WO2020036308A1 - 신규 진세노사이드, 및 이를 포함하는 항염 조성물 - Google Patents

신규 진세노사이드, 및 이를 포함하는 항염 조성물 Download PDF

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WO2020036308A1
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ginsenoside
compound
inflammatory
present
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PCT/KR2019/007815
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홍용덕
정현우
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㈜아모레퍼시픽
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    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton

Definitions

  • Panax ginseng C.A.Meyer is a plant belonging to the genus Ogapi and ginseng, and has been used for more than 2,000 years in Korea, China, and Japan.
  • Representative physiologically active ingredients of ginseng are saponins, polysaccharides, peptides, cytosterols, polyacetelins and fatty acids, and saponins of ginseng are called ginsenosides.
  • ginseng The effects and effects of ginseng on the central nervous system, anti-carcinogenic and anti-cancer activity, immune function control, antidiabetic, liver anti-inflammatory effect, cardiovascular disorders and anti-arteriosclerosis, blood pressure control, menopausal disorders And effects on osteoporosis, antistress and anti-fatigue, antioxidant activity and anti-aging effect are known.
  • the ginsenoside has a large difference in its content and composition depending on the roots, leaves, fruits, flowers, seeds, etc. of ginseng, but the known efficacy is as ginseng root, that is to the root portion of ginseng, ginseng There is a lack of research on other parts of ginseng except Geun.
  • Inflammation is a complex immune response to defend against living organisms from harmful stimuli such as mechanical injury, pathogens or stimuli.
  • stimulated inflammatory cells become pro-inflammatory such as interleukin (IL) -1 ⁇ , IL-6 and tumor necrosis factor (TNF) - ⁇ to regulate the functionality of cells and tissues.
  • Inflammatory mediators including pro-inflammatory cytokines, nitric oxide (NO) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) are expressed at higher levels.
  • pro-inflammatory cytokines, nitric oxide (NO) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) are expressed at higher levels.
  • abnormal regulation of the inflammatory response can also be triggered by non-pathogenic means. For example, free fatty acids can bind to Toll-like receptor 4 and elicit a pro-inflammatory response.
  • Low grade chronic inflammation is closely associated with the development of various metabolic disorders such as atherosclerosis, cancer, fatty liver disease, insulin resistance, rheumatoid arthritis, type 2 diabetes and vascular disease. Therefore, it is important to maintain a balanced inflammatory state to stay healthy.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a novel ginsenoside having a good anti-inflammatory efficacy and a composition comprising the same.
  • the invention provides (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24 -Epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24- epoxy-6a, 12b, 25-triol), pharmaceutically acceptable salts thereof, hydrates or solvates thereof.
  • the invention provides (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24 -Epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24- Epoxy-6a, 12b, 25-triol), salts thereof, hydrates or solvates thereof are provided as an anti-inflammatory composition comprising an active ingredient.
  • the invention provides a (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside- for use in the preparation of an anti-inflammatory composition.
  • a (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside- for use in the preparation of an anti-inflammatory composition.
  • the invention provides (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24
  • An anti-inflammatory method comprising administering to the subject an effective amount of an epoxy-6a, 12b, 25-triol, a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof.
  • the present invention provides (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside as an active ingredient for use in an anti-inflammatory composition.
  • the present invention may provide a novel ginsenoside, a salt thereof, a hydrate or solvate thereof, and a composition comprising the same, having an excellent effect on anti-inflammatory.
  • the new ginsenosides exhibit significantly better anti-inflammatory efficacy than ginsenosides known to have conventional anti-inflammatory efficacy.
  • FIG. 1 is a diagram illustrating a separation process of a novel ginsenoside (Cpd. 10) of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2a is a diagram showing the chemical structure of the compounds 1 to 3 fractionated in ginseng seed extract.
  • Figure 2b is a diagram showing the chemical structure of the compounds 4 to 6 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2c is a diagram showing the chemical structure of Compound 7 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2d is a diagram showing the chemical structure of Compound 8 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2e is a diagram showing the chemical structure of the compound 9 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2f is a diagram showing the chemical structure of the compound 10 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2g is a diagram showing the chemical structure of Compound 11 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2h is a diagram showing the chemical structure of Compound 12 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2i is a diagram showing the chemical structure of Compound 13 fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 2j is a diagram showing the chemical structure of Compound 14 fractionated from ginseng seed extract.
  • 2K is a diagram showing the chemical structure of Compound 15 fractionated from Ginseng seed extract.
  • Figure 2l is a diagram showing the chemical structure of the compound 16 fractionated in ginseng seed extract.
  • Figure 3a is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of the compound 1 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 3b is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of the compound 2 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 3c is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of the compound 3 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 3d is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of compound 4 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 3e is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of the compound 5 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 3f is a diagram showing the spectroscopic evidence and structure of compound 6 corresponding to the previously known ginsenosides of the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • Figure 4 is a diagram showing the 1 H-NMR spectrum of the compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 5 is a diagram showing 13 C-NMR spectra of compounds 10 corresponding to novel ginsenosides of the present invention among compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 6 is a diagram showing a COSY spectrum of Compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 7 is a diagram showing an HSQC spectrum of Compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 8 is a diagram showing an HMBC spectrum of Compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 9 is a diagram showing an MS spectrum of Compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 10 is a diagram showing the core HMBC correlation of compound 10 corresponding to the novel ginsenoside of the present invention among the compounds fractionated from ginseng seed extract.
  • FIG. 11 shows compounds 1 to 6 (GS # 01-06) and compounds 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • Figures comparing IL-1 ⁇ expression levels. (*** P ⁇ 0.001 vs. LPS, ** P ⁇ 0.01 vs. LPS, * P ⁇ 0.05 vs. LPS)
  • FIG. 12 shows compounds 1 to 6 (GS # 01-06) corresponding to ginsenosides and compounds 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • Figures comparing IL-6 expression levels. (*** P ⁇ 0.001 vs. LPS, ** P ⁇ 0.01 vs. LPS, * P ⁇ 0.05 vs. LPS)
  • FIG. 13 shows compounds 1 to 6 (GS # 01-06) corresponding to the conventionally known ginsenosides and compounds 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • Figures comparing iNOS expression levels. (*** P ⁇ 0.001 vs. LPS, ** P ⁇ 0.01 vs. LPS, * P ⁇ 0.05 vs. LPS)
  • FIG. 14 is a diagram comparing IL-1 ⁇ expression levels of ginsenosides Rg1, Rg3, and Rb1, which are red ginseng index components, and Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • GS # 10 Compound 10
  • FIG. 15 is a diagram comparing IL-6 expression levels of ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1, which are red ginseng indicator components, and compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 which are red ginseng indicator components
  • compound 10 GS # 10
  • FIG. 16 is a diagram comparing iNOS expression levels of ginsenosides Rg1, Rg3, and Rb1, which are red ginseng index components, and compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • FIG. (*** P ⁇ 0.001 vs. LPS, ** P ⁇ 0.01 vs. LPS, * P ⁇ 0.05 vs. LPS)
  • FIG. 17 is a diagram comparing cytokine secretion in TNF- ⁇ treated with ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1, which are the red ginseng index components, and Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 which are the red ginseng index components
  • Compound 10 Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenosides of the present invention.
  • FIG. 18 is a diagram comparing cytokine secretion in IL-1 ⁇ according to the treatment of ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 of the red ginseng index component and Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenoside of the present invention.
  • GS # 10 Compound 10
  • FIG. 19 is a diagram comparing cytokine secretion in IL-6 according to the treatment of ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 of the red ginseng index component and Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenoside of the present invention.
  • GS # 10 Compound 10
  • FIG. 20 is a diagram comparing the degree of inhibition of carbon monoxide (NO) production according to the ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 of the red ginseng index component and Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenoside of the present invention.
  • NO carbon monoxide
  • FIG. 21 is a diagram showing cell viability (% Viable cells) of Compound 10 (GS # 10) corresponding to the novel ginsenoside of the present invention.
  • FIG. (*** P ⁇ 0.001 vs. (-), ** P ⁇ 0.01 vs (-), * P ⁇ 0.05 vs. (-))
  • the present invention provides a novel ginsenoside (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3 -Won-20,24-epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3- one-20,24-epoxy-6a, 12b, 25-triol), pharmaceutically acceptable salts thereof, hydrates thereof, or solvates thereof.
  • the invention provides (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20, 24-epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24 -epoxy-6a, 12b, 25-triol), a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof may be provided as an anti-inflammatory composition comprising as an active ingredient.
  • An example is (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar- for use in the preparation of an anti-inflammatory composition.
  • the use of 3-membered 20,24-epoxy-6a, 12b, 25-triol, pharmaceutically acceptable salts thereof, hydrates thereof, or solvates thereof may be provided.
  • One embodiment is (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24-epoxy-
  • An anti-inflammatory method can be provided comprising administering to a subject an effective amount of 6a, 12b, 25-triol, a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof.
  • An embodiment is (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar as an active ingredient for use in an anti-inflammatory composition.
  • 3-membered 20,24-epoxy-6a, 12b, 25-triol, pharmaceutically acceptable salts thereof, hydrates thereof, or solvates thereof may be provided.
  • salts means salts according to one aspect of the invention that are pharmaceutically acceptable and have the desired pharmacological activity of the parent compound.
  • the salt is formed from (1) an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, or the like; Or acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, succinic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, 3- (4-hydroxybenzoyl) Benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, 1,2-ethane-disulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, 4-chlorobenzenes
  • hydrate refers to a compound to which water is bound, and is a broad concept including an inclusion compound having no chemical bonding force between water and the compound.
  • solvate means a higher order compound produced between molecules or ions of a solute and molecules or ions of a solvent.
  • the ginsenoside is a novel triterpene saponin, a molecular formula of C 42 H 70 O 15 has the following chemical structure.
  • the novel ginsenoside was named "Pseudomonas ginsenoside RT 8 (pseudoginsenoside RT 8)" or "PG-RT 8".
  • the ginsenoside may be extracted from ginseng seed. More specifically, the ginsenoside may be isolated from the ginseng seed extract, but is not limited thereto. In one embodiment, the ginseng of the carrot seeds are jinseng Panax (Panax ginseng CA Meyer).
  • fraction is meant to include those extracted or fractionated from ginseng seed extract, and may be water, organic solvents, and the like, and any method known to those skilled in the art may be applied.
  • the fraction may be after the extraction.
  • extract includes all materials irrespective of the extraction method or the type of the component, as long as the substance is obtained by extracting the components therein from natural products.
  • extract includes both the thing which extracted the component melt
  • fraction includes fractionating or extracting a specific substance or extract using a certain solvent, and extracting them again with a specific solvent. Fractionation methods and extraction methods can be any method known to those skilled in the art.
  • the ginsenoside may be isolated from ginseng seed methanol and butanol soluble extract. Specifically, the ginsenoside may be detected and separated by analyzing methanol and butanol soluble extracts of ginseng seed using HPLC-ESI-Q-TOF-MS. Not all triterpenes and steroidal saponins can be observed by HPLC-UV or HPLC-ELSD from ginseng seed crude extract because the main component of ginseng seed extract is lipid.
  • the present invention includes the ginsenoside, a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof so that the pro-inflammatory genes Interleukin-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , and interleukin are present.
  • a composition that inhibits the expression of one or more genes of -6 (Interleukin-6, 1L-6) and Inducible NO synthase (iNOS) can be provided.
  • the present invention comprises the ginsenoside, a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof to prevent the production and secretion of inflammatory cytokines, which are inflammation mediated signaling proteins.
  • the present invention provides a nitric oxide (Nitrix Oxide) which is a mediator of an inflammatory response by including the ginsenoside, a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof, or a solvate thereof.
  • NO can be provided a composition that inhibits the production.
  • the present invention can provide a composition having a remarkably good anti-inflammatory effect compared to ginsenosides known to have conventional anti-inflammatory efficacy.
  • the present invention may comprise the active ingredient in an amount of 0.0001 to 99.9% by weight based on the total weight of the composition.
  • the composition is an embodiment of the active ingredient at least 0.0001 wt%, at least 0.0005 wt%, at least 0.001 wt%, at least 0.01 wt%, at least 0.1 wt%, at least 1 wt%, based on the total weight of the composition At least 3%, at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8%, at least 9%, at least 10%, at least 15%, 20 At least 25%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, 70 It may include, but not limited to, by weight percent, at least 75 weight percent, at least 80 weight percent, at least 85 weight percent, at least 90 weight percent, at least 95 weight percent, or at least 99.9
  • the composition may be 100% by weight, 99% by weight, 95% by weight, 90% by weight, 85% by weight, 80% by weight, 75% by weight of the active ingredient based on the total weight of the composition. Or less, 70 or less, 65 or less, 60 or less, 55 or less, 50 or less, 50 or less, 45 or less, 40 or less, 35 or less, 30 or less, 25 or less Or less, 20 or less, 15 or less, 15 or less, 10 or less, 9 or less, 8 or less, 7 or less, 6 or less, 5 or less, 4 or less, 3 or less % Or less, 2% or less, 1% or less, 0.5% or less, 0.1% or less, 0.01% or less, 0.001% or less, or 0.0005% or less, but is not limited thereto. .
  • composition according to the embodiments of the present invention may be an external composition for skin containing the active ingredient.
  • skin refers to a tissue covering the body surface of an animal, and is a broad concept including not only tissues covering the body surface such as the face or body, but also the scalp and hair.
  • composition according to the embodiments of the present invention may be a cosmetic composition containing the active ingredient.
  • the composition may be formulated containing a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base.
  • a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base are all formulations suitable for topical application, for example emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) and non-obtained by dispersing an oil phase in solution, gels, solids, pasty anhydrous products, aqueous phases. It may be provided in the form of an ionic vesicle dispersant or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or concealed stick. It may also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
  • These compositions can be prepared according to conventional methods in the art.
  • composition according to the embodiments of the present invention may be a food composition comprising the active ingredient.
  • the composition may be processed into functional foods such as fermented milk, cheese, yoghurt, juice, probiotic and health food including the active ingredient, and may be used in the form of various other food additives.
  • the composition may be a composition for health food.
  • the health food composition may be formulated as pills, capsules, tablets, granules, caramels or drinks.
  • it may be processed in the form of a liquid, powder, granules, tablets or tea bags.
  • the composition may be administered by various methods, such as simple drinking, injection, spray or squeeze.
  • the composition may contain other components and the like that can give a synergistic effect to the main effect within a range that does not impair the main effect of the present invention.
  • it may further include additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials for improving the physical properties.
  • additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials for improving the physical properties.
  • supplementary ingredients such as water soluble vitamins, oil soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides and seaweed extract may be further included.
  • the above ingredients may be suitably selected and formulated by those skilled in the art according to the dosage form or purpose of use, and the amount thereof may be selected within a range that does not impair the object and effect of the present invention.
  • the added amount of the components may be from 0.0001% to 99.9% by weight based on the total weight of the composition.
  • composition according to the embodiments of the present invention may be a pharmaceutical composition comprising the active ingredient.
  • the pharmaceutical composition may further contain pharmaceutical adjuvants such as preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, salts for regulating osmotic pressure and / or buffers and other therapeutically useful substances.
  • the pharmaceutical composition may be an oral dosage form, and the oral dosage form may include, for example, tablets, pills, hard and soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, powders, powders, granules, Granules, pellets and the like.
  • These formulations in addition to the active ingredients, include surfactants, diluents (e.g. lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and glycine), glidants (e.g. silica, talc, stearic acid and magnesium or calcium salts thereof) and Polyethylene glycol).
  • Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium salt It may contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeteners.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium salt It may contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeteners.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally starch, agar, alginic acid or its sodium salt
  • pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, color
  • the pharmaceutical composition may be a parenteral administration, and the parenteral administration may be rectal, topical, subcutaneous, transdermal dosage form.
  • the formulation may be, but is not limited to, injections, drops, ointments, lotions, gels, creams, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, patches, and the like.
  • the dosage of the pharmaceutical composition will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of skill in the art. For example, the dosage may range from 1 mg / kg / day to 10 g / kg / day or 5 mg / kg / day to 100 mg / kg / day, but the dosage may be used herein in any manner It is not intended to limit the scope of.
  • ginseng seeds Seeds of Panax ginseng
  • a mixer extracted with methanol, and fractionated stepwise using n-hexane, ethyl acetate, n-butanol, and the like.
  • HPCCC High Performance Counter-Current Chromatography
  • n-butanol fraction 114.64 g was intended to be divided by MPLC.
  • the conditions were divided into a total of 12 subfractions. Each fraction was separated again using HPCCC, High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Sephadex LH-20 column, and the like. Subsequently, 16 compounds were identified by identifying the structure using NMR (Nuclear magnetic resonance), UV (Ultraviolet rays), and MS (Mass spectrometry).
  • the 16 compounds isolated include ginsenoside Rg1 (compound 1), ginsenoside Rg2 (compound 2) and ginsenoside Re (compound 3), which are protopanaxatriol saponins; Ginsenoside Rd (compound 4), ginsenoside Rb1 (compound 5) and ginsenoside Rb2 (compound 6), which are protopanaxadiol saponins; Stigma-5-en-3-O- ⁇ -D-glucopyranoside (compound 7), stegma- which is a sterol glycosides 5,24 (28) -diene-3-O- ⁇ -D-glucopyranoside (Stigma-5,24 (28) -dien-3-O- ⁇ -D-glucopyranoside) (Compound 8) and stigma- 5,22-diene-3-O- ⁇ -D-glucopyranoside (Stigma-5,22-dien-3-O- ⁇ -D-glucopyranoside) (Compound 9); (20S
  • FIG. 1 A separation process of a novel ginsenoside according to an embodiment of the present invention corresponding to compound 10 is shown in FIG. 1.
  • Chemical structures of the 16 compounds are shown in FIGS. 2A to 2L, and spectroscopic evidence and chemical structures of the conventionally known ginsenosides of Compound 1-6 are shown in FIGS. 3A to 3F. .
  • Compound 10 was m / z 837.4617 [(M + Na) + calcd. In the cation Electrospray Ionization-Quadrupole-Time-of-Flight Mass Spectrometry (CSI) spectra. 837.4612] was isolated as a white amorphous powder showing the molecular formula of C 42 H 70 O 15 based on the sodiated pseudomolecular ion peak.
  • CSI Electrospray Ionization-Quadrupole-Time-of-Flight Mass Spectrometry
  • the 1 H NMR spectrum of the compound 10 is [ ⁇ H 1.86 (3H, s, H-28), 1.69 (3H, s, H-29), 1.47 (3H, s, H-27), 1.25 (6H, s , H-21, 26), 1.10 (3H, s, H-18), 0.81 (3H, s, H-30), 0.75 (3H, s, H-19)].
  • the aglycone of compound 10 is 8 methylene, 4 methines, 3 oxygen-containing methines [ ⁇ C 79.79 (C-6), 71.40 (C-12) and 86.09 (C-24)], five quaternary carbon atoms, two oxygenated quaternary carbon atoms [ ⁇ C 87.15 (C-20) and 70.78 (C-25)], eight methyl groups and carbonyl carbon [ ⁇ C 218.85 (C-3)].
  • Both sugar units are ⁇ -D-glucopyranosyl ( ⁇ -) from the coupling constants of the anomer protons at 1 H NMR spectra and 12 carbon resonances, together with acid hydrolysis data and gas chromatography (GC) analysis. D-glucopyranosyl) residues.
  • Glycoside linkages are heteronuclear with peaks at ⁇ H 6.02 (H-1 ′′) / ⁇ C 79.49 (C-2 ′) and ⁇ H 4.91 (H-1 ′) / ⁇ C 79.79 (C-6) It was determined by the combined correlation (HMBC), 2- O - ( ⁇ -D- glucopyranosyl) - ⁇ -D- glucopyranosyl (2- O - ( ⁇ -D -glucopyranosyl) - ⁇ -D-glucopyranosyl ) Residues are linked to C-6 of aglycone in pseudoginsengenin R1, each of the analytical spectra of Compound 10 and the key HBMC correlations are shown in Figures 4-10.
  • the chemical structure of Compound 10 was (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one- 20,24-epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20 , it was named 24-epoxy-6a, 12b, was determined to be 25-triol), Pseudomonas ginsenoside RT8 (pseudoginsenoside RT8, PG-RT 8).
  • ginseng seed extract the ginsenoside isolated from the PPT (P roto P anax T riol) series ginsenoside of ginsenoside Rg1 (Compound 1), ginsenoside Rg2 (compound 2), and ginsenosides Re (compound 3 ) Contains three hydroxyl groups in the ginsenoside backbone.
  • PPD P roto P anax D iol
  • ginsenoside Rd series ginsenoside of ginsenoside Rd
  • ginsenoside Rb1 Compound 5
  • ginsenoside Rb2 compound 6
  • Compound 10 which is a novelly isolated ginsenoside in the present invention, has a PPT-based backbone, but the terminal hydroxyl group of the backbone is ketone, and the linear chain of ginsenoside is furan. There is a structural difference in the structure cyclized to a ring (furan ring).
  • the molecular formula of the novelly isolated compound 10 in the present invention was C 42 H 70 O 15 , ESI-Q-TOF-MS, m / z was 837.4617 [M + Na] + , and 1 H, 13 C-NMR spectrum Is as shown in the following table.
  • RAW 264.7 macrophage lines purchased from ATCC were subjected to 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin / streptomycin (Sigma) in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Sigma). And incubated in a 5% CO 2 incubator. 7 g of ginsenosides (GS # 01-GS # 06, GS # 10; 10 ⁇ M each) in RAW 264.7 cells were pretreated for 2 hours and then lipopolysaccharide (LPS); inflammation-inducing group, Sigma 10 ng / ml was further treated for 6 hours.
  • FBS fetal bovine serum
  • PBS Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • IL-1 ⁇ and IL-6 have important homeostatic functions under normal conditions and are excessively produced in most inflammatory states, causing pathological changes in the human body and causing many inflammatory diseases.
  • iNOS is one of nitric oxide synthase isoforms that produce high levels of NO in the inflammatory response leading to cell death and tissue destruction.
  • the new ginsenoside compound 10 (GS # 10) of the present invention is a conventional ginsenoside compound 1-6 (GS # 1-6) as a comparative example of the present invention
  • GS # 1-6 a conventional ginsenoside compound 1-6
  • the novel ginsenoside PG-RT 8 of the present invention is far superior to the anti-inflammatory effect among ginsenoside-derived ginsenosides, showing a stronger anti-inflammatory than the known steroidal saponin (steroidal saponin) Means.
  • Ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 purchased from Sigma, which are red ginseng indicator components, as a comparative example of the present invention on RAW 264.7 macrophages, and GS # 10 (Ginseng seed extract, which is a novel ginsenoside as an example of the present invention) )
  • LPS lipid polysaccharide
  • RNA was extracted by a method similar to Test Example 1, and expression of inflammation-related genes was observed by qPCR after cDNA synthesis.
  • the chemical structure of ginsenoside Rg3 which is a comparative example of the present invention is as follows.
  • ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 the ginsenosides of the present invention, ginsenosides GS # 10 of the new anti-inflammatory effect of the present invention was shown to be much better, especially when compared to Rg1 GS # 10 anti-inflammatory effect of one embodiment of the invention was confirmed that about 10 times better than the anti-inflammatory efficacy of Rg1.
  • Example 2 the inhibitory effect of the expression of inflammatory response genes by GS # 10, the novel ginsenoside of the present invention, was confirmed. Subsequently, the inhibition of gene expression results in the production and secretion of inflammatory cytokines. It was examined through further experiments to determine if the inhibition.
  • RAW 264.7 macrophage lines were used in the same manner as in Example 2. Serum-free medium without FBS was used to measure the amount of cytokines secreted into the medium.
  • each ginsenoside was pretreated at a concentration of 1 and 10 ⁇ M for 2 hours, and after 6 hours of LPS at 10 ng / ml, only medium was collected and TNF- ⁇ (tumor necrosis factor- ⁇ ), interleukin-1 ⁇ (IL-1 ⁇ ), and IL-6 pro-inflammatory cytokine secretion measured using an enzyme-linked immunosorbent assay kit (abcam) It was.
  • ginsenosides Rg1, Rg3 and Rb1 corresponding to the red ginseng indicator component of the comparative example of the present invention and the novel ginsenoside GS of the embodiment of the present invention as shown in Test Example 2
  • the amount of secretion of inflammatory mediator signaling proteins by # 10 treatment was decreased, and in particular, the amount of secretion of inflammatory mediator signaling proteins treated with novel ginsenoside GS # 10, which is an embodiment of the present invention, was significantly reduced.
  • GS # 10 a novel ginsenoside of the present invention, was shown to have an excellent anti-inflammatory effect, compared to other ginsenosides. This greatly decreased.
  • GS # 10 a novel ginsenoside of the present invention, could inhibit the production of NO (Nitrix Oxide), a secondary messenger of the inflammatory response.
  • Ginsenoside GS # 10 (extracted from ginseng seeds) was treated for 1 hour at 1 and 10 ⁇ M, respectively, and then treated with LPS 10 ng / ml for 1 hour. NO produced during 1 hour was measured using a Greries reaction. In summary, 50 ⁇ l of sulfanilamide solution was added to 50 ⁇ l of each ginsenoside sample and then incubated for 10 minutes at room temperature protected from light.
  • N-1-napthylethylenediamine solution 50 ⁇ l was added to the mixture and incubated for additional 10 minutes at room temperature without light.
  • the anisotropic intensity of NO was measured using a Tecan Infinite® 200 Pro multiplate reader at a wavelength of 540 nm.
  • Sodium nitrite (NaNO 2 ) was used to generate the standard curve.
  • the production of NO in RAW264.7 macrophages showed a result consistent with the iNOS gene expression pattern in Test Example 2.
  • the dosage of GS # 10 a novel ginsenoside of the present invention, the NO production decreased, and in particular, the ginsenoside Rg1, Rg3, and Rb1, corresponding to the red ginseng index component of the present invention, were significantly more inhibited from NO production. Appeared to be excellent.
  • the novel ginsenoside GS # 10 which is an embodiment of the present invention, did not show cytotoxicity up to 50 ⁇ M.
  • novel ginsenoside PG-RT 8 which is an embodiment of the present invention, has various potent anti-inflammatory properties and has a pharmaceutical potential as an anti-inflammatory agent.
  • composition described in the table below it was prepared in a flexible method in a conventional manner.
  • a tablet was prepared by mixing 100 mg of ginsenoside PG-RT 8 , 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate, followed by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • a capsule was prepared by mixing 100 mg of ginsenoside PG-RT 8 , 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate, and then filling the gelatin capsule according to a conventional method for preparing a capsule.
  • ginsenoside PG-RT 8 50 mg of ginsenoside PG-RT 8 , 250 mg of anhydrous glucose and 550 mg of starch were mixed, molded into granules using a fluid bed granulator, and then filled into fabrics.
  • ginsenoside PG-RT 8 50 mg of ginsenoside PG-RT 8 , 10 g of glucose, 0.6 g of citric acid, and 25 g of liquid oligosaccharides are mixed, and 300 ml of purified water is added thereto, and 200 ml are filled in each bottle. After filling the bottle sterilized for 4-5 seconds at 130 °C to prepare a drink.
  • ginsenoside PG-RT 8 50 g of ginsenoside PG-RT 8 , 1.8 g of corn syrup, 0.5 g of skim milk, 0.5 g of soy lecithin, 0.6 g of butter, 0.4 g of vegetable hardened oil, 1.4 g of sugar, 0.58 g of margarine, and 20 mg of salt Caramel molding was carried out.
  • Vitamin A Acetate 70 ⁇ g Vitamin E 1.0 mg Vitamin B1 0.13 mg Vitamin B2 0.15 mg Vitamin B6 0.5 mg Vitamin B12 0.2 ⁇ g Vitamin c 10 mg Biotin 10 ⁇ g Nicotinic acid amide 1.7 mg Folic acid 50 ⁇ g Calcium Pantothenate 0.5 mg Mineral mixture Ferrous sulfate 1.75 mg Zinc oxide 0.82 mg Magnesium carbonate 25.3 mg Potassium phosphate monobasic 15 mg Dicalcium Phosphate 55 mg Potassium citrate 90 mg Calcium carbonate 100 mg Magnesium chloride 24.8 mg
  • composition ratio of the vitamin and inorganic mixture is a composition that is relatively suitable for health food, for example, the composition ratio may be arbitrarily modified, and the granules are prepared by mixing the above components according to a conventional health food production method. And it can be used for manufacturing a health food composition according to a conventional method.
  • ingredient content PG-RT 8 10 mg Citric acid 1000 mg oligosaccharide 100 g Plum concentrate 2 g Taurine 1 g Purified water Remaining amount Total volume 900 ml
  • the remaining amount of purified water was added to a total volume of 900 ml, and the above ingredients were mixed according to a conventional health beverage manufacturing method, and then stirred and heated at 85 ° C. for about 1 hour, and then the resulting solution was filtered and sterilized. After obtaining sterilized and sealed sterilized in 2l container can be used for the manufacture of healthy beverage composition.
  • Injections were prepared by conventional methods according to the compositions described in the table below.
  • the present invention can provide the following embodiments as an example.
  • (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24- Epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy -6a, 12b, 25-triol), pharmaceutically acceptable salts thereof, hydrates thereof or solvates thereof.
  • the second embodiment is (20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-damar-3-one-20,24- Epoxy-6a, 12b, 25-triol ((20S, 24R) -6-O- ⁇ -D-glucopyranosyl (1-> 2) - ⁇ -D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy -6a, 12b, 25-triol), a pharmaceutically acceptable salt thereof, a hydrate thereof or a solvate thereof can be provided as an anti-inflammatory composition comprising as an active ingredient.
  • the said active ingredient can provide the composition which has a structure of following General formula (1).
  • the said active ingredient can provide the composition extracted from ginseng seed.
  • the active ingredient includes interleukin-1 ⁇ and IL-1 ⁇ , and interleukin-6 and 1L-6.
  • iNOS inducible NO synthase
  • 6th Embodiment can provide the composition in any one or more of 2nd Embodiment-5th Embodiment WHEREIN:
  • the said active ingredient suppresses production
  • Embodiment 7th Embodiment can provide a composition in any one or more of 2nd Embodiment-6th Embodiment WHEREIN: The said active ingredient suppresses production
  • Embodiment 8th Embodiment can provide a composition in any one or more of 2nd Embodiment-7th embodiment containing the said active ingredient in 0.0001-99.9 weight% with respect to the total weight of a composition.
  • Embodiment 9th Embodiment can provide the composition as described in any one or more of 2nd Embodiment-8th Embodiment whose said composition is a skin external preparation composition.
  • 10th Embodiment can provide the composition in any one or more of 2nd Embodiment-9th Embodiment whose said composition is a cosmetic composition.
  • 11th Embodiment can provide the composition in any one or more of 2nd Embodiment-10th Embodiment whose said composition is a food composition.
  • 12th Embodiment can provide the composition in any one or more of 2nd-11th Embodiment whose said composition is a pharmaceutical composition.

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Abstract

본 명세서는 신규 진세노사이드인 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 이의 용매화물에 관한 것이다. 상기 신규 진세노사이드는 우수한 항염효과를 나타낸다.

Description

신규 진세노사이드, 및 이를 포함하는 항염 조성물
본 명세서는 신규 진세노사이드에 관하여 기술한다.
인삼은(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오가피과 인삼 속에 속하는 식물로 한국, 중국, 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약이다. 인삼의 대표적 생리활성 성분으로 사포닌, 다당류, 펩타이드, 시토스테롤, 폴리아세텔린 및 지방산이 알려져 있으며, 이 중 인삼의 사포닌을 진세노사이드(ginsenoside)라 한다. 인삼의 효능 및 효과로는 중추신경계에 대한 작용, 항발암 작용과 항암활성, 면역기능 조절작용, 항당뇨 작용, 간기능 항진효능, 심혈관 장해개선 및 항동맥경화 작용, 혈압조절 작용, 갱년기 장애 개선 및 골다공증에 미치는 효과, 항스트레스 및 항피로 작용, 항산화 활성 및 노화억제 효능 등이 알려져 있다. 상기 진세노사이드는 인삼의 뿌리, 잎, 열매, 꽃, 씨 등 부위에 따라 그 함량과 조성에 큰 차이가 있으나, 상기와 같이 알려진 효능은 대부분 인삼근, 즉 인삼의 뿌리부분에 대한 것으로서, 인삼근을 제외한 인삼 다른 부분에 대한 연구는 부족한 실정이다.
염증은 기계적 상해, 병원체 또는 자극과 같은 유해한 자극으로부터 살아있는 유기체를 방어하기 위한 복잡한 면역 반응이다. 상기와 같은 염증 유도체가 염증 프로세스를 개시시키면, 자극된 염증 세포는 세포 및 조직들의 기능성을 조절하기 위해 인터루킨(IL)-1β, IL-6 및 종양 괴사 인자 (TNF)-α와 같은 전-염증성 사이토 카인(pro-inflammatory cytokines), 일산화질소(NO) 및 유도성 일산화 질소 합성 효소(iNOS)를 포함하는 염증성 매개체를 더 높은 수준으로 발현시킨다. 그러나 염증 반응의 비정상적인 조절은 비병원성 수단에 의해서도 촉발될 수 있다. 예를 들어, 유리 지방산은 Toll-like receptor 4에 결합하여 전-염증성 반응을 유발할 수 있다. 낮은 등급의 만성 염증은 죽상 동맥 경화증, 암, 지방간 질환, 인슐린 저항성, 류마티스 관절염, 제 2 형 당뇨병 및 혈관 질환과 같은 다양한 대사 장애의 발병과 밀접한 관련이 있다. 따라서 건강을 유지하기 위해서는 균형 잡힌 염증 상태를 유지하는 것이 중요하다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
대한민국 공개특허공보 제10-2016-0086149호
일 관점에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 우수한 항염증 효능을 가지는 신규한 진세노사이드 및 이를 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 용매화물을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 염, 이의 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 항염증용 조성물의 제조에 사용하기 위한 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물의 용도를 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 대상에 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 항염증 방법을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 항염증용 조성물에 사용하기 위한 유효성분으로서 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 제공한다. 또한, 항염증을 위한 유효성분으로서 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물의 비치료적 화장 용도를 제공한다.
일 관점에서, 본 발명은 항염증에 우수한 효과를 가지는 신규 진세노사이드, 이의 염, 이의 수화물 또는 용매화물, 그리고 이를 포함하는 조성물을 제공할 수 있다. 상기 신규 진세노사이드는 종래 항염증 효능이 있는 것으로 알려진 진세노사이드에 비해 현저히 우수한 항염 효능을 나타낸다.
도 1은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드(Cpd. 10)의 분리과정을 도시한 도이다.
도 2a는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 1 내지 3의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2b는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 4 내지 6의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2c는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 7의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2d는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 8의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2e는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 9의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2f는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 10의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2g는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 11의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2h는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 12의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2i는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 13의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2j는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 14의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2k는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 15의 화학구조를 도시한 도이다.
도 2l은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 16의 화학구조를 도시한 도이다.
도 3a는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 1의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 3b는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 2의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 3c는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 3의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 3d는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 4의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 3e는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 5의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 3f는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 6의 분광학적 증거 및 구조를 도시한 도이다.
도 4는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 1H-NMR 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 5는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 13C-NMR 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 6은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 COSY 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 7은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 HSQC 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 8은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 HMBC 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 9는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 MS 스펙트럼을 도시한 도이다.
도 10은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10 의 핵심 HMBC 상관관계를 나타낸 도이다.
도 11은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 1 내지 6(GS#01-06)과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 IL-1β 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 12는 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 1 내지 6(GS#01-06)과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 IL-6 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 13은 인삼씨 추출물에서 분획된 화합물 중 기존에 알려진 진세노사이드에 해당하는 화합물 1 내지 6(GS#01-06)과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 iNOS 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 14는 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 IL-1β 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 15는 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 IL-6 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 16은 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 iNOS 발현 수준을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 17은 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10) 처리에 따른 TNF-α에서의 사이토카인 분비량을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 18은 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10) 처리에 따른 IL-1β에서의 사이토카인 분비량을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 19는 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10) 처리에 따른 IL-6에서의 사이토카인 분비량을 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 20은 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1과 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10) 처리에 따른 일산화탄소(NO) 생산량 억제정도를 비교한 도이다. (*** P < 0.001 vs. LPS, ** P < 0.01 vs. LPS, * P < 0.05 vs. LPS)
도 21은 본 발명의 신규 진세노사이드에 해당하는 화합물 10(GS#10)의 세포 생존율(%Viable cells)을 나타낸 도이다. (*** P < 0.001 vs. (-), ** P < 0.01 vs (-), * P < 0.05 vs. (-))
이하, 첨부한 도면들을 참조하여, 본 출원의 실시예들을 보다 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 본 출원에 개시된 기술은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 출원의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 도면에서 각 구성요소를 명확하게 표현하기 위하여 구성요소의 폭이나 두께 등의 크기를 다소 확대하여 나타내었다. 또한, 설명의 편의를 위하여 구성요소의 일부만을 도시하기도 하였으나, 당업자라면 구성요소의 나머지 부분에 대하여도 용이하게 파악할 수 있을 것이다. 또한, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 출원의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 출원의 사상을 다양한 다른 형태로 구현할 수 있을 것이다.
일 실시예에서, 본 발명은 신규 진세노사이드인 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 제공한다.
일 실시예에서, 본 발명은 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공할 수 있다.
일 실시예는 항염증용 조성물의 제조에 사용하기 위한 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물의 용도를 제공할 수 있다.
일 실시예는 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 대상에 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 항염증 방법을 제공할 수 있다.
일 실시예는 항염증용 조성물에 사용하기 위한 유효성분으로서 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 제공할 수 있다. 또한, 항염증을 위한 유효성분으로서 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물의 비치료적 화장 용도를 제공할 수 있다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "수화물(hydrate)"은 물이 결합되어 있는 화합물을 의미하며, 물과 화합물 사이에 화학적인 결합력이 없는 내포 화합물을 포함하는 광범위한 개념이다.
본 명세서에서 "용매화물"은 용질의 분자나 이온과 용매의 분자나 이온 사이에 생긴 고차의 화합물을 의미한다.
일 실시예에서, 상기 진세노사이드는 신규한 트리테르펜 사포닌(triterpene saponin)으로, 분자식은 C 42H 70O 15이며, 아래와 같은 화학구조를 갖는다.
[화학식 1]
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본 명세서에서는 상기 신규한 진세노사이드를 "슈도진세노사이드 RT 8(pseudoginsenoside RT 8)" 또는 "PG-RT 8"로 명명하였다.
일 실시예에서, 상기 진세노사이드는 인삼씨로부터 추출한 것일 수 있다. 보다 구체적으로 상기 진세노사이드는 인삼씨 추출물로부터 분리된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 실시예에서, 상기 인삼씨의 인삼은 파낙스 진셍( Panax ginseng C.A. Meyer)이다.
본 명세서에서 "분리"라 함은, 인삼씨 추출물로부터 추출 또는 분획된 것을 포함하는 의미이며, 물, 유기용매 등을 이용하는 것일 수 있고, 당업자에게 알려진 어떠한 방법도 적용이 가능하다. 상기 분획은 상기 추출 이후에 하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 "추출물"이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 추출하여 얻어진 물질이라면, 추출방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함하는 광의의 개념이다.
본 명세서에서 "분획물"은 어떤 용매를 이용하여 특정 물질이나 추출물을 분획한 것 또는 분획하고 남은 것, 그리고 이들을 특정 용매로 다시 추출한 것을 포함한다. 분획 방법 및 추출방법은 당업계의 통상의 기술자에게 알려진 어떤 방법도 가능하다.
일 실시예에서, 상기 진세노사이드는 인삼씨 메탄올 및 부탄올 용해성 추출물로부터 분리된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 진세노사이드는 HPLC-ESI-Q-TOF-MS를 이용하여 인삼씨의 메탄올 및 부탄올 용해성 추출물을 분석하여 검출, 분리될 수 있다. 인삼씨 추출물의 주성분이 지질이기 때문에 모든 트리테르펜과 스테로이드성 사포닌이 인삼씨 원(crude) 추출물로부터 HPLC-UV 또는 HPLC-ELSD에 의해 관찰될 수 있는 것은 아니다.
일 실시예에서, 본 발명은 상기 진세노사이드, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 포함함으로써 전-염증 유전자인 인터루킨-1β(Interleukin-1β, IL-1β), 인터루킨-6(Interleukin-6, 1L-6) 및 유도형 일산화질소 합성효소(Inducible NO synthase, iNOS) 중 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하는 조성물을 제공할 수 있다. 일 실시예에서, 본 발명은 상기 진세노사이드, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 포함함으로써 염증 매개 신호전달단백질인 염증성 사이토카인((inflammatory cytokines)의 생성 및 분비를 억제하는 조성물을 제공할 수 있다. 일 실시예에서, 본 발명은 상기 진세노사이드, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 포함함으로써 염증 반응의 매개체인 일산화질소(Nitrix Oxide, NO) 생성을 억제하는 조성물을 제공할 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명은 종래 항염증 효능이 있는 것으로 알려진 진세노사이드에 비해 현저히 우수한 항염효능을 갖는 조성물을 제공할 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명은 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 99.9 중량%로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 일 실시예로서 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 1 중량% 이상, 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 4 중량% 이상, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상, 7 중량% 이상, 8 중량% 이상, 9 중량% 이상, 10 중량% 이상, 15 중량% 이상, 20 중량% 이상, 25 중량% 이상, 30 중량% 이상, 35 중량% 이상, 40 중량% 이상, 45 중량% 이상, 50 중량% 이상, 55 중량% 이상, 60 중량% 이상, 65 중량% 이상, 70 중량% 이상, 75 중량% 이상, 80 중량% 이상, 85 중량% 이상, 90 중량% 이상, 95 중량% 이상 또는 99.9 중량% 이상으로 포함할 수 있으나, 상기 범위에 제한되지는 않는다. 또는, 상기 조성물은 일 실시예로서 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 100 중량% 이하, 99 중량% 이하, 95 중량% 이하, 90 중량% 이하, 85 중량% 이하, 80 중량% 이하, 75 중량% 이하, 70 중량% 이하, 65 중량% 이하, 60 중량% 이하, 55 중량% 이하, 50 중량% 이하, 45 중량% 이하, 40 중량% 이하, 35 중량% 이하, 30 중량% 이하, 25 중량% 이하, 20 중량% 이하, 15 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 7 중량% 이하, 6 중량% 이하, 5 중량% 이하, 4 중량% 이하, 3 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.5 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.001 중량% 이하 또는 0.0005 중량% 이하로 포함할 수 있으나, 상기 범위에 제한되지는 않는다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 피부 외용제 조성물일 수 있다.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 화장료 조성물일 수 있다.
일 실시예에서, 상기 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화 될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 식품 조성물일 수 있다.
예를 들어, 상기 유효성분을 포함하는 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강식품 등과 같은 기능성 식품으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다. 일 실시예로서, 조성물은 건강 식품용 조성물일 수 있다. 일 실시예로서, 상기 건강 식품용 조성물은 환제, 캅셀제, 정제, 과립제, 캬라멜제 또는 드링크제 등으로 제형화할 수 있다. 다른 일 실시예로서, 액제, 분말, 과립, 정제 또는 티백 등의 형태로 가공될 수도 있다. 상기 조성물은 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 본 발명의 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.0001 중량% 내지 99.9 중량%일 수 있다.
본 발명 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 약제학적 조성물일 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있다.
일 실시예로서, 상기 약제학적 조성물은 경구 투여제일 수 있으며, 상기 경구 투여제는 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 분제, 산제, 세립제, 과립제, 펠렛제 등이 있다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 계면 활성제, 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅방법에 의해 제조될 수 있다.
일 실시예로서, 상기 약제학적 조성물은 비경구 투여제일 수 있으며, 상기 비경구 투여제는 직장, 국소, 피하, 경피 투여형 제형일 수 있다. 예를 들어 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 등의 제형일 수있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예로서 상기 약제학적 조성물의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 예를 들어, 상기 투여량은 1 mg/kg/일 내지 10 g/kg/일 또는 5 mg/kg/일 내지 100 mg/kg/일 범위일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 명세서의 범위를 한정하는 것이 아니다.
이하, 실시예, 비교예 및 시험예를 참조하여 본 발명을 상세히 설명한다. 이들은 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위해 예시적으로 제시한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이 실시예, 비교예 및 시험예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가지는 자에 있어서 자명할 것이다.
이하 모든 실험값들은 세번 이상 반복실험한 값들의 평균을 나타난 것이며, 표준 편차 (SD)는 오차 막대로 표시하였다. p 값은 one-way ANOVA와 Dunnett test로 계산하였고, 0.05 미만의 p 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
[실시예 1] 진세노사이드의 분리
분획
인삼씨(Seeds of Panax ginseng) 5.5 kg을 믹서로 곱게 갈아 분말 형태로 만들어 메탄올로 추출 후 n-헥산, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등을 사용해 단계적으로 분획하였다. 지질(Lipid)은 대부분 n-헥산에 의하여 제거되었으며, 에틸 아세테이트 분획물에 남아있던 지질은 메탄올:물 = 1:1 (v/v)로 현탁하였다. 이를 냉동실에 하룻밤 동안 보관한 다음 상층액만 취한 후, 원심분리기를 이용하여 한번 더 제거하였다. 이렇게 전처리된 에틸 아세테이트 분획물 2.61g과 n-부탄올 분획물 114.64g을 컬럼 및 HPCCC(High Performance Counter-Current Chromatography)를 통하여 아래와 같이 분획하였다.
n-부탄올 분획물의 컬럼 및 HPCCC를 이용한 분획
n-부탄올 분획물 114.64g을 MPLC로 분획을 나누고자 하였다. 이때 사용한 용매는 n-헥산/에틸 아세테이트 = 10:1->5:1->1:1 -> CHCl 3/MeOH = 10:1->5:1 (v/v)이었으며, 유속은 50 mL/min 이었다. 상기 조건을 이용하여 총 12개의 하위 분획으로 나누었다. 각 분획을 다시 HPCCC, HPLC(High-performance liquid chromatography), 세파덱스(Sephadex) LH-20 컬럼 등을 사용하여 각 분획에 함유된 성분을 분리하였다. 그 다음, NMR(Nuclear magnetic resonance), UV(Ultraviolet rays), MS(Mass spectrometry)를 이용하여 구조를 동정하여 16종의 화합물을 규명하였다.
상기 분리된 16종 화합물에는 프로토파낙사트리올 사포닌(protopanaxatriol saponin)인 진세노사이드 Rg1 (화합물 1), 진세노사이드 Rg2 (화합물 2) 및 진세노사이드 Re (화합물 3); 프로토파낙사디올 사포닌(protopanaxadiol saponin)인 진세노사이드 Rd (화합물 4), 진세노사이드 Rb1 (화합물 5) 및 진세노사이드 Rb2 (화합물 6); 스테롤 글리코사이드(sterol glycosides)인 스티그마-5-엔-3-O-β-D-글루코피라노사이드(Stigma-5-en-3-O-β-D-glucopyranoside) (화합물 7), 스티그마-5,24(28)-디엔-3-O-β-D-글루코피라노사이드(Stigma-5,24(28)-dien-3-O-β-D-glucopyranoside) (화합물 8) 및 스티그마-5,22-디엔-3-O-β-D-글루코피라노사이드(Stigma-5,22-dien-3-O-β-D-glucopyranoside) (화합물 9); 본 발명의 일 실시예에 따른 신규 진세노사이드로서 천연에서 처음 분리되는 신규 화합물인 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol)(화합물 10); 페놀릭 글리코사이드(phenolic glycosides)인 페네틸 알코올 β-D-크실로피라노실(1->6)-β-D-글루코피라노사이드(phenethyl alcohol β-D-xylopyranosyl(1->6)-β-D-glucopyranoside) (화합물 12) 및 유지닐 β-겐티오비오사이드(Eugenyl β-gentiobioside) (화합물 13); 플라보노이드인 이소람네틴 3- O-β-D-글루코피라노사이드(isorhamnetin 3- O-β-D-glucopyranoside) (화합물 15); 1차 대사체인 아데노신(Adenosine) (화합물 11), 우라실(uracil) (화합물 14) 및 트립토판(Tryptophan) (화합물 16)이었다.
상기 화합물 10에 해당하는 본 발명의 일 실시예에 따른 신규 진세노사이드의 분리과정을 도 1에 도시하였다. 상기 16종의 화합물의 화학구조를 도 2a 내지 도 2l에 도시하였으며, 상기 화합물들 중 기존에 알려진 진세노사이드인 화합물 1-6의 분광학적 증거 및 화학구조들을 도 3a 내지 도 3f에 별도로 도시하였다.
화합물 10은 양이온 ESI-Q-TOF-MS(Electrospray Ionization-Quadrupole-Time-of-flight mass spectrometry) 스펙트럼에서 m/z 837.4617 [(M+Na) + calcd. 837.4612]에서의 소디에이티드 가분자 이온 피크(sodiated pseudomolecular ion peak)에 기초하여 C 42H 70O 15의 분자식을 보이는 백색 무정형 분말로서 분리하였다. 상기 화합물 10의 1H NMR 스펙트럼은 [δ H 1.86 (3H, s, H-28), 1.69 (3H, s, H-29), 1.47 (3H, s, H-27), 1.25(6H, s, H-21, 26), 1.10 (3H, s, H-18), 0.81 (3H, s, H-30), 0.75 (3H, s, H-19)]에서 8개의 메틸 공명을 포함했다. 또한, 두 개의 당 잔기들에서 아노머 양성자(anomeric proton)와 탄소 원자들에 상응하는 두 쌍의 신호가 δ H 6.02 (1H, d, J = 7.8, H-2") / δ C 104.08 (C-1') 및 H4.91 (1H, d, J = 7.7, H-1') / δ C 104.32 (C-1")에서 검출되었다. 13C NMR 및 헤테로 핵 단일 양자 상관 관계 (HSQC) 스펙트럼은 42개의 탄소 신호를 밝혀냈다. 상기 두개의 당 잔기들과 별개로, 화합물 10의 어글리콘(aglycone)은 8개의 메틸렌, 4개의 메틴, 3개의 산소함유 메틴 [δ C 79.79 (C-6), 71.40 (C-12) 및 86.09 (C-24)], 5개의 4차 탄소 원자, 2개의 산소화된 4차 탄소 원자 [δ C 87.15(C-20) 및 70.78(C-25)], 8개의 메틸기 및 카르보닐 탄소 [δ C 218.85 (C-3)]를 가지고 있었다. 1H and 13C NMR 데이터의 철저한 해석 결과 화합물 10의 어글리콘이 슈도진생게닌(pseudoginsengenin) R1 [(20 S,24 R)-다마르-3-원-20,24-에폭시-6α,12β,25-트리올([(20 S,24 R)-dammar-3-one-20,24-epoxy-6α,12β,25-triol])]에 중첩된 것으로 나타났다. 화합물 10에서 C-20의 절대 배열은 C-21의 화학적 이동(δ C 27.67)으로부터 S로 추론되고, 24R 배열은 이전에 공개 된 바에 따라 C-24(δ C 86.09)의 화학적 이동에 의해 결정되었다. 두 당 단위(unit)는 산 가수분해 데이터 및 가스 크로마토그래피(GC) 분석 결과와 함께 1H NMR 스펙트럼 및 12개 탄소공명에서 아노머 양성자의 커플링 상수로부터 β-D-글루코피라노실(β-D-glucopyranosyl) 잔기로 밝혀졌다. 글리코시드 결합은 δ H 6.02 (H-1")/ δ C 79.49 (C-2') 및 δ H 4.91 (H-1')/δ C 79.79 (C-6)에서 교차 피크를 보인 이종핵다중결합 상관관계(HMBC)에 의해 결정되었으며, 2- O-(β-D-글루코피라노실)-β-D-글루코피라노실(2- O-(β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl) 잔기가 슈도진생게닌(pseudoginsengenin) R1에서 어글리콘의 C-6에 연결되어 있음을 입증했다. 상기 화합물 10의 각 분석 스펙트럼들과 핵심 HBMC 상관관계를 도 4 내지 도 10에 도시하였다.
상기 분석 결과, 화합물 10의 화학구조는 (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol)로 결정되었으며, 슈도진세노사이드 RT8(pseudoginsenoside RT8, PG-RT 8) 로 명명하였다.
상기 인삼씨 추출물로부터 분리된 진세노사이드 중 PPT( Proto Panax Triol)계열 진세노사이드인 진세노사이드 Rg1 (화합물 1), 진세노사이드 Rg2 (화합물 2), 진세노사이드 Re (화합물 3)은 진세노사이드 백본(backbone)에 3개의 하이드록실기(hydroxyl group)를 포함한다. PPD( Proto Panax Diol)계열 진세노사이드인 진세노사이드 Rd (화합물 4), 진세노사이드 Rb1 (화합물 5), 진세노사이드 Rb2 (화합물 6)는 진세노사이드 백본에 2개의 하이드록실기를 포함한다. 반면, 본 발명에서 신규하게 분리동정된 진세노사이드인 화합물 10은 PPT계열의 백본을 가지고 있지만 상기 백본의 말단 하이드록실기가 케톤(ketone)으로, 진세노시이드의 선형 체인(linear chain)이 퓨란 고리(furan ring)로 고리화(cyclization)된 구조라는데 구조적 차이가 있다.
상기 본 발명에서 신규하게 분리동정한 화합물 10의 분자식은 C 42H 70O 15, ESI-Q-TOF-MS는 m/z는 837.4617 [M+Na] +이었으며, 1H, 13C-NMR 스펙트럼은 하기 표에 나타난 바와 같다.
Figure PCTKR2019007815-appb-img-000002
Figure PCTKR2019007815-appb-img-000003
[시험예 1] 항염 효능 비교 1
ATCC사에서 구입한 RAW 264.7 대식세포주를 둘베코 수정 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium; Sigma)에 10% 소태아혈청(fetal bovine serum(FBS); Hyclone) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(Sigma)을 첨가하여 5% CO 2 배양기에서 배양하였다. RAW 264.7 세포에 인삼씨에서 추출한 진세노사이드 7종(GS#01-GS#06, GS#10; 각각 10μM)을 2시간 전처리 후 지질다당류(lipopolysaccharide(LPS); 염증 유발군, Sigma) 10 ng/ml 6시간 더 처리하였다. 이후 트리졸(Trizol) TM 시약(Thermo Fisher Scientific)을 이용하여 RNA를 추출하고, 리버트에이드(RevertAid) TM 1 st strand cDNA 합성키트(Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. Bio-Rad사의 CFX96 실시간 qPCR (real-time quantitative PCR) 기기를 이용하여 염증 관련 유전자(IL-1β, IL-6 및 iNOS)들의 발현을 관찰하고 도 11 내지 도 13에 나타내었다.
IL-1β 및 IL-6은 정상적인 상태에서 중요한 항상성 기능을 가지고 있으며, 대부분의 염증 상태에서 과다하게 생성되어 인체의 병리학적 변화를 일으키고 많은 염증성 질환을 유발한다. iNOS는 산화질소 합성효소 동형 단백질(nitric oxide synthase isoforms) 중의 하나로, 염증 반응에서 높은 수준의 NO를 생성하여 세포 사멸 및 조직 파괴를 유발한다.
도 11 내지 도 13에 나타난 바와 같이, 본 발명의 신규 진세노사이드인 화합물 10(GS#10)은 본 발명의 비교예로서 기존에 알려진 진세노사이드인 화합물 1-6(GS#1-6)보다 동일한 농도에서 IL-1β, IL-6 및 iNOS 유전자 발현 수준을 현저히 억제시킴을 확인할 수 있다. 이는 화학구조적 차이에 의한 것으로, 상기 본 발명의 신규 진세노사이드 PG-RT 8이 인삼씨 유래 진세노사이드 중에서도 항염 효능이 단연 뛰어나며, 기존에 알려진 스테로이드성 사포닌(steroidal saponin)보다도 강력한 항염증성을 보임을 의미한다.
[시험예 2] 항염 효능 비교 2
RAW 264.7 대식세포에 본 발명의 비교예로서 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1(Sigma에서 구매) 및 본 발명의 일 실시예로서 신규 진세노사이드인 GS#10(인삼씨 추출물에서 분리)를 각 1, 10 μM씩 2시간 전처리 후 염증 유발을 위해 LPS(지질다당체)를 10 ng/ml 농도로 6시간 더 처리하였다. 이후 상기 시험예 1과 유사한 방법으로 RNA를 추출하고 cDNA 합성 후 염증 관련 유전자들의 발현을 qPCR로 관찰하였다. 상기 본 발명의 비교예인 진세노사이드 Rg3의 화학구조는 다음과 같다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2019007815-appb-img-000004
도 14 내지 도 16에서 보이는 바와 같이 홍삼 지표성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1 보다 본 발명의 신규 진세노사이드인 GS#10의 항염 효능이 훨씬 뛰어난 것으로 나타났으며, 특히 Rg1과 비교할 경우 본 발명의 일 실시예인 GS#10의 항염 효능이 Rg1의 항염 효능보다 약 10배 가량 우수한 것을 확인할 수 있었다.
[시험예 3] 사이토카인 분비
상기 시험예 2에서 본 발명의 신규 진세노사이드인 GS#10에 의한 염증 반응 관련 유전자들의 발현 억제 효과를 확인한데 이어서, 이러한 유전자 발현 억제가 실제 염증 매개 신호전달단백질(inflammatory cytokines)의 생성 및 분비를 억제하는지를 추가 실험을 통하여 알아보았다.
시험예 2와 마찬가지로 RAW 264.7 대식세포주를 사용하였으며, 차이점으로는 배지로 분비되는 사이토카인(cytokine)의 양을 측정하기 위하여 FBS를 넣지 않은 혈청-프리(serum-free) 배지를 사용하였다. 시험예 1의 조건과 동일하게 각 진세노사이드를 각각 1, 10μM의 농도로 2시간 전처리하고, LPS를 10 ng/ml로 6시간 후처리 한 후, 배지만 수거하여 TNF-α(tumor necrosis factor-α), 인터루킨-1β(IL-1β), IL-6의 전-염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine) 분비량을 효소-결합 면역 흡착 분석키트(enzyme-linked immunosorbent assay kit; abcam)를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 도 17 내지 도 19에 나타난 바와 같이 시험예 2에서 나타난 결과와 마찬가지로 본 발명의 비교예인 홍삼 지표 성분에 해당하는 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1와 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 GS#10 처리에 의한 염증 매개 신호전달단백질들의 분비량이 감소하였으며, 특히 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 GS#10이 처리된 염증 매개 신호전달단백질들의 분비량이 현저히 감소된 것으로 나타났다.
[시험예 4] 일산화탄소(NO) 생산 억제율
전-염증성 사이토카인은 활성화된 면역 세포가 염증 조직으로 모집되는 것을 중재하며, 이펙터 면역 세포(effector immune cells)는 NO와 같은 독성이 강한 분자를 생성하여 침입하는 병원균을 제거하기 위해 세포 독성 조건을 구축한다. 이러한 과도한 반응성 질소 종은 조직 손상을 초래한다. 상기 시험예 2에서 본 발명의 신규 진세노사이드인 GS#10이 다른 진세노사이드 대비 항염 효능이 우수한 것으로 나타났으며, 특히, 염증 반응의 매개체인 NO를 생성하는 iNOS(inducible NO synthase)의 발현이 크게 감소하였다.
따라서, 아래 실험에서는 이를 토대로 본 발명의 신규 진세노사이드인 GS#10이 염증 반응의 2차 메신저(secondary messenger)인 NO(Nitrix Oxide)의 생성을 억제할 수 있는지를 검증하였다.
RAW 264.7 대식세포주에 L-NAME (NO 생성 억제제; 대조군; Sigma) 10μM과 본 발명의 비교예로서 홍삼 지표 성분인 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1(Sigma에서 구매) 및 본 발명의 실시예로서 신규 진세노사이드인 GS#10(인삼씨에서 추출)를 각각 1, 10 μM씩 1시간 처리한 후 LPS 10 ng/ml을 1시간 처리하였다. 1시간 동안 생성된 NO를 그리스(Griess) 반응을 이용하여 측정하였다. 요약하면, 50㎕의 설파닐아미드(sulfanilamide) 용액을 50㎕의 상기 각 진세노사이드 샘플에 첨가한 다음, 빛으로부터 보호된 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음 N-1-나프틸에틸렌디아민(N-1-napthylethylenediamine) 용액 (50 ㎕)을 혼합물에 넣고 빛없이 상온에서 추가로 10분 동안 배양하였다. 540 nm의 파장에서 테칸 인피니트(Tecan Infinite)®200 프로 다중 플레이트 판독기를 사용하여 NO의 비등방 강도를 측정했다. 표준곡선을 생성하기 위해 아질산나트륨 (NaNO 2)을 사용했다.
그 결과, 도 20에 나타난 바와 같이 RAW264.7 대식세포에서 NO 생산은 상기 시험예 2에서의 iNOS 유전자 발현 양상과 일치하는 결과를 보였다. 본 발명의 신규 진세노사이드인 GS#10의 투여량이 증가함에 따라 NO 생산량이 감소하였으며, 특히 본 발명의 비교예인 홍삼 지표 성분에 해당하는 진세노사이드 Rg1, Rg3 및 Rb1보다 NO 생성 억제능보다 현저하게 뛰어난 것으로 나타났다.
[시험예 5] 세포 독성
진세노사이드가 세포 독성 활성을 통해 항염 효능에 영향을 미칠 가능성을 배제하기 위해, CCK(Cell Counting Kit)-8을 이용하여 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 GS#10의 존재시 세포 성장을 평가하였다. 실험 방법은 다음과 같다.
CCK-8 시약을 배양 중인 SH-SY5Y 세포(Dojindo, MD, USA)에 96-웰 플레이트(well plate) 기준으로 10 μl 넣고 37℃에서 2시간 방치한 후, 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 세포 생존력을 미처리 샘플에 대한 각 샘플의 절대 광학 밀도의 백분율(%)로 표시하였다. 이때, 상기 세포가 배양되는 배지에 포함되는 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 GS#10의 농도는 각각 0.1, 1, 5, 10, 20, 50μM였다.
그 결과 도 21에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 GS#10는 50 μM까지 세포 독성을 나타내지 않았다. 이러한 결과는 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드가 세포 생존력에 해로운 영향을 주지 않으면서 항염 효과를 나타낼 수 있음을 나타낸다.
이러한 결과는 본 발명의 실시예인 신규 진세노사이드 PG-RT 8이 여러가지 강력한 항염증 특성을 가지고 있으며 항염증제로서 약제학적 가능성이 있음을 시사한다.
본 명세서의 일 실시예에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 명세서를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)
하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
배합 성분 함량 (중량%)
PG-RT 8 0.1
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)
하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
배합 성분 함량 (중량%)
PG-RT 8 0.1
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0
스쿠알란 5.0
솔비타세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
세테아릴 알코올 1.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 3] 마사지 크림
하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지 크림을 제조하였다.
배합 성분 함량(중량%)
PG-RT 8 0.1
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 45.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
밀납 4.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄 0.9
바세린 3.0
파라핀 1.5
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
[제형예 4] 정제
진세노사이드 PG-RT 8 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 5] 캡슐제
진세노사이드 PG-RT 8 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
[제형예 6] 과립제
진세노사이드 PG-RT 8 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.
[제형예 7] 드링크제
진세노사이드 PG-RT 8 50mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.
[제형예 8] 캬라멜 제형
진세노사이드 PG-RT 8 50mg, 옥수수 시럽(corn syrup) 1.8g, 탈지우유 0.5g, 대두 레시틴 0.5g, 버터 0.6g, 식물성 경화유 0.4g, 설탕 1.4g, 마가린 0.58g, 및 식염 20mg을 혼합하여 캬라멜 성형하였다.
[제형예 9] 건강 식품
성분 함량
PG-RT 8 100 ㎎
비타민 혼합물
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기 비타민 및 무기질 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
[제형예 10] 건강 음료
성분 함량
PG-RT 8 10 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수 잔량
총 부피 900 ㎖
상기 표와 같이 총 부피 900㎖가 되도록 잔량의 정제수를 첨가하여 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.
[제형예 11] 주사제
하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
배합 성분 함량
PG-RT 8 10-50 mg
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
본 발명은 일 실시예로서 다음의 실시형태들을 제공할 수 있다.
제1실시형태는, (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 이의 용매화물을 제공할 수 있다.
제2실시형태는, (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 이의 용매화물 을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공할 수 있다.
제3실시형태는, 제2실시형태에 있어서, 상기 유효성분은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 것인, 조성물을 제공할 수 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2019007815-appb-img-000005
제4실시형태는, 제2실시형태 또는 제3실시형태에 있어서, 상기 유효성분은 인삼씨로부터 추출한 것인, 조성물을 제공할 수 있다.
제5실시형태는, 제2실시형태 내지 제4실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 유효성분은 인터루킨-1β(Interleukin-1β, IL-1β), 인터루킨 -6(Interleukin-6, 1L-6) 및 유도형 일산화질소 합성효소(Inducible NO synthase, iNOS) 중 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하는 것인, 조성물을 제공할 수 있다.
제6실시형태는, 제2실시형태 내지 제5실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 유효성분은 염증성 사이토카인(inflammatory cytokines)의 생성 또는 분비를 억제하는 것인, 조성물을 제공할 수 있다.
제7실시형태는, 제2실시형태 내지 제6실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 유효성분은 일산화질소(Nitrix Oxide)의 생성을 억제하는 것인, 조성물을 제공할 수 있다.
제8실시형태는, 제2실시형태 내지 제7실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 99.9 중량%로 포함하는, 조성물을 제공할 수 있다.
제9실시형태는, 제2실시형태 내지 제8실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물인, 조성물을 제공할 수 있다.
제10실시형태는, 제2실시형태 내지 제9실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물을 제공할 수 있다.
제11실시형태는, 제2실시형태 내지 제10실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물인, 조성물을 제공할 수 있다.
제12실시형태는, 제2실시형태 내지 제11실시형태 중 어느 하나 이상에 있어서, 상기 조성물은 약제학적 조성물인, 조성물을 제공할 수 있다.
상기 실시형태들은 본 발명의 설명을 위해 개시되었으며, 상기 설명은 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니다. 따라서, 본 발명의 의미 및 범위를 벗어나지 않는 한, 다양한 수정, 변형, 및 대체가 당해 기술분야의 통상의 기술자에게서 발생될 수 있다.

Claims (12)

  1. (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물.
  2. (20S,24R)-6-O-β-D-글루코피라노실(1->2)-β-D-글루코피라노사이드-다마르-3-원-20,24-에폭시-6a,12b,25-트리올 ((20S,24R)-6-O-β-D-glucopyranosyl(1->2)-β-D-glucopyranoside-dammar-3-one-20,24-epoxy-6a,12b,25-triol), 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 수화물 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 것인, 조성물.
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2019007815-appb-img-000006
  4. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 인삼씨로부터 추출한 것인, 조성물.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 인터루킨-1β(Interleukin-1β, IL-1β), 인터루킨 -6(Interleukin-6, 1L-6) 및 유도형 일산화질소 합성효소(Inducible NO synthase, iNOS) 중 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하는 것인, 조성물.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 염증성 사이토카인(inflammatory cytokines)의 생성 또는 분비를 억제하는 것인, 조성물.
  7. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분은 일산화질소(Nitrix Oxide)의 생성을 억제하는 것인, 조성물.
  8. 제2항에 있어서,
    상기 유효성분을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 99.9 중량%로 포함하는, 조성물.
  9. 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 피부 외용제 조성물인, 조성물.
  10. 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물.
  11. 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인, 조성물.
  12. 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 약제학적 조성물인, 조성물.
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