WO2019226071A1 - Quaternary ammonium salt exhibiting antimycotic and antibacterial activity - Google Patents

Quaternary ammonium salt exhibiting antimycotic and antibacterial activity Download PDF

Info

Publication number
WO2019226071A1
WO2019226071A1 PCT/RU2019/000329 RU2019000329W WO2019226071A1 WO 2019226071 A1 WO2019226071 A1 WO 2019226071A1 RU 2019000329 W RU2019000329 W RU 2019000329W WO 2019226071 A1 WO2019226071 A1 WO 2019226071A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
quaternary ammonium
antimycotic
ammonium salt
strains
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/000329
Other languages
French (fr)
Russian (ru)
Inventor
Юрий Григорьевич ШТЫРЛИН
Никита Валерьевич ШТЫРЛИН
Сергей Витальевич САПОЖНИКОВ
Альфия Габдулахатовна ИКСАНОВА
Елена Владимировна НИКИТИНА
Рената Рувшановна КАЗАКОВА
Светлана Анатольевна ЛИСОВСКАЯ
Original Assignee
Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты"
Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты", Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" filed Critical Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты"
Publication of WO2019226071A1 publication Critical patent/WO2019226071A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/056—Ortho-condensed systems with two or more oxygen atoms as ring hetero atoms in the oxygen-containing ring

Definitions

  • the invention relates to the chemistry of organic heterocyclic compounds, namely, to a new quaternary ammonium salt containing a fragment of a vitamin B 6 derivative of formula I, exhibiting antimycotic and antibacterial properties.
  • the compound may find application in medicine and veterinary medicine.
  • Quaternary ammonium salts are one of the most important classes of antiseptics and have a wide scope, in particular, in the treatment of local purulent-inflammatory processes, in the disinfection of intact skin before surgery, preserving eye drops, injection solutions, toothpastes, cosmetics, disinfection and cleaning of surfaces.
  • Modern QAS are characterized by a wide spectrum of antimicrobial activity in relation to gram-positive and gram-negative microorganisms, as well as fungi.
  • the mechanism of the antibacterial action of QAS consists in their adsorption and penetration through the cell wall of bacteria, followed by interaction with phospholipids of the cytoplasmic membrane, which leads to complete structural disorganization and subsequent death of the bacterial cell [McDonnell G, Russell AD. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clinical Microbiology Reviews. - 1999 - V. 12 (1). - P. 147-179].
  • HOURs The disadvantages of using HOURs are inefficiency in relation to fungal spores [. Shandala M.G. Perspectives and problems of modern disinfection. Zhurn. Disinfection business. - 2002, Ne4. - From 12-19] and simple viruses [. Rainbaben, Friedrich von. The basics of antiviral disinfection: translation from German Moscow. Samarovo: Summer Garden. - 2014. - S. 525], as well as insufficient activity against gram-negative bacteria, mycobacteria, and fungi proper.
  • Miramistin ⁇ (benzyldimeths [3- (myristoylamino) propyl] ammonium chloride monohydrate) is an antiseptic developed in the USSR that has a wide spectrum of bactericidal activity against gram-positive ⁇ Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae and others., Gram grams , Escherichia coli, Klebsiella spp. et al.), aerobic and anaerobic bacteria, pathogenic fungi and viruses, including clinical strains with multidrug resistance to antibiotics [USDn Drug Registry Radar Encyclopedia of drugs. - 20th ed. G.L. Vyshkovsky.
  • the drug is used in the prevention of suppuration and treatment of purulent wounds, the treatment and prevention of candidiasis of the skin and mucous membranes, the complex treatment of acute and chronic otitis media, the treatment and prevention of infectious and inflammatory diseases of the oral cavity (stomatitis, gingivitis, periodontitis, periodontitis), individual prevention of diseases transmitted sexually (syphilis, gonorrhea, chlamydia, genital herpes, etc.) [Blatun L. A. Miramistin in a comprehensive program to combat hospital infection in a surgical hospital are // In Sat.
  • Miramistin application in surgery, traumatology and combustiology. M. - 2006. - S. 27-33 .; Makeeva I.M. E.V. Borovsky, M.V. Matavkina, E.A. Brovenko. The use of the drug Miramistin in the complex treatment of diseases of the oral mucosa. Farmateka. - 2013. - Ns3 - C.1].
  • Fluomisin (Dequalinium chloride) is a broad-spectrum antiseptic that is active against most gram-positive bacteria Streptococcus spp. , Staphylococcus aureus, Listeria spp. ; anaerobes of Peptostreptococcus (group D), fungi of the genus Candida ⁇ Candida tropicalis, Candida aMXicans, Candida glabratd), gram-negative bacteria Gardnerella vaginalis, Escherichia coli, Serratia spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Pritus spp.
  • Benzalkonium chloride (alkyldimethyl (phenylmethyl) ammonium chloride) is an antiseptic agent active against gram-positive ⁇ Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae and others), gram-negative ⁇ Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli s. Klebsi. etc.) and anaerobic bacteria, fungi and molds. It is used in primary and primary delayed treatment of wounds, prevention of secondary infection of wounds with hospital strains of microorganisms, bacterial vaginosis, drainage of bone cavities after surgery for osteomyelitis [Vidal Handbook “Medicines in Russia”. https://www.vidal.ru/drugs/dettol_benzalkonium_chloride _ 30527].
  • Antiseptic drug a quaternary ammonium salt containing a fragment of a vitamin B 6 derivative is shown, exhibiting antibacterial, antimycotic, antiviral and antiprotozoal properties. Moreover, this compound has insufficient activity against gram-negative bacteria, as well as fungi.
  • the objective of the claimed technical solution is a new compound with high antimycotic and antibacterial activity, comparable with existing antimycotic and antibacterial drugs, but significantly less toxic.
  • the technical result of the claimed technical solution is a new compound of formula I containing both a fragment of a natural compound (vitamin B 6 ) and a quaternary ammonium fragment having high antimycotic and antibacterial activity, as well as low toxicity.
  • the problem is solved, and the specified technical result is achieved through the synthesis of a new derivative of vitamin B 6 of formula I:
  • Table 1 which shows the average values of the minimum inhibitory concentration (MIC) (in ⁇ g / ml) for compound I, as well as comparison preparations for gram-positive and gram-negative microorganisms, at a concentration of inoculum of 107 CFU / ml, is shown in Table 1.
  • Table 2 presents the average IPC values (in ⁇ g / ml) for compound I, as well as comparison preparations for yeast and mycelial fungi.
  • FIG. Figure 3 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with terbinafine (p ⁇ 0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug.
  • the number of rows corresponds to the serial number of the strains.
  • FIG. Figure 4 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with fluconazole (p ⁇ 0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug.
  • the number of rows corresponds to the serial number of the strains.
  • FIG. Figure 5 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with compound I (p ⁇ 0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug.
  • the number of rows corresponds to the serial number of the strains.
  • FIG. 6 shows Table 3, which presents the results of a study of the acute toxicity of compound I in rats with intragastric administration, where LD
  • Table 4 presents the results of a study of the acute toxicity of compound I in rats when applied to the skin, where LD 10 , LD 16 , LD 50 and LD 84 are the average doses of the substance causing the death of 10, 16, 50 and 84% of the animals, respectively.
  • Example 1 Obtaining M '- ((2.2.8-Trimethyl-4H-G1.31dioxinoG4,5-s1pyridin-5.6-diyl) bis (methylene)) bis (-dimethyldodecan-1-aminium) dichloride (I).
  • Example 2 The study of the antibacterial activity of the Quaternary ammonium salt in vitro.
  • the value of the minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by serial dilution on Muller-Hinton medium using 96-well sterile plates. Double dilutions of the test substances in a nutrient medium were prepared. Final concentrations were 1-128 ⁇ g / ml.
  • IPC was determined by the method of serial dilutions in the broth with step 2, therefore, the differences of neighboring dilutions are not considered significant. In each experiment, there are positive (broth with a growing culture) and negative (broth without a growing culture) controls.
  • the cultivation was carried out on agar medium Muller-Hinton, including an additional 2% agar.
  • the media was autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes.
  • a suspension of microorganisms was prepared in a sterile isotonic sodium chloride solution, bringing the inoculum density to 0.5 according to the MacFarland standard (1.5 * 10 8 CFU / ml).
  • the resulting inoculum was diluted to a concentration of 10 7 CFU / ml with Mueller-Hinton medium. Inoculum was used within 15 minutes after preparation; the purity of the bacterial strains was monitored before each experiment.
  • Wells containing no test substances were included as a control (culture growth control). In addition, they put control over the purity of nutrient media and solvents. The plates were incubated in a thermostat at 37 ° C for 24 hours. The growth of cultures was assessed visually, comparing the growth of microorganisms in the presence of the studied test compounds with the growth of culture without them.
  • Example 3 The study of the antimycotic activity of the Quaternary ammonium salt in vitro.
  • Candida albicans K-1020 fluconazole-resistant clinical isolate isolated from a patient with a clinically confirmed diagnosis (systemic candidiasis of the skin and mucous membranes) at the Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan.
  • the inoculum for inoculation was prepared differently depending on the type of mushroom. So, yeast cultures (Candida albicans, Candida tropicalis) were prepared by washing off the culture from an agar jamb. Cultures of mycelial fungi (Rhizopus nigricans, Aspergillus fumigatus) were previously ground in a mortar. A suspension of microorganisms was prepared in a sterile isotonic sodium chloride solution, bringing the inoculum density to 2 billion, according to the MacFarland standard (2T0 CFU / ml), given that the size of the fungal elements is about 10 times the size of bacteria. The final concentration of cells in the experiment is 1-5x10 3 for yeast and 0.4-5x10 4 for mycelial. Inoculum was used within 15 minutes after preparation; the purity of fungal strains was monitored before each experiment
  • test tubes Two parallel series of dilutions of the test substance were prepared in the following way.
  • Saburo's liquid medium was sterilely poured into 3 ml in each tube; 4.5 ml was poured into the first tube of the row.
  • a total of 14 test tubes were used in a row; of which the last control.
  • 40 mg of the test substance was taken as a standard sample and dissolved in 1 ml of DMSO, and then distilled water was added, bringing the volume to 10 ml.
  • the initial dilution contained the test substance at a concentration of 4000 ⁇ g / ml. Then 0.5 ml of this dilution was introduced into the first test tube of the series (with 4.5 ml of medium), thereby diluting the concentration of the substance by another 10 times.
  • the first tube of the series contained 400 ⁇ g / ml of the test substance. Then, 3 ml of solution was taken from the first tube and transferred to the second tube, thoroughly blowing. Then again took 3 ml of the solution already from the second tube and transferred in the third test tube, etc .; from the penultimate tube, 3 ml was poured. The substance was not added to the last tube, as in the control.
  • compound I in its antimycotic activity is comparable to the comparison drug terbinafine and significantly exceeds fluconazole, as well as the antiseptics miramistin and benzalkonium chloride.
  • composition of biofilms is a composition of biofilms.
  • Candida albicans K-4546 (clinical isolate isolated from the mucous membrane of the pharynx) Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan;
  • Candida albicans (C. albicans) K-203 (clinical isolate isolated from the skin);
  • Candida albicans K-230 (clinical isolate isolated from the mucous membrane of the pharynx);
  • Candida albicans K-256 (a clinical isolate isolated from the skin).
  • a fungal culture was seeded in Saburo's liquid medium and incubated in an orbital shaker (180 rpm) at 30 ° C in within 24 hours. The culture was then washed twice with sterile phosphate buffer and resuspended in Saburo liquid medium with a final density of 1.0 x 10 6 cells / ml.
  • a cell suspension of 100 ⁇ l was introduced into 96-well flat-bottomed polystyrene micropanels and incubated for 24 hours at 37 ° C (control K1). After biofilm formation, the plates were washed three times with sterile phosphate buffer. Then, test compounds were added by serial dilution at various concentrations in an amount of 125 ⁇ l and incubated for 48 hours.
  • the degree or amount of biofilms formed was measured in a colorimetric manner. 125 ⁇ l of an aqueous solution of 1% crystalline violet was added to wells with formed biofilms and incubated for 20 min at 37 ° C. After removing the excess dye and washing the wells, 95% ethanol was added in an amount of 125 ⁇ l, the optical density was recorded on a reader with a vertical light beam using a 620 nm filter.
  • Test compound I showed stable activity against all groups of strains, significantly larger than terbinafine and fluconazole. In addition, the inhibition of quantitative growth of biofilms already occurs at a concentration of 6.2 ⁇ g / ml, which is its undoubted advantage.
  • Example 5 The study of acute toxicity of the compound in rats with
  • Example 6 The study of acute toxicity of the compound in rats with
  • the claimed technical solution a new compound of formula I, containing both a fragment of a natural compound (vitamin B6) and a quaternary ammonium fragment, allows you to create a new highly effective and low-toxic drug with both antimycotic and antibacterial activity, which potentially will significantly improve the quality and life expectancy of patients.
  • the claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability", because can be implemented at any specialized enterprise using standard equipment, well-known domestic materials and technologies.

Abstract

The invention relates to the chemistry of organic heterocyclic compounds, specifically to a novel quaternary ammonium salt comprising a fragment of a vitamin B6 derivative having formula I, said salt exhibiting antimycotic and antibacterial properties. The invention can be used in medicine and veterinary science.

Description

Четвертичная аммониевая соль, обладающая антимикотической  Quaternary ammonium salt with antimycotic
и антибактериальной активностью  and antibacterial activity
Изобретение относится к химии органических гетероциклических соединений, а именно - к новой четвертичной аммониевой соли, содержащей фрагмент производного витамина В6 формулы I, проявляющей антимикотические и антибактериальные свойства. Соединение может найти применение в медицине и ветеринарии. The invention relates to the chemistry of organic heterocyclic compounds, namely, to a new quaternary ammonium salt containing a fragment of a vitamin B 6 derivative of formula I, exhibiting antimycotic and antibacterial properties. The compound may find application in medicine and veterinary medicine.
Figure imgf000003_0001
Figure imgf000003_0001
Инфекционные заболевания, вызванные патогенными грибами и грамположительными бактериями, занимают одно из ведущих мест по распространенности [G.D. Brown, D. W. Denning, N.A. Gow., S.M. Levitz, M.G. Netea, T.C. White. Hidden killers: human fungal infections // Sci. Transl. Med. - 2012. - V. 19, N°4. - P.165rvl3.\. Участившиеся в последние годы случаи появления резистентных штаммов грибов и грамположительных бактерий обуславливают необходимость создания принципиально новых эффективных и селективных противомикробных средств для терапии внутри- и внебольничных инфекций.  Infectious diseases caused by pathogenic fungi and gram-positive bacteria occupy one of the leading places in terms of prevalence [G.D. Brown, D. W. Denning, N.A. Gow., S.M. Levitz, M.G. Netea, T.C. White Hidden killers: human fungal infections // Sci. Transl. Med. - 2012 .-- V. 19, N ° 4. - P.165rvl3. \. The cases of the emergence of resistant strains of fungi and gram-positive bacteria that have become more frequent in recent years necessitate the creation of fundamentally new effective and selective antimicrobial agents for the treatment of internal and community-acquired infections.
Четвертичные аммониевые соли (ЧАС) являются одним из важнейших классов антисептических средств и имеют широкую область применения, в частности, в терапии местных гнойно-воспалительных процессов, в дезинфекции неповрежденной кожи перед операциями, консервировании глазных капель, инъекционных растворов, зубных паст, косметических средств, дезинфекции и очистке поверхностей. Современные ЧАС характеризуются широким спектром антимикробной активности по отношению к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам, а также грибам. Механизм антибактериального действия ЧАС заключается в их адсорбции и проникновении через клеточную стенку бактерий с последующим взаимодействием с фосфолипидами цитоплазматической мембраны, что приводит к полной структурной дезорганизации и последующей гибели бактериальной клетки [ McDonnell G, Russell AD. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clinical Microbiology Reviews. - 1999 - V. 12(1). - P. 147-179 ].  Quaternary ammonium salts (QUAS) are one of the most important classes of antiseptics and have a wide scope, in particular, in the treatment of local purulent-inflammatory processes, in the disinfection of intact skin before surgery, preserving eye drops, injection solutions, toothpastes, cosmetics, disinfection and cleaning of surfaces. Modern QAS are characterized by a wide spectrum of antimicrobial activity in relation to gram-positive and gram-negative microorganisms, as well as fungi. The mechanism of the antibacterial action of QAS consists in their adsorption and penetration through the cell wall of bacteria, followed by interaction with phospholipids of the cytoplasmic membrane, which leads to complete structural disorganization and subsequent death of the bacterial cell [McDonnell G, Russell AD. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clinical Microbiology Reviews. - 1999 - V. 12 (1). - P. 147-179].
Недостатками используемых ЧАС являются неэффективность в отношении спор грибов [. Шандала М. Г. Перспективы и проблемы современной дезинфектологии. Журн. Дезинфекционное дело. - 2002, Ne4. - С 12-19 ] и простых вирусов [. Райнбабен , Фридрих фон. Основы противовирусной дезинфекции: перевод с немецкого языка Москва. Самарово: Летний сад. - 2014. - С. 525], а также недостаточная активность по отношению к грамотрицательным бактериям, микобактериям и собственно грибам. The disadvantages of using HOURs are inefficiency in relation to fungal spores [. Shandala M.G. Perspectives and problems of modern disinfection. Zhurn. Disinfection business. - 2002, Ne4. - From 12-19] and simple viruses [. Rainbaben, Friedrich von. The basics of antiviral disinfection: translation from German Moscow. Samarovo: Summer Garden. - 2014. - S. 525], as well as insufficient activity against gram-negative bacteria, mycobacteria, and fungi proper.
Анализ известных на дату подачи настоящей заявки лекарственных препаратов, содержащих фрагменты четвертичных аммониевых солей наиболее близких по эффективности и действию на аналогичный спектр патогенных организмов позволяет выделить следующую наиболее известную и широко применяемую в мире группу препаратов:  An analysis of drugs known at the filing date of this application containing fragments of quaternary ammonium salts that are closest in effectiveness and effect on a similar spectrum of pathogenic organisms allows us to single out the following group of drugs that is most known and widely used in the world:
Мирамистин {(бензилдиметш[3-(миристоиламино)пропил]-аммонийхлорид моногидрат) - разработанный в СССР антисептик, обладающий широким спектром бактерицидного действия в отношении грамположительных {Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae и др.), грамотрицательных {Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella spp. и др.), аэробных и анаэробных бактерий, патогенных грибов и вирусов, включая клинические штаммы с полирезистентностью к антибиотикам [Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. - 20-й вып.Гл.ред. Г.Л. Вышковский. - М..ЛИБРОФАРМ, 2011. - С. 1268]. Препарат применяется в профилактике нагноений и лечении гнойных ран, лечении и профилактике кандидозов кожи и слизистых оболочек, комплексном лечении острых и хронических отитов, лечении и профилактике инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта (стоматитов, гингивитов, пародонтитов, периодонтитов), индивидуальной профилактике заболеваний, передаваемых половым путем (сифилиса, гонореи, хламидиоза, генитального герпеса и др.) [Блатун Л. А. Мирамистин в комплексной программе борьбы с госпитальной инфекцией в хирургическом стационаре // В сб. : Мирамистин: применение в хирургии, травматологии и комбустиологии. М. - 2006. - С. 27-33.; Макеева И.М. Е.В. Боровский, М.В. Матавкина, Е.А. Бровенко. Применение препарата Мирамистин в комплексном лечении заболеваний слизистой оболочки рта. Фарматека. - 2013. - Ns3 - С.1].  Miramistin {(benzyldimeths [3- (myristoylamino) propyl] ammonium chloride monohydrate) is an antiseptic developed in the USSR that has a wide spectrum of bactericidal activity against gram-positive {Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae and others., Gram grams , Escherichia coli, Klebsiella spp. et al.), aerobic and anaerobic bacteria, pathogenic fungi and viruses, including clinical strains with multidrug resistance to antibiotics [Russian Drug Registry Radar Encyclopedia of drugs. - 20th ed. G.L. Vyshkovsky. - M .. LIBROFARM, 2011. - S. 1268]. The drug is used in the prevention of suppuration and treatment of purulent wounds, the treatment and prevention of candidiasis of the skin and mucous membranes, the complex treatment of acute and chronic otitis media, the treatment and prevention of infectious and inflammatory diseases of the oral cavity (stomatitis, gingivitis, periodontitis, periodontitis), individual prevention of diseases transmitted sexually (syphilis, gonorrhea, chlamydia, genital herpes, etc.) [Blatun L. A. Miramistin in a comprehensive program to combat hospital infection in a surgical hospital are // In Sat. : Miramistin: application in surgery, traumatology and combustiology. M. - 2006. - S. 27-33 .; Makeeva I.M. E.V. Borovsky, M.V. Matavkina, E.A. Brovenko. The use of the drug Miramistin in the complex treatment of diseases of the oral mucosa. Farmateka. - 2013. - Ns3 - C.1].
Флуомизин {хлорид деквалиния) - антисептик широкого спектра действия, активен в отношении большинства грамположительных бактерий Streptococcus spp. , Staphylococcus aureus, Listeria spp. ; анаэробов Peptostreptococcus (группы D), грибов рода Candida {Candida tropicalis, Candida aMXicans, Candida glabratd), грамотрицательных бактерий Gardnerella vaginalis, Escherichia coli, Serratia spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Proteus spp., и простейших {Trichomonas vaginalis). Используется при бактериальном вагинозе, кандидозе кожи, ногтевых валиков, слизистой оболочки полости рта, воспалительных процессах в полости рта и глотки (тонзиллит, стоматит, в т.ч. афтозный, глоссит, фарингит) [ Справочник Видаль «Лекарственные препараты в России» https ://www. vidal. ru/drugs/fluomisin _ 22520] . Fluomisin (Dequalinium chloride) is a broad-spectrum antiseptic that is active against most gram-positive bacteria Streptococcus spp. , Staphylococcus aureus, Listeria spp. ; anaerobes of Peptostreptococcus (group D), fungi of the genus Candida {Candida tropicalis, Candida aMXicans, Candida glabratd), gram-negative bacteria Gardnerella vaginalis, Escherichia coli, Serratia spp., Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Pritus spp. ) Used for bacterial vaginosis, candidiasis of the skin, nail rollers, oral mucosa, inflammatory processes in the oral cavity and pharynx (tonsillitis, stomatitis, including aphthous, glossitis, pharyngitis) [Vidal Handbook “Medicines in Russia” https: // www . vidal. com / drugs / fluomisin _ 22520].
Бензалкония хлорид ( алкилдиметил(фенилметил) аммония хлорид) - антисептическое средство активное в отношении грамположительных {Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae и др.), грамотрицательных {Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella spp. и др.) и анаэробных бактерий, грибов и плесеней. Применяется при первичной и первично-отсроченной обработке ран, профилактике вторичного инфицирования ран госпитальными штаммами микроорганизмов, бактериальном вагинозе, дренировании костных полостей после операции при остеомиелите [Справочник Видаль «Лекарственные препараты в России». https://www.vidal.ru/drugs/dettol_benzalkonium_chloride _ 30527].  Benzalkonium chloride (alkyldimethyl (phenylmethyl) ammonium chloride) is an antiseptic agent active against gram-positive {Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus pneumoniae and others), gram-negative {Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli s. Klebsi. etc.) and anaerobic bacteria, fungi and molds. It is used in primary and primary delayed treatment of wounds, prevention of secondary infection of wounds with hospital strains of microorganisms, bacterial vaginosis, drainage of bone cavities after surgery for osteomyelitis [Vidal Handbook “Medicines in Russia”. https://www.vidal.ru/drugs/dettol_benzalkonium_chloride _ 30527].
В изобретении по патенту РФ N°2641309 от 17.01.2018 «Антисептическое лекарственное средство» заявлена четвертичная аммониевая соль, содержащая фрагмент производного витамина В6, проявляющая антибактериальные, антимикотические, противовирусные и антипротозойные свойства. При этом данное соединение обладает недостаточной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, а также грибов. In the invention according to the patent of the Russian Federation N ° 2641309 dated 01/17/2018 “Antiseptic drug”, a quaternary ammonium salt containing a fragment of a vitamin B 6 derivative is shown, exhibiting antibacterial, antimycotic, antiviral and antiprotozoal properties. Moreover, this compound has insufficient activity against gram-negative bacteria, as well as fungi.
При этом следует отметить, что описанные выше лекарственные препараты, по мнению заявителя, не могут рассматриваться в качестве аналогов к заявленному изобретению вследствие того, что они не совпадают с заявленным соединением по химической структуре, хотя и обладают сходной в целом антимикотической и антибактериальной активностью (совпадают по назначению), сопоставимой с заявленным изобретением в большей или меньшей степени. It should be noted that the above drugs, according to the applicant, cannot be considered as analogues to the claimed invention due to the fact that they do not coincide with the claimed compound in chemical structure, although they have similar antimycotic and antibacterial activity as a whole (coincide by appointment), comparable with the claimed invention to a greater or lesser extent.
Задачей заявленного технического решения является новое соединение, обладающее высокой антимикотической и антибактериальной активностью, сопоставимой с существующими антимикотическими и антибактериальными препаратами, но при этом существенно менее токсичное.  The objective of the claimed technical solution is a new compound with high antimycotic and antibacterial activity, comparable with existing antimycotic and antibacterial drugs, but significantly less toxic.
Техническим результатом заявленного технического решения является новое соединение формулы I, содержащее в своем составе как фрагмент природного соединения (витамина В6), так и четвертичный аммониевый фрагмент, обладающее высокой антимикотической и антибактериальной активностью, а также низкой токсичностью. Задача решается, и указанный технический результат достигается посредством синтеза нового производного витамина В6 формулы I: The technical result of the claimed technical solution is a new compound of formula I containing both a fragment of a natural compound (vitamin B 6 ) and a quaternary ammonium fragment having high antimycotic and antibacterial activity, as well as low toxicity. The problem is solved, and the specified technical result is achieved through the synthesis of a new derivative of vitamin B 6 of formula I:
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0001
Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг.1 - Фиг.7.  The claimed technical solution is illustrated in Fig.1 - Fig.7.
На Фиг. 1 приведена Таблица 1, в которой представлены средние значения минимальной подавляющей концентрации (МПК) (в мкг/мл) для соединения I, а также препаратов сравнения в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, при концентрации инокулюма 107 КОЕ/мл.  In FIG. Table 1, which shows the average values of the minimum inhibitory concentration (MIC) (in μg / ml) for compound I, as well as comparison preparations for gram-positive and gram-negative microorganisms, at a concentration of inoculum of 107 CFU / ml, is shown in Table 1.
На Фиг. 2 приведена Таблица 2, в которой представлены средние значения МПК (в мкг/мл) для соединения I, а также препаратов сравнения в отношении дрожжевых и мицелиальных грибов.  In FIG. Table 2 is shown in Table 2, which presents the average IPC values (in μg / ml) for compound I, as well as comparison preparations for yeast and mycelial fungi.
На Фиг. 3 приведен график, на котором представлены кривые определения количественного роста биопленок С. albicans при культивировании с тербинафином (р<0.05), где К1 - начальная пленка сформированная в течение 24 часов, К2 - рост биопленки в отсутствие препарата. Номера рядов соответствует порядковому номеру штаммов.  In FIG. Figure 3 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with terbinafine (p <0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug. The number of rows corresponds to the serial number of the strains.
На Фиг. 4 приведен график, на котором представлены кривые определения количественного роста биопленок С. albicans при культивировании с флуконазолом (р<0.05), где К1 - начальная пленка сформированная в течение 24 часов, К2 - рост биопленки в отсутствие препарата. Номера рядов соответствует порядковому номеру штаммов.  In FIG. Figure 4 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with fluconazole (p <0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug. The number of rows corresponds to the serial number of the strains.
На Фиг. 5 приведен график, на котором представлены кривые определения количественного роста биопленок С. albicans при культивировании с соединением I (р<0.05), где К1 - начальная пленка сформированная в течение 24 часов, К2 - рост биопленки в отсутствие препарата. Номера рядов соответствует порядковому номеру штаммов.  In FIG. Figure 5 shows a graph showing the curves for determining the quantitative growth of C. albicans biofilms during cultivation with compound I (p <0.05), where K1 is the initial film formed within 24 hours, K2 is the biofilm growth in the absence of the drug. The number of rows corresponds to the serial number of the strains.
На Фиг. 6 приведена Таблица 3, на которой представлены результаты исследования острой токсичности соединения I на крысах при внутрижелудочном введении, где ЛДю, ЛД|6, ЛД50 и ЛД84 - средние дозы вещества, вызывающие гибель 10, 16, 50 и 84 % животных, соответственно. In FIG. 6 shows Table 3, which presents the results of a study of the acute toxicity of compound I in rats with intragastric administration, where LD | 6 , LD50 and LD 84 are the average doses of a substance causing the death of 10, 16, 50 and 84% of animals, respectively.
На Фиг. 7 приведена Таблица 4, на которой представлены результаты исследования острой токсичности соединения I на крысах при нанесении на кожу, где ЛД10, ЛД16, ЛД50 и ЛД84 - средние дозы вещества, вызывающие гибель 10, 16, 50 и 84 % животных, соответственно. In FIG. Table 4 presents the results of a study of the acute toxicity of compound I in rats when applied to the skin, where LD 10 , LD 16 , LD 50 and LD 84 are the average doses of the substance causing the death of 10, 16, 50 and 84% of the animals, respectively.
Заявленное соединение I получают по нижеприведенной Схеме 1 :  The claimed compound I is obtained according to Scheme 1 below:
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0001
Схема 1  Scheme 1
Характеристики нового соединения, а также описание его синтеза, приведены далее в примерах конкретного практического осуществления.  The characteristics of the new compound, as well as a description of its synthesis, are given below in the examples of specific practical implementation.
Структура полученного соединения подтверждена методами масс-спектрометрии, 1H и 13С ЯМР-спектроскопии. Спектры ЯМР регистрировали на приборе Bruker AVANCE- 400. Химический сдвиг определялся относительно сигналов остаточных протонов дейтерированных растворителей (1H и 13С). Температуры плавления определялись с помощью прибора Stanford Research Systems MPA- 100 OptiMelt. Контроль за ходом реакций и чистотой соединений проводили методом ТСХ на пластинах Sorbfil Plates. HRMS -эксперимент был проведен с использованием масс-спектрометра TripleTOF 5600, АВ Sciex (Германия) из раствора в метаноле методом ионизации - турбоионный спрей (TIS) - при энергии столкновения с молекулами азота 10 еВ. The structure of the obtained compound was confirmed by mass spectrometry, 1H and 13 C NMR spectroscopy. NMR spectra were recorded on a Bruker AVANCE-400 instrument. The chemical shift was determined relative to the signals of residual protons of deuterated solvents (1H and 13 C). Melting points were determined using a Stanford Research Systems MPA-100 OptiMelt instrument. The reaction progress and the purity of the compounds were monitored by TLC on Sorbfil Plates plates. The HRMS experiment was carried out using a TripleTOF 5600 mass spectrometer, AB Sciex (Germany) from a solution in methanol by ionization — turbo-ion spray (TIS) —with a collision energy of 10 eV nitrogen molecules.
Примеры конкретного практического осуществления заявленного технического решения. Examples of specific practical implementation of the claimed technical solution.
Пример 1. Получение М'-((2.2.8-Триметил-4Н-Г1.31диоксиноГ4,5-с1пиридин-5.6- диил)бис(метилен))бис( -диметилдодекан-1-аминий) дихлорида (I). Example 1. Obtaining M '- ((2.2.8-Trimethyl-4H-G1.31dioxinoG4,5-s1pyridin-5.6-diyl) bis (methylene)) bis (-dimethyldodecan-1-aminium) dichloride (I).
К раствору 0.20 г (0.7 ммоль) соединения 1 [Shtyrlin N. V, Pavelyev R.S., Pugachev М. V, Sysoeva L.P., Musin R.Z., Shtyrlin Yu.G. Synthesis of novel 6-substituted sulfur-containing derivatives of pyridoxine// Tetrahedron Letters - 2012. - V.53, Iss. 31. - P. 3967-3970] в 30 мл ДМФА добавляют 0.39 мл (1.4 ммоль) N,N-диметилдодециламина, после чего реакционную смесь перемешивают в течение 8 часов при температуре 70 °С. Далее растворитель отгоняют в вакууме. Полученный остаток перекристализовывают из смеси ацетон : диэтиловый эфир (10: 1). Выход 0.30 г (67 %), белое кристаллическое вещество, т.пл. 138 °С (разл). To a solution of 0.20 g (0.7 mmol) of compound 1 [Shtyrlin N. V, Pavelyev RS, Pugachev M. V, Sysoeva LP, Musin RZ, Shtyrlin Yu.G. Synthesis of novel 6-substituted sulfur-containing derivatives of pyridoxine // Tetrahedron Letters - 2012 .-- V.53, Iss. 31. - P. 3967-3970] in 30 ml of DMF add 0.39 ml (1.4 mmol) of N, N-dimethyldodecylamine, after which the reaction mixture is stirred for 8 hours at a temperature of 70 ° C. Further the solvent is distilled off in vacuo. The resulting residue was recrystallized from acetone: diethyl ether (10: 1). Yield 0.30 g (67%), white crystalline substance, mp. 138 ° C (decomp.).
Спектр ЯМР 1H (400 МГц, CDCl3) d, м.д.: 0.84 т (6Н, VHH = 7.2 Гц, СНяСпН.А 1.17- 1.32 м (36Н, 18СН2), 1.52 с (ЗН, СН3), 1.56 с (ЗН, СН3), 1.70-2.02 м (4Н, 2СН2), 2.40 с (ЗН, СН3), 3.19 с (ЗН, 2CH3N+), 3.21 с (ЗН, CH3N+), 3.37 с (ЗН, CH3N+), 3.54 с (ЗН, CH3N+), 3.42- 3.45 м (2Н, CH2N+), 3.78-3.96 м (2Н, CH2N+), 4.83, 5.70 (АВ-система, 2Н, 2 HH = - 13.4 Гц, СН2), 5.04, 5.82 (АВ-система, 2Н, 2 нн = - 14.2 Гц, СН2), 5.06, 5.47 (АВ-система, 2Н, 2 HH = - 16.8 Гц, СН2). 1H NMR spectrum (400 MHz, CDCl 3 ) d, ppm: 0.84 t (6H, V H H = 7.2 Hz, SNaSpN.A 1.17-1.32 m (36H, 18CH 2 ), 1.52 s (3H, CH 3 ), 1.56 s (ZN, CH 3 ), 1.70-2.02 m (4H, 2CH 2 ), 2.40 s (ZN, CH 3 ), 3.19 s (ZN, 2CH 3 N + ), 3.21 s (ZN, CH 3 N + ), 3.37 s (ZN, CH 3 N + ), 3.54 s (ZN, CH 3 N + ), 3.42- 3.45 m (2Н, CH 2 N + ), 3.78-3.96 m (2Н, CH 2 N + ) , 4.83, 5.70 (AV system, 2Н, 2 HH = - 13.4 Hz, СН 2 ), 5.04, 5.82 (AV system, 2Н, 2 нн = - 14.2 Hz, СН 2 ), 5.06, 5.47 (AV system , 2H, 2 HH = - 16.8 Hz, CH 2 ).
Спектр ЯМР 13С { 1H} (100 МГц, CDCl3) d, м.д.: 14.19 с (СН3), 18.53 с (СН3), 19.14 с (СН2), 22.75 с (СН2), 23.03 с (СН2), 23.11 с (СН3), 23.64 с (СН2), 26.36 с (СН2), 26.53 с (СН2), 26.73 (с, СН2), 29.40 с (СН2), 29.45 с (СН2), 29.51 с (СН2), 29.57 с (СН2), 29.67 с (СН2), 31.97 с (СН2), 48.09 с (CH3N+), 49.30 с (CH3N+), 51.17 с (CH3N+), 51.93 с (CH3N+), 60.41 с (СН2), с 61.12 (СН2), 62.39 с (СН2), 64.06 с (CH2N+), 64.83 с (CH2N+), 101.25 с (С(СН3)2), 120.70 с (СПИр), 130.95 с (Спир), 141.37 с (Спир), 147.44 с (Спир), 150.44 с (Спир). 13 C NMR spectrum (1H} (100 MHz, CDCl 3 ) d, ppm: 14.19 s (CH 3 ), 18.53 s (CH 3 ), 19.14 s (CH 2 ), 22.75 s (CH 2 ), 23.03 s (CH 2 ), 23.11 s (CH 3 ), 23.64 s (CH 2 ), 26.36 s (CH 2 ), 26.53 s (CH 2 ), 26.73 (s, CH 2 ), 29.40 s (CH 2 ), 29.45 s (CH 2 ), 29.51 s (CH 2 ), 29.57 s (CH 2 ), 29.67 s (CH 2 ), 31.97 s (CH 2 ), 48.09 s (CH 3 N + ), 49.30 s (CH 3 N + ), 51.17 s (CH 3 N + ), 51.93 s (CH 3 N + ), 60.41 s (CH 2 ), s 61.12 (CH 2 ), 62.39 s (CH 2 ), 64.06 s (CH 2 N + ), 64.83 s (CH 2 N + ), 101.25 s (C (CH 3 ) 2 ), 120.70 s (C PIR ), 130.95 s (C pir ), 141.37 s (C pir ), 147.44 s (C pir ), 150.44 s (C feast ).
Масс-спектр (HRMS-ESI): Найдено [ -2С/]2+ 315.8003. C40H77N302Cl2. Вычислено [М-2С/]2+ 315.8006. Mass spectrum (HRMS-ESI): Found [-2C /] 2+ 315.8003. C 40 H 77 N 3 0 2 Cl 2 . Calculated [M-2C /] 2+ 315.8006.
Пример 2. Исследование антибактериальной активности четвертичной аммониевой соли in vitro. Example 2. The study of the antibacterial activity of the Quaternary ammonium salt in vitro.
Сравнительную оценку спектра антибактериального действия соединения I проводили на музейных и клинических штаммах грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов в соответствии с [Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1890-04). Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 04.03.2004 г.]. В качестве препаратов сравнения использовали мирамистин и хлорид бензалкония.  A comparative assessment of the spectrum of antibacterial action of compound I was carried out on museum and clinical strains of gram-positive and gram-negative microorganisms in accordance with [Determination of the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs (Guidelines MUK 4.2.1890-04). Approved and enforced by the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation G.G. Onishchenko 03/04/2004]. Miramistin and benzalkonium chloride were used as comparison preparations.
Значение минимальной подавляющей концентрации (МПК) определяли методом серийных разведений на среде Мюллера-Хинтона с использованием 96 - луночных стерильных планшетов. Готовили двукратные разведения исследуемых веществ в питательной среде. Конечные концентрации составляли 1-128 мкг/мл.  The value of the minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by serial dilution on Muller-Hinton medium using 96-well sterile plates. Double dilutions of the test substances in a nutrient medium were prepared. Final concentrations were 1-128 μg / ml.
Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест-соединений с ростом культуры без них. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация исследуемого препарата недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. Первую наименьшую концентрацию исследуемого вещества (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост, считают минимальной подавляющей концентрацией. Assessment of the growth of cultures was carried out visually, comparing the growth of microorganisms in the presence of the studied test compounds with the growth of culture without them. The presence of microorganism growth in the broth (turbidity of the broth) indicates that this concentration of the studied drug is insufficient to suppress its viability. The first lowest concentration of the test substance (from a series of serial dilutions), where bacterial growth is not visually determined, is considered the minimum inhibitory concentration.
МПК определяли методом серийных разведений в бульоне с шагом 2, поэтому различия соседних разведений не считаются существенными. В каждом опыте присутствует положительный (бульон с растущей культурой) и отрицательный (бульон без растущей культуры) контроли.  IPC was determined by the method of serial dilutions in the broth with step 2, therefore, the differences of neighboring dilutions are not considered significant. In each experiment, there are positive (broth with a growing culture) and negative (broth without a growing culture) controls.
Для определения МПК брали 10 мкл культуральной среды из тех лунок, в которых не наблюдался рост, и проводили посев на плотную среду Мюллера-Хинтона.  To determine the BMD, 10 μl of culture medium was taken from those wells in which growth was not observed, and inoculation was performed on a solid Mueller-Hinton medium.
Для приготовления инокулюма использовали чистую, суточную культуру грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде. Питательная среда - бульон Мюллера-Хинтона, который готовили из сухих сред (Mueller Hinton broth, Acumedia, Baltimore).  For the preparation of the inoculum, a clean, daily culture of gram-positive and gram-negative microorganisms grown on a solid nutrient medium was used. Nutrient medium - Mueller-Hinton broth, which was prepared from dry media (Mueller Hinton broth, Acumedia, Baltimore).
Культивирование осуществляли на агаризованной среде Мюллера-Хинтона, включающей дополнительно 2% агара. Среды стерилизовали автоклавированием при 121 °С в течение 15 минут. В стерильном изотоническом растворе хлорида натрия готовили взвесь микроорганизмов, доводя плотность инокулюма до 0.5 по стандарту МакФарланда (1.5*108 КОЕ/мл). Затем полученный инокулят разводили до концентрации 107 КОЕ/мл средой Мюллера-Хинтона. Инокулюм использовали в течение 15 минут после приготовления; чистоту бактериальных штаммов контролировали перед каждым экспериментом. The cultivation was carried out on agar medium Muller-Hinton, including an additional 2% agar. The media was autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes. A suspension of microorganisms was prepared in a sterile isotonic sodium chloride solution, bringing the inoculum density to 0.5 according to the MacFarland standard (1.5 * 10 8 CFU / ml). Then, the resulting inoculum was diluted to a concentration of 10 7 CFU / ml with Mueller-Hinton medium. Inoculum was used within 15 minutes after preparation; the purity of the bacterial strains was monitored before each experiment.
В лунки каждого планшета вносили по 100 мкл бульона Мюллера-Хинтона; в первую лунку вносили испытуемое вещество в концентрации 128 мкг/мл в объеме 100 мкл и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0.5 мкг/мл. Затем в каждую лунку вносили приготовленный инокулюм (100 мкл), разводя тем самым вдвое концентрацию изучаемых соединений. 100 μl of Mueller-Hinton broth was added to the wells of each plate; the test substance was introduced into the first well at a concentration of 128 μg / ml in a volume of 100 μl and its concentration was adjusted to 0.5 μg / ml by two-fold dilution. Then, the prepared inoculum (100 μl) was added to each well, thereby diluting twice the concentration of the studied compounds.
В качестве контроля включали лунки, не содержащие тестируемых веществ (контроль роста культуры). Кроме того, ставили контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест - соединений с ростом культуры без них.  Wells containing no test substances were included as a control (culture growth control). In addition, they put control over the purity of nutrient media and solvents. The plates were incubated in a thermostat at 37 ° C for 24 hours. The growth of cultures was assessed visually, comparing the growth of microorganisms in the presence of the studied test compounds with the growth of culture without them.
За МПК принимали минимальную концентрацию исследуемых соединений, обеспечивающую полное подавление видимого роста исследуемых штаммов микроорганизмов. В качестве МПК соединения принимали его максимальное значение, полученное в трех независимых экспериментах. Полученные результаты представлены в Таблице 1 на Фиг.1.  For the IPC, the minimum concentration of the studied compounds was taken, which completely suppresses the visible growth of the studied microorganism strains. The maximum value obtained in three independent experiments was taken as the IPC of the compound. The results obtained are presented in Table 1 in figure 1.
Как видно из представленных в Таблице 1 данных, соединение I на штаммах грамположительных и грамотрицательных бактерий существенно превосходит мирамистин и сопоставимо по своей активности с хлоридом бензалкония. Необходимо отметить, что к соединению I были чувствительны все 55 бактериальных штаммов (МПК 100 < 64 мкг/мл), в то время как у мирамистина МПК9, < 64 мкг/мл, а у бензалкония хлорида МПК98 < 64 мкг/мл. As can be seen from the data presented in Table 1, compound I on strains of gram-positive and gram-negative bacteria significantly exceeds miramistin and is comparable in its activity with benzalkonium chloride. It should be noted that all 55 bacterial strains were sensitive to Compound I (IPC 100 <64 μg / ml), while miramistin IPC 9 , <64 μg / ml, and benzalkonium chloride IPC 98 <64 μg / ml.
Пример 3. Исследование антимикотической активности четвертичной аммониевой соли in vitro. Example 3. The study of the antimycotic activity of the Quaternary ammonium salt in vitro.
При исследовании антимикотической (противогрибковой) активности четвертичной аммониевой соли I использовались следующие штаммы грибов:  In the study of the antimycotic (antifungal) activity of the Quaternary ammonium salt I, the following fungal strains were used:
- Candida albicans К- 1020 (клинический изолят, резистентный к флуконазолу, выделенный от больной с клинически подтвержденным диагнозом (системный кандидоз кожи и слизистой) в Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора, лаборатория микологии, г. Казань.  - Candida albicans K-1020 (fluconazole-resistant clinical isolate isolated from a patient with a clinically confirmed diagnosis (systemic candidiasis of the skin and mucous membranes) at the Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan.
- Rhizopus nigricans 600 Всероссийская коллекция микроорганизмов (ВКМ) (эталонный штамм). - Aspergillus fumigatus 1320-13 (клинический изолят, выделен из полости носа, грибковое образование, решетчатая кость) в Казанском НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора, лаборатория микологии, г. Казань. - Rhizopus nigricans 600 All-Russian Collection of Microorganisms (VKM) (reference strain). - Aspergillus fumigatus 1320-13 (clinical isolate isolated from the nasal cavity, fungal formation, ethmoid bone) at the Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan.
- Trichophyton rubrum К-1 (клинический изолят, выделен с кожных покровов человека) из Казанского НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора, лаборатория микологии, г. Казань.  - Trichophyton rubrum K-1 (clinical isolate isolated from human skin) from the Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan.
Для приготовления инокулюма использовали чистые, 2-5 суточные культуры дрожжевых и мицелиальных грибов соответственно, выросших на плотной питательной среде Сабуро.  For the preparation of the inoculum, pure, 2-5 day old cultures of yeast and mycelial fungi, respectively, grown on Saburo's dense nutrient medium were used.
Инокулят для засева готовили по-разному в зависимости от вида грибов. Так, дрожжевые культуры ( Candida albicans, Candida tropicalis) готовили путем смыва культуры с агарового косяка. Культуры мицелиальных грибов ( Rhizopus nigricans, Aspergillus fumigatus) предварительно растирались в ступке. В стерильном изотоническом растворе хлорида натрия готовили взвесь микроорганизмов, доводя плотность инокулюма до 2 млрд, по стандарту МакФарланда (2Т0 КОЕ/мл), учитывая, что величина грибковых элементов примерно в 10 раз превышает величину бактерий. Конечная концентрация клеток в опыте составляет 1-5x103 для дрожжевых грибов и 0.4-5х104 для мицелиальных. Инокулюм использовали в течение 15 минут после приготовления; чистота грибковых штаммов контролировалась перед каждым экспериментом The inoculum for inoculation was prepared differently depending on the type of mushroom. So, yeast cultures (Candida albicans, Candida tropicalis) were prepared by washing off the culture from an agar jamb. Cultures of mycelial fungi (Rhizopus nigricans, Aspergillus fumigatus) were previously ground in a mortar. A suspension of microorganisms was prepared in a sterile isotonic sodium chloride solution, bringing the inoculum density to 2 billion, according to the MacFarland standard (2T0 CFU / ml), given that the size of the fungal elements is about 10 times the size of bacteria. The final concentration of cells in the experiment is 1-5x10 3 for yeast and 0.4-5x10 4 for mycelial. Inoculum was used within 15 minutes after preparation; the purity of fungal strains was monitored before each experiment
Изучение противогрибковой активности веществ in vitro проводилось в жидкой питательной среде (глюкозный бульон Сабуро) в биологических пробирках методом 2-х кратных серийных разведений. В пробирках готовили два параллельных ряда разведений исследуемого вещества следующим способом.  The study of the antifungal activity of substances in vitro was carried out in a liquid nutrient medium (Saburo glucose broth) in biological test tubes by the method of 2-fold serial dilutions. In test tubes, two parallel series of dilutions of the test substance were prepared in the following way.
Жидкую среду Сабуро разливали стерильно по 3 мл в каждую пробирку; в первую пробирку ряда наливали 4.5 мл. Всего в ряду использовались 14 пробирок; из них последняя контрольная. В качестве стандартной навески брали 40 мг испытуемого вещества и растворяли в 1 мл ДМСО, а затем добавляли дистиллированную воду, доводя объем до 10 мл. Таким образом, исходное разведение содержало испытуемое вещество в концентрации 4000 мкг/мл. Затем 0.5 мл этого разведения вносили в первую пробирку ряда (с 4.5 мл среды), разводя тем самым концентрацию вещества еще в 10 раз. Следовательно, первая пробирка ряда содержала 400 мкг/мл испытуемого вещества. Затем из первой пробирки брали по 3 мл раствора и переносили его во вторую пробирку, тщательно продув. Затем снова брали 3 мл раствора уже из второй пробирки и переносили в третью пробирку и т.д.; из предпоследней пробирки 3 мл выливали. В последнюю пробирку, как в контрольную, вещество не вносили. Saburo's liquid medium was sterilely poured into 3 ml in each tube; 4.5 ml was poured into the first tube of the row. A total of 14 test tubes were used in a row; of which the last control. 40 mg of the test substance was taken as a standard sample and dissolved in 1 ml of DMSO, and then distilled water was added, bringing the volume to 10 ml. Thus, the initial dilution contained the test substance at a concentration of 4000 μg / ml. Then 0.5 ml of this dilution was introduced into the first test tube of the series (with 4.5 ml of medium), thereby diluting the concentration of the substance by another 10 times. Therefore, the first tube of the series contained 400 μg / ml of the test substance. Then, 3 ml of solution was taken from the first tube and transferred to the second tube, thoroughly blowing. Then again took 3 ml of the solution already from the second tube and transferred in the third test tube, etc .; from the penultimate tube, 3 ml was poured. The substance was not added to the last tube, as in the control.
Таким образом, получили следующие разведения в мкг/мл: 400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.5, 0.75, 0.38, 0.19, 0.09.  Thus, the following dilutions in μg / ml were obtained: 400, 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.5, 0.75, 0.38, 0.19, 0.09.
В пробирки с двумя параллельными рядами разведений исследуемого вещества (как описано выше) и в контрольные пробирки в отсутствии испытуемых веществ оттитрованной пипеткой, содержащей 25 капель в 1 мл, вносили по одной капле взвеси инокулюма. После засева штатив энергично встряхивали и помещали в термостат с температурой 27 °С на 2-4 суток для дрожжевых грибов и на 7-14 суток для мицелиальных грибов соответственно. За МПК принимали минимальную концентрацию исследуемых соединений, обеспечивающую полное подавление видимого роста исследуемых штаммов микроорганизмов. В качестве препаратов сравнения использовали антимикотики флуконазол и тербинафин, а также антисептики бензалкония хлорид и мирамистин.  In tubes with two parallel rows of dilutions of the test substance (as described above) and in control tubes in the absence of test substances, one drop of the inoculum suspension was added by a titrated pipette containing 25 drops in 1 ml. After seeding, the tripod was shaken vigorously and placed in a thermostat with a temperature of 27 ° C for 2-4 days for yeast fungi and for 7-14 days for mycelial fungi, respectively. For the IPC, the minimum concentration of the studied compounds was taken, which completely suppresses the visible growth of the studied microorganism strains. The antimycotics fluconazole and terbinafine, as well as the antiseptics of benzalkonium chloride and miramistin, were used as comparison preparations.
Как видно из данных, представленных в Таблице 2 на Фиг.2, соединение I по своей антимикотической активности сопоставимо с препаратом сравнения тербинафином и существенно превосходит флуконазол, а также антисептики мирамистин и хлорид бензалкония.  As can be seen from the data presented in Table 2 in Figure 2, compound I in its antimycotic activity is comparable to the comparison drug terbinafine and significantly exceeds fluconazole, as well as the antiseptics miramistin and benzalkonium chloride.
Пример 4. Исследование влияния соединения на рост грибов Candida albicans в Example 4. Investigation of the effect of the compound on the growth of Candida albicans b.
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0001
составе биопленок. composition of biofilms.
При исследовании влияния соединения I на грибы в составе биопленок использовались следующие штаммы:  When studying the effect of compound I on fungi, the following strains were used as part of biofilms:
- Candida albicans К-4546 (клинический изолят, выделенный со слизистой зева) Казанский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора, лаборатория микологии, г. Казань;  - Candida albicans K-4546 (clinical isolate isolated from the mucous membrane of the pharynx) Kazan Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Federal Service for Supervision of Human Welfare, Mycology Laboratory, Kazan;
- Candida albicans (С. albicans) К- 203 (клинический изолят, выделенный с кожных покровов);  - Candida albicans (C. albicans) K-203 (clinical isolate isolated from the skin);
- Candida albicans К-230 (клинический изолят, выделенный со слизистой зева);  - Candida albicans K-230 (clinical isolate isolated from the mucous membrane of the pharynx);
- Candida albicans К-249 (клинический изолят, выделенный с ногтевых пластин); - Candida albicans K-249 (clinical isolate isolated from the nail plates);
- Candida albicans К-256 (клинический изолят, выделенный с кожных покровов).- Candida albicans K-256 (a clinical isolate isolated from the skin).
Формирование биопленок грибов С. albicans проводили по методу [G. Ramage, К.The formation of biofilms of C. albicans fungi was carried out according to the method of [G. Ramage K.
VandeWalle, B.L. Wickes, JL. Lopez-Ribot. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans // Rev. Iberoam. Micol. - 2001. -V. 18. - P. 163-170]. Культуру грибов засевали в жидкую среду Сабуро и инкубировали в орбитальном шейкере (180 об/мин) при 30 °С в течение 24 часов. Затем культуру промывали два раза стерильным фосфатным буфером и ресуспендировали в жидкой среде Сабуро с конечной плотностью 1.0 х 106 клеток/мл. Суспензию клеток в количестве 100 мкл вносили в 96-луночные плоскодонные полистироловые микропанели и инкубировали в течение 24 часов при 37 °С (контроль К1). После образования биопленки планшеты промывали три раза стерильным фосфатным буфером. Затем вносили тестируемые соединения методом серийных разведений в различных концентрациях в количестве 125 мкл и инкубировали в течение 48 часов. VandeWalle, BL Wickes, JL. Lopez-Ribot. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans // Rev. Iberoam. Micol. - 2001. -V. 18. - P. 163-170]. A fungal culture was seeded in Saburo's liquid medium and incubated in an orbital shaker (180 rpm) at 30 ° C in within 24 hours. The culture was then washed twice with sterile phosphate buffer and resuspended in Saburo liquid medium with a final density of 1.0 x 10 6 cells / ml. A cell suspension of 100 μl was introduced into 96-well flat-bottomed polystyrene micropanels and incubated for 24 hours at 37 ° C (control K1). After biofilm formation, the plates were washed three times with sterile phosphate buffer. Then, test compounds were added by serial dilution at various concentrations in an amount of 125 μl and incubated for 48 hours.
Оценивали степень или количество сформированных биопленок колориметрическим способом. В лунки со сформированными биопленками добавляли 125 мкл водного раствора 1% кристаллического фиолетового и инкубировали 20 мин при 37 °С. После удаления избытка красителя и промывки лунок добавляли 95% этанол в количестве 125 мкл, оптическую плотность регистрировали на ридере с вертикальным лучом света с использованием светофильтра 620 нм.  The degree or amount of biofilms formed was measured in a colorimetric manner. 125 μl of an aqueous solution of 1% crystalline violet was added to wells with formed biofilms and incubated for 20 min at 37 ° C. After removing the excess dye and washing the wells, 95% ethanol was added in an amount of 125 μl, the optical density was recorded on a reader with a vertical light beam using a 620 nm filter.
Как видно из представленных на Фиг. 3-5 графиков, количественный рост штаммов С. albicans в составе биопленок в отсутствии препаратов увеличивался в 2 раза. Минимальные значения МПК для флуконазола на штаммы С. albicans в составе биопленок составили >400 мкг/мл, максимальные значения >1600 мкг/мл. МПК для тербинафина на штаммах С. albicans в составе биопленок составили > 1600 мкг/мл. МПК для тестируемого соединения I на штаммах С. albicans в составе биопленок составили > 200 мкг/мл. Препараты сравнения (флуконазол, тербинафин) проявляли различную активность в отношении группы штаммов. Так, флуконазол был менее активен в отношении штаммов, выделенных с кожных покровов. Тербинафин не оказывал противогрибковую активность в отношении штамма, выделенного с ногтевых пластин.  As can be seen from FIG. 3-5 plots, the quantitative growth of C. albicans strains in biofilms in the absence of drugs increased by 2 times. The minimum MIC values for fluconazole for C. albicans strains in biofilms were> 400 μg / ml, and the maximum values> 1600 μg / ml. The MIC for terbinafine on C. albicans strains in biofilms was> 1600 μg / ml. The BMD for test compound I on C. albicans strains in biofilms was> 200 μg / ml. Comparison preparations (fluconazole, terbinafine) showed different activity against a group of strains. So, fluconazole was less active against strains isolated from the skin. Terbinafine did not exert antifungal activity against the strain isolated from the nail plates.
Тестируемое соединение I проявляло стабильную активность в отношении всех групп штаммов, существенно большую, чем тербинафин и флуконазол. Кроме того, ингибирование количественного роста биопленок наступает уже в концентрации 6.2 мкг/мл, что является его несомненным преимуществом.  Test compound I showed stable activity against all groups of strains, significantly larger than terbinafine and fluconazole. In addition, the inhibition of quantitative growth of biofilms already occurs at a concentration of 6.2 μg / ml, which is its undoubted advantage.
Пример 5. Исследование острой токсичности соединения на крысах приExample 5. The study of acute toxicity of the compound in rats with
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000013_0001
внутрижелудочном введении. intragastric administration.
Исследование острой токсичности соединения I проводили на SPF крысах линии Sprague Dawley при внутрижелудочном введении в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая [Текст] / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с.]. Использовали внутрижелудочное (пероральное) введение раствора соединения I в объеме не более 0.5 мл/300 г живой массы тела крысы с применением желудочного зонда. Крысам вводили дозу 2000 мг/кг. Расчет токсических доз ЛДю, ЛД16, ЛД50 и ЛД84 (средние дозы вещества, вызывающие гибель 10, 16, 50 и 84 % животных, соответственно) производился с использованием пробит-анализа в программном обеспечении IBM SPSS Statistics. An acute toxicity study of compound I was carried out on SPF rats of the Sprague Dawley line with intragastric administration in accordance with the Guidelines for preclinical studies of drugs [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One [Text] / Ed. A.N. Mironova. - M .: Grif and K, 2012. - 944 p.]. Used intragastric (oral) administration of a solution of compound I in a volume of not more than 0.5 ml / 300 g body weight of a rat body using a gastric tube. Rats were dosed with a dose of 2000 mg / kg. Toxic doses of LDu, LD 16 , LD 50 and LD 84 (average doses of the substance causing the death of 10, 16, 50 and 84% of animals, respectively) were calculated using probit analysis in the IBM SPSS Statistics software.
Через 14 дней после введения препарата были проведены эвтаназия и патоморфологическое вскрытие контрольной и опытных групп животных. При вскрытии крыс никаких изменений внутренних органов не наблюдалось.  14 days after drug administration, euthanasia and pathomorphological autopsy of the control and experimental groups of animals were performed. At autopsy of rats, no changes in internal organs were observed.
В результате эксперимента величина ЛД50 для соединения I выявлена не была (Таблица 6 на Фиг.6), поскольку при введении дозы 2000 мг/кг падеж крыс не фиксировался. As a result of the experiment, the LD 50 value for compound I was not detected (Table 6 in FIG. 6), since a rat case was not recorded with a dose of 2000 mg / kg.
По результатам исследования острой токсичности при пероральном введении (Таблица 6 на Фиг.6) в соответствии с ГОСТ 32644-2014 соединение I можно отнести к 4-му классу токсичности по Согласованной на глобальном уровне системе классификации опасности и маркировки химической продукции, а в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 - к 3-му классу умеренно опасных вредных веществ. Широко применяемые в настоящее время антисептики мирамистин (ЛД50 = 1200 мг/кг) [. Лекарственный препарат Патент РФ Ns 2161961 от 17.03.2000 ], бензалкония хлорид (ЛД50 = 240 мг/кг) [http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsld=9923038\, хлоргексидин (ЛД50 = 2000 мг/кг) [http ://www. pfizer. com/files/products/material_safety_data/PZ00711. pdj] и антимикотик флуконазол (ЛД50 = 1325 мг/кг)According to the results of the acute oral toxicity study (Table 6 in FIG. 6) in accordance with GOST 32644-2014, compound I can be attributed to the 4th toxicity class according to the Globally Harmonized System of Classification of Hazards and Labeling of Chemical Products, and in accordance with GOST 12.1.007-76 - to the 3rd class of moderately hazardous harmful substances. Miramistin antiseptics widely used at present (LD 50 = 1200 mg / kg) [. Drug Patent RF Ns 2161961 dated 03/17/2000], benzalkonium chloride (LD 50 = 240 mg / kg) [http: //www.sciencelab.com/msds.php? Msdsld = 9923038 \, chlorhexidine (LD 50 = 2000 mg / kg) [http: // www. pfizer. com / files / products / material_safety_data / PZ00711. pdj] and antimycotic fluconazole (LD 50 = 1325 mg / kg)
[https ://www. pfizer. com/sites/default/files/products/material_safety_data/diflucan(fluconazole)ta blets_3l-may-2016.pdf], при внутрижелудочном введении на крысах существенно более токсичны. [https: // www. pfizer. com / sites / default / files / products / material_safety_data / diflucan (fluconazole) ta blets_3l-may-2016.pdf], when administered intragastrically in rats, they are significantly more toxic.
Пример 6. Исследование острой токсичности соединения на крысах приExample 6. The study of acute toxicity of the compound in rats with
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000014_0001
нанесении на кожу. applied to the skin.
Исследования острой токсичности соединения I на крысах линии Wistar при нанесении на кожу проводились в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая [Текст] / Под ред. A.H. Миронова.— М.: Гриф и К, 2012.— 944 с.]. Acute toxicity studies of compound I in Wistar rats when applied to the skin were carried out in accordance with the Guidelines for the preclinical studies of drugs [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One [Text] / Ed. AH Mironova.— M .: Grif and K, 2012.— 944 p.].
Использовали накожное нанесение раствора соединения I в объеме не более 0.5 мл/250 г живой массы тела крысы. При накожной аппликации навеску соединения I равномерно наносили на марлю, увлажняли дистиллированной водой для обеспечения лучшего контакта с кожей, фиксировали при помощи лейкопластыря и оставляли на 24 часа.  Used percutaneous application of a solution of compound I in a volume of not more than 0.5 ml / 250 g body weight of the rat body. With a cutaneous application, a weighed portion of compound I was uniformly applied to gauze, moistened with distilled water to provide better skin contact, fixed with an adhesive plaster and left for 24 hours.
Через 14 дней после введения соединения была проведена эвтаназия животных и проведено патоморфологическое вскрытие. При вскрытии крыс никаких изменений внутренних органов не наблюдалось.  14 days after administration of the compound, animal euthanasia was performed and a pathomorphological autopsy was performed. At autopsy of rats, no changes in internal organs were observed.
В результате эксперимента величина ЛД50 для соединения I выявлена не была, поскольку при нанесении на кожу дозы 2000 мг/кг падеж крыс не фиксировался (Таблица 7 на Фиг.7). По результатам исследования острой токсичности при накожном нанесении в соответствии с ГОСТ 32644-2014 соединение I можно отнести к 4-му классу токсичности по Согласованной на глобальном уровне системе классификации опасности и маркировки химической продукции, а в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 - к 3-му классу умеренно опасных вредных веществ. Широко применяемые в настоящее время антисептик бензалкония хлорид (ЛД50 = 1420 мг/кг)As a result of the experiment, the LD50 value for compound I was not detected, since when the dose of 2000 mg / kg was applied to the skin, the mortality of rats was not recorded (Table 7 in FIG. 7). According to the results of the study of acute toxicity during skin application in accordance with GOST 32644-2014, compound I can be attributed to the 4th toxicity class according to the Globally Harmonized System of Classification of Hazards and Labeling of Chemical Products, and in accordance with GOST 12.1.007-76 - 3rd class of moderately hazardous harmful substances. Currently widely used antiseptics benzalkonium chloride (LD 50 = 1420 mg / kg)
Г https ://www. sismaaldrich. com/MSDS/MSDS/DisplavMSDSPaee. do ? country =R U &lansuase = e n&productNumber=12060&brand=SIAL&PaseToGoToURL=httDS%o3A%o2F%o2Fwww.sismaal drich.com%2Fcatalos%2Fsearch%3Fterm%3D63449-41-D https: // www. sismaaldrich. com / MSDS / MSDS / DisplavMSDSPaee. do? country = RU & lansuase = e n & productNumber = 12060 & brand = SIAL & PaseToGoToURL = htt DS % o3A% o2F% o2Fwww.sismaal drich.com% 2Fcatalos% 2Fsearch% 3Fterm% 3D63449-41-
2%o26interface%o3DCAS%o2520No. %26N%3D0%26mode%3DDartialmax%26lans%3Den%26re sion%3DR U%26focus%3Dproduct] и хлоргексидин (ЛД50 = 2000 мг/кг)2% o26interface% o3DCAS% o2520No. % 26N% 3D0% 26mode% 3DDartialmax% 26lans% 3Den% 26re sion% 3DR U% 26focus% 3Dproduct] and chlorhexidine (LD50 = 2000 mg / kg)
Г http://www.pfizer.com/fdes/products/material safety data/PZ00711.pdf] при накожном нанесении на крысах существенно более токсичны. D http://www.pfizer.com/fdes/products/material safety data / PZ00711.pdf] with cutaneous application on rats is significantly more toxic.
Таким образом, заявленное техническое решение - новое соединение формулы I, содержащее в своем составе как фрагмент природного соединения (витамина В6), так и четвертичный аммониевый фрагмент, позволяет создать новое высокоэффективное и малотоксичное лекарственное средство, обладающее как антимикотической, так и антибактериальной активностью, которое потенциально позволит существенно повысить качество и продолжительность жизни пациентов.  Thus, the claimed technical solution - a new compound of formula I, containing both a fragment of a natural compound (vitamin B6) and a quaternary ammonium fragment, allows you to create a new highly effective and low-toxic drug with both antimycotic and antibacterial activity, which potentially will significantly improve the quality and life expectancy of patients.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью отличительных признаков, обеспечивающих достижение заявленных результатов. The claimed technical solution meets the criterion of "novelty" presented to the invention, since the investigated prior art is not identified technical solutions possessing the claimed combination of distinctive features ensuring the achievement of the declared results.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как не является очевидным для специалиста в данной области науки и техники.  The claimed technical solution meets the criterion of "inventive step" for inventions, as it is not obvious to a specialist in this field of science and technology.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», т.к. может быть реализовано на любом специализированном предприятии с использованием стандартного оборудования, известных отечественных материалов и технологий.  The claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability", because can be implemented at any specialized enterprise using standard equipment, well-known domestic materials and technologies.

Claims

Формула изобретения Claim
1. Четвертичная аммониевая соль формулы I: 1. Quaternary ammonium salt of the formula I:
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0001
2. Четвертичная аммониевая соль по п.1, обладающая антимикотической и антибактериальной активностью. 2. The quaternary ammonium salt according to claim 1, having antimycotic and antibacterial activity.
PCT/RU2019/000329 2018-05-23 2019-05-13 Quaternary ammonium salt exhibiting antimycotic and antibacterial activity WO2019226071A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018118988A RU2666544C1 (en) 2018-05-23 2018-05-23 Quaternary ammonium salt possessing antimicrobial activity and antibacterial activity
RU2018118988 2018-05-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019226071A1 true WO2019226071A1 (en) 2019-11-28

Family

ID=63580184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/000329 WO2019226071A1 (en) 2018-05-23 2019-05-13 Quaternary ammonium salt exhibiting antimycotic and antibacterial activity

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2666544C1 (en)
WO (1) WO2019226071A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114349761A (en) * 2021-12-21 2022-04-15 新发药业有限公司 Vitamin B6 impurity A and preparation method and application thereof

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2731999C1 (en) * 2020-04-29 2020-09-09 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Bis-ammonium compounds based on pyridoxine, having antibacterial and antimycotic properties

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2561281C1 (en) * 2014-09-16 2015-08-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Antibacterial agents based on quaternary ammonium salts
RU2607522C1 (en) * 2015-12-02 2017-01-10 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Quaternary ammonium salts based on derivatives of vitamin b6
RU2641309C1 (en) * 2017-07-24 2018-01-17 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Antiseptic drug

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3408359A (en) * 1965-10-21 1968-10-29 Merck & Co Inc 7-methyl-8-hydroxy-1, 4-dihydro-o-dioxin(4, 5-c)pyridine

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2561281C1 (en) * 2014-09-16 2015-08-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Antibacterial agents based on quaternary ammonium salts
RU2607522C1 (en) * 2015-12-02 2017-01-10 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Quaternary ammonium salts based on derivatives of vitamin b6
RU2641309C1 (en) * 2017-07-24 2018-01-17 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Antiseptic drug

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114349761A (en) * 2021-12-21 2022-04-15 新发药业有限公司 Vitamin B6 impurity A and preparation method and application thereof

Also Published As

Publication number Publication date
RU2666544C1 (en) 2018-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230365491A1 (en) Method for inhibiting or disrupting biofilm formation, or reducing biofilm
US11014934B2 (en) Antiseptic drug
RU2666544C1 (en) Quaternary ammonium salt possessing antimicrobial activity and antibacterial activity
RU2561281C1 (en) Antibacterial agents based on quaternary ammonium salts
de Almeida et al. Synthesis and antimicrobial activity of novel amphiphilic aromatic amino alcohols
RU2428419C2 (en) Novel benzofuroxanes with fungicidal and bactericidal activity
Mishra et al. Synthesis and in vitro antimicrobial activity of some triazole derivatives
RU2808635C1 (en) Use of benzyldimethyl[3-(stearinoylamino)propyl] ammonium chloride as an antibacterial and/or antiseptic agent and method of its obtaining
Vortman et al. Fungicidal and bactericidal activity of alkyl-substituting polyetherguanidines
CN114773389B (en) Oxadiazole heterocycle substituted quaternary phosphonium salt with antibacterial activity, and preparation method and application thereof
US4100277A (en) 4,1-Benzoxazonine derivatives and process therefor
RU2764522C1 (en) 3,3&#39;[(hexano-1,6-diylbis (azanediyl)]bis-(7-hydroxy-6-methoxycarbonyl-2-oxo-2h-chromene) with antibacterial activity
RU2798469C1 (en) Application of 1-(4-bromophenyl)-4,4,4-trichlorobutane-1,3-dione as an antifungal activity against aspergillus fumigatus and aspergillus niger
RU2806095C1 (en) 8-(2,2,2-TRICHLOROACETYL)-9-(p-CHLOROPHENYL)-6,10-DIOXOSPIRO[4,5]DEC-8-EN-7-ONE, EXHIBITS ANTI-MICROBIAL ACTIVITY
RU2365596C1 (en) Copolymers of diallylaminophosphonium salts with sulphur dioxide demonstrating anti-microbial activity
Joshi et al. Synthesis and in-vitro study of some medicinally important mannich bases derived from 2-amino-9 [{(1, 3 dihydroxy propane-2yl) oxy} methyl] 6-9 dihydro-3h-purin-6-one
RU2479571C1 (en) 4-(1-cyclohepta-2,4,6-trienyl)aniline and chloride thereof, exhibiting antimicrobial activity
SU1089935A1 (en) 3-(benzyloxymethyl-3-[4-methoxyphenyl]-4-(3n)-quinozolone displaying antimicrobal activity
SU1107537A1 (en) Benzylamide of 5-nitrofurfurylydene anthranylic acid displaying antimicrobic activity
US20220022457A1 (en) Microbicide Ammonium-Imidazolium Oligomers and Their Anti-Fungal Compositions
RU2469027C2 (en) 3-(2-bromophenyl) and 3-benzyl-4,5,6,7-tetrahydroindazole hydrochlorides, antimicrobial agent based thereon
Morshed et al. Synthesis and antimicrobial screening of three triazole derivatives
Narasimhan et al. Synthesis and antimicrobial evaluation of substituted benzoic acid-(5-oxo-pentylidene)-hydrazides
RU2602804C1 (en) Salts of benzofuroxane with lomefloxacin, having antibacterial activity
Oezcelik et al. Synthesis of 3-substituted-5-(4-carboxycyclohexylmethyl)-tetrahydro-2H-1, 3, 5-thiadiazine-2-thione derivatives as antifibrinolytic and antimicrobial agents

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19808459

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19808459

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1