WO2018084748A1 - Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью - Google Patents

Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью Download PDF

Info

Publication number
WO2018084748A1
WO2018084748A1 PCT/RU2017/000808 RU2017000808W WO2018084748A1 WO 2018084748 A1 WO2018084748 A1 WO 2018084748A1 RU 2017000808 W RU2017000808 W RU 2017000808W WO 2018084748 A1 WO2018084748 A1 WO 2018084748A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
naproxen
formula
inflammatory
compound
administration
Prior art date
Application number
PCT/RU2017/000808
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Юрий Григорьевич ШТЫРЛИН
Роман Сергеевич ПАВЕЛЬЕВ
Альфия Габдулахатовна ИКСАНОВА
Никита Валерьевич ШТЫРЛИН
Михаил Владимирович ПУГАЧЕВ
Константин Валерьевич БАЛАКИН
Александр Маазович АЙМАЛЕТДИНОВ
Ильнур Махмутович ГАНИЕВ
Альбина Геннадьевна МАЛАНЬЕВА
Original Assignee
Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты"
Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты", Федеральное Государственное Автономное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" filed Critical Акционерное Общество "Татхимфармпрепараты"
Priority to EA201900245A priority Critical patent/EA034652B1/ru
Priority to CN201780067702.3A priority patent/CN109923103B/zh
Priority to JP2019545236A priority patent/JP6757858B2/ja
Priority to EP17866960.2A priority patent/EP3517525B1/en
Publication of WO2018084748A1 publication Critical patent/WO2018084748A1/ru
Priority to US16/399,590 priority patent/US10507202B2/en
Priority to US16/715,976 priority patent/US10688084B2/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4415—Pyridoxine, i.e. Vitamin B6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/65—One oxygen atom attached in position 3 or 5
    • C07D213/66—One oxygen atom attached in position 3 or 5 having in position 3 an oxygen atom and in each of the positions 4 and 5 a carbon atom bound to an oxygen, sulphur, or nitrogen atom, e.g. pyridoxal
    • C07D213/67—2-Methyl-3-hydroxy-4,5-bis(hydroxy-methyl)pyridine, i.e. pyridoxine

Definitions

  • the invention relates to a new naproxen derivative of formula I, which has high anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity, as well as low acute toxicity and gastrotoxicity, which can be used in the pharmaceutical industry, medicine and veterinary medicine.
  • NSAIDs non-steroidal anti-inflammatory drugs
  • NSAIDs are inflammatory processes of various nature and localization, pain, fever.
  • NSAIDs are one of the most widely used groups of drugs. For example, approximately 20% of inpatients with various diseases of the internal organs are prescribed NSAIDs [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One / Ed. A.N. Mironova. — M .: Grif and K, 2012. — 944 s].
  • NSAIDs The main element of the mechanism of action of NSAIDs is the inhibition of the synthesis of inflammatory mediators - prostaglandins.
  • phospholipids are released from the cell membrane, which are metabolized to arachidonic acid by the action of the phospholipase A2 enzyme.
  • Arachidonic acid is metabolized in two ways: cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase (LOG).
  • COX cyclooxygenase
  • LOG lipoxygenase
  • NSAIDs inhibit only COX, so they block the development of only the second stage of inflammation [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One / Ed. A.N. Mironova. — M: Grif and K, 2012. — 944 s].
  • COX-1 constitutitutive, existing in the norm
  • COX-2 induced
  • COX-2 is involved in the synthesis of prostaglandins in inflammation.
  • COX-2 is normally absent and is formed under the influence of tissue factors that induce an inflammatory reaction (cytokines, etc.). It is believed that the anti-inflammatory effect of NSAIDs is due to inhibition of COX-2, and side effects result from inhibition of COX-1 [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One / Ed. A.N. Mironova. — M .: Grif and K, 2012. — 944 s].
  • NSAIDs The most famous NSAIDs are ketoprofen (3-benzoyl-alpha-methylbenzeneacetic acid), ibuprofen ((/? 5) -2- (4-isobutylphenyl) propionic acid), diclofenac (2 - [(2,6-dichlorophenyl) amino] benzene acetic acid), indomethacin (1- (4-chlorobenzoyl) -5-methoxy-2-methyl-1H-indole-3-acetic acid) and naproxen ((S) -6-methoxy-a-methyl-2-naphthalene acetic acid )
  • naproxen occupies one of the leading positions in the NSAID group, as it has a longer effect than other NSAIDs and is well tolerated [M. Mashkovsky. Medicines 16th ed., Rev., Rev. and add. — M.: New Wave, 2012. - 1216 s].
  • Pillai // Expert. Opin. Drug Metab. Toxicol. - 2014. - V. 10, N. 2. - P. 143-156.].
  • the most promising area for the development of anti-inflammatory drugs is the search for non-selective NSAIDs.
  • the developers are faced with the task of reducing side effects, the main of which is gastrotoxicity.
  • NSAID esters are typical prodrugs that undergo enzymatic hydrolysis in the gastrointestinal tract (hereinafter referred to as the GIT) with the gradual release of NSAIDs providing a prolonged effect of the drug.
  • ester-based prodrugs penetrate better through the cytoplasmic membranes of cells, which makes them less irritating to the gastrointestinal mucosa.
  • Esters of ascorbic acid with NSAIDs which are derivatives of aryl acetic or arylpropionic acids, such as ibuprofen, ketoprofen, naproxen and their salts, are known [EP 2431361, publ. 03/21/2012].
  • 2-methanesulfonate ethyl ester of naproxen is proposed together with an H2 receptor antagonist [WO 200810106441, publ. 08.21.2008].
  • This modification of NSAIDs leads to a decrease in gastrotoxicity, however, the therapeutic effect is significantly reduced. For this reason, compounds of this kind are not included in clinical practice.
  • a prototype embodiment containing three fragments of naproxen is an effective anti-inflammatory compound.
  • it has a pronounced anti-inflammatory effect on the in vivo subacute (formalin) edema model.
  • the claimed technical solution in relation to the claimed composition differs from that described in the prototype by the presence of an additional fragment of naproxen, which, according to the applicant, experimentally justified, leads to the appearance of pharmacologically significant positive effects.
  • the combination of covalent ester bonds and non-covalent ionic bonds that bind fragments of naproxen and pyridoxine in the claimed molecule under physiological conditions determines the appearance of synergistic effects that are not obvious to the specialist. These effects are expressed in increased anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity, as well as significantly reduced gastrotoxicity and acute toxicity.
  • the claimed compound of formula I against the background of reduced gastrotoxicity and acute toxicity provides a rapid onset of a pronounced anti-inflammatory effect in the model of both acute and subacute edema in vivo, in due to which the applicant’s remoteness to solve the seemingly insurmountable problem characteristic of both the prototype and many other NSAIDs, including naproxen (the latter is also a prototype of the claimed technical solution).
  • the objective of the claimed technical solution is to create a pharmaceutical product based on naproxen with high anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity in combination with low toxicity, including gastrotoxicity, significantly expanding the arsenal of known drugs for this purpose.
  • the technical result of the invention is a new non-steroidal anti-inflammatory agent based on pyridoxine and naproxen, which shows high anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity against the background of significantly lower toxicity, including gastrotoxicity, compared with the known NSAIDs, including the prototype.
  • Tab. 2 Acute toxicity of the compounds of formula I upon intragastric administration;
  • Tab. 3 Comparative characteristics of the compounds of formula I and some known NSAIDs;
  • NMR spectra were recorded on a Bruker AVANCE-400 instrument.
  • the chemical shift was determined relative to the signals of the residual protons of the deuterated solvents (H and C).
  • the melting points of the products were determined using a Stanford Research Systems MPA-100 OptiMelt instrument at a heating rate of 1 ° C / min.
  • an Evolution 300 UV spectrophotometer (Thermo scientific) was used. Specific rotation was determined on an ADP440 + automatic polarimeter (B&S) (England) using a 100 ° Z quartz calibration cuvette.
  • MSWR High resolution mass spectra
  • the purity of the compounds of formula I was determined by reverse phase HPLC using the gradient elution regimen values in Table 1, using a LCMS-2010EV high-performance liquid chromatograph, Shimadzu (Japan) equipped with a diode array detector on an XBridge C 18 column (size 4.6x50 mm, 3.5 ⁇ m). The temperature of the column thermostat is plus 40 ° C, the flow rate is 1 ml / min, the volume of the injected sample is 1 mg / ml. UV detection was carried out at analytical wavelength of 220 nm, as well as 254 and 330 nm for the determination of impurities. As the mobile phase we used: channel A — 0.1% by volume of formic acid in water, channel B — acetonitrile. Pump operating mode - gradient elution, analysis time 22 minutes.
  • Example 2 Obtaining 3 - ((5) -2- (6-methoxynaphth-2-yl) propanoyl) 4,5-bis (((5 -2- (6-methoxynaphth-2-yl) propanoyloxy) methyl ) -2-methylpyridinium (S) -2- (6-metho-synaphth-2-yl) propanoate (compound I).
  • Target substance I is a salt of compound IV with naproxen.
  • Table 1 under reverse-phase HPLC conditions (Table 1), it appears on the chromatogram in the form of two peaks corresponding to compound IV and naproxen, the mass spectra of which correspond to the calculated and published data (806.3324 and 229.0870, respectively).
  • the experiment was carried out according to the fixed-dose method on Wistar rats of both sexes, 6 animals per group.
  • the initial dose for research with intragastric administration was 5000 mg / kg.
  • a 0.5% Tween-80 solution was used as a solvent (Tween 80 — polyoxyethylene, a derivative of sorbitan and oleic acid, a commercially available polymer), which was prepared by dissolving 0.5 g of Tween-80 in 100 ml of distilled water.
  • the introduction was carried out to animals deprived of food (for a period of at least 8 hours) with free access to water.
  • the volume of administration was calculated individually for each animal, based on body weight recorded immediately before the introduction of the substance. Access to food was resumed one hour after administration. Animals were observed individually after administration for 30 minutes, then at least once per hour for 4 hours, then daily 1 time per day for 14 days. Body weight was recorded immediately before the administration of the drug to calculate the volume of administration, then once every two days. If the animal died during the study, the time of death was established and documented as accurately as possible. The animal was weighed and opened as early as possible. Dying animals were weighed, euthanized and opened. The animals were euthanized by carbon dioxide inhalation.
  • the configuration of bones and joints is not broken.
  • the position of the organs of the chest and abdominal cavities is anatomically correct. Fluids in the thoracic and abdominal no cavities. Patency of the pharynx and esophagus is not impaired.
  • the heart in volume is not changed. In the cavities of the heart contains a small amount of clotted blood, the endocardium is smooth, shiny. The lungs are pale pink, evenly colored, without signs of swelling, lobation is pronounced.
  • the spleen is not enlarged, the edges are sharp, oblong in shape, elastic consistency, red-brown.
  • the liver is not enlarged, the edges are sharp, the shape is not changed, the texture is dense, the color is reddish brown.
  • the stomach contains a fodder mass of gray color, uniform consistency.
  • the mucous membrane of the stomach is pale gray.
  • the mucous membrane of the thin and thick intestines is pale pink or pale gray.
  • the kidneys are bean-shaped, dark brown in color, a moderate amount of fat is contained in the perinephric fiber, the capsule separates easily, the border between the cortical and brain zones is pronounced.
  • the bladder is empty or full of urine is light yellow in color, the mucous membrane is pale pink. Genitals without deviations.
  • the testes of elastic consistency are in the cavity of the scrotum, have an elliptical shape.
  • females the ovaries and uterus are normal.
  • the brain is not swollen, the cerebral substance has an elastic consistency, without hemorrhages.
  • the claimed compound of formula I with intragastric administration belongs to hazard class 4, i.e. to low-hazard substances (GOST 12.1.007-76 "Harmful substances. Classification and general safety requirements") and for safety, expressed by the value of the lethal dose of LD 50 , exceeds the majority of NSAIDs known today (table 3).
  • the claimed compound is 8 times less toxic compared to naproxen.
  • the drug UZo LD 50 index (acute therapeutic (mg / kg) (mg / kg)
  • the compound of formula I was administered once intragastrically to rats deprived of food 16 hours before the study. 3 hours after the administration of a suspension of the test substance at a dose of 2000 mg / kg (in a 0.5% aqueous solution of Tween-80), the animals were euthanized, their stomachs were removed, they were dissected by slight curvature, and washed in saline to remove the contents.
  • Gastrotoxicity was assessed on a 4-point scale:
  • UD 5 schreib was determined - the dose of the test substance, causing a gastrotoxic (ulcerogenic) effect, corresponding to 2 points.
  • the UD value is 50 > 2000 mg / kg, which exceeds the same parameter for most NSAIDs (table 3).
  • the claimed compound is 40 times less gastrotoxic compared to naproxen.
  • cyclooxygenase 1 The structural enzyme cyclooxygenase 1 (COX 1) is expressed in various types of cells and is involved in ensuring their normal (physiological) functional activity. Cyclooxygenase 2 (COX 2) is responsible for the synthesis of prostaglandins in severe inflammation.
  • the volume is adjusted to 172 ⁇ l.
  • reagents are added to the corresponding wells of the plate: first, the reaction mixture, then the solutions of the tested substances in DMSO in a series of concentrations and control substances (COX 1 SC560 inhibitor and COX 2 inhibitor Celecoxib), a pure DMSO solvent (for wells with higher activity). Two replicates are used. Incubate for 5 minutes.
  • the fluorescence parameter of images with control and test substances is calculated by the formula:
  • Average Net RFU Average RFU - Average Blank RFU
  • the percentage of COX inhibition is calculated by the formula: Then, using the available data points for the test substance and the reference substance (naproxen), the most suitable sigmoid inhibition curve is constructed. Based on this curve, 1C 0 of the test preparation for COX is calculated.
  • the COX-1 inhibitor SC560 and the COX-2 inhibitor celecoxib are added to the reaction mixture in a volume of 2 ⁇ l (this amount is sufficient to completely inhibit the corresponding isoform).
  • the residual activity of the COX contained in the cell lysate after treatment with SC560 and celecoxib is 72.8% and 32.0%, respectively.
  • the concentration of naproxen and the test substance in the well is from 1.25 to 20 ⁇ M.
  • test substances are tested in a concentration layout in the presence of a selective COX 1 inhibitor SC560, as well as in the presence of a selective COX 2 inhibitor celecoxib.
  • the inhibitor is added in an amount sufficient to completely inhibit the corresponding isoform of the enzyme, while the other isoform remains active.
  • 1C 50 of naproxen is 9.56 ⁇ M, which is 1.25 times more than 1C 5 about the compounds of formula I, equal to 7.7 ⁇ M. From the foregoing, it can be concluded that the claimed compound of formula I is more effective as a cyclooxygenase inhibitor, since it acts at a lower concentration.
  • the experiment was carried out using female and male Wistar rats aged 6-7 weeks with a body weight of 180-220 g.
  • the number of animals in each group is 10 animals.
  • An acute inflammatory reaction was reproduced by subplanetary (under plantar or plantar aponeurosis) administration of 0.1 ml of a 1% carrageenin solution (sulfated polysaccharide from Irish sea moss).
  • the severity of the inflammatory reaction was evaluated 3 hours after the induction of inflammation by the change in the volume of the paw (onkometrically).
  • the substance of formula I was introduced into the stomach by a probe 1 hour before the administration of a 1% solution of carrageenin.
  • As a negative control used 0.5% Tween-80 solution.
  • the anti-inflammatory effect as measured by a decrease in edema, was expressed as a percentage of control. According to the results of the action of four doses of the test substance, the ED 50 was calculated.
  • a weighed portion of 1000 mg of the compound of formula I was weighed in polystyrene boats on a Vibra scale (Shinko Denshi, Japan, cat. Ng AF225DRCE), transferred to a 200 ml volumetric flask of accuracy class A, adjusted to a mark of 200 ml 0.5% aqueous solution of Tween-80 and a suspension of the drug were stirred using a SilentCrusher dispersant (Heidolph, Germany, P / N 595-06000-00-3) until a homogeneous consistency.
  • Administration to rats was carried out in a volume of not more than 1 ml / 100 g. The concentration of the resulting solution was 5 mg / ml.
  • the animals were euthanized by carbon dioxide inhalation.
  • ED 5 on the compound of formula I on males is 23 mg / kg, on females 14 mg / kg.
  • the average value of ED 50 without dividing by sex is 18.5 ( ⁇ 19) mg / kg.
  • naproxen ED 50 is 15 mg / kg
  • ibuprofen is 48 mg / kg
  • diclofenac sodium is 8 mg / kg
  • piroxicam is 20 mg / kg
  • phenylbutazone is 56 mg / kg
  • indomethacin is 10 mg / kg
  • acetylsalicylic acids - 98 mg / kg [Guidelines for preclinical studies of drugs. Part One / Ed. A.N. Mironova. - M .: Grif and K, 2012. - 944 s].
  • the applicant proved the presence of high anti-inflammatory activity of the compounds of formula I, which is superior in value (in four out of seven cases) or comparable to the anti-inflammatory activity of modern NSAIDs.
  • Inflammatory hyperalgesia increased pain sensitivity of inflamed rat tissues was caused by carrageenin and was evaluated by lowering the threshold of pain sensitivity - PBC (by the difference between PBC) for mechanical irritation (squeezing) of the animal's paw tissue before carrageenin administration and 3 hours after it. The measurement was carried out on an inflamed paw.
  • the used Ugo Basile SRL analgesimeter (Italy) provides a smooth increase in the load on the inflamed paw of the rat until a pain reaction occurs (assessed by the squeaking of the animal or the withdrawal of the paw).
  • the test substances were administered 2 hours after the administration of carrageenin.
  • the analgesic effect with the determination of ED 50 was evaluated by reducing hyperalgesia 1 h after intragastric administration of the test substances.
  • the increase in the threshold of the pain reaction under the influence of the studied substances was expressed in an increase in the compression force of the limb and characterized the severity of the analgesic effect of the drug.
  • the animals were euthanized by carbon dioxide inhalation.
  • a dose of 50 mg / kg weighed 1000 mg of a compound of the formula I in polystyrene boats on a Vibra scale (Shinko Denshi, Japan, cat. N ° AF225DRCE), transferred to a 200 ml volumetric flask, accuracy class A, adjusted to a mark of 200 ml 0.5 Tween-80% aqueous solution and suspension were dispersed using a SilentCrusher dispersant (Heidolph, Germany, P / N 595-06000-00-3) to a uniform consistency.
  • Administration to rats was carried out in a volume of not more than 1 ml / 100 g. The concentration of the resulting solution was 5 mg / ml.
  • the claimed compound of formula I exhibits a pronounced analgesic effect at a dose of 5 mg / kg, while naproxen (prototype) has a similar effect only at a dose of 15 mg / kg, which is evidence of its higher efficiency.
  • the therapeutic index (LD50 / ED50) of the claimed compound in terms of its analgesic activity is more than 1000 against 42 for naproxen
  • the safety index (UD 50 / ED 50 ) is more than 400 against 3.2 for naproxen.
  • a weighed portion of 1500 mg of the compound of formula I was weighed in polystyrene boats on a Vibra scale (Shinko Denshi, Japan, Cat.No AF225DRCE), transferred to a 200 ml volumetric flask of accuracy class A, adjusted to a mark of 200 ml 0.5% aqueous Tween-80 aqueous solution and a suspension of the preparation were mixed with a SilentCrusher M dispersant (Heidolph, Germany) until a homogeneous consistency.
  • Administration to rats was carried out in a volume of not more than 1 ml / 100 g. The concentration of the resulting solution was 7.5 mg / ml.
  • the claimed compound has antipyretic properties at the naproxen level at a dose of 15 mg / kg. It should be especially noted that in molar terms these doses practically do not differ, since the molar mass of naproxen is significantly lower than the molar mass of the compound of formula I, and is 230 g / mol against 1036 g / mol of the claimed compound.
  • the therapeutic index (LD 5 o / ED 5 o) of the claimed compound in terms of its antipyretic activity is more than 67 against 42 for naproxen, and the safety index (UD50 / ED50) is more than 27 against 3.2 for naproxen.
  • the claimed compound is 8 times less toxic and 40 times less gastrotoxic in comparison with naproxen (prototype).
  • the claimed technical solution meets the criterion of "novelty" presented to the invention, because from the studied prior art, no technical solutions were found that coincided with those declared on essential grounds, leading to the implementation of the claimed technical results, which are new derivatives of pyridoxine and naproxen, which has low toxicity, including gastrotoxicity.
  • the claimed chemical compound expands the range means for the treatment of rheumatic diseases, as well as diseases accompanied by inflammation, pain and fever, while this is a fundamentally new, unparalleled in the world in terms of efficiency and safety of use.
  • the claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability", because can be implemented at any specialized enterprise using standard equipment, well-known domestic materials and technologies.
  • the applicant in the laboratory received the target product - a non-steroidal anti-inflammatory drug based on naproxen, with the stated technical results and all the stated goals have been achieved.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новому производному напроксена, 3-((S)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)-4,5-бис (((S)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)-метил)-2-метилпиридиний (S)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноату, обладающему высокой противовоспалительной, обезболивающей и жаропонижающей активностью, а также низкой острой токсичностью и гастротоксичностью, которое может найти применение в фармацевтической промышленности, медицине и ветеринарии.

Description

Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена,
обладающее низкой гастротоксичностью
Изобретение относится к новому производному напроксена формулы I, обладающему высокой противовоспалительной, обезболивающей и жаропонижающей активностью, а также низкой острой токсичностью и гастротоксичностью, которое может найти применение в фармацевтической промышленности, медицине и ветеринарии.
Figure imgf000003_0001
I
Основными показаниями для назначения нестероидных противовоспалительных средств (далее НПВС) являются воспалительные процессы различной природы и локализации, боль, лихорадка. НПВС являются одной из наиболее широко применяемых групп лекарственных средств. Например, НПВС назначают примерно 20 % стационарных больных с различными заболеваниями внутренних органов [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова.— М.: Гриф и К, 2012.— 944 с].
Главным элементом механизма действия НПВС является угнетение синтеза воспалительных медиаторов - простагландинов. В процессе альтерации (первой стадии воспаления) из клеточной мембраны высвобождаются фосфолипиды, которые под действием фермента фосфолипазы А2 метаболизируются до арахидоновой кислоты. Арахидоновая кислота, в свою очередь, метаболизируется двумя путями: циклооксигеназным (ЦОГ) и липооксигеназным (ЛОГ). НПВС подавляют только ЦОГ, поэтому они блокируют развитие только второй стадии воспаления [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова.— М: Гриф и К, 2012.— 944 с].
Существует 2 изофермента ЦОГ: ЦОГ-1 (конститутивный, существующий в норме) - контролирует выработку простаноидов, регулирующих физиологические функции желудка, сосудов и почек; ЦОГ-2 (индуцированный) - участвует в синтезе простагландинов при воспалении. ЦОГ-2 в норме отсутствует и образуется под действием тканевых факторов, индуцирующих воспалительную реакцию (цитокины и др.). Считается, что противовоспалительное действие НПВС обусловлено ингибированием ЦОГ-2, а побочные эффекты возникают в результате ингибирования ЦОГ-1 [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова.— М.: Гриф и К, 2012.— 944 с].
Наиболее известными НПВС являются кетопрофен (3-бензоил-альфа- метилбензолуксусная кислота), ибупрофен ((/?5)-2-(4-изобутилфенил)пропионовая кислота), диклофенак (2-[(2,6-дихлорфенил)амино]бензол уксусная кислота), индометацин (1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метил-1Я-индол-3-уксусная кислота) и напроксен ((S)-6- метокси-а-метил-2-нафталинуксусная кислота). В настоящее время напроксен занимает одну из лидирующих позиций в группе НПВС, поскольку оказывает более продолжительное действие, чем другие НПВС и хорошо переносится [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 16-е изд., перераб., испр. и доп.— М.: Новая Волна, 2012. - 1216 с].
Недостатком известных на сегодняшний день НПВС, а именно неселективных ингибиторов циклооксигеназы, является их выраженная гастротоксичность [Handa, О. The impact of non-steroidal anti-inflammatory drugs on the small intestinal epithelium / O. Handa, Y. Naito, A. Fukui, T. Omatsu, T. Yoshikawa // J. Clin. Biochem. Nutr. - 2014. - V. 54, N. 1. - P. 2-6.]. Селективные ингибиторы ЦОГ-2 менее гастротоксичны, однако известно их негативное влияние на сердечно-сосудистую систему [Singh, В. К. Assessment of nonsteroidal anti-inflammatory drug-induced cardiotoxicity / B.K. Singh, S.E. Haque, K.K. Pillai // Expert. Opin. Drug Metab. Toxicol. - 2014. - V. 10, N. 2. - P. 143-156.]. Таким образом, на дату представления заявочных материалов проблема снижения побочных эффектов НПВС обоих типов - селективных и неселективных ингибиторов циклооксигеназы, - остается неразрешенной.
Таким образом, разработка безопасных и эффективных НПВС является одной из важнейших задач фармакотерапии и здравоохранения в целом.
По мнению заявителя, основанному на анализе уровня техники, наиболее перспективным направлением разработки противовоспалительных средств является поиск неселективных НПВС. При этом, как отмечено выше, перед разработчиками стоит задача снижения побочных эффектов, основным из которых является гастротоксичность.
Защита карбоксильной группы неселективных ингибиторов ЦОГ является одним из основных способов снижения токсичности этой группы НПВС. Наиболее часто для этого применяют сложноэфирную защиту [Liu, W. Synthesis and biological evaluation of curcumin derivatives containing NSAIDs for their anti-inflammatory activity [Text] / W. Liu, Y. Li, Y. Yue, et al. // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2015. - V. 25, N. 15. - P. 3044-3051.]. Сложные эфиры НПВС являются типичными пролекарствами, которые в желудочно-кишечном тракте (далее - ЖКТ) подвергаются ферментативному гидролизу с постепенным высвобождением НПВС, обеспечивающим пролонгированный эффект лекарственного препарата. Помимо этого, пролекарства на основе сложных эфиров лучше проникают через цитоплазматические мембраны клеток, благодаря чему оказывают меньшее раздражающее действие на слизистую оболочку ЖКТ. Известны эфиры аскорбиновой кислоты с НПВС, являющимися производными арилуксусной или арилпропионовой кислот, такими как ибупрофен, кетопрофен, напроксен и их соли [ЕР 2431361, опубл. 21.03.2012]. Для лечения артритов, болей и воспалительных процессов предложен 2- метансульфонатэтиловый эфир напроксена совместно с антагонистом Н2 рецепторов [WO 200810106441, опубл. 21.08.2008]. Такая модификация НПВС приводит к снижению гастротоксичности, однако при этом значительно уменьшается и терапевтический эффект. По этой причине соединения такого рода не вошли в клиническую практику.
Наиболее близким по совокупности совпадающих признаков и достигаемому техническому результату к заявленному изобретению является техническое решение, описанное в изобретении по патенту RU 2513089 «Нестероидные противовоспалительные средства на основе производных пиридоксина», сущностью которого являются производные пиридоксина общей формулы (I)
Figure imgf000005_0001
, где: -С(СН3)2- -СН(СНз)-;
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0002
при i=H; R3=H; R2 =
Ri— R2-R3-
Figure imgf000006_0003
, обладающие противовоспалительной активностью.
Вариант прототипа, содержащий три фрагмента напроксена, является эффективным противовоспалительным соединением. В частности, он обладает выраженным противовоспалительным эффектом на модели подострого (формалинового) отека in vivo.
Однако на модели острого (каррагенинового) отека in vivo этот прототип оказался недостаточно эффективным. Важно отметить, что прототип не обладает одновременно совокупностью свойств, присущих заявленному техническому решению, а именно - высокой противовоспалительной (на модели острого (каррагенинового) отека in vivo), обезболивающей и жаропонижающей активностью в сочетании с низкой токсичностью, в том числе гастротоксичностью. По этой причине заявителем данный прототип не рассматривается в качестве препарата сравнения, вместо него с этой целью используется современное нестероидное противовоспалительное средство напроксен, и его аналоги (таблица 3).
Заявленное техническое решение в отношении заявленного состава отличается от описанного в прототипе наличием дополнительного фрагмента напроксена, который, по мнению заявителя, обоснованному экспериментально, обуславливает появление фармакологически значимых положительных эффектов. Так, сочетание в заявленной молекуле расщепляемых в физиологических условиях ковалентных сложноэфирных связей и нековалентной ионной связи, связывающих фрагменты напроксена и пиридоксина, обуславливает возникновение неочевидных для специалиста синергетических эффектов. Эти эффекты выражаются в повышенной противовоспалительной, обезболивающей и жаропонижающей активности, а также существенно пониженной гастротоксичности и острой токсичности. В частности, заявленное соединение формулы I на фоне пониженной гастротоксичности и острой токсичности обеспечивает быстрое наступление ярко выраженного противовоспалительного эффекта на модели как острого, так и подострого отека in vivo, в силу чего заявителю удалость разрешить, казалось бы, непреодолимую проблему, характерную как для прототипа, так и для многих других НПВС, включая напроксен (последний также является прототипом заявленного технического решения).
Задача заявленного технического решения состоит в создании фармацевтического средства на основе напроксена, обладающего высокой противовоспалительной, обезболивающей и жаропонижающей активностью в сочетании с низкой токсичностью, в том числе гастротоксичностью, значительно расширяющего арсенал известных средств указанного назначения.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является новое нестероидное противовоспалительное средство на основе пиридоксина и напроксена, проявляющее высокую противовоспалительную, обезболивающую и жаропонижающую активность на фоне значительно меньшей токсичности, в том числе гастротоксичности, по сравнению с известными НПВС, в том числе с прототипом.
Поставленная задача решается, и заявленный технический результат достигается путем синтеза соединения формулы I и применением его в качестве противовоспалительного, обезболивающего и жаропонижающего средства с пониженной гастротоксичностью :
Figure imgf000007_0001
I Заявленное техническое решение иллюстрируется следующими материалами: Схема - химическая схема синтеза соединения формулы I;
Табл. 1 - Параметры режима градиентного элюирования при аналитической ВЭЖХ;
Табл. 2 - Острая токсичность соединения формулы I при внутрижелудочном введении; Табл. 3 - Сравнительные характеристики соединения формулы I и некоторых известных НПВС;
Табл. 4 - Гастротоксичность соединения формулы I при однократном введении в дозе 2000 мг/кг;
Табл. 5 - Влияние соединения формулы I на острое экссудативное воспаление при внутрижелудочном введении;
Табл. 6 - Обезболивающий эффект соединения формулы I на крысах;
Табл. 7 - Жаропонижающий эффект соединения формулы I на крысах.
Сведения, подтверждающие состав и структуру заявленного соединения, приведены в примерах конкретного выполнения. Структура полученного соединения подтверждена методами Ή и 13С ЯМР-спектроскопии, УФ-спектроскопии, хромато-масс- спектрометрии.
Спектры ЯМР регистрировали на приборе Bruker AVANCE-400. Химический сдвиг определяли относительно сигналов остаточных протонов деитерированных растворителей ( Н и С). Температуры плавления продуктов определяли с помощью прибора Stanford Research Systems МРА-100 OptiMelt при скорости нагрева 1 °С/мин. Для изучения спектральных характеристик растворов соединения формулы I был использован УФ- спектрофотометр Evolution 300 (Thermo scientific). Удельное вращение определяли на поляриметре автоматическом ADP440+ (B&S) (Англия) при использовании кварцевой калибровочной кюветы 100° Z. Масс-спектры высокого разрешения (МСВР) регистрировали с использованием масс-спектрометра TripleTOF 5600, АВ Sciex (Германия) из раствора в метаноле методом ионизации - турбоионный спрей (TIS) - при энергии столкновения с молекулами азота 10 эВ.
Определение чистоты соединения формулы I проводили методом обращеннофазной ВЭЖХ с использованием значений режима градиентного элюирования по таблице 1, при этом использовали высокоэффективный жидкостной хроматограф LCMS-2010EV, Shimadzu (Япония), снабженный диодноматричным детектором на колонке XBridge С 18, (размер 4.6x50 мм, 3.5 мкм). Температура термостата колонки - плюс 40 °С, скорость потока 1 мл/мин, объем вводимой пробы 1 мг/мл. УФ-детектирование осуществляли при аналитической длине волны 220 нм, а также 254 и 330 нм для определения примесей. В качестве подвижной фазы использовали: канал А - 0.1 % по объему муравьиная кислота в воде, канал В - ацетонитрил. Режим работы насоса - градиентное элюирование, время анализа 22 минуты.
Таблица 1
Параметры режима градиентного элюирования при аналитической ВЭЖХ
Figure imgf000009_0001
Примеры конкретного выполнения заявленного технического решения
Получение заявленного соединения формулы I, содержащего фрагменты пиридоксина (витамина В6) и напроксена, осуществляют в две стадии с использованием коммерчески доступных субстратов, реагентов и растворителей по нижеприведенной схеме.
Figure imgf000010_0001
2-метил-3-о си-4,5-ди-(оксиметил)пиридин
Figure imgf000010_0002
(28,2'8)-(5-((8)-2-(6-метоксинафт-2-ил) пропаноилокси)-6-метилпиридин-3,4-диил) бис(метилен)бис(2-(6-метоксинафт-2-
Figure imgf000010_0003
(((8)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)метил)- 2-метилпиридиниум (8)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноат
М.в. 1036.17
I Пример 1. Получение (25,2'5)-(5-((5)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)-6- метилпиридин-3,4-диил)бис(метилен)бис(2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноата)
(соединение IV).
В круглодонную колбу загружают 28.35 г пиридоксина гидрохлорида II, 95.23 г напроксена III, 50.52 г 4-Л^-диметиламинопиридина и 123.73 г дициклогексилкарбодиимида в 5 л ацетона. Перемешивают реакционную смесь до прекращения образования осадка дициклогексилмочевины, после чего осадок отфильтровывают, промывают его 200 мл ацетона, а объединенный фильтрат упаривают в вакууме. Продукт очищают при помощи колоночной хроматографии на силикагеле (элюент этилацетат-петролейный эфир 1 : 1). Получают продукт IV в виде белого кристаллического вещества (выход 82.0 г, 74 %). Более детально получение указанного соединения и его свойства описаны в изобретении по патенту RU 2513098.
Пример 2. Получение 3-((5)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноило си)-4,5-бис (((5 -2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)метил)-2-метилпиридиний (S)-2-(6- мето синафт-2-ил)пропаноата (соединение I).
Помещают 82.0 г соединения IV в круглодонную колбу, добавляют 1 л ацетона и перемешивают смесь в течение 10 минут. К полученному раствору добавляют 18.22 г (S)- 2-(6-метокси-2-нафтил)пропионовой кислоты (напроксена) III и перемешивают до полного растворения осадка. Ацетон удаляют в вакууме на роторном испарителе (90 об/мин, остаточное давление 10 мбар, температура 40 °С). Осадок собирают и сушат в вакууме на роторном испарителе (90 об/мин, остаточное давление 10 мбар, температура 80 °С). Выход заявленного соединения I 100.1 г (99,9 %).
Т. пл. 145 °С. [а]24о = + 22.8° (с = 3.01, СН2С12). Спектры поглощения растворов соединения формулы I снимают в ацетонитриле и метиленхлориде в диапазоне длин волн от 200 до 450 нм, при этом они содержат максимумы поглощения при 262, 272, 317 и 332 нм. Отклонения положения максимумов составляют ± 2 нм. Концентрация растворов 40 мкг/мл. В спектре ЯМР 1H наблюдаются следующие сигналы (400 МГц, CDC13, δ, м.д., J/Гц): 1.33 (уш д, 3 Н, СН3, 3J= 3.7); 1.40 (д, 3 Н, СН3, 3J= 7.1); 1.50 (д, 6 Н, 2СН3, 3J= 7.1); 1.90 (уш с, 3 Н, СН3); 3.47 (уш с, 1 Н,); 3.65 (к, 1 Н, СН, 3J = 7.1); 3.74 - 3.87 (м, 13 Н); 4.50 (уш с, 1 Н); 4.80 (уш с, 1 Н); 4.95 и 5.04 (АВ, 2 Н, СН2, 2J = -12.8); 6.95 - 7.66 (м, 20 Н), 8.19 (с, 1 Н, СН). В спектре ЯМР 13С наблюдаются следующие сигналы (100 МГц, CDCI3, δ, м.д.): 17.96; 18.42; 18.52; 18.92; 45.02; 45.34; 45.38; 55.40; 57.13; 61.65; 105.66; 105.73; 119.09; 1 19.13; 1 19.18; 1 19.38; 125.96; 126.09; 126.16; 126.20; 126.38; 126.57; 127.30; 127.36; 127.49; 128.96; 129.01 ; 129.39; 129.64; 133.78; 133.81 ; 133.86; 134.05; 134.13; 135.18; 135.21 ; 135.42; 136.16; 144.78; 147.16; 152.75; 157.74; 157.79; 157.96; 171.95; 174.02; 179.30.
Целевое вещество I представляет собой соль соединения IV с напроксеном. В связи с этим в условиях обращеннофазной ВЭЖХ (таблица 1) оно проявляется на хроматограмме в виде двух пиков, соответствующих соединению IV и напроксену, масс- спектры которых соответствуют расчетным и литературным данным (806.3324 и 229.0870, соответственно).
Исследование острой токсичности соединения формулы I
Эксперимент проводили по методу фиксированной дозы на крысах линии Wistar обоего пола, по 6 голов в группе. Начальная доза для исследования при внутрижелудочном введении составляла 5000 мг/кг. В качестве растворителя использовали 0.5 % раствор Твин-80 (Твин 80 - полиоксиэтилен, производное сорбитана и олеиновой кислоты, коммерчески доступный полимер), который готовили растворением 0.5 г Твин-80 в 100 мл дистиллированной воды.
Для приготовления дозы 5000 мг/кг взвешивали навеску 25 г исследуемого соединения в полистирольных лодочках на весах Vibra (Shinko Denshi, Япония, кат. N° AF225DRCE), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 % водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи диспергатора SilentCrusher (Heidolph, Германия, P/N 595-06000-00-3) до однородной консистенции.
Введение осуществляли животным, лишенным корма (на промежуток времени не менее 8 часов) со свободным доступом к воде. Объем введения рассчитывали индивидуально для каждого животного, основываясь на массе тела, зарегистрированной непосредственно перед введением вещества. Доступ к корму возобновляли через час после введения. Животных наблюдали индивидуально после введения на протяжении 30 минут, затем не реже раза в час на протяжении 4-х часов, далее ежедневно 1 раз в день в течение 14 дней. Массу тела регистрировали непосредственно перед введением препарата для расчета объема введения, далее 1 раз в два дня. Если животное умирало в течение исследования, устанавливали и документировали время гибели с максимально возможной точностью. Животное взвешивали и вскрывали, как можно раньше. Умирающих животных взвешивали, подвергали эвтаназии и вскрывали. Животных подвергали эвтаназии методом ингаляции углекислым газом. Расчет токсических доз ЛДю, ЛД16, ЛД50 и ЛД84 производили с использованием пробит-анализа в программном обеспечении IBM SPSS Statistics. При внутрижелудочном введении в дозе 5000 мг/кг наблюдалось небольшое угнетение активности животного. Через 20-30 минут данный симптом исчезал. Через 1.5-2 часа животные начинали принимать корм и воду. Через трое суток пала 1 крыса (самка). Далее на протяжении исследования падежа не наблюдалось.
На протяжении всего эксперимента все основные показатели жизнедеятельности у подопытных животных соответствовали норме и не отличались от контрольных. У животных отмечался хороший аппетит, блестящая шерсть, видимые слизистые оболочки были бледно-розового цвета, поведение соответствовало данному виду животного, никаких отклонений при наблюдении выявлено не было. Масса тела крыс через 2 и 4 дня после начала эксперимента увеличивалась на (1-4) % и (2-6) %, соответственно, что приблизительно соответствует приросту массы у крыс контрольной группы. На восьмые сутки исследования масса животных увеличивалась на (2-8) %. На конец эксперимента повышение массы составило (5-13) %. Параметры острой токсичности представлены в таблице 2.
Таблица 2
Острая токсичность соединения формулы I при внутрижелудочном введении
Figure imgf000013_0001
В конце эксперимента проводили эвтаназию и патоморфологическое вскрытие контрольных и подопытных животных. При вскрытии крыс никаких изменений не наблюдалось. Трупы животных правильного телосложения, средней или выше средней упитанности. Естественные отверстия: рот - закрыт, язык находится в ротовой полости, слизистая оболочка губ, десен бледно-розовые гладкие, блестящие. Носовые отверстия - слизистая бледно-розовая, сухая, истечений нет, проходимость хорошая. Ушные раковины без изменений, наружный слуховой проход чистый. Анус - закрыт, слизистая оболочка бледно-розовая. Шерсть удерживается хорошо, шерстный покров блестящий. Кожа эластичная, подкожная клетчатка хорошо выражена, желтоватого цвета, эластичная. Мышцы красноватого цвета, хорошо развиты, сухожилия и связки белого цвета, эластичные, прочные. Конфигурация костей и суставов не нарушена. Положение органов грудной и брюшной полостей анатомически правильное. Жидкости в грудной и брюшной полостях нет. Проходимость глотки и пищевода не нарушена. Сердце в объеме не изменено. В полостях сердца содержится незначительное количество несвернувшейся крови, эндокард гладкий, блестящий. Легкие бледно-розового цвета, равномерно окрашенные, без признаков отечности, дольчатость выражена хорошо. Селезенка не увеличена в объеме, края острые, продолговатой формы, упругой консистенции, красно-коричневого цвета. Печень не увеличена в размере, края острые, форма не изменена, консистенция плотная, цвет красно- коричневый. Желудок содержит кормовую массу серого цвета, однородной консистенции. Слизистая оболочка желудка бледно-серого цвета. Слизистая оболочка тонкого и толстого отделов кишечника бледно-розового или бледно-серого цвета. Почки бобовидной формы, темно-коричневого цвета, в околопочечной клетчатке содержится умеренное количество жира, капсула отделяется легко, граница между корковой и мозговой зонами выражена. Мочевой пузырь пустой или переполнен мочой светло-желтого цвета, слизистая оболочка бледно-розового цвета. Половые органы без отклонений. У самцов семенники упругой консистенции, находятся в полости мошонки, имеют эллиптическую форму. У самок яичники и матка в норме. Головной мозг не отечен, мозговое вещество упругой консистенции, без кровоизлияний.
Таким образом, проведенные исследования показали, что заявленное соединение формулы I при внутрижелудочном введении относится к 4 классу опасности, т.е. к малоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности") и по безопасности, выраженной значением летальной дозы ЛД50, превосходит большинство известных на сегодняшний день НПВС (таблица 3). Например, заявленное соединение в 8 раз менее токсично в сравнении с напроксеном.
Таблица 3
Сравнительные характеристики соединения формулы I и некоторых известных НПВС эд50 УД50/ ЭД50 ЛД50/ ЭД50
(мг/кг)
Препарат УДзо лд50 (индекс (терапевтический острое (мг/кг) (мг/кг)
безопасности) индекс) воспаление
Соединение
19 > 2000 > 5000 > 105 > 263 формулы I
Ибупрофен 48 310 750 6.45 16
Диклофенак натрий 8 48 370 6 46
Напроксен 15 49 620 3.2 42
Пироксикам 20 36 290 1.8 15
Фенилбутазон 56 120 430 2.1 7.7
Ацетилсалициловая
98 240 1600 2.45 16 кислота
Индометацин 10 10 47 1 4.7 * Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова.— М.: Гриф и К, 2012.— 944 с.
Гастротоксичность соединения формулы I
При исследовании гастротоксичности использовали самок и самцов крыс линии Wistar в возрасте 6-7 недель, с массой тела 180-220 г. Количество животных в каждой группе составляло 10 голов.
Соединение формулы I вводили однократно внутрижелудочно крысам, лишенным пищи за 16 ч до исследования. Через 3 ч после введения суспензии исследуемого вещества в дозе 2000 мг/кг (в 0.5% водном растворе Твин-80) животных подвергали эвтаназии, извлекали желудки, рассекали их по малой кривизне и промывали в физиологическом растворе для удаления содержимого.
Оценку гастротоксичности проводили по 4-балльной шкале:
0— отсутствие повреждений;
0.5— гиперемия;
1— единичные незначительные повреждения (1 или 2 точечных кровоизлияния);
2— множественные повреждения (эрозии, точечные кровоизлияния);
3 — значительные и множественные повреждения слизистой (эрозии, кровоизлияния) ;
4— грубые повреждения, охватывающие всю поверхность слизистой (массивные кровоизлияния, эрозии, перфорации).
По результатам оценки определяли УД5о — дозу исследуемого вещества, вызывающую гастротоксический (ульцерогенный) эффект, соответствующий 2 баллам.
Для приготовления дозы 2000 мг/кг взвешивают навеску 32.0 г соединения формулы I в полистирольньгх лодочках на весах Vibra (Shinko Denshi, Япония, кат. Ν« AF225DRCE), переносят в мерную колбу объемом 400 мл класса точности А, доводят до метки 400 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивают при помощи диспергатора SilentCrusher (Heidolph, Германия, P N 595-06000-00-3) до однородной консистенции. Введение крысам осуществляют в объеме не более 5 мл/200 г.
Животные подвергались эвтаназии методом ингаляции углекислым газом.
При однократном введении соединения формулы I в дозе 2000 мг/кг гастротоксическое действие соответствовало в среднем 0.6 баллам у самцов крыс и 0.4 баллам у самок (таблица 4). Таблица 4
Гастротоксичность соединения формулы I при однократном введении в дозе 2000 мг/кг
Figure imgf000016_0001
Таким образом, для соединения формулы I значение УД50 > 2000 мг/кг, что превосходит аналогичный параметр для большинства НПВС (таблица 3). Например, заявленное соединение в 40 раз менее гастротоксично в сравнении с напроксеном.
Противовоспалительная активность соединения формулы I in vitro
Структурный фермент циклооксигеназа 1 (ЦОГ 1) экспрессируется в различных типах клеток и участвует в обеспечении их нормальной (физиологической) функциональной активности. Циклооксигеназа 2 (ЦОГ 2) ответственна за синтез простагландинов в условиях сильного воспаления.
Анализ активности ЦОГ заключался в измерении пероксидазной активности циклооксигеназы. В ходе реакции PGG2 (простагландин G2) с ADHP (10-ацетил-3,7- дигидрофеноксазин), представленном в используемом наборе («Cyclooxygenase (СОХ) Activity Assay Kit (Fluorometric)» (Biovision, кат N° К 549-100) в виде СОХ probe, образуется флуоресцентный компонент резоруфин, длина волны поглощения которого составляет 530-540 нм, длина волны испускания - (585-595) нм. Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна остаточной активности ЦОГ в образце. В качестве источника фермента циклооксигеназы были выбраны клетки фибробластов кожи (HSF). Было показано, что клеточный лизат фибробластов обладает активностью ЦОГ, равной 2.131 μυ/mg.
Приготовление клеточного лизата. Клетки фибробласты кожи (2-6 х 106) промывают единожды 10 мл фосфатного буфера. Ресуспендируют в 5 мл буфера и переносят клетки в 15 мл пробирку. Центрифугируют при 1500g в течение 4-х минут. Далее сливают супернатант, ресуспендируют клеточный осадок в 0.5-1 мл холодного лизирующего буфера с протеазным коктейлем (примерно 0.4 мл буфера на 100 мкл клеточного осадка), и центрифугируют при 4 °С в течение 15 мин при 10000g. Отделяют супернатант и используют его в качестве источника ЦОГ. Приготовление реагентов. Растворяют СОХ кофакторы в 200 раз, добавляя 2 мкл кофакторов к 398 мкл буфера сразу перед использованием. Смешивают 65 мкл арахидоновой кислоты и 65 мкл NaOH, затем разбавляют в 10 раз, добавив 1 170 мкл дистиллированной воды. Раствор стабилен в течение 1 часа.
Готовят реакционную смесь (для 2-х параллельных лунок), смешав следующие реагенты, указанные ниже:
- СОХ probe - 2 мкл;
- растворённый кофактор - 4 мкл (стабилен в течение 1 часа);
- клеточный лизат - 20 мкл;
- с помощью СОХ буфера доводят объём до 172 мкл.
Приготовление тестируемых веществ:
Используют стоковые растворы напроксена и вещества формулы I в диметилсульфоксиде (ДМСО) концентрацией 1000 мкМ для приготовления предварительных разведений с шагом в 2 раза. Получают соответственно 5 концентраций от 62.5 до 1000 мкМ.
Используя мультиканальную пипетку, добавляют реагенты в соответствующие лунки планшета: сначала реакционную смесь, затем растворы тестируемых веществ в ДМСО в ряду концентраций и контрольных веществ (ингибитор ЦОГ 1 SC560 и ингибитор ЦОГ 2 Celecoxib), чистый растворитель ДМСО (для лунок с высшей активностью). Используют две повторности. Инкубируют в течение 5 минут.
Инициирование реакции. До начала реакции проводят однократное измерение флуоресценции во всех лунках планшета для учёта собственного сигнала тестируемых и контрольных веществ. Затем во все лунки планшета с помощью мультиканальной пипетки добавляют 10 мкл раствора арахидоновой кислоты для инициирования реакции. После добавления арахидоновой кислоты немедленно начинают измерять флуоресценцию (Ex/Em = 535/587нм) в кинетическом режиме каждые 15 секунд в течение 30 мин.
Параметр флуоресценции образов с контрольными и тестируемыми веществами вычисляют по формуле:
Average Net RFU = Average RFU - Average Blank RFU
Процент ингибирования ЦОГ вычисляют по формуле: Далее по имеющимся точкам данных для исследуемого вещества и вещества сравнения (напроксена) строят наиболее подходящую сигмоидную кривую ингибирования. Исходя из этой кривой, вычисляют 1С 0 тест-препарата для ЦОГ.
Согласно рекомендациям производителя используемого набора, ингибитор ЦОГ-1 SC560 и ингибитор ЦОГ-2 целекоксиб добавляют в реакционную смесь в объеме по 2 мкл (этого количества достаточно для полного ингибирования соответствующей изоформы). Остаточная активность ЦОГ, содержащейся в клеточном лизате после обработки SC560 и целекоксибом, составляет соответственно 72.8% и 32.0%.
При исследовании ингибирующей активности концентрация напроксена и исследуемого вещества в лунке составляет от 1.25 до 20 мкМ.
Для определения доли ингибирования препаратом каждой из изоформ тестируют исследуемые вещества в раскладке концентраций в присутствии селективного ингибитора ЦОГ 1 SC560, а также в присутствие селективного ингибитора ЦОГ 2 целекоксиб. Ингибитор добавляют в количестве, достаточном для полного ингибирования соответствующей изоформы фермента, при этом другая изоформа сохраняет активность.
Условно приняв активность в присутствие только тестового препарата за 100%, рассчитывают остаточную активность ЦОГ 1 и ЦОГ 2 и процент ингибирования каждой изоформы препаратом. Соединение формулы I проявляет преимущественную ингибирующую активность по отношению к изоформе ЦОГ-2.
Таким образом, 1С50 напроксена (прототип) составляет 9.56 мкМ, что в 1.25 раз больше 1С5о соединения формулы I, равной 7.7 мкМ. Из вышесказанного можно сделать вывод, что заявленное соединение формулы I более эффективно в качестве ингибитора циклооксигеназы, поскольку действует при более низкой концентрации.
Противовоспалительная активность соединения формулы I in vivo
Эксперимент проводили с использованием самок и самцов крыс линии Wistar в возрасте 6-7 недель с массой тела 180-220 г. Количество животных в каждой группе составляет 10 голов.
Острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводили субплантарным (под подошвенный или плантарный апоневроз) введением 0.1 мл 1 % раствора каррагенина (сульфатированный полисахарид из ирландского морского мха). Выраженность воспалительной реакции оценивали через 3 ч после индукции воспаления по изменению объема лапы (онкометрически). Вещество формулы I вводили зондом в желудок за 1 ч до введения 1 % раствора каррагенина. В качестве негативного контроля использовали 0.5 % раствор Твин-80. Противовоспалительный эффект, оцениваемый по уменьшению отека, выражали в процентах к контролю. По результатам действия четырех доз исследуемого вещества проводили расчет ЭД50.
Для приготовления дозы 50 мг/кг взвешивали навеску 1000 мг соединения формулы I в полистирольных лодочках на весах Vibra (Shinko Denshi, Япония, кат. Ng AF225DRCE), переносили в мерную колбу объемом 200 мл класса точности А, доводили до метки 200 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи диспергатора SilentCrusher (Heidolph, Германия, P/N 595-06000-00-3) до однородной консистенции. Введение крысам осуществляли в объеме не более 1 мл/100 г. Концентрация полученного раствора 5 мг/мл.
Для приготовления дозы 20 мг/кг брали 40 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи диспергатора до однородной консистенции.
Для приготовления дозы 10 мг/кг брали 20 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи магнитной мешалки MR Hei-Standard (Heidolph, Германия) до однородной консистенции.
Для приготовления дозы 5 мг/кг брали 4 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи магнитной мешалки до однородной консистенции.
Животных наблюдали индивидуально после введения на протяжении 30 минут, затем не реже раза в час на протяжении 4-х часов. Массу тела регистрировали непосредственно перед введением препарата для расчета объема введения.
Животных подвергали эвтаназии методом ингаляции углекислым газом.
При введении дозы 50, 20, 10 и 5 мг/кг соединения формулы I самцам крыс наблюдалось снижение воспалительного отека на 62.34, 51.25, 23.57 и 12.39 %, соответственно, в отличие от контрольной группы. У самок крыс при введении дозы 50, 20, 10 и 5 мг/кг соединения формулы I отек снижался на 65.47, 67.89, 38.64 и 13.37 %, соответственно. Результаты представлены в таблице 5. Таблица 5
Влияние соединения формулы I
на острое экссудативное воспаление при внутрижелудочном введении
Figure imgf000020_0001
По результатам статистической обработки полученных данных ЭД5о соединения формулы I на самцах составляет 23 мг/кг, на самках 14 мг/кг. Среднее значение ЭД50 без деления на пол составляет 18.5 (~ 19) мг/кг.
Согласно литературным данным, ЭД50 напроксена составляет 15 мг/кг, ибупрофена - 48 мг/кг, диклофенака натрия - 8 мг/кг, пироксикама - 20 мг/кг, фенилбутазона - 56 мг/кг, индометацина - 10 мг/кг, ацетилсалициловой кислоты - 98 мг/кг [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с]. Таким образом, заявителем экспериментально доказано наличие высокой противовоспалительной активности соединения формулы I, которая по своему значению превосходит (в четырех случаях из семи) или сопоставима с противовоспалительной активностью современных НПВС.
Обезболивающее действие соединения формулы I
При исследовании обезболивающих свойств соединения формулы I использовали самок и самцов крыс линии Wistar в возрасте 6-7 недель, с массой тела 180-220 г. Количество животных в каждой группе составляло 10 голов. Хроническое иммунное воспаление моделировали у крыс субплантарным введением в правую заднюю лапу 0.1 мл 1% раствора каррагенина (сульфатированный полисахарид из ирландского морского мха). Вещество вводили внутрижелудочно с применением желудочного зонда. В качестве препарата сравнения использовали напроксен, в качестве негативного контроля использовали 0.5% раствор Твин-80. Противовоспалительный эффект, оцениваемый по уменьшению отека, выражали в процентах по отношению к контролю; по результатам действия четырех доз исследуемого вещества проводили расчет ЭД50.
Воспалительную гиперальгезию (повышенную болевую чувствительность воспаленных тканей у крысы) вызывали каррагенином и оценивали по снижению порога болевой чувствительности - ПБЧ (по разности ПБЧ) на механическое раздражение (сдавливание) тканей лапы животного до введения каррагенина и через 3 ч после него. Измерение проводили на воспаленной лапе. Используемый анальгезиметр Ugo Basile S.R.L. (Италия) обеспечивает плавное увеличение нагрузки на воспаленную лапу крысы до появления болевой реакции (оцениваемой по писку животного или отдергиванию лапы). Исследуемые вещества вводили через 2 ч после введения каррагенина. Обезболивающий эффект с определением ЭД50 оценивали по снижению гиперальгезии через 1 ч после внутрижелудочного введения испытуемых веществ. Увеличение порога болевой реакции под влиянием исследуемых веществ выражался в повышении силы сдавливания конечности и характеризовал выраженность обезболивающего действия препарата. После эксперимента животные подвергались эвтаназии методом ингаляции углекислым газом.
Для приготовления дозы 50 мг/кг взвешивали навеску 1000 мг соединения формулы I в полистирольных лодочках на весах Vibra (Shinko Denshi, Япония, кат. N° AF225DRCE), переносили в мерную колбу объемом 200 мл класса точности А, доводили до метки 200 мл 0.5%-ным водным раствором Твин-80 и суспензию диспергировали при помощи диспергатора SilentCrusher (Heidolph, Германия, P/N 595-06000-00-3) до однородной консистенции. Введение крысам осуществляли в объеме не более 1 мл/ 100 г. Концентрация полученного раствора составляла 5 мг/мл.
Для приготовления дозы 20 мг/кг брали 40 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5%-ным водным раствором Твин-80 и суспензию диспергировали при помощи диспергатора до однородной консистенции. Для приготовления дозы 10 мг/кг брали 20 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5%-ным водным раствором Твин-80 и суспензию перемешивали при помощи магнитной мешалки MR Hei-Standard (Heidolph, Германия) до однородной консистенции.
Для приготовления дозы 5 мг/кг брали 4 мл раствора с концентрацией 5 мг/мл (50 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5%-ным водным раствором Твин-80 и суспензию перемешивали при помощи магнитной мешалки до однородной консистенции.
Результаты эксперимента представлены в таблице 6.
Таблица 6
Обезболивающий эффект соединения формулы I на крысах
Figure imgf000022_0001
Из представленных результатов следует, что заявленное соединение формулы I проявляет выраженный обезболивающий эффект уже в дозе 5 мг/кг, в то время как напроксен (прототип) оказывает аналогичное воздействие лишь в дозе 15 мг/кг, что является доказательным фактом его более высокой эффективности. Таким образом, терапевтический индекс (ЛД50/ЭД50) заявленного соединения в плане его обезболивающей активности составляет более 1000 против 42 у напроксена, а индекс безопасности (УД50/ЭД50) - более 400 против 3.2 у напроксена.
Жаропонижающий эффект соединения формулы I на крысах
При исследовании жаропонижающих свойств соединения формулы I использовали самок и самцов крыс линии Wistar в возрасте 6-7 недель, с массой тела 180-220 г. Количество животных в каждой группе составляло 10 голов. Лихорадочную реакцию вызывали подкожным введением 20 % суспензии пекарских дрожжей. Ректальную температуру измеряли электротермометром до введения дрожжей и через 18 ч после него (разница этих измерений представляет собой оцениваемую гипертермическую реакцию). Препарат вводили животным на пике гипертермии однократно (через 18 часов). Жаропонижающее действие оценивали по уменьшению гипертермии через 2 ч после введения исследуемого вещества, далее регистрацию динамики эффекта проводили через часовые промежутки в течение 7 ч.
Для приготовления дозы 75 мг/кг взвешивали навеску 1500 мг соединения формулы I в полистирольных лодочках на весах Vibra (Shinko Denshi, Япония, кат. No AF225DRCE), переносили в мерную колбу объемом 200 мл класса точности А, доводили до метки 200 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи диспергатора SilentCrusher М (Heidolph, Германия) до однородной консистенции. Введение крысам осуществляли в объеме не более 1 мл / 100 г. Концентрация полученного раствора 7.5 мг/мл.
Для приготовления дозы 50 мг/кг брали 66.7 мл раствора с концентрацией 7.5 мг/мл (75 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи диспергатора до однородной консистенции.
Для приготовления дозы 20 мг/кг брали 26.7 мл раствора с концентрацией 7.5 мг/мл (75 мг/кг), переносили в мерную колбу объемом 100 мл класса точности А, доводили до метки 100 мл 0.5 %-ным водным раствором Твин-80 и суспензию препарата размешивали при помощи магнитной мешалки MR Hei-Standard (Heidolph, Германия) до однородной консистенции. За параметр снижения гипертермии принимали разницу температуры после введения препарата и температуры после 18 часовой индукции дрожжами.
Животные наблюдались индивидуально после введения на всем протяжении исследования. Масса тела регистрировалась непосредственно перед введением препарата для расчета объема введения. Для всех данных применялась описательная статистика: подсчитывали среднее значение и стандартную ошибку среднего, которые представляли в итоговой таблице 7. Для статистического сравнения экспериментальных групп между собой использовали непараметрический критерий Уилкоксона. Различия определяли при 0.05 уровне значимости. Статистический анализ проводился с использованием программы R- studio. Результаты исследования жаропонижающего действия различных доз соединения формулы I представлены в таблице 7. Таблица 7
Жаропонижающая активность соединения формулы I
Figure imgf000024_0001
* - р<0.05 в сравнении с напроксен ом
Через 18 часов после подкожного введения суспензии пекарских дрожжей в группах животных наблюдалось достоверное повышение ректальной температуры в среднем на 1.5° С. В течение всего срока наблюдения (до 7 часов после введения препаратов) в контрольной группе животных снижения температуры не наблюдалось. При введении соединения формулы I и самцам, и самкам в дозе 20 мг/кг жаропонижающего действия не наблюдалось. При повышении дозы до 50 мг/кг отчетливое снижение температуры наблюдалось в группе самок - так, через 2 и 3 часа после введения вещества температура была ниже чем до введения на 0.9° С, через 4, 5, 6 и 7 часов после введения уменьшение составило (0.5-0.7)° С. При введении соединения формулы I в дозе 50 мг/кг ощутимое уменьшение температуры наблюдалось через 3-4 часов после введения. Уровень снижения был равен (0.34-0.97)° С
Наибольший эффект наблюдался в группах животных, которым вводили соединение формулы I в дозе 75 мг/кг. Так, при введении вещества в дозе 75 мг/кг на протяжении всего эксперимента температура значительно снижалась и была меньше чем до введения на (0.76-1.5)° С.
При введении напроксена в дозе 15 мг/кг (или 65 мкмоль/кг) температура также снижалась значительно. Уровень снижения температуры составил (0.74-1.6)° С.
Обобщая полученные результаты, следует заключить, что в дозе 75 мг/кг заявленное соединение обладает жаропонижающими свойствами на уровне напроксена в дозе 15 мг/кг. Особо следует отметить, что в мольном выражении эти дозы практически не отличаются, поскольку молярная масса напроксена значительно ниже молярной массы соединения формулы I, и составляет 230 г/моль против 1036 г/моль заявленного соединения. Терапевтический индекс (ЛД5о/ЭД5о) заявленного соединения в плане его жаропонижающей активности составляет более 67 против 42 у напроксена, а индекс безопасности (УД50/ЭД50) - более 27 против 3.2 у напроксена.
Таким образом, из вышеописанного следует, что заявителем получено новое соединение на основе пиридоксина и напроксена - 3-((8)-2-(6-метоксинафт-2- ил)пропаноилокси)-4,5-бис (((8)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноилокси)метил)-2- метилпиридиний (8)-2-(6-метоксинафт-2-ил)пропаноат, которое обладает одновременно высокими противовоспалительными, обезболивающими и жаропонижающими свойствами, превосходящими или сопоставимыми с аналогичными свойствами напроксена (прототипа), сохраняя при этом крайне низкую токсичность (в том числе гастротоксичность) .
В целом заявленное соединение в 8 раз менее токсично и в 40 раз менее гастротоксично в сравнении с напроксеном (прототипом).
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, т.к. из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, совпадающие с заявленным по существенным признакам, приводящим к реализации заявленных технических результатов, которыми являются новые производные пиридоксина и напроксена, обладающее низкой токсичностью, в том числе гастротоксичностью. Заявленное химическое соединение расширяет ассортимент средств для лечения ревматических заболеваний, а также заболеваний, сопровождающихся воспалением, болью и лихорадкой, при этом является принципиально новым, не имеющим аналогов в мире по достигнутой эффективности и безопасности применения.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, т.к. не является очевидным для специалистов в данной области техники, а именно, из исследованного уровня техники не выявлены противовоспалительные, обезболивающие и жаропонижающие препараты заявленной структуры.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», т.к. может быть реализовано на любом специализированном предприятии с использованием стандартного оборудования, известных отечественных материалов и технологий. Заявителем в условиях лаборатории получен целевой продукт - нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, с заявленными техническими результатами и достигнуты все заявленные цели.

Claims

Формула изобретения
Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена формулы (I):
Figure imgf000027_0001
I
обладающее противовоспалительной, обезболивающей и жаропонижающей активностью, а также пониженной острой токсичностью и гастротоксичностью.
PCT/RU2017/000808 2016-11-02 2017-10-31 Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью WO2018084748A1 (ru)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201900245A EA034652B1 (ru) 2016-11-02 2017-10-31 Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью
CN201780067702.3A CN109923103B (zh) 2016-11-02 2017-10-31 具有低胃毒性的基于萘普生的非甾体抗炎药
JP2019545236A JP6757858B2 (ja) 2016-11-02 2017-10-31 低胃毒性のナプロキセン系非ステロイド性抗炎症薬
EP17866960.2A EP3517525B1 (en) 2016-11-02 2017-10-31 Naproxen-based non-steroidal anti-inflammatory drug with low gastric toxicity
US16/399,590 US10507202B2 (en) 2016-11-02 2019-04-30 Naproxen-based non-steroidal anti-inflammatory drug with low gastric toxicity
US16/715,976 US10688084B2 (en) 2016-11-02 2019-12-16 Method of use of novel naproxen derivatives

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016143071A RU2629367C1 (ru) 2016-11-02 2016-11-02 Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью
RU2016143071 2016-11-02

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US16/399,590 Continuation US10507202B2 (en) 2016-11-02 2019-04-30 Naproxen-based non-steroidal anti-inflammatory drug with low gastric toxicity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018084748A1 true WO2018084748A1 (ru) 2018-05-11

Family

ID=59797861

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2017/000808 WO2018084748A1 (ru) 2016-11-02 2017-10-31 Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью

Country Status (7)

Country Link
US (2) US10507202B2 (ru)
EP (1) EP3517525B1 (ru)
JP (1) JP6757858B2 (ru)
CN (1) CN109923103B (ru)
EA (1) EA034652B1 (ru)
RU (1) RU2629367C1 (ru)
WO (1) WO2018084748A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112034074B (zh) * 2020-09-22 2022-07-26 杭州市食品药品检验研究院(杭州市医疗器械检验研究院、杭州市药品与医疗器械不良反应监测中心) 测定禽畜肉中的七种非选择性环氧化酶抑制药物残留的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4260613A (en) * 1978-07-31 1981-04-07 Crinos Industria Farmacobiologica S.P.A. Pyridoxine derivatives
RU2513089C1 (ru) * 2012-09-13 2014-04-20 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Нестероидные противовоспалительные средства на основе производных пиридоксина

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6051587A (en) * 1998-04-16 2000-04-18 Medicure, Inc. Treatment of iatrogenic and age-related hypertension and pharmaceutical compositions useful therein
US20100221337A1 (en) 2007-02-14 2010-09-02 Logical Therapeutics, Inc. Method of treating arthritis, pain or inflammation with naproxen 2(methanesulfonyl)ethyl ester and an h2 receptor antagonist
CN101550119B (zh) 2009-05-11 2012-05-30 无锡宏瑞生物医药科技有限公司 芳基(乙)丙酸抗坏血酸酯,其制备方法及含有它们的药物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4260613A (en) * 1978-07-31 1981-04-07 Crinos Industria Farmacobiologica S.P.A. Pyridoxine derivatives
RU2513089C1 (ru) * 2012-09-13 2014-04-20 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) Нестероидные противовоспалительные средства на основе производных пиридоксина

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3517525A4 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109923103B (zh) 2022-08-30
CN109923103A (zh) 2019-06-21
US10507202B2 (en) 2019-12-17
EP3517525B1 (en) 2020-08-19
EA034652B1 (ru) 2020-03-03
JP2019537627A (ja) 2019-12-26
JP6757858B2 (ja) 2020-09-23
EP3517525A1 (en) 2019-07-31
US20190255030A1 (en) 2019-08-22
EP3517525A4 (en) 2019-11-06
US20200147067A1 (en) 2020-05-14
RU2629367C1 (ru) 2017-08-29
US10688084B2 (en) 2020-06-23
EA201900245A1 (ru) 2019-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tozkoparan et al. Preparation of 5-aryl-3-alkylthio-l, 2, 4-triazoles and corresponding sulfones with antiinflammatory–analgesic activity
Fadaly et al. New 1, 2, 4-triazole/pyrazole hybrids linked to oxime moiety as nitric oxide donor celecoxib analogs: Synthesis, cyclooxygenase inhibition anti-inflammatory, ulcerogenicity, anti-proliferative activities, apoptosis, molecular modeling and nitric oxide release studies
Li et al. Anti-inflammatory and gastrointestinal effects of a novel diclofenac derivative
Huang et al. Ethanesulfohydroxamic acid ester prodrugs of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs): synthesis, nitric oxide and nitroxyl release, cyclooxygenase inhibition, anti-inflammatory, and ulcerogenicity index studies
Özadalı et al. Synthesis and biological evaluation of isoxazolo [4, 5-d] pyridazin-4-(5H)-one analogues as potent anti-inflammatory agents
Labib et al. Design, synthesis of novel isoindoline hybrids as COX-2 inhibitors: Anti-inflammatory, analgesic activities and docking study
Abdellatif et al. Synthesis, cyclooxygenase inhibition, anti-inflammatory evaluation and ulcerogenic liability of novel triarylpyrazoline derivatives as selective COX-2 inhibitors
Tozkoparan et al. Design and synthesis of some thiazolotriazolyl esters as anti-inflammatory and analgesic agents
Rosa et al. Isoniazid-resveratrol cocrystal: a novel alternative for topical treatment of cutaneous tuberculosis
Akhter et al. Synthesis and pharmacological evaluation of 3-diphenylmethyl-6-substituted-1, 2, 4-triazolo [3, 4-b]-1, 3, 4-thiadiazoles: A condensed bridgehead nitrogen heterocyclic system
Bala et al. Design, characterization, computational studies, and pharmacological evaluation of substituted-N′-[(1E) substituted-phenylmethylidene] benzohydrazide analogs
Hu et al. Discovery of 2-phenyl-3-sulfonylphenyl-indole derivatives as a new class of selective COX-2 inhibitors
Hussein Synthesis, anti-inflammatory, and structure antioxidant activity relationship of novel 4-quinazoline
El-Nagar et al. Novel N-substituted 5-aminosalicylamides as dual inhibitors of cyclooxygenase and 5-lipoxygenase enzymes: Synthesis, biological evaluation and docking study
Abdellatif et al. Design, synthesis of celecoxib-tolmetin drug hybrids as selective and potent COX-2 inhibitors
CA2827887A1 (en) No- and h2s-releasing compounds
RU2629367C1 (ru) Нестероидное противовоспалительное средство на основе напроксена, обладающее низкой гастротоксичностью
Ushiyama et al. Preclinical pharmacology profile of CS-706, a novel cyclooxygenase-2 selective inhibitor, with potent antinociceptive and anti-inflammatory effects
WO2012112670A1 (en) Novel lipogenic inhibitors and uses thereof
Alam et al. Synthesis and characterization of biologically active flurbiprofen amide derivatives as selective prostaglandin-endoperoxide synthase II inhibitors: In vivo anti-inflammatory activity and molecular docking
Abdellatif et al. Diazen-1-ium-1, 2-diolated nitric oxide donor ester prodrugs of 5-(4-carboxymethylphenyl)-1-(4-methanesulfonylphenyl)-3-trifluoromethyl-1H-pyrazole and its aminosulfonyl analog: Synthesis, biological evaluation and nitric oxide release studies
Shrivastava et al. Synthesis, evaluation and docking studies of some 4-thiazolone derivatives as effective lipoxygenase inhibitors
US20080114038A1 (en) Drugs Derived from Diclofenac Containing No-Donor Heterocycles, Composition and Method of Inflammation Treatment
Abdellatif et al. A diazen-1-ium-1, 2-diolated nitric oxide donor ester prodrug of 3-(4-hydroxymethylphenyl)-4-(4-methanesulfonylphenyl)-5H-furan-2-one: Synthesis, biological evaluation and nitric oxide release studies
Vahedpour et al. Synthesis and Biological Evaluation of 1, 3, 5‐Trisubstituted 2‐Pyrazolines as Novel Cyclooxygenase‐2 Inhibitors with Antiproliferative Activity

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17866960

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019545236

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017866960

Country of ref document: EP

Effective date: 20190424