WO2018221291A1 - 過活動膀胱の予防剤または治療剤 - Google Patents

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ala
bladder
hydrogen atom
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田中　徹
高橋　究
啓史 井上
源顕 齋藤
津田　雅之
秀雄 福原
貴平 久野
翔吾 清水
Original Assignee
Ｓｂｉファーマ株式会社
国立大学法人高知大学
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating overactive bladder.
  • Overactive bladder is a symptom syndrome that has urinary urgency as an essential symptom and may accompany nocturia or frequent urination.
  • urinary urgency is “a sudden urinary urgency that cannot be tolerated and difficult to explain the difference from normal urinary intention”, but its pathophysiology and pathogenesis have not been elucidated.
  • anticholinergic agents such as propiverine hydrochloride and oxybutynin hydrochloride are mainly used.
  • Anticholinergic agents inhibit the action of acetylcholine that enhances parasympathetic nerves, and as a result, the promotion of urination is inhibited.
  • ⁇ 3 adrenergic receptor agonists are sometimes used as therapeutic agents for overactive bladder having a mechanism of action different from that of anticholinergic agents (Patent Document 1).
  • a ⁇ 3 adrenergic receptor agonist is known to enhance the ⁇ 3 adrenergic receptor existing in the bladder, and consequently the sympathetic nerve, contrary to the anticholinergic agent.
  • the anticholinergic agent has been reported to have side effects such as discharge disorder and dry mouth.
  • side effects such as discharge disorder and dry mouth.
  • ⁇ 3 adrenergic receptor agonists dry mouth, constipation, rash, urticaria and the like have been reported as main side effects. For this reason, in view of QOL improvement of overactive bladder patients, preparations of preventive / ameliorating agents for overactive bladder without side effects are eagerly desired.
  • the present inventors conducted an extensive search for compounds that can be used as preventive / ameliorating agents for overactive bladder without side effects.
  • 5-aminolevulinic acids also referred to as “ALAs” in the present specification
  • ALAs 5-aminolevulinic acids
  • 5-Aminolevulinic acid also referred to as “ALA” in the present specification
  • ALA is a kind of natural amino acid that is widely present in animals, plants and fungi and is contained in living organisms.
  • ALA is known to have a high level of safety for living organisms.
  • Photosensitizers, plant growth regulators, herbicides, fish pathogenic microorganisms, parasitic infection treatments, pig growth in photodynamic therapy Applications to accelerators and the like are known. However, nothing has been known about the effects of ALA on overactive bladder.
  • the present invention in one embodiment, is a pharmaceutical composition for use in the prevention or treatment of overactive bladder, Compound represented by the following formula (I) (In the formula, R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group). Or a salt thereof, It relates to a pharmaceutical composition.
  • formula (I) In the formula, R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group. Or a salt thereof, It relates to a pharmaceutical composition.
  • the present invention is characterized in that the overactive bladder is an overactive bladder exhibiting symptoms of frequent urination.
  • R 1 is selected from the group consisting of a hydrogen atom, an alkanoyl group having 1 to 8 carbon atoms, and an aroyl group having 7 to 14 carbon atoms
  • R 2 is a hydrogen atom Selected from the group consisting of a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms, an aryl group having 6 to 14 carbon atoms, and an aralkyl group having 7 to 15 carbon atoms. It is characterized by being.
  • R 1 and R 2 are hydrogen atoms.
  • the present invention is characterized in that in one embodiment, one or more metal-containing compounds are further contained.
  • the metal-containing compound is a compound containing iron, magnesium, zinc, nickel, vanadium, copper, chromium, molybdenum, or cobalt.
  • the metal-containing compound is a compound containing iron, magnesium, or zinc.
  • the metal-containing compound is a compound containing iron.
  • the iron-containing compound is sodium ferrous citrate.
  • Another embodiment of the present invention is for the manufacture of a prophylactic or therapeutic agent for overactive bladder.
  • Compound represented by the following formula (I) (In the formula, R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group). Or the use of a salt thereof.
  • Another embodiment of the present invention is a method for preventing or treating overactive bladder comprising: A therapeutically effective amount of a compound of formula (I) (In the formula, R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group). Or administering a salt thereof to a subject, Regarding the method.
  • a compound of formula (I) In the formula, R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group, and R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group.
  • FIG. 1 is a graph showing the amount of single urination in the control group and each experimental group.
  • FIG. 2 is a graph showing the amount of 24-hour urination in the control group and each experimental group.
  • FIG. 3 is a graph showing the amount of water consumed for 24 hours in the control group and each experimental group.
  • FIG. 4 is a graph showing the detrusor activity state in the control group and each experimental group.
  • FIG. 5 is a graph comparing urination intervals (seconds) in the control group and each experimental group.
  • FIG. 6 is a graph comparing bladder blood flow in the control group and each experimental group.
  • FIG. 7 is a graph comparing VEGF expression levels in the bladder tissue of the control group and each experimental group.
  • FIG. 1 is a graph showing the amount of single urination in the control group and each experimental group.
  • FIG. 2 is a graph showing the amount of 24-hour urination in the control group and each experimental group.
  • FIG. 3 is a graph showing the
  • FIG. 8 is a graph comparing MDA expression levels in the bladder tissue of the control group and each experimental group.
  • FIG. 9 is a graph comparing NGF expression levels in the bladder tissue of the control group and each experimental group.
  • FIG. 10 is a graph comparing Nrf2 expression levels in the bladder tissue of the control group and each experimental group.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating overactive bladder.
  • overactive bladder means a symptom syndrome in which urinary urgency is an essential symptom and may be accompanied by frequent urination, nocturia, or urge urinary incontinence. That is, the symptoms of frequent urination / urinary urgency but not incontinence are also included in the overactive bladder in the present invention.
  • frequent urination is one of the main symptoms of overactive bladder. For example, there is urinary urgency 8 times or more after waking up to bedtime, or once during bedtime. This refers to symptoms with urinary urgency.
  • ALA refers to ALA or a derivative thereof or a salt thereof.
  • ALA means 5-aminolevulinic acid.
  • ALA is also called ⁇ -aminolevulinic acid and is one of amino acids.
  • Examples of ALA derivatives include compounds represented by the following formula (I).
  • R 1 represents a hydrogen atom or an acyl group
  • R 2 represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, or an aralkyl group.
  • ALA corresponds to the case where R 1 and R 2 are hydrogen atoms.
  • ALAs may act as active ingredients in the state of ALA of the formula (I) or derivatives thereof in vivo, and can also be administered as prodrugs (precursors) that are degraded by enzymes in the body.
  • Examples of the acyl group in R 1 of the formula (I) include linear or branched C 1-8 carbon atoms such as formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, valeryl, isovaleryl, pivaloyl, hexanoyl, octanoyl, benzylcarbonyl group and the like.
  • Examples thereof include alkanoyl groups and aroyl groups having 7 to 14 carbon atoms such as benzoyl, 1-naphthoyl and 2-naphthoyl groups.
  • alkyl group in R 2 of the formula (I) examples include a straight chain such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, hexyl, heptyl, octyl group, etc.
  • cycloalkyl group in R 2 of formula (I) there is a saturated or partially unsaturated bond such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclododecyl, 1-cyclohexenyl group and the like. Examples thereof may include a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms.
  • Examples of the aryl group in R 2 of the formula (I) include aryl groups having 6 to 14 carbon atoms such as phenyl, naphthyl, anthryl, and phenanthryl groups.
  • the aryl moiety can be exemplified as the above aryl group
  • the alkyl moiety can be exemplified as the above alkyl group.
  • benzyl, phenethyl, phenylpropyl, phenyl Examples thereof include aralkyl groups having 7 to 15 carbon atoms such as butyl, benzhydryl, trityl, naphthylmethyl, and naphthylethyl groups.
  • Preferable ALA derivatives include compounds in which R 1 is formyl, acetyl, propionyl, butyryl group or the like. Further, preferable ALA derivatives include compounds in which R 2 is a methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl group or the like. As preferred ALA derivatives, the combination of R 1 and R 2 is (formyl and methyl), (acetyl and methyl), (propionyl and methyl), (butyryl and methyl), (formyl and ethyl), (acetyl) And ethyl), (propionyl and ethyl), and (butyryl and ethyl).
  • examples of the salt of ALA or a derivative thereof include pharmacologically acceptable acid addition salts, metal salts, ammonium salts, and organic amine addition salts.
  • acid addition salts include hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, phosphate, nitrate, sulfate, and other inorganic acid salts, formate, acetate, propionate, toluenesulfonic acid Salt, succinate, oxalate, lactate, tartrate, glycolate, methanesulfonate, butyrate, valerate, citrate, fumarate, maleate, malate, etc.
  • Organic acid addition salts can be exemplified.
  • metal salts include alkali metal salts such as lithium salt, sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as magnesium and calcium salt, and metal salts such as aluminum and zinc.
  • ammonium salts include ammonium salts and alkylammonium salts such as tetramethylammonium salts.
  • organic amine salt include salts such as triethylamine salt, piperidine salt, morpholine salt, and toluidine salt. These salts can also be used as a solution at the time of use.
  • ALA a compound formed from ALA and various esters such as ALA methyl ester, ALA ethyl ester, ALA propyl ester, ALA butyl ester, ALA pentyl ester, and their hydrochlorides and phosphoric acids. Salt, sulfate.
  • ALA hydrochloride and ALA phosphate can be exemplified as particularly suitable.
  • the ALAs can be produced by known methods such as chemical synthesis, production by microorganisms, production by enzymes, and the like.
  • the ALAs may form hydrates or solvates, and ALAs may be used alone or in combination of two or more.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further contain one or more metal-containing compounds.
  • the metal portion of the metal-containing compound include iron, magnesium, zinc, nickel, vanadium, cobalt, copper, chromium, and molybdenum.
  • the metal part of the metal-containing compound is iron, magnesium or zinc, particularly preferably iron.
  • the iron compound that can be used in the present invention may be an organic salt or an inorganic salt.
  • inorganic salts include ferric chloride, ferric sesquioxide, ferrous sulfate, and ferrous pyrophosphate.
  • Organic salts include carboxylates such as hydroxycarboxylates, citrates such as ferrous citrate, sodium iron citrate, sodium ferrous citrate (SFC) and ammonium iron citrate, pyrophosphate
  • Organic acid salts such as ammonium carboxymethyl glutamate, ferrous fumarate, iron acetate, iron oxalate, ferrous succinate, sodium iron succinate,
  • magnesium compounds examples include magnesium citrate, magnesium benzoate, magnesium acetate, magnesium oxide, magnesium chloride, magnesium hydroxide, magnesium carbonate, magnesium sulfate, magnesium silicate, magnesium nitrate, diethylenetriamine pentaacetate magnesium diammonium And ethylenediaminetetraacetate magnesium disodium and magnesium protoporphyrin.
  • Examples of zinc compounds that can be used in the present invention include zinc chloride, zinc oxide, zinc nitrate, zinc carbonate, zinc sulfate, diethylenetriaminepentaacetic acid zinc diammonium, ethylenediaminetetraacetic acid zinc disodium, zinc protoporphyrin, and zinc-containing yeast. it can.
  • the dose of the metal-containing compound to the subject may be 0 to 100 times in molar ratio to the dose of ALA to the subject, preferably 0.01 to 10 times, and preferably 0.1 to 8 times. Is more desirable.
  • the ALAs and metal-containing compounds contained in the pharmaceutical composition of the present invention can be administered as a composition containing ALAs and a metal-containing compound, or each can be administered alone, but each can be administered alone. It is preferable to administer at the same time.
  • simultaneous is not only performed at the same time, but the administration of ALAs and the metal-containing compound has an additive effect, preferably a synergistic effect, even if not at the same time. It means that the process is performed without a considerable interval between them.
  • the administration route of the ALAs and the metal-containing compound in the present invention is not limited, and may be systemic administration or local administration.
  • Examples of the administration route include oral administration including sublingual administration, inhalation administration, direct administration to a target tissue or organ by catheter, intravenous administration including infusion, transdermal administration by a patch, suppository, or trans Examples include parenteral administration such as administration by forced enteral nutrition using a nasogastric tube, naso-intestinal tract, gastrostomy tube, or gastrointestinal fistula tube.
  • the ALAs and the metal-containing compound may be administered from different routes.
  • the dosage form of ALAs, metal-containing compounds, or a combination of these used in the present invention may be appropriately determined according to the administration route, and is not limited, but includes injections, infusions, Examples thereof include liquids, patches, suppositories and the like dissolved in tablets, capsules, fine granules, powders, solutions, syrups and the like.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may contain other optional ingredients such as other medicinal ingredients, nutrients, and carriers as necessary.
  • an optional component for example, crystalline cellulose, gelatin, lactose, starch, magnesium stearate, talc, vegetable and animal fats, fats and oils, gums, polyalkylene glycols and the like, pharmaceutically acceptable ordinary carriers and binders
  • Various formulation ingredients such as stabilizers, solvents, dispersion media, extenders, excipients, diluents, pH buffers, disintegrants, solubilizers, solubilizers, isotonic agents, etc. it can.
  • the administration frequency and administration period of the pharmaceutical composition of the present invention to a subject can be appropriately determined by a person skilled in the art (for example, a doctor) in consideration of the symptoms and conditions of the subject.
  • Example 1 Increase effect such as the amount of urination once by ALA
  • Experimental Group II male SHR (spontaneously hypertension rat) of 12 weeks of age was used, and the experimental groups were divided into groups I to III according to the following ALA administration conditions.
  • Experimental Group II ALA and sodium ferrous citrate were orally administered on the start of the experiment.
  • the dose of ALA was 10 mg / kg body weight, and sodium ferrous citrate was 15.7 mg / kg body weight.
  • the experimental group III 100 mg / kg body weight was used, and sodium ferrous citrate was 157 mg / kg body weight.
  • Control group I was administered with the same amount of saline alone as ALA instead of ALA and sodium ferrous citrate.
  • control group I physiological saline was orally administered every day from the experiment start date (12 weeks of age) to the sixth week (18 weeks of age).
  • experimental groups II and III ALA and sodium ferrous citrate were orally administered every day from the start of the experiment (12 weeks of age) to the sixth week (18 weeks of age).
  • Measurement of micturition using a metabolic cage was performed for each experimental group. Specifically, measurement was performed at 12 weeks of age (before ALA administration) and at 18 weeks of age (after ALA administration), and the amount of urination once, the amount of urination for 24 hours, and the amount of water consumed were measured. .
  • the measurement method using a metabolic cage is described in Yono et al. , Life Sci. 2007 June 27; 81 (3): 218-222 (non-anesthetized / unrestrained / day / night continuous measurement method for mouse urination function) was employed.
  • the body weight, blood pressure, and heart rate were also measured as a precaution in addition to the amount of urination and the amount of water consumed.
  • the total number of urinations was also measured when measuring urination dynamics.
  • FIG. 1 shows the results of single urination volume in each experimental group, the vertical axis indicates the urination volume, and the horizontal axis indicates the presence or absence of ALA administration.
  • FIG. 2 shows the results of 24-hour urination volume in each experimental group, the vertical axis indicates urination volume, and the horizontal axis indicates the presence or absence of ALA administration.
  • the increase in urination volume for 24 hours was confirmed by administration of ALA compared to the control group.
  • FIG. 3 shows the results of drinking water for 24 hours in each experimental group, the vertical axis shows the amount of drinking water, and the horizontal axis shows the presence or absence of ALA administration. As is clear from FIG. 3, an increase in the amount of drinking water was confirmed by administration of ALA.
  • overactive bladder in general, in the case of overactive bladder, there is no difference in bladder capacity compared to the case of not suffering from overactive bladder. For this reason, in overactive bladder model rats, it was confirmed that the amount of urination once, 24-hour urination, and the amount of drinking water were confirmed, so ALA acts on bladder blood flow regulation and contributes to an increase in the urine storage capacity I think that. Therefore, in order to confirm changes in bladder blood flow due to ALA, measurement of intravesical pressure was performed.
  • Intravesical pressure measurement method After the micturition dynamics measurement method, an intravesical pressure measurement method was performed according to the following procedure. Note that intravesical pressure measurement is a method for confirming an overactive state of the detrusor muscle, and has been established as an inspection method for overactive bladder. (1) 18 weeks old male SHR / Hos rats and Wistar / ST rats are anesthetized with urethane (1.0 g / kg, ip). (2) Each rat is laid down and the extremities are fixed with gummed tape, and then the abdomen is opened and the bladder is pushed to urinate. In order to prevent drying, leave with raw cotton absorbent cotton and leave for 30 minutes. (3) A catheter for measuring intravesical pressure is inserted into the bladder of each rat.
  • the catheter is connected to a three-way stopcock, one end is connected to a syringe pump, and physiological saline is continuously infused into the bladder at a constant rate (12 ml / hr).
  • the other end is connected to a pressure transducer, monitored and amplified by a pressure amplifier, and recorded in a personal computer via a PowerLab system.
  • PowerLab (16ch high-speed power lab system): PowerLab / 16SP model ML 795, ADI (AD Instruments), USA
  • (6) Collect the residual urine of each rat and measure the amount.
  • the vertical axis represents intravesical pressure
  • the horizontal axis represents time (seconds).
  • FIG. 5 is a graph obtained by modifying the graph shown in FIG. 4 based on the urination interval (seconds). As is clear from FIGS. 4 and 5, the urination interval was prolonged by administering ALA compared to the group not administered ALA. From this result, it is considered that administration of ALA dilated the bladder that was atrophied by the overactive bladder, thereby increasing the urine storage capacity in the bladder.
  • bladder blood flow measurement (hydrogen clearance method) was performed according to the following procedure.
  • a silver chloride plate as an indifferent electrode is buried under the front chest of each rat.
  • a platinum wire electrode is inserted into the bladder wall (data is collected three times at three locations on the bladder wall).
  • results are shown in FIG. In FIG. 6, the vertical axis represents bladder blood flow, and the horizontal axis represents each experimental group. As is clear from FIG. 6, it was confirmed that ALA administration tended to increase bladder blood flow depending on the dose of ALA. In combination with the results shown in FIGS. 4 and 5, it can be said that the bladder contracted by the overactive bladder was expanded due to the increase in bladder blood flow. As a result, improvement of overactive bladder was confirmed by administration of ALA.
  • VEGF Vascular Endothelial Growth Factor
  • MDA Methyde
  • NGF Neve Growth Factor
  • Nrf2 NucleorFactor2
  • VEGF is a vascular endothelial growth factor and is used as a marker for bladder vascular endothelial injury.
  • Bladder tissue of the experimental group and the control group was processed by the following procedure and used as a sample. 1. Wash 100 mg of tissue with 1 ⁇ PBS. Homogenize with 500 ⁇ l of 2.1 ⁇ PBS. 3. Store overnight at -20 ° C. 4). 4. Freeze-thaw to break the cell membrane and centrifuge at 5000 G, 5 min, 4 ° C. Dispense and store at -20 ° C or -80 ° C. 6). After thawing, centrifuge again and use for assay.
  • VEGF ELISA assay was performed using a Rat VEGF ELISA kit (CUSABIO CSB-E04757r) according to the protocol provided by the manufacturer.
  • Results The measurement results are shown in FIG. As shown in FIG. 7, in the experimental group (ALA administration group), the VEGF expression level in the bladder tissue was significantly reduced as compared with the control group.
  • MDA is one of lipid peroxidative degradation products and is known as a major marker of lipid peroxidation.
  • Nrf2 is one of transcription factors that regulate the expression of antioxidant enzymes and detoxifying metabolic enzymes to control oxidative stress, and is used as an oxidative stress marker.
  • Nrf2 Nrf2 ELISA assay was performed using a Rat NFE2L2 / NRF2 ELISA kit (LSBio LS-F12145) according to the protocol provided by the manufacturer.
  • VEGF vascular endothelial damage
  • MDA, NGF, and Nrf2 are related to tissue oxidative stress
  • administration of ALA improves bladder blood flow, resulting in tissue damage or oxidative stress in the bladder tissue. This suggests a mechanism that alleviates detrusor and prevents detrusor overactivity.

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Abstract

【課題】　既存の過活動膀胱の治療薬には、様々な副作用が報告されており、副作用のない過活動膀胱の予防剤または治療剤が切望されている。 【解決手段】　５－アミノレブリン酸（ＡＬＡ）類を有効成分として含む、過活動膀胱の予防剤または治療剤を提供する。

Description

過活動膀胱の予防剤または治療剤
　本発明は、過活動膀胱を予防または治療するための医薬組成物に関する。
　過活動膀胱は、尿意切迫感を必須症状とし、夜間頻尿や頻尿を伴うことがある症状症候群である。ここで、尿意切迫感とは、「突然起こる、我慢できないような強い尿意であり通常の尿意との相違の説明が困難なもの」であるが、その病態生理や発症機序は解明されていない。また、過活動膀胱は、４０歳以上の男女の８人に１人がその症状をもっていることが知られている。
　過活動膀胱の治療剤としては、塩酸プロピベリンおよび塩酸オキシブチニン等の抗コリン剤が主に用いられている。抗コリン剤は、副交感神経を亢進させるアセチルコリンの作用を阻害し、その結果排尿促進が阻害される。また近年、抗コリン剤とは異なる作用機序の過活動膀胱の治療剤として、β３アドレナリン受容体作動剤が用いられることもある（特許文献１）。β３アドレナリン受容体作動剤は、前記抗コリン剤とは逆に、膀胱に存在するβ３アドレナリン受容体、ひいては交感神経を亢進させるものとして知られている。
ＷＯ２００４／０４１２７６
　前記抗コリン剤には、排出障害、口渇等の副作用が報告されている。また、β３アドレナリン受容体作動剤に関しても、口渇、便秘、発疹、しん麻疹などが主な副作用として報告されている。このため、過活動膀胱患者のＱＯＬ向上を考慮し、副作用のない過活動膀胱の予防・改善剤の製剤が切望されている。
　本発明者らは、副作用のない過活動膀胱の予防・改善剤となり得る化合物について鋭意探索を行ったところ、驚くべきことに、５－アミノレブリン酸類（本願明細書において、「ＡＬＡ類」ともいう）が過活動膀胱の改善作用を有することを見出し、本発明を完成させるに到った。
　５－アミノレブリン酸（本願明細書において、「ＡＬＡ」ともいう）は動物や植物や菌類に広く存在する、生体内に含まれる天然アミノ酸の一種である。ＡＬＡは生体に対して高い安全性を備えることが知られており、光動力学的治療における光増感剤、植物成長調節剤、除草剤、魚類病原性微生物、寄生虫の感染治療、豚成育促進剤等への用途が知られている。しかし、ＡＬＡの過活動膀胱に対する作用については、これまで全く知られていない。
　すなわち、本発明は、一実施形態において、過活動膀胱の予防または治療における使用のための医薬組成物であって、
　下記式（Ｉ）で示される化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩
を含む、
医薬組成物に関する。
　また、本発明は、一実施形態において、前記過活動膀胱が、頻尿の症状を呈する過活動膀胱であることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、Ｒ１が、水素原子、炭素数１～８のアルカノイル基、及び、炭素数７～１４のアロイル基からなる群から選択され、Ｒ２が、水素原子、直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基、炭素数３～８のシクロアルキル基、炭素数６～１４のアリール基、及び、炭素数７～１５のアラルキル基からなる群から選択されることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、Ｒ１およびＲ２が、水素原子であることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、一種または二種以上の金属含有化合物をさらに含有することを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデンまたはコバルトを含有する化合物であることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、金属含有化合物が、鉄、マグネシウムまたは亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする。
　また、本発明は、一実施形態において、前記鉄を含有する化合物が、クエン酸第一鉄ナトリウムであることを特徴とする。
　本発明の他の実施形態は、過活動膀胱の予防剤または治療剤の製造のための、
　下記式（Ｉ）で示される化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩
の使用、に関する。
　本発明の他の実施態様は、過活動膀胱を予防または治療する方法であって、
　治療上有効量の、下記式（Ｉ）で示される化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩
を対象へ投与するステップ、を含む、
方法に関する。
　なお、上記に述べた本発明の一又は複数の特徴を任意に組み合わせた発明も、本発明の範囲に含まれる。
図１は、コントロール群および各実験群における１回排尿量を示すグラフである。 図２は、コントロール群および各実験群における２４時間排尿量を示すグラフである。 図３は、コントロール群および各実験群における２４時間飲水量を示すグラフである。 図４は、コントロール群および各実験群における排尿筋の活動状態を示すグラフである。 図５は、コントロール群および各実験群における排尿間隔（秒）を比較したグラフである。 図６は、コントロール群および各実験群における膀胱血流量を比較したグラフである。 図７は、コントロール群および各実験群の膀胱組織におけるＶＥＧＦ発現量を比較したグラフである。 図８は、コントロール群および各実験群の膀胱組織におけるＭＤＡ発現量を比較したグラフである。 図９は、コントロール群および各実験群の膀胱組織におけるＮＧＦ発現量を比較したグラフである。 図１０は、コントロール群および各実験群の膀胱組織におけるＮｒｆ２発現量を比較したグラフである。
　本発明は、過活動膀胱を予防または治療するための医薬組成物に関する。本発明において、「過活動膀胱」とは、尿意切迫感を必須症状とし、頻尿、夜間頻尿、切迫性尿失禁を伴うことがある症状症候群を意味する。すなわち、頻尿／尿意切迫感がありながらも、失禁を呈さない症状も、本発明における過活動膀胱に含まれる。
　なお、本発明において、「頻尿」とは、過活動膀胱の主な症状の一つであり、例えば、起床後就寝までの間に８回以上尿意があるか、または、就寝中に１回以上尿意がある症状を指す。
　本明細書において、ＡＬＡ類とは、ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩をいう。
　本明細書において、ＡＬＡは、５－アミノレブリン酸を意味する。ＡＬＡは、δ－アミノレブリン酸ともいい、アミノ酸の１種である。
　ＡＬＡの誘導体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物を例示することができる。式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。なお、式（Ｉ）において、ＡＬＡは、Ｒ１及びＲ２が水素原子の場合に相当する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　ＡＬＡ類は、生体内で式（Ｉ）のＡＬＡ又はその誘導体の状態で有効成分として作用すればよく、生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与することもできる。
　式（Ｉ）のＲ１におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１－ナフトイル、２－ナフトイル基等の炭素数７～１４のアロイル基を挙げることができる。
　式（Ｉ）のＲ２におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基を挙げることができる。
　式（Ｉ）のＲ２におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１－シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３～８のシクロアルキル基を挙げることができる。
　式（Ｉ）のＲ２におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６～１４のアリール基を挙げることができる。
　式（Ｉ）のＲ２におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７～１５のアラルキル基を挙げることができる。
　好ましいＡＬＡ誘導体としては、Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物が挙げられる。また、好ましいＡＬＡ誘導体としては、上記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が挙げられる。また、好ましいＡＬＡ誘導体としては、上記Ｒ１とＲ２の組合せが、（ホルミルとメチル）、（アセチルとメチル）、（プロピオニルとメチル）、（ブチリルとメチル）、（ホルミルとエチル）、（アセチルとエチル）、（プロピオニルとエチル）、（ブチリルとエチル）の各組合せである化合物が挙げられる。
　ＡＬＡ類のうち、ＡＬＡ又はその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
　以上のＡＬＡ類のうち、もっとも望ましいものは、ＡＬＡ、及び、ＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩である。とりわけ、ＡＬＡ塩酸塩、ＡＬＡリン酸塩を特に好適なものとして例示することができる。
　上記ＡＬＡ類は、例えば、化学合成、微生物による生産、酵素による生産など公知の方法によって製造することができる。また、上記ＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またＡＬＡ類を単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることもできる。
　上記ＡＬＡ類を水溶液として調製する場合には、ＡＬＡ類の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要がある。アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐことができる。
　本発明の医薬組成物は、一実施形態において、一種または二種以上の金属含有化合物をさらに含有してよい。かかる金属含有化合物の金属部分としては、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、コバルト、銅、クロム、モリブデンを挙げることができる。好ましい実施形態では、金属含有化合物の金属部分は、鉄、マグネシウムまたは亜鉛であり、特に鉄であることが好ましい。
　本発明において用い得る鉄化合物は、有機塩でも無機塩でもよい。無機塩としては、塩化第二鉄、三二酸化鉄、硫酸鉄、ピロリン酸第一鉄を挙げることができる。有機塩としては、ヒドロキシカルボン酸塩等のカルボン酸塩、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ）、クエン酸鉄アンモニウム等のクエン酸塩や、ピロリン酸第二鉄、ヘム鉄、デキストラン鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン五酢酸鉄アンモニウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄アンモニウム、フマル酸第一鉄、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム等の有機酸塩や、トリエチレンテトラアミン鉄、ラクトフェリン鉄、トランスフェリン鉄、鉄クロロフィリンナトリウム、フェリチン鉄、含糖酸化鉄、グリシン第一鉄硫酸塩を挙げることができる。
　本発明において用い得るマグネシウム化合物としては、クエン酸マグネシウム、安息香酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、酸化マグネシウム、塩化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、ジエチレントリアミン五酢酸マグネシウムジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸マグネシウムジナトリウム、マグネシウムプロトポルフィリンを挙げることができる。
　本発明において用い得る亜鉛化合物としては、塩化亜鉛、酸化亜鉛、硝酸亜鉛、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジエチレントリアミン五酢酸亜鉛ジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸亜鉛ジナトリウム、亜鉛プロトポルフィリン、亜鉛含有酵母を挙げることができる。
　対象への金属含有化合物の投与量は、対象へのＡＬＡの投与量に対してモル比で０～１００倍であればよく、０．０１倍～１０倍が望ましく、０．１倍～８倍がより望ましい。
　本発明の医薬組成物に含有されるＡＬＡ類と金属含有化合物は、ＡＬＡ類と金属含有化合物とを含む組成物としても、あるいは、それぞれ単独でも投与することできるが、それぞれ単独で投与する場合でも同時に投与することが好ましく、ここで同時とは、同時刻に行われることのみならず、同時刻でなくともＡＬＡ類と金属含有化合物との投与が相加的効果、好ましくは相乗的効果を奏することができるように、両者間で相当の間隔をおかずに行われることを意味する。
　本発明におけるＡＬＡ類と金属含有化合物の投与経路は限定されず、全身投与であっても、局所投与であってもよい。投与経路としては、例えば、舌下投与も含む経口投与、あるいは吸入投与、カテーテルによる、標的組織又は臓器に対する直接投与、点滴を含む静脈内投与、貼付剤等による経皮投与、座薬、又は、経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを挙げることができる。また、上述のとおり、ＡＬＡ類と、金属含有化合物とを、別々の経路から投与してもよい。
　本発明において用いられる、ＡＬＡ類、金属含有化合物、または、これらを組み合わせた配合剤、の剤型は、前記投与経路に応じて適宜決定してよく、限定はされないが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、貼付剤、座薬剤等を挙げることができる。
　本発明に係る医薬組成物は、必要に応じて他の薬効成分、栄養剤、担体等の他の任意成分を加えることができる。任意成分として、例えば結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物性及び動物性脂肪、油脂、ガム、ポリアルキレングリコール等の、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、溶剤、分散媒、増量剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。
　本発明の医薬組成物の対象への投与頻度や投与期間は、対象の症状や状態等を考慮して、当業者（例えば、医師）が適宜決定することができる。
　本明細書において用いられる用語は、特に定義されたものを除き、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
　また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを排除しない。
　異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
　以下において、本発明を、実施例を参照してより詳細に説明する。しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
実施例１（ＡＬＡによる１回排尿量等の増加効果）
実験群
　実験ラットとしては、１２週齢の雄性ＳＨＲ（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　ｒａｔ）を用い、下記ＡＬＡの投与条件により、実験群をＩ～ＩＩＩ群に分けた。実験群ＩＩにおいては、ＡＬＡとクエン酸第一鉄ナトリウムを実験開始日に経口投与した。ＡＬＡの投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ体重とし、クエン酸第一鉄ナトリウムは、１５．７ｍｇ／ｋｇ体重とした。一方、実験群ＩＩＩにおいては、１００ｍｇ／ｋｇ体重とし、クエン酸第一鉄ナトリウムは、１５７ｍｇ／ｋｇ体重とした。なお、コントロール群ＩへはＡＬＡ及びクエン酸第一鉄ナトリウムの代わりに生理食塩水のみをＡＬＡと同量投与した。
ＡＬＡ投与条件
　コントロール群Ｉは、実験開始日（１２週齢）から６週目（１８週齢）まで毎日、生理食塩水を経口投与した。
　実験群ＩＩ及びＩＩＩは、実験開始日（１２週齢）から６週目（１８週齢）まで毎日、ＡＬＡ及びクエン酸第一鉄ナトリウムを経口投与した。
排尿動態測定法
　各実験群に対し、メタボリックケージによる排尿動態測定を実施した。具体的には、１２週齢のとき（ＡＬＡ投与前）と、１８週齢のとき（ＡＬＡ投与後）に測定を実施し、１回の排尿量、２４時間の排尿量、飲水量を測定した。ここで、メタボリックケージによる測定方法は、Ｙｏｎｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．２００７　Ｊｕｎｅ　２７；８１（３）：２１８‐２２２に基づく方法（マウス排尿機能の無麻酔・無拘束・昼夜連続測定法）を採用した。尚、排尿動態測定の前に、排尿量及び飲水量とは別に、体重・血圧・心拍数に関しても念のため測定した。また、排尿動態測定の際、全排尿回数に関しても測定した。
結果
　結果を図１～図３に示す。図１は各実験群における１回排尿量の結果を示し、縦軸は排尿量を、横軸はＡＬＡの投与有無を示す。図１から明らかなように、ＡＬＡの投与により、コントロール群に比べ、１回排尿量の増加（おおよそ３割程度）が確認された。
また、図２は各実験群における２４時間の排尿量の結果を示し、縦軸は排尿量を、横軸はＡＬＡの投与有無を示す。図２に明らかなように、ＡＬＡの投与により、コントロール群に比べ、２４時間の排尿量の増加が確認された。
　さらに、図３は各実験群における２４時間の飲水量の結果を示し、縦軸は飲水量を、横軸はＡＬＡの投与有無を示す。図３から明らかなように、ＡＬＡの投与により、飲水量の増加が確認された。
　ここで、一般的に、過活動膀胱の場合、過活動膀胱を罹患していない場合と比較して、膀胱容量の差異はない。このため、過活動膀胱モデルラットにおいて、１回排尿量、２４時間排尿量、飲水量の増加が確認されたことから、ＡＬＡが膀胱血流調整に作用し、膀胱の貯尿容量の増加に寄与すると考えられる。したがって、ＡＬＡによる膀胱血流の変化を確認するため、膀胱内圧の測定を実施した。
実施例２（ＡＬＡによる排尿期間延長効果）
膀胱内圧測定法
　前記排尿動態測定法の後、以下の手順に即し、膀胱内圧測定法を実施した。なお、膀胱内圧測定は、排尿筋の過活動状態を確認するものであり、過活動膀胱の検査手法として確立されている。
（１）１８週齢雄性ＳＨＲ／ＨｏｓラットとＷｉｓｔａｒ／ＳＴ　ラットをウレタン（１．０ｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）により全身麻酔する。
（２）各ラットを寝かせて四肢をガムテープで固定した後、開腹して膀胱を押して排尿させる。乾燥を防ぐため生食脱脂綿をかけて３０分放置する。
（３）各ラットの膀胱に膀胱内圧測定用のカテーテルを挿入する。
　ここで、カテーテルは三方活栓をつなぎ、一端はシリンジポンプに接続して生理食塩水を一定速度（１２ｍｌ／ｈｒ）で膀胱内に持続的に注入する。もう他端は圧トランスデューサーに接続して圧力アンプでモニター増幅し、ＰｏｗｅｒＬａｂシステムを介してパーソナルコンピューターに取り込んで記録する。
（＊ＰｏｗｅｒＬａｂ（１６ｃｈ高速パワーラボシステム）：ＰｏｗｅｒＬａｂ／１６ＳＰ　ｍｏｄｅｌ　ＭＬ　７９５，　ＡＤＩ（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ），ＵＳＡ）
（４）その後、生理食塩水を注入して３０分程度安定するまで放置する。
（５）波形を見ながら１回の尿を１．５ｍｌ　ｔｕｂｅに採取して尿の重さを測定する。
（６）各ラットの残尿を採取し量を測定する。
（７）同じような間隔、高さのピークを連続して６回（約１時間）とる。
結果
　結果を図４および５に示す。図４中、（ａ）はコントロール群Ｉの結果を、（ｂ）は実験群ＩＩの結果を、（ｃ）は実験群ＩＩＩの結果を示す。各グラフにおいて、縦軸は膀胱内圧を、横軸は時間（秒）を示している。また図５は、図４に示すグラフを排尿間隔（秒）に基づいて変形させたものである。図４および５から明らかなように、ＡＬＡを投与することにより、ＡＬＡを投与しない群に比べて排尿間隔の延長が確認された。この結果から、ＡＬＡを投与することにより過活動膀胱により萎縮された膀胱が拡張され、これにより膀胱における貯尿容量が増加されたものと考えられる。
実施例３（ＡＬＡによる膀胱血流改善効果）
方法
　前記膀胱内圧測定の後、以下の手順に即し、膀胱血流測定（水素クリアランス法）を実施した。
（１）各ラットの前胸部下に不関電極である塩化銀プレートを埋没させる。
（２）膀胱壁内にワイヤー型白金電極を刺入する（膀胱壁に３か所、３回ずつデータを採取する）。
（３）ＵＨ－ＭＥＴＥＲを使用し血流を測定する。
　具体的には、水素ボンベを０．３Ｌ／ｍｉｎまで開け、１００％水素をロートを用いて直接吸引させる。ピークになるまで水素を与え、水素クリアランスカーブをＰｏｗｅｒＬａｂシステムにより測定する。水素クリアランスカーブは下降し始めた時点を０秒とし約１８０秒間記録した。
（４）回帰曲線より血流量を算出した。
　＊回帰曲線　Ｙ＝Ｂ－ＡＸより半減期（Ｔ１／２）を求める。
　血流量＝６９．３／Ｔ１／２　（ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ）
（＊ＰｏｗｅｒＬａｂ（１６ｃｈ高速パワーラボシステム）：ＰｏｗｅｒＬａｂ／１６ＳＰ　ｍｏｄｅｌ　ＭＬ　７９５，　ＡＤＩ（ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ），　ＵＳＡ）
結果
　結果を図６に示す。図６において、縦軸は膀胱血流量を示し、横軸は各実験群を示す。図６から明らかなように、ＡＬＡの投与により、ＡＬＡの投与量に依存して膀胱血流が増加する傾向が確認された。図４および５に示す結果と合わせ、膀胱血流の増加により、過活動膀胱により萎縮された膀胱が拡張されたと言える。その結果、ＡＬＡの投与により、過活動膀胱の改善が確認された。
実施例４（ＡＬＡ投与による過活動膀胱の改善メカニズムの検証）
　上記の実施例によって検証されたＡＬＡの投与による過活動膀胱の改善のメカニズムをさらに詳細に検証するため、ＡＬＡの投与と膀胱血管内皮障害および酸化ストレスとの関係について検討を行った。対象の膀胱血管内皮障害のマーカーとしてはＶＥＧＦ（Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ）を用い、酸化ストレスマーカーとしてはＭＤＡ（Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ）、ＮＧＦ（Ｎｅｒｖｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ）、および、Ｎｒｆ２（Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｆａｃｔｏｒ　２）を用いた。
１．ＶＥＧＦの測定
　対象へのＡＬＡの投与とＶＥＧＦ発現量の変化について検討を行った。ＶＥＧＦは血管内皮増殖因子であり、膀胱血管内皮障害のマーカーとして使用されている。
実験群の準備
　実験群およびコントロール群の準備は、実施例１に記載の方法と同様の方法および条件で行った。
ラット膀胱組織のサンプル調整
　実験群およびコントロール群の膀胱組織を以下の手順で処理し、サンプルとして用いた。
１．１００ｍｇの組織を１ｘＰＢＳで洗浄。
２．１ｘＰＢＳ　５００μｌでホモジナイズ。
３．－２０℃で一晩保存。
４．凍結融解を行って細胞膜を破壊し、５０００Ｇ，５ｍｉｎ，４℃で遠心分離
５．分注して－２０℃か－８０℃で保存。
６．融解後もう一度遠心分離し、アッセイに用いる。
ＶＥＧＦの測定
　Ｒａｔ　ＶＥＧＦ　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔ（ＣＵＳＡＢＩＯ　ＣＳＢ－Ｅ０４７５７ｒ）を用い、製造業者の提供するプロトコルにしたがってＥＬＩＳＡアッセイを行った。
結果
　測定結果を図７に示す。図７に示すとおり、実験群（ＡＬＡ投与群）においては、コントロール群と比較して顕著に膀胱組織におけるＶＥＧＦ発現量が低下していた。
２．ＭＤＡの測定
　対象へのＡＬＡの投与とＭＤＡ発現量の変化について検討を行った。ＭＤＡは脂質過酸化分解生成物の一つであり、脂質過酸化の主要なマーカーとして知られている。
実験群の準備
　実験群およびコントロール群の準備は、実施例１に記載の方法と同様の方法および条件で行った。
ラットの膀胱組織のサンプル調整
　実験群およびコントロール群の膀胱組織を以下の手順で処理し、サンプルとして用いた。
１．ｃｏｌｄ　ａｓｓａｙ　ｂｕｆｆｅｒ　４００μｌでバイオマッシャー。
２．１５０００ｒｐｍ　５　ｍｉｎ　４℃で遠心分離。遠心分離後上清に」ｂｕｆｆｅｒ　３００μｌ　を加えて　ｏｎ　ｉｃｅ　で保存。
３．タンパク質濃度で補正する。
ＭＤＡの測定
　Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ　Ａｓｓａｙ　ｋｉｔ（ＮＷＫ－ＭＤＡ０１）を用い、製造業者の提供するプロトコルにしたがってＥＬＩＳＡアッセイを行った。
結果
　測定結果を図８に示す。図８に示すとおり、実験群（ＡＬＡ投与群）においては、コントロール群と比較して顕著に膀胱組織におけるＭＤＡ発現量が低下していた。
３．ＮＧＦの測定
　対象へのＡＬＡの投与とＮＧＦ発現量の変化について検討を行った。膀胱内でＮＧＦが増加すると排尿反射が亢進され、その結果過活動膀胱がもたらされることから、ＮＧＦは下部尿路機能障害マーカーとして用いられている。
実験群の準備
　実験群およびコントロール群の準備は、実施例１に記載の方法と同様の方法および条件で行った。
ラットの膀胱組織のサンプル調整
　実験群およびコントロール群の膀胱組織を以下の手順で処理し、サンプルとして用いた。
１．１００ｍｇの組織１ｘＰＢＳで洗浄。
２．１ｘＰＢＳ　１ｍｌでホモジナイズ。
３．－２０℃で一晩保存。
４．凍結融解を行って細胞膜を破壊し、５０００Ｇ，５ｍｉｎ，４℃で遠心分離。
５．分注して－２０℃か－８０℃で保存。
６．融解後もう一度遠心分離し、アッセイに用いる。
ＮＧＦの測定
　Ｒａｔ　ＮＧＦ　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔ（ＣＵＳＡＢＩＯ　ＣＳＢ－Ｅ２４６８５ｒ）を用い、製造業者の提供するプロトコルにしたがってＥＬＩＳＡアッセイを行った。
結果
　測定結果を図９に示す。図９に示すとおり、実験群（ＡＬＡ投与群）においては、コントロール群と比較して顕著に膀胱組織におけるＮＧＦ発現量が低下していた。
４．Ｎｒｆ２の測定
　対象へのＡＬＡの投与とＮｒｆ２発現量の変化について検討を行った。Ｎｒｆ２は抗酸化酵素や解毒代謝酵素の発現を調節して酸化ストレスを制御する転写因子の一つであり、酸化ストレスマーカーとして用いられている。
実験群の準備
　実験群およびコントロール群の準備は、実施例１に記載の方法と同様の方法および条件で行った。
ラットの膀胱組織のサンプル調整
　実験群およびコントロール群の膀胱組織を以下の手順で処理し、サンプルとして用いた。
１．ＰＢＳで余分な血液を洗う。
２．重量測定。
３．Ｏｎ　ｉｃｅでバイオマッシャーにＰＢＳを６００μｌ入れｔｉｓｓｕｅを細かくｍｉｎｃｅする。
４．超音波処理または凍結融解（－２０℃／室温）を３回行う。
５．５０００Ｇ　５ｍｉｎ遠心分離。
６．上清をｎｅｗ　ｔｕｂｅへ（タンパク濃度を測定しておく）。
Ｎｒｆ２の測定
　Ｒａｔ　ＮＦＥ２Ｌ２／ＮＲＦ２　ＥＬＩＳＡ　ｋｉｔ（ＬＳＢｉｏ　ＬＳ－Ｆ１２１４５）を用い、製造業者の提供するプロトコルにしたがってＥＬＩＳＡアッセイを行った。
結果
　測定結果を図１０に示す。図１０に示すとおり、実験群（ＡＬＡ投与群）においては、コントロール群と比較して顕著に膀胱組織におけるＮｒｆ２発現量が低下していた。
考察
　上記の結果のとおり、ＡＬＡを投与したラットの膀胱組織においては、コントロール群と比較して顕著にＶＥＧＦ、ＭＤＡ、ＮＧＦ、Ｎｒｆ２の発現量が低下していた。ＶＥＧＦは膀胱血管内皮障害に関係し、ＭＤＡ、ＮＧＦ、および、Ｎｒｆ２は組織の酸化ストレスに関係することから、ＡＬＡの投与によって膀胱の血流が改善される結果、膀胱組織の組織障害や酸化ストレスが軽減され、排尿筋の過活動が抑制されるというメカニズムが示唆された。
 
 
 

 

Claims (11)

  1. 　過活動膀胱の予防または治療における使用のための医薬組成物であって、
    　下記式（Ｉ）で示される化合物
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
    又はその塩
    を含む、
    医薬組成物。
  2. 　請求項１に記載の医薬組成物であって、
    　前記過活動膀胱は、頻尿の症状を呈する過活動膀胱であることを特徴とする、
    医薬組成物。
  3. 　請求項１または２に記載の医薬組成物であって、
    　Ｒ１が、水素原子、炭素数１～８のアルカノイル基、及び、炭素数７～１４のアロイル基からなる群から選択され、
    　Ｒ２が、水素原子、直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基、炭素数３～８のシクロアルキル基、炭素数６～１４のアリール基、及び、炭素数７～１５のアラルキル基からなる群から選択される
    ことを特徴とする、
    医薬組成物。
  4. 　請求項３記載の医薬組成物であって、
    　Ｒ１およびＲ２が、水素原子であることを特徴とする、
    医薬組成物。
  5. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
    　一種または二種以上の金属含有化合物をさらに含有することを特徴とする、
    医薬組成物。
  6. 　請求項５に記載の医薬組成物であって、
    　金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデンまたはコバルトを含有する化合物であることを特徴とする、
    医薬組成物。
  7. 　請求項５に記載の医薬組成物であって、
    　金属含有化合物が、鉄、マグネシウムまたは亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする、
    医薬組成物。
  8. 　請求項５に記載の医薬組成物であって、
    　金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする、
    医薬組成物。
  9. 　請求項８に記載の医薬組成物であって、
    　前記鉄を含有する化合物が、クエン酸第一鉄ナトリウムであることを特徴とする、
    医薬組成物。
  10. 　過活動膀胱の予防剤または治療剤の製造のための、
    　下記式（Ｉ）で示される化合物
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
    又はその塩
    の使用。
  11. 　過活動膀胱を予防または治療する方法であって、
    　治療上有効量の、下記式（Ｉ）で示される化合物
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
    又はその塩
    を対象へ投与するステップ、を含む、
    方法。

     
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