WO2021090923A1

WO2021090923A1 - 変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓ目視検出法

Info

Publication number: WO2021090923A1
Application number: PCT/JP2020/041570
Authority: WO
Inventors: 町田　幸子; みゆき倉持; 俊郎小堀; 康渡邊; 秀樹瀬筒; 謙一郎立松
Original assignee: 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
Priority date: 2019-11-08
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2021-05-14
Also published as: JPWO2021090923A1

Abstract

本開示は、変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを簡便迅速に目視で検出する技術を提供すること。本開示はまた、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部とを含み、該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイスを提供する。

Description

変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓ目視検出法

　変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを簡便迅速に目視で検出する技術に関する。

　酸化ＬＤＬ（いわゆる「悪玉コレステロール」）は、脂質異常症、虚血性心疾患などの危険因子として知られているが、酸化ＬＤＬは、酸化的修飾を受けたＬＤＬ分子の総称であり、修飾の程度も異なった不均一な分子集団である。本発明者らは、以前、酸化的修飾を受けたＬＤＬ分子中から、生体中で疾病の引き金となる酸化ＬＤＬ（真の悪玉）のみを広範に検出する手法を開発に成功した（特許文献１）。しかし、開発された手法は、専門的な技術と装置が必要であり研究機関・検査機関等での使用を前提としている。一方、運動、食生活改善などの生活習慣の改善による疾病の進行抑制効果、投薬などによる疾病の管理状況を簡便迅速に評価する手法の開発が求められている。

　ＡＧＥｓ（Ａｄｖａｎｃｅｄ　ｇｌｙｃａｔｉｏｎ　ｅｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ：終末糖化産物）は、タンパク質の糖化産物であるが、多様な構造体の総称である。近年、ヒト体内にも糖化ストレスにより生じるＡＧＥｓが存在し、その中に糖尿病合併症、加齢性疾患（関節リウマチ、アルツハイマー型認知症など）を誘発しうる刺激性ＡＧＥｓが含まれることが見いだされた。しかし、開発された手法は、酸化ＬＤＬ検出法同様に、研究機関・検査機関等での使用を前提としており、運動、食生活改善などの生活習慣の改善による疾病の進行抑制効果、投薬などによる疾病の管理状況を簡便迅速に評価する手法の開発が求められている。

国際公開第２０１６／０５１８０８号

　本発明者らは、酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを検出することができる検出系、例えばラテラルフローアッセイ（イムノクロマト法）を開発した。具体的には、検出系において、酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを認識する金属コロイドで修飾された認識素子を使用することによって、簡便迅速な酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓの検出が達成された。

　したがって、本開示は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
　毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイス。
（項目２）
　前記メンブレンが、上流から下流にかけて、前記検出部、および前記コントロール部をこの順番で含む、項目１に記載のキットまたはデバイス。
（項目３）
　前記試料接触部、前記検出部、および前記コントロール部が、相互に毛管現象で試料が浸透するように配置または連結されている、項目１または２に記載のキットまたはデバイス。
（項目４）
前記生体マーカー分子はＬＤＬまたはＡＧＥｓである、項目１～３のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目５）
前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓである、項目１～４のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目６）
前記結合分子はＣＴＬＤ１４またはｓＲＡＧＥである、項目１～５のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目７）
前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント、あるいは、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目１～６のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目８）
前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含む、項目１～７のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目９）
前記生体マーカー分子はＬＤＬであり、前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬであり、前記結合分子はＣＴＬＤ１４であり、前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントである、項目１～８のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１０）
前記生体マーカー分子はＡＧＥｓであり、前記生体マーカー分子の異常型は刺激性ＡＧＥｓであり、前記結合分子はｓＲＡＧＥであり、前記検出用結合剤は抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含み、該競合分子はＧ－ＢＳＡもしくはＧ－ＯＶＡである、項目１～９のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１１）
前記金属コロイドは、検出試薬として提供される、項目１～１０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１２）
前記金属コロイドは、前記メンブレン中で、試料混合物として提供される、項目１～１０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１３）
前記試料接触部が、血球分離部を含む、項目１～１２のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１４）
前記血球分離部が、ＦＵＳＩＯＮ５、ＬＦ１、ＭＦ１、およびＶＦ２から選択される、項目１３に記載のデバイスまたはキット。
（項目１５）
前記金属コロイドは、金、銀、白金およびパラジウムからなる群から選択される、項目１～１４のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１６）
前記金属コロイドが白金コロイドである、項目１５に記載のデバイスまたはキット。
（項目１７）
前記ＣＴＬＤ１４が、ビオチン化、Ｈｉｓタグ付加、Ｍｙｃタグ付加、Ｆｌａｇタグ付加、Ｅタグ付加、またはＳｔｒｅｐタグ付加なされており、それぞれの場合において、前記コントロール用結合剤は、ストレプトアビジン、抗Ｈｉｓ抗体、抗Ｍｙｃ抗体、抗Ｆｌａｇ抗体、抗Ｅタグ抗体、またはＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎである、項目６に記載のデバイスまたはキット。
（項目１８）
前記ＣＴＬＤ１４が、カイコ型糖鎖を有する、項目６に記載のデバイスまたはキット。
（項目１９）
前記ＣＴＬＤ１４がビオチン化されており、前記コントロール用結合剤が、ストレプトアビジンである、項目６に記載のデバイスまたはキット。
（項目２０）
前記試料が、血液試料である、項目１～１９のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目２１）
前記血液試料が、血清または全血である、項目２０に記載のデバイスまたはキット。
（項目２２）
生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、
　試料を提供する工程と、
　該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、
　項目１～２０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキットにおける前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、
　接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程と
を含む、方法。
（項目２３）
　金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、
組成物。
（項目２４）
　金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含む、
組成物。
（項目２５）
　毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイス。
（項目２６）
　上記１または複数の項目の特徴を有する、請求項２５に記載のキットまたはデバイス。
（項目２７）
　金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、
組成物。
（項目２８）　金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含む、
組成物。
（項目２９）
　上記１または複数の項目の特徴を有する、請求項２７または２８に記載の組成物。
（項目３０）
　生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、
　試料を提供する工程と、
　該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、
　項目２５に記載のデバイスまたはキットにおける前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、
　接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程と
を含む、方法。
（項目３１）
　上記１または複数の項目の特徴を有する、請求項３０に記載の方法。

　さらに、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１Ａ）
　毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、
　試料接触部と
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該キットまたはデバイスは、金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイス。
（項目２Ａ）
前記生体マーカー分子はＬＤＬまたはＡＧＥｓである、項目１Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目３Ａ）
前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓである、項目１Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目４Ａ）
前記結合分子はＣＴＬＤ１４またはｓＲＡＧＥである、項目１Ａ～３Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目５Ａ）
前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント、あるいは、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントである、項目１Ａ～４Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目６Ａ）
前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含む、項目１Ａ～５Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目７Ａ）
前記生体マーカー分子はＬＤＬであり、前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬであり、前記結合分子はＣＴＬＤ１４であり、前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントである、項目１Ａ～６Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目８Ａ）
前記生体マーカー分子はＡＧＥｓであり、前記生体マーカー分子の異常型は刺激性ＡＧＥｓであり、前記結合分子はｓＲＡＧＥであり、前記検出用結合剤は抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含み、該競合分子はＧ－ＢＳＡもしくはＧ－ＯＶＡである、項目１Ａ～６Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目９Ａ）
前記金属コロイドは、検出試薬として提供される、項目１Ａ～８Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１０Ａ）
前記金属コロイドは、前記メンブレン中で、試料混合物として提供される、項目１Ａ～８Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１１Ａ）
前記メンブレンが、血球分離部をさらに含む、項目１Ａ～１０Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１２Ａ）
前記血球分離部が、ＦＵＳＩＯＮ５、ＬＦ１、ＭＦ１、およびＶＦ２から選択される、項目１１Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目１３Ａ）
前記金属コロイドは、金、銀、白金およびパラジウムからなる群から選択される、項目１Ａ～１２Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１４Ａ）
前記金属コロイドが白金コロイドである、項目１３Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目１５Ａ）
前記ＣＴＬＤ１４が、ビオチン化、Ｈｉｓタグ付加、Ｍｙｃタグ付加、Ｆｌａｇタグ付加、Ｅタグ付加、またはＳｔｒｅｐタグ付加なされており、それぞれの場合において、前記コントロール用結合剤は、ストレプトアビジン、抗Ｈｉｓ抗体、抗Ｍｙｃ抗体、抗Ｆｌａｇ抗体、抗Ｅタグ抗体、またはＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎである、項目４Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目１６Ａ）
前記ＣＴＬＤ１４が、カイコ型糖鎖を有する、項目４Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目１７Ａ）
前記ＣＴＬＤ１４がビオチン化されており、前記コントロール用結合剤が、ストレプトアビジンである、項目４Ａに記載のデバイスまたはキット。
（項目１８Ａ）
前記試料が、血液試料である、項目１Ａ～１７Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
（項目１９Ａ）
生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、
　試料を提供する工程と、
　該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、
　項目１Ａ～１８Ａのいずれか一項に記載のデバイスまたはキットにおける前記メンブレンの前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、
　接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程と
を含む、方法。
（項目２０Ａ）
　金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　試料接触部と
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、
組成物。
（項目２１Ａ）
　金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　試料接触部と
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含む、
組成物。

　本開示において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本開示のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。

　本開示によれば、疾患に関連する酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを簡便かつ迅速に検出することができる検出系が提供される。したがって、本開示は、疾患（脂質異常症、糖尿病合併症、肝疾患、および、アルツハイマー型認知症など）を診断、治療の有効性を評価、予防措置を講ずるのに有用な酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを検出するためのキットおよび方法、ならびにそれに使用することができる基板を提供する。

図１は、中部絹糸腺および後部絹糸腺の発現系を用いたＣＴＬＤ１４の発現を確認するための電気泳動像を示す。図２は、中部絹糸腺（ＭＳＧ）および後部絹糸腺（ＰＳＧ）由来ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法によるＬＤＬ類の検出を示す。白四角は未変性ＬＤＬ、黒三角はＡＧＥ－ＬＤＬ、白丸は部分酸化ＬＤＬ、黒丸は完全酸化ＬＤＬを示す。図３は、中部絹糸腺（ＭＳＧ）由来ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる酸化ＬＤＬの検量線作成とヒト血清中の酸化ＬＤＬ量の算出を示す。図４は、金属コロイドによるＣＴＬＤ１４の修飾の概要およびハーフストリップの概略図を示す。図５は、ラテラルフローアッセイによる変性ＬＤＬの検出の原理の概略図を示す。図６は、ＭＳＧ由来ＣＴＬＤ１４の円偏光二色性（ＣＤ）スペクトル測定結果を示す。図７は、テストラインに一本鎖抗体を使用した場合のラテラルフローアッセイの結果を示す。図８は、テストラインにニワトリポリクローナル抗体を使用した場合のラテラルフローアッセイの結果を示す。図９は、テストラインに抗ＡｐｏＢモノクローナル抗体を使用した場合のラテラルフローアッセイの結果を示す。図１０は、ラテラルフローアッセイによる刺激性ＡＧＥsの検出の原理の概略図を示す。図１１は、全血試料の調製方法の概略およびフルストリップを用いた金属コロイドの有効性の結果を示す。図１２は、ハーフストリップを用いた刺激性ＡＧＥｓの検出結果を示す。図１３は、フルストリップを用いた金属コロイド標識ｓＲＡＧＥの有効性の検証結果を示す。図１４は、ラテラルフローアッセイによる全血中のＡＧＥｓの検出の結果を示す。図１５は、検出部（テストスポット）に競合分子（ＣＭＬ糖化ＢＳＡ）が塗布された検出系の概要図を示す。

　以下、本開示を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「a」、「an」、「the」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。

　（用語の定義）
　以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。

　本明細書において、「約」とは、示される値の±１０％を意味する。

　本明細書において、「システム」とは、検出、予測診断、事前診断、診断等を行うための任意の系をいい、一般に、１または複数の構成要素からなり、複数の構成要素がある場合それらの要素は互いに作用・関連し合っており、全体として調和のとれた挙動・機能を示すという３条件を満足する系をいう。システムは、装置、デバイス、組成物、診断薬など任意の形態であり得る。従って、システムは、例えば、測定装置を備える大掛かりなシステムから、クロマトグラフィーを備えるシステム、免疫反応を利用したキット・組み合わせ物、抗体を含む組成物（すなわち、マーカーのモノクローナル抗体を含む、体外医薬品である診断薬）などを包含することが理解される。

　本明細書において「デバイス」とは、検出、予測診断、事前診断、診断等を行うための任意の装置をいい、１または複数の構成要素からなり、複数の構成要素がある場合通常それらの要素が互いに連絡されていることが多く、特定の目的で用いられる装置、器具、道具、物全般を指す意味で用いられ、機械的または電気的作用を有するものに限定解釈されるものではない。通常目的（例えば、検査、検出、診断など）を可能にするように互いに作動可能に連結されている少なくとも１つの要素を含む。

　本明細書において「キット」とは、通常2つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、メンブレン、デバイス、試薬など）が提供されるユニットをいう。試薬やデバイスが独立して複数提供される場合、このキットとして提供されることが好都合であり得る。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、メンブレンやデバイス）をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように使用するかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。

　本明細書において「指示書」は、本開示を使用する方法を使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本開示の使用方法を指示する文言が記載されている。この指示書は、必要な場合は、本開示が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省または農林水産省等、米国であれば食品医薬品局（FDA）、農務省（USDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、紙媒体で提供され得るが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール、ＳＮＳ、簡易メッセージなど）のような形態でも提供され得る。

　本明細書において「金属コロイド」とは、当該分野において通常使用される意味と同様に用いられ、金属微粒子（通常ナノサイズであることが多く、（０．２５～０．００１マイクロメートル程度の極微細な粒子であり得る。）が、流体中に分散しているコロイドをいう。コロイド（ｃｏｌｌｏｉｄ）またはコロイド分散体（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）は、一方が微小な液滴あるいは微粒子を形成し（分散相）、他方に分散した２組の相から構成された物質状態である。分散媒が液体の場合はコロイド溶液（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）とも呼ばれる。具体的にはフォーム、エマルション、ゲル、サスペンジョンなどがこれに含まれる。本明細書で使用される金属コロイドの代表例としては、例えば、限定するものではないが、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、パラジウムコロイド等の白金族コロイド等を挙げることができる。白金コロイドが好ましくあり得るが本開示はこれに限定されるものではない。

　本明細書において使用される場合、「生体マーカー分子」とは、ある状態（例えば、疾患、障害など）に罹患しているかまたはその危険性があるかどうかを追跡する示標となる物質をいう。このようなマーカーとしては、遺伝子、遺伝子産物、代謝物質、酵素などを挙げることができる。本発明において、生体マーカー分子としては、ＬＤＬ、ＡＧＥｓ、またはその類似物が挙げられる。生体マーカー分子には、健常状態と健常状態以外とで異なるレベルまたは形態のものがあり、健常状態以外において特徴的に見出されるも）を本明細書で特に「生体マーカー分子の異常型」という。生体マーカー分子の異常型は、疾患に特に関連が強いことから、本発明において検出対象とされ得る。生体マーカー分子の異常型は、健常者において通常観察されない、または観察されても少ない生体マーカーの修飾物であることが多い。生体マーカー分子の異常型としては、変性ＬＤＬおよび刺激性ＡＧＥｓなどが挙げられる。

　本明細書において「競合分子」とは、ある対象に対して結合する結合分子と、競合して結合する分子をいう。競合分子は、ある対象に対する結合が結合分子と競合するため、競合分子が存在すると、その結合分子の結合量が減少することから、競合分子を用いることで、その結合分子や結合（例えば、コンジュゲート形成）の量を間接的に測定することができる。

　本明細書において「コンジュゲート」とは、ある対象と別の実体とが結合して一体化することをいい、その能力を「コンジュゲート形成能」という。例えば、変性ＬＤＬについては、ＣＬＴＤ１４が該当し、刺激性ＡＧＥｓについては、ｓＲＡＧＥが該当し、他の分子についても当業者は適宜特定することができる。

　本明細書において使用される場合、「検出用結合剤」とは、本開示のデバイスまたはキットにおけるメンブレンの検出部（例えば、テストスポットまたはライン）において、検出対象である生体マーカー分子もしくはその異常型、またはこれらの競合分子に特異的に結合する分子（例えば、抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント、あるいは、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメント等）を指す。

　本明細書において使用される場合、「コントロール用結合剤」とは、本開示のデバイスまたはキットにおけるメンブレンのコントロール部（例えば、コントロールスポットまたはライン）において、生体マーカー分子の異常型とコンジュゲート形成能を有する結合分子または生体マーカー分子の異常型の競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合する分子を指す。１つの実施形態では、コントロール用結合剤は、生体マーカー分子の異常型（例えば、変性ＬＤＬ）に特異的に結合する分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子（例えば、ＣＴＬＤ１４）であるか、または生体マーカー分子（例えば、刺激性ＡＧＥｓなど）と競合する競合分子（例えば、Ｇ－ＢＳＡなど）とコンジュゲート形成能を有する結合分子（ｓＲＡＧＥ）であり得、生体マーカー分子の異常型が特定されれば、当業者は適宜、その分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子（例えば、変性ＬＤＬの場合はＣＴＬＤ１４）と特異的に結合する分子（例えば、変性ＬＤＬの場合は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント）を特定または生成し、あるいはその競合分子（例えば、刺激性ＡＧＥｓの場合はＧ－ＢＳＡ）と特異的に結合する分子（例えば、刺激性ＡＧＥｓの場合は抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメント）を特定または生成することができ、これらをコントロール用結合剤として用いることができる。

　本明細書において「メンブレン」とは多孔性または非多孔性の水に不溶性の材料である固相を指し、好ましくは生体分子を結合又は保持し得る能力を有する材料を少なくとも部分的に有するものであり得る。本明細書において用いられるメンブレンは、好ましくは毛管現象による試料の展開を行うことができるものであり、それらを実現する材料を少なくとも一部含み得る。メンブレンを構成する材料の限定的な例として、例えば、セルロース、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）などの多糖、ガラス、ポリアクリロイルモルホリド、シリカ、コントロールドポア（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｐｏｒｅ）ガラス（ＣＰＧ）、ポリスチレン、ポリスチレン／ラテックス、超高分子量ポリエチレン（ＵＰＥ）などのポリエチレン、ポリアミド、ポリビニリジンフルオリド（ＰＶＤＦ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ；テフロン（登録商標））、カルボキシル修飾テフロン（登録商標）、ナイロン、ニトロセルロースならびに金、白金およびパラジウムなどの金属および合金で構成され得る。通常、メンブレンは、帯電しており、タンパク質などの有機材料と結合する。メンブレンは、プロセスを定量的にすることによって、各種分析プロセスを大幅に改善する。

　本明細書において使用される場合、「変性ＬＤＬ」は、「ＬＤＬ修飾物」「修飾ＬＤＬ」（これらは、同じ意味で用いられる）とも呼ばれ、ＬＤＬが体内で活性酸素、酸化的酵素、Ｆｅ３＋などと接触すること、あるいは、血管内皮細胞やマクロファージなどによる細胞依存性化学変化によって発生する種々の分子修飾を有する任意のＬＤＬ修飾物である。生体内に存在するＬＤＬ修飾物としては、代表的には、酸化ＬＤＬ（本明細書中、ＯｘＬＤＬといい、例としては完全酸化ＬＤＬ（本明細書中ｆｕ　ＯｘＬＤＬともいう）および部分酸化ＬＤＬ（本明細書中ｍｏ　ＯｘＬＤＬともいう）が挙げられる）、マロンジアルデヒド化ＬＤＬ（ＭＤＡ－ＬＤＬ）、クロトンアルデヒド（ＣＲＡ）修飾ＬＤＬ、等のアルデヒド修飾ＬＤＬ、アクロレイン修飾ＬＤＬ、ノネナール修飾ＬＤＬ、４－ヒドロキシノネナール（ＨＮＥ）修飾ＬＤＬ、ヘキサノイル（ＨＥＬ）修飾ＬＤＬ、小粒子ＬＤＬ（直径２５５ｎｍ以下のＬＤＬ）、糖化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬ（ＡｃＬＤＬ）などが挙げられるが、これらに限定されない。酸化ＬＤＬが異常値を示す場合、動脈硬化症、虚血性心疾患（心筋梗塞、狭心症など）、脳血管障害（脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、一過性脳虚血発作など）、大動脈瘤、腎梗塞、高脂血症などのような疾患が予想されるがこれらに限定されない（「今日の臨床検査２００７－２００８」発行所株式会社南江堂、参照）。一般に使用される検査方法では、基準物質としては、ＭＤＡ－ＬＤＬ（正常範囲：１０～８０ΜＬ）および酸化ホスファチジルコリン（正常範囲：８．４Ｕ／ｍＬ～１７．６Ｕ／ｍＬ）が使用されている。

　本明細書において使用される場合、用語「ＣＴＬＤ分子」とは、ＣＴＬＤ様ポリペプチドの他、それらの任意の複合体を含むことが理解される。したがって、ＣＴＬＤ分子には、ＬＯＸ－１全長、ＬＯＸ－１細胞外領域全長（Ｓ６１～Ｑ２７３）、ＣＴＬＤ１４（１２９－１４３）、ＣＴＬＤ（１４３－２７３）等も包含されることが理解される。本明細書において使用される場合、用語「ＣＴＬＤ１４」および「ＰＲ－ＣＴＬＤ１４」とは、（１）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；（２）上記配列番号２に示されるアミノ酸配列において１または数個のアミノ酸の置換、付加および／または欠失を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド；（３）上記配列番号２に示されるアミノ酸配列において１０４位および１２１位以外のアミノ酸位置で１または数個の置換、付加および／または欠失を含み、かつ天然型ＬＯＸ－１の活性を示すアミノ酸配列を含むポリペプチド；（４）上記配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；（５）上記配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；（６）配列号１に示される核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド；（７）上記配列番号１に示される核酸配列に対して相補的な核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド；（８）配列番号１に示される核酸配列と相補的な核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるアミノ酸配列であって、該コードされるアミノ酸配列において１０４位および１２１位のアミノ酸は、配列番号２における対応するアミノ酸を保持し、かつ天然型ＬＯＸ－１の活性を示すアミノ酸配列を含むポリペプチド；（９）上記配列番号１に示される核酸配列において１または数個の置換、付加および／または欠失を有する核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＬＯＸ－１の活性を示すポリペプチド；（１０）上記配列番号１に示される核酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド；（１１）上記配列番号１に示される核酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド、のうちの１つによって示される。上記の同一性または相同性は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ　２．９（２０１９．３．１１　発行））を用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。ストリンジェントな条件は配列に依存して変化し、このような条件の決定は、当業者の技術範囲内である。

　本明細書において使用される場合、用語「終末糖化産物」または「後期糖化反応生成物」（いずれも英文では、Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ　Ｅｎｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）とは、ＡＧＥｓともいわれ、タンパク質の糖化産物であり多様な構造体の総称である。食品の加工過程で生じ、食味向上に重要である一方、生体内でも生成し、一部は生体に機能不全を誘導し加齢性疾患の引き金となる。糖尿病患者の生活の質を損ねる元凶である血管合併症として知られる糖尿病性血管障害の発症・進展への関与も知られている。血管合併症による眼、神経、腎臓の障害は、それぞれ糖尿病網膜症、神経症、腎症（あわせて三大合併症）とよばれており、糖尿病患者に特徴的な病態である。グルコースに代表される還元糖は、タンパク質、アミノ酸のアミノ基と非酵素的に反応して、シッフ塩基またはアマドリ転位化合物などの糖化生成物を形成する。ここまでの反応は可逆的であり、前期反応とよばれている。その後、さらに縮合、開裂、架橋形成などの複雑かつ不可逆的な反応を経て、終末糖化産物を形成する。このような一連の反応は、糖化反応と称される。ＡＧＥｓはまた、このような過程を経て生成された構造物の総称である。生体中に存在するＡＧＥｓ構造としては、カルボキシメチルリジン(ＣＭＬ)、カルボキエチルリジン(ＣＥＬ)、ペントシジン、ピラリン、イミダゾリン、メチルグリオキサール、クロスリンなどが挙げられるが、これに限定されない。血漿中に存在するアルブミン、イムノグロブリン、オボアルブミンなどが上記の糖化を受けた産物もＡＧＥであり、ＡＧＥとして実験系に汎用されている。さらに、インビトロ実験系では、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）に糖化処理を施したもの、例えば、Ｒ－ＡＧＥ（リボースにより糖化処理をしたＢＳＡ）、Ｆ－ＡＧＥ（フルクトースにより処理をしたＢＳＡ）；Ｇ－ＡＧＥ（グルコースにより糖化処理をしたＢＳＡ）なども汎用されている。血糖コントロールの指標として用いられているヘモグロビンＡ１ｃはアマドリ転移化合物であるが、ＡＧＥｓに包含される。また、任意のタンパク質も、ＡＧＥｓに変換可能である。例えば、ＡＧＥｓに包含されるＣＭＬアルブミンおよびＣＥＬアルブミンは、いずれもアルブミンが糖化を受けたＡＧＥｓである。このようなＡＧＥｓ生成反応は、生体内において循環血液中、細胞外マトリクス、細胞内のいずれでも起こり得る。例えば、糖尿病患者の血管に存在するＡＧＥｓとしては、：蛍光性で架橋構造を有するもの（ペントシジン、クロスリンなど）および蛍光も架橋もないもの（カルボキシメチルリジン、ピラリン、メチルグリオキサール（ＭＧ）－イミダゾロンなど）の２つに大別できる。ＡＧＥｓが異常値を示す場合、細小血管症（腎症、網膜症、神経症など）、大血管障害（虚血性心疾患、脳血管疾患、閉塞性動脈硬化症のような疾患が予想される。一般に使用される検査方法では、基準物質としては、ピラリン（正常範囲：血漿中２３ｐｍｏｌ／ｍＬ未満）、ペントシジン（正常範囲：血漿中０．００９１５～０．０４３１μｇ／ｍＬ（ＥＬＩＳＡで測定した場合））などが使用される（「今日の臨床検査　２００７－２００８」発行所　株式会社　南江堂、参照）。

　本明細書において、「刺激性の終末糖化産物」または「刺激性のＡＧＥｓ（刺激性ＡＧＥｓ）」とは、疾患との関連性が高いＡＧＥｓを指し、ｓＲＡＧＥと強く結合する性質を有している。以前は、血中のグルコースによる糖化が主であると考えられていたが、グルコースによる糖化は長時間を要する上、グルコース糖化ＡＧＥｓは生体への刺激性も弱いことが示唆され始めた。過剰なグルコースは、ポリオール代謝系で代謝されグリセルアルデヒド（Ｇｌｙｃｅｒ）を生じるほか、酸化反応によりグリオキサール（ＧＯ）、グリコールアルデヒド（Ｇｌｙｃｏｌ）などを生じるが、これらは、反応性が高く、短時間でＡＧＥｓを生成する上、その糖化産物は生体刺激性が高いことが報告されている。肝疾患（例えば、ＮＡＳＨ）は、特にグリセルアルデヒドによる修飾を受けたタンパク質（Ｇｌｙｃｅｒ－ＡＧＥｓ）と関連性が高いことが示唆されている。

　本明細書において「ＡＧＥｓ分子」とは、上記ＡＧＥに含まれる任意の分子をいう。例えば、ＡＧＥｓとしては、Ｌｙｓ－ＡＧＥ（グルタルアルデヒド修飾リジン修飾ＡＧＥ）、グルコース修飾ＡＧＥ（Ｇ－ＡＧＥ）、リボース修飾ＡＧＥ（Ｒ－ＡＧＥ）、フルクトース修飾ＡＧＥ（Ｆ－ＡＧＥ）またはそれらの改変体あるいはそれらの複合体を挙げることができるがそれらに限定されない。

　本明細書において「ＡＧＥｓ様活性を示す分子」とは、少なくとも上述のＡＧＥｓの活性（本明細書において「ＡＧＥｓ様活性」という。）の一つを有する分子をいう。そのようなＡＧＥｓ様活性としては、ＲＡＧＥに対する結合活性（リガンド活性）を挙げることができるが、それに限定されない。

　本明細書において使用される場合、用語「ＡＧＥ受容体（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｏｒ　ＡＧＥ）」とは、ＲＡＧＥともいわれ、（１）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；（２）上記配列番号４に示されるアミノ酸配列において１または数個のアミノ酸の置換、付加および／または欠失を含むアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；（３）上記配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；（４）上記配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；（５）配列番号３に示される核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチド；（６）上記配列番号３に示される核酸配列に対して相補的な核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；（７）上記配列番号３に示される核酸配列において１または数個のヌクレオチドの置換、付加および／または欠失を有する核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；（８）上記配列番号３に示される核酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド；および（９）上記配列番号３に示される核酸配列と少なくとも８０％の配列相同性を有する核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含み、かつ天然型ＲＡＧＥの活性を示すポリペプチド、のうちの１つである。上記の同一性または相同性は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ　２．９（２０１９．３．１１　発行））を用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。ストリンジェントな条件は配列に依存して変化し、このような条件の決定は、当業者の技術範囲内である。ＲＡＧＥはまた、１９９２年に、ウシ肺から同定され、ＡＧＥと結合するイムノグロブリンスーパーファミリーに属する、分子量約３５ｋＤａのＩ型膜タンパク質（糖鎖修飾を受けた完全なＲＡＧＥは、分子量５５ｋＤａ）である。ＲＡＧＥｓの細胞外ドメインは、１つのＶ型イムノグロブリンドメイン、続いて、２つのＣ型イムノグロブリンドメイン（Ｃ１領域およびＣ２領域）の、３つのイムノグロブリンフォールド構造を取るドメインが結合した構造を取っている。ＲＡＧＥはまた、細胞膜１回貫通型のドメインおよび４３アミノ酸の細胞質ドメインを含む。ＲＡＧＥは、多様なクラスのリガンド（ＡＧＥｓ、Ｓ１００／カルグラニュリン、アンフォテリンおよびアミロイド－βペプチド）と相互作用する。Ｖドメインは、リガンド結合に必須の部位であり、細胞質ドメインは、ＲＡＧＥ媒介性細胞内シグナル伝達に必須である。ＲＡＧＥはまた、各ドメイン内でジスルフィド結合を有するので、本開示の変異ＲＡＧＥ－界面活性剤複合体は、配列番号６のアミノ酸配列における３８位、９９位、１４４位、２０８位、２５９位および３０１位に対応するシステイン残基を保持していることが好ましい。ＲＡＧＥは、正常組織および血管系においては低レベルでしか発現されない。しかし、この受容体は、そのリガンドが蓄積した場所においてアップレギュレートされる。ＲＡＧＥの発現は、糖尿病血管系において内皮細胞、平滑筋細胞、周皮細胞、腎メサンギウム細胞および浸潤性単核食細胞で増加している。また、ＡＧＥｓが蓄積している動脈硬化巣のような病的部位においても、ＲＡＧＥの発現が増加している。ＡＧＥｓ－ＲＡＧＥ相互作用は、血管系ホメオスタシスにおいて重要な細胞の特性を変化させる。例えば、ＲＡＧＥがＡＧＥｓと結合した後、血管内皮細胞は、ＶＣＡＭ－１、組織因子、およびＩＬ－６の発現、ならびに高分子へのそれらの透過性を増加させる。単核食細胞において、ＲＡＧＥは、サイトカインおよび増殖因子の発現を活性化し、可溶性ＡＧＥｓに応じて細胞移動を誘導するのに対して、走触性は、固定リガンドで起こる。

　本明細書では、「ＲＡＧＥリガンド認識領域」または「ｓＲＡＧＥ（ｓｏｌｕｂｌｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｏｒ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ　Ｅｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ）」とは、交換可能に使用され、ＲＡＧＥリガンドが認識する領域をいう。詳細には、ｓＲＡＧＥすなわちＲＡＧＥリガンド認識領域は、ＲＡＧＥの細胞外領域の全部または一部をいう。ｓＲＡＧＥは、代表的には、配列番号６または配列番号４の２２～３３２位で構成されるがこれに限定されない。

　本明細書において使用される場合、用語「ＲＡＧＥ様ポリペプチド」とは、「ＲＡＧＥ８」、「ｍＲＡＧＥ８」、「ＲＡＧＥ１」、「ｍＲＡＧＥ１」、「ＲＡＧＥ２」、「ｍＲＡＧＥ２」、「ＲＡＧＥ３」、「ｍＲＡＧＥ３」、「ＲＡＧＥ４」、「ｍＲＡＧＥ４」、「ＲＡＧＥ７」、「ｍＲＡＧＥ７」、「ＲＡＧＥ１４３」、「ｍＲＡＧＥ１４３」、「ＲＡＧＥ２２３」、「ｍＲＡＧＥ２２３」、「ＲＡＧＥ２２６」および「ｍＲＡＧＥ２２６」と称されるポリペプチドまたはこれらの変異体を包含する。これらの説明は、特開２０１３－２０９３３０等に開示されており、適宜本明細書において参考としてその内容を援用する。

　本明細書において使用される場合、用語「ＲＡＧＥ分子」とは、ＲＡＧＥ様ポリペプチドの他、それらの任意の複合体を含むことが理解される。したがって、ＲＡＧＥ分子には、ＲＡＧＥ様ポリペプチド等、例えば、ＲＡＧＥ（全長）、ＲＡＧＥ細胞外領域（配列番号４の２２－３３２位）、ＲＡＧＥ１４３、ＲＡＧＥ２２３、ＲＡＧＥ２２６等が包含されることが理解される。また、ＲＡＧＥ分子は、ＲＡＧＥを構成する３つのドメインのうちあるドメイン全体、またはあるドメインの一部を欠いたＲＡＧＥ（ミニＲＡＧＥ）も包含される。また、ミニＲＡＧＥは、ＲＡＧＥ様ポリペプチドのミニＲＡＧＥも包含する。

　本明細書では、「ＲＡＧＥリガンド認識領域」を含む分子は、「ＲＡＧＥ分子」のうち全長ＲＡＧＥ以外のもの（「ＲＡＧＥ様ポリペプチド」を含む）、例えば、「ＲＡＧＥ８」、「ｍＲＡＧＥ８」、「ＲＡＧＥ１」、「ｍＲＡＧＥ１」、「ＲＡＧＥ２」、「ｍＲＡＧＥ２」、「ＲＡＧＥ３」、「ｍＲＡＧＥ３」、「ＲＡＧＥ４」、「ｍＲＡＧＥ４」、「ＲＡＧＥ７」、「ｍＲＡＧＥ７」、「ＲＡＧＥ１４３」、「ｍＲＡＧＥ１４３」、「ＲＡＧＥ２２３」、「ｍＲＡＧＥ２２３」、「ＲＡＧＥ２２６」および「ｍＲＡＧＥ２２６」、ＲＡＧＥ細胞外領域（配列番号４の２２－３３２位）、などを挙げることができる。

　なお、上記ＲＡＧＥ様ポリペプチドは、天然型ＲＡＧＥの活性が保持されている限り、非天然アミノ酸を含んでいてもよいし、アミノ酸アナログ、アミノ酸誘導体などを含んでいてもよい。

　上記のＲＡＧＥ様ポリペプチドにおいても、分子内ジスルフィド結合を形成することは重要であるので、配列番号４のアミノ酸配列の３８位、９９位、１４４位、２０８位、２５９位および３０１位に対応するシステインは保持されていることが好ましい。

　本明細書において、「リガンド」とは、特異的な受容体または受容体のファミリーに対する結合パートナーである。リガンドは、受容体に対する内因性のリガンドであるか、またはその代わりに、薬剤、薬剤候補、もしくは薬理学的手段のような受容体に対する合成リガンドであり得る。

　本明細書において「抗体」は、広義には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ抗体、ならびにそれらの機能性フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦａｂフラグメント）、ならびにその他の組換えにより生産された結合体または機能的等価物（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（ｏｌｉｇｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体、単鎖抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）、ダイアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）、ｓｃ（Ｆｖ）_２（ｓｉｎｇｌｅ　ｃｈａｉｎ　（Ｆｖ）_２）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ）を含む。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。さらにこのような抗体を、酵素、例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、αガラクトシダーゼなど、に共有結合させまたは組換えにより融合させてよい。狭義に使用する場合は、抗体は、全長抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体等）を指し、その他は改変体または抗原結合フラグメントと称することがある。本開示で用いられる抗体は、その標的に結合すればよく、その由来、種類、形状などは問われない。具体的には、非ヒト動物の抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ラクダ抗体）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの公知の抗体をもとに製造することができる。本開示においては、一本鎖抗体が使用される。抗体の標的への結合は識別的なあるいは特異的な結合であることが好ましい。抗体の改変体は、抗体と、例えばポリエチレングリコール等の各種分子が結合していてもよい。抗体の改変体は、抗体に公知の手法を用いて化学的な修飾を施すことによって得ることができる。

　本明細書において「一本鎖抗体」とは、「ｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ　ｃｈａｉｎ　Ｆｖ）」ともいい、抗体の重鎖および軽鎖の可変部領域（Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ）を適当なリンカーペプチドで連結させたものに相当する。このようなコンストラクトを遺伝子レベルで構築し、タンパク質発現用ベクターを用いて大腸菌に導入することで一本鎖抗体タンパク質を発現させることができる。

　本明細書において、「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがｎ）に対して、１～ｎ－１までの配列長を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここの具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。本明細書において、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの長さは、上述のようにそれぞれアミノ酸または核酸の個数で表すことができるが、上述の個数は絶対的なものではなく、同じ機能を有する限り、上限または下限としての上述の個数は、その個数の上下数個（または例えば上下１０％）のものも含むことが意図される。本明細書において有用なフラグメントの長さは、そのフラグメントの基準となる全長タンパク質の機能のうち少なくとも１つの機能が保持されているかどうかによって決定され得る。

　本明細書において遺伝子の「相同性」とは、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一性の程度をいう。従って、ある２つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。２種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。２つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でＤＮＡ配列が、代表的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。

　アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認知された１文字コードにより言及され得る。

　本明細書では、アミノ酸配列および塩基配列の類似性、同一性および相同性の比較は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ　２．９（２０１９．３．１１　発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記ＢＬＡＳＴを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメータの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。

　本明細書において、「改変体」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどの物質に対して、一部が変更されているものをいう。そのような改変体としては、置換改変体、付加改変体、欠失改変体、短縮（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）改変体、対立遺伝子変異体などが挙げられる。対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅ）とは、　同一遺伝子座に属し、互いに区別される遺伝的改変体のことをいう。従って、「対立遺伝子変異体」とは、ある遺伝子に対して、対立遺伝子の関係にある改変体をいう。「種相同体またはホモログ（ｈｏｍｏｌｏｇ）」とは、ある種の中で、ある遺伝子とアミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、相同性（好ましくは、６０％以上の相同性、より好ましくは、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の相同性）を有するものをいう。そのような種相同体を取得する方法は、本明細書の記載から明らかである。「オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは、オルソロガス遺伝子（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ　ｇｅｎｅ）ともいい、二つの遺伝子がある共通祖先からの種分化に由来する遺伝子をいう。例えば、多重遺伝子構造をもつヘモグロビン遺伝子ファミリーを例にとると、ヒトとマウスのαヘモグロビン遺伝子はオルソログであるが，ヒトのαヘモグロビン遺伝子とβヘモグロビン遺伝子はパラログ（遺伝子重複で生じた遺伝子）である。オルソログは、分子系統樹の推定に有用であることから、オルソログもまた、本開示において有用であり得る。

　本明細書において「保存的（に改変された）改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいい、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合には、本質的に同一な配列をいう。このような塩基配列の改変法としては、制限酵素などによる切断、ＤＮＡポリメラーゼ、Ｋｌｅｎｏｗフラグメント、ＤＮＡリガーゼなどによる処理等による連結等の処理、合成オリゴヌクレオチドなどを用いた部位特異的塩基置換法（特定部位指向突然変異法；Ｍａｒｋ　Ｚｏｌｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｓｍｉｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１００，４６８－５００（１９８３））が挙げられるが、この他にも通常分子生物学の分野で用いられる方法によって改変を行うこともできる。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定される全ての位置で、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変更することなく、記載された対応するコドンの任意のものに変更され得る。このような核酸の変動は、保存的に改変された変異の１つの種である「サイレント改変（変異）」である。ポリペプチドをコードする本明細書中のすべての核酸配列はまた、その核酸の可能なすべてのサイレント変異を記載する。当該分野において、核酸中の各コドン（通常メチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常トリプトファンのための唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一な分子を産生するために改変され得ることが理解される。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、記載された各配列において暗黙に含まれる。好ましくは、そのような改変は、ポリペプチドの高次構造に多大な影響を与えるアミノ酸であるシステインの置換を回避するようになされ得る。

　あるアミノ酸は、相互作用結合能力の明らかな低下または消失なしに、例えば、リガンド分子の結合部位のようなタンパク質構造において他のアミノ酸に置換され得る。あるタンパク質の生物学的機能を規定するのは、タンパク質の相互作用能力および性質である。従って、特定のアミノ酸の置換がアミノ酸配列において、またはそのＤＮＡコード配列のレベルにおいて行われ得、置換後もなお、もとの性質を維持するタンパク質が生じ得る。従って、生物学的有用性の明らかな損失なしに、種々の改変が、本明細書において開示されたペプチドまたはこのペプチドをコードする対応するＤＮＡにおいて行われ得る。

　このような核酸は、周知のＰＣＲ法により得ることができ、化学的に合成することもできる。これらの方法に、例えば、部位特異的変位誘発法、ハイブリダイゼーション法などを組み合わせてもよい。

　上記のような改変を設計する際に、アミノ酸の疎水性指数が考慮され得る。タンパク質における相互作用的な生物学的機能を与える際の疎水性アミノ酸指数の重要性は、一般に当該分野で認められている（Ｋｙｔｅ．ＪおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｒ．Ｆ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７（１）：１０５－１３２，１９８２）。アミノ酸の疎水的性質は、生成したタンパク質の二次構造に寄与し、次いでそのタンパク質と他の分子（例えば、酵素、基質、受容体、ＤＮＡ、抗体、抗原など）との相互作用を規定する。各アミノ酸は、それらの疎水性および電荷の性質に基づく疎水性指数を割り当てられる。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５））である。

　あるアミノ酸を、同様の疎水性指数を有する他のアミノ酸により置換して、そして依然として同様の生物学的機能を有するタンパク質（例えば、リガンド結合能において等価なタンパク質）を生じさせ得ることが当該分野で周知である。このようなアミノ酸置換において、疎水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。疎水性に基づくこのようなアミノ酸の置換は効率的であることが当該分野において理解される。米国特許第４，５５４，１０１号に記載されるように、以下の親水性指数がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）；およびトリプトファン（－３．４）。アミノ酸が同様の親水性指数を有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。

　本開示において、「保存的置換」とは、アミノ酸置換において、元のアミノ酸と置換されるアミノ酸との親水性指数または／および疎水性指数が上記のように類似している置換をいう。保存的置換の例は、当業者に周知であり、例えば、次の各グループ内での置換：アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン、などが挙げられるがこれらに限定されない。

　本明細書中において、機能的に等価なポリペプチドを作製するために、アミノ酸の置換のほかに、アミノ酸の付加、欠失、または修飾もまた行うことができる。アミノ酸の置換とは、もとのペプチドを１つ以上、例えば、１～１０個、好ましくは１～５個、より好ましくは１～３個のアミノ酸で置換することをいう。アミノ酸の付加とは、もとのペプチド鎖に１つ以上、例えば、１～１０個、好ましくは１～５個、より好ましくは１～３個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチドから１つ以上、例えば、１～１０個、好ましくは１～５個、より好ましくは１～３個のアミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシル化、硫酸化、ハロゲン化、アルキル化、リン酸化、水酸化、アシル化（例えば、アセチル化）などを含むが、これらに限定されない。置換、または付加されるアミノ酸は、天然のアミノ酸であってもよく、非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然のアミノ酸が好ましい。

　本明細書において、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「置換、付加および／または欠失」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して、それぞれアミノ酸もしくはその代替物、またはヌクレオチドもしくはその代替物が、置き換わること、付け加わること、または取り除かれることをいう。このような置換、付加および／または欠失の技術は、当該分野において周知であり、そのような技術の例としては、部位特異的変異誘発技術などが挙げられる。基準となる核酸分子またはポリペプチドにおけるこれらの変化は、目的とする機能（例えば、ＲＡＧＥの認識能など）が保持される限り、この核酸分子の５’末端もしくは３’末端で生じ得るか、またはこのポリペプチドを示すアミノ酸配列のアミノ末端部位もしくはカルボキシ末端部位で生じ得るか、またはそれらの末端部位の間のどこにでも生じ得、基準配列中の残基間で個々に散在する。置換、付加または欠失は、１つ以上であれば任意の数でよく、そのような数は、その置換、付加または欠失を有する改変体において目的とする機能が保持される限り、多くすることができる。例えば、そのような数は、１または数個であり得、そして好ましくは、全体の長さの２０％以内、１５％以内、１０％以内、５％以内、または１５０個以下、１００個以下、５０個以下、２５個以下などであり得る。

　本明細書において使用される場合、用語「タグ配列」とは、受容体－リガンドのような特異的認識機構により分子を選別するための物質、より具体的には、特定の物質を結合するための結合パートナーの役割を果たす物質（例えば、ビオチン－アビジン、ビオチン－ストレプトアビジンのような関係を有する）をいう。よって、例えば、タグ配列が結合した特定の物質は、タグ配列の結合パートナーを結合させた基材を接触させることで、この特定の物質を選別することができる。このようなタグ配列は、当該分野で周知である。代表的なタグ配列としては、ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＨＡ、Ａｖｉタグなどが挙げられるが、これらに限定されない。

　本明細書において「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の１または２以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。

　本明細書において、「アミノ酸」は、本開示の目的を満たす限り、天然のものでも非天然のものでもよい。本明細書において「アミノ酸誘導体」または「アミノ酸アナログ」とは、天然に存在するアミノ酸とは異なるがもとのアミノ酸と同様の機能を有するものをいう。そのようなアミノ酸誘導体およびアミノ酸アナログは、当該分野において周知である。本明細書では、アミノ酸誘導体およびアミノ酸アナログは、アミノ酸と同じ生物学的機能を提供し得る限り代替として使用され得ることが理解される。本明細書において「天然のアミノ酸」とは、天然のアミノ酸のＬ－異性体を意味する。天然のアミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、γ－カルボキシグルタミン酸、アルギニン、オルニチン、およびリジンである。特に示されない限り、本明細書でいう全てのアミノ酸はＬ体であるが、Ｄ体のアミノ酸を用いた形態もまた本開示の範囲内にある。本明細書において「非天然アミノ酸」とは、タンパク質中で通常は天然に見出されないアミノ酸を意味する。非天然アミノ酸の例として、ノルロイシン、パラ－ニトロフェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、パラ－フルオロフェニルアラニン、３－アミノ－２－ベンジルプロピオン酸、ホモアルギニンのＤ体またはＬ体およびＤ－フェニルアラニンが挙げられる。本明細書において「アミノ酸アナログ」とは、アミノ酸ではないが、アミノ酸の物性および／または機能に類似する分子をいう。アミノ酸アナログとしては、例えば、エチオニン、カナバニン、２－メチルグルタミンなどが挙げられる。アミノ酸模倣物とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様な様式で機能する化合物をいう。

　本明細書において「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。この用語はまた、「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」を含む。「オリゴヌクレオチド誘導体」または「ポリヌクレオチド誘導体」とは、ヌクレオチドの誘導体を含むか、またはヌクレオチド間の結合が通常とは異なるオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドをいい、互換的に使用される。そのようなオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば、２’－Ｏ－メチル－リボヌクレオチド、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスホロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がＮ３’－Ｐ５’ホスホロアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリボースとリン酸ジエステル結合とがペプチド核酸結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ－５プロピニルウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のウラシルがＣ－５チアゾールウラシルで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがＣ－５プロピニルシトシンで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のシトシンがフェノキサジン修飾シトシン（ｐｈｅｎｏｘａｚｉｎｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｃｙｔｏｓｉｎｅ）で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体、ＤＮＡ中のリボースが２’－Ｏ－プロピルリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体およびオリゴヌクレオチド中のリボースが２’－メトキシエトキシリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などが例示される。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、１またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ　８：９１－９８（１９９４））。

　本明細書において「ヌクレオチド」は、天然のものでも非天然のものでもよい。「ヌクレオチド誘導体」または「ヌクレオチドアナログ」とは、天然に存在するヌクレオチドとは異なるがもとのヌクレオチドと同様の機能を有するものをいう。そのようなヌクレオチド誘導体およびヌクレオチドアナログは、当該分野において周知である。そのようなヌクレオチド誘導体およびヌクレオチドアナログの例としては、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド型核酸（ＰＮＡ）が含まれるが、これらに限定されない。

　本明細書において「核酸」はまた、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと互換可能に使用される。特定の核酸配列はまた、「スプライス改変体」を包含する。同様に、核酸によりコードされた特定のタンパク質は、その核酸のスプライス改変体によりコードされる任意のタンパク質を暗黙に包含する。その名が示唆するように「スプライス改変体」は、遺伝子のオルタナティブスプライシングの産物である。転写後、最初の核酸転写物は、異なる（別の）核酸スプライス産物が異なるポリペプチドをコードするようにスプライスされ得る。スプライス改変体の産生機構は変化するが、エキソンのオルタナティブスプライシングを含む。読み過し転写により同じ核酸に由来する別のポリペプチドもまた、この定義に包含される。スプライシング反応の任意の産物（組換え形態のスプライス産物を含む）がこの定義に含まれる。

　本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいう。通常染色体上に一定の順序に配列している。タンパク質の一次構造を規定する遺伝子を構造遺伝子といい、その発現を左右する遺伝子を調節遺伝子という。本明細書では、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」ならびに／あるいは「タンパク質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」をさすことがある。

　本明細書において、「リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）とは、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、およびＫＨ_２ＰＯ_４を含むｐＨ７～８の水溶液である。各成分の濃度およびｐＨは、用途に応じて好適に調節することができる。本明細書において、「ＰＢＳ（＋）」は、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含むことを意味しており、「ＰＢＳ（－）」は、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含まないことを意味しているが、本明細書では、明示的に記載しない限り、「ＰＢＳ」は「ＰＢＳ（－）」を意味するものとする。本明細書では、代表的には、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ＰＢＳ（－）を使用することができる。Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ＰＢＳ（－）の組成は、ＮａＣｌ　８ｇ，ＫＣｌ　０．２ｇ，Ｎａ_２ＨＰＯ_４　１．１５ｇ，ＫＨ_２ＰＯ_４　０．２ｇ／Ｌ、（ｐＨ　７．４）である。

　本明細書において使用される場合、用語「受容体」とは、１個以上のリガンドと可逆的、かつ特異的に複合体化する１個以上の結合ドメインを備える生物学的な構造であって、ここで、この複合体化は生物学的な構造を有する。受容体は、完全に細胞の外部（細胞外の受容体）、細胞膜の中（しかし、受容体の部分を細胞外部の環境および細胞質ゾルに向けている）、または完全に細胞の中（細胞内の受容体）に存在し得る。これらはまた、細胞と独立的に機能し得る。細胞膜中の受容体は、細胞を、その境界の外部の空間と連絡（例えば、シグナル伝達）させ、そして細胞の内側および外側への分子およびイオンの輸送において機能させることを可能とする。本明細書において使用する場合、受容体は、受容体全長であっても、受容体のフラグメントであってもよい。

　本明細書において、「抗原抗体反応」とは、当該分野で使用される最も広い意味で用いられ、特に、抗原と抗体との間の特異的結合に基づく反応をいう。検出系としてイムノブロット（ウェスタンブロット）形式を用いることによって、試料中の抗原を検出し、そして定量化するための試薬および方法も提供する。

　本明細書において、「カイコ」とは、通常の意味のカイコ（蚕）を意味し、チョウ目（鱗翅目）・カイコガ科に属する昆虫の一種であるものとする。正式和名はカイコガ（学名：Ｂｏｍｂｉｘ　ｍｏｒｉ）で、カイコはこの幼虫の名称だが、一般的にはこの種全般をも指す。クワ（桑）を食餌とし、絹を産生して蛹の繭を作る。カイコは家蚕（かさん）とも呼ばれ、野生に生息する昆虫ではない。カイコの祖先は東アジアに生息するクワコ（Ｂｏｍｂｙｘｍａｎｄａｒｉｎａ）であると考えられている。カイコとクワコは学問的には別種とされるが、これらの雑種は生殖能力をもつ。本明細書では、カイコには、クワコが含まれるものとする。本明細書において「カイコと同様の糖鎖を付与する生物」とは、カイコと同様の糖鎖を付加する能力を有する生物をいい、カイコと同様の糖鎖を付加する酵素をコードする遺伝子等でトランスジェニック生物等を含みうる。

　本明細書において、「絹糸腺」とは、熟蚕の体内に存在する左右１対の器官であり、クワの葉から摂取した多量のタンパク質（アミノ酸）を２種類の絹タンパク質（フィブロイン、セリシン）に変える器官を意味する。絹糸腺は左右一対となっており、マユ糸の原料となる液状絹を分泌する。絹糸腺は、後部絹糸腺、中部絹糸腺、前部絹糸腺の３つの部分に分けられる。本開示では、いずれの絹糸腺を用いても合成可能であるが、合成後の取り扱いを考慮し、後部絹糸腺、中部絹糸腺が通常使用され、好ましくは中部絹糸腺が使用されるが、それに限定されるものではない。また、全身に発現させて全身から回収することも可能であるし、マユを形成させた後にマユから回収することも可能である。

　後部絹糸腺とは、最後部にある細長い部分で、伸ばすと約２０ｃｍになる。ここでは後にマユ糸の中心となるフィブロインタンパク質を合成する。

　中部絹糸腺とは、中央部分にあるＳ字に曲がった太い部分で、伸ばすと約６ｃｍになる。後部絹糸腺から送られてきたフィブロインタンパク質を濃縮して蓄え、繊維にしやすい形に整える。またもうひとつの絹タンパク質であるセリシンも分泌する。マユ糸を吐きだすとき、フィブロインタンパク質をまとめる接着剤の役割をする。

　前部絹糸腺とは、長さは約４ｃｍの吐糸口につながる細い管で、先に行くほど細くなる。液状のフィブロインタンパク質の分子が引き伸ばされて一定方向に揃えられ、互いに集合することでさらに水分が除かれる。管の先端でもう一対の管と一本に合流し、吐糸口から吐きだされて一本のマユ糸になる。

　カイコは５齢の終わり頃にクワを食べるのをやめる（熟蚕）。熟蚕の体の中は、マユ糸の原料となる水飴のような液（液状絹）をため込んだ一対の器官（絹糸腺）でいっぱいになっている。絹糸腺は、細い吐糸管をつうじてカイコの口元にある吐糸口につながっている。液状絹は細い吐糸管を通ることで引き伸ばされて固まり、マユ糸となる。さらには、幼虫が吐糸管から吐きだした糸を近くのものに貼りつけ、頭と胸を８の字状に動かし、引っぱるという一連の運動で、マユ糸は次々と絹糸腺から引きだされるのである。

　本明細書において「カイコ型糖鎖」とは、カイコで生産される糖タンパク質において特有の糖鎖構造をいい、代表的にはトリマンノシルコア（自体）、オリゴマンノース型糖鎖および複合型糖鎖、あるいはそのハイブリッド型がある。本開示では、中部絹糸腺を用いてカイコ型糖タンパク質を生産していることから、特に断らない限り、「カイコ型糖鎖」とは、この中部絹糸腺で生産される特有の糖鎖型をいう。このようなカイコ型糖鎖としては、例えば、アスパラギン（Ａｓｎ）に結合したＮアセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が２個結合した後、マンノース（Ｍａｎ）が３分子結合したもの（トリマンノシルコアといい、下記（１）式で示される）をコアとして、そこから分岐した構造をとり、さらに種々の糖鎖が結合している。

　本明細書において「対応する」アミノ酸または核酸とは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドと同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいい、特に酵素分子にあっては、活性部位中の同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸をいう。例えば、アンチセンス分子であれば、そのアンチセンス分子の特定の部分に対応するオルソログにおける同様の部分であり得る。対応するアミノ酸は、例えば、システイン化、グルタチオン化、Ｓ－Ｓ結合形成、酸化（例えば、メチオニン側鎖の酸化）、ホルミル化、アセチル化、リン酸化、糖鎖付加、ミリスチル化などがされる特定のアミノ酸であり得る。あるいは、対応するアミノ酸は、二量体化を担うアミノ酸であり得る。このような「対応する」アミノ酸または核酸は、一定範囲にわたる領域またはドメインであってもよい。従って、そのような場合、本明細書において「対応する」領域またはドメインと称される。

　本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子（例えば、ポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子）をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子に対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。従って、マウス、ラットのＲＡＧＥ（または可溶性形態のｓＲＡＧＥ）は、それぞれ、ヒトにおいて、対応するＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥまたは可溶性形態のｓＲＡＧＥ）を見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。したがって、例えば、ある動物（例えば、マウス）における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、ＲＡＧＥまたは可溶性形態のｓＲＡＧＥ）は、ある動物の配列をクエリ配列として用いてその動物（例えばヒト、ラット）の配列データベースを検索することによって見出すことができる。

　本明細書において「生物学的機能」とは、ある遺伝子またはそれに関する核酸分子もしくはポリペプチドについて言及するとき、その遺伝子、核酸分子またはポリペプチドが生体内において有し得る特定の機能をいい、これには、例えば、特異的な抗体の生成、酵素活性、抵抗性の付与等を挙げることができるがそれらに限定されない。本開示においては、例えば、ＲＡＧＥがヘモペキシン等のマーカーを認識する機能などを挙げることができるがそれらに限定されない。本明細書において、生物学的機能は、「生物学的活性」によって発揮され得る。本明細書において「生物学的活性」とは、ある因子（例えば、ポリヌクレオチド、タンパク質など）が、生体内において有し得る活性のことをいい、種々の機能（例えば、転写促進活性）を発揮する活性が包含され、例えば、ある分子との相互作用によって別の分子が活性化または不活化される活性も包含される。２つの因子が相互作用する場合、その生物学的活性は、その二分子との間の結合およびそれによって生じる生物学的変化、例えば、一つの分子を抗体を用いて沈降させたときに他の分子も共沈するとき、２分子は結合していると考えられる。したがって、そのような共沈を見ることが一つの判断手法として挙げられる。例えば、ある因子が酵素である場合、その生物学的活性は、その酵素活性を包含する。別の例では、ある因子がリガンドである場合、そのリガンドが対応する受容体への結合を包含する。そのような生物学的活性は、当該分野において周知の技術によって測定することができる。

　したがって、「活性」は、結合（直接的または間接的のいずれか）を示すかまたは明らかにするか；応答に影響する（すなわち、いくらかの曝露または刺激に応答する測定可能な影響を有する）、種々の測定可能な指標をいい、例えば、本開示のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに直接結合する化合物の親和性、または例えば、いくつかの刺激後または事象後の上流または下流のタンパク質の量あるいは他の類似の機能の尺度が、挙げられる。

　本明細書において「被験体」とは、本開示の診断または検出等の対象となる生物（例えば、ヒト）をいう。

　本明細書において「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、体液（血液、唾液、尿、涙液、脳脊髄液等）が含まれる。

　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではａｇｅｎｔに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。ポリヌクレオチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリヌクレオチドの配列に対して一定の配列相同性を（例えば、７０％以上の配列同一性）もって相補性を有するポリヌクレオチド、プロモーター領域に結合する転写因子のようなポリペプチドなどが挙げられるがそれらに限定されない。ポリペプチドに対して特異的な因子としては、代表的には、そのポリペプチドに対して特異的に指向された抗体またはその誘導体あるいはその類似物（例えば、単鎖抗体）、そのポリペプチドが受容体またはリガンドである場合の特異的なリガンドまたは受容体、そのポリペプチドが酵素である場合、その基質などが挙げられるがそれらに限定されない。

　本明細書において「相互作用」とは、２つの物質についていうとき、一方の物質と他方の物質との間で力（例えば、分子間力（ファンデルワールス力）、水素結合、疎水性相互作用など）を及ぼしあうこという。通常、相互作用をした２つの物質は、会合または結合している状態にある。

　本明細書中で使用される用語「結合」は、２つのタンパク質もしくは化合物または関連するタンパク質もしくは化合物の間、あるいはそれらの組み合わせの間での、物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合には、イオン結合、非イオン結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水性相互作用などが含まれる。物理的相互作用（結合）は、直接的または間接的であり得、間接的なものは、別のタンパク質または化合物の効果を介するかまたは起因する。直接的な結合とは、別のタンパク質または化合物の効果を介してもまたはそれらに起因しても起こらず、他の実質的な化学中間体を伴わない、相互作用をいう。

　本明細書中で使用される「接触（させる）」とは、化合物を、直接的または間接的のいずれかで、本開示のマーカー、リガント等として機能しうるポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して物理的に近接させることを意味する。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、多くの緩衝液、塩、溶液などに存在させることができる。接触とは、核酸分子またはそのフラグメントをコードするポリペプチドを含む、例えば、ビーカー、マイクロタイタープレート、細胞培養フラスコまたはマイクロアレイ（例えば、遺伝子チップ）などに化合物を置くことが挙げられる。

　一つの局面において、本開示は、疾患（脂質異常症、糖尿病合併症、肝疾患、および、アルツハイマー型認知症など）を診断、治療の有効性を評価するのに有用な酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを検出するために用いられる。

　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本開示の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「予測診断」「事前診断」等を含む。早期の診断は「早期診断」ということもある。

　本明細書において特に、「予測診断」または「事前診断」とは、交換可能に使用され、ＬＤＬまたはＡＧＥｓを認識することができる分子（ＣＴＬＤ１４、ｓＲＡＧＥ等）を用いて、肝疾患、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症等について言及する場合、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症等の発症前の段階を検出することをいい、将来の発症リスクを判定すること、肝疾患、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症等の予防を目的として糖尿病に罹患するおそれの有無を判定することを含む。本開示の方法、キット、組成物、検出剤、診断剤、システム等を用いることによって、体内の状態を事前に調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書では、「予測診断」または「事前診断」は、他の従来の方法では診断できない段階での診断をも包含することから、「早期診断」の概念と一部重なって用いられる。

　本開示の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができることから、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。広義には、「診断」には、治療の有効性を評価することも包含される。

　本明細書において使用される場合、用語「検出剤」とは、広義には、目的の物質（例えば、疾患に関連する酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓなど）を検出できるあらゆる因子をいう。

　本明細書において使用される場合、用語「診断剤」とは、広義には、目的の状態（例えば、疾患（脂質異常症、糖尿病合併症、肝疾患、および、アルツハイマー型認知症など）など）を診断できるあらゆる因子をいう。

　本明細書において、「測定」とは、当該分野において使用される通常の意味で用いられ、ある対象について、量がどれほどか測って求めることをいう。本明細書において「検出」とは、当該分野において使用される通常の意味で用いられ、物質や成分等を検査して見つけだすことをいい、「同定」とは、ある対象について、そのものにかかわる既存の分類のなかからそれの帰属先をさがす行為をいい、化学分野において使用される場合、対象となる物質の化学物質としての同一性を決定する（例えば、化学構造を決定する）ことをいい、「定量」とは、対象となる物質の存在する量を決定することをいう。本明細書において「（分子）とのコンジュゲート形成により検出または定量」とは、検出または定量の目的となる対象の検出または定量が、その対象と別の実体（ｅｎｔｉｔｙ）がコンジュゲートを形成するかどうかを指標になされることをいう。コンジュゲート形成を指標にする場合と、コンジュゲート形成の阻害（競合分子を用いる）を指標にする場合とがあり得る。

　本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消退させることをいう。

　本明細書において「予防」とは、ある疾患（脂質異常症、糖尿病合併症、肝疾患、および、アルツハイマー型認知症など）または障害について、そのような状態になる前に、そのような状態にならないようにすることをいう。本開示の予測診断または事前診断を行うことによって、酸化ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓに関連する疾患または障害等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることができる。本開示の予測診断または事前診断を行うことによって、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症等の予防をするか、あるいは予防のための対策を講じることもできる。

　（好ましい実施形態）
　以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本開示の例示であり、本開示の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本開示の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。

　（デバイスまたはキット）
　一局面において、本開示は、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部とを含み、該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイスを提供する。

　いくつかの実施形態において、メンブレンが、上流から下流にかけて、検出部およびコントロール部をこの順番で含み得る。

　いくつかの実施形態において、試料接触部、検出部、およびコントロール部が、相互に毛管現象で試料が浸透するように配置または連結され得る。

　いくつかの実施形態において、生体マーカー分子はＬＤＬまたはＡＧＥｓであり得、生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓであり得る。

　いくつかの実施形態において、結合分子はＣＴＬＤ１４またはｓＲＡＧＥであり得る。

　いくつかの実施形態において、検出対象が、変性ＬＤＬである場合は、検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントであり得、検出対象が、刺激性ＡＧＥｓである場合は、検出用結合剤は、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。

　いくつかの実施形態において、本開示のキットまたはデバイスは、生体マーカー分子の競合分子をさらに含んでもよいし、含まなくてもよい。

　特定の実施形態において、生体マーカー分子はＬＤＬであり、生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬであり、結合分子はＣＴＬＤ１４であり、検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントであり得る。

　特定の実施形態において、前記生体マーカー分子はＡＧＥｓであり、前記生体マーカー分子の異常型は刺激性ＡＧＥｓであり、前記結合分子はｓＲＡＧＥであり、前記検出用結合剤は抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含み、該競合分子はＧ－ＢＳＡもしくはＧ－ＯＶＡであり得る。

　いくつかの実施形態において、金属コロイドは、検出試薬として提供され得る。検出試薬は、本開示のデバイスまたはキットとは別個に提供されてもよいし、本開示のデバイスまたはキットと一体となって提供されてもよい。検出試薬は、試料と混合して使用してもよいし、コンジュゲート部に含めてもよい。検出試薬が試料と混合される場合、コンジュゲート部は省略されてもよい。試料を水平方向に展開する場合は、メンブレンは検出試薬を含むコンジュゲート部を備えているのが好ましく、試料を垂直方向に展開する場合は、コンジュゲート部を省略し、検出試薬を試料中にあらかじめ混合しておくのが好ましい。コンジュゲート部は、メンブレンとは別要素として提供されていてもよい。

　（組成物）
　別の局面において、本開示は、金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部とを含み、該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、組成物を提供する。いくつかの実施形態において、デバイス、システムまたはキットは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含み得る。

　さらなる局面において、本開示は、金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と、該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部とを含む、組成物を提供する。いくつかの実施形態において、デバイス、システムまたはキットは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含み得る。

　（変性ＬＤＬ検出システム）
　一局面において、本開示は、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、変性ＬＤＬを検出または定量するためのシステムまたはデバイスであって、該メンブレンが、金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４を含むコンジュゲート部と、抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントを含む検出部と、ＣＴＬＤ１４に対する結合分子を含むコントロール部とを含む、システムを提供する。いくつかの実施形態において、システムまたはデバイスは、試料接触部および蛍光ナノ粒子をメンブレンの一部としてまたは別要素として含み得る。本開示のシステムは、従来の方法と比べて、簡易かつ迅速に変性ＬＤＬを検出することが可能である。また、夾雑物を多く含む血液試料（例えば、全血、血清、血漿）などの生体試料を用いて検出することが可能である。本開示のシステムは、ラテラルフローアッセイ形式のシステムであり得る。本開示のシステムは、夾雑物を多く含む血液試料において、夾雑物を取り除くための追加の工程を必要とすることなく変性ＬＤＬを検出することが可能であるため、有利である。

　いくつかの実施形態において、コンジュゲート部は、メンブレンとは別要素として提供されていてもよい。

　本開示の方法において、当該分野で周知の技術、例えば、デンシトメーターの色彩濃度測定機能を用いて着色を比色定量することによって、変性ＬＤＬを定量することが可能である。

　本開示の試料接触部は、試料（例えば、血液等）が接触され得る部分であり、試料が接触する形状であればどのような形状であってもよく、材質もまた、どのような材質であってもよいが、試料と反応をする材質は可能であれば回避され得る。試料接触部は、メンブレンの一部として提供されてもよく、別要素として提供されていてもよいが、いずれにしてもコントロール部および検出部と毛管現象で試料が浸透するように連結されている必要がある。

　いくつかの実施形態において、試料接触部は、血球分離フィルターを含み得る。血球分離フィルターとは、赤血球、白血球および血小板をろ過して、血球以外の成分をメンブレンに送り出すためのフィルターを指し、例えば、ＦＵＳＩＯＮ５、ＬＦ１、ＭＦ１、およびＶＦ２などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、血球分離フィルターは、ＦＵＳＩＯＮ５またはＬＦ１であり得る。

　本開示におけるコンジュゲート部は、金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４を含むものである。コンジュゲート部は、ＣＴＬＤ１４と、試料とが接触してコンジュゲートが可能な構造および材質で構成され得る。

　いくつかの実施形態において、金属コロイドは、金コロイド、銀コロイド、白金コロイドおよびパラジウムコロイドからなる群から選択され得、好ましくは、金属コロイドは、白金コロイドまたはパラジウムコロイドであり、最も好ましくは、金属コロイドは、白金コロイドである。金属コロイドは、コンジュゲートに配置される。

　いくつかの実施形態において、ＣＴＬＤ１４は、ビオチン化、Ｈｉｓタグ付加、Ｍｙｃタグ付加、Ｆｌａｇタグ付加、Ｅタグ付加、またはＳｔｒｅｐタグ付加されており、それぞれの場合において、ＣＴＬＤ１４に対する結合分子は、ストレプトアビジン、抗Ｈｉｓ抗体、抗Ｍｙｃ抗体、抗Ｆｌａｇ抗体、抗Ｅタグ抗体、またはＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎであり得る。

　いくつかの実施形態において、ＣＴＬＤ１４は、カイコ型糖鎖を有し得る。このようなカイコ型糖鎖を有するＣＴＬＤ１４は、カイコにより産生されるものであってもよく、人工的に糖鎖を付加されたものであってもよいが、カイコにより産生されるのが好ましい。ビオチンリガーゼを共発現可能に組み込んだカイコにより産生されるＣＴＬＤ１４は、ＣＴＬＤ１４の配列内にビオチン化タグを含めることによって、ビオチン化され得る。ビオチン化タグとしては、ビオチン化を受けるタグ配列としては、ＢｉｏＥａｓｅ．ｔａｇ、Ａｖｉ．ｔａｇ、ビオチン化を受け得る任意の配列が挙げられるが、これらに限定されない。ビオチン化ＣＴＬＤ１４を使用することによって、コントロール部に比較的容易に利用可能なストレプトアビジンを使用することが可能である。得られるビオチン化ＣＴＬＤ１４は、アルカリ条件下での金属コロイドとのコンジュゲートでも安定であり、優れている。特定の実施形態において、ＣＴＬＤ１４は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、約１００％の同一性を有し得る。カイコ型糖鎖を有するビオチン化ＣＴＬＤ１４の産生方法を以下に詳述する。参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０５１８０８号を参照することもできる。

　本開示のシステムまたはデバイスにおいて、検出部（テストスポットまたはライン）は、抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体また抗ＡｐｏＢ抗体を含む。検出部は、これらの抗体を介して、目的とする成分（例えば、変性ＬＤＬ、刺激性ＡＧＥｓ）が試料中に存在するかどうかの検出を可能にする部分である。したがって、検出を可能にする形状および材質であれば、どのようなもので構成されていてもよい。

　本開示のシステムまたはデバイスにおいて、コントロール部（コントロールスポットまたはライン）は、デバイス上で試料が展開されたことを確認する部分であり、ＣＴＬＤ１４に対する結合分子（例えば、ＣＴＬＤ１４に対する抗体、またはＣＴＬＤ１４がビオチン化されている場合、このビオチンを検出するストレプトアビジン）を含む。検出部（テストスポットまたはライン）は、ＣＴＬＤ１４に対する結合分子がＣＴＬＤ１４に結合し、次いであるいは並行して抗体と相互作用することで、金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４が凝集しプラズモン効果により発色することにより目的成分の検出または定量を可能にする。したがって、結合、制御および検出を可能にする形状および材質であれば、どのようなもので構成されていてもよい。検出または定量については、（検出または定量方法）においても詳述されている。

　（刺激性ＡＧＥｓ検出システム）
　別の局面において、本開示は、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、刺激性ＡＧＥｓを検出または定量するためのシステムであって、該メンブレンが、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥを含むコンジュゲート部と、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む検出部と、ｓＲＡＧＥに対する結合分子を含むコントロール部とを含む、システムを提供する。いくつかの実施形態において、コンジュゲート部はさらに競合分子としてＧ－ＢＳＡを含み得る。いくつかの実施形態において、システムは、試料接触部および蛍光ナノ粒子をメンブレンの一部としてまたは別要素として含み得る。いくつかの実施形態において、コンジュゲート部は、メンブレンとは別要素として提供されていてもよい。

　理論に束縛されることを望まないが、例えば、ｓＲＡＧＥに対する競合により、テストライン上のスポットの濃さ（発色）が減少することにより、試料中の刺激性ＡＧＥｓを検出することができる。例えばテストラインに、抗ＢＳＡ抗体をスポットした系の場合、グルコース修飾ＢＳＡ（活性の弱いＡＧＥｓ）を含む反応バッファーに、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥと試料を添加し、試料中に刺激性ＡＧＥｓが存在しない場合、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥがＧ－ＢＳＡと結合し、テストラインで抗体に捕捉され凝集するため発色するのに対し、試料中に刺激性ＡＧＥｓが存在する場合、Ｇ－ＢＳＡのｓＲＡＧＥへの結合量が低下し、その結果、テストラインでの金属コロイド標識ｓＲＡＧＥの凝集が生じ難くなり、結果的にテストスポットの発色が低下することが企図される。このテストラインの発色の阻害の程度で刺激性ＡＧＥｓの存在を検出することができる。テストラインに抗ＢＳＡ抗体を使用する場合、コンジュゲートバッファーやブロッキングバッファーにＢＳＡが使用できないことから、適宜、カゼイン、ＰＶＡなどを使用することができる。別の例として、テストラインに抗ＯＶＡ（オボアルブミン）抗体を使用し、競合用ＡＧＥｓとして、Ｇ－ＯＶＡを使用する系も実施することができる。

　本開示のシステムまたはデバイスにおいて、好ましくは血球分離部を含み得る。血球分離部は試料として血球や血液成分が含まれるまたは含まれることが想定される場合に望ましい。血液には検出に阻害する成分があり得ることから、特に血球を分離しうることが有利であり得る。

　さらなる局面において、本開示は、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部とを含み、該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイスを提供する。結合分子が試料中の生体マーカー分子に結合することにより、検出部における競合分子への結合が阻害され、発色強度の減少につながり得る。発色強度の減少に基づき、試料中の生体マーカー分子を定量することができる。別の局面において、本開示は、上記キットまたはデバイスにおいて使用するための、結合分子を標識する金属コロイド、または金属コロイドで標識された結合分子を含む組成物も提供し得る。検出部に競合分子を含む検出系の概要図を図１５に示す。

　いくつかの実施形態において、生体マーカー分子はＡＧＥｓであり、生体マーカー分子の異常型は刺激性ＡＧＥｓであり、結合分子はｓＲＡＧＥであり、競合分子は、糖化処理なしＢＳＡ、糖化処理なしＯＶＡ、ＣＭＬ－ＢＳＡ、ＣＭＬ－ＯＶＡ、Ｇ－ＢＳＡ、Ｇ－ＯＶＡ、Ｆ－ＢＳＡ、もしくはＦ－ＯＶＡであり得る。特定の実施形態において、競合分子は、Ｇ－ＢＳＡ、Ｇ－ＯＶＡ、Ｆ－ＢＳＡ、もしくはＦ－ＯＶＡであり得、好ましくは、Ｇ－ＢＳＡもしくはＦ－ＢＳＡであり得る。

　（検出または定量方法）
　別の局面において、本開示は、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、試料を提供する工程と、該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、本開示のデバイスまたはキットにおける前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程とを含む、方法を提供する。

　別の局面において、本開示は、変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓを検出または定量するための方法であって、血液試料を提供する工程と、該血液試料と緩衝液および抗凝固剤（例えば、ヘパリン）とを混合する工程と、本開示のシステムまたはデバイスにおける試料接触部と、該混合された血液試料とを接触させる工程と、接触後、該緩衝液を添加する工程とを含む、方法を提供する。

　いくつかの実施形態において、緩衝液としては、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、緩衝液は、ＰＢＳ（－）であり得る。緩衝液には、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等のアルブミン、カゼイン、ＰＶＡのような他の（その後の操作に影響のない）タンパク質が添加されても、されていなくてもよい。特定の実施形態において、緩衝液は、ＢＳＡ添加リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（－）であり得る。

　以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したものではない。したがって、本開示の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

　（実施例１：カイコ中部絹糸腺または後部絹糸腺抽出液からのＣＴＬＤ１４の精製）
　（材料および方法）
　標的配列ＵＳＡ下流にＢｉｏＥａｓｅ　ｔａｇ　ＣＴＬＤ１４（またはＢｉｏＥａｓｅ　ｔａｇ　ｓＲＡＧＥ）を挿入したＵＳＡ－Ｂｉｏｔｉｎ　ｔａｇ　ＣＴＬＤ１４（またはＵＳＡ－Ｂｉｏｔｉｎ　ｔａｇ　ｓＲＡＧＥ）、標的配列ＵＳＡ下流にビオチンリガーゼ（ＢｉｒＡ）を挿入したＵＳＡ－ＢｉｒＡ、ならびにＧＡＬ４を中部絹糸腺または後部絹糸腺特異的に発現させるセリシン１プロモーター（Ｓｅｒ１）－ＧＡＬの３つのコンストラクトを導入した遺伝子組換えカイコを作出した。このカイコは、中部絹糸腺または後部絹糸腺特異的に、Ｂｉｏｔｉｎ　ｔａｇ　ＣＴＬＤ１４（またはＢｉｏｔｉｎ　ｔａｇ
　ｓＲＡＧＥ）およびＢｉｒＡを発現する。さらに、５令幼虫に１ｇ当たり２０μｇのビオチンを添加した餌を与え、ＣＴＬＤ１４またはｓＲＡＧＥのビオチン化に必要なビオチンを供給した。繭を作る直前に中部絹糸腺または後部絹糸腺を摘出し、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００／ＰＢＳ（－）によりタンパク質を抽出した。

　凍結融解処理により中部または後部絹糸腺抽出物からセリシンを除去した溶解物を、ＰＢＳで平衡化したＴＡＬＯＮレジン（Ｃｏを使用した金属キレートアフィニティクロマトグラフィレジン）に結合させた後、１０ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳでレジンを洗浄し、ＰＢＳ中のイミダゾール濃度を段階的に上げることによりＣＴＬＤ１４を溶出した。５０ｍＭ～５００ｍＭイミダゾール溶出画分を収集しＰＢＳ（－）で透析した。さらにＰＢＳで平衡化したＭｕｔｅｉｎ　Ｍａｔｒｉｘに結合させ、１．５ｍＭ～３ｍＭのビオチンを含むＰＢＳで溶出させた画分をＰＢＳ透析し、ビオチン化ＣＴＬＤ１４を精製した。

　（結果）
　結果を図１に示す。示されるように、中部絹糸腺および後部絹糸腺の両方の発現系において、ビオチン化ＣＴＬＤ１４の発現に成功した。また、後部絹糸腺発現系は、中部絹糸腺発現系よりも高い効率でビオチン化ＣＴＬＤ１４を発現した。

　（実施例２：カイコ中部絹糸腺及び後部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法によるＬＤＬリガンド類の検出）
　カイコ中部絹糸腺及び後部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法により、各種ＬＤＬリガンド類の検出を評価した。

　（材料および方法）
　カイコ中部絹糸腺及び後部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４（２０μｇ／ｍｌ）をマイクロプレートウェルに５０μｌずつ分注し、４℃で一晩コートした。ＣＴＬＤ１４溶液を捨て、ウェルを２００μｌのＰＢＳで３回洗浄した後、２５０μｌの０．２５％ＢＳＡ／ＰＢＳを添加し２５℃で２時間ブロッキングした後、ウェルを２００μｌのＰＢＳで３回洗浄した。次にリガンドとして完全酸化ＬＤＬ（ｆ－ＯｘＬＤＬ）、部分酸化ＬＤＬ（ｍ－ＯｘＬＤＬ）、ＡＧＥ－ＬＤＬ、未変性ＬＤＬ（ＬＤＬ）の０～４μｇ／ｍｌ溶液を１ウェルにつき１００μｌ添加した。２５℃で２時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、抗ＬＤＬニワトリポリクロナール抗体（０．２５％ＢＳＡ／ＰＢＳで１：６０００に希釈したもの）を１ウェルにつき１００μｌ添加した。２５℃で１時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、抗ニワトリＩｇＹ-ＨＲＰコンジュゲート（０．２５％ＢＳＡ／ＰＢＳで１：６０００に希釈したもの）を１ウェルにつき１００μｌ添加した。２５℃で１時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、ＴＭＢ溶液を１ウェルにつき５０μｌ添加して発色を確認した。１Ｎ　ＨＣｌを１ウェルにつき５０μｌ添加して反応を停止し、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。

　（結果）
　結果を図２に示す。リガンドとして完全酸化ＬＤＬ（ｆ－ＯｘＬＤＬ）、部分酸化ＬＤＬ（ｍ－ＯｘＬＤＬ）、ＡＧＥ－ＬＤＬ、未変性ＬＤＬ（ＬＤＬ）を用いた。白四角は未変性ＬＤＬ、黒三角はＡＧＥ-ＬＤＬ、白丸は部分酸化ＬＤＬ、黒丸は完全酸化ＬＤＬを示す。左：中部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４と抗ＬＤＬニワトリポリクロナール抗体によるサンドイッチ法によるＬＤＬ、修飾ＬＤＬの検出を示す。右：後部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４と抗ＬＤＬニワトリポリクロナール抗体によるサンドイッチ法によるＬＤＬ、修飾ＬＤＬの検出を示す。中部、後部由来どちらも完全酸化ＬＤＬをよく認識し、その他のＬＤＬリガンド類についても中部、後部由来ともに同様の認識能を有する。

　（実施例３：ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる酸化ＬＤＬの検量線作成とヒト血清中の酸化ＬＤＬ量の算出）
　（材料および方法）
　カイコ中部絹糸腺由来ＣＴＬＤ１４からＢｉｏＥａｓｅタグを除去するため、エンテロキナーゼで処理後、ＴＡＬＯＮレジンでＨｉｓＴａｇにより精製し、切断されたＢｉｏＥａｓｅタグと残留エンテロキナーゼを除去した。ＢｉｏＥａｓｅタグを除去したＣＴＬＤ１４（７μｇ／ｍｌ）をマイクロプレートウェルに５０μｌずつ分注し、４℃で一晩コートした。ＣＴＬＤ１４溶液を捨て、ウェルを２００μｌのＰＢＳで３回洗浄した後２５０μｌのブロッキングバッファー（０．２５％ＢＳＡ／ＰＢＳ）を添加し２５℃で２時間ブロッキングした後、ウェルを２００μｌのＰＢＳで３回洗浄した。次に検量線を書くためのスタンダードとして０～２５０ｎｇ／ｍｌの完全酸化ＬＤＬ（ｆ－ＯｘＬＤＬ）を含む０．００７５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液を調製し、スタンダード用ウェルに１００μｌずつ添加した。同じプレートの測定試料用ウェルに、対象の血清または血漿をＰＢＳで１０００倍希釈したものを１００μｌずつ添加した。２５℃で２時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、抗ＬＤＬニワトリポリクロナール抗体（ブロッキングバッファーで１：６０００に希釈したもの）を１ウェルにつき１００μｌ添加した。２５℃で１時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、抗ニワトリＩｇＹ－ＨＲＰコンジュゲート（ブロッキングバッファーで１：６０００に希釈したもの）を１ウェルにつき１００μｌ添加した。２５℃で１時間インキュベートした後ウェルを２００μｌのＰＢＳで５回洗浄し、ＨＲＰの基質としてＴＭＢ溶液を１ウェルにつき５０μｌ添加し発色を確認した。１Ｎ　ＨＣｌを１ウェルにつき５０μｌ添加して反応を停止し、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。

　（結果）
　結果を図３に示す。中部絹糸腺（ＭＳＧ）由来ＣＴＬＤ１４とニワトリ抗ポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡに準じた手法で、試料中の酸化ＬＤＬを定量可能である。実際のヒト血清を対象に測定を行った場合、ＬＤＬが正常値より高い、ＨＤＬが正常値より低い，ＴＧが正常値より高いなどの異常値を示す検体（血清）を対象にした測定においても、それらの因子の影響を受けることなく検体中の酸化ＬＤＬ量の測定が可能なことが確認された。ただし、本手法は、ＣＴＬＤ１４の固相化に１晩、その後の測定に８時間程度の時間を要する。

　（実施例４：ラテラルフロー（イムノクロマト）アッセイ）
　（材料および方法）
　（金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４の調製）
　シリコンコートされたチューブに白金コロイド（ワインレッドケミカル，ＯＤ＝１２）を移し、等量の１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）を加えて超音波分散させた。５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５溶液で透析したＣＴＬＤ１４（３０μｇ／ｍｌ）をコロイド溶液の等量加え直ちにボルテックスした後、室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液と等量のコンジュゲートバッファー（１％ＢＳＡ／５　ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５）をチューブに加え直ちにボルテックスした後、再び室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液を遠心（９２００×ｇ，２ｍｉｎ）して上清を除去し、コンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁した。室温で１５ｍｉｎ静置後再度遠心して上清を除去し、５％トレハロースを含むコンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁し、４℃で保存した。調製の概要を図４に示す。

　（イムノクロマトストリップの調製）
　吸収パッドとメンブレンのみからなるハーフストリップのメンブレン上に、コントロールスポットとしてストレプトアビジン、テストスポットとして一本鎖抗体、ニワトリ抗ＬＤＬポリクローナル抗体または抗ＡｐｏＢ抗体をそれぞれ０．５μｌスポットし、３７℃で１ｈ乾燥させた。ブロッキングする場合はスポットの乾燥後、室温で１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液に浸して１５ｍｉｎゆっくり振盪し、ＭｉｌｌｉＱ水で軽く２回洗った後、さらに５ｍｉｎゆっくり振盪して洗浄した。洗浄後軽く水気を取り、キムワイプをひいたペーパータオル上で一晩風乾させた。調製の概要を図４に示す。

　（イムノクロマトアッセイによる酸化ＬＤＬの検出）
５５μｌの０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液に酸化ＬＤＬ溶液を０～３μｇ添加し、白金コロイド修飾ＣＴＬＤ１４１０μｌと混合してマイクロプレートウェルに試料を移し、調製したイムノクロマトハーフストリップを挿入した。２０分から３０分経過後、テストスポット及びコントロールスポットの発色を確認した。一本鎖抗体（図７）、ニワトリポリクローナル抗体（図８）、および抗ＡｐｏＢモノクローナル抗体（図９）をテストスポットに使用した。

　（結果）
　実施例３において示されるように、ＥＬＩＳＡ様の手法で酸化ＬＤＬを検出（定量）することが可能であるが、測定が煩雑で時間がかかる。金属コロイド標識ビオチン化ＣＴＬＤ１４の活用により、疾病の危険因子である酸化的修飾を受けた広範な修飾ＬＤＬを迅速に検出の可能性があり、かつ、ＣＴＬＤ１４は、ビオチン化されているため、コントロールラインにストレプトアビジンを使用できるメリットがある。しかし、金属コロイドによる修飾過程は、弱アルカリ側のｐＨ（ｐＨ８．５～９．２）で行う必要があり、従来のＣＴＬＤ１４は活性を維持できず、有効な検出試薬の調製が困難であった。カイコ絹糸腺由来のビオチン化ＣＴＬＤ１４は、アルカリ側ｐＨで予想外の安定性を示し、金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４の調製が可能であった。ＭＳＧ由来ＣＴＬＤ１４が、アルカリ条件下で活性を失うことなく、金属コロイドによる修飾反応が可能であったことから、アルカリ側でのＣＴＬＤ１４の円偏光二色性（ＣＤ）スペクトル測定を行った。その結果、ＭＳＧ由来のＣＴＬＤ１４は、ｐＨ７，８，９のいずれでも、αへリックス構造を維持していることが確認された。ＭＳＧ由来のＣＴＬＤ１４は、弱アルカリ性緩衝液中でも予想に反して構造を維持しており、その結果、金属コロイドによる修飾が可能なことが確認された（図６）。

　図７に示されるように、白金コロイドを使用することにより、最も一般的な金コロイドより良好に酸化ＬＤＬの検出が可能なことが確認された。図７において、テストラインにＢｉｏＥａｓｅＴａｇ付きの一本鎖抗体を使用した。一本鎖抗体は、長期保管が困難（３週間程度の安定性）であるが、ＢｉｏＥａｓｅＴａｇ付きの一本鎖抗体は予想外に安定だった。

　抗ＬＤＬニワトリポリクローナル抗体をテストラインに使用した場合、白金コロイドでＣＴＬＤ１４を修飾した場合のみ、酸化ＬＤＬを検出可能であったが、パラジウムコロイドでは、白金コロイドと比べて明確なスポットは現れなかった（図８）。ヒト血清中の酸化ＬＤＬ検出に必要な感度は、２～３μｇ／ｍｌであるが、脂質異常などの場合、血清中の濃度が５０μｇ／ｍｌ以上と予想される。ラテラルフローアッセイに換算した場合、３０ｎｇ／アッセイ（９０μｌ溶液）の検出が可能なことから、実際のヒト検体を対象にした場合にも酸化ＬＤＬ濃度の以上の有無を検出可能であることが確認された。

　パラジウムコロイドを用いた場合、テストラインに抗ＡｐｏＢモノクローナル抗体を使用すると、酸化ＬＤＬを検出することができた（図９）。

　（実施例５：イムノクロマトアッセイによるＡＧＥの検出）
　（材料および方法）
　（金属コロイド標識ｓＲＡＧＥの調製）
　シリコンコートされたチューブに金コロイドまたはパラジウムコロイド（共にワインレッドケミカル，ＯＤ＝１２）を移し、１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５または９．２）を加えてｐＨ調製したのち超音波分散させた。５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５（またはｐＨ９．２）溶液で透析したｓＲＡＧＥ（６０～９０μｇ／ｍｌ）をコロイド溶液に加え直ちにボルテックスした後、室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液にコンジュゲートバッファー（０．２５～１．０％ＢＳＡまたは０．０５～１．０％ＰＶＡまたは０．０５～２．５％カゼインを含む５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５またはｐＨ９．２溶液）をチューブに加え直ちにボルテックスした後、再び室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液を遠心（金コロイドの場合８０００×ｇ，２ｍｉｎ、パラジウムコロイドの場合６０００×ｇ，２ｍｉｎ）して上清を除去し、コンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁した。室温で１５　ｍｉｎ静置後再度遠心して上清を除去し、５％トレハロースを含むコンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁し、４℃で保存した。ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）は重合度５００～２０００、けん化度は７８．５～９８．５の粉末から部分けん化型水溶液を調製して使用した。

　（イムノクロマトストリップの調製）
　吸収パッドとメンブレンのみからなるハーフストリップのメンブレン上に、コントロールスポットとしてストレプトアビジン、テストスポットとして抗ＢＳＡまたは抗ＯＶＡ抗体をそれぞれ０．５μｌスポットし、３７℃で３０ｍｉｎ～２ｈ乾燥させた。ブロッキングする場合はスポットの乾燥後、室温でブロッキングバッファー（０．２５－１．０％ＢＳＡまたは０．０５～１．０％／ＰＢＳ　ＰＶＡまたは０．０５～２．５％カゼインを含む５ｍＭ　ＴｒｉｓまたはＰＢＳ溶液）に浸して１５ｍｉｎゆっくり振盪し、ＭｉｌｌｉＱ水で軽く２回洗った後、さらに５ｍｉｎゆっくり振盪して洗浄した。洗浄後軽く水気を取り、キムワイプをひいたペーパータオル上で一晩風乾させた。調製したストリップの概要とＡＧＥｓ検出の概略図を図１０に示す。

　（イムノクロマトアッセイによるＡＧＥsの検出）
　調製したハーフストリップにより、ＡＧＥｓが検出可能であることを確認した。具体的には、６０μｌの反応バッファー（０．０５～２．５％カゼインを含むＰＢＳ）にＡＧＥ溶液（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ＡＧＥ－ＢＳＡ）を０．１μｇ添加し、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥと混合した。マイクロプレートウェルにすべてを混合した溶液を移し、調製したイムノクロマトハーフストリップ（コントロールスポットには、ストレプトアビジンを塗布、テストスポットには、濃度の異なる抗ＢＳＡ抗体を4スポット塗布）を挿入した。２０分から３０分経過後、テストスポット及びコントロールスポットの発色を確認した。試料に全血を用いる場合、５～５００倍のバッファーで希釈した血液を５～５０μｌ使用した。全血を用いる場合の試料の調製は、図１１に示される。

　（結果）
　図１２に示されるように、パラジウム、または、金コロイド修飾sRAGEを用いた場合、コントロールラインの発色が確認され展開が正常に行われることが確認された。さらに、テストラインのスポットも確認され、刺激性ＡＧＥｓの検出が可能なことが示された。１μｇの刺激性ＡＧＥｓの検出が可能なことが明らかになり、健常者の血清中の刺激性ＡＧＥｓ濃度が５～１０μｇ／ｍｌであることから、本発明により、健常者と発症者の判別が可能であることが確認された。

　（実施例６：全血を対象とした酸化ＬＤＬの検出の可能性）
　（材料および方法）
　ヘパリンシートとＰＢＳの入ったマイクロチューブに全血、金属コロイド標識ＣＴＬＤ１４を添加し混合後、ミクロプレートのｗｅｌｌに移し、血球除去用フィルター（ＬＦ１，ＦＵＳＩＯＮ５，ＭＦ１，またはＶＦ２）を付けたフルストリップ（コントロールスポットにストレプトアビジンを塗布）を挿入し、縦方向に展開させた。

　（結果）
　図１１に結果を示す。展開後にコントロールスポットの発色が確認されたことから、全血中を対象にした場合でも作製したフルストリップにより試料の展開が可能なことが確認された。血球除去用フィルターとして、左からＬＦ１，ＦＵＳＩＯＮ５，ＭＦ１，またはＶＦ２を使用したが、いずれのフィルターでも血球の影響を受けずに展開可能であった。

　（実施例７：全血を対象にした刺激性ＡＧＥｓ検出の可能性）
　（材料および方法）
　ヘパリンシートとＰＢＳの入ったマイクロチューブに全血、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥを添加し混合後、ミクロプレートのｗｅｌｌに移し、血球除去用フィルター（ＬＦ１）を付けたフルストリップ（コントロールスポットにストレプトアビジンを塗布）を挿入し、縦方向に展開させた。

　（結果）
　図１３に結果を示す。Ｒ３，Ｒ１０，Ｒ１４は、検出剤として、パラジウムコロイド修飾ｓＲＡＧＥを、Ｒ５，Ｒ１１検出剤として金コロイド修飾ｓＲＡＧＥを使用した。ブロッキングバッファーには、Ｒ３，Ｒ５は０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳを、Ｒ１０，Ｒ１１は、０．５％カゼイン／ＰＢＳを、Ｒ１４は、０．５％ＰＶＡ／ＰＢＳを使用した。Ｒ３，５，１０，１１ではコントロールスポットが確認できたことから、０．５％ＢＳＡ、または、０．５％カゼインでブロッキングしたメンブレンを使用し、検出剤としてパラジウムコロイド修飾ｓＲＡＧＥ、または、金コロイド修飾ｓＲＡＧＥを検出剤として使用することにより、血球の影響を受けずに展開可能であり、全血中の刺激性ＡＧＥｓ検出の可能性があることが示唆された。ブロッキング剤としてＰＶＡを使用した場合は、Ｒ１４に示すようにコントロールスポットが得られず、展開が上手くいかなかった。

　（実施例８：金属ナノ粒子を用いたラテラルフロー検出法によるＡＧＥｓの検出）
　金属ナノ粒子標識ｓＲＡＧＥ調製法
　シリコンコートされたチューブに金コロイドまたはパラジウムコロイド（共に森永生科学研究所，ＯＤ＝１２）を移し、１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５または９．２）を加えてｐＨ調製したのち超音波分散させた。５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５（またはｐＨ９．２）溶液で透析したｓＲＡＧＥ（６０－９０μｇ／ｍｌ）をコロイド溶液に加え直ちにボルテックスした後、室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液にコンジュゲートバッファー（１．０％ＢＳＡまたは０．１－４．０％ＰＶＡまたは１－２．５％カゼインを含む５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５またはｐＨ９．２溶液）をチューブに加え直ちにボルテックスした後、再び室温で１５ｍｉｎ静置した。反応液を遠心（金コロイドの場合８０００×ｇ，２ｍｉｎ、パラジウムコロイドの場合６０００×ｇ，２ｍｉｎ）して上清を除去し、コンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁した。室温で１５ｍｉｎ静置後再度遠心して上清を除去し、５％トレハロースを含むコンジュゲートバッファーを加えて超音波で再懸濁し、４℃で保存した。

　ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）は重合度５００－２０００、けん化度は７８．５－９８．５の粉末から部分けん化型水溶液を調製して使用した。

　ラテラルフロー用テストストリップ調製法
　吸収パッド、メンブレン、サンプルパッド（血球分離パッド）からなるフルストリップ、または吸収パッドとメンブレンのみからなるハーフストリップの各々のメンブレン上の適切な箇所に、Ｃｔｌスポットとしてストレプトアビジン、ＴｅｓｔスポットとしてＡＧＥ（Ｇｌｕｃｏｓｅ－ＡＧＥ－ＢＳＡ等）を０．５μｌずつスポットし、３７℃で３０ｍｉｎ～２ｈ乾燥させた。ブロッキングする場合はスポットの乾燥後、室温でブロッキングバッファー（０．５－１．０％ＢＳＡまたは０．０５－２．０％／ＰＢＳ　ＰＶＡまたは０．１－１．０％カゼインを含む５ｍＭ　ＴｒｉｓまたはＰＢＳ溶液）に浸して１５ｍｉｎゆっくり振盪し、ＭｉｌｌｉＱ水で軽く２回洗った後、さらに５ｍｉｎゆっくり振盪して洗浄した。洗浄後軽く水気を取り、キムワイプをひいたペーパータオル上で一晩風乾させた。

　ラテラルフロー検出法によるＡＧＥｓの検出
　６０μｌの反応バッファー（０．５％ＢＳＡまたは０．０５－２．０％／ＰＢＳ　ＰＶＡまたは０．１－１％カゼインを含むＰＢＳまたは５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．５または５ｍＭ　Ｔｒｉｓ，ｐＨ９．２溶液）にＡＧＥ溶液（ＣＭＬ－ＡＧＥ－ＢＳＡ，Ｇｌｕｃｏｓｅ－ＡＧＥ－ＢＳＡ，Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－ＡＧＥ－ＢＳＡ，Ｇｌｙｃｏｌａｌｄｅｈｙｄｅ－ＡＧＥ－ＢＳＡ等）を０．２－４μｇ添加し、金属コロイド標識ｓＲＡＧＥと混合した。マイクロプレートウェルにすべてを混合した溶液を移し、調製したラテラルフロー用ハーフストリップを挿入した。２０分から３０分経過後、テストスポット及びコントロールスポットの発色を確認した。サンプルに全血を用いる場合、５００倍の反応バッファーで希釈した血液７５μｌにＡＧＥ溶液を添加し、コロイドコンジュゲートと混合した。マイクロプレートウェルに混合溶液を移し、サンプルパッド部分に血球分離パッドの付いたフルストリップを挿入した。５分から１０分経過しストリップが混合液を吸収し終わった頃、ウェルに反応バッファーを５０μｌ追加し、さらに３０分程経過した後、テストスポット及びコントロールスポットの発色を確認した。

　全血中のＡＧＥｓの検出
　テストスポットにフルクトース処理－ＢＳＡ（拮抗用ＡＧＥｓ）を塗布し、ヒト新鮮血に試料（Ｇｌｙｃｏｌａｌｄｅｈｙｄｅ処理ＢＳＡ）を添加して展開した。金属コロイド標識ビオチン化ｓＲＡＧＥのテストラインへの結合が全血中のＡＧＥｓにより阻害され、発色の減少が目視で確認された（図１４Ａ）。テストスポットにグルコース処理－ＢＳＡ（拮抗用ＡＧＥｓ）を塗布、ヒト新鮮血に試料（Ｇｌｙｃｏｌａｌｄｅｈｙｄｅ処理ＢＳＡ）を添加して展開した。金属コロイド標識ビオチン化ｓＲＡＧＥのテストラインへの結合が全血中のＡＧＥｓにより阻害され、濃度に依存した発色の減少が目視で確認された（図１４Ｂ）。テストスポットに拮抗用ＡＧＥｓを塗布した検出系の概要を図１５に示す。

　（注記）
　以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本開示は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本開示の具体的な好ましい実施形態の記載から、本開示の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本願は、２０１９年１１月８日に出願された日本国特許出願２０１９－２０３４４１号および２０１９年１２月１１日に出願された日本国特許出願２０１９－２２４０９８号の優先権の利益を主張し、その内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。

　本開示は、疾患の診断、又は予測診断を産業とする分野において有用である。

配列番号１：ＣＴＬＤ１４をコードする核酸配列
配列番号２：ＣＴＬＤ１４をコードするアミノ酸配列
配列番号３：ＲＡＧＥの核酸配列
配列番号４：ＲＡＧＥのアミノ核酸配列
配列番号５：本発明で使用されるｓＲＡＧＥの核酸配列
配列番号６：本発明で使用されるｓＲＡＧＥのアミノ核酸配列

Claims

　毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイス。
　前記メンブレンが、上流から下流にかけて、前記検出部、および前記コントロール部をこの順番で含む、請求項１に記載のキットまたはデバイス。
　前記試料接触部、前記検出部、および前記コントロール部が、相互に毛管現象で試料が浸透するように配置または連結されている、請求項１または２に記載のキットまたはデバイス。
前記生体マーカー分子はＬＤＬまたはＡＧＥｓである、請求項１～３のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬまたは刺激性ＡＧＥｓである、請求項１～４のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記結合分子はＣＴＬＤ１４またはｓＲＡＧＥである、請求項１～５のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント、あるいは、抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～６のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記生体マーカー分子はＬＤＬであり、前記生体マーカー分子の異常型は変性ＬＤＬであり、前記結合分子はＣＴＬＤ１４であり、前記検出用結合剤は抗ＬＤＬ抗体、抗変性ＬＤＬ抗体もしくは抗ＡｐｏＢ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントである、請求項１～８のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記生体マーカー分子はＡＧＥｓであり、前記生体マーカー分子の異常型は刺激性ＡＧＥｓであり、前記結合分子はｓＲＡＧＥであり、前記検出用結合剤は抗ＢＳＡ抗体もしくは抗ＯＶＡ抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記キットまたはデバイスは、前記生体マーカー分子の競合分子をさらに含み、該競合分子はＧ－ＢＳＡもしくはＧ－ＯＶＡである、請求項１～９のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記金属コロイドは、検出試薬として提供される、請求項１～１０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記金属コロイドは、前記メンブレン中で、試料混合物として提供される、請求項１～１０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記試料接触部が、血球分離部を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記血球分離部が、ＦＵＳＩＯＮ５、ＬＦ１、ＭＦ１、およびＶＦ２から選択される、請求項１３に記載のデバイスまたはキット。
前記金属コロイドは、金、銀、白金およびパラジウムからなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記金属コロイドが白金コロイドである、請求項１５に記載のデバイスまたはキット。
前記ＣＴＬＤ１４が、ビオチン化、Ｈｉｓタグ付加、Ｍｙｃタグ付加、Ｆｌａｇタグ付加、Ｅタグ付加、またはＳｔｒｅｐタグ付加なされており、それぞれの場合において、前記コントロール用結合剤は、ストレプトアビジン、抗Ｈｉｓ抗体、抗Ｍｙｃ抗体、抗Ｆｌａｇ抗体、抗Ｅタグ抗体、またはＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎである、請求項６に記載のデバイスまたはキット。
前記ＣＴＬＤ１４が、カイコ型糖鎖を有する、請求項６に記載のデバイスまたはキット。
前記ＣＴＬＤ１４がビオチン化されており、前記コントロール用結合剤が、ストレプトアビジンである、請求項６に記載のデバイスまたはキット。
前記試料が、血液試料である、請求項１～１９のいずれか一項に記載のデバイスまたはキット。
前記血液試料が、血清または全血である、請求項２０に記載のデバイスまたはキット。
生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、
　試料を提供する工程と、
　該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、
　請求項１～２０のいずれか一項に記載のデバイスまたはキットにおける前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、
　接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程と
を含む、方法。
　金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、
組成物。
　金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子またはその競合分子に特異的に結合する検出用結合剤を含む検出部と
　該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含む、
組成物。
　毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含む、生体マーカー分子の異常型を該生体マーカー分子とのコンジュゲート形成により検出または定量するためのデバイスまたはキットであって、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該キットまたはデバイスは、試料接触部および金属コロイドをメンブレンの一部としてまたは別要素として含む、キットまたはデバイス。
　金属コロイドを含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含み、
　該金属コロイドは、該結合分子を標識することにより使用される、
組成物。
　金属コロイドで標識された結合分子を含む、生体マーカー分子の異常型を検出または定量するためのデバイス、システムまたはキットにおいて使用するための組成物であって、該結合分子は、生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有し、
　該デバイス、システムまたはキットは、毛管現象による試料の展開を行うメンブレンを含み、該メンブレンが、
　生体マーカー分子の競合分子を含む検出部と
　該結合分子に特異的に結合するコントロール用結合剤を含むコントロール部と
を含む、
組成物。
　生体マーカー分子の異常型を検出または定量するための方法であって、
　試料を提供する工程と、
　該試料と金属コロイドで標識された結合分子とを混合する工程であって、該結合分子は生体マーカー分子の異常型またはその競合分子とコンジュゲート形成能を有する、工程と、
　請求項２５に記載のデバイスまたはキットにおける前記試料接触部と、該混合された試料とを接触させる工程と、
　接触後、必要に応じて緩衝液を添加する工程と
を含む、方法。