WO2020073835A1 - 白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用 - Google Patents

白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用 Download PDF

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Definitions

  • the invention relates to the technical field of antibodies, in particular to a humanized monoclonal antibody of interleukin-6 (IL-6), its coding gene and application.
  • IL-6 interleukin-6
  • Interleukin-6 (also known as interferon- ⁇ 2, B cell differentiation factor, B cell stimulating factor-2, hepatocyte stimulating factor, hybridoma growth factor) is a type produced by many different cell types Multifunctional cytokines involved in many biological processes including regulation of acute inflammatory response, regulation of specific immune response (including B cell and T cell differentiation), bone metabolism, platelet production, epidermal cell proliferation, menstruation, nerve cell differentiation , Neuroprotection, aging, cancer and the inflammatory response that occurs in Alzheimer's disease. See A. Papassotiropoulos etal. (2001), Neurobiology of Aging, 22: 863-871.
  • the coding gene for human IL-6 contains five exons and four introns, and is located on the short arm of chromosome 7, 7p21. Translation and post-translational modification of IL-6 RNA produces 21 to 28 kDa proteins with 184 amino acids. See A. Papassotiropoulos etal. (2001), Neurobiology of Aging, 22: 863-871.
  • IL-6 can bind to the IL-6 receptor complex expressed on mitogen-activated B cells, T cells, peripheral monocytes, and certain tumor cells.
  • the receptor complex consists of at least one subunit of the signal transduction glycoprotein gp130 and the IL-6 receptor ("IL-6R") (also known as gp80).
  • IL-6R can also exist in a soluble form ("sIL-6R" ").
  • IL-6 binds IL-6R and then dimerizes the signal transduction receptor gp130. See Jones, SA, J. Immunology, 175: 3463- 3468 (2005).
  • IL-6 activates a variety of intracellular kinase molecules and transcription factors by acting with its receptor complex and ultimately activates the expression of related genes.
  • IL-6 is a multi-effect proinflammatory cytokine that can regulate the acute phase response and the transition from innate to adaptive immune response.
  • IL-6 promotes liver synthesis of reactive proteins involved in the acute phase, leading to symptoms such as fever, chills, and fatigue. It stimulates B cell differentiation and antibody secretion, and prevents activated B cell apoptosis.
  • IL-6 activates and induces T cell proliferation, and in the presence of IL-2, induces the differentiation of mature and immature CD8 T cells into cytotoxic T cells.
  • IL-6 is also involved in the differentiation of Th17 cells and the production of IL-17, and inhibits the differentiation of regulatory T cells (Treg).
  • IL-6 also activates osteoclasts, synovial cells, neutrophils and other hematopoietic cells. See Park, et al. (2007), Bulletin of the NYU Hospital for Joint Diseases 65 (suppl 1): S4-10; Guerne, et. Al. (1989), J Clin Invest., 83 (2): 585-92 ; Houssiau, et al. (1988), Arthritis Rheum., 31 (6): 784-8; Nishimotor, et al. (2006), Nat Clin Pract Rheumatol., 2 (11): 619-26; Kishimoto (1989 ), Blood, 74 (1): 1-10; Van Snick (1990), Annu Rev Immunol., 8: 253-78.
  • IL-6 The function of IL-6 is not limited to immune response, it plays a role in hematopoiesis, platelet production, osteoclast formation, and induction of acute liver reaction, resulting in the rise of C-reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA) high. It is also a growth factor for epidermal keratinocytes, mesangial cells, myeloma and plasmacytoma cells. See Grossman, et al. (1989), Prot Natl Acad Sci., 86 (16): 6367-6371; Horii, et al. (1989), J Immunol., 143 (12): 3949-3955; Kawano, et al.
  • IL-6 In the body, stimulated monocytes, fibroblasts, and endothelial cells are the main sources of IL-6. Other cells such as macrophages, T and B lymphocytes, granulocytes, keratinocytes, mast cells, osteoblasts, chondrocytes, glial cells, and smooth muscle cells also produce IL-6 after stimulation (Kishimoto, T ., Blood 74: 1-10 (1989) and Kurihara, N. etal., J. Immunology 144: 4226-4230 (1990)). Several tumor cells also produce IL-6, and IL-6 has been shown to be a prognostic factor for prostate cancer progression. Except for tumor cells that constitutively produce IL-6, normal cells do not express IL-6 unless properly stimulated. IL-6 production can be regulated by IL-6 itself, and depending on the cell type, IL-6 can stimulate or inhibit its own synthesis.
  • Increased levels of IL-6 have been observed in many types of cancer, including breast cancer, leukemia, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lymphoma, lung cancer, renal cell carcinoma, colorectal cancer, and multiple myeloma. See Chopra, et al. (2004), MJAFI, 60: 45-49; Songur, et al. (2004), Tumori, 90: 196-200; Blay, et al. (1992), Cancer Research, 52: 3317 -3322; Nikitaas, et al. (2005), World J. Gasterenterol., 11: 1639-1643; Heikkila, et al. (2008), Eur J Cancer, 44: 937-945.
  • IL-6 is thought to play a role in the development of many diseases and conditions, including but not limited to fatigue, cachexia, inflammatory diseases, autoimmune diseases, skeletal system diseases, fever, cancer, heart disease, obesity, diabetes, asthma, Alzheimer's disease, multicentric Castleman disease, multiple sclerosis and rheumatoid arthritis. See, for example, WO2011 / 066374, WO2011 / 066371, WO2011 / 066378 and WO2011 / 066369.
  • IL-6 levels are associated with cachexia and fever, and can reduce serum albumin.
  • the IL-6 monoclonal antibody Siltuximab for the treatment of multicentric Castleman's disease has been approved for marketing in the United States in 2014, and this is the only anti-IL-6 monoclonal antibody currently listed globally.
  • the monoclonal antibodies Sirukumab and Olokizumab for the treatment of rheumatoid arthritis are also expected to be approved for marketing in the near future, see Kim GW etal. (2015), Arch Pharm Res., 38 (5): 575-84. There is no monoclonal antibody targeting IL-6 in China.
  • an antibody or antigen-binding fragment thereof is involved, in particular, the antibody or antigen-binding fragment thereof binds IL6, preferably human IL6, wherein: (1) the antibody comprises:
  • HCDR1 comprising the sequence shown in SEQ ID NO: 6, having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99 with the sequence % Or 100% sequence identity, or an amino acid sequence with one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence, or consisting of,
  • HCDR2 which contains the sequence shown in SEQ ID NO: 7, having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99 with the sequence % Or 100% sequence identity, or an amino acid sequence with one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence, or consisting of, with
  • HCDR3 which contains the sequence shown in SEQ ID NO: 8, having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99 with the sequence % Or 100% sequence identity, or an amino acid sequence with one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence, or consisting of,
  • the antibody also contains:
  • LCDR1 which contains the amino acid shown in SEQ ID NO: 9, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% of the sequence, 99% or 100% sequence identity, or an amino acid sequence with one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion) compared to the sequence ,
  • LCDR2 which contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10 and has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or an amino acid sequence with one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion) compared to the sequence ,with
  • LCDR3 which contains the sequence shown in SEQ ID NO: 11, having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99 with the sequence % Or 100% sequence identity, or an amino acid sequence that has one or more (preferably 2 or 3) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence, or consists of it.
  • the antibody includes:
  • Heavy chain variable region which contains or consists of the following sequence:
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 4, or
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4 it has one or more (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or Deletion) of the amino acid sequence, and
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 5, or
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 Compared with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5, it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion)
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 50, or
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 50 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion) Of the amino acid sequence, and
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 26, or
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 26 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions)
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 58, or
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 26, or
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 26 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions)
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 58, or
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 34, or
  • amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 34 Compared with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 34, it has one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion)
  • a heavy chain variable region which contains or consists of the following sequence:
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 58, or
  • SEQ ID NO: the amino acid sequence shown in 42, or
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region are encoded by the following nucleotide sequences:
  • nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 22 Compared with the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 22, it has one or more (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative mutations (preferably substitution, insertion Or deletion) nucleotide sequence, and
  • the antibody further comprises a heavy chain variable region framework region FR-H1, FR-H2, FR-H3 and FR-H4, and a light chain variable region framework region FR-L1, FR -L2, FR-L3 and FR-L4, where
  • FR-H1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 with the sequence shown in SEQ ID NO: 12 %, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consist of their columns;
  • FR-H2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 13 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 14 , 98%, 99%, or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 15 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 15 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) amino acid sequences of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions); and
  • FR-L1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 16 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequence of conservative amino acid mutation (preferably substitution, insertion or deletion), or consist of it; FR-L2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17 or has at least the sequence shown in SEQ ID NO: 17 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity sequence, or as shown in SEQ ID NO: 17 Amino acid sequence with or consisting of one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitution, insertion or deletion); FR-L3 contains the amino acid sequence of S
  • FR-H1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 52 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% of the sequence shown in SEQ ID NO: 52 , 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 52 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consist of them;
  • FR-H2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 53 , 98%, 99%, or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 53 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 54 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 54 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 54 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 55 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 55 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 55 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of; and
  • FR-L1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 28 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 28 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-L2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 29 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 29 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-L3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 30 , 98%, 99%, or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 30 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-L4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 31 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 31 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% with the sequence shown in SEQ ID NO: 60 , 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 60 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consist of them;
  • FR-H2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 61 , 98%, 99%, or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 61 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with the sequence shown in SEQ ID NO: 62 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 62 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of them;
  • FR-H4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence shown in SEQ ID NO: 63 , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 63 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), or consisting of; and
  • FR-L1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 28 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 28 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 29 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 29 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 30 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 30 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 31 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 31 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-H1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 with the sequence shown in SEQ ID NO: 60 %, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 60 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) or consist of amino acid sequences;
  • FR-H2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 61 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 61 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-H3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 62 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 62 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-H4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 63 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 63 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) amino acid sequences of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), and
  • FR-L1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 36 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 36 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 37 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 37 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 38 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 38 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 39 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 39 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) or consist of amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions); or
  • FR-H1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 with the sequence shown in SEQ ID NO: 60 %, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 60 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) or consist of amino acid sequences;
  • FR-H2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 61 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 61 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-H3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 62 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 62 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-H4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 63 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 63 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) amino acid sequences of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), and
  • FR-L1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44, or at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 44 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 45 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 45 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L3 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 46, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 46 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 46 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) the amino acid sequence of or consisting of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions);
  • FR-L4 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47, or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 with the sequence shown in SEQ ID NO: 47 %, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 47 (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9 or 10) or consist of amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions).
  • the antibody comprises or consists of an amino acid sequence selected from the following heavy and light chain combinations:
  • the heavy and light chains are encoded by the following nucleotide sequences:
  • the antibody is a humanized antibody, chimeric antibody, or multispecific antibody (eg, bispecific antibody).
  • the constant region of the antibody is humanized, preferably from human IgG, more preferably IgG1 or IgG4.
  • the heavy chain constant region of the antibody uses the Ig gamma-1 or Ig gamma-4 chain C region, preferably the Ig gamma-1 chain C region; the light chain constant region uses the Ig kappa chain C region, More preferably, the GenBank registration number is ACCESSION: P01834, the C region of the Ig kappa chain.
  • the antigen-binding fragment is selected from Fab, Fab ', F (ab') 2 , Fd, Fv, dAb, Fab / c, complementarity determining region (CDR) fragments, single-chain antibodies (eg, scFv), bivalent antibody or domain antibody.
  • polypeptide selected from the group consisting of:
  • An isolated polypeptide comprising a sequence selected from SEQ ID NO: 4 or 50 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more compared to the sequence (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 Amino acid sequence of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), wherein the polypeptide as part of an anti-human IL-6 antibody specifically binds to human IL-6, the antibody also correspondingly comprises selected from SEQ ID NO: the sequence shown in 5 or 26 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100 % Sequence identity, or one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence ) Amino acid sequence;
  • An isolated polypeptide comprising the sequence shown in SEQ ID NO: 58 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% of the sequence , 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conserved amino acids compared to the sequence Mutant (preferably substitution, insertion or deletion) amino acid sequence, wherein the polypeptide as part of an anti-human IL-6 antibody specifically binds to human IL-6, the antibody further comprises SEQ ID NO: 26, 34 Or the sequence shown in 42 or has at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity Sequence, or an amino acid sequence with one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence ;
  • An isolated polypeptide comprising a sequence selected from SEQ ID NO: 5 or 26 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96 %, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more compared to the sequence (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 Amino acid sequence of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), wherein the polypeptide as part of an anti-human IL-6 antibody specifically binds to human IL-6, the antibody also correspondingly contains a sequence selected from SEQ ID NO: the sequence shown in 4 or 50 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% Sequence identity sequence, or one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence The amino acid sequence of; or
  • An isolated polypeptide comprising the sequence selected from SEQ ID NO: 26, 34 or 42 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95% of the sequence , 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity, or one or more than the sequence (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 Or 10) amino acid sequences of conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions), where the polypeptide specifically binds to human IL-6 as part of an antibody against human IL-6, the antibody further comprises a sequence selected from SEQ ID NO: the sequence shown in 58 or having at least 90%, preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence with the sequence Sequence of identity, or one or (preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10) conservative amino acid mutations (preferably substitutions, insertions or deletions) compared to the sequence Amino acid sequence.
  • it relates to a vector comprising the isolated polynucleotide of the invention.
  • a host cell comprising the isolated polynucleotide according to the invention or the vector according to the invention.
  • the present invention in another aspect of the present invention, relates to a method of preparing the antibody or antigen-binding fragment of the present invention, which includes culturing the host cell of the present invention.
  • an antibody conjugate which comprises the antibody or antigen-binding fragment of the present invention and a coupling portion coupled thereto, preferably, the coupling portion is selected from a purification tag (such as His tag), cytotoxic agent, detectable label, radioisotope, luminescent substance, colored substance, enzyme or polyethylene glycol.
  • a purification tag such as His tag
  • cytotoxic agent detectable label
  • radioisotope luminescent substance
  • colored substance colored substance
  • enzyme or polyethylene glycol polyethylene glycol
  • a multispecific antibody preferably a bispecific antibody, which includes the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, as well as antibodies or antigen binding against other antigens and / or other epitopes Fragment.
  • fusion protein comprising the antibody or antigen-binding fragment of the invention.
  • composition comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein, optionally It also includes pharmaceutically acceptable carriers and / or excipients.
  • the pharmaceutical composition is a dosage form suitable for oral administration to the gastrointestinal tract (GI), preferably, at least one selected from parenteral, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intra-articular, Intrabronchial, intraabdominal, intracapsular, intrachondral, intraluminal, intraluminal, intratracerebral (intracelebellar), intraventricular, colon, neck, stomach, intrahepatic, myocardial, intraosseous, intrapelvic, intrapericardial , Intraperitoneal, intrapleural, intraprostatic, intrapulmonary, intrarectal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasynovial, intrathoracic, intrauterine, intravesical, bolus, vaginal, rectal, buccal, sublingual , Intranasal, or transdermal modes to use contact or administration dosage forms.
  • GI gastrointestinal tract
  • kits comprising the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein, preferably
  • the kit also includes a second antibody that specifically recognizes the antibody or antigen-binding fragment thereof, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein; optionally
  • the second antibody also includes detectable labels, such as radioisotopes, luminescent substances, colored substances, and enzymes.
  • the present invention relates to the use of the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein in the preparation kit,
  • the kit is used to detect the presence or level of human IL-6 in a sample.
  • the present invention relates to the use of the antibody or antigen-binding fragment thereof, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein of the present invention in the preparation of the following drugs:
  • Drugs that block the cytological biological response mediated by the binding of human IL-6 to IL-6R are included in the cytological biological response mediated by the binding of human IL-6 to IL-6R.
  • the invention in another aspect of the invention, relates to the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein in the preparation of prophylaxis and / or treatment and And / or the use of drugs for adjuvant therapy and / or diagnosis of diseases related to IL-6.
  • the invention in another aspect of the invention, relates to the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein, which is used for prevention and / or Treatment and / or adjuvant treatment and / or diagnosis of diseases associated with IL-6.
  • the present invention in another aspect of the present invention, it relates to an in vivo or in vitro method, comprising applying an antibody or antigen-binding fragment thereof according to the invention, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the Step of the fusion protein of the cell, or to give a subject in need an effective amount of the antibody or antigen-binding fragment thereof, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion
  • the method is selected from the following:
  • the present invention in another aspect of the present invention, relates to a method for preventing and / or treating and / or adjuvant treating and / or diagnosing IL-6-related diseases, including administering to the subject in need the antibody or antigen-binding of the present invention Fragment, the antigen conjugate, the multispecific antibody or the fusion protein.
  • the IL-6 related diseases include, but are not limited to, at least one of obesity, immune-related diseases, cardiovascular diseases, infectious diseases, malignant diseases, neurological diseases, trauma, trauma or tissue damage or Related chronic conditions.
  • the IL-6 related immune-related diseases include but are not limited to at least one
  • Obstructive airway disease Asthma; Bronchitis; Acute, allergic, atrophic rhinitis and chronic rhinitis; Membranous rhinitis; Seasonal rhinitis; Sarcoidosis, Farmer's lung and related diseases, Adult respiratory distress syndrome, Allergic Pneumonia, fibrotic lung and idiopathic interstitial pneumonia; neonatal chronic lung disease;
  • Rheumatoid arthritis childhood rheumatoid arthritis, systemic adolescent rheumatoid arthritis, juvenile chronic arthritis, seronegative spondyloarthritis (including psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis and Wright's disease) Bechet's disease, Sjogren's syndrome, systemic sclerosis, osteoarthritis, gout, osteolysis;
  • Psoriasis allergic contact dermatitis, contact dermatitis, atopic dermatitis, other eczema skin diseases, seborrheic dermatitis, lichen planus, scleroderma, pemphigus, bullous pemphigoid, Bullous epidermolysis, urticaria, rubella, angiodermas, vasculitis, erythema, skin eosinophilia, uveitis, alopecia areata, allergic conjunctivitis and vernal conjunctivitis );
  • graft-versus-host disease allograft rejection of any organ or tissue (kidney, heart, liver, pancreas, lung, bone marrow, skin, cartilage, bone, small intestine, fetal thymus, parathyroid gland, cornea) , Xenograft rejection of any organ or tissue
  • Cachexia systemic lupus erythematosus, cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, antiphospholipid syndrome, iridocyclitis / uveitis / optic neuritis, systemic vasculitis / Wegener's granulomatosis, sarcoidosis, Orchitis / vasectomy reversal process, allergic / atopic disease, allergic contact dermatitis, systemic inflammatory response syndrome, septicemia syndrome, Gram-positive sepsis, Gram-negative sepsis, culture Negative sepsis, fungal sepsis, neutropenia fever, urinary sepsis, meningococcalemia, trauma / bleeding, burns, ionizing radiation exposure, acute pancreatitis, alcohol-induced hepatitis, chronic inflammatory pathology, surgical implants Aseptic relaxation, sarcoidosis, sickle cell anemia, diabetes, nephropathy,
  • the cardiovascular diseases include but are not limited to at least one type of cardiac stun syndrome (cardiacstun syndrome), myocardial infarction, congestive heart failure, stroke, ischemic attack, hemorrhage, acute coronary syndrome, atherosclerosis, atherosclerosis Sclerosis, restenosis, diabetes, diabetic macular edema, diabetic atherosclerosis (diabetic atherosclerotic disease), hypertension, arterial hypertension, renal vascular hypertension, syncope, shock, cardiovascular system syphilis, heart failure, Pulmonary (primary) heart disease, primary pulmonary hypertension, arrhythmia, atrial ectopic beating, atrial flutter, atrial fibrillation (persistent or sudden), post-perfusion syndrome, cardiopulmonary bypass inflammation, Disordered or multi-source atrial tachycardia, regular narrow QRS tachycardia, special arrhythmia, ventricular fibrillation, His bundle arrhythmia (His bundle arrththias), atrio
  • infectious diseases related to IL-6 include but are not limited to at least one of: acute or chronic bacterial infections, acute or chronic parasitic or infectious processes, including bacterial, viral and fungal infections, HTV infection / HIV neuropathy, meningitis, Hepatitis (such as type A, type B or type C, etc.), septic arthritis, peritonitis, pneumonia, epiglottis, E.
  • coli 0157: h7 hemolytic uremic syndrome / thrombolytic thrombocytopenic purpura, malaria, dengue Hemorrhagic fever, leishmaniasis, leprosy, toxic shock syndrome, streptococcal myositis, gas gangrene, mycobacterium tuberculosis, mycobacterium avium intracellular parasite, pneumocystis carinii pneumonia, pelvic inflammation Sexual diseases, orchitis / epididitis, Legionella, Lyme disease, influenza A, Epstein-Barr virus, virus-associated hemophagocytic syndrome, viral encephalitis / sterile meningitis, enterovirus type 71 hand-foot-mouth disease .
  • the malignant diseases related to IL-6 include but are not limited to at least one of: leukemia, acute leukemia, acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute lymphocytic leukemia, B-cells, T-cells, or FAB ALL, Acute myeloid leukemia (AML), acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia (CML), chronic lymphocytic leukemia (CLL), hairy cell leukemia, myelodysplastic syndrome (MDS), lymphoma, Hodgkin Disease, malignant lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma, Burkitt's lymphoma, multiple myeloma, Kaposi's sarcoma, colorectal cancer, pancreatic cancer, nasopharyngeal cancer, malignant histiocytosis, extratumoral synthesis Signs / malignant hypercalcemia (idiopathic) syndrome, solid tumors, bladder cancer, breast cancer, colorec
  • the IL-6 related neurological diseases include but are not limited to at least one of: neurodegenerative diseases, multiple sclerosis, migraine, AIDS dementia syndrome, demyelinating diseases such as multiple sclerosis and acute transverse myelitis ; Extrapyramidal and cerebellar disorders, such as damage to the corticospinal system; basal ganglia disorders; hyperkinetic dyskinesias, such as Huntington's disease and senile chorea; drug-induced dyskinesias, such as blocking CNS dopamine Receptor drugs-induced disorders; dyskinesias, such as Parkinson's disease; progressive pronuclear palsy (Progressive supranucleo Palsy); cerebellar structural damage; spinal cerebellar degeneration, such as spinal ataxia, Free Dreich's ataxia, cerebellar cortical degeneration, multisystem degenerative diseases (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager, and Machado-Joseph); systemic disorders (Revers
  • Such a method may optionally include administering an effective amount of a composition or pharmaceutical composition comprising at least one TNF antibody or a specific portion or variant to a cell, tissue, organ, animal or patient in need of such modulation, treatment or treatment .
  • a composition or pharmaceutical composition comprising at least one TNF antibody or a specific portion or variant to a cell, tissue, organ, animal or patient in need of such modulation, treatment or treatment .
  • the IL-6-related trauma, trauma or tissue damage or related chronic conditions include, but are not limited to, at least one of the following: including periodontal surgery, tooth extraction, dental pulp treatment, dental implant insertion, dental restoration Physical injury or trauma associated with oral surgery; or where the wound is selected from sterile wounds, contusions, cuts, lacerations, non-penetrating injuries, open wounds, penetrating wounds, puncture wounds Stabbing, poisoning trauma, infarct formation and subcutaneous trauma; or wherein the trauma is selected from ischemic ulcer, ischemic ulcer, fistula, severe bite, thermal burn and donor site trauma; or wherein the trauma is aphthous trauma, Traumatic trauma or herpes-related trauma.
  • Fab fragment is composed of a light chain and CH1 and a heavy chain variable region.
  • the heavy chain of a Fab molecule cannot form a disulfide bond with another heavy chain molecule.
  • Fc region contains two heavy chain fragments comprising the CH1 and CH2 domains of an antibody.
  • the two heavy chain fragments are held together by two or more disulfide bonds and by the hydrophobic interaction of the CH3 domain.
  • Fab 'fragment contains a portion of a light chain and a heavy chain (which contains the portion of the VH domain and the CH1 domain and also the region between the CH1 and CH2 domains), So that an interchain disulfide bond can be formed between the two heavy chains of two Fab 'fragments to form an F (ab') 2 molecule.
  • F (ab ') 2 fragment contains two light chains and two heavy chains containing a portion of the constant region between the CH1 and CH2 domains, so that between the two heavy chains Interchain disulfide bonds are formed.
  • the F (ab ') 2 fragment thus consists of two Fab' fragments held together by the disulfide bond between the two heavy chains.
  • Fv region includes variable regions from heavy and light chains, but lacks constant regions.
  • Fd fragment means an antibody fragment composed of VH and CH1 domains (Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989)).
  • dAb fragment (Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989)) consists of VH domains.
  • Fab'-SH is the nomenclature for Fab 'herein, in which one or more cysteine residues of the constant domain carry a free thiol group.
  • Fab / c fragment is an antibody cleavage intermediate product formed by digestion of immunoglobulin by pepsin, which has the advantages of both Fab and Fc regions, that is, it has strong diffusion ability and slow metabolic clearance in vivo Characteristics, and can maintain a high affinity (Liu Jianjun, "Journal of Cellular and Molecular Immunology", 1989 (4): 29-29).
  • single-chain antibody is an Fv molecule in which a heavy chain and a light chain variable region are connected by a flexible linker to form a single polypeptide chain (which forms an antigen binding region) (see, for example, Bird et al. People, Science. 242: 423-426 (1988) and Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90: 5879-5883 (1988)).
  • Single chain antibodies are described in detail in International Patent Application Publication No. WO 88/01649 and U.S. Patent Nos. 4,946,778 and U.S. P 5,260,203 (the disclosures of the International Patent Application Publication No. and U.S. Patent No. are incorporated by reference).
  • domain antibody is an immunofunctional immunoglobulin fragment containing only the variable region of the heavy chain or the variable region of the light chain.
  • two or more VH regions are covalently linked by a peptide linker to generate multivalent domain antibodies (especially bivalent domain antibodies).
  • the two VH regions of a bivalent domain antibody can target the same or different antigens.
  • bivalent antigen binding protein or “bivalent antibody” encompasses two antigen binding sites. In some cases, the two binding sites have the same antigen specificity. Bivalent antibodies can be bispecific.
  • multispecific antigen binding protein or “multispecific antibody” is an antigen binding protein or antibody that targets more than one antigen or epitope.
  • bispecific antigen binding protein or antibody is a hybrid antigen binding protein or antibody having two different antigen binding sites, respectively.
  • a bispecific antibody is a multispecific antigen binding protein or multispecific antibody, and can be produced by a variety of methods, including, but not limited to, fusion of hybridomas or ligation of Fab 'fragments. See, for example, Songsivilai and Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148: 1547-1553.
  • the two binding sites of a bispecific antigen binding protein or antibody will bind to two different epitopes that exist on the same or different protein targets.
  • “Humanized” forms of non-human (eg, murine) antibodies are chimeric antibodies that contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. Most of the humanized antibodies are human immunoglobulins, in which the hypervariable region residues of the receptor antibody are replaced by residues of non-human species hypervariable regions with the required specificity, affinity and ability. Non-human species such as small Rat, rat, rabbit or non-human primate. In some cases, Fv framework region residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. In addition, the humanized antibody may contain residues that are not present in the recipient antibody or the donor antibody. These modifications are made to further improve antibody performance.
  • binding refers to determining whether the binding of the protein, such as IL-6, is present in a heterogeneous population of proteins and / or other biological agents reaction. Therefore, under the specified conditions, a specific ligand / antigen binds to a specific receptor / antibody and does not bind to other proteins present in the sample in a significant amount.
  • humanized antibody refers to the replacement of all or part of the CDR region of a human immunoglobulin (acceptor antibody) by the CDR region of a non-human antibody (donor antibody)
  • the obtained antibody or antibody fragment in which the donor antibody may be a non-human (eg, mouse, rat, or rabbit) antibody with the expected specificity, affinity, or reactivity.
  • some amino acid residues in the framework region (FR) of the acceptor antibody can also be replaced with corresponding non-human antibody amino acid residues, or with other antibody amino acid residues, to further improve or optimize antibody performance.
  • the terms “similarity” or “sequence similarity” and “identity” refer to the relationship between the sequences of two or more protein or polypeptide molecules, as determined by alignment and comparison of sequences .
  • Perfect identity means the percentage of identical residues between amino acids in the molecules being compared, and can be calculated based on the size of the smallest molecule to be compared. In order to perform these calculations, the gaps in the alignment (if any) must be resolved by specific mathematical models or computer programs (ie, “algorithms”).
  • algorithms ie, “algorithms”
  • a total of at least 70%, 75% or 80% sequence identity, at least 90% or 95% sequence identity, and at least 97%, 98% or 99% sequence identity differ in conservative amino acid substitutions.
  • a "conservative amino acid substitution” is a substitution in which an amino acid residue is replaced by another amino acid residue having a side chain R group possessing similar chemical properties (eg, charge or being aqueous). Generally, conservative amino acid substitutions will not substantially change the functional properties of proteins. In cases where two or more amino acid sequences differ from each other by conservative substitutions, the percent sequence identity can be adjusted up to correct for the conservative nature of the substitution.
  • amino acid group having side chains having similar chemical properties include 1) aliphatic hydroxy side chains: glycine, alanine, maineine, leucine, and isoleucine: 2) aliphatic hydroxy side chains: serine And threonine: 3) amide-containing side chains: asparagine and glutamine: 4) aromatic side chains: phenylalanine, acetic acid and tryptophan: 5) basic side chain: lysine , Arginine and histidine: 6) acidic side chains: aspartic acid and glutamic acid; and 7) sulfur-containing side chains: cysteine and methionine.
  • the conservative amino acid substitution groups are valine-leucine-isoleucine, phenylalanine-tyrosine, lysine-arginine, alanine-valine, glutamate-aspartic acid Acid and asparagine-glutamine.
  • Figure 1 SDS-PAGE of recombinant human IL-6.
  • FIG. 2 The hybridoma cell line 140-4 reduces the phosphorylation level of the downstream signaling protein p-Stat3 (Tyr705).
  • Figure 3 Affinity of humanized monoclonal antibodies HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c, and HZ-0408d for human IL-6.
  • Figure 4 Inhibitory effect of humanized monoclonal antibodies HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c and HZ-0408d on the binding of IL-6 to IL-6R
  • Figure 5 Humanized monoclonal antibodies HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c and HZ-0408d inhibit the phosphorylation of IL-6 stimulated p-Stat3 (Tyr705).
  • Figure 6 Humanized antibody inhibits rhA-6 stimulated SAA secretion in HepG2 cells.
  • FIG. 7 Cross-reaction results of humanized antibodies with various genus IL-6
  • FIG. 7A is the cross-reaction of humanized antibodies to rhesus monkey IL-6
  • FIG. 7B is (humanized antibodies to mouse IL-6)
  • 7C is the cross-reaction of humanized antibody to rat IL-6.
  • human IL-6 prokaryotic expression vector By constructing human IL-6 prokaryotic expression vector and transforming E. coli BL21 (DE3), IPTG induced IL-6 expression.
  • the inclusion body protein was denatured and renatured and purified by nickel column to prepare human IL-6 protein, which was used for mouse immunization, clone screening and functional identification.
  • the human-derived IL-6 target sequence was synthesized by means of genetic engineering (Nanjing Kingsley synthesis). The sequence starts from Val at position 30 of natural human IL-6 to a total of 183 amino acids at 212 Met (SEQ ID NO: 1). Adding 6 His at the C-terminus can be combined with nickel chloride in the nickel column, so that it can be purified by ion affinity chromatography, and two NdeI and XhoI digestion sites are added at both ends.
  • Synthesized human IL-6 and expression vector pET22b (+) (provided by Nanjing Kingsray) were double-digested by NdeI and XhoI to recover the target fragment of human IL-6 and the expression vector fragment, ligated and transformed, Positive clones were identified by PCR and enzyme digestion methods, and finally the correctness of the expression vector was verified by sequencing, named pET22b-rhIL-6-His. Plasmids were extracted using plasmid extraction kits for transformation.
  • pET22b-hIL-6-His was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), single clones were picked, and cultured in 5 ml LB medium containing ampicillin (50 ⁇ g / mL) at 37 ° C overnight. The overnight bacteria were inoculated into the corresponding fresh medium at 1: 100 and cultured at 37 ° C. When the bacteria grew to an OD600 of 0.6, 0.1 mM IPTG (Amresco, 0487) was added, and expression was induced at 37 ° C for 6 hours.
  • the method for washing and dissolving the inclusion bodies is as follows: the bacterial weight is suspended in the inclusion body ultrasonic buffer (20mmol / L Tris-HCl pH 8.0, 0.5mol / L NaCl, 1mmol / L EDTA) for ultrasonication, and the inclusion body is precipitated for inclusion Body wash buffer (20mmol / L Tris-HCl pH 8.0, 0.5mol / L NaCl, 2mol / L urea, 2% Triton) was washed twice.
  • inclusion bodies were dissolved in inclusion body lysis buffer (8M Urea, 25mM Tris, 150mM NaCl, 25mM DTT, pH 8.0), stirred at room temperature for 5-6 hours or overnight, and the supernatant was collected by centrifugation.
  • the dissolved inclusion body protein was adjusted to a concentration of 1 mg / ml, and 1 ml was placed in a dialysis bag.
  • the dialysis bag was placed in 140 ml of extradialysis fluid (6 M urea, 200 mM arginine, 25 mM Tris (pH 8.0), 150 mM NaCl, 2 mM Reduced glutathione (GSH), 1 mM oxidized glutathione (GSSG)), and dialyzed at 4 ° C overnight.
  • Ni-NTA Sepharose 6 Fast (GE Health Care, 17-5318-02), it is equilibrated in a balanced solution of 25 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl. Then, the hIL-6-His renatured protein was loaded on the column, and the column was washed with a washing solution (25 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 50 mM imidazole). Finally, the elution solution (25 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 300 mM imidazole) eluted the protein on the column.
  • a washing solution 25 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 300 mM imidazole
  • the BCA method (Applygen, P1151-1) measures the protein content, and the concentration can reach more than 1 mg / ml. SDS-PAGE method was used to detect protein purity (see Figure 1). The purity can reach more than 95%.
  • KM mice were immunized with rhIL-6-His as an antigen.
  • the antigen for immunization (rhIL-6-His) was from Example 1.
  • KM mice were purchased from Beijing Tonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.
  • the immunization route was subcutaneous multi-point injection, the immunization dose was 100 ⁇ g / 200 ⁇ l / mouse, and a total of 5 mice were immunized.
  • 100 ⁇ g rhIL-6-His was mixed with 100 ⁇ l Freund's complete adjuvant (Sigma, F5881).
  • Example 1 After the third immunization (day 35), 5 mice were bled and the titers of anti-human IL-6 antibody in the serum of immunized mice were measured by ELISA.
  • coating buffer NaHCO 3 8.4 g / L, pH 9.6
  • 1 ⁇ g / ml 100 ⁇ l / well was added to a 96-well ELISA plate (Corning, Acton, MA), 4 Overnight.
  • mice After testing, after the third immunization, the serum titer of mouse 4 was 1: 512000, and the remaining mice reached 1: 128000.
  • Enzyme-linked immunosorbent assay to screen hybridoma positive clones with strong binding activity to antigen hIL-6
  • the recombinant protein human rhIL-6-His was screened by ELISA plate for the first round of positive cell lines. After the first round of screening, 331 positive hybridoma monoclonals with OD value> 1.0 were selected.
  • the 331 positive cell lines were screened with rhIL-6-His for the second round of ELISA positive cell lines, and the His-tag protein cross-screening and IgM subtype exclusion screening were performed according to conventional methods. Select non-IgM cell lines that retain rhIL-6-His positive and His tag protein negative. In the end, 250 hybridoma cell lines were selected to remain.
  • TMB chromogenic solution (Zuman Bio, ZD311) was added to incubate at 37 ° C for 15 minutes for color development.
  • ELx808 read the absorbance value at 450nm wavelength, select 50 hybridomas with large differences in OD value for subsequent screening.
  • clone 140-4 can block the binding of IL-6 to the receptor IL-6R, inhibit gp130 signal transduction, and reduce the phosphorylation level of its downstream signaling protein p-Stat3 (Tyr705).
  • the hybridoma cell line 140-4 was deposited on September 26, 2018 in the General Microbiology Center (CGMCC, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, No. 3, Beichen West Road, Chaoyang District, Beijing), China The number is CGMCC No. 16389.
  • CGMCC General Microbiology Center
  • the variable-strand DNA sequence corresponding to the hybridoma cells is amplified using the first-strand cDNA as the subsequent template.
  • the primer sequences used in the amplification reaction are complementary to the first framework region and the constant region of the antibody variable region, reference (Larrick, JW, et al. (1990), Scand. J. Immunol., 32: 121-128 and Coloma , JJet al., (1991) BioTechniques, 11, 152-156).
  • Taq enzyme used (NEB, M0491S).
  • SEQ ID NO: 2 The amino acid sequence of the heavy chain of murine monoclonal antibody
  • SEQ ID NO: 3 light chain amino acid sequence of murine monoclonal antibody
  • SEQ ID NO: 4 Amino acid sequence of heavy chain variable region of murine monoclonal antibody
  • SEQ ID NO: 5 amino acid sequence of the light chain variable region of murine monoclonal antibody
  • SEQ ID NO: 6 CDR1 sequence of murine monoclonal antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 7 CDR2 sequence of murine monoclonal antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 8 CDR3 sequence of murine monoclonal antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 9 CDR1 sequence of murine monoclonal antibody light chain
  • SEQ ID NO: 10 CDR2 sequence of murine monoclonal antibody light chain
  • SEQ ID NO: 11 CDR3 sequence of murine monoclonal antibody light chain.
  • SEQ ID NO: 12 sequence of mouse monoclonal antibody heavy chain FR1
  • SEQ ID NO: 13 sequence of mouse monoclonal antibody heavy chain FR2
  • SEQ ID NO: 14 sequence of mouse monoclonal antibody heavy chain FR3
  • SEQ ID NO: 16 sequence of mouse monoclonal antibody light chain FR1
  • SEQ ID NO: 17 sequence of mouse monoclonal antibody light chain FR2
  • SEQ ID: NO: 18 sequence of mouse monoclonal antibody light chain FR3
  • SEQ ID NO: 20 nucleotide sequence of mouse monoclonal antibody heavy chain
  • SEQ ID NO: 22 nucleotide sequence of murine monoclonal antibody heavy chain variable region
  • SEQ ID NO: 23 nucleotide sequence of murine monoclonal antibody light chain variable region
  • variable region sequence of the antibody secreted by the hybridoma cell 140-4 obtained above humanized modification is performed, and the specific sequence obtained is as follows:
  • SEQ ID NO; 27 nucleotide sequence of humanized light chain L1 variable region
  • SEQ ID NO: 29 FR2 amino acid sequence of humanized light chain L1 variable region
  • SEQ ID NO: 30 Amino acid sequence of humanized light chain L1 variable region FR3
  • SEQ ID NO: 34 Amino acid sequence of humanized light chain L2 variable region
  • SEQ ID NO: 36 Amino acid sequence of humanized light chain L2 variable region FR1
  • SEQ ID NO: 38 Amino acid sequence of humanized light chain L2 variable region FR3
  • SEQ ID NO: 39 Amino acid sequence of humanized light chain L2 variable region FR4
  • SEQ ID NO: 40 humanized light chain L3 amino acid sequence
  • SEQ ID NO: 44 Amino acid sequence of humanized light chain L3 variable region FR1
  • SEQ ID NO: 46 FR3 amino acid sequence of humanized light chain L3 variable region
  • SEQ ID NO: 47 Amino acid sequence of humanized light chain L3 variable region FR4
  • SEQ ID NO: 48 Amino acid sequence of humanized heavy chain H2
  • SEQ ID NO: 50 Amino acid sequence of humanized heavy chain H2 variable region
  • SEQ ID NO: 56 Amino acid sequence of humanized heavy chain H3
  • the nucleotide sequences of the above light chain and heavy chain were digested by HindIII and ECOR I respectively, and then ligated into pCDNA3.1 (Invitrogen, V79020) plasmid to construct an expression vector.
  • the combination of light chain and heavy chain is as follows: L1 / H2, L1 / H3, L2 / H3 and L3 / H3.
  • 293F (Zhuhai Kerry) was diluted with 293 medium (Zhuhai Kerry, K03252) to a density of 3.0 ⁇ 10 6 cells / ml.
  • the cells were cultured on a constant temperature shaker at 130 rpm, 37 ° C, and 5% CO 2 so that the cell density (hematocrit counting method) on the day of transfection was 4.0-6.0 ⁇ 10 6 cells / ml.
  • the cell viability should be greater than 97%.
  • HZ-0408a L1 + H2
  • HZ-0408b L1 + H3
  • HZ-0408c L2
  • Example 7 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to determine the affinity of humanized antibodies
  • Figure 3 shows that the four monoclonal antibodies HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c, and HZ-0408d have significantly higher affinity for human IL-6 than Siltuximab.
  • Example 8 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) assay of humanized antibodies inhibits IL-6 binding to IL-6R
  • Figure 4 shows that the four monoclonal antibodies HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c and HZ-0408d have significantly higher inhibitory effects on the binding of IL-6 to IL-6R than Siltuximab.
  • HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c and HZ-0408d can all have lower concentrations (HZ-0408a 2 ⁇ g / ml, HZ-0408b 2 ⁇ g / ml, HZ-0408c 8 ⁇ g / ml, HZ-0408d 32 ⁇ g / ml) inhibits the phosphorylation of IL-6-stimulated p-Stat3 (Tyr705), while Siltuximab can only significantly inhibit the phosphorylation of IL-6-stimulated p-Stat3 (Tyr705) at an action concentration of 64 ⁇ g / ml.
  • Example 10 Humanized antibody inhibits rhA-6 stimulated SAA secretion in HepG2 cells
  • HepG2 Human hepatoma cells HepG2 (Basic Medical Cell Center, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences, 3111C0001CCC000802) were seeded into a 24-well plate at 2.25 ⁇ 10 5 cells / well and placed in MEM NEAA medium (Thermo, 41500034) for about 24 hours.
  • a certain concentration of humanized antibody (100ug / ml starting, 5-fold gradient to 0.0064ug / ml) and Siltuximab (2500ug / ml starting, 5-fold gradient to 0.0064ug / ml) and 100ng / mL rhIL- 6-His and 200ng / mL rhIL-6R (Yiqiao Shenzhou, 10398-H02H) were mixed and incubated for 30 minutes, and 25ng / ml IL-1 ⁇ (Yiqiao Shenzhou, 10139-HNAE) was added to mix. The above mixture was added to HepG2 cells and cultured for 48 hours, and the supernatant of the culture was collected. The ELISA kit (R & D, DY3019-05) was used to determine SAA in the supernatant.
  • Figure 6 shows that HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c, HZ-0408d, and Siltuximab can all inhibit the SAA secretion of rhIL-6 stimulated HepG2 cells in a concentration-dependent manner.
  • HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c, HZ-0408d and Siltuximab act on rhIL-6 stimulated HepG2 cells, respectively, and the concentration of SAA is 30.5 ⁇ 9.5ng / mL, -2.5 ⁇ 6.5 ng / mL, 12.5 ⁇ 9.5ng / mL, 85 ⁇ 22ng / mL and 148 ⁇ 7ng / mL.
  • the ForteBio Blitz Biomolecular Interaction Analysis (ForteBio) instrument detects the affinity of HZ-0408a, HZ-0408b, HZ-0408c and HZ-0408d, and Siltuximab for human IL-6.
  • the measured affinity constants are shown in the table below.

Abstract

本发明涉及一种抗IL-6的抗体、包括其的药物组合物或试剂盒，及其用途。

Description

白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用 技术领域
本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种白介素-6(IL-6)的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用。
发明背景
白介素-6(IL-6)(还称为干扰素-β2、B细胞分化因子、B细胞刺激因子-2、肝细胞刺激因子、杂交瘤生长因子)是一种由多种不同细胞类型生成的参与许多生物过程的多功能细胞因子，所述生物过程包括调节急性炎症应答、调节特异性免疫应答(包括B细胞和T细胞分化)、骨代谢、血小板生成、表皮细胞增殖、月经、神经细胞分化、神经保护、衰老、癌症和阿尔茨海默病中出现的炎症反应。参见A.Papassotiropoulos etal.(2001)，Neurobiologyof Aging，22：863-871。
人类IL-6的编码基因包含五个外显子和四个内含子，并定位于染色体7的短臂7p21。IL-6 RNA的翻译和翻译后修饰产生具有184个氨基酸的21至28kDa蛋白。参见A.Papassotiropoulos etal.(2001)，Neurobiology of Aging，22：863-871。
IL-6能结合在丝裂原活化的B细胞、T细胞、外周单核细胞、和某些肿瘤细胞上表达的IL-6受体复合物。受体复合物由信号转导糖蛋白gp130的至少一个亚基和IL-6受体(“IL-6R”)(还称为gp80)组成。IL-6R还可以可溶形式(“sIL-6R””)存在。IL-6结合IL-6R，然后二聚化信号转导受体gp130。参见Jones，SA，J.Immunology，175：3463-3468(2005)。包括IL-6、LIF、制瘤素M、IL-11、CNTF、和CT-1的细胞因子家族都在结合它们的关联受体后经由gp130发出信号，gp130的胞内段含有与酪氨酸激酶活化有关的保守序列。IL-6通过与其受体复合物作用来活化胞内的多种激酶分子和转录因子并最终激活有关基因的表达。
IL-6是一种多效促炎细胞因子，可调节急性期反应和从先天性到适 应性免疫应答的转变。IL-6促进参与急性期反应蛋白的肝脏合成，导致发烧、发冷和疲劳等症状。它刺激B细胞分化和抗体分泌，并防止活化B细胞的凋亡。IL-6激活并诱导T细胞增殖，并且在IL-2存在下，诱导成熟和未成熟CD8T细胞分化成细胞毒性T细胞。IL-6还参与Th17细胞的分化和IL-17的产生，并抑制调节性T细胞(Treg)分化。IL-6还激活破骨细胞，滑膜细胞，中性粒细胞和其他造血细胞。参见Park，et al.(2007)，Bulletin of the NYU Hospital for Joint Diseases 65(suppl 1)：S4-10；Guerne，et al.(1989)，J Clin Invest.，83(2)：585-92；Houssiau，et al.(1988)，Arthritis Rheum.，31(6)：784-8；Nishimotor，et al.(2006)，Nat Clin Pract Rheumatol.，2(11)：619-26；Kishimoto(1989)，Blood，74(1)：1-10；Van Snick(1990)，Annu Rev Immunol.，8：253-78.
IL-6的功能不仅限于免疫反应，它在造血、血小板生成、破骨细胞形成、诱导肝急性期反应中起作用，导致C-反应蛋白(CRP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)蛋白升高。它还是表皮角质形成细胞、肾小球系膜细胞、骨髓瘤和浆细胞瘤细胞的生长因子。参见Grossman，et al.(1989)，Prot Natl Acad Sci.，86(16)：6367-6371；Horii，et al.(1989)，J Immunol.，143(12)：3949-3955；Kawano，et al.(1988)，Nature，332：83-85。在体内，受到刺激的单核细胞、成纤维细胞、和内皮细胞是IL-6的主要来源。其它细胞诸如巨噬细胞、T和B淋巴细胞、粒细胞、角质形成细胞、肥大细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经胶质细胞、和平滑肌细胞也在刺激后生成IL-6(Kishimoto，T.，Blood 74：1-10(1989)和Kurihara，N.etal.，J.Immunology 144：4226-4230(1990))。数种肿瘤细胞也生成IL-6，而且已经表明IL-6是前列腺癌进展的预后因子。除组成型产生IL-6的肿瘤细胞外，除非适当刺激，否则正常细胞不表达IL-6。IL-6生成能被IL-6自身调节，而且取决于细胞类型，IL-6能刺激或抑制自身的合成。
许多类型的癌症中观察到IL-6水平升高，包括乳腺癌，白血病，卵巢癌，前列腺癌，胰腺癌，淋巴瘤，肺癌，肾细胞癌，结肠直肠癌和多发性骨髓瘤。参见Chopra，et al.(2004)，MJAFI，60：45-49；Songur，et al.(2004)，Tumori，90：196-200；Blay，et al.(1992)，Cancer Research，52：3317-3322；Nikiteas，et al.(2005)，World J.Gasterenterol.，11：1639-1643； Heikkila，et al.(2008)，Eur J Cancer，44：937-945。临床研究(Trikha，etal(2003)，Clinical Cancer Research 9：4653-4665)显示受试者施用各种抗IL-6抗体后病情得到一些改善，在IL-6促进癌细胞增殖或存活的癌症病例中抗体的作用更加明显。
IL-6被认为在许多疾病和病症的发展中起作用，包括但不限于疲劳，恶病质，炎性疾病，自身免疫疾病，骨骼系统疾病，发热，癌症，心脏病，肥胖症，糖尿病，哮喘，阿尔茨海默病疾病，多中心性Castleman病，多发性硬化症和类风湿性关节炎。参见，例如，WO2011/066374，WO2011/066371，WO2011/066378和WO2011/066369。
除了其在某些癌症和其他疾病的发病机理中的直接作用之外，长期升高的IL-6水平似乎对患者的健康和生活质量产生不利影响。升高的IL-6水平与恶病质和发热有关，并且能降低血清白蛋白。Gauldie，et al.(1987)，PNAS，84：7251-7253；Heinric，et al.(1990)，Biochem J.，265(3)：621-636；Zamir，et al.(1993)，Metabolism，42：204-208；Zamir，et al.(1992)，Arch Surg，127：170-174。中和抗体对IL-6的抑制可改善癌症患者的发热和恶病质，但尚未报道其对于血清白蛋白水平的改善。Emille，et al.(1994)，Blood，84：2472-2479；Blay，et al.(1992)，Cancer Research，52：3317-3322；Bataille，et al.(1995)，Blood，86：685-691.
另外，治疗多中心性Castleman病的IL-6单克隆抗体Siltuximab已经于2014年在美国获得批准上市，这也是目前全球上市的唯一一个抗IL-6单克隆抗体。用于类风湿性关节炎治疗的单克隆抗体Sirukumab和Olokizumab也有望在近期内获得批准上市，参见Kim GW etal.(2015)，Arch Pharm Res.，38(5)：575-84。国内还没有针对IL-6靶点的单克隆抗体上市销售。
发明内容
在本发明的一个方法，涉及抗体或其抗原结合片段，特别地，所述抗体或其抗原结合片段结合IL6，优选人IL6，其中：(1)所述抗体包含：
HCDR1，其包含SEQ ID NO：6所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％ 或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
HCDR2，其包含SEQ ID NO：7所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
HCDR3，其包含SEQ ID NO：8所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
并且所述抗体还包含：
LCDR1，其包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸，或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
LCDR2，其包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
LCDR3，其包含SEQ ID NO：11所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成。
在具体的实施方案中，所述抗体包括：
(1)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：5所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
(2)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：50所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：26所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、 3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
(3)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：26所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
(4)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：34所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列， 或
与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；或
(5)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列，或
与SEQ ID NO：42所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。
在具体的实施方案中，所述重链可变区和轻链可变区分别由以下核苷酸序列所编码：
(1)(i)SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：22所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
(ii)SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：23所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
(2)(i)SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：51所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
(ii)SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
(3)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
(ii)SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列， 或
与SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
(4)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
(ii)SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：35所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的序列；或
(5)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
(ii)SEQ ID NO：43所示的核苷酸序列，或
与SEQ ID NO：43所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
与SEQ ID NO：43所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、 3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列。
在具体的实施方案中，所述抗体还包含重链可变区的框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3和FR-H4，和轻链可变区的框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3和FR-L4，其中
(1)FR-H1包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：12所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其列组成；
FR-H2包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列或与SEQ ID NO：13所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H3包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列或与SEQ ID NO：14所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H4包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：15所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；和
FR-L1包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列或与SEQ ID NO：16所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：16所示 的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L2包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列或与SEQ ID NO：17所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L3包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列或与SEQ ID NO：18所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L4包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列或与SEQ ID NO：19所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
(2)FR-H1包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列或与SEQ ID NO：52所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H2包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列或与SEQ ID NO：53所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H3包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列或与SEQ ID NO：54所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H4包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列或与SEQ ID NO：55所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：55所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；和
FR-L1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列或与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-L2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列或与SEQ ID NO：29所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-L3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列或与SEQ ID NO：30所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-L4包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列或与SEQ ID NO：31所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
(3)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；和
FR-L1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：29所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：30所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L4包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：31所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
(4)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成，和
FR-L1包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：36所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L2包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：37所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L3包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：38所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L4包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：39所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；或
(5)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成，和
FR-L1包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：44所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L2包含SEQ ID NO：45的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：45所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L3包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：46所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
FR-L4包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：47所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：47所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成。
在具体的实施方案中，所述抗体包含选自以下重链和轻链组合的氨基酸序列，或由其组成：
(1)SEQ ID NO：2的氨基酸序列和SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
(2)SE ID NO：48的氨基酸序列和SEQ ID NO：24的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：24的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：32的氨基酸序列；或
(5)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：40的氨基酸序列。
在具体的实施方案中，所述重链和轻链分别由以下核苷酸序列所编码：
(1)SEQ ID NO：20的核苷酸序列和SEQ ID NO：21的核苷酸序列；
(2)SE ID NO：49的核苷酸序列和SEQ ID NO：25的核苷酸序列；
(3)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：25的核苷酸序列；
(4)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：33的核苷酸序列；或
(5)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：41的核苷酸序列。
在具体的实施方案中，所述抗体是人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。
在具体的实施方案中，其中所述抗体的恒定区是人源化的，优选来自人IgG，更优选IgG1或IgG4。
在具体的实施方案中，所述抗体的重链恒定区采用Ig gamma-1或Ig gamma-4链C区，优选采用Ig gamma-1链C区；轻链恒定区采用Ig kappa链C区，更优选GenBank登记号为ACCESSION：P01834的Ig kappa链C区。
在具体的实施方案中，所述抗原结合片段选自Fab，Fab′，F(ab′) 2，Fd，Fv，dAb，Fab/c，互补决定区(CDR)片段，单链抗体(例如，scFv)，双价抗体或结构域抗体。
在本发明的另一个方面，涉及分离的多肽，其选自以下各项组成的组：
(1)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：6，7和8所示的序列，其中所述 多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含SEQ ID NO：9，10和11所示的序列；
(2)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：9，10和11所示的序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含SEQ ID NO：6，7和8所示的序列；
(3)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：4或50所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还分别对应包含选自SEQ ID NO：5或26所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
(4)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：58所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含选自SEQ ID NO：26，34或42所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
(5)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：5或26所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的 抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还对应包含选自SEQ ID NO：4或50所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；或
(6)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：26，34或42所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含选自SEQ ID NO：58所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。
在本发明的另一个方面，涉及分离的多核苷酸，其编码本发明所述的分离的多肽。
在本发明的另一个方面，涉及载体，其包含本发明所述的分离的多核苷酸。
在本发明的另一个方面，涉及宿主细胞，其包含本发明所述的分离的多核苷酸或本发明所述的载体。
在本发明的另一方面，涉及制备本发明所述抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养本发明所述的宿主细胞。
在本发明的另一方面，涉及抗体偶联物，其包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分，优选地，所述偶联部分选自纯化标签(如His标签)、细胞毒性剂，可检测的标记，放射性同位素、发光物质、有色物质、酶或聚乙二醇。
在本发明的另一方面，涉及多特异性抗体，优选双特异性抗体，其包括本发明所述的抗体或其抗原结合片段，以及针对其他抗原和/或其 他抗原表位的抗体或抗原结合片段。
在本发明的另一方面，涉及融合蛋白，其包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段。
在本发明的另一方面，涉及药物组合物，包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白，任选地，还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在具体的实施方案中，所述药物组合物为适合于口服施用于胃肠道(GI)的剂型，优选地，至少一种选自胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内(intracelebellar)、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、推注、阴道、直肠、含服、舌下、鼻内、或经皮的模式来使用接触或施用的剂型。
在本发明的另一方面，涉及试剂盒，其包括本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白，优选地，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、发光物质、有色物质、酶。
在本发明的另一方面，涉及本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测人IL-6在样品中的存在或其水平。
在本发明的另一方面，涉及本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白在制备如下药物中的用途：
阻断人IL-6与人IL-6R结合的药物，
阻断人IL-6活性或下调其水平的药物，
抑制gp130信号转导，降低其下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平的药物，或者
阻断人IL-6与IL-6R结合所介导的细胞学生物学反应的药物。
在本发明的另一方面，涉及本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断与IL-6有关的疾病的药物中的应用。
在本发明的另一方面，涉及本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白，其用于预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断与IL-6有关的疾病。
在本发明的另一方面，涉及一种在体内或体外方法，包括施加包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白的细胞的步骤，或给予有需求的受试者以有效量的所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白的步骤，所述方法选自如下各项：
阻断人IL-6与人IL-6R结合，
阻断人IL-6活性或下调其水平，
抑制gp130信号转导，降低其下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平，或者
阻断人IL-6与IL-6R结合所介导的细胞学生物学反应。
在本发明的另一方面，涉及预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断IL-6有关的疾病的方法，包括给需要的受试者施用本发明所述的抗体或其抗原结合片段，所述的抗原偶联物，所述的多特异性抗体或所述的融合蛋白。
在一些实施方案中，所述IL-6有关的疾病包括但不限于，至少一种的肥胖症，免疫相关疾病，心血管疾病，传染病，恶性病，神经疾病，创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症。
所述IL-6有关的免疫相关疾病包括但不限于至少一种的
(1)呼吸道疾病
阻塞性气道疾病；哮喘；支气管炎；急性、变应性、萎缩性鼻炎和慢性鼻炎；膜性鼻炎；季节性鼻炎；结节病、农民肺和相关疾病、成人呼吸窘迫综合征、过敏性肺炎、纤维化肺和特发性间质性肺炎；新生儿慢性肺病；
(2)骨和关节
类风湿性关节炎、儿童类风湿性关节炎、全身发作的青少年类风湿性关节炎、青少年慢性关节炎、血清阴性脊椎关节炎(包括银屑病关节炎、强直性脊椎炎和莱特病)、贝切特病、舍格伦综合征、全身性硬化症、骨关节炎、痛风、骨质溶解；
(3)皮肤
银屑病、变应性接触性皮炎、接触性皮炎、特应性皮炎，其他湿疹性皮肤病、脂溢性皮炎、扁平苔藓、硬皮病、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、风疹、干皮病(angiodermas)、血管炎、红斑、皮肤嗜酸性细胞增多、葡萄膜炎、斑秃、变应性结膜炎和春季结膜炎(vernal vemal conjunctivitis)；
(4)胃肠道
胃溃疡、炎性肠病、溃疡性结肠炎、腹部疾病、直肠炎、嗜酸性肠胃炎、肥大细胞增生病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、抗磷脂综合征、产生远离内脏的影响，如偏头痛、鼻炎和湿疹的食品相关性变态反应；
(5)移植物排斥
移植物、移植物抗宿主病、任何器官或组织的同种异体移植物排斥(肾脏、心脏、肝脏、胰腺、肺、骨髓、皮肤、软骨、骨、小肠、胎儿胸腺、甲状旁腺、角膜)、任何器官或组织的异种移植物排斥
(6)其他组织和全身性疾病
恶病质、全身性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮、狼疮肾炎、抗磷脂综合征、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、系统性血管炎/韦格内氏肉芽肿症、肉样瘤病、睾丸炎/输精管切除术逆转过程、变应性/特应性疾病、过敏性接触性皮炎、全身炎症反应综合征、败血病综合征、革兰氏阳性败血症、革兰氏阴性败血症、培养物阴性败血症、真菌败血症、中性白细胞减少症发热、尿败血症、脑膜炎球菌血症，创伤/出血、烧伤、电离辐射暴露、急性胰腺炎、酒精诱导的肝炎、慢性炎症性病理、外科埋植剂的无菌松弛、肉样瘤病、镰状细胞性贫血、糖尿病、肾病、特应性疾病、超敏反应、花粉热、子宫内膜异位、全身过敏、恶性贫血、溶血性疾病、血小板减少(症)、抗受体超敏反应、格雷夫斯病、雷诺(氏)病、B型胰岛素抵抗性糖尿病、重症肌无力、抗体介导的细胞毒性、III型 超敏反应、POEMS综合征(多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病和皮肤变化综合征)、多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、皮肤变化综合征、抗磷脂综合征、混合性结缔组织病、原发性阿狄森(氏)病、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、白斑病、血管炎、MI后心切开术综合征、IV型过敏症、胞内生物体引起的肉芽肿、药物过敏、代谢病/自发病、威尔逊氏病、血色素沉着症、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、糖尿病性视网膜病、桥本甲状腺炎、下丘脑-垂体-肾上腺轴评估、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺炎、脑脊髓炎、纤维囊泡症、家族性噬血细胞淋巴组织细胞增多病(familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、皮肤用药病症、肾病综合征、肾炎、肾小球肾炎、急性肾功能衰竭、血液透析、尿毒症、中毒、先兆子痫、okt3疗法、抗cd3疗法、脱发、细胞因子疗法、化学疗法、放射疗法(如包括但不限于乏力、贫血、恶病质等)、慢性水杨酸盐中毒等。
参见如Merck Manual，第12-17版，Merck & Company，Rahway，NJ(1972，1977，1982，1987，1992，1999)，Pharmacotherapy Handbook，Wells等，编，第2版，Appleton and Lange，Stamford，Conn.(1998，2000)，各自完全并入作为参考。
所述心血管疾病包括但不限于至少一种的心脏stun综合征(cardiacstun syndrome)、心肌梗塞、充血性心力衰竭、中风、缺血性发作、出血、急性冠状动脉综合征、动脉硬化、动脉粥样硬化、再狭窄、糖尿病、糖尿病型黄斑水肿、糖尿病粥样硬化病(diabetic aterosclerotic disease)、高血压、动脉性高血压、肾血管性高血压、晕厥、休克，心血管系统梅毒、心力衰竭、肺(原)性心脏病、原发性肺动脉高压、心律失常、心房异位性博动、心房扑动、心房颤动(持续性或突发性)、灌注后综合征、心肺分流术炎症反应、紊乱性或多源性房性心动过速、规律性窄QRS心动过速、特殊心律失常、心室颤动、希氏束心律失常(His bundle arrythmias)、房室性传导阻滞、束支传导阻滞、心肌局部缺血性病症、冠状动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、心肌病、扩张性充血性心肌病、限制性心肌病、心脏瓣膜疾病、心内膜炎、心包疾病、心脏肿瘤、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、主动脉炎症、腹主动脉及其分支 闭塞、外周血管病症、闭塞性动脉病症、周围动脉粥样硬化疾病(peripheral atherlosclerotic disease)、血栓闭塞性脉管炎、机能性周围动脉病症、雷诺氏现象和疾病、手足发绀、红斑性肢痛、静脉疾病、血栓静脉炎、曲张静脉、动静脉瘘、淋巴水肿、脂肪水肿、不稳定心绞痛、再灌注损伤、泵后综合征(post pumpsyndrome)、缺血-再灌注损伤等。这样的方法可任选地包括施用有效量的包含至少一种抗IL-6抗体的组合物或药物组合物于需要这样的调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患者。
所述IL-6有关的传染病包括但不限于至少一种的：急性或慢性细菌感染、急性或慢性寄生或传染过程、包括细菌、病毒和真菌感染、HTV感染/HIV神经病变、脑膜炎、肝炎(如甲型、乙型或丙型等)、败血性关节炎、腹膜炎、肺炎、会厌炎、大肠杆菌0157：h7、溶血性尿毒症综合征/溶栓性血小板减少性紫癜、疟疾、登革出血热、利什曼病、麻风病、中毒性休克综合征、链球菌肌炎、气性坏疽、结核分支杆菌、鸟分枝杆菌胞内寄生菌、卡氏肺囊虫性肺炎、盆腔炎症性疾病、睾丸炎/附睾炎、军团杆菌、莱姆病、甲型流感、EB病毒、病毒相关的噬血细胞综合征、病毒性脑炎/无菌脑膜炎、肠道病毒71型手足口病等。
所述IL-6有关的恶性病包括但不限于至少一种的：白血病、急性白血病、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性淋巴细胞性白血病、B-细胞、T-细胞或FAB ALL、急性骨髓性白血病(AML)、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)、淋巴瘤、霍奇金病、恶性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波济氏肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组织细胞增多症、瘤外综合征/恶性高钙血(特发性)综合征、实体瘤、膀胱癌、乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、头癌、颈癌、遗传性非息肉癌、何杰金(氏)淋巴瘤、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰癌、前列腺癌、肾细胞癌、睾丸癌、腺癌、肉瘤、恶性黑色素瘤、血管瘤、肿瘤转移性疾病，癌有关的骨吸收、癌有关的骨痛等；癌症转移的抑制；癌症恶病质的改进。
所述IL-6有关的神经疾病包括但不限于至少一种的：神经变性疾病、多发性硬化症、偏头痛、AIDS痴呆综合征、脱髓鞘性病，例如多 发性硬化和急性横贯性脊髓炎；锥体束外和小脑病症，例如皮质脊髓系统损害；基底神经节病症；运动机能亢进的运动障碍，例如亨廷顿氏舞蹈病和老年性舞蹈病；药物诱发的运动障碍，例如为阻断CNS多巴胺受体的药物所诱发的那些病症；运动机能减退的运动障碍，例如帕金森病；进行性前核麻痹(Progressive supranucleo Palsy)；小脑结构损害；脊髓小脑变性，例如脊髓性共济失调，弗里德赖希(氏)共济失调，小脑皮质变性，多系统变性病(Mencel，Dejerine-Thomas，Shi-Drager和Machado-Joseph)；全身性病症(雷弗素姆(氏)病，abetalipoprotemia，共济失调，毛细血管扩张和线粒体多系统病症)；脱髓鞘核病症(demyelinating core disorders)，例如多发性硬化，急性横贯性脊髓炎；以及运动单元病症例如神经性肌萎缩(前角细胞变性，例如肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩和青少年脊髓性肌萎缩)；阿尔茨海默氏病；中年人中的唐氏综合征；弥漫性Lewy体疾病；Lewy体型老年性痴呆；韦尼克-科尔萨科夫综合征；慢性醇中毒；克罗伊茨费尔特-雅各布病；亚急性硬化性全脑炎、Hallerrorden-Spatz病；拳击员痴呆；神经外伤(如脊髓损伤、脑损伤、脑震荡、重复性脑震荡)；疼痛；炎性痛；孤独症；抑郁症和重度抑郁症；中风；认知障碍；癫痫等。这样的方法可任选地包括施用有效量的包含至少一种TNF抗体或特定部分或变体的组合物或药物组合物于需要这样的调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患者。参见如the Merck Manual，第16版，Merck & Company，Rahway，NJ(1992)。
所述IL-6有关的创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症包括但不限于，至少一种的：与包括牙周外科手术、拔牙、牙髓治疗、牙齿植入物的插入、牙齿修复术的应用和使用的口腔外科手术有关的身体损伤或外伤；或其中创伤为选自无菌创伤、挫伤、割伤、裂伤、非穿透伤、开放性创伤、贯通创伤、穿破创伤、刺伤、染毒创伤、梗塞形成和皮下创伤；或其中创伤为选自缺血性溃疡、缺血性溃疡、瘘管、严重咬伤、热灼伤和供体部位创伤；或其中创伤为口疮创伤、外伤性创伤或疱疹有关的创伤。
如本发明中所使用的，术语“Fab片段”由一条轻链和CH1以及 一条重链的可变区组成。Fab分子的重链不能与另一条重链分子形成二硫键。
如本发明中所使用的，术语“Fc”区含有两个包含抗体的CH1和CH2结构域的重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键以及通过CH3结构域的疏水相互作用保持在一起。
如本发明中所使用的，术语“Fab’片段”含有一条轻链和一条重链的部分(其含有VH结构域和CH1结构域以及还有CH1与CH2结构域之间的区域的部分)，以便可在两个Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’) 2分子。
如本发明中所使用的，术语“F(ab’) 2片段”含有两条轻链和两条含有CH1与CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，以便在两条重链之间形成链间二硫键。F(ab’) 2片段从而由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个Fab’片段组成。
如本发明中所使用的，术语“Fv区”包含来自重链和轻链的可变区，但缺乏恒定区。
如本发明中所使用的，术语“Fd”片段意指由VH和CH 1结构域组成的抗体片段(Ward等人，Nature 341：544-546(1989))。
如本发明中所使用的，术语“dAb”片段(Ward等人，Nature 341：544-546(1989))由VH结构域组成。
如本发明中所使用的，术语“Fab’-SH”是本文对Fab’的命名，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基携带游离硫醇基团。
如本发明中所使用的，术语“Fab/c”片段是免疫球蛋白经胃蛋白酶消化形成的抗体裂解中间产物，其兼有Fab和Fc区的优点，即具有扩散能力强，体内代谢清除慢的特点，并能保持高度亲和力(刘建军，《细胞与分子免疫学杂志》，1989(4)：29-29)。
如本发明中所使用的，术语“单链抗体”是其中重链与轻链可变区通过柔性接头连接来形成单条多肽链(其形成抗原结合区)的Fv分子(参见，例如，Bird等人，Science.242：423-426(1988)和Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.90：5879-5883(1988))。单链抗体在国际专利申请公开号WO 88/01649和美国专利U.S.P 4,946,778和U.S.P 5,260,203(所述 国际专利申请公开号和美国专利号的公开内容通过引用并入)中进行了详细描述。
如本发明中所使用的，术语“结构域抗体”是只含有重链的可变区或轻链的可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在一些情况下，两个或更多个VH区通过肽接头共价地连接，以生成多价结构域抗体(特别是双价结构域抗体)。双价结构域抗体的两个VH区可靶向相同或不同的抗原。
如本发明中所使用的，术语“双价抗原结合蛋白”或“双价抗体”包含两个抗原结合位点。在一些情况下，两个结合位点具有相同抗原特异性。双价抗体可以是双特异性的。
如本发明中所使用的，术语“多特异性抗原结合蛋白”或“多特异性抗体”是靶向不止一种抗原或表位的抗原结合蛋白或抗体。
如本发明中所使用的，术语“双特异性”、“双重特异性”或“双功能性”抗原结合蛋白或抗体是分别具有两个不同的抗原结合位点的杂交抗原结合蛋白或抗体。双特异性抗体是一种多特异性抗原结合蛋白或多特异性抗体，并且可通过多种方法产生，包括，但不限于杂交瘤的融合或Fab’片段的连接。参见，例如，Songsivilai和Lachmann，1990，Clin.Exp.Immunol.79：315-321；Kostelny等人，1992，J.Immunol.148：1547-1553。双特异性抗原结合蛋白或抗体的两个结合位点将结合两个不同的表位，所述表位存在于相同或不同的蛋白质靶标上。
非人类(例如鼠)抗体的“人源化”形式为含有最小限度的来源于非人类免疫球蛋白序列的嵌合抗体。人源化抗体的大部分为人免疫球蛋白，其中受体抗体的高变区残基被具有所需特异性、亲和力和能力的非人类物种高变区的残基置换，非人类物种例如有小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类。在某些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区残基被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体可包含不在受体抗体或供体抗体中存在的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体性能。
当提及配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，“特异性”结合是指在蛋白和/或其它生物试剂的异质群体中确定是否存在所述蛋白例如IL-6的结合反应。因此，在所指定的条件下，特定的配体/抗原与特定 的受体/抗体结合，并且并不以显著量与样品中存在的其它蛋白结合。
如本发明中所使用的，术语“人源化抗体”是指，人源免疫球蛋白(受体抗体)的全部或部分CDR区被一非人源抗体(供体抗体)的CDR区替换后得到的抗体或抗体片段，其中的供体抗体可以是具有预期特异性、亲和性或反应性的非人源(例如，小鼠、大鼠或兔)抗体。此外，受体抗体的框架区(FR)的一些氨基酸残基也可被相应的非人源抗体的氨基酸残基替换，或被其他抗体的氨基酸残基替换，以进一步完善或优化抗体的性能。关于人源化抗体的更多详细内容，可参见例如，Jones et al.，Nature，321：522 525(1986)；Reichmann et al.，Nature，332：323 329(1988)；Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2：593 596(1992)；和Clark，Immunol.Today 21：397 402(2000)。
如本文中使用的，术语“相似性”或“序列相似性”、“同一性”是指两个或更多个蛋白质或多肽分子的序列之间的关系，如通过比对和比较序列测定的。“百分比同一性”意指被比较的分子中的氨基酸之间的相同残基的百分比，并且可基于待比较的最小的分子的大小来计算。为了进行这些计算，必须通过特定的数学模型或计算机程序(即，“算法”)来解决比对中的缺口(如果有的话)。当用于多肽时，术语″大体上的同一性″，是指两个肽序列，当例如使用程序GAP或BESTFIT，利用程序提供的缺省缺口权重，进行最佳对齐时，共有至少70％、75％或80％的序列同一性，至少90％或95％的序列同一性，和至少97％、98％或99％的序列同一性。在某些情况下，不相同的残基位点相异在于保守氨基酸置换。″保守氨基酸置换″是这样的置换，即其中氨基酸残基被具有拥有相似化学性质(例如，电荷或正在水性)的侧链R基团的另一个氨基酸残基置换。一般地，保守氨基酸置换将基本上不改变蛋白质的功能性质。在其中两个或更多个氨基酸序列彼此相异在于保守置换的情况下，可上调百分比序列同一性以就置换的保守性质进行修正。用于进行该调整的方法对于本领域技术人员来说是熟知的。参见例如Pearson，Methods Mol.Biol.243：307-31(1994)。具有拥有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括1)脂肪族羟基侧链：甘氨酸、丙氨酸、缅氨酸、亮氨酸和异亮氨酸：2)脂肪族羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸：3)含酰胺侧链：天冬酰胺 和谷氨酰胺：4)芳香族侧链：苯丙氨酸、醋氨酸和色氨酸：5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸：6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；和7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。保守氨基酸置换组是缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
附图说明
图1：重组人IL-6的SDS-PAGE图。
图2：杂交瘤细胞株140-4降低下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平。
图3：人源化单克隆抗体HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d对于人IL-6的亲和力。
图4：人源化单克隆抗体HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d对于IL-6与IL-6R的结合的抑制作用
图5：人源化单克隆抗体HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d抑制IL-6刺激的p-Stat3(Tyr705)的磷酸化。
图6：人源化抗体抑制rhIL-6刺激的HepG2细胞的SAA分泌。
图7：人源化抗体与各种属IL-6的交叉反应结果，图7A为人源化抗体对恒河猴IL-6的交叉反应、图7B为(人源化抗体对小鼠IL-6的交叉反应，和图7C为人源化抗体对大鼠IL-6的交叉反应。
具体实施方式
下面通过实施例详细描述本发明。本领域的普通技术人员可以理解，下述实施例仅是用于举例说明的目的。本发明的精神和范围由权利要求所限定。
实施例1.人IL-6的制备
通过构建人IL-6原核表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导IL-6表达。包涵体蛋白经变性复性，通过镍柱纯化制备人IL-6蛋白，用于小鼠免疫、克隆筛选及功能鉴定。
①人IL-6原核表达载体的构建
首先通过基因工程手段合成人源IL-6目标序列(南京金斯瑞合成)，序列从自然人IL-6的30位Val开始，到212位Met共183个氨基酸(SEQ ID NO：1)，在C端增加6个His，可以与镍柱中的氯化镍结合，从而可以通过离子亲和层析进行纯化，并在两端增加NdeI和XhoI两个酶切位点。将合成的人源IL-6和表达载体pET22b(+)(南京金斯瑞提供)均通过NdeI和XhoI进行双酶切，回收人源IL-6目的片段和表达载体片段，进行连接，转化，通过PCR和酶切方法鉴定阳性克隆，最后通过测序验证表达载体的正确性，命名为pET22b-rhIL-6-His。采用质粒提取试剂盒抽提质粒用于转化。
②IPTG诱导表达及包涵体变复性
pET22b-hIL-6-His转化大肠杆菌BL21(DE3)，挑取单克隆，在含有氨苄青霉素(50μg/mL)的5ml LB培养液中37℃培养过夜。过夜菌1∶100接种至相应新鲜的培养基中37℃培养，待细菌生长至OD600为0.6时，加入0.1mM IPTG(Amresco，0487)，37℃诱导表达6小时。
IPTG诱导表达之后，呈现包涵体状态，不可溶。包涵体洗涤和溶解方法如下：菌体重悬于包涵体超声缓冲液(20mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5mol/L NaCl、1mmol/L EDTA)进行超声破碎后，将包涵体沉淀用包涵体洗涤缓冲液(20mmol/L Tris-HCl pH 8.0，0.5mol/L NaCl，2mol/L尿素，2％Triton)清洗两次。随后，包涵体溶解在包涵体溶解缓冲液(8M Urea，25mM Tris，150mM NaCl，25mM DTT，pH 8.0)中，室温搅拌5-6小时或过夜，离心收集上清液。
将溶解的包涵体蛋白调浓度至1mg/ml，1ml装入透析袋中，透析袋置于140ml透析外液(6M脲素，200mM精氨酸，25mM Tris(pH8.0)，150mM NaCl，2mM还原型谷胱甘肽(GSH)，1mM氧化型谷胱甘肽(GSSG))，4℃静置透析过夜。倒出上述50ml透析外液，补入50ml稀释液1(600mM精氨酸，25mM Tris(pH8.0)，150mM NaCl，2mM GSH，1mM GSSG)。此时外液的尿素浓度为4M。4℃透析6小时。倒出75ml透析外液，补入75ml稀释液1，尿素终浓度为2M。4℃透析6小时。更换透析液为200ml透析外液B(400mM精氨酸，25mM Tris，150mM NaCl， 2mM GSH，1mM GSSG)，4℃透析过夜。倒出100ml透析外液，补入100ml稀释液2(25mM Tris，150mM NaCl)，4℃透析6小时。倒出100ml透析外液，补入100ml稀释液2，4℃透析6小时。换新鲜1L稀释液2，透析过夜。
③rhIL-6-His的纯化
Ni-NTA sepharose 6 Fast Flow(GE Health Care，17-5318-02)后，在25mM Tris-HCl(pH8.0)，150mM NaCl的平衡溶液中平衡。然后将hIL-6-His复性蛋白上样挂柱，用洗涤溶液(25mM Tris-HCl(pH8.0)，150mM NaCl，50mM咪唑)洗柱。最后洗脱溶液(25mM Tris-HCl(pH8.0)，150mM NaCl，300mM咪唑)洗脱柱上的蛋白。
④rhIL-6-His的鉴定
BCA法(Applygen，P1151-1)测定蛋白含量，浓度可达1mg/ml以上。SDS-PAGE法检测蛋白纯度(参见图1)。纯度可达95％以上。
实施例2.小鼠免疫和血清中抗体效价测定
使用rhIL-6-His作为抗原对KM小鼠进行免疫。免疫用抗原(rhIL-6-His)来自实施例1，KM小鼠购自北京通利华实验动物技术有限公司。免疫途径为皮下多点注射，免疫剂量为100μg/200μl/只小鼠，共免疫了5只小鼠。首次免疫将100μg rhIL-6-His与100μl弗氏完全佐剂(Sigma，F5881)混合，第二次免疫和第三次免疫将100μg rhIL-6-His与100μl弗氏不完全佐剂(Sigma，F5506)混合，第四次(加强)免疫用100μg rhIL-6-His，不含佐剂。四次免疫时间分别是第0、14、28、39天。
5只小鼠分别在第三次免疫后(第35天)，眼球采血，通过ELISA的方法测定免疫小鼠血清中抗人IL-6抗体的效价。首先，用包被缓冲液(NaHCO 38.4g/L，pH 9.6)稀释实施例1中rhIL-6-Hiss至1μg/ml，100μl/孔加入96孔ELISA板(Corning，Acton，MA)，4度过夜。次日，用PBST(0.5‰)洗板3次，加入封闭液(3％BSA in 1×PBS)室温封闭1小时。洗板3次，将上述小鼠血清用0.5％BSA/PBS从1∶1000开始4倍稀释，空白孔为0.5％BSA/PBS，100μl/孔加入ELISA板中，室温孵 育2小时，洗板3次，加入终浓度为1μg/ml的羊抗鼠IgG(H+L)-HRP(ProteinTech，SA00001-1)，室温孵育1小时。洗板3次，加入TMB(Zuman Bio，ZD311)显色液室温显色10-20分钟，加入终止液，在酶标仪(BioTek，ELx808)上450nm波长下读取吸光值。OD值大于空白孔的2倍定义为阳性克隆，血清在最高稀释倍数时，OD值越高，表明对人IL-6的免疫反应性越强。
经检测，第三次免疫后，4号小鼠血清效价为1∶512000，其余小鼠均达到1∶128000。
实施例3.杂交瘤的制备
在最后一针加强免疫后(第42天)，取最高血清滴度的4号小鼠的脾脏，在生理盐水中碾磨后取富含B细胞的悬浮液，在融合剂PEG(Sigma，P7181)的作用下与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。将融合细胞分至15块96孔细胞培养板中，在含有HAT(Sigma，H0262)的20％胎牛血清RPMI-1640全培养基(Thermo，31800089)中置于5％CO 2，37℃条件下培养一周。
实施例4.杂交瘤阳性克隆的筛选
①酶联免疫吸附法(ELISA)筛选与抗原hIL-6的结合活性强的杂交瘤阳性克隆
用重组蛋白人rhIL-6-His被ELISA板进行第一轮阳性细胞株的筛查。第一轮筛选后，选择OD值＞1.0的331株阳性杂交瘤单克隆。
将一筛后的331株阳性细胞株，用rhIL-6-His进行第二轮ELISA阳性细胞株筛选，以及按照常规方法进行His标签蛋白的交叉筛选和IgM亚型的排除筛选。选择保留针对rhIL-6-His阳性、His标签蛋白阴性的非IgM的细胞株。最终选择保留250株杂交瘤细胞株。
②酶联免疫吸附法(ELISA)筛选与天然IL-6结合活性强的杂交瘤阳性克隆
rhIL-6-His抗原用PBS(pH＝8.6)稀释至2μg/ml，按照100μl/孔加 入酶标板中，4℃包被过夜，清洗板后加入3％BSA 37℃封闭1小时。洗板后加入50μl/孔LPS(10ug/mL)刺激的条件培养基与50μl/孔上述步骤筛选获得杂交瘤的培养液上清，在37℃条件下孵育1小时。PBST洗板后，加入山羊抗小鼠IgG抗体(ProteinTech，SA00001-1)，PBST洗板后，加入TMB显色液(Zuman Bio，ZD311)37℃孵育15分钟显色，在酶标仪(BioTek，ELx808)上450nm波长下读取吸光值，选择OD值差异较大的50株杂交瘤进行后续筛选。
③蛋白质免疫印迹(Western Blot)筛选与rhIL-6中和活性强的杂交瘤阳性克隆
取不同体积上述杂交瘤阳性克隆的腹水与25ng/ml rhIL-6-His混合于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中37℃孵育2小时。然后将混合物加入DLD-1细胞
Figure PCTCN2019108733-appb-000001
CCL-221 TM，37℃孵育30分钟，以PBS洗涤3次后，加入RIPA裂解液裂解细胞，收集蛋白。蛋白样品经SDS-PAGE电泳后，Western Blot检测p-STST3(Tyr705)(Cell Signaling，52075)磷酸化水平，β肌动蛋白作为对照。
由图2可见，克隆140-4可阻碍IL-6与受体IL-6R结合，抑制gp130信号转导，降低其下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平。
将杂交瘤细胞株140-4于2018年9月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCC No.16389。
实施例5.鼠源单克隆抗体的获得
将杂交瘤克隆140-4细胞总数量培养到10 7个细胞，1000rpm离心10分钟收集细胞，并以Trizol试剂盒(CWBio，CW0580S)提取总RNA。以所述RNA为模板，合成第一链cDNA(CWBio，CW0744M)后，以第一链cDNA为后续模板扩增杂交瘤细胞所对应的可变区DNA序列。扩增反应中所使用的引物序列与抗体可变区第一框架区和恒定区互补，参考(Larrick，J.W.，et al.(1990)，Scand.J.Immunol.，32：121-128和Coloma，J.J.et al.，(1991)BioTechniques，11，152-156)。所用Taq酶 (NEB，M0491S)。
SEQ ID NO：2：鼠源单克隆抗体的重链氨基酸序列；
SEQ ID NO：3：鼠源单克隆抗体的轻链氨基酸序列；
SEQ ID NO：4：鼠源单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列；
SEQ ID NO：5：鼠源单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列；
SEQ ID NO：6：鼠源单克隆抗体重链CDR1序列；
SEQ ID NO：7：鼠源单克隆抗体重链CDR2序列；
SEQ ID NO：8：鼠源单克隆抗体重链CDR3序列；
SEQ ID NO：9：鼠源单克隆抗体轻链CDR1序列；
SEQ ID NO：10：鼠源单克隆抗体轻链CDR2序列；
SEQ ID NO：11：鼠源单克隆抗体轻链CDR3序列。SEQ ID NO：12：鼠源单克隆抗体重链FR1序列
SEQ ID NO：13：鼠源单克隆抗体重链FR2序列
SEQ ID NO：14 鼠源单克隆抗体重链FR3序列
SEQ ID NO：15 鼠源单克隆抗体重链FR4序列
SEQ ID NO：16 鼠源单克隆抗体轻链FR1序列
SEQ ID NO：17 鼠源单克隆抗体轻链FR2序列
SEQ ID NO：18 鼠源单克隆抗体轻链FR3序列
SEQ ID NO：19 鼠源单克隆抗体轻链FR4序列
SEQ ID NO：20 鼠源单克隆抗体重链核苷酸序列
SEQ ID NO：21 鼠源单克隆抗体轻链核苷酸序列
SEQ ID NO：22 鼠源单克隆抗体重链可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：23 鼠源单克隆抗体轻链可变区核苷酸序列
实施例6.鼠源抗体的人源化改造及性能验证
根据上述获得的杂交瘤细胞140-4分泌的抗体的可变区序列，进行人源化改造，获得具体序列如下：
SEQ ID NO：24 人源化轻链L1氨基酸序列
SEQ ID NO：25 人源化轻链L1核苷酸序列
SEQ ID NO：26 人源化轻链L1可变区氨基酸序列
SEQ ID NO；27 人源化轻链L1可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：28 人源化轻链L1可变区FR1氨基酸序列
SEQ ID NO：29 人源化轻链L1可变区FR2氨基酸序列
SEQ ID NO：30 人源化轻链L1可变区FR3氨基酸序列
SEQ ID NO：31 人源化轻链L1可变区FR4氨基酸序列
SEQ ID NO：32 人源化轻链L2氨基酸序列
SEQ ID NO：33 人源化轻链L2核苷酸序列
SEQ ID NO：34 人源化轻链L2可变区氨基酸序列
SEQ ID NO；35 人源化轻链L2可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：36 人源化轻链L2可变区FR1氨基酸序列
SEQ ID NO：37 人源化轻链L2可变区FR2氨基酸序列
SEQ ID NO：38 人源化轻链L2可变区FR3氨基酸序列
SEQ ID NO：39 人源化轻链L2可变区FR4氨基酸序列
SEQ ID NO：40 人源化轻链L3氨基酸序列
SEQ ID NO：41 人源化轻链L3核苷酸序列
SEQ ID NO：42 人源化轻链L3可变区氨基酸序列
SEQ ID NO；43 人源化轻链L3可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：44 人源化轻链L3可变区FR1氨基酸序列
SEQ ID NO：45 人源化轻链L3可变区FR2氨基酸序列
SEQ ID NO：46 人源化轻链L3可变区FR3氨基酸序列
SEQ ID NO：47 人源化轻链L3可变区FR4氨基酸序列
SEQ ID NO：48 人源化重链H2氨基酸序列
SEQ ID NO：49 人源化重链H2核苷酸序列
SEQ ID NO：50 人源化重链H2可变区氨基酸序列
SEQ ID NO；51 人源化重链H2可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：52 人源化重链H2可变区FR1氨基酸序列
SEQ ID NO：53 人源化重链H2可变区FR2氨基酸序列
SEQ ID NO：54 人源化重链H2可变区FR3氨基酸序列
SEQ ID NO：55 人源化重链H2可变区FR4氨基酸序列
SEQ ID NO：56 人源化重链H3氨基酸序列
SEQ ID NO：57 人源化重链H3核苷酸序列
SEQ ID NO：58 人源化重链H3可变区氨基酸序列
SEQ ID NO；59 人源化重链H3可变区核苷酸序列
SEQ ID NO：60 人源化重链H3可变区FR1氨基酸序列
SEQ ID NO：61 人源化重链H3可变区FR2氨基酸序列
SEQ ID NO：62 人源化重链H3可变区FR3氨基酸序列
SEQ ID NO：63 人源化重链H3可变区FR4氨基酸序列
将上述轻链和重链的核苷酸序列分别由HindIII和ECOR I酶切后，连入pCDNA3.1(Invitrogen，V79020)质粒中，构建表达载体。其中轻链和重链的组合如下：L1/H2，L1/H3，L2/H3和L3/H3。
转染前24小时，用293培养基(珠海凯瑞，K03252)将293F(珠海凯瑞)稀释至密度为3.0×10 6个细胞/ml。于恒温摇床130转/分，37℃，5％CO 2条件下培养，使得转染当天的细胞密度(血球板计数法)为4.0-6.0×10 6个细胞/ml。为确保最佳转染效果，细胞活力(台盼蓝染色法)应大于97％。
(以转染100ml细胞悬液为例)，准备两支15ml的无菌离心管，在其中一支加入5ml KPM(珠海凯瑞，K03125L)和100μg无菌质粒DNA，轻轻吹打混匀；取另一支加入5ml KPM和500μl TA-293(珠海凯瑞，K20001)转染试剂，轻轻吹打混匀；将含有转染试剂的离心管中所有液体转移至含质粒的离心管中，轻轻吹打混匀；室温下静置10分钟制备出质粒-载体复合物；从恒温摇床中取出细胞，边摇边加入制备好的质粒-载体复合物，放回CO 2恒温摇床中培养。转染24小时后可加入600μl 293细胞蛋白表达增强剂(KE-293)(珠海凯瑞，K30001)和瞬时转染营养添加剂(KT-Feed 50×)(珠海凯瑞，K40001)以增加产物表达量；转染后第5天左右收集上清液，冷冻离心机9000转/分离心20分钟，收集上清液进行下一步蛋白纯化。
上述含抗体的293F细胞上清液，经离心后使用蛋白A(Protein A)柱(GE Healthcare Bio-Sciences，17-5080-02)捕获IgG1型抗体，用 50mM柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH＝3.0)洗脱，收集洗脱物(0.5ml)，加入100μl 1M Tris-HCL缓冲液(pH＝)中和至中性，经10K透析膜(Generay，M1915)在磷酸盐缓冲液PBS中透析后，OD280nm测定蛋白含量。过滤除菌后-80℃保存。获得4个有中和活性的抗体HZ-0408a(L1+H2)、HZ-0408b(L1+H3)、HZ-0408c(L2+H3)和HZ-0408d(L3+H3)。
实施例7.酶联免疫吸附法(ELISA)测定人源化抗体的亲和力
rhIL-6-His抗原用PBS(pH＝8.6)稀释至1μg/ml，按照100μl/孔加入酶标板中，4℃包被过夜。PBST洗板4次后加入3％BSA 300μl/孔，37℃封闭2小时。再用PBST洗板1次，分别加入100μl/孔不同浓度的人源化抗体(50ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.00064ug/ml)及Siltuximab(Janssen，HEI15015.D)(1250ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.016ug/ml)，在37℃孵育2小时。PBST洗板4次，加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的山羊抗人IgG抗体(ProteinTech，SA00001-1)，37℃孵育1小时。PBST洗板4次，加入100μl/孔TMB显色液(Zuman Bio，ZD311)，37℃孵育15分钟显色后加入50μl/孔终止液(1M硫酸)，在酶标仪(BioTek，ELx808)上450nm波长下读取吸光值。
图3显示，四个单克隆抗体HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d对于人IL-6的亲和力均明显高于Siltuximab。
抗体名称 EC 50(μg/mL)
HZ-0408a 0.16
HZ-0408b 0.09
HZ-0408c 0.18
HZ-0408d 0.39
Siltuximab 67.29
实施例8.酶联免疫吸附法(ELISA)测定人源化抗体抑制IL-6与IL-6R的结合
rhIL-6R(义翘神州，10398-H02H)抗原用PBS(pH＝8.6)稀释至1.5μg/ml，分别按照100μl/孔加入酶标板A中，4℃包被过夜。PBST洗板4次后加入3％BSA 300μl/孔，37℃封闭2小时。在酶标板B中加入50μl/孔不同浓度的人源化抗体(50ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.0032ug/ml)及Siltuximab(1250ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.08ug/ml)与50μl/孔rhIL-6-His(1μg/ml)结合，在37℃条件下孵育2小时。用PBST洗1次酶标板A，将酶标板B中的混合液加入酶标板A中，在37℃条件下孵育1小时。PBST洗4次酶标板A，加入100μl/孔HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗His抗体(ProteinTech，HRP-66005)，37℃孵育1小时。PBST洗板4次，加入100μl/孔TMB显色液(Zuman Bio，ZD311)37℃孵育15分钟显色，加入50μl/孔终止液(1M硫酸)，在酶标仪(BioTek，ELx808)上450nm波长下读取吸光值。
图4显示，四个单克隆抗体HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d对于IL-6与IL-6R的结合的抑制作用均明显高于Siltuximab。
抗体名称 IC 50(μg/mL)
HZ-0408a 0.72
HZ-0408b 0.53
HZ-0408c 1.29
HZ-0408d 3.04
Siltuximab 12.46
实施例9.人源化抗体对IL-6刺激的DLD-1细胞STAT-3磷酸化的抑制
将上述一定浓度的人源化抗体(32ug/ml起始，2倍梯度稀释至2ug/ml)和Siltuximab(64ug/ml起始，2倍梯度稀释至2ug/ml)与10ng/ml rhIL-6-His分别混合37℃孵育2小时。然后将混合物加入DLD-1细胞
Figure PCTCN2019108733-appb-000002
CCL-221 TM，37℃孵育30分钟，以PBS洗涤3次后，加入RIPA裂解液裂解细胞，收集蛋白。蛋白样品经SDS-PAGE电泳后，Western Blot检测p-STAT3(Tyr705)(Cell Signaling，52075)的磷酸化水平。
图5可见，HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d均能够较低浓度(HZ-0408a 2μg/ml，HZ-0408b 2μg/ml，HZ-0408c 8μg/ml，HZ-0408d 32μg/ml)抑制IL-6刺激的p-Stat3(Tyr705)的磷酸化，而Siltuximab只有在作用浓度达到64μg/ml时才能够明显抑制IL-6刺激的p-Stat3(Tyr705)的磷酸化。
实施例10.人源化抗体抑制rhIL-6刺激的HepG2细胞的SAA分泌
人肝癌细胞HepG2(中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心，3111C0001CCC000802)以2.25×10 5细胞/孔接种至24孔板，置于MEM NEAA培养基(Thermo，41500034)中培养约24小时。将一定浓度的人源化抗体(100ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.0064ug/ml)和Siltuximab(2500ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.0064ug/ml)与100ng/mL rhIL-6-His和200ng/mL rhIL-6R(义翘神州，10398-H02H)混合孵育30分钟，加入25ng/ml IL-1β(义翘神州，10139-HNAE)混匀。将上述混合液加入HepG2细胞，培养48小时，收集培养液上清。使用ELISA试剂盒(R&D，DY3019-05)测定上清中SAA。
图6可见，HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c、HZ-0408d和Siltuximab均能够以浓度依赖的方式抑制rhIL-6刺激的HepG2细胞的SAA分泌。其中，100μg/mL的HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c、HZ-0408d和Siltuximab分别作用于rhIL-6刺激的HepG2细胞，SAA的浓度分别是30.5±9.5ng/mL、-2.5±6.5ng/mL、12.5±9.5ng/mL、85±22ng/mL和148±7ng/mL。
实施例11.人源化抗体的亲和力常数测定
ForteBio Blitz生物分子相互作用分析(ForteBio)仪检测HZ-0408a、HZ-0408b、HZ-0408c和HZ-0408d以及Siltuximab对于人IL-6的亲和力。测定的亲和力常数见下表。
抗体名称 KD Ka(1/Ms)
HZ-0408a 4.429e-9 1.285e5
HZ-0408b 1.075e-9 2.333e5
HZ-0408c 6.488e-9 7.433e4
HZ-0408d 2.457e-9 9.317e4
Siltuximab 1.438e-8 2.892e4
           
           
           
实施例12.人源化抗体与大小鼠及猴IL-6的交叉反应
恒河猴IL-6(义翘神州，90197-CNAE)、小鼠IL-6(义翘神州，50136-MNAE)和大鼠IL-6(义翘神州，80076-RNAE)分别用PBS(pH＝8.6)稀释至1μg/ml，按照100μl/孔加入酶标板中，4℃包被过夜。PBST洗板4次后加入3％BSA 300μl/孔，37℃封闭1小时。再用PBST洗板2次，加入100μl/孔不同浓度的人源化抗体(10ug/ml起始，5倍梯度稀释至0.000128ug/ml)，在37℃条件下孵育2小时。PBST洗板4次，加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的山羊抗人IgG抗体(Proteintech，SA00001-1)，37℃孵育1小时。PBST洗板4次，加入100μl/孔TMB显色液(Zuman Bio，ZD311)37℃孵育15分钟显色，在酶标仪(Bio-Rad，Model 680 Micro reader)上450nm波长下读取吸光值。结果见图7A(人源化抗体对恒河猴IL-6的交叉反应)、7B(人源化抗体对小鼠IL-6的交叉反应)和7C(人源化抗体对大鼠IL-6的交叉反应)。

Claims (27)

  1. 抗体或其抗原结合片段，特别地，所述抗体或其抗原结合片段结合IL6，优选人IL6，其中：(1)所述抗体包含：
    HCDR1，其包含SEQ ID NO：6所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
    HCDR2，其包含SEQ ID NO：7所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
    HCDR3，其包含SEQ ID NO：8所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
    并且所述抗体还包含：
    LCDR1，其包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸，或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
    LCDR2，其包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
    LCDR3，其包含SEQ ID NO：11所示的序列，与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成。
  2. 权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括：
    (1)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
    (ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：5所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
    (2)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：50所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：50所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
    (ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：26所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
    (3)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
    (ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：26所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
    (4)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、 3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
    (ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：34所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；或
    (5)(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和
    (ii)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
    SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列，或
    与SEQ ID NO：42所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。
  3. 权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区和轻链可变区分别由以下核苷酸序列所编码：
    (1)(i)SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：22所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％， 93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
    (ii)SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：23所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
    (2)(i)SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：51所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
    (ii)SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
    (3)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
    (ii)SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：27所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列；
    (4)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列，和
    (ii)SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：35所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的序列；或
    (5)(i)SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：59所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的 核苷酸序列，和
    (ii)SEQ ID NO：43所示的核苷酸序列，或
    与SEQ ID NO：43所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或
    与SEQ ID NO：43所示的核苷酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守突变(优选置换，插入或缺失)的核苷酸序列。
  4. 权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体还包含重链可变区的框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3和FR-H4，和轻链可变区的框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3和FR-L4，其中
    (1)FR-H1包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：12所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其列组成；
    FR-H2包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列或与SEQ ID NO：13所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H3包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列或与SEQ ID NO：14所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H4包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：15所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：15所示 的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；和
    FR-L1包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列或与SEQ ID NO：16所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L2包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列或与SEQ ID NO：17所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L3包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列或与SEQ ID NO：18所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；FR-L4包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列或与SEQ ID NO：19所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    (2)FR-H1包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列或与SEQ ID NO：52所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：52所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H2包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列或与SEQ ID NO：53所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：53所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H3包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列或与SEQ ID NO：54所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H4包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列或与SEQ ID NO：55所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：55所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；和
    FR-L1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列或与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-L2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列或与SEQ ID NO：29所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-L3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列或与SEQ ID NO：30所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-L4包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列或与SEQ ID NO：31所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    (3)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
    FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；和
    FR-L1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：28所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：29所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：30所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L4包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：31所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    (4)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成，和
    FR-L1包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：36所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L2包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：37所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L3包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：38所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L4包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：39所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；或
    (5)FR-H1包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：60所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：60所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H2包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：61所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H3包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：62所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-H4包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：63所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成，和
    FR-L1包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：44所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L2包含SEQ ID NO：45的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：45所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L3包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：46所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成；
    FR-L4包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：47所示的序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与SEQ ID NO：47所示的氨基酸序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列或由其组成。
  5. 权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含选自以下重链和轻链组合的氨基酸序列，或由其组成：
    (1)SEQ ID NO：2的氨基酸序列和SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
    (2)SE ID NO：48的氨基酸序列和SEQ ID NO：24的氨基酸序列；
    (3)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：24的氨基酸序列；
    (4)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：32的氨基酸序列；或
    (5)SEQ ID NO：56的氨基酸序列和SEQ ID NO：40的氨基酸序列。
  6. 权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链和轻链分别由以下核苷酸序列所编码：
    (1)SEQ ID NO：20的核苷酸序列和SEQ ID NO：21的核苷酸序列；
    (2)SE ID NO：49的核苷酸序列和SEQ ID NO：25的核苷酸序列；
    (3)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：25的核苷酸序列；
    (4)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：33的核苷酸序列；或
    (5)SEQ ID NO：57的核苷酸序列和SEQ ID NO：41的核苷酸序列。
  7. 权利要求1-6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是人源化抗体、嵌合抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。
  8. 权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的恒定区是人源化的，优选来自人IgG，更优选IgG1或IgG4。
  9. 权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的重链恒定区采用Ig gamma-1或Ig gamma-4链C区，优选采用Ig gamma-1链C区；轻链恒定区采用Ig kappa链C区，更优选GenBank登记号为ACCESSION：P01834的Ig kappa链C区。
  10. 权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab，Fab′，F(ab′) 2，Fd，Fv，dAb，Fab/c，互补决定区(CDR)片段，单链抗体(例如，scFv)，双价抗体或结构域抗体。
  11. 分离的多肽，其选自以下各项组成的组：
    (1)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：6，7和8所示的序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含SEQ ID NO：9，10和11所示的序列；
    (2)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：9，10和11所示的序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含SEQ ID NO：6，7和8所示的序列；
    (3)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：4或50所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还分别对应包含选自SEQ ID NO：5或26所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
    (4)分离的多肽，其包含SEQ ID NO：58所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含选自SEQ ID NO：26，34或42所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；
    (5)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：5或26所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还对应包含选自SEQ ID NO：4或50所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列；或
    (6)分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：26，34或42所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，其中所述多肽作为抗人IL-6的抗体的一部分，特异性结合人IL-6，所述抗体还包含选自SEQ ID NO：58所示的序列或与所述序列具有至少90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。
  12. 分离的多核苷酸，其编码权利要求11中所述的分离的多肽。
  13. 载体，其包含权利要求12所述的分离的多核苷酸。
  14. 宿主细胞，其包含权利要求12所述的分离的多核苷酸或权利要求13所述的载体。
  15. 制备权利要求1-10任一项所述抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养权利要求14所述的宿主细胞。
  16. 抗体偶联物，其包含权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分，优选地，所述偶联部分选自纯化标签(如His标签)、细胞毒性剂，可检测的标记，放射性同位素、发光 物质、有色物质、酶或聚乙二醇。
  17. 多特异性抗体，优选双特异性抗体，其包括权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及针对其他抗原和/或其他抗原表位的抗体或抗原结合片段。
  18. 融合蛋白，其包含权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
  19. 药物组合物，包含权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白，任选地，还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。
  20. 权利要求19所述的药物组合物，所述药物组合物为适合于至少一种选自胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内(intracelebellar)、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、推注、阴道、直肠、含服、舌下、鼻内、或经皮的模式来使用接触或施用的剂型。
  21. 试剂盒，其包括权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白，优选地，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、发光物质、有色物质、酶。
  22. 权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测人IL-6在样品中的存在或其水平。
  23. 权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18 所述的融合蛋白在制备如下药物中的用途：
    阻断人IL-6与人IL-6R结合的药物，
    阻断人IL-6活性或下调其水平的药物，
    抑制gp130信号转导，降低其下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平的药物，或者
    阻断人IL-6与IL-6R结合所介导的细胞学生物学反应的药物。
  24. 权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断疲劳，恶病质，炎性疾病，自身免疫疾病，骨骼系统疾病，发热，癌症，心脏病，肥胖症，糖尿病，哮喘，阿尔茨海默病疾病，多中心性Castleman病，多发性硬化症和类风湿性关节炎的药物中的应用。
  25. 权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白，其用于预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断肥胖症，免疫相关疾病，心血管疾病，传染病，恶性病，神经疾病，创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症，
    其中优选地，
    所述IL-6有关的免疫相关疾病包括但不限于至少一种的
    (1)呼吸道疾病
    阻塞性气道疾病；哮喘；支气管炎；急性、变应性、萎缩性鼻炎和慢性鼻炎；膜性鼻炎；季节性鼻炎；结节病、农民肺和相关疾病、成人呼吸窘迫综合征、过敏性肺炎、纤维化肺和特发性间质性肺炎；新生儿慢性肺病；
    (2)骨和关节
    类风湿性关节炎、儿童类风湿性关节炎、全身发作的青少年类风湿性关节炎、青少年慢性关节炎、血清阴性脊椎关节炎(包括银屑病关节炎、强直性脊椎炎和莱特病)、贝切特病、舍格伦综合征、全身性硬化症、骨关节炎、痛风、骨质溶解；
    (3)皮肤
    银屑病、变应性接触性皮炎、接触性皮炎、特应性皮炎，其他湿疹性皮肤病、脂溢性皮炎、扁平苔藓、硬皮病、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、风疹、干皮病(angiodermas)、血管炎、红斑、皮肤嗜酸性细胞增多、葡萄膜炎、斑秃、变应性结膜炎和春季结膜炎(vernal vemal conjunctivitis)；
    (4)胃肠道
    胃溃疡、炎性肠病、溃疡性结肠炎、腹部疾病、直肠炎、嗜酸性肠胃炎、肥大细胞增生病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、抗磷脂综合征、产生远离内脏的影响，如偏头痛、鼻炎和湿疹的食品相关性变态反应；
    (5)移植物排斥
    移植物、移植物抗宿主病、任何器官或组织的同种异体移植物排斥(肾脏、心脏、肝脏、胰腺、肺、骨髓、皮肤、软骨、骨、小肠、胎儿胸腺、甲状旁腺、角膜)、任何器官或组织的异种移植物排斥
    (6)其他组织和全身性疾病
    恶病质、全身性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮、狼疮肾炎、抗磷脂综合征、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、系统性血管炎/韦格内氏肉芽肿症、肉样瘤病、睾丸炎/输精管切除术逆转过程、变应性/特应性疾病、过敏性接触性皮炎、全身炎症反应综合征、败血病综合征、革兰氏阳性败血症、革兰氏阴性败血症、培养物阴性败血症、真菌败血症、中性白细胞减少症发热、尿败血症、脑膜炎球菌血症，创伤/出血、烧伤、电离辐射暴露、急性胰腺炎、酒精诱导的肝炎、慢性炎症性病理、外科埋植剂的无菌松弛、肉样瘤病、镰状细胞性贫血、糖尿病、肾病、特应性疾病、超敏反应、花粉热、子宫内膜异位、全身过敏、恶性贫血、溶血性疾病、血小板减少(症)、抗受体超敏反应、格雷夫斯病、雷诺(氏)病、B型胰岛素抵抗性糖尿病、重症肌无力、抗体介导的细胞毒性、III型超敏反应、POEMS综合征(多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病和皮肤变化综合征)、多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、皮肤变化综合征、抗磷脂综合征、混合性结缔组织病、原发性阿狄森(氏)病、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、白斑病、血管炎、MI后心切开术综合征、IV型过敏症、胞 内生物体引起的肉芽肿、药物过敏、代谢病/自发病、威尔逊氏病、血色素沉着症、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、糖尿病性视网膜病、桥本甲状腺炎、下丘脑-垂体-肾上腺轴评估、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺炎、脑脊髓炎、纤维囊泡症、家族性噬血细胞淋巴组织细胞增多病(familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、皮肤用药病症、肾病综合征、肾炎、肾小球肾炎、急性肾功能衰竭、血液透析、尿毒症、中毒、先兆子痫、okt3疗法、抗cd3疗法、脱发、细胞因子疗法、化学疗法、放射疗法(如包括但不限于乏力、贫血、恶病质等)、慢性水杨酸盐中毒；
    所述心血管疾病包括但不限于至少一种的心脏stun综合征(cardiacstun syndrome)、心肌梗塞、充血性心力衰竭、中风、缺血性发作、出血、急性冠状动脉综合征、动脉硬化、动脉粥样硬化、再狭窄、糖尿病、糖尿病型黄斑水肿、糖尿病粥样硬化病(diabetic aterosclerotic disease)、高血压、动脉性高血压、肾血管性高血压、晕厥、休克，心血管系统梅毒、心力衰竭、肺(原)性心脏病、原发性肺动脉高压、心律失常、心房异位性博动、心房扑动、心房颤动(持续性或突发性)、灌注后综合征、心肺分流术炎症反应、紊乱性或多源性房性心动过速、规律性窄QRS心动过速、特殊心律失常、心室颤动、希氏束心律失常(His bundle arrythmias)、房室性传导阻滞、束支传导阻滞、心肌局部缺血性病症、冠状动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、心肌病、扩张性充血性心肌病、限制性心肌病、心脏瓣膜疾病、心内膜炎、心包疾病、心脏肿瘤、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、主动脉炎症、腹主动脉及其分支闭塞、外周血管病症、闭塞性动脉病症、周围动脉粥样硬化疾病(peripheral atherlosclerotic disease)、血栓闭塞性脉管炎、机能性周围动脉病症、雷诺氏现象和疾病、手足发绀、红斑性肢痛、静脉疾病、血栓静脉炎、曲张静脉、动静脉瘘、淋巴水肿、脂肪水肿、不稳定心绞痛、再灌注损伤、泵后综合征(post pumpsyndrome)、缺血-再灌注损伤；
    所述IL-6有关的传染病包括但不限于至少一种的：急性或慢性细菌感染、急性或慢性寄生或传染过程、包括细菌、病毒和真菌感染、HTV感染/HIV神经病变、脑膜炎、肝炎(如甲型、乙型或丙型等)、败血性关节炎、腹膜炎、肺炎、会厌炎、大肠杆菌0157：h7、溶血性尿毒症综合 征/溶栓性血小板减少性紫癜、疟疾、登革出血热、利什曼病、麻风病、中毒性休克综合征、链球菌肌炎、气性坏疽、结核分支杆菌、鸟分枝杆菌胞内寄生菌、卡氏肺囊虫性肺炎、盆腔炎症性疾病、睾丸炎/附睾炎、军团杆菌、莱姆病、甲型流感、EB病毒、病毒相关的噬血细胞综合征、病毒性脑炎/无菌脑膜炎、肠道病毒71型手足口病；
    所述IL-6有关的恶性病包括但不限于至少一种的：白血病、急性白血病、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性淋巴细胞性白血病、B-细胞、T-细胞或FAB ALL、急性骨髓性白血病(AML)、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)、淋巴瘤、霍奇金病、恶性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波济氏肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组织细胞增多症、瘤外综合征/恶性高钙血(特发性)综合征、实体瘤、膀胱癌、乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、头癌、颈癌、遗传性非息肉癌、何杰金(氏)淋巴瘤、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰癌、前列腺癌、肾细胞癌、睾丸癌、腺癌、肉瘤、恶性黑色素瘤、血管瘤、肿瘤转移性疾病，癌有关的骨吸收、癌有关的骨痛等；癌症转移的抑制；癌症恶病质的改进；
    所述IL-6有关的神经疾病包括但不限于至少一种的：神经变性疾病、多发性硬化症、偏头痛、AIDS痴呆综合征、脱髓鞘性病，例如多发性硬化和急性横贯性脊髓炎；锥体束外和小脑病症，例如皮质脊髓系统损害；基底神经节病症；运动机能亢进的运动障碍，例如亨廷顿氏舞蹈病和老年性舞蹈病；药物诱发的运动障碍，例如为阻断CNS多巴胺受体的药物所诱发的那些病症；运动机能减退的运动障碍，例如帕金森病；进行性前核麻痹(Progressive supranucleo Palsy)；小脑结构损害；脊髓小脑变性，例如脊髓性共济失调，弗里德赖希(氏)共济失调，小脑皮质变性，多系统变性病(Mencel，Dejerine-Thomas，Shi-Drager和Machado-Joseph)；全身性病症(雷弗素姆(氏)病，abetalipoprotemia，共济失调，毛细血管扩张和线粒体多系统病症)；脱髓鞘核病症(demyelinating core disorders)，例如多发性硬化，急性横贯性脊髓炎；以及运动单元病症例如神经性肌萎缩(前角细胞变性，例如肌萎缩性(脊髓) 侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩和青少年脊髓性肌萎缩)；阿尔茨海默氏病；中年人中的唐氏综合征；弥漫性Lewy体疾病；Lewy体型老年性痴呆；韦尼克-科尔萨科夫综合征；慢性醇中毒；克罗伊茨费尔特-雅各布病；亚急性硬化性全脑炎、Hallerrorden-Spatz病；拳击员痴呆；神经外伤(如脊髓损伤、脑损伤、脑震荡、重复性脑震荡)；疼痛；炎性痛；孤独症；抑郁症和重度抑郁症；中风；认知障碍；癫痫；
    所述IL-6有关的创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症包括但不限于，至少一种的：与包括牙周外科手术、拔牙、牙髓治疗、牙齿植入物的插入、牙齿修复术的应用和使用的口腔外科手术有关的身体损伤或外伤；或其中创伤为选自无菌创伤、挫伤、割伤、裂伤、非穿透伤、开放性创伤、贯通创伤、穿破创伤、刺伤、染毒创伤、梗塞形成和皮下创伤；或其中创伤为选自缺血性溃疡、缺血性溃疡、瘘管、严重咬伤、热灼伤和供体部位创伤；或其中创伤为口疮创伤、外伤性创伤或疱疹有关的创伤。
  26. 一种在体内或体外方法，包括施加包含权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白的细胞的步骤，或给予有需求的受试者以有效量的权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白的步骤，所述方法选自如下各项：
    阻断人IL-6与人IL-6R结合，
    阻断人IL-6活性或下调其水平，
    抑制gp130信号转导，降低其下游信号蛋白p-Stat3(Tyr705)的磷酸化水平，或者
    阻断人IL-6与IL-6R结合所介导的细胞学生物学反应。
  27. 预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断肥胖症，免疫相关疾病，心血管疾病，传染病，恶性病，神经疾病，创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症的方法，包括给需要的受试者施用权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求16所述的抗原偶联物，权利 要求17所述的多特异性抗体或权利要求18所述的融合蛋白，
    其中优选地，
    所述IL-6有关的免疫相关疾病包括但不限于至少一种的
    (1)呼吸道疾病
    阻塞性气道疾病；哮喘；支气管炎；急性、变应性、萎缩性鼻炎和慢性鼻炎；膜性鼻炎；季节性鼻炎；结节病、农民肺和相关疾病、成人呼吸窘迫综合征、过敏性肺炎、纤维化肺和特发性间质性肺炎；新生儿慢性肺病；
    (2)骨和关节
    类风湿性关节炎、儿童类风湿性关节炎、全身发作的青少年类风湿性关节炎、青少年慢性关节炎、血清阴性脊椎关节炎(包括银屑病关节炎、强直性脊椎炎和莱特病)、贝切特病、舍格伦综合征、全身性硬化症、骨关节炎、痛风、骨质溶解；
    (3)皮肤
    银屑病、变应性接触性皮炎、接触性皮炎、特应性皮炎，其他湿疹性皮肤病、脂溢性皮炎、扁平苔藓、硬皮病、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、风疹、干皮病(angiodermas)、血管炎、红斑、皮肤嗜酸性细胞增多、葡萄膜炎、斑秃、变应性结膜炎和春季结膜炎(vernal vemal conjunctivitis)；
    (4)胃肠道
    胃溃疡、炎性肠病、溃疡性结肠炎、腹部疾病、直肠炎、嗜酸性肠胃炎、肥大细胞增生病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、抗磷脂综合征、产生远离内脏的影响，如偏头痛、鼻炎和湿疹的食品相关性变态反应；
    (5)移植物排斥
    移植物、移植物抗宿主病、任何器官或组织的同种异体移植物排斥(肾脏、心脏、肝脏、胰腺、肺、骨髓、皮肤、软骨、骨、小肠、胎儿胸腺、甲状旁腺、角膜)、任何器官或组织的异种移植物排斥
    (6)其他组织和全身性疾病
    恶病质、全身性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮、狼疮肾炎、抗磷脂综合征、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、系统性血管炎/韦格内氏肉芽 肿症、肉样瘤病、睾丸炎/输精管切除术逆转过程、变应性/特应性疾病、过敏性接触性皮炎、全身炎症反应综合征、败血病综合征、革兰氏阳性败血症、革兰氏阴性败血症、培养物阴性败血症、真菌败血症、中性白细胞减少症发热、尿败血症、脑膜炎球菌血症，创伤/出血、烧伤、电离辐射暴露、急性胰腺炎、酒精诱导的肝炎、慢性炎症性病理、外科埋植剂的无菌松弛、肉样瘤病、镰状细胞性贫血、糖尿病、肾病、特应性疾病、超敏反应、花粉热、子宫内膜异位、全身过敏、恶性贫血、溶血性疾病、血小板减少(症)、抗受体超敏反应、格雷夫斯病、雷诺(氏)病、B型胰岛素抵抗性糖尿病、重症肌无力、抗体介导的细胞毒性、III型超敏反应、POEMS综合征(多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病和皮肤变化综合征)、多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、皮肤变化综合征、抗磷脂综合征、混合性结缔组织病、原发性阿狄森(氏)病、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、白斑病、血管炎、MI后心切开术综合征、IV型过敏症、胞内生物体引起的肉芽肿、药物过敏、代谢病/自发病、威尔逊氏病、血色素沉着症、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、糖尿病性视网膜病、桥本甲状腺炎、下丘脑-垂体-肾上腺轴评估、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺炎、脑脊髓炎、纤维囊泡症、家族性噬血细胞淋巴组织细胞增多病(familial hematophagocytic lymphohistiocytosis)、皮肤用药病症、肾病综合征、肾炎、肾小球肾炎、急性肾功能衰竭、血液透析、尿毒症、中毒、先兆子痫、okt3疗法、抗cd3疗法、脱发、细胞因子疗法、化学疗法、放射疗法(如包括但不限于乏力、贫血、恶病质等)、慢性水杨酸盐中毒；
    所述心血管疾病包括但不限于至少一种的心脏stun综合征(cardiacstun syndrome)、心肌梗塞、充血性心力衰竭、中风、缺血性发作、出血、急性冠状动脉综合征、动脉硬化、动脉粥样硬化、再狭窄、糖尿病、糖尿病型黄斑水肿、糖尿病粥样硬化病(diabetic aterosclerotic disease)、高血压、动脉性高血压、肾血管性高血压、晕厥、休克，心血管系统梅毒、心力衰竭、肺(原)性心脏病、原发性肺动脉高压、心律失常、心房异位性博动、心房扑动、心房颤动(持续性或突发性)、灌注后综合征、心肺分流术炎症反应、紊乱性或多源性房性心动过速、规律性 窄QRS心动过速、特殊心律失常、心室颤动、希氏束心律失常(His bundle arrythmias)、房室性传导阻滞、束支传导阻滞、心肌局部缺血性病症、冠状动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、心肌病、扩张性充血性心肌病、限制性心肌病、心脏瓣膜疾病、心内膜炎、心包疾病、心脏肿瘤、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、主动脉炎症、腹主动脉及其分支闭塞、外周血管病症、闭塞性动脉病症、周围动脉粥样硬化疾病(peripheral atherlosclerotic disease)、血栓闭塞性脉管炎、机能性周围动脉病症、雷诺氏现象和疾病、手足发绀、红斑性肢痛、静脉疾病、血栓静脉炎、曲张静脉、动静脉瘘、淋巴水肿、脂肪水肿、不稳定心绞痛、再灌注损伤、泵后综合征(post pumpsyndrome)、缺血-再灌注损伤；
    所述IL-6有关的传染病包括但不限于至少一种的：急性或慢性细菌感染、急性或慢性寄生或传染过程、包括细菌、病毒和真菌感染、HTV感染/HIV神经病变、脑膜炎、肝炎(如甲型、乙型或丙型等)、败血性关节炎、腹膜炎、肺炎、会厌炎、大肠杆菌0157：h7、溶血性尿毒症综合征/溶栓性血小板减少性紫癜、疟疾、登革出血热、利什曼病、麻风病、中毒性休克综合征、链球菌肌炎、气性坏疽、结核分支杆菌、鸟分枝杆菌胞内寄生菌、卡氏肺囊虫性肺炎、盆腔炎症性疾病、睾丸炎/附睾炎、军团杆菌、莱姆病、甲型流感、EB病毒、病毒相关的噬血细胞综合征、病毒性脑炎/无菌脑膜炎、肠道病毒71型手足口病；
    所述IL-6有关的恶性病包括但不限于至少一种的：白血病、急性白血病、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性淋巴细胞性白血病、B-细胞、T-细胞或FAB ALL、急性骨髓性白血病(AML)、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)、淋巴瘤、霍奇金病、恶性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波济氏肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组织细胞增多症、瘤外综合征/恶性高钙血(特发性)综合征、实体瘤、膀胱癌、乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、头癌、颈癌、遗传性非息肉癌、何杰金(氏)淋巴瘤、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰癌、前列腺癌、肾细胞癌、睾丸癌、腺癌、肉瘤、恶性黑色素瘤、血管瘤、肿瘤转移性疾病，癌有关的骨吸收、癌 有关的骨痛等；癌症转移的抑制；癌症恶病质的改进；
    所述IL-6有关的神经疾病包括但不限于至少一种的：神经变性疾病、多发性硬化症、偏头痛、AIDS痴呆综合征、脱髓鞘性病，例如多发性硬化和急性横贯性脊髓炎；锥体束外和小脑病症，例如皮质脊髓系统损害；基底神经节病症；运动机能亢进的运动障碍，例如亨廷顿氏舞蹈病和老年性舞蹈病；药物诱发的运动障碍，例如为阻断CNS多巴胺受体的药物所诱发的那些病症；运动机能减退的运动障碍，例如帕金森病；进行性前核麻痹(Progressive supranucleo Palsy)；小脑结构损害；脊髓小脑变性，例如脊髓性共济失调，弗里德赖希(氏)共济失调，小脑皮质变性，多系统变性病(Mencel，Dejerine-Thomas，Shi-Drager和Machado-Joseph)；全身性病症(雷弗素姆(氏)病，abetalipoprotemia，共济失调，毛细血管扩张和线粒体多系统病症)；脱髓鞘核病症(demyelinating core disorders)，例如多发性硬化，急性横贯性脊髓炎；以及运动单元病症例如神经性肌萎缩(前角细胞变性，例如肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩和青少年脊髓性肌萎缩)；阿尔茨海默氏病；中年人中的唐氏综合征；弥漫性Lewy体疾病；Lewy体型老年性痴呆；韦尼克-科尔萨科夫综合征；慢性醇中毒；克罗伊茨费尔特-雅各布病；亚急性硬化性全脑炎、Hallerrorden-Spatz病；拳击员痴呆；神经外伤(如脊髓损伤、脑损伤、脑震荡、重复性脑震荡)；疼痛；炎性痛；孤独症；抑郁症和重度抑郁症；中风；认知障碍；癫痫；
    所述IL-6有关的创伤、外伤或组织损害或有关的慢性病症包括但不限于，至少一种的：与包括牙周外科手术、拔牙、牙髓治疗、牙齿植入物的插入、牙齿修复术的应用和使用的口腔外科手术有关的身体损伤或外伤；或其中创伤为选自无菌创伤、挫伤、割伤、裂伤、非穿透伤、开放性创伤、贯通创伤、穿破创伤、刺伤、染毒创伤、梗塞形成和皮下创伤；或其中创伤为选自缺血性溃疡、缺血性溃疡、瘘管、严重咬伤、热灼伤和供体部位创伤；或其中创伤为口疮创伤、外伤性创伤或疱疹有关的创伤。
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