WO2019229333A1 - Elevage de coleopteres pour la preparation d'une poudre comprenant la mise a disposition d'un support alimentaire absorbant imbibe notamment d'un liquide nutritif d'origine vegetale - Google Patents
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- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/15—Vitamins
Definitions
- Another object of the present invention is a process for rearing beetles for the preparation of such a composition and its use in human or animal nutrition.
- the present invention will find many applications in the food industry, including human food or animal nutrition including fish farming and New Pets (NAC).
- human food or animal nutrition including fish farming and New Pets (NAC).
- NAC New Pets
- vitamin D3 or Cholecalciferol which is a form of vitamin D and vitamin B 12.
- vitamin D3 allows for optimal assimilation of calcium and mineralization of bones.
- vitamin B12 is meant all of the chemical forms of vitamin B12: natural (Methylcobalamin, Adenosylcobalamin, Hydroxocobalamin) and / or synthetic (Cyanocobalamin).
- this vitamin plays an active role in many metabolic processes, particularly related to the protection and regeneration of nerves and bone health.
- the daily requirement for vitamin B 12 is about 3 pg / day on average for people over 14 years old.
- Vitamin B 12 intake is mainly via diet.
- the sources of vitamin B 12 come almost exclusively from animal sources. Low amounts of vitamin B 12 can, however, be found in milk and some milk products, but also in fruits, vegetables and seeds.
- DH A docosahexaenoic acid
- vitamin D3 whose nutritional properties are decisive, is one of the fat-soluble vitamins that can be found in certain species of beetles such as Tenebrio molitor and Alphitobius diaperinus.
- vitamin B 12 certain marine microalgae such as the species Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica and Chaetoceros calcitrans are excellent candidates. Their vitamin content may vary depending on the species from 1162 to 9 ⁇ g of vitamin B12 per g of dry matter. It is at least 100 times higher than the concentration in milk or beef.
- Semi-solid foods are composed of a gelling agent such as agar-agar and allow the feeding and / or hydration of the larvae.
- Certain water-based liquids in particular can be gelled and processed to be supplied to the larvae in a nutrient or hydration setting.
- Natural gelling agents are expensive and may require a considerable preparation time for large scale farming.
- the liquids are not used directly as such in the farms for two main reasons.
- the Applicant submits that there is currently no solution to feed the larvae of beetles by providing these plant-derived nutrients derived from liquid sources in order to increase their vitamin D3, vitamin B 12 content. and / or DHA.
- the present invention aims to improve the current situation described above.
- the object of the present invention relates, according to a first aspect, to a method for rearing beetles for the preparation of a beetle powder, said method comprising, during the larval stage, a supply to the beetles of at least one absorbent food carrier. impregnated with a food substrate comprising a nutritive liquid of vegetable origin.
- absorbent support in the context of the present invention one or more vegetable food matrices placed in contact with larvae of Coleoptera.
- the nutrient liquid comprises:
- an aqueous solution comprising marine microalgae, and / or
- an aqueous solution comprising boric lichen, and / or
- the marine microalgae are selected from the following: Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis Galbana, Tetraselmis suecica, Chaetoceros calcitrans, for a modification of the vitamin B 12 profile of Coleoptera larvae.
- the marine microalgae are selected from the following: Schizochytrium, Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana for a modification of the docosahexaenoic acid profile, or DHA, Coleoptera larvae.
- the nutrient liquid preferably comprises at least 5% of oil derived from these marine microalgae.
- the nutrient liquid has a DHA concentration of between 1 and 1000 mg per gram of liquid, preferably between 100 and 500 mg per gram of liquid.
- the method according to the present invention comprises, prior to the supply step, an imbibition step during which the nutritive liquid is brought into contact on the food support.
- the contacting of the nutritive liquid on the food support is carried out on a height of between 5 and 100% of the height of the substrate, preferably between 10 and 50% of the height. of the substrate, preferably between 20 and 35% of the height of the substrate.
- the method according to the present invention comprises, prior to the imbibition step, a filtering step during which the nutrient liquid is filtered to reduce the liquid fraction.
- the filtering of the nutrient liquid is carried out using a filter having mesh sizes of between 1 and 50 pgrams, preferably between 2 and 20 pgrams.
- the nutrient liquid comprises a vegetable oil such as for example a rapeseed oil.
- this vegetable oil is previously enriched with vitamin D3 resulting from the lichen lichen boreal type.
- the nutrient liquid has a vitamin D3 concentration of between 10 and 2000 IU per drop, preferably between 50 and 1000 IU per drop, a drop representing a weight of between 25 and 60 milligrams.
- the absorbent food carrier is imbibed with about 1 to 15 drops of nutrient liquid, preferably between 5 and 10, more preferably between 6 and 8.
- the absorbent food carrier has a volume of between 125 mm3 and 900 cm3.
- the absorbent food carrier has a density per production area of between 2 and 15 for 2400 cm 2 , preferably between 4 and 8 for 2400 cm 2 .
- the supply of said food carrier has a frequency of between one and four times a week, more preferably between one and two times a week.
- the supply of food support is carried out between the sixth and the fourteenth week of growth of the larvae, more preferably between the tenth and twelfth week of growth of the larvae.
- the Coleoptera are selected from the following species: Tenebrio molitor, Alphitobus diaperinus.
- the Coleoptera larvae are maintained in an environment having a substantially constant temperature of between 24 and 30 ° C, preferably between 26 and 28 ° C.
- the larvae of Coleoptera are maintained in an environment having a substantially constant humidity of between 45 and 70% relative humidity, preferably between 55 and 65%.
- the temperature and / or hygrometry of the environment of the Coleoptera larvae is controlled so that the temperature difference during all or part of the larval stage is less than or equal to 2 ° C. and / or the difference hygrometry is less than or equal to 10% relative humidity.
- the subject of the present invention relates, according to a second aspect, to a beetle powder obtained from beetles reared according to the rearing method as described above.
- the powder comprises a percentage by weight of vitamin D3 greater than or equal to at least 0.000049% of vitamin D3, the percentage by weight being given on the total weight of beetle powder.
- the powder comprises a percentage by weight of vitamin B 12 greater than or equal to at least 0.0000013% by weight of vitamin B 12, the percentage by weight being given on the total weight of coleopteran powder.
- the powder has a percentage by weight of calcium greater than or equal to at least 0.1%, the weight percentage being given on the total weight of Coleoptera powder.
- the object of the present invention relates, according to a second aspect, to a use of the Coleoptera powder as described above in the human or animal diet.
- the powder is used as a dietary supplement.
- the present invention makes it possible to significantly increase the level of certain nutrients of interests such as vitamin D3, vitamin B12 or DHA.
- the breeding method that will be described here aims to develop a technique for significantly increasing the level of vitamin D3, vitamin B 12 or DHA in living Tenebrio molitor or Alphitobius diaperinus and / or in the associated powder obtained after transformation.
- Coleoptera in the following description is understood to mean the following species: Tenebrio molitor and / or Alphitobius diaperinus.
- the concept underlying the present invention is therefore to modify the diet of beetles during their larval stage to increase the vitamin D3, vitamin B 12 and / or DHA content.
- breeding method thus comprises several phases which will be described here in the following description. Breeding :
- the larval stage includes all stages before the nymphal stage.
- the nymphal stage corresponds to the intermediate phase between the last larval stage and the adult stage.
- the larvae After hatching, the larvae are kept in plastic containers at a temperature between 24 and 30 ° C, more preferably between 26 and 28 ° C and a relative humidity between 45 and 70% relative humidity, more preferably between 55 and 65 % relative humidity.
- the larvae are kept in the dark between 12 and 22 hours per day, more preferably between 18 and 20 hours per day.
- the density of larvae is optimized to obtain a mortality rate close to 0 on the growth cycle of between 10 and 16 weeks, more preferably between 11 and 13 weeks.
- the food provided to the larvae is 100% vegetable.
- the formulation of the diet is adapted here according to the various tests carried out.
- the amounts of food are adapted to the numbers of larvae and their stage of development. From the sixth week of growth, previously cleaned vegetables are given to the larvae in amounts adapted to the numbers of larvae and their stage of development.
- the source of vitamin D3 comes from Boreal Lichen.
- this fat-soluble vitamin D3 is extracted from Boreal Lichen and then dissolved in vegetable oil, preferably rapeseed oil.
- Rapeseed oil is particularly interesting because its use has very little impact on the mortality rate of coleopteran larvae (mortality rate ⁇ 1%)
- the vitamin D3 concentrations of this enriched oil are between 10 and 2000 IU per drop, preferably between 50 and 1000 per drop, a drop representing a weight of between 25 and 60 milligrams.
- the rapeseed oil enriched with vitamin D3 is then applied on absorbent supports.
- the volume of the absorbent supports is between 125 mm 3 and 900 cm 3 .
- the density of absorbent supports per production area is between 2 and 15 for 2400 cm 2 , more preferably between 4 and 8 for 2400 cm 2 .
- the amount of oil applied to each absorbent support is between 1 and 15 drops, more preferably between 5 and 10, optimally between 6 and 8.
- the frequency of placement in the culture units of the absorbent supports is between 1 and 4 per week, more preferably between 1 and 2 times per week.
- the period of the provisioning is between the 6 th and 14 th week of larval growth, more preferably between the 10 th and l2 th week of growth of the larvae.
- Quantitative analyzes of vitamin D3 or cholecalciferol were performed on these tests by an independent laboratory certified Cofrac. Quantification is performed by semi-preparative HPLC followed by reverse phase HPLC with UV / DAD detector (265 nm).
- the consumption by the larvae of certain oils on an absorbent support causes a high mortality rate.
- the survival rate of larvae can reach 99% when vitamin D3 is dissolved in rapeseed oil and this oil is previously positioned on an absorbent support.
- the larvae After fasting, the larvae are sieved again to remove the feces.
- the larvae are placed in water between 85 ° C and 100 ° C for slaughter for 1 to 4 minutes.
- a stunning step of between 0 and 4 ° C for several minutes can also take place just before slaughter.
- the larvae After slaughter, the larvae are placed at a temperature between 50 and 150 ° C for a time between lh20 and 24h depending on the temperature used.
- the larvae obtained contain between 2 and 15% of water, more preferably between 3 and 8% of water and a water activity of less than 0.7.
- the powder reduction is obtained by grinding.
- the term powder includes any reduction in element less than 3 mm of whole insects in their larval or nymphal stage or only a morphological part of these insects.
- sources of B12 vitamins come from microalgae species selected from the following: Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica and Chaetoceros calcitrans.
- the microalgae are taken from their culture medium and can be placed temporarily in a solution adapted to their survival.
- solution fresh or salt water whose salt concentrations are adapted to the species used.
- Microalgae can be applied directly to absorbent substrates.
- the application of the algae or the solution comprising the microalgae can be done by making contact between the absorbent supports and the solution containing the microalgae.
- the contacting is performed on a height of between 5 and 100% of the height of the substrate, preferably between 10 and 50%, optimally between 20 and 35% of the height of the substrate.
- the microalgae can be filtered to reduce the liquid fraction before they are applied to the absorbent support.
- the filters used have mesh sizes of between 1 ⁇ m and 50 ⁇ m, more preferably between 2 and 10 ⁇ m.
- the volume of the absorbent supports is between 125 mm 3 and 900 cm 3 .
- the density of absorbent supports per production area is between 2 and 15 for 2400 cm 2 , more preferably between 4 and 8 for 2400 cm 2 .
- the frequency of placement in the culture units of the absorbent supports is between 1 and 4 per week, more preferably between 1 and 2 times per week.
- the period of the provisioning is between the 6 th and 14 th week of larval growth, more preferably between the 10 th and l2 th week of growth of the larvae.
- Quantitative analyzes of vitamin B 12 were performed on these tests as previously:
- the larvae After fasting, the larvae are sieved again to remove the feces. The larvae are placed in water between 85 ° C and 100 ° C for slaughter for 1 to 4 minutes. A stunning step of between 0 and 4 ° C for several minutes can also take place just before slaughter.
- the larvae After slaughter, the larvae are placed at a temperature between 50 and 150 ° C for a time between lh20 and 24h depending on the temperature used.
- the larvae obtained contain between 2 and 15% of water, more preferably between 3 and 8% of water and a water activity of less than 0.7.
- the powder reduction is obtained by grinding.
- the term powder includes any reduction in element less than 3 mm of whole insects in their larval or nymphal stage or only a morphological part of these insects.
- the source of DHA comes from Schizochytrium sp., Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana microalgae and more particularly from oils of this specific genus.
- the vitamin DHA concentrations are between 1 and 1000 mg per gram of liquid, preferably between 100 and 500 mg per gram of liquid.
- the amount of oil applied to each absorbent support is between 1 and 15 drops, more preferably between 5 and 10, optimally between 6 and 8.
- microalgae are used in their entirety, they are first taken from their culture medium and can be placed temporarily in a solution adapted to their survival.
- solution fresh or salt water whose salt concentrations are adapted to the species used.
- Microalgae can be applied directly to absorbent substrates.
- the application of the algae can be done by making contact between the absorbent supports and the solution containing the microalgae.
- the contact is made at a height between 5 and 100% of the height of the substrate, preferably between 10 and 50%, optimally between 20 and 35% of the height of the substrate.
- the microalgae can be filtered to reduce the liquid fraction before they are applied to the absorbent support.
- the filters used have mesh sizes of between 1 ⁇ m and 50 ⁇ m, more preferably between 2 and 20 ⁇ m.
- the frequency of placement in the culture units of the absorbent supports is between 1 and 4 per week, more preferably between 1 and 2 times per week.
- the period of the provisioning is between the 6 th and 14 th week of larval growth, more preferably between the 10 th and l2 th week of growth of the larvae.
Landscapes
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Abstract
La présente invention concerne un procédé d'élevage de coléoptères pour la préparation d'une poudre de coléoptères, ledit procédé comportant, pendant le stade larvaire, une fourniture aux coléoptères d'au moins un support alimentaire absorbant imbibé d'un substrat alimentaire comprenant un liquide nutritif d'origine végétale.
Description
ELEVAGE DE COLEOPTERES POUR LA PREPARATION D’UNE POUDRE COMPRENANT LA MISE A DISPOSITION D’UN SUPPORT ALIMENTAIRE ABSORBANT IMBIBE NOTAMMENT D’UN LIQUIDE NUTRITIF D’ORIGINE
VEGETALE
Domaine technique et art antérieur
La présente invention concerne le domaine de l’alimentation.
Un des objets de la présente invention concerne plus particulièrement la composition d’une poudre alimentaire aux propriétés nutritives intéressantes réalisée à partir d’insectes et notamment de coléoptères.
Un des autres objets de la présente invention vise un procédé d’élevage des coléoptères pour la préparation d’une telle composition et son utilisation dans l’alimentation humaine ou animale.
La présente invention trouvera ainsi de nombreuses applications dans l’industrie alimentaire dont notamment l’alimentation humaine ou encore la nutrition animale dont la pisciculture et les Nouveaux Animaux de Compagnie (NAC).
Aujourd’hui, on recense plus de deux milles espèces d’insectes comestibles dans le monde (d’après une source de la FAO).
L’utilisation d’insectes comestibles en tant que source nutritive pour l’alimentation humaine ou animale représente un potentiel non-exploité qui est de plus en plus reconnu, notamment en Europe.
Des études ont montré que certaines espèces d’insectes allient à la fois des propriétés nutritionnelles très intéressantes aussi bien sur le plan qualitatif que quantitatif.
On sait par ailleurs que la production d’aliments à base d’insectes a un impact réduit sur l’environnement (voir notamment les publications Belluco et al., 2013, Oonincx et al, 2010 ou encore Van Huis et al. 2013).
Des études sur le pouvoir nutritionnel de certaines espèces de coléoptères ont été approfondies ces dernières années.
Chez les espèces Tenebrio molitor ou Alphitobius diaperinus, ce sont les stades larvaire et nymphal qui sont le plus intéressants d’un point de vue nutritionnel.
Ces études montrent en effet que les larves et les nymphes de ces deux espèces contiennent une grande diversité de nutriments d’intérêts parmi lesquels des protéines (entre 50
et 66% du poids sec), des acides gras essentiels comme les oméga 3 dont des ALA, des vitamines ou encore des minéraux.
Parmi les nutriments d’intérêts présents chez ces coléoptères, on retrouve plus particulièrement la vitamine D3 (ou Cholécalciférol) qui est une forme de la vitamine D et la vitamine B 12.
La vitamine D3 a des propriétés importantes.
Chez l’espèce humaine, la vitamine D3 participe au maintien des niveaux sanguins normaux de calcium et de phosphore absorbés par l’intestin.
La vitamine D3 joue donc un rôle essentiel dans le maintien des muscles squelettiques et des os. Elle est utilisée en complément du calcium pour prévenir l’ostéoporose chez les personnes âgées.
On sait aujourd’hui qu’environ 80% des personnes souffrent d’un déficit en vitamine D3.
Les besoins journaliers en vitamine D3 sont de 5 pg pour les enfants à partir de 4 ans jusqu’à l’âge adulte mais grimpe à 10 pg chez les enfants de moins de 3 ans, les femmes enceintes et les personnes âgées.
Chez les reptiles, la vitamine D3 permet notamment une assimilation optimale du calcium et la minéralisation des os.
Classiquement, les sources alimentaires contenant de la vitamine D3 proviennent essentiellement des poissons à travers notamment les huiles, le filet ou les foies de poisson.
La vitamine B 12 est une vitamine hydrosoluble dite essentielle car l’espèce humaine ne peut pas la synthétiser.
Par vitamine B12, on entend l’ensemble des formes chimiques de la vitamine B12 : naturelles (Méthylcobalamine, Adénosylcobalamine, Hydroxocobalamine) et/ou synthétique (Cyanocobalamine) .
Chez l’espèce humaine, cette vitamine participe activement à de nombreux processus métaboliques notamment liés à la protection et la régénération des nerfs ainsi qu’à la santé osseuse.
Les besoins journaliers en vitamine B 12 sont d’environ 3 pg/jour en moyenne pour les personnes âgées de plus de 14 ans.
L’apport en vitamine B 12 se fait essentiellement via l’alimentation.
Les sources de vitamine B 12 proviennent presque uniquement de source animale.
De faibles quantités de vitamine B 12 peuvent cependant être trouvées dans le lait et certains produits à base de lait mais également dans les fruits, légumes et graines.
D’autres nutriments très importants pour le métabolisme humaine comme la DH A (ou acide docosahexaénoïque) sont trouvés sous forme de traces chez les larves de coléoptères.
Malgré la capacité de ces larves à bioaccumuler les nutriments de leur alimentation, une concentration significative en DH A n’a jamais encore été démontrée que ce soit chez les larves vivantes ou transformées par traitement thermique.
Cette absence de DHA pourrait s’expliquer par le fait que les sources principales de DHA proviennent des poissons et des huiles de poissons qui sont deux types de nourriture très complexes à intégrer dans l’alimentation des larves de coléoptères pour des raisons sanitaires, organoleptiques, économiques et environnementales.
La DHA est aussi très fragile et peut se dégrader rapidement sous l’effet de l’oxygène et de la lumière notamment.
Comme indiqué ci-dessus, la vitamine D3 dont les propriétés nutritionnelles sont décisives fait partie des vitamines liposolubles qu’on peut trouver chez certaines espèces de coléoptères comme les Tenebrio molitor et les Alphitobius diaperinus.
Or, on sait déjà réaliser des poudres alimentaires à base de ces coléoptères.
Une étude (Klasing et al, 1999) montre chez les larves de Tenebrio molitor que la prise d’une alimentation sèche contenant 675 UI de vitamine D3 pour 1000 grammes de nourriture pendant 15 jours induisait une concentration en vitamine D3 de 139 UI.
Actuellement, le seul moyen connu d’augmenter le taux de vitamine D3 est donc d’ajouter dans l’alimentation de ces espèces une supplémentation en vitamine D3 sous forme de poudre.
Le Demandeur soumet que les concentrations en vitamine D3 pour 100 grammes de matière vivante ou sèche chez Tenebrio molitor ou Alphitobius diaperinus nourris avec une supplémentation en vitamine D3 sous forme de poudre reste cependant faible si on souhaite utiliser ces espèces comme complément alimentaire pour la vitamine D3 en nutrition humaine ou animale.
De telles poudres obtenues avec une supplémentation en vitamine D3 lors de l’élevage des coléoptères ne sont donc pas économiquement et nutritionnellement satisfaisantes.
La vitamine B 12 a quant à elle été quantifiée chez des larves fraîches de Tenebrio molitor à un taux pouvant atteindre 6 pg/ 100g.
La DHA n’a été trouvée que sous forme de trace dans la littérature et la seule source riche en DHA qui a été fournie dans l’alimentation des coléoptères est issue des poissons.
Les sources significatives et traditionnelles de ces trois types de nutriments d’intérêts (vitamine D3, vitamine B 12 et DHA) pour l’alimentation des larves de coléoptères sont donc d’origine animale, ce qui n’est pas économiquement et environnementalement acceptable.
Pour ces raisons, il devient nécessaire de trouver des sources alternatives dans l’alimentation des larves pour l’approvisionnement de ces nutriments spécifiques, qui s’inscrivent dans une démarche durable et raisonnée.
Pour la vitamine D3, on sait que le lichen boréal ( Cladonia arbuscula ) est très intéressant car il fournit une vitamine D3 comparable à celle que l’on trouve habituellement dans les sources animales. Les lichens sont des organismes résultant d’une symbiose entre un champignon hétérotrophe et des cellules microscopiques possédant de la chlorophylle (algue verte ou cyanobactérie autotrophe).
Pour la vitamine B 12, certaines microalgues marines comme les espèces Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica et Chaetoceros calcitrans constituent d’excellents candidats. Leur teneur en vitamine peut varier en fonction des espèces de 1162 à 9 pg de vitamine B12 par g de matière sèche. C’est au minimum 100 fois supérieur à la concentration chez le lait ou le bœuf.
Pour la DHA, les microalgues marines sont d’excellentes sources de DHA non animales comme les espèces Schizochytrium, Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana.
On sait par ailleurs que les nutriments absorbés par les larves de coléoptères dans les élevages sont issus d’aliments solides et/ou semi solides.
Parmi les aliments solides, on distingue les aliments secs qu’ils soient sous forme de poudre ou de granulométrie plus importante et les aliments frais comme les fruits ou les légumes.
Les aliments semi-solides sont composés d’un gélifiant comme l’agar-agar et permettent l’alimentation et/ou l’hydratation des larves.
Certains liquides à base d’eau notamment peuvent être gélifiées et transformées pour être fournies aux larves dans un cadre nutritif ou d’hydratation.
Les gélifiants naturels sont coûteux et peuvent nécessiter un temps de préparation non négligeable pour un élevage à grande échelle.
Dans le cadre de l’alimentation et/ou de l’hydratation des larves, les liquides ne sont pas utilisés directement tels quels dans les élevages pour deux principales raisons.
L’introduction de liquides notamment à base d’eau au sein d’unité de croissance des larves augmente le risque d’apparition de pathogènes (bactéries, champignons et virus) ou de nuisibles.
Les liquides à base d’eau ou d’huile peuvent également induire une mortalité importante des larves.
Le Demandeur soumet qu’il n’existe pas à ce jour de solution pour alimenter les larves de coléoptères en leur fournissant ces nutriments d’intérêts d’origine végétale issues de source liquide afin d’augmenter leur teneur en vitamine D3, vitamine B 12 et/ou DHA.
Résumé et objet de la présente invention
La présente invention vise à améliorer la situation actuelle décrite ci-dessus.
La présente invention vise plus particulièrement à remédier aux différents inconvénients mentionnés ci-dessus en proposant une solution simple, économique et sans impact sanitaire sur l’élevage des coléoptères pour la mise à disposition de nutriments d’origine végétale (vitamine D3, vitamine B 12 et DHA) sous forme de solutions liquides à base d’eau ou d’huile afin d’augmenter significativement le taux de ces nutriments d’intérêts.
L’objet de la présente invention concerne selon un premier aspect un procédé d’élevage de coléoptères pour la préparation d’une poudre de coléoptères, ledit procédé comportant, pendant le stade larvaire, une fourniture aux coléoptères d’au moins un support alimentaire absorbant imbibé d’un substrat alimentaire comprenant un liquide nutritif d’origine végétale.
Par support absorbant, on entend dans le cadre de la présente invention un ou plusieurs matrices alimentaires végétales placées au contact des larves de coléoptères.
De préférence, le liquide nutritif comprend :
des microalgues marines, et/ou
du lichen boréal et/ou
une solution aqueuse comprenant des microalgues marines, et/ou
une solution aqueuse comprenant du lichen boréal, et/ou
une huile issue desdites microalgues marines, et/ou
une huile issue de lichen boréal.
Dans un mode de réalisation avantageux de la présente invention, les microalgues marines sont sélectionnées parmi les suivantes : Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica, Chaetoceros calcitrans, pour une modification du profil en vitamine B 12 des larves de coléoptères.
Dans un autre mode de réalisation avantageux de la présente invention, les microalgues marines sont sélectionnées parmi les suivantes : Schizochytrium, Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana pour une modification du profil en acides docosahexaénoïque, ou DHA, des larves de coléoptères.
Dans ce mode, le liquide nutritif comporte de préférence au moins 5% d’huile issue de ces micro algues marines.
Avantageusement, le liquide nutritif présente une concentration en DHA comprise entre 1 et 1000 mg par gramme de liquide, de préférence entre 100 et 500 mg par gramme de liquide.
Dans une variante de réalisation, le procédé selon la présente invention comporte, préalablement à l’étape de fourniture, une étape d’imbibition au cours de laquelle le liquide nutritif est mis en contact sur le support alimentaire.
De préférence, lors de l’étape d’imbibition, la mise en contact du liquide nutritif sur le support alimentaire est réalisée sur une hauteur comprise entre 5 et 100 % de la hauteur du substrat, de préférence entre 10 et 50 % de la hauteur du substrat, préférentiellement entre 20 et 35% de la hauteur du substrat.
Dans une autre variante de réalisation qui peut être combinée à la précédente variante, le procédé selon la présente invention comporte, préalablement à l’étape d’imbibition, une étape de filtrage au cours de laquelle le liquide nutritif est filtré pour diminuer la fraction liquide.
De préférence, le filtrage du liquide nutritif est réalisé à l’aide d’un filtre présentant des mailles comprises entre 1 et 50 pgrammes, préférentiellement entre 2 et 20 pgrammes.
Dans un autre mode de réalisation avantageux de la présente invention, le liquide nutritif comporte une huile végétale telle que par exemple une huile de colza.
De préférence, cette huile végétale est préalablement enrichie en vitamine D3 issue du lichen de type lichen boréal.
Avantageusement, le liquide nutritif présente une concentration en vitamine D3 comprise entre 10 et 2000 UI par goutte, de préférence entre 50 et 1000 UI par goutte, une goutte représentant un poids compris entre 25 et 60 milligrammes.
De préférence, le support alimentaire absorbant est imbibé d’environ 1 à 15 gouttes de liquide nutritif, de préférence entre 5 et 10, plus préférentiellement entre 6 et 8.
Avantageusement, le support alimentaire absorbant présente un volume compris entre 125 mm3 et 900 cm3.
Avantageusement, le support alimentaire absorbant présente une densité par surface de production comprise entre 2 et 15 pour 2400 cm2, de préférence entre 4 et 8 pour 2400 cm2.
Avantageusement, la fourniture dudit support alimentaire présente une fréquence comprise entre une et quatre fois par semaine, plus préférentiellement entre une et deux fois par semaine.
Avantageusement, la fourniture du support alimentaire est réalisée entre la sixième et la quatorzième semaine de croissance des larves, plus préférentiellement entre la dixième et la douzième semaine de croissance des larves.
De préférence, les coléoptères sont sélectionnés parmi les espèces suivantes : Tenebrio molitor, Alphitobus diaperinus.
Avantageusement, les larves de coléoptères sont maintenues dans un environnement présentant une température sensiblement constante comprise entre 24 et 30°C, de préférence entre 26 et 28°C.
Avantageusement, les larves de coléoptères sont maintenues dans un environnement présentant une hygrométrie sensiblement constante comprise entre 45 et 70 % d’humidité relative, de préférence entre 55 et 65 %.
De préférence, on contrôle la température et/ou l’hygrométrie de l’environnement des larves de coléoptères de manière à ce que la différence de température pendant tout ou partie du stade larvaire est inférieure ou égale à 2 °C et/ou la différence d’hygrométrie est inférieure ou égale à 10 % d’humidité relative.
L’objet de la présente invention concerne selon un deuxième aspect une poudre de coléoptères obtenue à partir de coléoptères élevés selon le procédé d’élevage tel que décrit ci- dessus.
Dans une variante, la poudre comporte un pourcentage en poids de vitamine D3 supérieur ou égal à au moins 0,000049 % en vitamine D3, le pourcentage en poids étant donné sur le poids total de poudre de coléoptères.
Dans une autre variante, la poudre comporte un pourcentage en poids de vitamine B 12 supérieur ou égal à au moins 0,0000013 % en vitamine B 12, le pourcentage en poids étant donné sur le poids total de poudre de coléoptères.
De préférence, la poudre présente un pourcentage en poids de calcium supérieur ou égal à au moins 0.1 %, le pourcentage en poids étant donné sur le poids total de poudre de coléoptères.
L’objet de la présente invention concerne selon un deuxième aspect une utilisation de la poudre de coléoptères telle que décrite ci-dessus dans l’alimentation humaine ou animale.
De préférence, la poudre est utilisée en tant que complément alimentaire.
D’autres utilisations avantageuses pourront être envisagées comme par exemple l’alimentation des reptiles ou celle des poissons.
Par les différentes caractéristiques techniques ci-dessus, et notamment la mise à disposition pendant le stade larvaire d’un support alimentaire imbibé d’un liquide nutritif d’origine végétale, la présente invention permet d’augmenter significativement le taux de certains nutriments d’intérêts comme la vitamine D3, la vitamine B12 ou encore la DHA.
Description détaillée portant sur différents exemples
Les exemples qui suivent sont fournis à titre de simple illustration de l’invention vis-à- vis de laquelle ils ne présentent aucun caractère limitatif.
Le procédé d’élevage qui va être décrit ici vise à mettre au point une technique pour augmenter signifîcativement le taux de vitamine D3, de vitamine B 12 ou encore de DHA chez le Tenebrio molitor ou Alphitobius diaperinus vivant et/ou dans la poudre obtenue associée après transformation.
Par souci de clarté et de concision, on entend par coléoptères dans la suite de la description les espèces suivantes : Tenebrio molitor ct/ou Alphitobius diaperinus.
On sait qu’il est possible de faire varier les quantités des nutriments présents chez les coléoptères selon le stade pendant la croissance, le type d’alimentation, le mode de transformation et la qualité du conditionnement et du stockage.
Le concept sous-jacent à la présente invention est donc de modifier l’alimentation des coléoptères pendant leur stade larvaire pour augmenter la teneur en vitamine D3, vitamine B 12 et/ou en DHA
Le procédé d’élevage comprend ainsi plusieurs phases qui vont être décrites ici dans la suite de la description.
Elevage :
Le stade larvaire regroupe l’ensemble des stades avant le stade nymphal.
Le stade nymphal correspond à la phase intermédiaire entre le dernier stade larvaire et le stade adulte.
Après éclosion, les larves sont maintenues dans des bacs plastiques à une température comprise entre 24 et 30°C, plus préférentiellement entre 26 et 28°C et une hygrométrie comprise entre 45 et 70% d’humidité relative, plus préférentiellement entre 55 et 65% d’humidité relative.
Dans l’exemple décrit ici, les larves sont maintenues dans l’obscurité entre 12 et 22 heures par jour, plus préférentiellement entre 18 et 20h par jour.
Dans chaque bac, la densité de larves est optimisée pour obtenir un taux de mortalité proche de 0 sur le cycle de croissance compris entre 10 et 16 semaines, plus préférentiellement entre 11 et 13 semaines.
Ici, la nourriture fournie aux larves est 100 % végétal.
La formulation du régime alimentaire est ici adaptée en fonction des différents tests réalisés.
Les quantités de nourriture sont adaptées aux nombres de larves et à leur stade de développement. A partir de la sixième semaine de croissance, des légumes préalablement nettoyées sont données aux larves dans des quantités adaptées aux nombres de larves et à leur stade de développement.
Premier mode de réalisation dédié à l’ augmentation du taux de vitamine D3 :
Dans ce mode de réalisation, la source de vitamine D3 provient du Lichen Boréal.
De préférence, cette vitamine D3 liposoluble est extraite du Lichen Boréal puis dissoute dans de l’huile végétale, préférentiellement de l’huile de colza.
L’huile de colza est particulièrement intéressante car son utilisation a très peu d’impact sur le taux de mortalité des larves de coléoptères (taux de mortalité inférieur à < 1%)
Les concentrations en vitamine D3 de cette huile enrichie sont comprises entre 10 et 2000 UI par goutte, préférentiellement entre 50 et 1000 par goutte, une goutte représentant un poids compris entre 25 et 60 milligrammes.
L’huile de colza enrichie en vitamine D3 est ensuite appliquée sur des supports absorbants.
Le volume des supports absorbants est compris entre 125 mm3 et 900 cm3.
La densité de supports absorbants par surface de production est comprise entre 2 et 15 pour 2400 cm2, plus préférentiellement entre 4 et 8 pour 2400 cm2.
La quantité d’huile appliquée sur chaque support absorbant est compris entre 1 et 15 gouttes, plus préférentiellement entre 5 et 10, de façon optimale entre 6 et 8.
La fréquence de mise en place dans les unités d’élevage des supports absorbants est comprise entre 1 et 4 par semaine, plus préférentiellement entre 1 et 2 fois par semaine.
La période de la mise à disposition est comprise entre la 6eme et 14eme semaine de croissance des larves, plus préférentiellement entre la 10eme et la l2eme semaine de croissance des larves.
Des analyses de quantification de la vitamine D3 ou Cholécalciférol ont réalisées sur ces tests par un laboratoire indépendant certifié Cofrac. La quantification est réalisée par HPLC semi-préparative suivie d'une HPLC en phase inverse avec détecteur UV/DAD (265 nm).
Pour ces tests, les résultats montrent une capacité de concentration de la vitamine D3 de 49 pg/l00g.
La consommation par les larves de certaines huiles sur un support absorbant entraîne un taux de mortalité important. Le taux de survie des larves peut atteindre 99% lorsque la vitamine D3 est dissoute dans de l’huile de colza et que cette huile est préalablement positionnée sur un support absorbant.
1 Contrôle réalisé sur des larves de Tenebrio molitor nourries avec un mix 100% végétal contenant 2500 UI de vitamine D3 par kilogramme.
' 2 Pendant la l3ème semaine de croissance, les larves sont tamisées pour éliminer les excréments. Les larves tamisées sont ensuite placées dans un bac plastique pour un jeun de 24 à 48 heures.
Après le jeun, les larves sont de nouveau tamisées pour enlever les excréments. Les larves sont placées dans de l’eau entre 85°C et l00°C pour l’abattage pendant 1 à 4 minutes. Une étape d’étourdissement entre 0 et 4°C pendant plusieurs minutes peut également avoir lieu juste avant l’abattage.
Après l’abattage, les larves sont placées à une température comprise entre 50 et l50°C pour une durée comprise entre lh20 et 24h en fonction de la température utilisée. Les larves obtenues contiennent entre 2 et 15% d’eau, plus préférentiellement entre 3 et 8% d’eau et une activité de l’eau inférieure à 0.7
La réduction en poudre est obtenue par broyage. Le terme poudre regroupe toute réduction en élément inférieur à 3 mm des insectes entiers dans leur stade larvaire ou nymphal ou seulement d’une partie morphologique de ces insectes.
Deuxième mode de réalisation dédié à l’augmentation du taux de vitamine B 12 :
Dans ce mode, les sources de vitamines B12 proviennent d’espèces de microalgues sélectionnées parmi les suivantes : Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica et Chaetoceros calcitrans.
Les microalgues sont prélevées de leur milieu de culture et peuvent être placées provisoirement dans une solution adaptée à leur survie.
Par solution, on entend de l’eau douce ou salée dont les concentrations en sel sont adaptées à l’espèce utilisée.
Les microalgues peuvent être directement appliquées sur les supports absorbants.
L’application des algues ou de la solution comprenant les microalgues peut se faire en réalisant un contact entre les supports absorbants et la solution contenant les microalgues. La mise en contact est réalisée sur une hauteur comprise entre 5 et 100% de la hauteur du substrat, préférentiellement entre 10 et 50%, de façon optimale entre 20 et 35% de la hauteur du substrat.
En fonction de la concentration de microalgues désirée, les microalgues peuvent être filtrées pour diminuer la fraction liquide avant qu’elles ne soient appliquées sur le support absorbant.
Dans l’exemple décrit ici, les filtres utilisés ont des mailles comprises entre 1 pm et 50 mpi, plus préférentiellement entre 2 et 10 pm.
Le volume des supports absorbants est compris entre 125 mm3 et 900 cm3.
La densité de supports absorbants par surface de production est comprise entre 2 et 15 pour 2400 cm2, plus préférentiellement entre 4 et 8 pour 2400 cm2.
La fréquence de mise en place dans les unités d’élevage des supports absorbants est comprise entre 1 et 4 par semaine, plus préférentiellement entre 1 et 2 fois par semaine.
La période de la mise à disposition est comprise entre la 6eme et 14eme semaine de croissance des larves, plus préférentiellement entre la 10eme et la l2eme semaine de croissance des larves.
Des analyses de quantification de la vitamine B 12 ont été réalisées sur ces tests comme précédemment :
' 2 Contrôle réalisé sur des larves de Tenebrio molitor nourries avec un mix 100% végétal 2’ 3 Pendant la l3ème semaine de croissance, les larves sont tamisées pour éliminer les excréments. Les larves tamisées sont ensuite placées dans un bac plastique pour un jeun de 24 à 48 heures.
Après le jeun, les larves sont de nouveau tamisées pour enlever les excréments. Les larves sont placées dans de l’eau entre 85°C et l00°C pour l’abattage pendant 1 à 4 minutes. Une étape d’étourdissement entre 0 et 4°C pendant plusieurs minutes peut également avoir lieu juste avant l’abattage.
Après l’abattage, les larves sont placées à une température comprise entre 50 et l50°C pour une durée comprise entre lh20 et 24h en fonction de la température utilisée. Les larves obtenues contiennent entre 2 et 15% d’eau, plus préférentiellement entre 3 et 8% d’eau et une activité de l’eau inférieure à 0.7
La réduction en poudre est obtenue par broyage.
Comme précédemment, le terme poudre regroupe toute réduction en élément inférieur à 3 mm des insectes entiers dans leur stade larvaire ou nymphal ou seulement d’une partie morphologique de ces insectes.
Troisième mode de réalisation dédié à l’ augmentation du taux de DHA :
Dans ce mode de réalisation, la source de DHA provient des microalgues Schizochytrium sp., Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana et plus particulièrement des huiles issues de ce genre spécifique.
Les concentrations en vitamine DHA sont comprises entre 1 et 1000 mg par gramme de liquide, de préférence entre 100 et 500 mg par gramme de liquide.
Le volume des supports absorbants est compris entre 125 mm3 et 900 cm3.
La densité de supports absorbants par surface de production est comprise entre 2 et 15 pour 2400 cm2, plus préférentiellement entre 4 et 8 pour 2400 cm2.
Si l’huile de microalgues est utilisée, la quantité d’huile appliquée sur chaque support absorbant est compris entre 1 et 15 gouttes, plus préférentiellement entre 5 et 10, de façon optimale entre 6 et 8.
Si les microalgues sont utilisés en entier, elles sont d’abord prélevées de leur milieu de culture et peuvent être placées provisoirement dans une solution adaptée à leur survie.
Par solution, on entend de l’eau douce ou salée dont les concentrations en sel sont adaptées à l’espèce utilisée.
Les microalgues peuvent être directement appliquées sur les supports absorbants.
L’application des algues peut se faire en réalisant un contact entre les supports absorbants et la solution contenant les microalgues. Le contact est réalisé sur une hauteur comprise entre 5 et 100% de la hauteur du substrat, préférentiellement entre 10 et 50%, de façon optimale entre 20 et 35% de la hauteur du substrat.
En fonction de la concentration de microalgues désirée, les microalgues peuvent être filtrées pour diminuer la fraction liquide avant qu’elles ne soient appliquées sur le support absorbant. Les filtres utilisés ont des mailles comprises entre 1 pm et 50 pm, plus préférentiellement entre 2 et 20 pm.
La fréquence de mise en place dans les unités d’élevage des supports absorbants est comprise entre 1 et 4 par semaine, plus préférentiellement entre 1 et 2 fois par semaine.
La période de la mise à disposition est comprise entre la 6eme et 14eme semaine de croissance des larves, plus préférentiellement entre la 10eme et la l2eme semaine de croissance des larves.
L’ensemble des résultats obtenu mettent en évidence l’influence du support alimentaire imbibé d’un liquide nutritif d’origine végétale sur la concentration en vitamine D3, en vitamine B 12 et en DHA.
Il devra être observé que cette description détaillée porte sur un exemple de réalisation particulier de la présente invention, mais qu’en aucun cas cette description ne revêt un quelconque caractère limitatif à l’objet de l’invention ; bien au contraire, elle a pour objectif d’ôter toute éventuelle imprécision ou toute mauvaise interprétation des revendications qui suivent. Il devra également être observé que les signes de références mis entre parenthèses dans les revendications qui suivent ne présentent en aucun cas un caractère limitatif ; ces signes ont pour seul but d’améliorer l’intelligibilité et la compréhension des revendications qui suivent ainsi que la portée de la protection recherchée.
Claims
1. Procédé d’élevage de coléoptères pour la préparation d’une poudre de coléoptères, ledit procédé comportant, pendant le stade larvaire, une fourniture aux coléoptères d’au moins un support alimentaire absorbant imbibé d’un substrat alimentaire comprenant un liquide nutritif d’origine végétale.
2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le liquide nutritif comprend :
des microalgues marines, et/ou
- une solution aqueuse comprenant des microalgues marines, et/ou
- une huile issue desdites microalgues marines.
3. Procédé selon la revendication 2, dans lequel les microalgues marines sont sélectionnées parmi les suivantes : Pavlova Lutheri, Skeletonema costatum, Isochrysis galbana, Tetraselmis suecica, Chaetoceros calcitrans, pour une modification du profil en vitamine B 12 des larves de coléoptères.
4. Procédé selon la revendication 2, dans lequel les microalgues marines sont sélectionnées parmi les suivantes : Schizochytrium, Pavlova Lutheri, Isochrysis galbana pour une modification du profil en acides docosahexaénoïque, ou DHA, des larves de coléoptères.
5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel le liquide nutritif comporte au moins 5% d’huile issue desdites microalgues marines.
6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel le liquide nutritif présente une concentration en DHA comprise 1 et 1000 mg par gramme de liquide, de préférence entre 100 et 500 mg par gramme de liquide.
7. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, lequel comporte, préalablement à l’étape de fourniture, une étape d’imbibition au cours de laquelle le liquide nutritif est mis en contact sur le support alimentaire.
8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel, lors de l’étape d’imbibition, la mise en contact du liquide nutritif sur le support alimentaire est réalisée sur une hauteur comprise entre 5 et 100 % de la hauteur du substrat, de préférence entre 10 et 50% de la hauteur du substrat, préférentiellement entre 20 et 35% de la hauteur du substrat.
9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, lequel comporte, préalablement à l’étape d’imbibition, une étape de filtrage au cours de laquelle le liquide nutritif est filtré pour diminuer la fraction liquide.
10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel le filtrage du liquide nutritif est réalisé à l’aide d’un filtre présentant des mailles comprises entre 1 et 50 pgrammes, préférentiellement entre 2 et 20 pgrammes.
11. Procédé selon la revendication 1 , dans lequel le liquide nutritif comporte une huile végétale telle que par exemple une huile de colza.
12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel ladite huile végétale est préalablement enrichie en vitamine D3 issue du lichen de type lichen boréal.
13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, dans lequel le liquide nutritif présente une concentration en vitamine D3 comprise entre 10 et 2000 UI par goutte, de préférence entre 50 et 1000 UI par goutte, une goutte représentant un poids compris entre 25 et 60 milligrammes.
14. Procédé selon la revendication 6 ou 13, dans lequel le support alimentaire absorbant est imbibé d’environ 1 à 15 gouttes de liquide nutritif, de préférence entre 5 et 10, plus préférentiellement entre 6 et 8.
15. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support alimentaire absorbant présente un volume compris entre 125 mm3 et 900 cm3.
16. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support alimentaire absorbant présente une densité par surface de production comprise entre 2 et 15 pour 2400 cm2, de préférence entre 4 et 8 pour 2400 cm2.
17. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la fourniture dudit support alimentaire présente une fréquence comprise entre une et quatre fois par semaine, plus préférentiellement entre une et deux fois par semaine.
18. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la fourniture dudit support alimentaire est réalisée pendant le stade larvaire entre la sixième et la quatorzième semaine de croissance des larves, plus préférentiellement entre la dixième et la douzième semaine de croissance des larves.
19. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les coléoptères sont sélectionnés parmi les espèces suivantes : Tenebrio molitor, Alphitobus diaperinus.
20. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les larves de coléoptères sont maintenues dans un environnement présentant une température sensiblement constante comprise entre 24 et 30°C, de préférence entre 26 et 28°C.
21. Procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les larves de coléoptères sont maintenues dans un environnement présentant une hygrométrie sensiblement constante comprise entre 45 et 70 % d’humidité relative, de préférence entre 55 et 65 %.
22. Procédé selon la revendication 21 rattachée à la revendication 20, dans lequel on contrôle la température et/ou l’hygrométrie de l’environnement des larves de coléoptères de manière à ce que la différence de températures pendant tout ou partie du stade larvaire est inférieure ou égale à 2 °C et/ou la différence d’hygrométries est inférieure ou égale à 10 % d’humidité relative.
23. Poudre de coléoptères obtenue à partir de coléoptères élevés selon le procédé d’élevage selon l’une quelconque des revendications précédente.
24. Poudre de coléoptères selon la revendication 23, comportant un pourcentage en poids de vitamine D3 supérieur ou égal à au moins 0,000049 % en vitamine D3, le pourcentage en poids étant donné sur le poids total de poudre de coléoptères.
25. Poudre de coléoptères selon la revendication 23, comportant un pourcentage en poids de vitamine B 12 supérieur ou égal à au moins 0,0000013 % en vitamine B 12, le pourcentage en poids étant donné sur le poids total de poudre de coléoptères.
26. Utilisation de la poudre de coléoptères selon l’une quelconque des revendications 23 à
25 dans l’alimentation humaine ou animale.
27. Utilisation selon la revendication 26, dans laquelle la poudre est utilisée en tant que complément alimentaire.
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NENP | Non-entry into the national phase |
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