linker can be a truncated linker cleaved by a cathepsin (eg, cathepsin B), such as maleimide caproyl-valine-citrulline-p-aminobenzyloxycarbonyl.
  • the linker used in the complex of the present disclosure may be an acid instability linker.
  • Acidic pH in endosomes or lysosomes after intracellular translocation can be utilized and linkers responsive to acidic and unstable pH can be used. Examples of such a linker include hydrazone and the like.
  • the linker used in the complex of the present disclosure may be a disulfide linker, such a linker being N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) butanoate (SPDB),.
  • a linker being N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) butanoate (SPDB),.
  • SPDB N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) butanoate
  • SPP N-succinimidyl 4- (2-pyridyldithio) pentanoate
  • the linker used in the complex of the present disclosure may be a non-cleavable linker.
  • the non-cleavable linker include, but are not limited to, maleimide methylcyclohexane-1-carboxylic acid (MCC linker).
  • Cancers include esophageal cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, lung cancer, head and neck cancer, breast cancer, uterine leiomyosarcoma, prostate cancer, Skills gastric cancer, bile duct cancer, and colon cancer or any of these. Can be selected from the combinations of.
  • the present disclosure is a composition for treating a cancer that heterogeneously expresses GPC-1, which composition is an anti-GPC-1 antibody or antigen-binding fragment thereof and cytotoxic activity.
  • a composition comprising a complex with an agent having.
  • the inventors have surprisingly found that not only cancers that homogenically express GPC-1 but also cancers that heterogeneously express GPC-1 can be treated.
  • Anti-GPC-1 antibody is unexpected because it cannot target cells that do not express GPC-1. It is advantageous in that it can also be used for cancers that homogenically express GPC-1.
  • the present disclosure comprises a composition for treating a cancer comprising a complex of an anti-GPC-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof and a drug having cytotoxic activity, wherein the cancer comprises.
  • a composition characterized by being administered with a cancer-related fibroblast (CAF), and if the CAF is significantly expressing GPC-1, the composition is administered. ..
  • CAF cancer-related fibroblast
  • the anti-human Glypican-1 antibody or antigen-binding fragment thereof that can be used in the compositions of the present disclosure is as follows: (A) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 53, 54 and 55, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 56, 57 and 58, respectively. An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-01a033), (B) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 5, 6 and 7, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 8, 9 and 10, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-01a002), (C) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 11, 12 and 13, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 14, 15 and 16, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a007), (D) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 17, 18 and 19, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 20, 21 and 22, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a016), (E) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 23, 24 and 25, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 26, 27 and 28, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a017), (F) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 29, 30 and 31, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 32, 33 and 34, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-01a021), (G) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 35, 36 and 37, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 38, 39 and 40, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a026), (H) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 41, 42 and 43, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 44, 45 and 46, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a009), (I) of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 47, 48 and 49, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 50, 51 and 52, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-01a030), (J) Of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 59, 60 and 61, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 62, 63 and 64, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-01a042), (K) Of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 65, 66 and 67, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 68, 69 and 70, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-02a002), (L) of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 71, 72 and 73, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 74, 75 and 76, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-02a006), (M) Of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 77, 78 and 79, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 80, 81 and 82, respectively.
  • Antibodies containing amino acid sequences (clone K090-02a010), (N) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 83, 84 and 85, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 86, 87 and 88, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-02a014), (O) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 89, 90 and 91, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 92, 93 and 94, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-02a022), (P) Of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 95, 96 and 97, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 98, 99 and 100, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-02a034), (Q) Of the heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 101, 102 and 103, respectively, and the light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 104, 105 and 106, respectively.
  • An antibody containing an amino acid sequence (clone K090-02a035), (R) Heavy chain CDR1, heavy chain CDR2 and heavy chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively, and light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 shown in SEQ ID NOs: 110, 111 and 112, respectively.
  • an antibody comprising an amino acid sequence (clone K090-02b006) and (s) a variant of the antibody selected from (a)-(r) containing at least one substitution, addition or deletion in the CDR moiety.
  • a variant of the antibody selected from (a)-(r) containing at least one substitution, addition or deletion in the CDR moiety.
  • the antibody or antigen binding fragment thereof that can be used in the present invention is a heavy chain of the following clones: 01a033, 01a002, 02a010, 02a002, 02a014, 02b006, 01a042, 01a017, 01a026, 01a016, 01a030, or 01a009. It may have sequences of CDRs and light chain CDRs.
  • the antibodies of the invention are: (A) An antibody (clone K090-01a033) containing the amino acid sequence of the heavy chain shown in SEQ ID NO: 158 and the light chain shown in SEQ ID NO: 160. (B) An antibody (clone K090-01a002) containing the amino acid sequences of the heavy chain shown in SEQ ID NO: 126 and the light chain shown in SEQ ID NO: 128. (C) An antibody (clone K090-01a007) containing the amino acid sequence of the heavy chain shown in SEQ ID NO: 130 and the light chain shown in SEQ ID NO: 132.
  • the antibody or antigen binding fragment thereof that can be used in the present invention is a heavy chain of the following clones: 01a033, 01a002, 02a010, 02a002, 02a014, 02b006, 01a042, 01a017, 01a026, 01a016, 01a030, or 01a009. And may have a light chain sequence.
  • the variant of the antibody is at least about 50%, about 60%, about 70%, about 80%, about 90%, about 95%, about the amino acid sequence of the original antibody. It may have an amino acid sequence that is 98%, or about 99% identical. Variants of the above antibodies may contain at least one substitution, addition or deletion in the framework.
  • the antibody that can be used in the present invention preferably has a binding affinity of about 10 nM or less and binds to human Glypican-1, but has an internalizing activity and a desired ADC activity. For example, it is understood that it may be weaker than the above-mentioned binding affinity.
  • the antibodies of the present disclosure may be of any class, eg, IgM, IgD, IgG, IgA, IgE, or IgY.
  • the antibodies of the present disclosure can be IgG.
  • the antibody of the present disclosure is a subclass selected from the group consisting of human IgG1, human IgG2, human IgG3, and human IgG4, preferably human IgG4.
  • Human IgG4 is known to undergo a reaction (Fab-arm exchange) in which the H chain of human IgG4 exchanges with another human IgG4 (https://www.nature.com/articles/nrneph.2015.95/figures). / 2).
  • an S228P mutation can be inserted (J Biol Chem. 2015 Feb 27; 290 (9): 5462-9.).
  • OPDIVOR nivolumab
  • KEYTRUDAR pembrolizumab
  • dupilumab has the amino acid residue at position 233 of the H chain replaced with Pro. Since Fab-arm exchange does not occur in classes other than human IgG4, it is not necessary to include amino acid mutations.
  • the variants are 3 or less amino acid substitutions, deletions and / or additions, preferably 2 or less amino acid substitutions, deletions in each CDR of the antibodies or antigen-binding fragments thereof of the present disclosure. And / or additions, more preferably one or less amino acid substitutions, deletions and / or additions. These variants may have an affinity for GPC-1 equal to or higher than that of the original antibody.
  • the anti-GPC1 monoclonal antibody utilizes the property that GPC1 is highly expressed not only in cancer cells but also in cancer-related fibroblasts (CAF), which are present in extremely large amounts in the stroma.
  • GPC1-ADC (MMAE) conjugated with MMAE which is a payload having a bystander effect, is taken up by CAF, and after the linker is cleaved, MMAE is released extracellularly and taken up by cancer cells around CAF. The purpose was to clarify that it exerts an antitumor effect.
  • Example 1 Expression analysis of cancer antigen by immunohistochemical staining method
  • Thin slices of paraffin-embedded tissue were deparaffinized and dehydrated with alcohol.
  • Immunohistochemical staining for Glypican-1 was performed using an anti-GPC-1 antibody (Genetex: GTX104557) and a Chemmate Envision kit HRP 500T (Dako: K5007).
  • GPC1 was highly expressed not only in pancreatic cancer cells but also in CAF (Fig. 1).
  • Example 2 Preparation of ADC
  • GPC1-ADC (MMAE) conjugated with MMAE which is a payload having a bystander effect on the anti-GPC1 monoclonal antibody, is incorporated into the CAF, and after the linker of the ADC is cleaved, the MMAE is released extracellularly and around the CAF.
  • MMAE could be taken up by pancreatic cancer cells and exert an antitumor effect (Fig. 2).
  • the anti-GPC1 monoclonal antibody (clone K090-01a033) is conjugated with MMAE, which is a payload having a bystander effect, at a cysteine residue as shown in FIG.
  • GPC1-ADC was created so that the average value of DAR was 4.0.
  • GPC1-ADC was prepared as follows. 50 ml 2 mg / ml BioLegend mouse IgG2a ⁇ isotype control MOPC173 (Part # 92394, lot # B232324) and 50 ml 2 mg / ml mouse anti-GPC-1 clone 01a033 (lot # 170302) were obtained. ⁇ First, we performed a small scale conjugate.
  • mAb was conjugated with maleimide caproyl-valine-citrulline-p-aminobenzyloxycarbonyl-monomethyl auristatin E (MC-vc-PAB-MMAE). Conjugation was performed by a maleimide-cysteine based method in which the interchain disulfide bond of mAb was first reduced by TCEP at 37 ° C.
  • the profile of the complex was analyzed by hydrophobic interaction chromatography (HIC). -Next, the optimum conditions for conjugate on the large scale determined on the small scale were used.
  • the ADC was desalted on a Sephadex G50 column to remove unreacted toxins and then the buffer was replaced with PBS. The ADC was then filtered and sterilized, diluted with sterile PBS buffer to 1 mg / ml, fractionated into 1 ml tubes and stored at 4 ° C.
  • SEC size exclusion chromatography
  • HIC hydrophobic interaction chromatography
  • MOPC173 was present as a monomer, and ⁇ GPC1 also seemed to be present as a monomer, but a slight aggregation peak was observed.
  • Both mAbs were successfully conjugated to MC-vc-PAB-MMAE.
  • a schematic diagram of the structure of an exemplary ADC is shown in FIG.
  • Example 3 Antigen affinity analysis of GPC1-ADC and unlabeled antibody by FACS
  • human pancreatic cancer cell line (BxPC-3) cells were used as Glypican-1 positive cells.
  • Anti-GPC1 monoclonal antibody (clone K090-01a033) and GPC1-ADC (01a033) MMAE were used as the primary antibody at varying concentrations, and the secondary antibody was FITC-labeled Goat Anti-Mouse IgG (H + L chain spectrum) (southern biothech).
  • FACS CantoII BD
  • the measurement data was analyzed using BD FACSDiva software (BD).
  • Example 4 Intracellular internalization assay of GPC1-ADC (MMAE)
  • GPC1-ADC (MMAE) was examined for internalization (intracellular transfer) activity using a GPC1-positive BxPC-3 cell line using FACS.
  • the cells treated with GPC1-ADC (MMAE) prepared in Example 2 were detected with anti-GPC1 mAb (biotin-labeled 02b006) and PE-labeled streptavidin.
  • the BxPC-3 cell line was peeled off from one 10 cm plate using 0.02% EDTA and recovered.
  • the cells were suspended in RPMI1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX TM I + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin, and two cells were prepared as 2.0x10 6 cells / 0.9 ml in a 1.5 ml tube. It was allowed to stand on ice for 1 hour to reduce the internalization activity.
  • MMAE 1 mg / ml GPC1-ADC (01a033) MMAE was diluted to 24 ⁇ g / ml (160 nM) with ice-cold RPMI 1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX TM I + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin. 100 ⁇ l of the above ADC was added to the cell suspension, suspended, and allowed to stand on ice for 30 minutes to stain the cell surface antigen. After 30 minutes, the cell suspension was dispensed into 6 cells of 100 ⁇ l each. The cell suspension was divided into a 4-degree incubation group and a 37-degree incubation group, and 12 cells were used.
  • the incubation time was 0h, 1h, 2h, 3h, 4h, 6h. After reaching the incubation time, cells were centrifuged at 1500 rpm, 4 degrees for 5 minutes and the supernatant was removed. The cells were washed with 100 ⁇ l of ice-cold PBS + 0.2% BSA and centrifuged. The cleaning operation was performed a total of 3 times. 50 ⁇ L of biotin-labeled anti-GPC1 antibody 02b006 at a concentration of 1 ⁇ g / ml was added and suspended. Cell surface antigens were stained on ice for 30 minutes (non-internalized GPC1 was stained).
  • the cells were washed with 100 ⁇ l of ice-cold PBS + 0.2% BSA and centrifuged. The cleaning operation was performed a total of 3 times. Was added 150 ⁇ L of ice-cold PBS + 0.2% BSA, was measured by FACS Canto II, and analyzed with FlowJo TM software.
  • BxPC-3 cells were seeded at 7.5x10 4 cells / well (1 ml / well) in a 12-well plate (Corning: 3513) containing 18 mm microcover glass (matsunami), and the cells were seeded at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. Incubated overnight.
  • the antibody solution was aspirated, 1.0 ml ice-cold RPMI 1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX TM I + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin was added, and the cells were washed. The sample at this point was collected as a 0-hour sample (0 h).
  • the cells were washed 3 times with 1 ml PBS, the cover glass to which the cells were adhered was taken out, sealed on a slide glass with a Vectorshield (Vectashield H1200), and with an all-in-one fluorescence microscope (Keyence, BZ-X800). Observed.
  • both the anti-GPC1 monoclonal antibody (01a033) and the GPC1-ADC (MMAE) co-existed with CD107a.
  • Localization confirmed that the anti-GPC1 monoclonal antibody (01a033) and GPC1-ADC (MMAE) bind to GPC1 and then translocate to lysosomes (FIG. 5).
  • the anti-GPC1 monoclonal antibody eg, 01a033 did not lose its internalizing activity by the conjugate of a drug having cytotoxic activity (eg, MMAE).
  • Example 5 in vitro ADC assay using anti-GPC1 antibody
  • Conjugation of mouse anti-human Glypican-1 mAb (01a033) and mouse IgG2a (biolegend # 400224) as a control with mc-vc-PAB-MMAE was commissioned to MORADEC.
  • the anticancer drug was conjugated to the cysteine residue via a cleavage linker.
  • the DAT drug-to-antibody ratio
  • GPC1-CL-MMAE DAR 3.7
  • mouse IgG2a-CL-MMAE DAR 3.5.
  • the assay was performed as follows. (1) The cells were sprinkled on a 96-well white plate (model number 136101) manufactured by Thermo Fisher Scientific (model number 136101) (cell suspension 90 ⁇ L). The medium used was RPMI1640 + 10% FBS + 100U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin (only for BxPC-3 cells, the medium used was RPMI1640 + 10% FBS + 1% GlutaMAX TM I + 100U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin). Cells were sprinkled in 60 wells in the center of the plate and 100 ⁇ L of medium was added to the outer 36 wells. The cells were cultured at 37 ° C.
  • IC50 10 ⁇ (Log [A] [B] ⁇ (50C) / (DC) + Log [B]) A: High concentration sandwiching 50% B: Inhibition rate at low concentration C: B sandwiching 50% D: Inhibition rate at A.
  • TE8 cells which are GPC1-positive esophageal cancer cell lines, were sprinkled on a 24-well plate at 3x10 5 cells / well, and the cells were cultured overnight in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. The next day, ADC was added to a final concentration of 0,1,4,16 nM and the cells were cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. The day after the ADC was added, the culture supernatant was collected from the wells and centrifuged at 1500 rpm at 4 degrees for 5 minutes to collect the supernatant.
  • TE8-GPC1 KO cells with negative GPC1 expression were sown on a 96-well white plate (model number 136101) from Thermo Fisher Scientific.
  • the medium used was RPMI1640 + 10% FBS + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin.
  • Cells were sprinkled in 60 wells in the center of the plate and 100 ⁇ L of medium was added to the outer 36 wells. The cells were cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator, and the next day, the culture supernatant was added to the cells.
  • the culture supernatant prepared using GPC1-ADC (MMAE) prepared in Example 2 is concentration-dependent with respect to TE8-GPC1 KO cells.
  • the growth inhibitory activity was confirmed. No cell proliferation inhibitory effect was observed in the culture supernatant using ADC conjugated with MMAF, which is a payload having lower cell membrane permeability than MMAE. From these results, it was confirmed in vitro that GPC1-ADC conjugated with MMAE had a bystander effect.
  • Example 7 Confirmation of GPC1 expression in pancreatic cancer PDX (PK645) and in vivo drug efficacy test of GPC1-ADC
  • Thin slices of paraffin-embedded tissue were deparaffinized and then dehydrated with alcohol.
  • the immunohistochemical staining method for GPC1 was performed using an anti-GPC-1 antibody (Genetex: GTX104557) and a Chemmate Envision kit HRP 500T (Dako: K5007). It was confirmed that the expression of GPC1 in PK645 was negative in pancreatic cancer cells and positive in cancer-related fibroblasts (CAF).
  • CAF cancer-related fibroblasts
  • pancreatic cancer PDX was subcutaneously transplanted into 6-week-old NOG female mice, and when the tumor size became about 100 mm 3 after transplantation, PBS was used as a control, and the anti-GPC1-ADC (MMAF) prepared in Example 2 was used.
  • Administration of (10 mg / kg), anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) and MMAE (0.2 mg / kg) was started.
  • Intravenous administration was performed on the 0th day, the 4th day, the 8th day and the 12th day, with the day when the administration was started as the 0th day.
  • Tumor volume and body weight were measured on days 0, 4, 8, 12, 16, 20, 20, 24, 28 and 32.
  • PK645 As a result of screening the expression of GPC1 in the tumor tissues of multiple strains of pancreatic cancer PDX mice, PK645 was GPC1 positive in CAF and GPC1 negative in pancreatic cancer cells.
  • the stromal content of pancreatic cancer PDX mice (PK645) in the tumor tissue is about 70%. Therefore, the antitumor effect of GPC1-ADC (MMAE) was evaluated in vivo using PK645 (FIG. 9). As a result, a strong antitumor effect was observed in the GPC1-ADC (MMAE) -administered group as compared with the PBS-administered group and the GPC1-ADC (MMAF) -administered group.
  • GPC1-ADC releases MMAE extracellularly after being taken up by CAF, and that MMAE is taken up by surrounding cancer cells, thereby exhibiting an antitumor effect and a cell proliferation inhibitory activity due to the bystander effect. ..
  • no weight loss was observed in GPC1-ADC with respect to PK645. Assuming that the linker of 10 mg / kg GPC1-ADC (MMAE) was completely cleaved in the blood, no medicinal effect was observed even if 0.2 mg / kg of MMAE alone was administered systemically. It was confirmed that transport to CAF by ADC is important for exerting an effective antitumor effect.
  • Example 8 Confirmation of GPC1 expression in pancreatic cancer PDX (PK565) and in vivo drug efficacy test of GPC1-ADC
  • Thin slices of paraffin-embedded tissue were deparaffinized and then dehydrated with alcohol.
  • the immunohistochemical staining method for GPC1 was performed using an anti-GPC-1 antibody (Genetex: GTX104557) and a Chemmate Envision kit HRP 500T (Dako: K5007).
  • the expression of GPC1 in PK565 was confirmed to be a heterogeneous tumor in which positive and negative were mixed in pancreatic cancer cells.
  • pancreatic cancer PDX was subcutaneously transplanted into 6-week-old NOG female mice, and when the tumor size became about 100 mm3 after transplantation, PBS was used as a control, control ADC (10 mg / kg), and Example 2 was prepared.
  • Administration of anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) was started. Intravenous administration was performed on the 0th day, the 4th day, the 8th day and the 12th day, with the day when the administration was started as the 0th day. Tumor volume and body weight were measured on days 0, 4, 8, 12, 16, 20, 20, 24 and 28.
  • PK565 in which GPC1 is heterogeneously expressed, has an interstitial content of about 0%, but due to the bystander effect of MMAE, it also affects GPC-1 negative cancer cells around GPC-1 positive cancer cells. It is considered that a strong antitumor effect was observed.
  • Example 9 Confirmation of GPC1 expression of esophageal cancer PDX (ESCC14) and efficacy test of GPC1-ADC in vivo
  • Thin slices of paraffin-embedded tissue were deparaffinized and then dehydrated with alcohol.
  • the immunohistochemical staining method for GPC1 was performed using an anti-GPC-1 antibody (Genetex: GTX104557) and a Chemmate Envision kit HRP 500T (Dako: K5007). It was confirmed that the expression of GPC1 in ESCC14 is a homogeneous tumor that is uniformly and highly expressed in esophageal cancer cells.
  • esophageal cancer PDX was subcutaneously transplanted into 6-week-old NOG female mice, and when the tumor size became about 100 mm3 after transplantation, PBS was used as a control, and anti-GPC1-ADC (MMAE) (3 mg) prepared in Example 2 was used as a control. / Kg) and anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) were started. Intravenous administration was performed on the 0th day, the 4th day, the 8th day and the 12th day, with the day when the administration was started as the 0th day. Tumor volume and body weight were measured on days 0, 4, 8, 12, 16, 20, 20, 24, 28 and 32.
  • the stromal content in the tumor tissue of esophageal cancer PDX mice is about 40%.
  • GPC1-ADC MMAE
  • MMAE GPC1-ADC
  • Example 10 Confirmation of GPC1 expression of esophageal cancer PDX (ESCC2) and efficacy test of GPC1-ADC in vivo
  • Thin slices of paraffin-embedded tissue were deparaffinized and then dehydrated with alcohol.
  • the immunohistochemical staining method for GPC1 was performed using an anti-GPC-1 antibody (Genetex: GTX104557) and a Chemmate Envision kit HRP 500T (Dako: K5007). It was confirmed that the expression of GPC1 in ESCC2 is a homogeneous tumor that is uniformly and highly expressed in esophageal cancer cells.
  • esophageal cancer PDX was subcutaneously transplanted into 6-week-old NOG female mice, and when the tumor size became about 100 mm3 after transplantation, PBS was used as a control, and the anti-GPC1-ADC (MMAE) prepared in Example 2 ( Administration of 1 mg / kg), anti-GPC1-ADC (MMAE) (3 mg / kg) and anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) was started. The administration was started intravenously on the 0th day, the 0th day, the 7th day, and the 14th day. Tumor volume and body weight were measured on days 0, 7, 14, 21, 28, 35 and 42.
  • the stromal content in the tumor tissue of esophageal cancer PDX mice is about 50%.
  • GPC1-ADC MMAE
  • MMAE GPC1-ADC
  • ADC targeting GPC1 is effective for intractable cancers with abundant stroma such as pancreatic cancer because it transports anticancer drugs to cancer cells via CAF. It suggests that it will lead to the development of a highly safe and epoch-making therapeutic drug.
  • Example 11 Isolation of CAF (PK645-CAF) from tumor tissue of pancreatic cancer PDX (PK645))
  • CAF was isolated from the tumor tissue of PK645 PDX using gentleMACS TM tissue dissociator (Miltenyi Biotec, CA).
  • gentleMACS TM tissue dissociator Miltenyi Biotec, CA.
  • Example 12 Culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC (material and method) The outline of the transfer assay is shown in FIG. PK645-CAF positive for GPC1 expression was sprinkled on a 24-well plate at 1x10 5 cells / well, and the cells were cultured overnight in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. The next day, ADCs prepared according to Example 2 (antibodies 01a033 and drugs MMAE and MMAF were used) were added so that the final concentration was 0,16,32,64 nM, and 37 ° C., 5% CO 2 The cells were cultured in an incubator. 72 hours after the addition of the ADC, the culture supernatant was collected from the wells and centrifuged at 1500 rpm at 4 degrees for 5 minutes to collect the supernatant.
  • BxPC-3-GPC1 KO cells a pancreatic cancer cell line with negative GPC1 expression, were sown on a 96-well white plate (model number 136101) from Thermo Fisher Scientific.
  • the medium used was RPMI1640 + 10% FBS + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin.
  • Cells were sprinkled in 60 wells in the center of the plate and 100 ⁇ L of medium was added to the outer 36 wells. The cells were cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator, and the next day, the culture supernatant was added to the cells. After culturing for 144 hours, CellTiter-Glo® Luminescence Cell Viability Assay Reagent (Promega) was added, mixed, and measured with a plate reader.
  • Pancreatic cancer PDX (PK645) was subcutaneously transplanted into 6-week-old NOG female mice, and when the tumor size became about 100 mm 3 after transplantation, PBS, control-ADC (MMAE) (10 mg / kg), Example 2
  • the anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) prepared in 1 was administered, and the tumor was excised 24 hours later.
  • the excised tissue was fixed with 10% neutral formalin buffer, and then a paraffin-embedded tissue was prepared to prepare slices.
  • fluorescent double staining using anti-EpCAM antibody and anti-cleaved caspase-3 antibody to confirm the presence or absence of apoptosis in cancer cells, and (2) confirmation of the presence or absence of apoptosis in CAF.
  • fluorescent double staining was performed using an anti-apoptosis-SMA antibody and an anti-cleave caspase-3 antibody.
  • apoptosis was detected in cancer cells in the anti-GPC1-ADC (MMAE) (10 mg / kg) -administered group as compared with the PBS and control-ADC (MMAE) (10 mg / kg) -administered groups. , No apoptosis was detected in CAF (Fig. 15).
  • MMAE is known to be recognized as a substrate for MDR-1, a drug efflux transporter. Therefore, it was decided to confirm the expression of MDR-1 in CAF by Western blotting. As a result, it was confirmed that MDR-1 was highly expressed in PK645-CAF as compared with BxPC-3, KP-2, and PK-8 cells, which are pancreatic cancer cell lines (FIG. 16).
  • MMAE is because the MDR-1 to be excreted out of the cells determine whether involved, measure the IC 50 of MMAE and MMAF in the presence or absence of Tariquidar added an inhibitor against MDR-1 did.
  • IC 50 values of MMAE in PK645-CAF has been a 3.38nM in the absence of 50nM Tariquidar, in the presence of 50 nM Tariquidar was 0.464NM.
  • major changes in MMAF IC 50 of the presence or absence of Tariquidar was observed.
  • MDR-1 inhibition of MDR-1 increased the MMAE sensitivity of PK645Fb by 7.28 times, while the sensitivity of MMAF, which is not a substrate for MDR-1, was increased by 1.36 times. Therefore, it is preferable to use a cytotoxic agent that serves as a substrate for MDR-1 in the ADC.
  • Example 16 Culture supernatant transfer assay of GPC1-ADC using MDR-1 inhibitor
  • PK645-CAF positive for GPC1 expression was sprinkled on a 24-well plate at 1x10 5 cells / well, and the cells were cultured overnight in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C.
  • ADC was added to a final concentration of 0,16,32,64 nM and the cells were cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator.
  • the culture supernatant was prepared under two conditions, one containing 50 nM Tariquidar and the other not containing 50 nM Tariquidar.
  • 72 hours after the addition of the ADC the culture supernatant was collected from the wells and centrifuged at 1500 rpm at 4 degrees for 5 minutes to collect the supernatant.
  • BxPC-3-GPC1 KO cells a pancreatic cancer cell line with negative GPC1 expression, were sown on a 96-well white plate (model number 136101) from Thermo Fisher Scientific.
  • the medium used was RPMI1640 + 10% FBS + 100 U / ml penicillin + 100 ⁇ g / ml streptomycin.
  • Cells were sprinkled in 60 wells in the center of the plate and 100 ⁇ L of medium was added to the outer 36 wells. The cells were cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator, and the next day, the culture supernatant was added to the cells. After culturing for 144 hours, CellTiter-Glo® Luminescence Cell Viability Assay Reagent (Promega) was added, mixed, and measured with a plate reader.
  • a drug for the treatment or prevention of cancer was provided. Technologies that can be used in industries (pharmaceuticals, etc.) based on such technologies are provided.
  • SEQ ID NO: 1 Human Glypican-1 nucleic acid sequence (NM_002081.2.)
  • SEQ ID NO: 2 Human Glypican-1 amino acid sequence (P35052)
  • SEQ ID NO: 3 Mouse Glypican-1 nucleic acid sequence (NM_016966.4)
  • SEQ ID NO: 4 Mouse Glypican-1 amino acid sequence (Q9QZF2)
  • SEQ ID NO: 5 Amino acid sequence of heavy chain CDR1 of K090-01a002
  • SEQ ID NO: 7 Amino acid sequence of heavy chain CDR3 of K090-01a002
  • Nucleic acid sequence of light chain SEQ ID NO: 152 Nucleic acid sequence of light chain of K090-01a009 Amino acid sequence of light chain SEQ ID NO: 153: Nucleic acid sequence of heavy chain of K090-01a030 Nucleic acid sequence No.

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Abstract

本開示は、CAFを有するがん(例えば、難治性腫瘍)を処置するための組成物を提供する。1つの局面において、本開示は、がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本開示の組成物が治療し得るがんは、間質を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、間質含有率が、少なくとも約30%であるがんを治療し得る。

Description

CAFを有するがんを処置するための組成物
 本開示は、新たながんの処置または予防のための技術、方法、および薬剤等に関する。
 難治性腫瘍の中には、腫瘍の間質バリアを形成するがん関連線維芽細胞(CAF)を有するものがあり、この間質バリアが薬剤の送達を阻害する(非特許文献1)。しかしながら、CAFを標的としたCAFを有するがん(例えば、難治性腫瘍)に対する効果的な治療薬は見出されていなかった。
Richardset al., Oncogene. 2017 Mar 30;36(13):1770-1778
 1つの局面において、本開示は、CAFを有するがん(例えば、難治性腫瘍)を処置するための組成物等を提供する。本発明者らは、CAFがGlypican-1(GPC-1)を発現しており、抗GPC-1抗体と細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体(抗体薬物複合体;ADC)により、CAFを有するがんを効果的に治療することができることを見出した。GPC-1を標的とすることにより、CAFを有するがんを治療した例はこれまでに例が無く、抗GPC-1抗体と細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体が、CAFを有するがんを治療できたことは驚くべき結果である。
 したがって、本願発明は、以下を提供する。
(項目1)
 がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物。
(項目2)
 前記がんが間質を有する、項目1に記載の組成物。
(項目3)
 前記がんにおける前記間質の含有率が少なくとも約30%である、項目1または2に記載の組成物。
(項目4)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結されている、項目1~3のいずれか一項に記載の組成物。
(項目5)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される、項目1~4のいずれか一項に記載の組成物。
(項目6)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、細胞膜透過性である、項目1~5のいずれか一項に記載の組成物。
(項目7)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、およびDM4から選択される、項目1~6のいずれか一項に記載の組成物。
(項目8)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、薬物排出トランスポーターの基質となる、項目1~7のいずれか一項に記載の組成物。
(項目9)
 前記薬物排出トランスポーターがMDR-1である、項目8に記載の組成物。
(項目10)
 前記薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAEである、項目8または9に記載の組成物。
(項目11)
 前記リンカーが、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーからなる群から選択される、項目4に記載の組成物。
(項目12)
 前記リンカーが、カテプシンBにより切断される切断型リンカーである、項目11に記載の組成物。
(項目13)
 前記CAFは、Glypican-1を発現する、項目1~12のいずれか一項に記載の組成物。
(項目14)
 前記がんが、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択される、項目1~13のいずれか一項に記載の組成物。
(項目15)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、インターナライズ活性を有する、項目1~14のいずれか一項に記載の組成物。
(項目16)
 前記抗体が、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
 (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
のエピトープに結合する、項目1~15のいずれか一項に記載の組成物。
(項目17)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号2の339~358位および388~421位のエピトープに結合する、項目1~16のいずれか一項に記載の組成物。
(項目18)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下
 (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、ならびに
 (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、
項目1~17のいずれか一項に記載の組成物。
(項目19)
 抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、がんを処置するための組成物であって、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査し、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、該組成物が投与されることを特徴とする、組成物。
(項目20)
 GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物。
(項目1A)
 被験体におけるがん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための方法であって、該方法は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を該被験体に投与するステップを含む、方法。
(項目2A)
 前記がんが間質を有する、項目1Aに記載の方法。
(項目3A)
 前記がんにおける前記間質の含有率が少なくとも約30%である、項目1Aまたは2Aに記載の方法。
(項目4A)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結されている、項目1A~3Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目5A)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される、項目1A~4Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目6A)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、細胞膜透過性である、項目1A~5Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目7A)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、およびDM4から選択される、項目1A~6Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目8A)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、薬物排出トランスポーターの基質となる、項目1A~7Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目9A)
 前記薬物排出トランスポーターがMDR-1である、項目8Aに記載の方法。
(項目10A)
 前記薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAEである、項目8Aまたは9Aに記載の方法。
(項目11A)
 前記リンカーが、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーからなる群から選択される、項目4に記載の方法。
(項目12A)
 前記リンカーが、カテプシンBにより切断される切断型リンカーである、項目11Aに記載の方法。
(項目13A)
 前記CAFは、Glypican-1を発現する、項目1A~12Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目14A)
 前記がんが、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択される、項目1A~13Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目15A)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、インターナライズ活性を有する、項目1A~14Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目16A)
 前記抗体が、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
 (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
のエピトープに結合する、項目1A~15Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目17A)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号2の339~358位および388~421位のエピトープに結合する、項目1A~16Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目18A)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下
 (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、ならびに
 (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、
項目1A~17Aのいずれか一項に記載の方法。
(項目19A)
 被験体におけるがんを処置するための方法であって、該方法が、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査するステップと、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を該被験体に投与するステップとを含む、方法。
(項目20A)
 被験体におけるGPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための方法であって、該方法は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を該被験体に投与するステップ含む、方法。
(項目1B)
 がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための医薬品の製造における、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体の使用。
(項目2B)
 前記がんが間質を有する、項目1に記載の使用。
(項目3B)
 前記がんにおける前記間質の含有率が少なくとも約30%である、項目1Bまたは2Bに記載の使用。
(項目4B)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結されている、項目1B~3Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目5B)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される、項目1B~4Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目6B)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、細胞膜透過性である、項目1B~5Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目7B)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、およびDM4から選択される、項目1B~6Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目8B)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、薬物排出トランスポーターの基質となる、項目1B~7Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目9B)
 前記薬物排出トランスポーターがMDR-1である、項目8Bに記載の使用。
(項目10B)
 前記薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAEである、項目8Bまたは9Bに記載の使用。
(項目11B)
 前記リンカーが、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーからなる群から選択される、項目4Bに記載の使用。
(項目12B)
 前記リンカーが、カテプシンBにより切断される切断型リンカーである、項目11Bに記載の使用。
(項目13B)
 前記CAFは、Glypican-1を発現する、項目1B~12Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目14B)
 前記がんが、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択される、項目1B~13Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目15B)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、インターナライズ活性を有する、項目1B~14Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目16B)
 前記抗体が、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
 (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
のエピトープに結合する、項目1B~15Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目17B)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号2の339~358位および388~421位のエピトープに結合する、項目1B~16Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目18B)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下
 (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、ならびに
 (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、
項目1B~17Bのいずれか一項に記載の使用。
(項目19B)
 がんを処置するため医薬の製造における、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体の使用であって、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査し、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、該医薬が投与されることを特徴とする、使用。
(項目20B)
 GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための医薬の製造における、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体の使用。
(項目1C)
 がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体。
(項目2C)
 前記がんが間質を有する、項目1Cに記載の複合体。
(項目3C)
 前記がんにおける前記間質の含有率が少なくとも約30%である、項目1Cまたは2Cに記載の複合体。
(項目4C)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結されている、項目1C~3Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目5C)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される、項目1C~4Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目6C)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、細胞膜透過性である、項目1C~5Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目7C)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、およびDM4から選択される、項目1C~6Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目8C)
 前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、薬物排出トランスポーターの基質となる、項目1C~7Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目9C)
 前記薬物排出トランスポーターがMDR-1である、項目8Cに記載の複合体。
(項目10C)
 前記薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAEである、項目8Cまたは9Cに記載の複合体。
(項目11C)
 前記リンカーが、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーからなる群から選択される、項目4Cに記載の複合体。
(項目12C)
 前記リンカーが、カテプシンBにより切断される切断型リンカーである、項目11Cに記載の複合体。
(項目13C)
 前記CAFは、Glypican-1を発現する、項目1C~12Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目14C)
 前記がんが、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択される、項目1C~13Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目15C)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、インターナライズ活性を有する、項目1C~14Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目16C)
 前記抗体が、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
 (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
のエピトープに結合する、項目1C~15Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目17C)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号2の339~358位および388~421位のエピトープに結合する、項目1C~16Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目18C)
 前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下
 (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
 (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、ならびに
 (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、
項目1C~17Cのいずれか一項に記載の複合体。
(項目19C)
 がんを処置するための、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体であって、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査し、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、該複合体が投与されることを特徴とする、複合体。
(項目20C)
 GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体。
 本開示において、上記1または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本開示のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
 本開示によれば、CAFを有するがんに有効な、抗GPC-1抗体と細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体およびこれに基づく治療・予防技術が提供される。このような複合体は、難治性腫瘍の治療に極めて有効である。
図1は、膵臓がんにおける免疫組織化学染色の結果を示す。 図2は、GPC1-ADCによるバイスタンダー効果の概略図を示す。 図3は、例示的なADCの構造の模式図を示す。 図4は、GPC1-ADCと未標識抗体のFACSによる抗原親和性解析 図5は、GPC1-ADCの細胞内インターナライゼーションアッセイ(上パネル)および細胞内局在解析(下パネル)の結果を示す。グラフの各群の左のバーが4℃、右のバーが37℃を示す。 図6は、GPC1-ADCを用いたin vitro ADCアッセイの結果を示す。 図7は、培養上清トランスファーアッセイの模式図を示す。 図8は、GPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイの結果を示す。グラフにおいて各群の左のバーはControl-ADC-TE8 cells(培養上清)を示し、右のバーはGPC1-ADC-TE8 cells(培養上清)を示す。 図9は、膵臓がん細胞でGPC1陰性であり、かつCAFでGPC1陽性である膵臓がんPDX(PK645)のGPC1発現の確認と、膵臓がんPDX(PK645)におけるヒト化GPC1-ADC(MMAE)のin vivoでの薬効試験の結果を示す。いずれの群においても体重に大きな変化は無かった。腫瘍体積は、GPC1-ADC(MMAE)10mg/kgにおいてほぼ変化がなく、GPC1-ADC(MMAF)10mg/kg、MMAE0.2mg/kgおよびPBSにおいて増加し、GPC1-ADC(MMAF)10mg/kg、MMAE0.2mg/kgおよびPBSの順に大きかった。 図10は、GPC1が不均一に発現されている膵臓がんPDX(PK565)のGPC1発現の確認と、膵臓がんPDX(PK565)におけるヒト化GPC1-ADC(MMAE)のin vivoでの薬効試験の結果を示す。いずれの群においても体重は大きな変化は無かった。腫瘍体積は、GPC1-ADC(MMAE)10mg/kgにおいて減少し、control-ADC(MMAE)およびPBSにおいて増加し、PBSにおいて最も大きかった。 図11は、GPC1が均一に発現されている食道がんPDX(ESCC14)のGPC1発現の確認と、食道がんPDX(ESCC14)におけるヒト化GPC1-ADC(MMAE)のin vivoでの薬効試験の結果を示す。いずれの群においても体重に大きな変化は無かった。腫瘍体積は、GPC1-ADC(MMAE)10mg/kgおよびGPC1-ADC(MMAE)3mg/kgにおいて減少し、いずれの群も腫瘍はほぼ0mmとなり、PBSにおいて増加した。 図12は、GPC1が均一に発現されている食道がんPDX(ESCC2)のGPC1発現の確認と、食道がんPDX(ESCC2)におけるヒト化GPC1-ADC(MMAE)のin vivoでの薬効試験の結果を示す。いずれの群においても体重に大きな変化は無かった。腫瘍体積は、GPC1-ADC(MMAE)10mg/kgにおいてわずかに減少し、GPC1-ADC(MMAE)3mg/kg、GPC1-ADC(MMAE)1mg/kg、およびPBSにおいて増加し、GPC1-ADC(MMAE)3mg/kg、GPC1-ADC(MMAE)1mg/kg、およびPBSの順に大きかった。 図13は、GPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイの模式図を示す。得られたPK645-CAF細胞に対して抗GPC1モノクローナル抗体(clone 01a033)を用いてFACSを行った結果、GPC1の発現が陽性であることが確認された(図13左下)。さらに、CAFマーカーであるα-SMAに対する抗体を用いて免疫蛍光細胞染色を行った結果、PK645-CAFはα-SMAの発現が陽性であることが確認された(図13右下)。 図14は、GPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイの結果を示す。グラフにおける各群の左のバーがControl-ADC PK645 CAF(培養上清)を示し、右のバーがGPC1-ADC PK645 CAF(培養上清)を示す。 図15は、膵臓がんPDX(PK645)のがん細胞およびCAFにおけるアポトーシスの検出結果を示す。スケールは25μmを示す。矢印はアポトーシスを示す。 図16は、PK645のCAFにおけるMDR-1の発現の確認結果を示す。 図17は、MDR-1阻害剤の存在下でのPK645-CAFにおけるMMAEおよびMMAFのIC50を示す。 図18は、MDR-1阻害剤を用いたGPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイの結果を示す。グラフにおける各群の左のバーがControl-ADC PK645 CAF(培養上清)を示し、右のバーがGPC1-ADC PK645 CAF(培養上清)を示す。
 以下、本開示を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞(例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など)は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書(定義を含めて)が優先する。「約」は、示される値の±10%を意味する。
 (定義)
 最初に本開示において使用される用語および一般的な技術を説明する。
 本明細書において、「Glypican-1」、「GPC-1」または「GPC1」は、交換可能に使用される用語であり、グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカー型細胞表面プロテオグリカンであり、ヘパラン硫酸を有するものである。細胞接着、移動、リポタンパク質代謝、増殖因子活性調節および血液凝固抑止に関連するとされている。いくつかの線維芽細胞増殖因子(FGF)、例えば、FGF-1、FGF-2およびFGF-7に結合するといわれる。Glypican-1は、VEGF165の細胞外シャペロンとして機能し、酸化後のレセプター結合能を回復することを支援するとされる。Glypicanは現在のところGlypican-1~Glypican-6の6種類が知られているが、がんとの関係ではGlypican-ファミリーメンバーであるからといっても必ずがんマーカーであると認識されているものではなく、メンバー相互は無関係であるようである。Glypican-1は、UniProtにアクセッション番号P35052として登録されており(http://www.uniprot.org/uniprot/P35052を参照)、このほか、NCBIでは、NP_002072.2(前駆体アミノ酸配列)、NM_002081.2(mRNA)、EMBL、GenBankおよびDDBJでは、X54232.1(mRNA)、BC051279.1(mRNA)、AC110619.3(genomic)として登録されている。これらはいずれも、本明細書において利用することができる情報であり、その情報を本明細書において参考として援用する。Glypican-1については、David G et al., J Cell Biol. 1990 Dec;111(6 Pt 2):3165-76;Haecker U et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2005 Jul;6(7):530-41;Aikawa T et
 al., J Clin Invest. 2008Jan;118(1):89-99.;Matsuda K, et al., Cancer Res. 2001 Jul 15;61(14):5562-9.等を参照。ヒトGlypican-1の核酸配列(全長)は、配列番号1が代表例であり、アミノ酸配列は配列番号2が代表例である。また、マウスGlypican-1の核酸配列(全長)は、配列番号3が代表例であり、アミノ酸配列は配列番号4が代表例である。本明細書の目的で使用される場合は、「Glypican-1」、「GPC-1」または「GPC1」は、本開示の具体的な目的に合致する限り、特定の配列番号またはアクセッション番号に記載されるアミノ酸配列を有するタンパク質(あるいはそれをコードする核酸)のみならず、機能的に活性なその類似体もしくは誘導体、または機能的に活性なそのフラグメント、またはその相同体、または高ストリンジェンシー条件または低ストリンジェンシー条件下で、このタンパク質をコードする核酸にハイブリダイズする核酸にコードされる変異体もまた、本開示において用いることができることが理解される。
 本明細書で使用される「誘導体」、「類似体」または「変異体」は、好ましくは、限定を意図するものではないが、対象となるタンパク質(例えば、Glypican-1、抗体)に実質的に相同な領域を含む分子を含み、このような分子は、種々の実施形態において、同一サイズのアミノ酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる配列と比較した際、少なくとも30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一であるか、あるいはこのような分子をコードする核酸は、(高度に)ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェントでない条件下で、構成要素タンパク質をコードする配列にハイブリダイズ可能である。これは、それぞれ、アミノ酸置換、欠失および付加によって、タンパク質を改変した産物であり、その誘導体がなお元のタンパク質の生物学的機能を、必ずしも同じ度合いでなくてもよいが示すタンパク質を意味する。例えば、本明細書において記載されあるいは当該分野で公知の適切で利用可能なin vitroアッセイによって、このようなタンパク質の生物学的機能を調べることも可能である。本明細書で使用される「機能的に活性な」は、本明細書において、本開示のポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体が関連する態様に従って、生物学的活性などの、タンパク質の構造的機能、制御機能、または生化学的機能を有する、ポリペプチド、すなわちフラグメントまたは誘導体を指す。
 本開示では、Glypican-1についてヒトが主に論じられるが、チンパンジー(Pantroglodytes)(K7B6W5)、アカゲザル(Macaca mulatta)(F6VPW9)、マウス(Mus musculus)(Q9QZF2)、ラット(Rattus norvegicus)(P35053)、ニワトリ(Gallus gallus)(F1P150)等、ヒト以外の多くの動物がGlypican-1タンパク質を発現していることが知られているため、これらの動物、特に哺乳動物についても、本開示の範囲内に入ることが理解される。好ましくは、Glypican-1の機能的ドメイン、例えば、細胞外ドメイン(約500アミノ酸であり、12のシステイン残基を含む)やC末端の疎水性領域(GPI-アンカードメイン)は保存されていることが好ましい。
 本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変(例えば、標識成分との結合体化)が包含される。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の1または2以上のアナログを含むポリペプチド(例えば、非天然アミノ酸などを含む)、ペプチド様化合物(例えば、ペプトイド)および当該分野において公知の他の改変が包含される。本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基を持つ有機化合物の総称である。本開示の実施形態に係る抗体が「特定のアミノ酸配列」を含むとき、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が化学修飾を受けていてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸が塩、または溶媒和物を形成していてもよい。また、そのアミノ酸配列中のいずれかのアミノ酸がL型、またはD型であってもよい。それらのような場合でも、本開示の実施形態に係る蛋白質は、上記「特定のアミノ酸配列」を含むといえる。蛋白質に含まれるアミノ酸が生体内で受ける化学修飾としては、例えば、N末端修飾(例えば、アセチル化、ミリストイル化等)、C末端修飾(例えば、アミド化、グリコシルホスファチジルイノシトール付加等)、または側鎖修飾(例えば、リン酸化、糖鎖付加等)等が知られている。アミノ酸は、本開示の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。
 本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、2’-O-メチル-リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がN3’-P5’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC-5プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがC-5チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがC-5プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン(phenoxazine-modified cytosine)で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、DNA中のリボースが2’-O-プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが2’-メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体(例えば、縮重コドン置換体)および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、1またはそれ以上の選択された(または、すべての)コドンの3番目の位置が混合塩基および/またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る(Batzer et al., Nucleic Acid Res.19:5081(1991);Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260: 2605-2608(1985);Rossolini et al., Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。
 本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
 本明細書において遺伝子の「相同性」とは、2以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいい、一般に「相同性」を有するとは、同一性または類似性の程度が高いことをいう。従って、ある2つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。2種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。2つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でDNA配列が、代表的には少なくとも50%同一である場合、好ましくは少なくとも70%同一である場合、より好ましくは少なくとも80%、90%、95%、96%、97%、98%または99%同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。従って本明細書において「相同体」または「相同遺伝子産物」は、本明細書にさらに記載する複合体のタンパク質構成要素と同じ生物学的機能を発揮する、別の種、好ましくは哺乳動物におけるタンパク質を意味する。このような相同体はまた、「オルソログ遺伝子産物」とも称されることもある。本開示の目的に合致する限り、このような相同体、相同遺伝子産物、オルソログ遺伝子産物等も用いることができることが理解される。
 アミノ酸は、その一般に公知の3文字記号か、またはIUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された1文字コードにより言及され得る。本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるBLASTを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、NCBIのBLAST2.2.28(2013.4.2発行)を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記BLASTを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。類似性は、同一性に加え、類似のアミノ酸についても計算に入れた数値である。
 本開示の一実施形態において「90%以上」は、例えば、90、95、96、97、98、99、または100%以上であってもよく、それらいずれか2つの値の範囲内であってもよい。上記「相同性」は、2つもしくは複数間のアミノ酸配列において相同なアミノ酸数の割合を、当該技術分野で公知の方法に従って算定してもよい。割合を算定する前には、比較するアミノ酸配列群のアミノ酸配列を整列させ、同一アミノ酸の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該技術分野で従来からよく知られている(例えば、BLAST、GENETYX等)。本明細書において「相同性」は、特に断りのない限りNCBIのBLASTによって測定された値で表すことができる。BLASTでアミノ酸配列を比較するときのアルゴリズムには、Blastpをデフォルト設定で使用できる。測定結果はPositivesまたはIdentitiesとして数値化される。
 本明細書において「機能的等価物」とは、対象となるもとの実体に対して、目的となる機能が同じであるが構造が異なる任意のものをいう。従って、「Glypican-1」またはその抗体の機能的等価物は、Glypican-1またはその抗体自体ではないが、Glypican-1またはその抗体の変異体または改変体(例えば、アミノ酸配列改変体等)であって、Glypican-1またはその抗体の持つ生物学的作用を有するもの、ならびに、作用する時点において、Glypican-1またはその抗体自体またはこのGlypican-1またはその抗体の変異体もしくは改変体に変化することができるもの(例えば、Glypican-1またはその抗体自体またはGlypican-1またはその抗体の変異体もしくは改変体をコードする核酸、およびその核酸を含むベクター、細胞等を含む)が包含されることが理解される。本開示において、Glypican-1またはその抗体の機能的等価物は、格別に言及していなくても、Glypican-1またはその抗体と同様に用いられうることが理解される。機能的等価物は、データベース等を検索することによって、見出すことができる。本明細書において「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および/または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、BLAST(Altschul et al.,J.Mol.Biol.215:403-410(1990))、FASTA(Pearson & Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 85:2444-2448(1988))、Smith and Waterman法(Smith and Waterman,J.Mol.Biol.147:195-197(1981))、およびNeedleman and Wunsch法(Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.48:443-453(1970))などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムDNAをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ(マイクロアレイアッセイ)、PCRおよびinsituハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本開示において使用される遺伝子には、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応遺伝子も含まれるべきであることが意図される。
 本開示の機能的等価物としては、アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加されたものを用いることができる。本明細書において、「アミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸の挿入、置換もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加」とは、部位特異的突然変異誘発法等の周知の技術的方法により、あるいは天然の変異により、天然に生じ得る程度の複数個の数のアミノ酸の置換等により改変がなされていることを意味する。改変アミノ酸配列は、例えば1~30個、好ましくは1~20個、より好ましくは1~9個、さらに好ましくは1~5個、特に好ましくは1~2個のアミノ酸の挿入、置換、もしくは欠失、またはその一方もしくは両末端への付加がなされたものであることができる。改変アミノ酸配列は、好ましくは、そのアミノ酸配列が、Glypican-1のアミノ酸配列において1または複数個(好ましくは1もしくは数個または1、2、3、もしくは4個)の保存的置換を有するアミノ酸配列であってもよい。ここで「保存的置換」とは、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、1または複数個のアミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合などが挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸は、アミノ酸毎に当該分野において公知である。具体例を挙げると、非極性(疎水性)アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニンなどが挙げられる。極性(中性)アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システインなどが挙げられる。陽電荷をもつ(塩基性)アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジンなどが挙げられる。また、負電荷をもつ(酸性)アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。
 本開示の一実施形態において「抗Glypican-1抗体」は、Glypican-1に結合性を有する抗体を含む。この抗Glypican-1抗体の生産方法は特に限定されないが、例えば、Glypican-1を哺乳類または鳥類に免疫することによって生産してもよい。抗Glypican-1抗体の「抗原結合フラグメント」とは、Glypican-1に結合する能力を保持する抗体のフラグメントを指す。かかる抗原結合フラグメントとしては、以下に限定されないが、例えば、単鎖抗体、scFv、Fabフラグメント、またはF(ab’)フラグメントなどが挙げられる。
 本発明の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体であれば、ポリクローナル抗体に比べて、効率的にGlypican-1に対して作用させることができる。抗Glypican-1モノクローナル抗体を効率的に生産する観点からは、Glypican-1をニワトリに免疫することが好ましい。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体の抗体クラスは特に限定されないが、例えばIgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、抗原結合活性を有する抗体フラグメント(以下、「抗原結合性フラグメント」と称することもある)であっても良い。この場合、安定性または抗体の生産効率が上昇する等の効果がある。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、融合蛋白質であってもよい。この融合蛋白質は、抗Glypican-1抗体のNまたはC末端に、ポリペプチドまたはオリゴペプチドが結合したものであってもよい。ここで、オリゴペプチドは、Hisタグであってもよい。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、例えば、精製Glypican-1、Glypican-1発現細胞、またはGlypican-1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体であってもよい。Glypican-1陽性がんに対する治療効果を高める観点からは、Glypican-1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、精製Glypican-1、Glypican-1発現細胞またはGlypican-1含有脂質膜で生物を免疫する工程を経て得られる抗体の、CDRセットを有する抗体であってもよい。Glypican-1陽性がんに対する治療効果を高める観点からは、Glypican-1発現細胞を免疫に使用することが好ましい。CDRセットとは、重鎖CDR1、2、および3、並びに、軽鎖CDR1、2、および3のセットである。
 本開示の一実施形態において「Glypican-1発現細胞」は、例えば、Glypican-1をコードするポリヌクレオチドを細胞に導入後、Glypican-1を発現させることによって得てもよい。ここでGlypican-1は、Glypican-1フラグメントを含む。また本開示の一実施形態において「Glypican-1含有脂質膜」は、例えば、Glypican-1と脂質二重膜を混合することによって得てもよい。ここでGlypican-1は、Glypican-1フラグメントを含む。また本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、Glypican-1陽性がんに対する治療効果を高める観点からは、抗原をニワトリに免疫する工程を経て得られる抗体、またはその抗体のCDRセットを有する抗体が好ましい。
 本開示の抗Glypican-1抗体は、目的を達成する限り、どのような結合力を有していてもよい。例えば、本開示の抗Glypican-1抗体は、Glypican-1に対して低い親和性を有していたとしても、インターナライゼーション活性および/またはADC活性を有していればよい。ただし診断やコンパニオン試薬目的では、強い結合力があるほうが好ましい。例えば、KD値(kd/ka)が、1.0×10-7(M)以下、1.0×10-8(M)以下、1.0×10-9(M)以下あるいは1.0×10-10(M)以下でありうる。好ましくは、診断やコンパニオン試薬目的における抗Glypican-1抗体の結合力は、KD値(kd/ka)で1.0×10-8(M)以下である。
 本開示の一実施形態に係る抗Glypican-1抗体は、Glypican-1の野生型または変異型に結合する抗体であってもよい。変異型とは、個体間のDNA配列の差異に起因するものを含む。野生型または変異型のGlypican-1のアミノ酸配列は、配列番号2に示すアミノ酸配列に対し、好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、より好ましくは95%以上、特に好ましくは98%以上の相同性を有している。
 本明細書において「抗体」は、抗原上の特定のエピトープに特異的に結合することができる分子またはその集団を含む。また抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。抗体は、様々な形態で存在することができ、例えば、全長抗体(Fab領域とFc領域を有する抗体)、Fv抗体、Fab抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、diabody、一本鎖(単鎖)抗体(例えば、scFv)、sc(Fv)2(single chain(Fv)2)、scFv-Fc、dsFv、多価特異的抗体(例えば、オリゴ特異的抗体、二価特異的抗体)、ダイアボディー、抗原結合性を有するペプチドまたはポリペプチド、キメラ抗体(例えば、マウス-ヒトキメラ抗体、ニワトリ-ヒトキメラ抗体等)、マウス抗体、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらの同等物(または等価物)からなる群から選ばれる1種以上の形態であってもよい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。本開示で用いられる抗Glypican-1抗体は、Glypican-1のタンパク質に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体(例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体)、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体が使用できる。本発明においては、モノクローナル、あるいはポリクローナルを抗体として利用することができるが好ましくはモノクローナル抗体である。抗体のGlypican-1タンパク質への結合は特異的な結合であることが好ましい。また抗体は、抗体修飾物または抗体非修飾物を含む。抗体修飾物は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体修飾物は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。
 本発明の一実施形態において「ポリクローナル抗体」は、例えば、抗原に特異的なポリクローナル抗体の産生を誘導するために、哺乳類(例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、サル等)、鳥類等に、目的の抗原を含む免疫原を投与することによって生成することが可能である。免疫原の投与は、1つ以上の免疫剤、および所望の場合にはアジュバントの注入をしてもよい。アジュバントは、免疫応答を増加させるために使用されることもあり、フロイントアジュバント(完全または不完全)、ミネラルゲル(水酸化アルミニウム等)、または界面活性物質(リゾレシチン等)等を含んでいてもよい。免疫プロトコールは、当該技術分野で公知であり、選択する宿主生物に合わせて、免疫応答を誘発する任意の方法によって実施される場合がある(タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):86-91.)。
 本開示の一実施形態において「モノクローナル抗体」は、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体である場合を含む。または、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に同一である抗体であってもよい。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、異なるエピトープに対応する異なる抗体を典型的に含むような、通常のポリクローナル抗体とは異なる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていないハイブリドーマ培養から合成できる点で有用である。「モノクローナル」という形容は、実質的に均一な抗体集団から得られるという特徴を示していてもよいが、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、モノクローナル抗体は、“KohlerG, Milstein C.,Nature. 1975 Aug 7;256(5517):495-497.”に掲載されているようなハイブリドーマ法と同様の方法によって作製してもよい。あるいは、モノクローナル抗体は、米国特許第4816567号に記載されているような組換え法と同様の方法によって作製してもよい。または、モノクローナル抗体は、“Clacksonet al., Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-628.”、または“Marks et al., J MolBiol. 1991 Dec 5;222(3):581-597.”に記載されているような技術と同様の方法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。または、“タンパク質実験ハンドブック,羊土社(2003):92-96.”に掲載されている方法でよって作製してもよい。
 抗体の大量生産については、当該分野で公知の任意の手法を用いることができるが、例えば、代表的な抗体の大量生産系の構築および抗体製造としては、以下を例示することができる。すなわち、CHO細胞にH鎖抗体発現ベクターおよびL鎖抗体発現ベクターをトランスフェクションし、選択試薬であるG418およびZeocinを用いて培養を行い、限界希釈法によるクローニングを行う。クローニング後、安定的に抗体を発現しているクローンをELISA法により選択する。選択したCHO細胞を用いて拡大培養し、抗体を含む培養上清を回収する。回収した培養上清からProtein AもしくはProteinG精製により抗体を精製することができる。本開示のヒト化抗体は、ヒト抗体産生マウスに目的とする抗原を免疫するとポリクロ―ナルな完全ヒト抗体を得ることができ、ここからモノクローナルな状態にしてから本開示において利用することができる。
 本開示の一実施形態において「ヒト化抗体」は、例えば、非ヒト種由来の1つ以上のCDR、およびヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域(FR)、さらにヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有し、所望の抗原に結合する抗体である。抗体のヒト化は、当該技術分野で既知の種々の手法を使用して実施可能である(Almagro et al., Front Biosci. 2008 Jan 1;13:1619-1633.)。例えば、CDRグラフティング(Ozaki et al.,Blood.1999 Jun 1;93(11):3922-3930.)、Re-surfacing (Roguska et al., Proc Natl Acad Sci US A.1994Feb 1;91(3):969-973.)、またはFRシャッフル(Damschroder et al., Mol Immunol. 2007 Apr;44(11):3049-3060. Epub 2007 Jan 22.)などが挙げられる。抗原結合を改変するために(好ましくは改善するために)、ヒトFR領域のアミノ酸残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。このFR置換は、当該技術分野で周知の方法によって実施可能である(Riechmann et al., Nature. 1988 Mar 24;332(6162):323-327.)。例えば、CDRとFR残基の相互作用のモデリングによって抗原結合に重要なFR残基を同定してもよい。または、配列比較によって、特定の位置で異常なFR残基を同定してもよい。ヒト化において、CDR内のアミノ酸を変更しなくてもよく、変更してもよい。上記に加えて、本開示の製造例に記載のとおりヒト化抗体を製造してもよい。具体的には、非ヒト由来の抗体のCDRをヒト重鎖フレームワークにグラフティングした、重鎖が固定されたVκライブラリーから、スクリーニングされてもよい。このヒト化方法においては、重鎖CDRは変更されないが、軽鎖CDRは変更され得る。
 本開示の一実施形態において「重鎖」は、典型的には、全長抗体の主な構成要素である。重鎖は、通常、軽鎖とジスルフィド結合および非共有結合によって結合している。重鎖のN末端側のドメインには、同種の同一クラスの抗体でもアミノ酸配列が一定しない可変領域(VH)と呼ばれる領域が存在し、一般的に、VHが抗原に対する特異性、親和性に大きく寄与していることが知られている。例えば、“Reiter et al., J Mol Biol. 1999 Jul 16;290(3):685-98.”にはVHのみの分子を作製したところ、抗原と特異的に、高い親和性で結合したことが記載されている。さらに、“Wolfson W,Chem Biol. 2006 Dec;13(12):1243-1244.”には、ラクダの抗体の中には、軽鎖を持たない重鎖のみの抗体が存在していることが記載されている。
 本開示の一実施形態において「CDR(相補性決定領域)」は、抗体において、実際に抗原に接触して結合部位を形成している領域である。一般的にCDRは、抗体のFv(可変領域:重鎖可変領域(VH)および軽鎖可変領域(VL)を含む)上に位置している。また一般的にCDRは、5~30アミノ酸残基程度からなるCDR1、CDR2、CDR3が存在する。そして、特に重鎖のCDRが抗体の抗原への結合に寄与していることが知られている。またCDRの中でも、CDR3が抗体の抗原への結合における寄与が最も高いことが知られている。例えば、“Willyet al., Biochemical and Biophysical Research Communications Volume 356, Issue 1, 27 April 2007, Pages 124-128”には、重鎖CDR3を改変させることで抗体の結合能を上昇させたことが記載されている。CDR以外のFv領域はフレームワーク領域(FR)と呼ばれ、FR1、FR2、FR3およびFR4からなり、抗体間で比較的よく保存されている(Kabat et al.,「Sequence of Proteins of Immunological Interest」US Dept. Health and Human Services, 1983.)。即ち、抗体の反応性を特徴付ける要因はCDRにあり、特に重鎖CDRにあるといえる。
 CDRの定義およびその位置を決定する方法は複数報告されている。例えば、Kabatの定義(Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))、またはChothiaの定義(Chothia et al., J. Mol.Biol.,1987;196:901-917)を採用してもよい。本開示の一実施形態においては、Kabatの定義を好適な例として採用するが、必ずしもこれに限定されない。また、場合によっては、Kabatの定義とChothiaの定義の両方を考慮して決定しても良く、例えば、各々の定義によるCDRの重複部分を、または各々の定義によるCDRの両方を含んだ部分をCDRとすることもできる。そのような方法の具体例としては、Kabatの定義とChothiaの定義の折衷案である、Oxford Molecular’sAbM antibody modeling softwareを用いたMartinらの方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989;86:9268-9272)がある。このようなCDRの情報を用いて、本開示に使用されうる変異体を生産することができる。このような抗体の変異体では、もとの抗体のフレームワークに1または数個(例えば、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個)の置換、付加もしくは欠失を含むが、該CDRには変異を含まないように生産することができる。
 本明細書において「抗原」(antigen)とは、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。本明細書において「免疫原」(immunogen)とは、抗原特異的免疫応答を生じるリンパ球活性化を開始し得る抗原をいう。本明細書において「エピトープ」または「抗原決定基」とは、抗体またはリンパ球レセプターが結合する抗原分子中の部位をいう。エピトープを決定する方法は、当該分野において周知であり、そのようなエピトープは、核酸またはアミノ酸の一次配列が提供されると、当業者はそのような周知慣用技術を用いて決定することができる。本開示の抗体は、エピトープが同じであれば、他の配列を有する抗体であっても同様に利用することができることが理解される。
 本明細書において使用される抗体は、擬陽性が減じられる限り、どのような特異性の抗体を用いても良いことが理解される。
 本開示が対象とする「がん」は、肺がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓がん、副腎がん、胆道がん、乳がん、大腸がん、小腸がん、卵巣がん、子宮がん、膀胱がん、前立腺がん、尿管がん、腎盂がん、尿管がん、陰茎がん、精巣がん、脳腫瘍、中枢神経系のがん、末梢神経系のがん、頭頸部がん、グリオーマ、多形性膠芽腫、皮膚がん、メラノーマ、甲状腺がん、唾液腺がん、悪性リンパ腫、がん腫、肉腫、白血病および血液悪性腫瘍からなる群から選ばれる1種以上を含む。「癌」および「腫瘍」と交換可能に使用される。ここで、卵巣がんは、例えば、卵巣漿液性腺がん、または卵巣明細胞線がんを含む。子宮がんは、例えば、子宮内膜がん、または子宮頸がんを含む。頭頸部がんは、例えば、口腔がん、咽頭がん、喉頭がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、唾液腺がん、または甲状腺がんを含む。肺がんは、例えば、非小細胞肺がん、または小細胞肺がんを含む。また悪性腫瘍は、PD-L1陽性であってもよい。
 本明細書において「食道がん」とは、通常の意味で使用され、食道におけるがんを含む広義の意味で使用される。食道がんとしては、扁平上皮がんのほか、腺がん、リンパ節転移部位のもの等も包含されるがこれに限定されない。日本人の食道がんは、約半数が胸の中の食道中央付近から発生し、次いで1/4が食道の下部に発生するとされており、本開示はいずれも対象とすることが理解される。理論に束縛されることを望まないが、本開示では、扁平上皮がんのほか、腺がん、リンパ節転移部位のものを含め食道がん全体の指標として使用されうることが期待される。
 本明細書において「膵臓がん」は、膵臓から発生した悪性の腫瘍のことをいうが、一般には膵管がんをいい、このほかの膵臓の部分の腫瘍も包含される。
 本明細書において「子宮頸がん」は、子宮がんの一種で、子宮がんには子宮頸がんと子宮体がんとがあり、子宮頸がんは、子宮の入り口の子宮頸部とよばれる部分から発生するものである。
 本明細書において「肺がん」は、肺に発生する上皮細胞由来の悪性腫瘍であり、小細胞肺がん、非小細胞肺がんなどがあり、非小細胞肺がんには、腺がん、扁平上皮がん、大細胞がんがある。
 本明細書において「頭頸部がん」は、頭頸部の腫瘍であり、顔面から頸部までの部分、例えば、鼻、口、のど、上あご、下あご、耳などの部分にできる腫瘍をいう。
 本明細書において「乳がん」は、乳房に生じる腫瘍であり、乳管がん、小葉がんなどがある。
 本明細書において「子宮平滑筋肉腫」とは、子宮肉腫のうち子宮の平滑筋にできる子宮肉腫を指す。子宮平滑筋肉腫は、細胞密度、細胞分裂数、細胞異型、腫瘍細胞の凝固壊死の有無により組織学的に診断され得る。
 本明細書において「前立腺がん」は、「前立腺がん」とは、前立腺にできる腫瘍をいう。
 本明細書において「スキルス胃がん」は、胃に生じる難治性の悪性腫瘍であり、胃壁や胃の組織にしみこんでいくように進行し、進行すると胃壁が硬く厚くなる。通常の胃がんとは異なり、潰瘍などの病変を作らないため、内視鏡検査など肉眼で確認する検査では発見が困難である。
 本明細書において「胆管がん」は、胆管に生じる腫瘍であり、肝臓内の胆管に生じる肝内胆管がん、肝臓の外の肝門部に生じる肝門部領域胆管がん、および肝臓の外の遠位部に生じる遠位胆管がんに分類される。
 本明細書において「大腸がん」は、大腸の内側にある粘膜に発生するがんをいう。大腸がんには、良性のポリープが大きくなる過程でがん化して発生するものと、粘膜の正常な細胞が直接がん細胞に変化して発生するものがある。
 本明細書において「がん関連線維芽細胞(cancer-associated fibroblasts(CAF))」とは、がんの間質を構成する線維芽細胞を指す。CAFはコラーゲンなどの多くの細胞外基質を産生し、がんの間質を非常に硬くし、その結果、血管が押しつぶされること(虚脱)等に起因して、抗がん剤の効率的な浸透を妨げる。血管が押しつぶされることは、がん組織の低酸素状態も誘導し、さらに、がん細胞の悪性度を上昇させる。また、間質の硬度の上昇自体も、がん細胞の増殖や浸潤能(周囲組織にひろがる能力)を上昇させる因子の一つである。加えて、CAFは多くの増殖因子を産生し、これらはがん細胞に作用してその増殖や浸潤を促進し、抗腫瘍免疫応答を抑制する。
 本明細書において、がんの「間質」は、がん組織におけるがん細胞を取り囲む組織であって、CAFを主要な構成成分として含み、その他の構成成分として、免疫細胞、骨髄由来細胞、腫瘍血管、リンパ管、CAFによって産生される細胞外基質等を含む組織を指す。
 本明細書において、がんにおける間質の「含有率」とは、病理組織解析による、がん組織全体の面積における間質の割合を指す。含有率は、間質の領域および/または間質ではない領域(がん細胞領域)を同定することで算出され得る。間質の同定方法としては、間質に特異的に発現されるタンパク質に対する抗体、例えば、α-SMAに対する抗体を用いた免疫組織化学染色などが挙げられるが、これらに限定されない。がん細胞領域を同定する方法としては、がん特有の構造(例えば、膵臓がんにおける腺管構造)の観察、がん細胞に特異的に発現されるタンパク質に対する抗体、例えば、上皮系細胞のマーカータンパク質であるEpCAMに対する抗体を用いた免疫組織化学染色などが挙げられるが、これに限定されない。本明細書において、「含有率」は、特段の定めがない限り、がん特有の構造(例えば、膵臓がんにおける腺管構造)を観察してがん細胞領域を同定することにより算出されたものを指す。
 具体的には、以下の方法を行うことによって算出される数値が採用され得る。(1)腫瘍組織薄切に対して、HE染色、抗GPC1抗体あるいは抗α-SMA抗体などを用いて免疫組織化学染色を行う。
(2)染色後、顕微鏡観察により画像を観察し、がん細胞(腺管構造)とCAF(線維芽細胞様構造)の範囲を測定する。
(3)顕微鏡観察視野の全体の内、がん細胞およびCAFが占める面積を計算する。
 本明細書において「被験体(者)」とは、本開示の診断または検出、あるいは治療等の対象となる対象(例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等)をいう。
 本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい試料を選択することができる。
 本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」(いずれも英語ではagentに相当する)は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素(例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー)でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸(例えば、cDNA、ゲノムDNAのようなDNA、mRNAのようなRNAを含む)、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子(例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子(例えば、低分子リガンドなど)など)、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。Glypican-1に結合する物質もまた、このような薬剤でありうる。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を(例えば、70%以上の配列同一性)もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物(例えば、単鎖抗体)、そのポリペプチドがレセプターまたはリガンドである場合の特異的なリガンドまたはレセプター、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。
 本明細書において「細胞膜透過性」とは、分子(例えば、ポリペプチド、糖、脂質、核酸、他の炭化水素、低分子化合物等)が、有意または有効な量で細胞内外を原形質膜を通って通過する能力を指す。
 本明細書において「薬物排出トランスポーター」とは、細胞内の薬物などの不要物を細胞外に輸送するための膜貫通タンパク質を指す。
 本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態(例えば、食道がん)などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本開示の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本開示の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。
 本明細書において「検出薬(剤)」または「検査薬(剤)」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。
 本明細書において「診断薬(剤)」とは、広義には、目的の状態(例えば、食道がん等の疾患など)を診断できるあらゆる薬剤をいう。
 本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害(例えば、食道がん)について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいい、患者の疾患、もしくは疾患に伴う1つ以上の症状の、症状改善効果あるいは予防効果を発揮しうることを含む。事前に診断を行って適切な治療を行うことは「コンパニオン治療」といい、そのための診断薬を「コンパニオン診断薬」ということがある。
 本明細書において「治療薬(剤)」とは、広義には、目的の状態(例えば、食道がん等の疾患など)を治療できるあらゆる薬剤をいう。本開示の一実施形態において「治療薬」は、有効成分と、薬理学的に許容される1つもしくはそれ以上の担体とを含む医薬組成物であってもよい。医薬組成物は、例えば有効成分と上記担体とを混合し、製剤学の技術分野において知られる任意の方法により製造できる。また治療薬は、治療のために用いられる物であれば使用形態は限定されず、有効成分単独であってもよいし、有効成分と任意の成分との混合物であってもよい。また上記担体の形状は特に限定されず、例えば、固体または液体(例えば、緩衝液)であってもよい。なお食道がんの治療薬は、食道がんの予防のために用いられる薬物(予防薬)、または食道がん細胞の増殖抑制剤を含む。
 本明細書において「予防」とは、ある疾患または障害(例えば、食道がん)について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本開示の薬剤を用いて、診断を行い、必要に応じて本開示の薬剤を用いて例えば、食道がん等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。
 本明細書において「予防薬(剤)」とは、広義には、目的の状態(例えば、食道がん等の疾患など)を予防できるあらゆる薬剤をいう。
 本明細書において「相互作用」とは、2つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力(例えば、分子間力(ファンデルワールス力)、水素結合、疎水性相互作用など)を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした2つの物質は、会合または結合している状態にある。本開示の検出、検査および診断は、このような相互作用を利用して実現することができる。
 本明細書においてポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現の「検出」または「定量」は、例えば、検出剤、検査剤または診断剤(コンパニオン試薬としての適用を含む)への結合または相互作用を含む、mRNAの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法またはPCR法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるELISA法、RIA法、蛍光抗体法、発光イムノアッセイ(LIA)、免疫沈降法(IP)、免疫拡散法(SRID)、免疫比濁法(TIA)、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては、ELISA法またはRIA法などが例示される。アレイ(例えば、DNAアレイ、プロテインアレイ)を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。DNAアレイについては、(秀潤社編、細胞工学別冊「DNAマイクロアレイと最新PCR法」)に広く概説されている。プロテインアレイについては、Nat Genet.2002 Dec;32 Suppl:526-532に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加えて、RT-PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two-hybridシステム、invitro翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔羊土社(2002)などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考として援用される。
 本明細書において、活性、発現産物(例えば、タンパク質、転写物(RNAなど))の「減少」または「抑制」あるいはその類義語は、特定の活性、転写物またはタンパク質の量、質または効果における減少、または減少させる活性をいう。減少のうち「消失」した場合は、活性、発現産物等が検出限界未満になることをいい、特に「消失」ということがある。本明細書では、「消失」は「減少」または「抑制」に包含される。
 本明細書において「標識」とは、目的となる分子または物質を他から識別するための存在(例えば、物質、エネルギー、電磁波など)をいう。そのような標識方法としては、RI(ラジオアイソトープ)法、蛍光法、ビオチン法、化学発光法等を挙げることができる。本開示のマーカーまたはそれを捕捉する因子または手段を複数、蛍光法によって標識する場合には、蛍光発光極大波長が互いに異なる蛍光物質によって標識を行う。蛍光発光極大波長の差は、10nm以上であることが好ましい。リガンドを標識する場合、機能に影響を与えないものならば何れも用いることができるが、蛍光物質としては、AlexaTM Fluorが望ましい。AlexaTMFluorは、クマリン、ローダミン、フルオレセイン、シアニンなどを修飾して得られた水溶性の蛍光色素であり、広範囲の蛍光波長に対応したシリーズであり、他の該当波長の蛍光色素に比べ、非常に安定で、明るく、またpH感受性が低い。蛍光極大波長が10nm以上ある蛍光色素の組み合わせとしては、AlexaTM555とAlexaTM633の組み合わせ、AlexaTM488とAlexaTM555の組み合わせ等を挙げることができる。核酸を標識する場合は、その塩基部分と結合できるものであれば何れも用いることができるが、シアニン色素(例えば、CyDyeTMシリーズのCy3、Cy5等)、ローダミン6G試薬、2-アセチルアミノフルオレン(AAF)、AAIF(AAFのヨウ素誘導体)等を使用することが好ましい。蛍光発光極大波長の差が10nm以上である蛍光物質としては、例えば、Cy5とローダミン6G試薬との組み合わせ、Cy3とフルオレセインとの組み合わせ、ローダミン6G試薬とフルオレセインとの組み合わせ等を挙げることができる。本開示では、このような標識を利用して、使用される検出手段に検出され得るように目的とする対象を改変することができる。そのような改変は、当該分野において公知であり、当業者は標識におよび目的とする対象に応じて適宜そのような方法を実施することができる。
 本明細書において「インビボ」(in vivo)とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。
 本明細書において「インビトロ」(in vitro)とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」(例えば、試験管内に)摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。
 本明細書において「エキソビボ」(ex vivo)とは、ある処置について、体外で行われるがその後体内に戻されることが意図される場合、一連の動作をエキソビボという。本開示においても、生体内にある細胞を本開示の薬剤で処置して再度患者に戻すような実施形態を想定することができる。
 本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分(例えば、検査薬、診断薬、治療薬、抗体、標識、説明書など)が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分(例えば、検査薬、診断薬、治療薬をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、治療薬、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
 本明細書において「指示書」は、本開示を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本開示の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与(例えば、注射などによる)することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本開示が実施される国の監督官庁(例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局(FDA)など)が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書(package insert)であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体(例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール)のような形態でも提供され得る。
 本明細書で使用される「細胞内移行(インターナライズ/インターナライゼーション)」とは、細胞表面上の抗原に結合した物質を媒介してエンドサイトーシスまたは食作用によって細胞が抗原に結合した物質を取り込むことを指す。このような活性を有するGlypian-1に結合する物質(例えば、抗Glypican-1抗体)は、Glypian-1を細胞表面に発現する細胞に対して目的の有効成分を細胞内移行させ、目的の有効成分による所望の効果をGlypian-1発現細胞において生じさせることができる。目的の有効成分としては、細胞傷害性活性を有する薬剤、抗がん剤、造影剤、siRNA、アンチセンス核酸、リボザイムなどが挙げられるが、これらに限定されない。
 本明細書において「複合体」とは、2以上の部分を含む任意の構成体を意味する。例えば、一方の部分がポリペプチドである場合は、他方の部分は、ポリペプチドであってもよく、それ以外の物質(例えば、糖、脂質、核酸、他の炭化水素、低分子化合物等)であってもよい。本明細書において複合体を構成する2以上の部分は、共有結合で結合されていてもよくそれ以外の結合(例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、ファンデルワールス力等)で結合されていてもよい。従って、本明細書において「複合体」は、ポリペプチド、核酸、脂質、糖、低分子化合物などの分子が複数種連結してできた分子を含む。 
 本明細書において「リンカ―」とは、少なくとも2つの構成要素を連結し、空間的に分離するための分子を指す。リンカーとしては、例えば、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、ジスルフィドリンカーなどが挙げられるが、これらに限定されない。「酵素切断型リンカー」は、細胞内に存在する酵素によって切断されるリンカーを指す。「酸不安定性リンカー」は、細胞内のエンドソームまたはリソソームの産生条件下で切断されるリンカーを指す。「ジスルフィドリンカー」は、細胞内の還元環境下で切断されるリンカーを指す。
 本明細書において「抗体薬物複合体(ADC)」とは、1つまたは複数の目的の有効成分と化学的に連結された抗体これらの抗原結合フラグメントを指す。好ましい実施形態において、ADCは、リンカーを介して作動可能に連結されている。本明細書において「作動可能に連結されている」とは、連結される構成要素がその機能を発揮するように作動することが可能な関係にあることを指す。ADCに含まれ得る目的の有効成分としては、以下に限定されないが、細胞傷害性活性を有する薬剤、抗がん剤、造影剤、siRNA、アンチセンス核酸、リボザイムなどが挙げられる。リンカーとして使用され得るものは、開裂型リンカーであっても、非開裂型のリンカーであってもよい。開裂型リンカーとしては、タンパク質分解酵素による切断配列を有するリンカー、酸不安定性のリンカー、ジスルフィドリンカーなどが挙げられるが、これらに限定されない。非開裂型リンカーとしては、MCCリンカーなどが挙げられるが、これに限定されない。
 本明細書において「細胞傷害活性」とは、例えば、細胞に病理的な変化をもたらすこと、直接的な外傷にとどまらず、DNAの切断や塩基の二量体の形成、染色体の切断、細胞分裂システムの損傷、各種酵素活性の低下などあらゆる細胞の構造や機能上の損傷により、細胞の機能を直接または間接的に遮断することによって細胞死をもたらすことをいう。したがって、「細胞傷害活性を有する薬剤」としては、例えば、以下に限定されないが、アルキル化剤、腫瘍壊死因子阻害剤、インターカレーター、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、及びトポイソメラーゼ阻害剤などが挙げられる。
 本明細書において「50%阻害濃度(IC50)」とは、50%の細胞が死滅させるために必要な化合物の濃度をいう。本明細書では、実施例7に記載の方法を使用してIC50が測定される。
 本明細書において「親和性」とは、2つの物質(例えば、抗体と抗原)の可逆的結合の平衡定数を指し、平衡解離定数(KD値)で表される。平衡解離定数は表面プラズモン共鳴(SPR)法、例えばBiacore(登録商標)により測定することができる。その他、MP-SPR NaviTM(BioNavis)、OpenPlex(Horiba)、Smart SPR(RIBM)によって測定されてもよい。本開示において、示されるKD値は、特段の定めがない限り、表面プラズモン共鳴(SPR)法によって測定された値を意味する。
 (好ましい実施形態)
 以下に本開示の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本開示のよりよい理解のために提供されるものであり、本開示の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本開示の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本開示の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
 CAFを標的としたがん治療の試みがいくつか行われてきた。例えば、ヘッジホッグ経路がCAFの増殖促進に関わっているという視点から、ヘッジホッグ経路阻害剤であるsaridegibおよび膵臓がんの標準治療として使用されているgemcitabineの併用と、gemcitabine単剤の比較試験(第II相試験)が実施されたが、saridegibとgemcitabineの併用はgemcitabine単剤よりも高い有効性を示さなかった(J Clin Oncol.2015 Dec 20;33(36):4284-92)。
 本発明者らは、驚くべきことに、抗GPC-1抗体と細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体(抗体薬物複合体;ADC)により、CAFを有するがんを効果的に治療することができることを発見した。したがって、1つの局面において、本開示は、がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物を提供する。
 いくつかの実施形態において、本開示の組成物が治療し得るがんは、間質を有し得る。間質は、難治性腫瘍によく見られ、バリアの役割を果たし、薬剤の送達を妨げる。がん関連線維芽細胞(CAF)が、間質のバリアを形成する。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、間質含有率が、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、または少なくとも約90%であるがんを治療し得る。含有率は病理組織解析により、全体の面積における間質の割合から決定され得る。
 いくつかの実施形態において、がんはGPC-1陽性がんであっても、GPC-1陰性がんであってもよい。本開示の組成物は、GPC-1陰性がん(CAFを有するが、がん細胞はGPC-1を発現しないがん)も治療することができ、有利である。理論に束縛されることを望まないが、CAFを標的とすることで、複合体がインターナライズしCAF内で遊離した細胞傷害性活性を有する薬剤が、周りのがん細胞に浸透し、CAFの周りのがん細胞を殺傷することができる。
 いくつかの実施形態において、CAFはGPC-1を発現し得る。したがって、本開示の複合体に使用される抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントは、GPC-1に特異的に結合し、細胞内にインターナライズすることができればいずれの抗体であってもよい。いくつかの実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、GPC-1を発現する細胞に対してインターナライズする活性を有し得る。
 一部の実施形態では、Glypican-1陽性細胞に対して細胞内移行する(インターナライズ)活性を有する抗Glypican-1抗体またはその抗原結合フラグメントのエピトープは、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および/もしくは388~421位、
 (c)配列番号2の430~530位
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、および/もしくは388~421位、
 (e)配列番号2の339~358位、388~421位、および/もしくは430~530位、または
 (f)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および/もしくは430~530位、
であるかこれを含み得る。より好ましくは、Glypican-1陽性細胞に対して細胞内移行する活性を有する抗Glypican-1抗体またはその抗原結合フラグメントのエピトープは、以下:
 (a)配列番号2の33~61位、
 (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
 (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
 (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
であるか、これを含み得る。
 いくつかの実施形態において、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結され得る。
 細胞傷害性活性を有する薬剤としては、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。限定を意図するものではないが、細胞傷害性活性を有する薬剤は、バイスタンダー効果を有するものであるのが好ましい。バイスタンダーとは、がん細胞内で遊離した薬剤が細胞膜を透過し、周囲のがん細胞に対しても有効性を示す効果をいう。したがって、いくつかの実施形態において、細胞傷害性活性を有する薬剤は、細胞膜透過性であり得る。バイスタンダー効果を有する細胞傷害性活性を有する薬剤としては、例えば、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、DM4等が挙げられるが、これらに限定されない。
 いくつかの実施形態において、細胞傷害性活性を有する薬剤は、薬物排出トランスポーターの基質となり得る。理論に束縛されることを望まないが、CAFは、薬物排出トランスポーターを発現しており、薬物排出トランスポーターの基質となった細胞傷害性活性を有する薬剤は、細胞外に放出され、がん細胞に送達され得る。いくつかの実施形態において、薬物排出トランスポーターはMDR-1であり得る。特定の実施形態において、薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤は、MMAEであり得る。
 いくつかの実施形態において、細胞傷害性活性を有する薬剤は、細胞傷害性活性を有する薬剤は、細胞膜透過性であるか、または薬物排出トランスポーターの基質となり得る。
 細胞傷害性活性を有する薬剤を効率的にがん細胞に送達するために、細胞傷害性活性を有する薬剤は、細胞膜透過性であり、かつ薬物排出トランスポーターの基質となることが好ましい。このような薬剤は、MMAEであり得る。
 いくつかの実施形態において、リンカーは、がん細胞内において切断されるものであればよく、例えば、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーなどが挙げられる。特定の実施形態において、リンカーは、カテプシン(例えば、カテプシンB)により切断される切断型リンカー、例えば、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-p-アミノベンジルオキシカルボニルであり得る。
 別の実施形態では、本開示の複合体で使用されるリンカーは、酸不安定性リンカーであってもよい。細胞内移行後のエンドソームまたはリソソーム内の酸性pHを利用し、酸性で不安定なpHに応答性のリンカーを使用することができる。このようなリンカーとしては、例えば、ヒドラゾンなどが挙げられる。
 さらなる別の実施形態では、本開示の複合体で使用されるリンカーは、ジスルフィドリンカーであってもよく、このようなリンカーとしては、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ブタノエート(SPDB)、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ペンタノエート(SPP)などが挙げられる。
 本開示の複合体で使用されるリンカーは、非開裂型リンカーであってもよい。非開裂型リンカーとしてはマレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボン酸(MCCリンカー)などが挙げられるが、これらに限定されない。
 がんは、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択され得る。
 さらなる局面において、本開示は、GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、GPC-1をホモジニアスに発現するがんだけではなく、GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんも治療し得ることを見出した。抗GPC-1抗体は、GPC-1を発現しない細胞を標的にできないため、予想外である。GPC-1をホモジニアスに発現するがんに対しても使用可能である点で有利である。
 さらなる態様において、本開示は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、がんを処置するための組成物であって、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査し、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、該組成物が投与されることを特徴とする、組成物を提供する。
 本開示の組成物において使用され得る抗ヒトGlypican-1抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下:
 (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a033)、
 (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a002)、
 (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a007)、
 (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a016)、
 (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a017)、
 (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a021)、
 (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a026)、
 (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a009)、
 (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a030)、
 (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a042)、
 (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a002)、
 (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a006)、
 (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a010)、
 (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a014)、
 (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a022)、
 (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a034)、
 (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a035)、
 (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02b006)、ならびに
 (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
 好ましい実施形態において、本発明において使用され得る抗体またはその抗原結合断片は、以下のクローン:01a033、01a002、02a010、02a002、02a014、02b006、01a042、01a017、01a026、01a016、01a030、または01a009の重鎖CDRおよび軽鎖CDRの配列を有し得る。
 ある実施形態では、本発明の抗体は、以下:
 (a)配列番号158に示される重鎖、および配列番号160に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a033)、
 (b)配列番号126に示される重鎖、および配列番号128に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a002)、
 (c)配列番号130に示される重鎖、および配列番号132に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a007)、
 (d)配列番号134に示される重鎖、および配列番号136に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a016)、
 (e)配列番号138に示される重鎖、および配列番号140に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a017)、
 (f)配列番号142に示される重鎖、および配列番号144に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a021)、
 (g)配列番号146に示される重鎖、および配列番号148に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a026)、
 (h)配列番号150に示される重鎖、および配列番号152に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a009)、
 (i)配列番号154に示される重鎖、および配列番号156に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a030)、
 (j)配列番号162に示される重鎖、および配列番号164に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-01a042)、
 (k)配列番号166に示される重鎖、および配列番号168に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a002)、
 (l)配列番号170に示される重鎖、および配列番号172に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a006)、
 (m)配列番号174に示される重鎖、および配列番号176に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a010)、
 (n)配列番号178に示される重鎖、および配列番号180に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a014)、
 (o)配列番号182に示される重鎖、および配列番号184に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a022)、
 (p)配列番号186に示される重鎖、および配列番号188に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a034)、
 (q)配列番号190に示される重鎖、および配列番号192に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02a035)、
 (r)配列番号194に示される重鎖、および配列番号196に示される軽鎖のアミノ酸配列を含む抗体(クローンK090-02b006)、ならびに
 (s)少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される。
 好ましい実施形態において、本発明において使用され得る抗体またはその抗原結合断片は、以下のクローン:01a033、01a002、02a010、02a002、02a014、02b006、01a042、01a017、01a026、01a016、01a030、または01a009の重鎖および軽鎖の配列を有し得る。
 別の実施形態では、上記抗体の変異体は、元の抗体のアミノ酸配列に対して、少なくとも、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約98%、または約99%同一であるアミノ酸配列を有し得る。上記抗体の変異体は、フレームワークに少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含んでもよい。
 上記抗体の詳細は、国際公開第2018/199318号(参照により本明細書に組み込まれる)に開示される。
 本発明で使用され得る抗体は、約10nM以下の結合定数の結合親和性でヒトGlypican-1に結合するものが好ましいが、インターナライズ活性を有しており、所望のADC活性を有していれば、上記の結合親和性よりも弱くてもよいことが理解される。
 いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、いずれのクラスであってもよく、例えば、IgM、IgD、IgG、IgA、IgE、またはIgYであってもよい。特定の実施形態において、本開示の抗体は、IgGであり得る。さらなる特定の実施形態において、本開示の抗体は、ヒトIgG1、ヒトIgG2、ヒトIgG3、およびヒトIgG4からなる群から選択されるサブクラスであり、好ましくは、ヒトIgG4である。
 ヒトIgG4は、ヒトIgG4のH鎖が別のヒトIgG4と交換する反応(Fab-arm exchange)が起きることが知られている(https://www.nature.com/articles/nrneph.2015.95/figures/2)。これを防ぐために、S228P変異を入れることができる(J Biol Chem. 2015 Feb 27;290(9):5462-9.)。例えば、OPDIVOR(nivolumab)やKEYTRUDAR(pembrolizumab)は、S228P変異が導入されており、デュピルマブは、H鎖233番目のアミノ酸残基がProに置換されている。ヒトIgG4以外のクラスではFab-arm exchangeは起きないため、アミノ酸変異を入れなくてもよい。
 (改変体の作成)
 当該分野で周知の方法に従って、当業者であれば、本開示における抗体の配列に基づき、GPC-1に対して、元々の抗体と同等またはそれらよりも高い親和性を有する改変体を製造することが可能である。例えば、当業者であれば、ファージディスプレイ法を用いてCDR配列がわずかに異なる抗体を解析し、目的の抗体と同等またはそれより高い親和性を有する抗体をスクリーニングすることができる。その他の改変体を作成する方法としては、CDR-walking法、ランダム変異誘発法などが挙げられる。いくつかの実施形態において、改変体は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントにおける各CDRにおいて、3個以下のアミノ酸置換、欠失および/または付加、好ましくは2個以下のアミノ酸置換、欠失および/または付加、より好ましくは1個以下のアミノ酸置換、欠失および/または付加を有し得る。これらの改変体は、GPC-1に対して、元々の抗体と同等またはそれらよりも高い親和性を有し得る。
 本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも1つ以上
」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「2つ
の値の範囲内」と明記した場合、その範囲には2つの値自体も含む。
 本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
 以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したのではない。従って、本開示の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
 以下に実施例を記載する。必要な場合、以下の実施例で用いる動物の取り扱いは、必要な場合、医薬基盤研究所において規定される基準を遵守し、ヘルシンキ宣言に基づいて行った。試薬類は具体的には実施例中に記載した製品を使用したが、他メーカー(Sigma-Aldric、和光純薬、ナカライ、R&DSystems、USCN Life Science INC等)の同等品でも代用可能である。
 本実施例では、GPC1ががん細胞のみならず間質に極めて多量に存在するがん関連線維芽細胞(cancer-associated fibroblasts(CAF))にも高発現する性質を利用し、抗GPC1モノクローナル抗体にバイスタンダー効果を有するペイロードであるMMAEをコンジュゲートしたGPC1-ADC(MMAE)がCAFに取り込まれ、リンカーが切断された後、MMAEが細胞外に遊離し、CAF周囲のがん細胞に取り込まれて抗腫瘍効果を発揮することを明らかにすることを目的とした。
 (実施例1:免疫組織化学染色法によるがん抗原の発現解析)
 パラフィン包埋組織の薄切は脱パラフィン処理、アルコールによる脱水を行った。Glypican-1に対する免疫組織化学染色は抗GPC-1抗体(Genetex:GTX104557)とChemMate Envision kit HRP 500T(Dako社:K5007)を用いて行った。
 (結果)
 膵臓がん組織におけるGPC1の発現を免疫組織化学染色法により確認した結果、GPC1は膵臓がん細胞のみならず、CAFにも高発現した(図1)。
 (実施例2:ADCの作製)
 抗GPC1モノクローナル抗体にバイスタンダー効果を有するペイロードであるMMAEをコンジュゲートしたGPC1-ADC(MMAE)がCAFに取り込まれ、ADCのリンカーが切断された後、MMAEが細胞外に遊離し、CAF周囲の膵臓がん細胞にMMAEが取り込まれて抗腫瘍効果を発揮できるのではないかと考えた(図2)。本実施例では、抗GPC1モノクローナル抗体(クローンK090-01a033)に図3に示すようにシステイン残基に、カテプシンBにより切断される切断型リンカーを介してバイスタンダー効果を有するペイロードであるMMAEをコンジュゲートした。GPC1-ADC(MMAE)をDARの平均値が4.0となるように作成した。具体的には、GPC1-ADC(MMAE)を以下のとおり作製した。
・50mlの2mg/ml BioLegendマウスIgG2aκアイソタイプコントロールMOPC173(Part#92394、lot#B232324)および50mlの2mg/mlマウス抗GPC-1クローン01a033(lot#170302)を取得した。
・最初に、スモールスケールでのコンジュゲートを行った。50mlのαGPC1を約20ml(5mg/ml)に濃縮し、50mlのMOPC173を約20ml(5mg/ml)に濃縮した。1つの条件に対して50μlの各mAbを用いて異なる還元条件を設定し、約4の最終薬物-抗体比(DAR)を達成した。mAbを、マレイミドカプロイル-バリン-シトルリン-p-アミノベンジルオキシカルボニル-モノメチルアウリスタチンE(MC-vc-PAB-MMAE)とコンジュゲートさせた。コンジュゲートは、最初に37℃でTCEPによりmAbの鎖間ジスルフィド結合を還元し、次いで薬物のマレイミド部分を還元されたシステインに結合させるマレイミド-システインベースの方法で行った。複合体のプロフィールを疎水性相互作用クロマトグラフィ(HIC)で分析した。
・次いで、スモールスケールにおいて決定されたラージスケールでのコンジュゲートに最適な条件を使用した。
・ADCをSephadex G50カラムで脱塩し、未反応の毒素を取り除き、次いで、PBSにバッファーを交換した。その後、ADCをろ過滅菌して滅菌PBSバッファーで1mg/mlに希釈し、1mlチューブに分画した後、4℃で保存した。
・A248nm:A280nmの比で決定された薬物-抗体比(DAR)は、MOPC173-CL-MMAEについては3.5、αGPC1-CL-MMAEについては3.7であった。
・サイズ排除クロマトグラフィ(SEC)および疎水性相互作用クロマトグラフィ(HIC)を使用して、コンジュゲートしていないmAbおよび2つのADCを分析した。MOPC173は、単量体で存在しており、αGPC1もほとんど単量体で存在しているようだったが、わずかな凝集ピークが観察された。両方のmAbは、MC-vc-PAB-MMAEとうまくコンジュゲートした。ADCのHICプロフィールは、良好なDAR=2、4、6,8のピークを示し、DARを決定するためのピーク積分法を可能にしている。例示的なADCの構造の概略図を図3に示す。
 (実施例3:GPC1-ADCと未標識抗体のFACSによる抗原親和性解析)
 抗体を用いたFACS解析を行うにあたり、Glypican-1陽性細胞として、ヒト膵臓がん細胞株(BxPC-3)細胞を用いた。抗GPC1モノクローナル抗体(クローンK090-01a033)およびGPC1-ADC(01a033)MMAEを、濃度を振って一次抗体として用い、2次抗体としてはFITC標識GoatAnti-Mouse IgG (H+L chain specific)(southern biothech社)を用い、FACS CantoII(BD社)を用いて測定し、測定データはBD FACSDiva software(BD社)を用いて解析した。
 (結果)
 その結果、GPC1-ADC(MMAE)は抗GPC1モノクローナル抗体(01a033)と同等のK値を示したため、ペイロードのコンジュゲートにより抗原親和性の大きな低下は起きていないことが確認された(図4)。
 (実施例4:GPC1-ADC(MMAE)の細胞内インターナライゼーションアッセイ)
 本実施例では、GPC1-ADC(MMAE)について、GPC1陽性BxPC-3細胞株を用いてインターナライズ(細胞内移行)活性を、FACSを用いて調べた。
 (材料および方法)
 実施例2において作製したGPC1-ADC(MMAE)で処理した細胞に対して抗GPC1 mAb(ビオチン標識02b006)とPE標識ストレプトアビジンで検出した。
 BxPC-3細胞株を10cmプレート1枚から0.02% EDTAを用いてはがし、回収した。細胞をRPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンに懸濁し、1.5mlチューブに、2.0x10細胞/0.9mlとして2本作成した。インターナライゼーション活性を下げるため、氷上で1時間静置した。1mg/mlのGPC1-ADC(01a033)MMAEを氷冷RPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンで24μg/ml(160nM)に希釈した。細胞懸濁液に上記ADCを100μl加え懸濁し、氷上で30分間静置し、細胞表面の抗原を染色した。30分後に、細胞懸濁液を100μlずつ6本ずつに分注した。細胞懸濁液は4度インキュベート群と、37度インキュベート群に分け12本とした。インキュベート時間は0h、1h、2h、3h、4h、6hとした。インキュベート時間に達した後、細胞を1500rpm、4度で5分間遠心上清除いた。100μlの氷冷PBS+0.2%BSAで洗浄し、遠心を行い細胞を洗浄した。洗浄操作を合計3回行った。1μg/mlの濃度のビオチン標識抗GPC1抗体02b006を50μL加え、懸濁した。氷上で30分間、細胞表面の抗原を染色した(インターナライズされなかったGPC1が染まる)。インキュベート時間に達した後、細胞を1500rpm、4度で5分間遠心上清除いた。100μlの氷冷PBS+0.2%BSAで洗浄し、遠心を行い細胞を洗浄した。洗浄操作を合計3回行った。Streptavidin-PE(PharMingen、#554061)を氷冷PBS+0.2%BSAで200倍希釈し、細胞に50μL加え、懸濁した。氷上で30分間、遮光下で反応させた。インキュベート時間に達した後、細胞を1500rpm、4度で5分間遠心上清除いた。100μlの氷冷PBS+0.2%BSAで洗浄し、遠心を行い細胞を洗浄した。洗浄操作を合計3回行った。氷冷PBS+0.2%BSAを150μL加え、FACS CantoIIで測定し、FlowJoTMソフトウェアで解析した。
 次に、GPC1-ADC(MMAE)について、GPC1陽性BxPC-3細胞株を用いてインターナライズした際のGPC1-ADC(MMAE)の細胞内の局在を、蛍光顕微鏡を用いて調べた。
 18mm microcover glass (matsunami)を入れた12ウェルプレート(Corning:3513)にBxPC-3細胞を7.5x104 cells/well(1ml/well)で播種し、37度、5%COインキュベーターで細胞を一晩培養した。
 翌日、培地を除去し、ウェルに1.0mlの氷冷RPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを加え、4度で1時間インキュベートし、細胞のインターナライズ活性を下げた。
 続いて、ウェル内部の培地を除去し、10 μg/mlの1次抗体(氷冷した抗GPC1抗体 clone 01a033およびGPC1-ADC(01a033)MMAE)を500 μl/well添加し、4度で15分インキュベートした。
 15分後に抗体溶液をアスピレートし、1.0mlの氷冷RPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを加え、細胞を洗浄した。この時点のサンプルを0時間サンプル(0 h)として回収した。
 インターナライズさせるサンプルについては、溶液をアスピレートし、1.0mlのRPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシン(37度で温めたもの)を加え37度、5%COインキュベーターで4時間培養し、この時点のサンプルを4時間サンプル(4h)として回収した。
 0時間および4時間の時点でのサンプルについては、ウェル内の培地を除去し、1ml 氷冷PBSで細胞を洗浄した。
 次に、1mlの100%(氷冷)メタノールを加え、-20度で15分インキュベートすることで細胞を固定した。固定した後、1mlのPBSで3回洗浄し、1%BSA, 0.3% Triton X-100/PBS(-)を1ml加える、1時間、室温でブロッキング処理をした。ブロッキング後、溶液を除去し、1%BSA,0.3% Triton X-100/PBS(-)で100倍希釈した1次抗体(Anti-CD107a mAb (CST社 型番#9091 LAMP1 (D2D11) XP(登録商標) Rabbit mAb))を0.5 ml/well添加し、4度で遮光して一晩反応させた。
 1次抗体反応を一晩行った後、1ml のPBSで3回洗浄し、1%BSA, 0.3% Triton X-100/PBS(-)で200倍希釈したdonkey-anti-Mouse IgG-Alexa488(Life technology社,A21202 lot1562298)と200倍希釈したdonkey-anti-Rabbit IgG-Alexa647(Life technology社,A31573, lot 1626613)を0.5ml/wellずつ添加し、室温、遮光して1時間反応させた。
 2次抗体反応後、1ml のPBSで3回洗浄し、細胞が接着したカバーガラスを取り出し、スライドガラス上で、Vectashield (vectashield H1200)で封入し、オールインワン蛍光顕微鏡(キーエンス社、BZ-X800)で観察した。
 (結果)
 BxPC3細胞を用いたFACS解析の結果、GPC1-ADC(MMAE)および抗GPC1モノクローナル抗体(01a033)はいずれもBxPC3細胞に添加後、2時間で60から70%以上のGPC1が細胞内に速やかにインターナライズしたことが確認された(図5)。本ADCが抗腫瘍効果を発揮するにはリソソーム内の酵素のカテプシンBによりADCのリンカー部分が切断される必要がある。そこで、細胞内局在について、リソソームマーカーであるCD107aとGPC1との局在を蛍光二重染色法で評価した結果、抗GPC1モノクローナル抗体(01a033)およびGPC1-ADC(MMAE)はいずれもCD107aと共局在したことから、抗GPC1モノクローナル抗体(01a033)およびGPC1-ADC(MMAE)はGPC1と結合した後、リソソームに移行することが確認された(図5)。これらのことから、抗GPC1モノクローナル抗体(例えば、01a033)は、細胞傷害性活性を有する薬剤(例えば、MMAE)のコンジュゲートにより、インターナライズ活性を失わなかったことが示された。
 (実施例5:抗GPC1抗体を用いたin vitro ADCアッセイ)
 (材料および方法)
 マウス抗ヒトGlypican-1 mAb(01a033)およびコントロールとして、マウスIgG2a(biolegend #400224)とmc-vc-PAB-MMAEとのコンジュゲートは、MORADEC社に依頼した。システイン残基に抗がん剤を切断リンカーを介してコンジュゲートした。DAR(薬物対抗体比)は以下のとおりであった:GPC1-CL-MMAE DAR=3.7、マウスIgG2a-CL-MMAE DAR=3.5。
 具体的には、以下のとおりアッセイを行った。
(1)細胞をThermo Fisher Scientific社の96ウェルホワイトプレート(型番136101)にまいた(細胞懸濁液90μL)。培地はRPMI1640+10%FBS+100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを使用した(BxPC-3細胞のみ培地はRPMI1640+10%FBS+1% GlutaMAXTM I +100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを用いた)。細胞をプレート中央の60ウェルにまき、培地100μLを外側の36ウェルに添加した。37℃、5%COインキュベーターで培養した。
(2)翌日、細胞にADC10μLを加えた(総量100μL)
(3)144時間培養後、CellTiter-Glo(登録商標)Luminescence Cell Viability Assay試薬(Promega社)を100μL/ウェル加え混合した。
(4)プレートリーダーで測定した。
 IC50値は以下の式から計算した(Hossain MM, Hosono-Fukao T, Tang R, Sugaya N, van Kuppevelt TH, Jenniskens GJ, Kimata K, Rosen SD, Uchimura K (2010) Direct detection of HSulf-1 and HSulf-2 activities on extracellular heparan sulphate and their inhibition by PI-88. Glycobiology 20(2): 175-186.)。
IC50=10^(Log[A][B]×(50C)/(DC)+Log[B])
A:50%を挟む高い濃度
B:50%を挟む低い濃度
C:Bでの阻害率
D:Aでの阻害率。
 (結果)
 GPC1陽性の食道がん細胞株としてTE8、TE14、膵臓がん細胞株のBxPC3、KP-2、PK-8および、CRISPR/Cas9システムによりGPC1をノックアウトしたTE8-GPC1-KO細胞、TE14-GPC1-KO細胞、BxPC3-GPC1-KO細胞を用いてin vitro ADCアッセイを行った。その結果、GPC1-ADC(MMAE)はGPC1陽性がん細胞株に対して薬効を発揮したが、GPC1陰性がん細胞株には薬効を示さなかったため、GPC1-ADC(MMAE)がGPC1発現依存的に薬効を示すことが確認された(図6)。
 (実施例6:GPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイ)
 24ウェルプレートにGPC1発現陽性の食道がん細胞株であるTE8細胞を3x10cells/wellで撒き、37度、5%COインキュベーターで細胞を一晩培養した。翌日、ADCを最終濃度が0,1,4,16nMとなるように添加し、37度、5%COインキュベーターで細胞を培養した。ADCを添加した翌日、ウェルから培養上清を回収し、1500rpm、4度で5分間遠心し、上清を回収した。
 GPC1の発現が陰性のTE8-GPC1 KO細胞をThermo Fisher Scientific社の96ウェルホワイトプレート(型番136101)にまいた。培地はRPMI1640+10%FBS+100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを使用した。細胞をプレート中央の60ウェルにまき、培地100μLを外側の36ウェルに添加した。37℃、5%COインキュベーターで培養し、翌日、細胞に培養上清を加えた。144時間培養後、CellTiter-Glo(登録商標)Luminescence Cell Viability Assay試薬(Promega社)を加え混合し、プレートリーダーで測定した。培養上清トランスファーアッセイの模式図を示す。
 (結果)
 control-ADC(MMAE)を用いて調製した培養上清と比較し、実施例2において作製したGPC1-ADC(MMAE)を用いて調製した培養上清ではTE8-GPC1 KO細胞に対して濃度依存的な増殖阻害活性が確認された。MMAEよりも細胞膜透過性が低いペイロードであるMMAFをコンジュゲートしたADCを用いた培養上清では細胞増殖阻害効果が見られなかった。これらの結果より、MMAEをコンジュゲートしたGPC1-ADCはバイスタンダー効果を有することがin vitroで確認された。
 (実施例7:膵臓がんPDX(PK645)のGPC1発現の確認およびGPC1-ADCのin vivoでの薬効試験)
 パラフィン包埋組織の薄切を脱パラフィン後、アルコールによる脱水を行った。GPC1に対する免疫組織化学染色法は抗GPC-1抗体(Genetex:GTX104557)とChemMate Envision kit HRP 500T(Dako社:K5007)を用いて行った。PK645におけるGPC1の発現は膵臓がん細胞で陰性、がん関連線維芽細胞(CAF)で陽性であることが確認された。
 次に、6週齢のNOG雌性マウスに膵臓がんPDXを皮下移植し、移植後腫瘍サイズが約100mmとなったところで、コントロールとしてPBS、実施例2において作製した抗GPC1-ADC(MMAF)(10mg/kg)、抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)および、MMAE(0.2mg/kg)の投与を開始した。投与を開始した日を0日目として、0日目、4日目、8日目および12日目に静脈内投与した。腫瘍体積および体重を0日目、4日目、8日目、12日目、16日目、20日目、24日目、28日目および32日目に計測した。
 (結果)
 複数系統の膵臓がんPDXマウスの腫瘍組織におけるGPC1の発現をスクリーニングした結果、PK645がCAFではGPC1陽性、膵臓がん細胞ではGPC1陰性であった。また、膵臓がんPDXマウス(PK645)の腫瘍組織における間質含有率は、約70%である。そこで、PK645を用いてGPC1-ADC(MMAE)の抗腫瘍効果をin vivoで評価した(図9)。その結果、PBS投与群やGPC1-ADC(MMAF)投与群と比較し、GPC1-ADC(MMAE)投与群において強力な抗腫瘍効果が認められた。このことからGPC1-ADCはCAFに取り込まれた後に細胞外にMMAEを遊離し、周囲のがん細胞にMMAEが取り込まれることで抗腫瘍効果を示すバイスタンダー効果による細胞増殖阻害活性が示唆された。また、PK645に対してGPC1-ADCは体重減少が認められなかった。10 mg/kgのGPC1-ADC(MMAE)のリンカーが血中で全て切断された場合を想定し、0.2mg/kgのMMAE単剤を全身投与しても薬効は認められなかったため、MMAEはADCによりCAFに輸送することが効果的な抗腫瘍効果の発揮のために重要であることが確認された。
 (実施例8:膵臓がんPDX(PK565)のGPC1発現の確認およびGPC1-ADCのin vivoでの薬効試験)
 パラフィン包埋組織の薄切を脱パラフィン後、アルコールによる脱水を行った。GPC1に対する免疫組織化学染色法は抗GPC-1抗体(Genetex:GTX104557)とChemMate Envision kit HRP 500T(Dako社:K5007)を用いて行った。PK565におけるGPC1の発現は膵臓がん細胞で陽性と陰性が混在するヘテロジニアスな腫瘍であることが確認された。
 次に、6週齢のNOG雌性マウスに膵臓がんPDXを皮下移植し、移植後腫瘍サイズが約100mm3となったところで、コントロールとしてPBS、コントロールADC(10mg/kg)および、実施例2において作製した抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)の投与を開始した。投与を開始した日を0日目として、0日目、4日目、8日目および12日目に静脈内投与した。腫瘍体積および体重を0日目、4日目、8日目、12日目、16日目、20日目、24日目および28日目に計測した。
 (結果)
 さらに、GPC1がヘテロジニアスに発現するPK565を用いた薬効試験において薬剤を4日毎に合計4回静脈内投与した結果、GPC1-ADC(MMAE)投与群ではcontrol-ADC(MMAE)投与群と比較して強力な抗腫瘍効果が認められた(図10)。この際、体重減少など認められなかったため、GPC1-ADC(MMAE)は毒性が低く、安全性が高いことが示唆される。GPC1がヘテロジニアスに発現するPK565は、間質含有率が約0%であるが、MMAEのバイスタンダー効果により、GPC-1陽性がん細胞の周辺のGPC-1陰性がん細胞にも影響し、強力な抗腫瘍効果が認められたと考えられる。
 (実施例9:食道がんPDX(ESCC14)のGPC1発現の確認およびGPC1-ADCのin vivoでの薬効試験)
 パラフィン包埋組織の薄切を脱パラフィン後、アルコールによる脱水を行った。GPC1に対する免疫組織化学染色法は抗GPC-1抗体(Genetex:GTX104557)とChemMate Envision kit HRP 500T(Dako社:K5007)を用いて行った。ESCC14におけるGPC1の発現は食道がん細胞で均一に高発現するホモジニアスな腫瘍であることが確認された。
 次に6週齢のNOG雌性マウスに食道がんPDXを皮下移植し、移植後腫瘍サイズが約100mm3となったところで、コントロールとしてPBS、実施例2において作製した抗GPC1-ADC(MMAE)(3mg/kg)および、抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)の投与を開始した。投与を開始した日を0日目として、0日目、4日目、8日目および12日目に静脈内投与した。腫瘍体積および体重を0日目、4日目、8日目、12日目、16日目、20日目、24日目、28日目および32日目に計測した。
 (結果)
 食道がんPDXマウス(ESCC14)の腫瘍組織における間質含有率は、約40%である。食道がんPDXマウスのESCC14に薬剤を4日毎に合計4回静脈内投与した結果(図11)、GPC1-ADC(MMAE)は濃度依存的な高い抗腫瘍効果を発揮した。この際、体重減少など認められなかったため、GPC1-ADC(MMAE)は毒性が低く、安全性が高いことが示唆される。
 (実施例10:食道がんPDX(ESCC2)のGPC1発現の確認およびGPC1-ADCのin vivoでの薬効試験)
 パラフィン包埋組織の薄切を脱パラフィン後、アルコールによる脱水を行った。GPC1に対する免疫組織化学染色法は抗GPC-1抗体(Genetex:GTX104557)とChemMate Envision kit HRP 500T(Dako社:K5007)を用いて行った。ESCC2におけるGPC1の発現は食道がん細胞で均一に高発現するホモジニアスな腫瘍であることが確認された。
 次に、6週齢のNOG雌性マウスに食道がんPDXを皮下移植し、移植後腫瘍サイズが約100mm3となったところで、コントロールとしてPBS、実施例2において作製した抗GPC1-ADC(MMAE)(1mg/kg)、抗GPC1-ADC(MMAE)(3mg/kg)および、抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)の投与を開始した。投与を開始した日を0日目として、0日目、7日目、14日目に静脈内投与した。腫瘍体積および体重を0日目、7日目、14日目、21日目、28日目、35日目および42日目に計測した。
 (結果)
 食道がんPDXマウス(ESCC2)の腫瘍組織における間質含有率は、約50%である。GPC1をホモジニアスに発現する食道がんPDXマウスのESCC2に薬剤を1週間毎に合計3回静脈内投与した結果(図12)、GPC1-ADC(MMAE)は濃度依存的な高い抗腫瘍効果を発揮したこの際、体重減少など認められなかったため、GPC1-ADC(MMAE)は特徴的な毒性を示さなかった。
 これらの結果は、膵臓がんなど間質が豊富な難治性がんに対して、GPC1を標的としたADCはCAFを介して抗がん剤をがん細胞に輸送することため、有効性と安全性が高い画期的な治療薬の開発につながることを示唆している。
 (実施例11:膵臓がんPDX(PK645)の腫瘍組織からのCAF(PK645-CAF)の単離)
 PK645 PDXの腫瘍組織からgentleMACSTM tissue dissociator(Miltenyi Biotec, CA)を用いてCAFの単離を行った。得られたPK645-CAF細胞に対して抗GPC1モノクローナル抗体(clone 01a033)を用いてFACSを行った結果、GPC1の発現が陽性であることが確認された(図13左下)。さらに、CAFマーカーであるα-SMAに対する抗体を用いて免疫蛍光細胞染色を行った結果、PK645-CAFはα-SMAの発現が陽性であることが確認された(図13右下)。
 (実施例12:GPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイ)
 (材料および方法)
 トランスファーアッセイの概要を図13に示す。24ウェルプレートにGPC1発現陽性のPK645-CAFを1x10cells/wellで撒き、37度、5%COインキュベーターで細胞を一晩培養した。翌日、実施例2(抗体は01a033、薬剤はMMAEおよびMMAFの2種類を使用)に従って作製したADCを最終濃度が0,16,32,64nMとなるように添加し、37度、5%COインキュベーターで細胞を培養した。ADC添加したあと、72時間後に、ウェルから培養上清を回収し、1500rpm、4度で5分間遠心し、上清を回収した。
 GPC1の発現が陰性の膵臓がん細胞株であるBxPC-3-GPC1 KO細胞をThermo Fisher Scientific社の96ウェルホワイトプレート(型番136101)にまいた。培地はRPMI1640+10%FBS+100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを使用した。細胞をプレート中央の60ウェルにまき、培地100μLを外側の36ウェルに添加した。37℃、5%COインキュベーターで培養し、翌日、細胞に培養上清を加えた。144時間培養後、CellTiter-Glo(登録商標)Luminescence Cell Viability Assay試薬(Promega社)を加え混合し、プレートリーダーで測定した。
 (結果)
 その結果、GPC1-ADC(MMAE)を添加した培養上清を添加すると、BxPC3-GPC1 KO細胞の増殖が阻害された(図14)。一方で、バイスタンダー効果を有さないペイロードであるMMAFをコンジュゲートしたGPC1-ADC(MMAF)を添加した培養上清を添加してもBxPC3-GPC1 KO細胞の増殖が阻害されなかった(図14)。
 (実施例13:膵臓がんPDX(PK645)に対するGPC1-ADC(MMAE)の作用機序の解析)
 (材料および方法)
 6週齢のNOG雌性マウスに膵臓がんPDX(PK645)を皮下移植し、移植後腫瘍サイズが約100mmとなったところで、PBS、control-ADC(MMAE)(10mg/kg)、実施例2において作製した抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)を投与し、24時間後に腫瘍を摘出した。摘出した組織は10%中性ホルマリン緩衝液で固定した後、パラフィン包埋組織を作成し、薄切を調製した。それぞれの薄切について(1)がん細胞におけるアポトーシスの有無を確認するために抗EpCAM抗体と抗cleaved caspase-3抗体を用いた蛍光2重染色、および、(2)CAFにおけるアポトーシスの有無を確認するために抗alpha-SMA抗体と抗cleaved caspase-3抗体を用いた蛍光2重染色実施した。
 (結果)
 その結果、PBS、および、control-ADC(MMAE)(10mg/kg)投与群と比較して抗GPC1-ADC(MMAE)(10mg/kg)投与群においてはがん細胞にアポトーシスが検出されたが、CAFにおいてはアポトーシスが検出されなかった(図15)。
 (実施例14:MDR-1発現解析)
 MMAEは薬剤排出トランスポーターであるMDR-1の基質として認識されることがしられている。そこで、CAFにおいてMDR-1の発現をウェスタンブロット法で確認することとした。その結果、膵臓がん細胞株であるBxPC-3、KP-2、PK-8細胞と比較してPK645-CAFではMDR-1が高発現していることが確認された(図16)。
 (実施例15:MDR-1阻害剤を用いたIC50測定)
 PK645-CAFにおいて、MMAEが細胞外に排出されることにMDR-1が関与しているかどうかを調べるために、MDR-1に対する阻害剤であるTariquidar添加の有無におけるMMAEおよびMMAFのIC50を測定した。その結果、PK645-CAFにおけるMMAEのIC50値は50nM Tariquidarの非存在下では3.38nMであったが、50nM Tariquidarの存在下では0.464nMであった。一方で、MDR-1の基質とならないMMAFについては、Tariquidarの有無によるMMAFのIC50に大きな変化は認められなかった。このように、MDR-1を阻害することでPK645FbのMMAE感受性が7.28倍向上し、他方で、MDR-1の基質にならないMMAFについて感受性の向上は1.36倍であった。したがって、ADCにおいて、MDR-1の基質となる細胞傷害性薬剤を使用することが好ましい。
 (実施例16:MDR-1阻害剤を用いたGPC1-ADCの培養上清トランスファーアッセイ)
 (材料および方法)
 24ウェルプレートにGPC1発現陽性のPK645-CAFを1x10cells/wellで撒き、37度、5%COインキュベーターで細胞を一晩培養した。翌日、ADCを最終濃度が0,16,32,64nMとなるように添加し、37度、5%COインキュベーターで細胞を培養した。このとき、50nM Tariquidarを含む条件と含まない条件の2通りで培養上清の調製を行った。ADC添加したあと、72時間後に、ウェルから培養上清を回収し、1500rpm、4度で5分間遠心し、上清を回収した。
 GPC1の発現が陰性の膵臓がん細胞株であるBxPC-3-GPC1 KO細胞をThermo Fisher Scientific社の96ウェルホワイトプレート(型番136101)にまいた。培地はRPMI1640+10%FBS+100U/mlペニシリン+100μg/mlストレプトマイシンを使用した。細胞をプレート中央の60ウェルにまき、培地100μLを外側の36ウェルに添加した。37℃、5%COインキュベーターで培養し、翌日、細胞に培養上清を加えた。144時間培養後、CellTiter-Glo(登録商標)Luminescence Cell Viability Assay試薬(Promega社)を加え混合し、プレートリーダーで測定した。
 (結果)
 その結果、50nM Tariquidarを含まない条件でPK645-CAF にGPC1-ADC(MMAE)を添加した培養上清を添加すると、BxPC3-GPC1 KO細胞の増殖が阻害された。一方で、50nM Tariquidarを含む条件でPK645-CAFにGPC1-ADC(MMAE)を添加した培養上清を添加してもBxPC3-GPC1 KO細胞の増殖が阻害されなかった(図18)。これらの結果、PK645-CAFはMDR-1を介してMMAEを細胞外に効率よく排出し、このMMAEががん細胞の増殖を阻害することが確認された。
 以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本願は、2020年6月11日に出願された日本国特許出願第2020-101859号の優先権の利益を請求し、その内容は参照によって本明細書に組み込まれる。
 がんの治療または予防のための医薬が提供された。このような技術に基づく産業(製薬等)において利用可能な技術が提供される。
配列番号1:ヒトGlypican-1核酸配列(NM_002081.2)
配列番号2:ヒトGlypican-1アミノ酸配列(P35052)
配列番号3:マウスGlypican-1核酸配列(NM_016696.4)
配列番号4:マウスGlypican-1アミノ酸配列(Q9QZF2)
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配列番号204:クローン18の軽鎖のアミノ酸配列

Claims (20)

  1.  がん関連線維芽細胞(CAF)を有するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物。
  2.  前記がんが間質を有する、請求項1に記載の組成物。
  3.  前記がんにおける前記間質の含有率が少なくとも約30%である、請求項1または2に記載の組成物。
  4.  前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記細胞傷害性活性を有する薬剤とリンカーを介して作動可能に連結されている、請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物。
  5.  前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、DM1、DM4、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)、およびトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
  6.  前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、細胞膜透過性である、請求項1~5のいずれか一項に記載の組成物。
  7.  前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAE、PBD、Eribulin、SN-38、Dxd、およびDM4から選択される、請求項1~6のいずれか一項に記載の組成物。
  8.  前記細胞傷害性活性を有する薬剤が、薬物排出トランスポーターの基質となる、請求項1~7のいずれか一項に記載の組成物。
  9.  前記薬物排出トランスポーターがMDR-1である、請求項8に記載の組成物。
  10.  前記薬物排出トランスポーターの基質となる細胞傷害性活性を有する薬剤が、MMAEである、請求項8または9に記載の組成物。
  11.  前記リンカーが、酵素切断型リンカー、酸不安定性リンカー、およびジスルフィドリンカーからなる群から選択される、請求項4に記載の組成物。
  12.  前記リンカーが、カテプシンBにより切断される切断型リンカーである、請求項11に記載の組成物。
  13.  前記CAFは、Glypican-1を発現する、請求項1~12のいずれか一項に記載の組成物。
  14.  前記がんが、食道がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、子宮平滑筋肉腫、前立腺がん、スキルス胃がん、胆管がん、および大腸がんまたはこれらの任意の組合せから選択される、請求項1~13のいずれか一項に記載の組成物。
  15.  前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、インターナライズ活性を有する、請求項1~14のいずれか一項に記載の組成物。
  16.  前記抗体が、以下:
     (a)配列番号2の33~61位、
     (b)配列番号2の339~358位および388~421位、
     (c)配列番号2の33~61位、339~358位、および388~42、または
     (d)配列番号2の33~61位、339~358位、388~421位、および430~530位、
    のエピトープに結合する、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
  17.  前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号2の339~358位および388~421位のエピトープに結合する、請求項1~16のいずれか一項に記載の組成物。
  18.  前記抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントが、以下
     (a)それぞれ配列番号53、54および55に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号56、57および58に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (b)それぞれ配列番号5、6および7に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号8、9および10に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (c)それぞれ配列番号11、12および13に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号14、15および16に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (d)それぞれ配列番号17、18および19に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号20、21および22に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (e)それぞれ配列番号23、24および25に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号26、27および28に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (f)それぞれ配列番号29、30および31に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号32、33および34に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (g)それぞれ配列番号35、36および37に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号38、39および40に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (h)それぞれ配列番号41、42および43に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号44、45および46に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (i)それぞれ配列番号47、48および49に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号50、51および52に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (j)それぞれ配列番号59、60および61に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号62、63および64に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (k)それぞれ配列番号65、66および67に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号68、69および70に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (l)それぞれ配列番号71、72および73に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号74、75および76に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (m)それぞれ配列番号77、78および79に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号80、81および82に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (n)それぞれ配列番号83、84および85に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号86、87および88に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (o)それぞれ配列番号89、90および91に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号92、93および94に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (p)それぞれ配列番号95、96および97に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号98、99および100に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (q)それぞれ配列番号101、102および103に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号104、105および106に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、
     (r)それぞれ配列番号107、108および109に示される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびにそれぞれ配列番号110、111および112に示される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3のアミノ酸配列を含む抗体、ならびに
     (s)CDR部分に少なくとも1個の置換、付加もしくは欠失を含む(a)~(r)から選択される抗体の変異体からなる群から選択される、
    請求項1~17のいずれか一項に記載の組成物。
  19.  抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、がんを処置するための組成物であって、該がんががん関連線維芽細胞(CAF)を有するかどうかを検査し、CAFがGPC-1を有意に発現している場合に、該組成物が投与されることを特徴とする、組成物。
  20.  GPC-1をヘテロジニアスに発現するがんを処置するための組成物であって、該組成物は、抗GPC-1抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性活性を有する薬剤との複合体を含む、組成物。
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