WO2021000770A1 - 可增强免疫活性的杂环化合物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents
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- WO2021000770A1 WO2021000770A1 PCT/CN2020/097941 CN2020097941W WO2021000770A1 WO 2021000770 A1 WO2021000770 A1 WO 2021000770A1 CN 2020097941 W CN2020097941 W CN 2020097941W WO 2021000770 A1 WO2021000770 A1 WO 2021000770A1
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- 0 *c1n[n](*)c(C(Nc2nc(cc(cc3O*)C(N)=O)c3[n]2*)=O)c1 Chemical compound *c1n[n](*)c(C(Nc2nc(cc(cc3O*)C(N)=O)c3[n]2*)=O)c1 0.000 description 7
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- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
Definitions
- the present invention relates to the field of medicine, and relates to a compound represented by the general formula (I), a preparation method thereof, a pharmaceutical composition containing the derivative, and a therapeutic agent, especially its use as an STING modulator and treatment of STING-mediated Use of diseases or conditions, such as inflammation, allergic and autoimmune diseases, infectious diseases, cancer, precancerous syndromes.
- diseases or conditions such as inflammation, allergic and autoimmune diseases, infectious diseases, cancer, precancerous syndromes.
- the human immune system can generally be divided into two types of systems, called “innate immunity” and “adaptive immunity”.
- the innate immune system of the immune system is mainly responsible for the passage of many soluble factors (including the complement system and chemokine/cytokine system); these factors act on many different cell types, including mast cells, macrophages, dendritic cells and natural Kill cells to resist various pathogens such as viruses, bacteria, fungi and parasites.
- the adaptive immune system involves delayed and longer-lasting antibody responses and CD8 + and CD4 + T cell responses that play a key role in immune memory to antigens.
- the innate immune system has no antigen specificity, but it does respond to multiple effect mechanisms.
- the mechanism by which the innate immune system mediates its response includes phagocytosis, activation of the complement system, and the production of soluble biologically active molecules such as cytokines or chemokines.
- DAMP damage-related molecular patterns
- PAMP pathogen-related molecular patterns
- the innate immune system can provide extensive protection to the body to resist a wide range of threats to the host.
- the innate immune system can detect free cytoplasmic DNA and RNA in PAMP and DAMP. It has recently been demonstrated that the main sensor for cytosolic DNA is cGAS (cyclic GMP-AMP synthase).
- CDN cyclic dinucleotide 2'-3'cGAMP
- type I interferon has antiviral activity and can inhibit the replication of human hepatitis B virus and hepatitis C virus.
- type I interferons and compounds that can induce the production of type I interferons can be used to treat human cancers. Such molecules may be used as anticancer agents with multiple active pathways. Interferon can directly inhibit the proliferation of human tumor cells and can act synergistically with various approved chemotherapeutics. Type I interferon can significantly enhance the anti-tumor immune response by inducing the activation of adaptive and innate immune cells. Finally, by regulating the expression of enzymes related to tissue remodeling, interferon can inhibit tumor invasiveness.
- STING is considered to be the key adaptor protein in the cGAS-STING-IFN cascade, and the role of STING in the activation of the innate immune system against tumors has also been recognized.
- Xiang Zhou et al. STING-mediated DNA sensing in cancer immunotherapy, Science China Life Sciences, Vol. 60, No. 6, pp563-574
- STING-mediated DNA sensing in cancer immunotherapy Science China Life Sciences, Vol. 60, No. 6, pp563-574
- tumor-derived DNA is present in the cytoplasm of certain antigen-presenting cells (such as tumor-infiltrating dendritic cells), which may be produced by tumor cell stress or cell death.
- This tumor-derived DNA is known to activate cGAS, which leads to the production of cyclic nucleotides that have been shown to activate STING, leading to the production of related type 1 interferons such as interferon beta (Woo, SR et al., Immunity (2014) 41: 830 -842).
- the downstream signal transduction pathways stimulated and produced by STING may also contribute to the recruitment of effector T cells into the inflamed tumor microenvironment (Woo, S.R. Trends in Immunol (2015) 36: 250-256).
- STING activation in the tumor microenvironment can induce an adaptive immune response, leading to anti-tumor activity. Therefore, in those STING-deficient tumors, by activating antigen-presenting cells and dendritic cells (APC and DC) and inducing adaptive immune responses, these tumors still have anti-tumor activity. With more and more data showing that the cGAS-STING cytosolic DNA sensory pathway has a significant ability to induce type I interferons, the development of STING activators has rapidly occupied an important position in the field of anti-tumor therapy today.
- CDN cyclic dinucleotides Due to easy hydrolysis in the body and very low permeability, natural cyclic dinucleotides (CDN) are not suitable for clinical development.
- Aduro Company modified the natural cyclic dinucleotide structure and replaced the phosphoric acid ester with phosphorothioate to obtain the compound ADU-S100 with higher druggability.
- the object of the present invention is to provide a compound represented by general formula (I):
- X is selected from O, NR a and C(R a )(R b );
- Y is selected from N and CR a ;
- U, V, and W are each independently selected from N, O and C;
- R 1 and R 2 are each independently selected from a hydrogen atom, a cyano group, and -CON(R m )(R n );
- R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently selected from hydrogen atom, halogen, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 3-6 cycloalkyl, C 6-10 aryl, C 6-10 aryloxy, 5-10 membered heteroaryl, 3-6 membered heterocyclic, nitro, cyano,- C(O)R m , -OC(O)R m , -SR m , -S(O)R m , -S(O) 2 R m , -S(O) 2 N(R m )(R n ), -N(R m )(R n ), -N(R m )-C(O)R n , -C(O)-N(R m )(R n ), -(C 1 -C 6 Al
- R 7 and R 8 together with the connected atoms form a 5-7 membered heterocyclic group, wherein the 5-7 membered heterocyclic group is optionally substituted by one or more R c ;
- one of R 7 and R 8 is selected from -(C 1 -C 6 alkylene) -N(R m )-S(O)-N(R m )(R n ), -(C 1 -C 6 alkylene)-N(R m )-S(O) 2 -N(R m )(R n ), -(C 2 -C 6 alkenylene)-N(R m )-S(O) -N (R m) (R n ), - (C 2 -C 6 alkynylene) -N (R m) -S ( O) -N (R m) (R n), - (C 2 -C 6 alkenylene) -N (R m) -S ( O) 2 -N (R m) (R n), - (C 2 -C 6 alkenylene) -N (R m) -S ( O) 2 -N (R m
- R a and R b are each independently selected from hydrogen atom, halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 3-6 cycloalkyl, C 6-10 aryl, C 6-10 aryloxy, 5-10 membered heteroaryl, 3-6 membered heterocyclic, nitro and cyano;
- R c is selected from hydrogen atom, halogen, hydroxyl, amino, -N (R m ) (R n ), C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 3 -6 cycloalkyl, C 6-10 aryl, C 6-10 aryloxy, 5-10 membered heteroaryl, 5-10 heterocyclic, amino, nitro and cyano; and
- R m and R n are each independently selected from hydrogen atom, halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 3-6 cycloalkyl, C 6-10 aryl, C 6-10 aryloxy, 5-10 membered heteroaryl, 5-10 heterocyclic, nitro and cyano;
- R m and R n together with the attached nitrogen atom form a 5-7 membered heterocyclic group, wherein the 5-7 membered heterocyclic group is optionally substituted with one or more R c .
- the compound represented by general formula (I) is a compound of general formula (I-1) and a compound of general formula (I-2):
- X, Y, R 1 -R 3 , R 5 , R 7 and R 8 are as defined in the general formula (I).
- the compound represented by general formula (I) is a compound of general formula (I-1a) and a compound of general formula (I-2a):
- R 3 , R 5 , R 7 and R 8 are as defined in the general formula (I).
- one of R 7 and R 8 is selected from -(C 1 -C 6 alkylene)-N(R m )-S (O) 2 -N(R m )(R n ) and -(C 1 -C 6 alkylene)-3-6-membered heterocyclic ring-S(O) 2 -N(R m )(R n ),
- the other of R 7 and R 8 is selected from a C 1 -C 6 alkyl group, wherein R m and R n are each independently selected from a hydrogen atom and a C 1 -C 6 alkyl group, or R m and R n are connected to The nitrogen atoms of together form a 5-7 membered heterocyclic group, preferably a 5-membered heterocyclic group or a 6-membered heterocyclic group, more preferably a pyrrolidinyl group or a morpholinyl group.
- R 3 is selected from C 1 -C 6 alkyl and halo C 1 -C 6 alkyl.
- R 5 is selected from C 1 -C 6 alkyl and C 1 -C 6 alkoxy.
- Typical compounds of the present invention include but are not limited to:
- the present invention also relates to a method for preparing the compound represented by general formula (I), which comprises:
- X, Y, R 1 -R 8 are as defined in the general formula (I).
- the compound of general formula (IA) and the compound of general formula (IB) undergo a condensation reaction in the presence of a condensing agent to obtain a compound of general formula (IC).
- a condensing agent is selected from 2-(7).
- HATU hexafluorophosphate
- N,N'-dicyclohexylcarbodiimide N,N'-diisopropylcarbodiimide
- O-benzotriazole-N,N,N',N' -Tetramethylurea tetrafluoroborate 1-hydroxybenzotriazole, 1-hydroxy-7-azobenzotriazole, O-benzotriazole-N,N,N',N' -Tetramethylurea hexafluorophosphate
- 2-(7-azobenzotriazole)-N,N,N',N'-tetramethylurea hexafluorophosphate benzotriazole-1- Tris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate
- the present invention also relates to a method for preparing the compound represented by general formula (I), which comprises:
- q is an integer of 1-6
- L is a halogen, preferably a chlorine atom
- R 8 is -(C 1 -C 6 alkylene) -N(R m )-S(O) 2 -N(R m ) (R n )
- X, Y, R 1 -R 7 , R m and R n are as defined in the general formula (I).
- the present invention also relates to a method for preparing the compound represented by general formula (I), which comprises:
- q is an integer of 1-6
- L is halogen, preferably the chlorine atom
- R 7 is -(C 1 -C 6 alkylene) -N(R m )-S(O) 2 -N(R m )( R n )
- X, Y, R 1 -R 6 , R 8 , R m and R n are as defined in the general formula (I).
- the present invention also relates to a pharmaceutical composition
- a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a compound represented by general formula (I) or its tautomers, mesosomes, racemates, enantiomers, non- Enantiomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, and pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.
- the present invention also relates to the use of the compound represented by the general formula (I) or the pharmaceutical composition containing the same in the preparation of a medicine for the treatment of STING-mediated diseases or disorders.
- the STING-mediated disease or condition is selected from inflammatory diseases, allergic and autoimmune diseases, infectious diseases, cancer and precancerous syndromes.
- the present invention also relates to the use of the compound represented by the general formula (I) or the pharmaceutical composition containing the same in the preparation of a medicine for treating cancer.
- the cancer is selected from breast cancer, cervical cancer, colorectal cancer, and intrauterine cancer.
- the present invention also relates to the compound represented by the general formula (I) or its tautomer, meso, racemate, enantiomer, diastereomer or mixture thereof, or A pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition containing the same, which is used as a medicine.
- the present invention also relates to the compound represented by the general formula (I) or its tautomer, meso, racemate, enantiomer, diastereomer or mixture thereof, or A pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition containing the same, which is used to treat STING-mediated diseases or conditions.
- the STING-mediated disease or condition is selected from inflammatory diseases, allergic and autoimmune diseases, infectious diseases, cancer and precancerous syndromes.
- the present invention also relates to the compound represented by the general formula (I) or its tautomer, meso, racemate, enantiomer, diastereomer or mixture thereof, or A pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition containing the same, for the treatment of cancer, preferably, the cancer is selected from breast cancer, cervical cancer, colorectal cancer, endometrial cancer, glioblastoma, Head and neck cancer, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, medulloblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, skin cancer and urethral cancer.
- the cancer is selected from breast cancer, cervical cancer, colorectal cancer, endometrial cancer, glioblastoma, Head and neck cancer, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, medulloblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, skin cancer and urethral cancer.
- the present invention also relates to a method for treating STING-mediated diseases or conditions, which comprises administering a therapeutically effective amount of a compound represented by the general formula (I) or its tautomers, mesosomes, or exogenous compounds to a desired patient. Rotates, enantiomers, diastereomers or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions containing them.
- the STING-mediated disease or condition is selected from inflammatory diseases, allergic and autoimmune diseases, infectious diseases, cancer and precancerous syndromes.
- the present invention also relates to a method for treating cancer, comprising administering a therapeutically effective amount of a compound represented by general formula (I) or its tautomers, mesosomes, racemates, enantiomers to a desired patient Constructs, diastereomers or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions containing them.
- the cancer is selected from breast cancer, cervical cancer, colorectal cancer, and uterine cancer. Endometrial cancer, glioblastoma, head and neck cancer, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, medulloblastoma, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, skin cancer, and urethral cancer.
- the compounds according to the present invention can be administered orally, sublingually, intraperitoneally, parenterally, subcutaneously, intramuscularly, intravenously, transdermally, topically, or rectally.
- the active ingredient may be the same as conventional
- the pharmaceutical carriers are mixed together and administered to animals or humans in the form of administration units.
- Suitable administration unit forms include oral forms such as tablets, gel capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual or oral administration forms, parenteral, subcutaneous, intramuscular, intravenous, and nasal Intra or intraocular administration form and rectal administration form.
- the main active ingredient is mixed with pharmaceutical carriers such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic and the like.
- pharmaceutical carriers such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic and the like.
- the tablets may be coated with sucrose or other suitable materials or processed in such a way that they have prolonged or delayed activity and continuously release a predetermined amount of active ingredient.
- a gel capsule preparation is obtained by mixing the active ingredient with a diluent and by pouring the obtained mixture into soft or hard capsules.
- Preparations in the form of syrups or tinctures may contain the active ingredient together with sweetening agents, preservatives, and flavoring agents and appropriate coloring agents.
- the water-dispersible powders or granules may contain active ingredients mixed with dispersing agents, wetting agents or suspending agents, and with flavoring or sweetening agents.
- Suppositories are used for rectal administration and are prepared with adhesives that melt at rectal temperature, for example, cocoa butter or polyethylene glycol.
- Aqueous suspension, isotonic physiological saline solution or sterile and injectable solution which contains pharmacologically compatible dispersing agent and/or wetting agent for parenteral, intranasal or intraocular Apply.
- the active ingredient (possibly with one or more additive carriers) can also be formulated as microcapsules.
- the compound of the present invention can be used at a dose between 0.01 mg/day and 1000 mg/day, provided in a single dose/day or administered in several doses throughout the day, for example, the same dose twice a day .
- the daily dose administered is advantageously between 0.1 mg and 1000 mg, even more advantageously between 2.5 mg and 50 mg. It may be necessary to use dosages outside of these ranges, and those skilled in the art themselves will be aware of this.
- the pharmaceutical composition may also be formulated for external administration. It can be introduced into the usual forms of the application type (ie, in particular lotions, foams, gels, dispersions, sprays), which have excipients, in particular It can penetrate the skin to improve the properties and accessibility of active ingredients.
- these compositions usually further comprise a physiologically acceptable medium, which usually comprises water or a solvent, for example, alcohol, ether or glycol.
- the composition may also include surfactants, preservatives, stabilizers, emulsifiers, thickeners, other active ingredients that produce complementary effects or possible synergistic effects, trace elements, essential oils, fragrances, colorants, collagen, Chemical or mineral filter.
- stereoisomers refer to geometric isomers (or configuration isomers) or optical isomers.
- “Geometric isomers” are caused by substituents at different positions on the double bond, which can then have the Z or E configuration, also called cis or trans.
- Optical isomers are caused in particular by substituents at different steric positions on carbon atoms, said carbon atoms containing four different substituents. This carbon atom constitutes the chiral center or asymmetric center.
- Optical isomers include diastereomers and enantiomers.
- Optical isomers that are non-superimposable mirror images of each other are called “enantiomers”.
- Optical isomers that are not superimposable mirror images of each other are called "diastereomers”.
- racemic mixture A mixture containing equal amounts of two separate enantiomeric forms of opposite chirality is called a "racemic mixture.”
- tautomers refer to structural isomers of compounds obtained by proton transfer rearrangement (prototropie), that is, by the migration of hydrogen atoms and the change of the position of the double bond.
- the different tautomers of the compound are generally mutually convertible and exist in the solution in a balanced manner in proportions, which may vary according to the solvent used, temperature or pH.
- pharmaceutically acceptable is understood to mean that it is used to prepare pharmaceutical compositions, which are generally safe, non-toxic, biologically or otherwise satisfying and the combination The drug can be accepted for veterinary and human drug use.
- the "pharmaceutically acceptable salt” of the compound is understood to refer to the following salt, which is a pharmaceutically acceptable (as defined herein) salt and which possesses the expected pharmacological activity of the parent compound.
- This salt includes:
- alkali metal ions such as Na + , K + or Li +
- alkaline earth metal ions such as Ca 2+ or Mg 2+
- aluminum ions or the salt formed when coordinated with an organic base or an inorganic base.
- Acceptable organic bases include diethanolamine, ethanolamine, N-methylglucamine, triethanolamine, tromethamine and the like.
- Acceptable inorganic bases include aluminum hydroxide, calcium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, and sodium hydroxide.
- halogen means fluorine, bromine, chlorine or iodine atom.
- C 1-6 alkyl refers to a saturated straight or branched hydrocarbon chain containing 1 to 6 carbon atoms.
- Representative examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-Dimethylpropyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2 -Methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1, 3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, etc.
- C 1-6 alkylene refers to a divalent hydrocarbon chain containing 1 to 6 carbon atoms.
- Representative examples include, but are not limited to, methylene (-CH 2 -), 1,1-ethylene (-CH(CH 3 )-), 1,2-ethylene (-CH 2 CH 2 )-, 1,1-propylene (-CH(CH 2 CH 3 )-), 1,2-propylene (-CH 2 CH(CH 3 )-), 1,3-propylene (- CH 2 CH 2 CH 2 -), 1,4-butylene (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -) and 1,5-butylene (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -), etc.
- C 2-6 alkenyl refers to a straight or branched hydrocarbon chain having at least one double bond and having 2 to 6 carbon atoms. Representative examples include, but are not limited to, vinyl, propenyl, butenyl, pentenyl, hexenyl, and the like.
- C 2-6 alkynyl refers to a straight or branched hydrocarbon chain having at least one triple bond and having 2 to 6 carbon atoms. Representative examples include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, hexynyl, and the like.
- C 1-6 alkoxy refers to -O-(C 1-6 alkyl), wherein the definition of C 1-6 alkyl is as described above. Non-limiting examples include methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentoxy, hexoxy and the like.
- halogenated C 1-6 alkyl means that C 1-6 alkyl is substituted by one or more halogens, wherein C 1-6 alkyl and halogen are as defined above.
- C 3-6 cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic hydrocarbon system containing 3 to 6 carbon atoms. Representative examples include, but are not limited to, cyclohexyl, cyclopentyl, cyclobutyl, Cyclopropyl, cyclohexenyl, etc.
- 3-6 membered heterocyclyl refers to a heterocyclic group containing 3 to 6 ring atoms, of which 1-3 ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (wherein m is 0, 1, or 2) Atomized saturated or partially unsaturated monocyclic hydrocarbon systems, including 3-membered, 4-membered, 5-membered, and 6-membered heterocyclic groups.
- Representative examples include, but are not limited to, oxirane, pyrrolidinyl, and imidazolidine Group, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrothienyl, dihydroimidazolyl, dihydrofuranyl, dihydropyrazolyl, dihydropyrrolyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, etc.
- 5-7 membered heterocyclyl refers to a heterocyclic group containing 5 to 7 ring atoms, wherein 1-3 ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (wherein m is 0, 1, or 2).
- Atomized saturated or partially unsaturated monocyclic hydrocarbon systems including 5-membered, 6-membered, and 7-membered heterocyclic groups.
- Representative examples include, but are not limited to, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, tetrahydrofuranyl, and tetrahydropyran Group, tetrahydrothienyl, dihydroimidazolyl, dihydrofuranyl, dihydropyrazolyl, dihydropyrrolyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, homomorpholinyl, etc.
- C 5-10 aryl refers to a 5- to 10-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) groups with a conjugated ⁇ -electron system, including C 6 aryl groups , C 7 aryl, C 8 aryl, C 9 aryl, C 10 aryl, such as phenyl and naphthyl, more preferably phenyl.
- the aryl ring may be fused on a heteroaryl, heterocyclic or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring, non-limiting examples of which include:
- C 6-10 aryloxy refers to -O-(C 6-10 alkyl), wherein the definition of C 6-10 alkyl is as described above.
- heteroaryl refers to a heteroaromatic system containing 1 to 4 heteroatoms and 5 to 10 ring atoms, wherein the heteroatoms are selected from oxygen, sulfur and nitrogen, including 5-membered, 6-membered, 7-membered Member, 8-membered, 9-membered, 10-membered heteroaryl groups, preferably 5-membered or 6-membered heteroaryl groups containing 1 to 2 heteroatoms, such as quinolinyl, imidazolyl, furanyl, thienyl, thiazolyl, pyridine Azolyl, oxazolyl, oxazolyl, pyrrolyl, tetrazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, thiadiazole, pyrazinyl, etc.
- the heteroaryl ring may be fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is
- hydroxyl refers to the -OH group.
- nitro refers to -NO 2 .
- amino refers to -NH 2 .
- cyano refers to -CN.
- heterocyclic group optionally substituted by an alkyl group means that an alkyl group may but need not be present, and the description includes the case where the heterocyclic group is substituted by an alkyl group and the case where the heterocyclic group is not substituted by an alkyl group .
- Substituted refers to one or more hydrogen atoms in the group, preferably up to 5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms, independently of each other, substituted with a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without too much effort. For example, an amino group or a hydroxyl group with free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom with an unsaturated (eg, olefinic) bond.
- “Pharmaceutical composition” means a mixture containing one or more of the compounds described herein or their physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, and other components such as physiological/pharmaceutically acceptable carriers And excipients.
- the purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, which is beneficial to the absorption of the active ingredients and thus the biological activity.
- the analysis sample was vacuum dried (1-5 mmHg) at room temperature.
- the monitoring of the reaction progress in the examples adopts thin layer chromatography (TLC).
- Thin layer chromatography (TLC) was performed on a silica gel plate, and spots were observed by UV light (214 and 254 nm).
- Column purification and flash chromatography were performed using silica gel (200-300 mesh).
- the mixed solvent system is reported in volume ratio.
- the structure of the compound is determined by nuclear magnetic resonance (NMR) or/and mass spectrometry (MS). ( ⁇ ) is given in units of 10 -6 (ppm).
- the determination solvent is deuterated chloroform (CDCl 3 ), deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), deuterated methanol (CD 3 OD) or deuterated acetonitrile (CD 3 CN).
- the internal standard is tetramethylsilane (TMS).
- TMS tetramethylsilane
- the LC/MS instrument used is an Agilent 1200 series 6110 or 6120 mass spectrometer with electrospray ionization. Unless otherwise specified, the general LCMS conditions are as follows:
- Method A Agilent LCMS 1200-6110, column: Waters X-Bridge C18 (50 mm ⁇ 4.6 mm ⁇ 3.5 microns); column temperature: 40°C; flow rate: 1.5 mL/min; mobile phase: 95% within 0.8 minutes Change the mixed solvent of [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 5% [acetonitrile+0.05% trifluoroacetic acid] to 0% [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 100% [CH3CN+0.05% trifluoroacetic acid] Mix the solvent, then keep it under this condition for 0.4 minutes, and finally change it to 95% [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 5% [CH3CN+0.05% trifluoroacetic acid], keep it for 0.01 minutes under this condition;
- Method B Agilent LCMS 1200-6110, column: Waters X-Bridge C18 (50 mm ⁇ 4.6 mm ⁇ 3.5 microns); column temperature: 40°C; flow rate: 2.0 mL/min; mobile phase: 95% within 1.6 minutes Change the mixed solvent of [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 5% [acetonitrile+0.05% trifluoroacetic acid] to 0% [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 100% [acetonitrile+0.05% trifluoroacetic acid] Mixed solvent, then under this condition for 1.4 minutes, and finally within 0.05 minutes it becomes a mixed solvent of 95% [water+0.05% trifluoroacetic acid] and 5% [acetonitrile+0.05% trifluoroacetic acid], under this condition Hold for 0.7 minutes;
- Method C Agilent LCMS 1200-6120, column: Waters X-Bridge C18 (50 mm ⁇ 4.6 mm ⁇ 3.5 microns); column temperature: 40°C; flow rate: 2.0 mL/min; mobile phase: 95% within 1.6 minutes [Water+10mM ammonium bicarbonate] and 5% acetonitrile to 0% [water+10mM ammonium bicarbonate] and 100% acetonitrile, then keep under this condition for 1.4 minutes, and finally change to 95% [water+10mM] within 0.1 minutes Ammonium bicarbonate] and 5% acetonitrile and kept under these conditions for 0.7 minutes.
- Nuclear magnetic resonance instrument Bruker ARX-500 high-resolution mass spectrometer and Bruker ARX-400 high-resolution mass spectrometer.
- MTT detection instrument Thermo Scientific Multiskan GO full-wavelength microplate reader.
- the thin layer chromatography silica gel plate uses Qingdao GF254 silica gel plate, the size of the silica gel plate used in thin layer chromatography (TLC) is 0.15mm ⁇ 0.2mm, and the size of thin layer chromatography separation and purification products is 0.4mm ⁇ 0.5mm.
- the reactions are all carried out under an argon atmosphere or a nitrogen atmosphere.
- the solution in the reaction refers to an aqueous solution.
- reaction temperature is room temperature.
- the seventh step 2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3,4-dihydro-5-oxa-1,2a-diazepine Acenaphthylene-7-carboxamide 1
- the 1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole in the seventh step was replaced by 3-methoxy-1-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid -5-carboxylic acid to obtain compound 2 as a white solid; replace the 1-ethyl-3-methyl- in the seventh step with 3-ethyl-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid 1H-pyrazole-5-carboxylic acid to obtain compound 3 as a white solid.
- the sixth step 1-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-8,9-dihydro-7H-6-oxa-2,9a-di Azabenzo[cd]azulene-4-carboxamide 4
- the fifth step (2-((5-carbamoyl-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl -1H-Benzo[d]imidazol-7-yl)oxy)tert-butyl)ethyl)tert-butyl carbamate 7-5
- the sixth step 7-(2-aminoethoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl-1H- Benzo[d]imidazole-5-carboxamide 7-6
- the seventh step 7-(2-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)ethoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole -5-carboxamido)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 7
- the first step N-(2-((5-carbamoyl-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl -1H-Benzo[d]imidazol-7-yl)oxy)ethyl)sulfamoyl)tert-butyl carbamate 9-1
- the second step 2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl-7-(2-(sulfamoylamino) Ethoxy)-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 9
- the first step (4-((4-carbamoyl-2-methoxy-6-nitrophenyl)amino)butyl) tert-butyl carbamate 10-1
- the fifth step 1-(4-aminobutyl)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamide)-7-methoxy-1H-benzene And [d]imidazole-5-carboxamide 10-5
- the sixth step 1-(4-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)butyl)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5- Carboxamido)-7-methoxy-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 10
- the fifth step (4-((5-carbamoyl-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl -1H-Benzo[d]imidazol-7-yl)oxy)tert-butyl)butyl)carbamate 13-5
- the sixth step 7-(4-aminobutoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamido)-1-propyl-1H- Benzo[d]imidazole-5-carboxamide 13-6
- the seventh step 7-(4-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)butoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole -5-carboxamido)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 13
- the first step (3-(5-carbamoyl-2-chloro-3-nitrophenoxy)propyl) tert-butyl carbamate 15-1
- 4-chloro-3-hydroxy-5-nitrobenzamide 1-1 (1.0g, 4.62mmol) was dissolved in 15ml DMF, and (1.3mg, 5.54mmol) (5-bromopropyl) tert-butylamino was added Formate, (3.2mg, 23.1mmol) potassium carbonate, heated to 120°C and reacted for 4 hours.
- the third step (3-(3-amino-5-carbamoyl-2-(propylamino)phenoxy)propyl) tert-butyl carbamate 15-3
- the fifth step (3-((5-carbamoyl-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl-1H- Benzo[d]imidazol-1-yl)oxy)propyl)tert-butyl carbamate 15-5
- the sixth step 7-(3-aminopropoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl-1H-benzene And [d]imidazole-5-carboxamide 15-6
- the seventh step 7-(3-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)propoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole -5-carboxamido)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 15
- N,N-dimethylsulfamoyl chloride in the seventh step was replaced by pyrrolidine-1-sulfonyl chloride to obtain compound 17 as a pale yellow solid.
- N,N-dimethylsulfamoyl chloride in the seventh step was replaced by morpholine-4-sulfonyl chloride to obtain compound 18 as a yellow solid.
- N,N-dimethylsulfamoyl chloride in the seventh step was replaced by methyl(propyl)sulfamoyl chloride to obtain compound 19 as a pale yellow solid.
- N,N-dimethylsulfamoyl chloride in the seventh step was replaced by diethylsulfamoyl chloride to obtain compound 20 as a white solid.
- the first step (2-((4-carbamoyl-2-methoxy-6-nitrophenyl)amino)ethyl) tert-butyl carbamate 21-1
- the third step (2-(2-amino-5-carbamoyl-7-methoxy-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)ethylaminomethane Tert-butyl ester 21-3
- the sixth step 1-(2-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)ethyl)-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5- Carboxamido)-7-methoxy-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 21
- 3-Methyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid methyl ester 24-0 (200mg, 1.4mmol), fluoroethanol (110.7mg, 1.7mmol), triphenylphosphine (550mg, 2.1mmol) were dissolved in tetrahydrofuran ( 20 mL), cool to 0°C, add dimethyl azodicarboxylate (365 mg, 2.1 mmol) dropwise, and stir at room temperature for 12 hours.
- the obtained 1-(2-fluoroethyl)-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxylic acid 24-2 was 220 mg of a white solid with a yield of 59.4%. MS(ESI): 187.2 [M+1] + .
- the third step (3-((5-carbamoyl-2-(1-(2-fluoroethyl)-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl -1H-Benzo[d]imidazol-7-yl)oxy)propyl)tert-butyl carbamate 24-3
- the fifth step 7-(3-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)propoxy)-2-(1-(2-fluoroethyl)-3-methyl -1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 24
- Step 2 Tertiary 3-((5-carbamoyl-3-nitro-2-(propylamino)phenoxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylic acid Butyl ester 25-2
- the third step tertiary 3-((3-amino-5-carbamoyl-2-(propylamino)phenoxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylic acid Butyl ester 25-3
- the fifth step 3-(((5-carbamoyl-2-(1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl-1H-benzene And [d]imidazol-7-yl)oxy)methyl)pyrrolidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 25-5
- the seventh step 7-((1-(N,N-dimethylsulfamoyl)pyrrolidin-3-yl)methoxy)-2-(1-ethyl-3-methyl -1H-pyrazole-5-carboxamide)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxamide 25
- Test Example 1 Determination of Stimulating THP1 Cells to Produce Interferon ⁇
- the compound to be tested is prepared as a 10 mM DMSO solution and diluted 3 times with DMSO to prepare a solution of 3.3 mM, 1.1 mM, 0.4 mM, 0.1 mM, 0.033 mM, 0.0137 mM and 0.0046 mM
- -Assay medium RPMI1640 medium and 0.5% HIFBS
- Example 1 Compound EC 50 ( ⁇ M) ADU-S100 4.2 Example 1 42 Example 2 80 Example 3 100 Example 4 12 Example 5 60 Example 6 300 Example 7 12 Example 8 14.6 Example 9 300 Example 10 124 Example 11 300 Example 12 300 Example 13 4.2 Example 14 3.9 Example 15 3.3 Example 16 4.1 Example 17 2.1 Example 18 4.2 Example 19 8.2 Example 20 2.2 Example 21 300 Example 22 12.7 Example 23 300 Example 25 Untested Example 25 1.8
- the compound of the present invention has excellent activity and can effectively activate and stimulate THP1 cells to produce interferon ⁇ , thereby having excellent anti-inflammatory and anti-tumor activities.
- the compound of the present invention has good solubility and is beneficial to absorption in the body. More importantly, it can be formulated into a solution for intratumoral injection to improve the efficacy.
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Abstract
可增强免疫活性的杂环化合物、其制备方法及其在医药上的应用。具体为一种通式(I)所示的化合物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为STING调节剂的用途以及治疗STING介导的疾病或病症的用途，例如炎症、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前综合征。
Description
本发明涉及属于医药领域，涉及一种通式(I)所示的化合物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及治疗剂，特别是作为STING调节剂的用途以及治疗STING介导的疾病或病症的用途，例如炎症、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前综合征。
人免疫系统通常可分为两类系统，称为“先天性免疫”和“适应性免疫”。免疫系统的先天性免疫系统主要负责通过许多可溶性因子(包括补体系统和趋化因子/细胞因子系统)；这些因子作用于许多不同的细胞类型，包括肥大细胞，巨噬细胞，树突细胞和自然杀伤细胞以抵御各种病原体，如病毒，细菌，真菌和寄生虫。适应性免疫系统涉及在对抗原的免疫记忆中发挥关键作用的延迟的和更持久的抗体应答以及CD8
+和CD4
+T细胞应答。
先天免疫系统没有抗原特异性，但确实对多种效应机制有反应。先天免疫系统介导其反应的机制包括吞噬作用，补体系统的活化以及可溶性生物活性分子如细胞因子或趋化因子的产生。通过对上述这些与损伤相关的分子模式(DAMP)或病原体相关分子模式(PAMP)的响应，先天免疫系统能够对机体提供广泛的保护，以抵抗对宿主的广泛威胁。先天免疫系统可以检测到PAMP和DAMP中游离的胞质DNA和RNA。最近证明细胞溶质DNA的主要传感器是cGAS(环状GMP-AMP合酶)。在识别细胞溶质DNA后，cGAS催化环二核苷酸2'-3'cGAMP(CDN)的产生，这是一种非典型的第二信使，它与ER-跨膜衔接蛋白STING强烈结合。构象变化由cGAMP结合的STING发生，其转移至核周区室并诱导关键转录因子IRF-3和NF-κB的活化。这导致I型干扰素的强烈诱导和促炎细胞因子如IL-6，TNF-α和IFN-γ的产生。
从治疗的角度来看，I型干扰素具有抗病毒活性，可以抑制人乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒复制。此外，I型干扰素和可诱导I型干扰素产生的化合物可用于治疗人类癌症。此类分子可能用作具有多种活性途径的抗癌剂。干扰素可直接抑制人肿瘤细胞增殖，并可与各种批准的化学治疗剂协同作用。I型干扰素可通过诱导适应性和先天性免疫细胞的活化而显着增强抗肿瘤免疫应答。最后，通过调节与组织重塑相关的酶表达，干扰素可以抑制肿瘤侵袭性。
STING被认为是cGAS-STING-IFN级联中的关键衔接蛋白，同时STING在先天免疫系统针对肿瘤的激活过程中的作用也被认清。Xiang Zhou等人 (STING-mediated DNA sensing in cancer immunotherapy,Science China Life Sciences,Vol.60,No.6,pp563-574)认为，虽然STING已被证明是细胞溶质DNA触发的先天免疫激活所必需的，但从各种研究中获得的积累证据表明，可以观察到STING相关信号在肿瘤发生中的内在相关性。最近的研究表明，某些抗原呈递细胞(如肿瘤浸润的树突细胞)的细胞质中存在肿瘤来源的DNA，可能是通过肿瘤细胞应激或细胞死亡产生的。已知该肿瘤衍生的DNA激活cGAS，其导致已经显示激活STING的环核苷酸的产生，导致产生相关的1型干扰素如干扰素β(Woo，SR等人，Immunity(2014)41：830-842)。STING的刺激和产生的下游信号传导途径也可能有助于效应T细胞募集到发炎的肿瘤微环境中(Woo，S.R.Trends in Immunol(2015)36：250-256)。肿瘤微环境中的STING活化可诱导适应性免疫应答，从而导致抗肿瘤活性。因此，在那些STING缺陷的肿瘤中，通过激活抗原呈递细胞和树突细胞(APC和DC)以及诱导适应性免疫应答，对这些肿瘤仍具有抗肿瘤活性。随着越来越多的数据显示，cGAS-STING细胞溶质DNA感觉途径具有诱导I型干扰素的显着能力，STING活化剂的发展迅速在今天的抗肿瘤治疗领域中占据重要地位。此外，使用免疫刺激佐剂，特别是STING的激动和非激动配体的几项临床试验已经揭示了它们不仅作为疫苗佐剂而且作为抗肿瘤剂的治疗潜力。Xiang Zhou等人总结了最近的发现，这些发现已经指出STING途径是在肿瘤环境中驱动I型干扰素产生的先天免疫传感机制。更好地理解该途径可指导进一步开发治疗癌症的新型免疫治疗策略。
由于容易在体内水解和非常低的渗透性，天然的环二核苷酸(CDN)并不适合临床开发。Aduro公司通过对天然的环二核苷酸的结构修饰,硫代磷酸酯替代磷酸酯获得了成药性更高的化合物ADU-S100。
将ADU-S00注射到B16黑色素瘤和4T1乳腺癌肿块，不仅导致明显的肿瘤抑制作用直至肿瘤消失，同时也诱导免疫系统持久的抗原特异性T细胞免疫，造成动物其它部位未注射药物的肿瘤生长也受到抑制。经肿瘤内注射后，约50％的治疗动物无肿瘤并存活超过150天(Cell Reports(2018)25,3074-3085)。此外，他们完全受到保护而免受第二次肿瘤重新攻击。这些临床前研究表明，肿瘤局部治疗诱导的全身免疫能有效诱导远端肿瘤消退。因此，间接作用可促进全身性抗肿瘤活性。
与天然CDN相比较，虽然ADU-S100的体内稳定性有很大的提高，但在给药后也仅几秒钟仍可检测到。因此开发更加稳定的新型小分子STING激动剂，有着重要的意义。
国际专利申请WO2014/093936、WO2014/189805、WO2013/185052公开了某些环状二核苷酸以及它们经由活化STING而诱导免疫应答的用途。
国际专利申请WO2017/175156公开了作为STING的调节剂的杂环酰胺类及其制备和医药用途。
仍然需要用于免疫策略的改进的化合物以治疗可能难以用传统治疗方法治疗的疾病(诸如癌症)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，
其中：
X选自O、NR
a和C(R
a)(R
b)；
Y选自N和CR
a；
R
1和R
2各自独立地选自氢原子、氰基和-CON(R
m)(R
n)；
R
3、R
4、R
5和R
6各自独立地选自氢原子、卤素、C
1-C
6烷基、C
1-C
6烷氧基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基、氰基、-C(O)R
m、-OC(O)R
m、-SR
m、-S(O)R
m、-S(O)
2R
m、-S(O)
2N(R
m)(R
n)、-N(R
m)(R
n)、-N(R
m)-C(O)R
n、-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-N(R
m)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)和-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)(R
n)，其中所述C
1-C
6烷基、C
1-C
6烷氧基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基和3-6元杂环基各自独立地任选被一个或多个R
c取代；
R
7和R
8与相连接的原子一起形成5-7元杂环基，其中所述5-7元杂环基任选被一个或多个R
c取代；
或者，R
7和R
8中一个选自-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚烯基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚炔基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚烯基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚炔基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)和-(C
1-C
6亚烷基)-3-6元杂环-S(O)
2-N(R
m)(R
n)，且R
7和R
8中另一个选自C
1-C
6烷基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
1-C
6烷氧基、卤素、卤代C
1-C
6烷基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基、氰基、-C(O)R
m、-OC(O)R
m、-SR
m、-S(O)R
m、-S(O)
2R
m、-S(O)
2N(R
m)(R
n)、-N(R
m)(R
n)、-N(R
m)-C(O)R
n、-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)(R
n)、-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-N(R
m)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-C(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚烯基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚炔基)-N(R
m)-S(O)-N(R
m)(R
n)、-(C
2-C
6亚烯基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)和-(C
2-C
6亚炔基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)，其中所述C
1-C
6亚烷基、C
2-C
6亚烯基C
2-C
6亚炔基、C
1-C
6烷基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
1-C
6烷氧基、卤代C
1-C
6烷基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基和3-6元杂环基各自独立地任选被一个或多个R
c取代；
R
a和R
b各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、C
1-C
6烷基、C
1-C
6烷氧基C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基和氰基；
R
c选自氢原子、卤素、羟基、氨基、-N(R
m)(R
n)、C
1-C
6烷基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基、5-10杂环基、氨基、硝基和氰基；以及
R
m和R
n各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、C
1-C
6烷基、C
2-C
6烯基、C
2-C
6炔基、C
3-6环烷基、C
6-10芳基、C
6-10芳氧基、5-10元杂芳基、5-10杂环基、硝基和氰基；
或者，R
m和R
n与相连接的氮原子一起形成5-7元杂环基，其中所述5-7元杂环基任选被一个或多个R
c取代。
在一个优选实施例方案中，通式(I)所示的化合物为通式(I-1)化合物和通式(I-2)化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合 物形式或其可药用的盐，
其中：X、Y、R
1-R
3、R
5、R
7和R
8如通式(I)中所定义。
在另一个优选实施例方案中，通式(I)所示的化合物为通式(I-1a)化合物和通式(I-2a)化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，
其中：R
3、R
5、R
7和R
8如通式(I)中所定义。
在另一个优选实施例方案中，在通式(I)所示的化合物中，其中R
7和R
8中一个选自-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)和-(C
1-C
6亚烷基)-3-6元杂环-S(O)
2-N(R
m)(R
n)，且R
7和R
8中另一个选自C
1-C
6烷基，其中R
m和R
n各自独立地选自氢原子和C
1-C
6烷基，或者R
m和R
n与相连接的氮原子一起形成5-7元杂环基，优选5元杂环基或6元杂环基，更优选吡咯烷基或吗啉基。
在另一个优选实施例方案中，在通式(I)所示的化合物中，其中R
7和R
8与相连接的原子一起形成5-7元杂环基，优选6元杂环基或7元杂环基。
在另一个优选实施例方案中，在通式(I)所示的化合物中，其中R
3选自C
1-C
6烷基和卤代C
1-C
6烷基。
在另一个优选实施例方案中，在通式(I)所示的化合物中，其中R
5选自C
1-C
6烷基和C
1-C
6烷氧基。
本发明的典型化合物包括但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，其包括：
通式(I-A)化合物和通式(I-B)化合物发生缩合反应得到通式(I)化合物，
其中：X、Y、
R
1-R
8如通式(I)中所定义。
在一个优选实施例方案中，通式(I-A)化合物和通式(I-B)化合物在缩合剂存在下发生缩合反应得到通式(I-C)化合物，优选地，所述缩合剂选自2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N′,N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N′-二环己基碳化二亚胺、N,N'-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N′,N'-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N′,N'-四甲脲六氟磷酸盐、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐和六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，最优选2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)。
本发明还涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，其包括：
通式(I-C)化合物和通式(I-D)化合物反应得到通式(I)化合物，
其中：q为1-6的整数，L为卤素，优选氯原子，R
8为-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)，X、Y、
R
1-R
7、R
m和R
n如通式(I)中所定义。
本发明还涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，其包括：
通式(I-E)化合物和通式(I-D)化合物反应得到通式(I)化合物，
其中：q为1-6的整数，L为卤素，优选氯原子R
7为-(C
1-C
6亚烷基)-N(R
m)-S(O)
2-N(R
m)(R
n)，X、Y、
R
1-R
6、R
8、R
m和R
n如通式(I)中所定义。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或包含其的药物组合物在制备用于治疗STING介导的疾病或病症的药物中的用途。在一个优选的实施方案中，所述STING介导的疾病或病症选自炎性疾病、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症和癌前综合征。
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或包含其的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，优选地，所述癌症选自由乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和尿道癌。
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物，其用作药物。
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗STING介导的疾病或病症。在一个优选的实施方案中，所述STING介导的疾病或病症选自炎性疾病、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症和癌前综合征。
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗癌症，优选地，所述癌症选自由乳腺癌、宫颈癌、结 肠直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和尿道癌。
本发明还涉及一种治疗STING介导的疾病或病症的方法，包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物。在一个优选的实施方案中，所述STING介导的疾病或病症选自炎性疾病、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症和癌前综合征。
本发明还涉及一种治疗癌症的方法，包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物，优选地，所述癌症选自由乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和尿道癌。
根据本发明的化合物可以被口服施用、舌下施用、腹膜内、肠胃外施用、皮下施用、肌内施用、静脉内施用、经皮施用、局部施用或直肠施用。
在本发明的药用化合物中，对于口服施用、舌下施用、肠胃外施用、皮下施用、肌内施用、静脉内施用、经皮施用、局部施用或直肠施用而言，活性成分可以与常规的药用载体混合在一起，以施用单位的形式施用于动物或人类。适合的施用单位形式包含口服形式如片剂、凝胶胶囊剂、粉剂、颗粒剂和口服的溶液剂或混悬剂，舌下或口腔施用形式，肠胃外、皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内施用形式和直肠施用形式。
当固体组合物被制备成片剂形式时，主要活性成分与药用载体如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、阿拉伯胶等混合。片剂可以采用蔗糖或其他适合的材料包衣或者以如此的方式处理以至于其具有延长的或延迟的活性并且连续释放预定量的活性成分。
通过将活性成分与稀释剂混合并通过将获得的混合物倾倒入软质或硬质胶囊中来获得凝胶胶囊制剂。
糖浆剂或酊剂形式的制剂可以包含活性成分连同甜味剂、防腐剂以及芳香剂和适当的着色剂。
可分散于水中的粉剂或颗粒剂可以包含活性成分，其与分散剂、润湿剂或悬浮剂以及与矫味剂或甜味剂混合在一起。
栓剂用于直肠施用，其采用在直肠温度下熔化的粘合剂，例如，可可脂或聚乙二醇来制备。
水性混悬剂、等渗的生理盐水溶液剂或无菌的且可注射的溶液剂(其包含药理学上可兼容的分散剂和/或润湿剂)用于肠胃外、鼻内或眼内施用。
活性成分(可能与一种或多种添加剂载体一起)也可以被配制成微囊剂。
本发明的化合物能够以介于0.01mg/天和1000mg/天之间的剂量来使用，以单一剂量/天的方式来提供或者以全天内若干剂量的方式来施用，例如，相同剂量每天两次。所施用的日剂量有利地介于0.1mg和1000mg之间，甚至更有利地介于2.5mg和50mg之间。使用超出这些范围的剂量可能是需要的，本领域技术人员自身将会意识到这一点。
在本发明的一个特定实施方案中，药物组合物也可以被配制用于外部施用。它可以被引入到该施用类型的常用形式(即，特别是洗剂、泡沫剂、凝胶剂、分散剂、喷雾剂)中，所述常用形式具有赋形剂，所述赋形剂特别地能够穿透皮肤，以便于改善活性成分的性质和可接近性。除了根据本发明的组合物之外，这些组合物通常进一步包含生理上可接受的介质，所述介质通常包含水或溶剂，例如，醇、醚或乙二醇。所述组合物还可以包含表面活性剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、增稠剂、产生互补效果或可能的协同效果的其他活性成分、微量元素、精油、香料、着色剂、胶原蛋白、化学或矿物过滤剂。
定义
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
在本发明的含义内，“立体异构体”是指几何异构体(或构型异构体)或旋光异构体。
“几何异构体”由双键上不同位置的取代基所导致，然后其可以具有Z或E构型，也被称作顺式或反式。
“光学异构体”特别地由碳原子上不同空间位置的取代基所导致，所述碳原子包含四个不同的取代基。这个碳原子则构成手性中心或不对称中心。光学异构体包括非对映异构体和对映异构体。彼此为不可重叠的镜像的光学异构体被称作“对映异构体”。彼此不为可重叠的镜像的光学异构体被称作“非对映异构体”。
含有等量的、相反手性的两种单独的对映异构体形式的混合物被称作“外消旋混合物”。
在本发明的含义内，“互变异构体”是指通过质子转移重排(prototropie)，即通过氢原子的迁移和双键的位置的改变而获得的化合物的结构异构体。化合物的不同互变异构体通常是可互相转化的，并且按比例平衡地存在于溶液中，所述比例可以根据所使用的溶剂、温度或pH而变化。
在本发明中，“药学上可接受的”被理解为是指其用于制备药物组合物，所述组合物一般是安全的，无毒的，在生物学或其他方面满足需要并且所述组合物可以被接受用于兽类和人类药物用途。
在本发明中，化合物的“药学上可接受的盐”被理解为指代下列盐，其是药学上可接受的(如本文所定义的)盐并且其具备预期的母体化合物的药理活性。这种盐包括：
(1)与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐，或与有机酸如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟萘酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水杨酸、琥珀酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三甲基乙酸、三氟乙酸等形成的酸加成盐；和
(2)当母体化合物中存在的酸质子被金属离子，例如，碱金属离子(例如，Na
+、K
+或Li
+)，碱土金属离子(如Ca
2+或Mg
2+)或铝离子代替；或者与有机碱或无机碱配位时形成的盐。可接受的有机碱包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠。
在本发明中，术语“卤素”是指氟、溴、氯或碘原子。
术语“C
1-6烷基”是指包含1至6个碳原子的饱和的直链或支链的烃链。代表性的例子包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。
术语“C
1-6亚烷基”指包含1至6个碳原子的二价烃链。代表性的例子包括，但不限于，亚甲基(-CH
2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH
3)-)、1,2-亚乙基(-CH
2CH
2)-、1,1-亚丙基(-CH(CH
2CH
3)-)、1,2-亚丙基(-CH
2CH(CH
3)-)、1,3-亚丙基(-CH
2CH
2CH
2-)、1,4-亚丁基(-CH
2CH
2CH
2CH
2-)和1,5-亚丁基(-CH
2CH
2CH
2CH
2CH
2-)等。
术语“C
2-6烯基”是指具有至少一个双键并且具有2至6个碳原子的直链或支链烃链。代表性的例子包括，但不限于，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等。
术语“C
2-6炔基”是指具有至少一个三键并且具有2至6个碳原子的直链或支链烃链。代表性的例子包括，但不限于，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。
术语“C
1-6烷氧基”是指-O-(C
1-6烷基)，其中C
1-6烷基的定义如上所述。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
术语“卤代C
1-6烷基”是指C
1-6烷基被一个或多个卤素取代，其中C
1-6烷基、卤素的定义如上所述。
术语“C
3-6环烷基”指包含3至6个碳原子的饱和或部分不饱和单环烃系统，代表性的例子包括，但不限于，环己基、环戊基、环丁基、环丙基、环己烯基等。
术语“3-6元杂环基”指包含3至6个环原子，其中1-3个环原子为选自氮、氧或S(O)
m(其中m是0、1或2)的杂原子的饱和或部分不饱和单环烃系统，包括3元、4元、5元、6元杂环基，代表性的例子包括，但不限于，环氧乙烷基、吡咯 烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基等。
术语“5-7元杂环基”指包含5至7个环原子，其中1-3个环原子为选自氮、氧或S(O)
m(其中m是0、1或2)的杂原子的饱和或部分不饱和单环烃系统，包括5元、6元、7元杂环基，代表性的例子包括，但不限于，吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、高吗啉基等。
术语“C
5-10芳基”指具有共轭的π电子体系的5至10元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，包括C
6芳基、C
7芳基、C
8芳基、C
9芳基、C
10芳基，例如苯基和萘基，更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
术语“C
6-10芳氧基”是指-O-(C
6-10烷基)，其中C
6-10烷基的定义如上所述。
术语“5-10元杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至10个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮，包括5元、6元、7元、8元、9元、10元杂芳基，优选含有1至2个杂原子的5元或6元杂芳基，例如喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
术语“羟基”是指-OH基团。
术语“硝基”指-NO
2。
术语“氨基”是指-NH
2。
术语“氰基”是指-CN。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
通过阅读下列实施例，本领域技术人员将会更好地理解本发明。这些实施例仅用于解释本发明。
本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
所有蒸发均使用旋转蒸发器在真空中进行。
将分析样品在室温下真空干燥(1-5mmHg)。实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)。在硅胶板上进行薄层色谱(TLC)，通过UV光(214和254nm)观察斑点。通过柱纯化和快速色谱法使用硅胶(200-300目)进行。混合溶剂体系按体积比例报告。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。(δ)以10
-6(ppm)的单位给出。测定溶剂为氘代氯仿(CDCl
3)，氘代二甲亚砜(DMSO-d
6)，氘代甲醇(CD
3OD)或者氘代乙腈(CD
3CN)。内标为四甲基硅烷(TMS)。使用下列缩写：s为单峰，bs为宽单峰，d为二重峰，t为三重峰，qdt为四重峰，m为多重峰或大量峰，dd为双二重峰等。
所用液质联用仪是具有电喷雾电离的Agilent 1200系列6110或6120质谱仪，除非另有说明，一般LCMS条件如下：
方法A：Agilent LCMS 1200-6110，柱：Waters X-Bridge C18(50毫米×4.6毫米×3.5微米)；柱温：40℃；流速：1.5mL/min；流动相：在0.8分钟内从95％[水+0.05％三氟乙酸]和5％[乙腈+0.05％三氟乙酸]的混合溶剂换至0％[水+ 0.05％三氟乙酸]和100％[CH3CN+0.05％三氟乙酸]的混合溶剂，然后在此下条件保持0.4分钟，最后改为95％[水+0.05％三氟乙酸]和5％[CH3CN+0.05％三氟乙酸]，在此条件下保持0.01分钟；
方法B：Agilent LCMS 1200-6110，柱：Waters X-Bridge C18(50毫米×4.6毫米×3.5微米)；柱温：40℃；流速：2.0mL/min；流动相：在1.6分钟内从95％[水+0.05％三氟乙酸]和5％[乙腈+0.05％三氟乙酸]的混合溶剂换至0％[水+0.05％三氟乙酸]和100％[乙腈+0.05％三氟乙酸]的混合溶剂，然后在此下条件为1.4分钟，最后在0.05分钟内变为95％[水+0.05％三氟乙酸]和5％[乙腈+0.05％三氟乙酸]的混合溶剂，在此条件下保持0.7分钟；
方法C：Agilent LCMS 1200-6120，柱：Waters X-Bridge C18(50毫米×4.6毫米×3.5微米)；柱温：40℃；流速：2.0mL/min；流动相：在1.6分钟内从95％[水+10mM碳酸氢铵]和5％乙腈至0％[水+10mM碳酸氢铵]和100％乙腈，然后在此条件下保持1.4分钟，最后在0.1分钟内换为95％[水+10mM碳酸氢铵]和5％乙腈并在此条件下保持0.7分钟。
核磁共振仪：Bruker ARX-500型高分辨质谱和Bruker ARX-400型高分辨质谱。
MTT检测仪器：Thermo Scientific Multiskan GO全波长酶标仪。
薄层层析硅胶板使用青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。
实施例中如无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温。
实施例1
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺1
第一步：4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1
将15g(65.2mmol)4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺1-0溶于326mL(326mmol)1M三溴化硼二氯甲烷溶液中，室温搅拌48小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，将反应液倒入1千克碎冰中，搅拌，乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并，干燥，旋干。获得4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1(11g)，灰白色固体，收率78.0％。MS(ESI):217.6[M+1]
+。
第二步：(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯1-2
将4g(18.6mmol)4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1、5g(22mmol)(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯和12.8g(93mmol)碳酸钾溶于50mL DMF中，在120℃下反应2小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，加入200mL水，搅拌30分钟，分液，二氯甲烷萃取(3×25mL)，合并，干燥，旋干获得粗品。粗品经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，获得(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯1-2(9.2g)，橙红色固体，收率100％。MS(ESI):360.6[M+1]
+。
第三步：3-(2-氨基乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺1-3
将9.2g(25.5mmol)(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯1-2溶于100mL 4M氯化氢/二氧六环中，室温搅拌过夜。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，加入200mL甲基叔丁基醚，搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得3-(2-氨基乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺1-3(7.1g)为黄白色固体7.1g，收率100％。MS(ESI):260.6[M+1]
+。
第四步：5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-4
将7.1g(27.4mmol)3-(2-氨基乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺1-3和17.6g(137mmol)DIEA溶于150mL乙醇中，在80℃下反应16小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，浓缩反应液，加入水，乙酸乙酯萃取(3×25mL)，合并，干燥， 旋干。获得5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-4为橙色油状物(8g)，收率100％。MS(ESI):224.2[M+1]
+。
第五步：5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-5
将8g(35.6mmol)5-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-4和2g 10％Pd/C悬浮于150mL乙醇中，室温搅拌过夜。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，过滤，洗涤，旋干获得粗品。粗品经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，获得5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-5为白色固体5g，收率73.0％。MS(ESI):192.2[M+1]
+。
第六步：2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂环苊烯-7-甲酰胺1-6
将5g(25.8mmol)5-氨基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-甲酰胺1-5和3.4g(28.4mmol)溴乙腈溶于100mL甲醇中，室温搅拌10小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝5:1)检测，反应结束后，过滤，洗涤，抽干。获得2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂环苊烯-7-甲酰胺1-6为灰白色固体(2g)，收率35.2％。MS(ESI):219.2[M+1]
+。
第七步：2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂
苊烯-7-甲酰胺1
将100mg(0.45mmol)2-氨基-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂环苊烯-7-甲酰胺、61mg(0.45mmol)1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸、199mg(0.54mmol)HATU和135mg(1.3mmol)三乙胺溶于2mLDMF中，室温搅拌16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝5:1)检测，反应完全后，加入10mL水，搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-3,4-二氢-5-氧杂-1,2a-二氮杂苊烯-7-甲酰胺1为白色固体30mg，收率18.8％。MS(ESI):335.4[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),7.91(s,1H),7.57(s,1H),7.30(d,J＝14.8Hz,2H),6.64(s,1H),4.62(d,J＝7.1Hz,2H),4.54(s,2H),4.21(s,2H),2.17(s,3H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H)。
按照与实施例1类似的程序，由3-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸替换第七步中的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸，得到化合物2，为白色固体；由3-乙基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸替换第七步中的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸，得到化合物3，为白色固体。
实施例4
1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺4
第一步：(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯4-1
将4g(18.6mmol)4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1、5g(22mmol)(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯和12.8g(93mmol)碳酸钾溶于50mL DMF中，在120℃下反应2小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，加入200mL水，搅拌30分钟，分液，二氯甲烷萃取(3×25mL)，有机相合并，干燥，旋干获得粗品。粗品经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，获得8.5g(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯4-1为橙红色固体，收率100％。MS(ESI):374.8[M+1]
+。
第二步：3-(2-氨基丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺4-2
将8.5g(22.6mmol)(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯酯溶于100mL 4M氯化氢/二氧六环中，室温搅拌过夜。TLC(乙酸乙酯)检测， 反应结束后，加入200mL甲基叔丁基醚，搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得10.1g 3-(2-氨基丙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺4-2为黄白色固体，收率100％。MS(ESI):274.8[M+1]
+。
第三步：6-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-3
将10.1g(17.4mmol)3-(2-氨基乙氧基)-4-氯-5-硝基苯甲酰胺4-2和13.6g(105mmol)DIEA溶于75mLDMSO中，在100℃下反应16小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，浓缩反应液，加入水，乙酸乙酯萃取(3×25mL)，合并，干燥，旋干。获得4.3g 6-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-3为橙色固体物，收率100％。MS(ESI):238.4[M+1]
+。
第四步：6-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-4
将4.3g(18.6mmol)6-硝基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-3和0.86g 10％Pd/C悬浮于150mL乙醇中，室温搅拌过夜。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，过滤，洗涤，旋干获得粗品。粗品经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，获得1.5g 6-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-4为白色固体，收率38.7％。MS(ESI):208.1[M+1]
+。
第五步：1-氨基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺4-5
将1.5g(7.2mmol)6-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]高吗林-8-甲酰胺4-4和0.95g(7.9mmol)溴乙腈溶于20mL甲醇中，室温搅拌10小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝5:1)检测，反应结束后，过滤，洗涤，抽干。获得1.7g 1-氨基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺3-5为白色固体1.7g，收率100％。MS(ESI):233.4[M+1]
+。
第六步：1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二
氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺4
1-氨基-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺3-6(100mg，0.43mmol)溶于3mL DMF中，加入66mg(0.43mmol)1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸、196mg(0.52mmol)HATU和131mg(1.29mmol)三乙胺，加热至90℃，反应16小时，冷却至室温，有固体析出，过滤，用少量甲醇洗涤，抽干，得25mg 1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-8,9-二氢-7H-6-氧杂-2,9a-二氮杂苯并[cd]薁-4-甲酰胺4为白色固体，收率15.76％。MS(ESI):369.2[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.2(s,1H),7.79(s,1H),7.70(s,2H),7.2(s,1H),6.40(s,1H),4.20(m,4H),4.05–3.91(m,2H),2.30(s,3H),2.11(q,J＝8.2Hz,2H),1.29(t,J＝8.2Hz,3H)。
按照与实施例4类似的程序，由3-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸替换第六步中的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸，得到化合物5，为白色固体；由3-乙基-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸替换第七步中的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸，得到化合物6，为白色固体。
实施例7
7-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7
第一步：(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-1
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1(2g，9.3mmol)、N-Boc-溴乙胺(2.5g，11mmol)和碳酸钾(6.4g，46.5mmol)悬浮于25mL DMF中，在120℃下反应2小时。TLC(乙酸乙酯)检测显示反应结束，加入100mL水，100mL乙酸乙酯萃取2次，水洗，用无水硫酸钠干燥，旋干。获得(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-1(2.75g，7.7mmol)，橙色固体，收率82.8％。MS(ESI):360.1[M+1]
+。
第二步：(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
7-2
将(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-1(2.8g，7.7mmol)、丙胺(0.7g，11.6mmol)和DIEA(2.9g，23.1mmol)溶于30mL乙醇中，在90℃下反应12小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，冷却至0℃下，反应体系形成沉淀，过滤，洗涤，抽干。获得(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-2(2.5g，6.5mmol)，橙色固体，收率80.6％。MS(ESI):383.4[M+1]
+。
第三步：(2-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
7-3
将(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-2(2.5g，6.5mmol)溶于150mL乙醇中，加入0.25g钯碳，抽排空气后通入氢气在室温下反应12小时。TLC(乙酸乙酯)检测显示反应结束，过滤，旋干，过硅胶柱纯化(乙酸乙酯)。获得(2-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-3(2.0g，5.6mmol)，无色油状物，收率83.3％。MS(ESI):353.4[M+1]
+。
第四步：(2-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨
基甲酸叔丁酯7-4
将(2-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-3(2g，5.6mmol)和溴乙腈(0.75g，6.2mmol)溶于20mL甲醇中，室温搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯)检测显示反应结束，加入甲基叔丁基醚(60mL)室温搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得(2-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-4(2g，5.2mmol)白色固体，收率95.2％。MS(ESI):378.2[M+1]
+。
第五步：(2-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基
-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-5
将(2-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-4(1g，2.65mmol)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(0.49g，3.18mmol)、HATU(1.5g，3.9mmol)和三乙胺(0.53g，5.3mmol)溶于5mL DMF中，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，加入20mL水搅拌30 分钟，过滤，洗涤，抽干。获得(2-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-5(1.2g，2.33mmol)白色固体，收率88.2％。MS(ESI):514.6[M+1]
+。
第六步：7-(2-氨基乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-
苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7-6
将(2-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)乙基)氨基甲酸叔丁酯7-5(1.2g，2.33mmol)溶于5mL 1M HCl/二氧六环中，室温搅拌12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1+Et
3N)检测，反应结束后，加入甲基叔丁基醚(20mL)搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得7-(2-氨基乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7-6(0.8g，1.93mmol)白色固体，收率72.7％。MS(ESI):414.6[M+1]
+。
第七步：7-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑
-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7
将7-(2-氨基乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7-6(100mg，0.24mmol)、N,N-二甲基磺酰氯(52mg，0.36mg)和DIEA(92.8mg，0.72mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在40℃下反应12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，旋干反应液，制备TLC纯化(DCM：MeOH＝10：1)。获得7-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7(20mg，0.038mmol)为白色固体20mg，收率18.1％。MS(ESI):521.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.85(s,1H),8.11(s,1H),7.68-7.51(m,2H),7.51-7.06(m,2H),6.64(s,1H),4.93-4.51(m,2H),4.51-4.02(m,4H),3.45(q,J＝7.8Hz,2H),2.70(s,6H),2.18(s,3H),1.82-1.70(m,2H),1.36(t,t＝7.8Hz,3H),0.99(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例8
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(2-((N-甲基氨磺酰基)氨基)乙氧基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺8
将7-(2-氨基乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7-6(100mg，0.24mmol)、N-甲基磺酰氯(46mg，0.36mg)和DIEA (92.8mg，0.72mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在40℃下反应12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，旋干反应液，制备TLC纯化(DCM：MeOH＝10：1)。获得2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(2-((N-甲基氨磺酰基)氨基)乙氧基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺8(10mg，0.020mmol)，白色固体，收率9.1％。MS(ESI):507.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.03(s,1H),7.69(s,1H),7.50-7.31(m,2H),7.25(s,1H),6.84(s,1H),6.65(s,1H),4.75-4.56(m,2H),4.49-4.38(m,2H),4.38-4.16(m,2H),3.33–3.24(m,2H),2.49(s,3H),2.19(s,3H),2.06-1.91(m,1H),1.91–1.71(m,2H),1.42-1.31(m,3H),0.98–0.88(m,3H)。
实施例9
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(2-(氨磺酰基氨基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺9
第一步：N-(2-((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基
-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨磺酰基)氨基甲酸叔丁酯9-1
将氯磺酰异氰酸酯(40mg，0.28mmol)溶于5mL二氯甲烷中，滴加叔丁醇(23mg，0.31mmol)，室温搅拌2小时，7-(2-氨基乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺7-6(100mg，0.24mmol)加入反应液，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，旋干反应液。获得N-(2-((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨磺酰基)氨基甲酸叔丁酯9-1(110mg，0.18mmol)，白色固体，收率84.6％。MS(ESI):593.7[M+1]
+。
第二步：2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(2-(氨磺酰基氨基)
乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺9
将N-(2-((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氨磺酰基)氨基甲酸叔丁酯9-1(110mg，0.16mmol)溶于HCl/二氧六环(5mL 1M)中，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1+Et
3N)检测，反应结束后，加入甲基叔丁基醚(20mL)搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(2-(氨磺酰基氨基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(15mg，0.030mmol)白色固体9，收率16.7％。MS(ESI):493.7[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.12(s,1H),7.69(s,1H),7.50-7.31(m,2H),7.25 (s,1H),6.84(s,1H),6.65(s,1H),6.45(s,1H),4.75-4.56(m,2H),4.49-4.38(m,2H),4.38-4.16(m,2H),3.33-3.24(m,2H),2.19(s,3H),2.06-1.91(m,1H),1.91-1.71(m,2H),1.42-1.31(m,3H),0.98-0.88(m,3H)。
实施例10
1-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10
第一步：(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
10-1
4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺1-0(500mg，2.17mmol)溶于乙醇(20ml)中，加入(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(730mg，3.25mmol)，DIEA(840mg，6.5mmol)，氮气保护下，加热至90℃，反应过夜。冷却至0℃，搅拌2小时，过滤，用冷乙醇洗涤，抽干得(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-1(484mg，1.26mmol)，红色固体，收率58.3％。MS(ESI):383.7[M+1]
+。
第二步：(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
10-2
(4-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-1(484mg，1.26mmol)溶于乙醇(10ml)和乙酸乙酯(10ml)的混合溶液中，将体系置换为氮气，加入钯碳(48mg，10％m/m)，将体系置换为H
2，室温反应2小时。加硅藻土过滤，用乙醇和乙酸乙酯的混合溶液(1:1)洗涤，滤液旋干得粗品，粗 品经硅胶柱层析(洗脱液：甲醇：二氯甲烷＝1:10)得(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-2(388mg，1.09mmol)，白色固体，收率87％。MS(ESI):353.2[M+1]
+。
第三步：(4-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基
甲酸叔丁酯10-3
(4-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-2(388mg，0.99mmol)溶于甲醇(10ml)中，将体系置换为氮气，加入溴化氰(110mg，1.04mmol)，室温反应过夜。有固体析出，过滤，固体用甲醇洗涤，抽干得(4-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-3(297mg，0.78mmol)白色固体，收率79.62％。MS(ESI):378.2[M+1]
+。
第四步：(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-
苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-4
(4-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-3(297mg，0.79mmol)溶于DMF(5mL)中，加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(122mg，0.79mmol)、HATU(361mg，0.95mmol)和三乙胺(240mg，2.37mmol)，加热至90℃，反应16小时，冷却至室温，加入40ml水，有固体析出，过滤，用少量甲醇洗涤，抽干，得(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-4(330mg，0.64mmol)，白色固体，收率81％。MS(ESI):514.3[M+1]
+。
第五步：1-(4-氨基丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯
并[d]咪唑-5-甲酰胺10-5
(4-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯10-4(330mg，0.64mmol)溶于盐酸/二氧六环溶液(4mL,4M)中，室温反应16小时，有固体析出，过滤，抽干，得1-(4-氨基丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10-5(313mg，0.75mmol)，棕色固体。MS(ESI):414.7[M+1]
+。
第六步：1-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-
甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10
将1-(4-氨基丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10-5(100mg，0.24mmol)、N,N-二甲基氨磺酰氯(35mg，0.24mmol)和三乙胺(73mg，0.72mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，室温反应16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，加入10ml水和10ml二氯甲烷，分液，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，蒸干，制备液相纯化得1-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10(白色固体，收率16％)。MS(ESI):521.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),7.72(s,1H),7.65(s,1H),7.46(s,3H), 6.41(s,1H),4.2(m,4H),3.85(s,3H),2.87(t,J＝7.8Hz,2H),2.75(s,6H),2.32(s,3H),1.70(m,2H),1.51(m,2H),1.28(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例11
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1-(4-((N-甲基氨磺酰基)氨基)丁基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺11
将1-(4-氨基丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10-5(100mg，0.24mmol)、N-甲基氨磺酰氯(30mg，0.24mmol)和三乙胺(73mg，0.72mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，室温反应16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，加入10ml水和10ml二氯甲烷，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸干，制备板纯化得1-(4-((N-甲基胺磺酰基)氨基)丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺11(18mg，0.035mmol)为白色固体，收率14.69％。MS(ESI):507.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),7.72(s,1H),7.65(br,2H),7.46(s,3H),6.41(s,1H),4.32(m,4H),3.95(s,3H),2.77(t,J＝7.8Hz,2H),2.75(s,3H),2.22(s,3H),1.80(m,2H),1.51(m,2H),1.28(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例12
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1-(4-(氨磺酰基氨基)丁基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺12
将35mg(0.26mmol)氯磺酰异氰酸酯和22mg(0.29mmol)叔丁醇溶于二氯甲烷(5ml)中，冷却至0℃，反应1小时，加入1-(4-氨基丁基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺10-5(100mg，0.24mmol)和三乙胺(73mg，0.72mmol)，保持0℃，反应3小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，旋干。加入1ml 4M盐酸/二氧六环溶液，室温搅拌16小时，有固体析出，过滤，抽干得2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1-(4-(氨磺酰基氨基)丁基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺12(25mg，0.051mmol) 为白色固体，收率20.99％。MS(ESI):493.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),7.72(s,1H),7.65(br,1H),7.46(s,3H),6.41(s,1H),4.32(m,4H),3.95(s,3H),2.97(t,J＝7.8Hz,2H),2.42(s,3H),1.80(m,2H),1.51(m,2H),1.32(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例13
7-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13
第一步：(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-1
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1(0.72g，3.3mmol)、N-Boc-溴丁胺(1g，4mmol)和碳酸钾(2.2g，16.5mmol)悬浮于DMF(10mL)中，在120℃下反应2小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL)2次，水洗，用无水硫酸钠干燥，旋干。获得(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-1(1.4g，3.6mmol)为橙色固体，收率100％。MS(ESI):388.8[M+1]
+。
第二步：(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
13-2
将(2-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-1(1.4g，3.6mmol)、丙胺(0.3g，5.4mmol)和DIEA(1.4g，10.8mmol)溶于乙醇(20mL)中，在90℃下反应12小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，冷却至0℃下，有固体析出，过滤，洗涤，抽干。获得(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基) 丁基)氨基甲酸叔丁酯13-2(1.5g，3.6mmol)为橙色固体，收率99.3％。MS(ESI):411.5[M+1]
+。
第三步：(4-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
13-3
将(2-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-2(1.5g，3.6mmol)为溶于乙醇(100mL)中，加入钯碳(0.15g，10％)，抽排空气后通入氢气反应12小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，过滤，旋干，过硅胶柱纯化(乙酸乙酯/己烷)。获得(4-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-3(1g，2.6mmol)为无色油状物，收率71.3％。MS(ESI):381.5[M+1]
+。
第四步：(4-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丁基)氨
基甲酸叔丁酯13-4
将(4-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-3(1g，2.6mmol)和溴乙腈(0.35g，2.9mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯)检测，反应结束后，加入甲基叔丁基醚(40mL)室温搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得(4-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-4(1g，2.4mmol)为白色固体，收率96.2％。MS(ESI):406.5[M+1]
+。
第五步：(4-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基
-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-5
将(4-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-4(1g，2.4mmol)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(0.46g，2.9mmol)、HATU(1.3g，3.3mmol)和三乙胺(0.49g，4.8mmol)溶于DMF(5mL)中，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，加入水(20mL)搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得(4-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-5(1.2g，2.21mmol)为白色固体，收率88.2％。MS(ESI):542.6[M+1]
+。
第六步：7-(4-氨基丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-
苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13-6
将1.2g(4-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)叔丁基)丁基)氨基甲酸叔丁酯13-5(1.2g，2.21mmol)溶于HCl/二氧六环中(5mL，4M)，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1+Et
3N)检测，反应结束后，加入甲基叔丁基醚(20mL)搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得7-(4-氨基丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13-6(0.8g，1.81mmol)为白色固体，收率72.7％。MS(ESI):442.6[M+1]
+。
第七步：7-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑
-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13
将7-(4-氨基丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13-6(100mg，0.22mmol)、N,N-二甲基氨磺酰氯(48mg，0.34mg)和DIEA(85mg，0.66mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在40℃下反应12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，旋干反应液，制备TLC纯化(DCM：MeOH＝10：1)。获得7-(4-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丁氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺13(15mg，0.027mmol)为白色固体，收率12.1％。MS(ESI):549.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),8.03(s,1H),7.65(s,1H),7.40(s,1H),7.34(s,1H),7.31-7.20(m,1H),6.61(s,1H),4.51-4.62(m,2H),4.41-4.31(m,2H),4.30-4.15(m,2H),3.05-2.81(m,2H),2.66(s,6H),2.35(s,3H),1.98–2.10(m,4H),1.37(t,J＝7.81Hz,3H),0.92(t,J＝7.81,Hz,3H)。
实施例14
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(4-((N-甲基氨磺酰基)氨基)丁氧基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺14
按照与实施例13类似的程序，由化合物甲基氨磺酰氯替换第七步化合物N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物14，为白色固体。MS(ESI):535.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.16(s,1H),8.02(s,1H),7.67(s,1H),7.51-7.38(m,2H),6.94(s,1H),6.51(s,1H),4.75-4.53(m,2H),4.42-4.25(m,2H),4.25-4.10(m,2H),3.01-2.85(m,2H),2.46(s,3H),2.18(s,3H),1.77-1.69(m,4H),1.69-1.52(m,2H),1.42–1.31(m,3H),1.03–0.84(m,3H)。
实施例15
7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺15
第一步：(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-1
4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1(1.0g，4.62mmol)溶于15ml DMF中，加入(1.3mg，5.54mmol)(5-溴丙基)叔丁基氨基甲酸酯，(3.2mg，23.1mmol)碳酸钾，加热至120℃，反应4小时。冷却至室温，加入水(60ml)和二氯甲烷(60ml)，分液，水相用二氯甲烷(60ml)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，蒸干得(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-1(1.2g，3.2mmol)为红色固体，收率69％。MS(ESI):374.7[M+1]
+。
第二步：(3-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
15-2
(3-(5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-1(1.2g，3.2mmol)溶于乙醇(40ml)中，加入正丙胺(284mg，4.81mmol)，DIEA(1.244g，9.63mmol)，氮气保护下，加热至90℃，反应过夜。冷却至0℃，搅拌2小时，过滤，用冷乙醇洗涤，抽干得(3-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-2(1.0g，2.5mmol)为红色固体，收率78.50％。MS(ESI):397.4[M+1]
+。
第三步：(3-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
15-3
(3-(5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-2(1.0g，2.52mmol)溶于乙醇(15ml)和乙酸乙酯(15ml)的混合溶液中，将体系置换为氮气，加入钯碳(100mg，10％m/m)，将体系置换为H
2，室温反应2小时。加硅藻土过滤，用1:1的乙醇和乙酸乙酯的混合溶液洗涤，滤液旋干得粗品，粗 品经硅胶柱层析(洗脱液：甲醇：二氯甲烷＝1:10)得(3-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-3(0.6g，1.6mmol)为白色固体，收率64.97％。MS(ESI):367.2[M+1]
+。
第四步：(3-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)
氨基甲酸叔丁酯15-4
(3-(3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-3(0.6g，1.64mmol)溶于甲醇(10ml)中，将体系置换为氮气，加入溴化氰(182mg，1.72mmol)，室温反应过夜。有固体析出，过滤，固体用甲醇洗涤，抽干得(3-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-4(0.6g，1.53mmol)白色固体，收率93％。MS(ESI):392.2[M+1]
+。
第五步：(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-
苯并[d]咪唑-1-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-5
(3-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-4(0.6g，1.53mmol)溶于DMF(10mL)中，加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(236mg，1.53mmol)、HATU(700mg，1.84mmol)和三乙胺(464mg，4.59mmol)，加热至90℃，反应16小时，冷却至室温，加入80ml水，有固体析出，过滤，用少量甲醇洗涤，抽干，得(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-5(0.7g，1.33mmol)为白色固体，收率81％。MS(ESI):528.4[M+1]
+。
第六步：7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯
并[d]咪唑-5-甲酰胺15-6
(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-5(0.7g，1.33mmol)溶于盐酸/二氧六环溶液(7mL，4M)中，室温反应16小时，有固体析出，过滤，抽干，得7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺15-6(580mg，1.35mmol)为棕色固体。MS(ESI):428.7[M+1]
+。
第七步：7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑
-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺15
将7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺15-6(100mg，0.23mmol)、N,N-二甲基氨磺酰氯(33mg，0.23mmol)和三乙胺(71mg，0.70mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，加热至40℃，反应16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，旋干，制备板纯化得7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺15(36mg，0.067mmol)为白色固体，收率28％。MS(ESI):535.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.61(s,1H),7.79(s,2H),7.37(s,2H),6.86(s, 2H),3.97(m,6H),2.87(m,2H),2.66(s,6H),2.30(s,3H),1.98(m,2H),1.70(m,2H),1.29(t,J＝7.8Hz,3H),0.84(t,J＝7.8Hz,3H)。
按照与实施例15类似的程序，由氨磺酰氯替换第七步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物16，为浅黄色色固体；
由吡咯烷-1-磺酰氯替换第七步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物17，为浅黄色色固体。
由吗啉-4-磺酰氯替换第七步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物18，为黄色色固体。
由甲基(丙基)氨磺酰氯替换第七步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物19，为浅黄色色固体。
由二乙基氨磺酰氯替换第七步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物20，为白色色固体。
实施例21
1-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21
第一步：(2-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
21-1
4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺1-0(500mg，2.17mmol)溶于20ml乙醇中，加入(5-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(521mg，3.25mmol)，DIEA(840mg，6.5mmol)，氮气保护下，加热至90℃，反应过夜。冷却至0℃，搅拌2小时，过滤，用冷乙醇洗涤，抽干得(2-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-1(400mg，1.1mmol)为红色固体，收率52％。MS(ESI):355.2[M+1]
+。
第二步：(2-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
21-2
(2-((4-氨基甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-1(400mg，1.1mmol)溶于乙醇(5ml)和乙酸乙酯(5ml)的混合溶液中，将体系置换为氮气，加入钯碳(40mg，10％m/m)，将体系置换为H
2，室温反应2小时。加硅藻土过滤，用1:1的乙醇和乙酸乙酯的混合溶液洗涤，滤液旋干得粗品，粗品经硅胶柱层析(洗脱液：甲醇：二氯甲烷＝1:10)得(2-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-2(230mg，0.66mmol)为白色固体，收率63％。MS(ESI):325.2[M+1]
+。
第三步：(2-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基氨基甲
酸叔丁酯21-3
(2-((2-氨基-4-氨基甲酰基-6-甲氧基苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-2(230mg，0.66mmol)溶于甲醇(10ml)中，将体系置换为氮气，加入溴化氰(73mg，0.69mmol)，室温反应过夜。有固体析出，过滤，固体用甲醇洗涤，抽干得(2-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯21-3(223mg，0.64mmol)为白色固体，收率90％。MS(ESI):350.2[M+1]
+。
第四步：(2-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基
-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-4
(2-(2-氨基-5-氨基甲酰基-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯21-3(223mg，0.64mmol)溶于DMF(5mL)中，加入1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(99mg，0.64mmol)、HATU(293mg，0.77mmol)和三乙胺(194mg，1.92mmol)，加热至90℃，反应16小时，冷却至室温，加入水(30mL)，有固体析出，过滤，用少量甲醇洗涤，抽干，得(2-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-4(125mg，0.26mmol)为白色固体，收率40％。MS(ESI):486.2[M+1]
+。
第五步：1-(2-氨基乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-
苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21-5
(2-(5-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯21-4(125mg，0.26mmol)溶于盐酸/二氧六环溶液(2mL 4M)中，室温反应16小时，有固体析出，过滤，抽干，得1-(2-氨基乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21-5(92mg，0.24mmol)棕色固体，收率92％。MS(ESI):386.7[M+1]
+。
第六步：1-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-
甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21
将1-(2-氨基乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21-5(92mg，0.24mmol)、N,N-二甲基氨磺酰氯(35mg，0.24mmol)和三乙胺(73mg，0.72mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，室温反应16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，加入水(10mL)和二氯甲烷(10mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸干，制备液相纯化得1-(2-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)乙基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺21(28mg，0.057mmol)白色固体，收率23％。MS(ESI):493.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.3(s,1H),7.74(s,1H),7.37(s,2H),6.81(s,2H),4.53(t,J＝7.5Hz,2H),3.94(q,J＝8.0Hz,2H),3,75(s,3H),3.15(s,2H),2.64(s,6H),2.29(s,3H),1.28(t,J＝7.8Hz,3H)。
按照与实施例21类似的程序，由(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯替换第一步中的(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯，得到化合物22，为白色固体；按照与实施例22类似的程序，由氨磺酰氯替换第六步中的N,N-二甲基氨磺酰氯，得到化合物23，为白色固体。
实施例24
7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24
第一步：1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯24-1
将3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯24-0(200mg，1.4mmol)、氟乙醇(110.7mg，1.7mmol)、三苯基膦(550mg，2.1mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冷却至0℃，滴加偶氮二甲酸二甲酯(365mg，2.1mmol)，滴毕，室温搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)检测，反应结束后，加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，旋干获得粗品。粗品悬浮于100mL石油醚中，搅拌30分钟，过滤，洗涤，合并母液，旋干，获得1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯24-1(370mg)为黄色固体，收率100％。MS(ESI):187.2[M+1]
+。
第二步：1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸24-2
将1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯24-1(370mg，1.97mmol)溶于氢氧化钠(5mL，10％)和甲醇(5m)中，室温搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)检测。反应结束后，调节pH＝3-4，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，旋干。获得1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸24-2为白色固体220mg，收率59.4％。MS(ESI):187.2[M+1]
+。
第三步：(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基
-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯24-3
将(3-((2-氨基-5-氨基甲酰基-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯15-4(619mg，1.58mmol)、1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸24-2(300mg，1.74mmol)、HATU(900mg，2.37mmol)和三乙胺(480mg，4.74mmol)溶于DMF(10m)中，在90℃下反应12小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应结束后，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，旋干。获得(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯24-3为棕色 油状物0.7g，收率91.1％。MS(ESI):546.6[M+1]
+。
第四步：7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙
基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24-4
将(3-((5-氨基甲酰基-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯24-3(0.7mg，1.28mmol)溶于2MHCl/二氧六环中(10mL)，室温搅拌12小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应结束后，加入30mL甲基叔丁基醚，搅拌30分钟，过滤，洗涤。获得7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24-4为白色固体0.4g，收率51.2％，MS(ESI):446.6[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.57(s,1H),8.06(s,4H),7.68(s,1H),7.43(s,1H),7.35(s,1H),6.70(s,1H),4.99(s,1H),4.92(s,1H),4.88-4.81(m,1H),4.47-4.20(m,4H),3.01(m,2H),2.20(s,3H),2.18-2.08(m,2H),1.90-1.63(m,2H),0.83(t,J＝7.8Hz,3H)。
第五步：7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基
-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24
将7-(3-氨基丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24-4(107mg，0.24mmol)、N,N-二甲基氨磺酰氯(35mg，0.24mmol)和三乙胺(73mg，0.72mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，室温反应16小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1)检测，反应完全后，加入水(10mL)和二氯甲烷(10mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸干，制备液相纯化得7-(3-((N,N-二甲基氨磺酰基)氨基)丙氧基)-2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺24(42mg，0.076mmol)白色固体，收率31％。MS(ESI):553.2[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),8.09(s,1H),7.68(s,1H),7.53–7.16(m,3H),6.69(s,1H),5.05-4.67(m,4H),4.39-4.18(m,4H),2.67(s,7H),2.19(s,3H),2.11-1.85(m,3H),1.85-1.71(m,2H),0.88(t,J＝7.8Hz,3H)。
实施例25
7-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25
第一步：3-((5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
25-1
将4-氯-3-羟基-5-硝基苯甲酰胺1-1(0.5g，2.3mmol)、3-(溴甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.73g，2.7mmol)和碳酸钾悬(1.5g，11.5mmol)浮于DMF(10mL)中，在120℃下反应2小时。TLC(EA)检测，反应结束后，加入80mL水，乙酸乙酯萃取(80mL×2)，水洗，用无水硫酸钠干燥，旋干。获得3-((5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-1为橙色固体1.1g，收率100％。MS(ESI):400.1[M+1]
+。
第二步：3-((5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔
丁酯25-2
将3-((5-氨基甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-1(1.1g，2.7mmol)、丙胺(0.24g，4.1mmol)和DIEA(1.0g，8.1mmol)溶于乙醇(20mL)中，在90℃下反应12小时。TLC(EA)检测，反应结束后，冷却至0℃下，过滤，洗涤，抽干。获得3-((5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-2为橙色固体0.9g，收率81.8％。MS(ESI):425.5[M+1]
+。
第三步：3-((3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔
丁酯25-3
将3-((5-氨基甲酰基-3-硝基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-2(0.9g，2.1mmol)溶于乙醇(50mL)中，加入钯碳(0.09g，10％)，抽排空气后通入氢气反应12小时。TLC(EA)检测，反应结束后，过滤，旋干，过硅胶柱纯化(EA)。获得3-((3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-3为无色油状物0.9g，收率100％。MS(ESI):393.5[M+1]
+。
第四步：3-((2-氨基-5-氨基甲酰-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯
烷-1-甲酸叔丁酯25-4
将3-((3-氨基-5-氨基甲酰基-2-(丙基氨基)苯氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-3(0.9g，2.3mmol)和溴乙腈(0.27g，2.5mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温搅拌12小时。TLC(EA)检测，反应结束后，加入50mL甲基叔丁基醚室温搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得3-((2-氨基-5-氨基甲酰-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-4为白色固体(0.5g，1.2mmol)，收率51.5％。MS(ESI):418.5[M+1]
+。
第五步：3-(((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯
并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-5
将3-((2-氨基-5-氨基甲酰-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-4(0.5g，1.2mmol)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(0.22g，1.43mmol)、HATU(0.68g，1.8mmol)和三乙胺(0.36g，3.6mmol)溶于DMF(5mL)中，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，加入20mL水搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得3-(((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-5(0.6g，1.08mmol)为白色固体，收率85.7％。MS(ESI):554.7[M+1]
+。
第六步：2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(吡咯烷-3-基甲氧
基)-1H苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25-6
向3-(((5-氨基甲酰-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯25-5溶于(0.6g，1.08mmol)中加入HCl/二氧六环(5mL，1M)，室温搅拌12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1+Et
3N)检测，反应结束后，加入甲基叔丁基醚(20mL)搅拌30分钟，过滤，洗涤，抽干。获得2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(吡咯烷-3-基甲氧基)-1H苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25-6(0.4g，0.88mmol)为白色固体，收率79.2％。MS(ESI):454.7[M+1]
+。
第七步：7-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基
-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25
将2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-7-(吡咯烷-3-基甲氧基)-1H苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25-6(100mg，0.24mmol)、N,N-二甲基磺酰氯25-6(47mg，0.33mg)和DIEA(85mg，0.66mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在40℃下反应12小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测，反应结束后，旋干反应液，制备TLC纯化(DCM：MeOH＝10：1)。获得7-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺25(10mg，0.017mmol)为白色固体，收率8.9％。MS(ESI):561.7[M+1]
+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),8.09(s,1H),7.72(s,1H),7.46(s,1H),7.35(s,1H),6.63(s,1H),4.42-4.08(m,4H),3.60-3.47(m,2H),3.09-2.80(m,2H), 2.76(s,6H),2.55(s,2H),2.18(s,4H),2.08-1.71(m,4H),1.41-1.31(t,J＝7.8Hz,3H),1.01-0.88(t,J＝7.8Hz,3H)。
生物活性检测
测试例1：刺激THP1细胞产生干扰素β的测定
材料：
| 材料名称 | 供应商 | 产品编号 |
| RPMI 1640培养基 | invitrogen | A10491-01 |
| FBS | invitrogen | 10099141 |
| ADU-S100 | Chemietek | |
| 人IFN-beta DuoSet ELISA | R&D | DY814-05 |
| DuoSet ELISA辅助试剂盒2 | R&D | DY008 |
检测程序：
第一天：
1.细胞和化合物处理
-待测化合物配制成10mM的DMSO溶液，按3倍用DMSO稀释，配制成3.3mM、1.1mM、0.4mM、0.1mM、0.033mM、0.0137mM和0.0046mM溶液
-测定培养基：RPMI1640培养基和0.5％HIFBS
-在96孔板中每孔加入98μL THP1悬浮液100000个细胞。
-每孔加入2uL上面准备的待测化合物，每个化合物测试2次。
-在细胞培养箱中孵育5小时
-收获细胞上清液，以200×g离心5分钟并储存在-80℃
2.铺板(Coat plate)
-将100ul/孔稀释的捕获抗体加入ELISA板中，密封平板并在室温下孵育过夜
第二天：ELISA测定。
1.清洗并处理板
-用300μl/孔的1X洗涤缓冲液洗涤板3次。
-向每个孔中加入300μl试剂稀释液，并在室温下孵育1.5小时。
-按每孔300μl的量用洗涤缓冲液洗涤板3次。
2.样品的准备
-收集细胞上清液，然后离心3分钟(2000g)
3.添加样品
-每孔加入100ul制备的样品至ELISA板，并在室温下孵育2小时。
4.洗涤并加入检测抗体溶液
-用300μl/孔的1X洗涤缓冲液洗涤板3次。
-向每个孔中加入100μl检测抗体溶液，并在室温下孵育2小时。
5.洗涤并加入HRP抗体溶液
-按每孔300μl的量用洗涤缓冲液洗涤板3次。
-向每个孔中加入100μl HRP抗体溶液，并在室温下孵育20分钟。
6.洗涤并加入底物溶液
-用300μl/孔的1X洗涤缓冲液洗涤板3次。
-向每个孔中加入100μl底物，在室温下孵育20分钟。
7.读取数据
-不要洗涤，直接加入50μl终止溶液，并在5分钟内读取板(OD450)
| 化合物 | EC 50(μM) |
| ADU-S100 | 4.2 |
| 实施例1 | 42 |
| 实施例2 | 80 |
| 实施例3 | 100 |
| 实施例4 | 12 |
| 实施例5 | 60 |
| 实施例6 | 300 |
| 实施例7 | 12 |
| 实施例8 | 14.6 |
| 实施例9 | 300 |
| 实施例10 | 124 |
| 实施例11 | 300 |
| 实施例12 | 300 |
| 实施例13 | 4.2 |
| 实施例14 | 3.9 |
| 实施例15 | 3.3 |
| 实施例16 | 4.1 |
| 实施例17 | 2.1 |
| 实施例18 | 4.2 |
| 实施例19 | 8.2 |
| 实施例20 | 2.2 |
| 实施例21 | 300 |
| 实施例22 | 12.7 |
| 实施例23 | 300 |
| 实施例25 | 未测 |
| 实施例25 | 1.8 |
结论：本发明的化合物具有优良的活性，可以有效激活刺激THP1细胞产生干扰素β，从而具有优良的消炎和抗肿瘤的活性。
测试例2：溶解度测定
操作步骤：
1.标准曲线的建立：
1)取样品2毫克，溶解于400μL的DMSO溶剂，配制成5毫克/毫升的溶液。
2)取200μL 5毫克/毫升的溶液，加入200μL的DMSO溶剂，配制成2.5毫克/毫升的溶液。
3)取200μL 2.5毫克/毫升的溶液，加入200μL的DMSO溶剂，配制成1.25毫克/毫升的溶液。
4)取200μL 1.25毫克/毫升的溶液，加入200μL的DMSO溶剂，配制成0.625毫克/毫升的溶液。
5)取200μL 0.625毫克/毫升的溶液，加入200μL的DMSO溶剂，配制成0.32毫克/毫升的溶液。
6)取200μL 0.32毫克/毫升的溶液，加入200μL的DMSO溶剂，配制成0.16毫克/毫升的溶液。
7)取1μL体积的样品，注入HPLC，获得样品峰，测得峰的积分
8)以浓度为横坐标，峰的积分为纵坐标，作图获得标准曲线。
2.测量样品的溶解度：
1)将2mg样品用100μL PEG400溶解，充分混合，然后加入150μLPBS。涡旋10分钟，再在振动筛上振动1小时。
2)离心分离机离心30分钟(3000rpm)。
3)取20μL清液，加入20μL DMSO，混合均匀。
4)取1μL体积的样品，注入HPLC，获得样品峰，测得峰的积分。
由标准曲线获得浓度
结论：本发明化合物有良好的溶解度，有利于体内吸收，更重要的是，可以配制成溶液进行瘤内注射，以提高药效。
Claims (13)
- 一种通式(I)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其药学上可接受的盐，其中：X选自O、NR a和C(R a)(R b)；Y选自N和CR a；为环戊二烯基或5元杂芳基，U、V、W各自独立地选自N、O和C；
R 1和R 2各自独立地选自氢原子、氰基和-CON(R m)(R n)；R 3、R 4、R 5和R 6各自独立地选自氢原子、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基、氰基、-C(O)R m、-OC(O)R m、-SR m、-S(O)R m、-S(O) 2R m、-S(O) 2N(R m)(R n)、-N(R m)(R n)、-N(R m)-C(O)R n、-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-C(O)-N(R m)(R n)、-N(R m)-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-S(O) 2-N(R m)(R n)和-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)(R n)，其中所述C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基和3-6元杂环基各自独立地任选被一个或多个R c取代；R 7和R 8与相连接的原子一起形成5-7元杂环基，其中所述5-7元杂环基任选被一个或多个R c取代；或者，R 7和R 8中一个选自-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚烯基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚炔基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚烯基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚炔基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)和-(C 1-C 6亚烷基)-3-6元杂环-S(O) 2-N(R m)(R n)，且R 7和R 8中另一个选自C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、卤素、卤代C 1-C 6烷基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基、氰基、-C(O)R m、-OC(O)R m、-SR m、-S(O)R m、-S(O) 2R m、-S(O) 2N(R m)(R n)、-N(R m)(R n)、-N(R m)-C(O)R n、-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)(R n)、-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-C(O)-N(R m)(R n)、-N(R m)-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6 亚烷基)-N(R m)-C(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-S(O) 2-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚烯基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚炔基)-N(R m)-S(O)-N(R m)(R n)、-(C 2-C 6亚烯基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)和-(C 2-C 6亚炔基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)，其中所述C 1-C 6亚烷基、C 2-C 6亚烯基C 2-C 6亚炔基、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 1-C 6烷氧基、卤代C 1-C 6烷基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基和3-6元杂环基各自独立地任选被一个或多个R c取代；R a和R b各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基、3-6元杂环基、硝基和氰基；R c选自氢原子、卤素、羟基、氨基、-N(R m)(R n)、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基、5-10杂环基、氨基、硝基和氰基；以及R m和R n各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-6环烷基、C 6-10芳基、C 6-10芳氧基、5-10元杂芳基、5-10杂环基、硝基和氰基；或者，R m和R n与相连接的氮原子一起形成5-7元杂环基，其中所述5-7元杂环基任选被一个或多个R c取代。 - 根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(I-1)化合物和通式(I-2)化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其中：X、Y、R 1-R 3、R 5、R 7和R 8如权利要求1中所定义。 - 根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(I-1a)化合物和通式(I-2a)化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其中：R 3、R 5、R 7和R 8如权利要求1中所定义。 - 根据权利要求1-3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中R 7和R 8中一个选自-(C 1-C 6亚烷基)-N(R m)-S(O) 2-N(R m)(R n)和-(C 1-C 6亚烷基)-3-6元杂环-S(O) 2-N(R m)(R n)，且R 7和R 8中另一个选自C 1-C 6烷基，其中R m和R n各自独立地选自氢原子和C 1-C 6烷基，或者R m和R n与相连接的氮原子一起形成5-7元杂环基，优选5元杂环基或6元杂环基，更优选吡咯烷基或吗啉基。
- 根据权利要求1-3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中R 7和R 8与相连接的原子一起形成5-7元杂环基，优选6元杂环基或7元杂环基。
- 根据权利要求1-5中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中R 3选自C 1-C 6烷基和卤代C 1-C 6烷基。
- 根据权利要求1-6中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中R 5选自C 1-C 6烷基和C 1-C 6烷氧基。
- 根据权利要求1-7中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：
- 一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，其包括：
通式(I-A)化合物和通式(I-B)化合物发生缩合反应得到通式(I)化合物，其中：X、Y、R 1-R 8如权利要求1中所定义。
- 一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-8中任一项所述的通式(I)所示的化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
- 根据权利要求1-8中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗STING介导的疾病或病症的药物中的用途。
- 根据权利要求11所述的用途，其中所述疾病或病症选自炎性疾病、过敏性和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症和癌前综合征。
- 根据权利要求1-8中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求10中任一项所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，优选地，所述癌症选自乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和尿道癌。
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