WO2021206498A1 - 항코로나바이러스능을 가지는 플라보노이드 배당체 - Google Patents

항코로나바이러스능을 가지는 플라보노이드 배당체 Download PDF

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WO2021206498A1
WO2021206498A1 PCT/KR2021/004475 KR2021004475W WO2021206498A1 WO 2021206498 A1 WO2021206498 A1 WO 2021206498A1 KR 2021004475 W KR2021004475 W KR 2021004475W WO 2021206498 A1 WO2021206498 A1 WO 2021206498A1
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WO
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formula
coronavirus
compound represented
composition
present
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PCT/KR2021/004475
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권두한
최화정
강세찬
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권두한
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    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system

Definitions

  • the present invention relates to the anti-coronavirus use of a flavonoid glycoside compound, and specifically, the present invention relates to an antiviral composition for coronavirus comprising a combination of three flavonoid glycoside compounds as an active ingredient;
  • Respiratory disease which started in Wuhan, China in 2019, is a disease caused by coronavirus infection, showing severe respiratory symptoms, leading to death of a significant number of infected patients.
  • Remdisivir ( GS-5734, remdesivir) and favipiravir are used for the treatment of coronavirus infection, but they are ineffective and have a high incidence of variant viruses due to the nature of the nucleic acid analog antivirals [Wang] M, Cao R, Koh Mun L, Yang X, Liu j, Xu M, Shi Z, Hu Z, Zhong W, Xiao G. 2020. Remdesvir and choloquinie effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro. Cell Research 30: 269-271].
  • antiviral agents used for coronavirus infection are substances with RNA polymerase inhibitory activity.
  • ribavirin and remdisivir are substances with RNA polymerase inhibitory activity.
  • a mouse hepatitis virus a type of coronavirus with resistance to remdisivir, has been found, and the existing antiviral agents have no effect.
  • an antiviral composition for coronavirus using a plant extract is known (Korean Patent No. 10-0697309), but the anti-corona activity of the flavonoid glycoside mixture of the present invention has not yet been studied.
  • One object of the present invention is to provide an antiviral composition for coronavirus comprising a combination of three types of flavonoid glycoside compounds as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating a coronavirus infection disease comprising a combination of three types of flavonoid glycoside compounds or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a health functional food composition for the prevention or improvement of coronavirus infection disease comprising a combination of three kinds of flavonoid glycoside compounds as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a feed composition for the prevention or improvement of a coronavirus infection disease comprising a combination of three kinds of flavonoid glycoside compounds as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for the prevention or improvement of a coronavirus infection disease comprising a combination of three kinds of flavonoid glycoside compounds as an active ingredient.
  • composition comprising the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3 as an active ingredient of the present invention exhibits an infection inhibitory effect on coronavirus, the prevention or treatment of the viral disease It can be used to develop antiviral drugs for
  • Figure 2 is a result of comparing the anti-coronavirus activity of a mixture of three flavonoid glycosides and ribavirin.
  • One aspect of the present invention for achieving the above object is a coronavirus comprising a compound represented by the following formula 1, a compound represented by formula 2, and a compound represented by formula 3 (three flavonoid glycoside compounds) as an active ingredient. It provides an antiviral composition for antiviral.
  • the compound having the structure of Chemical Formula 1 is a flavonoid glycoside compound having a molecular weight of 448.38 and Chemical Formula C 21 H 20 O 11 as Quercetin 3-rhamnoside (Quercitrin).
  • the compound having the structure of Chemical Formula 2 is a flavonoid glycoside compound having a molecular weight of 464.38 and Chemical Formula C 21 H 20 O 12 as Quercetin 3-glucoside (Isoquercetin).
  • the compound having the structure of Formula 3 is a flavonoid glycoside compound having a molecular weight of 464.38 and Formula C 21 H 20 O 12 as Quercetin 3-galactoside (Hyperoside).
  • the compounds represented by Formulas 1 to 3 of the present invention for example, the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3
  • the composition comprising the compound represented by Formula 3 may be in the range expected by some skilled in the art from these compounds. Derivatives may be included, and are included without limitation as long as they have the same effect in the present invention. These compounds may be obtained from an extract containing them, but are not limited thereto, and may be synthesized and used by a known method.
  • the extract may be, for example, an extract or a fraction of Eoseongcho, as long as it is a plant extract or fraction containing the compound, but is not limited thereto.
  • the compounds represented by the terms Formulas 1 to 3 may be used in combination with three types of flavonoid glycoside compounds, a mixture of flavonoid glycosides, a mixture of three types of flavonoid glycosides, and a mixture of three types.
  • the content ratio of each compound in the composition comprising the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3 of the present invention may be 1 to 2: 1: 1 to 5, preferably may be 1:1:1, but is not limited thereto.
  • the compounds represented by Chemical Formula 1, Chemical Formula 2 and Chemical Formula 3 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is used.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid and aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • non-toxic organic acids such as dioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, and organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, and fumaric acid.
  • Such pharmaceutically non-toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, ioda.
  • the acid addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method, for example, by dissolving methylinderone of Formula 1 in an organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, or the like, and adding an organic or inorganic acid to the precipitate. It can be prepared by filtration and drying, or by drying or crystallization in an organic solvent after distilling the solvent and excess acid under reduced pressure.
  • an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, or the like
  • a pharmaceutically acceptable metal salt may be prepared using a base.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the undissolved compound salt, and evaporating and drying the filtrate.
  • it is pharmaceutically suitable to prepare a sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • the corresponding silver salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
  • the present invention includes all possible solvates, hydrates, stereoisomers, etc. that can be prepared therefrom, as well as methylinderone represented by Formula 1 and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • coronavirus is a virus belonging to the family Coronaviridae, and in one embodiment of the present invention, a composition comprising a combination of compounds represented by Chemical Formulas 1, 2 and 3 It was confirmed that there is a coronavirus inhibitory activity (Table 1 and Table 2).
  • the coronavirus is swine epidemic diarrhea virus (PEDV), swine infectious gastroenteritis virus (TGEV), porcine respiratory coronavirus (PRCV), Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV), severe It may be acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) and novel coronavirus (CoVID-19), but is not limited thereto.
  • PEDV swine epidemic diarrhea virus
  • TGEV swine infectious gastroenteritis virus
  • PRCV porcine respiratory coronavirus
  • MERS-CoV Middle East respiratory syndrome coronavirus
  • severe It may be acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) and novel coronavirus (CoVID-19), but is not limited thereto.
  • the inhibitory activity effect of the antiviral composition on porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), porcine infectious gastroenteritis virus (TGEV) and porcine respiratory coronavirus (PRCV) was confirmed (Example 2 and 3).
  • the antiviral composition comprising a combination of three types of compound 1, compound 2 and compound 3 has a more significant anti-corona activity than each of the compounds or a combination of two types of compounds. did. In addition, it was confirmed that it has a superior effect than the conventional anti-coronavirus agent as a positive control.
  • Another aspect of the present invention is a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3; Or it provides a pharmaceutical composition for preventing or treating a coronavirus infection disease comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • coronavirus infectious disease refers to a disease caused by infection with a coronavirus.
  • infection refers to a state in which a pathogenic microorganism invades the body of a host organism and develops and proliferates.
  • the coronavirus infection disease may be a cold, cough, sputum, bronchitis or severe respiratory disease in humans, and hepatitis, encephalitis, neurological disease, severe respiratory disease, severe diarrhea or It may be a respiratory disease, peritonitis, etc., but is not limited thereto.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the onset of an infectious disease caused by a coronavirus by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • treatment refers to any action in which the symptoms of a suspected and infected individual of a coronavirus infection are improved or beneficially changed by administration of the pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent commonly used in the preparation of the pharmaceutical composition, and the carrier may include a non-naturally occurring carrier.
  • the carrier, excipient and diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil may be used, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition can be prepared as tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-drying agents and suppositories according to conventional methods, respectively. It may have any one formulation selected from the group consisting of, and may be oral or parenteral various formulations. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients, such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Tablets, pills, powders, granules, capsules, etc.
  • the solid preparation may include at least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, Gelatin or the like may be used.
  • excipients for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, Gelatin or the like may be used.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc may be used.
  • liquid formulations for oral administration suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, etc. may be used.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, may be used.
  • a sterile aqueous solution, a non-aqueous solution, a suspension, an emulsion, a freeze-dried formulation, or a suppository may be used as a formulation for parenteral administration.
  • Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • injectable esters such as ethyl oleate.
  • witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, etc. may be used, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains, with respect to the total weight of the composition, the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3 at 0.1 to 1000ug/ml, specifically 0.1 to 200ug/ml, It may contain 0.1 ⁇ 100ug/ml, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3 in an amount of 20-200 mg, specifically 70-100 mg, but is not limited thereto.
  • a composition (a mixture of three) comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 is administered to a coronavirus-infected mouse model, and its weight loss inhibitory effect And by confirming the effect of reducing the increased blood cells at the location of the bubbles in the lung tissue due to the coronavirus infection, it was confirmed that it can be used for the prevention or treatment of coronavirus-infected diseases ( FIGS. 3 and 4 ).
  • Another aspect of the present invention provides a method for preventing or treating a coronavirus infection, comprising administering the pharmaceutical composition to an individual.
  • the term “administration” refers to introducing the pharmaceutical composition to a subject by an appropriate method.
  • the term "individual” refers to all animals, such as rats, mice, livestock, including humans, that have or can develop a coronavirus-infected disease.
  • the animal may be a mammal, such as a cow, a horse, a sheep, a pig, a goat, a camel, an antelope, a dog, or a cat, in need of prevention or treatment of similar symptoms as well as humans, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the term "pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type and severity of the subject, age, sex, activity of the drug, Sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, factors including concomitant drugs, and other factors well known in the medical field.
  • the pharmaceutical composition may be administered as an individual therapeutic agent or may be administered in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. In addition, single or multiple administration may be used. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally (eg, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or locally applied) according to a desired method, and the dosage may vary depending on the condition and weight of the patient, and the disease. Although it varies depending on the degree, drug form, administration route and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art. As a specific example, the pharmaceutical composition may be administered in divided doses from once to several times a day, but the preferred dosage is appropriate by those skilled in the art according to the individual's condition and weight, the degree of disease, drug form, administration route and period. can be chosen
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered within the range of 20-200mg per day for adults, the compound represented by the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, and the compound represented by Formula 3, more specifically It may be administered within the range of 70-100 mg at a time, but is not limited thereto.
  • Another aspect of the present invention provides a health functional food composition for the prevention or improvement of a coronavirus infection disease comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 as an active ingredient do.
  • the food composition of the present invention can be ingested on a daily basis, and unlike general drugs, since compounds 1 to 3, which are active ingredients extracted from natural products, are used as raw materials, there is no side effect that may occur during long-term administration of the drug, It can be very usefully used for the purpose of preventing or improving coronavirus-infected diseases.
  • the term “improvement” refers to any action that reduces a parameter related to a condition to be treated by ingestion of the food composition, for example, the severity of symptoms.
  • the term "food” refers to meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages , vitamin complexes, health functional foods, and health foods, and includes all foods in the ordinary sense.
  • health functional food is the same term as food for special health use (FoSHU), and in addition to nutrition, it is processed to efficiently exhibit bioregulatory functions. Foods that are highly effective.
  • 'function (sex)' refers to obtaining useful effects for health purposes, such as regulating nutrients or physiological actions with respect to the structure and function of the human body.
  • the health food means a food having an active health maintenance or promotion effect compared to general food
  • the health supplement food means a food for the purpose of health supplementation.
  • the terms health functional food, health food, and health supplement may be used interchangeably.
  • the health functional food is a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 added to food materials, such as beverages, teas, spices, gums, and confectionery, or encapsulated or powdered. , suspension, etc., which means that certain health effects are obtained when ingested.
  • the health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and can be prepared by adding raw materials and components commonly added in the art.
  • the health functional food composition may be prepared without limitation in various types of formulations as long as the formulations are recognized as food.
  • the health functional food composition may further include a physiologically acceptable carrier, the type of carrier is not particularly limited and any carrier commonly used in the art may be used.
  • the health functional food composition may include additional ingredients that are commonly used in food compositions to improve odor, taste, and vision.
  • vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, pantothenic acid, and the like may be included.
  • minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu), chromium (Cr); and amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, and valine.
  • the health functional food composition includes a preservative (potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dehydroacetate, etc.), a disinfectant (bleaching powder and high bleaching powder, sodium hypochlorite, etc.), an antioxidant (butylhydroxyanisole (BHA), Butylhydroxytoluene (BHT), etc.), coloring agents (tar pigments, etc.), coloring agents (sodium nitrite, sodium nitrite, etc.), bleach (sodium sulfite), seasonings (MSG sodium glutamate, etc.), sweeteners (dulcin, cyclmate) , saccharin, sodium, etc.), flavorings (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, D-potassium hydrogen tartrate, etc.), strengthening agents, emulsifiers, thickeners (flavors), film agents, gum base agents, foam inhibitors, solvents, improving agents, etc. of food additives.
  • the additive may be selected according to
  • Another aspect of the present invention provides a feed composition for preventing or improving a coronavirus infection disease comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 as an active ingredient.
  • feed additive refers to a substance added in a trace amount to a feed for nutritional or specific purposes.
  • an animal is a concept including livestock and pets.
  • the feed additive of the present invention may further include a binder, an emulsifier, a preservative, etc. added to prevent quality deterioration, and an amino acid agent, a vitamin agent, an enzyme agent, a probiotic agent, a flavor agent, and a non-protein nitrogen added to increase the utility. It may further include a compound, a silicate agent, a buffer, a colorant, an extractant, an oligosaccharide, and the like, and may further include a feed mixture, etc., but is not limited thereto.
  • Another aspect for the purpose of the present invention is to provide a quasi-drug for the prevention or improvement of a coronavirus infection disease comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 as an active ingredient do.
  • quadsi-drug used in the present invention refers to articles that are not instruments, machines, or devices, among articles used for the purpose of diagnosing, treating, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals, and those that are not pharmacologically related to the structure and function of humans or animals. Articles used for the purpose of influencing, other than those that are not instruments, machines or devices.
  • the quasi-drug composition may have an effect of preventing or improving cardiovascular disease, but is not limited thereto.
  • the quasi-drug composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent if necessary in addition to the above components.
  • a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent is not limited as long as it does not impair the effects of the present invention, and includes, for example, fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, lubricants, sweeteners, fragrances, preservatives, etc. may include
  • Another aspect for the purpose of the present invention relates to the antiviral use of a composition comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 as an active ingredient against coronavirus. .
  • Another aspect for the purpose of the present invention is for the prevention or treatment of a coronavirus-infected disease of a composition comprising a compound represented by Formula 1, a compound represented by Formula 2, and a compound represented by Formula 3 as an active ingredient It's about use.
  • quercetin 3-galactoside (Catalog No. 83388), quercetin 3-glucoside (Catalog No. 16654), quercetin 3-rhamnoside from Sigma-Aldrich. (Catalog No. 00740580-25MG) was purchased and used.
  • ribavirin (R9644), ramivudin (L1295), and zidovudine (Catalog No. PHR1292-1G) used as antiviral agents were purchased and used in the antiviral activity test against coronavirus.
  • quercetin 3-galactoside quercetin 3-glucoside
  • quercetin 3-rhamnoside was dissolved in a dimethylsulfuroxide solution at a concentration of 10 mg/ml, respectively, and the mixture of the three types contained the flavonoid compound in the same amount was mixed to obtain a concentration of 10 mg/ml of the final mixture.
  • the present inventors performed the following experiment using Vero cells, a monkey kidney cell line.
  • the virus activity inhibitory effect on PEDV (strain CV777), a kind of coronavirus, was measured based on the method applied for a patent by Kwon Doo-han et al. (Korean Patent Registration No.: 0682069).
  • Vero cells were cultured in each well of a 96-well microplate until the bottom was completely covered with cells. After removing the existing culture medium and washing each well twice with phosphate buffer, a virus solution prepared at a concentration of TCID50 was added to each well, and a compound to check antiviral activity was added.
  • quercetin 3-rhamnoside (A), quercetin 3-glucoside (B), and quercetin 3-galactoside (C) were each used as Comparative Groups 1 to 3 for three compounds, and a combination of these two compounds (quercetin 3-rhamnoside and quercetin 3-glucoside (A + B); quercetin 3-rhamnoside and quercetin 3-galactoside (A + C); and quercetin 3-glucoside and quercetin 3-galactoside (B +) C)) was used as Comparative Groups 4 to 6, respectively.
  • the three types of mixtures of the present invention were used as an experimental group, and ribavirin (R9644), known as an antiviral agent purchased from Sigma, was used as a positive control group.
  • each solution was administered to each well at a concentration of 0.1 to 100 ⁇ g/ml, and cultured for 48 hours. judged. After adding 100 ⁇ l of 70% acetone to each well, it was left at -20 ° C for 1 hour, dried in a dryer, and a 0.4% (w/v) SRB (sulforhodamine B) solution dissolved in 1% (v/v) acetic acid. After adding 100 ⁇ l of staining for 30 minutes, the SRB staining solution not bound to the cells was washed 4 times with 1% (v/v) acetic acid and dried again.
  • SRB sulforhodamine B
  • SI is an index indicating the safety and efficacy of a drug, and the higher the value, the better the drug is evaluated.
  • the remark column shows the percentage comparison value expressed based on the SI value of quercetin 3-galactoside among the three types of flavonoids.
  • Comparative Example 5 which is a mixture of two compounds, only about 136%, but three kinds of mixtures In the case of 4,436%, it was confirmed that the effect was superior.
  • the antiviral activity of the three types of flavonoid glycoside compounds against coronavirus was compared with ribavirin, which is another anti-coronavirus, and the efficacy by concentration of 0.01, 0.1, 1, 10, 100 ⁇ g/ml three times. and the average value and error are presented in FIG. 2 .
  • the three types of flavonoid glycoside compounds exhibited an anti-coronavirus activity of 50% or more in all of the tested concentration ranges of 0.01, 0.1, 1, 10, and 100 ⁇ g/ml, and as the concentration increased, the anti-coronavirus activity also increased. did. In contrast, it was confirmed that ribavirin did not exhibit antiviral activity of 50% or less except for 100 ⁇ g/ml.
  • the mixture of three types of flavonoid glycosides of the present application has excellent effects compared to the existing therapeutic agent, ribavirin, and exhibits a significant effect compared to a single flavonoid glycoside.
  • the anti-corona activity was compared with the conventional antiviral agents acycloguanine, azidothymidine, lamivudine and ribavirin, and the results are shown in Table 2.
  • Example 4 Confirmation of antiviral activity of a mixture of three types of flavonoid glycosides in a coronavirus infection model
  • the following experiment was performed to confirm the anti-coronavirus activity in animals of the three mixtures of the present invention.
  • the murine coronavirus (ATCC®VR-1410) purchased from ATCC in the United States in Vero cells, an amount of 100TCID50 was injected into the nose of the mice to induce infection of the murine coronavirus.
  • rat coronavirus infection replication in airway and alveolar epithelial cells and the innate immune response. J. Gen. Virol. 2005. 90: 2956-2964
  • rat coronavirus is a severe respiratory disease in mice. is a virus that causes
  • the experiment consisted of 3 mice in each group, and was divided into an uninfected group, an infected group but not administered with a drug, a group administered with a single flavonoid glycoside compound to the infected group, and a group administered with a mixture of three flavonoid glycosides.
  • mice used in the experiment were measured daily, and the weight of each individual in the non-infected group, the infected group but not administered with the drug, the group administered with a single drug flavonoid glycoside to the infected group, and the group administered with a three-type flavonoid glycoside mixture drug was measured daily, and the change in daily body weight of each group is presented in FIG. 3 .
  • the drug administration group was orally administered with 100 ⁇ g daily.
  • the non-infected group continued to gain weight during the experiment, resulting in a final increase of 6 g.
  • the quercetin 3-glucoside administration group decreased 1.74 g
  • the quercetin 3-rhamnoside administration group decreased 0.85 g
  • the quercetin 3-galactoside administration group decreased 1.19 g.
  • the three flavonoid mixture drug administration group increased 3.65 g, confirming the ability to inhibit weight loss due to rat coronavirus infection compared to the single flavonoid drug administration group, confirming the excellent antiviral effect.
  • lung tissue was isolated from the mice in each group to make a lung tissue section, and the non-infected group, the infected group but not administered with the drug, and the group administered with a single drug of flavonoid glycosides to the infected group and 3 types
  • the results of comparing the lung tissue sections of the flavonoid glycoside mixture drug administration group are presented in FIG. 4 . .
  • the antiviral activity of the three-type flavonoid glycoside mixture was confirmed in the coronavirus-infected model mouse, and it was confirmed that it could be used for the treatment of coronavirus-infected diseases. It was confirmed that the synergistic effect was confirmed in the case of the three types of mixture by confirming that it appeared better.

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Abstract

본 발명은 플라보노이드 배당체 화합물의 항코로나바이러스 용도에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물; 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물; 사료조성물; 및 의약외품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 코로나바이러스에 대한 감염 억제 효과를 나타내므로, 상기 바이러스 질환의 예방 또는 치료를 위한 항바이러스제 개발에 이용될 수 있다.

Description

항코로나바이러스능을 가지는 플라보노이드 배당체
본 발명은 플라보노이드 배당체 화합물의 항코로나바이러스 용도에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물; 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물, 사료 조성물 및 의약외품 조성물에 관한 것이다.
2019년 중국 우한시에서 시작된 호흡기질환은 코로나바이러스 감염으로 인한 질병으로 심한 호흡기증상을 나타내면서 감염환자의 상당수가 사망까지 이르게 되고 있다. 코로나바이러스 감염증에 대한 공인된 치료제로는 리바비린(ribavirin), 펜시클로비르(penclovir), 니타코사니드(nitazoxanide), 나파모스태트(nafamostat), 클로르퀴닌(chloroquinie)등이 알려져 있으며 이외에도 렘디시비르(GS-5734,remdesivir), 파비피라비르(favipiravir)가 코로나바이러스 감염증 치료에 사용되고 있으나 효과가 낮고 핵산아날로그형의 항바이러스제들의 특성상 변종바이러스의 발생율이 높아 2종이상의 항바이러스제를 같이 적용하고 있다[Wang M, Cao R, 코뭏 L, Yang X, Liu j, Xu M, Shi Z, Hu Z, Zhong W, Xiao G. 2020. Remdesvir and choloquinie effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus(2019-nCoV) in vitro. Cell Research 30: 269-271].
리바비린을 비롯한 렘디시비르 등의 코로나바이러스 감염증에 사용되는 항바이러스제들은 대부분 RNA polymerase 억제능을 가지는 물질들이다. 다만, 렘디시비르에 대한 내성을 가진 코로나바이러스의 일종인 마우스 간염바이러스가 발견되었으며 기존의 항바이러스제의 효과가 없는 실정이다.
반면, 플라보노이드의 코로나바이러스 polymerase 효소단백질의 억제능에 대하여 연구되고 있으며, 켐프페롤 아세틸 3-글루코사이드와 퀘르세틴 아세틸 3 -글루코사이드가 진핵세포의 DNA polymerase에 억제능을 나타냄이 알려진 바 있으며 (Mizushina Y, Ishdoh T, Takemura M, Sugawara F, Yoshida H, Sakaguchi K. 2003. Flavonoid glycoside: a new inhibitor of eukaryotic DNA polymerase alpha and a new carrier for inhibitor-affinity chromatography. Biochem Biophys. Res. Commun. 301(2):480-487), 식물추출물을 이용한 코로나바이러스에 대한 항바이러스 조성물은 알려진 바 있으나(한국 등록특허 제 10-0697309 호), 본 발명의 플라보노이드 배당체 혼합물의 항코로나능에 대하여는 아직 연구된 바 없다.
또한, 현재까지 개발된 항바이러스들은 심한 부작용을 나타내고 있으므로, 그 응용에 있어서 많은 주의가 필요하다. 이러한 치료제는 효과적이지 못하며 부작용 또한 나타나고 있는 실정이다. 그러므로 코로나바이러스의 발생을 예방하고 치료하기 위한 감염 억제 효과가 뛰어나고 독성이 적은 우수한 새로운 코로나 바이러스제의 개발의 필요성이 증가하고 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은, 신규한 코로나바이러스 치료제를 개발하기 위한 노력을 계속한 결과, 각각 식물 추출물로부터 분리하거나, 이를 모방하여 화학적으로 합성한 플라보노이드 배당체 3종 혼합물이 항코로나바이러스 활성을 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 플라보노이드 배당체 화합물 3종의 조합을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 코로나바이러스에 대한 감염 억제 효과를 나타내므로, 상기 바이러스 질환의 예방 또는 치료를 위한 항바이러스제 개발에 이용될 수 있다.
도 1은 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 항코로나바이러스능을 확인한 결과이다.
도 2는 플라보노이드 배당체 3종 혼합물과 리바비린의 항코로나바이러스능을 비교한 결과이다.
도 3은 코로나바이러스 감염모델에서 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 항바이러스능을 확인한 결과이다. (사각형 실선 표식: 3종 혼합물, 십자모양 점선 표식: 퀘르세틴 3-글루코사이드, X자 점선 표식: 퀘르세틴 3-람노사이드, 열린 다이아몬드형 점선 표식:퀘르세틴 3-갈락토사이드, 닫힌 삼각 점선 표식: 약제를 투여하지 않은 감염군, 원 실선 표식: 비감염군)
도 4는 코로나바이러스 감염모델의 폐조직에서 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 항바이러스 효과를 확인한 결과이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물(플라보노이드 배당체 화합물 3종)을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2021004475-appb-I000001
[화학식 2]
Figure PCTKR2021004475-appb-I000002
[화학식 3]
Figure PCTKR2021004475-appb-I000003
상기 화학식 1의 구조를 갖는 화합물은 퀘르세틴 3-람노사이드(Quercetin 3-rhamnoside; Quercitrin)로 분자량 448.38, 화학식 C21H20O11 의 플라보노이드 배당체 화합물이다.
또한, 상기 화학식 2의 구조를 갖는 화합물은 퀘르세틴 3-글루코사이드 (Quercetin 3-glucoside; Isoquercetin)로 분자량 464.38, 화학식 C21H20O12 의 플라보노이드 배당체 화합물이다.
또한, 상기 화학식 3의 구조를 갖는 화합물은 퀘르세틴 3-갈락토사이드(Quercetin 3-galactoside; Hyperoside)로 분자량 464.38, 화학식 C21H20O12 의 플라보노이드 배당체 화합물이다.
본 발명의 상기 화학식 1 내지 3으로 표시되는 화합물, 예컨대, 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는 조성물은 이들 화합물에서 일부 당업자가 예상 가능한 범위의 유도체가 포함될 수 있으며, 본 발명에서의 동일한 효과가 있는 한 제한 없이 포함된다. 이들 화합물은 이를 포함하는 추출물에서 수득할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 또한, 공지의 방법으로 합성해서 사용 가능하다. 상기 추출물은 일 예로 어성초 추출물 또는 분획물일 수 있으나, 상기 화합물이 포함되어 있는 식물 추출물 또는 분획물이면 족하고 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어 화학식 1 내지 3으로 표시되는 화합물은 플라보노이드 배당체 화합물 3종, 플라보노이드 배당체 혼합물, 플라보노이드 배당체 3종 혼합물, 3종 혼합물과 혼용하여 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는 조성물의 각 화합물의 함량비는 1 내지 2 : 1 : 1 내지 5일 수 있으며, 바람직하게는 1:1:1일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 화학식 1 , 화학식 2 및 화학식 3으로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염을 사용할 수 있다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 메틸린더론을 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다. 또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 메틸린더론 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 입체이성질체 등을 모두 포함한다.
본 발명의 용어, "코로나바이러스(coronavirus)"는 코로나비리데(Coronaviridae) 과에 속하는 바이러스로서, 본 발명의 일 실시예에서는 화학식 1, 화학식 2 및 화학식 3으로 표시되는 화합물의 조합을 포함하는 조성물은 코로나바이러스 억제활성이 있음을 확인하였다(표 1 및 표 2).
본 발명의 일 구체예로, 상기 코로나바이러스는 바이러스는 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV), 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV), 돼지호흡기코로나바이러스(PRCV), 중동호흡기증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스(SARS-CoV) 및 신종코로나바이러스(CoVID-19)일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에서는 상기 항바이러스용 조성물의 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV), 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV) 및 돼지호흡기코로나바이러스(PRCV)에 대하여 그 억제 활성 효과를 확인하였다(실시예 2 및 3).
상기 결과는 각 코로나바이러스간의 polymerase 아미노산 서열의 동질성이 50%이상으로, 아미노산 서열 유사성을 포함하면 75% 이상으로 유사성이 매우 높으며, 특히 PEDV polymerase gene에서 485th-545th 아미노산 서열은 SARS coV2와 유사성 일치도가 100%에 이른다는 점을 고려하면, 상기 코로나바이러스에 대한 항바이러스능이 다른 코로나바이러스에도 적용 가능하며, 본 발명의 항바이러스용 조성물이 항코로나능을 가지고 있음을 시사하는 것이다.
또한, 본 발명의 일 실시예에서는 상기 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3의 3종의 조합을 포함하는 항바이러스용 조성물이 상기 각각의 화합물 또는 2종의 화합물의 조합보다 현저한 항코로나능이 있음을 확인하였다. 또한, 이는 양성대조군인 기존의 항코로나바이러스제 보다도 뛰어난 효과를 가짐을 확인하였다.
상기와 같은 결과는 단일 화합물 3종을 각각 합친 효과보다 큰 것이며, 2종 화합물의 조합을 합친 효과보다도 현저한 것으로, 시너지 효과에 해당됨을 확인하였다(표 1, 도 1 내지 4).
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어,"코로나바이러스 감염질환"이란, 코로나바이러스의 감염으로 유발되는 질환을 의미한다.
상기 용어, "감염"은 병원성 미생물이 숙주가 되는 생물체의 체내에 침입하여, 발육 증식한 상태를 의미한다.
본 발명의 일 구체예로, 상기 코로나바이러스 감염질환이란, 사람에서는 코감기, 기침, 가래, 기관지염 또는 중증호흡기질환 등 일 수 있으며, 동물에서는 간염, 뇌염, 신경질환, 중증호흡기질환, 심한 설사나 호흡기질환, 복막염 등 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어, "예방"은 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 코로나바이러스에 의한 감염질환의 발병을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "치료"는 상기 약학 조성물의 투여에 의해 코로나바이러스 감염질환의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
상기 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 구체적인 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있으며, 상기 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제 등이 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 또는 좌제 등이 사용될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 조성물의 총 중량에 대하여, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 0.1~1000ug/ml, 구체적으로 0.1~200ug/ml, 0.1~100ug/ml으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 20-200mg, 구체적으로 70-100mg으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 실시예에서는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는 조성물(3종 혼합물)을 코로나바이러스 감염 쥐 모델에 투여하여 이의 체중감소 억제 효과 및 코로나바이러스 감염으로 인한 폐조직 기포 위치에 증가된 혈구의 감소 효과를 확인하여, 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용도로 사용될 수 있음을 확인하였다(도 3 및 4).
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
이때, 상기 "코로나바이러스 감염질환", "예방" 및 "치료"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어, "투여"는 적절한 방법으로 개체에게 상기 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미한다.
본 발명의 용어, "개체"는 코로나바이러스 감염질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 예방 또는 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
상기 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여할 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여할 수 있다. 또한, 단일 또는 다중 투여할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 구체적인 예로, 상기 약학적 조성물은 일반적으로 1일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있으나, 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 성인을 기준으로 1일 20-200mg의 범위 내에서 투여할 수 있으며, 보다 구체적으로 1회 70-100mg 범위 내에서 투여할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
이때, 상기 "코로나바이러스 감염질환", "예방"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명의 식품 조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하며, 일반약품과는 달리 천연물에서 추출한 활성성분인 상기 화합물 1 내지 3을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있으므로, 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선 목적으로 매우 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 용어, "개선"은 상기 식품 조성물의 섭취로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "식품"은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강기능식품 및 건강식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 용어, "건강기능성 식품(health functional food) "은 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다.
여기서 '기능(성)'은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 상기 건강식품(health food)은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강기능식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 호용될 수 있다.
구체적으로, 상기 건강기능식품은 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다.
본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품 조성물은 식품으로 인정되는 제형이면 다양한 형태의 제형으로 제한 없이 제조될 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별하고 적절한 양으로 사용할 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
이때, 상기 "코로나바이러스 감염질환", "예방", "개선"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명에서 용어, "사료 첨가제"는 영양적 또는 특정 목적을 위하여 사료에 미량으로 첨가되는 물질을 총칭하는 것으로, 본 발명에서는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선을 목적으로 첨가되는 물질을 의미한다. 여기서, 동물이란 가축 및 애완동물을 포함하는 개념이다.
본 발명의 사료 첨가제에 포함할 수 있는 성분으로는, 필수 성분으로 유효성분을 함유하는 외에 다른 성분에는 특별히 제한이 없다. 본 발명의 사료 첨가제에는 품질 저하를 방지하기 위해 첨가되는 결착제, 유화제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있고, 효용 증대를 위하여 첨가되는 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제, 향미제, 비단백태 질소화합물, 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제, 올리고당 등을 추가로 포함할 수 있으며, 그 외에도 사료 혼합제 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 목적을 위한 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 의약외품을 제공한다.
이때, 상기 "코로나바이러스 감염질환", "예방", "개선"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미한다.
본 발명에서 상기 의약외품 조성물은 심혈관질환의 예방 또는 개선 효과를 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 의약외품 조성물에는 상기 성분 외에 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 해하지 않는 한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 목적을 위한 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 코로나바이러스에 대한 항바이러스 용도에 관한 것이다.
본 발명의 목적을 위한 또 다른 하나의 양태는 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 제조
바이러스 증식능을 억제할 수 있는 화합물을 탐색하기 위하여, 본 발명자들은 시그마-알드리치사로부터 퀘르세틴 3-갈락토사이드(Catalog No. 83388), 퀘르세틴 3-글루코사이드(Catalog No. 16654), 퀘르세틴 3-람노사이드(Catalog No. 00740580-25MG)를 구입하여 사용하였다. 또한, 양성대조군으로 항바이러스제로 활용되는 리바비린(R9644), 라미뷰딘(L1295), 지도뷰딘(Catalog No. PHR1292-1G)를 구입하여 코로나바이러스에 대한 항바이러스능 시험에 사용하였다.
퀘르세틴 3-갈락토사이드, 퀘르세틴 3-글루코사이드, 퀘르세틴 3-람노사이드의 각 단일 화합물은 디메틸설퍼옥사이드 용액에 각각 10mg/ml의 농도로 용해하였으며, 상기 3종의 혼합물은 플라보노이드 화합물을 각각 동량의 비율로 혼합하여 최종 혼합물의 농도를 10mg/ml의 농도로 제조하였다.
실시예 2: 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 항코로나바이러스능 확인
혼합물의 코로나바이러스에 대한 항바이러스능을 측정하기 위하여, 본 발명자들은 원숭이 신장세포주인 Vero세포를 이용하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
코로나바이러스 증식 억제능 측정방법은 권두한 등(대한민국 특허등록번호: 0682069호)이 특허 출원한 방법에 의거하여 코로나바이러스의 일종인 PEDV (strain CV777)에 대한 바이러스 활성 저해 효과를 측정하였다.
Vero세포를 96-웰 마이크로플레이트(96-well microplate)의 각 웰에서 바닥이 세포로 완전히 덮힐 때까지 배양하였다. 기존 배양액을 제거하고 인산 완충액으로 각 웰을 2회 세척한 후 TCID50의 농도로 조장된 바이러스 용액을 각 웰에 넣고 항바이러스능을 확인하고자 하는 화합물을 넣었다.
이때, 퀘르세틴 3-람노사이드(A), 퀘르세틴 3-글루코사이드(B) 및 퀘르세틴 3-갈락토사이드(C)를 각각 3종의 화합물을 비교군 1 내지 3으로 하였고, 이들의 2종의 화합물 조합(퀘르세틴 3-람노사이드 및 퀘르세틴 3-글루코사이드(A + B); 퀘르세틴 3-람노사이드 및 퀘르세틴 3-갈락토사이드(A + C); 및 퀘르세틴 3-글루코사이드 및 퀘르세틴 3-갈락토사이드(B + C))를 각각 비교군 4 내지 6으로 하였다. 또한, 본 발명의 3종 혼합물을 실험군으로 하였으며, 시그마사로부터 구입한 항바이러스제로 알려진 리바비린(R9644)을 양성대조군으로 하였다.
상기 화합물들은 각각 디메틸설폭사이드에 용해시킨 뒤에 각각의 용액을 0.1 ~ 100 ㎍/ml의 농도로 각 웰에 투여하고 48시간 동안 배양하였으며 현미경으로 MDCK 세포의 모양을 관찰하여 항바이러스능 여부를 1차 판정하였다. 각 웰에 70% 아세톤을 100 ㎕씩 첨가한 후 1시간 동안 -20 ℃에 방치하고 건조기에서 건조시킨 후 1%(v/v) 아세트산에 녹인 0.4%(w/v) SRB(sulforhodamine B) 용액 100 ㎕를 첨가해 30분 동안 염색시킨 후 세포와 결합하지 않은 SRB 염색액을 1% (v/v) 아세트산으로 4회 세척한 다음 다시 건조시켰다.
각 웰 바닥에 세포와 결합되어 있는 염색제를 10 mM 트리스 용액(pH 10.5) 100 ㎕를 각 웰에 가하여 염색제를 녹인 후 562 nm에서 흡광도를 측정하여 바이러스 저해효과를 비교하였다. 이때, DMSO만 처리한 세포와 DMSO 및 코로나바이러스 감염용액을 같이 투여한 세포를 음성대조군으로 비교한 후, 비교군, 실험군 및 대조군이 나타내는 코로나바이러스의 증식저해 효과를 결정하여 다음 표 1 및 도 1에 나타내었다. CC50(cytotoxic concentration)은 50% 세포독성을 나타내는 농도를 나타내며, EC50 (effective concentration)은 의약효능이 50% 나타나는 농도를 의미한다. 또한, SI는 의약의 안전성과 유효성을 같이 나타내는 지수로 높을수록 좋은 의약으로 평가되며, ND(not determined)는 수치가 낮아 최대치 농도에서도 50% 억제능 값을 계산할 수 없음을 의미한다. 또한, 비고란은 3종의 플라보노이드 중에서 퀘르세틴 3-갈락토사이드의 SI값을 기준으로 하여 표시한 백분율 비교값을 나타낸다.
CC50
(μg/ml) 		EC50
(μg/ml) 		SI
(CC50/EC50) 		비고(%)
비교군 1(A) 1000> 69.18 ± 19.21 14.5< 9.01
비교군 2(B) 875.35 ND ND ND
비교군 3(C) 466.03 2.88 ± 0.50 161 100
비교군 4(A + B) 1000> 142.42 ± 60.97 7< 4.35
비교군 5(A + C) 535.30 2.44 ± 0.80 219.4 136.27
비교군 6(B + C) 326.02 5.98± 0.65 54.5 33.85
실험군(A+B+C) 292.86. 0.041 7,143 4,436.65
양성대조군(리바비린) 271 4.57 ± 0.28 59.30 36.83
상기 표 1에서 볼 수 있듯이, 3종 혼합물의 실험군의 경우 단일화합물의 비교군 1 내지 3 및 2종의 화합물 조합인 비교군 4 내지 6에 비하여 현저하게 높은 SI 값을 가짐을 확인할 수 있었다.
즉, 단일 화합물 중에 항코로나능이 가장 높은 비교군 3(퀘르세틴 3-갈락토사이드)을 100으로 볼 때, 2종 화합물의 혼합물인 비교예 5의 경우 약 136%에 해당될 뿐이나, 3종 혼합물의 경우 4,436%로 그 효과가 월등함을 확인할 수 있었다.
이와 더불어 양성대조군인 기존의 항코로나바이러스제 보다 현저한 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.
이는 단일 화합물 3종을 각각 합친 수치보다 큰 것이며, 2종 화합물의 조합을 합친 수치보다도 현저한 효과를 보이는 것으로서 단순한 조합에 대한 효과라고는 볼 수 없으며, 시너지 효과임을 확인할 수 있었다.
또한, 도 1에서 볼 수 있듯이, 3종 혼합물의 실험군의 경우 단일화합물의 비교군 1, 2, 3의 화합물에 비하여 0.01, 0.1, 1㎍/ml 의 농도에서 매우 월등한 항바이러스능 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
상기 방법과 동일하게, 플라보노이드 배당체 3종 화합물의 코로나바이러스에 대한 항바이러스능을 다른 항코로나항바이러스제인 리바비린과 0.01, 0.1, 1, 10, 100 ㎍/ml의 농도별 효능을 비교실험을 3회 수행하여 그 평균값과 오차를 도 2에 제시하였다.
도 2에서와 같이 플라보노이드 배당체 3종 화합물은 실험한 0.01, 0.1, 1, 10, 100 ㎍/ml의 농도범위 모두에서 50%이상의 항코로나바이러스능을 나타내었으며 농도가 증가할수록 항코로나바이러스능도 증가하였다. 이에 비해 리바비린은 100 ㎍/ml외에는 50%이하의 항바이러스능을 나타내지 못함을 확인하였다.
상기의 결과로 본원 플라보노이드 배당체 3종 혼합물은 기존의 치료제인 리바비린 대비 효과가 뛰어나며, 플라보노이드 배당체 단일 대비 현저한 효과를 나타냄을 확인하였다.
실시예 3. 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 타 코로나바이러스에 대한 항바이러스능 확인
본 발명의 3종 혼합물, 퀘르세틴 3-갈락토사이, 퀘르세틴 3-람노사이드 및 퀘르세틴 3-글루코사이드를 상기 PEDV와 다른 코로나바이러스인 PRCV 와 TGEV에 대한 항바이러스능을 측정하기 위하여, 돼지 정낭세포주인 ST세포를 이용하여 상기 실시예 2와 동일한 방법에 의하여 실험하였다.
또한, 양성대조군으로 기존의 항바이러스 제인 아시클로비르(acycloguanine), 지도부딘 (azidothymidine) 및 라미뷰딘(lamivudine) 및 리바비린(ribavirin)과 항코로나능을 비교하였고, 그 결과는 표 2에 표시하였다.
Figure PCTKR2021004475-appb-T000001
상기 표 2에서 확인할 수 있듯이, PRCV 또는 TGEV 코로나바이러스에 대해 기존 항바이러스제인 아시클로비르, 지도부딘, 라미뷰딘은 2종의 코로나바이러스에 대해 효과가 없는 것으로 확인되었으나, 본 발명의 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 경우 상기 바이러스에 관하여도 항코로나능을 확인할 수 있었다.
실시예 4. 코로나바이러스 감염모델에서 플라보노이드 배당체 3종 혼합물의 항바이러스능 확인
4-1. 코로나바이러스 감염 쥐 모델 제작
본 발명의 3종 혼합물의 동물에서의 항코로나바이러스능을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다. 미국 ATCC로부터 구입한 쥐코로나바이러스 (ATCC®VR-1410)를 Vero 세포에서 배양한 후에 100TCID50의 양으로 생쥐의 코에 주입하여 쥐코로나바이러스의 감염을 유도하였다.
쥐코로나바이러스는 Funk 등 (Rat respiratory coronavirus infection: replication in airway and alveolar epithelial cells and the innate immune response. J. Gen. Virol. 2005. 90: 2956-2964) 에 의하면 쥐코로나바이러스는 쥐에서 중증호흡기질환을 유발하는 바이러스이다.
실험은 각 군당 쥐 3 마리씩이며, 비감염군, 감염군이면서 약제를 투여하지 않은 군, 감염군에 플라보노이드 배당체 단일 화합물을 투여한 군과 3 종 플라보노이드 배당체 혼합물 약제 투여군으로 나누어 실험하였다.
쥐코로나바이러스는 Vero 세포에서 배양한 후에 100TCID50의 양을 각 쥐(Balb/C 4주령)의 코에 주입하여 쥐코로나바이러스에 감염시켰으며 실험결과는 도 3 및 4에 제시된 결과와 같다.
4-2. 코로나바이러스 감염모델에서 플라보노이드 배당체 3종 혼합물에 의한 체중감소 억제 확인
상기 실험에 사용된 모든 쥐의 체중을 매일 측정하여 비감염군, 감염군이면서 약제를 투여하지 않은 군, 감염군에 플라보노이드 배당체 단일약제를 투여한 군과 3종 플라보노이드 배당체 혼합물 약제 투여군의 각 개체의 체중을 매일 측정하여 각 군의 일일 체중의 변화를 도 3에 제시하였다.
도 3에서 볼 수 있듯이, 약제 투여군은 매일 100 ㎍을 구강투여하였다. 비감염군은 실험기간동안 계속 체중이 증가하여 최종 6g이 증가하였으며 감염군 중 비약제투여군은 체중이 감소하여 9 일차에 5.77g이 감소하였다. 단일 플라보노이드 배당체 약제 투여군은 퀘르세틴 3-글루코사이드 투여군이 1.74g이 감소하였으며, 퀘르세틴 3-람노사이드 투여군이 0.85g이 감소하였고 퀘르세틴 3-갈락토사이드 투여군이 1.19g이 감소하였다.
반면에 3종 플라보노이드 혼합물 약제 투여군은 3.65g이 증가하여 단일 플라보노이드 약제 투여군보다 쥐코로나바이러스 감염으로 인한 체중감소 억제능을 확인하여 우수한 항바이러스능 효과를 확인할 수 있었다.
4-3. 플라보노이드 배당체 3종 혼합물 투여에 의한 코로나바이러스 감염모델의 폐조직 절편 확인
상기 쥐감염실험이 종료된 후에 각 군의 쥐에서 폐조직을 분리하여 폐조직절편을 만들어 비감염군, 감염군이면서 약제를 투여하지 않은 군, 감염군에 플라보노이드 배당체 단일약제를 투여한 군과 3 종 플라보노이드 배당체 혼합물 약제 투여군의 폐조직절편을 비교한 결과를 도 4에 제시하였다. .
도 4를 보면, 비감염군은 폐세포에 기포가 활성화 되어 있는 형태이나 코로나바이러스에 감염된 쥐의 폐조직절편은 기포 위치에 혈구가 가득 차 있는 형태를 확인할 수 있었다. 케르세틴 3-글루코사이드 투여군, 케르세틴 3-람노사이드 투여군, 케르세틴 3-갈락토사이드 투여군 모두 약제 비투여 감염군보다 기포 위치에 혈구의 수가 적은 것을 확인할 수 있으나, 일부 폐세포에 혈구가 차 있는 형태를 보임을 확인하였다.
다만, 3 종 혼합물 투여군의 폐조직절편에서는 전체적으로 혈구가 차 있는 세포가 단일 플라보노이드 투여군보다 현저하게 적은 것을 확인할 수 있고 폐조직 내에 전체적으로 혈구의 분포가 적은 것을 확인할 수 있었다.
이로서 코로나바이러스 감염 모델 쥐에서 3종 플라보노이드 배당체 혼합물의 항바이러스능을 확인하여, 이의 코로나바이러스 감염질환의 치료용도로 사용될 수 있음을 확인하였으며, 단일 플라보노이드 배당체 투여대비 3종 혼합물 투여군에서 항바이러스능 효과가 더 우수하게 나타났음을 확인하여, 3종 혼합물의 경우 시너지 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000004
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000005
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000006
  2. 제1항에 있어서, 상기 코로나 바이러스는 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV), 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV), 돼지호흡기코로나바이러스(PRCV), 중동호흡기증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스(SARS-CoV) 및 신종코로나바이러스(CoVID-19)에서 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물.
  3. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000007
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000008
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000009
  4. 제3항에 있어서, 상기 코로나 바이러스는 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV), 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV), 돼지호흡기코로나바이러스(PRCV), 중동호흡기증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스(SARS-CoV) 및 신종코로나바이러스(CoVID-19)에서 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 약학적 조성물.
  5. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000010
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000011
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000012
  6. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000013
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000014
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000015
  7. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 화학식 3으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 코로나바이러스 감염질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000016
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000017
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2021004475-appb-I000018
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