WO2021025140A1 - 二重特異性タンパク質 - Google Patents

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lymphoma
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史朗 柴山
智也 手塚
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小野薬品工業株式会社
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    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present disclosure discloses a bispecific protein capable of specifically binding to PD-1 and CD4 (hereinafter, may be abbreviated as "PD-1 / CD4 bispecific protein") and a medicament thereof. Regarding therapeutic applications.
  • PD-1 is an immunosuppressive receptor belonging to the immunoglobulin family, and is a molecule having a function of suppressing the immune activation signal of T cells activated by stimulation from an antigen receptor.
  • PD-1 signals are obtained from autoimmune dilated cardiomyopathy, lupus-like syndrome, autoimmune encephalomyelitis, systemic lupus erythematosus, graft-versus-host disease, type I diabetes and It is known to play an important role in suppressing autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis. Therefore, it has been pointed out that substances that enhance PD-1 signal can be prophylactic or therapeutic agents for autoimmune diseases.
  • T cells express the CD3 antigen on their surface.
  • the expression pattern differs depending on the subtype. For example, in addition to CD3, killer T cells express CD8, helper T cells express CD4, and regulatory T cells express CD4, CD25, FoxP3, CD127, and the like.
  • bispecific antibodies that recognize PD-1 have been known as substances that enhance PD-1 signals (Patent Documents 1 to 3). These bispecific antibodies are genetically engineered links between the antigen recognition site of an antibody that recognizes CD3, which is a member of the T cell receptor complex, and the antigen recognition site of an antibody that recognizes PD-1. It has the effect of enhancing the inhibitory signal of PD-1 to the T cell receptor complex by increasing the frequency with which PD-1 is located near the T cell receptor complex. Furthermore, these patent documents also describe that PD-1 bispecific antibodies can be used for the prevention or treatment of autoimmune diseases.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention has not been reported at all so far.
  • An object of the present invention is to provide a new drug for prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence or treatment of autoimmune diseases, blood cancers and the like.
  • the inventors of the present invention focused on PD-1 / CD4 bispecific protein as a substance capable of solving such a problem, and completed the present invention.
  • a bispecific protein having a first arm that specifically binds to PD-1 and a second arm that specifically binds to CD4 in the present specification, “specifically to PD-1 and CD4, respectively". It is synonymous with “bispecific protein that can bind”, and this is also abbreviated as “PD-1 / CD4 bispecific protein”).
  • a first arm that specifically binds to PD-1 hereinafter, may be abbreviated as “first arm” and a second arm that specifically binds to CD4 (hereinafter, “second arm”).
  • a bispecific antibody having a bispecific antibody (hereinafter, may be abbreviated as “PD-1 / CD4 bispecific antibody”) or an antibody fragment thereof (hereinafter, these may be abbreviated as “”.
  • PD-1 / CD4 bispecific antibody, etc. may be abbreviated.
  • VH Heavy chain variable region
  • anti-PD-1 antibody light of an antibody
  • VL of anti-PD-1 antibody, VH of anti-PD-1 antibody, VH of anti-CD4 antibody and VL of anti-CD4 antibody were linked in this order via a peptide linker or directly.
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to the preceding item [4] which has a structure.
  • VL of anti-CD4 antibody, VH of anti-PD-1 antibody, VL of anti-PD-1 antibody and VH of anti-CD4 antibody were linked in this order via a peptide linker or directly.
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to the preceding item [4] which has a structure.
  • the peptides are in the order of VL of anti-CD4 antibody, VH of anti-CD4 antibody, IgG constant region (hinge / CH3), VH of anti-PD-1 antibody and VL of anti-PD-1 antibody.
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to the preceding item [4] which has a structure linked via a linker or directly.
  • the peptide linker is Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 1; where "Gly” represents glycine and “Ser” represents serine, hereinafter "(Gly) x 4-Ser”. (Sometimes abbreviated as ".) Or Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 2; ) ⁇ 4-Ser) ⁇ 3 ”(However, when multiple peptide linkers are present, they may be the same or different, and at least one of them is the peptide linker.
  • PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to any one of the above items [5] to [10].
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to any one of the above items [2] to [4], which is in the form of mAb 2 .
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to the preceding item [15] wherein the binding of the IgG 1 antibody to the Fc receptor is lost or attenuated.
  • the Scaffold molecule is in the form of Adnectin, Affibody®, Anticalin®, Avimer, DARPin, LRRP, Affilin®, Affitin or Fynomer, and the modified peptide is a special cyclic peptide.
  • Addbody® or Mirabody® the bispecific protein according to the preceding paragraph [23].
  • PD-1 / CD4 according to any one of the above items [1] to [24], which transmits a suppressive signal of PD-1 (or is used for transmitting a suppressive signal of PD-1).
  • Bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof is described by the above items [1] to [24.
  • the first arm allows interaction with PD-1 and PD-L1, interaction with PD-1 and PD-L2, or both (hereinafter, "PD-1 and PD-L"). (March be abbreviated as "allowing interaction with”), PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 dual according to any one of the preceding paragraphs [1] to [25]. Specific antibody or antibody fragment thereof.
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD according to any one of the above items [1] to [26], wherein cytokine production or release during administration or within 24 hours after administration is sufficiently reduced.
  • -1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof are examples of the above items [1] to [26]
  • the first arm allowed interaction with PD-1 and PD-L1, and cytokine production or release during or within 24 hours after administration was sufficiently reduced.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to any one of [25].
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof [31] Specific binding to each of PD-1 expressed in cancer cells of blood cancer, which is a target cell, and CD4 expressed in lymphocytes (for example, helper T cells or regulatory T cells) which are effector cells.
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof according to any one of the preceding items [1] to [29].
  • PD-1 / CD4 according to any one of the above items [1] to [29], which specifically binds to PD-1 and CD4 expressed in cancer cells derived from T cells, which are target cells, respectively.
  • Bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof An isolated PD-1 / CD4 bispecific antibody having a first arm that specifically binds to PD-1 and a second arm that specifically binds to CD4.
  • the first arm contains the anti-PD-1 antibody VH and VL
  • the second arm contains the anti-CD4 antibody VH and VL.
  • B specifically binds to each of PD-1 and CD4 expressed on lymphocytes (eg, helper T cells or regulatory T cells, etc.), and (c) (i) PD-1 inhibitory signals.
  • a humanized or fully human isolated PD-1 / CD4 bispecific antibody having a first arm that specifically binds to PD-1 and a second arm that specifically binds to CD4.
  • the first arm contains the anti-human PD-1 antibody VH and VL
  • the second arm contains the anti-human CD4 antibody VH and VL.
  • (C) (i) transmit a suppressive signal for PD-1, (ii) the first arm allows interaction with PD-1 and PD-L1, and / or (iii) during or during administration. Cytokine production or release within the next 24 hours is sufficiently reduced, and is in the form of (d) (i) bispecific hybrid antibody and / or (ii) IgG 1 or IgG 4 antibody. antibody.
  • An isolated PD-1 / CD4 bispecific antibody having a first arm that specifically binds to PD-1 and a second arm that specifically binds to CD4.
  • the first arm contains the anti-PD-1 antibody VH and VL
  • the second arm contains the anti-CD4 antibody VH and VL.
  • B (i) Specific to PD-1 expressed in cancer cells of blood cancer, which is a target cell, and CD4, which is expressed in lymphocytes (for example, helper T cells or regulatory T cells) which are effector cells. Cytokines that bind specifically or (ii) specifically bind to each of PD-1 and CD4 expressed in T cell-derived cancer cells that are target cells, and (c) cytokines during or within 24 hours after administration. The antibody for which production or release is sufficiently reduced.
  • a humanized or fully human isolated PD-1 / CD4 bispecific antibody having a first arm that specifically binds to PD-1 and a second arm that specifically binds to CD4.
  • the first arm contains the anti-human PD-1 antibody VH and VL
  • the second arm contains the anti-human CD4 antibody VH and VL.
  • B (i) Specific to PD-1 expressed in cancer cells of blood cancer, which is a target cell, and CD4, which is expressed in lymphocytes (for example, helper T cells or regulatory T cells) which are effector cells. Bind specifically, or (ii) specifically bind to each of PD-1 and CD4 expressed in T cell-derived cancer cells, which are target cells.
  • the active ingredient is PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof selected from any one of the above items [1] to [36].
  • Autoimmune diseases include Bechette's disease, systemic erythematosus, chronic discoid erythematosus, polyarteritis nodosa, systemic sclerosis, progressive systemic sclerosis, chondrosis, polyarteritis nodosa, and skin.
  • polyarteritis nodosa polyarteritis nodosa, microangiitis nodosa
  • aortitis syndrome hyperan arteritis
  • rheumatoid arthritis rheumatoid arthritis
  • juvenile idiopathic arteritis spondyloarthritis
  • mixed connective tissue Diseases Castleman's disease, Schegren's syndrome, adult Still's disease, vasculitis, allergic granulomatous vasculitis, hypersensitivity vasculitis, rheumatoid vasculitis, macroangiitis
  • ANCA-related vasculitis eg, polyarteritis nodosa) (Sickness and polyarteritis nodosa)
  • Cogan syndrome RS3PE syndrome
  • temporal arteritis polyarteritis nodosa
  • fibromyalgia antiphospholipid antibody syndrome
  • autoimmune myocardium Flames IgG
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific selected from any one of the above items [1] to [30], [33] and [34].
  • GVHD transplant-to-host disease
  • Insulin preparations eg, human insulin, insulin glargine, insulin lispro, insulin detemil, insulin aspart, etc.
  • sulfonylureas eg, Glibenclamide, Gliclazide, Glimepiride, etc.
  • haste insulin secretagogues eg, Glypiride
  • An agent for preventing, suppressing the progression of symptoms, suppressing recurrence, and / or treating type I diabetes which comprises a sex antibody or an antibody fragment thereof as an active ingredient.
  • Steroid drugs eg, cortisone, cortisone acetate, hydrocortisone, sodium hydrocortisone phosphate, sodium hydrocortisone succinate, fludrocortisone acetate, prednisolone, prednisolone acetate, sodium prednisolone succinate, butyl acetate Prednisolone, sodium prednisolone phosphate, halopredon acetate, methylprednisolone, methylprednisolone acetate, sodium methylprednisolone succinate, triamsinolone, triamsinolone acetate, triamsinolone acetonide, dexamethasone, dexamethasone, dexamethasone, dexa
  • Agents Administered with any one or more agents selected from steroids (eg, the steroids described in [2-5] above), immunosuppressants (eg, Cilospolin, Tacrolimus, Fingolimod, etc.) and Belimumab.
  • steroids eg, the steroids described in [2-5] above
  • immunosuppressants eg, Cilospolin, Tacrolimus, Fingolimod, etc.
  • Belimumab PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific selected from any one of the above items [1] to [30], [33] and [34].
  • An agent for preventing, suppressing progression of symptoms, suppressing recurrence and / or treating systemic lupus erythematosus which comprises a sex antibody or an antibody fragment thereof as an active ingredient.
  • Steroids eg, steroids according to [2-5] above
  • anti-rheumatic drugs eg, Methotrexate, Sulfasalazine, Bucillamine, Leflunomide, Mizoribine, Tacrolimus, etc.
  • anti-cytocytosis drugs eg, Infliximab, etc.
  • one or more agents selected from Abatacept which are administered together with any one of the above items [1] to [30], [33] and [34].
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD selected from any one of the above items [1] to [29], [31], [32], [35] and [36].
  • the blood cancer is one or more cancers selected from multiple myeloma, malignant lymphoma, leukemia, central nervous system primary malignant lymphoma and myeloproliferative syndrome. ..
  • Non-hodgkin lymphoma is B-cell non-hodgkin lymphoma
  • B-cell non-hodgkin lymphoma is precursor B-cell lymphoblastic lymphoma, precursor B-cell acute lymphocytic leukemia, chronic B-lymphocytic leukemia.
  • Pre-B-cell lymphocytic leukemia lymphoplasmacytic lymphoma, nodal marginal B-cell lymphoma, extranodal marginal B-cell lymphoma, primary splenic marginal B-cell lymphoma, hairy cell leukemia , Hairy cell leukemia variant type, follicular lymphoma, pediatric follicular lymphoma, diffuse large B cell lymphoma, diffuse large B cell lymphoma / non-specific type, splenic diffuse red splenic spinal cord small B Cellular lymphoma, lymphoid cell lymphoma, primary mediasular large cell B-cell lymphoma, primary exudative lymphoma, Berkit lymphoma, mantle cell lymphoma, monoclonal B-cell lymphocytosis, splenic B-cell lymphoma / Leukemia / unclassifiable type, monoclonal gamma globulinemia of unknown significance / Ig
  • Non-hodgkin lymphoma is T / NK cell non-hodgkin lymphoma, and T / NK cell non-hodgkin lymphoma is precursor T cell lymphoblastic lymphoma, chronic T lymphocytic leukemia, T cell acute lymphoma.
  • T cell lymphoblastic leukemia T cell type large granule lymphocytic leukemia, large granule NK cell leukemia, rapidly progressive NK cell leukemia, peripheral T cell lymphoma, peripheral T cell lymphoma / unspecified Type, unclassifiable peripheral T-cell lymphoma, vascular immunoblastic T-cell lymphoma, undifferentiated large cell (CD30 positive) lymphoma, vasocentral lymphoma, intestinal T-cell lymphoma, enteropathy-type T-cell lymphoma, hepatospleen Type ⁇ - ⁇ T cell lymphoma, subcutaneous adipose tissueitis-like T cell lymphoma, mycobacterial sarcoma, Cesarie syndrome, Hodgkin-like / Hodgkin-related undifferentiated large cell lymphoma, extranodal NK / T cell lymphoma, adult T cell lymphoma, Pre-T cell lympho
  • Hodgkin lymphoma Malignant lymphoma is Hodgkin lymphoma, and Hodgkin lymphoma is classical Hodgkin lymphoma (eg, nodular sclerosing, mixed cell, lymphocyte-rich and hypocytopenic) or nodular lymphocyte-dominant Hodgkin.
  • the blood cancer is leukemia, and the leukemia is acute myelogenous leukemia, acute premyelogenous leukemia, acute lymphoblastic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, myelodysplastic syndrome or chronic myelogenous leukemia.
  • [3-9] The agent according to any one of the preceding items [3-1] to [3-8], wherein the blood cancer is a childhood blood cancer.
  • [3-10] The description in any one of the preceding paragraphs [3-1] to [3-9], wherein the blood cancer is a blood cancer for which the therapeutic effect of another anticancer drug is insufficient or insufficient.
  • Agent. [3-11] The agent according to any one of the preceding items [3-1] to [3-10], wherein the blood cancer is a blood cancer exacerbated after treatment with another anticancer drug.
  • [3-12] The agent according to any one of the above items [3-1] to [3-9], wherein the blood cancer patient has not been treated with another anticancer drug.
  • the other anticancer agents include alkylating agents, platinum preparations, antimetabolites (eg, antimetabolites, pyridine metabolism inhibitors, purine metabolism inhibitors), ribonucleotide reductase inhibitors, nucleotides.
  • One or more drugs selected from analogs, topoisomerase inhibitors, microtube polymerization inhibitors, microtube depolymerization inhibitors, antitumor antibiotics, cytokine preparations, molecular targeted drugs and cancer immunotherapeutic agents [3] -10], [3-11] or [3-14].
  • [3-17] The agent according to the preceding paragraph [3-14] or [3-15], which is administered after administration of any one or more of the other anticancer agents.
  • [3-18] The agent according to the preceding item [3-14] or [3-15], which is administered before administration of any one or more of the other anticancer agents.
  • [3-19] The agent according to any one of the preceding items [3-1] to [3-18], which is administered together with a steroid drug.
  • [3-20] The agent according to any one of the preceding items [3-1] to [3-18], which is administered after administration of a steroid drug.
  • [4-1] PD-1 / CD4 bispecific protein or PD selected from any one of the above items [1] to [29], [31], [32], [35] and [36].
  • a blood cancer cell growth inhibitor containing a 1 / CD4 bispecific antibody or an antibody fragment thereof as an active ingredient.
  • PD-1 / CD4 bispecific protein or PD-1 / CD4 bispecific selected from any one of the above items [1] to [30], [33] and [34].
  • GVHD transplant-to-host disease
  • a method for preventing, suppressing symptom progression, suppressing recurrence and / or treating blood cancer which comprises administering an effective amount of 1 / CD4 bispecific antibody or antibody fragment thereof to a patient.
  • GVHD transplant-to-host disease
  • GVHD transplant-to-host disease
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention can be used for prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence or treatment of autoimmune diseases and blood cancers.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention has reduced induction of cytokine production or release during administration, and thus suppresses the expression of infusion reaction or cytokine release syndrome after administration. Can be expected.
  • PD-1 / CD4 bispecific antibody described in Example 1 (hereinafter, may be abbreviated as “PD-1 / CD4 scDb”) is shown.
  • VH CD4" and VL CD4 represent VH and VL of the anti-CD4 antibody, respectively
  • VH PD-1 and VL PD-1 represent VH and VL of the anti-PD-1 antibody, respectively.
  • L1", “L2” and “L3” represent peptide linkers that link each VH and VL, L1 and L3 are (Gly) ⁇ 4-Ser, and L2 is ((Gly) ⁇ 4-Ser) ⁇ It has a structure represented by 3.
  • PD-1 / CD4 bispecific antibody described in Example 2 (hereinafter, may be abbreviated as “PD-1 / CD4 scDb-Fc”) is shown.
  • IgG 1 (Hinge-CH 3) represents a human IgG 1 constant region having a hinge portion to a CH 3 region.
  • L4 represents a peptide having a structure represented by (Gly) ⁇ 4-Ser or ((Gly) ⁇ 4-Ser) ⁇ 3.
  • Other symbols have the same meanings as those shown in FIG.
  • Flow cytometry showing the specific binding of PD-1 / CD4 scDb to mouse PD-1 is shown.
  • Clone-1 and Clone-A to -H represent PD-1 / CD4 scDb prepared in Example 1, respectively.
  • Flow cytometry showing the specific binding of PD-1 / CD4 scDb-Fc to mouse PD-1 is shown.
  • Clone-2 and Clone-I to -P each represent PD-1 / CD4 scDb-Fc prepared in Example 2.
  • Flow cytometry showing the specific binding of PD-1 / CD4 scDb to mouse CD4 is shown.
  • Flow cytometry showing the specific binding of PD-1 / CD4 scDb-Fc to mouse CD4 is shown.
  • PD-1 (P rogrammed Cell D eath -1) , in one embodiment, a membrane protein having the amino acid sequence shown in GenBank accession number NP_005009.
  • PD-1 is preferably human PD-1.
  • CD4 in one embodiment, has the amino acid sequence indicated by Genbank registration number NP_000607. When referred to herein as "CD4", unless otherwise specified, all isoforms thereof and their modifications of the "second arm specifically binding to CD4" epitope according to the invention are conserved. It may be used as including the body. In the present invention, CD4 is preferably human CD4.
  • isolated is defined as substantially a single pure substance by being identified, separated and / or purified from impurities containing multiple or innumerable components extracted from a host cell. It means that it becomes an ingredient.
  • bispecific protein means a protein having binding specificity for two different antigen molecules or epitopes in one molecule, but any form thereof as long as it has the binding specificity. It may be, for example, a bispecific antibody and an antibody fragment thereof, a Scaffold molecule (Current Opinion in Biotechnology (2006), Vol. 17, No. 6, p.653-658, Current Opinion in Biotechnology (2007)). , Vol. 18, p.1-10, Current Opinion in Structural Biology (1997), Vol. 7, p.463-469 or Protein Science (2006), Vol. 15, p.14-27) and modified types. Peptides (for example, special cyclic peptides (J. Synth. Org.
  • Scaffold molecules include, for example, Adnectin (see WO2001 / 64942), Affibody® (see WO95 / 19374 and WO2000 / 63243), Anticalin® (see WO99 / 16873), Avimer (see Nature Biotechnology (2005), Vol. 23, p. 1556-1561), DARPin (see Nature Biotechnology (2004), Vol. 22, p. 575-582), LRRP (see Nature (2004), Vol. 430) , No.
  • Adnectin see WO2001 / 64942
  • Affibody® see WO95 / 19374 and WO2000 / 63243
  • Anticalin® see WO99 / 16873
  • Avimer see Nature Biotechnology (2005), Vol. 23, p. 1556-1561
  • DARPin see Nature Biotechnology (2004), Vol. 22, p. 575-582
  • LRRP see Nature (2004), Vol. 430
  • the term "monoclonal antibody” means an antibody obtained from a substantially homogeneous population of antibodies that binds to the same specific antigen.
  • bispecific antibody means an antibody having binding specificity to two different antigen molecules or epitopes in one molecule, and the term “bispecific monoclonal antibody” further means substantially. Means a bispecific antibody obtained from an antibody population that is uniformly homogeneous.
  • Bispecific antibody forms include, for example, diabody, bispecific sc (Fv) 2 , bispecific minibody, bispecific F (ab') 2 , bispecific hybrid antibody, Covalently coupled diabody (bispecific DART), bispecificity (FvCys) 2 , bispecificity F (ab'-zipper) 2 , bispecificity (Fv-zipper) 2 , bispecificity There are three-chain antibody and bispecific mAb 2 .
  • a diabody is a dimer of a single-stranded peptide in which VHs and VLs that recognize different antigens are linked with a peptide linker (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993), Vol. 90, No. .14: See p.6444-6448).
  • Bispecific sc (Fv) 2 is a small molecule modified so that two sets of VH / VL of two antibodies that recognize different antigens are produced in a continuous single-chain form via a peptide linker. It is a chemical antibody (see J. Biological Chemistry (1994), Vol. 269: p. 199-206).
  • Bispecific F (ab') 2 is a low molecular weight antibody in which Fab'fragments of an antibody that recognizes two different antigens are covalently bonded by a disulfide bond or the like.
  • the bispecific minibody is a low molecular weight antibody fragment in which a small molecule antibody fragment modified so that the constant region CH3 domain of an antibody is linked to scFv that recognizes different antigens is covalently bonded by a disulfide bond or the like on the CH3 domain. It is a molecularized antibody (see Biochemistry (1992), Vo.31, No.6, p.1579-1584).
  • a bispecific hybrid antibody is an intact antibody in which a heavy chain / light chain complex of an antibody that recognizes two different antigens is covalently bound by a disulfide bond or the like.
  • the preferred form of the bispecific antibody is preferably a form in which the movable region between the two variable regions is wide, and is, for example, a bispecific hybrid antibody.
  • the bispecific hybrid antibody can be produced, for example, from a hybridoma prepared by the hybrid hybridoma method (see US4474893).
  • the bispecific hybrid antibody can be produced by co-expressing and secreting a total of four types of cDNA encoding the heavy chain and the light chain of an antibody that recognizes different antigens in mammalian cells.
  • the monoclonal antibody used in the present invention is a hybridoma method (for example, Kohler and Milstein et al., Natur (1975), Vol. 256, p.495-97, Hongo et al., Hybridoma (1995), Vol. 14, No. 3 , P.253-260, Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988), Vol.
  • an antibody or monoclonal antibody When administered to a human, it can be prepared in the form of a chimeric antibody, a humanized antibody, or a fully human antibody in order to reduce or eliminate its antigenicity.
  • the "chimeric antibody” means an antibody in which the variable region sequence and the constant region sequence are derived from different mammals.
  • the variable region sequence is derived from a mouse antibody and the constant region sequence is derived from a human antibody. ..
  • the chimeric antibody is a gene encoding an antibody variable region isolated by a known method from an antibody-producing hybridoma isolated by the above-mentioned hybridoma method, recombinant DNA method or phage display method, using a known method.
  • Human-derived antibody constant regions can be linked to a gene encoding (see, for example, US4816567 of Cabilly et al.).
  • Humanized antibody means an antibody in which a complementarity determining region (CDR) sequence derived from a germ cell type of another mammal such as a mouse is transplanted onto a human framework sequence.
  • CDR complementarity determining region
  • a gene encoding an antibody CDR region isolated by a known method from an antibody-producing hybridoma isolated by the above method can be obtained from a human-derived antibody framework region using a known method.
  • Can be made by linking to a gene encoding see, eg, US5225539 and US5530101 in Winter, US5585089 and US6180370 in Queen et al.).
  • Human antibody or “fully human antibody” means an antibody derived from a human germ cell type immunoglobulin sequence in both the variable region consisting of the framework region and the CDR region and the constant region.
  • the human antibodies used in the present invention are mice transformed to produce human antibodies, such as Humab mice (eg, US5545806, US5569825, US5625126, US5633425, US5789650, US5877397, US5661016, US5814318 by Lonberg and Kay et al.
  • mice see, eg, WO2002 / 43478 of Ishida et al.
  • Xeno mice see, eg, US5939598, US6075181, US6114598, US6150584 and US6162963
  • Tc mice eg, Tomizuka et al., Proc. Natl. It can be produced by the method using Acad. Sci. USA (2000), p.722-727. It can also be prepared using SCID mice in which human immune cells have been reconstituted (see, eg, US5476996 and US5698767 by Wilson et al.) So that immunization causes a human antibody response.
  • the human antibody used in the present invention can also be produced by the phage display method described above.
  • an "antibody fragment" of a PD-1 / CD4 bispecific antibody is an antibody that is part of a full-length antibody and has an antigen-binding portion to PD-1 and an antigen-binding portion to CD4.
  • the antigen-binding portion means the minimum unit that an antibody can bind to the antigen, and for example, the target antigen can be recognized by the combination of three CDRs each in VH and VL and those CDRs. It consists of a framework area where the CDR is placed.
  • isotype is used to refer to an antibody class (eg, IgM or IgG) encoded by a heavy chain constant region gene.
  • the preferred isotype of the bispecific antibody of the invention is IgG, more preferably IgG 1 or IgG 4 .
  • IgG 1 is one in which the binding to the Fc receptor (specifically, the Fc ⁇ receptor) is abolished or attenuated, or ADCC and / or CDC action is abolished or attenuated.
  • an IgG 1 antibody in which the binding to the Fc receptor is lost or attenuated can be obtained.
  • an antibody lacking the C-terminal amino acid, for example, ricin at position 447 according to the EU numbering system is preferable.
  • the Fc region of the bispecific antibody of the present invention may be substituted with any amino acid in that region so that two different heavy chains can easily associate with each other.
  • leucine at position 351 is replaced with lysine and threonine at position 366 is replaced with lysine by the EU numbering system in the constant region on the heavy chain with the VH of the first arm that specifically binds to PD-1.
  • PD-1 / CD4 double in which leucine at position 351 and leucine at position 368 in the constant region in the heavy chain with VH of the second arm that specifically binds to CD4 was replaced with glutamic acid.
  • Specific antibodies can be mentioned.
  • leucine at position 351 was replaced with aspartic acid and leucine at position 368 was replaced with glutamic acid by the EU numbering system in the constant region in the heavy chain having VH of the first arm that specifically binds to PD-1.
  • PD-1 / CD4 double in which leucine at position 351 and threonine at position 366 in the constant region in the heavy chain with VH of the second arm that specifically binds to CD4 was replaced with lysine.
  • Specific antibodies can also be mentioned.
  • the bispecific antibody of the present invention is IgG 4
  • a variant in which any amino acid in the heavy chain constant region is substituted, deleted or inserted is more preferable so as to suppress swapping in the antibody molecule.
  • an antibody in which serine at position 228 by the EU numbering system is replaced with proline, which is located in the hinge region is preferable.
  • the amino acid position assigned to the CDR of the variable region of an antibody and the framework can be defined according to Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md., 1987). ) And (1991)).
  • the amino acids in the constant region are represented according to the EU numbering system according to the amino acid position of Kabat (see Sequences of proteins of immunological interest, NIH Publication No. 91-3242).
  • peptide linker refers to two sets of VHs and VLs constituting the bispecific antibody of the present invention or an antibody fragment thereof, and to link them with an IgG 1 constant region (hinge / CH3). It is not particularly limited as long as it does not inhibit the functional expression and formation of a heavy specific antibody or an antibody fragment thereof, but is not limited to, for example, Ser, (Gly) n -Ser, Ser- (Gly) n , ((Gly) 4 -Ser) n , (Ser- (Gly) 4 ) n [n represents an integer from 1 to 6, and other symbols have the same meaning as above.
  • bispecific antibody of the present invention or an antibody fragment thereof has a plurality of peptide linkers, each of them may have the same amino acid sequence or may be different, and at least one of them may have the same amino acid sequence. It may be a peptide linker consisting of an amino acid sequence.
  • first arm specifically bound to PD-1 is referred to as the present invention. It is a protein that specifically binds to PD-1, regardless of whether it is a part of the bispecific protein according to the invention or exists as a single substance, and the bispecific protein is bispecific. In the case of a sex antibody, the first arm is at least PD-1 specific, whether or not it is contained as part of the antibody or antibody fragment, or is not part of it and exists as a single entity.
  • VH and VL of an antibody that binds specifically (hereinafter, may be abbreviated as anti-PD-1 antibody), and means an antibody portion that can specifically bind to PD-1.
  • anti-PD-1 antibody the Fv part of the antibody consisting of VH and VL constituting the antigen binding site of the anti-PD-1 antibody, and the Fab'part and Fab part of the antibody containing the VH and VL are also included in this. included.
  • “specifically binding to PD-1” means at least an affinity higher than 1x10 -5 M, preferably 1x10 -7 M, more preferably 1x10 -9 M (dissociation constant (Kd value)).
  • the "antibody” in the "antibody that specifically binds to PD-1" or “anti-PD-1 antibody” is a full-length antibody, that is, from two heavy chains linked by a disulfide bond and two light chains. Means a full-length antibody, preferably a monoclonal antibody thereof.
  • the "first arm that specifically binds to PD-1" in the present invention is, as one embodiment, an interaction with PD-1 and PD-L1, an interaction with PD-1 and PD-L2, or Allow both of these interactions.
  • "allowing interaction with PD-1 and PD-L1, interaction with PD-1 and PD-L2, or both of them” means PD-1 / CD4 according to the present invention. Even in the situation where the heavy-specific antibody is present in an excess of 20 times the concentration of soluble PD-L1 or PD-L2, the PD-1 / CD4 bispecific antibody according to the present invention has an interaction between them.
  • the first arm allows these interactions is determined by known methods, such as binding of the soluble PD-1 protein to immobilized PD-L1 protein or PD-L1-expressing cells. For example, via core analysis, ELISA assay, flow cytometry, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), fluorescence energy transfer measurement method (FRET), and fluorescence trace measurement technology (FMAT (registered trademark)) are used to measure the effects of It can be judged by doing. Also, the definition of "allowing interactions with PD-1 and PD-L1, interactions with PD-1 and PD-L2, or both of them" does not substantially inhibit those interactions. Sometimes used synonymously with meaning.
  • the "first arm that specifically binds to PD-1" in the present invention interacts with PD-1 and PD-L1, interacts with PD-1 and PD-L2, or. It may include those that inhibit these two interactions.
  • first arm that specifically binds to PD-1 for example, a combination of VH and VL of a known anti-PD-1 antibody can be mentioned, and such a known anti-PD-1 antibody.
  • a known anti-PD-1 antibody examples include Nivolumab, Cemiplimab, Pembrolizumab, Spartanizumab, Tislelizumab, Dostarlimab, Tripalimab, Camrelizumab, Genolimzumab, Sintilimab, Lodapolimab, Retifanlimab, Balstilimab, Serplulimab, Balstilimab, Serplulimab, Balstilimab, Serplulimab, Balstilimab, Serplulimab, ), STI-A1110, ENUM 388D4, ENUM 244C8, GLS010, CS1003, BAT-1306, AK103, BI 754091, LZM009, CMAB819, Sym021, SSI
  • second arm specifically binding to CD4 (hereinafter, may be abbreviated as "second arm”) relates to the present invention.
  • the second arm is at least an antibody that specifically binds to CD4, whether or not it is contained as part of an antibody or antibody fragment, or is not part of it and exists as a single entity.
  • anti-CD4 antibody May be abbreviated as anti-CD4 antibody), which means an antibody moiety capable of specifically binding to CD4, including VH and VL.
  • such a second arm also includes an Fv portion of an antibody consisting of VH and VL that constitutes an antigen-binding site of an anti-CD4 antibody, and a Fab'part and a Fab portion of an antibody containing the VH and VL.
  • “specifically binds to CD4" has at least an affinity (dissociation constant (Kd value)) higher than 1x10 -5 M, preferably 1x10 -7 M, and more preferably 1x10 -9 M. It can bind directly to CD4 with its binding activity and is used as a feature that does not substantially bind to other proteins.
  • the "antibody” in the “antibody that specifically binds to CD4" or "anti-CD4 antibody” is a full-length antibody, that is, a full-length antibody consisting of two heavy chains linked by a disulfide bond and two light chains. It means an antibody, preferably a monoclonal antibody thereof.
  • second arms that specifically bind to CD4 include, for example, a combination of VH and VL of known anti-CD4 antibodies, and such anti-CD4 antibodies include, for example, MTRX. -1011A, TRX-1, Ibalizumab, BT-061, huB-F5, Zanolimumab, 4162W94, Clenoliximab, Keliximab, AD-519, PRO-542, Cedelizumab and IT1208.
  • the preferred isotype of the PD-1 / CD4 bispecific antibody of the present invention is an IgG antibody, and more preferably an IgG 1 or IgG 4 antibody.
  • the antibody when the antibody is an IgG 1 antibody, it may take a form in which a mutation that substantially eliminates the binding to the Fc receptor is introduced, for example. Included are IgG 1 antibodies in which leucine at position 234 was replaced with alanine and / or leucine at position 235 was replaced with alanine by the EU numbering system, respectively, on two heavy chain constant regions or hinge regions. Alternatively, it may be an IgG 1 antibody in which leucine at position 235 is replaced with glycine and / or glycine at position 236 is replaced with arginine according to the EU numbering system on each of the two heavy chain constant regions or hinge regions. Further, antibodies lacking the amino acid at the C-terminal of the heavy chain of these bispecific antibodies, for example, lysine at position 447 according to the EU numbering system, are more preferable.
  • PD-1 / CD4 bispecific antibodies are IgG 1 antibodies
  • a preferred embodiment is the EU in the constant region in a heavy chain with a first arm VH that specifically binds to PD-1.
  • leucine at position 351 is replaced with lysine
  • threonine at position 366 is replaced with lysine
  • Examples thereof include IgG 1 antibody in which aspartic acid is substituted and leucine at position 368 is substituted with glutamic acid.
  • leucine at position 351 was replaced with aspartic acid and leucine at position 368 was replaced with glutamic acid by the EU numbering system in the constant region in the heavy chain having VH of the first arm that specifically binds to PD-1.
  • a IgG 1 antibody in which leucine at position 351 and threonine at position 366 in the constant region in the heavy chain with VH of the second arm that specifically binds to CD4 is replaced with lysine is also preferred. ..
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody is an IgG 4 antibody is located in the hinge region, antibody was substituted with proline 228 serine by the EU numbering system are preferred.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention (preferably PD-1 / CD4 bispecific antibody or the like) has a feature of transmitting a PD-1 inhibitory signal in one embodiment.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the invention (preferably PD-1 / CD4 bispecific antibody, etc.), in one embodiment, interacts with PD-1 and PD-L1, PD- It has the characteristic of allowing interaction with 1 and PD-L2 or both.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention (preferably PD-1 / CD4 bispecific antibody, etc.) had a sufficiently reduced cytokine production or release during or within 24 hours after administration. It has characteristics.
  • the cytokine production or release during or within 24 hours after administration was sufficiently reduced means that, for example, the PD-1 / CD4 bispecific antibody according to the present invention was intravenously administered by infusion or the like.
  • the concentration of cytokines including IL-2, IFN- ⁇ and / or TNF- ⁇ in blood or tissue does not increase, or even if it increases, steroid administration It means that it can be suppressed.
  • the PD-1 / CD4 bispecific proteins of the invention are, in one embodiment, lymphocytes (preferably T cell lymphocytes (eg, helpers). It may specifically bind to PD-1 and CD4 expressed on T cells or regulatory T cells, etc.), and at that time, it may bind to PD-1 and CD4 at the same time or the same lymphocyte. It may bind to PD-1 and CD4 expressed on lymphocytes.
  • lymphocytes preferably T cell lymphocytes (eg, helpers). It may specifically bind to PD-1 and CD4 expressed on T cells or regulatory T cells, etc.), and at that time, it may bind to PD-1 and CD4 at the same time or the same lymphocyte. It may bind to PD-1 and CD4 expressed on lymphocytes.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention (preferably PD-1 / CD4 bispecific antibody or the like) is expressed on a cancer cell of a blood cancer which is a target cell in one embodiment.
  • PD-1 and CD4 expressed on lymphocytes that are effector cells may specifically bind to each other. At that time, it may bind to PD-1 and CD4 at the same time.
  • the "target cell” means a cell that undergoes a cytotoxic effect of lymphocytes that are effector cells
  • the "effector cell” means a cell that exerts a cytotoxic effect on the target cell.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention expresses PD-1 and T cell-derived cancer cells. It may bind specifically to each of CD4, and at that time, it may bind to PD-1 and CD4 at the same time.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein is preferably a PD-1 / CD4 bispecific antibody and an antibody fragment thereof, and the PD-1 / CD4 bispecific antibody is preferable.
  • PD-1 / CD4 bispecific monoclonal antibody more preferably isolated PD-1 / CD4 bispecific monoclonal antibody, still more preferably isolated human PD-1 / human CD4 bi It is a specific monoclonal antibody.
  • isolated human PD-1 / human CD4 bispecific monoclonal antibody means an isolated bispecific monoclonal antibody against human PD-1 and human CD4.
  • the PD-1 / CD4 bispecific antibody of the present invention and an antibody fragment thereof are described in WO2014 / 051433, WO2013 / 157953 or WO2013 / 157954. But it can be manufactured.
  • a polynucleotide encoding a heavy chain having a VH of an anti-PD-1 antibody (2) a polynucleotide encoding a heavy chain having a VH of an anti-CD4 antibody, and (3) a VL of an anti-PD-1 antibody.
  • An expression vector in which a polynucleotide encoding a light chain having a light chain and (4) a polynucleotide encoding a light chain having a VL of an anti-CD4 antibody was inserted was gene-introduced into mammalian cells and transformed into both. It can be produced by expressing and secreting both heavy and light chains.
  • the host cell expressing the bispecific antibody of the present invention may be any host cell capable of introducing an expression vector into a gene and expressing the introduced expression vector.
  • insect cells such as SF-9 and SF-21 cells, more preferably mouse cells including CHO cells, BHK cells, SP2 / 0 cells and NS-0 myeloma cells, primates such as COS and Vero cells.
  • Examples include mammalian cells such as similar cells, MDCK cells, BRL3A cells, hybridomas, tumor cells, immortalized primary cells, embryonic retinal cells such as W138, HepG2, HeLa, HEK293, HT1080 or PER.C6.
  • an expression vector of mammalian cells and a host may be used so that the antibody is appropriately glycosylated.
  • Human cell lines, preferably PER.C6, are advantageously used to obtain antibodies that match the glycosylation pattern in humans.
  • Protein production in host cells transformed by gene transfer of expression vectors is described, for example, in Current Protocols in Protein Science (1995), Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, Wingfield PT, ISBN 0-471-11184. -8, Bendig, 1988 can be referred to, and general guidelines, procedures and practical methods for maximizing host cell culture productivity can be found in Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach. It can be carried out with reference to (M. Butler, ed., IRL Press, 1991). Expression of antibodies in host cells is described, for example, in published publications such as EP0120694, EP0314161, EP0481790, EP0523949, US4816567 and WO2000 / 63403.
  • the culture conditions of the host cell can be optimized by a known method, and the amount of protein produced can be optimized.
  • the culture is carried out, for example, in a dish, a roller bottle or a reaction tank by batch culture, fed-batch culture, continuous culture, culture with hollow fibers, or the like.
  • Antibodies expressed in host cells and recovered from the cells or cell culture medium by a known method are purified using a known method. Purification methods include immunoprecipitation, centrifugation, filtration, size exclusion chromatography, affinity chromatography, cation and / or anion exchange chromatography, hydrophobic interaction chromatography and the like. In addition, protein A or protein G affinity chromatography is preferably used (see, eg, US4801687 and US5151504).
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention is useful for the prevention, suppression of symptom progression and / or treatment of autoimmune diseases, graft-versus-host diseases (GVHD), blood cancers and the like.
  • GVHD graft-versus-host diseases
  • the autoimmune diseases include, for example, Bechet's disease, systemic erythematosus, chronic discoid erythematosus, polyarteritis nodosa, systemic sclerosis, progressive systemic sclerosis, sclerosis, polyarteritis nodosa.
  • Polyarteritis nodosa gestational herpes, linear IgA vesicular dermatosis, acquired epidermal vesicular disease, alopecia alopecia, white spots, white spots vulgaris, Harada disease, autoimmune optic neuropathy, idiopathic aspernia, habitual abortion, Inflammatory bowel disease (eg, ulcerative colitis, Crohn's disease), Celiac disease, atopic dermatitis, optic neuromyelitis, chronic inflammatory demyelinating polyneuritis, polyarteritis nodosa, alveolar proteinosis, autoimmune disease Immune hemorrhagic disease XIII, recurrent polyarteritis nodosa, sarcoidosis, tonic spondylitis, severe asthma, chronic urticaria, transplant immunity, familial Mediterranean fever, eosinophilic sinusitis, dilated cardiomyopathy, food allergy, Examples include systemic obesity cell disease, myotrophic
  • PD-1 / CD4 bispecific proteins used in the treatment of autoimmune diseases are at least partially lymphocytes (preferably T cell lymphocytes). It specifically binds to PD-1 and CD4 expressed on lymphocytes (for example, helper T cells and regulatory T cells), and exerts a therapeutic effect by transmitting a PD-1 inhibitory signal.
  • lymphocytes for example, helper T cells and regulatory T cells
  • the feature that allows interaction with PD-1 and PD-L1 contributes to the prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence and / or enhancement or persistence of therapeutic effect.
  • the blood cancer includes, for example, multiple myeloma, malignant lymphoma (eg, non-hodgkin lymphoma (eg, B-cell non-hodgkin lymphoma (eg, prodromal B-cell lymphoblastic lymphoma, prodromal B-cell acute)).
  • malignant lymphoma eg, non-hodgkin lymphoma (eg, B-cell non-hodgkin lymphoma (eg, prodromal B-cell lymphoblastic lymphoma, prodromal B-cell acute)).
  • Lymphocytic leukemia chronic B lymphocytic leukemia (small lymphocytic lymphoma or prodromal leukemia), pre-B cell lymphocytic leukemia, lymphocytic lymphoma, nodal marginal B cell lymphoma, extranodal Marginal zone B-cell lymphoma (MALT lymphoma), primary splenic marginal zone B-cell lymphoma, hair cell leukemia, hair cell leukemia variant type, follicular lymphoma, pediatric follicular lymphoma, diffuse large cells Diffuse large B-cell lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma / non-specific type, diffuse red splenic spinal cord small B-cell lymphoma, lymphoplasmocyte lymphoma, primary mediasophageal B-cell lymphoma, primary Exudative lymphoma, Berkitt lymphoma, mantle cell lymphoma, monoclonal B-cell lymphocytosis,
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein used for blood cancer treatment and the like in the present invention includes at least a part of blood as a target cell. It is specific for PD-1 expressed on cancer cells and CD4 expressed on lymphocytes that are effector cells (preferably T cell lymphocytes (for example, helper T cells or regulatory T cells)). It exerts a therapeutic effect by binding to. In addition, at least a part of them may specifically bind to each of PD-1 and CD4 expressed in T cell-derived cancer cells and exert a therapeutic effect by transmitting a PD-1 inhibitory signal. ..
  • treatment means, for example, curing or ameliorating a certain disease or a symptom thereof
  • prevention means preventing or delaying the onset of a certain disease or a symptom for a certain period of time. That is, “suppression of symptom progression” means suppressing the progression or worsening of symptoms and stopping the progression of the pathological condition. The meaning of “prevention” also includes suppression of recurrence. By “suppressing recurrence” is meant preventing or reducing the likelihood of recurrence of a disease or symptom.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention is usually administered systemically or locally in a parenteral form.
  • Specific examples of such an administration method include injection administration, nasal administration, and pulmonary administration.
  • Examples of the injection administration include intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection and the like, and in the case of intravenous injection, administration by infusion is preferable.
  • the dose varies depending on age, body weight, symptoms, therapeutic effect, administration method, treatment time, etc., but is usually in the range of 0.1 ⁇ g / kg to 300 mg / kg per adult, particularly preferably. , 0.1 mg / kg to 10 mg / kg, parenteral administration once to several times daily, or continuous intravenous administration in the range of 30 minutes to 24 hours daily.
  • a dose smaller than the above dose may be sufficient, or administration beyond the range may be necessary.
  • the injection or infusion solution may be an aqueous solution, a suspension or an emulsion. It may be in the form of, or it may be formulated as a solid agent with a pharmaceutically acceptable carrier so that it can be dissolved, suspended or emulsified by adding a solvent at the time of use. Good.
  • Solvents used in infusions for injections or infusions include, for example, distilled water for injection, saline, glucose solutions and isotonic solutions (eg, sodium chloride, potassium chloride, glycerin, mannitol, sorbitol, boric acid, etc. A solution of sodium chloride, propylene glycol, etc.) can be used.
  • examples of the pharmaceutically acceptable carrier include stabilizers, solubilizers, suspending agents, emulsifiers, soothing agents, buffers, preservatives, preservatives, pH adjusters and antioxidants.
  • Stabilizers include, for example, various amino acids, albumin, globulin, gelatin, mannitol, glucose, dextran, ethylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol, ascorbic acid, sodium bisulfite, sodium thiosulfate, sodium edetate, sodium citrate or Dibutylhydroxytoluene and the like can be used.
  • Dissolution aids include, for example, alcohols (eg, ethanol, etc.), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), nonionic surfactants (eg, polysorbate 20®, polysorbate 80®). ) And HCO-50, etc.) can be used.
  • the suspending agent for example, glycerin monostearate, aluminum monostearate, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, sodium lauryl sulfate and the like can be used.
  • emulsifier for example, gum arabic, sodium alginate, tragant and the like can be used.
  • the soothing agent for example, benzyl alcohol, chlorobutanol, sorbitol and the like can be used.
  • a buffer for example, a phosphate buffer solution, an acetate buffer solution, a borate buffer solution, a carbonic acid buffer solution, a citrate buffer solution, a Tris buffer solution, a glutamate buffer solution, an epsilon aminocaproic acid buffer solution, or the like can be used.
  • Examples of the preservative include methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, butyl paraoxybenzoate, chlorobutanol, benzyl alcohol, benzalkonium chloride, sodium dehydroacetate, sodium edetate, boric acid or borax. Sand or the like can be used.
  • As the preservative for example, benzalkonium chloride, paraoxybenzoic acid, chlorobutanol and the like can be used.
  • As the pH adjuster for example, hydrochloric acid, sodium hydroxide, phosphoric acid, acetic acid and the like can be used.
  • antioxidants for example, (1) water-soluble antioxidants such as (1) ascorbic acid, cysteine hydrochloride, sodium bisulfite, sodium metabisulfite and sodium bisulfite, (2) ascorbic palmitate, butylated hydroxyanisol, etc.
  • oil-soluble antioxidants such as butylated hydroxytoluene, lecithin, propyl gallate and ⁇ -tocopherol and (3) metal chelating agents such as citric acid, ethylenediamine tetraacetic acid, sorbitol, tartaric acid and phosphoric acid. Can be done.
  • the infusion solution for injection or infusion can be produced by sterilization in the final step or by aseptic technique, for example, filtering with a filter or the like to sterilize, and then filling in a sterile container.
  • Infusions for injections or infusions are vacuum-dried and lyophilized sterile powders (which may contain pharmaceutically acceptable carrier powders) dissolved in a suitable solvent before use. You can also do it.
  • the PD-1 / CD4 bispecific proteins of the invention are used in the prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence and / or treatment of autoimmune disease or graft-versus-host disease (GVHD) or blood cancer. It may be used in combination with a drug.
  • the administration form when used in combination with other drugs may be a combination drug in which both components are mixed in one preparation, or may be administered as separate preparations. There may be.
  • the bispecific antibody of the present invention and another drug are administered separately, they may be co-administered for a certain period of time, and then only the bispecific antibody or only the other drug may be administered.
  • the bispecific antibody of the present invention may be administered first and another drug may be administered after the end of the administration, or the other drug may be administered first and the bispecific of the present invention may be administered after the end of the administration.
  • the sex antibody may be administered later, and each administration method may be the same or different. It can also be provided as a kit of a preparation containing the bispecific antibody of the present invention and a preparation containing another drug.
  • the dose of the other drug can be appropriately selected based on the clinically used dose.
  • other drugs may be administered in combination of any two or more at an appropriate ratio.
  • the other drugs include not only those found so far but also those found in the future.
  • insulin preparations eg, human insulin, insulin glalgin, insulin lispro, insulin detemil, insulin
  • Asparts etc.
  • sulfonylureas eg, Glibenclamide, Gliclazide, Glimepiride, etc.
  • haste insulin secretagogues eg, Nateglinide, etc.
  • biguanide preparations eg, Metformin, etc.
  • insulin resistance improvers eg, Pioglitazone, etc.
  • ⁇ -Glucosidase inhibitors eg, Acarbose and Voglibose
  • diabetic neuropathy treatments eg, Epalrestat, Mexiletine and Imidapril, etc.
  • GLP-1 analogs eg, Liraglutide, Exenatide and Lixisenatide
  • steroid drugs eg, cortisone, cortisone acetate, hydrocortisone, hydrocortisone phosphorus
  • steroid drugs eg, cortisone, cortisone acetate, hydrocortisone, hydrocortisone phosphorus
  • Sodium acid ester sodium hydrocortisone succinate
  • fludrocortisone acetate prednisolone, prednisolone acetate, sodium prednisolone succinate, prednisolone butylacetate, sodium prednisolone phosphate, halopredone acetate, methylprednisolone, methylprednisolone, Methylpredonizolone succinate sodium, triamsinolone, triamsinolone acetate, triamsinolone acetonide, dexamethasone, dexamethasone acetate, dexamethasone valerate, dexamethasone, de
  • a steroid drug for example, the steroid drug described above
  • an immunosuppressant for example, Ciclospolin, Tacrolimus and Fingolimod, etc.
  • a steroid drug for example, the steroid drug described above
  • an anti-rheumatic drug for example, Methotrexate
  • Sulfasalazine for example, Bucillamine, Leflunomide, Mizoribine and Tacrolimus, etc.
  • anti-cytocytomous drugs eg, Infliximab, Adalimumab, Tocilizumab, Etanercept, Abatacept, Golimumab, Certolizumab, etc.
  • the bispecific protein of the present invention When applied to the prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence and / or treatment of other autoimmune diseases, the bispecific protein of the present invention is used in combination with any one or more of the other agents described above. You may.
  • the bispecific protein of the present invention when applied to the prevention, suppression of symptom progression, suppression of recurrence and / or treatment of blood cancer, for example, alkylating agents (for example, dacarbazine, Nimustine, Temozolomide, Fotomustine, Vincristine) , Cyclophosphamide, Ifosfamide, Carmustine, Chlorambucil and Procarbazine, etc.), platinum preparations (eg, Cisplatin, Carboplatin, Nedaplatin and Oxaliplatin, etc.), antimetabolites (eg, folic acid antimetabolites (eg, Pemetrexed, Leucovorin and Methotrexate, etc.), pyridine Antimetabolites (eg TS-1®, 5-fluorouracil, UFT, Carmofur, Doxifluridine, FdUrd, Cytarabine and Capecitabine), purine antimetabolites (eg Fludarabine, Cladribine and
  • examples of the molecular target drug include ALK inhibitors (eg, Crizotinib, Ceritinib, Ensartinib, Alectinib, Lorlatinib, etc.), BCR-ABL inhibitors (eg, Imatinib, Dasatinib, etc.), and Axl inhibitors (eg, ONO).
  • ALK inhibitors eg, Crizotinib, Ceritinib, Ensartinib, Alectinib, Lorlatinib, etc.
  • BCR-ABL inhibitors eg, Imatinib, Dasatinib, etc.
  • Axl inhibitors eg, ONO.
  • CDK inhibitors eg, Dinaciclib, Abemaciclib, Palbociclib and Trilaciclib, etc.
  • Btk inhibitors eg, Ibrutinib and Acalabrutinib, etc.
  • PI3K- ⁇ / ⁇ inhibitors eg, Umbralisib, Parsaclisib and IPI
  • JAK-1 / 2 inhibitors eg Itacitinib and Luxolitinib etc.
  • FAK inhibitors eg Defactinib etc.
  • Syk / FLT3 dual inhibitors eg Mivavotinib etc.
  • ATR inhibitors eg Mivavotinib etc.
  • Ceralasertib etc. Ceralasertib etc.
  • Wee1 kinase inhibitors eg Adavosertib etc.
  • mTOR inhibitors eg Temsirolimus, Everolimus, Vistusert
  • cancer immunotherapeutic agents include anti-PD-1 antibodies (eg, Nivolumab, Cemiplimab, Pembrolizumab, Spartanalizumab, Tislelizumab, Dostarlimab, toripalimab, Camrelizumab, Genolimzumab, Sintilimab, Lodapolimab, Retifanlimab, Balstilimab, Stilimab, Balstilimab, Prolgolimab, Sasanlimab, Cetrelimab, Zimberelimab, Penpulimab, AMP-514, STI-A1110, ENUM 388D4, ENUM 244C8, GLS010, CS1003, BAT-1306, AK103, BI 754091, LZM009, CMAB819, Sym021, SSI-361 , HX008 and CX-188, etc.), anti-PD-L1 antibodies (eg Atezolizumab, Ave,
  • examples of other antibody drugs include anti-IL-1 ⁇ antibody (for example, Canakinumab etc.) and anti-CCR2 antibody (for example, Plozalizumab etc.).
  • Example 1 Preparation of PD-1 / CD4 bispecific protein (PD-1 / CD4 scDb)
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein PD-1 / CD4 scDb in this example is an anti-mouse CD4 antibody. It is a single-chain Diabody (hereinafter abbreviated as "scDb") composed of VH and VL of the above and VH and VL of the anti-mouse PD-1 antibody.
  • FIG. 1 shows an outline of the structure.
  • DNA prepared by linking the variable regions of each antibody and the DNA encoding the peptide linker in a predetermined order was inserted into an expression vector, and this was expressed in animal cells (Free Style 293F cells). ..
  • the scDb produced in the culture supernatant was recovered and then purified by Ni-NTA affinity chromatography and size exclusion chromatography.
  • the cDNA encoding each variable region (VH and VL) of the anti-mouse CD4 antibody and the anti-mouse PD-1 antibody constituting scDb of this example were obtained according to a method according to a known gene cloning method. ..
  • J43 was used as an anti-mouse PD-1 antibody
  • YTA3.1.2, YTS191 or GK1.5 was used as an anti-mouse CD4 antibody.
  • Example 2 Preparation of PD-1 ⁇ CD4 bispecific protein (PD-1 / CD4 scDb-Fc)
  • PD-1 / CD4 scDb-Fc in this example is anti-mouse CD4 antibody VH and VL.
  • a polypeptide in which a human IgG 1 constant region (IgG 1 constant region (hinge / CH3)) from the hinge site to the CH3 region is fused to a bispecific scDb composed of VH and VL of a mouse PD-1 antibody.
  • polypeptide A a polypeptide consisting of only an IgG 1 constant region (hinge / CH3)
  • polypeptide B a polypeptide consisting of only an IgG 1 constant region
  • the heterodimer has a mutation that abolishes Fc ⁇ receptor binding.
  • FIG. 2 shows an outline of the structure.
  • the DNA encoding polypeptide A is a DNA encoding each VH and VL of the anti-mouse CD4 antibody and the anti-mouse PD-1 antibody obtained in Example 1 in preparing PD-1 / CD4 scDb. It was prepared by ligating with DNA encoding a peptide linker in a predetermined order.
  • An expression vector into which each DNA sequence encoding polypeptides A and B was inserted was gene-introduced into Free Style 293F cells for expression and produced in the culture supernatant.
  • the culture supernatant was collected and then purified by Protein A affinity chromatography and size exclusion chromatography.
  • Example 3 Evaluation of binding of PD-1 / CD4 bispecific protein Mouse PD-1 / CD4 bispecific protein by flow cytometry using mouse PD-1 expressing CHO-S cells The binding to 1 was evaluated. A 6 ⁇ His tag is added to the C-terminus of PD-1 / CD4 scDb, and Alexa Fluor 488-labeled anti-His tag antibody (MBL, model number D291-A48) is used to detect each recombinant protein bound to the cell. It was used. The results are shown in FIG.
  • PD-1 / CD4 scDb-Fc contains a human IgG 1 constant region, so PE-labeled anti-human IgG-Fc antibody (Thermo Fisher Scientific, model number H10104) was used to detect binding to mouse PD-1. used. The results are shown in FIG.
  • Example 4 In vivo action in an experimental allergic encephalomyelitis mouse model (EAE model) of PD-1 / CD4 bispecific protein
  • EAE model experimental allergic encephalomyelitis mouse model
  • PD-1 / CD4 dual The in vivo action of the specific protein was evaluated.
  • Dead tuberculosis H37Ra (BD Biosciences, model number 231141) and incomplete Freund's adjuvant (BD Biosciences, model number 263910) were mixed to prepare a complete Freund's adjuvant (CFA) containing 4 mg / mL killed tuberculosis H37Ra.
  • CFA complete Freund's adjuvant
  • An emulsion was prepared by mixing 1 mg / mL MOG peptide (ANASPEC, model number AS-60130) and an equal amount of CFA, and used as an inducer for the EAE model. 200 ⁇ L of the inducer was subcutaneously administered to the ridge of the C57BL / 6 mouse, and 200 ⁇ L of 1 ⁇ g / mL pertussis toxin (SIGMA-ALDRICH, model number P7208) was administered to the tail vein on the day and the second day of the immunotreatment. It was administered internally. Next, the C57BL / 6 mice were intraperitoneally administered with Clone-1 or Clone-2 once a day for 5 days from 6 to 10 days after immunization.
  • MOG peptide ANASPEC, model number AS-60130
  • CFA pertussis toxin
  • neurological symptoms were evaluated according to Onuki et al. (Onuki M, et al., Microsc Res Tech 2001; 52: 731-9.). Score the degree of neurological symptoms (normal: score 0; tail relaxation: score 1; partial hindlimb paralysis: score 2; hindlimb paralysis: score 3; forelimb paralysis: 4 and dying or death: score 5), with multiple neurological symptoms If it was observed, a high value was adopted as the neurological symptom score on the evaluation day. Cumulative neurological symptom scores for the observation period from the day of immunization to 30 days after immunization were tabulated. The evaluation result is shown in FIG.
  • Clone-1 and Clone-2 suppressed neurological symptoms in the EAE model.
  • Example 5 Effect of PD-1 / CD4 bispecific protein on blood cytokine concentration in in vivo mice
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention was administered to mice, and the plasma cytokine concentration was in vivo. The change in was evaluated.
  • C57BL / 6 mice were given 0.5 mg / kg of Clone-1 and 1.0 mg / kg of Clone-2, Clone-J, Clone-L and Clone-O as PD-1 / CD4 bispecific proteins, respectively. It was administered.
  • PD-1 / CD3 bispecific scDb (J43 ⁇ 2C11_scDb) disclosed in Patent Document 1 was intraperitoneally administered at a dose of 0.5 mg / kg.
  • IFN- ⁇ Interferon- ⁇
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor- ⁇
  • IL-2 interleukin-2
  • J43 ⁇ 2C11_scDb increased the plasma IFN- ⁇ , TNF- ⁇ , and IL-2 concentrations in mice.
  • none of the PD-1 / CD4 bispecific proteins of the present invention increased plasma IFN- ⁇ , TNF- ⁇ , and IL-2 concentrations.
  • the target molecule was CD4, the induction of cytokine production or release during administration was improved.
  • Example 6 Inhibitory effect of PD-1 / CD4 bispecific protein on B cell lymphoma cell line Using healthy human peripheral blood-derived pan-T cells (STEMCELL, model number ST-70024) (human T cells) , B cell lymphoma The cell growth inhibitory effect on cell lines is evaluated. Human T cells and B cell lymphoma cell line EB-1 or human PD-1 forced expression SU-DHL-4 labeled with Vybrant DiD Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher, model number V22887) were seeded on a U-bottom 96-well plate. , PD-1 / CD4 bispecific protein is added and co-cultured for 48 hours.
  • DiD-positive viable cells are harvested from each well, stained with Cell Viability Solution, and the number of DiD-positive live cells is counted on a flow cytometer.
  • the decrease rate of DiD-positive viable cells in the PD-1 / CD4 bispecific protein-free sample is calculated as 100%, and the decrease rate of DiD-positive viable cells in the protein-added sample is calculated as the cell growth inhibition rate.
  • Example 7 Cell growth inhibitory effect of PD-1 / CD4 bispecific protein on multiple myeloma cell line Using healthy human peripheral blood-derived pan-T cells (STEMCELL, model number ST-70024) (human T cells) To evaluate the cell growth inhibitory effect on multiple myeloma cell lines. Human T cells and the multiple myeloma cell line RPMI8226 labeled with Vybrant DiD Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher, model number V22887) were seeded on a U-bottom 96-well plate, and PD-1 / CD4 bispecific recombinant protein was seeded. Is added and co-cultured for 48 hours.
  • Human T cells and the multiple myeloma cell line RPMI8226 labeled with Vybrant DiD Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher, model number V22887) were seeded on a U-bottom 96-well plate, and PD-1 / CD4 bispecific recombinant
  • the decrease rate of DiD-positive viable cells in the PD-1 / CD4 bispecific protein-free sample is calculated as 100%, and the decrease rate of DiD-positive viable cells in the protein white-added sample is calculated as the cell growth inhibition rate.
  • Example 8 Inhibitory effect of PD-1 / CD4 bispecific protein on adult T-cell lymphoma cell line Pan-T cells derived from healthy human peripheral blood (STEMCELL, model number ST-70024) (human T cells) It will be used to evaluate the inhibitory effect on adult T-cell lymphoma cell lines.
  • Human T cells and adult T-cell lymphoma cell line ILT-Mat labeled with Vybrant DiD Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher, model number V22887) were seeded on a U-bottom 96-well plate and PD-1 / CD4 bispecific. Recombinant protein is added and co-cultured for 48 hours.
  • DiD-positive viable cells are harvested from each well, stained with Cell Viability Solution, and the number of DiD-positive live cells is counted on a flow cytometer.
  • the decrease rate of DiD-positive viable cells in the PD-1 / CD4 bispecific protein-free sample is calculated as 100%, and the decrease rate of DiD-positive viable cells in the protein-added sample is calculated as the cell growth inhibition rate.
  • Example 9 Inhibitory effect of PD-1 / CD4 bispecific protein on acute T-cell leukemia cell line Pan-T cells derived from healthy human peripheral blood (STEMCELL, model number ST-70024) (human T cells) It will be used to evaluate the cell growth inhibitory effect on acute T-cell leukemia cell lines.
  • Human T cells and human PD-1 forced expression Jurkat (acute T cell leukemia cell line) labeled with Vybrant DiD Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher, model number V22887) were seeded on a U-bottom 96-well plate, and PD-1 was seeded. Add / CD4 bispecific protein and co-culture for 48 hours.
  • DiD-positive viable cells are harvested from each well, stained with Cell Viability Solution, and the number of DiD-positive live cells is counted on a flow cytometer.
  • the decrease rate of DiD-positive viable cells in the PD-1 / CD4 bispecific protein-free sample is calculated as 100%, and the decrease rate of DiD-positive viable cells in the protein-added sample is calculated as the cell growth inhibition rate.
  • the PD-1 / CD4 bispecific protein of the present invention is useful for prevention, symptom progression suppression, recurrence suppression and / or treatment of autoimmune diseases or graft-versus-host diseases (GVHD) or blood cancers.
  • GVHD graft-versus-host diseases

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Abstract

本発明の課題は、自己免疫疾患または血液がん等に対する予防、症状進展抑制、再発抑制または治療のための新たな薬剤を提供することにある。　本発明の発明者らは鋭意検討した結果、かかる課題を解決し得る物質として、PD-1/CD4二重特異性タンパク質に着目し、本発明を完成した。本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、投与時のサイトカインの産生または放出の誘導が低減されており、そのため、投与後のインフュージョン・リアクションあるいはサイトカイン放出症候群の発現が抑制されることが期待できる。

Description

二重特異性タンパク質
　本開示は、PD-1およびCD4に各々特異的に結合することができる二重特異性タンパク質（以下、「PD-1/CD4二重特異性タンパク質」と略記することがある。）ならびにその医薬治療用途に関する。
　PD-1は免疫グロブリンファミリーに属する免疫抑制受容体であり、抗原レセプターからの刺激により活性化したＴ細胞の免疫活性化シグナルを抑制する機能を持つ分子である。PD-1ノックアウトマウスの解析等から、PD-1シグナルは、自己免疫性拡張型心筋症、ループス様症候群、自己免疫性脳脊髄炎、全身性ループスエリテマトーデス、移植片対宿主病、Ｉ型糖尿病およびリウマチ性関節炎等の自己免疫疾患の抑制に重要な役割を果たすことが知られている。したがって、PD-1シグナルを増強する物質は自己免疫疾患の予防または治療剤となり得ることが指摘されている。
　Ｔ細胞のすべてのサブタイプは、その表面にCD3抗原を発現している。一方、それ以外の抗原については、サブタイプによって発現パターンは異なる。例えばCD3の他、キラーＴ細胞はCD8、ヘルパーＴ細胞はCD4、制御性Ｔ細胞はCD4、CD25、FoxP3、CD127などを各々発現している。
　これまでにPD-1シグナルを増強する物質として、PD-1を認識する二重特異性抗体が知られている（特許文献１ないし３）。これら二重特異性抗体は、Ｔ細胞受容体複合体のメンバーであるCD3を認識する抗体の抗原認識部位とPD-1を認識する抗体の抗原認識部位とを遺伝子工学的に連結されたものであり、PD-1をＴ細胞受容体複合体近傍に位置させる頻度を上げることによって、Ｔ細胞受容体複合体に対するPD-1の抑制シグナルを増強する作用をもつ。さらに、これら特許文献には、PD-1二重特異性抗体が自己免疫疾患の予防または治療に使用できることも記載されている。
　一方、本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、現在までに全く報告されていない。
国際公開第2003/011911号パンフレット 国際公開第2004/072286号パンフレット 国際公開第2013/022091号パンフレット
　本発明の目的は、自己免疫疾患や血液がん等に対する予防、症状進展抑制、再発抑制または治療のための新たな薬剤を提供することにある。
　本発明の発明者らは鋭意検討した結果、かかる課題を解決し得る物質としてPD-1/CD4二重特異性タンパク質に着目し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
［１］　PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する二重特異性タンパク質（本明細書において、「PD-1およびCD4に各々特異的に結合することができる二重特異性タンパク質」と同義であり、これについても、「PD-1/CD4二重特異性タンパク質」と略記することがある。）。
［２］　PD-1に特異的に結合する第一アーム（以下、「第一アーム」と略記することがある。）およびCD4に特異的に結合する第二アーム（以下、「第二アーム」と略記することがある。）を有する二重特異性抗体（以下、「PD-1/CD4二重特異性抗体」と略記することがある。）またはその抗体断片（以下、これらをあわせて「PD-1/CD4二重特異性抗体等」と略記することがある。）。
［３］　当該第一アームが、PD-1に特異的に結合する抗体（以下、「抗PD-1抗体」という。）の重鎖可変領域（以下、「VH」と略記する。）および軽鎖可変領域（以下、「VL」と略記する。）を含むことを特徴とする前項［２］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［４］　当該第二アームが、CD4に特異的に結合する抗体（以下、「抗CD4抗体」という。）のVHおよびVLを含むことを特徴とする前項［２］または［３］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［５］　N末端から、抗PD-1抗体のVL、抗CD4抗体のVH、抗CD4抗体のVLおよび抗PD-1抗体のVHの順番で、各々、ペプチドリンカーを介してもしくは直接連結された構造を有する、前項［４］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［６］　N末端から、抗PD-1抗体のVL、抗PD-1抗体のVH、抗CD4抗体のVHおよび抗CD4抗体のVLの順番で、各々、ペプチドリンカーを介してもしくは直接連結された構造を有する、前項［４］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［７］　N末端から、抗CD4抗体のVL、抗PD-1抗体のVH、抗PD-1抗体のVLおよび抗CD4抗体のVHの順番で、各々、ペプチドリンカーを介してもしくは直接連結された構造を有する、前項［４］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［８］　前項［５］記載の抗PD-1抗体のVH、前項［６］記載の抗CD4抗体のVLまたは前項［７］記載の抗CD4抗体のVHのC末端に、ヒンジ部位からCH3領域までのヒトIgG定常領域（以下、「IgG定常領域（ヒンジ/CH3）」と略記することがある。）を有するポリペプチドのN末端が、ペプチドリンカーを介してもしくは直接に、さらに連結された構造を有する、前項［５］～［７］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［９］　N末端から、抗CD4抗体のVL、抗CD4抗体のVH、IgG定常領域（ヒンジ/CH3）、抗PD-1抗体のVHおよび抗PD-1抗体のVLの順番で、各々、ペプチドリンカーを介してもしくは直接連結された構造を有する、前項［４］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１０］　さらに、IgG定常領域（ヒンジ/CH3）を有するポリペプチドを含む構造を有する、前項［８］または［９］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１１］　ペプチドリンカーが、Gly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号１；ここで、「Gly」はグリシンを表し、「Ser」はセリンを表し、以下、「(Gly)×4-Ser」と略記することがある。）またはGly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser（配列番号２；以下、「((Gly)×4-Ser)×3」と略記することがある。）である（但し、複数のペプチドリンカーが存在する場合、各々が同じでも異なっていてもよく、そのうちの少なくとも一つが当該ペプチドリンカーであってもよい。）、前項［５］～［１０］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１２］　ダイアボディ、二重特異性sc(Fv)2、二重特異性ミニボディ、二重特異性F(ab′)2、二重特異性ハイブリッド抗体、共有結合型ダイアボディ（二重特異性ＤＡＲＴ）、二重特異性(FvCys)2、二重特異性F(ab′-ジッパー)2、二重特異性(Fv-ジッパー)2、二重特異性三鎖抗体、または二重特異性mAb2の形態である、前項［２］～［４］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１３］　二重特異性ハイブリッド抗体の形態である、前項［２］～［４］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１４］　IgG抗体である、前項［２]～［４］および［１３］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１５］　IgG抗体が、IgG1抗体またはIgG4抗体である前項［１４］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１６］　当該IgG1抗体のFc受容体への結合が消失あるいは減弱した、前項［１５］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１７］　当該IgG1抗体のADCCおよび／またはCDC作用が消失あるいは減弱した、前項［１５］または［１６］記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１８］　IgG定常領域（ヒンジ/CH3）のアイソタイプが、IgG1である前項［８］～［１０］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［１９］　PD-1およびCD4が、各々ヒトPD-1およびヒトCD4である、前項［１］～［１８］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［２０］　モノクローナル抗体である、前項［２］～［１９］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２１］　ヒト化または完全ヒト型抗体である、前項［２］～［２０］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２２］　単離抗体である前項［２］～［２１］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
［２３］　当該二重特異性タンパク質が、Scaffold分子または修飾型ペプチドである、前項［１］記載の二重特異性タンパク質。
［２４］　当該Scaffold分子が、Adnectin、Affibody（登録商標）、Anticalin（登録商標）、Avimer、DARPin、LRRP、Affilin（登録商標）、AffitinまたはFynomerの形態であり、当該修飾型ペプチドが特殊環状ペプチド、Addbody（登録商標）またはMirabody（登録商標）の形態である、前項［２３］記載の二重特異性タンパク質。
［２５］　PD-1の抑制性シグナルを伝達する（またはPD-1の抑制性シグナルの伝達に使用される）、前項［１］～［２４］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［２６］　当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用またはそれら両相互作用を許容する（以下、「PD-1およびPD-Lとの相互作用を許容する」と略記することがある。）、前項［１］～［２５］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［２７］　投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減された、前項［１］～［２６］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［２８］　当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用を許容し、かつ、投与中もしくは投与後２４時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減された、前項［１］～［２５］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［２９］　サイトカインが、少なくともIL-2、IFN-γまたはTNF-αである、前項［２７］または［２８］記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［３０］　リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）上に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合する、前項［１］～［２９］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［３１］　標的細胞である血液がんのがん細胞に発現するPD-1およびエフェクター細胞であるリンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）に発現するCD4各々に特異的に結合する、前項［１］～［２９］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［３２］　標的細胞であるＴ細胞由来のがん細胞に発現するPD-1およびCD4に各々特異的に結合する、前項［１］～［２９］の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［３３］　PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する、単離PD-1/CD4二重特異性抗体であって、
（ａ）当該第一アームが抗PD-1抗体のVHおよびVLを含み、当該第二アームが抗CD4抗体のVHおよびVLを含み、
（ｂ）リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）上に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、ならびに
（ｃ）（i）PD-1の抑制性シグナルを伝達し、（ii）当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用もしくはそれら両相互作用を許容し、および／または（iii）投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減された、当該抗体。
［３４］　PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する、ヒト化または完全ヒト型単離PD-1/CD4二重特異性抗体であって、
（ａ）当該第一アームが抗ヒトPD-1抗体のVHおよびVLを含み、第二アームが抗ヒトCD4抗体のVHおよびVLを含み、
（ｂ）リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、
（ｃ）（i）PD-1の抑制性シグナルを伝達し、（ii）当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用を許容し、および／または（iii）投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減され、ならびに
（ｄ）（i）二重特異性ハイブリッド抗体の形態であり、および／または(ii)IgG1抗体またはIgG4抗体である、当該抗体。
［３５］　PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する、単離PD-1/CD4二重特異性抗体であって、
（ａ）当該第一アームが抗PD-1抗体のVHおよびVLを含み、当該第二アームが抗CD4抗体のVHおよびVLを含み、
（ｂ）（ｉ）標的細胞である血液がんのがん細胞に発現するPD-1およびエフェクター細胞であるリンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）に発現するCD4各々に特異的に結合し、もしくは（ｉｉ）標的細胞であるＴ細胞由来のがん細胞に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、ならびに
（ｃ）投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減された、当該抗体。
［３６］　PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する、ヒト化または完全ヒト型単離PD-1/CD4二重特異性抗体であって、
（ａ）当該第一アームが抗ヒトPD-1抗体のVHおよびVLを含み、当該第二アームが抗ヒトCD4抗体のVHおよびVLを含み、
（ｂ）（ｉ）標的細胞である血液がんのがん細胞に発現するPD-1およびエフェクター細胞であるリンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）に発現するCD4各々に特異的に結合し、もしくは（ｉｉ）標的細胞であるＴ細胞由来のがん細胞に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、
（ｃ）投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生もしくは放出が十分に低減され、ならびに
（ｄ）（ｉ）二重特異性ハイブリッド抗体の形態であり、および／または（ｉｉ）IgG1抗体またはIgG4抗体である、当該抗体。
［１－１］　前項［１］～［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む医薬組成物。
［１－２］　さらに、薬学的に許容される担体を含む前記［１－１］記載の医薬組成物。
［２－１］　前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－２］　自己免疫疾患が、ベーチェット病、全身性エリテマトーデス、慢性円板状エリテマトーデス、多発性硬化症、全身性強皮症、進行性全身性硬化症、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎（結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発血管炎）、大動脈炎症候群（高安動脈炎）、悪性関節リウマチ、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、脊椎関節炎、混合性結合組織病、キャッスルマン病、シェーグレン症候群、成人スティル病、血管炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、リウマトイド血管炎、大型血管炎、ANCA関連血管炎（例えば、多発血管炎性肉芽腫症および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症）、コーガン症候群、RS3PE症候群、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症、抗リン脂質抗体症候群、好酸球性筋膜炎、IgG4関連疾患（例えば、原発性硬化性胆管炎および自己免疫性膵炎等）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、ループス腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病（グレーブス病（甲状腺機能亢進症））、橋本病、自己免疫性副腎機能不全、原発性甲状腺機能低下症、アジソン病（慢性副腎皮質機能低下症）、特発性アジソン病、Ｉ型糖尿病、緩徐進行性Ｉ型糖尿病（成人潜在性自己免疫性糖尿病）、限局性強皮症、乾癬、乾癬性関節炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状IgA水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、白斑、尋常性白斑、視神経脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、サルコイドーシス、巨細胞性動脈炎、筋委縮性側索硬化症、原田病、自己免疫性視神経症、特発性無精子症、習慣性流産、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、セリアック病、強直性脊椎炎、重症喘息、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、好酸球性副鼻腔炎、拡張型心筋症、全身性肥満細胞症または封入体筋炎である前項［２－１］記載の剤。
［２－３］　前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、自己免疫疾患または移植片対宿主病（GVHD）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－４］　インスリン製剤（例えば、ヒトインスリン、インスリングラルギン、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリンアスパルト等）、スルホニルウレア剤（例えば、Glibenclamide、GliclazideおよびGlimepiride等）、速攻型インスリン分泌促進薬（例えば、Nateglinide等）、ビグアナイド製剤（例えば、Metformin等）、インスリン抵抗性改善薬（例えば、Pioglitazone等）、α－グルコシダーゼ阻害薬（例えば、AcarboseおよびVoglibose等）、糖尿病性神経症治療薬（例えば、Epalrestat、MexiletineおよびImidapril等）、GLP-1アナログ製剤（例えば、Liraglutide、ExenatideおよびLixisenatide等）およびDPP-4阻害剤（例えば、Sitagliptin、VildagliptinおよびAlogliptin等）から選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、Ｉ型糖尿病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－５］　ステロイド薬（例えば、コルチゾン、コルチゾン酢酸エステル、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、フルドロコルチゾン酢酸エステル、プレドニゾロン、プレドニゾロン酢酸エステル、プレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、ブチル酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロンリン酸エステルナトリウム、ハロプレドン酢酸エステル、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン酢酸エステル、メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、トリアムシノロン、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、デキサメタゾン酢酸エステル、デキサメタゾン吉草酸エステル、デキサメタゾンシペシル酸エステル、デキサメタゾンパルミチン酸エステル、デキサメタゾンプロピオン酸エステル、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサメタゾンメタスルホ安息香酸エステルナトリウム、パラメタゾン、パラメタゾン酢酸エステル、ベタメタゾン、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル、ベタメタゾン吉草酸エステル、ベタメタゾン酢酸エステル、ベタメタゾン酪酸エステルプロピオン酸エステルおよびベタメタゾンリン酸エステルナトリウム等）、インターフェロンβ-1a、インターフェロンβ-1b、酢酸グラチラマー、Mitoxantrone、Azathioprine、Cyclophosphamide、Ciclospolin、Methotrexate、Cladribine、副腎皮質刺激ホルモン（ACTH）、Corticotropin、Mizoribine、Tacrolimus、FingolimodおよびAlemtuzumabから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、多発性硬化症の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－６］　ステロイド薬（例えば、前項［２－５］記載のステロイド薬）、免疫抑制剤（例えば、Ciclospolin、TacrolimusおよびFingolimod等）およびBelimumabから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、全身性エリテマトーデスの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－７］　ステロイド薬（例えば、前項［２－５］記載のステロイド薬）、抗リウマチ薬（例えば、Methotrexate、Sulfasalazine、Bucillamine、Leflunomide、MizoribineおよびTacrolimus等）、抗サイトカイン薬（例えば、Infliximab、Adalimumab、Tocilizumab、Etanercept、GolimumabおよびCertolizumab等）およびAbataceptから選択される何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、関節リウマチの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－８］　前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤とともに投与されることを特徴とし、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体等を有効成分として含む、自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－９］　前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤を投与される患者に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－１０］　前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤の投与後に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［２－１１］　前項［２－４］～［２－７］において挙げられる何れか一以上の薬剤の投与前に投与されることを特徴とする、前項［２－４］～［２－８］記載の各疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［３－１］　前項［１］～［２９］、［３１］、［３２］、［３５］および［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
［３－２］　当該血液がんが、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、白血病、中枢神経系原発悪性リンパ腫および骨髄増殖症候群から選択される１以上のがんである前項［３－１］記載の剤。
［３－３］　当該血液がんが悪性リンパ腫であり、悪性リンパ腫が、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である前項［３－２］記載の剤。
［３－４］　悪性リンパ腫が非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫が、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫またはT/NK細胞性非ホジキンリンパ腫ある前項［３－３］記載の剤。
［３－５］　非ホジキンリンパ腫がＢ細胞性非ホジキンリンパ腫であり、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、前駆Ｂ細胞急性リンパ球芽性白血病、慢性Ｂリンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、脾原発辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、有毛細胞白血病・バリアント型、濾胞性リンパ腫、小児型濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特定型、脾びまん性赤脾髄小型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、単クローン性Ｂ細胞リンパ球増加症、脾Ｂ細胞リンパ腫／白血病・分類不能型、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症・IgM型、μ重鎖病、λ重鎖病、α重鎖病、形質細胞骨髄腫、骨孤在性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着病、IRF4再構成を伴う大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・下肢型、EBV陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特定型、EBV陽性粘膜皮膚潰瘍、慢性炎症関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ALK陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、原発性体腔液リンパ腫、HHV8陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特異型、11q異常を伴うバーキット様リンパ腫、MYCおよびBCL2とBCL6の両方か一方の再構成伴う高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫・非特異型またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間的特徴を伴うＢ細胞リンパ腫・分類不能型である前項［３－４］記載の剤。
［３－６］　非ホジキンリンパ腫がT/NK細胞性非ホジキンリンパ腫であり、T/NK細胞性非ホジキンリンパ腫が、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｔリンパ球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ細胞リンパ芽球性白血病）、Ｔ細胞型大顆粒リンパ球性白血病、大顆粒NK細胞性白血病、急速進行性NK細胞白血病、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、末梢性T細胞リンパ腫・非特定型、分類不能末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞性リンパ腫、未分化大細胞（CD30陽性）リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞性リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾型γ－δＴ細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、ホジキン様／ホジキン関連未分化大細胞リンパ腫、節外性NK/T細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞性リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、慢性NK細胞リンパ増殖異常症、小児全身性EBV陽性Ｔ細胞リンパ腫、種痘様水疱症様リンパ増殖異常症、節外性NK/T細胞リンパ腫・鼻型、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、単形性上皮向性腸管Ｔ細胞リンパ腫、胃腸管緩徐進行性Ｔ細胞リンパ増殖異常症、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD30陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症、リンパ腫様丘疹症、原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫、原発性皮膚γδＴ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD8陽性急速進行性表皮向性細胞傷害性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚先端型CD8陽性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD4陽性小型／中型Ｔ細胞リンパ増殖性症、濾胞Ｔ細胞リンパ腫、濾胞ヘルパーＴ細胞形質を伴う節性末梢性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫・ALK陽性型、未分化大細胞リンパ腫・ALK陰性型または乳房インプラント関連未分化大細胞リンパ腫である前項［３－４］記載の剤。
［３－７］　悪性リンパ腫がホジキンリンパ腫であり、ホジキンリンパ腫が、古典的ホジキンリンパ腫（例えば、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型およびリンパ球減少型）または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫である前項［３－３］記載の剤。
［３－８］　当該血液がんが白血病であり、白血病が、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群または慢性骨髄性白血病である前項［３－２］記載の剤。
［３－９］　当該血液がんが、小児の血液がんである、前項［３－１］～［３－８］の何れか一項記載の剤。
［３－１０］　当該血液がんが、他の抗がん薬による治療効果が不十分あるいは十分ではない血液がんである、前項［３－１］～［３－９］の何れか一項記載の剤。
［３－１１］　当該血液がんが、他の抗がん薬による治療後に増悪した血液がんである、前項［３－１］～［３－１０］の何れか一項記載の剤。
［３－１２］　血液がん患者が、他の抗がん薬による治療歴のない、前項［３－１］～［３－９］の何れか一項記載の剤。
［３－１３］　当該血液がんが、再発性および／または難治性である、前項［３－１］～［３－１２］の何れか一項記載の剤。
［３－１４］　さらに、他の抗がん薬と併用される前項［３－１］～［３－１３］の何れか一項記載の剤。
［３－１５］　当該他の抗がん薬が、アルキル化薬、白金製剤、代謝拮抗剤（例えば、葉酸代謝拮抗薬、ピリジン代謝阻害薬、プリン代謝阻害薬）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害薬、ヌクレオチドアナログ、トポイソメラーゼ阻害薬、微小管重合阻害薬、微小管脱重合阻害薬、抗腫瘍性抗生物質、サイトカイン製剤、分子標的薬およびがん免疫治療薬から選択される一以上の薬剤である前項［３－１０］、［３－１１］または［３－１４］記載の剤。
［３－１６］　当該他の抗がん薬の何れか一以上の薬剤を投与される患者に投与されることを特徴とする、前項［３－１４］または［３－１５］記載の剤。
［３－１７］　当該他の抗がん薬の何れか一以上の薬剤の投与後に投与されることを特徴とする、前項［３－１４］または［３－１５］記載の剤。
［３－１８］　当該他の抗がん薬の何れか一以上の薬剤の投与前に投与されることを特徴とする、前項［３－１４］または［３－１５］記載の剤。
［３－１９］　ステロイド薬とともに投与されることを特徴とする、前項［３－１］～［３－１８］の何れか一項記載の剤。
［３－２０］　ステロイド薬の投与後に投与されることを特徴とする、前項［３－１］～［３－１８］何れか一項記載の剤。
［４－１］　前項［１］～［２９］、［３１］、［３２］、［３５］および［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片を有効成分として含む、血液がん細胞増殖抑制剤。
［５－１］　前項［１］～［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片および薬学的に許容できる担体を含む、静脈内注射用製剤。
［５－２］　自己免疫疾患、移植片対宿主病（GVHD）または血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための前項［５－１］記載の静脈内注射用製剤。
［５－３］　点滴用である、前項［５－１］または［５－２］記載の静脈内注射用製剤。
［６－１］　前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片の有効量を患者に投与することからなる、自己免疫疾患または移植片対宿主病（GVHD）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療方法。
［６－２］　前項［１］～［２９］、［３１］、［３２］、［３５］および［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片の有効量を患者に投与することからなる、血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療方法。
［６－３］　自己免疫疾患または移植片対宿主病（GVHD）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［６－４］　血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される、前項［１］～［２９］、［３１］、［３２］、［３５］および［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片。
［６－５］　自己免疫疾患または移植片対宿主病（GVHD）の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための医薬の製造における、前項［１］～［３０］、［３３］および［３４］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片の使用。
［６－６］　血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための医薬の製造における、前項［１］～［２９］、［３１］、［３２］、［３５］および［３６］の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質またはPD-1/CD4二重特異性抗体もしくはその抗体断片の使用。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、自己免疫疾患や血液がん等に対する予防、症状進展抑制、再発抑制または治療に使用できる。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、投与時のサイトカインの産生または放出の誘導が低減されており、そのため、投与後のインフュージョン・リアクションあるいはサイトカイン放出症候群の発現が抑制されることが期待できる。
実施例１記載のPD-1/CD4二重特異性抗体（以下、「PD-1/CD4 scDb」と略記することがある。）の構造を示す。図中、「VH CD4」および「VL CD4」は、抗CD4抗体のVHおよびVLを各々表し、「VH PD-1」および「VL PD-1」は抗PD-1抗体のVHおよびVLを各々表す。「L1」、「L2」および「L3」は各VHおよびVLを連結するペプチドリンカーを表し、L1およびL3は、(Gly)×4-Serで、L2は((Gly)×4-Ser)×3で表される構造を有する。 実施例２記載のPD-1/CD4二重特異性抗体（以下、「PD-1/CD4 scDb-Fc」と略記することがある。）の構造を示す。図中、「IgG1(Hinge-CH3)」は、ヒンジ部からCH3領域までを有するヒトIgG1定常領域を表す。「L4」は、(Gly)×4-Serまたは((Gly)×4-Ser)×3で表される構造を有するペプチドを表す。その他の記号は、図１で示したものと同じ意味を表す。 PD-1/CD4 scDbのマウスPD-1への特異的結合性を示すフローサイトメトリーを示す。図中、Clone-1およびClone-A～-Hは、実施例１において作製されたPD-1/CD4 scDbを各々表す。 PD-1/CD4 scDb-FcのマウスPD-1への特異的結合性を示すフローサイトメトリーを示す。図中、Clone-2およびClone-I～-Pは各々実施例２において作製されたPD-1/CD4 scDb-Fcを各々表す。 PD-1/CD4 scDbのマウスCD4への特異的結合性を示すフローサイトメトリーを示す。 PD-1/CD4 scDb-FcのマウスCD4への特異的結合性を示すフローサイトメトリーを示す。 実験的アレルギー性脳脊髄炎マウスモデル（EAEモデル）における両PD-1/CD4二重特異性タンパク質（Clone-1およびClone-2）の作用を示す。 PD-1/CD4二重特異性タンパク質を投与したマウスにおける血漿中サイトカイン濃度を示す。図中、「＊」および「＊＊」は、Vehicleとのｔ検定により、各々p<0.05およびp<0.01で有意であることを表す。
　PD-1(Programmed Cell Death-1)は、一実施形態において、GenBank登録番号NP_005009で示されるアミノ酸配列からなる膜型タンパク質である。本明細書において「PD-1」と記載される場合、特に限定しない限り、そのすべてのアイソフォーム、および本発明にかかる「PD-1に特異的に結合する第一アーム」のエピトープが保存された、それら改変体をも含むものとして使用される場合がある。本発明において、PD-1として好ましくは、ヒトPD-1である。
　CD4は、一実施形態において、Genbank登録番号NP_000607で示されるアミノ酸配列を有する。本明細書において「CD4」と記載される場合、特に限定しない限り、そのすべてのアイソフォーム、および本発明にかかる「CD4に特異的に結合する第二アーム」のエピトープが保存された、それら改変体をも含むものとして使用される場合がある。本発明において、CD4として好ましくは、ヒトCD4である。
　本明細書において「単離」とは、宿主細胞から抽出された、複数ないし無数の成分が含まれる夾雑物の中から同定、分離および／または精製されることにより、実質的に単一の純粋な成分となることを意味する。
　本明細書において、「二重特異性タンパク質」とは、二つの異なる抗原分子あるいはエピトープに対する結合特異性を一分子に備え持つタンパク質を意味するが、当該結合特異性を有する限りにおいてその形態は何れであってもよく、例えば、二重特異性抗体およびその抗体断片、Scaffold分子（Current Opinion in Biotechnology (2006), Vol. 17, No. 6, p.653-658、Current Opinion in Biotechnology (2007), Vol. 18, p.1-10、Current Opinion in Structural Biology (1997), Vol. 7, p.463-469またはProtein Science (2006), Vol. 15, p.14-27参照）および修飾型ペプチド（例えば、特殊環状ペプチド（J. Synth. Org. Chem., Jpn. (2017), Vol.75, No.11, p.1171-1178)、Addbody（登録商標）およびMirabody（登録商標）等）等が挙げられるが、それに限定されない。さらに、そのようなScaffold分子の例としては、例えば、Adnectin（WO2001/64942参照）、Affibody（登録商標）（WO95/19374およびWO2000/63243参照）、Anticalin（登録商標）（WO99/16873参照）、Avimer（Nature Biotechnology (2005),Vol. 23, p.1556-1561参照）、DARPin（Nature Biotechnology (2004),Vol. 22, p.575-582参照）、LRRP（Nature (2004),Vol. 430, No. 6996, p.174-180参照）、Affilin（登録商標）（WO2001/04144およびWO2004/106368参照）、Affitin（Journal of molecular biology (2008),Vol. 383,No. 5, p.1058-1068参照）およびFynomer（WO2011/023685）等が挙げられるが、それらに限定されない。
　本明細書において「モノクローナル抗体」とは、同一の特定の抗原に対して結合する、実質的に均一である抗体集団から得られた抗体を意味する。
　本明細書において「二重特異性抗体」とは、二つの異なる抗原分子あるいはエピトープに対する結合特異性を一分子に備え持つ抗体を意味し、「二重特異性モノクローナル抗体」とは、さらに、実質的に均一である抗体集団から得られた二重特異性抗体を意味する。
　二重特異性抗体の形態には、例えば、ダイアボディ、二重特異性sc(Fv)2、二重特異性ミニボディ、二重特異性F(ab′)2、二重特異性ハイブリッド抗体、共有結合型ダイアボディ（二重特異性DART）、二重特異性(FvCys)2、二重特異性F(ab′-ジッパー)2、二重特異性(Fv-ジッパー)2、二重特異性三鎖抗体および二重特異性mAb2等がある。
　ダイアボディとは、異なる抗原を認識するVH、VL同士をペプチドリンカーで連結された一本鎖ペプチドの二量体である（Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993), Vol. 90, No.14: p.6444-6448参照）。
　二重特異性sc(Fv)2とは、異なる抗原を認識する２つの抗体の２組のVH/VLがペプチドリンカーを介して連続する一本鎖の形態で産生されるよう改変された低分子化抗体である（J. Biological Chemistry (1994), Vol. 269: p.199-206参照）。
　二重特異性F(ab′)2とは、異なる２つの抗原を認識する抗体のFab′断片が、ジスルフィド結合等により共有結合した低分子化抗体である。
　二重特異性ミニボディとは、各々異なる抗原を認識するscFvに抗体の定常領域CH3ドメインが連結されるよう改変された低分子抗体断片を、そのCH3ドメイン上のジスルフィド結合等によって共有結合した低分子化抗体である（Biochemistry (1992), Vo.31, No.6, p.1579-1584参照）。
　二重特異性ハイブリッド抗体とは、異なる２つの抗原を認識する抗体の重鎖／軽鎖複合体がジスルフィド結合等によって共有結合したインタクトな抗体である。
　本発明において、好ましい二重特異性抗体の形態としては、二つの可変領域間の可動領域が広い形態のものが好ましく、例えば、二重特異性ハイブリッド抗体である。
　二重特異性ハイブリッド抗体は、例えば、ハイブリッドハイブリドーマ法（US4474893参照）で作製されたハイブリドーマから産生させることができる。また、二重特異性ハイブリッド抗体は、異なる抗原を認識する抗体の重鎖および軽鎖を各々コードする計４種類のcDNAを哺乳動物細胞に共発現ならびに分泌させて製造することができる。
　本発明において使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（例えば、KohlerおよびMilsteinら， Natur (1975)， Vol. 256, p.495-97、Hongoら, Hybridoma (1995), Vol. 14, No. 3, p.253-260、Harlowら, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988), Vol. 2)およびHammerlingら, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, p.563-681(Elsevier, N.Y., 1981)参照）、組換えDNA法（例えば、US4816567参照）、ファージディスプレイ方法（例えば、LadnerらのUS5223409、US5403484およびUS5571698、DowerらのUS5427908およびUS5580717、McCaffertyらのUS5969108およびUS6172197およびGriffithsらのUS5885793、US6521404、US6544731、US6555313、US6582915およびUS6593081参照）で作製することができる。
　抗体あるいはモノクローナル抗体は、ヒトに投与される場合には、その抗原性を低減あるいは消失させるために、キメラ抗体、ヒト化抗体あるいは完全ヒト型抗体の形態で作製することができる。
　「キメラ抗体」は、可変領域配列と定常領域配列が別々の哺乳動物に由来する抗体を意味し、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来するものがある。キメラ抗体は、上記のハイブリドーマ法、組換えDNA法あるいはファージディスプレイ方法で単離された抗体産生ハイブリドーマから、公知の手法により単離された抗体可変領域をコードする遺伝子を、公知の方法を用いて、ヒト由来の抗体定常領域をコードする遺伝子に連結させ、作製することができる（例えば、CabillyらのUS4816567参照）。
　「ヒト化抗体」とは、マウスのような別の哺乳動物の生殖細胞型に由来する相補性決定領域（CDR）配列をヒトフレームワーク配列上に移植した抗体を意味する。ヒト化抗体の場合も、上記方法で単離された抗体産生ハイブリドーマから、公知の手法により単離された抗体CDR領域をコードする遺伝子を、公知の方法を用いて、ヒト由来の抗体フレームワーク領域をコードする遺伝子に連結させ、作製することができる（例えば、WinterのUS5225539およびUS5530101、QueenらのUS5585089号およびUS6180370参照）。
　「ヒト抗体」または「完全ヒト型抗体」とは、フレームワーク領域およびCDR領域からなる可変領域ならびに定常領域の両方ともにヒト生殖細胞型免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。本発明において使用されるヒト抗体は、ヒト抗体を産生するように形質転換されたマウス、例えば、Humabマウス（例えば、LonbergとKayらによるUS5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299およびUS5770429参照）、KMマウス（例えば、IshidaらのWO2002/43478参照）、Xenoマウス（例えば、US5939598、US6075181、US6114598、US6150584およびUS6162963参照）またはTcマウス（例えば、Tomizukaら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000), p.722-727参照）を用いた方法で作製することができる。また、免疫によりヒト抗体応答が起こるように、ヒト免疫細胞を再構築したSCIDマウス（例えば、WilsonらのUS5476996およびUS5698767参照）を用いても調製できる。さらに、本発明において使用されるヒト抗体は、上記したファージディスプレイ方法でも作製することができる。
　本明細書において、PD-1/CD4二重特異性抗体の「抗体断片」とは、全長抗体の一部であって、PD-1に対する抗原結合部分およびCD4に対する抗原結合部分を有する抗体であり、例えば、F(ab′)2等が挙げられる。ここで、抗原結合部分とは、抗体がその抗原に結合することができる最少単位を意味し、例えば、VHおよびVLにある各々３つずつのCDRとそれらCDRの組合せにより目的の抗原が認識できるようCDRを配置するフレームワーク領域から構成される。
　本明細書において「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、IgMまたはIgG）を称するものとして使用される。本発明の二重特異性抗体として好ましいアイソタイプは、IgGであり、より好ましくはIgG1またはIgG4である。一実施形態において、IgG1としては、Fc受容体（具体的には、Fcγ受容体）への結合が消失あるいは減弱したもの、またはADCCおよび／またはCDC作用が消失あるいは減弱したものである。具体的には、その重鎖定常領域の任意のアミノ酸を置換、欠損あるいは挿入することによって、Fc受容体への結合が消失あるいは減弱されたIgG1抗体を得ることができる。例えば、各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、EUナンバリングシステムによる234番目のロイシンがアラニンに置換され、および／または235番目のロイシンがアラニンに置換されたIgG1抗体が挙げられる。また、二重特異性抗体の各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、EUナンバリングシステムによる235番目のロイシンがグリシンに置換され、および／または236番目のグリシンがアルギニンに置換された抗体でもよい。また、抗体の不均一性を低減させるために、Ｃ末端のアミノ酸、例えば、EUナンバリングシステムによる447番目のリシンを欠損した抗体が好ましい。
　本発明の二重特異性抗体のFc領域は、二つの異なる重鎖が会合し易いように、その領域の任意のアミノ酸が置換されていてもよい。例えば、PD-1に特異的に結合する第一アームのVHを有する重鎖上の定常領域のEUナンバリングシステムによる351番目のロイシンがリシンに置換され、かつ366番目のスレオニンがリシンに置換され、CD4に特異的に結合する第二アームのVHを有する重鎖における定常領域中の351番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ368番目のロイシンがグルタミン酸に置換されたPD-1/CD4二重特異性抗体が挙げられる。また、PD-1に特異的に結合する第一アームのVHを有する重鎖における定常領域中のEUナンバリングシステムによる351番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ368番目のロイシンがグルタミン酸に置換され、CD4に特異的に結合する第二アームのVHを有する重鎖における定常領域中の351番目のロイシンがリシンに置換され、かつ366番目のスレオニンがリシンに置換されたPD-1/CD4二重特異性抗体も挙げられる。
　さらに、本発明の二重特異性抗体がIgG4である場合、抗体分子内におけるスワッピングを抑制するように、その重鎖定常領域の任意のアミノ酸が置換、欠損あるいは挿入した改変体がより好ましい。例えば、ヒンジ領域に位置する、EUナンバリングシステムによる228番目のセリンをプロリンに置換した抗体が好ましい。なお、本明細書において、抗体の可変領域のCDRとフレームワークに割り当てられるアミノ酸位置はKabatにしたがって規定することができる（Sequences of Proteins of Immunological Interest（National Institute of Health, Bethesda, Md., (1987)および(1991)参照）。また、定常領域のアミノ酸はKabatのアミノ酸位置に準じたEUナンバリングシステム（Sequences of proteins of immunological interest, NIH Publication No. 91-3242参照）に従って表される。
　本明細書において「ペプチドリンカー」は、本発明の二重特異性抗体またはその抗体断片を構成する二組のVHおよびVL同士ならびにそれらとIgG1定常領域（ヒンジ/CH3）を連結し、当該二重特異性抗体またはその抗体断片の機能的な発現および形成を阻害するものでなければ特に限定されないが、例えば、Ser、(Gly)n-Ser、Ser-(Gly)n、((Gly)4-Ser)n、(Ser-(Gly)4)n［ｎは１～６の整数を表し、その他の記号は前記と同じ意味を表す。］等が挙げられ、さらに、(Gly)×4-Serおよび((Gly)×4-Ser)×3等が好ましい。本発明の二重特異性抗体またはその抗体断片が複数のペプチドリンカーを有する場合、各々が同じ前記のアミノ酸配列からなるものでも異なるものであってもよく、また、それらのうちの少なくとも一つが前記アミノ酸配列からなるペプチドリンカーであってもよい。
PD-1に特異的に結合する第一アーム
　本明細書において、「PD-1に特異的に結合する第一アーム」（以下、「第一アーム」と略記することがある。）は、本発明にかかる二重特異性タンパク質の一部であるか、あるいはそれ自体単体として存在するかに関わらず、PD-1に特異的に結合するタンパク質であり、当該二重特異性タンパク質が二重特異性抗体である場合、当該第一アームは、抗体あるいは抗体断片の一部に含まれるか、あるいは一部ではなく、それ自体単体として存在するか否かにかかわらず、少なくとも、PD-1に特異的に結合する抗体（以下、抗PD-1抗体と略記することがある。）のVHおよびVLを含み、PD-1に特異的に結合することができる抗体部分を意味する。例えば、このような第一アームには、抗PD-1抗体の抗原結合部位を構成するVHおよびVLからなる抗体のFv部、当該VHおよびVLを含む抗体のFab′部およびFab部もこれに含まれる。ここで、「PD-1に特異的に結合する」とは、少なくとも、1x10-5M、好ましくは1x10-7M、より好ましくは1x10-9Mより高い親和性（解離定数（Kd値））を有する結合活性でPD-1に対して直接結合することができ、少なくとも、CD28、CTLA-4およびICOS等の、いわゆる、CD28ファミリー受容体に属するほかの受容体メンバーには実質的に結合しない特徴として使用される。また、「PD-1に特異的に結合する抗体」あるいは「抗PD-1抗体」における「抗体」とは、全長抗体、すなわち、ジスルフィド結合で連結された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる完全長の抗体を意味するが、好ましくは、そのモノクローナル抗体である。
　本発明における「PD-1に特異的に結合する第一アーム」は、一つの実施態様として、PD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する。ここで、「PD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する」とは、本発明にかかるPD-1/CD4二重特異性抗体が可溶型PD-L1またはPD-L2の濃度の20倍過剰に存在する状況下においても、それら相互作用が、本発明にかかるPD-1/CD4二重特異性抗体が存在しない時の当該相互作用に比べて50％以上維持され、好ましくは70％以上維持され、より好ましくは80％以上維持されることを意味する。当該第一アームがそれら相互作用を許容するかどうかは、公知の方法、例えば、固定化PD-L1タンパク質あるいはPD-L1発現細胞への可溶型PD-1タンパク質の結合への当該第一アームの影響を、例えば、ビアコア分析、ELISAアッセイ、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）、蛍光エネルギー転移測定法（FRET）や蛍光微量測定技術（FMAT（登録商標））を用いて測定することによって判断することができる。また、「PD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用、またはそれら両相互作用を許容する」という定義は、それら相互作用を実質的に阻害しないという意味と同義で使用されることがある。
　本発明における「PD-1に特異的に結合する第一アーム」は、別の実施態様として、PD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用、またはそれら両相互作用を阻害するものを含む場合がある。
　また、その他の「PD-1に特異的に結合する第一アーム」としては、例えば、公知の抗PD-1抗体のVHおよびVLの組合せが挙げられ、そのような公知の抗PD-1抗体としては、例えば、Nivolumab、Cemiplimab、Pembrolizumab、Spartalizumab、Tislelizumab、Dostarlimab、Toripalimab、Camrelizumab、Genolimzumab、Sintilimab、Lodapolimab、Retifanlimab、Balstilimab、Serplulimab、Budigalimab、Prolgolimab、Sasanlimab、Cetrelimab、Zimberelimab、Penpulimab、AMP-514(MEDI0680)、STI-A1110、ENUM 388D4、ENUM 244C8、GLS010、CS1003、BAT-1306、AK103、BI 754091、LZM009、CMAB819、Sym021、SSI-361、JY034、HX008、ISU106およびCX-188等が挙げられ、さらに、以下の公開特許出願：US20180222982、US20180312564、WO2004/056875、WO2006/121168、WO2008/156712、WO2010/029434、WO2010/029435、WO2010/036959、WO2011/110604、WO2011/110621、WO2014/179664、WO2014/194302、WO2014/206107、WO2015/035606、WO2015/036394、WO2015/085847、WO2015/112800、WO2016/014688、WO2016/015685、WO2016/068801、WO2016/077397、WO2016/092419、WO2016/106159、WO2016/127179、WO2016/197497、WO2016/210129、WO2017/011580、WO2017/016497、WO2017/019846、WO2017/024465、WO2017/024515、WO2017/025016、WO2017/025051、WO2017/040790、WO2017/055443、WO2017/055547、WO2017/058115、WO2017/058859、WO2017/079112、WO2017/079116、WO2017/087599、WO2017/096026、WO2017/106656、WO2017/107885、WO2017/124050、WO2017/125815、WO2017/132827、WO2017/133540、WO2017/166804、WO2017/198741、WO2017/201766、WO2017/214182、WO2018/020476、WO2018/026248、WO2018/034226、WO2018/036472、WO2018/052818、WO2018/053106、WO2018/068336、WO2018/085358、WO2018/085468、WO2018/087143、WO2018/091661、WO2018/113258、WO2018/119474、WO2018/162944、WO2018/192089、WO2018/210230、WO2018/217227、WO2018/226580、WO2019/005635またはWO2019/051164により特定される特許公開明細書に各々記載された抗PD-1抗体のVHおよびVLの組合せも、PD-1に特異的に結合する第一アームの例として挙げられる。また、上記抗PD-1抗体のVHと共通軽鎖との組み合わせも、PD-1に特異的に結合する第一アームの例として挙げられる。
CD4に特異的に結合する第二アーム
　本明細書において、「CD4に特異的に結合する第二アーム」（以下、「第二アーム」と略記することがある。）とは、本発明にかかる二重特異性タンパク質の一部であるか、あるいはそれ自体単体として存在するかに関わらず、CD4に特異的に結合するタンパク質であり、当該二重特異性タンパク質が二重特異性抗体である場合、当該第二アームは、抗体あるいは抗体断片の一部に含まれるか、あるいは一部ではなく、それ自体単体として存在するか否かにかかわらず、少なくとも、CD4に特異的に結合する抗体（以下、抗CD4抗体と略記することがある。）のVHおよびVLを含み、CD4に特異的に結合することができる抗体部分を意味する。例えば、このような第二アームには、抗CD4抗体の抗原結合部位を構成するVHおよびVLからなる抗体のFv部、当該VHおよびVLを含む抗体のFab′部およびFab部もこれに含まれる。ここで、「CD4に特異的に結合する」とは、少なくとも、1x10-5M、好ましくは1x10-7M、より好ましくは1x10-9Mより高い親和性（解離定数（Kd値））を有する結合活性でCD4に対して直接結合することができ、他のタンパク質には実質的に結合しない特徴として使用される。また、「CD4に特異的に結合する抗体」あるいは「抗CD4抗体」における「抗体」とは、全長抗体、すなわち、ジスルフィド結合で連結された２つの重鎖および２つの軽鎖からなる完全長の抗体を意味するが、好ましくは、そのモノクローナル抗体である。
　また、その他の「CD4に特異的に結合する第二アーム」としては、例えば、公知の抗CD4抗体のVHおよびVLの組合せが挙げられ、そのような抗CD4抗体としては、例えば、例えば、MTRX-1011A、TRX-1、Ibalizumab、BT-061、huB-F5、Zanolimumab、4162W94、Clenoliximab、Keliximab、AD-519、PRO-542、CedelizumabおよびIT1208等が挙げられる。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性抗体として好ましいアイソタイプとしてはIgG抗体であり、さらに好ましくは、IgG1もしくはIgG4抗体である。
　本発明の二重特異性抗体のうち、同抗体がIgG1抗体である場合には、Fc受容体への結合を実質的に消失させた変異が導入された形態を取っていてもよく、例えば、各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、EUナンバリングシステムによる234番目のロイシンがアラニンに置換され、および／または235番目のロイシンがアラニンに置換されたIgG1抗体が挙げられる。または、各々二つの重鎖定常領域あるいはヒンジ領域上において、EUナンバリングシステムによる235番目のロイシンがグリシンに置換され、および／または236番目のグリシンがアルギニンに置換されたIgG1抗体でもよい。さらに、それら二重特異性抗体の重鎖Ｃ末端のアミノ酸、例えば、EUナンバリングシステムによる447番目のリシンを欠損した抗体がより好ましい。
　さらに、これらPD-1/CD4二重特異性抗体がIgG1抗体である場合に好ましい態様としては、PD-1に特異的に結合する第一アームのVHを有する重鎖における定常領域中のEUナンバリングシステムによる351番目のロイシンがリシンに置換され、かつ366番目のスレオニンがリシンに置換され、CD4に特異的に結合する第二アームのVHを有する重鎖における定常領域中の351番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ368番目のロイシンがグルタミン酸に置換されたIgG1抗体が挙げられる。また、PD-1に特異的に結合する第一アームのVHを有する重鎖における定常領域中のEUナンバリングシステムによる351番目のロイシンがアスパラギン酸に置換され、かつ368番目のロイシンがグルタミン酸に置換され、CD4に特異的に結合する第二アームのVHを有する重鎖における定常領域中の351番目のロイシンがリシンに置換され、かつ366番目のスレオニンがリシンに置換されたIgG1抗体も同様に好ましい。
　一方、PD-1/CD4二重特異性抗体がIgG4抗体である場合には、そのヒンジ領域に位置する、EUナンバリングシステムによる228番目のセリンをプロリンに置換した抗体が好ましい。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、一実施態様において、PD-1の抑制性シグナルを伝達する特徴を有する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、一実施態様において、PD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用またはそれら両相互作用を許容する特徴を有する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、投与中もしくは投与後24時間以内におけるサイトカイン産生または放出が十分に低減された特徴を有する。ここで、「投与中もしくは投与後24時間以内のサイトカイン産生または放出が十分に低減された」とは、例えば、本発明にかかるPD-1/CD4二重特異性抗体を点滴等により静脈内投与中あるいは投与してから24時間以内において、例えば、血中あるいは組織中のIL-2、IFN-γおよび／またはTNF-αを含むサイトカインの濃度が増加しないか、あるいは増加してもステロイド投与により抑制可能な程度であることを意味する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、一実施態様において、リンパ球（好ましくは、Ｔ細胞リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）等）上に発現するPD-1およびCD4に対して各々特異的に結合する場合があり、その際、PD-1およびCD4に同時に結合し、あるいは同一のリンパ球に発現するPD-1およびCD4に結合する場合がある。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、一実施態様において、標的細胞である血液がんのがん細胞上に発現するPD-1とエフェクター細胞であるリンパ球（好ましくは、Ｔ細胞リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）等）上に発現するCD4に各々特異的に結合する場合があり、その際、PD-1およびCD4に同時に結合する場合がある。ここで、「標的細胞」とは、エフェクター細胞であるリンパ球の細胞傷害作用を受ける細胞を意味し、「エフェクター細胞」とは、標的細胞に対して細胞傷害作用を及ぼす細胞を意味する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体等）は、一実施態様において、Ｔ細胞由来のがん細胞に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合する場合があり、その際、PD-1およびCD4に同時に結合する場合がある。
　本発明において、PD-1/CD4二重特異性タンパク質として好ましくは、PD-1/CD4二重特異性抗体およびその抗体断片であり、さらに、PD-1/CD4二重特異性抗体として好ましくは、PD-1/CD4二重特異性モノクローナル抗体であり、より好ましくは、単離PD-1/CD4二重特異性モノクローナル抗体であり、さらに好ましくは、単離ヒトPD-1/ヒトCD4二重特異性モノクローナル抗体である。ここで、「単離ヒトPD-1/ヒトCD4二重特異性モノクローナル抗体」とは、ヒトPD-1とヒトCD4に対する、単離された二重特異性モノクローナル抗体を意味する。
PD-1/CD4二重特異性抗体の製造および精製方法
　本発明のPD-1/CD4二重特異性抗体およびその抗体断片は、WO2014/051433、WO2013/157953あるいはWO2013/157954に開示された方法でも製造することができる。
　例えば、（１）抗PD-1抗体のVHを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、（２）抗CD4抗体のVHを有する重鎖をコードするポリヌクレオチド、（３）抗PD-1抗体のVLを有する軽鎖をコードするポリヌクレオチド、および（４）抗CD4抗体のVLを有する軽鎖をコードするポリヌクレオチドが各々挿入された発現ベクターを、哺乳動物細胞に遺伝子導入して形質転換させ、両重鎖および軽鎖を共に発現ならびに分泌させて製造することができる。
　ここで、本発明の二重特異性抗体を発現する宿主細胞は、発現ベクターを遺伝子導入でき、導入された発現ベクターを発現することができるいかなる宿主細胞でもよい。好ましくは、SF-9およびSF-21細胞のような昆虫細胞、より好ましくは、CHO細胞、BHK細胞、SP2/0細胞およびNS-0ミエローマ細胞を含むマウス細胞、COSおよびVero細胞のような霊長類細胞、MDCK細胞、BRL 3A細胞、ハイブリドーマ、腫瘍細胞、不死化した初代細胞、W138、HepG2、HeLa、HEK293、HT1080またはPER.C6のような胚性の網膜細胞等の哺乳類細胞が挙げられる。なお、発現システムの選択においては、抗体が適切にグリコシル化されるように、哺乳類の細胞の発現ベクターおよび宿主を用いることがある。ヒト細胞株、好ましくはPER.C6は、ヒトにおけるグリコシル化パターンと一致する抗体を得るために有利に用いられる。
　発現ベクターの遺伝子導入によって形質転換された宿主細胞における蛋白質の産生は、例えば、Current Protocols in Protein Science (1995), Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, Wingfield PT, ISBN 0-471-11184-8，Bendig, 1988を参考に実施することができ、さらに、宿主細胞の培養の生産性を最大にするための一般的な指針、手順および実用的な方法は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach (M. Butler, ed., IRL Press, 1991)を参考に実施することができる。宿主細胞での抗体の発現は、例えば、EP0120694、EP0314161、EP0481790、EP0523949、US4816567およびWO2000/63403等の公開公報に記述されている。
　ここで、宿主細胞の培養条件は、公知の方法により最適化でき、蛋白質の生産量を最適化することができる。培養は、例えば皿、ローラーボトルもしくは反応槽の中で、バッチ培養、流加培養、連続培養、中空糸による培養等によりなされる。細胞培養により、大規模に（連続的な）組み換えタンパク質の生産をするためには、細胞を懸濁液の中で増殖させることが好ましい。また、動物もしくはヒト由来血清または動物もしくはヒト由来の血清の構成要素が無い条件下で細胞の培養をさせることが好ましい。
　宿主細胞で発現され、その細胞または細胞培地から公知の方法により回収された抗体は、公知の方法を用いて精製される。精製方法には、免疫沈降法、遠心分離法、ろ過、サイズ排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、陽イオンおよび／または陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー等が含まれる。さらに、プロテインＡまたはプロテインＧ親和性クロマトグラフィーが好適に用いられる（例えば、US4801687およびUS5151504参照）。
［医薬的用途］
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、自己免疫疾患もしくは移植片対宿主病（GVHD）あるいは血液がん等の予防、症状進展抑制および／または治療に有用である。
　本発明において、自己免疫疾患としては、例えば、ベーチェット病、全身性エリテマトーデス、慢性円板状エリテマトーデス、多発性硬化症、全身性強皮症、進行性全身性硬化症、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎（結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発血管炎）、大動脈炎症候群（高安動脈炎）、悪性関節リウマチ、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、脊椎関節炎、混合性結合組織病、キャッスルマン病、シェーグレン症候群、成人スティル病、血管炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、リウマトイド血管炎、大型血管炎、ANCA関連血管炎（例えば、多発血管炎性肉芽腫症および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症）、コーガン症候群、RS3PE症候群、側頭動脈炎、巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症、抗リン脂質抗体症候群、好酸球性筋膜炎、IgG4関連疾患（例えば、原発性硬化性胆管炎および自己免疫性膵炎等）、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、原発性胆汁性肝硬変、大動脈炎症候群、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、ループス腎炎、抗糸球体基底膜腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、甲状腺機能亢進症（グレーヴス病(バセドウ病)）、橋本病、自己免疫性副腎機能不全、原発性甲状腺機能低下症、アジソン病、特発性アジソン病（慢性副腎皮質機能低下症）、Ｉ型糖尿病、緩徐進行性I型糖尿病、限局性強皮症、乾癬、乾癬性関節炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状IgA水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、白斑、尋常性白斑、原田病、自己免疫性視神経症、特発性無精子症、習慣性流産、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、セリアック病、アトピー性皮膚炎、視神経脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、肺胞蛋白症、自己免疫性出血病XIII、再発性多発軟骨炎、サルコイドーシス、強直性脊椎炎、重症喘息、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、好酸球性副鼻腔炎、拡張型心筋症、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、筋萎縮性側索硬化症および封入体筋炎等が挙げられる。
　自己免疫疾患の治療に使用されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくはPD-1/CD4二重特異性抗体等）は、少なくともその一部がリンパ球（好ましくは、Ｔ細胞リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞および制御性Ｔ細胞））上に発現するPD-1およびCD4に対して各々特異的に結合し、PD-1の抑制シグナルを伝達することで治療効果を発揮する。また、その際、PD-1およびPD-L1との相互作用を許容する特徴が、その予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療の効果の増強あるいは持続に寄与することが期待できる。
　本発明において、血液がんとしては、例えば、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（例えば、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、前駆Ｂ細胞急性リンパ球芽性白血病、慢性Ｂリンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫あるいは前駆細胞性白血病）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫（MALTリンパ腫）、脾原発辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、有毛細胞白血病・バリアント型、濾胞性リンパ腫、小児型濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特定型、脾びまん性赤脾髄小型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、単クローン性Ｂ細胞リンパ球増加症、脾Ｂ細胞リンパ腫／白血病・分類不能型、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症・IgM型、μ重鎖病、λ重鎖病、α重鎖病、形質細胞骨髄腫、骨孤在性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着病、IRF4再構成を伴う大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・下肢型、EBV陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特定型、EBV陽性粘膜皮膚潰瘍、慢性炎症関連びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ALK陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、原発性体腔液リンパ腫、HHV8陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫・非特異型、11q異常を伴うバーキット様リンパ腫、MYCおよびBCL2とBCL6の両方か一方の再構成伴う高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫・非特異型およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間的特徴を伴うＢ細胞リンパ腫・分類不能型）、T/NK細胞性非ホジキンリンパ腫（例えば、前駆Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、慢性Ｔリンパ球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ細胞リンパ芽球性白血病）、Ｔ細胞型大顆粒リンパ球性白血病、大顆粒NK細胞性白血病、急速進行性NK細胞白血病、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、末梢性T細胞リンパ腫・非特定型、分類不能末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞性リンパ腫、未分化大細胞（CD30陽性）リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞性リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾型γ－δＴ細胞リンパ腫、皮下脂肪組織炎様Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、ホジキン様／ホジキン関連未分化大細胞リンパ腫、節外性NK/T細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞性リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、慢性ＮＫ細胞リンパ増殖異常症、小児全身性EBV陽性Ｔ細胞リンパ腫、種痘様水疱症様リンパ増殖異常症、節外性NK/T細胞リンパ腫・鼻型、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、単形性上皮向性腸管Ｔ細胞リンパ腫、胃腸管緩徐進行性Ｔ細胞リンパ増殖異常症、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD30陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症、リンパ腫様丘疹症、原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫、原発性皮膚γδＴ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD8陽性急速進行性表皮向性細胞傷害性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚先端型CD8陽性Ｔ細胞リンパ腫、原発性皮膚CD4陽性小型／中型Ｔ細胞リンパ増殖性症、濾胞Ｔ細胞リンパ腫、濾胞ヘルパーＴ細胞形質を伴う節性末梢性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫・ALK陽性型、未分化大細胞リンパ腫・ALK陰性型および乳房インプラント関連未分化大細胞リンパ腫））およびホジキンリンパ腫（例えば、古典的ホジキンリンパ腫（例えば、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型およびリンパ球減少型）または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫））、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球性リンパ腫）、慢性リンパ性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、骨髄異形成症候群および慢性骨髄性白血病）、中枢神経系原発悪性リンパ腫および骨髄増殖症候群等が挙げられる。
　本発明において血液がん治療等に使用されるPD-1/CD4二重特異性タンパク質（好ましくはPD-1/CD4二重特異性抗体等）は、少なくともその一部は標的細胞である血液がんのがん細胞に発現するPD-1とエフェクター細胞であるリンパ球（好ましくは、Ｔ細胞リンパ球（例えば、ヘルパーＴ細胞または制御性Ｔ細胞等）等）上に発現するCD4に各々特異的に結合することで治療効果を発揮する。また、少なくともその一部は、Ｔ細胞由来のがん細胞に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、PD-1の抑制シグナルを伝達することで治療効果を発揮する場合もある。
　本発明において「治療」とは、例えば、ある疾患もしくはその症状を治癒させることまたは改善させることを意味し、「予防」とは、ある疾患もしくは症状の発現を未然に防止するあるいは一定期間遅延させることを意味し、「症状進展抑制」とは症状の進展または悪化を抑制して病態の進行を止めることを意味する。なお、「予防」の意味には再発抑制も含まれる。「再発抑制」とは、ある疾患もしくは症状の再発を防止または再発の可能性を低減させることを意味する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、通常、全身的または局所的に、非経口の形で投与される。かかる投与方法として、具体的には、注射投与、経鼻投与および経肺投与等が挙げられる。注射投与としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射および腹腔内注射等が挙げられ、静脈内注射の場合には、点滴による投与が好ましい。その投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人当たり、一回につき、0.1 μg/kgから300 mg/kgの範囲で、特に好ましくは、0.1 mg/kgから10 mg/kgの範囲で、一日一回から数回非経口投与されるか、または一日30分から24時間の範囲で静脈内に持続投与される。もちろん前記したように、投与量は種々の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて投与の必要な場合もある。
［製剤］
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、注射剤または点滴のための輸液として製剤化されて用いられる場合、当該注射剤または輸液は、水溶液、懸濁液または乳濁液のいずれの形態であってもよく、また、用時に溶剤を加えることにより、溶解、懸濁または乳濁して使用されるように、薬学的に許容される担体とともに、固形剤として製剤化されていてもよい。注射剤または点滴のための輸液に使用される溶剤として、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖溶液および等張液（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂およびプロピレングリコール等の溶液）等を用いることができる。
　ここで、薬学的に許容される担体としては、例えば、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤、防腐剤、pH調整剤および抗酸化剤等が挙げられる。安定剤としては、例えば、各種アミノ酸、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムまたはジブチルヒドロキシトルエン等を用いることができる。溶解補助剤としては、例えば、アルコール（例えば、エタノール等）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール等）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート20（登録商標）、ポリソルベート80（登録商標）およびHCO-50等）等を用いることができる。懸濁化剤としては、例えば、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースまたはラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。乳化剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウムまたはトラガント等を用いることができる。無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノールまたはソルビトール等を用いることができる。緩衝剤としては、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液またはイプシロンアミノカプロン酸緩衝液等を用いることができる。保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸またはホウ砂等を用いることができる。防腐剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸またはクロロブタノール等を用いることができる。pH調整剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸または酢酸等を用いることができる。抗酸化剤として、例えば、（１）アスコルビン酸、システインハイドロクロライド、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよび亜硫酸ナトリウム等のような水溶性抗酸化剤、（２）アスコルビルパルミテート、ブチル化ハイドロキシアニソール、ブチル化ハイドロキシトルエン、レシチン、プロピルガレートおよびα－トコフェロール等のような油溶性抗酸化剤および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸およびリン酸等のような金属キレート剤等を用いることができる。
　注射剤または点滴のための輸液は、その最終工程において滅菌するかあるいは無菌操作法、例えば、フィルター等で濾過して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填することによって製造することができる。また、注射剤または点滴のための輸液は、真空乾燥および凍結乾燥による無菌粉末（薬学的に許容される担体の粉末を含んでいてもよい。）を、適切な溶剤に用時溶解して使用することもできる。
［併用または配合剤］
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、自己免疫疾患もしくは移植片対宿主病（GVHD）あるいは血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される他の薬剤とともに組み合わせて使用してもよい。本発明において、他の薬剤とともに組み合わせて使用する場合（併用）の投与形態には、１つの製剤中に両成分を配合した配合剤の形態であっても、また別々の製剤としての投与形態であってもよい。その併用により、その他の薬剤の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療効果を補完したり、投与量あるいは投与回数を維持ないし低減することができる。本発明の二重特異性抗体と他の薬剤を別々に投与する場合には、一定期間同時投与し、その後、当該二重特異性抗体のみあるいは他の薬剤のみを投与してもよい。また、本発明の二重特異性抗体を先に投与し、その投与終了後に他の薬剤を投与してもよいし、他の薬剤を先に投与し、その投与終了後に本発明の二重特異性抗体を後に投与してもよく、各々の投与方法は同じでも異なっていてもよい。本発明の二重特異性抗体を含む製剤と他の薬剤を含む製剤のキットとして提供することもできる。ここで、他の薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、他の薬剤は任意の２種以上を適宜の割合で組み合わせて投与してもよい。また、前記他の薬剤には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。
　例えば、本発明の二重特異性タンパク質をＩ型糖尿病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、インスリン製剤（例えば、ヒトインスリン、インスリングラルギン、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリンアスパルト等）、スルホニルウレア剤（例えば、Glibenclamide、GliclazideおよびGlimepiride等）、速攻型インスリン分泌促進薬（例えば、Nateglinide等）、ビグアナイド製剤（例えば、Metformin等）、インスリン抵抗性改善薬（例えば、Pioglitazone等）、α－グルコシダーゼ阻害薬（例えば、AcarboseおよびVoglibose等）、糖尿病性神経症治療薬（例えば、Epalrestat、MexiletineおよびImidapril等）、GLP-1アナログ製剤（例えば、Liraglutide、ExenatideおよびLixisenatide等）、DPP-4阻害剤（例えば、Sitagliptin、VildagliptinおよびAlogliptin等）等と組み合わせて使用してもよい。
　また、例えば、本発明の二重特異性タンパク質を多発性硬化症の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、コルチゾン、コルチゾン酢酸エステル、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、フルドロコルチゾン酢酸エステル、プレドニゾロン、プレドニゾロン酢酸エステル、プレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、ブチル酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロンリン酸エステルナトリウム、ハロプレドン酢酸エステル、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン酢酸エステル、メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、トリアムシノロン、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、デキサメタゾン酢酸エステル、デキサメタゾン吉草酸エステル、デキサメタゾンシペシル酸エステル、デキサメタゾンパルミチン酸エステル、デキサメタゾンプロピオン酸エステル、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサメタゾンメタスルホ安息香酸エステルナトリウム、パラメタゾン、パラメタゾン酢酸エステル、ベタメタゾン、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル、ベタメタゾン吉草酸エステル、ベタメタゾン酢酸エステル、ベタメタゾン酪酸エステルプロピオン酸エステルおよびベタメタゾンリン酸エステルナトリウム等）、インターフェロンβ-1a、インターフェロンβ-1b、酢酸グラチラマー、Mitoxantrone、Azathioprine、Cyclophosphamide、Ciclospolin、Methotrexate、Cladribine、副腎皮質刺激ホルモン（ACTH）、Corticotropin、Mizoribine、Tacrolimus、FingolimodおよびAlemtuzumab等と組み合わせて使用してもよい。
　また、例えば、本発明の二重特異性タンパク質を全身エリテマトーデスの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、上記記載のステロイド薬）あるいは免疫抑制剤（例えば、Ciclospolin、TacrolimusおよびFingolimod等）と組み合わせて使用してもよい。
　例えば、本発明の二重特異性タンパク質を関節リウマチの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、ステロイド薬（例えば、上記記載のステロイド薬）、抗リウマチ薬（例えば、Methotrexate、Sulfasalazine、Bucillamine、Leflunomide、MizoribineおよびTacrolimus等）あるいは抗サイトカイン薬（例えば、Infliximab、Adalimumab、Tocilizumab、Etanercept、Abatacept、GolimumabおよびCertolizumab等）等と組み合わせて使用してもよい。
　その他の自己免疫疾患の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、本発明の二重特異性タンパク質と、上記に記載した他の薬剤の何れかの一以上と組み合わせて使用してもよい。
　一方、本発明の二重特異性タンパク質を、血液がんの予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に適用する場合、例えば、アルキル化薬（例えば、Dacarbazine、Nimustine、Temozolomide、Fotemustine、Bendamustine、Cyclophosphamide、Ifosfamide、Carmustine、ChlorambucilおよびProcarbazine等）、白金製剤（例えば、Cisplatin、Carboplatin、NedaplatinおよびOxaliplatin等）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸代謝拮抗薬（例えば、Pemetrexed、LeucovorinおよびMethotrexate等）、ピリジン代謝阻害薬（例えば、TS-1（登録商標）、5-fluorouracil、UFT、Carmofur、Doxifluridine、FdUrd、CytarabineおよびCapecitabine等）、プリン代謝阻害薬（例えば、Fludarabine、CladribineおよびNelarabine等）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害薬、ヌクレオチドアナログ（例えば、Gemcitabine等））、トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、Irinotecan、NogitecanおよびEtoposide等）、微小管重合阻害薬（例えば、Vinblastine、Vincristine、Vindesine、VinorelbineおよびEribulin等）、微小管脱重合阻害薬（例えば、DocetaxelおよびPaclitaxel等）、抗腫瘍性抗生物質（例えば、Bleomycin、Mitomycin C、Doxorubicin、Daunorubicin、Idarubicin、Etoposide、Mitoxantrone、Vinblastine、Vincristine、Peplomycin、Amrubicin、AclarubicinおよびEpirubicin等）、サイトカイン製剤（例えば、IFN-α2a、IFN-α2b、ペグIFN-α2b、天然型IFN-βおよびインターロイキン-2等）、分子標的薬、がん免疫治療薬およびその他の抗体医薬等から選択される何れか一以上の薬剤と組み合わせて使用してもよい。
　ここで、分子標的薬としては、例えば、ALK阻害剤（例えば、Crizotinib、Ceritinib、Ensartinib、AlectinibおよびLorlatinib等）、BCR-ABL阻害剤（例えば、ImatinibおよびDasatinib等）、Axl阻害剤（例えば、ONO-7475およびBGB324等）、CDK阻害剤（例えば、Dinaciclib、Abemaciclib、PalbociclibおよびTrilaciclib等）、Btk阻害剤（例えば、IbrutinibおよびAcalabrutinib等）、PI3K-δ/γ阻害剤（例えば、Umbralisib、ParsaclisibおよびIPI-549等）、JAK-1/2阻害剤（例えば、ItacitinibおよびRuxolitinib等）、FAK阻害剤（例えば、Defactinib等）、Syk/FLT3 dual阻害剤（例えば、Mivavotinib等）、ATR阻害剤（例えば、Ceralasertib等）、Wee1キナーゼ阻害剤（例えば、Adavosertib等）、mTOR阻害剤（例えば、Temsirolimus、Everolimus、VistusertibおよびIrinotecan等）、HDAC阻害剤（例えば、Vorinostat、Romidepsin、Entinostat、Chidamide、Mocetinostat、Citarinostat、PanobinostatおよびValproate等）、EZH2阻害剤（例えば、Tazemetostat等）、STAT3阻害剤（例えば、Napabucasin等）、DNMT阻害剤（例えば、Azacitidine等）、BCL-2阻害剤（例えば、NavitoclaxおよびVenetoclax等）、SMO阻害剤（例えば、Vismodegib等）、抗CD20抗体（例えば、Rituximab、Blontuvetmab、Epitumomab、Ibritumomab tiuxetan、Ocaratuzumab、Ocrelizumab、Technetium (99mTc) nofetumomab merpentan、Tositumomab、Veltuzumab、Ofatumumab、Ublituximab、ObinutuzumabおよびNofetumomab等）、抗CD30抗体（例えば、Brentuximab VedotinおよびIratumumab等）、抗CD38抗体（例えば、Daratumumab、Isatuximab、Mezagitamab、AT13/5およびMOR202等）、抗DR5抗体（例えば、DS-8273a等）、抗TNFRSF10B抗体（例えば、Benufutamab、Conatumumab、Drozitumab、Lexatumumab、Tigatuzumab、Eftozanermin alfaおよびDS-8273a等）、抗CD40抗体（例えば、Bleselumab、Dacetuzumab、Iscalimab、Lucatumumab、Mitazalimab、Ravagalimab、Selicrelumab、Teneliximab、ABBV-428およびAPX005M等）、抗CD70抗体(例えば、Cusatuzumab、Vorsetuzumab、Vorsetuzumab mafodotinおよびARGX-110等)、抗TNFRSF10A抗体（例えば、Mapatumumab等）、抗CD79b抗体（例えば、Iladatuzumab、Iladatuzumab vedotinおよびPolatuzumab vedotin等）、TNFSF11抗体（例えば、Denosumab等）、抗NCAM1抗体（例えば、Lorvotuzumab mertansine等）、抗CD37抗体（例えば、Lilotomab、Lutetium (177lu) lilotomab satetraxetan、Naratuximab、Naratuximab emtansineおよびOtlertuzumab等）、抗CD200抗体（例えば、Samalizumab等）、抗CD30-CD16A二重特異性抗体（例えば、AFM13等）、抗IL3RA-CD3二重特異性抗体（FlotetuzumabおよびVibecotamab等）、抗GPRC5D-CD3二重特異性抗体（例えば、Talquetamab）、抗CD3-CD19二重特異性抗体（例えば、DuvortuxizumabおよびBlinatumomab等）、抗TNFRSF17-CD3二重特異性抗体（例えば、Teclistamab）、抗CLEC12A-CD3二重特異性抗体（例えば、Tepoditamab）、および抗CD20-CD3二重特異性抗体（例えば、Plamotamab、Odronextamab、Mosunetuzumab、Glofitamab、EpcoritamabおよびREGN1979等）等が挙げられる。
　また、がん免疫治療薬としては、例えば、抗PD-1抗体（例えば、Nivolumab、Cemiplimab、Pembrolizumab、Spartalizumab、Tislelizumab、Dostarlimab、toripalimab、Camrelizumab、Genolimzumab、Sintilimab、Lodapolimab、Retifanlimab、Balstilimab、Serplulimab、Budigalimab、Prolgolimab、Sasanlimab、Cetrelimab、Zimberelimab、Penpulimab、AMP-514、STI-A1110、ENUM 388D4、ENUM 244C8、GLS010、CS1003、BAT-1306、AK103、BI 754091、LZM009、CMAB819、Sym021、SSI-361、JY034、ISU106、HX008およびCX-188等）、抗PD-L1抗体（例えば、Atezolizumab、Avelumab、Durvalumab、Manelimab、Pacmilimab、Envafolimab、Cosibelimab、BMS-936559、STI-1010、STI-1011、STI-1014、SHR-1316、CS1001、MSB2311、BGB-A333、KL-A167、AK106、AK104、ZKAB001、FAZ053、CBT-502およびJS003等）、PD-1拮抗剤（例えば、AUNP-12、BMS-M1～BMS-M10の各化合物、BMS-1、BMS-2、BMS-3、BMS-8、BMS-37、BMS-200、BMS-202、BMS-230、BMS-242、BMS-1001、BMS-1166、Incyte-1～Incyte-6の各化合物、CAMC-1～CAMC-4の各化合物、RG_1およびDPPA-1等）、PD-L1/VISTA拮抗剤（例えば、CA-170等）、PD-L1/TIM3拮抗剤（例えば、CA-327等）、抗PD-L2抗体、PD-L1融合タンパク質、PD-L2融合タンパク質（例えば、AMP-224等）、抗CTLA-4抗体（例えば、Ipilimumab、Zalifrelimab、NurulimabおよびTremelimumab等）、抗LAG-3抗体（例えば、Relatlimab、Ieramilimab、Fianlimab、EncelimabおよびMavezelimab等）、抗TIM3抗体（例えば、MBG453およびCobolimab等）、抗KIR抗体（例えば、Lirilumab、IPH2101、LY3321367およびMK-4280等）、抗BTLA抗体、抗TIGIT抗体（例えば、Tiragolumab、Etigilimab、VibostolimabおよびBMS-986207等）、抗VISTA抗体（例えば、Onvatilimab等）、抗CD137抗体（例えば、UrelumabおよびUtomilumab等）、抗CSF-1R抗体・CSF-1R阻害剤（例えば、Cabiralizumab、Emactuzumab、LY3022855、Axatilimab、MCS-110、IMC-CS4、AMG820、Pexidartinib、BLZ945およびARRY-382等）、抗OX40抗体（例えば、MEDI6469、Ivuxolimab、MEDI0562、MEDI6383、Efizonerimod、GSK3174998、BMS-986178およびMOXR0916等）、抗HVEM抗体、抗CD27抗体（例えば、Varlilumab等）、抗GITR抗体・GITR融合蛋白質（例えば、Efaprinermin alfa、Efgivanermin alfa、MK-4166、INCAGN01876、GWN323およびTRX-518等）、抗CD28抗体、抗CCR4抗体（例えば、Mogamulizumab等）、抗B7-H3抗体（例えば、Enoblituzumab、Mirzotamab、Mirzotamab clezutoclaxおよびOmburtamab等）、抗ICOSアゴニスト抗体（例えば、VopratelimabおよびGSK3359609等）、抗CD4抗体（例えば、ZanolimumabおよびIT1208等）、抗DEC-205抗体/NY-ESO-1融合蛋白質（例えば、CDX-1401等）、抗SLAMF7抗体（例えば、Azintuxizumab、Azintuxizumab vedotinおよびElotuzumab等）、抗CD73抗体（例えば、OleclumabおよびBMS-986179等）、PEG化IL-2（例えば、Bempegaldesleukin）、抗CD40アゴニスト抗体（例えば、ABBV-428、APX005MおよびRO7009789等）、IDO阻害剤（例えば、Epacadostat、IndoximodおよびLinrodostat等）、TLRアゴニスト（例えば、Motolimod、CMP-001、G100、Tilsotolimod、SD-101およびMEDI9197等）、アデノシンA2A受容体拮抗剤（例えば、Preladenant、AZD4635、TaminadenantおよびCiforadenant等）、抗NKG2A抗体（例えば、Monalizumab等）、抗CSF-1抗体（例えば、PD0360324等）、免疫増強剤（例えば、PV-10等）、IL-15スーパーアゴニスト（例えば、ALT-803）、可溶性LAG3（例えば、IMP321等）、抗CD47抗体・CD47拮抗剤（例えば、ALX148等）およびIL-12拮抗剤（例えば、M9241等）等が挙げられる。
　さらに、その他の抗体医薬としては、例えば、抗IL-1β抗体（例えば、Canakinumab等）および抗CCR2抗体（例えば、Plozalizumab等）等が挙げられる。
　本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本発明の記載に基づき種々の変更、修飾が当業者には可能であり、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。
実施例１：PD-1/CD4二重特異性タンパク質(PD-1/CD4 scDb)の調製
　本実施例におけるPD-1/CD4二重特異性タンパク質PD-1/CD4 scDbは、抗マウスCD4抗体のVHおよびVLと抗マウスPD-1抗体のVHおよびVLから構成されるsingle-chain Diabody（以下、「scDb」と略記する。）である。図１にその構造の概略を示す。当該scDbは、各抗体の可変領域ならびにペプチドリンカーをコードするDNAを所定の順番で連結して作製されたDNAを発現ベクターに挿入し、これを動物細胞（Free Style 293F細胞）にて発現させた。培養上清中に産生されたscDbは、回収後、Ni-NTAアフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにて精製した。本実施例で調製されたPD-1/CD4 scDbは９種類あり、そのうちの一つを「Clone-1」とした。なお、本実施例のscDbを各々構成する抗マウスCD4抗体および抗マウスPD-1抗体の各可変領域（VHおよびVL）を各々コードするcDNAは、公知の遺伝子クローニング法に準じた方法に従って取得した。本実施例では、一例として、抗マウスPD-1抗体としてJ43を、抗マウスCD4抗体としてYTA3.1.2、YTS191またはGK1.5を使用した。
実施例２：PD-1×CD4二重特異性タンパク質(PD-1/CD4 scDb-Fc)の調製
　本実施例におけるPD-1/CD4 scDb-Fcは、抗マウスCD4抗体のVHおよびVLと抗マウスPD-1抗体のVHおよびVLから構成される二重特異性scDbに、ヒンジ部位からCH3領域までのヒトIgG1定常領域（IgG1定常領域（ヒンジ/CH3））を融合させたポリペプチド（以下、ポリペプチドＡと略記する。）、およびIgG1定常領域（ヒンジ/CH3）のみからなるポリペプチド（以下、ポリペプチドＢと略記する。）の二つのタンパク質の会合により構成されるヘテロ二量体である。当該ヘテロ二量体は、Fcγ受容体結合性を消失させた変異を有する。図２にその構造の概略を示す。
　ポリペプチドＡをコードするDNAは、PD-1/CD4 scDbを作製する上で、実施例１において取得した抗マウスCD4抗体ならびに抗マウスPD-1抗体の各VHおよびVLを各々コードするDNAを、ペプチドリンカーをコードするDNAとともに所定の順序で連結して作製した。なお、ポリペプチドＡおよびＢの一部を構成する、IgG1定常領域（ヒンジ/CH3）をコードするDNAは、公知の遺伝子情報をもとにPCR法にてそのcDNAを取得した。ポリペプチドＡおよびＢを各々コードする各DNA配列を挿入した発現ベクターを、Free Style 293F細胞に遺伝子導入して発現させ、培養上清中に産生させた。その培養上清を回収した後、Protein Aアフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにて精製することにより調製した。本実施例で調製されたPD-1/CD4 scDb-Fcは９種類あり、そのうちの一つを「Clone-2」とした。
実施例３：PD-1/CD4二重特異性タンパク質の結合性評価
　マウスPD-1発現CHO-S細胞を用いたフローサイトメトリーにて、PD-1/CD4二重特異性タンパク質のマウスPD-1への結合性を評価した。PD-1/CD4 scDbのＣ末端には6×Hisタグが付加されており、同細胞に結合した各組み換え蛋白の検出には、Alexa Fluor 488標識抗Hisタグ抗体（MBL、型番D291-A48）を使用した。結果を図３に示す。一方、PD-1/CD4 scDb-FcにはヒトIgG1定常領域が含まれるため、マウスPD-1への結合検出には、PE標識抗ヒトIgG-Fc抗体（Thermo Fisher Scientific、型番H10104）を使用した。結果を図４に示す。
　何れのPD-1/CD4二重特異性タンパク質も、マウスPD-1発現CHO-S細胞に結合することが確認された。一方、コントロールとして用いたCHO-S細胞への結合は認められなかったことから、その結合が発現させたPD-1に特異的であることが確認された。続いて、同様の方法により、マウスCD4発現CHO-K1細胞を用いてPD-1/CD4二重特異性タンパク質がマウスCD4に特異的に結合することを確認した。結果を図５および６に示す。
実施例４：PD-1/CD4二重特異性タンパク質の実験的アレルギー性脳脊髄炎マウスモデル（EAEモデル）におけるin vivo作用
　C57BL/6マウスを用いたEAEモデルにおいて、PD-1/CD4二重特異性タンパク質のin vivo作用を評価した。結核死菌H37Ra（BD Biosciences、型番231141）と不完全フロイントアジュバント（BD Biosciences、型番263910）を混合して、4 mg/mLの結核死菌H37Raを含む完全フロイントアジュバント（CFA）を調製した。1 mg/mLのMOGペプチド（ANASPEC、型番AS-60130）と等量のCFAを混合してエマルジョンを調製し、EAEモデルの惹起剤とした。200 μLの当該惹起剤を当該C57BL/6マウス尾根部に皮下投与し、その免疫処置当日および２日目に、各々200 μLの1 μg/mL百日咳毒素（SIGMA-ALDRICH、型番P7208）を尾静脈内投与した。次に、当該C57BL/6マウスに、免疫後６日から10日までの５日間、Clone-1またはClone-2を１日１回腹腔内投与した。免疫処置日以降、神経症状を大貫らの方法に準じて評価した（Onuki M，et al., Microsc Res Tech 2001;52:731-9.）。神経症状の程度をスコア化し（正常：スコア０；尾弛緩：スコア１；後肢部分麻痺：スコア２；後肢麻痺：スコア３；前肢麻痺：４および瀕死または死亡：スコア５）、複数の神経症状が認められる場合は高い値を評価日の神経症状スコアとして採用した。免疫処置日から免疫後30日までの観察期間の累積神経症状スコアを集計した。図７にその評価結果を示す。
　Clone-1およびClone-2は、EAEモデルにおいて神経症状を抑制した。
実施例５：PD-1/CD4二重特異性タンパク質のin vivoマウス血中サイトカイン濃度に対する影響
　マウスに本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質を投与し、in vivoで血漿中サイトカイン濃度の変化を評価した。C57BL/6マウスに、PD-1/CD4二重特異性タンパクとして、0.5 mg/kgのClone-1ならびに、1.0 mg/kgのClone-2、Clone-J、Clone-LおよびClone-Oを各々投与した。また、特許文献１に開示されたPD-1/CD3二重特異性scDb(J43×2C11_scDb)を0.5 mg/kgの投与量で腹腔内投与した。各々について投与から３時間後にマウスの尾静脈から採血を行い、血漿を分離した。血漿中のインターフェロン－γ（IFN-γ）、腫瘍壊死因子－α(TNF-α)およびインターロイキン-2(IL-2)濃度を、BD Cytometric Bead Arrayのマウス可溶性タンパクFlex Set（BD Biosciences、型番558296、558299および558297）を用いて、フローサイトメーター（BD Biosciences、BD FACSCantoII）で測定した。その結果を図８に示す。なお、図中の血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度(pg/mL)は、平均値±標準誤差(N=5)で示した。
　J43×2C11_scDbはマウスの血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度を増加させた。一方、本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、いずれも血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度を増加させなかった。標的分子がCD4である場合、投与時のサイトカイン産生または放出の誘導が改善された。
実施例６：PD-1/CD4二重特異性タンパク質のＢ細胞リンパ腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用
　健常人末梢血由来pan-T細胞(STEMCELL，型番ST-70024）（ヒトＴ細胞）を用いて、Ｂ細胞リンパ腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用を評価する。Ｕ底96ウェルプレートにヒトＴ細胞と、Vybrant DiD Cell-Labeling Solution（Thermo Fisher，型番V22887）で標識したＢ細胞リンパ腫細胞株EB-1またはヒトPD-1強制発現SU-DHL-4を播種し、PD-1/CD4二重特異性タンパク質を添加して、48時間共培養する。各ウェルから細胞を回収し、Cell Viability Solutionで染色して、フローサイトメーターでDiD陽性生細胞数をカウントする。PD-1/CD4二重特異性タンパク質非添加サンプルのDiD陽性生細胞数を100％として、同タンパク質添加サンプルのDiD陽性生細胞の減少率を細胞増殖抑制率として算出する。
実施例７：PD-1/CD4二重特異性タンパク質の多発性骨髄腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用
　健常人末梢血由来pan-T細胞（STEMCELL，型番ST-70024）（ヒトＴ細胞）を用いて、多発性骨髄腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用を評価する。Ｕ底96ウェルプレートにヒトＴ細胞と、Vybrant DiD Cell-Labeling Solution（Thermo Fisher，型番V22887）で標識した多発性骨髄腫細胞株RPMI8226を播種し、PD-1/CD4二重特異性組換え蛋白を添加して、48時間共培養する。各ウェルから細胞を回収し、Cell Viability Solutionで染色して、フローサイトメーターでDiD陽性生細胞数をカウントする。PD-1/CD4二重特異性タンパク質非添加サンプルのDiD陽性生細胞数を100％として、同タンパク質白添加サンプルのDiD陽性生細胞の減少率を細胞増殖抑制率として算出する。
実施例８：PD-1/CD4二重特異性タンパク質の成人Ｔ細胞性リンパ腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用
　健常人末梢血由来pan-T細胞（STEMCELL，型番ST-70024）（ヒトＴ細胞）を用いて、成人Ｔ細胞性リンパ腫細胞株に対する細胞増殖抑制作用を評価する。Ｕ底96ウェルプレートにヒトＴ細胞と、Vybrant DiD Cell-Labeling Solution（Thermo Fisher，型番V22887）で標識した成人Ｔ細胞性リンパ腫細胞株ILT-Matを播種し、PD-1/CD4二重特異性組換え蛋白を添加して、48時間共培養する。各ウェルから細胞を回収し、Cell Viability Solutionで染色して、フローサイトメーターでDiD陽性生細胞数をカウントする。PD-1/CD4二重特異性タンパク質非添加サンプルのDiD陽性生細胞数を100％として、同タンパク質添加サンプルのDiD陽性生細胞の減少率を細胞増殖抑制率として算出する。
実施例９：PD-1/CD4二重特異性タンパク質の急性Ｔ細胞性白血病細胞株に対する細胞増殖抑制作用
　健常人末梢血由来pan-T細胞（STEMCELL，型番ST-70024）（ヒトＴ細胞）を用いて、急性Ｔ細胞性白血病細胞株に対する細胞増殖抑制作用を評価する。Ｕ底96ウェルプレートにヒトＴ細胞と、Vybrant DiD Cell-Labeling Solution（Thermo Fisher，型番V22887）で標識したヒトPD-1強制発現Jurkat（急性Ｔ細胞性白血病細胞株）を播種し、PD-1/CD4二重特異性タンパク質を添加して、48時間共培養する。各ウェルから細胞を回収し、Cell Viability Solutionで染色して、フローサイトメーターでDiD陽性生細胞数をカウントする。PD-1/CD4二重特異性タンパク質非添加サンプルのDiD陽性生細胞数を100％として、同タンパク質添加サンプルのDiD陽性生細胞の減少率を細胞増殖抑制率として算出する。
　本発明のPD-1/CD4二重特異性タンパク質は、自己免疫疾患もしくは移植片対宿主病(GVHD)あるいは血液がん等の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に有用である。

Claims (15)

  1. PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有するPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  2. 当該第一アームが、抗PD-1抗体のVHおよびVLを含むことを特徴とする請求項１記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  3. 当該第二アームが、抗CD4抗体のVHおよびVLを含むことを特徴とする請求項１または２記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  4. IgG抗体である、請求項１～３の何れか一項に記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  5. IgG抗体が、IgG1抗体またはIgG4抗体である、請求項４記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  6. PD-1の抑制性シグナルを伝達する、請求項１～５の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  7. 当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用またはそれら両相互作用を許容する、請求項１～６の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  8. 投与中または投与後24時間以内のサイトカイン産生が十分に低減された、請求項１～７の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  9. Ｔ細胞リンパ球に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合する、請求項１～８の何れか一項記載のPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  10. PD-1に特異的に結合する第一アームおよびCD4に特異的に結合する第二アームを有する、単離PD-1/CD4二重特異性抗体であって、
    （ａ）　当該第一アームが抗PD-1抗体のVHおよびVLを含み、当該第二アームが抗CD4抗体のVHおよびVLを含み、
    （ｂ）　Ｔ細胞リンパ球上に発現するPD-1およびCD4各々に特異的に結合し、ならびに
    （ｃ）　（ｉ）PD-1の抑制性シグナルを伝達し、（ii）当該第一アームがPD-1およびPD-L1との相互作用、PD-1およびPD-L2との相互作用もしくはそれら両相互作用を許容し、および／または（iii）投与中または投与後24時間以内のサイトカイン産生が十分に低減された、当該抗体。
  11. 請求項１～１０の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  12. 請求項１～１０の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片を有効成分として含む、自己免疫疾患または移植片対宿主病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療剤。
  13. 請求項１～１０の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片の有効量を患者に投与することからなる、自己免疫疾患または移植片対宿主病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療方法。
  14. 自己免疫疾患または移植片対宿主病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療に使用される、請求項１～１０の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片。
  15. 自己免疫疾患または移植片対宿主病の予防、症状進展抑制、再発抑制および／または治療のための医薬の製造における、請求項１～１０の何れか一項から選択されるPD-1/CD4二重特異性抗体またはその抗体断片の使用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023143478A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Crown Bioscience Inc. Novel anti-cd4 and anti-pd-l1 bispecific antibodies

Citations (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
EP0120694A2 (en) 1983-03-25 1984-10-03 Celltech Limited Processes for the production of multichain polypeptides or proteins
US4801687A (en) 1986-10-27 1989-01-31 Bioprobe International, Inc. Monoclonal antibody purification process using protein A
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0314161A1 (en) 1987-10-28 1989-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Human immunoglobulines produced by recombinant DNA techniques
EP0481790A2 (en) 1990-10-17 1992-04-22 The Wellcome Foundation Limited Antibody production
US5151504A (en) 1989-11-17 1992-09-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for purification of monoclonal antibodies
EP0523949A1 (en) 1991-07-15 1993-01-20 The Wellcome Foundation Limited Production of antibodies
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
WO1995019374A1 (en) 1994-01-14 1995-07-20 Pharmacia Ab Bacterial receptor structures
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5569825A (en) 1990-08-29 1996-10-29 Genpharm International Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
WO1999016873A1 (de) 1997-09-26 1999-04-08 Arne Skerra Anticaline
US5939598A (en) 1990-01-12 1999-08-17 Abgenix, Inc. Method of making transgenic mice lacking endogenous heavy chains
US5969108A (en) 1990-07-10 1999-10-19 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO2000063243A1 (en) 1999-04-19 2000-10-26 Biovitrum Ab Derivatives of the b or z domain from staphylococcal protein a (spa) interacting with at least one domain of human factor viii
WO2000063403A2 (en) 1999-04-15 2000-10-26 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell using sequences encoding adenovirus e1 protein
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6162963A (en) 1990-01-12 2000-12-19 Abgenix, Inc. Generation of Xenogenetic antibodies
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
WO2001004144A2 (de) 1999-07-13 2001-01-18 Scil Proteins Gmbh Design von beta-faltblatt-proteinen mit spezifischen bindungseigenschaften
WO2001064942A1 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Phylos, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2003011911A1 (en) 2001-07-31 2003-02-13 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to pd-1
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
WO2004072286A1 (ja) 2003-01-23 2004-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. ヒトｐｄ−１に対し特異性を有する物質
WO2004106368A1 (de) 2003-05-28 2004-12-09 Scil Proteins Gmbh Generierung künstlicher bindungsproteine auf der grundlage von ubiquitin-proteinen
WO2006121168A1 (en) 2005-05-09 2006-11-16 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
WO2008156712A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 N. V. Organon Antibodies to human programmed death receptor pd-1
WO2010029435A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
WO2010029434A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
WO2010036959A2 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Dana-Farber Cancer Institute Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses therefor
WO2011023685A1 (en) 2009-08-27 2011-03-03 Covagen Ag Il-17 binding compounds and medical uses thereof
WO2011110604A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Pd-1 antibody
WO2011110621A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Biological products: humanised agonistic anti-pd-1 antibodies
WO2013022091A1 (ja) 2011-08-11 2013-02-14 小野薬品工業株式会社 Ｐｄ－１アゴニストからなる自己免疫疾患治療剤
WO2013157954A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Merus B.V. Methods and means for the production of ig-like molecules
WO2014051433A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Merus B.V. BISPECIFIC IgG ANTIBODIES AS T CELL ENGAGERS
WO2014179664A2 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
WO2014194302A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
WO2014206107A1 (zh) 2013-06-26 2014-12-31 上海君实生物医药科技有限公司 抗pd-1抗体及其应用
WO2015036394A1 (en) 2013-09-10 2015-03-19 Medimmune Limited Antibodies against pd-1 and uses thereof
WO2015035606A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Beigene, Ltd. Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
WO2015085847A1 (zh) 2013-12-12 2015-06-18 上海恒瑞医药有限公司 Pd-1抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2015112800A1 (en) 2014-01-23 2015-07-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to pd-1
WO2015125652A1 (ja) * 2014-02-21 2015-08-27 Ｉｄａｃセラノスティクス株式会社 固形がんの治療剤
WO2015190538A1 (ja) * 2014-06-11 2015-12-17 Ｉｄａｃセラノスティクス株式会社 免疫チェックポイント制御剤の副作用低減方法
WO2016014688A2 (en) 2014-07-22 2016-01-28 Junzhuan Qiu Anti-pd-1 antibodies
WO2016015685A1 (zh) 2014-07-30 2016-02-04 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
WO2016068801A1 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Agency For Science, Technology And Research Anti-pd-1 antibodies
WO2016077397A2 (en) 2014-11-11 2016-05-19 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
US20160145355A1 (en) * 2013-06-24 2016-05-26 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
WO2016092419A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Rinat Neuroscience Corp. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
WO2016106159A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Enumeral Biomedical Holding, Inc. Anti-pd-1 antibodies
WO2016127179A2 (en) 2015-02-06 2016-08-11 Kadmon Corporation, Llc Immunomodulatory agents
WO2016197497A1 (zh) 2015-06-09 2016-12-15 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
WO2016210129A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Novel pd-1 immune modulating agents
WO2017011580A2 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof
WO2017019846A1 (en) 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
WO2017016497A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Harbour Biomed Limited Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017025016A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017025051A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017024515A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Cayman) Inc. Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017040790A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
WO2017055443A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd1 antibodies and methods of use
WO2017055547A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
WO2017058115A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Asia Biotech Pte. Ltd. Pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017058859A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Celgene Corporation Pd-1 binding proteins and methods of use thereof
WO2017079116A2 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and tim-3 and their uses
WO2017087599A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Lyvgen Biopharma Holdings Limited Anti-pd-1 antibodies and therapeutic uses thereof
WO2017096026A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-1 and methods of use thereof
WO2017106656A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Novartis Ag Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
WO2017107885A1 (zh) 2015-12-23 2017-06-29 杭州尚健生物技术有限公司 抗人程序性死亡受体1抗体及其制备方法和用途
WO2017124050A1 (en) 2016-01-14 2017-07-20 Bps Bioscience, Inc. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017125815A2 (en) 2016-01-22 2017-07-27 MabQuest SA Immunological reagents
WO2017132827A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017166804A1 (zh) 2016-04-01 2017-10-05 中山康方生物医药有限公司 抗pd-1的单克隆抗体
WO2017198741A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti pd-1 and anti-lag3 antibodies for cancer treatment
WO2017201766A1 (zh) 2016-05-24 2017-11-30 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人pd-1人源化单克隆抗体及其应用
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
WO2018020476A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Anti-pd-1 antibodies
WO2018026248A1 (ko) 2016-08-05 2018-02-08 주식회사 와이바이오로직스 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도
WO2018034226A1 (ja) 2016-08-15 2018-02-22 国立大学法人北海道大学 抗ｐｄ－１抗体
WO2018036472A1 (zh) 2016-08-23 2018-03-01 中山康方生物医药有限公司 一种抗pd1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
WO2018052818A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Henlix, Inc. Anti-pd-1 antibodies
WO2018053106A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-pd-1(cd279) antibodies
WO2018068336A1 (en) 2016-10-15 2018-04-19 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd Pd-1 antibodies
WO2018085468A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (pd-1)
WO2018085358A1 (en) 2016-11-02 2018-05-11 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to pd-1 and uses thereof
WO2018087143A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Actigen Ltd Anti-pd-1 antibodies
WO2018091661A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
WO2018119474A2 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Remd Biotherapeutics, Inc. Immunotherapy using antibodies that bind programmed death 1 (pd-1)
WO2018113258A1 (zh) 2016-12-22 2018-06-28 安源医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其用途
US20180222982A1 (en) 2015-07-29 2018-08-09 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
WO2018162944A1 (en) 2017-03-04 2018-09-13 Shenzhen Runshin Bioscience Recombinant antibodies to programmed death 1 (pd-1) and uses therefor
WO2018192089A1 (zh) 2017-04-20 2018-10-25 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制人pd-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用
US20180312564A1 (en) 2013-04-05 2018-11-01 Versitech Limited Antibodies Against Novel PD1 Isoforms and Uses Thereof
WO2018210230A1 (zh) 2017-05-16 2018-11-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种pd-l1抗体药物组合物及其用途
WO2018217227A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Immunomedics, Inc. Novel anti-pd-1 checkpoint inhibitor antibodies that block binding of pd-l1 to pd-1
WO2018226580A2 (en) 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use
WO2019005635A2 (en) 2017-06-25 2019-01-03 Systimmune, Inc. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF PREPARATION AND USE
WO2019051164A1 (en) 2017-09-07 2019-03-14 Augusta University Research Institute, Inc. ANTIBODIES AGAINST PROTEIN 1 OF PROGRAMMED CELL DEATH

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2542590T4 (da) * 2010-03-05 2020-07-13 Univ Johns Hopkins Sammensætninger og fremgangsmåde til målrettede immunomodulatoriske antistof-fer og fusionproteiner

Patent Citations (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
EP0120694A2 (en) 1983-03-25 1984-10-03 Celltech Limited Processes for the production of multichain polypeptides or proteins
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4801687A (en) 1986-10-27 1989-01-31 Bioprobe International, Inc. Monoclonal antibody purification process using protein A
EP0314161A1 (en) 1987-10-28 1989-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Human immunoglobulines produced by recombinant DNA techniques
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5698767A (en) 1988-06-14 1997-12-16 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5403484A (en) 1988-09-02 1995-04-04 Protein Engineering Corporation Viruses expressing chimeric binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5571698A (en) 1988-09-02 1996-11-05 Protein Engineering Corporation Directed evolution of novel binding proteins
US6180370B1 (en) 1988-12-28 2001-01-30 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins and methods of making the same
US5585089A (en) 1988-12-28 1996-12-17 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5151504A (en) 1989-11-17 1992-09-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for purification of monoclonal antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6114598A (en) 1990-01-12 2000-09-05 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6162963A (en) 1990-01-12 2000-12-19 Abgenix, Inc. Generation of Xenogenetic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5939598A (en) 1990-01-12 1999-08-17 Abgenix, Inc. Method of making transgenic mice lacking endogenous heavy chains
US5580717A (en) 1990-05-01 1996-12-03 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5969108A (en) 1990-07-10 1999-10-19 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5569825A (en) 1990-08-29 1996-10-29 Genpharm International Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0481790A2 (en) 1990-10-17 1992-04-22 The Wellcome Foundation Limited Antibody production
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
EP0523949A1 (en) 1991-07-15 1993-01-20 The Wellcome Foundation Limited Production of antibodies
US6582915B1 (en) 1991-12-02 2003-06-24 Medical Research Council Production of anti-self bodies from antibody segment repertories and displayed on phage
US6593081B1 (en) 1991-12-02 2003-07-15 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US6555313B1 (en) 1991-12-02 2003-04-29 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US6544731B1 (en) 1991-12-02 2003-04-08 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertories and displayed on phage
US6521404B1 (en) 1991-12-02 2003-02-18 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
WO1995019374A1 (en) 1994-01-14 1995-07-20 Pharmacia Ab Bacterial receptor structures
WO1999016873A1 (de) 1997-09-26 1999-04-08 Arne Skerra Anticaline
WO2000063403A2 (en) 1999-04-15 2000-10-26 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell using sequences encoding adenovirus e1 protein
WO2000063243A1 (en) 1999-04-19 2000-10-26 Biovitrum Ab Derivatives of the b or z domain from staphylococcal protein a (spa) interacting with at least one domain of human factor viii
WO2001004144A2 (de) 1999-07-13 2001-01-18 Scil Proteins Gmbh Design von beta-faltblatt-proteinen mit spezifischen bindungseigenschaften
WO2001064942A1 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Phylos, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2003011911A1 (en) 2001-07-31 2003-02-13 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to pd-1
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
WO2004072286A1 (ja) 2003-01-23 2004-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. ヒトｐｄ−１に対し特異性を有する物質
WO2004106368A1 (de) 2003-05-28 2004-12-09 Scil Proteins Gmbh Generierung künstlicher bindungsproteine auf der grundlage von ubiquitin-proteinen
WO2006121168A1 (en) 2005-05-09 2006-11-16 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
WO2008156712A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 N. V. Organon Antibodies to human programmed death receptor pd-1
WO2010029435A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
WO2010029434A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
WO2010036959A2 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Dana-Farber Cancer Institute Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses therefor
WO2011023685A1 (en) 2009-08-27 2011-03-03 Covagen Ag Il-17 binding compounds and medical uses thereof
WO2011110604A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Pd-1 antibody
WO2011110621A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Biological products: humanised agonistic anti-pd-1 antibodies
WO2013022091A1 (ja) 2011-08-11 2013-02-14 小野薬品工業株式会社 Ｐｄ－１アゴニストからなる自己免疫疾患治療剤
WO2013157954A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Merus B.V. Methods and means for the production of ig-like molecules
WO2013157953A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Merus B.V. Methods and means for the production of ig-like molecules
WO2014051433A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Merus B.V. BISPECIFIC IgG ANTIBODIES AS T CELL ENGAGERS
US20180312564A1 (en) 2013-04-05 2018-11-01 Versitech Limited Antibodies Against Novel PD1 Isoforms and Uses Thereof
WO2014179664A2 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
WO2014194302A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
US20160145355A1 (en) * 2013-06-24 2016-05-26 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
WO2014206107A1 (zh) 2013-06-26 2014-12-31 上海君实生物医药科技有限公司 抗pd-1抗体及其应用
WO2015036394A1 (en) 2013-09-10 2015-03-19 Medimmune Limited Antibodies against pd-1 and uses thereof
WO2015035606A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Beigene, Ltd. Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
WO2015085847A1 (zh) 2013-12-12 2015-06-18 上海恒瑞医药有限公司 Pd-1抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2015112800A1 (en) 2014-01-23 2015-07-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to pd-1
WO2015125652A1 (ja) * 2014-02-21 2015-08-27 Ｉｄａｃセラノスティクス株式会社 固形がんの治療剤
WO2015190538A1 (ja) * 2014-06-11 2015-12-17 Ｉｄａｃセラノスティクス株式会社 免疫チェックポイント制御剤の副作用低減方法
WO2016014688A2 (en) 2014-07-22 2016-01-28 Junzhuan Qiu Anti-pd-1 antibodies
WO2016015685A1 (zh) 2014-07-30 2016-02-04 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
WO2016068801A1 (en) 2014-10-27 2016-05-06 Agency For Science, Technology And Research Anti-pd-1 antibodies
WO2016077397A2 (en) 2014-11-11 2016-05-19 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
WO2016092419A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Rinat Neuroscience Corp. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
WO2016106159A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Enumeral Biomedical Holding, Inc. Anti-pd-1 antibodies
WO2016127179A2 (en) 2015-02-06 2016-08-11 Kadmon Corporation, Llc Immunomodulatory agents
WO2016197497A1 (zh) 2015-06-09 2016-12-15 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
WO2016210129A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Novel pd-1 immune modulating agents
WO2017011580A2 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof
WO2017016497A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Harbour Biomed Limited Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
US20180222982A1 (en) 2015-07-29 2018-08-09 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
WO2017019846A1 (en) 2015-07-30 2017-02-02 Macrogenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods use thereof
WO2017025016A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017025051A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017024515A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Cayman) Inc. Novel anti-pd-1 antibodies
WO2017040790A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
WO2017058115A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Asia Biotech Pte. Ltd. Pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017058859A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Celgene Corporation Pd-1 binding proteins and methods of use thereof
WO2017055443A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd1 antibodies and methods of use
WO2017055547A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
WO2017079112A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
WO2017079116A2 (en) 2015-11-03 2017-05-11 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding pd-1 and tim-3 and their uses
WO2017087599A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Lyvgen Biopharma Holdings Limited Anti-pd-1 antibodies and therapeutic uses thereof
WO2017096026A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-1 and methods of use thereof
WO2017106656A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Novartis Ag Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
WO2017107885A1 (zh) 2015-12-23 2017-06-29 杭州尚健生物技术有限公司 抗人程序性死亡受体1抗体及其制备方法和用途
WO2017124050A1 (en) 2016-01-14 2017-07-20 Bps Bioscience, Inc. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
WO2017125815A2 (en) 2016-01-22 2017-07-27 MabQuest SA Immunological reagents
WO2017132827A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017133540A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017166804A1 (zh) 2016-04-01 2017-10-05 中山康方生物医药有限公司 抗pd-1的单克隆抗体
WO2017198741A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti pd-1 and anti-lag3 antibodies for cancer treatment
WO2017201766A1 (zh) 2016-05-24 2017-11-30 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人pd-1人源化单克隆抗体及其应用
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
WO2018020476A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Anti-pd-1 antibodies
WO2018026248A1 (ko) 2016-08-05 2018-02-08 주식회사 와이바이오로직스 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도
WO2018034226A1 (ja) 2016-08-15 2018-02-22 国立大学法人北海道大学 抗ｐｄ－１抗体
WO2018036472A1 (zh) 2016-08-23 2018-03-01 中山康方生物医药有限公司 一种抗pd1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
WO2018053106A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-pd-1(cd279) antibodies
WO2018052818A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Henlix, Inc. Anti-pd-1 antibodies
WO2018068336A1 (en) 2016-10-15 2018-04-19 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd Pd-1 antibodies
WO2018085468A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (pd-1)
WO2018085358A1 (en) 2016-11-02 2018-05-11 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to pd-1 and uses thereof
WO2018087143A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Actigen Ltd Anti-pd-1 antibodies
WO2018091661A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
WO2018113258A1 (zh) 2016-12-22 2018-06-28 安源医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其用途
WO2018119474A2 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Remd Biotherapeutics, Inc. Immunotherapy using antibodies that bind programmed death 1 (pd-1)
WO2018162944A1 (en) 2017-03-04 2018-09-13 Shenzhen Runshin Bioscience Recombinant antibodies to programmed death 1 (pd-1) and uses therefor
WO2018192089A1 (zh) 2017-04-20 2018-10-25 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制人pd-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用
WO2018210230A1 (zh) 2017-05-16 2018-11-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种pd-l1抗体药物组合物及其用途
WO2018217227A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Immunomedics, Inc. Novel anti-pd-1 checkpoint inhibitor antibodies that block binding of pd-l1 to pd-1
WO2018226580A2 (en) 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use
WO2019005635A2 (en) 2017-06-25 2019-01-03 Systimmune, Inc. ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF PREPARATION AND USE
WO2019051164A1 (en) 2017-09-07 2019-03-14 Augusta University Research Institute, Inc. ANTIBODIES AGAINST PROTEIN 1 OF PROGRAMMED CELL DEATH

Non-Patent Citations (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"GenBank", Database accession no. NP_000607
"Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach", 1991, 1RL PRESS
"Sequences of Proteins of Immunological Interest", 1987, NATIONAL INSTITUTE OF HEALTH, BETHESDA, MD.
BIOCHEMISTRY, vol. 31, no. 6, 1992, pages 1579 - 1584
COLIGAN JE, DUNN BM, PLOEGH HL, SPEICHER DW, WINGFIELD PT, CURRENT PROTOCOLS IN PROTEIN SCIENCE, 1995, ISBN: 0-471-11184-8
CURRENT OPINION IN BIOTECHNOLOGY, vol. 17, no. 6, 2006, pages 653 - 658
CURRENT OPINION IN BIOTECHNOLOGY, vol. 18, 2007, pages 1 - 10
CURRENT OPINION IN STRUCTURAL BIOLOGY, vol. 7, 1997, pages 463 - 469
HAMMERLING ET AL.: "Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas", 1981, ELSEVIER, pages: 563 - 681
HARLOW ET AL.: "Antibodies: A Laboratory Manual", vol. 2, 1988, COLD SPRING HARBOR LABORATORY PRESS
HONGO ET AL., HYBRIDOMA, vol. 14, no. 3, 1995, pages 253 - 260
ISHIWATA YOSHIRO , YOKOCHI SHOJI , KAKIMI KAZUHIRO , ITO SATORU , USHA SATOSHI , MATSUSHIMA KOUJI: "Administration of anti- CD 4 depleting antibody together with anti-PD-1/anti- PD-L1 antibody shows dramatic anti-tumor effects in mice", PROCEEDINGS OF THE JAPANESE SOCIETY FOR IMMUNOLOGY, vol. 43, 30 November 2013 (2013-11-30), pages 95, XP009526789, ISSN: 0919-1984 *
J. BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 269, 1994, pages 199 - 206
J. SYNTH. ORG. CHEM., JPN., vol. 75, no. 11, 2017, pages 1171 - 1178
JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 383, no. 5, 2008, pages 1058 - 1068
KOHLERMILSTEIN ET AL., NATURE, vol. 256, 1975, pages 495 - 97
NATURE BIOTECHNOLOGY, vol. 22, 2004, pages 575 - 582
NATURE BIOTECHNOLOGY, vol. 23, 2005, pages 1556 - 1561
NATURE, vol. 430, no. 6996, 2004, pages 174 - 180
ONUKI M, MICROSC RES TECH, vol. 52, 2001, pages 731 - 9
PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 90, no. 14, 1993, pages 6444 - 6448
PROTEIN SCIENCE, vol. 15, 2006, pages 14 - 27
See also references of EP4011918A4
TOMIZUKA ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, 2000, pages 722 - 727
UEHA, SATOSHI: "Combination Cancer Immunotherapy of anti- CD 4 antibody and anti-PD-1/PD-Ll antibody", THE JOURNAL OF THE JAPANESE SOCIETY OF LYMPHORETICULAR TISSUE , vol. 56, 30 November 2015 (2015-11-30), JP, pages 60, XP009526788, ISSN: 1342-9248 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023143478A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Crown Bioscience Inc. Novel anti-cd4 and anti-pd-l1 bispecific antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
EP4011918A4 (en) 2023-08-23
JPWO2021025140A1 (ja) 2021-02-11
US20220332825A1 (en) 2022-10-20
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TW202120550A (zh) 2021-06-01

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