WO2019235952A1 - Функциональная питьевая вода - Google Patents

Функциональная питьевая вода Download PDF

Info

Publication number
WO2019235952A1
WO2019235952A1 PCT/RU2018/000358 RU2018000358W WO2019235952A1 WO 2019235952 A1 WO2019235952 A1 WO 2019235952A1 RU 2018000358 W RU2018000358 W RU 2018000358W WO 2019235952 A1 WO2019235952 A1 WO 2019235952A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vkpm
biomass
strain
bacillus amyloliquefaciens
probiotic
Prior art date
Application number
PCT/RU2018/000358
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Александр Иванович Леляк
Original Assignee
Lelyak Aleksandr Ivanovich
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lelyak Aleksandr Ivanovich filed Critical Lelyak Aleksandr Ivanovich
Priority to PCT/RU2018/000358 priority Critical patent/WO2019235952A1/ru
Publication of WO2019235952A1 publication Critical patent/WO2019235952A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Definitions

  • the present invention relates to probiotic functional drinking water, which contains a mixture of probiotic microorganisms and can be used in the food industry, biotechnology and medicine.
  • Probiotics are living cultures of microorganisms that come with food, as well as drinks (water) and have a beneficial effect on the human body through a normalizing effect on the physiological, biochemical and immune reactions of the human body through stabilization and optimization of the function of its normal microflora.
  • Functional drinking water allows the use of probiotic microorganisms to people with lactose intolerance and people who for various reasons do not want to consume dairy products and products with a high content of dyes, flavors and sweeteners.
  • Functional drinking water with microorganisms with probiotic activity has a beneficial effect on the human body as a result of normalization of the composition and (or) increase in the biological activity of normal intestinal microflora.
  • Functional drinking water is known (RF patent 2625677, IPC A23L2 / 38, published July 18, 2017) containing succinic acid, dry water-soluble extract of lemon balm leaves, iodine-containing preparation "Iodinol", artesian water, (g / dm): succinic acid - 0.5-1.0; dry water-soluble extract of lemon balm leaves - 0.001-0.0015; iodinol (in terms of iodine) - 0.001-0.0015; artesian water - the rest.
  • Drinking water prepared according to this recipe does not contain any additional aromatic additives, and the composition of biologically active components has a beneficial effect on the body as a whole.
  • a probiotic immunostimulatory additive for drinking water for animals containing a mixture of probiotic microorganisms, at least two microorganisms selected from the group consisting of Enterococcus faecium, DSM 16211, Lactobacillus reuteri, DSM 16350, and Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, DSM 16351, Pediococcus acidilactici, DSM 16210, and Bifidobacterium animalis, DSM 16284 (U.S. Patent JV28IOI 170, IPC A23K 1/00, published January 24, 2012).
  • these drinking agents using probiotic additives are mainly intended for animals.
  • such drinking preparations are prepared immediately before use (feeding to animals) due to the fact that the prepared drinking water with probiotics has a short shelf life.
  • Known bio-oat drinking food product obtained by processing oats and its derivatives, having a pH from 3.2 to 4.5 and characterized by the content of the following components: 1, 3-1,4-PD-glucan with a molecular weight of more than 2,000,000 Yes (containing solids 2.5-20.0 wt.%) - 0, 4-2.0 wt.%; lactobacilli - 10E7 CFU / g; bifidobacteria - 10E7 CFU / g; water is the rest.
  • a bio-oat drinking food product contains from 0.4 to 2.0 wt.% Of high molecular weight 1.3-1, 4-pO-glucan, extracted during the processing of oat bran, hydrated and stabilized with the formation of a colloidal solution, oatmeal and malted oats, primarily fermented with a mixture of lactobacilli, yeast and bacteria, with the addition of raw oats, with oatmeal, malted oats, raw oat and oat bran taken in a ratio of 1: 3: 11: 15 with the addition of water to dry content substances from 2.5 to 20.0 wt.%, the resulting mixture is secondary fermented with probiotic bacteria.
  • such a drinking product has a short shelf life at room temperature (not more than 5-7 days) and at a temperature of + 2- +6 ° C not more than 1-2 months.
  • such a drinking product does not have a prophylactic antiviral effect with regular intake and insufficient prophylactic antibacterial action.
  • probiotic water is functional drinking water for humans, which is equipped with probiotic microorganisms and other substances (vitamins, minerals, dyes, flavorings), placed in a separate sealed package in the lid of a water tank (Slovenian patent N »SL23411MPK A23L 2/00 , published on January 31, 2012).
  • probiotic microorganisms and other substances vitamins, minerals, dyes, flavorings
  • the technical result of the proposed technical solution is to increase the prophylactic properties of drinking water through the use of a recombinant strain of probiotic bacteria that provides the production of recombinant alpha-2 interferon in the human body, consuming drinking water with probiotics, as well as providing the possibility of a significant increase in the shelf life of functional drinking water with probiotics up to one year with prolonged preservation of the activity of probiotics after mixing with water through the use of probiotic bacteria in a spore form.
  • the functional drinking water containing drinking water, mineral components and a probiotic as a probiotic, it contains in the spore form the biomass of probiotic bacteria of the recombinant strain Bacillus subtilis VKPM B-10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVbMDS6136M6) having bactericidal, fungicidal and antiviral activity, or biomass of probiotic bacteria of the strain Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JV DSM 24614), having bactericidal and fungicidal act in fact, or the biomass of probiotic bacteria of the strain Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVsDSM 24614), which has bactericidal and fungicidal activity, or a 1: 1 mixture of the biomass of probiotic bacteria of the Bacillus bacteriacomicentius bacteriophy
  • the rest is up to 1 ml.
  • drinking water it contains purified drinking water, or distilled water, or artesian water, or glacial melt water.
  • water contains salts of potassium, magnesium, sodium and calcium.
  • salts of potassium, magnesium, sodium and calcium water contains 1 ml of potassium chloride in an amount of 0.019-0.024 mg, magnesium chloride - 0.0015-0.0035 mg, sodium chloride - 0, 31-0.35 mg, calcium chloride -0.009-0.013 mg.
  • Drinking water is packaged and stored in a lightproof room.
  • the strain Bacillus subtilis IC-1435-1-1 was transformed with the recombinant plasmid DNA rBMB 105, containing the alpha-2 interferon gene, deposited in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms (VKPM) GNII Genetics under the number VKPM B-10641, as well as in the German collection of microorganisms (Deuthe Sammlung von Mikroorganismen) under the number JVeDSM 24613 and has bactericidal, fungicidal and antiviral activity.
  • VKPM All-Russian Collection of Industrial Microorganisms
  • the plasmid pBMB 105 is able to replicate in Bacillus subtilis bacteria and contains the human alpha-2-interferon gene, a promoter for the expression of this gene, a ribosome landing site (SD site) and the signaling peptide of alpha amylase B. amyloliquefaciens for secretion of interferon into the culture Wednesday
  • the concentration of human alpha-2 interferon obtained by the method of suppressing cytopathic action (CPD) is at least 30 IU / g of the test sample.
  • interferon may be involved in the regulation of intrinsic expression.
  • the preliminary administration of small doses of interferon leads to an increase in the production of endogenous interferon. This phenomenon is called priming (Stewart WE II. The Interferon System. Wien; NY: Springer-Verlag, 1979.).
  • priming Step WE II. The Interferon System. Wien; NY: Springer-Verlag, 1979.
  • the role of interferon-induced protein kinase proteins and 2 ', 5'-oligoadenylate synthetase in the regulation of intrinsic expression of interferon during priming.
  • IFN genes are repressed and their reading begins only after an inducing effect that can be considered as a positively regulating signal.
  • IRF nuclear interferon regulatory factors
  • IRF-I nuclear interferon regulatory factors
  • the reading of IRF genes is influenced not only by the inducer (viral RNA and its chemical analogues), but also by IFN (this explains the priming phenomenon), interleukin-1, and tumor necrosis factor [Fujita T., Miyamoto M., Kimura Y. et al. Biol Interferon Syst. Osaka 1988; 25-32]. That is, there is a close functional relationship between IFN and other cytokines in the immune response, which has an objective basis in the form of IRF in the genome, which is activated by various signals.
  • IRF nuclear interferon regulatory factors
  • Bacillus subtilis VKPM B-10641 produces biologically active metabolites, including antibiotics and broad-spectrum enzymes that inhibit the growth of pathogenic and conditionally pathogenic bacterial and fungal microflora.
  • the strain Bacillus amyloliquefaciens IC-1436- 1-23 is deposited in the collection of the GNII Genetika under the number VKPM B-10642, as well as in the German collection of microorganisms (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) under the number NeDSM 24614) and produces biologically active metabolites, including antibiotics broad-spectrum enzymes that inhibit the growth of pathogenic and conditionally pathogenic bacterial and fungal microflora.
  • the strain Bacillus amyloliquefaciens IC-1437- 1-23 is deposited in the collection of the GNII Genetika under the number VKPM B-10643, as well as in the German collection of microorganisms (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) under the number N ° DSM 24615 and produces biologically active metabolites, including antibiotics and broad-spectrum enzymes that inhibit the growth of pathogenic and conditionally pathogenic bacterial and fungal microflora,
  • Purified water can be obtained from drinking water by distillation methods (distilled water), ion exchange, reverse osmosis or electrodialysis.
  • distilled water ion exchange, reverse osmosis or electrodialysis.
  • the preferred and most economical methods for producing purified water are ion exchange or reverse osmosis.
  • Artesian waters are pressurized groundwater enclosed in aquifers of rocks between water-resistant layers. Usually found within certain geological structures (depressions, troughs, flexures, etc.), forming artesian basins.
  • Glacial melt water is obtained by the natural melting of a glacier in the mountains, passing through solid rocks, saturated with minerals and minerals.
  • the ratio of mineral components (potassium, magnesium, sodium and calcium salts) is balanced and does not exceed 0.3-05 mg / ml in total, which favorably affects the body when consumed.
  • Example 8 The study of the antiviral and antagonistic activity of probiotic strains of bacteria Bacillus subtilis VKPM B-10641, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10643 used in functional drinking water.
  • the concentration of human alpha-2 interferon obtained by the method of suppressing cytopathic action (CPD) is at least 30 IU / g of the test sample of functional drinking water, obtained according to example 1 and after storage for 12 months of the claimed functional drinking water at a temperature of (20 + 0.5) ° C.
  • the antiviral activity of interferon was determined on a cell culture using mouse encephalomyocarditis virus.
  • Probiotic strains of bacteria Bacillus subtilis VKPM B-10641, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10643 are characterized by high antagonistic activity against pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms.
  • Antagonistic activity against test cultures was tested by delayed antagonism. Staphylococcus aureus, Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Yersinia pseudotuberculosis, Serratia marcescens, Escherichia coli, Enterococcus spp. Were used as test strains.
  • test strains used met the following requirements: they were in S - form, had typical morphological and enzymatic properties.
  • 0.5 g of the drug was diluted in 0.5 cm 3 .
  • the resulting suspension was streaked using a microbiological loop along the diameter of a Petri dish with meat - peptone agar. Crops were incubated in a thermostat at a temperature of (37 + 1) ° ⁇ for (48 + 2) hours. Then, a suspension of pathogens was seeded to the culture grown as a stroke using a microbiological loop by the method of perpendicular strokes.
  • Example 9 The technology of culturing bacteria Bacillus subtilis and Bacillus amyloliquefaciens to obtain microbial biomass.
  • strains of Bacillus subtilis VKPM B-10641, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10643 were separately cultivated on a liquid nutrient medium of the following composition:
  • Example 10 cm 3 of inoculum with a titer of 108 CFU / cm 3 was used per 1 dm of fermentation medium.
  • the process of growing biomass was carried out in the fermenter for (48 + 2) hours. With this cultivation method, a spore titer of (5-10) x 10 10 CFU / cm 3 can be obtained.
  • Example 10 The technology of obtaining functional drinking water
  • Example 11 Storage data of the claimed functional drinking water based on strains of Bacillus subtilis VKPM B-10641, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642, Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10643.
  • probiotics enter the gastrointestinal W tract (GIT), where there is a powerful representation of the symbiotic bacterial flora and the immune system of the human body (up to 70% of immunocompetent cells).
  • GIT gastrointestinal W tract
  • probiotic bacteria as a transit microflora, actively multiply and are in the gastrointestinal tract from 1 to 4 days, and then are excreted from 15 organisms.
  • the recombinant strain of probiotic bacteria Bacillus subtilis VKPM B-10641 and the strain of probiotic bacteria Bacillus amyloliquefaciens VKPM B-10642 function in a thick intestines
  • the strain of probiotic bacteria Bacillus am yloliquefaciens VKPM B-10643 - in the small intestine which extends the health-improving prophylactic effect of the use of the claimed probiotic drinking water.
  • the functional (useful and prophylactic) effect of the claimed probiotic drinking water is that during the life of the recombinant strain of the bacteria probiotic bacteria Bacillus subtilis VKPM B-10641 small doses of IFN type I are released, which are adsorbed on immunocompetent cells (ICC) and facilitate interaction with specific IFN receptors, triggering a cascade reaction of cytokine priming, which stimulates the superproduction of homologous IFN I and P-type.
  • ICC immunocompetent cells
  • IFN type I and type II released during superinduction in the ICC and the corresponding group of cytokines provide powerful nonspecific antiviral and antibacterial protection of macroorganism cells (both local and remote from the production site) against intracellular pathogens, as well as the formation of a high level of specific anti-infectious resistance of a macroorganism, (mainly a cell link) with activation of macrophage cells and type I T-helpers, in relation to the individual pathogenic viruses and bacteria.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к функциональной питьевой воде, содержащей питьевую воду, минеральные компоненты и пробиотик. В качестве пробиотика функциональная питьевая вода содержит в споровой форме биомассу пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 (DSM 24613), или биомассу пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (DSM 24614), или биомассу пробиотических бактерий штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 (DSM 24615), или их смесь в равных соотношениях.

Description

Функциональная питьевая вода
Настоящее изобретение относится к пробиотической функциональной питьевой воде, которая содержит смесь микроорганизмов-пробиотиков и может быть использовано в пищевой промышленности, биотехнологии и медицине.
Пробиотики - это живые культуры микроорганизмов, поступающие с пищей, а также напитками (водой) и благотворно влияющие на организм человека путем нормализующего воздействия на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма человека через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры.
Функциональная питьевая вода позволяет использовать пробиотические микроорганизмы людям с непереносимостью лактозы и людям, которые по разным причинам не хотят употреблять молочные продукты и продукты с высоким содержанием красителей, ароматизаторов и подсластителей. Функциональная питьевая вода с микроорганизмами, обладающая пробиотической активностью оказывает благоприятное воздействие на организм человека в результате нормализации состава и (или) повышения биологической активности нормальной микрофлоры кишечника.
Известна функциональная питьевая вода (патент РФ 2625677, МПК A23L2/38, опубл. 18.07.2017 г.), содержащая янтарную кислоту, сухой водорастворимый экстракт листьев мелиссы, йодсодержащий препарат «Иодинол», артезианскую воду, (г/дм ): янтарная кислота - 0, 5- 1,0; сухой водорастворимый экстракт листьев мелиссы - 0,001- 0,0015; йодинол (в пересчете на йод) - 0,001-0,0015; артезианская вода - остальное. Питьевая вода, приготовленная по данной рецептуре, не содержит дополнительных вкусо-ароматических добавок, а композиция биологически активных компонентов благотворно влияет на организм в целом.
Однако данная функциональная питьевая вода не обладает пробиотическими свойствами.
Наибольшее количество публикаций касается питьевой воды с пробиотическими добавками для сельскохозяйственных и домашних животных (заявка США Г«2015250832, опубл. 10.09.2015 г.; заявка Китая N»CN 104611257, опубл. 13.05.2015 г.; Европейский патент JST2EP2385765, опубл. 16.11.2011 г.; патент Республики Корея
JVb 101106302, опубл. 18.01.2012 г.). Например, известна пробиотическая иммуностимулирующая добавка к питьевой воде для животных, содержащая смесь пробиотических микроорганизмов, по меньшей мере два микроорганизма, выбранных из группы, состоящей из Enterococcus faecium, DSM 16211, Lactobacillus reuteri, DSM 16350, и Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, DSM 16351, Pediococcus acidilactici, DSM 16210, и Bifidobacterium animalis, DSM 16284 (Патент США JV28IOI 170, МПК A23K 1/00, опубл. 24.01.2012 г.).
Однако указанные питьевые средства с использованием пробиотических добавок в основном предназначены для животных. Кроме того, такие питьевые средства приготавливают непосредственно перед применением (выпаиванием животным) вследствие того, что готовая вода для питья с пробиотиками имеет малый срок хранения.
Известен биоовсяный питьевой пищевой продукт (патент РФ .N°2332113, МПК A23L 2/38, опубл. 27.08.2008 г.), полученный путем обработки овса и его производных, имеющий pH от 3,2 до 4,5 и характеризующийся содержанием следующих компонентов: 1 ,3-1,4- PD-глюкан с молекулярным весом более 2000000 Да (с содержанием сухих веществ 2,5-20,0 мас.%) - 0, 4-2,0 мас.%; лактобактерии - 10Е7 КОЕ/г; бифидобактерии - 10Е7 КОЕ/г; вода - остальное. При этом в биоовсяном питьевом пищевом продукте в качестве овса и его производных используют компоненты: овсяную муку грубого помола, овес осоложенный, овес сырой и овсяные отруби. При этом биоовсяный питьевой пищевой продукт содержит от 0,4 до 2,0 мас.% высокомолекулярного 1,3-1 ,4-рО-глюкана, извлеченного в процессе обработки овсяных отрубей, гидратированного и стабилизированного с образованием коллоидного раствора, овсяной муки грубого помола и овса осоложенного, первично ферментированных смесью, состоящей из лактобактерий, дрожжей и бактерий, с добавлением овса сырого, при этом овсяная мука грубого помола, овес осоложенный, овес сырой и овсяные отруби взяты в соотношении 1 :3:11 : 15 с добавлением воды до содержания сухих веществ от 2,5 до 20,0 мас.%, полученная смесь вторично ферментирована пробиотическими бактериями.
Однако такой питьевой продукт обладает малым сроком хранения при комнатной температуре (не более 5-7 дней) и при температуре +2- +6 °С не более 1-2 месяцев. Кроме того, такой питьевой продукт не обладает профилактическим противовирусным действием при регулярном приеме и недостаточным профилактическим антибактериальным действием.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является функциональная питьевая вода для человека, которая снабжена пробиотическими микроорганизмами и другими веществами (витамины, минералы, красители, ароматизаторы), размещенными в отдельной герметичной упаковке в крышке емкости для воды (патент Словении N»SL23411МПК A23L 2/00, опубл. 31.01.2012 г.). В одной упаковке пробиотической воды содержится пробиотических
2 микроорганизмов в количестве которое варьируется от 10 микроорганизмов на миллилитр воды до 109 микроорганизмов на миллилитр воды. Функциональную питьевую воду приготавливают перед употреблением путем разрушения герметичной упаковки с пробиотиком и другими веществами и смешиванием содержимого с питьевой водой. После смешения пробиотических микроорганизмов и других компонентов содержимого крышки с питьевой водой питьевой продукт готов для приема внутрь.
Недостатком указанной пробиотической воды, как указано в описании к патенту-прототипу, является малый срок хранения напитка после смешивания пробиотиков с питьевой водой вследствие быстрого разрушения клеток микроорганизмов в водной среде и потеря их активности (титра). Кроме того, такой питьевой продукт не обладает профилактическим противовирусным действием при регулярном приеме и недостаточным профилактическим антибактериальным действием.
Техническим результатом заявляемого технического решения является повышение профилактических свойств питьевой воды за счет использования рекомбинантного штамма бактерий-пробиотиков, обеспечивающих продукцию рекомбинантного альфа-2 интерферона в организме человека, потребляющего питьевую воду с пробиотиками, а также обеспечение возможности значительного увеличения срока хранения функциональной питьевой воды с пробиотиками до одного года с длительным сохранением активности пробиотиков после смешения с водой за счет использования пробиотических бактерий в споровой форме. Указанный технический результат достигается тем, что функциональная питьевая вода, содержащая питьевую воду, минеральные компоненты и пробиотик, согласно изобретения, в качестве пробиотика она содержит в споровой форме биомассу пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVbDSM 24613), обладающую бактерицидной, фунгицидной и противовирусной активностью, или биомассу пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JV DSM 24614), обладающую бактерицидной и фунгицидной активностью, или биомассу пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVsDSM 24614), обладающую бактерицидной и фунгицидной активностью, или смесь в соотношении 1 :1 биомасс пробиотических бактерий штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVsDSM 24614) и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N°DSM 24615), или смесь в соотношении 1:1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Ba cillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N°DSM 24613) и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVaDSM 24614), или смесь в соотношении 1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen NeDSM 24613) и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen J DSM 24615), или смесь в соотношении 1 :1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus s ubtilis В КПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JV DSM 24613) и штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ B- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N°DSM 24614) и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ B- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVfeDSM 24615) при следующем количественном содержании компонентов: минеральные компоненты 0,3-0, 5 мг; раствор в питьевой воде биомассы пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641, или биомассы пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642, или биомассы пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643, или смеси в соотношении 1:1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642, или смеси в соотношении 1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643, или смеси в соотношении 1:1 биомасс пробиотических бактерий штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643, или смеси в соотношении 1:1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 и штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 с титром каждого штамма бактерий 1x102 - 1x104 КОЕ/мл
остальное до 1 мл. В качестве питьевой воды она содержит очищенную питьевую воду, или дистиллированную воду, или артезианскую воду, или ледниковую талую воду.
В качестве минеральных компонентов вода содержит соли калия, магния, натрия и кальция. В качестве солей калия, магния, натрия и кальция вода содержит в 1 мл хлористый калий в количестве 0,019-0,024 мг, хлористый магний - 0,0015-0,0035 мг, хлористый натрий - 0, 31-0,35 мг, хлористый кальций -0, 009-0,013 мг.
Питьевая вода расфасована в упаковку и хранится в светонепроницаемом помещении.
Штамм Bacillus subtilis IC-1435-1-1 трансформирован рекомбинантной плазмидой ДНК рВМВ 105, содержащий ген альфа-2 интерферона, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В- 10641, а также в немецкой коллекции микроорганизмов (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) под номером JVeDSM 24613 и обладает бактерицидной, фунгицидной и противовирусной активностью. Плазмида рВМВ 105 способна реплицироваться в бактерии Bacillus subtilis и содержит в своем составе ген альфа-2- интерферона человека, промотор для экспрессии этого гена, сайт посадки рибосом (SD-сайт) и сигнальный пептид альфа- амилазы В. amyloliquefaciens для секреции интерферона в культуральную среду.
Концентрация человеческого альфа-2 интерферона, полученная методом подавления цитопатического действия (ЦПД), составляет не менее 30 МЕ/г исследуемого образца.
Известно, что интерферон может участвовать в регуляции собственной экспрессии. В частности, предварительное введение небольших доз интерферона приводит к повышению продукции эндогенного интерферона. Это явление получило название прайминг (Stewart W.E. II. The Interferon System. Wien; N.Y.: Springer- Verlag, 1979.). В рамках проведенных модельных исследований показана роль интерферон-индуцируемых белков протеинкиназы и 2', 5'- олигоаденилатсинтетазы в регуляции собственной экспрессии интерферона при прайминге. Эксперименты показывают, что в норме гены ИФН репрессированы и их считывание начинается только после индуцирующего воздействия которое может рассматриваться как позитивно регулирующий сигнал. На примере ИФН I типа показано, что при этом индуктор не взаимодействует с генами ИФН прямо, а сначала включает систему ядерных интерферон регулирующих факторов (ИРФ), в частности ИРФ-I, который, в свою очередь, способен включать считывание генов ИФН. На считывание генов ИРФ влияет не только индуктор (вирусная РНК и ее химические аналоги), но также ИФН (это объясняет феномен прайминга), интерлейкин- 1 и фактор некроза опухоли [Fujita Т., Miyamoto М., Kimura Y. et al. Biol Interferon Syst. Osaka 1988; 25-32]. Т.е, существует тесная функциональная связь ИФН с другими цитокинами в иммунном ответе, имеющая объективный базис в виде ИРФ в геноме, активирующегося под действием разных сигналов.
Кроме того, указанный рекомбинантный штамм Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 продуцирует биологически активные метаболиты, в том числе антибиотики и ферменты широкого спектра действия, подавляющие рост патогенной и условно - патогенной бактериальной и грибной микрофлоры.
Штамм Bacillus amyloliquefaciens IC- 1436- 1-23 депонирован в коллекции ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В- 10642, а также в немецкой коллекции микроорганизмов (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) под номером NeDSM 24614) и продуцирует биологически активные метаболиты, в том числе антибиотики и ферменты широкого спектра действия, подавляющие рост патогенной и условно - патогенной бактериальной и грибной микрофлоры.
Штамм Bacillus amyloliquefaciens IC- 1437- 1-23 депонирован в коллекции ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В- 10643, а также в немецкой коллекции микроорганизмов (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) под номером N°DSM 24615 и продуцирует биологически активные метаболиты, в том числе антибиотики и ферменты широкого спектра действия, подавляющие рост патогенной и условно - патогенной бактериальной и грибной микрофлоры,
На основе заявляемых пробиотических штаммов компания ООО НПФ «Исследовательский центр» выпускает в Российской Федерации сертифицированные сухие формы пищевых биологически-активных добавок (БАД):
- БАД Ветом 1.1 (http://vetom.m/index.php/bad-vetom- 1-1):
- БАД Ветом 2 (http://vetom.m/index.php/bad-vetom-2):
- БАД Ветом 3 (http://vetom.ru/index.php/bad-vetom-31:
- БАД Ветом 4 (http://vetom.ru/index.php/bad-vetom-4.:
Вода очищенная может быть получена из питьевой воды методами дистилляции (дистиллированная вода), ионного обмена, обратного осмоса или электродиализа. Предпочтительными и наиболее экономичными методами получения очищенной воды является ионный обмен или обратный осмос.
Дистиллированная вода — очищенная вода, практически не содержащая примесей и посторонних включений. Получают перегонкой в специальных аппаратах— дистилляторах.
Артезианские воды - напорные подземные воды, заключённые в водоносных пластах горных пород между водоупорными слоями. Обычно встречаются в пределах определенных геологических структур (впадин, мульд, флексур и др.), образуя артезианские бассейны.
Ледниковую талую воду получают при естественном таянии ледника в горах проходя сквозь твердые горные породы, насыщаясь при этом минералами и полезными микроэлементами.
Ниже приведены примеры 1-7 составов функциональной питьевой воды с количественным содержанием компонентов в 1 мл.
Соотношение минеральных компонентов (солей калия, магния, натрия и кальция) сбалансировано и суммарно не превышает 0,3-05 мг/мл, что благоприятно воздействует на организм при употреблении.
Ниже приведены примеры 1-7 составов заявляемой функциональной питьевой воды.
Пример 1.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,019 мг хлористый магний 0,0015 мг хлористый натрий 0, 31 мг хлористый кальций О, 009 мг раствор в очищенной
питьевой воде биомассы
пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В-10641
с титром 1х104 КОЕ/мл остальное до 1 мл
Пример 2.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,02 мг хлористый магний 0,002 мг хлористый натрий 0, 32 МГ хлористый кальций О, 01 мг раствор в дистиллированной
питьевой воде биомассы
пробиотических бактерий
штамма Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10642 с титром штамма
бактерий lxl О3 КОЕ/мл остальное до 1 мл Пример 3.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,02 мг хлористый магний 0,002 мг хлористый натрий О, 32 мг хлористый кальций О, 01 мг раствор в артезианской
питьевой воде биомассы
пробиотических бактерий
штамма Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10643 с титром штамма
бактерий lxl О3 КОЕ/мл остальное до 1 мл Пример 4.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,022 мг хлористый магний 0,003 мг хлористый натрий 0,34 мг хлористый кальций 0,012 мг раствор в ледниковой талой
питьевой воде смеси в соотношении 1:1 биомасс пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В- 10641 и штамма
Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642
с титром каждого штамма
бактерий lxl О3 КОЕ/мл остальное до 1 мл
Пример 5.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,022 мг хлористый магний 0,003 мг хлористый натрий 0,34 мг хлористый кальций 0,012 мг раствор в очищенной питьевой
воде смеси в соотношении 1 : 1
биомасс пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В- 10641 и штамма
Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ
В- 10643 с титром каждого штамма
бактерий lxl О3 КОЕ/мл остальное до 1 мл
Пример 6.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,024 мг хлористый магний 0,0035 мг хлористый натрий 0,35 мг хлористый кальций 0,013 мг раствор в ледниковой талой
питьевой воде смеси в соотношении 1 : 1 биомасс пробиотических бактерий
штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ
В- 10642 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ
В- 10643 с титром каждого штамма
бактерий 1x102 КОЕ/мл остальное до 1 мл
Пример 7.
Минеральные компоненты:
хлористый калий 0,024 мг хлористый магний 0,0035 мг хлористый натрий 0,35 мг хлористый кальций 0,013 мг раствор в очищенной
питьевой воде смеси в соотношении
1:1:1 биомасс пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В- 10641 и штаммов Bacillus
amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 и
Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643
с титром каждого штамма
бактерий 1x102 КОЕ/мл остальное до 1 мл
Пример 8. Исследование противовирусной и антагонистической активности пробиотических штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, используемых в функциональной питьевой воде.
Концентрация человеческого альфа-2 интерферона, полученная методом подавления цитопатического действия (ЦПД), составляет не менее 30 МЕ/г исследуемого образца функциональной питьевой воды, полученной по примеру 1 и после хранения в течение 12 месяцев заявляемой функциональной питьевой воды при температуре (20+0,5) °С.
Определение противовирусной активности интерферона проводили на культуре клеток с использованием вируса энцефаломиокардита мышей.
Пробиотические штаммы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 характеризуются высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов.
Антагонистическую активность в отношении тест - культур проверяли методом отсроченного антагонизма. В качестве тест - штаммов использовали Staphylococcus aureus, Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Yersinia pseudotuberculosis, Serratia marcescens, Escherichia coli, Enterococcus spp.
Используемые тест - штаммы удовлетворяли следующим требованиям: находились в S - форме, имели типичные морфологические и ферментативные свойства.
Исследование антагонистической активности заявляемых штаммов бактерий Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens производили на мясо. - пептонном агаре.
Рецептура мясо - пептонного агара на 1 дм3:
- пептон мясной ферментативный - 10,0 г;
- дрожжевой экстракт - 5,0 г;
- хлорид натрия - 5,0 г;
- агар микробиологический - 15,0 г.
- дистиллированная вода - до общего объема 1 дм3. После смешивания компонентов среду разогревали до полного растворения агара и фильтровали через ватно - марлевый фильтр в колбы вместимостью 500 см по 300 см . Колбы со средой закрывали ватно - марлевыми пробками, оборачивали горловину пергаментом и стерилизовали в автоклаве при давлении 0,15 Мпа в течение 40 мин. После остывания до температуры (45+1) °С среду разливали по стерильным чашкам Петри. Для контроля стерильности чашки с подсушенной средой помещали в термостат при температуре (37+1) °С на (24+2) часа. Нестерильные чашки отбраковывали.
Культуры патогенных микроорганизмов, указанные выше, выращивали на чашках Петри в течение (18+2) часов на мясо - пептонном агаре. В стерильные пробирки приливали по 1 мл физиологического раствора и готовили суспензии тест - штаммов с концентрацией микробных клеток (5,0+1,0)хЮ8КОЕ/см3.
Для проведения испытания от каждой серии препарата отбирали 3 пробы по 1 г.
Далее 0,5 г препарата разводили в 0,5 см3. Полученную взвесь высевали штрихом с помощью микробиологической петли по диаметру чашки Петри с мясо - пептонным агаром. Посевы инкубировали в термостате при температуре (37+1) °С в течение (48+2) часов. Затем к выросшей в виде штриха культуре подсевали с помощью микробиологической петли суспензии патогенов методом перпендикулярных штрихов.
Учет результатов проводили через 8 часов инкубирования при (37+1) °С по величине зон угнетения роста тест - штаммов. Контролем роста культур патогенов служил их параллельный высев на чашки Петри с той же плотной средой (мясо - пептонным агаром) без исследуемой ассоциации антагонистов. В результате исследования заявляемых пробиотических штаммов на антагонистическую активность установлено, что они проявляют высокую антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенных и условно патогенных микроорганизмов, частности штаммов Staphylococcus aureus, Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Yersinia pseudotuberculosis, Serratia marcescens, Escherichia coli, Enterococcus spp., которая сохраняется после получения функциональной питьевой пробиотической воды и после хранения ее в течение 12 месяцев.
Пример 9. Технология культивирования бактерий Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens для получения микробной биомассы. Для получения биомассы спор бактерий штаммы Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 раздельно культивировали на жидкой питательной среде следующего состава:
- пептон мясной ферментативный - 10,0 г;
- дрожжевой экстракт - 5,0 г;
- хлорид натрия - 5,0 г;
- дистиллированная вода - до общего объема 1 дм .
pH (7, 2+0, 2).
На 1 дм ферментационной питательной среды использовали 10 см 3 посевного материала с титром 108 КОЕ/ см 3. Процесс выращивания биомассы осуществляли в ферментёре в течение (48+2) часов. При указанном способе культивирования может быть получен титр спор (5— 10)хЮ10 КОЕ/ см3. Пример 10. Технология получения функциональной питьевой воды
Для приготовления функциональной питьевой воды берут очищенную питьевую воду, или дистиллированную воду, или артезианскую воду, или ледниковую талую воду и растворяют в ней при перемешивании хлористый калий, хлористый магний, хлористый натрий, хлористый кальций в конечной концентрации не превышающей величин, указанных в примерах 1-7. Далее после растворения солей при перемешивании вводят биомассу штаммов-пробиотиков в споровой форме, доводя их содержание до титров (КОЕ/мл), указанных в примерах 1-7. Готовую функциональную питьевую воду фасуют в тару и хранят в светонепроницаемых помещениях при температуре от +6 до +20°С.
Пример 11. Данные по хранению заявляемой функциональной питьевой воды на основе штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643.
Для установления срока годности при хранении заявляемой функциональной питьевой воды при температуре (+20+0,5) °С в светонепроницаемом помещении проведены соответствующие исследования, представленные в таблице.
Анализ таблицы показывает, что в течение 12 месяцев хранения заявляемой функциональной питьевой воды при температуре (+20+0,5) °С титр пробиотических бактерий не изменился. Противовирусная и антагонистическая активность (пример 8) пробиотических бактерий также не изменилась, что подтверждает высокую термостабильность питьевой воды с пробиотическими бактериями в споровой форме, обеспечивающую значительное упрощение технологии их применения в пищевой промышленности, медицине и ветеринарии.
Таблица
Данные по хранению заявляемой функциональной питьевой воды
Figure imgf000019_0001
5
Пример 12. Описание механизма действия функциональной питьевой пробиотической воды
При пероральном приеме функциональной пробиотической питьевой воды происходит поступление пробиотиков в желудочно-кишечный W тракт (ЖКТ), где имеется мощное представительство симбиотической бактериальной флоры и иммунной системы организма человека (до 70% иммунокомпетентных клеток). В тонком и толстом кишечнике бактерии-пробиотики, являясь транзитной микрофлорой, активно размножаются и находятся в ЖКТ от 1 до 4 суток, а затем выводятся из 15 организма. Причем, рекомбинантный штамм бактерий-пробиотиков Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 и штамм бактерий-пробиотиков Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 функционируют в толстом кишечнике, а штамм бактерий-пробиотиков Bacillus am yloliquefaciens ВКПМ В- 10643 - в тонком кишечнике, что расширяет оздоровительный профилактический эффект от применения заявляемой пробиотической питьевой воды.
Функциональное (полезное и профилактическое) действие заявляемой пробиотической питьевой воды состоит в том, что в процессе жизнедеятельности рекомбинантного штамма бактерий-пробиотиков Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 освобождаются малые дозы ИФН I типа, который сорбируется на иммунокомпетентных клетках (ИКК) и способствует взаимодействию со специфичными ИФН-рецепторами, запуская каскадную реакцию цитокинового прайминга стимулирующего уже суперпродукцию гомологичного ИФН I и П-го типов. Выделяющиеся при супериндукции в ИКК ИФН I-го и П-го типов и соответствующая группа цитокинов (Ил-1, Ил-2 и др.) обеспечивают мощную неспецифическую противовирусную и противобактериальную защиту клеток макроорганизма (как локальных, так и отдаленных от места продукции) против внутриклеточных патогенов, а также формирование высокого уровня специфической противоинфекционной резистентности макроорганизма, (преимущественно клеточного звена) с активацией клеток макрофагов и Т-хелперов I-го типа, в отношении имеющихся у конкретного индивидуума патогенных вирусов и бактерий.
Штамм бактерий-пробиотиков Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 функционируя в толстом кишечнике, а штамм бактерий- пробиотиков Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 - в тонком кишечнике и, обладая высокой антагонистической активностью в отношении патогенных бактерий и грибов, расширяют и усиливают профилактический эффект от применения заявляемой пробиотической питьевой воды.

Claims

Формула изобретения
1. Функциональная питьевая вода, содержащая питьевую воду, минеральные компоненты и пробиотик, отличающаяся тем, что в качестве пробиотика она содержит в споровой форме биомассу пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N°DSM 24613), обладающую бактерицидной, фунгицидной и противовирусной активностью, или биомассу пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen NsDSM 24614), обладающую бактерицидной и фунгицидной активностью, или биомассу пробиотических бактерий штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N«DSM 24614), обладающую бактерицидной и фунгицидной активностью, или смесь в соотношении 1 :1 биомасс пробиотических бактерий штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVsDSM 24614) и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JV°DSM 24615), или смесь в соотношении 1:1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Ba cillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVsDSM 24613) и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVbDSM 24614), или смесь в соотношении 1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N«DSM 24613) и штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen N°DSM 24615), или смесь в соотношении 1 :1 :1 биомасс пробиотических бактерий рекомбинантного штамма Bacillus s ubtilis В КПМ В- 10641 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen J feDSM 24613) и штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ B- 10642 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen JVeDSM 24614) и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ B- 10643 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen J 2DSM 24615) при следующем количественном содержании компонентов:
минеральные компоненты 0,3 -0,5 мг раствор в питьевой воде
биомассы пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В- 10641, или биомассы
пробиотических бактерий штамма
Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642
или биомассы пробиотических бактерий
штамма Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10643, или смеси в
соотношении 1 : 1 биомасс пробиоти- ческих бактерий рекомбинантного
штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641
и штамма Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10642, или смеси в
соотношении 1 :1 биомасс пробиоти- ческих бактерий рекомбинантного
штамма Bacillus subtilis ВКПМ В- 10641
и штамма Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10643, или смеси в
соотношении 1 : 1 биомасс пробиотических
бактерий штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 и Bacillus amyloliquefaciens
ВКПМ В- 10643, или смеси в соотношении
1 :1:1 биомасс пробиотических бактерий
рекомбинантного штамма Bacillus
subtilis ВКПМ В- 10641 и штаммов Bacillus
amyloliquefaciens ВКПМ В- 10642 и
Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В- 10643
с титром каждого штамма бактерий
1x102 - 1x104 КОЕ/мл остальное до 1 мл
2. Функциональная питьевая вода по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве питьевой воды она содержит очищенную питьевую воду, или дистиллированную воду, или артезианскую воду, или ледниковую талую воду.
3. Функциональная питьевая вода по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве минеральных компонентов вода содержит соли калия, магния, натрия и кальция.
4. Функциональная питьевая вода по п. 3, отличающаяся тем, что в качестве солей калия, магния, натрия и кальция вода содержит в 1 мл хлористый калий в количестве не более 0,019-0,024 мг, хлористый магний - не более 0,0015-0,0035 мг, хлористый натрий - не более 0, 31- 0,35 мг, хлористый кальций - не более 0, 009-0,013 мг.
PCT/RU2018/000358 2018-06-04 2018-06-04 Функциональная питьевая вода WO2019235952A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2018/000358 WO2019235952A1 (ru) 2018-06-04 2018-06-04 Функциональная питьевая вода

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2018/000358 WO2019235952A1 (ru) 2018-06-04 2018-06-04 Функциональная питьевая вода

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019235952A1 true WO2019235952A1 (ru) 2019-12-12

Family

ID=68769429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2018/000358 WO2019235952A1 (ru) 2018-06-04 2018-06-04 Функциональная питьевая вода

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2019235952A1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI23411A (sl) * 2010-07-26 2012-01-31 Probiotiki D.O.O. Probiotiäśna voda: voda z dodanimi mikroorganizmi
RU2482174C2 (ru) * 2011-02-10 2013-05-20 Александр Иванович Леляк ШТАММЫ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis И Bacillus amyloliquefaciens, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗОВ ПОЧВЫ И ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ЖИВОТНЫХ, ОБЛАДАЮЩИЕ БАКТЕРИЦИДНОЙ, ФУНГИЦИДНОЙ И ВИРУЛИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭТИХ ШТАММОВ
WO2017207372A1 (en) * 2016-05-31 2017-12-07 Evonik Degussa Gmbh Bacillus subtilis strain with probiotic activity

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI23411A (sl) * 2010-07-26 2012-01-31 Probiotiki D.O.O. Probiotiäśna voda: voda z dodanimi mikroorganizmi
RU2482174C2 (ru) * 2011-02-10 2013-05-20 Александр Иванович Леляк ШТАММЫ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis И Bacillus amyloliquefaciens, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗОВ ПОЧВЫ И ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ЖИВОТНЫХ, ОБЛАДАЮЩИЕ БАКТЕРИЦИДНОЙ, ФУНГИЦИДНОЙ И ВИРУЛИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭТИХ ШТАММОВ
WO2017207372A1 (en) * 2016-05-31 2017-12-07 Evonik Degussa Gmbh Bacillus subtilis strain with probiotic activity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZAMENHOF S. ET AL.: "Mutability of Stored Spores of Bacillus subtilis", NATURE, vol. 220, November 1968 (1968-11-01), pages 818 - 819, XP055662224 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210113632A1 (en) Novel use of lactobacillus paracasei subsp. paracasei k56 capable of regulating gastrointestinal flora balance
CN104703611B (zh) 用于生产免疫调节剂的多阶段方法
CN107047934A (zh) 利用枯草芽孢杆菌菌株以增强动物健康的方法
ES2404137T3 (es) Composición de Bacillus resistente a la bilis que secreta altos niveles de aminoácidos esenciales
JP4917025B2 (ja) ラクトバチルス・ペントーサスを含む、免疫調節作用を有する組成物
CN110893193B (zh) 乳双歧杆菌bl-99的新应用
CN1057563C (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
EP0271364B1 (en) Preparation suitable for treating enteric disorders
CN113040390A (zh) 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用
CN114191464B (zh) 一种提高鸭生长性能的中药微生态制剂与应用
JP4515157B2 (ja) 免疫調節作用を有する乳酸菌
JPWO2010001509A1 (ja) イムノグロブリンａ誘導能の高い新規乳酸菌
KR20160026280A (ko) 무항생제 가축용 단미 펠렛 사료
KR100557397B1 (ko) 유해미생물 억제 활성을 가지는 신규 내산성 락토바실러스 루테리 Probio-054 및 이를 함유하는 생균활성제
CN114504106A (zh) 乳双歧杆菌bl-99在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用
CN101638665A (zh) 乳酸菌单质粒Nisin诱导表达载体的构建及使用方法
RU2579266C1 (ru) Биотрилакт - биопрепарат для повышения жизнедеятельности и активности пчел в закрытом грунте
WO2019235952A1 (ru) Функциональная питьевая вода
CN1059235C (zh) 一种枯草芽孢杆菌活菌制剂及其制做方法
CN104988089A (zh) 一种鸡用益生菌菌制剂及其制备方法
CN115216434A (zh) 一株唾液乳杆菌菌株及其用途
CN116963607A (zh) 乳酸菌抑制产甲烷菌生长或减少甲烷排放的用途
WO2021071375A1 (ru) Функциональная питьевая вода
KR20230125654A (ko) 신규한 페디오코커스 펜토사세우스 균주 및 이를 포함하는 돼지 설사증 예방 또는 개선용 조성물
CN113462616A (zh) 一株人源鼠李糖乳杆菌glr8及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18921951

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 15.04.2021)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 18921951

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1