WO2021151180A2 - Anticorpo, seu uso, composição farmacêutica o compreendendo, método de diagnóstico de infecções fúngicas, kit de diagnóstico de infecções fúngicas e método para tratamento de infecções fúngicas - Google Patents
Anticorpo, seu uso, composição farmacêutica o compreendendo, método de diagnóstico de infecções fúngicas, kit de diagnóstico de infecções fúngicas e método para tratamento de infecções fúngicas Download PDFInfo
- Publication number
- WO2021151180A2 WO2021151180A2 PCT/BR2021/050007 BR2021050007W WO2021151180A2 WO 2021151180 A2 WO2021151180 A2 WO 2021151180A2 BR 2021050007 W BR2021050007 W BR 2021050007W WO 2021151180 A2 WO2021151180 A2 WO 2021151180A2
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- fungal infections
- set out
- fungal
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 title claims abstract description 50
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 60
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 60
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 29
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 28
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 25
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 22
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 19
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 14
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims description 13
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 12
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 claims description 11
- 150000004291 polyenes Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 38
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 25
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 102
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 62
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 49
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 47
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 46
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 46
- 101100116283 Arabidopsis thaliana DD11 gene Proteins 0.000 description 33
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 33
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 29
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 24
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 19
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 19
- 230000009471 action Effects 0.000 description 17
- 241000894007 species Species 0.000 description 17
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 15
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 15
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 13
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 12
- 241001522864 Cryptococcus gattii VGI Species 0.000 description 12
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 12
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 12
- OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-2-(hydroxymethyl)-6-[[(2r,3s,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-3-[(2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]methoxy]oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O1 OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 229920000926 Galactomannan Polymers 0.000 description 11
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 11
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 11
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 9
- 108010049047 Echinocandins Proteins 0.000 description 8
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 8
- 230000034994 death Effects 0.000 description 8
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 6
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 6
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 6
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 6
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 5
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 5
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 5
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 5
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 5
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 5
- DNVPQKQSNYMLRS-APGDWVJJSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-APGDWVJJSA-N 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 5
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 208000037026 Invasive Fungal Infections Diseases 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- ABJKWBDEJIDSJZ-UHFFFAOYSA-N butenafine Chemical compound C=1C=CC2=CC=CC=C2C=1CN(C)CC1=CC=C(C(C)(C)C)C=C1 ABJKWBDEJIDSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 4
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 4
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 241000425347 Phyla <beetle> Species 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 3
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000007748 combinatorial effect Effects 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 3
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 108010052221 glucan synthase Proteins 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 3
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 3
- 229960003255 natamycin Drugs 0.000 description 3
- 239000004311 natamycin Substances 0.000 description 3
- 235000010298 natamycin Nutrition 0.000 description 3
- NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N natamycin Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)/C=C/[C@H]2O[C@@H]2C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N 0.000 description 3
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 description 3
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- BLSQLHNBWJLIBQ-OZXSUGGESA-N (2R,4S)-terconazole Chemical compound C1CN(C(C)C)CCN1C(C=C1)=CC=C1OC[C@@H]1O[C@@](CN2N=CN=C2)(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)OC1 BLSQLHNBWJLIBQ-OZXSUGGESA-N 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910018626 Al(OH) Inorganic materials 0.000 description 2
- VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N Allylamine Chemical compound NCC=C VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036089 Fascin Human genes 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- 241000526686 Paracoccidioides brasiliensis Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005384 Pneumocystis Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010073755 Pneumocystis jirovecii pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 241000758405 Zoopagomycotina Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940045688 antineoplastic antimetabolites pyrimidine analogues Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009650 gentamicin protection assay Methods 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 2
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 239000003860 topical agent Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N (2R,4S)-ketoconazole Chemical compound C1CN(C(=O)C)CCN1C(C=C1)=CC=C1OC[C@@H]1O[C@@](CN2C=NC=C2)(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)OC1 XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N 0.000 description 1
- MQHLMHIZUIDKOO-OKZBNKHCSA-N (2R,6S)-2,6-dimethyl-4-[(2S)-2-methyl-3-[4-(2-methylbutan-2-yl)phenyl]propyl]morpholine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)CC)=CC=C1C[C@H](C)CN1C[C@@H](C)O[C@@H](C)C1 MQHLMHIZUIDKOO-OKZBNKHCSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VIYKYVYAKVNDPS-HKGPVOKGSA-N (2s)-2-azanyl-3-[3,4-bis(oxidanyl)phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 VIYKYVYAKVNDPS-HKGPVOKGSA-N 0.000 description 1
- OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N (3-hydroxy-1-adamantyl) 2-methylprop-2-enoate Chemical compound C1C(C2)CC3CC2(O)CC1(OC(=O)C(=C)C)C3 OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPIPASJGOJYODL-SFHVURJKSA-N (R)-isoconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1[C@@H](OCC=1C(=CC=CC=1Cl)Cl)CN1C=NC=C1 MPIPASJGOJYODL-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- AFNXATANNDIXLG-SFHVURJKSA-N 1-[(2r)-2-[(4-chlorophenyl)methylsulfanyl]-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]imidazole Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CS[C@H](C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 AFNXATANNDIXLG-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- ZCJYUTQZBAIHBS-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(2,4-dichlorophenyl)-2-{[4-(phenylsulfanyl)benzyl]oxy}ethyl]imidazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1C(OCC=1C=CC(SC=2C=CC=CC=2)=CC=1)CN1C=NC=C1 ZCJYUTQZBAIHBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCAPBUJLXMYKEJ-UHFFFAOYSA-N 1-[biphenyl-4-yl(phenyl)methyl]imidazole Chemical compound C1=NC=CN1C(C=1C=CC(=CC=1)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OCAPBUJLXMYKEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 1-{2-(4-chlorobenzyloxy)-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl}imidazole Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLGKQTAYUIMGRK-UHFFFAOYSA-N 1-{2-[(7-chloro-1-benzothiophen-3-yl)methoxy]-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl}imidazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1C(OCC=1C2=CC=CC(Cl)=C2SC=1)CN1C=NC=C1 JLGKQTAYUIMGRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHNUSOAYVQDYRE-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-2-nitro-5-[5-(phenylcarbamoyl)-2h-tetrazol-1-ium-1-yl]benzenesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].COC1=CC([N+]([O-])=O)=C(S(O)(=O)=O)C=C1[N+]1=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)N=NN1 JHNUSOAYVQDYRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 240000006409 Acacia auriculiformis Species 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108010064760 Anidulafungin Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000272478 Aquila Species 0.000 description 1
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 1
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000228405 Blastomyces dermatitidis Species 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000004020 Brain Abscess Diseases 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010020326 Caspofungin Proteins 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000033335 Cladophialophora bantiana Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000028399 Critical Illness Diseases 0.000 description 1
- 241000649026 Cryptococcus neoformans var. grubii H99 Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 101150106008 ERG11 gene Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000906736 Escherichia phage Mu DNA circularization protein N Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 229930183931 Filipin Natural products 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000224421 Heterolobosea Species 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000228402 Histoplasma Species 0.000 description 1
- 101000797762 Homo sapiens C-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101001037138 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-11 Proteins 0.000 description 1
- 101000839657 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 3-73 Proteins 0.000 description 1
- 101001138126 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-16 Proteins 0.000 description 1
- 101001138125 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-17 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100040222 Immunoglobulin heavy variable 3-11 Human genes 0.000 description 1
- 102100027822 Immunoglobulin heavy variable 3-73 Human genes 0.000 description 1
- 102100020946 Immunoglobulin kappa variable 1-16 Human genes 0.000 description 1
- 102100020945 Immunoglobulin kappa variable 1-17 Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000132887 Lomentospora prolificans Species 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 241000555676 Malassezia Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027236 Meningitis fungal Diseases 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010021062 Micafungin Proteins 0.000 description 1
- BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N Miconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- AWGBZRVEGDNLDZ-UHFFFAOYSA-N Rimocidin Natural products C1C(C(C(O)C2)C(O)=O)OC2(O)CC(O)CCCC(=O)CC(O)C(CC)C(=O)OC(CCC)CC=CC=CC=CC=CC1OC1OC(C)C(O)C(N)C1O AWGBZRVEGDNLDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWGBZRVEGDNLDZ-JCUCCFEFSA-N Rimocidine Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@H](OC(=O)[C@@H](CC)[C@H](O)CC(=O)CCC[C@H](O)C[C@@]2(O)O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)C2)C(O)=O)C1)CCC)[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](N)[C@@H]1O AWGBZRVEGDNLDZ-JCUCCFEFSA-N 0.000 description 1
- 108091006576 SLC34A2 Proteins 0.000 description 1
- 241000132889 Scedosporium Species 0.000 description 1
- 241000852049 Scedosporium apiospermum Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100038437 Sodium-dependent phosphate transport protein 2B Human genes 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 102000017168 Sterol 14-Demethylase Human genes 0.000 description 1
- 108010013803 Sterol 14-Demethylase Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 101000764570 Streptomyces phage phiC31 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 description 1
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 108010046516 Wheat Germ Agglutinins Proteins 0.000 description 1
- 238000003225 XTT reduction assay Methods 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 210000003001 amoeba Anatomy 0.000 description 1
- 229960003204 amorolfine Drugs 0.000 description 1
- 229960003348 anidulafungin Drugs 0.000 description 1
- JHVAMHSQVVQIOT-MFAJLEFUSA-N anidulafungin Chemical compound C1=CC(OCCCCC)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C(=O)N3C[C@H](O)C[C@H]3C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N3C[C@H](C)[C@H](O)[C@H]3C(=O)N[C@H](O)[C@H](O)C2)[C@@H](C)O)[C@H](O)[C@@H](O)C=2C=CC(O)=CC=2)[C@@H](C)O)=O)C=C1 JHVAMHSQVVQIOT-MFAJLEFUSA-N 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000002216 antistatic agent Substances 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002206 bifonazole Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960002962 butenafine Drugs 0.000 description 1
- 229960005074 butoconazole Drugs 0.000 description 1
- SWLMUYACZKCSHZ-UHFFFAOYSA-N butoconazole Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CCC(SC=1C(=CC=CC=1Cl)Cl)CN1C=NC=C1 SWLMUYACZKCSHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- PTOJXIKSKSASRB-UHFFFAOYSA-O candicine Chemical compound C[N+](C)(C)CCC1=CC=C(O)C=C1 PTOJXIKSKSASRB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- JYIKNQVWKBUSNH-WVDDFWQHSA-N caspofungin Chemical compound C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N3CC[C@H](O)[C@H]3C(=O)N[C@H](NCCN)[C@H](O)C[C@@H](C(N[C@H](C(=O)N3C[C@H](O)C[C@H]3C(=O)N2)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)CCCCCCCC[C@@H](C)C[C@@H](C)CC)[C@H](O)CCN)=CC=C(O)C=C1 JYIKNQVWKBUSNH-WVDDFWQHSA-N 0.000 description 1
- 229960003034 caspofungin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N chitotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](CO)O1 RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229960004022 clotrimazole Drugs 0.000 description 1
- VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N clotrimazole Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(N1C=NC=C1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M dimethylarsinate Chemical compound C[As](C)([O-])=O OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VZFRNCSOCOPNDB-AJKFJWDBSA-N domoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)\C=C\C=C(/C)[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)[C@H]1CC(O)=O VZFRNCSOCOPNDB-AJKFJWDBSA-N 0.000 description 1
- VZFRNCSOCOPNDB-UHFFFAOYSA-N domoic acid Natural products OC(=O)C(C)C=CC=C(C)C1CNC(C(O)=O)C1CC(O)=O VZFRNCSOCOPNDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 229960003913 econazole Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008686 ergosterol biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 150000002137 ergosterols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 229960001274 fenticonazole Drugs 0.000 description 1
- IMQSIXYSKPIGPD-NKYUYKLDSA-N filipin Chemical compound CCCCC[C@H](O)[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O)C[C@@H](O)C[C@@H](O)C[C@@H](O)C[C@@H](O)C[C@H](O)\C(C)=C\C=C\C=C\C=C\C=C\[C@H](O)[C@@H](C)OC1=O IMQSIXYSKPIGPD-NKYUYKLDSA-N 0.000 description 1
- 229950000152 filipin Drugs 0.000 description 1
- IMQSIXYSKPIGPD-UHFFFAOYSA-N filipin III Natural products CCCCCC(O)C1C(O)CC(O)CC(O)CC(O)CC(O)CC(O)CC(O)C(C)=CC=CC=CC=CC=CC(O)C(C)OC1=O IMQSIXYSKPIGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 150000005699 fluoropyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 201000010056 fungal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- ZXQYGBMAQZUVMI-GCMPRSNUSA-N gamma-cyhalothrin Chemical compound CC1(C)[C@@H](\C=C(/Cl)C(F)(F)F)[C@H]1C(=O)O[C@H](C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 ZXQYGBMAQZUVMI-GCMPRSNUSA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 208000036732 invasive candidiasis Diseases 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- DDFOUSQFMYRUQK-RCDICMHDSA-N isavuconazole Chemical compound C=1SC([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC=C(F)C=2)F)=NC=1C1=CC=C(C#N)C=C1 DDFOUSQFMYRUQK-RCDICMHDSA-N 0.000 description 1
- 229960000788 isavuconazole Drugs 0.000 description 1
- 229960004849 isoconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- VZFRNCSOCOPNDB-OXYNIABMSA-N isodomoic acid D Natural products CC(C=C/C=C(/C)C1CNC(C1CC(=O)O)C(=O)O)C(=O)O VZFRNCSOCOPNDB-OXYNIABMSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 229960004125 ketoconazole Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 229960002159 micafungin Drugs 0.000 description 1
- PIEUQSKUWLMALL-YABMTYFHSA-N micafungin Chemical compound C1=CC(OCCCCC)=CC=C1C1=CC(C=2C=CC(=CC=2)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C(=O)N3C[C@H](O)C[C@H]3C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N3C[C@H](C)[C@H](O)[C@H]3C(=O)N[C@H](O)[C@H](O)C2)[C@H](O)CC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](O)C=2C=C(OS(O)(=O)=O)C(O)=CC=2)[C@@H](C)O)=O)=NO1 PIEUQSKUWLMALL-YABMTYFHSA-N 0.000 description 1
- 229960002509 miconazole Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 1
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-phenylpropan-2-amine Chemical compound CNC(C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000024181 negative regulation of developmental pigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229960003483 oxiconazole Drugs 0.000 description 1
- QRJJEGAJXVEBNE-MOHJPFBDSA-N oxiconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1CO\N=C(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)\CN1C=NC=C1 QRJJEGAJXVEBNE-MOHJPFBDSA-N 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010001062 polysaccharide-K Proteins 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 229960001589 posaconazole Drugs 0.000 description 1
- RAGOYPUPXAKGKH-XAKZXMRKSA-N posaconazole Chemical compound O=C1N([C@H]([C@H](C)O)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@H]3C[C@@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(F)=CC=3)F)=CC=2)C=C1 RAGOYPUPXAKGKH-XAKZXMRKSA-N 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 244000062645 predators Species 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- OPAHEYNNJWPQPX-RCDICMHDSA-N ravuconazole Chemical compound C=1SC([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=1C1=CC=C(C#N)C=C1 OPAHEYNNJWPQPX-RCDICMHDSA-N 0.000 description 1
- 229950004154 ravuconazole Drugs 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 229960005429 sertaconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960002607 sulconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002722 terbinafine Drugs 0.000 description 1
- DOMXUEMWDBAQBQ-WEVVVXLNSA-N terbinafine Chemical compound C1=CC=C2C(CN(C\C=C\C#CC(C)(C)C)C)=CC=CC2=C1 DOMXUEMWDBAQBQ-WEVVVXLNSA-N 0.000 description 1
- 229960000580 terconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N voriconazole Chemical compound C1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=NC=C1F BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N 0.000 description 1
- 229960004740 voriconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39575—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from other living beings excluding bacteria and viruses, e.g. protozoa, fungi, plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56961—Plant cells or fungi
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Definitions
- the present invention relates to the field of diagnostic medicine, biotechnology and biopharmaceuticals. Specifically, the present invention relates to monoclonal antibodies for therapeutic use against fungal infections, as well as in the diagnostic application of fungal infections in any human or animal subject.
- Fungi are eukaryotic and saprophytic organisms with a rigid cell wall that constitute about 5 million species on the planet (1). Compared to plants, which also consist of eukaryotic cells containing a cell wall, the difference is that fungal cells have cell walls that contain chitin, as opposed to plant cells, which contain cellulose.
- Fungi show great morphological diversity, including two main morphotypes: yeasts, unicellular rounded, oval or spherical shapes, and filaments, which are presented in the form of hyphae and are multicellular.
- yeasts consist of cells that reproduce by single or multiple budding.
- the basic morphology of filamentous fungi is hyphae, which can be septate or non-septate. It is noteworthy the existence of dimorphic fungi, which can live both in the form of yeast and in the form of hypha depending on environmental variations that guide the transition between morphological states.
- the Fungi Kingdom is divided into four phyla: Ascomicota, Basidiomycota, Zygomycota and Chitridiomycota.
- the Ascomicota and Basidiomycota phyla harbor several animal and plant pathogens, including the human pathogens Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Condida sp., Aspergillus sp., Histoplasma capsulatum and Coccidioides immitis (2)
- Systemic mycoses can affect any organ of the host.
- the classification of fungal diseases in this category is dynamic and highly variable, as illustrated by the observation that species previously considered non-pathogenic are now recognized as pathogens responsible for invasive mycoses (6). These infections are very common in immunocompromised patients and are often associated with a high mortality rate (4).
- the most frequent genera involved in systemic fungal infections are Condida, Pneumocystis, Histoplasma, Aspergillus, Cryptococcus, Mucor, Rhizopus and Coccidioidomyces (Table 1).
- Table 1 Global estimates and related deaths of yeast infections per year among people with HIV
- the genus Cryptococcus is characterized by oval or spherical yeast cells surrounded by a capsule.
- the members of the genus belong to the phylum Basidiomicota (22).
- C. neoformans and C. gattii pathogenic members of the genus, have for decades been subdivided into three varieties and five serotypes based on the capsular polysaccharide antigenic determinants: C. neoformans var grubii (serotype A), C. neoformans var neoformans (serotype D) , C. neoformans (AD hybrid) and C. gattii (serotypes B and C) (23).
- C. neoformans and C. gattii pathogenic members of the genus
- C. neoformans is a saprophytic, cosmopolitan, globally distributed fungus found in bird droppings (commonly pigeons), soil and trees. It is the cause of cryptococcosis predominantly in immunosuppressed individuals.
- C. gattii is found on tree trunks in tropical and subtropical regions, causing infection, mainly in immunocompetent individuals (25).
- Human cryptococcosis occurs primarily through inhalation of desiccated yeast cells, or possibly basidiospores, which are deposited in the alveolar space ( Figure 1).
- the virulence of the infectious strain, the size of the inoculum and the individual's immunological status are preponderant factors for the progress of the disease (27).
- the infection may be asymptomatic or take a latent form, depending on the host's immune system.
- cryptococcal cells proliferate and spread to various organs, with a predilection for the brain. Under these conditions, meningoencephalitis are common (28).
- C. neoformans can survive in amoebas and can use the same pathogenic strategy in human macrophages, which in many respects provide a similar environment.
- C. neoformans can survive in amoebas and can use the same pathogenic strategy in human macrophages, which in many respects provide a similar environment.
- it has been proposed that such predation in the environmental niche has selected the cryptococcal virulence characteristics that contribute to pathogenesis in human hosts (29).
- Phagocytic cells are the body's first line of defense against pathogenic fungi. Interactions between Cryptococcus and phagocytes can result in infection control, depending on various stimulatory factors. However, phagocytes may pose a greater risk for disseminated fungal infection, as they can carry live fungi between different tissues. The individual's immune status is directly linked to the fate of this interaction. Immunocompetent individuals in general block fungal spread through local cellular mechanisms. Immunocompromised patients produce an inflammatory response that favors the replication of the pathogen (30,31), with consequent dissemination.
- Thl-type cells produce large amounts of TNF and ⁇ F ⁇ , which induce the activation of Ml-type macrophages and consequent elimination of Cryptococcus (33).
- Th2 type cells produce cytokines involved in inflammatory reactions inducing the proliferation of M2 type macrophages, which do not have antifungal activity and allow the proliferation of the fungus
- CNS Central Nervous
- the predilection of C. neoformans by the CNS is correlated with several factors.
- the CNS may represent a safer shelter for the fungus, since the brain consists of an immunologically privileged environment.
- L-3,4 dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) a diphenolic substrate used by the fungus for melanin synthesis, can facilitate its permanence in the CNS.
- Melanization of C. neoformans and C. gattii protects fungi against stress oxidative, phagocytosis, decreases the action of antifungal agents, and modifies immunity patterns (27).
- the clinical diagnosis of IFIs is difficult due to the lack of specific signs and symptoms at the onset of the disease. Laboratory tests are, therefore, essential for an outcome that results in reduced morbidity and mortality.
- Biopsy is generally not a viable option for critically ill patients with suspected IFIs such as aspergillosis, as they are more likely to have hemorrhage due to thrombocytopenia (39)
- the test has limited sensitivity and specificity (41) and it requires well-trained professionals to identify the microorganism. Despite this, microscopic observation still remains the gold standard of diagnosis for many IFIs (42).
- BDG Aspergillus galactomannan
- GXM Cryptococcus glucuronoxylomannan
- histoplasmic antigen As mentioned above, the detection of antigens allows the early identification of the IFIs, directing therapeutic strategies and evaluating the prognosis of the disease in response to therapy (38,45,46).
- BDG is found in most fungi, with the exception of Zygomycetes, Blastomyces dermatitidis, Mucoromycotin, Cryptococcus spp. and some basidiomycota
- BDG Malassezia spp.
- invasive candidiasis there is an increase in sensitivity of approximately 70% compared to blood culture (47).
- Pneumocystis pneumonia greater sensitivity (96%) and specificity (84%) are observed for BDG in serum when compared to the same analysis in candidiasis and arpergillosis, which do not exceed 80% (48).
- GM is a polysaccharide characteristic of Aspergillus spp released during growth and detected by commercially available tests in blood circulation, serum, urine and BAL during the growth of the fungus in tissue (50). As it is constitutively released by the fungus, GM can be a marker of disease prognosis and evolution and/or response to treatment. Several immunoenzymatic methods are used for detection of GM, but the most promising is the sandwich ELISA because it is the most sensitive, detecting low concentrations of GM in clinical samples (51).
- the GM test has a better result according to the patient population, for example in transplant patients or patients with hematological diseases, with a specificity around 90% when used through bronchoalveolar fluid detection (43, 52). In pediatric patients, the test can produce false positives in around 80% of cases, a fact associated with breastfeeding, bacteremia or use of antibiotics (43). In addition, GM has mixed reactions with antigens from several fungi, since the polysaccharide mannan is found in the wall of many fungi.
- PCR assays have emerged as promising experimental approaches to detect fungal pathogens.
- the use of PCR is common in clinical practice, with great application to guide preventive therapy or directed to the control of pathogens (43,50,53).
- twin PCR amplification commonly involves 18S, 5.8S and 28S regions, which encode ribosomal RNA (rRNA), and variable areas of the DNA sequence of intervening internal regions of transcribed spacers, termed ITS1 and ITS2 ( 54).
- rRNA ribosomal RNA
- the azoles are the most used antifungals in clinical practice. These drugs target the ergosterol biosynthetic pathway, acting primarily through the inhibition of a key enzyme, lanosterol
- the class of polyenes comprises more than 200 molecules, most of them being produced by the bacterium Streptomyces, however, only three have clinical application, namely: AmB, nystatin and natamycin (58). These compounds complex with ergosterol in the plasma membrane (57). Their amphiphilic structure allows them to be inserted into the lipid bilayer followed by pore formation. The formation of pores promotes the destabilization of the plasma membrane with consequent leakage of intracellular components, resulting in cell lysis (61). Polyenes bind less closely to cholesterol, the human analogue of ergosterol. The binding to cholesterol explains its high toxicity and consequent side effects (62). In this sense, AmB is widely used in systemic infections, in contrast to nystatin and natamycin, which, extremely toxic, are only used topically in infections of the vaginal and cutaneous tract (63).
- AmB has malabsorption through the gastrointestinal tract, resulting in the need for intravenous administration associated with severe adverse effects, mainly in the kidneys and liver (64). It is noteworthy that side effects such as nausea, vomiting and fever are common, but the most serious effect is nephrotoxicity (65). New AmB formulations, such as liposomal AmB complexes, minimize these side effects, but increase the cost of the drug (66,67).
- Fluoropyrimidines are synthetic structural cytokine analogs and therefore inhibit nucleic acid synthesis (68). However, these drugs are not used in isolation, due to reports of resistance mechanisms (69).
- the current gold standard for the treatment of Cryptococcus meningoencephalitis is the combination of AmB with 5- flucytosine (5-FC), as it minimizes AmB nephrotoxicity due to the administration of lower doses of the drug for a shorter period of time, in addition to reducing the development of resistance to 5-FC (64). It is noteworthy that 5-FC is not available in Brazil, which limits the access of Brazilian patients to the ideal treatment.
- Echinocandins are non-competitive inhibitors of ⁇ (1-3) - glucan synthase, an enzyme that catalyzes the polymerization of uridine diphosphate-glucose into ⁇ (1-3) glucan, one of the structural components responsible for maintaining the integrity of cell wall in fungi (70). Inhibition of ⁇ (1-3) - glucan synthase leads to destabilization of the cell wall and extravasation of intracellular components, resulting in cell lysis (71.72) . However, several fungal pathogens are partially or totally resistant to the action of echinocandins, including C. neoformans and C.
- echinocandins are a good alternative to fight other fungal infections. Most treatments that fail classical therapy with azoles or polyenes are successfully using echinocandins.
- Antifungal resistance mechanisms may include decreased effective drug concentration, changes or overexpression of drug targets, and metabolic shifts (57).
- Antibodies or immunoglobulins are glycoproteins secreted by B cells that have the ability to identify and/or neutralize foreign organisms or antigens to the host's immune system (73). Ig are formed by two protein heavy chains and two light chains, which have variable regions that participate in antigen recognition and constant regions that play the effector function of the molecule (73). [0051] The diversity of antibodies is due to the variability in the amino acid sequences of the variable region of the light and heavy chains. Complementarity determining regions (CDR) consist of hypervariable sequences that come in direct contact with the antigen to be recognized
- Antibodies can be divided into distinct classes and subclasses, the so-called isotypes (73).
- the Ig classes are IgM, IgG, IgA, IgD and IgE, with the subdivision in humans of the IgA and IgG isotypes into IgAl, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4, each exerting different effector functions (73).
- the mAbs have several applications in the fields of diagnosis and therapy, and can be used not only for infectious diseases caused by bacteria, viruses and protozoa, but also for autoimmune diseases and tumors, considering their high sensitivity and specificity (75). Over the past 30 years, nearly 80 AcM have been approved by the FDA to treat a variety of diseases, including cancer, chronic inflammatory diseases, neurodegenerative diseases, and infectious diseases.
- mAbs against fungi can mediate three different effects: protection (inhibiting growth, immunomodulating the immune system response and neutralizing the effects of the fungus on host tissue), disease enhancement (by facilitating the spread of the disease, for example, favoring the phagocytosis of C. neoformans) and neutralization of virulence (through the inhibition of the release of proteins or fungal polysaccharides) (77).
- protection inhibiting growth, immunomodulating the immune system response and neutralizing the effects of the fungus on host tissue
- disease enhancement by facilitating the spread of the disease, for example, favoring the phagocytosis of C. neoformans
- neutralization of virulence through the inhibition of the release of proteins or fungal polysaccharides
- the mAbs can also act indirectly in protection against IFI, through promotion of phagocytosis, activation of the complement system, regulation of cell cytotoxicity, and phagosome maturation (86). They can also directly affect biofilm formation (87), polysaccharide release (88), dimorphism (89), gene expression (90) and signal transduction (86).
- Immunotherapeutic studies characterized mAbs protective against several targets and different fungal species such as: ⁇ -1,3 Glucan - A. fumigatus (91), Als3 - C. albicans (92), heat-shock protein 60 - H. capsulatum ( 93), GXM - C.
- chitin a polymer of N-acetylglucosamine, being one of the main constituents of the fungal cell wall, becomes an excellent target for new therapeutic strategies.
- the present invention discloses mAb against chitin oligomers for therapeutic and diagnostic use of fungi in biological samples. Furthermore, the present invention also reveals that synergism of mAbs developed with AmB, due to the binding to chitooligomers in a murine model of infection by Cryptococcus neoformans, led to an increase in the survival of infected individuals.
- the present invention aims to provide monoclonal antibodies (AcMs) for the treatment of fungal infections and diagnosis of fungal infections.
- AcMs monoclonal antibodies
- mAbs are developed to show activity against fungal chytooligomers.
- the present invention provides monoclonal antibody comprising:
- VH CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 1, VH CDR2 as set out in SEQ ID NO: 2 and VH CDR3 as set out in SEQ ID NO: 3; and
- VL CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 4, VL CDR2 as set out in SEQ ID NO: 5 and VL CDR3 as set out in SEQ ID NO: 6;
- VH CDR1 sequence as depicted in SEQ ID NO: 7, VH CDR2 as depicted in SEQ ID NO: 8 and VH CDR3 as depicted in
- the present invention provides a pharmaceutical composition comprising said monoclonal antibody.
- the pharmaceutical composition may further comprise AmB and/or FLC as well as a pharmaceutically acceptable carrier/excipient.
- the pharmaceutical composition is for use in treating fungal infections.
- the present invention provides the use of the monoclonal antibody in the preparation of a medicine to treat fungal infections. Wherein said use can be in combination with polyenes and/or azoles preferably, preferably, AmB and/or FLC.
- the present invention provides a method of diagnosing fungal infections comprising:
- the biological sample is selected from the group comprising saliva, urine, serum, blood, bronchoalveolar lavage, CSF or peritoneal fluid, or any other biological fluids from the individual.
- the present invention provides a fungal infections diagnostic kit comprising said monoclonal antibody or said composition.
- the kit may also include instructions for use.
- the kit may comprise a means of detecting the antigen/antibody complex, which may comprise a signal generator capable of generating a detectable signal.
- the present invention provides a kit for the treatment of fungal infections, characterized in that it comprises (i) said monoclonal antibody or said composition; and
- the present invention provides a method for treating fungal infections comprising administering a therapeutically effective amount of said antibody or said composition to a subject.
- the present invention provides an antibody or a pharmaceutical composition for use in treating fungal infections in an individual.
- Figure 1 refers to infection cycle of Cryptococcus spp.
- the fungus can survive in soils and trees, in addition to infecting several animals, including pigeons, which are vehicles for the dispersion of fungal cells.
- pigeons which are vehicles for the dispersion of fungal cells.
- a lung infection is established, which can progress to diseases in the central nervous system (CNS).
- Figure 2 refers to the schematic representation of the structure of the cell wall and capsule of fungi (Modified [99]).
- Figure 3 refers to the action of the four main classes of antifungal drugs. The illustration demonstrates the action of the four main classes of antifungals. Flucytotosin shows its action in the synthesis of nucleic acids, while the other classes have their site of action in the plasma membrane or cell wall, either in the synthesis or complexing to ergosterol (Azoles and AmB, respectively) or in the synthesis of ⁇ -Glucan Synthase
- Figure 4 refers to the development of Mab through the hybridoma technique. B lymphocytes fused with myeloma cells murine cells generate hybridomas, which are immortal cells that produce antibodies, which are later selected by immunoassay techniques to choose the best clone producing the Mab under study. Figure adapted from Abbas, A. et al 2015 [073].
- Figure 5 refers to the proposed mechanisms of action of antibodies against fungi, which can be considered in three general categories involving: A) direct inhibition of growth, B) neutralization of the undesirable effects of fungal products on host tissues and C) immunomodulation and enhancement of innate immune mechanisms, which in the case of C. neoformans are not protective.
- Figure 6 refers to the curve of the last titration of antibodies found in the serum of animals through ELISA.
- IgM Immunoglobulin M
- B Serum Titer for IgG. The red, blue and green curves represent different animals. Dashed line represents the pre-immune serum cut-off line.
- Figure 7 refers to the isotyping of hybridomas AF1/CC5 and HC6/DD11. Tests were performed for each of the isotypes specified above, with predominant positivity for detecting IgM.
- Figure 8 refers to the analysis of the purification of the Mab
- Lane 1 Precision Dual Color molecular weight standard (Bio-Rad); Lanes 2 and 3: Mab AF1/CC5 and HC6/DD11, respectively; Lane 4: Precision Dual Color (Bio-Rad) molecular weight standard.
- the predominant bands in fractions 2 and 3 correspond to the heavy ( ⁇ 70kDa) and light (molecular mass ranging from ⁇ 23-24kDa) chains of IgM.
- Figure 9 refers to the saturation curve of AcM
- Figure 10 refers to the ELISA saturation curve for C. neoformans and C. albicans detectable by the MAb HC6/DD11 and AF1/CC5. In green we have C. neorformans and in blue C. albicans.
- Figure 11 refers to the Dot Blot saturation curve for C. neofonnans and C. albicans detectable by the AcM HC6/DD11 and AF1/CC5.
- Figure 12 refers to the IF analysis of the reaction of Mab HC6/DD11 and AF1/CC5 with C. albicans. The panels on the left show the fungal cells by differential contrast, while the other panels show the cells in fluorescence mode. The arrows indicate the polar marking characteristic of this type of fungal target, which was demonstrated for both mAbs, being identified even in the overlay image
- Figure 13 refers to the melanization test.
- A Visual analysis of pigmentation after fungal growth in liquid medium supplemented with L-DOPA and treated with AcM.
- B and C Graphical representation by relative densitometry of pigmentation.
- the AcM HC6/DD11 showed partial inhibition of pigmentation up to a concentration of 6.2 ⁇ g/ml (p ⁇ 0.05), while the AcM AF1/CC5 showed total inhibition up to a concentration of 6.2 ⁇ g/ml (p ⁇ 0.001) and partial at concentrations of 3.2 and 1.6 ⁇ g/ml (p ⁇ 0.05).
- Figure 14 refers to the test of ⁇ - Biofilm formation. Biofilm formation was indirectly measured by the ⁇ reduction assay. Treatment of fungi with AcM HC6/DD11 and AF1/CC5 significantly reduced biofilm formation when compared to untreated fungus (p ⁇ 0.05). Untreated fungus black bar and treated fungus white bar. A and B cells washed; C and D unwashed cells.
- Figure 15 refers to the XTT assay - Biofilm formation. Biofilm formation was indirectly measured by the XTT reduction assay. Treatment of the H99 fungus with AcM HC6/DD11 and AF1/CC5 significantly reduced biofilm formation when compared to the untreated fungus and showed similar behavior to the fungus treated with 18B7 antibody (p ⁇ 0.05). black bar untreated fungus and white bar treated fungus. A and B cells washed; C and D unwashed cells.
- Figure 16 refers to the ELISA against whole cells of C. neoformans, Giardia lamblia, lineage A549, E. coli and Staphylococcus aureus.
- C. neoformans in orange (square) Giardia lamblia, in green (triangle) lineage A549, in lilac (inverted triangle) E. coli and in black (diamond) Staphylococcus aureus. Dashed line represents the white of the reaction.
- Figure 17 refers to the representative sensorgram demonstrating the interactions of both AcM against chitotriosis.
- A AcM HC6/DD11 and
- B AF1/CC5. In green the concentration of chitotriosis is 0.06M and in red 0.1M.
- Figure 18 refers (A and B) to the representation of the synergistic fungicidal effect of Mab HC6/DD11 and AF1/CC5 added to AmB 0.1 ⁇ g/ml from the concentration of 6.2 ⁇ g/ml added to 0.1 ⁇ g/ml of AmB compared to AmB alone at a concentration of 1 ⁇ g/ml (p ⁇ 0.001).
- Figure 19 refers (A and B) to the representation of the synergistic effect of Mab HC6/DD11 and AF1/CC5 added to FLC.
- Both AcM showed potentiation of the partial fungicidal effect when added to FLC at 2 ⁇ g/ml, having their behavior similar to FLC at a concentration of 4 ⁇ g/ml alone.
- Figure 21 refers to the scFv fragment of murine and humanized antibodies.
- amino acid denotes the ⁇ -amino acid group that directly or in the form of a precursor can be encoded by a nucleic acid.
- Individual amino acids are encoded by nucleic acids consisting of three nucleotides, known as codons. Each amino acid is encoded by at least one codon. The fact that the same amino acid is encoded by different codons is known as “genetic code degeneration”.
- amino acid denotes naturally occurring ⁇ -amino acids, comprising alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine and valine.
- polypeptide can be used interchangeably, and refer to a polymer of amino acids connected by peptide bonds, regardless of the number of amino acid residues that constitute this chain.
- Polypeptides include “variants” or “derivatives” thereof, which refer to a polypeptide that includes variations or modifications, for example, substitution, deletion, addition or chemical modifications in its amino acid sequence with respect to the polypeptide of reference. Examples of chemical modifications are glycosylation, PEGlation, PEG alkylation, alkylation, phosphorylation, acetylation, amidation, etc.
- polypeptide can be artificially produced from cloned nucleotide sequences through the recombinant DNA technique or it can be prepared through a known chemical synthesis reaction.
- polypeptide of the present invention can also be understood as antigen, polyantigen or multi-epitope antigen, which consist of a junction of different epitopes that may or may not be interconnected by flexible or rigid linkers, specific to a single pathogen or for different pathogens.
- the present invention provides murine mAbs against chitin oligomers or chitooligomers produced through hybridoma technology.
- antibody is any immunoglobulin, including antibodies and their fragments, that binds to a specific epitope.
- the term includes polyclonal, monoclonal, and chimeric antibodies, the latter mentioned described in more detail in U.S. 4,816,397 and 4,816,567.
- the term "antibody(s)” includes a wild-type immunoglobulin (Ig) molecule, generally comprising four full-length polypeptide chains, two heavy (H) chains and two light (L) chains, or an Ig homologue thereof.
- Immunoglobulin molecules can be of any class (e.g., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, and IgY), or subclass (e.g., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, and IgA2). Also included within the meaning of the term "antibody” is any "antibody fragment".
- the term "monoclonal antibody” is widely recognized in the technical field and refers to an antibody that is mass produced in the laboratory from a single clone and that recognizes only one antigen.
- Monoclonal antibodies typically are prepared by fusing an antibody-producing B cell with a rapidly growing cell, such as a tumor cell (also known as an “immortal” cell).
- the resulting hybrid cell, or hybridoma is a clone capable of producing antibody indefinitely under normal culture conditions.
- hybrida is also traditionally recognized in the technical field and is understood by any person skilled in the art with general knowledge to refer to a cell produced by the fusion of an antibody-producing cell and an immortal cell, for example, a myeloma cell. This hybrid cell is capable of continuously providing antibody.
- antigen refers to an entity or fragment thereof that can induce an immune response in an organism, particularly an animal, more particularly a mammal including a human.
- the term includes immunogen and regions responsible for antigenicity or antigenic determinants.
- the fungal antigens used in the present invention can be selected from fungal cell wall components and their oligomers. More specifically, the antigens can be selected from chitobiosis, chitotriosis, chitotetraose, chitopentaose, chitohexaosis and chitoheptaosis, and any other fungal antigen that has its origin in chitin and its oligomers and is capable of inducing an immune response. Most preferably, the fungal antigen is chitotriosis.
- the fungal antigens of the present invention can be obtained from any species of the kingdom Fungi., more specifically any species of the phyla Ascomicota, Basidiomycota, Zygomycota and Chitridiomycota. Even more specifically from the genera Aspergillus, Condida, Cryptococcus and Pneumocystis. In this sense, species can be selected from the group comprising Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Condida sp., Aspergillus sp., Histoplasma capsulatum and Coccidioides immitis.
- antigens can be combined with adjuvants capable of inducing an immune response.
- Adjuvants are compounds that when administered in conjunction with an antigen increase the immune response to the antigen, however when administered alone do not generate an immune response to the antigen.
- Adjuvants can enhance the immune response by several mechanisms, including lymphocyte recruitment, B and/or T cell stimulation, and macrophage stimulation.
- Suitable adjuvants for the present invention can be selected, but not limited, from the following classes of compounds: (i) aluminum salts (alum), such as aluminum hydroxide, aluminum phosphate, aluminum sulfate. Such adjuvants can be used with or without other specific immunostimulating agents such as MPL or 3-DMP, QS21, polymeric or monomeric amino acids such as polyglutamic acid or polylysine; (ii) oil-in-water emulsion formulations, such as (a) MF59 (WO 90/14837), containing 5% squalene, 0.5% Tween 80 and 0.5% Span 85 (optionally containing various amounts of MTP-PE) formulated into submicronic particles using a microfluidizer, such as the Model 110Y microfluidizer (Microfluidics, Newton Mass.), (B) SAF, containing 10% squalane, 0.4% L121 polymer blocked by Tween 80 plurinic .5% and thr-MDP,
- antibody-producing cells (lymphocytes from the spleen) are fused with myeloma cells (malignant cells from primary bone marrow tumors), creating a hybrid cell lineage, resulting from a single fused cell hybrid (called a hybridoma) that inherited certain characteristics of lymphocyte and myeloma cell lines.
- a suitable fusing agent can be polyethylene glycol.
- the hybridoma cells prepared in this way are cultured in an appropriate culture medium, which preferably contains one or more substances that inhibit the growth or survival of unfused parental myeloma cells.
- an appropriate culture medium which preferably contains one or more substances that inhibit the growth or survival of unfused parental myeloma cells.
- the culture medium selected for hybridomas will typically include hypoxanthine, aminopterin and thymidine (HAT medium), substances that prevent the growth of cells deficient in HGPRT.
- the only type of immunoglobulin secreted by a hybridoma is specific for only one antigenic determinant, or epitope, on the antigen, a complex molecule with a multiplicity of antigenic determinants.
- the culture medium in which the hybridoma cells are grown is tested to determine the production of monoclonal antibodies directed against the antigen.
- the binding specificity of monoclonal antibodies produced by the hybridoma cells is determined by immunoprecipitation or by an in vitro binding assay such as immunoassay (RIA) or enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA).
- hybridoma cells After identifying hybridoma cells that produce antibodies with the desired specificity, affinity and/or activity, the clones can be subcloned by limiting dilution procedures and cultured by standard methods (98). Suitable media for this purpose include, for example, D-MEM or RPMI-1640 media. Furthermore, hybridoma cells can be cultured in vivo as animal ascites tumors, for example, by intraperitoneal injection of the cells into mice.
- Monoclonal antibodies produced by hybridoma are suitably separated from the culture medium, ascites fluid or serum by standard antibody purification procedures such as affinity chromatography (using, for example, protein A or protein G-Sepharose) or chromatography exchange. ions, hydroxylapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis, among others.
- the product obtained is cultivated in selective media, for example, HAT medium containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine.
- Said medium enables the proliferation of hybrid cells and prevents the growth of unfused myeloma cells that would normally continue to divide indefinitely.
- the myeloma cells used are mutants lacking hypoxanthine phosphoribosyl transferase (HPRT) and therefore cannot use the rescue pathway.
- HPRT hypoxanthine phosphoribosyl transferase
- the B lymphocyte provides genetic information for the production of this enzyme.
- B lymphocytes themselves have a limited shelf life in culture approximately two weeks
- the only cells that can proliferate in HAT media are hybrids formed from myeloma and spleen cells.
- antibody is to be understood as covering any molecule or substance having a binding domain with the required specificity.
- this term covers antibody fragments, derivatives, functional equivalents and homologues of antibodies, including any polypeptide comprising an immunoglobulin binding domain, whether natural or fully or partially synthetic. Chimeric molecules comprising an immunoglobulin binding domain, or equivalent, fused to another polypeptide are therefore included. Cloning and expression of chimeric antibodies are described in EP-A-0120694 and EP-A-0125023 and in U.S. Patent Nos. 4,816,397 and 4,816,567.
- binding fragments are (i) the Fab fragment consisting of VL, VH, CL and CHI domains; (ii) the Fd fragment consisting of the VH and CHI domains; (iii) the Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single antibody; (iv) the dAb fragment [101] which consists of a VH domain; (v) isolated CDR regions; (vi) F(ab') 2 fragments, a bivalent fragment comprising two linked Fab fragments (vii) single-chain Fv molecules (scFv), in which a VH domain and a VL domain are linked by a peptide linker that allows the two domains associate to form an antigen-binding site [102, 103] ; (viii) multivalent antibody fragments (scFv dimers, trimers and/or tetramers [104] (ix) bispecific single chain
- antibody molecule in its various grammatical forms as used herein contemplates both an intact immunoglobulin molecule and an immunologically active portion of an immunoglobulin molecule.
- Antibody molecules can be, for example, intact immunoglobulin molecules, substantially intact immunoglobulin molecules, and those portions of an immunoglobulin molecule that contain paratope, including those portions known in the art as Fab, Fab', F(ab) ') 2 and F(v), which portions are preferred for use in the therapeutic methods described herein.
- Fab and F(ab') 2 portions of antibody molecules are prepared by proteolytic reaction of papain and pepsin, respectively, on substantially intact antibody molecules by methods that are well known. See for example, US Patent No. 4,342,566 to Theofilopolous et al. Fab' antibody molecule portions are also well known and are produced from F(ab') 2 portions followed by reduction of the disulfide bonds linking the two heavy chain moieties as with mercapto-ethanol, and followed by alkylation of the resulting protein-mercaptan with a reagent such as iodo-acetamide. An antibody containing intact antibody molecules is preferred herein.
- Fully human antibodies can also be prepared by immunizing transgenic mice carrying large portions of human immunoglobulin heavy and light chains with an immunogen. Examples of such mice are well known in the art, e.g.
- Antibodies can be prepared by standard techniques, e.g. standard hybridoma techniques or by phage display.
- Antibody humanization methods are well known in the art, among the most common methods are complementarity determining region (CDR) grafting and surface modification (also known as surface delivery new). These methods have been extensively described in the literature and in patents, see eg; [110]; US Patents 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089. 5,859,205 and 6,797,492, each incorporated herein by reference.
- the antibodies of the present invention comprise the following nucleotide sequences of their light and heavy chains; or sequences having 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity thereto; or its degenerate sequences: i) HC6/DD11
- VH Heavy Chain Nucleotide Sequence
- VL Light Chain Nucleotide Sequence
- the CDRs comprise the following sequences: (i) a VH CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 1, VH CDR2 as set out in SEQ ID NO: 2 and VH CDR3 as set out in SEQ ID NO : 3; and (ii) a VL CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 4, VL CDR2 as set out in SEQ ID NO: 5 and VL CDR3 as set out in SEQ ID NO: 6 or sequences having 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity thereto, i) AF1/CC5
- VH Heavy Chain Nucleotide Sequence
- VL Light Chain Nucleotide Sequence
- the CDRs comprise the following sequences: (i) a VH CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 7, VH CDR2 as set out in SEQ ID NO: 8 and VH CDR3 as set out in SEQ ID NO: : 9; and (ii) a VL CDR1 sequence as set out in SEQ ID NO: 10, VL CDR2 as set out in SEQ ID NO: 11 and VL CDR3 as set out in SEQ ID NO: 12 or sequences having 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity thereto.
- Mutations can be made in DNA sequences encoding antibodies or peptides provided herein, such as in the CDRs, such that a particular codon is replaced by a codon encoding a different amino acid. Such a mutation is usually made by making as few changes as possible.
- a substitution mutation of this type can be made to replace an amino acid in the resulting protein in a non-conservative manner (ie, by exchanging the codon of an amino acid belonging to a grouping of amino acids having a particular size or characteristic for an amino acid belonging to another grouping) or in a conservative manner (ie, by replacing the codon of an amino acid belonging to a grouping of amino acids having a particular size or characteristic for an amino acid belonging to the same grouping).
- a conservative substitution generally causes a minor change in the structure and function of the resulting protein.
- a non-conservative switch is likely to further alter the structure, activity, or function of the resulting protein. It should be appreciated that the present invention includes sequences containing conservative exchanges that do not significantly alter the activity or binding characteristics of the resulting protein.
- polypeptides of the present invention showed reproducibility in terms of sensitivity and specificity. This suggests that the developed proteins can remain stable for long periods, maintaining their reactive capacity. It is possible that the composition of the stock buffer may have favored its stability, the use of protease inhibitors, the presence of a denaturing agent in the buffer, or even due to their amino acid sequence. Stable proteins are considered when there is interest in their diagnostic application.
- the present invention discloses pharmaceutical compositions comprising said monoclonal antibody.
- the pharmaceutical composition may comprise the combination
- compositions may further additionally comprise other antifungal agents.
- Suitable antifungal agents may be selected from the group comprising (1) a polyene antifungal agent such as Natamycin, Rimocidin, Filipin Nystatin, Amphotericin B and Candicin; (2) Imidazole antifungals such as Miconazole, Ketoconazole, Clotrimazole, Econazole, Bifonazole, Butoconazole, Fenticonazole, Isoconazole, Oxiconazole, Sertaconazole, Sulconazole, Thioconazole; (3) triazole antifungals such as FLC, itraconazole, isavuconazole, ravuconazole, posaconazole, voriconazole, terconazole; (4) allylamine antifungals such as terbinafine, amorolfine, naphthyfine and butenafine; (5) echinocandin antifungals such as Anidulafungin, Caspofungin and Micafungin.
- the additional antifungal agents are AmB or FLC.
- compositions can be formulated with pharmaceutically acceptable carriers or excipients as well as any other adjuvants and diluents known to a person skilled in the art having general knowledge in the field.
- Suitable pharmaceutically acceptable carriers comprise excipients and auxiliaries which facilitate the processing of the active compounds into preparations which can be used pharmaceutically.
- Suitable pharmaceutically acceptable carriers are well known in the art and are described, for example, in Gennaro, Alfonso, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition 1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., which is a reference text in this technical field.
- pharmaceutically acceptable excipients, carriers or stabilizers do not present toxicity to the recipient organism in the dosages and concentrations used and include buffers such as phosphate, citrate and other organic acids; antioxidants such as ascorbic acid and methionine; preservatives such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride, hexamethonium chloride, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, phenol, butyl alcohol, benzyl alcohol, alkyl parabens such as methyl- and propylparaben, catechol, resorcinol, cyclohexanol, 3-pentanol and m-cresol; proteins such as albumin, gelatin or immunoglobulins; amino acids, monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates such as glucose, mannose, sucrose, mannitol or sorbitol; polymeric excipients such as polyvinylpyrrolidone
- compositions may comprise additives in order to increase the ease of administration, the ability to be stored, resistance to degradation, bioavailability, half-life, provide isotonic preparations, etc.
- additives used for preparing pharmaceutical compositions are well known in the art.
- Pharmaceutically acceptable vehicles can be routinely selected according to the mode of administration and the solubility and stability of the peptides.
- formulations for intravenous administration may include sterile aqueous solutions which may also contain buffers, diluents and other suitable additives.
- Formulations suitable for parenteral administration include aqueous solutions of the active compounds in water-soluble form, for example, water-soluble salts.
- suspension of the active compound such as suspensions of appropriate oily injections, can be administered.
- Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils, for example sesame oil, or synthetic fatty acid esters, for example ethyl oleate or triglycerides.
- Aqueous injection suspensions which may contain substances which increase the viscosity of the suspension include, for example, sodium carboxymethylcellulose, sorbitol and/or dextran.
- the suspension can also contain stabilizers.
- compositions for oral administration may be, preferably, but not necessarily, in the form of tablets or capsules, having the size conventional in the pharmaceutical industry.
- compositions can vary widely and can be selected primarily based on fluid volumes, viscosities, among others. The particular mode of administration will be decisive. Compositions can comprise even more than one type of antibody.
- the therapeutically effective dose can be estimated initially, either in cell culture assays, eg, neoplastic cells, or in animal models, usually mice, rabbits, dogs or pigs.
- the animal model can also be used to determine the appropriate concentration range and route of administration. Information of this type can then be used to determine useful doses and routes for administration in humans.
- the amount of active ingredient that can be combined with a pharmaceutically acceptable carrier to produce a single dosage form will vary depending on the subject to be treated and the particular mode of administration.
- the amount of active ingredient that can be combined with a pharmaceutically acceptable carrier to produce a single dosage form will generally be that amount of the composition that produces a therapeutic effect. Generally, from one hundred percent, such amount ranges from about 0.01 to 99% of the active ingredient, preferably from about 0.1 to 70%, more preferably from 1 to 30% of the active ingredient in combination with a carrier pharmaceutically acceptable.
- compositions of the invention can be administered by various routes of administration including, but not limited to, oral, sublingual, nasal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intra-articular, subcutaneous, cutaneous, transdermal, but not limited to.
- the present invention discloses the use of said monoclonal antibody in the preparation of a medicine for treat fungal infections. It can be used in combination with other active antifungal agents including AmB and/or FLC.
- “combination” is meant the administration of two or more therapeutic agents to treat a disease, condition and/or disorder. Such administration encompasses co-administration of two or more therapeutic agents substantially simultaneously, such as in a single capsule with a fixed ratio of active ingredients or in multiple, separate capsules for each active agent. Furthermore, administration can be sequential.
- the antibodies of the invention can be administered in combination with others with standard drugs in the treatment of fungal infections.
- AmB which has a broad spectrum against yeasts and filamentous fungi
- FLC which has a fungistatic action against Cryptococcus.
- Both drugs have their actions on ergosterol, AmB binding directly to ergosterol forming pores and FLC binding the enzyme lanosterol 14 alpha demethylase, which is the key enzyme in the synthesis of ergosterol.
- the present invention discloses a method of diagnosing fungal infections comprising:
- Samples can be selected from the group comprising saliva, urine, serum, blood, bronchoalveolar lavage, CSF or peritoneal fluid, or any other biological fluid from the individual.
- the antibody may comprise a detectable label such as a fluorescent, radioisotopic, chemiluminescent or enzymatic label such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase or luciferase.
- a detectable label such as a fluorescent, radioisotopic, chemiluminescent or enzymatic label such as horseradish peroxidase, alkaline phosphatase or luciferase.
- fluorescent materials are known and can be used as labels. These include, for example, fluorescein, rhodamine, auramine, Texas Red, AMCA blue and Lucifer Yellow.
- a particular detection material is anti-rabbit antibody prepared in goats and conjugated to fluorescein via isothiocyanate.
- the SLC34A2 peptide or its binding partner(s) can also be labeled with a radioactive element or with an enzyme. The radioactive marker can be detected by any of the counting procedures currently available.
- the preferred isotope can be selected from 3 H, 14 C, 32 P, 35 S, 36 C1, 51 Cr, 57 Co, 58 Co, 59 Fe, 90 Y, 123 I, 125 I, 131 1, 186 Re, 99 Tc, 67 Ga, 201 Tl and 111 In.
- Enzyme markers are also useful, and can be detected by any of the currently used colorimetric, spectrophotometric, fluorospectrophotometric, amperometric, or gasometric techniques.
- the enzyme is conjugated to the selected particle by reacting with bridging molecules such as carbodiimides, diisocyanates, glutaraldehyde and the like. Many enzymes that can be used in these procedures are known and can be used. Preferred are peroxidase, ⁇ -glucuronidase, ⁇ -D-glucosidase, ⁇ -D-galactosidase, urease, glucose oxidase plus peroxidase and alkaline phosphatase.
- U.S. Patents to Nos. 3,654,090; 3,850,752; and 4,016,043 are referenced by way of example for their disclosure of alternative marking methods and material.
- the detection means may be those known in the art.
- a non-limiting example of the detection means might be a conjugate comprised of an antibody coupled to a signal generating compound capable of generating a detectable signal.
- the antibody can be attached to a solid support, which can accommodate the automation of the assay.
- Suitable solid supports include, but are not limited to, glass or plastic slides, tissue culture plates, microtiter wells, tubes, chips or particles such as Beads selected from, but not limited to, latex, polystyrene or glass beads .
- the invention can be carried out in any method known in the technical field can be used to connect the antibody to the solid support, including the use of covalent and non-covalent bonds, passive absorption or pairs of binding moieties bound to the antibody and to the support solid.
- Antigen and antibody binding can be performed in any container suitable for holding the reagents. Examples of such vessels include microtiter plates, test tubes and microcentrifuge tubes.
- Antibodies can still be used primarily to distinguish invasive fungal infections from bacterial infections in hospital settings and with high-risk and/or immunocompromised patients.
- the invention provides a fungal infections diagnostic kit comprising said monoclonal antibody or said composition and instructions for use.
- the kit may further comprise a means of detecting the antigen/antibody complex, which may comprise a signal generator capable of generating a detectable signal.
- a means of detecting the antigen/antibody complex which may comprise a signal generator capable of generating a detectable signal.
- the antibody can have a label with a detection means that allows the detection of the antibody when it is linked to its respective antigen.
- the means of detection can be a fluorescent labeling agent such as fluorescein isocyanate (FIC), fluorescein isothiocyanate (FITC) and among others, an enzyme such as horseradish peroxidase wild type (HRP), glucose oxidase or the like, a radioactive element such as 125 I or 51 Cr that produces gamma ray emissions, or a radioactive element that emits positrons that produce gamma rays after encounters with electrons present in the test solution, such as 11 C , 15 O or 13 N. Binding can also be detected by other methods, for example, via avidin-biotin complexes.
- FIC fluorescein isocyanate
- FITC fluorescein isothiocyanate
- an enzyme such as horseradish peroxidase wild type (HRP), glucose oxidase or the like
- a radioactive element such as 125 I or 51 Cr that produces gamma ray emissions
- a radioactive element
- the labeling agent can be any enzyme included in the oxidase groups (such as radish peroxidase), luciferases, peptidases (such as caspase-3), glycosidases (such as beta-galactosidase) and phosphatases (such as alkaline phosphatase).
- oxidase groups such as radish peroxidase
- luciferases such as caspase-3
- glycosidases such as beta-galactosidase
- phosphatases such as alkaline phosphatase
- the connection of the detection means is generally known to a person skilled in the art in the technical field.
- the MAbs produced can be metabolically labeled by the incorporation of amino acids containing radioisotopes in the culture medium, or they can be conjugated or coupled to a detection medium through activated functional groups.
- the diagnostic kits for fungal infections suitable for the present invention can be preferably based on the following techniques: ELISA, Lateral Flow Immunochromatographic Rapid Test and Liquid Microarrays.
- the ELISA test is an immunoenzymatic test that is based on antigen-antibody reactions that can be detected through enzymatic reactions.
- the purified antigens are fixed on an appropriate solid support (eg a polystyrene plate). Then, the sample is added to the wells and, if the sample is from a positive individual for that condition, the specific antibodies will bind to the antigens fixed on the solid support.
- an appropriate solid support eg a polystyrene plate
- the absence of staining indicates the absence of antibody in the sample against the substrate antigen.
- the lateral flow immunochromatographic test is composed of the superposition of different membranes mounted on a support adhesive card.
- the antibody is immobilized on a nitrocellulose membrane and this is overlaid by a membrane that receives the sample to be tested in the proximal region of the card.
- a membrane impregnated with compounds (conjugates) that reveal the reaction is situated at one end of the nitrocellulose membrane and an absorbent membrane in the distal region. The resulting strips are fitted to plastic devices.
- the test uses samples (serum, plasma or blood) in volume to be evaluated, immediately followed by the application of buffer.
- the buffer solution assists the migration of the conjugate and proteins contained in the sample.
- Sample migration occurs by capillary action to the area of test and control lines at room temperature. The visual reading of the test is performed after the complete migration of the sample/buffer, which usually takes up to 15 minutes. Visualization of the test and control lines indicate a positive result for the disease. Absence of visualization of the test line with simultaneous marking of the control line indicates a negative result and absence of visualization of the control line invalidates the test.
- Liquid microarrays is an assay performed in suspension with a matrix of polystyrene microspheres, with 5.6 or 6.5 micrometers in diameter that work as a solid support for the coupling of antibodies through covalent bonding.
- the detection of the antibody-antigen reaction occurs with the aid of a detection molecule (fluorophore), especially phycoerythrin.
- fluorophore a detection molecule
- Coupling occurs through a covalent bond between the carboxylated surface of the microspheres and primary amines present in antibodies.
- microspheres contain internal dyes that have individual codes that differ in the unique emission profile. Thus, it is possible to perform a simultaneous analysis of multiple analytes, as each microsphere covalently coupled to a capture reagent can be distinguished by its spectrum.
- the reading of the reaction is performed by aspiration of the microspheres in solution that are transported to a special chamber.
- the microspheres are centered in a continuous flow and individually, so that two lasers intercept a single particle at a time and precisely identify each code.
- the invention provides a kit for treating fungal infections comprising
- the invention provides a method for the treatment of fungal infections which comprises administering a therapeutically effective amount of said antibody or said composition to a subject in need thereof.
- the invention provides an antibody or composition for use in treating fungal infections in an individual in need thereof.
- Treatment can be for both human and veterinary treatment.
- the treated individual is a human being in need of treatment.
- the precise effective amount for a human individual will depend on the severity of the disease state, the individual's general health, the age, weight, and sex of the subject, diet, time and frequency of administration, the combination /drug combinations, reaction sensitivities, and tolerance/response to therapy.
- doses to be given depend on a number of factors that cannot be measured before clinical trial studies are carried out. The technician in the subject, however, knows how to arrive at appropriate doses for different treatments.
- Example 1 Cell types and growth conditions
- cells were grown in minimal medium (15 mM glucose, 10 mM MgSO 4 , 29.4 mM KH 2 PO 4 , 13 mM glycine, 3 ⁇ thiamine-HCl, pH 5.5) and kept under stirring for 2 days at 30°C. Cells were obtained by centrifugation, washed in PBS and counted in a Neubauer chamber.
- Myeloma cells lineage SP2/0 (Sp2/0-Agl4 (ATCC® CRL-1581TM) were used to form hybrid cells together with B cells from the spleen of the animal previously immunized with chitooligomers and by the fungus C. gattii. Cultivation was carried out in DMEM medium (LONZA) supplemented with 6.4 mM Glutamine / 10% FBS. The contents were transferred to a T 25cm 2 bottle (Corning®) and incubated at 37°C / 5% CO 2 until the necessary viability was achieved.
- mice of the Balb/C strain were immunized intraperitoneally (ip; 200 ⁇ l) every 15 days.
- ip the mice of the Balb/C strain
- two different strategies were used: in the first strategy, the animals were immunized via ip with C.
- gattii (1x10 6 cells/ml) previously fixed in 4% paraformaldehyde (PFA) and washed in PBS followed by two immunizations via ip with interval of 15 days with 200 ⁇ g of free chitotriosis (trimer of molecules composed of units of ⁇ -1,4-N-acetylglucosamine - ⁇ -1,4-GlcNAc), using aluminum hydroxide (Al(OH) 3 - l) as an adjuvant .5mg), respecting the ratio of 1:1 (v/v). Finally, animals were immunized intravenously (iv) with 50 ⁇ g of free chitotriosis, using PBS as vehicle.
- PFA paraformaldehyde
- the second strategy was identical to the first, except for the introduction of an additional immunization with free chitotriosis with Al(OH) 3 before the final injection, iv
- bleeding was performed at the end of the immunizations to check the serum antibody titers through indirect ELISA.
- Pre-immune serum was collected from all animals to be used as a control and cut-off of the irrigation.
- Example 3 Fusion
- splenectomy of the animals was performed to process the splenocytes for the execution of cell fusion with SP2/0 murine myelomic cells (ATCC), adapted from K ⁇ hler & Milstein 1975.
- ATCC SP2/0 murine myelomic cells
- Splenocytes and SP2/0 are fused with the aid of 50% PEG 3000-3700 solution, pre-warmed at 37°C. Subsequently, the cell homogenate was swelled in DMEM medium supplemented with 6.4 mM Glutamine / 1x Antibiotic (ATB) / 20% FCS in a proportion of 1x10 8 cells/100ml. The entire volume of the suspension was transferred to 96-well plates for cell culture (Corning) at 100 ⁇ L/well, 3 wells of the last plate were added with 6 x 10 4 SP2/0 cells that were used as a control of the selection medium.
- ATB 6.4 mM Glutamine / 1x Antibiotic
- the plates were then incubated at 37°C, 5% CO2 for 24 hours and one day after the initial incubation, 100 ⁇ L of DMEM medium supplemented with 6.4 mM Glutamine / 1x ATB / 20% FCS / hypoxanthine, aminopterin, thymidine (HAT ) 2x were added to the wells of the plates for the start of the process to select viable hybrid cells resulting from the fusion process for 14 days. The supernatant from the wells was used to perform the specific indirect ELISA assay against chitotriosis.
- Indirect ELISA (97) were performed in two moments: 1) Determination of the antibody titre in the animals' serum at the end of the immunization process; 2) Determination of polyclonal and monoclonal antibodies specific for chytooligomers produced by the hybridoma.
- Example 4.1 - ELISA for titer determination in animal serum The 96-well plate was coated with BSA-conjugated chitotriose at a concentration of 0.5 ⁇ g/ml in PBS and incubated overnight at 4°C. After incubation, the plate was incubated with PBS/1% BSA for 1 hour at 37°C, then washing was performed and the animals' serum was added at different dilutions and incubated for 2 hours at 37°C. The plate was washed three times with PBS/0.05% Tween and added peroxidase-conjugated anti-IgG and anti-murine IgM and incubated 2 hours at 37°C.
- TMB Tetramethylbenzidine
- Example 4.2 - ELISA for determination of polyclonal and monoclonal antibody [00206] The same procedure described above was performed, with the difference that the primary antibody of the reaction came from the culture supernatant of the hybridomas.
- Example 5 Cloning of polydonal hybridomas The cloning of polydonal hybridomas positive in the ELISA assay described in the previous item is carried out by counting the cells in a Neubauer chamber so that the dilution of this cell suspension has a concentration of 1 at the end. cell/well in a final volume of 200 ⁇ l. The culture is incubated at 37°C, 5% CO2 for 14 days and clonality (monoclonal or polyclonal) is observed from the 5th day. The cultures that remain viable and monoclonal are again submitted to the ELISA assay to verify the specificity against the determined antigen.
- Example 6 Isotyping of selected clones
- the isotyping of clones previously selected by ELISA was done using the commercial kit - Rapid ELISA Mouse mAb Isotyping Kit - ThermoFisher. For this, a 1:10 dilution of the clones' culture supernatant was made and added to the specific test plate.
- the kit determines the presence of the murine isotypes IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA and IgM present in the sample quickly and efficiently.
- RNA extraction was made of each monoclonal antibody from a T-25 culture bottle, in which only the cells were collected by means of centrifugation (400 g for 10 minutes at room temperature). The pellet of each monoclonal antibody was used to extract total RNA with the commercial kit RNeasy Mini Kit (Qiagen), following the protocol established by the manufacturer.
- PCR was performed with the oligonucleotide primers selected from the publication by Zhou et al. 1994 for being described as universal primers for murine variable heavy chain (VH) and variable light chain (VL) as described in table 2.
- VH murine variable heavy chain
- VL variable light chain
- the RT-PCR was performed under the following conditions: initial denaturation 94°C/5 minutes, denaturation 94°C/2 minutes, annealing 48°C/1 minute, extension 72°C/1 minute and 30 seconds repeated 30 times and final extension 72°C/1 minute for VH chain and the same conditions for VL, but with annealing temperature of 55°C/1 minute.
- Example 9 DNA sequencing of selected monoclonal antibodies
- DNA sequencing of selected monoclonal antibodies was carried out according to the protocol described in the commercial kit BigDye Terminator v3.1 kit (Life Technologies) and for this the same primers were used described in the PCR (example 8).
- the identity of each sequencing was evaluated using the BLAST tool - Basic Local 54 Alignment Search Tool (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast), between the VH and VL sequences of the selected hybridomas.
- the sequences were analyzed using the SeqMan program (DNAStar) and for identification of CDR1, 2 and 3, the gene sequences were submitted to analysis by the IgBlast tool (IgBlast Tool NCBI NIH; https://www.ncbi.nlm.nih.gov /igblast/).
- Example 10 Purification of Monoclonal Antibodies (AcMs) The purification of mAbs took place in three phases: precipitation by PEG, size exclusion chromatography and ion exchange chromatography in the high performance liquid chromatography system (AKTA Purifier 10; GE Healthcare).
- PEG precipitation was performed by submitting the culture supernatant to precipitation with polyethylene glycol (PEG 6000) at a concentration of 4% (w/v). The suspension was kept under stirring for three hours at room temperature (RT) and then the material was centrifuged (1600 xg; 30 minutes; 4°C).
- PEG 6000 polyethylene glycol
- the SPR experiments were performed using the BIACORE X system (GE Healtcare) equipped with a CM5 sensor chip.
- the ligands tested were MAb AF1/CC5 and HC6/DD11 (described later in Results), to which they were immobilized using amine coupling chemistry.
- the surfaces of the two flow cells were activated for 7 min with a 1:1 mixture of 0.1 M NHS (N-hydroxysuccinimide) and 0.1 M EDC (3-(N,N-dimethylamino) propyl-N-ethylcarbodiimide ) at a flow rate of 10 ⁇ l / min.
- Ligands were immobilized at a concentration of 100 ⁇ g/ml in 10 mM sodium acetate, pH 5.0. Ester residues were deactivated with a 7 min injection of 1 M ethanolamine, pH 8.0. [00222] To collect kinetic binding data, the analyte BSA- (G1CNAC) 3 was injected over the two flow cells at concentrations of 0.1 and 0.6 nM at a flow rate of 5 ⁇ l / min and at a temperature 25°C using HBS-EP buffer (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 Mm EDTA and 0.005% P20) pH 7.4.
- HBS-EP buffer 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 Mm EDTA and 0.005% P20
- 96-well plates were coated with chitotriose-BSA at a concentration of 0.5 ⁇ g/ml in PBS and incubated overnight at 4°C, followed by incubation with PBS/BSA 1% for 1 hour at 37°C . Subsequently, washing (PBS/Tween 0.05%) was performed and a solution of wheat germ lectin (WGA) conjugated to peroxidase at a concentration of 25 ⁇ g/ml was added, used as reaction control. Cold WGA was used for the test system in order to block the chitotriosis-BSA binding site and the MACs to verify if there would be binding to chitotriosis-BSA.
- WGA wheat germ lectin conjugated to peroxidase
- Example 13.1 Indirect ELISA against intact cells adapted from Stearns et al. 1999
- C. neoformans (H99) Condida albicans, Giardia lamblia, A549 human pulmonary lineage cell (ATCC), Escherichia coli and Staphylococcus aureus were used.
- Cells were washed in PBS three times and suspended at the density of 10 7 cells/ml in poly-L-Lysine solution (5 ⁇ g/ml in PBS) for overnight adhesion at 4°C.
- the plates were blocked with PBS/5% BSA and incubated for 1 hour at 37°C and then incubated for 2 hours at 37°C with the anti-chito-oligomer mAb at a concentration of 50 ⁇ g/ml and diluted until 5 ⁇ g/ml. Subsequently, washing with PBS/Tween 0.05% was performed 3 times and anti-murine IgM peroxidase diluted 1:5000 was added and incubated for 2 hours at 37°C. The plates were again washed and TMB was added and incubated for 30 minutes at 37°C.
- C .neoformans (H99) and Candida albicans at the density of 10 7 cells/ml up to 10 cells/ml were suspended in poly-L-Lysine solution (5 ⁇ g/ml in PBS) and 10 ⁇ 1 were loaded on membranes of nitrocellulose. Subsequently, the same steps described for the ELISA were followed, but the concentration of 25 ⁇ g/ml of the anti-chitooligomer MAb was used. The membrane was cut and deposited in 96-well plates to which it was added 50 ⁇ 1 TMB and incubated for 30 minutes at 37°C. The volume was removed and transferred to a new plate, to which the stop reaction with 1N HCl was added and read in a spectrophotometer at 450nm.
- Example 13.3 Evaluation of anti-chitooligomer mAb activity against intact cells by immunofluorescence adapted from Rodrigues et al. 2008 [00229]
- Fungal cells (10 6 cells) were fixed (4% cacodylate paraformaldehyde buffer; 30 min) and subsequently blocked (PBS/1% BSA; lhora). Then, they were incubated with the anti-chito-oligomer mAb (25 ⁇ g/mL; 1h at 37°C). After washing with PBS, cells were incubated with Alexa 568-conjugated anti-mouse IgM antibody (SIGMA; 1:1000).
- SIGMA Alexa 568-conjugated anti-mouse IgM antibody
- C. neoformans cells were cultured in RPMI 1640 buffered with MOPS at pH 7 at the density of 10 5 cells/well in 96-well plates in the final volume of 200 ⁇ l.
- the systems were supplemented with AcM at the concentration (25 to 0.05 ⁇ g/ml), AmB (1 to 0.1 ⁇ g/ml) or FLC (8 to 2 ⁇ g/ml), alone or in combination.
- AcM the concentration (25 to 0.05 ⁇ g/ml)
- AmB 1 to 0.1 ⁇ g/ml
- FLC 8 to 2 ⁇ g/ml
- C. neoformans (H99 and Cap67) and Condida albicans were cultivated in Sabouraud medium for 24 hours at 30°C. Cell suspensions were centrifuged for 5 minutes at 3000g, washed three times in PBS and suspended in minimal medium (20 mg/ml thiamine, 30 mm glucose, 26 mM glycine, 20 mM MgSO4, and 58.8 mM KH2PO4).
- the metabolic activity of viable cells in the two assays was evaluated by the method based on the reduction of XTT (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino) carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide) in spectrophotometer at 492nm wavelength.
- variable region sequences of the HC6/DD11 and AF1/CC5 antibodies were obtained by sequencing and translated to obtain the corresponding amino acid sequences using the bioinformatics tool ExPASy Translate tool (https://web.expasy.org/ translate/).
- the humanization of the sequences were performed using the IMGT database (http://imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/Dom ainGapAlign.cgi) to obtain the most identical human germline repertoire (percent identity) for the VH and VL chains.
- Example 16 Development of murine monoclonal antibody against chitooligomers through hybridoma technology
- Example 16.1 Titration of animals immunized against C. gattii and chitotriosis Two immunization strategies were developed and, in both, bleeding was performed at the end of the last immunization to check the serum antibody titers ( Figure 6). Regardless of the strategy adopted, a titer of 1:3200 was obtained for both IgG and IgM measured in serum, being used to screen for chitotriosis-BSA. To establish the cut-off line, the absorbance values obtained in reactions with pre-immune serum were used. The three animals were used to proceed with the fusion.
- Example 16.2 Selection of Mab-producing hybridomas by ELISA [00241] 3 fusions were performed from the splenectomy of the 3 animals. Splenocytes were fused with Sp2/0 and 172 hybridomas were obtained, 4 of which produced reactive antibodies against chitotriosis.
- the four hybridomas producing polyclonal antibodies were cloned, generating 541 hybridomas producing Mab.
- 58 hybridomas reactive against chitotriosis were selected, and finally, the 10 hybridomas that showed the highest response (optical density - O.D. ⁇ 3x cut-off) in ELISA tests using chitotriosis-BSA as primary antigen were selected for further studies.
- the hybridomas producing the MAbs AF1/CC5 and HC6/DD11 had their RNA extracted to generate a cDNA and consequently be amplified through PCR the VH and VL of both MAbs. After amplification, the chains were sequenced and had their CDRs identified using a Kabat numbering system, which is a scheme for the numbering of amino acid residues in antibodies based on variable regions. With the CDR identified, the alignment was performed using the immunoglobulin database, IgBlast, to verify the identity of the mAbs with the immunoglobulins deposited in GeneBank.
- PL is a lysine polymer that confers positive charge on the surface of bottles, plates or slides that serve as a cell substrate.
- Fungi have cell walls composed of chitin, which is made up of long chains of N-acetylglucosamine, a polymer that has a negative charge.
- C. neoformans in addition to chitin, has a polysaccharide capsule consisting predominantly of glucuronoxylomannan and galactoxylomannan, which also have a negative charge in their structure.
- PL was used to change the charge on the plaque (positive) and consequently manage to adhere the cells to this surface.
- Example 16.6 - Dot Blot using PL The principle used in this assay was the same as the ELISA and was based on the load presented by the fungi. As the nitrocellulose membrane has a negative charge, PL was used to confer a positive charge on the fungus and consequently have membrane binding.
- AF1/CC5 ranged from 0.2 to 25 ⁇ g/ml.
- L-DOPA was used as a substrate for melanization.
- Pigmentation in C. neoformans was visually assessed by observing brown to black sedimentation at the bottom of the 96-well plates. To document pigmentation or its inhibition, plaques were photographed on white surfaces (light background) to allow for differentiation between pigmented and unpigmented populations. It should be noted that all doses of AcM showed fungal growth, but with negative pigmentation or partial inhibition.
- Example 16.11 - Minimum Inhibitory Concentration Assay The fungicidal activity of mAbs was tested through the MIC test. None of the mAbs showed a fungicidal effect, unlike the controls with 1 ⁇ g/ml of AmB and 8 ⁇ g/ml of FLC ( Figure 18 and 19). It was evaluated whether the association of mAbs with AmB or FLC would potentiate antifungal effects at sub-inhibitory concentrations, thus, the 0.1 ⁇ g/ml concentrations of AmB and 4 and 2 ⁇ g/ml for FLC in combination with different concentrations of mAbs. To assess whether there was a combinatorial effect of the mAbs with the drug, the action of the drug alone was used as a basis.
- mice were lethally challenged with an ip inoculum of 1 x 10 5 yeast C. neoformans strain H99 cells. After 2 hours, they were treated with PBS (negative control), 85 ⁇ g/animal of AcM (HC6/DD11) alone, 0.25 or 2.5mg/kg of AmB alone and synergistically the AcM maintaining the concentrations test. Treatments were repeated twice more with an interval of 10 days. [00265] The animals infected with C.
- Example 16.13 - Comparative Modeling In order to humanize murine Mabs, an alignment of light and heavy chains of MAbs HC6/DD11 and AF1/CC5 against the IMGT human antibody database was performed (http:// imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi). The sequences that showed greater homology to HC6/DD11 heavy and light chain were, respectively, IGHV3-11*01 and IGKV1-16*01, while for AF1/CC5 they were, respectively, IGHV3-73*01 and IGKV1-17* 03. Amino acids that differed between murine and human sequences were replaced by amino acids present in the framework of human antibodies.
- Warfare and defense The host response to Cryptococcus infection. Fungal Biol Rev [Internet]. 2018;32(2):35-51. Available from: https://doi.org/10.1016 /j.fbr.2017.09.002.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Botany (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A presente invenção fornece anticorpos monoclonais contra oligômero de quitina através da técnica de hibridomas. Os referidos anticorpos podem ser utilizados como ferramentas para diagnóstico e tratamento de infecções fúngicas. Também são reveladas composições farmacêuticas e kits para tratamento de infecções fúngicas compreendendo os referidos anticorpos. Ademais são revelados ainda um método de diagnóstico de infecções fúngicas utilizando os referidos anticorpos e o seu uso na preparação de um medicamento para tratar infecções fúngicas.
Description
ANTICORPO, SEU USO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA O COMPREENDENDO, MÉTODO DE DIAGNÓSTICO DE INFECÇÕES FÚNGICAS, ΚΓΓ DE DIAGNÓSTICO DE INFECÇÕES FÚNGICAS E MÉTODO PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES FÚNGICAS CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se ao campo da medicina diagnóstica, da biotecnologia e biofármacos. Especificamente, a presente invenção refere-se anticorpos monoclonais para uso terapêutico contra infecções fúngicas, bem como na aplicação diagnóstica de infecções fúngicas em qualquer indivíduo humano ou animal.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] Fungos são organismos eucarióticos e saprófitos com uma parede celular rígida que constituem cerca de 5 milhões de espécies no planeta (1). Em comparação com plantas, que também consistem de células eucarióticas contendo parede celular, ressalta-se a diferença de que as células fúngicas têm paredes celulares que contêm quitina, ao contrário de células de plantas, que contêm celulose.
[003] Os fungos apresentam grande diversidade morfológica, incluindo dois morfotipos principais: as leveduras, formas unicelulares arredondadas, ovais ou esféricas, e os filamentos, que se apresentam na forma de hifa e são multicelulares. As leveduras consistem de células que se reproduzem por brotamento único ou múltiplo. Os fungos filamentosos apresentam como morfologia básica a hifa, que pode ser septada ou não septada. Ressalta-se a existência de fungos dimórficos, que podem viver tanto na forma de levedura quanto na forma de hifa dependendo de variações ambientais que guiam a transição entre os estados morfológicos.
[004] O Reino Fungi é dividido em quatro filos: Ascomicota, Basidiomicota, Zigomicota e Quitridiomicota. Os filos Ascomicota e Basidiomicota abrigam vários patógenos de animais e plantas, incluindo os
patógenos humanos Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Condida sp., Aspergillus sp., Histoplasma capsulatum e Coccidioides immitis (2)
[005] As micoses sistémicas, quadros que resultam das infecções fúngicas invasivas (IFI), representam uma das principais causas de morte de humanos no mundo (3). De acordo com dados apresentados pelo Fundo Global de Ações contra Infecções Fúngicas (GAFFI, da denominação em inglês Global Action Fund for Fungai Infections), mais de 300 milhões de pessoas de todas as idades sofrem de alguma infecção fúngica grave a cada ano no globo. É estimado que, nesse grupo, mais de 1,6 milhões de pessoas morrerão, sendo essas estatísticas comparáveis às observadas para tuberculose e 3 vezes maior que a malária.
[006] O aumento da incidência atual de IFT é em grande parte resultado de uma escalada substancial nas últimas décadas de condições imunossupressoras, como a infecção pelo HIV e o uso de fármacos indutores de imunossupressão (4). Além disso, o uso de antineoplásicos e antibióticos de amplo espectro, além de intervenções médicas invasivas (5), também contribui diretamente com o aumento das IFIs.
[007] As micoses sistémicas podem afetar qualquer órgão do hospedeiro. A classificação de doenças fúngicas nessa categoria é dinâmica e altamente variável, como ilustrado pela observação de que espécies anteriormente consideradas não patogênicas são agora reconhecidas como patógenos responsáveis por micoses invasivas (6). Essas infecções são muito comuns em pacientes imunocomprometidos e frequentemente estão associadas a uma elevada taxa de mortalidade (4). Os gêneros mais frequentes envolvidos nas infecções fúngicas sistémicas são Condida, Pneumocystis, Histoplasma, Aspergillus, Cryptococcus, Mucor, Rhizopus e Coccidioidomyces (Tabela 1).
Tabela 1: Estimativas globais e mortes relacionadas de infecções por fungos por ano entre pessoas com HIV
[008] Os fungos patogênicos para os seres humanos existem em muitos habitats naturais, mas as IFIs são geralmente observadas em climas tropicais e subtropicais (7,8). Especula-se que o aumento das mudanças climáticas pode ter alterado a distribuição das doenças e, consequentemente, levado ao aparecimento de fungos patogênicos em novas áreas geográficas (7). Por exemplo, o Nordeste dos Estados Unidos registrou 100 casos de doença por C. gattii pertencente ao tipo molecular VGII, normalmente encontrado na América do Sul (9). Entretanto, esse surto foi registrado em uma região temperada dos EUA (10). Cabe ressaltar que os fungos são armados com um arsenal de características que facilitam a adaptação e colonização de novos nichos e, consequentemente, a capacidade de sobreviver às condições fisiológicas do hospedeiro e de alternar entre diferentes estados morfológicos (11). Dentre as adaptações mais comuns em fungos patogênicos está a capacidade de crescer a 37°C (12), mudanças de forma e tamanho, capacidade de escapar de macrófagos (13,14), melanizar e formar biofilme
(15).
[009] Cabe destacar que espécies pertencentes aos gêneros Aspergillus, Candida, Cryptococcus, e Pneumocystis são responsáveis por aproximadamente 90% dos casos de morte de humanos (11). Estimativas globais recentes registram mais de 11 milhões de infecções fúngicas associadas a pacientes HIV-positivos, resultando em mais de 500 mil mortes
anuais (Tabela 1). [0010] Segundo o Centro para Controle e Prevenção de Doenças (CDC, EUA), os fungos são os agentes mais frequentemente associados à mortalidade por meningite microbiana. Estima-se que cerca de um milhão de casos de meningite causadas pelo fungo C. neoformans ocorrem anualmente, resultando em mais de duzentas mil mortes 3 meses após a infecção (16).
[0011] Apesar da alta taxa de mortalidade associada a diferentes tipos de infecções fúngicas, as estratégias terapêuticas recomendadas mantêm-se quase as mesmas desde a década de 1950 quando comparadas aos tratamentos de infecções bacterianas (18). Atualmente, existem quatro classes principais de fármacos antifúngicos: os azóis, os polienos, análogos de pirimidinas e as equinocandinas. Várias outras classes, como, morfolinas e alilaminas, são usadas apenas como agentes tópicos devido à baixa eficácia ou efeitos adversos graves, quando administradas sistemicamente.
[0012] Porém, o uso intensivo e indiscriminado de medicamentos pertencentes a essas classes propiciou a seleção de isolados multirresistentes a fármacos antifúngicos (19), que apesar de raro tem apresentado destaque, principalmente no caso de espécies de Condida. O surgimento de isolados multirresistentes a fármacos antifúngicos também representa, neste momento, uma grande ameaça global à saúde pública. Um exemplo deste grave problema foi demonstrado no início de 2009, quando foi descrita no leste da Ásia, uma espécie de Condida resistente ao Fluconazol (FLC), a Condida auris. Atualmente, esta espécie encontra-se amplamente difundida nos cinco continentes e é reconhecidamente descrita por exibir um perfil multirresistente a fármacos (20).
[0013] O padrão ouro atual para o tratamento da meningoencefalite causada por Cryptococcus spp é a combinação do poliênico anfotericina B (AmB) com 5-flucitosina. A AmB apresenta nefrotoxicidade acentuada e requer administração intravenosa, o que limita seu uso em regiões sem
infraestrutura médica adequada. Estima-se que um tratamento intravenoso de 15 dias com AmB lipossomal custe entre € 10.000 e € 20.000, na Europa (21) e no Brasil, esse valor pode atingir um custo mensal de R$250.000,00 por paciente (Fonte: Centro Colaborador do SUS para Avaliação de Tecnologias e Excelência em Saúde - CCATES).
[0014] Nesse sentido, a busca de alternativas que diminuam os efeitos adversos dos tratamentos antifúngicos, o uso de anticorpos monoclonais em modelos de infecções fúngicas é considerado altamente promissor, visto que pode se ligar com alta especificidade a antígenos expressos em fungos nos fluidos corporais do paciente, sendo ainda ferramentas-chave no campo de diagnóstico clínico.
[0015] O gênero Cryptococcus é caracterizado por células leveduriformes ovais ou esféricas circundadas por uma cápsula. Os membros do gênero são pertencentes ao filo Basidiomicota (22). C. neoformans e C. gattii, membros patogênicos do gênero, por décadas foram subdivididos em três variedades e cinco sorotipos baseados nos determinantes antigênicos do polissacarídeo capsular: C. neoformans var grubii (sorotipo A), C. neoformans var neoformans (sorotipo D), C. neoformans (híbrido AD) e C. gattii (sorotipos B e C) (23). Atualmente, há em curso uma proposta de reclassificação de C. neoformans e C. gattii em sete espécies, com base em evidências moleculares (24).
[0016] C. neoformans é um fungo saprófito, cosmopolita, globalmente distribuído e encontrado em excrementos de pássaros (comumente pombos), no solo e em árvores. Trata-se do causador da criptococose predominantemente em indivíduos imunossuprimidos. C. gattii é encontrado em troncos de árvores de regiões tropicais e subtropicais causando a infecção, principalmente, em imunocompetentes (25).
[0017] O balanço entre sistema imune do hospedeiro e a virulência do fungo está diretamente relacionado com o desenvolvimento ou não da doença.
Cabe destacar, que o estabelecimento da infecção se dá pela exposição do homem aos ambientes contaminados pelo fungo, visto que há similaridade entre os isolados clínicos e ambientais em indivíduos acometidos pela criptococose (26).
[0018] A criptococose humana ocorre primariamente através inalação de células de levedura dessecadas, ou possivelmente basidiósporos, que são depositadas no espaço alveolar (Figura 1). A virulência da cepa infecciosa, o tamanho do inóculo e o estado imunológico do indivíduo são fatores preponderantes para o progresso da doença (27).
[0019] A infecção pode ser assintomática ou assumir uma forma latente, dependendo do sistema imune do hospedeiro. Em contraste, em indivíduos imunocomprometidos, as células criptocócicas proliferam e se disseminam para diversos órgãos, com predileção pelo cérebro. Nessas condições, são comuns os quadros de meningoencefalite (28).
[0020] Cabe ressaltar que a interação entre C. neoformans e predadores ambientais é vista como um fator importante para a evolução do fungo como um patógeno intracelular facultativo bem-sucedido. C. neoformans pode sobreviver em amebas e pode utilizar a mesma estratégia patogênica em macrófagos humanos, que em vários aspectos fornecem um ambiente similar. Desta forma, foi proposto que tal predação no nicho ambiental tenha selecionado as características de virulência criptocócica que contribuem para a patogênese em hospedeiros humanos (29).
[0021] As células fagocíticas são a primeira linha de defesa do organismo contra fungos patogênicos. As interações entre Cryptococcus e fagócitos podem resultar em controle da infecção, dependendo de vários fatores estimulatórios. Entretanto, fagócitos pode promover um maior risco para infecção fúngica disseminada, uma vez que podem carrear fungos vivos entre tecidos distintos. O estado imunológico do indivíduo está diretamente ligado ao destino dessa interação. Indivíduos imunocompetentes em geral
bloqueiam a disseminação fúngica através de mecanismos celulares locais. Pacientes imunocomprometidos produzem uma resposta inflamatória favorável à replicação do patógeno (30,31), com consequente disseminação.
[0022] A progressão da doença é diretamente relacionada aos perfis Thl e Th2 e consequente polarização de macrófagos M1/M2. (32). Células do tipo Thl produzem grandes quantidades de TNF e ΙΝFγ, que induzem a ativação de macrófagos do tipo Ml e consequente eliminação do Cryptococcus (33). Células do tipo Th2 produzem citocinas envolvidas em reações inflamatórias induzindo a proliferação de macrófagos do tipo M2, que não apresentam atividade antifúngica e permitem a proliferação do fungo
(30).
[0023] Cabe ressaltar que existem diversas moléculas produzidas por Cryptococcus que estimulam a resposta de macrófagos do tipo M2 (34,35). Dentre essas, destacam-se arginase, urease e lacase (30). Estes macrófagos representam papel central na disseminação da criptococose, já que o Cryptococcus pode usar essas células como nicho de replicação e sair dos macrófagos através de exocitose não lítica, dentre outros mecanismos (14). Devido a essa característica, foi proposta uma hipótese de que os macrófagos poderiam atuar como “Cavalos de Tróia”, levando células intemalizadas de C. neoformans a atravessar a barreira hematoencefálica e atingir o Sistema
Nervoso Central (SNC) (36). [0024] A predileção do C. neoformans pelo SNC se correlaciona com diversos fatores. O SNC pode representar para o fungo um abrigo mais seguro, visto que a o cérebro consiste de ambiente imunologicamente privilegiado. Além disso, de L-3,4 dihidroxifenilalanina (L-DOPA), um substrato difenólico utilizado pelo fungo para síntese de melanina, pode facilitar sua permanência no SNC.. A melanização de C. neoformans e C. gattii protege os fungos contra estresse oxidativo, fagocitose, diminui a ação de antifungicos, e modifica padrões de imunidade (27).
[0025] O diagnóstico clínico de IFIs é difícil devido à falta de sinais e sintomas específicos no início da doença. Testes laboratoriais são, portanto, fundamentais para um desfecho que resulte na redução de morbidade e mortalidade.
[0026] As características ideais para o desenvolvimento de plataformas de diagnóstico incluem detecção precoce do patógeno, boa sensibilidade, capacidade de obter discriminação em nível de espécie, detecção de uma ampla gama de patógenos (capacidade múltipla), confiabilidade, precisão quantitativa (capacidade de distinguir entre doença e colonização) e ser não invasiva. Nenhum dos testes diagnósticos padrão atende a todos esses critérios e, de fato, muitos estão ausentes em vários níveis.
[0027] A identificação de patógenos fúngicos ainda está baseada na visualização direta do organismo por microscopia óptica, histopatologia de tecidos infectados e no cultivo do fungo (17,37). Apesar da cultura fúngica clássica e técnicas de sorologia tradicionais serem relevantes e necessárias, se fazem necessárias detecção e identificação de fungos por técnicas moleculares (anticorpos e antígenos, PCR e sequenciamento) que possibilitem com rapidez e eficácia o diagnóstico, complementando os métodos tradicionais baseados na cultura.
[0028] Uma das maiores limitações do uso de cultura no diagnóstico de IFI está ligada ao tempo de obtenção de resultados, visto que vários patógenos, em especial os fungos filamentosos, têm crescimento lento. Dependendo das características do inóculo e do crescimento fúngico, a cultura requer pelo menos 2 a 3 dias de incubação e, para algumas espécies, dias a semanas. Culturas positivas de fontes não estéreis, incluindo espécimes de lavado bronco alveolar (BAL), também requerem interpretação cautelosa para diferenciar entre colonização fúngica e isolamento do verdadeiro agente invasivo. Finalmente, as hemoculturas fúngicas, embora não invasivas e
altamente específicas, requerem incubação prolongada e podem ser igualmente insensíveis, apresentando resultados confiáveis em 50% de casos ligados a Condida spp. e 10% de casos ligados a Aspergillus spp. (38). [0029] No caso de meningites fúngicas, o problema pode ser ainda mais grave, pois um diagnóstico impreciso ou tardio pode decretar a morte do paciente. Cabe ressaltar que em alguns casos se faz necessária a biópsia para estabelecer um diagnóstico preciso, já que as culturas de líquido céfalo raquidiano são frequentemente não diagnosticadas, especialmente em casos com abscesso cerebral fúngico (39). Na criptococose, esses problemas podem ser facilmente contornados com o uso do teste CrAg (do inglês Serum Cryptococcal Antigen), que detecta antígeno fúngico no soro do paciente. Esse teste consiste de um método eficiente e barato para prevenção de morte em pessoas infectadas com HIV com contagens de linfócitos T CD4 ≤100/μL em regiões com restrições sócio-econômicas (40).
[0030] A biópsia geralmente não é uma opção viável para pacientes gravemente doentes e com suspeita de IFIs como a aspergilose, visto que apresentam uma maior probabilidade de apresentarem hemorragia devido a trombocitopenia (39) O teste apresenta sensibilidade e especificidade limitadas (41) e requer profissionais bem treinados para identificação do microrganismo. Apesar disso, a observação microscópica ainda se mantém como padrão ouro de diagnóstico para muitas IFIs (42).
[0031] A identificação de antígenos fúngicos em amostras de pacientes evoluiu substancialmente na área de diagnóstico de IFIs. Essas moléculas, em grande parte, incluem componentes da parede celular (Figura
2). A detecção dessas estruturas pode sugerir ocorrência de IFIs e, frequentemente, são detectáveis antes que sinais clínicos ou sintomas da doença estejam presentes (43). Dentre esses biomarcadores destacam-se (1,
3)-β-D-glucana (BDG), galactomanana de Aspergillus (GM), glucuronoxilomanana de Cryptococcus (GXM) e antígeno histoplasmínico.
[0032] Conforme mencionado acima, a detecção de antígenos permite identificar de forma precoce as IFIs, direcionar estratégias terapêuticas e avaliar o prognóstico da doença em resposta a terapia (38,45,46). BDG é encontrado na maioria dos fungos, com exceção de Zigomicetos, Blastomyces dermatitidis, Mucoromycotina, Cryptococcus spp. e alguns Basidiomycota
(e.g., Malassezia spp.) (45). [0033] Além da detecção de BDG possuir especificidade limitada para determinados patógenos fúngicos e variar de acordo com o organismo, há vantagens claras quando comparadas com outras técnicas. No caso da candidíase invasiva, há aumento da sensibilidade em aproximadamente 70% em comparação com a hemocultura (47). Em casos de pneumonia por Pneumocystis, são observadas maior sensibilidade (96%) e especificidade (84%) para BDG no soro quando comparadas a mesma análise em candidíase e arpergilose, as quais não ultrapassam 80% (48). Cabe destacar, que esses kits diagnósticos já estão disponíveis no mercado e usados para avaliar casos de pneumonia por Pneumocystis (Empresa Era Biology - Goldstream Fungus (1-3 )-β- D- Glucan Test (GCT-110T - Empresa MiraVista Diagnostics - Beta-
D Glucan Assay ). [0034] Em contrapartida, o alto custo associado aos resultados falso- positivos em pacientes com bacteremia Gram Positiva e Negativa (37%) e em lotes de antibióticos β-lactâmicos (33%) mostrou que esse teste diagnóstico pode ser limitado, apesar de ser útil quando em combinação com outros métodos diagnósticos complementares (49).
[0035] Galactomanana (GM) é um polissacarídeo característico de Aspergillus spp liberado durante o crescimento sendo detectado por testes comercialmente disponíveis na circulação sanguínea, no soro, urina e BAL durante o crescimento do fungo no tecido (50). Por ser liberado pelo fungo constitutivamente, a GM pode ser um marcador de prognóstico e evolução da doença e/ou resposta ao tratamento. Diversos métodos imunoenzimáticos são
utilizados para detecção de GM, porém o mais promissor é o ELISA sanduíche por ser o mais sensível, detectando baixas concentrações de GM em amostras clinicas (51).
[0036] O teste de GM apresenta um resultado melhor de acordo com a população de pacientes, por exemplo em pacientes transplantados ou com doenças hematológicas, apresentando uma especificidade em tomo de 90% quando utilizado através da detecção por liquido bronco-alveolar (43,52). Em pacientes pediátricos, o teste pode produzir falsos-positivos em tomo de 80% dos casos, fato associado a aleitamento materno, bacteremia ou uso de antibióticos (43). Além disso, a GM apresenta reações cmzadas com antígenos de vários fungos, já que o polissacarídeo manana é encontrado na parede de diversos fungos.
[0037] No entanto, existem desafios associados a esses métodos, incluindo o risco de resultados falso-positivos devido à contaminação ou reatividade cruzada, bem como falso-negativos, devido à sensibilidade imperfeita do ensaio. Como regra geral, nenhum teste de diagnóstico laboratorial deve ser usado como um teste independente para o diagnóstico de IFI. Os testes atuais de diagnóstico fúngico devem ser usados em combinação com as avaliações do hospedeiro e as características radiográficas para gerenciar de maneira otimizada os pacientes em risco (43).
[0038] Durante a última década, ensaios de PCR emergiram como abordagens experimentais promissoras para detectar patógenos fúngicos. O uso de PCR é comum na prática clínica, com grande aplicação para orientar a terapia preventiva ou direcionada ao controle de patógenos (43,50,53).
[0039] Em fungos, a amplificação gêmea por PCR comumente envolve regiões 18S, 5.8S e 28S, que codificam para RNA ribossômico (rRNA), e áreas variáveis da sequência de DNA de regiões intervenientes internas de espaçadores transcritos, denominadas ITS1 e ITS2 (54).
[0040] Além de PCR, uma variedade de métodos moleculares
incluindo sequenciamento de DNA, microarranjos e espectrometria de massa Ionização e dessorção a laser por espectrometria de massa por ionização (MALDI) vem usada para desenvolver ensaios de detecção molecular de ampla faixa (43). Entretanto, a abordagem mais comum para a detecção molecular é a PCR seguida do sequenciamento de Sanger, visto que pode ser particularmente útil quando a cultura fúngica é negativa ou não é solicitada no momento em que a biópsia tecidual foi realizada (55).
[0041] Nos últimos 30 anos, a importância dos fungos como causadores de doenças em humanos aumentou dramaticamente (18). Por outro lado, as opções terapêuticas disponíveis são inacessíveis, tóxicas ou ineficientes, o que toma inquestionável a importância da busca por novos antifúngicos (56). [0042] Como anteriormente dito, atualmente, existem quatro classes principais de fármacos antifúngicos. Essas classes incluem os azóis, os polienos, análogos de pirimidinas e as equinocandinas. Várias outras classes, como morfolinas e alilaminas, são usadas apenas como agentes tópicos devido à baixa eficácia ou efeitos adversos graves quando administradas sistemicamente.
[0043] Os azóis são os antifúngicos mais utilizados na prática clínica. Esses fármacos apresentam como alvo a via biosintética do ergosterol, atuando principalmente através da inibição de uma enzima chave, a lanosterol
14 alfa desmetilase, codificada pelo gene ERG11 (57). [0044] O FLC e o itraconazol, azóis de amplo uso, desde a década de 90 vem sendo usados no tratamento de diversas infecções sistémicas, devido ao seu alto poder de absorção e uma toxicidade menor que os azóis inicialmente desenvolvidos (58). Entretanto, apresentam interações medicamentosas com fármacos utilizados na quimioterapia ou no tratamento da AIDS (58,59). Além disso, itraconazol e FLC são ineficazes contra alguns patógenos emergentes como Scedosporium, Fusarium e Mucorales (60). É
ainda crescente a percepção de que o fenômeno de resistência fúngica aos azóis está em expansão (58). Outros fármacos dessa classe estão em desenvolvimento, como os triazóis de nova geração. Alguns já aprovados pelo
Food and Drug Administration (FDA) (57). [0045] A classe dos polienos compreende mais de 200 moléculas, a maioria deles sendo produzidos pela bactéria Streptomyces, contudo, apenas três possuem aplicação clínica, a saber: AmB, nistatina e natamicina (58). Esses compostos se complexam com o ergosterol na membrana plasmática (57). Sua estrutura anfifílica lhes permite inserção na bicamada lipídica seguida da formação de poros. A formação de poros promove a desestabilização da membrana plasmática com consequente vazamento de componentes intracelulares, resultando em lise celular (61). Os polienos se ligam com menor afinidade ao colesterol, análogo humano do ergosterol. A ligação ao colesterol explica sua alta toxicidade e consequentes efeitos colaterais (62). Nesse sentido, a AmB é amplamente usada em infecções sistémicas, ao contrário de nistatina e natamicina que, extremamente tóxicas, são usadas apenas topicamente em infecções do trato vaginal e cutâneas (63).
[0046] A AmB tem má absorção através do trato gastrointestinal, acarretando na necessidade de administração por via intravenosa associada a efeitos adversos severos, principalmente, nos rins e no fígado (64). Cabe ressaltar que efeitos colaterais como náusea, vômitos e febre são comuns, mas o efeito mais grave é a nefrotoxicidade (65). Novas formulações de AmB, como os complexos lipossômicos de AmB, minimizam esses efeitos colaterais, porém elevam o custo do fármaco (66,67).
[0047] As fluoropirimidinas são análogos sintéticos estruturais de citocina e por consequência inibem a síntese ácidos nucléicos (68). Entretanto, esses fármacos não são utilizados de forma isolada, devido ao relato de mecanismos resistência (69). O padrão ouro atual para o tratamento da meningoencefalite por Cryptococcus é a combinação da AmB com 5-
flucitosina (5-FC), visto que minimiza a nefrotoxicidade da AmB por conta da administração de doses mais baixas do fármaco por um menor período de tempo, além de reduzir o desenvolvimento de resistência à 5-FC (64). Ressalta-se que a 5-FC não está disponível no Brasil, o que limita o acesso de pacientes brasileiros ao tratamento ideal.
[0048] As equinocandinas são inibidores não competitivos da β (1-3) - glucana sintase, uma enzima que catalisa a polimerização da uridina difosfato-glicose em β (1-3) glucana, um dos componentes estruturais responsáveis pela manutenção da integridade da parede celular em fungos (70). A inibição da β (1-3) - glucana sintase leva à desestabilização da parede celular e ao extravasamento de componentes intracelulares, resultando em lise celular (71,72) . Porém, vários patógenos fúngicos são parcialmente ou totalmente resistentes à ação das equinocandinas, incluindo C. neoformans e C. gattii ou espécies pertencentes aos gêneros Trichophyton e Fusarium , além de Scedosporium apiospermum, S. prolificans e Cladophialophora bantiana (58). No entanto, as equinocandinas constituem uma boa alternativa para combater as demais infecções fúngicas. A maioria dos tratamentos com falha na terapia clássica com azólicos ou polienos se utiliza com sucesso das equinocandinas.
[0049] Os mecanismos de resistência antifungica podem incluir a diminuição da concentração eficaz do fármaco, alterações ou superexpressão dos alvos dos fármacos e desvios metabólicos (57).
[0050] Anticorpos ou imunoglobulinas (Ig) são glicoproteínas secretadas por células B que apresentam a capacidade de identificar e/ou neutralizar organismos ou antígenos estranhos ao sistema imune do hospedeiro (73). As Ig são formadas por duas cadeias proteicas pesadas e duas cadeias leves, as quais possuem regiões variáveis que participam do reconhecimento de antígenos e as regiões constantes que exercem a função efetora da molécula (73).
[0051] A diversidade dos anticorpos se dá pela variabilidade nas sequências de aminoácidos da região variável das cadeias leve e pesada. As regiões determinantes de complementaridade (CDR) consistem de sequências hipervariáveis que entram em contato direto com o antígeno a ser reconhecido
(73).
[0052] Os anticorpos podem ser divididos em classes e subclasses distintas, os denominados isotipos (73). As classes de Ig são IgM, IgG, IgA, IgD e IgE, com subdivisão em humanos dos isotipos IgA e IgG em IgAl, IgA2, IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4, cada um exercendo funções efetoras diferentes (73).
[0053] Os anticorpos monoclonais (AcM) foram desenvolvidos pela primeira vez em 1975 por Georges Kõhler e César Milstein (74) através da produção de célula hibrida, denominada hibridoma, resultante da fusão de duas células diferentes (74). O hibridoma decorre da fusão de um linfócito B (previamente imunizado com o antígeno de interesse) com células de mieloma, gerando uma célula imortal e produtora de AcM (Figura 4).
[0054] Os AcM apresentam diversas aplicações nos campos de diagnóstico e terapia, podendo ser usados não apenas para doenças infecciosas causadas por bactérias, vírus e protozoários, mas também para doenças autoimunes e tumores, considerando suas altas sensibilidade e especificidade (75). Nos últimos 30 anos , cerca de 80 AcM foram aprovados pelo FDA para tratamento de diversas doenças, incluindo câncer, doenças inflamatórias crônicas, doenças neurodegenerativas e doenças infecciosas
(76).
[0055] O imunodiagnóstico de doenças infecciosas melhorou significativamente após o advento da tecnologia de hibridomas, visto que os AcMs superam as limitações dos anticorpos policlonais, sendo os AcMs capazes de proporcionar a identificação de apenas um antígeno gerando resultados reprodutíveis e consistentes (77).
[0056] A utilização de AcM contra fungos patogênicos vem sendo cada vez mais frequente. Anticorpos com potencial terapêutico foram desenvolvidos contra antígenos como histona 2B de H. capsulatum (78), β- glucanas de C. albicans (79), glicosilceramida de C. neoformans (80), melanina de vários patógenos (81), e proteínas de choque térmico de H. capsulatum (82). Anticorpos com uso diagnóstico incluem aqueles reativos contra os antígeno M e H de ff, capsulatum e contra o antígeno de
Cryptoccocus (CrAg) (83,84). [0057] A administração de AcM no tratamento de IFI depende de diversos fatores, que incluem, necessariamente, o isotipo do AcM, seu título, apresentação via complexo principal de histocompatibilidade (MHC) e, especialmente, a ativação de células imunes (85).
[0058] Os AcMs contra fungos podem mediar três efeitos diferentes: proteção (inibindo crescimento, imunomodulando a resposta do sistema imune e neutralizando os efeitos do fungo no tecido do hospedeiro), aumento da doença (por facilitar a disseminação da doença, por exemplo, favorecendo a fagocitose de C. neoformans) e neutralização de virulência (através da inibição da liberação de proteínas ou polissacarídeos fúngicos) (77). Esses efeitos estão ilustrados na Figura 5.
[0059] Os AcMs podem ainda agir de forma indireta na proteção contra IFI, através de promoção de fagocitose, ativação do sistema complemento, regulação de citotoxicidade celular, e maturação do fagossomo (86). Podem ainda afetar de forma direta como na formação de biofilme (87), liberação de polissacarídeos (88), dimorfismo (89), expressão gênica (90) e transdução de sinal (86). [0060] Estudos imunoterapêuticos caracterizaram AcM protetores contra diversos alvos e diferentes espécies fúngicas como: β-1,3 Glucana - A. fumigatus (91), Als3 - C. albicans (92), heat-shock protein 60 - H. capsulatum (93), GXM - C. neoformans (94), gp43 - P. brasiliensis (95) e
p55 - Pneumocystis spp (96). Esses estudos demonstraram que alguns antígenos fúngicos induzem a proteção mediada por anticorpos durante infecções fúngica.
[0061] Alguns desses alvos antigênicos por serem conservados são aplicados a diferentes fungos. Diante desse cenário, a quitina, um polímero de N-acetilglucosamina, por ser um dos principais constituintes da parede celular fúngica, se toma um excelente alvo para novas estratégias terapêuticas.
[0062] Neste sentido, as infecções fúngicas tomaram-se uma das principais causas de doenças em indivíduos imunocomprometidos, constituindo um sério e subestimado problema de saúde pública (16), bem como o fenômeno da resistência a drogas está levando ao aumento significativo na morbidade e mortalidade de indivíduos imunocomprometidos ao redor do mundo.
[0063] Sendo assim, a busca de alternativas que diminuam os efeitos adversos dos tratamentos antifúngicos, o uso de anticorpos monoclonais em modelos de infecções fúngicas é considerado altamente promissor, visto que pode se ligar com alta especificidade a antígenos expressos em fungos nos fluidos corporais do paciente, sendo ainda ferramentas-chave no campo de diagnóstico clínico.
[0064] Ademais, técnicas eficientes de diagnóstico podem ajudar a identificar pacientes com IFIs mais cedo do que apenas com a cultura celular. No entanto, existem desafios associados a esses métodos, incluindo o risco de resultados falso-positivos devido a contaminação ou reatividade cruzada, bem como falso-negativos devido à sensibilidade imperfeita do ensaio. É desejável, portanto, a combinação de testes diferentes em associação com avaliações do hospedeiro, incluindo características intrínsecas de pacientes sob risco.
[0065] Diante desse cenário e devido à grande complexidade da arquitetura da superfície celular dos fungos, foram escolhidos
quitooligômeros como alvos para o desenvolvimento dos AcM.
[0066] Portanto, a presente invenção revela AcM contra oligômeros de quitina para uso terapêutico e de diagnóstico de fungos em amostras biológicas. Ademais, a presente invenção revela ainda que sinergismo dos AcM desenvolvidos com AmB, devido o ligação a quitooligômeros em modelo murino de infecção por Cryptococcus neoformans, levou a um aumento da sobrevida dos indivíduos infectados.
[0067] As vantagens da invenção serão evidentes na descrição da invenção fornecida neste documento.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0068] A presente invenção tem por objetivo prover anticorpos monoclonais (AcMs) para o tratamento de infecções fúngicas e diagnóstico de infecções fúngicas.
[0069] Particularmente, os AcMs são desenvolvidos para apresentarem atividade contra quitooligômeros fúngicos.
[0070] Em um primeiro aspecto, a presente invenção provê anticorpo monoclonal que compreende:
(i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 1, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 2 e VH CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 3; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 4, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 5 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 6; ou
(i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 7, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 8 e VH CDR3 como descrita na
SEQ ID NO: 9; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 10, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 11 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 12.
[0071] Em um segundo aspecto, a presente invenção provê uma composição farmacêutica que compreende o referido anticorpo monoclonal.
A composição fannacêutica pode ainda compreender AmB e/ou FLC, bem como um veículo/excipiente farmacêuticamente aceitável. A composição farmacêutica é para uso no tratamento de infecções fúngicas.
[0072] Em um terceiro aspecto, a presente invenção provê o uso do anticorpo monoclonal na preparação de um medicamento para tratar infecções fúngicas. Em que o referido uso pode ser em combinação com polienos e/ ou azóis preferencialmente, preferencialmente, AmB e/ou FLC.
[0073] Em um quarto aspecto, a presente invenção provê um método de diagnóstico de infecções fúngicas que compreende:
(i) prover o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição com uma amostra obtida de um indivíduo,
(ii) contatar o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição com a amostra biológica a ser testada por um tempo suficiente e sob condições suficientes para a formação de complexos antígeno/anticorpo; e
(iii) detectar o complexo antígeno/anticorpo formado na etapa anterior através de uma técnica de detecção capaz de gerar um sinal detectável na presença do referido complexo antígeno/anticorpo. A amostra biológica é selecionada do grupo compreendendo saliva, urina, soro, sangue, lavado bronco-alveolar, líquor ou líquido peritoneal, ou quaisquer outros fluídos biológicos do indivíduo.
[0074] Em um quinto aspecto, a presente invenção provê um kit de diagnóstico de infecções fúngicas que compreende o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição. O kit pode compreender ainda instruções de uso. Ademais, o kit pode compreender um meio de detecção do complexo antígeno/anticorpo, o qual pode compreender um gerador de sinal, capaz de gerar um sinal detectável.
[0075] Em um sexto aspecto, a presente invenção provê um kit para tratamento de infecções fúngicas, caracterizado pelo fato de que compreende (i) o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição;
e
(ii) agente antifúngico,
(iii) Instruções para uso dos componentes em combinação.
[0076] Em um sétimo aspecto, a presente invenção provê um método para o tratamento de infecções fúngicas compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido anticorpo ou da referida composição em um indivíduo.
[0077] Em um oitavo aspecto, a presente invenção provê um anticorpo ou uma composição farmacêutica para uso no tratamento de infecções fúngicas em um indivíduo. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0078] A Figura 1 se refere a ciclo de infecção de Cryptococcus spp. O fungo pode sobreviver em solos e árvores, além de infectar diversos animais, dentre eles os pombos que são veículos de dispersão das células fúngicas. Em humanos, através da inalação de esporos ou leveduras dessecadas presentes no ambiente, é estabelecida uma infecção pulmonar, que pode evoluir para enfermidades no sistema nervoso central (SNC).
(Modificado de [28]). [0079] A Figura 2 se refere a representação esquemática da estrutura da parede celular e cápsula dos fungos (Modificado [99]). [0080] A Figura 3 se refere ação das quatro classes principais de fármacos antifúngicos. A ilustração demonstra a ação das quatros classes principais de antifúngicos. Flucitotosina mostra sua ação na síntese de ácidos nucléicos, enquanto as outras classes têm seu sítio de ação na membrana plasmática ou parede celular, seja na síntese ou se complexando ao ergosterol (Azóis e AmB, respectivamente) ou na síntese de β-Glucana Sintase
(Equinocandina). (Modificado de [100].). [0081] A Figura 4 se refere ao desenvolvimento de AcM através da técnica de hibridoma. Linfócitos B fusionados com células de mieloma
murino geram hibridomas, que são células imortais produtoras de anticorpos, que posteriormente são selecionados por técnicas de imunoensaio para eleger o melhor clone produtor do AcM em estudo. Figura adaptada de Abbas, A. et al 2015 [073].
[0082] A Figura 5 se refere aos mecanismos propostos de ação de anticorpos contra fungos, os quais podem ser considerados em três categorias gerais envolvendo: A) inibição direta do crescimento, B) neutralização dos efeitos indesejáveis dos produtos fúngicos nos tecidos do hospedeiro e C) imunomodulação e potenciação dos mecanismos imunes inatos, que no caso de C. neoformans não são protetores.
[0083] A Figura 6 se refere curva da última titulação dos anticorpos encontrados no soro dos animais através de ELISA. (A) Título do soro para Imunoglobulina M (IgM); (B) Título do Soro para IgG. As curvas em vermelho, azul e verde representam animais distintos. Linha tracejada representa a linha de corte do soro pré-imune.
[0084] A Figura 7 se refere à isotipagem dos hibridomas AF1/CC5 e HC6/DD11. Foram realizados testes para cada um dos isotipos especificados acima, com positividade predominante para detecção de IgM.
[0085] A Figura 8 se refere à análise da purificação do AcM
AF1/CC5 e HC6/DD11. Raia 1: Padrão de peso molecular Precision Dual Color (Bio-Rad); Raias 2 e 3: AcM AF1/CC5 e HC6/DD11, respectivamente; Raia 4: Padrão de peso molecular Precision Dual Color (Bio-Rad). As bandas predominantes nas frações 2 e 3 correspondem às cadeias pesadas (~70kDa) e leves (massa molecular variando entre ~23-24kDa) de IgM.
[0086] A Figura 9 se refere à curva de saturação da ligação AcM e
C.albicans.
[0087] A Figura 10 se refere à curva de saturação de ELISA para C. neoformans e C. albicans detectável pelo AcM HC6/DD11 e AF1/CC5. Em verde temos C. neorformans e em azul C. albicans.
[0088] A Figura 11 se refere à curva de saturação de Dot Blot para C. neofonnans e C. albicans detectável pelo AcM HC6/DD11 e AF1/CC5. [0089] A Figura 12 se refere à análise por IF da reação dos AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 com C. albicans. Os painéis a esquerda mostram as células fúngicas através de contraste diferencial, enquanto os outros painéis mostram as células em modo de fluorescência. As setas indicam a marcação polar característica desse tipo de alvo fúngico, aos quais foram demonstradas para ambos os AcM, sendo identificada inclusive na imagem em sobreposição
(Calcofluor / Alexa 548). [0090] A Figura 13 se refere ao ensaio de melanização. (A) Análise visual da pigmentação após crescimento de fungos em meio liquido suplementado com L-DOPA e tratado com os AcM.; B e C) Representação gráfica por densitometria relativa da pigmentação. O AcM HC6/DD11 apresentou inibição parcial da pigmentação até a concentração de 6,2μg/ml (p<0,05), enquanto o AcM AF1/CC5 apresentou inibição total até a concentração de 6,2μg/ml (p<0,001) e parcial nas concentrações de 3,2 e 1,6 μg/ml (p<0,05).
[0091] A Figura 14 se refere ao ensaio de ΧΤΓ - formação de Biofilme. A formação de biofilme foi medida indiretamente pelo ensaio de redução de ΧΤΓ. O tratamento dos fungos com AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 reduziram a formação de biofilme de forma significativa quando comparadas ao fungo sem tratamento (p<0,05). Barra preta fungos sem tratamento e barra branco fungo tratado. A e B células lavadas; Ce D células não lavadas.
[0092] A figura 15 se refere ao ensaio de XTT - formação de Biofilme. A formação de biofilme foi medida indiretamente pelo ensaio de redução de XTT. O tratamento do fungo H99 com AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 reduziram a formação de biofilme de forma significativa quando comparadas ao fungo sem tratamento e apresentaram comportamento semelhante ao fungo tratado com anticorpo 18B7 (p<0,05). Barra preta
fungos sem tratamento e barra branco fungo tratado. A e B células lavadas; Ce D células não lavadas.
[0093] A Figura 16 se refere ao ELISA contra células integras de C. neoformans, Giardia lamblia, linhagem A549, E. coli e Staphylococcus aureus. Em azul temos C. neoformans, em laranja (quadrado) Giardia lamblia, em verde (triângulo) linhagem A549, em lilás (triângulo invertido) E. coli e em preto (losango) Staphylococcus aureus. Linha tracejada representa o branco da reação.
[0094] A Figura 17 se refere ao sensograma representativo demonstrando as interações de ambos AcM contra quitotriose. (A) AcM HC6/DD11 e (B) AF1/CC5. Em verde a concentração de quitotriose de 0,06M e em vermelho de 0,1M.
[0095] A Figura 18 se refere (A e B) à representação do efeito sinérgico fungicida dos AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 somado a AmB 0,1 μg/ml a partir da concentração de 6,2 μg/ml somado a 0,1 μg/ml de AmB comparado a AmB de forma isolada na concentração de 1 μg/ml (p<0,001). A) Efeito sinérgico parcial potencializado do AcM nas concentrações de 1,6 e 3,2 μg/ml quando comparado com a AmB isolada na concentração de 0,1 μg/ml (p<0,01); B) Efeito sinérgico parcial potencializado do AcM na concentração de 3,2 μg/ml quando comparado com a AmB isolada na concentração de 0,1 μg/ml (p<0,01).
[0096] A Figura 19 se refere (A e B) à representação do efeito sinérgico dos AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 somado ao FLC. Efeito sinérgico fungicida parcial potencializado do HC6/DD11 e AF1/CC5 a partir da concentração de 3,2 μg/ml somado a 4 μg/ml de FLC quando comparado ao FLC de forma isolada na concentração de 4 μg/ml (p<0,01). Ambos os AcM apresentaram potencialização do efeito fungicida parcial quando somado ao FLC a 2 μg/ml, tendo seu comportamento similar ao FLC na concentração de 4 μg/ml de forma isolada.
[0097] A Figura 20 se refere à administração de AcM somado a AmB é protetor no modelo de infecção por C. neoformans. Curva de sobrevivência comparando animais tratados com PBS, AcM, AmB (0,25mg/kg) e grupo sinérgico. Os grupos com tratamento isolado vieram a óbito entre 28 e 37 dias, enquanto o grupo sinérgico apresentou 100% de sobrevida e teve significância estatística quando comparados aos outros grupos (p<0.01) (n=7).
[0098] A Figura 21 se refere ao fragmento scFv dos anticorpos murinos e humanizados.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0099] A não ser que sejam definidos de maneira diferente, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado entendido por um técnico no assunto ao qual a invenção pertence. A terminologia utilizada na descrição da invenção tem finalidade de descrever concretizações particulares somente, e não tem a intenção de limitar o escopo dos ensinamentos. A não ser que seja indicado de forma diferente, todos os números expressando quantidades, porcentagens e proporções, e outros valores numéricos usados no relatório descritivo e nas reivindicações, devem ser entendidos como sendo modificados, em todos os casos, pelo termo “cerca de”. Assim, a não ser que seja indicado o contrário, os parâmetros numéricos mostrados no relatório descritivo e nas reivindicações são aproximações que podem variar, dependendo das propriedades a serem obtidas.
[00100] A prática da presente invenção irá empregar, a menos que indicado de forma diferente, métodos convencionais de química, bioquímica, técnicas de DNA recombinante e imunologia, dentro do conhecimento da técnica. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura. Veja, por exemplo, Fundamental Virology, 2a Edição, vols. I & II (B.N. Fields e D. M. Knipe, eds.); Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D. M. Weir e C.C. Blackwell eds., Blackwell Scientific Publications); T.E. Creighton, Proteins: Structures e Molecular Properties (W.H. Freeman e
Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., edição atual); Sambrook, e cols., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a Edição, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick e N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.).
[00101] Conforme empregado ao longo do presente pedido, o termo “aminoácido” denota o grupo α-aminoácidos que diretamente ou na forma de um precursor pode ser codificado por um ácido nucleico. Os aminoácidos individuais são codificados por ácidos nucleicos consistindo de três nucleotídeos, conhecidos como códons. Cada aminoácido é codificado por pelo menos um códon. O fato do mesmo aminoácido ser codificado por diferentes códons é conhecido como “degeneração do código genético”. O termo “aminoácido”, como usado no presente pedido, denota os a- aminoácidos que ocorrem naturalmente, compreendendo alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina e valina.
[00102] Os termos “peptídeo”, “polipeptídeo” ou “proteína” podem ser utilizados intercambiavelmente, e fazem referência a um polímero de aminoácidos conectado por ligações peptídicas, independentemente do número de resíduos de aminoácido que constituem esta cadeia. Os polipeptídeos, como aqui usados, incluem “variantes” ou “derivados” dos mesmos, que se referem a um polipeptídeo que inclui variações ou modificações, por exemplo, substituição, deleção, adição ou modificações químicas em sua sequência de aminoácido em relação ao polipeptídeo de referência. Exemplos de modificações químicas são glicosilação, PEGlação, PEG alquilação, alquilação, fosforilação, acetilação, amidação, etc. O polipeptídeo pode ser produzido artificialmente a partir de sequências nucleotídicas clonadas através da técnica de DNA recombinante ou pode ser preparado através de uma reação de síntese química conhecida.
[00103] Mais especificamente, o termo polipeptídeo da presente invenção pode também ser entendido como antígeno, poliantígeno ou antígeno multiepítopo, que consistem em uma junção de epítopos diferentes que podem ou não estar interligados por ligantes ( linkers ) flexíveis ou rígidos, específicos para um único patógeno ou para patógenos diferentes.
[00104] Em uma primeira concretização, a presente invenção fornece AcMs murino contra oligômeros de quitina ou quitooligômeros produzido através da tecnologia de hibridoma.
[00105] O termo “anticorpo” é qualquer imunoglobulina, incluindo anticorpos e seus fragmentos, que se liga em um epítopo específico. O termo inclui anticorpos policlonais, monoclonais, e quiméricos, os últimos mencionados descritos com mais detalhe em Patentes U.S. de Nos. 4.816.397 e 4.816.567. O termo "anticorpo(s)" inclui uma molécula de imunoglobulina (Ig) de tipo selvagem, geralmente compreendendo quatro cadeias de polipeptídeo de comprimento total, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L), ou um seu homólogo de Ig equivalente (e.g., um nanocorpo de camelídeo, que compreende apenas uma cadeia pesada); incluindo seus mutantes, variantes ou derivados funcionais de comprimento total, que mantêm as características de ligação em epítopo essenciais de uma molécula de Ig, e incluindo anticorpos de domínio dual específico, biespecífico, multiespecífico, e variável dual; moléculas de Imunoglobulina podem ser de qualquer classe (e.g., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, e IgY), ou subclasse (e.g., IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, e IgA2). Também está incluído dentro do significado do termo “anticorpo” qualquer “fragmento de anticorpo”.
[00106] O termo “anticorpo monoclonal” é amplamente reconhecido no campo técnico e se refere a um anticorpo que é produzido em massa no laboratório a partir de um único clone e que reconhece apenas um antígeno. Anticorpos monoclonais tipicamente são preparados fundindo uma célula B produtora de anticorpo com uma célula de crescimento rápido, tal como uma
célula tumoral (também conhecida como célula “imortal”). A célula híbrida resultante, ou hibridoma, é um clone capaz de produzir anticorpo indefinidamente, caso em condições normais de cultivo..
[00107] O termo “hibridoma” também é tradicionalmente reconhecido no campo técnico e é entendido por qualquer técnico no assunto com conhecimentos gerais como se referindo a uma célula produzida pela fusão de uma célula produtora de anticorpo e uma célula imortal, por exemplo, uma célula de mieloma. Esta célula híbrida é capaz de fornecer continuamente anticorpo.
[00108] O termo “antígeno” se refere a uma entidade ou fragmento desta que pode induzir uma resposta imune em um organismo, particularmente um animal, mais particularmente um mamífero incluindo um humano. O termo inclui imunógeno e regiões responsáveis por antigenicidade ou determinantes antigênicos.
[00109] Os antígenos fúngicos utilizados na presente invenção podem ser selecionados a partir de componentes de parede celular fúngica e seus oligômeros. Mais especificamente, os antígenos podem ser selecionados a partir de quitobiose, quitotriose, quitotetraose, quitopentaose, quitohexaose e quitoheptaose, e qualquer outro antígeno fúngico que tenha sua origem a quitina e seus oligômeros e sejam capazes de induzir uma resposta imune. Mais preferivelmente, o antígeno fúngico é quitotriose.
[00110] Os antígenos fúngicos da presente invenção podem ser obtidos a partir de qualquer espécie do reino Fungi., mais especificamente qualquer espécie dos filos Ascomicota, Basidiomicota, Zigomicota e Quitridiomicota. Ainda mais especificamente dos gêneros Aspergillus, Condida , Cryptococcus e Pneumocystis. Neste sentido, as espécies podem ser selecionadas do grupo compreendendo Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Condida sp., Aspergillus sp., Histoplasma capsulatum e Coccidioides immitis.
[00111] Ademais, os antígenos podem ser combinados com adjuvantes
capazes de induzir uma resposta imune.
[00112] Adjuvantes são compostos que quando administrados em conjunto com um antígeno aumentam a resposta imune ao antígeno, entretanto quando administrados isoladamente não geram uma resposta imune ao antígeno. Os adjuvantes podem aumentar a resposta imune por vários mecanismos, incluindo recrutamento de linfócitos, estimulação de células B e / ou T e estimulação de macrófagos.
[00113] Adjuvantes adequados para a presente invenção podem ser selecionados, mas não estando limitados, das seguintes classes de compostos: (i) sais de alumínio (alúmen), como hidróxido de alumínio, fosfato de alumínio, sulfato de alumínio. Tais adjuvantes podem ser utilizados com ou sem outros agentes imunoestimulantes específicos, como MPL ou 3-DMP, QS21, aminoácidos poliméricos ou monoméricos, como ácido poliglutâmico ou polilisina; (ii) formulações de emulsão de óleo em água, tais como (a) MF59 (WO 90/14837), contendo 5% de esqualeno, 0,5% de Tween 80 e 0,5% de Span 85 (opcionalmente contendo várias quantidades de MTP-PE) formulados em partículas submicrônicas usando um microfluidizador, como o microfluidizador Modelo 110Y (Microfluidics, Newton Mass.), (B) SAF, contendo 10% de esqualano, 0,4% de polímero L121 bloqueado por plurínico de Tween 80,5% e thr-MDP, microfluidizado em uma emulsão submicrônica ou agitado em vórtex para gerar uma emulsão de tamanho de partícula maior, e (c) sistema adjuvante Ribi ™ (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, Mont.) contendo esqualeno a 2%, Tween 80 a 0,2% e um ou mais componentes da parede celular bacteriana do grupo que consiste em monofosforilipídeo A (MPL), trealose dimicolato (TDM) e esqueleto da parede celular (CWS), de preferência MPL + CWS (Detox ™); (iii) adjuvantes de saponina, tal como Stimulons (QS21, Aquila, Worcester, Mass.) ou partículas geradas a partir deles, como ISCOMs (complexos imunoestimulantes) e ISCOMATRIX; (iv) Adjuvante Completo de Freund (CFA) e Adjuvante Incompleto de Freund
(IFA); (v) citocinas, como interleucinas, por exemplo, IL-1, IL-2 e IL-12, fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), fator de necrose tumoral (TNF) e / ou quimiocinas como CXCL10 e CCL5. Preferencialmente, o adjuvante utilizado é hidróxido de alumínio (Al(OH)3).
[00114] Originalmente desenvolvida por Kõhler e Milstein [075], na metodologia do hibridoma, camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado, é imunizado para gerar linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que se ligam especificamente à proteína usada para imunização.
[00115] Após a imunização, células produtoras de anticorpos (linfócitos do baço) são fusionadas com células de mieloma (células malignas de tumores primários da medula óssea), criando linhagem celular híbrida, resultante de um único híbrido celular fundido (chamado hibridoma) que herdou certas características das linhagens celulares de linfócitos e mieloma. O agente de fusão apropriado pode ser o polietilenoglicol.
[00116] As células de hibridoma preparadas dessa maneira são cultivadas em um meio de cultura apropriado, que preferencialmente contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou a sobrevivência de células de mieloma parental não fundidas. Por exemplo, na falta da enzima hipoxantina guanina fosforibosil transferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura selecionado para os hibridomas incluirá tipicamente hipoxantina, aminopterina e timidina (meio HAT), substâncias que impedem o crescimento de células deficientes em HGPRT.
[00117] Os hibridomas secretam um único tipo de imunoglobulina específica para o antígeno; além disso, como as células do mieloma, as células híbridas tinham potencial para divisão celular indefinida. A combinação dessas duas características fornece vantagens distintas sobre os anti-soros convencionais. Enquanto os anti-soros derivados de animais vacinados são misturas variáveis de anticorpos policlonais que nunca podem ser
reproduzidos de forma idêntica, os anticorpos monoclonais são imunoglobulinas altamente específicas de um único tipo.
[00118] O único tipo de imunoglobulina secretada por um hibridoma (anticorpo monoclonal) é específico para apenas um determinante antigênico, ou epítopo, no antígeno, uma molécula complexa com uma multiplicidade de determinantes antigênicos.
[00119] O meio de cultura em que as células de hibridoma são cultivadas é testado para determinar a produção de anticorpos monoclonais direcionados contra o antígeno. De preferência, a especificidade de ligação dos anticorpos monoclonais produzidos pelas células de hibridoma é determinada por imunoprecipitação ou por ensaio de ligação in vitro, como imunoensaio (RIA) ou ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA).
[00120] Após a identificação de células de hibridoma que produzem anticorpos com a especificidade, afinidade e/ou atividade desejadas, os clones podem ser subclonados por procedimentos de diluição limitantes e cultivados por métodos padrão (98). Os meios adequados para esse fim incluem, por exemplo, meios D-MEM ou RPMI-1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser cultivadas in vivo como tumores de ascites de animais, por exemplo, por injeção intraperitoneal das células em camundongos.
[00121] Os anticorpos monoclonais produzidos por hibridoma são adequadamente separados do meio de cultura, fluido de ascite ou soro por procedimentos padrão de purificação de anticorpos, como cromatografia de afinidade (usando, por exemplo, proteína A ou proteína G-Sefarose) ou cromatografia de troca. íons, cromatografia de hidroxilapatita, eletroforese em gel, diálise, entre outros.
[00122] Neste contexto, foram desenvolvidas diversas linhagens celulares de mieloma especializadas para produção de hibridomas, como por exemplo as linhagens amplamente conhecidas no estado da técnica: X63-Ag8, NSI-Ag4/l, MPCU-45.6TG1 .7, C63-Ag8.653, Sp2/0-Agl4, FO e
S194/5XXO. BU.l, 210. RCY3.Agl.2.3, U-226AR, GM 1500GTGAL2, U- 226 AR e GM 1500GTGAL2. Mais especificamente, a linhagem é SP2/0 (Sp2/0-Agl4 (ATCC® CRL-1581™).
[00123] De forma geral, após a fusão das células, o produto obtido é cultivado em meios seletivos, por exemplo, meio HAT contendo hipoxantina, aminopterina e timidina.
[00124] O referido meio possibilita a proliferação de células híbridas e evita o crescimento de células de mieloma não fundidas que normalmente continuariam a se dividir indefinidamente.
[00125] As células de mieloma utilizadas são mutantes sem hipoxantina fosforibosil transferase (HPRT) e, portanto, não podem utilizar a via de resgate. No híbrido sobrevivente, o linfócito B fornece informações genéticas para a produção dessa enzima. Como os próprios linfócitos B têm uma vida útil limitada em cultura (aproximadamente duas semanas), as únicas células que podem proliferar nos meios HAT são híbridos formados a partir de células do mieloma e do baço.
[00126] Visto que anticorpos podem ser modificados em numerosas maneiras, o termo “anticorpo” deve ser entendido como cobrindo qualquer molécula ou substância tendo um domínio de ligação com a especificidade exigida. Assim, este termo cobre fragmentos de anticorpo, derivados, equivalentes funcionais e homólogos de anticorpos, incluindo qualquer polipeptídeo compreendendo um domínio de ligação de imunoglobulina, seja natural seja total ou parcialmente sintético. Moléculas quiméricas compreendendo um domínio de ligação de imunoglobulina, ou equivalente, fusionado em outro polipeptídeo são consequentemente incluídas. Clonagem e expressão de anticorpos quiméricos são descritas em EP-A-0120694 e EP- A-0125023 e em Patentes U.S. de Nos. 4.816.397 e 4.816.567.
[00127] Tem sido mostrado que fragmentos de um anticorpo inteiro podem desempenhar a função de ligação de antígenos. Exemplos de
fragmentos de ligação são (i) o fragmento Fab consistindo de domínios VL, VH, CL e CHI; (ii) o fragmento Fd consistindo dos domínios VH e CHI; (iii) o fragmento Fv consistindo dos domínios VL e VH de um anticorpo único; (iv) o fragmento dAb [101] que consiste de um domínio VH; (v) regiões CDR isoladas; (vi) fragmentos F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados (vii) moléculas Fv de cadeia única (scFv), nas quais um domínio VH e um domínio VL estão ligados por um linker peptídico que permite que os dois domínios se associem para formarem um sítio de ligação de antígeno [102, 103] ; (viii) fragmentos de anticorpo multivalentes (dímeros, trímeros e/ou tetrâmeros de scFv [104] (ix) dímeros de Fv de cadeia única biespecíficos (PCT/US92/09965) e (x) "diacorpos", fragmentos multivalentes ou multiespecíficos construídos por fusão de gene
(WO94/13804; [105] ). [00128] A frase "molécula de anticorpo" em suas várias formas gramaticais como aqui usada contempla ambas uma molécula de imunoglobulina Intacta e uma porção imunologicamente ativa de uma molécula de imunoglobulina.
[00129] As moléculas de anticorpo podem ser, por exemplo, moléculas de imunoglobulina intactas, moléculas de imunoglobulina substancialmente intactas e aquelas porções de uma molécula de imunoglobulina que contém paratopo, incluindo aquelas porções conhecidas na técnica como Fab, Fab', F(ab')2 e F(v), cujas porções são preferidas para uso nos métodos terapêuticos aqui descritos.
[00130] Porções Fab e F(ab')2 de moléculas de anticorpo são preparadas por reação proteolítica de papaína e pepsina, respectivamente, em moléculas de anticorpo substancialmente intactas por métodos que são bem conhecidos. Veja por exemplo, Patente U.S. de No. 4.342.566 de Theofilopolous et al. Porções de molécula de anticorpo Fab' também são bem conhecidas e são produzidas a partir de porções F(ab')2 seguido por redução
das ligações de dissulfeto ligando as duas porções de cadeia pesada como com mercapto-etanol, e seguido por alquilação do ao proteína-mercaptano resultante com um reagente tal como iodo-acetamida. Um anticorpo contendo moléculas de anticorpo intactas é aqui preferido.
[00131] À parte da técnica de hibridoma tradicional há numerosas outras técnicas bem conhecidas para preparar anticorpos monoclonais. Particularmente úteis são os métodos de preparar anticorpos totalmente de humano. Um método é tecnologia de exibição de fago que pode ser usada para selecionar uma variedade de anticorpos de humano ligando especificamente no antígeno usando métodos de enriquecimento por afinidade. Exibição de fago tem sido completamente descrita na literatura e a construção e a triagem de bibliotecas de exibição de fago são bem conhecidas na técnica, veja, e.g., [106, 107, 108, 109]. Anticorpos totalmente de humano também podem ser preparados por imunização de camundongos transgênicos trazendo porções grandes das cadeias pesada e leve de imunoglobulina de humano, com um imunógeno. Exemplos de tais camundongos são bem conhecidos na técnica, e. g., o Xenomouse® (Abgenix, Inc.) e o HuMAb- Mouse (Medarex, Inc.,), veja também Patentes U. S. de No. 6.207.418, No. 6.150.584, No. 6.111.166, No. 6.075.181, No. 5.922.545, No. 5.545.806 e No. 5.569.825. Anticorpos podem ser preparados por técnicas padrão, e.g. técnicas de hibridoma padrão ou por exibição de fago.
[00132] Anticorpos monoclonais derivados por técnica de hibridoma a partir de espécie diferente de espécie humana, tal como camundongo, podem ser humanizados, o que significa que um anticorpo de não-humano geneticamente modificado para ser mais humano com o propósito de se evitar HAMA quando infundido em humanos. Os métodos de humanização de anticorpos são bem conhecidos na técnica, dentre os métodos mais comuns estão enxerto de região determinante de complementaridade (CDR) e modificação superficial (também conhecida como fornecimento de superfície
nova). Estes métodos têm sido extensivamente descritos na literatura e em patentes, veja e.g.; [110]; Patentes U.S. 5.225.539; 5.530.101; 5.585.089. 5.859.205 e 6.797.492, cada uma aqui incorporada como referência.
[00133] Mais especificamente, os anticorpos da presente invenção compreendem as seguintes sequências nucleotídicas das suas cadeias leve e pesada; ou sequências possuindo 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as mesmas; ou suas sequências degeneradas: i) HC6/DD11
Sequência Nucleotídica da Cadeia Pesada (VH):
[00134] 3 ’ ggcagggagcggtgaccgtggtccctgcgccccagacatcgaagtaccagtagct actaccgtagtaatcccttgcacagtagtacatggctgtgtcctcagacctcagactgctcatttccaggtacagg gtgttcttggcattctctctagagatggtgaatcggcccgtcacagtgtctgcatagtagatactatatgccaaatt actaatgaatgctacccactcaggccccttccctggagcctgtcgaacccacgccattccgtagtcactgaaag tgaatccagaggctgcacaggatagtttccgggaccctccaggctgcactaagcctccccctgactcctccag cttaacttgaccggtcga5 ' (SEQID NO: 13)
Sequência Nucleotídica da Cadeia Leve (VL):
[00135] 5 ' gcaaccaattcctgcatctccaggggagaggtcaccataacctgcagtgccagctca agtgtaagttacatgcactggttccagcagaagccaggcacttctcccaaactctggatttatagcacatccaac ctggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtggatctgggacctcttactctctcacaatcagccgaatgg aggctgaagatgctgccacttattactgccagcaaaggagtagttacccgctcacgttcggtgctgggaccaag ctggagctgaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccctcgagacca3’ (SEQID NO: 14) [00136] Tradução das sequências e respectivos CDRs utilizando o método de definição por Kabat:
VH
[00137] STGQVKLEESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMA WVRQAPGKGPEWVAFISNLAYSIYYADTVTGRFnSRENAKNTLYLE MSSLRSEDTAMYY CARDYY GSS YWYFDVWGAGTTVTAPC (SEQ ID NO: 15)
VL
[00138] ATNSCISRGEVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWI
YSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPL TFGAGTKLELKRADAAPTVSLET (SEQ ID NO: 16)
[00139] Mais especificamente, em que os CDRs compreendem as seguintes sequências: (i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 1, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 2 e VH CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 3; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 4, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 5 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 6 ou sequências possuindo 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as mesmas, i) AF1/CC5
Sequência Nucleotídica da Cadeia Pesada (VH):
[00140] 3'cggggaatgtgagagtggtgccttggccccagtagtcaaagccgtcgtacctatgcc tcgtacagtaataaatgccagtgtcttcagctcttaagctgttcatttgcaggtagacactacttttggaatcatctct tgagatggtgaacctccctttcacagactcagcatagtatgttgcatgattattagctttgcttctaatttcagcaacc cactcaagccccttctctggagactggcggacccagtccatccaggcgtcactaaaagtgaatccagaggca gcacaagagagtttcatggatcctccaggttgcaccaagcctcctcctgactcctccagcttaacttgaccggtc ga5’ (SEQID NO: 17)
Sequência Nucleotídica da Cadeia Leve (VL):
[00141] 5 ' gattattttcttgcatctcagggagaggtcaccatgacctgcagtgccagctcaagtat aagttacatgcactggtaccagcagaagccaggcacctcccccaaaagatggatttatgacacatccaaactg gcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttattctctcacaatcagcagcatggag gctgaagatgctgccacttattactgccatcagcggagtagttacccatgcacgttcggtgctgggaccaagct ggagctgaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccctcgagaccaagaccagc3’ (SEQ ID NO:
18)
[00142] Tradução das sequências e respectivos CDRs utilizando o método de definição por Kabat:
VH
[00143] STGQVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCAASGFTFSDAWM DWVRQSPEKGLEWVAEIRSKANNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSSV YLQMNSLRAEDTGI Y Y CTRHRYDGFD YWGQGTTLTFP (SEQ ID NO:
19)
VL
[00144] DYFLASQGEVTMTCSASSSISYMHWYQQKPGTSPKRWI
YDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQRSSYPC TFGAGTKLELKRADAAPTVSLETKTS (SEQ ID NO: 20)
[00145] Mais especificamente, em que os CDRs compreendem as seguintes sequências: (i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 7, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 8 e VH CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 9; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 10, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 11 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 12 ou sequências possuindo 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as mesmas.
[00146] Mutações podem ser feitas em sequências de DNA codificadoras de anticorpos ou peptídeos aqui fornecidos, tais como nas CDRs, de tal modo que um códon particular é substituído por um códon que codifica um aminoácido diferente. Uma tal mutação é geralmente feita fazendo-se o mínimo possível de trocas. Uma mutação de substituição deste tipo pode ser feita para substituir um aminoácido na proteína resultante em uma maneira não-conservativa (i.e., por troca do códon de um aminoácido pertencendo a um agrupamento de aminoácidos tendo um tamanho ou uma característica particular por um aminoácido pertencendo a outro agrupamento) ou em uma maneira conservativa (i.e, por substituição do códon de um aminoácido pertencendo a um agrupamento de aminoácidos tendo um tamanho ou uma característica particular por um aminoácido pertencendo ao
mesmo agrupamento). Uma substituição conservativa geralmente causa uma mudança menor na estrutura e na função da proteína resultante. Uma troca não-conservativa provavelmente altera mais a estrutura, atividade ou função da proteína resultante. Deve ser considerado que a presente invenção inclui sequências contendo trocas conservativas que não alteram significativamente a atividade ou características de ligação da proteína resultante.
[00147] Os polipeptídeos da presente invenção apresentaram reprodutibilidade quanto à sensibilidade e especificidade. Isto sugere que as proteínas desenvolvidas podem se manter estáveis por longos períodos, mantendo sua capacidade reativa. É possível que a composição do tampão de estoque pode ter favorecido sua estabilidade, o uso de inibidores de proteases, a presença de agente desnaturante no tampão ou, até mesmo, devido à sequência de aminoácidos das mesmas. Proteínas estáveis são consideradas quando existe interesse de aplicação diagnóstica.
[00148] Em uma segunda concretização, a presente invenção revela composições farmacêuticas que compreendem o referido anticorpo monoclonal.
[00149] A composição farmacêutica pode compreender a combinação
AcM da presente invenção. [00150] As referidas composições podem ainda compreender adicionalmente outros agentes antifungicos.
[00151] Agentes antifungicos adequados podem ser selecionados do grupo compreendendo (1) um agente antifungico de polieno, como Natamicina, Rimocidina, Filipina Nistatina, Anfotericina B e Candicina; (2) Antifungicos de imidazol, como Miconazol, Cetoconazol, Clotrimazol, Econazol, Bifonazol, Butoconazol, Fenticonazol, Isoconazol, Oxiconazol, Sertaconazol, Sulconazol, Tioconazol; (3) antifungicos de triazol, como FLC, itraconazol, isavuconazol, ravuconazol, posaconazol, voriconazol, terconazol; (4) antifungicos de alilamina, como terbinafina, amorolfina, naftifina e
butenafina; (5) antifungicos da equinocandina, como Anidulafungina, Caspofungina e Micafungina.
[00152] Preferivelmente, os agentes antifúngicos adicionais são AmB ou FLC.
[00153] Ademais, as composições farmacêuticas podem ser formuladas com veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis assim como quaisquer outros adjuvantes e diluentes conhecidos por um técnico no assunto com conhecimento geral na área.
[00154] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis adequados compreendem excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser utilizadas farmaceuticamente. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis adequados são bem conhecidos no estado da técnica e são descritos, por exemplo, em Gennaro, Alfonso, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18° edição 1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., o qual é um texto de referência neste campo técnico. De forma mais específica, excipientes, carreadores ou estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis não apresentam toxicidade ao organismo receptor nas dosagens e concentrações empregadas e incluem tampões como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes como ácido ascórbico e metionina; conservantes como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, fenol, álcool butílico, álcool benzílico, alquil parabenos como metil- e propilparabeno, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol e m-cresol; proteínas como albumina, gelatina ou imunoglobulinas; aminoácidos, monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos como glicose, manose, sucrose, manitol ou sorbitol; excipientes poliméricos como polivinilpirrolidonas, Ficoll®, dextrinas e polietileno glicóis; agentes de sabor; adoçantes; agentes anti-estáticos; agentes quelantes como EDTA ou EGTA; sais liberadores de íons como sódio; complexos
metálicos; surfactantes não-iônicos como polissorbatos 20 e 80; lipídeos como fosfolipídeos, ácidos graxos e esteroides como colesterol. Métodos para preparação de várias composições farmacêuticas são bem conhecidos, ou serão aparentes à luz da presente invenção, pelo especialista da arte em tecnologia farmacêutica.
[00155] Além disto, as composições podem compreender aditivos com o objetivo de aumentar a facilidade de administração, a capacidade de serem estocadas, a resistência à degradação, a biodisponibilidade, a meia vida, prover preparações isotônicas, etc. Aditivos usais para a preparação de composições farmacêuticas são bem conhecidas na arte.
[00156] Veículos farmaceuticamente aceitáveis podem ser rotineiramente selecionados de acordo com o modo de administração e a solubilidade e estabilidade dos peptídeos.
[00157] Por exemplo, formulações para administração intravenosa podem incluir soluções aquosas estéreis que podem também conter tampões, diluentes e outros aditivos adequados.
[00158] Formulações adequadas para administração parentética incluem soluções aquosas dos compostos ativos na forma solúvel em água, por exemplo, sais solúveis em água. Além disso, a suspensão do composto ativo, como suspensões de injeções oleosas apropriadas, pode ser administrada. Solventes ou veículos lipofílicos adequados incluem óleos graxos, por exemplo, óleo de gergelim, ou ésteres de ácido graxo sintéticos, por exemplo oleato de etila ou triglicerídeos. Suspensões de injeções aquosas que podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão incluem, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, sorbitol e/ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores.
[00159] Composições farmacêuticas para administração oral (em dosagem apropriada) podem estar, preferencialmente, mas não necessariamente, na forma de comprimidos ou cápsulas, tendo o tamanho
convencional na indústria farmacêutica.
[00160] A concentração do anticorpo da invenção nas composições farmacêuticas pode variar de maneira ampla e pode ser selecionada principalmente com base em volumes de fluido, viscosidades, entre outros. O modo de administração particular será determinante. As composições podem compreender ainda mais de um tipo de anticorpo.
[00161] Para qualquer composto, a dose terapeuticamente efetiva pode ser estimada inicialmente, quer em ensaios de cultura de células, por exemplo, de células neoplásicas, quer em modelos animais, usualmente camundongos, coelhos, cães ou porcos. O modelo animal também pode ser usado para se determinar a faixa de concentração apropriada e a via de administração. Informação desse tipo pode então ser usada para se determinar doses úteis e vias para administração em humanos.
[00162] No geral, a quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um veículo farmaceuticamente aceitável para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do sujeito a ser tratado e do modo particular de administração. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um veículo farmaceuticamente aceitável para produzir uma forma de dosagem única será geralmente a quantidade da composição que produz um efeito terapêutico. Geralmente, de cem por cento, essa quantidade varia de cerca de 0,01 a 99% do ingrediente ativo, de preferência de cerca de 0,1 a 70%, mais preferencialmente de 1 a 30% do ingrediente ativo em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00163] As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por várias rotas de administração incluindo, entre outras, oral, sublingual, nasal, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intra-articular, subcutânea, cutânea, transdérmica, não sendo limitada a estas.
[00164] Em uma terceira concretização, a presente invenção revela o uso do referido anticorpo monoclonal na preparação de um medicamento para
tratar infecções fúngicas. O uso pode ser em combinação com outros agentes antifungicos ativos dentre eles a AmB e/ou FLC.
[00165] Por “combinação”, pode-se entender como sendo administração de dois ou mais agentes terapêuticos para tratar uma doença, condição e/ou distúrbio. Essa administração abrange a co-administração de dois ou mais agentes terapêuticos de maneira substancialmente simultânea, como em uma cápsula única com uma proporção fixa de ingredientes ativos ou em cápsulas múltiplas e separadas para cada agente ativo. Ademais, a administração pode ser sequencial.
[00166] Os anticorpos da invenção podem ser administrados em combinação com outros com fármacos padrão no tratamento de infecções fúngicas. Preferivelmente, AmB, que apresenta amplo espectro contra leveduras e fungos filamentosos e FLC que tem ação fungistática contra Cryptococcus.
[00167] Ambos os fármacos apresentam suas ações no ergosterol, sendo a AmB se ligando diretamente ao ergosterol formando poros e o FLC se ligando a enzima lanosterol 14 alfa desmetilase, que é a enzima chave na síntese do ergosterol.
[00168] Em uma quarta concretização, a presente invenção revela um método de diagnóstico de infecções fúngicas que compreende:
(i) prover o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição com uma amostra obtida de um indivíduo
(ii) contatar o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição com a amostra a ser testada por um tempo suficiente e sob condições suficientes para a formação de complexos antígeno/anticorpo; e
(iri) detectar o complexo antígeno/anticorpo formado na etapa anterior através de uma técnica de detecção capaz de gerar um sinal detectável na presença do referido complexo antígeno/anticorpo.
[00169] As amostras podem ser selecionadas do grupo compreendendo
saliva, urina, soro, sangue, lavado bronco-alveolar, líquor ou líquido peritoneal, ou quaisquer outros fluídos biológicos do indivíduo.
[00170] O anticorpo pode compreender um marcador detectável, como um marcador fluorescente, radioisotópico, quimioluminescente ou enzimático, como peroxidase de rábano silvestre, fosfatase alcalina ou luciferase.
[00171] Numerosos materiais fluorescentes são conhecidos e podem ser utilizados como marcadores. Estes incluem, por exemplo, fluoresceína, rodamina, auramina, Vermelho Texas, azul AMCA e Amarelo Lúcifer. Um material de detecção particular é anticorpo anti-coelho preparado em cabras e conjugado com fluoresceína através de isotiocianato. O peptídeo SLC34A2 ou seu(s) parceiro(s) de ligação também pode(m) ser marcado(s) com um elemento radioativo ou com uma enzima. O marcador radioativo pode ser detectado por qualquer um dos procedimentos de contagem correntemente disponíveis. O isótopo preferido pode ser selecionado de 3H, 14C, 32P, 35S, 36C1, 51Cr, 57Co, 58Co,59Fe,90Y, 123I, 125I,1311, 186Re, 99Tc, 67Ga, 201Tl e 111In.
[00172] Marcadores de enzima são igualmente úteis, e podem ser detectados por qualquer uma das técnicas colorimétrica, espectrofotométrica, fluoroespectrofotométrica, amperométrica ou gasométrica presentemente utilizadas. A enzima é conjugada na partícula selecionada pela reação com moléculas de ponte tais como carbodiimidas, diisocianatos, glutaraldeído e semelhante. Muitas enzimas que podem ser usadas nestes procedimentos são conhecidas e podem ser utilizadas. As preferidas são peroxidase, β- glicuronidase, β-D-glicosidase, β-D-galactosidase, urease, glicose oxidase mais peroxidase e fosfatase alcalina. Patentes U.S. de Nos. 3.654.090; 3.850.752; e 4.016.043 são referidas por meio de exemplo para sua revelação de métodos e material de marcação alternativos.
[00173] Os meios de detecção podem ser aqueles conhecidos na técnica. Um exemplo não limitativo do meio de detecção pode ser um
conjugado compreendido por um anticorpo acoplado a um composto gerador de sinal, capaz de gerar um sinal detectável.
[00174] Opcionalmente, o anticorpo pode estar ligado a um suporte sólido, que pode acomodar a automação do ensaio. Suportes sólidos adequados incluem, mas não estão limitados a lâminas de vidro ou plástico, placas de cultura de tecidos, poços de microtitulação, tubos, chips ou partículas como contas (Beads) selecionados de, mas não restritas, látex, poliestireno ou contas de vidro.
[00175] A invenção pode ser realizada em qualquer método conhecido no campo técnico pode ser usado para conectar o anticorpo ao suporte sólido, incluindo o uso de ligações covalentes e não covalentes, absorção passiva ou pares de porções de ligação ligadas ao anticorpo e ao suporte sólido. A ligação do antígeno e do anticorpo pode ser realizada em qualquer recipiente adequado para conter os reagentes. Exemplos de tais vasos incluem placas de microtitulação, tubos de ensaio e tubos de microcentrífuga.
[00176] Os anticorpos podem ainda ser utilizados principalmente para distinguir infecções fúngica invasivas de infecções bacterianas em ambiente hospitalar e com pacientes de alto risco e/ou imunocomprometidos.
[00177] Em uma quinta concretização, a invenção fornece um kit de diagnóstico de infecções fúngicas que compreende o referido anticorpo monoclonal ou a referida composição e instruções de uso.
[00178] O kit pode ainda compreender um meio de detecção do complexo antígeno/anticorpo, o qual pode compreender um gerador de sinal, capaz de gerar um sinal detectável. Por exemplo, o anticorpo pode ter uma marcação ( label) com um meio de detecção que permita a detecção do anticorpo quando este estiver ligado ao seu respectivo antígeno.
[00179] Os meios de detecção podem ser um agente de marcação fluorescente, como isocianato de fluoresceína (FIC), isotiocianato de fluoresceína (FITC) e entre outros, uma enzima, como peroxidase de rábano
silvestre (HRP), glicose oxidase ou semelhante, um elemento radioativo como 125I ou 51Cr que produz emissões de raios gama, ou um elemento radioativo que emite pósitrons que produzem raios gama após encontros com elétrons presentes na solução de teste, como 11C, 15O ou 13N. A ligação também pode ser detectada por outros métodos, por exemplo, através de complexos avidina- biotina. Além disso, o agente de marcação pode ser qualquer enzima incluída nos grupos oxidases (como peroxidase de rabanete), luciferases, peptidases (como caspase-3), glicosidases (como beta-galactosidase) e fosfatases (como fosfatase alcalina).
[00180] A ligação dos meios de detecção é de conhecimento geral de um técnico no assunto na área técnica. Neste sentido, os AcM produzidos podem ser metabolicamente marcados pela incorporação de aminoácidos contendo radioisótopos no meio de cultura, ou podem ser conjugados ou acoplados a um meio de detecção através de grupos funcionais ativados. [00181] Os kits de diagnósticos de infecções fúngicas adequados para a presente invenção podem ser basear preferencialmente nas seguintes técnicas: ELISA, Teste Rápido Imunocromatográfico de Fluxo Lateral e Microarranjos Líquidos.
[00182] O teste de ELISA é um teste imunoenzimático que se baseia em reações antígeno-anticorpo que podem ser detectadas através de reações enzimáticas.
[00183] Os antígenos purificados são fixados sobre um suporte sólidos (por exemplo, uma placa de poliestireno) apropriados. Em seguida, a amostra é adicionada aos poços e, caso a amostra seja de um indivíduo positivo para a referida condição, os anticorpos específicos se ligarão aos antígenos fixados no suporte sólido.
[00184] Após esta etapa, adicionam-se anticorpos ligados a marcadores (peroxidase) contra os anticorpos que se ligam aos antígenos. Desta forma, nos poços nos quais ocorrem a ligação antígeno-anticorpo ocorre coloração ao
ser adicionado o substrato para o marcador.
[00185] A ausência de coloração indica a ausência do anticorpo na amostra contra o antígeno do substrato.
[00186] O teste imunocromatográfico de fluxo lateral é composto pela sobreposição de diferentes membranas montadas sobre cartão adesivo suporte. O anticorpo é imobilizado em membrana de nitrocelulose e essa sobreposta por membrana que recebe a amostra a ser testada na região proximal do cartão. Uma membrana impregnada com compostos (conjugados) que revelam a reação está situada em extremidade da membrana de nitrocelulose e uma membrana absorvente na região distai. As tiras resultantes são encaixadas em dispositivos plásticos.
[00187] O teste utiliza amostras (soro, plasma ou sangue) em volume a ser avaliado, imediatamente seguido da aplicação do tampão. A solução tampão auxilia a migração do conjugado e das proteínas contidas na amostra. [00188] A migração da amostra ocorre por capilaridade até a área de linhas teste e controle em temperatura ambiente. A leitura visual do teste é realizada após a completa migração da amostra/tampão, que costuma ocorrer em até 15 minutos. Visualização das linhas teste e controle indicam resultado positivo para a doença. Ausência de visualização da linha teste com simultânea marcação da linha controle indica resultado negativo e ausência de visualização da linha controle invalida o teste.
[00189] Microarranjos líquidos é um ensaio realizado em suspensão com uma matriz de microesferas de poliestireno, com 5,6 ou 6,5 micrômetros de diâmetro que funcionam como suporte sólido para o acoplamento de anticorpos através de ligação covalente. A detecção da reação anticorpo- antígeno ocorre com o auxílio de uma molécula de detecção (fluoróforo), em especial a ficoeritrina. Neste sistema é possível empregar uma mistura de diferentes tipos de microesferas, que são uniformes em tamanho, todavia, emitem intensidades de fluorescência distintas.
[00190] O acoplamento ocorre por meio de uma ligação covalente entre a superfície carboxilada das microesferas e aminas primárias presentes em anticorpos.
[00191] As microesferas contêm corantes internos que possuem códigos individuais que se diferenciam quanto ao perfil único de emissão. Dessa forma, é possível realizar uma análise simultânea de múltiplos analitos, pois cada microesfera acoplada covalentemente a um reagente de captura, pode ser distinguida pelo seu espectro.
[00192] A leitura da reação é realizada através da aspiração das microesferas em solução que são transportadas a uma câmara especial. Nesta, as microesferas são centralizadas num fluxo contínuo e de maneira individualizada, de forma que dois lasers interceptem uma única partícula por vez e identifiquem com precisão cada código.
[00193] Em uma sexta concretização, a invenção fornece um kit para tratamento de infecções fúngicas que compreende
(i) anticorpo monoclonal como definido na reivindicação 1 ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 2 a 4; e
(ii) Agentes antifúngicos;
(iii) Instruções para uso dos componentes em combinação.
[00194] Em uma sétima concretização, a invenção fornece um método para o tratamento de infecções fúngicas que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido anticorpo ou a referida composição em um indivíduo com necessidade do mesmo.
[00195] Em uma oitava concretização, a invenção fornece um anticorpo ou composição para uso no tratamento de infecções fúngicas em um indivíduo com necessidade do mesmo.
[00196] O uso no tratamento pode ser tanto para tratamento humano, quanto veterinário. Preferencialmente o indivíduo tratado é um ser humano que necessita de tratamento
[00197] A quantidade efetiva precisa para um indivíduo humano dependerá da gravidade do estado de doença, da saúde geral do indivíduo, da idade, do peso, e do sexo do sujeito, da dieta, do tempo e da frequência de administração, da combinação/combinações de drogas, das sensibilidades de reação, e da tolerância/resposta à terapia. Assim, doses a serem fornecidas dependem de um número de fatores que não podem ser mensuradas antes que os estudos de testes clínicos sejam feitos. O técnico no assunto, no entanto, sabe como chegar a doses adequadas para diferentes tratamentos.
[00198] Os exemplos citados a seguir são meramente ilustrativos, devendo ser empregados somente para uma melhor compreensão dos desenvolvimentos constantes na presente invenção, não devendo, contudo, serem utilizados com o intuito de limitar os objetos descritos.
EXEMPLOS
Exemplo 1 - Tipos celulares e condições de crescimento
[00199] As espécies de fungos utilizadas foram C. neoformans
(sorotipo A, isolado clínico H99 ATCC 208821), C. gatti (sorotipo B, cepa R265 ATCC MYA-4093), C. albicans (ATCC 90028), C. neoformans acapsular (mutante Cap67 ATCC 52817), Giardia lamblia (ATCC 30957), célula de linhagem pulmonar humana A549 (ATCC CCL-185), Escherichia coli (ATCC 9637) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Para os ensaios in vitro e in vivo, as células foram cultivadas em meio mínimo (glicose 15 mM, MgSO4 10 mM, KH2PO429,4 mM, glicina 13 mM, tiamina-HCl 3 μΜ, pH 5,5) e mantidas sob agitação por 2 dias a 30°C. As células foram obtidas por centrifugação, lavadas em PBS e contadas em câmara de Neubauer.
[00200] Foram utilizadas para formação de células híbridas, as células de mieloma linhagem SP2/0 (Sp2/0-Agl4 (ATCC® CRL- 1581™) juntamente com as células B oriundas do baço do animal previamente imunizado com quitooligomêros e pelo fungo C. gattii. O cultivo foi realizado em meio DMEM (LONZA) suplementado com Glutamina 6,4 mM / SFB 10%. Todo o
conteúdo foi transferido para garrafa do tipo T 25cm2 (Corning®) e incubados a 37°C / 5% CO2 até atingir viabilidade necessária.
Exemplo 2 - Imunização dos animais
[00201] A imunização dos camundongos se deu da seguinte forma: camundongos da linhagem Balb/C foram imunizados intraperitonealmente (i.p.; 200 μl) a cada 15 dias. Para tal foram utilizadas duas estratégias diferentes: na primeira estratégia, os animais foram imunizados via i.p. com C. gattii (1x106céls/ml) previamente fixado em paraformolaldeído (PFA) 4% e lavado em PBS seguido de duas imunizações via i.p. com intervalo de 15 dias com 200 μg de quitotriose livre (trímero de moléculas compostas por unidades de β- 1 ,4-N-acetilglucosamina - β-1,4-GlcNAc), utilizando como adjuvante hidróxido de alumínio (Al(OH)3 - l,5mg), respeitando a proporção de 1:1 (v/v). Finalmente, os animais foram imunizados por via intravenosa (i.v.) com 50 μg de quitotriose livre, utilizando PBS como veículo. A segunda estratégia foi idêntica a primeira, exceto pela introdução de uma imunização adicional com quitotriose livre com Al(OH)3 antes da injeção final, i.v. Em ambas as estratégias foram realizadas a sangria ao final das imunizações para verificar o título dos anticorpos no soro através de ELISA indireto. Foi recolhido o soro pré-imune de todos os animais para ser utilizado como controle e cut-off da riagem.
Exemplo 3 - Fusão [00202] Após quatro/cinco imunizações, foi realizada a esplenectomia dos animais para o processamento dos esplenócitos para a execução da fusão celular com células mielômicas murinas SP2/0 (ATCC), adaptado de Kõhler & Milstein 1975.
[00203] Os esplenócitos e as SP2/0 são fusionadas com o auxílio da solução de PEG 3000-3700 a 50%, pré-aquecido a 37°C. Posteriormente, o homogenato de células foi avolumado em meio DMEM suplementado com Glutamina 6,4 mM / Antibiótico (ATB) 1x / SFB 20% em uma proporção de
1x108 células/100mL. Todo o volume da suspensão foi transferido para placas de 96 poços para cultura celular (Corning) a 100 μL/poço, sendo 3 poços da última placa foram adicionados 6 x 104 células SP2/0 que foram utilizadas como controle do meio de seleção. As placas então foram incubadas a 37°C, 5% CO2 por 24 horas e um dia após a incubação inicial, 100 μL de meio DMEM suplementado comGlutamina 6,4 mM / ATB 1x / SFB 20% / hipoxantina, aminopterina, timidina (HAT) 2x foram adicionados aos poços das placas para o início do processo a seleção das células híbridas viáveis resultantes do processo de fusão durante 14 dias. O sobrenadante dos poços foi utilizado para realizar o ensaio de ELISA indireto específico contra quitotriose.
Exemplo 4 - Elisa Direto
[00204] Foram realizados ELISA (97) indireto em dois momentos: 1) Determinação do título do anticorpo no soro dos animais ao final do processo de imunização; 2)Determinação de anticorpo policlonal e monoclonal específicos para quitooligomêros produzidos pelo hibridoma.
Exemplo 4.1 - ELISA para determinação de título no soro animal [00205] A placa de 96 poços foi revestida com quitotriose conjugada a BSA na concentração de 0,5μg/ml em PBS e incubada durante a noite a 4°C. Após a incubação, a placa foi incubada com PBS/BSA 1% por 1 hora a 37°C, posteriormente foi realizada lavagem e adicionado o soro dos animais em diferentes diluições e incubado 2 horas a 37°C. A placa foi lavada três vezes com PBS/Tween 0,05% e adicionado anti-IgG e anti-IgM murino conjugado a peroxidase e incubado 2 horas a 37°C. Após incubação a placa foi lavada como anteriormente descrito e incubada com Tetrametilbenzidina (TMB) e incubada por 30 minutos a 37°C. A reação foi parada com HC1 1 N e obtivemos a leitura em espectrofotômetro a 450nm.
Exemplo 4.2 - ELISA para determinação de anticorpo policlonal e monoclonal
[00206] Foi realizado o mesmo procedimento descrito anteriormente com a diferença que o anticorpo primário da reação foi oriundo do sobrenadante de cultivo dos hibridomas.
Exemplo 5 - Clonagem dos hibridomas polidonais [00207] A clonagem dos hibridomas polidonais positivos no ensaio de ELISA descrito no item anterior se dá através da contagem das células em câmara de Neubauer de modo que a diluição desta suspensão celular apresente ao final uma concentração de 1 célula/poço em um volume final de 200 μl. O cultivo é incubado a 37°C, 5% CO2 por 14 dias e são observadas a clonalidade (monoclonal ou policlonal) a partir do 5° dia. Os cultivos que se mantiverem viáveis e monoclonais são novamente submetidos ao ensaio de ELISA para verificar a especificidade frente ao antígeno determinado. Exemplo 6 - Isotipagem dos clones seledonados
[00208] A isotipagem dos clones previamente selecionados por ELISA foi feita através do kit comercial - Rapid ELISA Mouse mAb Isotyping Kit - ThermoFisher. Para tal, foi feito uma diluição de 1:10 do sobrenadante de cultivo dos clones e adicionado na placa especifica do teste. O kit determina a presença dos isotipos murinos IgGl, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA e IgM presentes na amostra de forma rápida e eficiente.
Exemplo 7 - Extração de RNA dos anticorpos monoclonais seledonados
[00209] A extração de RNA foi feita de cada anticorpo monoclonal oriundo de uma garrafa de cultivo T-25, na qual foi recolhido apenas as células por meio de centrifugação (400 g por 10 minutos a temperatura ambiente). O pellet de cada anticorpo monoclonal foi utilizado para a extração do RNA total com o kit comercial RNeasy Mini Kit (Qiagen), seguindo protocolo estabelecido pelo fabricante.
Exemplo 8 - Reação em Cadeia da Polimerase via Transcriptase Reversa (RT-PCR)
[00210] Previamente à etapa de RT-PCR foi realizada a síntese de
cDNA dos monoclonais através do kit comercial Super Script ΙΠ First-Strand Synthesis System (INVITROGEN) .
[00211] Posteriormente, foi realizada a PCR com os oligonucleotídeos iniciadores selecionados a partir da publicação de Zhou et al. 1994 por serem descritos como primers universais para a cadeia variável pesada (VH) e cadeia variável leve (VL) murino como descrito na tabela 2. As sequências obtidas foram avaliadas frente ao banco de dados de Kabat.
[00212] A RT-PCR foi feita de acordo com as seguintes condições: desnaturação inicial 94°C/5 minutos, desnaturação 94°C/2 minutos, anelamento 48°C/1 minuto, extensão 72°C/1 minuto e 30 segundos repetidos por 30 vezes e extensão final 72°C/1 minuto para cadeia VH e as mesmas condições para VL, porém com a temperatura de anelamento de 55°C/1 minuto.
[00213] A visualização das bandas foi feita em gel de agarose 1,5% no tamanho de aproximadamente 570pb para VH e 370pb para VL.
Tabela 2- Oligonucleotídeos sintéticos utilizados na reação de RT-PCR para amplificação dos cDNAs codificadores para VH e VL murinas a partir da extremidade 5'
Exemplo 9 - Sequenciamento do DNA dos anticorpos monodonais selecionados [00214] O sequenciamento do DNA dos anticorpos monoclonais selecionados foi feito de acordo com o protocolo descrito no kit comercial kit BigDye Terminator v3.1 (Life Technologies) e para tal foram utilizados os mesmos primers descritos na PCR (exemplo 8). Além disso, foi avaliado a identidade de cada sequenciamento utilizando a ferramenta BLAST - do inglês, Basic Local 54 Alignment Search Tool (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast), entre as sequências de VH e VL dos hibridomas selecionados. As sequências foram analisadas usando o programa SeqMan (DNAStar) e para identificação dos CDR1, 2 e 3, as sequências gênicas foram submetidas a análise pela ferramenta IgBlast (IgBlast Tool NCBI NIH; https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/).
Exemplo 10 - Purificação dos Anticorpos Monoclonais (AcMs) [00215] A purificação dos AcMs se deu em três fases: precipitação por PEG, cromatografia de exclusão molecular e cromatografia de troca iônica no sistema de cromatografia líquida de alta eficiência (AKTA Purifier 10; GE Healthcare).
[00216] A precipitação por PEG foi realizada submetendo o sobrenadante do cultivo a precipitação com polietilenoglicol (PEG 6000) na concentração de 4% (p/v). A suspensão foi mantida sob agitação por três horas à temperatura ambiente (TA) e, em seguida, procedeu-se a centrifugação do material (1600 xg; 30 minutos; 4°C).
[00217] O sobrenadante obtido após a centrifugação foi submetido a uma segunda etapa de precipitação com PEG 6000 na concentração de 6% (p/v), seguida de centrifugação nas mesmas condições descritas anteriormente. O precipitado obtido foi dissolvido no volume de 15 mL de solução tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0.
[00218] O material obtido após a segunda precipitação foi fracionado através da cromatografia de exclusão molecular (SEC) utilizando a coluna Superdex 200 High Load 26 x 60 (320mL) com fluxo de 3,0 mL/min, sendo utilizado como eluente a solução tampão Tris-HCl 50mM, pH=8,0, com volume de coleta igual a 10 mL.
[00219] Após a seleção e pool das amostras provenientes da SEC foi realizada a cromatografia de troca aniônica em coluna Poros HQ 10 x 100. A eluição das frações foi realizada em fluxo de 5,0 mL/min na solução tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0 com gradiente salino em dois segmentos (20% e 50%). As frações foram coletadas com volume de 4,0 mL.
[00220] A homogeneidade das amostras obtidas em cada etapa do processo de purificação foi avaliada por eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Para a estimativa do peso molecular (PM), foi utilizado o padrão comercial Precision Plus Protein™ Dual Color (Bio- Rad). As proteínas foram reveladas com solução corante Coomassie Blue R350 e o resultado analisado através do software Image Lab™, após o processamento da imagem no sistema Gel Doc™ XR+ (BIO RAD).
Exemplo 11 - Determinação de constante de afinidade e dissociação por Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR)
[00221] Os experimentos de SPR foram realizados usando o sistema BIACORE X (GE Healtcare) equipado com um chip sensor CM5. Os ligantes testados foram os AcM AF1/CC5 e HC6/DD11 (descritos posteriormente em Resultados), aos quais foram imobilizados usando química de acoplamento por amina. As superfícies das duas células de fluxo foram ativadas por 7 min com uma mistura 1: 1 de 0,1 M NHS (N-hidroxisuccinimida) e 0,1 M EDC (3- (N, N-dimetilamino) propil-N-etilcarbodiimida) em uma taxa de fluxo de 10 μl / min. Os ligantes foram imobilizados na concentração de 100 μg/ml em acetato de sódio a 10 mM, pH 5,0. Os resíduos de ésteres foram desativados com uma injeção de 7 min de etanolamina 1 M, pH 8,0.
[00222] Para coletar dados de ligação cinética, o analito BSA- (G1CNAC)3 foi injetado sobre as duas células de fluxo em concentrações de 0,1 e 0,6 nM em uma taxa de fluxo de 5 μl / min e a uma temperatura de 25°C utilizando tampão HBS-EP (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 Mm EDTA e 0,005% P20) pH 7,4.
[00223] Os dados foram ajustados mediante concentração em um modelo simples de interação (1:1) do ligante e do analito usando a opção de análise de dados global, que possibilita ajustar todos os gráficos obtidos simultaneamente. Todos os dados foram analisados no software BiaEvaluation 4.1.
Exemplo 12 - Ensaio de determinação de sitio de ligação
[00224] As placas de 96 poços foram revestidas com quitotriose-BSA na concentração de 0,5 μg/ml em PBS e incubadas durante a noite a 4°C, seguido de incubação com PBS/BSA 1% por 1 hora a 37°. Posteriormente, foi realizada lavagem (PBS/Tween 0,05%) e adicionada uma solução de lectina do germe de trigo (WGA) conjugada a peroxidase na concentração de 25μg/ml, utilizado como controle da reação. Utilizou-se a WGA fria para o sistema de teste com o intuito de bloquear o sitio de ligação a quitotriose-BSA e os AcM para verificar se haveria ligação a quitotriose-BSA. A WGA fria foi incubada por 1 hora a 37°C e, posteriormente lavada três vezes com PBS/Tween 0,05%. Os AcM foram incubados em concentração de 25 μg/ml, seguindo-se incubação por 2 horas a 37°C. A placa foi lavada três vezes com PBS/Tween 0,05% e foram incubados novamente por 2 horas a 37°C com anti-IgM murino conjugado a peroxidase (1:10000). Os sistemas foram lavados como descrito anteriormente e incubados com TMB para revelação das reações sorológicas, conforme descrito anteriormente.
Exemplo 13 - Ensaios funcionais
Exemplo 13.1 - ELISA indireto contra células íntegras adaptado de Stearns et al. 1999
[00225] Para este teste foram utilizados o C. neoformans (H99), Condida albicans , Giardia lamblia, célula de linhagem pulmonar humana A549 (ATCC), Escherichia coli e Staphylococcus aureus. As células foram lavadas em PBS três vezes e suspensas na densidade de 107 células/ml em solução de poli-L-Lisina (5 μg/ml em PBS) para adesão durante a noite a 4°C. No dia seguinte as placas foram bloqueadas com PBS/BSA 5% e incubadas por 1 hora a 37°C para então serem incubadas por 2 horas a 37°C com o AcM anti-quito-oligômero na concentração de 50μg/ml e diluídas até 5μg/ml. Posteriormente, foi realizada a lavagem com PBS/Tween 0,05% por 3 vezes e adicionado anti-IgM murino peroxidase diluído 1 :5000 e incubado por 2 horas a 37°C. As placas foram novamente lavadas e foi adicionado TMB e incubada por 30 minutos a 37°C.
[00226] A reação foi parada com HC1 1 N e obtivemos a leitura em espectrofotômetro a 450nm. Posteriormente a esse ensaio, foi realizado diluições seriadas na densidade das células de 107 até 10 células/ml para os fungos e 107 até 104 células/ml para os outros tipos celulares e testado do AcM anti-quito-oligômero na concentração de 25μg/ml, sendo seguido os mesmos procedimentos descritos anteriormente.
[00227] Além disso, foi realizado ensaio similar com outro derivado da quitina, a quitosana (forma de-acetilada) em diferentes concentrações, mantendo os mesmos procedimentos descritos.
Exemplo 13.2 - Dot Blot contra células íntegras adaptado de Nimrichter etal. 2007
[00228] C .neoformans (H99) e Candida albicans na densidade de 107 células/ml até 10 células/ml foram suspensas em solução de poli-L-Lisina (5 μg/ml em PBS) e 10μ1 foram carregadas em membranas de nitrocelulose. Posteriormente, foi seguido os mesmos passos descritos para o ELISA, porém foi usada a concentração de 25μg/ml dos AcM anti-quitooligômeros. A membrana foi cortada e depositada em placas de 96 poços ao qual foi
adicionado 50μ1 TMB e incubado por 30 minutos a 37°C. O volume foi retirado e transferido para uma nova placa, ao qual foi adicionado a reação de parada com HC1 1 N e lido em espectrofotômetro a 450nm.
Exemplo 13.3 - Avaliação da atividade do AcM anti-quitooligomêro contra células íntegras por imunofluorescência adaptado de Rodrigues et al. 2008 [00229] As células fúngicas (106 células) foram fixadas (tampão cacodilato paraformaldeído 4%; 30 min) e posteriormente bloqueadas (PBS/BSA 1%; lhora). Em seguida, foram incubadas com o AcM anti-quito- oligômero(25 μg/mL; lh a 37°C). Após lavagem com PBS, as células foram incubadas com anticorpo anti-IgM de camundongo conjugado a Alexa 568 (SIGMA; 1:1000). Após a lavagem em PBS, as células foram incubadas com 25 μΜ de calcofluor branco (Invitrogen) e lavadas novamente. As suspensões celulares foram montadas em lâminas de vidro e analisadas sob microscópio Olympus AX70, acoplado ao sistema de câmera (Qlmaging Retiga 1300) e analisados em software QCapture suíte V2.46.
Exemplo 13.4 - Mínima Concentração Inibitória (MIC) adaptado de Joffe et al. 2017
[00230] Células de C. neoformans foram cultivadas em RPMI 1640 tamponado com MOPS em pH 7 na densidade de 105 células/poço em placas de 96 poços no volume final de 200 μl. Os sistemas foram suplementados com AcM na concentração (25 a 0,05 μg/ml), AmB (1 a 0,lμg/ml) ou FLC (8 a 2 μg/ml), sozinhos ou em associação. Após 48 horas de incubação a 37 ° C sob agitação, as células foram suspensas por pipetagem para leitura em espectrofotômetro em comprimento de onda de 592 nm.
Exemplo 13.5 - Formação de Biofilme adaptado de Joffe et al. 2017
[00231] C. neoformans (H99 e Cap67) e Condida albicans foram cultivados em meio Sabouraud por 24 horas a 30°C. As suspensões celulares foram centrifugadas por 5 minutos a 3000g, lavadas três vezes em PBS e
suspensas em meio mínimo (20 mg/ml tiamina, 30 mm glucose, 26 mM glicina, 20 mM MgSO4, e 58,8 mM KH2PO4). Posterionnente, foram adicionadas à placas de 96 poços (100μΙ/poço - 1x106células/ml) e cultivadas por 48 horas a 37°C na presença dos AcM (HC6/DD11 e AF1/CC5) e do AcM anti-GXM 18B7 (apenas para H99) na concentração de 25 μg/ml, mantendo sob agitação por 30 minutos para total homogeneização dos AcM com os fungos. Como controle, foi utilizado o fármaco AmB na concentração de 1 μg/ml.
[00232] Foram realizados dois sistemas de análise: o primeiro, as células foram lavadas, afim de que fossem retiradas as células não aderentes e ficassem apenas as células ligadas ao biofilme em formação; o segundo sistema, as células não foram lavadas e todas as células aderidas ou não ao substrato foram quantificadas.
[00233] A atividade metabólica das células viáveis nos dois ensaios foi avaliada pelo método baseado na redução do XTT (2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl)-5-[(phenylamino) carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide) em espectrofotômetro a 492nm de comprimento de onda.
Exemplo 13.6 - Ensaio de melanização adaptado Walker et al. 2010
[00234] O cultivo do C. neoformans foi feito como parágrafo [0221] e a suspensão celular (lxlO6 células/ml) foi cultivada por 72 horas em meio mínimo suplementado com lmM de L-DOPA em placa de 96 poços de fundo em “U". Foram adicionados ao meio mínimo os anticorpos HC6/DD11 e AF1/CC5 em faixa de concentração de 25 a 0,05μg/ml. A placa foi centrifugada e a quantificação da formação de pigmentos foi determinada densitometricamente após a digitalização das imagens pelo equipamento iBright FL1000 Invitrogen.
Exemplo 14 - Ensaio de Sobrevida [00235] Camundongos da linhagem Balb/C (n=7) foram desafiados letalmente via i.p. com 105 células em PBS de C. neoformans (H99) e tratados
2 hora depois com 100 μl de AmB (2,5mg/kg e 0,25mg/kg), 100 μl de AcM (85μg/ml) e 100 μl de uma solução combinada de AcM e AmB (0,25mg/kg). Os animais controle foram desafiados apenas C. neoformans (H99) ou apenas com 100 μΐ de uma solução de PBS, AmB (2,5mg/kg) ou AcM (85μg/ml) sem o fungo (adaptado de Liedke et al). A curva de sobrevivência foi obtida e a análise se estendeu até 90 dias após a infecção, apresentando valor estatístico com p<0.005.
Exemplo 15 - Modelagem Molecular
[00236] As sequências das regiões variáveis dos anticorpos HC6/DD11 e AF1/CC5 foram obtidas por sequenciamento e traduzidas para a obtenção das sequências de aminoácidos correspondentes utilizando a ferramenta de bioinformática ExPASy Translate tool (https://web.expasy.org/translate/). [00237] A humanização das sequências foram realizadas utilizando o banco de dados IMGT (http://imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/Dom ainGapAlign.cgi) para se obter o repertório germinativo humano mais idêntico (identidade percentual) para as cadeias VH e VL.
[00238] A sequências humanizadas obtidas a partir do repertório humano mais idêntico foram alinhadas separadamente utilizando a ferramenta blastp (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov) contra o banco de dados do PDB (Protein Data Bank - https://www.rcsb.org) para a seleção da proteína molde. A construção do modelo tridimensional foi feita utilizando o programa Modeller 9.19.
[00239] O refinamento das estruturas dos modelos de VH e VL murino e humanizados foram submetidos a análises estruturais nos servidores Molprobity e Verify 3D. As estruturas foram refinadas através da correção de rotâmeros incorretos e conformações dos ângulos phi e psi desfavoráveis, segundo o gráfico de Ramachandran utilizando o programa Coot. O posicionamento espacial de VH/VL GB2 foi determinado através do alinhamento de VH e VL com o modelo de anticorpo neutralizante 5JHL
(Código PDB) anti E-ZIKV utilizando o programa PyMol (PyMOL Molecular Graphics System, Version 1.8 Schrõdinger, LLC).
Exemplo 16 - Desenvolvimento de anticorpo monoclonal murino contra quitooligômeros através da tecnologia de hibridoma Exemplo 16.1 - Titulação dos animais imunizados contra C. gattii e quitotriose [00240] Foram desenvolvidas duas estratégias de imunização e, em ambas, foi realizada sangria ao final da última imunização para verificar o título sérico dos anticorpos (Figura 6). Independente da estratégia adotada, foi obtido o título de 1:3200, tanto para IgG quanto para IgM dosados no soro, sendo utilizado para triagem a quitotriose-BSA. Para estabelecimento de linha de corte, foram utilizados os valores de absorbância obtidos em reações com o soro pré-imune. Foram utilizados os três animais para dar prosseguimento à fusão.
Exemplo 16.2 - Seleção de hibridomas produtores de AcM por ELISA [00241] Foram realizadas 3 fusões a partir da esplenectomia dos 3 animais. Os esplenócitos foram fusionados com Sp2/0 e foram obtidos 172 hibridomas, 4 dos quais produzindo anticorpos reativos contra quitotriose.
[00242] Os quatros hibridomas produtores de anticorpos policlonais foram submetidos a clonagem, gerando 541 hibridomas produtores de AcM. Nesse grupo, foram selecionados 58 hibridomas reativos contra quitotriose, sendo, finalmente, selecionados para estudos posteriores os 10 hibridomas que apresentaram maior resposta (densidade óptica - D.O. ≥ 3x cut-off) em testes de ELISA usando quitotriose-BSA como antígeno primário.
Exemplo 16.3 - Purificação do AcM
[00243] Os 2 AcMs foram purificados através de Cromatografia de Troca Iônica e analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida (Figura
8).
[00244] Todas as alíquotas de IgM apresentaram duas bandas
principais da IgM, correspondentes às cadeias pesadas (~70kDa) e leves (massa molecular variando entre ~23-24kDa) da imunoglobulina M. As demais bandas observadas são sugestivas de redução parcial da IgM e micro heterogeneidade proteica e glicídica.
Exemplo 16.4 - Identificação de CDR
[00245] Os hibridomas produtores dos AcM AF1/CC5 e HC6/DD11 tiveram seu RNA extraídos para gerar um cDNA e consequentemente ser amplificado através de PCR as VH e VL de ambos os AcM. Após a amplificação, as cadeias foram sequenciadas e tiveram seus CDRs identificados através de um sistema numeração de Kabat, que é um esquema para a numeração de resíduos de aminoácidos em anticorpos baseados em regiões variáveis. Com o CDR identificado, foi realizado o alinhamento através da base de dados de imunoglobulina, IgBlast, para verificar a identidade dos AcM com as imunoglobulidas depositadas no GeneBank.
[00246] Para tal foi obtida uma identidade muito elevada de ambos os AcM, porém os mesmos tiveram diferenças pontuais no CDR3 de VH do HC6/DD11 onde houve a mudança de um aminoácido com relação ao depositado no banco e alteração no CDR3 de VH e VL do AF1/CC5, sendo que o CDR3 da cadeia pesada houve um maior percentual de alterações chegando a 95% de identidade contra os 99% dos outros CDR3 apontados conforme demonstra a tabela 3 e 4, respectivamente.
Exemplo 16.5 - ELISA utilizando PL:
[00247] A PL é um polímero de lisina que confere carga positiva a superfície de garrafas, placas ou lâminas que servem de substrato celular. Fungos possuem parede celular composta de quitina, que é constituída por cadeias longas de N-acetilglicosamina, um polímero que possui carga negativa. C. neoformans, além da quitina, possui uma capsula polissacaridica constituída predominantemente por glicuronoxilomanana e galactoxilomanana, que também possuem carga negativa na sua estrutura. Diante desse cenário, foi utilizada a PL para alterar a carga da placa (positiva) e consequentemente conseguir fazer a adesão das células a essa superfície.
[00248] Neste ensaio, foi utilizado 107células/ml de C. albicans para realizar uma curva de absorbância, na qual se observou que tínhamos um sinal confiável na concentração de 25μg/ml de ambos os AcM, já que acima desse valor a curva começa a entrar em platô, como demonstrado na Figura 9. Com o intuito de verificar a sensibilidade de detecção de ambos os AcM, foi realizada uma curva de saturação de células. Foi determinado que o nível máximo de sensibilidade de ambos os AcM foi de 103 células/ml. Essa conclusão foi obtida em função da detecção de um sinal de reação considerado positivo 3 vezes maior que o cut-off (branco da reação). Entretanto, o sinal obtido pelo anticorpo HC6/DD11 foi ligeiramente mais sensível nas concentrações de 104 e 105 células/ml, enquanto para o AF1/CC5 obteve-se um platô para ambas as células.
Exemplo 16.6 - Dot Blot utilizando PL
[00249] O princípio utilizado nesse ensaio foi o mesmo do ELISA e se baseou na carga apresentada pelos fungos. Como a membrana de nitrocelulose possui carga negativa, foi utilizada a PL para conferir carga positiva ao fungo e consequentemente ter ligação a membrana.
[00250] Como demonstrado na Figura 11, foi inicialmente diluido em
5μg/ml de PL na concentração de 107células/ml e diluido na base 10. Nesse ensaio foi demonstrado que o AcM HC6/DD11 foi capaz de se ligar a C. albicans até a ordem de 104células/ml o que se contrapõe ao C. neoformans que foi identificado até a ordem de 106células/ml. Foi realizado 3 experimentos independentes para cada ensaio.
Exemplo 16.7 - Imunofluorescênda
[00251] A partir dos ensaios confiáveis do ELISA e Dot Blot, foi inicado os testes de validação de atividade biológica. Nesse sentido, os AcMs foram utilizados através de imunofluorescênda (IF), usando o patógeno Condida albicans como modelo. Os AcMs se mostraram eficazes na marcação da parede celular fúngica, demonstrando o mesmo perfil quando utilizado marcador padrão (lectina), dados não mostrados. Este experimento foi realizado por 3 vezes e demonstraram o mesmo padrão de resposta, porém a Figura 12 apresenta o dado de um experimento isolado.
Exemplo 16.8 - Ensaio de Melanização
[00252] A habilidade de C. neoformans em produzir pigmentos de melanina representa seu segundo mais importante fator de virulência, após a presença da cápsula de polissacarídeo. Diante desse cenário, foi proposto avaliar a atividade dos AcMs no depósito da melanina na parede celular fúngica.
[00253] As concentrações estabelecidas de AcM HC6/DD11 e
AF1/CC5 foram de 0,2 a 25μg/ml. A L-DOPA foi utilizada com substrato para a melanização.
[00254] A pigmentação em C. neoformans foi avaliada visualmente
através da observação de sedimentação marrom a preto no fundo das placas de 96 poços. Para documentar a pigmentação ou sua inibição, as placas foram fotografadas sobre superfícies brancas (fundo claro), para permitir a diferenciação entre populações pigmentadas e não pigmentadas. Cabe destacar, que todas as doses de AcM apresentaram crescimento fúngico, porém com pigmentação negativa ou inibição parcial.
[00255] Foi demonstrado que os tratamentos com o AcM HC6/DD11 inibem a melanização, parcialmente, até a concentração até a 6,2 μg/ml (p<0,05), enquanto nas concentrações menores não há inibição significativa (p>0,05). O AcM AF1/CC5 inibe a melanização até a concentração de 6,2 μg/ml (p<0,001), enquanto nas concentrações de 3,2 e 1,6 μg/ml (p<0,05) há inibição parcial e nas menores concentrações não há inibição significativa (p>0,05). (Figura 13)
Exemplo 16.9 - Formação de Biofilme
[00256] A formação de biofílme é de grande importância na clínica médica, uma vez que causa dificuldades no tratamento de diversas enfermidades, incluindo a criptococose. Diante desse cenário, foi proposto avaliar o efeito dos AcMs na formação do biofílme por ensaio de ΧΤΓ. [00257] Foram testados os AcMs (25 μg/ml) contra três espécies de fungo (C. albicans, C. neoformans - H99 - e o mutante acapsular de C. neoformans - Cap67) tendo como controle o AcM anti-GXM 18B7 (25 μg/ml) apenas para H99. No primeiro ensaio (Figura 14 A e B) as suspensões celulares foram lavadas para retirada das células não aderentes ao substrato. Os AcMs inibiram significativamente a formação de biofílme quando comparad as células não tratadas e aderidas diretamente ao substrato (p<0,05). No segundo ensaio (Figura 14 C e D) as suspensões celulares não foram lavadas e, novamente, os AcM inibiram a formação do biofílme (p<0,05) quando comparada as células não tratadas com os anticorpos. Em ambos os ensaios foram observados o crescimento das células.
[00258] Os AcMs foram comparados com o AcM anti-GXM 18B7 quanto a inibição da formação de biofilme. Tanto para as suspensões celulares lavadas para aquelas não lavadas, os AcMs foram capazes de inibir significativamente a formação de bioflme da célula H99 quando comparada ao efeito das células não tratadas, além de apresentar comportamento semelhante ao AcM anti-GXM 18B7 (p<0,05) (Figura 15).
[00259] Foi demonstrado que os tratamentos com o AcM afetam a formação de biofilme (p<0,05) quando comparados ao fungo não tratado, além de apresentar um comportamento similar a AmB. Todos os tratamentos testados afetaram apenas a formação de biofilme, pois houve crescimento celular.
Exemplo 16.10 - ELISA contra diversas células utilizando PL
[00260] Neste ensaio foi utilizado o mesmo princípio para marcação de fungo por ELISA utilizando PL, porém foi realizado contra diferentes tipos celulares para demonstrar que o AcMs são específicos contra quintina e consequentemente contra fungo. Para tal foi utilizado uma linhagem de célula pulmonar humana, A549, Giardia lamblia e bactéria gram negativa e gram positiva. O gráfico demonstra que em todas as densidades celulares os AcMs não foram capazes de identificar o alvo específico em contrapartida apresentou o mesmo resultado para a identificação do alvo em C. neoformans, o que demonstra que os AcMs são alvos especifico e conserva sua sensibilidade em 106 células/ml como demonstra a Figura 16. O experimento foi realizado por 3 vezes, as quais mantiveram sua reprodutibilidade.
Exemplo 16.11 - Ensaio de Mínima Concentração Inibitória [00261] A atividade fungicida dos AcMs foi testada através do teste de CIM. Nenhum dos AcMs apresentoram efeito fungicida, ao contrário dos controles com 1 μg/ml de AmB e 8 μg/ml de FLC (Figura 18 e 19). Foi avaliado se a associação dos AcMs com AmB ou FLC potencializaria efeitos antifungicos em concentrações sub-inibitórias, desta forma foram utilizadas as
concentrações 0,1 μg/ml de AmB e de 4 e 2 μg/ml para o FLC em combinação com diferentes concentrações dos AcMs. Para avaliar se houve efeito combinatório dos AcMs com o fármaco, foi utilizado como base a ação do fármaco de forma isolada.
[00262] Ao avaliar a ação fungicida dos AcMs em combinação com a concentração sub-inibitória de AmB, foi observado que a concentração de 6,2 μg/ml de ambos os anticorpos potencializou a ação fungicida da AmB na sua concentração sub-inibitória quando comparada a ação isolada do fármaco em sua concentração ideal de ação (p<0.001). Entretanto, houve potencialização do efeito fungicida da AmB 0,1 μg/ml quando em combinação com anticorpo HC6/DD11 a partir da concentração de 1,6 μg/ml (p<0,01), enquanto para o anticorpo AF1/CC5 o efeito combinatório apresentou efeito fungicida a partir da concentração de 3,2 μg/ml (p<0,01), quando comparado a concentração sub-inibitória de AmB isolada (Figura 18).
[00263] Com relação ao efeito combinatório dos AcMs com o FLC, foi observado o efeito fungicida parcial dos anticorpos (3,2 μg/ml para ambos o AcM) em combinação com o FLC (4 μg/ml) (p<0.01). Desta forma, houve potencialização da ação do fármaco quando comparada com a forma isolada na concentração de 4 μg/ml. Além disso, foi observada ação fungicida combinatória dos AcMs com o FLC na concentração de 2 μg/ml, visto que potencializou a ação do fármaco alcançando níveis da forma isolada na concentração de 4 μg/ml Exemplo 16.12 - Ensaio de Sobrevida
[00264] Os camundongos foram letalmente desafiados com um inóculo i.p. de 1 x 105 células de levedura C. neoformans cepa H99. Após 2 horas foram tratados com PBS (controle negativo), 85 μg/animal de AcM (HC6/DD11) de forma isolada, 0,25 ou 2,5mg/kg de AmB de forma isolada e de forma sinérgica o AcM mantendo as concentrações teste. Os tratamentos foram repetidos por mais duas vezes com um intervalo de 10 dias.
[00265] Os animais infectados com C. neoformans e tratados com PBS morreram no dia 28 pós infecção, enquanto os tratados com AcM morreram até o dia 29, o grupo dos animais tratados apenas com AmB a 0,25 mg/kg vieram a óbito no dia 37, enquanto o grupo sinérgico (AcM -85μg/animal - com AmB - 0,25 mg/kg -) não apresentou óbito. O grupo controle tratado com a dose padrão de AmB (2,5mg/kg) não houve óbito como esperado (dado não mostrado). Desta forma, foi obtido 100% de sobrevivência dos animais infectados com C. neoformans e tratados com AcM HC6/DD11 e AmB subinibitória.
[00266] O grupo sinérgico foi significativamente estatístico com relação ao grupo tratado com PBS e AcM (p<0.001). O mesmo foi observado com relação ao grupo tratado com AmB (0,25 mg/kg) (p=0.01). Os animais sobreviventes do grupo tratado com mAb e AmB não apresentaram sintomas até o final do experimento (90 dias) (Figura 20).
Exemplo 16.13 - Modelagem Comparativa [00267] Com o intuito de humanizar os AcM murinos, foi realizado um alinhamento das cadeias leve e pesada dos AcM HC6/DD11 e AF1/CC5 contra o banco de dados de anticorpos humanos do IMGT (http://imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi). As sequências que apresentaram maior homologia para HC6/DD11 cadeia pesada e leve foram, respectivamente, IGHV3-11*01 e IGKV1-16*01, enquanto para o AF1/CC5 foram, respectivamente, IGHV3-73*01 e IGKV1-17*03. Os aminoácidos que diferiam entre as sequências murinas e humanas foram substituídas pelos aminoácidos presentes no framework dos anticorpos humanos.
[00268] Para obter as estruturas tridimensionais dos anticorpos HC6/DD11 e AF1/CC5 murinos e humanizados foi utilizada a metodologia de modelagem molecular. Realizou-se um alinhamento local através do BLASTp (Basic Local Alignment Search Tool)) contra o banco de dados PDB para a
escolha e seleção das proteínas molde. Foram utilizados como modelo para o AcM HC6/DD11 murino a sequência 4U0R, enquanto para AF1/CC5 murino as seguintes sequências de cadeia pesada e leve, respectivamente, 5UK 3NFT. Com relação ao humanizado do HC6/DD11 foi utilizada a sequência 5F72, enquanto para o humanizado do AF1/CC5 cadeia pesada e leve foram 6MAM e 3NFP, respectivamente.
[00269] A construção dos modelos tridimensionais foi feita utilizando o programa Modeller 9.19. Os modelos murinos e humanizados obtidos foram submetidos a minimização de energia utilizando o programa Wincoot e alinhados entre si para verificar as estruturas preditas (Figura 21). REFERÊNCIAS
[00270] 1. Kõ Hler JR, Casadevall A, Perfect J. The Spectrum of Fungi That Infects Humans. [cited 2018 Dec 6]; Available from: www.perspectivesinmedicine.org.
[00271] 2. Heitman J. Microbial Pathogens in the Fungai Kingdom.
2011 [cited 2018 Dec 6]; Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles /PMC3081590/pdf/nihms- 264974.pdf.
[00272] 3. Armstrong- James D, Meintjes G, Brown GD. A neglected epidemic: fungal infections in HIV/AIDS. 2014 [cited 2018 Aug 15]; Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j .tim.2014.01.001.
[00273] 4. Bongomin F, Gago S, Oladele R, Denning D. Global and Multi-National Prevalence of Fungai Diseases — Estimate Precision. J Fungi [Internet]. 2017;3(4):57. Available from: http://www.mdpi.com/2309- 608X/3/4/57.
[00274] 5. Brown GD, Denning DW, Gow NAR, Levitz SM, Netea MG, White TC. Hidden killers: Human fungai infections. Sei Transi Med. 2012;4(165).
[00275] 6. Vallabhaneni S, Mody RK, Walker T, Chiller T. The Global
Burden of Fungai Diseases. 2016 [cited 2018 Aug 22]; Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.idc.2015.10.004.
[00276] 7. Benedict K, Richardson M, Vallabhaneni S, Jackson BR,
Chiller T. Fungal infections 7 Emerging issues, challenges, and changing epidemiology of fungai disease outbreaks. Ser Lancet Infect Dis [Internet]. 2017 [cited 2018 Aug 17]; 17:403-15. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/.
[00277] 8. Nucci M, Marr K a. Emerging fungai diseases. Clin Infect
Dis. 2005;41(4):521-6.
[00278] 9. Harris JR, Lockhart SR, Sondermeyer G, Vugia DJ, Crist MB, Tobin D’angelo M, et al. Cryptococcus gattii Infections in Multiple States Outside the US Pacific Northwest. 2013 [cited 2018 Aug 22]; 19(10). Available from: http://dx.doi.org/10.3201/eidl910.130441.
[00279] 10. Harris JR, Lockhart SR, Debess E, Marsden-Haug N, Goldoft M, Wohrle R, et al. Cryptococcus gattii in the United States: Clinicai Aspects of Infection With an Emerging Pathogen. [cited 2018 Aug 22]; Available from: https ://academic.oup.com/cid/article- abstract/53/12/1188/400737.
[00280] 11. Polvi EJ, Li X, 0’meara TR, Leach MD, Cowen LE.
Opportunistic yeast pathogens: reservoirs, virulence mechanisms, and therapeutic strategies. [cited 2018 Aug 16]; Available from: https ://link.springer.com/content/pd f/10.1007 %2Fs00018-015-1860-z.pdf. [00281] 12. Leach MD, Cowen LE. Surviving the Heat of the Moment:
A Fungai Pathogens Perspective [Internet], [cited 2018 Aug 21]. Available from: http://www.wellcome.ac.uk/Funding/.
[00282] 13. Bain JM, Lewis LE, Okai B, Quinn J, Gow NAR, Erwig L- P. Non-lytic expulsion/exocytosis of Candida albicans from macrophages. Fungai Genet Biol [Internet]. 2012 [cited 2018 Aug 21];49:677-8. Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3430864/pdf/main.pdf.
[00283] 14. Moraes Nicola A, Robertson EJ, Albuquerque P, da Silveira Derengowski L, Casadevall A. Nonlytic Exocytosis of Cryptococcus neoformans from Macrophages Occurs In Vivo and Is Influenced by Phagosomal pH. 2011 [cited 2018 Aug 21]; Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pm c/articles/PMC3150755/pdf/mBio.00167- ll.pdf.
[00284] 15. Coelho C, Bocca AL, Casadevall A. The Tools for
Virulence of Cryptococcus neoformans. Adv Appl Microbiol [Internet]. 2014 Jan 1 [cited 2018 Aug 21];87:1- 41. Available from: https ://www.sciencedirect.com/scien ce/article/pii/B9780128002612000013 ?via%3Dihub.
[00285] 16. Rajasingham R, Smith RM, Park BJ, Jarvis JN, Govender NP, Chiller TM, et al. Global burden of disease of HIV-associated cryptococcal meningitis: an updated analysis. [cited 2018 Aug 21]; Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5818156/pdf/nihms886671.p df.
[00286] 17. Giacomazzi J, Baethgen L, Carneiro LC, Millington MA, Denning DW, Colombo AL, et al. The burden of serious human fungai infections in Brazil. Mycoses. 2016;59(3): 145-50.
[00287] 18. Roemer T, Krysan DJ. Antifungal Drug Development : Challenges , Unmet Clinicai Needs , and New Approaches. 2016;.
[00288] 19. Kontoyiannis DP. Antifungal Resistance: An Emerging
Reality and A Global Challenge. Glob Chall Antifung Resist · JID [Internet]. 2017 [cited 2018 Sep 18];2017:216. Available from: https://academic.oup.eom/jid/article-abstract/216/suppl_3/S431/4107053. [00289] 20. Spivak ES, Hanson KE. Candida auris : an Emerging
Fungai Pathogen. Kraft CS, editor. J Clin Microbiol. 2017 Nov;56(2):e01588-
17.
[00290] 21. Ostennann H, Solano C, Jarque I, Garcia- Vidal C, Gao X, Barrueta JA, et al. Cost analysis of voriconazole versus liposomal amphotericin B for primary therapy of invasive aspergillosis among patients with haematological disorders in Germany and Spain [Internet]. Vol. 15. 2014 [cited 2018 Aug 21]. Available from: http://www.biomedcentral.eom/2050- 6511/15/52.
[00291] 22. Lin X. Cryptococcus neoformans: Morphogenesis, infection, and evolution. Infect Genet Evol. 2009;9(4):401-16.
[00292] 23. Kwon-Chung KJ, Bennett JE, Wickes BL, Meyer W, Cuomo CA, Wollenburg KR, et al. The Case for Adopting the "Species Complex" Nomenclature for the Etiologic Agents of Cryptococcosis.
2017 [cited 2018 Dec 11]; Available from: https ://doi.org/l 0.1128/ mSphere.00357- 16.
[00293] 24. Hagen F, Khayhan K, Theelen B, Kolecka A, Polacheck I, Sionov E, et al. Recognition of seven species in the Cryptococcus gattii/Cryptococcus neoformans species complex. Fungai Genet Biol [Internet]. 2015 May [cited 2019 Aug 20] ;78: 16-48. Available from: https ://linkinghub .elsevier.com /retrieve/pii/S 1087184515000328.
[00294] 25. Kwon-Chung KJ, Fraser JA, Doering TL, Wang Z, Janbon G, Idnurm A, et al. Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii, the Etiologic Agents of Cryptococcosis [Internet], [cited 2018 Dec 11]. Available from: www.perspectivesinmedicine.org.
[00295] 26. Chayakulkeeree M. Cryptococcosis. 2006;20:507-44.
[00296] 27. Colombo ANAC, Rodrigues ML. Fungai colonization of the brain : anatomopathological aspects of neurological cryptococcosis epidemic in HIV patients ( Armstrong-James et al . people die each year because of systemic fungai cryptococcosis presented in the last ( 9 th ) edition and Cryp. 2015;87:1293-309. [00297] 28. Lin X, Heitman J. The Biology of the Cryptococcus
neoformans Species Complex. Annu Rev Microbiol [Internet]. 2006;60(1):69-105. Available from: http://www.annualreviews.org/doi/10.1146/annurev.micro.60.080805.142102. [00298] 29. Casadevall A, Pirofski L-A. MINIRE VIE W S Accidental
Virulence, Cryptic Pathogenesis, Martians, Lost Hosts, and the Pathogenicity of Environmental Microbes. Eukaryot Cell [Internet]. 2007 [cited 2018 Dec
11];6(12):2169— 74. Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2168257/pdf/0308-07.pdf . [00299] 30. Dutra FF, Albuquerque PC, Rodrigues ML, Fonseca FL.
Warfare and defense: The host response to Cryptococcus infection. Fungal Biol Rev [Internet]. 2018;32(2):35-51. Available from: https://doi.org/10.1016 /j.fbr.2017.09.002.
[00300] 31. Templeton S, Pirofski L-A, Johnston SA, Wormley FL,
Williamson PR, Elsegeiny W, et al. immunology of Cryptococcal infections: Developing a Rational Approach to Patient Therapy. 2018 [cited 2018 Aug 10];9:651. Available from: www.frontiersin.org.
[00301] 32. Olszewski MA, Wormley FL, Williamson Sarah E
Hardison PR, Malachowski AN, Davis JJ, Vedula P, et al. Polarization Response by Promoting Macrophage M2 during the Afferent Phase of the Immune Cryptococcus neoformans Expansion of Homolog Ssal Contributes to Pulmonary Cryptococcal Heat Shock Protein 70. J Immunol Ref [Internet]. 2015 [cited 2019 Feb 6];194:5999-6010. Available from: http://www.jimmunol.Org/content/194/12/5999http://www.jimmunol.org/cont ent/194/12/5999.full#ref-list-l.
[00302] 33. Campuzano A, Wormley FL. Innate Immunity against
Cryptococcus, from Recognition to Elimination. [cited 2018 Aug 10]; Available from: www.mdpi.com/joumal/jof.
[00303] 34. Olszewski MA, Wormley FL, Chrissy Leopold Wager JM,
Hole CR. Mice Infection in Cryptococcus neoformans against STAT1
Signaling Is Essential for Protection. J Immunol Ref [Internet]. 2014 [cited
2019 Aug 20]; 193:4060-71. Available from: http://www.jinMnunol.org/content/
193/8/4060http://www.jimmunol.org/content/193/8/4060.full#ref-list- 1. [00304] 35. Leopold Wager CM, Hole CR, Wozniak KL, Wormley FL,
Jr. Cryptococcus and Phagocytes: Complex Interactions that Influence Disease Outcome. Front Microbiol [Internet]. 2016 [cited 2018 Aug 10];7:105. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26903984. [00305] 36. Liu T-B, Perlin DS, Xue C. Molecular mechanisms of cryptococcal meningitis. 2012 [cited 2019 Feb 6]; Available from: https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=kvir20. [00306] 37. Kozel TR, Wickes B. Fungai Diagnostics. [cited 2018 Aug
24]; Available from: www.perspectivesinmedicine.org.
[00307] 38. Theel ES, Doem CD. D-Glucan Testing Is Important for
Diagnosis of Invasive Fungal Infections. 2013 [cited 2018 Aug 27]; Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3889722/pdf/zjm3478.pdf. [00308] 39. Schwartz S, Kontoyiannis DP, Harrison T, Ruhnke M. Advances in the diagnosis and treatment of fungai infections of the CNS. Lancet Neurol [Internet]. 2018;17(4):362-72. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/S 1474-4422(18)30030-9.
[00309] 40. Meya DB, Manabe YC, Castelnuovo B, Cook BA, Ali M, Kambugu A, et al. Serum Cryptococcal Antigen (CRAG) Screening is a Cost- Effective Method to Prevent Death in HIV- infected persons with CD4 <100/μL starting HIV therapy in Resource-Limited Settings. Clin Infect Dis. 2010;51(4):448-55.
[00310] 41. Bames PD, Marr KA. Aspergillosis: Spectrum of Disease,
Diagnosis, and Treatment. [cited 2018 Aug 24]; Available from: https://ac.els- cdn.com/S0891552006000511/1 -s2.0-S089155200600051 l-main.pdf?_tid=
507238c0-e399-4d35-a636-9d578d958447&acdnat=1535138005_2968e5
6d5f508d2a5e02c85f2dld7496.
[00311] 42. Ramanan P, Wengenack NL, Theel ES. Laboratory
Diagnostics for Fungai Infections: A Review of Current and Future Diagnostic Assays. Clin Chest Med [Internet]. 2017 ;38(3):535-54. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.ccm.2017.04.013.
[00312] 43. Powers-Fletcher M V, Hanson KE. Nonculture Diagnostics in Fungai Disease. Infect Dis Clin NA [Internet]. 2016 [cited 2018 Aug 27] ;30: 37-49. Available from: http://dx.doi.Org/10.1016/j.idc.2015.10.005. [00313] 45. Lamoth F. Galactomannan and l,3-β-d-Glucan Testing for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis. J Fungi [Internet]. 2016;2(3):22. Available from: http://www.mdpi.eom/2309-608X/2/3/22.
[00314] 46. Jaijakul S, Vazquez JA, Swanson RN, Ostrosky-Zeichner
L. 3)-P-D-Glucan as a Prognostic Marker of Treatment Response in Invasive Candidiasis. [cited 2019 Aug 20];.
[00315] 47. Nguyen H, Wissel MC, Shields RK, Salomoni MA, Hao B,
Press EG, et al. Performance of Candida Real-time Polymerase Chain Reaction, b-D-Glucan Assay, and Blood Cultures in the Diagnosis of Invasive Candidiasis. [cited 2018 Aug 28]; Available from: https://academic.oup.eom/cid/article-abstract/54/9/1240/391720.
[00316] 48. Onishi A, Sugiyama D, Kogata Y, Saegusa J, Sugimoto T,
Kawano S, et al. Diagnostic Accuracy of Serum 1,3-D-Glucan for Pneumocystis jiroveci Pneumonia, Invasive Candidiasis, and Invasive Aspergillosis: Systematic Review and Meta-Analysis Downloaded from. 2011 [cited 2018 Aug 28]; Available from: http://jcm.asm.org/.
[00317] 49. Sulahian A, Porcher R, Bergeron A, Touratier S, Raffoux
E, Menotti J, et al. Use and limits of (1-3)-β-D-glucan assay (fungitell), compared to galactomannan determination (platelia Aspergillus), for diagnosis of invasive aspergillosis. J Qin Microbiol. 2014;.
[00318] 50. Azab MM, Taleb AFA, Mohamed NAE, Omran FH. Rapid Diagnosis of Invasive Fungai Infections [Internet]. Vol. 4, Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci. 2015 [cited 2018 Aug 29]. Available from: http://www.ijcmas.com.
[00319] 51. Singh N, Paterson DL. Aspergillus Infections in Transplant Recipients. Clin Microbiol Rev [Internet]. 2005 [cited 2018 Aug 29];18(l):44-69. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC54417 l/pdf/0014-04.pdf. [00320] 52. Fisher CE, Stevens AM, Leisenring W, Pergam SA, Boeckh M, Hohl TM. Independent contribution of bronchoalveolar lavage and serum galactomannan in the diagnosis of invasive pulmonary aspergillosis.
[00321] 53. Rampini SK, Zbinden A, Speck RF, Bloemberg G V. Similar efficacy of broad-range ITS PCR and conventional fungal culture for diagnosing fungal infections in non-immunocompromised patients. 2016 [cited 2018 Aug 29]; Available from: https://bmcmicrobiol.biomedcentral.eom/track/p df/10.1186/s 12866-016- 0752-1.
[00322] 54. Zeller I, Schabereiter-Gurtner C, Mihalits V, Selitsch B,
Barousch W, Hirschl AM, et al. Detection of fungal pathogens by a new broad range real-time PCR assay targeting the fungal ITS2 region. 2018 [cited 2018 Sep 18]; Available from: www.ebi.ac.uk/clustalw/.
[00323] 55. Buitrago MJ, Aguado JM, Ballen A, Bemal-Martinez L, Prieto M, Garcia-Reyne A, et al. Efficacy of DNA amplification in tissue biopsy samples to improve the detection of invasive fungal disease. Clin Microbiol Infect [Internet]. 2013 [cited 2019 Aug 21];19:E271-7. Available from: http://www.ncbi.nih.gov/Genbank/.
[00324] 56. Rodrigues ML, Carlos Chagas I, Oswaldo Cruz F. The Multifunctional Fungal Ergosterol. 2018 [cited 2018 Sep 18]; Available from:
https://doi.org/10.1128/mBio.01755-18.
[00325] 57. Pelleschi Taborda C, Frases S, Rao Juvvadi P, Fusco-
Almeida AM, Scorzoni L, A de Paula Silva AC, et al. Antifungal Therapy: New Advances in the Understanding and Treatment of Mycosis. 2017 [cited 2018 Aug 23]; Available from: www.frontiersin.org.
[00326] 58. Vandeputte P, Ferrari S, Coste AT. Antifungal Resistance and New Strategies to Control Fungai Infections Antifungal Resistance and New Strategies to Control Fungai Infections. 2014;(June).
[00327] 59. Edith Albengres, Hervé Le Louët J-PT, Tillement J-P. Systemic Antifungal Agents. Drug Saf [Internet]. 1998 [cited 2019 Aug 22];18(2):83-97. Available from: http://tink.springer.eom/10.2165/00002018- 199818020-00001.
[00328] 60. Denning DW, Venkateswarlu K, Oakley KL, Anderson MJ, Manning NJ, Stevens DA, et al. Itraconazole Resistance in Aspergillus fumigatus [Internet]. Vol. 41. 1997 [cited 2019 Aug 22]. Available from: https://www.ncbi.nlm. nih.gov/p mc/article s/PMC163916/pdf/411364.pdf.
[00329] 61. Lemke F Kiderlen O Kayser Amphotericin B AA. MINI- REVIEW. Appl Microbiol Biotechnol [Internet]. 2005 [cited 2018 Sep 25];68:151-62. Available from: https://tink.springer.eom/content/pdf/10.1007%2Fs00253-005-1955-9.pdf.
[00330] 62. Spitzer M, Robbins N, Wright GD. Combinatorial strategies for combating invasive fungai infections. 2017 [cited 2019 Feb 26]; Available from: http://dx.doi.org/10.1080/21505594.2016.1196300.
[00331] 63. Zotchev S. Polyene Macrotide Antibiotics and their Applications in Human Therapy. Curr Med Chem. 2012; 10(3):211-23.
[00332] 64. Alvarez C, Andes DR, Kang JY, Krug C, Kwon GS. Antifungal Efficacy of an Intravenous Formulation Containing Monomeric Amphotericin B, 5-Fluorocytosine, and Saline for Sodium Supplementation HHS Public Access. Pharm Res [Internet]. 2017 [cited 2018 Sep
25] ;34(5): 1115-24. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5383515/pdf/nihms8 53112.pdf.
[00333] 65. Steimbach LM, Tonin FS, Virtuoso S, Borba HHL, Sanches ACC, Wiens A, et al. Efficacy and safety of amphotericin B lipid- based formulations — A systematic review and meta-analysis. Mycoses. 2017;60(3): 146-54.
[00334] 66. Borba HHL, Steimbach LM, Riveros BS, Tonin FS, Ferreira VL, Bagatim BA de Q, et al. Cost-effectiveness of amphotericin B formulations in the treatment of systemic fungal infections. Mycoses.
2018;61(10):754-63. [00335] 67. Hamill RJ. Amphotericin B Formulations: A Comparative Review of Efficacy and Toxicity. Drugs [Internet]. 2013 Jun 1 [cited 2019
Aug 22] ;73(9):919-34. Available from: http://link.springer.com/10.1007/s40265-013-0069-4.
[00336] 68. Thom CF, Marsh S, Camilo MW, Mcleod HL, Klein TE,
Altman RB. PharmGKB summary: fluoropyrimidine pathways. 2011 [cited
2019 Aug 22]; Available from: http://www.pharmgkb.org/search/annotatedGene/mthfr /index.jsp.
[00337] 69. Mukherjee PK, Sheehan DJ, Hitchcock CA, Ghannoum MA. Combination Treatment of Invasive Fungal Infections. Clin Microbiol
Rev [Internet]. 2005 [cited 2019 Aug 22];18(1): 163-94. Available from: https ://www.nc bi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC544182/pdf/0092-03.pdf. [00338] 70. Fesel PH, Zuccaro A. β-glucan: Crucial component of the fungai cell wall and elusive MAMP in plants. Fungal Genet Biol [Internet]. 2016 May [cited 2019 Aug 22];90:53-60. Available from: https ://linkinghub .elsevier. com/retrieve/pii/S 1087184515300529.
[00339] 71. Odds FC, Brown AJP, Gow NAR. Antifungal agents: mechanisms of action. Trends Microbiol [Internet]. 2003 Jun [cited 2019 Aug
22] ; 11 (6):272— 9. Available from: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0966842X03001173.
[00340] 72. Kurtz MB, Douglas CM. Lipopeptide inhibitors of fungal glucan synthase [Internet]. Vol. 35, Journal of Medicai & Veterinary Mycology. 1997 [cited 2019 Aug 22]. Available from: https://acadeimc.oup.eom/mmy/article-abstract/35/2/79/940389.
[00341] 73. Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S. Imunologia Celular e Molecular. 8th ed. Digital T, editor. Rio de: Elsevier Inc.; 2015. 549 p.
[00342] 74. Kõhler G, Milstein C. Pillars Article : Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature, 1975, 256 (5517): 495-497. J Immunol. 2005;174(5517):2453-5.
[00343] 75. Dos Santos ML, Quintilio W, Manieri TM, Tsuruta LR, Moro AM. Advances and challenges in therapeutic monoclonal antibodies drug development. Brazilian J Pharm Sci. 2018;54(Special Issue):l-15.
[00344] 76. Kaplon H, Reichert JM. Antibodies to watch in 2019.
MAbs [Internet]. 2019;ll(2):219-38. Available from: https://doi.org/10.1080/19420862.2018. 1556465.
[00345] 77. Casadevall A, Pirofski L-A. IMMUNOGLOBULINS IN
DEFENSE, PATHOGENESIS AND THERAPY OF FUNGAL DISEASES. 2012 [cited 2018 Nov 16]; Available from: https://www.ncbi.nlm.nih. gov/pmc/articles/PMC3360875/pdf/nihms375082.pdf.
[00346] 78. Nosanchuk JD, Steenbergen JN, Shi L, Deepe GS, Casadevall A, Casadevall A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J Clin Invest [Internet]. 2003 Oct [cited 2018 Nov 8];112(8): 1164-75. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pub med/14561701.
[00347] 79. Rachini A, Pietrella D, Lupo P, Torosantucci A, Chiani P, Bromuro C, et al. An Anti-Glucan Monoclonal Antibody Inhibits Growth and Capsule Formation of Cryptococcus neoformans In Vitro and Exerts
Therapeutic, Anticryptococcal Activity In Vivo. Infect Immun [Internet]. 2007 [cited 2018 Jul 5];75(ll):5085-94. Available from: http://iai.asm.org/.
[00348] 80. Rodrigues ML, Shi L, Barreto-Bergter E, Nimrichter L, Farias SE, Rodrigues EG, et al. Monoclonal antibody to fungal glucosylceramide protects mice against lethal Cryptococcus neoformans infection. Clin Vaccine Immunol. 2007;14(10):1372-6.
[00349] 81. Guimarães AJ, de Cerqueira MD, Nosanchuk JD. Surface architecture of Histoplasma capsulatum. Front Microbiol. 2011;2(NOV):1-
14.
[00350] 82. Guimarães AJ, Frases S, Gomez FJ, Zancopé-Oliveira RM,
Nosanchuk JD. Monoclonal Antibodies to Heat Shock Protein 60 Alter the Pathogenesis of Histoplasma capsulatum †. Infect Immun [Internet]. 2009 [cited 2018 Sep 20];77(4): 1357-67. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ articles/PMC2663142/pdf/1443-08.pdf. [00351] 83. Kauffman CA. Histoplasmosis: a Clinicai and Laboratory
Update. Clin Microbiol Rev [Internet]. 2007 [cited 2018 Nov 5];20(1):115- 32. Available from: http://cmr.asm.org/.
[00352] 84. Huang H-R, Fan L-C, Rajbanshi B, Xu J-F. Evaluation of a
New Cryptococcal Antigen Lateral Flow Immunoassay in Serum, Cerebrospinal Fluid and Urine for the Diagnosis of Cryptococcosis: A Meta-
Analysis and Systematic Review. 2015 [cited 2018 Aug 27]; Available from: http://joumals.plos.org/plosone/article/file?id= 10.137 l/joumal.pone.0127117 &type=printable.
[00353] 85. Rivera J, Zaragoza O, Casadevall A. Antibody-Mediated Protection against Cryptococcus neoformans Pulmonary Infection Is Dependent on B Cells. Infect Immun [Internet]. 2005 [cited 2018 Jan 18];73(2): 1141-50. Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC546959/ pdfZ0809-04.pdf.
[00354] 86. Posch W, Steger M, Wilflingseder D, Lass-Flõrl C.
Promising immunotherapy against fungal diseases. Expert Opin Biol Ther [Internet]. 2017 [cited 2018 Aug 23];17(7):861-70. Available from: http://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=iebt20.
[00355] 87. Martinez LR, Casadevall A. Specific Antibody Can Prevent Fungal Biofilm Formation and This Effect Correlates with Protective Efficacy. Infect Inraiun [Internet]. 2005 [cited 2019 Feb 27];73(10):6350-62. Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC 1230912/pdf/0374-05.pdf .
[00356] 88. Martinez LR, Moussai D, Casadevall A. Antibody to Cryptococcus neoformans Glucuronoxylomannan Inhibits the Release of Capsular Antigen. Infect Inraiun. 2004;72(6):3674-9.
[00357] 89. Moragues MD, Omaetxebarria MJ, Elguezabal N, Sevilla MJ, Conti S, Polonelli L, et al. A Monoclonal Antibody Directed against a Candida albicans Cell Wall Mannoprotein Exerts Three Anti-C. albicans Activities. Infect Inraiun. 2003;71(9):5273-9.
[00358] 90. Casadevall A, Pirofski L-A. A new synthesis for antibody- mediated immunity NIH Public Access. Nat Immu nol [Internet]. 2012 [cited
2019 Aug 22];13(l):21-8. Available from: http://www.nature.com/reprints/index.html.
[00359] 91. Torosantucci A, Chiani P, Bromuro C, De Bernardis F,
Palma AS, Liu Y, et al. Protection by Anti-b-Glucan Antibodies Is Associated with Restricted b-1,3 Glucan Binding Specificity and Inhibition of Fungal Growth and Adherence. [cited 2019 Feb 26]; Available from: www.plosone.org.
[00360] 92. Brena S, Omaetxebarría MJ, Elguezabal N, Cabezas J, Moragues MD, Pontón J. Fungicidal Monoclonal Antibody C7 Binds to Candida albicans Als3. Infect Immun [Internet]. 2007 [cited 2019 Aug 23];75(7):3680-2. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1932956/pdf/l 840-06.pdf.
[00361] 93. Guimarães AJ, Frases S, Gomez FJ, Zancopé-Oliveira RM,
Nosanchuk JD. Monoclonal Antibodies to Heat Shock Protein 60 Alter the Pathogenesis of Histoplasma capsulatum †. Infect Immun [Internet]. 2009 [cited 2018 Nov 7];77(4): 1357-67. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov /pmc/articles/PMC2663142/pdf/1443-08.pdf. [00362] 94. Beenhouwer DO, Yoo EM, Lai C-W, Rocha MA,
Morrison SL. Human Immunoglobulin G2 (IgG2) and IgG4, but Not IgGl or IgG3, Protect Mice against Cryptococcus neoformans Infection. Infect Immun
[Internet]. 2007 [cited 2019 Aug 23] ;75(3): 1424-35. Available from: https ://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC 1828574/pdf/l 161 -06.pdf. [00363] 95. Buissa-Filho R, Puccia R, Marques AF, Pinto FA, Mufioz JE, Nosanchuk JD, et al. The monoclonal antibody against the major diagnostic antigen of Paracoccidioides brasiliensis mediates immune protection in infected BALB/c mice challenged intratracheally with the fungus. Infect Immun. 2008;76(7):3321-8.
[00364] 96. Smulian AG, Sullivan DW, Theus SA. Immunization with recombinant Pneumocystis carinii p55 antigen provides partial protection against infection: characterization of epitope recognition associated with immunization [Internet]. Vol. 2, Microbes and Infection. 2000 [cited 2019 Aug 23]. Available from: https://pdf.sciencedirectassets.com.
[00365] 97. Saeed AFUH, Ling S, Yuan J, Wang S. The Preparation and Identification of a Monoclonal Antibody against Domoic Acid and Establishment of Detection by Indirect Competitive ELISA. 2017 [cited 2019 Feb 7]; Available from: www.mdpi.com/joumal/toxins.
[00366] 98. Goding, Anoclodies Monoclonal: Principies and Practice, pp. 59-103). (Academic Press, 1986).
[00367] 99. Erwig LP, R Gow NA. Interactions of fungai pathogens with phagocytes. Nat Rev Microbiol. 2016 Mar; 14(3): 163-76. doi: 10.1038/nrmicro.2015.21.
[00368] 100. Katzung B, Masters S, Trevor A. Farmacologia básica e clínica. 12° edição Porto Alegre. AMGH, 2014. [00369] 101. Ward, E.S. et al., Nature 341, 544-546 (1989)).
[00370] 102. Bird et al., Science, 242, 423-426, 1988;.
[00371] 103. Huston et al., PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988).
[00372] 104. Power e Hudson, J Immunol. Methods 242: 193-204 9
(2000)).
[00373] 105. Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90 6444-6448,
(1993).
[00374] 106. Hoogenboom et al. Trends Biotechnol, 15:62-70 (1997);.
[00375] 107. Hoogenboom, et al. Immunotechnology 4:1-20 (1998);.
[00376] 108. McGregor et al. Mol. Biotechnol, 6:155-62 (1996);.
[00377] 109. Bird et al., Science, 242:423-426 (1988);.
[00378] 110. King "Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies" Taylor & Francis, 1998.
Claims
1. Anticorpo, caracterizado por compreender (i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 1, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 2 e VH CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 3; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 4, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 5 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 6; ou
(i) uma sequência VH CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 7, VH CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 8 e VH CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 9; e (ii) uma sequência VL CDR1 como descrita na SEQ ID NO: 10, VL CDR2 como descrita na SEQ ID NO: 11 e VL CDR3 como descrita na SEQ ID NO: 12.
2. Anticorpo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser um anticorpo monoclonal.
3. Anticorpo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por ser um anticorpo murino, anticorpo humanizado, anticorpo humano ou anticorpo quimérico.
4. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender o anticorpo como definido na reivindicação 1, 2 ou 3.
5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por compreender polienos e/ou azóis.
6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por compreender preferencialmente AmB e/ou FLC.
7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, 5 ou 6 caracterizada por compreender ainda um veículo/excipiente farmaceuticamente aceitável.
8. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizada por ser para uso no tratamento de infecções fúngicas.
9. Uso do anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3, caracterizado por ser para a preparação de um medicamento para tratar infecções fúngicas.
10. Uso de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por estar em combinação com polienos e/ou azóis.
11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por estar em combinação com AmB e/ ou FLC.
12. Método de diagnóstico de infecções fúngicas, caracterizado por compreender:
(i) prover o anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3 ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 4 a 8 com uma amostra obtida de uma paciente,
(ii) contatar o referido anticorpo ou a referida composição com a amostra biológica a ser testada por um tempo suficiente e sob condições suficientes para a formação de complexos anticorpo/antígeno; e
(iii) detectar o complexo antigeno/anticorpo formado na etapa anterior através de uma técnica de detecção capaz de gerar um sinal detectável na presença do referido complexo antigeno/anticorpo.
13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por a amostra biológica ser selecionada do grupo compreendendo saliva, urina, soro, sangue, lavado bronco-alveolar, líquor ou líquido peritoneal, ou quaisquer outros fluídos biológicos do paciente.
14. Kit de diagnóstico de infecções fúngicas, caracterizado por compreender o anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3 ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 4 a 8.
15. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por ainda compreender instruções de uso.
16. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 14 e 15, caracterizado por ainda compreender um meio de detecção do complexo
antígeno/anticorpo, o qual pode compreender um gerador de sinal, capaz de gerar um sinal detectável.
17. Kit para tratamento de infecções fúngicas, caracterizado por compreender
(i) anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3 ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 4 a 8; e
(ii) agente antifúngico,
(iii) Instruções para uso dos componentes em combinação.
18. Método para o tratamento de infecções fúngicas, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3 ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 4 a 8 em um indivíduo.
19. Anticorpo como definido na reivindicação 1 a 3 ou composição como definida em qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizado por ser para uso no tratamento de infecções fúngicas em um indivíduo.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202180011835.5A CN115087668A (zh) | 2020-01-31 | 2021-01-12 | 抗体、其用途、药物组合物,包括真菌感染诊断方法、真菌感染诊断试剂盒和真菌感染治疗方法 |
EP21747645.6A EP4169939A4 (en) | 2020-01-31 | 2021-01-12 | ANTIBODY, ITS USE, PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING SAME, METHOD FOR DIAGNOSING FUNGAL INFECTIONS, KIT FOR DIAGNOSING FUNGAL INFECTIONS AND METHODS FOR TREATING FUNGAL INFECTIONS |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
BRBR102020002165-6 | 2020-01-31 | ||
BR102020002165-6A BR102020002165A2 (pt) | 2020-01-31 | 2020-01-31 | Anticorpo, seu uso, composição farmacêutica o compreendendo, método de diagnóstico de infecções fúngicas, kit de diagnóstico de infecções fúngicas e método para tratamento de infecções fúngicas. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2021151180A2 true WO2021151180A2 (pt) | 2021-08-05 |
WO2021151180A3 WO2021151180A3 (pt) | 2021-10-28 |
Family
ID=77080011
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/BR2021/050007 WO2021151180A2 (pt) | 2020-01-31 | 2021-01-12 | Anticorpo, seu uso, composição farmacêutica o compreendendo, método de diagnóstico de infecções fúngicas, kit de diagnóstico de infecções fúngicas e método para tratamento de infecções fúngicas |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP4169939A4 (pt) |
CN (1) | CN115087668A (pt) |
BR (1) | BR102020002165A2 (pt) |
WO (1) | WO2021151180A2 (pt) |
Citations (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3654090A (en) | 1968-09-24 | 1972-04-04 | Organon | Method for the determination of antigens and antibodies |
US3850752A (en) | 1970-11-10 | 1974-11-26 | Akzona Inc | Process for the demonstration and determination of low molecular compounds and of proteins capable of binding these compounds specifically |
US4016043A (en) | 1975-09-04 | 1977-04-05 | Akzona Incorporated | Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies |
US4342566A (en) | 1980-02-22 | 1982-08-03 | Scripps Clinic & Research Foundation | Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes |
EP0120694A2 (en) | 1983-03-25 | 1984-10-03 | Celltech Limited | Processes for the production of multichain polypeptides or proteins |
EP0125023A1 (en) | 1983-04-08 | 1984-11-14 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor |
WO1990014837A1 (en) | 1989-05-25 | 1990-12-13 | Chiron Corporation | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
WO1994013804A1 (en) | 1992-12-04 | 1994-06-23 | Medical Research Council | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5569825A (en) | 1990-08-29 | 1996-10-29 | Genpharm International | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
US5922545A (en) | 1993-10-29 | 1999-07-13 | Affymax Technologies N.V. | In vitro peptide and antibody display libraries |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6111166A (en) | 1994-09-19 | 2000-08-29 | Medarex, Incorporated | Transgenic mice expressing human Fcα and β receptors |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6207418B1 (en) | 1996-10-11 | 2001-03-27 | Abgenix, Inc. | Production of a multimeric protein by cell fusion method |
US6797492B2 (en) | 1991-05-17 | 2004-09-28 | Merck & Co., Inc. | Method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains |
US9209965B2 (en) | 2014-01-14 | 2015-12-08 | Microsemi Semiconductor Ulc | Network interface with clock recovery module on line card |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6200951B1 (en) * | 1998-03-12 | 2001-03-13 | Icos Corporation | Chitinase chitin-binding fragments |
KR20050096499A (ko) * | 2004-03-31 | 2005-10-06 | 한국식품연구원 | 키토산올리고당 및 키틴올리고당의 효소면역측정법 |
-
2020
- 2020-01-31 BR BR102020002165-6A patent/BR102020002165A2/pt unknown
-
2021
- 2021-01-12 EP EP21747645.6A patent/EP4169939A4/en active Pending
- 2021-01-12 CN CN202180011835.5A patent/CN115087668A/zh active Pending
- 2021-01-12 WO PCT/BR2021/050007 patent/WO2021151180A2/pt active Search and Examination
Patent Citations (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3654090B1 (pt) | 1968-09-24 | 1982-07-20 | ||
US3654090A (en) | 1968-09-24 | 1972-04-04 | Organon | Method for the determination of antigens and antibodies |
US3850752A (en) | 1970-11-10 | 1974-11-26 | Akzona Inc | Process for the demonstration and determination of low molecular compounds and of proteins capable of binding these compounds specifically |
US4016043A (en) | 1975-09-04 | 1977-04-05 | Akzona Incorporated | Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies |
US4342566A (en) | 1980-02-22 | 1982-08-03 | Scripps Clinic & Research Foundation | Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes |
EP0120694A2 (en) | 1983-03-25 | 1984-10-03 | Celltech Limited | Processes for the production of multichain polypeptides or proteins |
US4816397A (en) | 1983-03-25 | 1989-03-28 | Celltech, Limited | Multichain polypeptides or proteins and processes for their production |
EP0125023A1 (en) | 1983-04-08 | 1984-11-14 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5585089A (en) | 1988-12-28 | 1996-12-17 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
WO1990014837A1 (en) | 1989-05-25 | 1990-12-13 | Chiron Corporation | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5569825A (en) | 1990-08-29 | 1996-10-29 | Genpharm International | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US6797492B2 (en) | 1991-05-17 | 2004-09-28 | Merck & Co., Inc. | Method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains |
WO1994013804A1 (en) | 1992-12-04 | 1994-06-23 | Medical Research Council | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
US5922545A (en) | 1993-10-29 | 1999-07-13 | Affymax Technologies N.V. | In vitro peptide and antibody display libraries |
US6111166A (en) | 1994-09-19 | 2000-08-29 | Medarex, Incorporated | Transgenic mice expressing human Fcα and β receptors |
US6207418B1 (en) | 1996-10-11 | 2001-03-27 | Abgenix, Inc. | Production of a multimeric protein by cell fusion method |
US9209965B2 (en) | 2014-01-14 | 2015-12-08 | Microsemi Semiconductor Ulc | Network interface with clock recovery module on line card |
Non-Patent Citations (109)
Title |
---|
"Remington's Pharmaceutical Sciences", 1990, ACADEMIC PRESS, INC. |
ALVAREZ CANDES DRKANG JYKRUG CKWON GS: "Antifungal Efficacy of an Intravenous Formulation Containing Monomeric Amphotericin B, 5-Fluorocytosine, and Saline for Sodium Supplementation HHS Public Access", PHARM RES, vol. 34, no. 5, 2017, pages 1115 - 24, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbl.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5383515/pdf/nihms853112.pdf> |
ARMSTRONG-JAMES DMEINTJES GBROWN GD, A NEGLECTED EPIDEMIC: FUNGAL INFECTIONS IN HIV/AIDS, 2014, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.1016/j.tim.2014.01.001> |
AZAB MMTALEB AFAMOHAMED NAEOMRAN FH: "Rapid Diagnosis of Invasive Fungal Infections", INT.J.CURR.MICROBIOL.APP.SCI., vol. 4, 2015, Retrieved from the Internet <URL:http://www.ijcmas.com> |
BAIN JMLEWIS LEOKAI BQUINN JGOW NARERWIG L-P: "Non-lytic expulsion/exocytosis of Candida albicans from macrophages", FUNGAL GENET BIOL, vol. 49, 2012, pages 677 - 8, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3430864/pdf/main.pdf> |
BARNES PDMARR KA, ASPERGILLOSIS: SPECTRUM OF DISEASE, DIAGNOSIS, AND TREATMENT, 24 August 2018 (2018-08-24), Retrieved from the Internet <URL:https://ac.els-cdn.com/S0891552006000511/1-s2.0-S0891552006000511-main.pdf?tid=507238c0-e399-4d35-a636-9d578d958447&acdnat=15351380052968e56d5f508d2a5e02c85f2dld7496> |
BEENHOUWER DOYOO EMLAI C-WROCHA MAMORRISON SL: "Human Immunoglobulin G2 (IgG2) and IgG4, but Not IgGl or IgG3, Protect Mice against Cryptococcus neoformans Infection", INFECT IMMUN, vol. 75, no. 3, 2007, pages 1424 - 35, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1828574/pdf/1161-06.pdf> |
BENEDICT KRICHARDSON MVALLABHANENI SJACKSON BRCHILLER T: "Fungal infections 7 Emerging issues, challenges, and changing epidemiology of fungal disease outbreaks", SER LANCET INFECT DIS, vol. 17, 2017, pages 403 - 15, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.1016> |
BIRD ET AL., SCIENCE, vol. 242, 1988, pages 423 - 426 |
BONGOMIN FGAGO SOLADELE RDENNING D: "Global and Multi-National Prevalence of Fungal Diseases—Estimate Precision", J FUNGI, vol. 3, no. 4, 2017, pages 57, Retrieved from the Internet <URL:http://www.mdpi.com/2309-608X/3/4/57> |
BORBA HHLSTEIMBACH LMRIVEROS BSTONIN FSFERREIRA VLBAGATIM BA DE Q ET AL.: "Cost-effectiveness of amphotericin B formulations in the treatment of systemic fungal infections", MYCOSES, vol. 61, no. 10, 2018, pages 754 - 63 |
BRENA SOMAETXEBARRIA MJELGUEZABAL NCABEZAS JMORAGUES MDPONTON J: "Fungicidal Monoclonal Antibody C7 Binds to Candida albicans Als3", INFECT IMMUN, vol. 75, no. 7, 2007, pages 3680 - 2, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1932956/pdf/1840-06.pdf> |
BROWN GDDENNING DWGOW NARLEVITZ SMNETEA MGWHITE TC: "Hidden killers: Human fungal infections", SCI TRANSL MED, vol. 4, no. 165, 2012 |
BUISSA-FILHO RPUCCIA RMARQUES AFPINTO FAMUFIOZ JENOSANCHUK JD ET AL.: "The monoclonal antibody against the major diagnostic antigen of Paracoccidioides brasiliensis mediates immune protection in infected BALB/c mice challenged intratracheally with the fungus", INFECT IMMUN, vol. 76, no. 7, 2008, pages 3321 - 8 |
BUITRAGO MJAGUADO JMBALLEN ABERNAL-MARTINEZ LPRIETO MGARCIA-REYNE A ET AL.: "Efficacy of DNA amplification in tissue biopsy samples to improve the detection of invasive fungal disease", CLIN MICROBIOL INFECT, vol. 19, 2013, pages E271 - 7, Retrieved from the Internet <URL:http://www.ncbi.nih.gov/Genbank> |
CAMPUZANO AWORMLEY FL, INNATE IMMUNITY AGAINST CRYPTOCOCCUS, FROM RECOGNITION TO ELIMINATION, 10 August 2018 (2018-08-10), Retrieved from the Internet <URL:www.mdpi.com/journal/jof> |
CASADEVALL APIROFSKI L-A, IMMUNOGLOBULINS IN, 2012, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3360875/pdf/nihms375082.pdf> |
CASADEVALL APIROFSKI L-A: "A new synthesis for antibody-mediated immunity NIH Public Access", NAT IMMUNOL, vol. 13, no. 1, 2012, pages 21 - 8, Retrieved from the Internet <URL:http://www.nature.com/reprints/index.html> |
CASADEVALL APIROFSKI L-A: "MINIREVIEWS Accidental Virulence, Cryptic Pathogenesis, Martians, Lost Hosts, and the Pathogenicity of Environmental Microbes", EUKARYOT CELL, vol. 6, no. 12, 2007, pages 2169 - 74, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2168257/pdf/0308-07.pdf> |
CHAYAKULKEEREE M, CRYPTOCOCCOSIS, vol. 20, 2006, pages 507 - 44 |
COELHO CBOCCA ALCASADEVALL A: "The Tools for Virulence of Cryptococcus neoformans", ADV APPL MICROBIOL, vol. 87, 1 January 2014 (2014-01-01), pages 1 - 41, Retrieved from the Internet <URL:https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128002612000013?via%3Dihub> |
COLOMBO ANACRODRIGUES ML ET AL.: "people die each year because of systemic fungal cryptococcosis presented in the last", vol. 87, 2015, article "Fungal colonization of the brain: anatomopathological aspects of neurological cryptococcosis epidemic in HIV patients", pages: 1293 - 309 |
DENNING DWVENKATESWARLU KOAKLEY KLANDERSON MJMANNING NJSTEVENS DA ET AL., ITRACONAZOLE RESISTANCE IN ASPERGILLUS FUMIGATUS, vol. 41, 1997, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC163916/pdf/411364.pdf> |
DOS SANTOS MLQUINTILIO WMANIERI TMTSURUTA LRMORO AM: "Advances and challenges in therapeutic monoclonal antibodies drug development", BRAZILIAN J PHARM SCI, vol. 54, 2018, pages 1 - 15 |
DUTRA FFALBUQUERQUE PCRODRIGUES MLFONSECA FL: "Warfare and defense: The host response to Cryptococcus infection", FUNGAL BIOL REV, vol. 32, no. 2, 2018, pages 35 - 51, Retrieved from the Internet <URL:https://doi.Org/10.1016/j.fbr.2017.09.002> |
EDITH ALBENGRESHERVE LE LOUET J-PTTILLEMENT J-P: "Systemic Antifungal Agents", DRUG SAF, vol. 18, no. 2, 1998, pages 83 - 97, Retrieved from the Internet <URL:http://link.springer.com/10.2165/00002018-199818020-00001> |
ERWIG LPR GOW NA: "Interactions of fungal pathogens with phagocytes", NAT REV MICROBIOL, vol. 14, no. 3, March 2016 (2016-03-01), pages 163 - 76 |
FESEL PHZUCCARO A: "β-glucan: Crucial component of the fungal cell wall and elusive MAMP in plants", FUNGAL GENET BIOL, vol. 90, May 2016 (2016-05-01), pages 53 - 60, XP029486218, Retrieved from the Internet <URL:https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1087184515300529> DOI: 10.1016/j.fgb.2015.12.004 |
FISHER CESTEVENS AMLEISENRING WPERGAM SABOECKH MHOHL TM, INDEPENDENT CONTRIBUTION OF BRONCHOALVEOLAR LAVAGE AND SERUM GALACTOMANNAN IN THE DIAGNOSIS OF INVASIVE PULMONARY ASPERGILLOSIS |
GIACOMAZZI JBAETHGEN LCARNEIRO LCMILLINGTON MADENNING DWCOLOMBO AL ET AL.: "The burden of serious human fungal infections in Brazil", MYCOSES, vol. 59, no. 3, 2016, pages 145 - 50 |
GODING: "Anoclodies Monoclonal: Principies and Practice", 1986, ACADEMIC PRESS, pages: 59 - 103 |
GUIMARAES AJDE CERQUEIRA MDNOSANCHUK JD: "Surface architecture of Histoplasma capsulatum", FRONT MICROBIOL, vol. 2, November 2011 (2011-11-01), pages 1 - 14 |
GUIMARAES AJFRASES SGOMEZ FJZANCOPE-OLIVEIRA RMNOSANCHUK JD: "Monoclonal Antibodies to Heat Shock Protein 60 Alter the Pathogenesis of Histoplasma capsulatum f", INFECT IMMUN, vol. 77, no. 4, 2009, pages 1357 - 67, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2663142/pdf/1443-08.pdf> |
HAGEN FKHAYHAN KTHEELEN BKOLECKA APOLACHECK ISIONOV E ET AL.: "Recognition of seven species in the Cryptococcus gattii/Cryptococcus neoformans species complex", FUNGAL GENET BIOL, vol. 78, May 2015 (2015-05-01), pages 16 - 48, XP029228475, Retrieved from the Internet <URL:https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1087184515000328> DOI: 10.1016/j.fgb.2015.02.009 |
HAMILL RJ: "Amphotericin B Formulations: A Comparative Review of Efficacy and Toxicity", DRUGS, vol. 73, no. 9, 1 June 2013 (2013-06-01), pages 919 - 34, XP009533950, Retrieved from the Internet <URL:http://link.springer.com/10.1007/s40265-013-0069-4> DOI: 10.1007/s40265-013-0069-4 |
HARRIS JRLOCKHART SRDEBESS EMARSDEN-HAUG NGOLDOFT MWOHRLE R ET AL., CRYPTOCOCCUS GATTII IN THE UNITED STATES: CLINICAL ASPECTS OF INFECTION WITH AN EMERGING PATHOGEN, 22 August 2018 (2018-08-22), Retrieved from the Internet <URL:https://academic.oup.com/cid/article-abstract/53/12/1188/400737> |
HARRIS JRLOCKHART SRSONDERMEYER GVUGIA DJCRIST MBTOBIN D'ANGELO M ET AL., CRYPTOCOCCUS GATTII INFECTIONS IN MULTIPLE STATES OUTSIDE THE US PACIFIC NORTHWEST, vol. 19, no. 10, 2013, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.3201/eidl910.130441> |
HEITMAN J., MICROBIAL PATHOGENS IN THE FUNGAL KINGDOM, 2011, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3081590/pdf/nihms-264974.pdf> |
HOLLIGER ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. I, II, 1993, pages 6444 - 6448 |
HOOGENBOOM ET AL., IMMUNOTECHNOLOGY, vol. 4, 1998, pages 1 - 20 |
HOOGENBOOM ET AL., TRENDS BIOTECHNOL, vol. 15, 1997, pages 62 - 70 |
HUANG H-RFAN L-CRAJBANSHI BXU J-F: "Evaluation of a New Cryptococcal Antigen Lateral Flow Immunoassay in Serum", CEREBROSPINAL FLUID AND URINE FOR THE DIAGNOSIS OF CRYPTOCOCCOSIS: A META-ANALYSIS AND SYSTEMATIC REVIEW, 2015, pages 549, Retrieved from the Internet <URL:http://journals.plos.org/plosone/article/file?id=10.1371/journal.pone.0127117&type=printable> |
HUSTON ET AL., PNAS USA, vol. 85, 1988, pages 5879 - 5883 |
J IMMUNOL. METHODS, vol. 242, 2000, pages 193 - 204 |
J IMMUNOL., vol. 174, no. 5517, 2005, pages 2453 - 5 |
JAIJAKUL SVAZQUEZ JASWANSON RNOSTROSKY-ZEICHNER L, 3)-P-D-GLUCAN AS A PROGNOSTIC MARKER OF TREATMENT RESPONSE IN INVASIVE CANDIDIASIS, 20 August 2019 (2019-08-20) |
KAPLON HREICHERT JM: "Antibodies to watch in 2019", MABS, vol. 11, no. 2, 2019, pages 219 - 38, Retrieved from the Internet <URL:https://doi.org/10.1080/19420862.2018.1556465> |
KATZUNG BMASTERS STREVOR A: "Farmacologia basica e clinica. 12° ediijao Porto Alegre", AMGH, 2014 |
KAUFFMAN CA: "Histoplasmosis: a Clinical and Laboratory Update", CLIN MICROBIOL REV, vol. 20, no. 1, 2007, pages 115 - 32, Retrieved from the Internet <URL:http://cmr.asm.org> |
KING: "Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies", 1998, TAYLOR & FRANCIS |
KO HLER JRCASADEVALL APERFECT J, THE SPECTRUM OF FUNGI THAT INFECTS HUMANS, 6 December 2018 (2018-12-06), Retrieved from the Internet <URL:www.perspectivesinmedicine.org> |
KOHLER GMILSTEIN C: "Pillars Article : Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity", NATURE, vol. 256, no. 5517, 1975, pages 495 - 497 |
KONTOYIANNIS DP: "Antifungal Resistance: An Emerging Reality and A Global Challenge", GLOB CHALL ANTIFUNG RESIST - JID, vol. 2017, 2017, pages 216, Retrieved from the Internet <URL:https://academic.oup.com/jid/article-abstract/216/suppl_3/S431/4107053> |
KOZEL TRWICKES B, FUNGAL DIAGNOSTICS, 24 August 2018 (2018-08-24), Retrieved from the Internet <URL:www.perspectivesinmedicine.org> |
KURTZ MBDOUGLAS CM: "Lipopeptide inhibitors of fungal glucan synthase", JOURNAL OF MEDICAL & VETERINARY MYCOLOGY, vol. 35, 1997, Retrieved from the Internet <URL:https://academic.oup.com/mmy/article-abstract/35/2/79/940389> |
KWON-CHUNG KJBENNETT JEWICKES BLMEYER WCUOMO CAWOLLENBURG KR ET AL.: "The Case for Adopting the "Species Complex"", NOMENCLATURE FOR THE ETIOLOGIC AGENTS OF CRYPTOCOCCOSIS, 2017, Retrieved from the Internet <URL:https://doi.org/10.1128/mSphere.00357-16> |
KWON-CHUNG KJFRASER JADOERING TLWANG ZJANBON GIDNURM A ET AL.: "Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii", THE ETIOLOGIC AGENTS OF CRYPTOCOCCOSIS, 11 December 2018 (2018-12-11), Retrieved from the Internet <URL:www.perspectivesinmedicine.org> |
LAMOTH F: "Galactomannan and 1,3-p-d-Glucan Testing for the Diagnosis of Invasive Aspergillosis", J FUNGI, vol. 2, no. 3, 2016, pages 22, Retrieved from the Internet <URL:http://www.mdpi.com/2309-608X/2/3/22> |
LEACH MDCOWEN LE, SURVIVING THE HEAT OF THE MOMENT: A FUNGAL PATHOGENS PERSPECTIVE, 21 August 2018 (2018-08-21), Retrieved from the Internet <URL:http://www.wellcome.ac.uk/Funding> |
LEMKE FKIDERLEN OKAYSER AMPHOTERICIN B AA: "MINI-REVIEW", APPL MICROBIOL BIOTECHNOL, vol. 68, 2005, pages 151 - 62, Retrieved from the Internet <URL:https://link.springer.com/content/pdf/10.1007%2Fs00253-005-1955-9.pdf> |
LEOPOLD WAGER CMHOLE CRWOZNIAK KLWORMLEY FL, JR: "Cryptococcus and Phagocytes: Complex Interactions that Influence Disease Outcome", FRONT MICROBIOL, vol. 7, 2016, pages 105, Retrieved from the Internet <URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26903984> |
LIN X: "Cryptococcus neoformans: Morphogenesis, infection, and evolution", INFECT GENET EVOL, vol. 9, no. 4, 2009, pages 401 - 16, XP026122270, DOI: 10.1016/j.meegid.2009.01.013 |
LIN XHEITMAN J: "The Biology of the Cryptococcus neoformans Species Complex", ANNU REV MICROBIOL, vol. 60, no. 1, 2006, pages 69 - 105, Retrieved from the Internet <URL:http://www.annualreviews.org/doi/10.1146/annurev.micro.60.080805.142102> |
LIU T-BPERLIN DSXUE C, MOLECULAR MECHANISMS OF CRYPTOCOCCAL MENINGITIS, 2012, Retrieved from the Internet <URL:https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=kvir20> |
MARTINEZ LRCASADEVALL A: "Specific Antibody Can Prevent Fungal Biofilm Formation and This Effect Correlates with Protective Efficacy", INFECT IMMUN, vol. 73, no. 10, 2005, pages 6350 - 62, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1230912/pdf/0374-05.pdf> |
MARTINEZ LRMOUSSAI DCASADEVALL A: "Antibody to Cryptococcus neoformans Glucuronoxylomannan Inhibits the Release of Capsular Antigen", INFECT IMMUN, vol. 72, no. 6, 2004, pages 3674 - 9 |
MCGREGOR ET AL., MOL. BIOTECHNOL, vol. 6, 1996, pages 155 - 62 |
MEYA DBMANABE YCCASTELNUOVO BCOOK BAALI MKAMBUGU A ET AL.: "Serum Cryptococcal Antigen (CRAG) Screening is a Cost-Effective Method to Prevent Death in HIV- infected persons with CD4 ≤100/µE starting HIV therapy in Resource-Limited Settings", CLIN INFECT DIS, vol. 51, no. 4, 2010, pages 448 - 55 |
MORAES NICOLA AROBERTSON EJALBUQUERQUE PDA SILVEIRA DERENGOWSKI LCASADEVALL A, NONLYTIC EXOCYTOSIS OF CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS FROM MACROPHAGES OCCURS IN VIVO AND IS INFLUENCED BY PHAGOSOMAL PH, 2011, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3150755/pdf/mBio.00167-ll.pdf> |
MORAGUES MDOMAETXEBARRIA MJELGUEZABAL NSEVILLA MJCONTI SPOLONELLI L ET AL.: "A Monoclonal Antibody Directed against a Candida albicans Cell Wall Mannoprotein Exerts Three Anti-C. albicans Activities", INFECT IMMUN, vol. 71, no. 9, 2003, pages 5273 - 9, XP055269095, DOI: 10.1128/IAI.71.9.5273-5279.2003 |
MUKHERJEE PKSHEEHAN DJHITCHCOCK CAGHANNOUM MA: "Combination Treatment of Invasive Fungal Infections", CLIN MICROBIOL REV, vol. 18, no. 1, 2005, pages 163 - 94, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC544182/pdf/0092-03.pdf> |
NGUYEN HWISSEL MCSHIELDS RKSALOMONI MAHAO BPRESS EG ET AL., PERFORMANCE OF CANDIDA REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION, B-D-GLUCAN ASSAY, AND BLOOD CULTURES IN THE DIAGNOSIS OF INVASIVE CANDIDIASIS, 28 August 2018 (2018-08-28), Retrieved from the Internet <URL:https://academic.oup.com/cid/article-abstract/54/9/1240/391720> |
NOSANCHUK JDSTEENBERGEN JNSHI LDEEPE GSCASADEVALL ACASADEVALL A: "Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum", J CLIN INVEST, vol. 112, no. 8, October 2003 (2003-10-01), pages 1164 - 75, Retrieved from the Internet <URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14561701> |
NUCCI MMARR K A: "Emerging fungal diseases", CLIN INFECT DIS, vol. 41, no. 4, 2005, pages 521 - 6 |
ODDS FCBROWN AJPGOW NAR: "Antifungal agents: mechanisms of action", TRENDS MICROBIOL, vol. 11, no. 6, June 2003 (2003-06-01), pages 272 - 9, Retrieved from the Internet <URL:https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0966842X03001173> |
OLSZEWSKI MAWORMLEY FLCHRISSY LEOPOLD WAGER JMHOLE CR: "Mice Infection in Cryptococcus neoformans against STAT1 Signaling Is Essential for Protection", J IMMUNOL REF, vol. 193, 2014, pages 4060 - 71, Retrieved from the Internet <URL:http://www.jimmunol.org/content/193/8/4060http://wwwjimmunol.org/content/193/8/4060Jull#ref-list-1> |
OLSZEWSKI MAWORMLEY FLWILLIAMSON SARAH EHARDISON PRMALACHOWSKI ANDAVIS JJVEDULA P ET AL.: "Polarization Response by Promoting Macrophage M2 during the Afferent Phase of the Immune Cryptococcus neoformans Expansion of Homolog Ssal Contributes to Pulmonary Cryptococcal Heat Shock Protein 70", J IMMUNOL REF, vol. 194, 2015, pages 5999 - 6010, Retrieved from the Internet <URL:http://www.jimmunol.org/content/194/12/5999http://www.jimmunol.org/content/194/12/5999.full#reflist-1> |
ONISHI ASUGIYAMA DKOGATA YSAEGUSA JSUGIMOTO TKAWANO S ET AL., DIAGNOSTIC ACCURACY OF SERUM 1,3-D-GLUCAN FOR PNEUMOCYSTIS JIROVECI PNEUMONIA, INVASIVE CANDIDIASIS, AND INVASIVE ASPERGILLOSIS: SYSTEMATIC REVIEW AND META-ANALYSIS DOWNLOADED FROM, 2011, Retrieved from the Internet <URL:http://jcm.asm.org> |
OSTERMANN HSOLANO CJARQUE IGARCIA-VIDAL CGAO XBARRUETA JA ET AL., COST ANALYSIS OF VORICONAZOLE VERSUS LIPOSOMAL AMPHOTERICIN B FOR PRIMARY THERAPY OF INVASIVE ASPERGILLOSIS AMONG PATIENTS WITH HAEMATOLOGICAL DISORDERS IN GERMANY AND SPAIN, vol. 15, 2014, Retrieved from the Internet <URL:http://www.biomedcentral.com/2050-6511/15/52> |
PELLESCHI TABORDA CFRASES SRAO JUWADI PFUSCO-ALMEIDA AMSCORZONI LA DE PAULA SILVA AC ET AL., ANTIFUNGAL THERAPY: NEW ADVANCES IN THE UNDERSTANDING AND TREATMENT OF MYCOSIS, 2017, Retrieved from the Internet <URL:www.frontiersin.org> |
POLVI EJLI XO'MEARA TRLEACH MDCOWEN LE, OPPORTUNISTIC YEAST PATHOGENS: RESERVOIRS, VIRULENCE MECHANISMS, AND THERAPEUTIC STRATEGIES, 16 August 2018 (2018-08-16), Retrieved from the Internet <URL:https://link.springer.com/content/pdf710.1007%2Fs00018-015-1860-z.pdf> |
POSCH WSTEGER MWILFLINGSEDER DLASS-FLORL C: "Promising immunotherapy against fungal diseases", EXPERT OPIN BIOL THER, vol. 17, no. 7, 2017, pages 861 - 70, Retrieved from the Internet <URL:http://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=iebt20> |
POWERS-FLETCHER M VHANSON KE: "Nonculture Diagnostics in Fungal Disease", INFECT DIS CLIN NA, vol. 30, 2016, pages 37 - 49, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.Org/10.1016/j.idc.2015.10.005> |
RACHINI APIETRELLA DLUPO PTOROSANTUCCI ACHIANI PBROMURO C ET AL.: "An Anti-Glucan Monoclonal Antibody Inhibits Growth and Capsule Formation of Cryptococcus neoformans In Vitro and Exerts Therapeutic, Anticryptococcal Activity In Vivo", INFECT IMMUN, vol. 75, no. 11, 2007, pages 5085 - 94, Retrieved from the Internet <URL:http://iai.asm.org> |
RAJASINGHAM RSMITH RMPARK BJJARVIS JNGOVENDER NPCHILLER TM ET AL., GLOBAL BURDEN OF DISEASE OF HIV-ASSOCIATED CRYPTOCOCCAL MENINGITIS: AN UPDATED ANALYSIS, 21 August 2018 (2018-08-21), Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5818156/pdf/nihms886671.pdf.> |
RAMANAN PWENGENACK NLTHEEL ES: "Laboratory Diagnostics for Fungal Infections: A Review of Current and Future Diagnostic Assays", CLIN CHEST MED, vol. 38, no. 3, 2017, pages 535 - 54, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.Org/10.1016/j.ccm.2017.04.013> |
RAMPINI SKZBINDEN ASPECK RFBLOEMBERG G V, SIMILAR EFFICACY OF BROAD-RANGE ITS PCR AND CONVENTIONAL FUNGAL CULTURE FOR DIAGNOSING FUNGAL INFECTIONS IN NON-IMMUNOCOMPROMISED PATIENTS, 2016, Retrieved from the Internet <URL:https://bmcmicrobiol.biomedcentral.com/track/pdf/10.1186/s12866-016-0752-1> |
RIVERA JZARAGOZA OCASADEVALL A: "Antibody-Mediated Protection against Cryptococcus neoformans Pulmonary Infection Is Dependent on B Cells", INFECT IMMUN, vol. 73, no. 2, 2005, pages 1141 - 50, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC546959/pdf/0809-04.pdf> |
RODRIGUES MLCARLOS CHAGAS IOSWALDO CRUZ F, THE MULTIFUNCTIONAL FUNGAL ERGOSTEROL, 18 September 2018 (2018-09-18), Retrieved from the Internet <URL:https://doi.org/10.1128/mBio.01755-18> |
RODRIGUES MLSHI LBARRETO-BERGTER ENIMRICHTER LFARIAS SERODRIGUES EG ET AL.: "Monoclonal antibody to fungal glucosylceramide protects mice against lethal Cryptococcus neoformans infection", CLIN VACCINE IMMUNOL, vol. 14, no. 10, 2007, pages 1372 - 6, XP055452645, DOI: 10.1128/CVI.00202-07 |
ROEMER TKRYSAN DJ: "Antifungal Drug Development: Challenges", UNMET CLINICAL NEEDS , AND NEW APPROACHES, 2016 |
SAEED AFUHLING SYUAN JWANG S, THE PREPARATION AND IDENTIFICATION OF A MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST DOMOIC ACID AND ESTABLISHMENT OF DETECTION BY INDIRECT COMPETITIVE ELISA, 2017, Retrieved from the Internet <URL:www.mdpi.com/journal/toxins> |
SCHWARTZ SKONTOYIANNIS DPHARRISON TRUHNKE M: "Advances in the diagnosis and treatment of fungal infections of the CNS", LANCET NEUROL, vol. 17, no. 4, 2018, pages 362 - 72, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.1016/S1474-4422(18)30030-9> |
See also references of EP4169939A4 |
SINGH NPATERSON DL: "Aspergillus Infections in Transplant Recipients", CLIN MICROBIOL REV, vol. 18, no. 1, 2005, pages 44 - 69, XP055173793, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC544171/pdf/0014-04.pdf> DOI: 10.1128/CMR.18.1.44-69.2005 |
SMULIAN AGSULLIVAN DWTHEUS SA: "Immunization with recombinant Pneumocystis carinii p55 antigen provides partial protection against infection: characterization of epitope recognition associated with immunization", MICROBES AND INFECTION, vol. 2, 2000, XP027412982, Retrieved from the Internet <URL:https://pdf.sciencedirectassets.com> |
SPITZER MROBBINS NWRIGHT GD, COMBINATORIAL STRATEGIES FOR COMBATING INVASIVE FUNGAL INFECTIONS, 2017, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.1080/21505594.2016.1196300> |
SPIVAK ESHANSON KE: "J Clin Microbiol", vol. 56, November 2017, article "Candida auris: an Emerging Fungal Pathogen", pages: e01588 - 17 |
STEIMBACH LMTONIN FSVIRTUOSO SBORBA HHLSANCHES ACCWIENS A ET AL.: "Efficacy and safety of amphotericin B lipid-based formulations-A systematic review and meta-analysis", MYCOSES, vol. 60, no. 3, 2017, pages 146 - 54 |
SULAHIAN APORCHER RBERGERON ATOURATIER SRAFFOUX EMENOTTI J ET AL.: "Use and limits of (1-3)-p-D-glucan assay (fungitell), compared to galactomannan determination (platelia Aspergillus), for diagnosis of invasive aspergillosis", J CLIN MICROBIOL, 2014 |
TEMPLETON SPIROFSKI L-AJOHNSTON SAWORMLEY FLWILLIAMSON PRELSEGEINY W ET AL., IMMUNOLOGY OF CRYPTOCOCCAL INFECTIONS: DEVELOPING A RATIONAL APPROACH TO PATIENT THERAPY, vol. 9, 10 August 2018 (2018-08-10), pages 651, Retrieved from the Internet <URL:www.frontiersin.org> |
THEEL ESDOERN CD, D-GLUCAN TESTING IS IMPORTANT FOR DIAGNOSIS OF INVASIVE FUNGAL INFECTIONS, 2013, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3889722/pdf/zjm3478.pdf> |
THORN CFMARSH SCARRILLO MWMCLEOD HLKLEIN TEALTMAN RB, PHARMGKB SUMMARY: FLUOROPYRIMIDINE PATHWAYS, 2011, Retrieved from the Internet <URL:http://www.pharmgkb.org/search/annotatedGene/mthfr/index.jsp> |
TOROSANTUCCI ACHIANI PBROMURO CDE BERNARDIS FPALMA ASLIU Y ET AL., PROTECTION BY ANTI-B-GLUCAN ANTIBODIES IS ASSOCIATED WITH RESTRICTED B-1,3 GLUCAN BINDING SPECIFICITY AND INHIBITION OF FUNGAL GROWTH AND ADHERENCE, 26 February 2019 (2019-02-26), Retrieved from the Internet <URL:www.plosone.org> |
VALLABHANENI SMODY RKWALKER TCHILLER T, THE GLOBAL BURDEN OF FUNGAL DISEASES, 2016, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.1016/j.idc.2015.10.004> |
VANDEPUTTE PFERRARI SCOSTE AT, ANTIFUNGAL RESISTANCE AND NEW STRATEGIES TO CONTROL FUNGAL INFECTIONS ANTIFUNGAL RESISTANCE AND NEW STRATEGIES TO CONTROL FUNGAL INFECTIONS, June 2014 (2014-06-01) |
WARD, E.S. ET AL., NATURE, vol. 341, 1989, pages 544 - 546 |
ZELLER ISCHABEREITER-GURTNER CMIHALITS VSELITSCH BBAROUSCH WHIRSCHL AM ET AL., DETECTION OF FUNGAL PATHOGENS BY A NEW BROAD RANGE REAL-TIME PCR ASSAY TARGETING THE FUNGAL ITS2 REGION, 18 September 2018 (2018-09-18), Retrieved from the Internet <URL:www.ebi.ac.uk/clustalw> |
ZOTCHEV S: "Polyene Macrolide Antibiotics and their Applications in Human Therapy", CURR MED CHEM, vol. 10, no. 3, 2012, pages 211 - 23, XP009039408 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115087668A (zh) | 2022-09-20 |
EP4169939A4 (en) | 2024-02-21 |
BR102020002165A2 (pt) | 2021-11-30 |
WO2021151180A3 (pt) | 2021-10-28 |
EP4169939A2 (en) | 2023-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Casadevall | Fungal diseases in the 21st century: the near and far horizons | |
Douglas et al. | Consensus guidelines for the diagnosis and management of invasive aspergillosis, 2021 | |
Tso et al. | The elusive anti-Candida vaccine: lessons from the past and opportunities for the future | |
ES2812181T3 (es) | Métodos de tratamiento y prevención de infecciones por staphylococcus aureus y afecciones asociadas | |
CN107135654A (zh) | 巨胞饮人类抗cd46抗体和靶向癌症疗法 | |
EA027054B1 (ru) | Связывающие молекулы человека, способные нейтрализовать вирусы гриппа a филогенетической группы 1 и филогенетической группы 2 и вирусы гриппа b | |
CN105849262A (zh) | 抗lps o11抗体 | |
US10160790B2 (en) | HYR1-derived compositions and methods of treatment using same | |
ES2287105T3 (es) | Tratamiento de infecciones micoticas con antimicoticos a base de inhibidor de polieno o betaglucano sintasa combinados con anticuerpos contra hsp90. | |
Pouw et al. | Potentiation of complement regulator factor H protects human endothelial cells from complement attack in aHUS sera | |
Shen et al. | Dectin-1 facilitates IL-18 production for the generation of protective antibodies against Candida albicans | |
Apsemidou et al. | Invasive aspergillosis in children: update on current guidelines | |
CN101878302A (zh) | 绿脓杆菌的外膜蛋白质pa4710 | |
Xin et al. | Design of a mimotope-peptide based double epitope vaccine against disseminated candidiasis | |
G Alshahawey et al. | New insights on mucormycosis and its association with the COVID-19 pandemic | |
Jo et al. | Anti-complement component 5 antibody targeting MG4 domain inhibits choroidal neovascularization | |
Dhitinanmuang et al. | Undiagnosed Cryptococcus gattii meningitis leading to subsequent ventriculoperitoneal shunt infection in a patient with symptoms of normal pressure hydrocephalus: case report and literature review | |
US20230355751A1 (en) | Compositions and methods for a multi-adjuvant only approach to immunoprophylaxis for preventing infections | |
WO2021151180A2 (pt) | Anticorpo, seu uso, composição farmacêutica o compreendendo, método de diagnóstico de infecções fúngicas, kit de diagnóstico de infecções fúngicas e método para tratamento de infecções fúngicas | |
US11555063B2 (en) | Norovirus antibodies | |
AU2005235339B2 (en) | Treatment of fungal infections | |
US20210402003A1 (en) | Methods of treating cancer with a combination of an anti-vegf antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate | |
Fowler et al. | Human Monoclonal Antibodies to Escherichia coli Outer Membrane Protein A Porin Domain Cause Aggregation but Do Not Alter In Vivo Bacterial Burdens in a Murine Sepsis Model | |
TWI773670B (zh) | 克雷伯氏肺炎桿菌(klebsiella pneumoniae)抗體及治療克雷伯氏肺炎桿菌感染之方法 | |
US11466326B2 (en) | Methods and kit for diagnosing and treating colorectal cancer based on AvrA and Wnt1 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DPE1 | Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101) | ||
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 21747645 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A2 |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 2021747645 Country of ref document: EP Effective date: 20220831 |