WO2019027293A1 - Ml323을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Ml323을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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WO2019027293A1
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obesity
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treating obesity
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전경희
이진아
백정환
김남준
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    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising ML323 or a salt thereof as an active ingredient.
  • adipocyte a new adipocyte is produced in the human body.
  • the new adipocytes differentiate from pro-adipocytes, which are formed by differentiation from stem cells.
  • the process of differentiation of stem cells into adipocytes through adipocytes is called hormone, growth Factors such as urea, cytokine, and the like regulators are affected.
  • Obesity is not just a lot of weight, but refers to a state of excessive accumulation of body fat. Even if it appears to be normal weight, it means that it can be called obesity if the percentage of body fat is high.
  • the body mass index (BMI) is usually used to determine the obesity rate. In the case of 23 to 24.9, overweight is judged to be 25 to 29.9. .
  • Obesity is caused by a combination of multiple causes rather than a single cause, including poor eating habits, decreased activity, emotional factors, and genetic factors, including westernized eating habits. Obesity, which is caused by hyperlipidemia, diabetes, Thereby increasing the risk of disease.
  • Ubiquitin is composed of 76 amino acids. It exists in all eukaryotic cells and participates in numerous cellular functions such as selective degradation of proteins and regulation of cell division.
  • the covalent bonding of ubiquitin and substrate proteins takes place sequentially by ubiquitin-catalyzed ubiquitin-activating enzyme (E1), ubiquitin-binding enzyme (E2) and ubiquitin-conjugating enzyme (E3).
  • E1 ubiquitin-catalyzed ubiquitin-activating enzyme
  • E2 ubiquitin-binding enzyme
  • E3 ubiquitin-conjugating enzyme
  • Substrate protein modification by ubiquitination can occur reversibly as in the case of modification by protein phosphorylation / dephosphorylation. Removing ubiquitin from the substrate protein is called deubiquitination, and the enzyme group that activates this reaction is called deubiquitin It is called deubiquitinase (DUB).
  • the deubiquitinating enzymes are mainly UB (Ub C-terminal hydrolase), USP (Ub-specific processing protease), Otubain (OTU-domain Ub-aldehyde- binding protein, MJD (Machado-Joseph disease) and JAMM (Jab1 / Pad1 / MPN domain metallo-enzyme) family.
  • USP is the largest group. In the case of USP, it has an active-domain consisting mainly of 350 amino acids and is a protease (protease).
  • Korean Patent No. 10-0794706 discloses that when the adipocyte precursor cells are treated with insulin, the expression level of a gene encoding a specific deubiquitinating enzyme is significantly decreased, and thus the expression level of the gene is measured to diagnose obesity or diabetes I can tell.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising ML323 or a salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising ML323 or a salt thereof represented by the following formula (1) as an active ingredient:
  • the ML323 may inhibit the activity and / or expression of USP1 (Ubiquitin specific protease 1).
  • the composition may inhibit fat accumulation or adipocyte differentiation.
  • composition may reduce the expression of PPAR ⁇ (Peroxisome Proliferator Receptor gamma), C / EBP ⁇ (CCAAT-enhancer-binding proteins alpha) or FABP4 (fatty acid binding protein 4) protein.
  • PPAR ⁇ Peroxisome Proliferator Receptor gamma
  • C / EBP ⁇ CCAAT-enhancer-binding proteins alpha
  • FABP4 fatty acid binding protein 4
  • the capacity of the ML323 may be 0.1 to 100 ⁇ M.
  • a health functional food composition for preventing or ameliorating obesity comprising ML323 or a salt thereof represented by the following formula (1) as an active ingredient:
  • the ML323 may inhibit the activity and / or expression of USP1 (Ubiquitin specific protease 1).
  • the present inventors have completed the present invention by discovering the efficacy of ML323 against obesity, which suppresses the expression of UPS1.
  • ML323 is a compound which inhibits the expression of USP1 and is represented by the following formula (1), and the IUPAC name is N- (4- (1H-1,2,3-triazol- - (2- (2-isopropylphenyl) -5-methylpyrimidin-4-amine) -isopropylphenyl) -5-methylpyrimidin-4-amine < / RTI >
  • the method for obtaining the ML323 is not particularly limited, and the ML323 may be chemically synthesized using a known production method or a commercially available product may be used.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity comprising ML323 or a salt thereof represented by the following formula (1) as an active ingredient:
  • the ML323 can inhibit the activity and / or expression of USP1 (Ubiquitin specific protease 1).
  • the ML323 may be used for various factors that inhibit lipid synthesis, lipid accumulation or differentiation of adipocytes such as FASN (Fatty acid synthase), PPAR ⁇ (Peroxisome Proliferator Receptor gamma), C / EBP ⁇ (CCAAT-enhancer-binding proteins ) Or FABP4 (fatty acid binding protein 4), thereby preventing or treating obesity.
  • FASN Food acid synthase
  • PPAR ⁇ Peroxisome Proliferator Receptor gamma
  • C / EBP ⁇ CCAAT-enhancer-binding proteins
  • FABP4 fatty acid binding protein 4
  • the capacity of the ML323 may be in the range of 0.1 ⁇ M to 100 ⁇ M, preferably 5 ⁇ M to 50 ⁇ M, but is not limited thereto. At this time, when ML323 is less than the concentration range, there is a problem that the neutral fat accumulation inhibitory activity is lowered and it is difficult to exert the preventive or therapeutic effect of obesity. When ML323 exceeds the above concentration range, there is a concern about toxicity including cytotoxicity There may be something.
  • the pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity may be in the form of oral preparations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups and aerosols, external preparations, suppositories and sterilized injection solutions And may contain suitable carriers, excipients or diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions for formulation.
  • Examples of the carrier or the excipient or diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, and the like.
  • a diluent or excipient such as a commonly used filler, a weight agent, a binder, a wetting agent, a disintegrant or a surfactant may be used.
  • the solid preparation for oral administration may be prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like in the pulp extract.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like in the pulp extract.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used.
  • liquid formulations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included .
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous agents, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories.
  • the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like.
  • As a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerol gelatin and the like can be used.
  • the preferred dosage of the pharmaceutical composition for preventing or treating obesity varies depending on the condition of the patient, the body weight, the degree of disease, the drug form, the administration route and the period, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the dose may be 0.0001 to 2,000 mg / kg, preferably 0.001 to 2,000 mg / kg per day.
  • the administration may be carried out once a day or divided into several doses.
  • the scope of the present invention is not limited by the dosage.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating obesity according to the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, and humans in various routes. All modes of administration can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.
  • the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving obesity comprising ML323 or a salt thereof represented by the following formula (1) as an active ingredient:
  • the ML323 can inhibit the activity and expression of USP1 (Ubiquitin specific protease 1), and the ML323 specific contents are as described above.
  • ML323 when used as an additive for health functional food, it may be added as it is or may be used together with other foods or food ingredients, Can be used.
  • the amount of the active ingredient to be mixed may be suitably determined according to each use purpose such as prevention, health, or treatment.
  • Formulations of health functional foods may be in the form of powders, granules, pills, tablets, capsules, as well as in the form of ordinary foods or beverages.
  • examples of the food to which the above substance can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, , Various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages, and vitamin complexes, and may include foods in a conventional sense.
  • the ML323 may be added in an amount of not more than 15 parts by weight, preferably not more than 10 parts by weight, based on 100 parts by weight of the raw material. However, in the case of long-term consumption intended for health and hygiene purposes or for health control purposes, the amount may be less than the above range. Further, since the present invention uses fractions from natural products, there is no problem in terms of safety, Or more.
  • the beverage in the health functional food according to the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages.
  • the above-mentioned natural carbohydrates may be monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol.
  • sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like.
  • the ratio of the natural carbohydrate may be about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the beverage according to the present invention.
  • the health functional food composition for preventing or ameliorating obesity may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickening agents, Stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, and carbonating agents used in carbonated beverages.
  • the health functional food composition for prevention or improvement of obesity of the present invention may contain flesh for the production of natural fruit juice, fruit juice drink and vegetable drink. These components may be used independently or in combination. The ratio of such additives is not limited, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight based on 100 parts by weight of the health functional food of the present invention.
  • the composition for preventing or treating obesity is a composition for preventing or treating obesity, wherein ML323 represented by the formula (1) inhibits the activity and / or expression of the USP1 gene and thereby inhibits lipid accumulation in adipocytes or inhibits adipocyte differentiation, ≪ / RTI >
  • the present invention relates to a composition for preventing or treating obesity, comprising ML323 or a salt thereof as an active ingredient.
  • the ML323 inhibits the expression of USP1, thereby inhibiting lipid accumulation in adipocytes or inhibiting differentiation into adipocytes from adipocytes Excellent bars, and prevention or treatment of obesity.
  • Example 1 shows results of (a) expression of molecules involved in lipogenesis, lipid accumulation and adipocyte differentiation according to si-USP1 during adipocyte differentiation, (b) inhibition of adipocyte differentiation inhibition of Example 1-3 (C) is a graph showing the effect of inhibiting lipid accumulation in lipo-progenitor cells of Example 1-3.
  • FIG. 3 is a graph showing the effect of (a) liposome degradation of Example 3 in Oil red O staining and (b) inhibition of lipid accumulation in lipid precursor cells.
  • FIG. 4 is a graph showing anti-obesity effect according to administration of ML323 in an experimental animal.
  • USP1 siRNA was prepared and injected into lipid precursor cells (3T3-L1, Korean Cell Line Bank, cat. 10092.1) to confirm the inhibitory effect of siRNA on protein expression.
  • lipid precursor cells 3T3-L1, Korean Cell Line Bank, cat. 10092.1
  • the siRNA of the following Table 1 and the control siRNA USP1 thereof were transfected with a Lipofectamine RNAiMAX reagent.
  • the cells were replaced with Bovine Serum medium, and the differentiation of adipocytes was induced the next day. Samples of adipocytes differentiated for 2 days and adipocytes differentiated for 6 days were confirmed to inhibit USP1 expression by Western blotting.
  • Membrane was washed with phosphate-buffered saline and tween 20 solution (PBS-T) three times for 10 minutes and then blocked for 60 minutes with 5% skim milk. The membranes were washed with PBS-T and incubated at 4 ° C for 12 h. The membranes were washed twice with 1: 2,000 dilution of secondary antibody Incubated for 60 min and washed. At this time, FASN, FABP4, PPAR ⁇ and C / EBP4 were used as primary antibodies. Finally, proteins were visualized on X-ray films using an ECL Western blot detection kit (RPN2106, Amersham, Arlington Heights, IL, USA). Visualized bands were scanned on X-ray film and quantified using Quantity One analysis software (Bio-Rad).
  • PBS-T phosphate-buffered saline and tween 20 solution
  • the medium was continuously changed every 2 days while changing medium containing 10% FBS.
  • Cultures of differentiated precursor cells were removed and washed with phosphate buffered saline (PBS).
  • PBS phosphate buffered saline
  • 200 ⁇ l of 10% formaldehyde was added to the wells and fixed at room temperature for 1 hour.
  • Formaldehyde was then removed, washed with tertiary distilled water, washed with 60% isopropanol, and dried.
  • 200 ⁇ l of Oil red O dye was added, and the plate was stained at room temperature for 1 hour and then washed three times with distilled water.
  • the stained cells were observed under a microscope to confirm the degree of differentiation from adipocytes into adipocytes.
  • the oil red ophthalmic solution is a solution obtained by dissolving 350 mg of Oil Red O dye in 100 ml of isopropanol in a ratio of 6: 4 with distilled water, and then filtering with a
  • dye dye in the adipocyte was extracted with 300 ⁇ l of isopropanol per well and the optical density value (OD value) was measured at 500 nm with an ELISA reader.
  • lipid precursor cells were cultured in DMEM medium supplemented with 10% bovine serum (Gibco-BRL, USA) and 1% Penicillin-Streptomycin (+5,000 Units / ml Penicillin, +5,000 ⁇ g / ⁇ l Streptomycin, Gibco-BRL, USA) And cultured at 37 ° C in an incubator supplied with 5% CO 2 . Then, 100 ⁇ l of the 3T3-L1 cells were added to 96-well plates (eppendorf, Germany) at 4 ⁇ 10 3 cells / well and cultured for 24 hours at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator.
  • ML323 compounds were prepared at concentrations of 0, 1, 2, 5, 10, and 25 ⁇ M to induce cell differentiation and treated with 3T3-L1 cells. After 48 hours, 10 ⁇ l of Ez-Cytox (Daeillab, Korea) was added to each well, incubated at 0.5 to 2 hours in an incubator, and absorbance was measured at 450 nm using an ELISA reader.
  • the ML323 compound did not show cytotoxicity to 3T3-L1 cells at a concentration of 0.1 to 25 ⁇ M.
  • Example 3 Confirmation of inhibition of differentiation into adipocytes and suppression of fat accumulation in adipose precursor cells
  • Example 1-3 In the same manner as in Example 1-3 except that ML323 was treated in order to confirm the degree of differentiation into adipocytes from lipid precursor cells according to the treatment concentration (1, 2, 5, 10, 25 ⁇ M) Respectively.
  • FIG. 3A it was confirmed that the differentiation of adipose precursor cells into adipocytes was inhibited depending on the concentration of the ML323 compound. In particular, when 10 to 25 ⁇ M was treated, adipocyte differentiation was remarkably inhibited I could confirm. Further, as shown in FIG. 3B, it was confirmed that lipid accumulation in the adipocytes was inhibited when the ML323 compound was treated at 2 ⁇ M or more, and it was confirmed that lipid accumulation was remarkably inhibited when 10 to 25 ⁇ M was treated I could.
  • the body weight gain of the M1323-treated group was significantly smaller than that of the control group, and the body weight was significantly different after 6 weeks. From this, it was confirmed that ML323-treated group had anti-obesity effect as compared with the control group.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • capsules were filled in gelatin capsules in accordance with the usual methods for preparing capsules.
  • the components are dissolved in purified water according to the usual preparation method, and the lemon fragrance is added in an appropriate amount. Then purified water is added to adjust the total volume to 100 mL, sterilized and filled in a brown bottle to prepare a liquid preparation.
  • Vitamin A Acetate 70 ⁇ g
  • composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a composition suitable for health food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional method for producing healthy foods , Granules can be prepared and used in the manufacture of health food compositions according to conventional methods.
  • Vitamin A 0.2 g
  • Vitamin B 1 0.25 g
  • the above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was heated for about 1 hour at 85 DEG C with stirring, and the solution thus prepared was filtered to obtain a sterilized 2-liter container, which was sealed and sterilized, ≪ / RTI >
  • compositional ratio is relatively mixed with a component suitable for a favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the compounding ratio according to the regional or national preference such as the demand class, the demanding country, and the use purpose.

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Abstract

본 발명은 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 및 비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물에 관한 것이다.

Description

ML323을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
최근 서구화된 식생활과 더불어 열량 섭취와 소비의 불균형으로 인하여 지방 조직이 과다하게 축적된 상태인 비만이 크게 늘고 있다. 비만은 대부분 섭취한 열량 중에서 소모되고 남는 부분이 지방세포(adipocyte)로 전환되어 체내의 피하조직과 복강 내에 축적되는 현상이다. 이러한, 지방세포의 크기에는 한계가 있으므로 과잉 에너지를 섭취할 때 에너지를 빨리 저장하기 위해서는 지방세포 수의 증가가 필요하게 되어 인체에서는 새로운 지방세포를 만든다. 새로운 지방세포는 전구지방세포(pro-adipocyte)로부터 분화되는데, 전구지방세포는 줄기세포(stem cell)로부터 분화되어 형성되고, 줄기세포가 전구지방 세포를 거쳐 지방세포로 분화되는 과정에는 호르몬, 성장요소, 사이토카인 등의 생체조절자(regulator)들이 영향을 미친다.
비만은 단순히 체중이 많이 나가는 것이 아니라 체지방이 과도하게 축적된 상태를 말한다. 겉으로 정상체중으로 보여도 체지방 비율이 높으면 비만이라고 할 수 있다는 의미이다. 보통 비만을 판정하는 방법은 체질량지수 (BMI)를 이용하게 되는데 23~24.9인 경우에 과체중, 25~29.9까지를 경도비만으로 판정하며, 30~34.9는 중등도비만, 35 이상일 경우는 고도비만으로 판정하고 있다. 비만은 한가지 원인보다는 여러 원인이 복합적으로 작용하여 발생하는데, 서구화된 식습관을 포함하여 잘못된 식습관과 활동량 감소, 정서적 요인, 유전적 요인 등을 들 수 있으며 이렇게 발생한 비만은 결국 고지혈증, 당뇨병, 고혈압 등 만성질환의 발생 위험을 높이게 된다.
생물체에서 일어나는 수많은 신진대사는 유비퀴틴화(Ubiquitination)와 탈유비퀴틴화(deubiquitination)에 의해 조절된다. 유비퀴틴(Ubiquitin, Ub)은 76개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 모든 진핵 세포에 존재하여 단백질의 선택적인 분해 및 세포 분열의 조절 등 수많은 세포 내의 기능에 관여한다. 유비퀴틴화란, 유비퀴틴 활성화 효소(E1), 유비퀴틴 결합 효소(E2) 및 유비퀴틴 접합 효소(E3)에 의해 유비퀴틴과 기질 단백질의 공유 결합이 순차적으로 일어나는 것이다. 유비퀴틴화에 의한 기질 단백질 변형은 단백질의 인산화/탈인산화에 의한 변형에서와 같이 가역적으로 일어날 수 있는데, 기질 단백질로부터 유비퀴틴을 제거하는 것을 탈유비퀴틴화라고 하며, 이 반응을 활성화시키는 효소 군을 탈유비퀴틴화 효소(deubiquitinase, DUB)라 한다.
사람에는 약 100개의 탈유비퀴틴화 효소가 존재하는 것으로 보고되고 있는데, 탈유비퀴틴화 효소는 크게 UCH(Ub C-terminal hydrolase), USP(Ub-specific processing protease), Otubain(OTU-domain Ub-aldehyde-binding protein), MJD(Machado-Joseph disease) 및 JAMM(Jab1/Pad1/MPN domain metallo-enzyme) family의 5개 그룹으로 나눌 수 있으며, 이 중 USP가 가장 큰 그룹을 형성한다. USP의 경우, 주로 350개의 아미노산으로 구성된 활성-도메인을 가지고 있으며 단백질 분해 효소(Cysteine protease)들이다. 이들 USP 활성 도메인의 아미노산 보전 정도는 전반적으로 그리 높지 않은 편이지만, 활성 시스테인(Cysteine)과 히스티딘(Histidine) 잔기를 둘러싼 부위, 즉 시스테인 박스(Cysteine box)＆ 히스티딘 박스(Histidine box)는 잘 보존되어있다. USP의 경우 이런 활성-도메인 외에 아직 그 기능이 밝혀지지 않은 도메인들을 다수 포함하고 있는데, 아마도 기질 인식, 세포 내 위치조절 및 단백질-단백질 상호작용 등에 관여하는 것으로 여겨진다.
대한민국 등록특허 제10-0794706호에서는 지방 전구세포를 인슐린으로 처리하였을 때 특정한 탈유비퀴틴화 효소를 코딩하는 유전자의 발현량이 유의성 있게 감소하므로, 상기 유전자의 발현량을 측정함으로써, 비만 또는 당뇨병을 진단할 수 있다는 사실을 밝힌 바 있다.
그러나, USP1 유전자의 발현을 억제함에 따라, 지질 축적 억제 또는 지방세포 분화가 억제됨으로써, 항비만 활성을 가짐에 대한 보고는 지금껏 없었다.
본 발명은 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물 등을 제공하고자 한다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018008862-appb-I000001
상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및/또는 발현을 억제할 수 있다.
상기 조성물은 지방축적 또는 지방세포 분화를 억제할 수 있다.
상기 조성물은 PPARγ(Peroxisome Proliferator Receptor gamma), C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins alpha) 또는 FABP4(fatty acid binding protein 4) 단백질의 발현을 감소시킬 수 있다.
상기 ML323의 용량은 0.1 내지 100μM 인 것일 수 있다.
본 발명의 일구현예로, 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018008862-appb-I000002
상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및/또는 발현을 억제할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명자들은 UPS1의 발현을 억제하는 ML323의 비만에 대한 효능을 밝혀냄으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 "ML323"은 USP1의 발현을 억제하는 화합물로서, 하기 화학식 1로 표시되고, IUPAC명은 N-(4-(1H-1,2,3-트리졸-1-일)벤질)-2-(2-(2-아이소프로필페닐)-5-메틸피리미딘-4-아민)[N-(4-(1H-1,2,3-Triazol-1-yl)benzyl)-2-(2-isopropylphenyl)-5-methylpyrimidin-4-amine]이다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018008862-appb-I000003
상기 ML323의 수득방법은 특별히 한정되지 않으며, 상기 ML323을 공지된 제법을 사용하여 화학적으로 합성하거나 또는 시판되는 것을 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018008862-appb-I000004
구체적으로, 상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및/또는 발현을 억제할 수 있다. 또한, 상기 ML323은 지방 합성, 지질축적 또는 지방세포의 분화를 억제하는 각종 인자들, 즉, FASN(Fatty acid synthase), PPARγ(Peroxisome Proliferator Receptor gamma), C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins alpha) 또는 FABP4(fatty acid binding protein 4)의 단백질 발현을 억제함으로써, 비만을 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 ML323의 용량은 0.1μM 내지 100μM의 농도로 포함될 수 있으며, 5μM 내지 50 μM인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, ML323이 상기 농도 범위 미만인 경우, 중성지방 축적 억제 활성이 저하되어, 비만의 예방 또는 치료 효과를 발휘하기 어려운 문제점이 있고, ML323이 상기 농도 범위를 초과하는 경우, 세포 독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다.
본 발명에 따른 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
상기 담체 또는, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리게이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제는 상기 두류 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다.
경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용하는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등을 사용할 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.
비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018008862-appb-I000005
상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및 발현을 억제할 수 있고, 상기 ML323의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 발명에 따른 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 ML323을 건강기능식품의 첨가물로 사용하는 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 예방, 건강 또는 치료 등의 각 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.
건강기능식품의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.
상기 식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.
일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 ML323은 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 또한 본 발명은 천연물로부터의 분획물을 이용하는 점에서 안전성 면에서 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.
상기 외에 본 발명에 따른 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 본 발명의 건강기능식품 100 중량부 대비 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
따라서, 본 발명에 따른 비만 예방 또는 치료용 조성물은 화학식 1로 표시되는 ML323이 USP1 유전자의 활성 및/또는 발현을 억제함에 따라, 지방세포 내 지질 축적을 억제하거나 또는 지방세포 분화를 억제함으로써, 비만의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 발명은 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 ML323이 USP1의 발현을 억제함으로써, 지방세포 내 지질 축적 억제 또는 지방전구세포에서 지방세포로의 분화 억제 활성이 뛰어난바, 비만에 대한 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
도 1은 (a) 지방세포의 분화 동안 si-USP1에 따른 지방합성, 지질축적 및 지방세포 분화와 관련된 분자들의 발현 여부를 나타낸 결과이고, (b)는 실시예 1-3의 지방세포 분화 억제 효과를 Oil red O 염색하여 확인한 결과이며, (c)는 실시예 1-3의 지방전구세포 내 지질축적 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 2의 세포독성 여부를 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 3의 (a) 지방세포 분해 효과를 Oil red O 염색하여 확인한 결과이고, (b) 지방전구세포 내 지질축적 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실험동물에서 ML323 투여에 따른 항비만 효과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. USP1의 발현 억제에 따른 항비만 활성 확인
1-1. USP1 발현 억제
USP1의 siRNA를 제작한 후, 지방 전구세포(3T3-L1, 한국세포주은행, cat. 10092.1)에 주입하여 siRNA에 의한 단백질 발현 억제 효과를 확인하였다. 지방전구세포를 6 웰 플레이트에 1.4×105 cell의 수로 심고 하루 동안 배양한 후, 하기 표 1의 siRNA와 이에 대한 대조군 siRNA USP1를 Lipofectamine RNAiMAX 시약을 이용하여 형질감염(transfection)하였다. 형질감염 후 1일 후에, Bovine Serum 배지로 교체해 준 후, 그 다음날부터 지방세포의 분화를 유도시켰다. 이틀동안 분화시킨 지방세포와 6일동안 분화시킨 지방세포의 샘플로 웨스턴블랏팅을 통하여 USP1의 발현 억제를 확인하였다.
Forward Reverse
siUSP1-1 CCU CUU AAA CUG UCA CUA GAA CCU CUU AAA CUG UCA CUA GAA
siUSP1-2 CCA GAG AAA UAU ACA GAU GAA UUC AUC UGU AUA UUU CUC UGG
1-2. USP1 발현 억제에 따른 항비만 관여 인자의 발현 양상 확인
지방세포에서 western blotting을 수행하기 위해 media를 제거한 각 well에 500 μL의 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, pH 8.0, 1% Sodium deoxycholate, 1% Triton X-100, 150 mM NaCl, Protease inhibitor cocktail, 5M NaF, 1M Na3VO4 를 포함하는 lysis buffer를 넣고 harvest한 후 16,000 × g, 4에서 20분간 원심분리한 후 가운데 층을 취하고 Bradford 법에 따라 단백질을 정량 하였다(Bio-Rad). 단백질 20 ㎍을 SDS polyacrylamide gel에 전기영동시킨 후 Polyvinylidene fluoride (Merck Millipore, Darmstadt, Germany)으로 이동시켰다. Membrane을 Phosphate-buffered saline과 tween 20 용액(PBS-T)을 이용하여 10분 동안 3회 반복하여 세척한 후 5% skim milk를 이용하여 60분간 차단하였다. Membrane을 1:1,000의 비율로 희석한 1차 항체에 넣어 4℃에서 부드럽게 흔들어 12시간 동안 배양한 후 PBS-T를 이용하여 세척하였고, membrane을 다시 1:2,000의 비율로 희석한 2차 항체와 함께 60분 동안 배양하고 세척하였다. 이 때, 1차 항체는 FASN, FABP4, PPARγ 및 C/EBP4를 사용하였다. 최종적으로 단백질을 X-ray 필름에 ECL Western blot detection kit (RPN2106, Amersham, Arlington Heights, IL, USA)를 사용하여 시각화하였다. X-ray 필름에 시각화된 밴드를 스캔 후 Quantity One analysis software (Bio-Rad)를 이용하여 정량화하였다.
그 결과, 도 1a에 나타난 바와 같이, USP1의 발현을 억제함으로써, FASN, FABP4, PPARγ 및 C/EBPα의 단백질 발현이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 즉, USP1의 발현 억제는 지방합성, 지질축적 또는 지방세포의 분화를 억제할 수 있는 바, 비만에 대한 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
1-3. 지방전구세포에서 지방세포로의 분화 억제 및 지방축적 억제 효과 확인
지방전구세포(3T3-L1, 한국세포주은행, cat. 10092.1)를 6-웰 플레이트(6-well plate)에 6×104 cell/well로 분주하여 4일 동안 5% CO2, 37℃ 인큐베이터(incubator)에서 배양하였다. 이후, 배양액을 제거하고, 지방세포 분화배지(10% FBS, 1 mg/ml insulin, 1 μM Dexamethasone, 0.52 mM IBMX 가 포함된 DMEM)를 이용하여 분화를 2일 동안 유도하면서 ML323 화합물을 각각 1, 2, 5, 10, 25㎍을 처리해 준다. 2일 후, 배양액을 제거하고, insulin이 1 ㎍/㎖ 포함된 배지를 넣어주면서 ML323 화합물을 각각 1, 2, 5, 10, 25㎍을 다시 처리해 준다. 이후, 2일 마다 지속적으로 10% FBS 가 포함된 배지를 갈아주면서 분화를 진행하였다. 분화가 진행된 지방전구세포의 배양액을 제거하고 인산완충식염수(PBS; phosphate buffered saline)로 세척하였다. 이후, 웰에 10 % 포름알데하이드(formaldehyde)를 200 ㎕씩 첨가하고 상온에서 1시간 동안 고정시킨 다음, 포름알데하이드를 제거하고 3차 증류수로 씻어내고 60% 이소프로판올로 씻어낸 후 건조하였다. 이후 플레이트(plate)가 다 마르면 오일 레드 오(Oil red O) 염색약을 200 ㎕씩 넣고 상온에서 1 시간 염색한 후 3차 증류수로 3번 세척하였다. 염색이 된 세포는 현미경으로 관찰하여 지방전구세포에서 지방세포로의 분화정도를 확인하였다. 상기 오일 레드 오 염색약은 Oil Red O 염색약 350 ㎎을 이소프로판올(isopropanol) 100 ㎖에 녹인 용액을 증류수와 6:4의 비율로 섞은 후 0.22 ㎛ 필터(filter)로 여과한 용액이다.
이후, 지방세포내 지질 축적 정도를 확인하기 위해 웰당 300 ㎕의 이소프로판올로 지방세포 내 염색된 염색약을 추출하여 ELISA reader로 500 ㎚에서 광학밀도값(OD값; optical density)을 측정하였다.
그 결과, 도 1b에 나타난 바와 같이, USP1의 발현이 억제됨에 따라 지방세포 분화가 현저하게 억제되며, 도 1c에 나타난 바와 같이, 지방전구세포 내 지질 축적이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2. 세포 독성 확인(Cell viability assay)
ML323 화합물의 세포 독성을 확인하기 위하여 Cell viability assay를 수행하였다.
구체적으로, 지방전구세포를 10% bovine serum (Gibco-BRL, USA)과 1% Penicillin-Streptomycin (+5,000 Units/ml Penicillin, +5,000 ㎍/㎕ Streptomycin, Gibco-BRL, USA)을 넣은 DMEM 배양액으로 5% CO2가 공급되는 배양기에서 37℃ 조건으로 배양하였다. 이후, 상기 3T3-L1 세포를 4×103 cells/well로 96-well plates (eppendorf, Germany)에 100 ㎕씩 첨가하여 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양한 후, 3T3-L1세포의 분화를 유도하면서 ML323 화합물을 0, 1, 2, 5, 10 및 25μM의 농도로 제조하여 3T3-L1세포에 처리하였다. 48시간 후, Ez-Cytox (Daeillab, Korea)를 10㎕씩 각 웰에 첨가한 후, 0.5 에서 2 시간 정도 incubator에서 반응시켜 ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, ML323 화합물은 0.1 내지 25μM의 농도에서 3T3-L1 세포에 대하여 세포 독성을 나타내지 않았음을 확인할 수 있다.
실시예 3. 지방전구세포에서 지방세포로의 분화 억제 및 지방축적 억제 효과 확인
화합물의 처리 농도(1, 2, 5, 10, 25μM)에 따른 지방전구세포에서 지방세포로의 분화 정도를 확인하기 위하여, ML323을 처리하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1-3과 동일한 방법으로 수행하였다.
그 결과, 도 3a에 나타난 바와 같이, ML323 화합물의 농도 의존적으로 지방전구세포의 지방세포로의 분화가 억제되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 10 내지 25μM을 처리한 경우, 지방세포 분화가 현저하게 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 3b에 나타난 바와 같이, ML323 화합물을 2μM 이상 처리한 경우, 지방세포 내 지질 축적이 억제되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히, 10 내지 25μM을 처리한 경우, 지질 축적이 현저하게 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 4. 실험동물에서 ML323의 항비만 효과 확인
ML323이 비만에 미치는 영향을 확인하기 위하여 2개월 된 야생형 C57BL6/J 수컷 마우스(Orient Bio Inc. Gyeonggi, Korea) 6마리를 실험에 사용하였다. 마우스는 물과 먹이에 자유롭게 접근할 수 있는 조건인 독립적인 케이지에서 사육되었으며, 6주간 고-지방 식이(HFD, 60% of kcal as fat, OpenSource Diets, New Brunswick, NJ)를 시켜 비만을 유발시켰다. 6주간 고-지방 식이를 하는 동안 3마리는 실험군으로 40 mg/kg의 ML323을 주당 2회 복강 주사하여 6주간 투여하고, 3마리는 대조군으로 DMSO를 투여하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 대조군의 체중 증가량에 비해 M1323 투여군의 체중 증가량이 현저하게 작았으며, 6주 후 체중이 현저한 차이를 나타내는 것을 확인하였다. 이로부터 ML323 투여군은 대조군에 비해서 항 비만 효능이 있음을 확인하였다.
하기에 본 발명의 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1: 산제의 제조
ML323 20 ㎎
유당수화물 100 ㎎
탈크 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제제예 2: 정제의 제조
ML323 10 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당수화물 100 ㎎
스테아르산마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제제예 3: 캅셀제의 제조
ML323 10 ㎎
미결정셀룰로오스 3 ㎎
유당수화물 14.8 ㎎
스테아르산마그네슘 0.2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캅셀제의 제조방법에 다라서 젤라틴캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조하였다.
제제예 4: 주사제의 제조
ML323 10 ㎎
만니톨 180 ㎎
주사용 멸균 증류수 2974 ㎎
인산일수소나트퓸 26 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1앰플당(2mL) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
제제예 5: 액제의 제조
ML323 10 ㎎
이성화당 10 ㎎
만니톨 5 ㎎
정제수 적량
레몬향 적량
상기의 성분을 통상의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 정제수를 가하여 전체 100mL로 조절한 후 멸균시켜 갈색병에 충진하여 액제를 제조한다.
제제예 6: 건강기능식품의 제조
ML323 10 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이드 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 30 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7: 건강음료의 제조
ML323 10 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
정제수 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (9)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018008862-appb-I000006
  2. 제1항에 있어서,
    상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및/또는 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는
    비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 지방축적 또는 지방세포 분화를 억제하는 것을 특징으로 하는
    비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 PPARγ(Peroxisome Proliferator Receptor gamma), C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins alpha) 또는 FABP4(fatty acid binding protein 4)의 단백질 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는
    비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 ML323의 용량은 0.1 내지 100μM 인 것을 특징으로 하는
    비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018008862-appb-I000007
  7. 제6항에 있어서,
    상기 ML323은 USP1(Ubiquitin specific protease 1)의 활성 및/또는 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는
    비만 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물.
  8. 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여 또는 복용시키는 단계를 포함하는 비만 예방 또는 치료 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018008862-appb-I000008
  9. 하기 화학식 1로 표시되는 ML323 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 조성물의 비만 예방 또는 치료 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018008862-appb-I000009
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230310431A1 (en) * 2020-08-04 2023-10-05 Industry-Academic Cooperation Foundtion, Yonsei University Composition for preventing or treating liver fibrosis, containing triazole derivative as active ingredient

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014105952A2 (en) * 2012-12-28 2014-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of the usp1/uaf1 deubiquitinase complex and uses thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014105952A2 (en) * 2012-12-28 2014-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of the usp1/uaf1 deubiquitinase complex and uses thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KADOWAKI, T. ET AL.: "The Role of PPARgamma in High-fat Diet-induced Obesity and Insulin Resistance", JOURNAL OF DIABETES AND ITS COMPLICATIONS, vol. 16, 2002, pages 41 - 45, XP055572302 *
OLOFSSON, L. E. ET AL.: "CCAAT/Enhancer Binding Protein alpha (C/EBPa) in Adipose Tissue Regulates Genes in Lipid and Glucose Metabolism and a Genetic Variation in C/EBPalpha Is Associated with Serum Levels of Triglycerides", THE JOURNAL OF CLINICAL ENDOCRINOLOGY & METABOLISM, vol. 93, no. 12, 2008, pages 4880 - 4886, XP055200098 *
QUEIPO-ORTUNO, M. I . ET AL.: "FABP4 Dynamics in Obesity: Discrepancies in Adipose Tissue and Liver Expression regarding Circulating Plasma Levels", PLOS ONE, vol. 7, no. 11, 2012, pages 1 - 10, XP055572307 *
WING, S. S .: "The UPS in Diabetes and Obesity", BMC BIOCHEMISTRY, vol. 9, no. 1, 2008, pages 1 - 10, XP021041715 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230310431A1 (en) * 2020-08-04 2023-10-05 Industry-Academic Cooperation Foundtion, Yonsei University Composition for preventing or treating liver fibrosis, containing triazole derivative as active ingredient
CN116916925A (zh) * 2020-08-04 2023-10-20 延世大学校产学协力团 含有三唑衍生物作为活性成分的用于预防或治疗肝纤维化的组合物
CN116916925B (zh) * 2020-08-04 2026-02-03 延世大学校生物健康技术控股有限公司 含有三唑衍生物作为活性成分的用于预防或治疗肝纤维化的组合物

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