WO2020077428A1 - Compostos, uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica e composição farmacêutica compreendendo 7,11b-dihydro-6h-indeno[2,1-c]chromene-3,6a,9,10-tetrol, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, para prevenção e/ou terapia senolítica - Google Patents

Compostos, uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica e composição farmacêutica compreendendo 7,11b-dihydro-6h-indeno[2,1-c]chromene-3,6a,9,10-tetrol, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, para prevenção e/ou terapia senolítica Download PDF

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senolytic
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André SOUTO
Priscylla VOLKART
Guido LENZ
Giovana ONZI
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União Brasileira De Educação E Assistência - Mantenedora Da Pucrs
Universidade Federal Do Rio Grande Do Sul
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Definitions

  • the present invention describes chemical compounds, use of chemical compounds in the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy and a pharmaceutical composition. More specifically, the present invention comprises the compounds of Formula A, their derivatives or analogues, neutral or ionized, and more preferably the compound of Formula B, acting by means of selective elimination of senescent cells.
  • the present invention is in the fields of chemistry, pharmacy and medicine.
  • the present invention differs both because the brasilina used in the invention is of synthetic origin, and because Kim et al, 2017 do not describe the use of brasilina for selective elimination of senescent cells by inhibiting and / or activating the SCAP pathway and for the treatment of disorders related to aging. Kim et al, 2017 also did not evaluate markers related to the principle of senescence, such as levels of Beta-galactosidase, F0X03A, p21, p16, p53 or apoptosis.
  • the present invention differs in that it claims the use of brasilina for selective elimination of senescent cells by inhibiting and / or activating the SCAPs pathway and not anti-cancer activity applied to multiple myeloma, according to several mechanisms previously studied in natural products for this activity (Kim and Kim, 2018), as well as describes application for treating disorders related to cell senescence.
  • the present invention describes the use of brasilina for selective elimination of senescent cells by inhibition and / or activation of the SCAP pathway, reveals only the anti-inflammatory activity of brasilina, as also demonstrated by Macha et al, 2015 Lee et al, 2015 also does not describe the treatment of disorders related to cell senescence.
  • the document KR 20130057514 describes the use of brasilina as a food additive, promoting inhibition of apoptosis, preventing and treating conditions associated with UV radiation, such as skin damage and aging.
  • the document does not describe the use of brasilina for selective elimination of senescent cells by inhibiting and / or activating the SCAP pathway, as well as its senolytic activity; it reveals only the photo-protective activity to prevent skin aging, just as other natural molecules also promote (Dunaway et al, 2018).
  • brasilina is not used for selective elimination of senescent cells by inhibition and / or activation of the SCAP pathway as proposed, but for its anti-cancer activity , according to several mechanisms previously studied in natural products for this activity (Kim and Kim, 2018).
  • the document WO 2018094495 describes the use of the species Casearia sylvestris and / or Hymenaea courbaril in anti-senescence compositions. It also mentions mechanisms for modulating the beta-galactosidase, p21 and p16 markers. However, the document does not describe the use of said compound, nor does it mention the selective elimination of senescent cells by inhibiting and / or activating the SCAP pathway. It reveals that extract from Casearia sylvestris plants has anti-senescence activity without revealing which are the chemical structures specifically for said cosmetic compositions.
  • EP 3330274 describes the use of compounds of formula ⁇ "," la “and their pharmaceutically acceptable salts. As in the chemical structure of Brasilina, the compounds have benzene rings that are part of a main "skeleton", and may eventually assume other identities, through chemical structures made possible by the Markush formula and the different radicals predicted and claimed. Additionally, the document presents a method of treatment and / or prevention of diseases related to senescence and health conditions and also describes the relationship between senescence and apoptosis, Beta-galactosidase activity and levels of senescence markers.
  • the present invention differs from the document in that it is clearly observed that the “I” structure has three benzene rings connected by a double bond with no defined spatial orientation, which is not the case with brasilina and, therefore, the document does not describe O skeleton of the Brasilina compound specifically, nor does it list it for the treatment of these conditions.
  • Aging is the main risk factor for chronic diseases, which are responsible for most of the morbidity, mortality and health costs.
  • a fundamental mechanism of aging that contributes to chronic diseases and age-related dysfunctions is cell senescence (Goldman et al., 2013), whose mechanism leads to the irreversible arrest of cell division by a variety of stresses including DNA damage, shortening of telomeres and oxidative stress (Baker et al., 201 1; Tchkonia et al., 2013).
  • senescent cells Two of the characteristic aspects of senescent cells are the cellular increase, indicating a clear morphological change, which is visible when compared to non-senescent cells and the irreversible stop of cell replication.
  • senescent morphogenesis is directly linked to the loss of cell division capacity, the finding of alteration of these two characteristics, related to growth, are involved in the control of morphological change (Chen and Ames, 1994; von Zglinicki et al., 1995; Ogryzko et al., 1996; Serrano et al., 1997; Lee et al., 1999; Dimri et al., 2000).
  • the present invention proposes senolytic compounds for prevention and / or anti-senescence therapy resulting in the partial or complete elimination of cells with this phenotype. It is important to note that the technology proposed here differs from the state of the art with regard to prevention and anti-aginci treatment, which do not establish a relationship with the mechanisms that reverse the senescent state itself, but which propose the maintenance of a physiological state preserved, preventing or delaying the aging process (Blagosklonnv, 2008; Malavolta et al., 2016, Zhao et al., 2017). In this way, the present invention revolutionizes the way of prevention and treatment of processes related to aging, proposing even as a result, the increase in life expectancy in a time scale.
  • the mechanisms of action are preliminary through inhibition and / or activation of the SCAP pathway, involving mainly family of proteins, B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, RI3Kd, AKT, ROS protective and / or metabolic , MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, HIF-1a, and / or HSP-90, however, not limited to these.
  • gH2AC is a protein related to damage and / or repair at the DNA level and, consequently, by the expression of damaged proteins.
  • R1 and R2 are independently chosen and, without defined stereochemistry, among:
  • R1 O, 0-R2, S-R2, N- (R2) 2 , Cl, Br, F or H;
  • R2 CHs, CH2CH3, COCH3 or H.
  • the compounds of the present invention can be used alone or in combination, preferably being isolated.
  • the compounds of the present invention can be used for prevention and / or senolytic therapy, the preferred embodiment being for senolytic therapy.
  • the compounds of the present invention are for prevention and / or senolytic therapy, preferably by means of selective elimination of senescent cells, by inhibiting and / or activating the SCAP pathway, comprising a family of B-galactosidase proteins, BCL -2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, protective and / or metabolic ROS, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, HIF-1a, and / or HSP-90.
  • SCAP pathway comprising a family of B-galactosidase proteins, BCL -2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, protective and / or metabolic ROS, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, HIF-1a, and / or
  • the compounds of the present invention are for prevention and / or therapy of the group of physiological disorders comprising: SASP, idiopathic pulmonary fibrosis, coronary artery disease, infarction, changes in heartbeat, arrhythmias, cardiac arrest, diseases of heart valves, cardiomyopathies, pericarditis, aortic dysfunction (Marfan syndrome), vascular diseases, angina, abdominal aortic aneurysm, acute myocardial infarction, peripheral vascular disease, endocarditis, heart failure, myocarditis, heart tumors, vascular hyporeactivity and calcification, atherosclerosis, neurodegeneration, reduction of chronic inflammation, osteoarthritis, age-associated macular degeneration (AMD), amblyopia, astigmatism, blepharitis, cataracts, keratoconus, conjunctivitis, color blindness, retinal detachment, age-related macular degeneration (AMD), strabismus , Glaucoma
  • SASP idiopathic
  • the present invention provides the use of compounds in the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy according to Formula A, being:
  • the compounds of the present invention are used in the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy, alone or in combination, preferably isolated.
  • the compounds of the present invention are used in the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy, acting by means of selective elimination of senescent cells.
  • the selective elimination of senescent cells is by inhibiting and / or activating the SCAP pathway, comprising a family of B- proteins. galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, protective and / or metabolic ROS, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, H IF-1 a, and / or HSP-90.
  • SCAP pathway comprising a family of B- proteins. galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, protective and / or metabolic ROS, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, H IF-1 a, and / or HSP-90.
  • the use of the compounds of the present invention is in the preparation of the pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy of the group of physiological disorders comprising: SASP, idiopathic pulmonary fibrosis, coronary artery disease, infarction, changes in the beat cardiac arrhythmias, cardiac arrest, heart valve diseases, cardiomyopathies, pericarditis, aortic dysfunction (Marfan syndrome), vascular diseases, angina, abdominal aortic aneurysm, acute myocardial infarction, peripheral vascular disease, endocarditis, heart failure, myocarditis , tumors in the heart, vascular hyporeactivity and calcification, atherosclerosis, neurodegeneration, reduction of chronic inflammation, osteoarthritis, age-associated macular degeneration (AMD), Amblyopia, Astigmatism, Blepharitis, cataracts, Keratoconus, Conjunctivitis, Color blindness, Retinal detachment, Age-related macular de
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising compounds of Formula A, being:
  • R1 O, 0-R2, S-R2, N- (R2) 2 , Cl, Br, F or H;
  • R2 CHs, CH2CH3, COCHs or H
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • the compound of formula B is in a concentration range of 1 mM to 100 mM.
  • the pharmaceutical composition of the present invention selectively eliminates senescent cells by inhibiting and / or activating the SCAP pathway, comprising a family of proteins B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, ROS protective and / or metabolic, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, H IF-1 a, and / or HSP-90.
  • SCAP pathway comprising a family of proteins B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3K ⁇ , AKT, ROS protective and / or metabolic, MDM2, p53, p21, p16, FOX03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, H IF-1 a, and / or HSP-90.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is for the prevention and / or treatment of the group of physiological disorders comprising: SASP, idiopathic pulmonary fibrosis, coronary artery disease, infarction, changes in heartbeat, arrhythmias, arrest cardiac valve disease, cardiomyopathies, pericarditis, aortic dysfunction (Marfan syndrome), vascular diseases, angina, abdominal aortic aneurysm, acute myocardial infarction, peripheral vascular disease, endocarditis, heart failure, myocarditis, heart tumors, vascular hyporeactivity and calcification, atherosclerosis, neurodegeneration, reduction of chronic inflammation, osteoarthritis, age-associated macular degeneration (AMD), amblyopia, astigmatism, blepharitis, cataracts, keratoconus, conjunctivitis, color blindness, retinal detachment, age-related macular degeneration (AMD) ), Strabismus, Glaucoma, Hyper
  • Figure 1 Assay of b-galactosidase activity in U-87 cell line treated with TMZ in relation to untreated control
  • Figure 3 Population Doubling for ALBB, Brasilina and Resveratrol:
  • FIG. 4 N1 and N2-FSC for ALBB, Brasilina and Resveratrol.
  • Figure 5 Images from the Image Pro Plus 6 software of the cells treated with the six concentrations of the six compounds for 72 hours.
  • Control proliferative cells
  • TMZ ct senescent cells not treated with compound
  • ALBB Chicoric Acid, Brasilina, Dehydroresveratrol, Genistein and Resveratrol: proliferative cells treated with a dose of compound
  • Compound + TMZ senescent cells treated with the same dose of each respective compound.
  • Figure 6 Cell Senescence Control (A) compared to treatment with 200uM Brasilina in senescent culture (B) in RPE-1 strain.
  • Figure 7 Western Blotting using U-87 senescent cell lysate after treatment with 70 and 200 mM Brasilina and specific antibodies for the researched proteins: A) p21; B) p53; C) FOX04 and D) AKT.
  • the object of the present invention is to propose compounds, use of compounds in the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or senolytic therapy and pharmaceutical composition comprising compounds of Formula A, preferably Formula B (7, 1 1 b-dihydro- 6FI-indeno [2,1 - c] chromene-3,6a, 9,10-tetrol), its derivatives or analogues, neutral or ionized.
  • Formula A preferably Formula B (7, 1 1 b-dihydro- 6FI-indeno [2,1 - c] chromene-3,6a, 9,10-tetrol)
  • the different families of proteins involved in the SCAP pathway were selected to outline and conduct different assays to confirm specific routes and paths related to senescence and selective elimination of senescent cells against the compounds evaluated.
  • the mechanisms of action occurs preliminarily by inhibiting and / or activating the SCAPs pathway, mainly comprising a family of B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, RI3Kd, AKT, protective and / or metabolic ROS proteins, MDM2, p53, p21 , p16, F0X03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, HIF-1a, and / or HSP-90, however, not limited to these.
  • SCAPs pathway mainly comprising a family of B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, RI3Kd, AKT, protective and / or metabolic ROS proteins, MDM2, p53, p21 , p16, F0X03, serpine, Ephrins, their receptors, tyrosine kinases, HIF-1a, and / or HSP-90, however, not limited
  • the compounds were purchased from Sigma-Aldrich and dissolved in DMSO. All were preliminarily tested to define concentrations of use in the tests. After defining lethal concentrations and inhibitory concentrations (IC50), two concentrations below IC50 were used for each compound. For Brasilina, in view of its low toxicity (data not shown), it was decided to use it in a wide concentration range between 1 uM and 100mM.
  • Cell viability and cytotoxicity tests were performed using MTT and Population Doubling (DP) assays by flow cytometry to determine treatments in non-senescent cells.
  • the cell line used was U-87 (human glioma), obtained from ATCC. All materials for cell culture were purchased from Gibco (Biogen). The cells were cultured in DMEM low glucose culture medium, supplemented with 10% SFB (fetal bovine serum; Gibco), 100 IU / mL penicillin, 100 IU / mL streptomycin and 100 pg / ml of fungizone at 37 ° C and 5% CO2 in a humidified incubator.
  • SFB fetal bovine serum
  • the senescence experimental model used in vitro was established with the use of 100mM of the chemotherapy drug temozolomide (TMZ) (Sigma-Aldrich).
  • TTZ chemotherapy drug temozolomide
  • the b-galactosidase kit was used in flow cytometry.
  • Cell lines U-87 and A172-FI2B-mCherry were used and senescence induction was proven in different periods of exposure time (for 3h and 7 days) by changes in the cell activity of b-galactosidase in flow cytometry ( Figure 1 ).
  • NMA Nuclear morphometric test
  • PD Population Doubling Analysis
  • the treatments were carried out with the six compounds in different concentrations (Resveratrol and Dehidroresveratrol 50mM; ALBB and Brasilina 70mM; Genistein 4mM; Chicory Acid 20mM) for 72 hours. Cell growth was determined by Population Doubling (PD).
  • NII nuclear irregularity index
  • the images obtained were demonstrated green fluorescence and the nuclear area of the cells was determined using the Image Pro Plus 6.0 software.
  • the treatments of the treated groups 50mM Dehidroresveratrol and Resveratrol; 70mM ALBB and Brazilina; 4mM Geisse ⁇ na and 20mM Chicendico Acid) were carried out during 72 hours in the senescent cultures when they were collected and analyzed by flow cytometry.
  • Graphs of cell count (y-axis) versus cell size (FSC) (x-axis) were also made for the determination of senescent cells that remained after treatment with the compounds ( Figure 4).
  • the graphs specify cell size (x-axis) versus cell count (y-axis).
  • the evaluated parameters are control (untreated and proliferative-control cells), senescent control (tmz: untreated senescent cells), compound control (ct_composite: proliferative cells treated with the respective doses of each compound) and treated senescent cells (tmz_composite- senescent cells treated with the same dose of each compound).
  • Tests with induction of senescence by Lonizing Radiation were conducted simulating the same conditions of the Cell Viability tests.
  • the senescence experimental model was prepared with 1.5 x 10 6 RPE-1 cells plated and pelleted for 24 h. Then they received a single dose of 20Gy of exposure to the effect of ionizing radiation, causing a stop in the G2 phase of the cell cycle, stopping the division and entering into cellular senescence (Muthna et al., 1994). After irradiation, there was a 10-30% decrease in survival and the remaining cells, which were kept in DMEM HIGH medium until the signs of cell senescence were observed. After the increase in cell size and non-uniform morphology, tests with Brasilina were performed.
  • the p21 protein is directly related to the maintenance of cell proliferation and induction of senescence in the face of DNA damage, which may explain the decreased expression of this protein in the result of Figure 7A (Yosef et al., 2017).
  • AKT silencing may be a factor that induces cell apoptosis.
  • these findings indicate a strong relationship with the findings found in cell cultures, which when treated, qualitatively demonstrated less cell confluence / concentration. Complementary assays with more sensitive techniques are needed to confirm these results, to evaluate cultures limited to low cell confluence, as well as to determine which signaling pathways are yet to be evaluated in vivo.

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Abstract

A presente invenção descreve compostos, o uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica e uma composição farmacêutica compreendendo os compostos conforme fórmula A, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, para prevenção e/ou terapia senolítica. Especificamente, a presente invenção compreende os compostos de fórmula A, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, para prevenção e/ou terapia senolítica, por meio de eliminação seletiva de células senescentes.

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção
COMPOSTOS, USO DE COMPOSTOS NA PREPARAÇÃO DE UMA
COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA
COMPREENDENDO 7, 1 1 B-DIHYDRO-6 H-I NDENO[2 , 1 -C]CHROMENE- 3 ,6A, 9, 1 0-TETROL, SEUS DERIVADOS OU ANÁLOGOS, N EUTROS OU
IONIZADOS, PARA PREVENÇÃO E/OU TERAPIA SENOLÍTICA
Campo da Invenção
[0001] A presente invenção descreve compostos químicos, uso de compostos químicos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica e uma composição farmacêutica. Mais especificamente, a presente invenção compreende os compostos de Fórmula A, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, e mais preferencialmente o composto de Fórmula B, com atuação por meio de eliminação seletiva de células senescentes. A presente invenção situa-se nos campos da química, farmácia e medicina.
Antecedentes da Invenção
[0002] A busca na literatura apontou alguns documentos relevantes que serão descritos a seguir.
[0003] O documento intitulado“Lifespan-extending and stress resistance properties of brazilin from Caesalpinia sappan in Caenorhabditis elegans” (Kim et al, 2017) apresenta a exposição de nematoides à brasilina em condições normais e em condições de estresse, resultando em melhoria de qualidade de saúde e qualidade de vida sob a ótica dos parâmetros avaliados (efeitos de estresses térmicos, oxidativos, osmóticos, elevação de atividade de superóxido dismutases (SOD) e diminuição de acúmulo de espécies reativas de oxigénio). Contudo, a presente invenção difere tanto porque a brasilina utilizada na invenção é de origem sintética, quanto porque Kim et al, 2017 não descrevem o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs e para o tratamento de distúrbios relacionados ao envelhecimento. Kim et al, 2017 também não avaliaram os marcadores relacionados ao princípio da senescência, como níveis de Beta-galactosidase, F0X03A, p21 , p16, p53 ou apoptose. Além disto, do ponto de vista de qualidade de vida, existem várias moléculas naturais que revelam atividade similar (Cãtanã et al, 2018), não sendo possível supor, somente por esta razão, que essas moléculas possuam atividade senolítica como na presente invenção.
[0004] O documento intitulado “Brazilin Induces Apoptosis and G2/M Arrest via Inactivation of Histone Deacetylase in Multiple Myeloma U266 Cells” (Kim et al, 2012) apresenta o uso de brasilina no tratamento de câncer, mais especificamente de mieloma múltiplo e antecipa o conceito da ação reguladora de apoptose do composto em células U266 (mieloma múltiplo) e a ativação de p21 no ciclo celular. Contudo, a presente invenção difere pelo fato de que reivindica o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs e não atividade anti-câncer aplicada a mieloma múltiplo, conforme vários mecanismos estudados previamente em produtos naturais para esta atividade (Kim e Kim, 2018), bem como descreve aplicação para tratamento de distúrbios relacionados à senescência celular.
[0005] O documento intitulado “Brazilin induces FOX03A-dependent autophagic cell death by disturbing calcium homeostasis in osteosarcoma cells” (Kang et al 2018) apresenta o uso de brasilina no tratamento de câncer, mais especificamente de osteossarcoma e antecipa o conceito da ação de autofagia mediada por FOX03A em células MG-63. Contudo, a presente invenção difere pelo fato de que o documento não descreve o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs e seu efeito no tratamento de distúrbios relacionados ao envelhecimento, e sim para atividade anti-câncer, conforme vários mecanismos estudados previamente em produtos naturais para esta atividade, como por exemplo, mostrado por Kim e Kim, 2018. Kang et al tampouco descrevem o uso da brasilina para o tratamento de distúrbios relacionados à senescência celular.
[0006] O documento intitulado“Brazilin Limits Inflammatory Responses through Induction of Prosurvival Autophagy in Rheumatoid Fibroblast-Like Synoviocytes” (Lee et al, 2015) descreve a ação anti-inflamatória e pró- apoptótica da brasilina, propondo a sua utilização para tratamento de artrite reumatoide. Reforça também a ativação de mecanismos de autofagia e restauração de células contra citotoxicidade apenas em células nesta condição, não acionando este mecanismo em células controle (saudáveis). Como diferencial frente a este estudo, a presente invenção descreve o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs, revela somente a atividade anti-inflamatória da brasilina, como também demonstrado por Macha et al, 2015. Lee et al, 2015 também não descreve o tratamento de distúrbios relacionados à senescência celular.
[0007] O documento intitulado “Inhibitory Effects of Brazilin on the Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation and Migration Induced by PDGF-BB” (Guo et al, 2013) descreve a ação anti-proliferativa da brasilina, propondo a sua utilização para tratamento de doenças vasculares. Contudo, Guo et al não descrevem o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs, revelando apenas um mecanismo relacionado com aterosclerose (VSMC) sendo que, a literatura também apresenta vários exemplares de extratos de plantas com este efeito, como por exemplo a erva Ziziphus numulária (Fardoun et al, 2017).
[0008] O documento KR 20130057514 descreve o uso da brasilina como aditivo alimentar, promovendo inibição de apoptose, prevenindo e tratando condições associadas à radiação UV, como danos e envelhecimento da pele. Contudo, o documento não descreve o uso da brasilina para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs, bem como sua atividade senolítica; revela somente a atividade de foto-proteção para evitar o envelhecimento da pele, assim como outras moléculas naturais também promovem (Dunaway et al, 2018). [0009] O documento intitulado “Brazilin Inhibits Growth and Induces Apoptosis in Human Glioblastoma Cells” (Lee et al, 2013) descreve a ação de sensibilização de células do câncer, mais especificamente a linhagem de Glioblastoma multiforme U87, levando-as à apoptose. Este documento descreve a experimentação da brasilina na mesma linhagem celular utilizada na presente invenção, contudo, neste estudo a brasilina não é usada para eliminação seletiva de células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs como proposto e sim para sua atividade anti-câncer, conforme vários mecanismos estudados previamente em produtos naturais para esta atividade (Kim e Kim, 2018).
[0010] O documento WO 2018094495 descreve o uso das espécies Casearia sylvestris e/ou Hymenaea courbaril em composições anti-senescência. Menciona também mecanismos de modulação dos marcadores Beta- galactosidase, p21 e p16. Contudo, o documento não descreve o uso de dito composto, tampouco menciona a eliminação seletiva das células senescentes por inibição e/ou ativação da via SCAPs. Revela que extrato das plantas de Casearia sylvestris tem atividade anti-senescência sem revelar quais são as estruturas químicas especificamente para as referidas composições cosméticas.
[0011] O documento EP 3330274 descreve o uso dos compostos de fórmula Ί”, “la” e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Assim como na estrutura química da Brasilina, os compostos apresentam anéis benzênicos que fazem parte de um“esqueleto” principal, podendo eventualmente assumir outras identidades, através de estruturas químicas possibilitadas pela fórmula Markush e pelos diferentes radicais previstos e reivindicados. Adicionalmente, o documento apresenta um método de tratamento e/ou prevenção de doenças relacionadas à senescência e condições de saúde e também descreve a relação da senescência com apoptose, atividade de Beta-galactosidase e níveis de marcadores de senescência. Contudo, a presente invenção difere do documento pelo fato de que se observa claramente que a estrutura“I” tem três anéis benzênicos ligados por uma dupla ligação sem orientação espacial definida, o que não acontece com a brasilina e, portanto, o documento não descreve o esqueleto do composto Brasilina especificamente, e tampouco o relaciona para tratamento destas condições.
[0012] Dessa forma, conforme antecedentes apontados, a pesquisa no desenvolvimento de fármacos senolíticos é uma tendência na medicina atual (de Keizer, 2017), e, portanto, o desenvolvimento e a verificação de novas terapias senolíticas tornaram-se um esforço importante para aliviar os sintomas de fragilidade senil e ampliar a expectativa de vida da população.
[0013] Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção no estado da técnica, em especial, seu uso para o tratamento de distúrbios relacionados ao envelhecimento por meio de eliminação seletiva de células senescentes.
Sumário da Invenção
[0014] O envelhecimento é o principal fator de risco para as doenças crónicas, as quais são responsáveis pela maior parte da morbidade, da mortalidade e dos custos com a saúde. Um mecanismo fundamental de envelhecimento que contribui para doenças crónicas e disfunções relacionadas à idade é a senescência celular (Goldman et al. , 2013), cujo mecanismo leva à parada irreversível da divisão celular por uma variedade de estresses incluindo dano ao DNA, encurtamento dos telômeros e estresse oxidativo (Baker et al., 201 1 ; Tchkonia et al., 2013).
[0015] Dois dos aspectos característicos das células senescentes são o aumento celular, indicando uma clara mudança morfológica, a qual é visível quando comparada com células não senescentes e a parada irreversível da replicação celular. Como a morfogênese senescente está diretamente ligada à perda de capacidade celular de divisão, a constatação de alteração destas duas características, relacionadas ao crescimento, estão envolvidas no controle da mudança morfológica (Chen e Ames, 1994; von Zglinicki et al., 1995; Ogryzko et ai., 1996; Serrano et al., 1997; Lee et al.,1999; Dimri et al., 2000). [0016] Portanto, a presente invenção propõe compostos senolíticos para prevenção e/ou terapia anti-senescência tendo como resultado a eliminação parcial ou completa das células com este fenótipo. É importante ressaltar que a tecnologia aqui proposta difere do estado da técnica no que diz respeito a prevenção e tratamento anti-aginci , que não estabelecem uma relação com os mecanismos que revertem o estado senescente em si, mas que propõem a manutenção de um estado fisiológico preservado, evitando ou retardando o processo do envelhecimento (Blagosklonnv, 2008; Malavolta et al., 2016, Zhao et al., 2017). Desta forma, a presente invenção revoluciona a forma de prevenção e tratamento dos processos relacionados ao envelhecimento, propondo inclusive como resultado, o aumento de expectativa de vida em escala de tempo.
[0017] Os mecanismos de ação se dão preliminarmente por meio de inibição e/ou ativação da via SCAPs, envolvendo principalmente família de proteínas, B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, RI3Kd, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, FOX03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, HIF-1a, e/ou HSP-90, contudo, não limitadas a estas.
[0018] Por exemplo, sabe-se que quando afetada a via de FOX04, que possui interação com p53, a mesma está livre para incitar apoptose intrínseca celular; Já as vias de p53 e p21 , responsáveis pela regulação do ciclo celular, inibem CDK2, CDK4 e CDK6, mantendo a proteína RB fosforilada, e consequentemente, suprimindo a expressão de genes da fase S. A expressão de AKT promove o acúmulo de p53 e p21 , aumentando o tamanho das células e induzindo a atividade da b-galactosidase associada à senescência. Com relação à GAPDFI, quando associada a um indicador de estresse intra e extracelular, é capaz de ativar vias de recuperação celular ou de sinalização para morte celular. Por fim, gH2AC se trata de uma proteína relacionada a danos e/ou reparo em nível de DNA e consequentemente, pela expressão de proteínas danificadas.
[0019] A fim de evidenciar os processos relacionados ao envelhecimento celular e as sinalizações envolvidas, a presente invenção demonstrou a relação de tais vias de sinalização em modelos experimentais com a senescência celular, em ensaios in vitro não tratados e tratados com os compostos aqui descritos.
[0020] São portanto, objetos da presente invenção em um primeiro aspecto, os compostos de Fórmula A,
Figure imgf000009_0001
Fórmula A seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, em que R1 e R2 são independentemente escolhidos e, sem estereoquímica definida, dentre:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e
R2 = CHs, CH2CH3, COCH3 ou H.
[0022] Em uma realização preferencial, o composto da presente invenção é o de fórmula A, sendo R1 =OH, conforme Fórmula B:
Figure imgf000009_0002
Fórmula B
[0023] Em uma realização, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isoladamente ou em combinação, sendo preferencialmente isolados.
[0024] Em uma realização, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para prevenção e/ou terapia senolítica, sendo a realização preferencial para terapia senolítica.
[0025] Em uma realização, os compostos da presente invenção são para prevenção e/ou terapia senolítica, preferencialmente por meio de eliminação seletiva de células senescentes, pela inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, FOX03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, HIF-1a, e/ou HSP-90.
[0026] Em uma realização preferencial, os compostos da presente invenção são para prevenção e/ou terapia do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Flipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, glaucoma, olhos secos, baixa visão, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
[0027] Em um segundo aspecto, a presente invenção proporciona o uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica conforme Fórmula A, sendo:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e R2 = CHs, CH2CH3, COCH3 ou H.
[0028] Em uma realização preferencial, o uso do composto na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica da presente invenção é o de fórmula A, sendo R1 =OH, conforme Fórmula B.
[0029] Em uma realização preferencial, os compostos da presente invenção são utilizados na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, isoladamente ou em combinação, preferencialmente isolados.
[0030] Em uma realização, os compostos da presente invenção são usados na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, atuando por meio de eliminação seletiva de células senescentes.
[0031] Em uma realização preferencial do uso dos compostos na preparação da composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica da presente invenção, a eliminação seletiva de células senescentes é pela inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B- galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, FOX03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, H IF-1 a, e/ou HSP-90.
[0032] Em uma realização preferencial, o uso dos compostos da presente invenção é na preparação da composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Hipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, glaucoma, olhos secos, baixa visão, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
[0033] Em um terceiro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo compostos de Fórmula A, sendo:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e
R2 = CHs, CH2CH3, COCHs ou H;
e veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[0034] Em uma realização preferencial, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo o composto de fórmula A, sendo R1 =OH, conforme Fórmula B e veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[0035] Em uma realização preferencial da composição farmacêutica da presente invenção, o composto de fórmula B está numa faixa de concentração de 1 mM a 100mM.
[0036] Em uma realização preferencial, a composição farmacêutica da presente invenção elimina seletivamente as células senescentes pela inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B- galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, FOX03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, H IF-1 a, e/ou HSP-90.
[0037] Em uma realização preferencial, a composição farmacêutica da presente invenção é para prevenção e/ou tratamento do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Hipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, glaucoma, olhos secos, baixa visão, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
[0038] Estes e outros objetos da invenção serão detalhados de modo suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.
Breve Descrição das Figuras
[0039] Figura 1 : Ensaio de atividade de b- galactosidase em linhagem de células U-87 tratadas com TMZ em relação ao controle não tratado
[0040] Figura 2: Ensaio morfométrico nuclear (NMA) de Células
Senescentes de A172-H2B-mCherry e U-87 em relação ao controle não tratado.
[0041] Figura 3: Population Doubling para ALBB, Brasilina e Resveratrol:
A: ensaio N1 ; B: ensaio N2.
[0042] Figura 4: N1 e N2- FSC para ALBB, Brasilina e Resveratrol.
[0043] Figura 5: Imagens do software Image Pro Plus 6 das células tratadas com as seis concentrações dos seis compostos durante 72 horas. Controle: células proliferativas; TMZ ct: células senescentes não tratadas com composto; ALBB, Ácido Chicórico, Brasilina, Dehidroresveratrol, Genisteína e Resveratrol: células proliferativas tratadas com uma dose de composto; Composto+TMZ: células senescentes tratadas com a mesma dose de cada respectivo composto.
[0044] Figura 6: Controle de Senescência Celular (A) em comparação ao tratamento com 200uM de Brasilina em cultura senescente (B) em linhagem RPE-1 .
[0045] Figura 7: Western Blotting utilizando o lisado de células senescentes U-87 após tratamento com 70 e 200 mM de Brasilina e anticorpos específicos para as proteínas pesquisadas: A) p21 ; B) p53; C) FOX04 e D) AKT.
Descrição Detalhada da Invenção
[0046] A presente invenção tem por objeto propor compostos, uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica e composição farmacêutica compreendendo compostos de Fórmula A, preferencialmente de Fórmula B (7, 1 1 b-dihydro-6FI-indeno[2,1 - c]chromene-3,6a,9,10-tetrol), seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados.
[0047] No desenvolvimento da presente invenção, levou-se em consideração alguns conhecimentos do estado da arte em relação a outros compostos senolíticos e aos conceitos já estabelecidos de que as células senescentes dependem de vias pró-sobrevivência para se defenderem dos efeitos pró-apoptóticos de citocinas e outras moléculas no fenótipo secretor associado à senescência (SASP). Esses conhecimentos já foram confirmados por abordagens bioinformáticas com base nos perfis de expressão de níveis de RNA e proteínas. Cinco vias antiapoptóticas, dos Caminhos Antiapoptóticos de Células Senescentes (SCAPs) já foram identificadas por Kirkland et al. , 2017. Com base nisto, a fim de testar a atividade senolítica dos presentes compostos, as diferentes famílias de proteínas envolvidas na via dos SCAPs foram selecionadas para delinear e conduzir diferentes ensaios para confirmação de rotas e caminhos específicos relacionados à senescência e à eliminação seletiva de células senescentes frente aos compostos avaliados. Os mecanismos de ação se dão preliminarmente por meio de inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo principalmente família de proteínas de B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, RI3Kd, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, F0X03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, HIF-1a, e/ou HSP- 90, contudo, não limitadas a estas.
[0048] Assim, inicialmente seis compostos tiveram sua atividade senolítica testada por meio de diferentes ensaios de triagens e validações sobre seus efeitos terapêuticos: ALBB - 4-[(E)-2-(3-Methoxyphenyl)ethenyl]phenol (PubChem CID: 5930975), ácido Chicórico (2R,3R)-2,3-bis[[(E)-3-(3,4 dihydroxyphenyl)prop-2enoyl]oxy]butanedioic acid (PubChem CID: 5281764), resveratrol - 3, 4', 5 -Trihydroxystilbene (PubChem CID: 445154), dehidroresveratrol - 5-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]benzene-1 ,3-diol (PubChem CID: 185914), geisteína - 4',5,7-Trihydroxyisoflavone (PubChem CID: 5280961 ) e brasilina - 7,1 1 b-dihydro-6Flindeno[2, 1 -c]chromene-3,6a,9,10-tetrol (PubChem CID: 222515). Para todas as análises realizadas, os compostos foram adquiridos da Sigma-Aldrich e dissolvidos em DMSO. Todos foram testados preliminarmente para definição de concentrações de uso nos ensaios. Após definição de concentrações letais e de concentração inibitória (IC50), duas concentrações abaixo da IC50 foram utilizadas para cada composto. Para a Brasilina, tendo em vista sua baixa toxicidade, (dados não demonstrados), optou-se sua utilização numa faixa de concentração ampla entre 1 uM e 100mM.
Compostos Selecionados em Modelo Experimental In Vitro: Temozolomida
[0049] Testes de viabilidade celular e citotoxicidade foram realizados por meio dos ensaios MTT e Population Doubling (DP) por Citometria de fluxo para determinação dos tratamentos em células não senescentes. A linhagem celular utilizada foi U-87 (glioma humano), obtida da ATCC. Todos os materiais para cultura celular foram adquiridos da Gibco (Biogen). As células foram cultivadas em meio de cultura DMEM low glicose, suplementado com 10% de SFB (soro bovino fetal; Gibco), 100 UI/mL de penicilina, 100 UI/mL de estreptomicina e 100 pg/mL de fungizona a 37°C e 5% de CO2 numa incubadora umidificada.
[0050] Para a o MTT, 1x103 células foram plaqueadas em duplicata em microplacas de 96 poços (TPP) e previamente incubadas por 72 horas. Nos grupos tratados, as células foram expostas a concentrações crescentes dos seis compostos em quatro diferentes concentrações para cada: Resveratrol, Dehidroresveratrol, ALBB e Brasilina (1 mM, 10mM, 25mM, 50mM), Genisteína (O.OdmM, O,dmM, 2.22mM e 4.44mM) e Ácido Chicórico (0.4mM, 4mM, 10mM, 20mM). Após, as células foram incubadas com solução de 5mg/ml_ de MTT por 3 horas, removido e a reação foi concluída com 50mI_ de Dimetilsulfóxido (DMSO). A leitura das absorbâncias resultantes foi realizada em leitor de placas (Perkin Elmer) e a viabilidade celular foi determinada pela diferença entre o valor médio de absorbância dos grupos tratados e do grupo controle em relação ao branco de reação, sendo o resultado do controle negativo considerado como 100% de células viáveis para a determinação da viabilidade celular dos grupos tratados. A viabilidade celular na linhagem U-87 não foi afetada para os grupos tratados por 72h. Para a confirmação, realizou-se análise de duplicação celular Population Doubling (DP) por Citometria de Fluxo (Silva et al. , 2016). 2x104 células por poço foram plaqueadas em triplicata em uma placa de 24 poços e tratadas com duas concentrações diferente de cada composto (Resveratrol e Dehidroresveratrol 10 e 50mM; ALBB e Brasilina 50 e 70mM; Genisteína 4 e 10mM; Ácido Chicórico 20 e 50mM). Após os tratamentos, procedeu-se à análise em citômetro de fluxo. Assim como no ensaio anterior, não foi observada alteração de viabilidade celular entre os grupos tratados e o grupo controle.
[0051] Posteriormente, o modelo experimental de senescência utilizado in vitro estabeleceu-se com o uso de 100mM do quimioterápico temozolomida (TMZ) (Sigma-Aldrich). Inicialmente, para confirmação do modelo experimental, foi utilizado o kit de b-galactosidase em citometria de fluxo. Foram utilizadas as linhagens celulares U-87 e A172-FI2B-mCherry e a indução de senescência foi comprovada em diferentes períodos de tempo de exposição (por 3h e por 7 dias) por alterações da atividade celular de b-galactosidase em citometria de fluxo (Figura 1 ).
[0052] Os ensaios conduzidos nas culturas senescentes e não- senescentes dos grupos tratados e do grupo controle foram: Ensaio morfométrico nuclear (NMA) com gráfico de contorno, Detecção da Atividade de SA-b Galactosidase e Análise de Population Doubling (PD) para verificação do efeito do tratamento anti-senescência dos compostos. 7x103 células foram plaqueadas em placas de 12 poços. Após 12 a 16h ( overnight ), as células foram tratadas com TMZ 100mM durante 3h seguido por 2 lavagens, troca de meio e mantidas por 7 dias em cultura para implementação do modelo de senescência. Registros foram realizados no dia 0 (zero) como controles e no dia 7 (sete). Para confirmação de senescência foram realizados os ensaios de NMA e de atividade da SA-b Galactosidase. Os tratamentos foram realizados com os seis compostos em diferentes concentrações (Resveratrol e Dehidroresveratrol 50mM; ALBB e Brasilina 70mM; Genisteína 4mM; Ácido Chicórico 20mM) por 72 horas. O crescimento celular foi determinado por Population Doubling (PD). O ensaio de NMA foi realizado após tratamento com TMZ por 3 horas e mantido por 7 dias quando então as células foram fotografadas em microscópio de fluorescência em aumento de 400x (Zeiss Axiovert 200 M). A análise das imagens e a quantificação dos núcleos foram feitas utilizando o software Image Pro Plus 6.0. e os dados apresentados como gráfico de área pelo índice de irregularidade nuclear (NII) (Filippi-Chiela et al., 2015). A figura 2 apresenta os gráficos onde N 11= índice de irregularidade nuclear e Y= área dos núcleos.
[0053] A detecção da atividade de SA^-gal foi reproduzida nas linhagens celulares em diferentes períodos de tempo após exposição aos compostos e com grupo não tratado (controle). A indução da senescência foi observada por alterações morfológicas detectáveis sob microscopia de luz e observando a atividade celular da b-galactosidase. Utilizando-se o kit Fluorescein ϋί-b-ϋ- Galactopyranoside (FDG), o ensaio de b-galactosidase foi realizado de acordo com Yang and Flu et al., (2004) e os dados foram coletados por citometria de fluxo. A análise de Population Doubling (PD) foi realizada após os tratamentos com uma concentração sub-letal para cada composto, por citometria de fluxo das células. 7x103 células por poço foram plaqueadas e foram fotografados no dia 0 e no dia 7 como controles. As imagens obtidas foram demonstraram fluorescência verde e a área nuclear das células foi determinada usando o software Image Pro Plus 6.0. Os tratamentos dos grupos tratados (50mM Dehidroresveratrol e Resveratrol; 70mM ALBB e Brazilina; 4mM Genisteína e 20mM Ácido Chicórico) foram realizados durante 72 horas nas culturas senescentes quando foram coletadas e analisadas por citometria de fluxo.
[0054] Após confirmação de indução de senescência do modelo experimental, a determinação da atividade senolítica dos diferentes compostos foi avaliada por meio da contagem de células em diferentes ensaios (N1 e N2). As células foram plaqueadas em densidade de aproximadamente 7,5x103 células por poço para o experimento N1 e 8,5x103 células por poço para o N2. Os tratamentos com os compostos foram realizados por 72h, 7 dias após as 3h de exposição de TMZ (como de acordo com o protocolo). Células de glioblastoma humano U-87 foram tratadas (células proliferativas e senescentes) com uma concentração sub-letal selecionada previamente de acordo com os testes de viabilidade celular de cada droga. As concentrações utilizadas foram de 70mM de ALBB e Brasilina e 50mM de Resveratrol. Após os tratamentos, as células foram colhidas e analisadas através do Citômetro de Fluxo. Os resultados são observados na figura 3A (N1 ) e na figura 3B (N2). O gráfico mostra a relação entre proliferação das células tratadas com os compostos sozinhos (ct+com posto), TMZ+com postos (tmz+com posto) e o controle não tratado e não senescente (Ct) (controle considerado como valor 1 ). Todos os três compostos nos grupos de células proliferativas, ou seja, não senescentes (ct+composto), obtiveram números maiores de PD. Essa informação sugere que as células desses grupos continuam proliferando em relação ao controle (Figura 3).
[0055] No entanto, quando as células senescentes (tmz+com posto) foram expostas às mesmas concentrações dos mesmos compostos, notamos uma diminuição considerável na contagem celular em relação ao controle tratado apenas com os compostos (ct+com posto). Esse resultado indica que houve diminuição de número de células senescentes frente às concentrações sub-letais dos compostos. Além disso, podemos destacar sobre uma notória diminuição de contagem também em relação ao controle de células não tratadas e proliferativas (eixo x- 0 de parâmetro de contagem). Dentre os compostos utilizados, o mais eficaz quanto à eliminação do grupo de células senescentes (tmz+com posto), foi o composto Brasilina. Resveratrol e ALBB também apresentam distinta ação nas células senescentes de acordo com os gráficos N1 e N2 (figura 3A e 3B).
[0056] Foram feitos ainda gráficos de contagem celular (eixo y) versus tamanho celular (FSC) (eixo x) para a determinação de células senescentes que restaram após o tratamento com os compostos (Figura 4). Os gráficos especificam tamanho de célula (eixo x) versus contagem celular (eixo y). Os parâmetros avaliados são controle (células não tratadas e proliferativas-control), controle senescente (tmz: células senescentes não tratadas), controle dos compostos (ct_composto: células proliferativas tratadas com as respectivas doses de cada composto) e células senescentes tratadas (tmz_composto- células senescentes tratadas com a mesma dose de cada composto). Podemos notar que quanto mais alto e estreito é o pico (maior contagem e menor tamanho de célula), mais a célula possui morfologia não senescente e quanto mais largo é o pico (maior deslocamento para a direita - tamanho de célula), maior é o tamanho celular indicando morfologia característica de células senescentes. Podemos observar também que para o composto Brasilina (tmz_braz) uma notória diminuição da população de células senescentes (menor contagem e menor deslocamento para a direita), o que não foi observado para os compostos ALBB (tmz_albb) e Resveratrol (tmz_resv), conforme verificado pela contagem celular e FSC. Tendo um maior valor para o parâmetro de FSC, temos mais células de maior tamanho, ou seja, senescentes, mostrando alto potencial senolítico. Quando as células senescentes (tmz+com posto) foram expostas aos compostos anteriormente utilizadas para células não senescentes, observa-se menor capacidade de duplicação de população, ou seja, menor proliferação celular. Esse resultado demonstra diminuição do número de células senescentes frente às concentrações sub-letais dos compostos, demonstrando potencial senolítico do composto Brasilina. Devido ao conjunto de dados obtidos, o composto com melhor ação (baixa citotoxicidade em relação ao controle e índice de eliminação em população de células senescentes) foi Brasilina.
[0057] Além das contagens por citometria de fluxo e FSC, foram feitas imagens em microscópio de luz invertido para ambos os experimentos N1 e N2. Podemos destacar sobre as imagens capturadas que quando temos células senescentes (tmz: induzidas com TMZ) não tratadas em relação às células proliferativas não tratadas (control: células não senescentes e que não receberam os compostos), as células senescentes apresentam morfologia característica dessas, distintamente maior em relação às células proliferativas (Figura 5).
Composto Brasilina em Modelo Experimental In Vitro: Radiação lonizante
[0058] Testes de Viabilidade Celular e Citotoxicidade por XTT foram realizados previamente em células RPE-1 (ATCC® CRL-4000™) para determinação das concentrações de teste. Não houve redução significativa na porcentagem de células viáveis em concentrações de 100mM, 200 mM e 300mM durante o período de até 120 h de exposição em relação ao controle não tratado.
[0059] Testes com indução de senescência por Radiação lonizante foram conduzidos simulando as mesmas condições dos testes de Viabilidade celular. O modelo experimental de senescência foi preparado com 1 ,5x106 de células RPE-1 plaqueadas e sedimentadas por 24 h. A seguir receberam uma única dose de 20Gy de exposição de efeito de radiação ionizante, ocasionando uma parada na fase G2 do ciclo celular, parando a divisão e entrando em senescência celular (Muthna et al. , 1994). Após a irradiação, houve diminuição de sobrevivência em 10-30% e as células remanescentes, que foram mantidas em meio DMEM HIGH até que fossem observados os sinais de senescência celular. Após a constatação de aumento de tamanho celular e morfologia não-uniforme, procedeu-se aos testes com a Brasilina.
[0060] A verificação da atividade senolítica foi conduzida por avaliação qualitativa de imagens de cultivo celular considerando a concentração de 200mM de Brasilina. Dois ensaios independentes foram realizados considerando o mesmo tratamento em intervalos de tempo diferentes N1 e N2. Para ambos, as células RPE-1 foram plaqueadas em densidade de 1 ,5x106 células por frasco. O primeiro ensaio N1 com Brasilina durante 72h, foi realizado 7 dias após a exposição por irradiação com 20Gy. A confluência e aspectos morfológicos permaneceram sendo acompanhados por 120h após a irradiação. Já no ensaio N2, células RPE-1 foram plaqueadas na mesma concentração anterior, e submetidas ao mesmo tratamento com 200mM de Brasilina durante 120h, realizado 7 dias após a exposição por irradiação com 20Gy. Tanto em N1 quanto em N2 observou-se presença de células em menor quantidade e de tamanho celular reduzido em relação ao controle senescente sem tratamento, conforme Figura 6. Esse resultado indica que houve diminuição de número de células senescentes frente às concentrações sub-letais da Brasilina, demonstrando ausência de citotoxicidade e atividade senolítica na concentração de 200 mM em cultura celular.
Western Blottinq - Atividade Modulatória da Molécula de Brasilina em Vias de Sinalização de Senescência Celular
[0061] Considerando a metodologia para indução de senescência por Radiação lonizante, culturas de células senescentes não tratadas e tratadas com Brasilina (70mM e 200mM durante 120h) foram avaliadas em termos de expressão proteica para vias de sinalização envolvidas no processo de senescência celular tais como: p53, p16, p21 , FOX04, AKT, PARP clivada, ÕH2AX, GAPDH.
[0062] Para isso, as culturas celulares tratadas e não tratadas (controle senescente) foram previamente lisadas. Nesta técnica semi-quantitativa, uma mistura de proteínas é separada com base no peso molecular de cada uma (e, portanto, por tipo), por meio de eletroforese em gel. Esta corrida é, então, transferida para uma membrana que revela uma banda para cada proteína, por meio de colorimetria. Este método, denominado Bradford, é adequado para análises qualitativas, sendo o seu objetivo determinar presença ou ausência de uma proteína específica a partir de amostras purificadas. Em algumas situações, fornece dados semiquantitativos para equiparar e/ou ajustar carregamento de amostras (Bradford, 1976). Posteriormente, o Western Blotting foi realizado conforme Cherif et al, 2019.
[0063] Avaliando-se os resultados obtidos, observou-se que na linhagem U-87, houve diminuição após tratamento com Brasilina na concentração de 200mM nas vias p21 , p53, FOX04 e AKT, demonstrando que esta concentração pode ser mais efetiva em termos de terapia senolítica do que a concentração de 70mM (Figura 7).
[0064] A diminuição da concentração proteica em 3 das 4 vias analisadas frente ao controle, indica menor conteúdo de proteína específica, sendo que cada uma dessas proteínas possui um papel específico ligado à sobrevivência celular, demonstrando que tanto o estado senescente, quanto o tratamento com Brasilina, parecem interferir diretamente em nível de ciclo celular. As proteínas FOXO e p53 são fatores de transcrição que são apontadas como principais responsáveis na regulação de vias do ciclo celular como a apoptose e compartilhando papéis chave na senescência celular. A diferença de conteúdo proteico entre os tratados e o controle demonstra que a droga pode estar modulando as vias em questão, o que pode levar a célula à interrupção dessa via mecanística. Já a proteína p21 está diretamente relacionada à manutenção da proliferação celular e indução de senescência frente a danos de DNA, o que pode explicar a diminuição de expressão dessa proteína no resultado da Figura 7A (Yosef et al., 2017). O silenciamento de AKT pode ser um fator indutor de apoptose de células. Encontramos uma diminuição nos níveis de AKT nos grupos tratados. Esse resultado pode apontar que a droga pode modular morte celular através de inibição de AKT (Liu et al. , 2013). Adicionalmente, esses achados indicam uma forte relação com os achados encontrados nas culturas celulares, que quando tratadas, qualitativamente demonstravam menor confluência/concentração celular. Ensaios complementares com técnicas mais sensíveis são necessários para confirmação destes resultados, para avaliação em culturas limitadas à baixa confluência celular, bem como para determinação de quais vias de sinalização ainda devem ser avaliadas in vivo.

Claims

Reivindicações COMPOSTOS, USO DE COMPOSTOS NA PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICACOMPREENDENDO 7, 1 1 B-DIHYDRO-6 H-I NDENO[2 , 1 -C]CHROMENE- 3 ,6A, 9, 1 0-TETROL, SEUS DERIVADOS OU ANÁLOGOS, N EUTROS OUIONIZADOS, PARA PREVENÇÃO E/OU TERAPIA SENOLÍTICA
1 . Compostos caracterizados por ser de fórmula A,
Figure imgf000024_0001
Fórmula A
compreendendo seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, em que R1 e R2 são independentemente escolhidos e, sem estereoquímica definida, dentre:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e
R2 = CHs, CH2CH3, COCH3 ou H.
2. Compostos, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizados por R1 =OH, sendo conforme fórmula B:
Figure imgf000025_0001
Fórmula B
3. Compostos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizados por serem utilizados isoladamente ou em combinação.
4. Compostos, de acordo com a reivindicação 3, caracterizados por serem utilizados isoladamente.
5. Compostos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizados por serem usados para prevenção e/ou terapia senolítica.
6. Compostos, de acordo com a reivindicação 5, caracterizados por serem usados para terapia senolítica.
7. Compostos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 e 6, caracterizados pela prevenção e/ou terapia senolítica ser por meio de eliminação seletiva de células senescentes.
8. Compostos, de acordo com a reivindicação 7, caracterizados pela eliminação seletiva de células senescentes ser por inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, F0X03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, HIF-1a, e/ou HSP-90.
9. Compostos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizados por ser para prevenção e/ou terapia do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Hipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, glaucoma, olhos secos, baixa visão, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
10. Uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, caracterizado por ser conforme fórmula A, compreendendo seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, em que R1 e R2 são independentemente escolhidos e, sem estereoquímica definida, dentre:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e
R2 = CHs, CH2CH3, COCH3 ou H.
1 1 . Uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por R1 =OH, conforme fórmula B.
12. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 e 1 1 , caracterizado por serem utilizados isoladamente ou em combinação.
13. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por serem utilizados isoladamente.
14. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 e 1 1 , caracterizado por serem para prevenção e/ou terapia senolítica.
15. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por serem para terapia senolítica.
16. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pela prevenção e/ou terapia senolítica ser por meio de eliminação seletiva de células senescentes.
17. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pela eliminação seletiva de células senescentes ser por inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B- galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, F0X03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, HIF-1a, e/ou HSP-90.
18. Uso dos compostos na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou terapia senolítica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 e 1 1 , caracterizado por ser para prevenção e/ou terapia do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Hipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, glaucoma, olhos secos, baixa visão, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
19. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender compostos de fórmula A, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, em que R1 e R2 são independentemente escolhidos e, sem estereoquímica definida, dentre:
R1 = O, 0-R2, S-R2, N-(R2)2, Cl, Br, F ou H; e
R2 = CHs, CH2CH3, COCH3 ou H;
e veículos farmaceuticamente aceitáveis.
20. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada por R1 =OH, conforme fórmula B.
21 . Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo composto de fórmula B estar numa faixa de concentração de 1 mM a 100mM.
22. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 e 20, caracterizada por ser para prevenção e/ou terapia senolítica, pela eliminação seletiva de células senescentes ser pela inibição e/ou ativação da via SCAPs, compreendendo família de proteínas B-galactosidase, BCL-2, BCL-XL, PI3KÕ, AKT, ROS protetivas e/ou metabólicas, MDM2, p53, p21 , p16, FOX03, serpine, Ephrins, seus receptores, tirosina quinases, H IF-1 a, e/ou HSP-90.
23. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 e 20, caracterizada por ser para prevenção e/ou terapia do grupo de desordens fisiológicas compreendendo: SASP, fibrose pulmonar idiopática, doença arterial coronariana, infarto, alterações nos batimentos cardíacos, arritmias, parada cardíaca, doenças das válvulas cardíacas, cardiomiopatias, pericardite, disfunções da aorta (síndrome de Marfan), doenças vasculares, angina, aneurisma da aorta abdominal, infarto agudo do miocárdio, doença vascular periférica, endocardite, insuficiência cardíaca, miocardite, tumores no coração, hiporeatividade vascular e calcificação, aterosclerose, neurodegeneração, redução de inflamação crónica, osteoartrite, degeneração macular associada à idade (DMRI), Ambliopia, Astigmatismo, Blefarite, catarata, Ceratocone, Conjuntivite, Daltonismo, Descolamento de retina, Degeneração macular relacionada à idade (DMRI), Estrabismo, Glaucoma, Hipermetropia, Miopia, Presbiopia, Pterígio, Retinopatia, Síndrome de disfunção lacrimal, Terçol, Uveíte, doença diabética dos olhos, doença de obstrução pulmonar crónica, diabetes mellitus, pâncreas diabético, degeneração do disco vertebral, dano induzido por radiação, cegueira, catarata, insuficiência renal, esteatose hepática, fragilidade, perda de resistência física e capacidade de recuperação de estresses.
PCT/BR2019/050447 2018-10-19 2019-10-17 Compostos, uso de compostos na preparação de uma composição farmacêutica e composição farmacêutica compreendendo 7,11b-dihydro-6h-indeno[2,1-c]chromene-3,6a,9,10-tetrol, seus derivados ou análogos, neutros ou ionizados, para prevenção e/ou terapia senolítica WO2020077428A1 (pt)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112608296A (zh) * 2021-01-12 2021-04-06 山西省肿瘤研究所 巴西苏木素类天然产物Brazilane的合成方法
CN116283880A (zh) * 2023-02-10 2023-06-23 五邑大学 一种茚并[2,1,c]色烯化合物的合成方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR930000028B1 (ko) * 1990-04-26 1993-01-06 문창규 브라질린을 유효성분으로 하는 면역조절제 조성물
WO2007066928A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-14 Korea Institute Of Science And Technology Use of the extract of caesalpinia sappan l. and compounds therefrom
KR20130024395A (ko) * 2011-08-31 2013-03-08 주식회사 진생사이언스 브라질린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 피부 노화의 예방 및 개선용 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물
CN104173328A (zh) * 2013-05-28 2014-12-03 中国医学科学院药物研究所 巴西木素在制备药物中的用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR930000028B1 (ko) * 1990-04-26 1993-01-06 문창규 브라질린을 유효성분으로 하는 면역조절제 조성물
WO2007066928A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-14 Korea Institute Of Science And Technology Use of the extract of caesalpinia sappan l. and compounds therefrom
KR20130024395A (ko) * 2011-08-31 2013-03-08 주식회사 진생사이언스 브라질린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 피부 노화의 예방 및 개선용 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물
CN104173328A (zh) * 2013-05-28 2014-12-03 中国医学科学院药物研究所 巴西木素在制备药物中的用途

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHOI, B.M. ET AL.: "Upregulation of heme oxygenase-1 by brazil in via the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt and ERK pathways and its protective effect against oxidative injury", EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, vol. 580, 2008, pages 12 - 18, XP022413549, DOI: 10.1016/j.ejphar.2007.10.044 *
DU, W.J. ET AL.: "Brazil in inhibits amyloid beta-protein fibrillogenesis, remodels amyloid fibrils and reduces amyloid cytotoxicity", SCI REP., vol. 5, no. 7992, 23 January 2015 (2015-01-23), pages 1 - 10, XP055703871 *
GUO, J. ET AL.: "Inhibitory Effects of Brazilin on the Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation and Migration Induced by PDGF- BB", THE AMERICAN JOURNAL OF CHINESE MEDICINE, vol. 41, no. 6, 2013, pages 1283 - 1296 *
HWANG, H.S. ET AL.: "Brazil in and Caesalpinia sappan L. extract protect epidermal keratinocytes from oxidative stress by inducing the expression of GPX7", CHINESE JOURNAL OF NATURAL MEDICINES, vol. 16, no. 3, March 2018 (2018-03-01), pages 0203 - 0209, XP055703867 *
JAYAKUMAR, T. ET AL.: "Brazil in Ameliorates High Glucose-Induced Vascular Inflammation via Inhibiting ROS and CAMs Production in Human Umbilical Vein Endothelial Cells", BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, vol. 2014, no. 403703, 2 March 2014 (2014-03-02), pages 1 - 10, XP055703866 *
KANG, Y. ET AL.: "Brazil in induces FOX03A-dependent autophagic cell death by disturbing calcium homeostasis in osteosarcoma cells", CANCER CHEMOTHERAPY AND PHARMACOLOGY, vol. 82, 2018, pages 479 - 491, XP036572991, DOI: 10.1007/s00280-018-3633-5 *
LEE, E.B. ET AL.: "Lifespan-extending and stress resistance properties of brazil in from Caesalpinia sappan in Caenorhabditis elegans", ARCH. PHARM. RES., vol. 40, no. 7, 30 June 2017 (2017-06-30), pages 825 - 835, XP036289063 *
LEE, Y.R. ET AL.: "Brazil in inhibits UVB-induced MMP-1/3 expressions and secretions by suppressing the NF-KB pathway in human dermal fibroblasts", EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, vol. 674, 2012, pages 80 - 86, XP028434531, DOI: 10.1016/j.ejphar.2011.10.016 *
SHIM, J.H.: "Anti-aging Effect of Brazil in in UVA-irradiated Dermal Fibroblasts", ASIAN JOURNAL BEAUTYOF COSMETOLOGY, vol. 14, no. 3, 30 September 2016 (2016-09-30), pages 249 - 257, XP055703868 *
UDDIN, G.M. ET AL.: "One-step isolation of sappanol and brazil in from Caesalpinia sappan and their effects on oxidative stress-induced retinal death", BMB REP., vol. 48, no. 5, May 2015 (2015-05-01), pages 289 - 294, XP055703865 *
WALZER, S.M. ET AL.: "Effects of brazil in on human chondrocytes and synoviocytes", ABSTRACTS / OSTEOARTHRITIS AND CARTILAGE, vol. 20, 2012, pages S54 - S296 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112608296A (zh) * 2021-01-12 2021-04-06 山西省肿瘤研究所 巴西苏木素类天然产物Brazilane的合成方法
CN112608296B (zh) * 2021-01-12 2023-04-28 山西省肿瘤研究所 巴西苏木素类天然产物Brazilane的合成方法
CN116283880A (zh) * 2023-02-10 2023-06-23 五邑大学 一种茚并[2,1,c]色烯化合物的合成方法

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