WO2020251253A1 - Vital melon for preventing or treating obesity, and extract thereof - Google Patents

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WO2020251253A1
WO2020251253A1 PCT/KR2020/007505 KR2020007505W WO2020251253A1 WO 2020251253 A1 WO2020251253 A1 WO 2020251253A1 KR 2020007505 W KR2020007505 W KR 2020007505W WO 2020251253 A1 WO2020251253 A1 WO 2020251253A1
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melon
vital
obesity
extract
fruit
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최영환
강남준
황미란
궈루
추이정웨이
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부산대학교 산학협력단
경상대학교 산학협력단
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Definitions

  • Obesity refers to a phenomenon in which excess calories are accumulated in the body in the form of fat by ingesting excess calories compared to consumed calories.
  • Obesity is thought to be caused by a variety of causes, such as genetic influence, environmental influence due to westernized diet, and psychological influence due to stress, but the exact cause or mechanism has not been clearly established.
  • causes such as genetic influence, environmental influence due to westernized diet, and psychological influence due to stress, but the exact cause or mechanism has not been clearly established.
  • obesity can act not only as a problem of obesity itself, but also as a cause of diseases such as cardiovascular disease or diabetes, a lot of interest in obesity treatment has been drawn around the world.
  • 1 is a diagram showing a fruited state of vital melon.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving obesity comprising the composition for anti-obesity.
  • the present invention provides a method for preventing or treating obesity, comprising administering an effective dose of the vital melon extract to an individual.
  • cucurbitacin B content is very high, 30 ⁇ g/g DW -1 to 60 ⁇ g/g DW -1 .
  • the standard cucurbitacin A and the standard cucurbitacin B were accurately weighed and dissolved in high performance liquid chromatography (HPLC)-grade ethanol to prepare a concentration of 1 mg/ml.
  • HPLC mobile phase solvent for cucurbitacin A was used as tertiary distilled water containing 0.1% formic acid
  • HPLC mobile phase solvent for cucurbitacin B was used as methanol containing 0.1% formic acid.

Abstract

The present invention relates to a Vital melon which is a first generation progeny of the cross of a wild oriental melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and a cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus); an anti-obesity composition comprising an extract of the Vital melon; a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity, comprising the anti-obesity composition; and an anti-obesity functional health food comprising the anti-obesity composition. The Vital melon of the present invention, which is a first generation progeny of the cross of a wild oriental melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and a cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus), exhibits an excellent anti-obesity effect and has more flesh than existing wild varieties of oriental melon, thus providing excellent productivity. In addition, the extract extracted from the Vital melon is a natural product and thus is safe; and based on the anti-obesity effect of the Vital melon, may be used in an anti-obesity pharmaceutical composition or an anti-obesity functional health food, and thus may be widely utilized in drug and functional health food industries.

Description

비만 예방 또는 치료용 바이탈 멜론 및 이의 추출물Vital melon and extracts thereof for preventing or treating obesity
본 발명은 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 교잡한 1세대 종자인 바이탈 멜론, 상기 바이탈 멜론 추출물을 포함하는 항비만용 조성물, 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 상기 항비만용 조성물을 포함하는 항비만용 건강기능식품에 관한 것이다.The present invention is a first-generation seed hybrid of wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus), a composition for anti-obesity comprising the vital melon extract, the composition for anti-obesity It relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity, including a health functional food for anti-obesity comprising the composition for anti-obesity.
지방화(Adipogenesis)란 미성숙지방세포(preadipocyte)로부터 지방세포가 분화되어 지방을 축적하게 되는 과정으로서, 이는 비만(obesity), 당뇨병(diabetes), 지방간(steatosis), 심장 질환(coronary heart disease)과 같은 질병을 일으킬 수 있는 위험 요인으로 알려져 있다. 성숙한 지방 세포(adipocytes or fat cells)는 섬유아세포(fibroblast)와 같은 미성숙지방세포(preadipocytes)로부터 분화되어 궁극적으로 세포 내에 지방 방울(lipid droplet)을 형성하게 된다. 지방세포의 분화 과정은 3T3-L1과 같은 세포를 이용하여 연구되어 왔으며, 여러 종류의 전사인자 (transcription factor)들, 특히 지방화에 관여하는 것으로 알려진 전사인자, C/EBPs(CAAT enhancer binding proteins), PPARs(Peroxisome Proliferator Activated receptor)와 ADD/SREBPs(Adipocyte determination and differentiation dependent factor1/sterol response element binding proteins) 등이 시간의 차이에 따라 발현하며 그 과정을 조절한다는 것이 알려져 있다. MDI(isobutylmethylxanthin, dexamethasone and insulin)와 같은 호르몬의 자극이 주어질 때, C/EBPβ와 δ가 가장 먼저, 일시적으로 발현되며, 지방세포로의 분화를 개시하게 한다. 이는 계속해서 C/EBP α와 PPARγ의 발현 증가를 유도하게 된다. PPARγ는 특히 지방세포 분화에 중요한 전사인자로 알려져 있으며, 레티논산 X 수용체(retinoic acid X receptor) 단백질(RXR)과 이합체(dimer)를 형성한 뒤, 다양한 지방세포 유전자의 프로모터 (promoter)에 존재하는 PPRE(peroxisome proliferator response elements)에 결합한다. PPARγ와 C/EBP α의 상호 작용이 성숙한 지방세포로의 분화에 매우 결정적인데, 지방산 결합 단백질 aP2와 같은 지방세포 특이적 단백질 및 지방 대사 효소의 발현을 조절한다. 더불어 ADD1/SREBPs는 지방 대사에도 중요한 역할을 하지만, 또한 분화과정에도 관여하는 것으로 알려졌다. 미성숙 지방세포에서 ADD1/SREBP1c가 발현되는 것은 PPARγ의 활성화에 기여하는 것으로 여겨진다. 분화과정을 마친 지방세포만이 지방산(fatty acid)을 합성하고 중성지질(trigly cerides)을 저장하게 된다. Adipogenesis is a process in which adipocytes differentiate from premature adipocytes to accumulate fat, such as obesity, diabetes, steatosis, and coronary heart disease. It is known as a risk factor for causing disease. Mature adipocytes (adipocytes or fat cells) are differentiated from immature adipocytes (preadipocytes) such as fibroblasts and ultimately form lipid droplets within the cells. The differentiation process of adipocytes has been studied using cells such as 3T3-L1, and several types of transcription factors, particularly transcription factors known to be involved in localization, C/EBPs (CAAT enhancer binding proteins), It is known that PPARs (Peroxisome Proliferator Activated Receptor) and ADD/SREBPs (Adipocyte determination and differentiation dependent factor1/sterol response element binding proteins) are expressed over time and regulate their processes. When stimulation of hormones such as isobutylmethylxanthin, dexamethasone and insulin (MDI) is given, C/EBPβ and δ are first, transiently expressed, and initiate differentiation into adipocytes. This continues to induce increased expression of C/EBP α and PPARγ. PPARγ is known as a transcription factor that is particularly important for adipocyte differentiation. After forming a dimer with the retinoic acid X receptor protein (RXR), it is present in the promoter of various adipocyte genes. It binds to peroxisome proliferator response elements (PPRE). The interaction between PPARγ and C/EBP α is very critical for differentiation into mature adipocytes, and regulates the expression of adipocyte-specific proteins such as fatty acid-binding protein aP2 and fat metabolism enzymes. In addition, ADD1/SREBPs play an important role in fat metabolism, but are also known to be involved in the differentiation process. Expression of ADD1/SREBP1c in immature adipocytes is thought to contribute to the activation of PPARγ. Only fat cells that have completed the differentiation process synthesize fatty acids and store trigly cerides.
반면, 지방대사의 항상성은 지방의 생성과 분해간의 균형에 의해서 유지된다. ADD1/SREBP1은 지방생성을 조절하는 전사인자로서, 지방산, 중성지질, 콜레스테롤, 인지질 등의 합성과 흡수를 조절한다. SREBPs는 소포체막에 결합한 불활성 전구체로 합성되고, N 말단이 잘려나간 후, 활성화되어 핵으로 이동하게 되고 조절 유전자 프로모터의 SRE(sterol regulatory elements)에 결합하게 된다. 그 이형질체 중 SREBP1c는 중성지질의 합성을 주로 조절하는 반면, SREBP2는 콜레스테롤 합성에 관여하는 것으로 알려졌다. SREBP1c에 의해 조절되는 유전자는 ACL(ATP citrate lyase), ACC(acetyl CoA carboxylase), FAS(fatty acid synthase) 및 SCD (stearoyl-CoA desarurase) 등이다. 지방 분해를 조절하는 데는 PPAR α가 중요한 조절을 하는 것으로 알려져 있다. 지방산의 흡수 및 지방산 분해에는 LPL(lipoprotein lipase), 아포프로테인 (apoproteins), ACO(Acyl-CoA oxidase), 티오레이즈(thiolase)등이 관여한다. On the other hand, the homeostasis of fat metabolism is maintained by the balance between fat production and degradation. ADD1/SREBP1 is a transcription factor that regulates adipogenesis, and it regulates the synthesis and absorption of fatty acids, triglycerides, cholesterol, and phospholipids. SREBPs are synthesized as inactive precursors bound to the endoplasmic reticulum membrane, and after the N-terminus is cut off, they are activated to move to the nucleus and bind to the sterol regulatory elements (SRE) of the regulatory gene promoter. Among the heterozygous, SREBP1c mainly regulates the synthesis of triglycerides, while SREBP2 is known to be involved in cholesterol synthesis. Genes regulated by SREBP1c are ACL (ATP citrate lyase), ACC (acetyl CoA carboxylase), FAS (fatty acid synthase) and SCD (stearoyl-CoA desarurase). It is known that PPAR α plays an important role in regulating fat breakdown. Lipoprotein lipase (LPL), apoproteins, Acyl-CoA oxidase (ACO), thiolase, and the like are involved in the absorption and decomposition of fatty acids.
비만은 소모하는 열량에 비해 과다한 열량을 섭취함으로써 여분의 열량이 체내에 지방의 형태로 축적되어지는 현상을 말한다. 비만은 유전적 영향, 서구화되는 식생활에 의한 환경적인 영향, 스트레스에 의한 심리적인 영향 등 다양한 원인에 의해 유발되어지는 것으로 생각되고 있으나 아직 그 정확한 원인이나 기작에 관해서는 명확히 정립된 바가 없는 상황이다. 그러나 비만은, 비만 그 자체가 갖는 문제점뿐만 아니라, 심혈관계 질환이나 당뇨와 같은 질병의 원인으로도 작용할 수 있기 때문에 전 세계적으로 비만치료에 많은 관심이 모아지고 있다. Obesity refers to a phenomenon in which excess calories are accumulated in the body in the form of fat by ingesting excess calories compared to consumed calories. Obesity is thought to be caused by a variety of causes, such as genetic influence, environmental influence due to westernized diet, and psychological influence due to stress, but the exact cause or mechanism has not been clearly established. However, since obesity can act not only as a problem of obesity itself, but also as a cause of diseases such as cardiovascular disease or diabetes, a lot of interest in obesity treatment has been drawn around the world.
현재 비만치료 전략은 식사량 감소, 열량흡수의 억제, 발열반응 촉진, 에너지 대사 조절, 신경계를 통한 신호전달 조절과 같은 기전으로 비만을 치료하는 약물 치료 방법이 있으나, 심장질환, 호흡기 질환, 신경계질환 등의 부작용과 함께 그 효능의 지속성이 낮아, 더욱 효율적인 비만치료제의 개발이 필요하며, 아직까지 안전성과 효능을 동시에 갖고 있는 약물을 개발하는 것이 쉽지 않은 것이 현실이다. Currently, obesity treatment strategies include drug treatment methods to treat obesity through mechanisms such as reduction of diet, suppression of calorie absorption, promotion of fever response, regulation of energy metabolism, and control of signal transmission through the nervous system, but heart disease, respiratory disease, nervous system disease, etc. Along with the side effects of the drug, the persistence of its efficacy is low, so it is necessary to develop a more efficient anti-obesity drug, and it is still not easy to develop a drug that has both safety and efficacy.
따라서 항비만 효과가 있고 안전성이 입증된 천연물을 찾아 품종을 개량 또는 개발하고, 이를 이용하려는 시도는 합성 제제로부터 치료제를 개발하는 것에 비해 더욱 효율적인 접근방법이라 할 수 있을 것이다.Therefore, an attempt to improve or develop a variety in search of natural products that have anti-obesity effects and have proven safety, and to use them, can be said to be a more efficient approach than developing a therapeutic agent from a synthetic formulation.
본 발명자들은 비만 치료에 효과가 있는 천연물을 찾기 위하여 다양한 식물을 검색하던 중 야생종 참외의 항비만 활성을 확인하였고, 야생종 참외의 낮은 생산성을 높이기 위해 재배 멜론과 교잡하여 신품종인 바이탈 멜론을 개발하고 바이탈 멜론의 항비만 효과와 높은 생산성을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present inventors confirmed the anti-obesity activity of wild melon while searching for a variety of plants to find natural products effective in treating obesity, and developed a new variety of vital melon by crossing with cultivated melon to increase the low productivity of wild melon. By confirming the anti-obesity effect and high productivity of melon, the present invention was completed.
따라서, 본 발명의 목적은 항비만 효과가 있는 신품종 바이탈 멜론, 상기 바이탈 멜론 추출물을 포함하는 항비만용 조성물, 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 상기 항비만용 조성물을 포함하는 항비만용 건강기능식품을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is a new variety of vital melon having an anti-obesity effect, a composition for anti-obesity comprising the vital melon extract, a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising the composition for anti-obesity, the composition for anti-obesity It is to provide a health functional food for anti-obesity, including.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 교잡한 1세대 종자인 바이탈 멜론을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a vital melon, a first-generation seed hybridized with wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus).
또한, 본 발명은 야생종 참외(Cucumis melo var.makuwa Makino)를 모본으로 하고, 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 부본으로 하여 개화기에 인공수분을 시켜 얻어진 교잡 1세대 종자로써 하기 (1) 내지 (22)의 식물학적 특성을 가지는 바이탈 멜론을 제공한다. In addition, the present invention is a hybrid first-generation seed obtained by artificial pollination during flowering using a wild melon (Cucumis melo var.makuwa Makino) as a model and a cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) as a counterpart. Provides a vital melon with the botanical characteristics of (22).
(1) 식물체는 덩굴성으로 원줄기의 길이는 길다.(1) Plants are vines and the length of the main stem is long.
(2) 잎몸의 녹색 정도는 중간 정도이다.(2) The green color of the leaf body is medium.
(3) 잎몸 엽절의 발생은 약하다. (3) The occurrence of leaf body lobes is weak.
(4) 잎자루 길이는 중간이다.(4) Petiole length is medium.
(5) 성표현은 웅성양성동주이다.(5) Sexual expression is male and female.
(6) 암꽃은 마디마다 달린다.(6) The female flower runs on every node.
(7) 어린과실의 과피색은 옅은 녹색이다. (7) The skin color of young fruits is pale green.
(8) 과실 길이는 짧다. (8) The fruit length is short.
(9) 과실 너비는 아주 짧다. (9) The fruit width is very short.
(10) 과실은 중간 타원형이다.(10) Fruit is medium oval.
(11) 과실 표면의 주름은 없다.(11) There are no wrinkles on the fruit surface.
(12) 과실의 코르크는 형성되지 않는다. (12) Fruit cork is not formed.
(13) 성숙기 이후 과피색의 변화속도는 느리다.(13) After maturity, the rate of change of pericarp color is slow.
(14) 과실의 종단 시 과육이 차지하는 너비는 좁다.(14) The width occupied by the flesh at the end of the fruit is narrow.
(15) 과육의 주된 색은 백색이다(15) The main color of the flesh is white
(16) 과육의 경도는 무르다.(16) The hardness of the flesh is soft.
(17) 종자의 길이는 짧다.(17) The length of the seed is short.
(18) 종자의 너비는 매우 짧다.(18) The width of the seeds is very short.
(19) 종자의 색은 크림 빛 황색이다.(19) The color of the seeds is creamy yellow.
(20) 수꽃 개화기는 늦다.(20) The flowering period of male flowers is late.
(21) 암꽃 개화기는 빠르다.(21) The flowering period of female flowers is fast.
(22) 과실의 저장성은 길다.(22) The storage of fruit is long.
또한, 본 발명은 상기 바이탈 멜론 추출물을 포함하는 항비만용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for anti-obesity comprising the vital melon extract.
또한, 본 발명은 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising the composition for anti-obesity.
또한, 본 발명은 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for preventing or improving obesity comprising the composition for anti-obesity.
본 발명의 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 교잡한 1세대 종자인 바이탈 멜론은 항비만 효과가 우수하고, 기존의 야생종 참외보다 과육이 커서 생산력이 우수하다. 또한 상기 바이탈 멜론을 추출한 추출물은 천연물을 이용하여 안전하며, 바이탈 멜론의 항비만 효과를 바탕으로 항비만용 약학적 조성물 또는 항비만용 건강기능식품에 사용될 수 있어, 의약업계 및 건강식품업계에 널리 활용 될 수 있다.Vital melon, a first-generation seed that hybridizes the wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) of the present invention, has excellent anti-obesity effect and has a larger pulp than the existing wild melon. great. In addition, the extract extracted from the vital melon is safe using natural products, and can be used in a pharmaceutical composition for anti-obesity or a health functional food for anti-obesity based on the anti-obesity effect of the vital melon, so it is widely used in the pharmaceutical industry and the health food industry. Can be utilized.
도 1은 바이탈 멜론의 착과된 모습을 나타낸 도이다.1 is a diagram showing a fruited state of vital melon.
도 2는 채취 시기에 따른 바이탈 멜론 추출물의 항비만 효과를 비교한 도로써, 도 2A는 3T3-L1 세포를 oil-red O 염색 후 200배율 광학현미경으로 관찰한 도이며, 도 2B는 oil-red O 염색약을 이소프로파놀로 용해시킨 후 OD값을 측정한 도이다. Figure 2 is a diagram comparing the anti-obesity effect of the vital melon extract according to the collection time, Figure 2A is a diagram observed with a 200-magnification optical microscope after oil-red O staining 3T3-L1 cells, Figure 2B is oil-red O This is a diagram of the OD value after dissolving the dye with isopropanol.
도 3은 건조 전 및 건조 후 야생종 참외와 바이탈 멜론의 무게를 비교한 도이다. (F1 : 바이탈 멜론, Wild : 야생종 참외)Figure 3 is a diagram comparing the weight of wild melon and vital melon before and after drying. (F1: Vital melon, Wild: wild melon)
도 4는 야생종 참외와 바이탈 멜론의 채취시기 별 쿠커비타신 A 및 B의 함량을 비교한 도이다. (F1 : 바이탈 멜론, Wild : 야생종 참외)Figure 4 is a diagram comparing the content of cucurbitacin A and B according to the harvesting period of wild melon and vital melon. (F1: Vital melon, Wild: wild melon)
도 5는 추출 용매인 에탄올의 농도에 따른 바이탈 멜론 추출물의 지질 축적 억제 효과를 비교한 도로써, 도 5A는 3T3-L1 세포를 oil-red O 염색 후 200배율 광학현미경으로 관찰한 도이며, 도 5B는 oil-red O 염색약을 이소프로파놀로 용해시킨 후 OD값을 측정하여 DMSO 첨가군 대비 비율(%)을 나타낸 도이다. 5 is a diagram comparing the lipid accumulation inhibitory effect of a vital melon extract according to the concentration of ethanol as an extraction solvent. FIG. 5A is a diagram illustrating 3T3-L1 cells observed with a 200-magnification optical microscope after oil-red O staining. 5B is a diagram showing the ratio (%) of the DMSO added group by measuring the OD value after dissolving the oil-red O dye with isopropanol.
도 6은 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 지방세포생성 억제 효과를 확인한 도로써, 도 6A는 3T3-L1 세포를 oil-red O 염색 후 200배율 광학현미경으로 관찰한 도이며, 도 6B는 oil-red O 염색약을 이소프로파놀로 용해시킨 후 OD값을 측정한 도이다(** DMSO처리군 대비 P<0.01).6 is a diagram confirming the concentration-dependent adipocyte production inhibitory effect of the vital melon extract, FIG. 6A is a diagram of 3T3-L1 cells observed with a 200-magnification optical microscope after oil-red O staining, and FIG. 6B is an oil-red O This is a diagram of measuring the OD value after dissolving the dye with isopropanol (** P<0.01 compared to the DMSO treatment group).
도 7은 바이탈 멜론 추출물의 처리 농도에 따른 3T3-L1 세포의 Glucose 소모량을 확인한 도이다(** DMSO처리군 대비 P<0.01).7 is a diagram illustrating the amount of glucose consumed in 3T3-L1 cells according to the treatment concentration of the vital melon extract (** P<0.01 compared to the DMSO treatment group).
도 8은 바이탈 멜론 추출물의 처리 농도에 따른 3T3-L1 세포의 세포 내 중성지방 농도를 확인한 도이다(* DMSO처리군 대비 P<0.05, ** DMSO처리군 대비 P<0.01).8 is a diagram showing the concentration of triglycerides in the cells of 3T3-L1 cells according to the treatment concentration of the vital melon extract (* P<0.05 compared to the DMSO treated group, ** P<0.01 compared to the DMSO treated group).
도 9는 바이탈 멜론 추출물의 처리 농도에 따른 전사인자 PPARγ의 발현 수준을 확인한 도로써, 도 9A는 배양 1일째 측정결과를 나타낸 도이며, 도 9B는 배양 8일째 측정결과를 나타낸 도이다(* DMSO처리군 대비 P<0.05, ** DMSO처리군 대비 P<0.01).9 is a diagram showing the expression level of the transcription factor PPARγ according to the treatment concentration of the vital melon extract, FIG. 9A is a diagram showing the measurement result on the first day of culture, and FIG. 9B is a diagram showing the measurement result on the 8th day of culture (* DMSO P<0.05 compared to treatment group, ** P<0.01 compared to DMSO treatment group).
도 10은 바이탈 멜론 추출물의 처리 농도에 따른 지방세포분화 관련 단백질 HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 및 LPL의 분화 수준을 확인한 도이다(* DMSO처리군 대비 P<0.05, ** DMSO처리군 대비 P<0.01).Figure 10 is a diagram confirming the differentiation levels of adipocyte differentiation-related proteins HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 and LPL according to the treatment concentration of the vital melon extract (* P<0.05 compared to the DMSO treatment group, ** DMSO treatment P<0.01 compared to group).
본 발명은 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)를 교잡한 1세대 종자인 바이탈 멜론을 제공한다. The present invention provides a vital melon which is a first-generation seed hybridized with wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus).
본 발명의'야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa makino)'는 박목 박과 오이속 덩굴성 한해살이풀로써, 전국각처에서 재배한다. 엽액에 덩굴손이 있고 잎은 호생하며 엽병은 길고 장상으로 얕게 갈라지며 밑부분은 얕은 심장저이고 가장자리에 톱니가 있다. 꽃은 일가화로서 6-7월에 피며 단성화이고 화관은 5개로 갈라지며 황색이고 암꽃에 하위자방이 있다. 열매는 장과로서 원주상 타원형이고 황록색, 황색 및 그 밖의 여러가지 색으로 익으며 향기가 나고 단맛이 있다. 원줄기는 길게 옆으로 뻗으며 덩굴손으로 감으면서 다른 물체에 붙고 굽은 털이 있다. The'wild species melon (Cucumis melo var. makuwa makino)' of the present invention is a vine-like annual herb of the genus Cucumber and Cucumber, and is cultivated throughout the country. The leaf fluid has tendrils, the leaves grow alternately, the petioles are long, long and shallowly split, the bottom is shallow, the heart is shallow, and the edge has serrations. The flower is a family flower, blooms in June-July, is a single-star flower, the corolla is divided into 5, yellow, and the female flower has lower ovary. The fruit is a berry, a columnar oval, ripens in yellow-green, yellow, and other various colors, has a scent and sweet taste. The main stem extends long sideways and has hairs that are bent and attached to other objects by winding it with tendrils.
본 발명의 '재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)'은 멜론의 한 종으로 과피에 그물 모양의 무늬를 가지고 있는 네트형 멜론에 속한다. 초록색 과육을 가진 칸탈로우스펜시스(cantaloupensis) 종의 하오겐(Ha'Ogen)과 네트형 멜론인 러시안 레티쿨라투스(russian reticulatus) 종의 크림카(Krimka) 사이의 이종 교배로 만들어졌다.The'cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus)' of the present invention is a kind of melon and belongs to a net-shaped melon having a net-shaped pattern on the pericarp. It was made by cross-breeding between Ha'Ogen of the species Cantaloupensis with green flesh and Krimka of the Russian reticulatus species, which is a net-shaped melon.
본 발명의 '쿠커비타신(Cucurbitacin)'은 일부 식물, 특히 일반적인 호박과 조롱박을 포함하는 쿠커비투과 (Cucurbitaceae)에서 생산되고 초식 동물에 대한 방어 작용을 하는 생화학 화합물의 일종이며, 박과작물에서 효능성분으로 알려져 있다. 쿠커비타신은 쿠커비타신 A 및 쿠커비타신 B와 같은 다양한 변이체가 존재하며, 이 중 쿠커비타신 B는 항비만 활성을 나타낸다. 'Cucurbitacin' of the present invention is a kind of biochemical compound that is produced in some plants, particularly Cucurbitaceae, including common pumpkins and gourds, and acts as a defense against herbivores, and is effective in gourd crops. Known as an ingredient. Cucurbitacin has various variants such as cucurbitacin A and cucurbitacin B, of which cucurbitacin B exhibits anti-obesity activity.
본 발명의 '바이탈 멜론'은 신품종 식물로써, 야생종 참외와 재배 멜론을 교잡한 1세대 종자이다. 상기 바이탈 멜론은 착과 시 쿠커비타신(cucurbitacin) B의 함량이 30 μg/g DW -1(Dry weight,건물중) 내지 60 μg/g DW -1이며, 착과 후 시간이 경과함에 따라, 쿠커비타신 B의 함량이 낮아질 수 있다. The'vital melon' of the present invention is a new plant, and is a first-generation seed hybridized between wild melon and cultivated melon. The vital melon has a cucurbitacin B content of 30 μg/g DW -1 (Dry weight, in buildings) to 60 μg/g DW -1 during fruiting, and as time elapses after fruiting, cucurbitacin The content of sour B may be lowered.
또한, 본 발명은 야생종 참외(Cucumis melo var.makuwa Makino)를 모본으로 하고, 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 부본으로 하여 개화기에 인공수분을 시켜 얻어진 교잡 1세대 종자로써 바이탈 멜론의 식물학적 특성 중 주요 형태적 특성에 대해 대조품종인 '얼스엘리트' 품종과 차이가 있는 특성을 정리하면 아래 (1) 내지 (22)와 같다. In addition, the present invention is a first-generation hybrid seed obtained by artificial pollination during flowering using a wild melon (Cucumis melo var.makuwa Makino) as a model and a cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) as a counterpart. Among the characteristics, the main morphological characteristics are summarized as follows (1) to (22) when the characteristics that differ from the control breed'Earth Elite' are summarized.
(1) 식물체는 덩굴성으로 원줄기의 길이는 길다.(1) Plants are vines and the length of the main stem is long.
(2) 잎몸의 녹색 정도는 중간 정도이다.(2) The green color of the leaf body is medium.
(3) 잎몸 엽절의 발생은 약하다. (3) The occurrence of leaf body lobes is weak.
(4) 잎자루 길이는 중간이다.(4) Petiole length is medium.
(5) 성표현은 웅성양성동주이다.(5) Sexual expression is male and female.
(6) 암꽃은 마디마다 달린다.(6) The female flower runs on every node.
(7) 어린과실의 과피색은 옅은 녹색이다. (7) The skin color of young fruits is pale green.
(8) 과실 길이는 짧다. (8) The fruit length is short.
(9) 과실 너비는 아주 짧다. (9) The fruit width is very short.
(10) 과실은 중간 타원형이다.(10) Fruit is medium oval.
(11) 과실 표면의 주름은 없다.(11) There are no wrinkles on the fruit surface.
(12) 과실의 코르크는 형성되지 않는다. (12) Fruit cork is not formed.
(13) 성숙기 이후 과피색의 변화속도는 느리다.(13) After maturity, the rate of change of pericarp color is slow.
(14) 과실의 종단 시 과육이 차지하는 너비는 좁다.(14) The width occupied by the flesh at the end of the fruit is narrow.
(15) 과육의 주된 색은 백색이다(15) The main color of the flesh is white
(16) 과육의 경도는 무르다.(16) The hardness of the flesh is soft.
(17) 종자의 길이는 짧다.(17) The length of the seed is short.
(18) 종자의 너비는 매우 짧다.(18) The width of the seeds is very short.
(19) 종자의 색은 크림 빛 황색이다.(19) The color of the seeds is creamy yellow.
(20) 수꽃 개화기는 늦다.(20) The flowering period of male flowers is late.
(21) 암꽃 개화기는 빠르다.(21) The flowering period of female flowers is fast.
(22) 과실의 저장성은 길다.(22) The storage of fruit is long.
또한, 상기 바이탈 멜론은 모본과 부본이 되는 야생종 참외 또는 재배 멜론과 비교하여 하기 (1) 내지 (6)의 식물학적 특성을 갖는다.In addition, the vital melon has the botanical characteristics of the following (1) to (6) compared to the wild type melon or cultivated melon used as a parent and a supplement.
(1) 항비만 효과가 높다.(1) The anti-obesity effect is high.
(2) 주지와 측지에 착과하는 습성이 있다.(2) It has a habit of condensing on the common and geodesic.
(3) 주지와 측지 마디수만큼 착과한다. (3) It is fruited as much as the number of main and geodesic nodes.
(4) 수정 1주일 후 과실의 질량은 30g 내지 50g이며, 수확시 질량은 130g 내지 170g이다. (4) One week after fertilization, the mass of the fruit is 30g to 50g, and the mass at harvest is 130g to 170g.
(5) 수정 후 10일간 쿠커비타신(cucurbitacin) B 함량이 30μg/g DW -1 내지 60μg/g DW -1 으로 매우 높다. (5) 10 days after fertilization, cucurbitacin B content is very high, 30 μg/g DW -1 to 60 μg/g DW -1 .
(6) 착과 후 착과 후 연속 수확이 가능하다. (6) After fruiting Continuous harvesting is possible after fruiting.
또한, 본 발명은 상기 바이탈 멜론을 추출한 바이탈 멜론 추출물을 포함하는 항비만용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for anti-obesity comprising the vital melon extract extracted from the vital melon.
본 발명에서의 용어 '비만'은 체내에 과다하게 많은 양의 체지방이 쌓여있는 상태로써, 섭취하는 영양분에 비해 에너지소비가 적을 때 여분의 에너지가 체지방의 형태로 축적됨으로서 발생한다. The term'obesity' in the present invention is a state in which an excessively large amount of body fat is accumulated in the body, and occurs when excess energy is accumulated in the form of body fat when energy consumption is less than the nutrients consumed.
본 발명에서 '항비만'이란 체지방의 감소 또는 체중의 감소를 의미한다. 따라서 비만의 예방, 비만의 치료를 포함하는 의미이며, 나아가 체중이 비만이나 과체중으로 분류되지 않지만 미용이나 건강목적으로 체중 또는 체지방을 감소시키는 것을 포함한다.In the present invention, "anti-obesity" means a decrease in body fat or a decrease in weight. Therefore, it means to include prevention of obesity and treatment of obesity, and further, weight is not classified as obesity or overweight, but includes reducing weight or body fat for beauty or health purposes.
본 발명에서, '바이탈 멜론 추출물'의 추출 대상은 바이탈 멜론의 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리, 이들의 혼합물 등으로 할 수 있으며, 바람직하게는 바이탈 멜론의 열매로 할 수 있고, 더욱 바람직하게는 수정 2주 이내에 수확한 바이탈 멜론 열매를 추출한 것일 수 있으며, 더더욱 바람직하게는 수정 2주 이내에 수확한 바이탈 멜론 열매로써 질량이 30g 내지 50g인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the extraction target of the'vital melon extract' may be a stem, leaf, fruit, flower, root, or a mixture thereof of vital melon, preferably, it may be a fruit of vital melon, and more preferably The vital melon fruit harvested within 2 weeks of fertilization may be extracted, and more preferably, the vital melon fruit harvested within 2 weeks of fertilization may have a mass of 30 g to 50 g, but is not limited thereto.
본 발명에서, '바이탈 멜론 추출물'은 상기 추출 대상을 물, 메탄올(methanol), 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 등의 C 1-C 4 알코올, 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식이 적용될 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 C 1-C 4 알코올을 사용하여 얻어진 추출물일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 추출용매로서 50% 내지 95%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.In the present invention, the'vital melon extract' refers to the extraction target as C 1 -C 4 alcohol such as water, methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, methylene chloride, ethylene, acetone, hexane, ether, chloroform, Extract obtained by leaching with ethyl acetate, butyl acetate, N,N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), 1,3-butylene glycol, propylene glycol or a mixed solvent thereof, carbon dioxide, pentane It refers to an extract obtained using a supercritical extraction solvent such as, or a fraction obtained by fractionating the extract, and the extraction method is cold sedimentation, reflux, warming, ultrasonic spinning, supercritical extraction in consideration of the polarity, extraction degree, and preservation degree of the active substance. Etc. Any method can be applied. In the case of a fractionated extract, a fraction obtained by suspending the extract in a specific solvent and mixing and policing with a solvent having a different polarity, and adsorbing the extract on a column filled with silica gel, etc., and then adding a hydrophobic solvent, a hydrophilic solvent, or a mixed solvent thereof. It is meant to include the fraction obtained as a mobile phase. In addition, the meaning of the extract includes a concentrated liquid extract or a solid extract from which the extraction solvent has been removed by a method such as freeze drying, vacuum drying, hot air drying, or spray drying. Preferably, it may be an extract obtained using C 1 -C 4 alcohol as an extraction solvent, and more preferably it means an extract obtained using 50% to 95% (v/v) ethanol as an extraction solvent.
본 발명의 '바이탈 멜론 추출물'은 그 유효성분이 항비만 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있으며, 여기서 '유효량'이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 항비만 효과 등 의도한 기능적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.The'vital melon extract' of the present invention may be included in an arbitrary amount (effective amount) depending on the use, formulation, and purpose of mixing, as long as the active ingredient can exhibit anti-obesity activity, and the'effective amount' is preferably a mammal to which it is applied. Specifically, when the composition of the present invention is administered to a person during the administration period according to the recommendations of a medical expert, etc., the amount of the active ingredient contained in the composition of the present invention can exhibit the intended functional and pharmacological effects such as anti-obesity effect. Say. Such effective amounts can be determined empirically within the range of ordinary skill in the art.
본 발명의 항비만용 조성물은 유효성분 이외에, 항비만 활성의 상승·보강을 위하여 이미 안전성이 검증되고 항비만 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.In addition to the active ingredient, the composition for anti-obesity of the present invention may further include any compound or natural extract, which has already been verified for safety and is known to have anti-obesity activity, in order to increase and reinforce anti-obesity activity.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 '대한민국약전), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 '건강기능식품 기준 및 규격'임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 '약사법'임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다. These compounds or extracts include compounds, extracts, and pharmaceuticals listed in the pharmacopoeia of each country (the Korean Pharmacopoeia in Korea) and the Health Functional Food Code of each country (the'health functional food standards and standards' notified by the Ministry of Food and Drug Safety in Korea). In accordance with the laws of each country governing manufacturing and sales (the'Pharmaceutical Affairs Act' in Korea), national laws governing the manufacture and sale of compounds, extracts, and health functional foods that have been licensed as items (in Korea, the 「Health Functional Food Act」 Im) compounds or extracts whose functionality has been recognized are included.
예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」의 건강기능식품공전(식약처 고시 「건강기능식품 기준 및 규격」)상에서 항비만 기능성이 인정된 엽록소 함유 식물 분말 또는 착즙액, 클로렐라 분말, 스피루리나 분말, 녹차 추출물, 코엔자임Q10 등과, 「건강기능식품에관한법률」에 따라 항비만 기능성으로 개별인정을 받은 대나무 잎 추출물, 메론 추출물, 복분자 추출물(분말), 비즈왁스알코올, 유비퀴놀, 토마토 추출물, 포도 종자 추출물, 프랑스해안송 껍질 추출물 등을 들 수 있다. 이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 항비만용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.For example, chlorophyll-containing plant powder or juice, chlorella powder, spirulina powder, green tea whose anti-obesity function is recognized under the Health Functional Food Code of the 「Health Functional Food Act」 in Korea (``Health Functional Food Standards and Standards''). Extract, coenzyme Q10, etc., bamboo leaf extract, melon extract, bokbunja extract (powder), beeswax alcohol, ubiquinol, tomato extract, grape seed extract, individually recognized for anti-obesity function according to the 「Health Functional Food Act」 , French coast pine bark extract, etc. are mentioned. One or more of these compounds or natural extracts may be included in the composition for anti-obesity of the present invention together with the active ingredient.
본 발명의 항비만용 조성물은 농도 의존적으로 세포 내 지질축적을 억제하고, 지방세포생성(adipogenesis)을 억제하고, 세포의 글루코스 흡수를 억제하고, 세포 내 중성지방을 감소시키며, 지방세포분화 관련 유전자 발현을 억제할 수 있으며, 항비만 효과가 있다. The composition for anti-obesity of the present invention inhibits intracellular lipid accumulation in a concentration-dependent manner, inhibits adipogenesis, inhibits the absorption of glucose in cells, reduces triglycerides in cells, and genes related to adipocyte differentiation. It can inhibit the expression and has an anti-obesity effect.
또한, 본 발명은 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising the composition for anti-obesity.
본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물 또는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions according to a conventional method. have. Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose , Methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oils. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, or It is prepared by mixing lactose and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives may be included. . Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like may be used.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration, and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of one of ordinary skill in the art, and dosages generally range from 0.01 mg/kg/day to approximately 2000 mg/kg/day. A more preferred dosage is from 1 mg/kg/day to 500 mg/kg/day. Administration may be administered once a day, or may be divided several times. The above dosage does not in any way limit the scope of the present invention.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as mice, livestock, and humans by various routes. All modes of administration can be expected and can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or cerebrovascular injection. Since the compound of the present invention has little toxicity and side effects, it is a drug that can be safely used even when taken for a long time for prophylactic purposes.
본 발명의 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 항비만용 조성물의 유효성분 및 효과가 동일하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.Since the pharmaceutical composition for preventing or treating obesity of the present invention has the same active ingredient and effect of the composition for anti-obesity, the descriptions in common between the two are omitted in order to avoid excessive complexity of the present specification.
또한, 본 발명은 상기 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for preventing or improving obesity comprising the composition for anti-obesity.
본 발명의 건강기능식품은 식품 제조 시 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분으로서 바이탈 멜론 추출물 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등),및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마린, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다.The health functional food of the present invention includes ingredients that are commonly added during food production, and includes, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, and seasonings. For example, when prepared as a drink, a flavoring agent or natural carbohydrate may be included as an additional component in addition to the vital melon extract as an active ingredient. For example, natural carbohydrates are monosaccharides (e.g., glucose, fructose, etc.), disaccharides (e.g., maltose, sucrose, etc.), oligosaccharides, polysaccharides (e.g., dextrin, cyclodextrin, etc.), and Sugar alcohols (eg, xylitol, sorbitol, erythritol, etc.) are included. As the flavoring agent, natural flavoring agents (eg, taumarin, stevia extract, etc.) and synthetic flavoring agents (eg, saccharin, aspartame, etc.) can be used.
본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.The health functional food of the present invention includes forms such as tablets, capsules, pills or liquids, and foods to which the extract of the present invention can be added include, for example, various drinks, meats, sausages, bread, candy, There are snacks, noodles, ice cream, dairy products, soups, ionized drinks, beverages, alcoholic beverages, gum, tea and vitamin complexes.
본 발명의 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품은 상기 항비만용 조성물의 유효성분 및 효과가 동일하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.Since the health functional food for preventing or improving obesity of the present invention has the same active ingredients and effects of the composition for anti-obesity, the descriptions in common between the two are omitted in order to avoid excessive complexity of the present specification.
또한, 본 발명은 상기 바이탈 멜론 추출물의 유효 투여량을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 비만 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for preventing or treating obesity, comprising administering an effective dose of the vital melon extract to an individual.
본 발명의 상기 개체는 비만의 예방 또는 치료가 필요한 개체라면 제한없이 포함될 수 있으며, 바람직하게는 포유동물, 예컨대 인간, 마우스, 개, 고양이, 양, 말, 소 또는 돼지 일 수 있다. The subject of the present invention may be included without limitation as long as it is an individual in need of prevention or treatment of obesity, and preferably may be a mammal, such as a human, a mouse, a dog, a cat, a sheep, a horse, a cow, or a pig.
본 발명을 이하 실시예를 통하여 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 오로지 발명을 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The present invention will be described in detail through the following examples. These examples are for illustrative purposes only and do not limit the scope of the present invention.
실시예 1. 바이탈 멜론의 제작Example 1. Preparation of vital melon
1.1 아생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)의 특성 검정 및 형질 고정1.1 Characterization and fixation of subspecies melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus)
바이탈 멜론을 제작하기 위해, 출발 품종이 되는 야생종 참외와 재배 멜론의 특성을 검정하였다. 특성 검정 및 형질 고정을 위한 출발 품종으로써 야생종 참외는 경남 진주시 가좌동 야산에서 수집하였고, 재배 멜론은 국내 시판되는 스페인산 갈리아 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 구입하여 사용하였다. 특성 검정 결과, 야생종 참외는 과실의 크기가 작고, 양성화이며, 마디마다 암꽃이 착생하는 특성이 있음을 확인하였다. 재배 멜론은 소엽이며, 과실의 크기가 큰 특성이 있음을 확인하였다.In order to produce vital melon, the characteristics of wild melon and cultivated melon as starting varieties were tested. As a starting cultivar for characterization and trait fixation, wild melon species were collected in Yasan, Gajwa-dong, Jinju-si, Gyeongnam, and the cultivated melon was purchased and used from Spanish Gallia melon (Cucumis melo var. reticulatus) sold in Korea. As a result of the characteristic test, it was confirmed that the wild melon has a small fruit size, a positive flower, and a female flower per node. It was confirmed that the cultivated melon is a leaflet and has a large size of fruit.
야생종 참외의 특성 중 마디마다 암꽃이 착생하는 특성 및 양성화 특성을 목적형질로 하고, 야생종 참외를 7회 자가수정하여 야생종 참외의 형질을 고정하였다.Among the characteristics of wild-species melon, the characteristics of female flowers in each node were used as target traits, and the wild-species melon was self-fertilized seven times to fix the wild-species melon.
재배 멜론의 특성 중 소엽 특성 및 과실이 큰 특성을 목적형질로 하고, 재배 멜론을 7회 자가수정하여 재배 멜론의 형질을 고정하였다. Among the characteristics of the cultivated melon, the lobular characteristics and the large fruit were used as target traits, and the cultivated melon was self-fertilized seven times to fix the trait of the cultivated melon.
1.2 야생종 참외와 재배 멜론의 교배를 통한 F1(자식 1세대) 종자 채종1.2 Picking of F1 (first generation of children) seeds through crossing between wild melon and cultivated melon
목적형질을 고정한 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 수집하여 포장에 식재 한 다음 개화를 유도하여 모본으로서 사용하였다. 수집한 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)를 모본으로 하고 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 부본으로 하여 개화기에 인공수분을 시켜 얻어진 교잡 1세대 종자를 개발하였으며, 상기 교잡 1세대 종자를 바이탈 멜론으로 명명하였다. 바이탈 멜론이 착과된 모습을 도 1에 나타내었다.Wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) with fixed target traits were collected and planted in the field, and then flowering was induced and used as a seedling. The first-generation hybrid seeds obtained by artificial pollination during the flowering period were developed using the collected wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) as a model and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) as a counterpart. It was named Vital Melon. Fig. 1 shows the fruit of the vital melon.
1.3 바이탈 멜론의 식물학적 특성1.3 Botanical Characteristics of Vital Melon
상기 실시예 1.2에서 제작한 바이탈 멜론의 식물학적 특성을 조사하였다. 바이탈 멜론의 특성조사는 대조품종을 시판 멜론 품종인 '얼스엘리트'를 이용하여 농림축산식품부 국립종자원의 2008년도 멜론에 대한 신품종 심사를 위한 작물 별 특성조사 요령 종자(18)-37-1에 따랐으며, 상기 요령에 따라 확인되는 바이탈 멜론의 특성을 대조품종인 '얼스엘리트' 품종과 대조하여 정리하면 아래 (1) 내지 (22)와 같다. The botanical properties of the vital melon prepared in Example 1.2 were investigated. The characteristic investigation of vital melon was conducted using the commercial melon cultivar'Earth Elite' as a control variety, according to the guidelines for the characteristics of each crop for screening new varieties of melon in 2008 by the Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs. The characteristics of the vital melon identified according to the above instructions are as follows (1) to (22) when compared with the control variety,'Earth Elite'.
(1) 식물체는 덩굴성으로 원줄기의 길이는 길다.(1) Plants are vines and the length of the main stem is long.
(2) 잎몸의 녹색 정도는 중간 정도이다.(2) The green color of the leaf body is medium.
(3) 잎몸 엽절의 발생은 약하다. (3) The occurrence of leaf body lobes is weak.
(4) 잎자루 길이는 중간이다.(4) Petiole length is medium.
(5) 성표현은 웅성양성동주이다.(5) Sexual expression is male and female.
(6) 암꽃은 마디마다 달린다.(6) The female flower runs on every node.
(7) 어린과실의 과피색은 옅은 녹색이다. (7) The skin color of young fruits is pale green.
(8) 과실 길이는 짧다. (8) The fruit length is short.
(9) 과실 너비는 아주 짧다. (9) The fruit width is very short.
(10) 과실은 중간 타원형이다.(10) Fruit is medium oval.
(11) 과실 표면의 주름은 없다.(11) There are no wrinkles on the fruit surface.
(12) 과실의 코르크는 형성되지 않는다. (12) Fruit cork is not formed.
(13) 성숙기 이후 과피색의 변화속도는 느리다.(13) After maturity, the rate of change of pericarp color is slow.
(14) 과실의 종단 시 과육이 차지하는 너비는 좁다.(14) The width occupied by the flesh at the end of the fruit is narrow.
(15) 과육의 주된 색은 백색이다(15) The main color of the flesh is white
(16) 과육의 경도는 무르다.(16) The hardness of the flesh is soft.
(17) 종자의 길이는 짧다.(17) The length of the seed is short.
(18) 종자의 너비는 매우 짧다.(18) The width of the seeds is very short.
(19) 종자의 색은 크림 빛 황색이다.(19) The color of the seeds is creamy yellow.
(20) 수꽃 개화기는 늦다.(20) The flowering period of male flowers is late.
(21) 암꽃 개화기는 빠르다.(21) The flowering period of female flowers is fast.
(22) 과실의 저장성은 길다.(22) The storage of fruit is long.
바이탈 멜론의 상기 형태학적 특성 이외에 본 발명의 출발 종자인 야생종 참외 또는 재배 멜론과 비교하여 확인한 특성을 정리하면 아래의 (1) 내지 (6)과 같다.In addition to the above morphological characteristics of vital melon, the characteristics confirmed by comparison with wild melon or cultivated melon, which are the starting seeds of the present invention, are as follows (1) to (6).
(1) 항비만 효과가 높다.(1) The anti-obesity effect is high.
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 항비만 효과가 없으며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 항비만 효과가 높다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) has no anti-obesity effect, and wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) has a high anti-obesity effect.
(2) 주지와 측지에 착과하는 습성이 있다.(2) It has a habit of condensing on the common and geodesic.
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 측지에만 착과하며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 주지와 측지에 착과한다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) fruit only on the geodesic, and wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) fruit on the main and geodetic.
(3) 주지와 측지 마디수만큼 착과한다. (3) It is fruited as much as the number of main and geodesic nodes.
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 1 내지 2개 정도 착과하며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 주지와 측지 마디수만큼 착과한다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) is fruiting about 1 to 2, and wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) is fruiting as much as the number of main and geodesic nodes.
(4) 수정 1주일 후 과실의 질량은 30g 내지 50g이며, 수확시 질량은 130g 내지 170g이다. (4) One week after fertilization, the mass of the fruit is 30g to 50g, and the mass at harvest is 130g to 170g.
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 수확시 질량이 1Kg이며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 수확시 질량이 3.4g이다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) has a mass of 1Kg at harvest, and wild species melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) has a mass of 3.4g at harvest.
(5) 수정 후 10일간 쿠커비타신(cucurbitacin) B 함량이 30μg/g DW -1 내지 60μg/g DW -1 으로 매우 높다. (5) 10 days after fertilization, cucurbitacin B content is very high, 30 μg/g DW -1 to 60 μg/g DW -1 .
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 쿠커비타신 함량이 낮으며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 쿠커비타신 함량이 매우 높다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) has a low content of cucurbitacin, and wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) has a very high content of cucurbitacin.
(6) 착과 후 연속 수확이 가능하다. (6) Continuous harvesting is possible after fruiting.
재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)은 연속 착과가 어려우며, 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)는 연속 착과 후에 연속 수확이 가능하다.Cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) has difficulty in continuous fruiting, while wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) can be harvested continuously after continuous fruiting.
실시예 2. 바이탈 멜론의 채취 시기별 항비만 효과Example 2. Anti-obesity effect by collection time of vital melon
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론의 채취 시기별 항비만 효과를 조사하였다. 구체적으로, 바이탈 멜론을 수정 후 일주일 간격으로 채취하고, 채취한 바이탈 멜론을 70% 에탄올(v/v)을 용매로 추출하여 추출물을 제작하였다. 수정 7일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM1E70, 수정 10일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM2E70, 수정 20일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM3E70, 수정 30일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM4E70, 수정 40일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM5E70, 수정 50일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM6E70, 수정 60일 후 채취한 바이탈 멜론으로 제작한 추출물은 KM7E70 으로 명명하여 실험군으로 사용하였다. 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS (Welgene사, S001-01), 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM (Gibco사, 11995-040) 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone (Sigma사, R2408-50MG), 10 μg/ml 인슐린 (Sigma사, I0516-5ML) 및 1μM 덱사메사손 (Sigma사, D4902-10MG)이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군은 분화배지에서 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 1주 후 채취한 바이탈 멜론 추출물은 3T3-L1 세포에 25㎍/ml 및 50㎍/ml로 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 그 이후 채취한 바이탈 멜론 추출물은 3T3-L1 세포에 200㎍/ml 및 100㎍/ml로 지방세포생성 유도기간동안 처리하였으며, 3T3-L1 세포의 지방세포생성을 확인하기 위해 oil red O 염색시켜 200배 광학 현미경으로 관찰하여, 그 결과를 도 2A에 나타내었다. 또한, 광학 현미경으로 관찰 후 oil red O를 이소프로파놀(iso-propanol)로 용해시킨 후 OD값을 측정하였으며 그 결과를 도 2B에 나타내었다. The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. The anti-obesity effect of vital melon by harvesting period was investigated. Specifically, the vital melon was collected at weekly intervals after fertilization, and the collected vital melon was extracted with 70% ethanol (v/v) with a solvent to prepare an extract. The extract made with vital melon collected 7 days after fertilization is KM1E70, the extract made with vital melon collected 10 days after fertilization is KM2E70, the extract made with vital melon collected 20 days after fertilization is KM3E70, and 30 days after fertilization The extract made with one vital melon is KM4E70, the extract made with the vital melon collected 40 days after fertilization is KM5E70, the extract made with the vital melon collected 50 days after fertilization is KM6E70, and the extract made with vital melon collected 60 days after fertilization One extract was named KM7E70 and used as an experimental group. The 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. 10% FBS (Welgene, S001-01), 25mM NaHCO 3 , 25mM HEPEs added DMEM (Gibco, 11995-040) medium was used as a culture medium, and the differentiation medium A culture medium containing 10 μM rosiglitazone (Sigma, R2408-50MG), 10 μg/ml insulin (Sigma, I0516-5ML) and 1 μM dexamesasone (Sigma, D4902-10MG) was used, and the experimental group was Adipogenesis was induced by culturing in differentiation medium. Vital melon extract collected 1 week after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at 25 µg/ml and 50 µg/ml during the induction period of adipocyte production, and the collected vital melon extract was then used in 3T3-L1 cells. 200 µg/ml and 100 µg/ml were treated during the adipocyte production induction period, and oil red O stained to confirm the adipocyte production of 3T3-L1 cells and observed with a 200-fold optical microscope, and the results are shown in Fig. 2A Shown in. In addition, after observation with an optical microscope, oil red O was dissolved in isopropanol, and the OD value was measured, and the results are shown in FIG. 2B.
도 2A 및 도 2B에 나타난 바와 같이, 수정 후 7일경에 수확한 바이탈 멜론의 70% 에탄올 추출물의 경우, 25㎍/ml의 낮은 농도로 처리한 군에서도 지방세포생성효과가 현저히 감소하여 우수한 항비만 효과를 확인하였으나, 수정 후 2주경에 수확한 바이탈 멜론의 70% 에탄올 추출물의 경우, 200㎍/ml의 높은 농도로 처리한 군에서도 지방세포생성효과가 거의 감소하지 않음을 확인하였다. 2A and 2B, in the case of the 70% ethanol extract of vital melon harvested around 7 days after fertilization, the adipocyte-generating effect was significantly reduced even in the group treated with a low concentration of 25 μg/ml, resulting in excellent anti-obesity. Although the effect was confirmed, in the case of the 70% ethanol extract of vital melon harvested 2 weeks after fertilization, it was confirmed that the adipocyte-generating effect hardly decreased even in the group treated with a high concentration of 200 μg/ml.
실시예 3. 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 바이탈 멜론의 비교Example 3. Comparison of wild species melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and vital melon
3.1 항비만 효과가 나타나는 시기에 수확한 야생종 참외와 바이탈 멜론의 질량 비교3.1 Mass comparison of wild melon and vital melon harvested at the time of anti-obesity effect
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 실시예 2에서 수정 1주일 후 채취한 바이탈 멜론에서 항비만 효과가 우수한 것으로 확인하였으므로, 수정 1주일 후 채취한 바이탈 멜론과 수정 50일 후 채취한 야생종 참외의 질량을 건조 전과 건조 후로 나누어 비교하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. Since it was confirmed that the anti-obesity effect was excellent in the vital melon collected 1 week after fertilization in Example 2, the mass of the vital melon collected 1 week after fertilization and the wild melon collected 50 days after fertilization was divided into before and after drying and compared. The results are shown in FIG. 3.
도 3에 나타난 바와 같이, 건조 전 바이탈 멜론의 질량은 39.62g으로, 야생종 참외의 질량은 3.43g으로 나타났으며, 건조 후 바이탈 멜론의 질량은 2.36g으로, 야생종 참외의 질량은 0.19g으로 나타나, 건조 전과 후 모두 바이탈 멜론의 질량이 현저히 높음을 확인하였다. 3, the mass of the vital melon before drying was 39.62g, the mass of the wild melon was 3.43g, and the mass of the vital melon after drying was 2.36g, and the mass of the wild melon was 0.19g. , It was confirmed that the mass of the vital melon was remarkably high both before and after drying.
3.2 야생종 참외와 바이탈 멜론의 cucurbitacin A 및 cucurbitacin B의 채취 시기별 함량 비교3.2 Comparison of the content of cucurbitacin A and cucurbitacin B in wild melon and vital melon
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 채취 시기를 달리한 야생종 참외와 바이탈 멜론의 동결 건조한 샘플의 cucurbitacin A와 cucurbitacin B의 함량을 LC-MS/MS를 이용하여 비교하였다. 구체적인 실험방법은 다음과 같다. 실험 샘플로 동결 건조된 100mg의 수정 0일 후 바이탈 멜론, 수정 10일 후 바이탈 멜론, 수정 20일 후 바이탈 멜론, 수정 30일 후 바이탈 멜론, 수정 40일 후 바이탈 멜론, 수정 50일 후 바이탈 멜론, 수정 60일 후 바이탈 멜론, 수정 0일 후 야생종 참외, 수정 10일 후 야생종 참외, 수정 20일 후 야생종 참외, 수정 30일 후 야생종 참외, 수정 40일 후 야생종 참외, 수정 50일 후 야생종 참외, 수정 60일 후 야생종 참외 샘플을 준비하였다. 표준물질로 표준품 cucurbitacin A 및 표준품 cucurbitacin B를 정확히 칭량한 후 HPLC (high performance liquid chromatography)급 에탄올에 녹여 농도가 1mg/ml이 되도록 준비하였다. 쿠커비타신 A에 대한 HPLC 이동상 용매를 0.1% 포름산을 포함하는 3차 증류수로 하여 사용하였고, 쿠커비타신 B에 대한 HPLC 이동상 용매를 0.1% 포름산을 포함하는 메탄올로 하여 사용하였다. 2 mL e-튜브에 동결건조한 샘플 약 100 mg을 넣고 암모늄 버퍼(ammonium buffer, Sigma-Aldrich, Korea) 100μL와 1.2mL의 디클로로메탄(Dichloromethane, HPLC급, Merch, Germany)을 첨가 후 2분간 볼텍싱하고 10분간 초음파분쇄(ultrasonicate) 추출을 하였다. 그 후, 14,000 rpm으로 5분간 원심분리하여 층 분리하였으며, 유기층을 다른 2mL e-튜브에 800μL를 분리하였다. e-튜브에 분리한 샘플을 건조하였으며 완전히 건조한 다음 메탄올 (Methanol, HPLC 급, Merck, Germany) 150μL을 이용하여 다시 녹여 HPLC-MS에 주입하여 cucurbitacin A 와 cucurbitacin B의 함량을 측정하였다. 본 실시예에서 사용한 장비를 표 1에 나타내었으며, MASS의 최적화 분석조건을 표 2에 나타내었고, MASS 및 HPLC 분석 조건을 표 3에 나타내었으며, 쿠커비타신 A와 쿠커비타신 B의 측정 결과를 도 4에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. The contents of cucurbitacin A and cucurbitacin B in freeze-dried samples of wild melon and vital melon at different collection times were compared using LC-MS/MS. The specific experimental method is as follows. 100mg of freeze-dried experimental sample after fertilization 0 days, vital melon 10 days after fertilization, 20 days after fertilization, vital melon, 30 days after fertilization, vital melon 40 days after fertilization, 50 days after fertilization, vital melon, Vital melon 60 days after fertilization, wild melon after fertilization 0 days, wild melon after fertilization 10 days, wild melon after fertilization 20 days, wild melon after fertilization 30 days, wild melon after fertilization 40 days, wild melon after fertilization 50 days after fertilization, fertilization After 60 days, wild melon samples were prepared. The standard cucurbitacin A and the standard cucurbitacin B were accurately weighed and dissolved in high performance liquid chromatography (HPLC)-grade ethanol to prepare a concentration of 1 mg/ml. The HPLC mobile phase solvent for cucurbitacin A was used as tertiary distilled water containing 0.1% formic acid, and the HPLC mobile phase solvent for cucurbitacin B was used as methanol containing 0.1% formic acid. Add about 100 mg of the lyophilized sample to a 2 mL e-tube, add 100 μL of ammonium buffer (Sigma-Aldrich, Korea) and 1.2 mL of dichloromethane (HPLC grade, Merch, Germany), and then vortex for 2 minutes Then, ultrasonic pulverization (ultrasonicate) extraction was performed for 10 minutes. After that, the layers were separated by centrifugation at 14,000 rpm for 5 minutes, and 800 μL of the organic layer was separated into another 2 mL e-tube. The sample separated in the e-tube was dried, completely dried, and then dissolved again with 150 μL of methanol (Methanol, HPLC grade, Merck, Germany) and injected into HPLC-MS to measure the contents of cucurbitacin A and cucurbitacin B. The equipment used in this example is shown in Table 1, the optimized analysis conditions for MASS are shown in Table 2, the conditions for MASS and HPLC analysis are shown in Table 3, and the measurement results of cucurbitacin A and cucurbitacin B It is shown in Figure 4.
[표 1] [Table 1]
Figure PCTKR2020007505-appb-img-000001
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[표 2][Table 2]
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[표 3][Table 3]
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도 4에 나타난 바와 같이, 야생종 참외의 cucurbitacin B의 함량은 착과시부터 수정 10일까지 약 40μg/g DW -1(Dry weight,건물중)으로서 유사한 함량이었으나 20일 째에 급격하게 증가하였으며 그 후에는 급격하게 감소하는 경향을 나타내었다. 그러나 바이탈 멜론은 착과시에 cucurbitacin B의 함량이 50 μg/g DW -1으로서 매우 높았으나, 항비만 효과가 우수한 수정 10일 후에는 약 30 μg/g DW -1으로서 착과시보다 감소하였으나 높은 수준을 유지하였고, 그 후에는 급격하게 감소하여 수정 50일 후에는 거의 검출되지 않을 정도로 낮았다. Cucurbitacin A는 야생종 참외와 바이탈 멜론 모두 채취시기에 따른 변화가 거의 없었다.As shown in FIG. 4, the content of cucurbitacin B in wild melon was about 40 μg/g DW -1 (Dry weight, in the building) from the time of fruiting to the 10th day of fertilization, but it was rapidly increased on the 20th day. Showed a tendency to decrease rapidly. However, the content of cucurbitacin B was very high at 50 μg/g DW -1 during fruiting, but it was about 30 μg/g DW -1 after 10 days of fertilization with excellent anti-obesity effect, which was lower than when fruiting, but at a higher level. Was maintained, and after that, it decreased rapidly and was so low that it was hardly detected after 50 days of fertilization. Cucurbitacin A showed little change depending on the harvesting time of both wild melon and vital melon.
실시예 4. 바이탈 멜론 추출물의 에탄올 용매 농도 선정Example 4. Selection of ethanol solvent concentration of vital melon extract
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 에탄올 농도에 따른 바이탈 멜론 추출물의 지질 축적 억제효과를 비교하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS, 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10 μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군을 분화배지에 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 95%, 70%, 50%, 25% 에탄올 및 물을 추출 용매로 하여 제작한 바이탈 멜론 추출물을 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 3T3-L1 세포의 지방세포생성을 확인하기 위해 oil red O 염색시켜 200배 광학 현미경으로 관찰하였으며, 그 결과를 도 5A에 나타내었다. 또한, 광학 현미경으로 관찰 후 oil red O를 이소프로파놀(iso-propanol)로 용해시킨 후 OD값을 측정하였으며 그 결과를 도 5B에 나타내었다. The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. The inhibitory effect on lipid accumulation of the vital melon extract according to the ethanol concentration was compared. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium with 10% FBS, 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs was used as a culture medium, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/ml insulin and 1 μM dexamethasone in the culture medium as a differentiation medium This added medium was used, and the experimental group was cultured in a differentiation medium to induce adipogenesis. Vital melon extract prepared using 95%, 70%, 50%, 25% ethanol and water as extraction solvents was treated in 3T3-L1 cells during the induction period of adipocyte production, and adipocytes of 3T3-L1 cells In order to confirm the production, oil red O was stained and observed with a 200 times optical microscope, and the results are shown in FIG. 5A. In addition, after observation with an optical microscope, oil red O was dissolved in isopropanol, and the OD value was measured, and the results are shown in FIG. 5B.
도 5에 나타난 바와 같이, 지질축적율이 최저값(약 60%)으로 수렴하는 바이탈 멜론 추출물의 최소농도는 95% 에탄올 추출물의 경우 1μg/ml, 70% 에탄올 추출물은 0.5μg/ml, 50% 에탄올 추출물은 2μg/ml, 25% 에탄올 추출물은 5μg/ml, 물 추출물은 10μg/ml인 것으로 확인되어, 70% 에탄올 추출물이 가장 낮은 농도에서 지질축적율이 최저로 수렴하는 것을 확인하였다. 따라서 70% 에탄올을 추출용매로 추출한 바이탈 멜론 추출물을 이하 실시예에서 사용하였다.As shown in FIG. 5, the minimum concentration of the vital melon extract at which the lipid accumulation rate converges to the lowest value (about 60%) is 1 μg/ml for 95% ethanol extract, 0.5 μg/ml for 70% ethanol extract, 50% ethanol It was confirmed that the extract was 2 μg/ml, the 25% ethanol extract was 5 μg/ml, and the water extract was 10 μg/ml, and it was confirmed that the lipid accumulation rate converged to the lowest at the lowest concentration of the 70% ethanol extract. Therefore, the vital melon extract extracted with 70% ethanol as an extraction solvent was used in the following examples.
실시예 5. 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 항비만 효과 확인Example 5. Confirmation of concentration-dependent anti-obesity effect of vital melon extract
5.1 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 지방세포생성 억제 효과 확인5.1 Confirmation of concentration-dependent adipocyte production inhibitory effect of vital melon extract
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 농도 의존적 지방세포생성 억제효과를 검증하기 위하여 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 처리한 세포를 oil red O로 염색한 후 지방 분화정도를 확인하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS (Welgene, S001-01), 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10 μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군을 분화배지에 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 7일 후 수확한 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물을 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 3T3-L1 세포의 지방세포생성을 확인하기 위해 oil red O 염색시켜 200배 광학 현미경으로 관찰하였으며, 그 결과를 도 6A에 나타내었다. 또한, 광학 현미경으로 관찰 후 oil red O를 이소프로파놀(iso-propanol)로 용해시킨 후 OD값을 측정하였으며 그 결과를 도 6B에 나타내었다. The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. To verify the concentration-dependent adipocyte production inhibitory effect of the 70% ethanol extract of vital melon, cells treated with the concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml of the 70% ethanol extract of vital melon were stained with oil red O and the degree of fat differentiation was measured. Confirmed. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium containing 10% FBS (Welgene, S001-01), 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs was used as a culture medium, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/in the culture medium as a differentiation medium. A medium to which ml insulin and 1 μM dexamethasone were added was used, and the experimental group was cultured in a differentiation medium to induce adipogenesis. Vital melon 70% ethanol extract harvested 7 days after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml during the induction period of adipocyte production, and adipocyte production of 3T3-L1 cells To confirm, oil red O was stained and observed with a 200 times optical microscope, and the results are shown in FIG. 6A. In addition, after observation with an optical microscope, oil red O was dissolved in iso-propanol, and the OD value was measured, and the results are shown in FIG. 6B.
도 6A와 도 6B에 나타난 바와 같이, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 지방의 분화를 억제시키는 것을 확인하였다.6A and 6B, it was confirmed that the 70% ethanol extract of vital melon inhibits the differentiation of fat in a concentration-dependent manner.
5.2 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 글루코스 흡수 억제 효과 확인5.2 Confirmation of the concentration-dependent glucose absorption inhibitory effect of vital melon extract
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 농도 의존적 글루코스 흡수 억제 효과를 검증하기 위하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 처리한 세포의 배지 내 글루코스 농도를 측정하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS, 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군은 분화배지에 8일 간 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 7일 후 수확한 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물을 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 배양 8일째 배지 내 글루코스 함량을 측정하였으며 그 결과를 도 7에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. In order to verify the concentration-dependent glucose absorption inhibitory effect of the 70% ethanol extract of vital melon, the glucose concentration in the medium of cells treated with the concentration of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml of the 70% ethanol extract of vital melon was measured. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium with 10% FBS, 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs added as a culture medium was used, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/ml insulin and 1 μM dexamethasone were used in the culture medium as a differentiation medium. The added medium was used, and the experimental group was cultured in differentiation medium for 8 days to induce adipogenesis. Vital melon 70% ethanol extract harvested 7 days after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml during the induction period of adipogenesis, and the glucose content in the medium on the 8th day of culture was adjusted. It was measured and the results are shown in FIG. 7.
도 7에 나타난 바와 같이, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 처리 농도가 높은 군일수록 배지 내 잔존하는 글루코스가 높은 것을 확인하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 글루코스의 흡수를 억제하는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 7, it was confirmed that the higher the concentration of treatment of the 70% ethanol extract of vital melon, the higher the residual glucose in the medium, and it was confirmed that the 70% ethanol extract of vital melon inhibits the absorption of glucose in a concentration-dependent manner. .
5.3 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 세포 내 중성지방 감소 효과 확인5.3 Confirmation of concentration-dependent intracellular triglyceride reduction effect of vital melon extract
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 농도 의존적 세포 내 중성지방 감소 효과를 검증하기 위하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 처리한 지방 세포의 세포 내 중성지방(Triglyceride) 농도를 측정하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS, 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군은 분화배지에 8일 간 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 7일 후 수확한 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물을 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하였다. 배양 8일째에 5% triton X-100(Bioshop, Burlington, Ontario, canada)를 사용하여 중성지방을 추출하고 3T3-L1 세포 내 중성지방의 함량(㎍/well)을 상업적인 TG 키트(아산 약품, 서울, 대한민국)을 사용한 효소분석법으로 측정하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. To verify the concentration-dependent intracellular triglyceride reduction effect of the 70% ethanol extract of vital melon, the triglyceride concentration of the adipocytes treated with the concentration of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml of the 70% ethanol extract of vital melon Was measured. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium with 10% FBS, 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs added as a culture medium was used, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/ml insulin and 1 μM dexamethasone were used in the culture medium as a differentiation medium. The added medium was used, and the experimental group was cultured in differentiation medium for 8 days to induce adipogenesis. Vital melon 70% ethanol extract harvested 7 days after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml during the induction period of adipogenesis. On the 8th day of culture, triton X-100 (Bioshop, Burlington, Ontario, Canada) was used to extract triglycerides, and the content of triglycerides (㎍/well) in 3T3-L1 cells was determined by a commercial TG kit (Asan Pharmaceutical, Seoul). , Korea) was measured using an enzyme analysis method, and the results are shown in FIG. 8.
도 8에 나타난 바와 같이, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 처리 농도가 높은 군일수록 3T3-L1 세포 내 중성지방의 함량이 감소하는 것을 확인하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 세포 내 중성 지방의 함량을 감소시키는 것을 확인하였다.As shown in Figure 8, it was confirmed that the content of triglyceride in 3T3-L1 cells decreased as the treatment concentration of the 70% ethanol extract of vital melon was higher, so that the concentration-dependently concentration-dependent intracellular triglyceride of the vital melon 70% ethanol extract It was confirmed to reduce the content of.
5.4 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 지방세포분화 관련 전사인자 PPARγ 발현 억제 효과5.4 Inhibitory Effect of Vital Melon Extract on the Expression of the Transcription Factor PPARγ Related to Concentration-dependent Adipocyte Differentiation
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 농도 의존적 지방세포분화 관련 특이지표단백질이자 전사인자인 PPARγ의 발현 억제 효과를 검증하기 위하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 처리한 지방 세포의 PPARγ의 발현을 측정하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS, 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군은 분화배지에 8일 간 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 7일 후 수확한 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물을 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 배양 1일째와 8일째, 항 PPAR-γ 항체(Santa cruz사, Sc-271392) 및 항 α-tubulin 항체(Santa cruz사, Sc-23948)를 이용한 웨스턴 블롯으로 지방세포로의 분화 특이 지표 단백질이자 전사인자인 PPAR-γ의 발현을 측정하였다. 배양 1일째 결과를 도 9A에 나타내었고 배양 8일째 결과를 도9B에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. Fat treated at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml of Vital Melon 70% ethanol extract to verify the effect of inhibiting the expression of PPARγ, a specific indicator protein and transcription factor related to adipocyte differentiation related to concentration-dependent adipocyte differentiation. The expression of PPARγ in cells was measured. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium with 10% FBS, 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs added as a culture medium was used, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/ml insulin and 1 μM dexamethasone were used in the culture medium as a differentiation medium. The added medium was used, and the experimental group was cultured in differentiation medium for 8 days to induce adipogenesis. Vital melon 70% ethanol extract harvested 7 days after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml during the induction period of adipogenesis, and on the 1st and 8th days of culture, Western blot using PPAR-γ antibody (Santa cruz, Sc-271392) and anti α-tubulin antibody (Santa cruz, Sc-23948) to express the expression of PPAR-γ, which is a transcription factor and a specific indicator protein for differentiation into adipocytes. Measured. The results on the first day of culture are shown in Fig. 9A, and the results on the eighth day of culture are shown in Fig. 9B.
도 9A 및 도 9B에 나타난 바와 같이, 배양 1일째와 8일째 모두 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 처리 농도가 높은 군일수록 PPARγ의 발현이 감소하는 것을 확인하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 지방세포분화 관련 전사인자의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다.As shown in FIGS. 9A and 9B, it was confirmed that the expression of PPARγ decreased as the treatment concentration of the 70% ethanol extract of vital melon was higher on both the first and the eighth day of culture, and the 70% ethanol extract of vital melon was concentration dependent. It was confirmed that the expression of transcription factors related to adipocyte differentiation was reduced.
5.5 바이탈 멜론 추출물의 농도 의존적 지방세포분화 관련 단백질의 발현 억제 효과5.5 Inhibitory Effect of Vital Melon Extract on the Expression of Proteins Related to Concentration-dependent Adipocyte Differentiation
본 실시예의 바이탈 멜론은 바이탈 멜론 열매로 실시하였다. 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 농도 의존적 지방세포분화 관련 단백질 발현 억제 효과를 검증하기 위하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 처리한 지방 세포의 HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 및 LPL의 발현을 측정하였다. 구체적으로, 실험 세포주로 3T3-L1 세포주를 사용하였다. 배양배지(culture medium)로 10% FBS, 25mM NaHCO 3, 25mM HEPEs가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였고, 분화배지(differentiation medium)로 상기 배양배지에 10μM rosiglitazone, 10μg/ml 인슐린 및 1μM 덱사메사손이 첨가된 배지를 사용하였으며, 실험군은 분화배지에 8일 간 배양하여 지방세포생성(adipogenesis)을 유도하였다. 수정 7일 후 수확한 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물을 0.1, 0.2 및 0.5μg/ml의 농도로 3T3-L1 세포에 지방세포생성 유도기간(induction period)동안 처리하고, 배양 8일째, 웨스턴 블롯으로 HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 및 LPL의 발현을 측정하였으며, 웨스턴 블롯에 사용한 항체를 표 4에 나타내었고, 측정 결과를 도 10에 나타내었다.The vital melon of this example was carried out with the fruit of the vital melon. In order to verify the concentration-dependent adipocyte differentiation-related protein expression inhibitory effect of the 70% ethanol extract of vital melon, HMGCR, CD36, A- of adipocytes treated with the concentration of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml of the 70% ethanol extract of vital melon Expression of FABP, FAS, Glut4 and LPL was measured. Specifically, a 3T3-L1 cell line was used as the experimental cell line. DMEM medium with 10% FBS, 25mM NaHCO 3 and 25mM HEPEs added as a culture medium was used, and 10 μM rosiglitazone, 10 μg/ml insulin and 1 μM dexamethasone were used in the culture medium as a differentiation medium. The added medium was used, and the experimental group was cultured in differentiation medium for 8 days to induce adipogenesis. Vital melon 70% ethanol extract harvested 7 days after fertilization was treated in 3T3-L1 cells at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.5 μg/ml during the induction period, and cultured on day 8, HMGCR by Western blot , CD36, A-FABP, FAS, Glut4 and LPL expressions were measured, and the antibodies used for Western blot are shown in Table 4, and the measurement results are shown in FIG. 10.
[표 4][Table 4]
Figure PCTKR2020007505-appb-img-000004
Figure PCTKR2020007505-appb-img-000004
도 10에 나타난 바와 같이, 배양 8일째 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물의 처리 농도가 높은 군일수록 HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 및 LPL의 발현이 모두 감소하는 것을 확인하여, 바이탈 멜론 70% 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 지방세포분화 관련 단백질의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다.As shown in Figure 10, it was confirmed that the expression of HMGCR, CD36, A-FABP, FAS, Glut4 and LPL all decreased as the treatment concentration of the 70% ethanol extract of vital melon on the 8th day of culture decreased. It was confirmed that the ethanol extract reduced the expression of adipocyte differentiation-related proteins in a concentration-dependent manner.
이하, 본 발명의 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아니고 단지 이를 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, an example of the preparation of a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity including the composition for anti-obesity of the present invention is described, but is not intended to limit the present invention, but only to describe it in detail.
제제예 1. 산제의 제조Formulation Example 1. Preparation of powder
본 발명의 바이탈 멜론 추출물 100 ㎎100 mg of vital melon extract of the present invention
유당 1 g1 g lactose
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.The above ingredients were mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
제제예 2. 정제의 제조Formulation Example 2. Preparation of tablet
본 발명의 바이탈 멜론 추출물 100 ㎎100 mg of vital melon extract of the present invention
옥수수전분 100 ㎎ Corn starch 100 mg
유 당 100 ㎎100 mg lactose
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.After mixing the above ingredients, tablets were prepared by tableting according to a conventional tablet preparation method.
제제예 3. 캡슐제의 제조Formulation Example 3. Preparation of Capsule
본 발명의 바이탈 멜론 추출물 100 ㎎100 mg of vital melon extract of the present invention
옥수수전분 100 ㎎ Corn starch 100 mg
유 당 100 ㎎100 mg lactose
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After mixing the above ingredients, the gelatin capsules were filled according to a conventional capsule preparation method to prepare a capsule formulation.
제제예 4. 환의 제조Formulation Example 4. Preparation of Pill
본 발명의 바이탈 멜론 추출물 100 ㎎100 mg of vital melon extract of the present invention
유당 1.5 g1.5 g lactose
글리세린 1 g1 g glycerin
자일리톨 0.5 g0.5 g xylitol
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.After mixing the above ingredients, it was prepared so as to be 4 g per ring according to a conventional method.
제제예 5. 과립의 제조Formulation Example 5. Preparation of granules
본 발명의 바이탈 멜론 추출물 100 ㎎100 mg of vital melon extract of the present invention
대두추출물 50 ㎎Soybean extract 50 mg
포도당 200 ㎎200 mg of glucose
전분 600 ㎎Starch 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.After mixing the above ingredients, 100 mg of 30% ethanol was added and dried at 60°C to form granules, and then filled into a cloth.
제제예 6. 정제형 건강기능식품Formulation Example 6. Tablet health functional food
옥타코사놀분말 15중량%, 유당가수분해물분말 15중량%, 분리대두단백분말 15중량%, 키토올리고당 15중량% 효모추출물분말 10중량%, 비타민미네랄혼합제재 10중량%, 스테아린산 마그네슘 4.6중량%, 이산화티타늄 0.2 중량%, 및 글리세린지방산에스테르 0.2중량%와 본 발명의 바이탈 멜론 추출물 20중량%를 배합하여 통상의 방법으로 정제형 건강기능식품을 제조한다. Octacosanol powder 15% by weight, lactose hydrolyzate powder 15% by weight, isolated soy protein powder 15% by weight, chitooligosaccharide 15% by weight yeast extract powder 10% by weight, vitamin mineral mixture 10% by weight, magnesium stearate 4.6% by weight, titanium dioxide By blending 0.2% by weight, and 0.2% by weight of glycerin fatty acid ester and 20% by weight of the vital melon extract of the present invention, a tablet-type health functional food is prepared by a conventional method.
제제예 7. 건강 음료Formulation Example 7. Healthy beverage
꿀 5중량%, 과당 3중량%, 염산리보플라빈나트륨 0.0001중량%, 염산피리독신 0.0001중량%, 물 86.9998중량% 및 본 발명의 바이탈 멜론 추출물 5중량%를 배합하여 통상의 방법으로 건강 음료를 제조한다.5% by weight of honey, 3% by weight of fructose, 0.0001% by weight of sodium riboflavin hydrochloride, 0.0001% by weight of pyridoxine hydrochloride, 86.9998% by weight of water, and 5% by weight of the vital melon extract of the present invention are blended to prepare a health drink by a conventional method.

Claims (11)

  1. 야생종 참외(Cucumis melo var. makuwa Makino)와 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 교잡한 1세대 종자인 바이탈 멜론.Vital melon, a first-generation seed hybridized with wild melon (Cucumis melo var. makuwa Makino) and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus).
  2. 제1항에 있어서, 상기 바이탈 멜론은 착과시 쿠커비타신(cucurbitacin) B의 함량이 30 μg/g DW -1(Dry weight,건물중) 내지 60 μg/g DW -1인 것을 특징으로 하는 바이탈 멜론.The vital melon according to claim 1, wherein the content of cucurbitacin B is 30 μg/g DW -1 (Dry weight, in the building) to 60 μg/g DW -1 during fruiting. melon.
  3. 야생종 참외(Cucumis melo var.makuwa Makino)를 모본으로 하고, 재배 멜론(Cucumis melo var. reticulatus)을 부본으로 하여 개화기에 인공수분을 시켜 얻어진 교잡 1세대 종자로써 하기 (1) 내지 (22)의 식물학적 특성을 가지는 바이탈 멜론: Plants of the following (1) to (22) as a hybrid first generation seed obtained by artificial pollination during flowering using wild melon (Cucumis melo var.makuwa Makino) as a model and cultivated melon (Cucumis melo var. reticulatus) as a counterpart. Vital melon with mechanical properties:
    (1) 식물체는 덩굴성으로 원줄기의 길이는 길다.(1) Plants are vines and the length of the main stem is long.
    (2) 잎몸의 녹색 정도는 중간 정도이다.(2) The green color of the leaf body is medium.
    (3) 잎몸 엽절의 발생은 약하다. (3) The occurrence of leaf body lobes is weak.
    (4) 잎자루 길이는 중간이다.(4) Petiole length is medium.
    (5) 성표현은 웅성양성동주이다.(5) Sexual expression is male and female.
    (6) 암꽃은 마디마다 달린다.(6) The female flower runs on every node.
    (7) 어린과실의 과피색은 옅은 녹색이다. (7) The skin color of young fruits is pale green.
    (8) 과실 길이는 짧다. (8) The fruit length is short.
    (9) 과실 너비는 아주 짧다. (9) The fruit width is very short.
    (10) 과실은 중간 타원형이다.(10) Fruit is medium oval.
    (11) 과실 표면의 주름은 없다.(11) There are no wrinkles on the fruit surface.
    (12) 과실의 코르크는 형성되지 않는다. (12) Fruit cork is not formed.
    (13) 성숙기 이후 과피색의 변화속도는 느리다.(13) After maturity, the rate of change of pericarp color is slow.
    (14) 과실의 종단 시 과육이 차지하는 너비는 좁다.(14) The width occupied by the flesh at the end of the fruit is narrow.
    (15) 과육의 주된 색은 백색이다(15) The main color of the flesh is white
    (16) 과육의 경도는 무르다.(16) The hardness of the flesh is soft.
    (17) 종자의 길이는 짧다.(17) The length of the seed is short.
    (18) 종자의 너비는 매우 짧다.(18) The width of the seeds is very short.
    (19) 종자의 색은 크림 빛 황색이다.(19) The color of the seeds is creamy yellow.
    (20) 수꽃 개화기는 늦다.(20) The flowering period of male flowers is late.
    (21) 암꽃 개화기는 빠르다.(21) The flowering period of female flowers is fast.
    (22) 과실의 저장성은 길다.(22) The storage of fruit is long.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 바이탈 멜론의 추출물을 포함하는 항비만용 조성물.An anti-obesity composition comprising the extract of any one of claims 1 to 3 of the vital melon.
  5. 제4항에 있어서, 상기 바이탈 멜론은 수정 후 약 2주 이내에 수확한 것을 특징으로 하는, 항비만용 조성물.The composition for anti-obesity according to claim 4, wherein the vital melon is harvested within about 2 weeks after fertilization.
  6. 제5항에 있어서, 상기 바이탈 멜론은 질량이 30g 내지 50g인 것을 특징으로 하는, 항비만용 조성물.The composition for anti-obesity according to claim 5, wherein the vital melon has a mass of 30 g to 50 g.
  7. 제4항에 있어서, 상기 바이탈 멜론 추출물은 C 1-C 4 알코올을 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물.The composition for anti-obesity of claim 4, wherein the vital melon extract is C 1 -C 4 alcohol extracted with a solvent.
  8. 제7항에 있어서, 상기 C 1-C 4 알코올은 50% 내지 95% (v/v) 에탄올인 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물.The composition for anti-obesity according to claim 7, wherein the C 1 -C 4 alcohol is 50% to 95% (v/v) ethanol.
  9. 제4항의 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising the composition for anti-obesity of claim 4.
  10. 제4항의 항비만용 조성물을 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품.Health functional food for preventing or improving obesity comprising the composition for anti-obesity of claim 4.
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 바이탈 멜론의 추출물 유효 투여량을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 비만 예방 또는 치료 방법.A method for preventing or treating obesity, comprising administering to an individual an effective dose of the extract of any one of claims 1 to 3 of vital melon.
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