WO2021152780A1 - Ｄｎａ抽出方法及び爪加工装置 - Google Patents

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麻生川　稔
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

Definitions

  • the present invention relates to a DNA extraction method and a nail processing device.
  • an object of the present invention is to provide a DNA extraction method and a nail processing apparatus that contribute to improving the efficiency of DNA extraction from nails.
  • a processing step of processing a nail as a sample for DNA extraction while maintaining the state of one mass to increase the surface area of the nail exposed to the DNA extraction reagent and a processing step.
  • An extraction step of exposing the processed nail to a DNA extraction reagent to extract DNA, A DNA extraction method comprising the above is provided.
  • a nail processing device that processes a nail as a sample for DNA extraction while maintaining the state of one mass to increase the surface area of the nail exposed to the DNA extraction reagent. Provided.
  • a DNA extraction method and a nail processing device that contribute to improving the efficiency of DNA extraction from nails are provided.
  • the DNA extraction method of the present invention processes a nail as a sample for DNA extraction while maintaining the state of one mass to increase the surface area of the nail exposed to the DNA extraction reagent.
  • the machining step (step S01) is included.
  • the DNA extraction method of the present invention includes an extraction step (step S02) in which the processed nail is exposed to a DNA extraction reagent to extract DNA.
  • the nail as a sample for DNA extraction is rolled flat by the nail processing device.
  • the nail has an appropriate stickiness in the first place, and the nail can maintain the state of one lump even in the state of being rolled into a flat shape. That is, by processing the nail into a flat shape, the surface area of the nail can be increased while maintaining the state of one mass.
  • the flattened nail is transferred to a container for DNA extraction (for example, a microtube) and exposed to a DNA extraction reagent to extract DNA.
  • a container for DNA extraction for example, a microtube
  • the nail transferred into the container has a frictional force with the inner wall of the container for DNA extraction, the nail does not float on the DNA extraction reagent. Further, even if it floats, the nail can be settled in the DNA extraction reagent much more easily than the shattered nail, for example, by pushing it into the DNA extraction reagent with a rod-shaped instrument.
  • the DNA extraction efficiency from the nail can be improved. That is, since the nail is processed while maintaining the state of one lump, it can be easily taken out from the processing apparatus without loss. In other words, the processing equipment is easier to clean and the risk of carryover / contamination with the next sample is reduced. In addition, since the nail remains in the state of one mass, it is easy to settle in the DNA extraction reagent.
  • the nail processing device has a basic property of processing a nail as a sample for DNA extraction while maintaining the state of one mass to increase the surface area of the nail exposed to the DNA extraction reagent. In other words, the nail processing device only needs to be able to process the nail so as to increase the surface area while maintaining the state of one mass.
  • the claw processing device is exemplified by a press machine in which a claw is sandwiched between a pair of dies and pressure is applied to roll the claw into a flat shape.
  • the pressure applied to the nail is preferably about 200 to 2000 kgf (about 2000 to 20000 N (Newton)), but may be 200 kgf or less, or 2000 kgf or more. That is, if the pressure applied to the nail is large, the surface area of the flatly rolled nail is also large, but the thickness of the nail is thin and it is difficult to maintain the state of one lump, which is a disadvantage. Occurs.
  • the pressure applied to the nail can be selected in consideration of various factors such as the skill of the operator and the purpose of DNA extraction.
  • the mechanism for applying pressure to the claw can be selected from a wide variety of mechanisms such as a human-powered mechanism (for example, a mechanism using a hydraulic jack) and a mechanical mechanism.
  • the material and shape of the mold can be changed in a wide variety of ways if the nails can be processed so as to increase the surface area while maintaining the state of one lump.
  • One example is a die made of stainless steel and having a flat press surface.
  • the pressed surface can be provided with irregularities with the intention of further increasing the surface area of the nail.
  • the nails may be stretched by performing operations such as relatively moving or rotating the pair of molds.
  • the press surface of the die may be provided with an inclination.
  • the pressure applied to the claws, the movement of the mold, and the rotation may be performed at the same time or separately.
  • the nail can be processed so as to increase the surface area while maintaining the state of one mass, but even if the location of the nail to which pressure is applied is gradually changed. good.
  • the pressure may be applied to the central portion of the nail first, and then the portion of the nail to which the pressure is applied may be gradually shifted outward. In this case, since the nail is gradually pushed outward from the central portion, more efficient rolling of the nail is possible.
  • the claw processing device is also exemplified by a roller mechanism in which a claw is sandwiched between a pair of rollers and the claw is rolled into a flat shape.
  • spike rows (s) along the circumference may be provided on the surface of the roller.
  • the rolling direction of the claw is restricted to the rolling direction of the rollers (the direction of insertion between the rollers), and the claws are rolled in the axial direction.
  • the rolling of the claws can be restricted. This processes the claws into a sheet of appropriately connected strips, which makes it easier to maintain the state of a single mass (for example, imagine a squid).
  • the spike rows may be arranged not only along the circumference of the roller but also diagonally along the circumference of the roller.
  • the claw processing device is also exemplified by a hammer mechanism that strikes a claw with a hammer to stretch the claw.
  • FIG. 2A shows an example of a press machine as a claw processing device (a hydraulic experimental pellet press manufactured by Specac).
  • the die used has a flat press surface.
  • a pressure of about 2000 kgf is applied to the nail, the nail is processed into an elliptical sheet having a major axis of 7 mm and a minor axis of about 5 mm as shown in FIG. 2B.
  • the nail has a hardness enough to be pinched with tweezers and a softness enough to be flexibly bent, so that it can be easily peeled off from the mold.
  • a cartridge for DNA analysis for example, RapidHIT manufactured by Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.
  • RapidHIT manufactured by Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.
  • This cartridge is originally designed so that a swab with oral cells can be inserted, and when inserting it into the cartridge, the nail is wrapped around a rod-shaped instrument, cut into multiple strips, and so on. Alternatively, it may be pushed in forcibly.
  • the subsequent treatment to dissolve the nails is generally established as an experimental system, so explanations will be omitted. That is, in the present invention, the process of applying the processed nail instead of the oral cells attached to the swab is a technical difference from the general DNA analysis method.
  • a jig having a handle may be provided to process the nail so as to be integrated with the jig.
  • the holding tool having the handle portion has a frame portion designed to be along the outer circumference of the press surface, for example, as shown in FIG.
  • a part of the frame portion may be crushed by press working.
  • the frame portion is designed so as to be crushed and extended inward, the contact between the claw and the frame portion becomes easier.
  • FIG. 5 it may have a whiskers portion extending inward from the frame portion and pressed together with the claws.
  • the whiskers can be spiral as shown in FIG. 5A or radial as shown in FIG. 5B.
  • a binder may be further provided, and the holding tool and the claw may be integrally processed via the binder.
  • the binder is preferably cotton-like or mesh-like in consideration of exposure of the nail to the DNA extraction reagent.
  • the material of the binder may include a natural material such as cotton, a plastic resin, plastic and the like.
  • the sample can be applied not only to nails but also to bones and teeth. Since bones, teeth, etc. may be crushed into pieces when pressed, it is preferable to press them together with a thickener for maintaining the state of one mass.
  • Appendix 2 The DNA extraction method according to Appendix 1, wherein the nail is processed into a flat shape in the processing step.
  • Appendix 3 The DNA extraction method according to Appendix 2, wherein the nail is press-processed in the processing step.
  • Appendix 4 The DNA extraction method according to Appendix 3, wherein in the processing step, a holding tool having a handle is provided and the nail is processed so as to be integrated with the holding tool.
  • a nail processing device that processes a nail as a sample for DNA extraction while maintaining the state of one mass to increase the surface area of the nail exposed to the DNA extraction reagent.

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Abstract

爪からのＤＮＡ抽出効率の向上に寄与する技術を提供する。ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる加工ステップと、前記加工された爪をＤＮＡ抽出試薬に暴露して、ＤＮＡを抽出する抽出ステップと、を含むＤＮＡ抽出方法が提供される。

Description

ＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置
　本発明は、ＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置に関する。
　爪を試薬で溶解した後に爪からＤＮＡを抽出する技術が存在する（例えば特許文献１を参照）。この技術では溶解効率を改善するために、鉄球等を打ち付けるビーターで爪を粉状に粉砕する処理、又はハサミで細かく（例えば１ｍｍ角に）裁断する処理などが行われる。
特開２００９－１１２１０号公報
　以下の分析は、本発明の観点からなされたものである。なお、上記先行技術文献の開示を、本書に引用をもって繰り込むものとする。
　上述のように爪を粉砕／裁断した後にＤＮＡを抽出する場合には、種々の問題点がある。例えば、ビーターで爪を粉状に粉砕する場合には、次のサンプルへのキャリーオーバー／混入（コンタミネーション）を防止するためにビーターを丁寧に洗浄する必要がある。さらに、粉状に粉砕した爪はＤＮＡ抽出試薬に浮くため、沈降、攪拌のための操作が必要である。また、爪を粉砕、裁断する場合には、粉砕、裁断した爪をロスする可能性が高くなるという問題点がある。特に、爪からのＤＮＡ抽出は他の試料（例えば、口腔細胞）と比べて強い試薬での処理や高温処理を必要とするなど難易度が高く、他の試料が入手不可能な場合に行われることが多い。そのため、爪は試料としての貴重性（価値）が高いと言え、少量のロスですら重大な問題になり得る。つまり、従来の爪からのＤＮＡ抽出方法には、ＤＮＡ抽出効率という点で改善すべき点がある。
　そこで、本発明では、爪からのＤＮＡ抽出効率の向上に寄与するＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置を提供することを目的とする。
　本発明の第１の視点によれば、ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる加工ステップと、
　前記加工された爪をＤＮＡ抽出試薬に暴露して、ＤＮＡを抽出する抽出ステップと、
　を含むＤＮＡ抽出方法が提供される。
　本発明の第２の視点によれば、ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる爪加工装置が提供される。
　本発明の各視点によれば、爪からのＤＮＡ抽出効率の向上に寄与するＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置が提供される。
本発明のＤＮＡ抽出方法における処理の流れを示すフローチャート図である。 爪加工処理の一例を示す図である。 持具の一例を示す図である。 持具の一例を示す図である。 持具の一例を示す図である。 持具及びつなぎ材の一例を示す図である。
　本発明のとり得る好適な実施形態について図面を参照して詳細に説明する。なお、以下の記載に付記した図面参照符号は、理解を助けるための一例として各要素に便宜上付記したものであり、本発明を図示の態様に限定することを意図するものではない。
　先ず、本発明の一実施形態の概要について説明する。
［実施形態１］
　まず、本発明のＤＮＡ抽出方法の基本形態を実施形態１として説明する。図１に示すように、本発明のＤＮＡ抽出方法は、１つの塊の状態を維持しつつＤＮＡ抽出用の試料としての爪を加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる加工ステップ（ステップＳ０１）を含む。そして、本発明のＤＮＡ抽出方法は、加工された爪をＤＮＡ抽出試薬に暴露して、ＤＮＡを抽出する抽出ステップ（ステップＳ０２）を含む。
　具体的な一例を挙げて説明すると、加工ステップにおいて、ＤＮＡ抽出用の試料としての爪は爪加工装置によって扁平状に圧延される。ここで、そもそも爪は適度な粘り気を有しており、扁平状に圧延された状態であっても爪は１つの塊の状態を維持することが可能であることが判明した。つまり、爪を扁平状に加工することによって、１つの塊の状態を維持しつつ爪の表面積を増加させることができる。
　次に、抽出ステップにおいて、扁平状に加工された爪をＤＮＡ抽出用の容器（例えば、マイクロチューブ）へ移し、ＤＮＡ抽出試薬に暴露してＤＮＡを抽出する。ここで、容器内へ移された爪にはＤＮＡ抽出用の容器の内壁との間の摩擦力が生じるため、爪がＤＮＡ抽出試薬の上に浮上することがない。また、仮に浮上したとしても、例えば棒状の器具でＤＮＡ抽出試薬内に押し込むなど、粉々に加工した爪よりもはるかに容易にＤＮＡ抽出試薬内に爪を沈降させることができる。
　以上のように、本発明のＤＮＡ抽出方法によれば、爪からのＤＮＡ抽出効率を向上させることができる。すなわち、爪は１つの塊の状態を維持したままで加工されるので、ロスなく加工装置から容易に取り出すことができる。言い換えると、加工装置の洗浄が容易になるとともに、次のサンプルへのキャリーオーバー／混入のリスクが軽減される。また、爪は１つの塊の状態を維持したままなので、ＤＮＡ抽出試薬内への沈降が容易になる。
［実施形態２］
　次に、本発明の爪加工装置の基本形態を実施形態２として説明する。爪加工装置は、１つの塊の状態を維持しつつＤＮＡ抽出用の試料としての爪を加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させることを基本的な性質として有する。言い換えると、爪加工装置は、１つの塊の状態を維持しつつ表面積を増加させるように爪を加工できれば良い。
　例えば、爪加工装置は、一対の金型の間に爪を挟み込み、圧力を印可して爪を扁平状に圧延するプレス機によって例示される。爪に印可する圧力は、約２００～２０００ｋｇｆ（約２０００～２００００Ｎ（ニュートン））であることが好ましいが、２００ｋｇｆ以下、又は２０００ｋｇｆ以上であってもよい。すなわち、爪に印可する圧力が大きければ、扁平状に圧延された爪の表面積も大きくなるが、爪の厚さは薄くなり、１つの塊の状態の維持が困難になるという点でのデメリットが生じる。その一方で、爪に印可する圧力が小さければ、１つの塊の状態の維持が容易になるが、爪の表面積の拡大という点でのデメリットが生じる。そのため、オペレータのスキル、ＤＮＡ抽出の目的などの様々な要因に鑑みて、爪に印可する圧力を選択することができる。爪に圧力をかける機構については、人力のもの（例えば、油圧ジャッキを用いた機構）、機械によるものなど多種多様なものから選択することができる。
　金型の材質、形状なども１つの塊の状態を維持しつつ表面積を増加させるように爪を加工できれば多種多様に変更することができる。一例としては、ステンレス製で、平坦なプレス面を有する金型（ダイ）が挙げられる。ここで、爪の表面積のさらなる拡大を意図して、プレス面に凹凸を設けることもできる。
　また、単に爪に圧力をかけるのみではなく、一対の金型を相対的に移動させる、回転させるなどの操作を加えて、爪を押し伸ばすようにしてもよい。ここで、金型のプレス面に傾斜を設けておいてもよい。なお、爪に対する圧力の印加、金型の移動、回転は、同時に行ってもよいし、別途行ってもよい。
　さらに、爪に対する圧力のかけ方も多種多様なものから選択することができる。単に爪全体に対して均一の圧力を同時に印可することでも１つの塊の状態を維持しつつ表面積を増加させるように爪を加工できるが、圧力を印可する爪の箇所を徐々に変更してもよい。例えば、爪の中央部分に対して最初に圧力を印可し、その後圧力を印可する爪の箇所を徐々に外側へずらしてもよい。この場合には、中央部分から徐々に外側へ向かって爪を押し伸ばすことになるため、より効率的な爪の圧延が可能である。
　また、爪加工装置は、一対のローラーの間に爪を挟み込んで爪を扁平状に圧延するローラー機構によっても例示される。ここで、ローラーの表面に円周に沿ったスパイク列（複数）を設けてもよい。例えば、スパイク列を有するローラー機構によって遺体から剥離したシート状の爪を圧延する場合には、爪の圧延方向をローラーの回転方向（ローラー間への挿入方向）へ規制し、ローラー軸方向への爪の圧延を制限することができる。これによって、適度に連結された複数条のストリップからなるシートへと爪が加工されるため、１つの塊の状態の維持がより容易になる（例えば、のしイカをイメージされたい）。なお、スパイク列はローラーの円周に沿うもののみならず、ローラーの円周に斜めに配列してもよい。
　また、爪加工装置は、ハンマーで爪を叩いて爪を打ち伸ばすハンマー機構によっても例示される。
［実施形態３］
　次に、本発明のＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置に関する具体的な一例を実施形態３として説明する。
　まず、被験者から取得した１ｍｍ幅の爪を爪加工装置としてのプレス機を用いて圧延する。図２Ａは、爪加工装置としてのプレス機の一例（Ｓｐｅｃａｃ社の油圧式実験用ペレットプレス）を示す。使用する金型は平面状のプレス面を有するものである。この時に約２０００ｋｇｆの圧力を爪に対して印加すると、図２Ｂに示すように爪は長径７ｍｍ、短径５ｍｍ程度の楕円形のシートに加工される。
　この加工された爪を、ヘラを用いて金型から剥離する。この際の爪は、ピンセットでつまめる程度の硬さを有しており、かつ自在に撓ませることができる程度の柔らかさを有するため、容易に金型から剥離することが可能である。
　金型から剥離した爪を、ＤＮＡ解析用のカートリッジ（例えば、サーモフィッシャーサイエンティフィック社のＲａｐｉｄＨＩＴ）に挿入する。このカートリッジは、そもそも口腔細胞が付着したスワブが挿入可能なように設計されており、カートリッジへの挿入の際に爪を棒状器具に巻きつける、複数条のストリップに切断するなどの処理を行ってもよいし、あるいは、強引に押し込むようにしてもよい。
　その後の爪を溶解する処理などに関しては実験系として一般的に確立されているため説明を省略する。すなわち、本発明において、スワブに付着した口腔細胞の代わりに加工した爪をアプライするまでの処理が一般的なＤＮＡ解析方法との間の技術的相違点である。
［実施形態４］
　次に、本発明のＤＮＡ抽出方法及び爪加工装置に関する応用形態を実施形態４として説明する。
　例えば、本発明のＤＮＡ抽出方法における加工ステップにおいて、柄部を有する持具を供して、持具と一体的になるように爪を加工してもよい。具体的に説明すると、柄部を有する持具は、例えば図３に示すように、プレス面の外周に沿うように設計された枠部を有する。プレス加工によって枠部に到達するまで爪を押し潰すと、加工された爪は持具と一緒に爪加工装置から取り外し可能になる。
　また、例えば図４に示すように、枠部の一部がプレス加工によって押し潰されるようにしてもよい。ここで、枠部が押し潰されて内側に伸びるように設計すれば、爪と枠部との接触がより容易になる。
　また、例えば図５に示すように、枠部から内側へ向かって延在し、爪と一緒にプレスされるひげ部を有してもよい。このひげ部は、図５Ａに示すようにスパイラル状であり得るし、又は図５Ｂに示すように放射状であり得る。
　また、図６に示すようにつなぎ材をさらに供して、つなぎ材を介して持具と爪とを一体的に加工してもよい。つなぎ材は、ＤＮＡ抽出試薬に対する爪の暴露を考慮して、綿状、メッシュ状であることが好ましい。また、つなぎ材の素材は、コットンなどの天然素材、可塑性樹脂、プラスチックなどを含み得る。
　また、本発明のＤＮＡ抽出方法において、試料は爪に限らず、骨や歯なども適用することができる。なお、骨や歯などはプレス加工を行うと粉々に粉砕されることがあるため、１つの塊の状態を維持するための増粘剤と一緒にプレス加工を行うと良い。
　上記の実施形態の一部又は全部は、以下の付記のようにも記載され得るが、以下には限られない。
　（付記１）
　ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる加工ステップと、
　前記加工された爪をＤＮＡ抽出試薬に暴露して、ＤＮＡを抽出する抽出ステップと、
　を含むＤＮＡ抽出方法。
　（付記２）
　前記加工ステップにおいて前記爪を扁平状に加工する、付記１に記載のＤＮＡ抽出方法。
　（付記３）
　前記加工ステップにおいて前記爪をプレス加工する、付記２に記載のＤＮＡ抽出方法。
　（付記４）
　前記加工ステップにおいて、柄部を有する持具を供して、当該持具と一体的になるように前記爪を加工する、付記３に記載のＤＮＡ抽出方法。
　（付記５）
　ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる爪加工装置。
　なお、引用した上記の特許文献の開示は、本書に引用をもって繰り込むものとする。本発明の全開示（請求の範囲を含む）の枠内において、さらにその基本的技術思想に基づいて、実施形態ないし実施例の変更・調整が可能である。また、本発明の全開示の枠内において種々の開示要素（各請求項の各要素、各実施形態ないし実施例の各要素、各図面の各要素等を含む）の多様な組み合わせ、ないし、選択（部分的削除を含む）が可能である。すなわち、本発明は、請求の範囲を含む全開示、技術的思想にしたがって当業者であればなし得るであろう各種変形、修正を含むことは勿論である。特に、本書に記載した数値範囲については、当該範囲内に含まれる任意の数値ないし小範囲が、別段の記載のない場合でも具体的に記載されているものと解釈されるべきである。さらに、上記引用した文献の各開示事項は、必要に応じ、本発明の趣旨に則り、本発明の開示の一部として、その一部又は全部を、本書の記載事項と組み合わせて用いることも、本願の開示事項に含まれるものと、みなされる。

Claims (5)

  1. 　ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる加工ステップと、
    　前記加工された爪をＤＮＡ抽出試薬に暴露して、ＤＮＡを抽出する抽出ステップと、
    　を含むＤＮＡ抽出方法。
  2. 　前記加工ステップにおいて前記爪を扁平状に加工する、請求項１に記載のＤＮＡ抽出方法。
  3. 　前記加工ステップにおいて前記爪をプレス加工する、請求項２に記載のＤＮＡ抽出方法。
  4. 　前記加工ステップにおいて、柄部を有する持具を供して、当該持具と一体的になるように前記爪を加工する、請求項３に記載のＤＮＡ抽出方法。
  5. 　ＤＮＡ抽出用の試料としての爪を１つの塊の状態を維持しつつ加工して、ＤＮＡ抽出試薬に暴露される爪の表面積を増加させる爪加工装置。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004201558A (ja) * 2002-12-25 2004-07-22 Wako Pure Chem Ind Ltd Ｄｎａ遊離方法
JP2009011210A (ja) 2007-07-03 2009-01-22 Keio Gijuku Ｄｎａ抽出方法及びそのためのキット
JP2014113079A (ja) * 2012-12-07 2014-06-26 Mitsubishi Chemical Medience Corp 高精度な白癬菌の検出法
JP2017518497A (ja) * 2014-05-30 2017-07-06 プレッシャー バイオサイエンシズ インコーポレイテッドＰｒｅｓｓｕｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 試料調製デバイスおよび方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004201558A (ja) * 2002-12-25 2004-07-22 Wako Pure Chem Ind Ltd Ｄｎａ遊離方法
JP2009011210A (ja) 2007-07-03 2009-01-22 Keio Gijuku Ｄｎａ抽出方法及びそのためのキット
JP2014113079A (ja) * 2012-12-07 2014-06-26 Mitsubishi Chemical Medience Corp 高精度な白癬菌の検出法
JP2017518497A (ja) * 2014-05-30 2017-07-06 プレッシャー バイオサイエンシズ インコーポレイテッドＰｒｅｓｓｕｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 試料調製デバイスおよび方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FENG TAO, CHUNQIN LI, GARY SMEJKAL, ALEXANDER LAZAREV, NATHAN LAWRENCE, RICHARD T SCHUMACHER: "Pressure Cycling Technology (PCT) Applications in Extraction of Biomolecules from Challenging Biological Samples", HIGH PRESSURE BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 166 PROCEEDINGS OF THE 4 TH INTERNATIONAL CONFERENCE ON HIGH PRESSURE BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY, 1 January 2007 (2007-01-01), pages 166 - 173, XP055458730, Retrieved from the Internet <URL:http://www.exaltedweb.com/pressure/file_579f69f1aa03c_HPBB-proceeding-paper.pdf> *
HASHIYADA, M. ; NAKAYASHIKI, N. ; FUNAYAMA, M.: "Utility validation of extraction of genomic DNA from hard tissues, bone and nail, using PrepFiler(TM) Forensic DNA Extraction Kit", FORENSIC SCIENCE INTERNATIONAL: GENETICS SUPPLEMENT SERIES, ELSEVIER IRELAND LTD, AMSTERDAM, NL, vol. 2, no. 1, 1 December 2009 (2009-12-01), AMSTERDAM, NL, pages 172 - 173, XP026791816, ISSN: 1875-1768 *
KOTROTSIOU T., CHATZIMICHALOGLOU A., NASR A., SPANDOU E., PATSATSI A., SOTIRIADIS D., VYZANTIADIS T.-A.: "A comparative study of three extraction protocols of DNA from nails: Potential use in the diagnosis of onychomycoses", MYCOSES, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING LTD., GB, vol. 60, no. 3, 1 March 2017 (2017-03-01), GB, pages 183 - 187, XP055844268, ISSN: 0933-7407, DOI: 10.1111/myc.12581 *

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