WO2018074951A1 - Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения - Google Patents

Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения Download PDF

Info

Publication number
WO2018074951A1
WO2018074951A1 PCT/RU2017/050108 RU2017050108W WO2018074951A1 WO 2018074951 A1 WO2018074951 A1 WO 2018074951A1 RU 2017050108 W RU2017050108 W RU 2017050108W WO 2018074951 A1 WO2018074951 A1 WO 2018074951A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
protein
sponge
agents
solution
serum
Prior art date
Application number
PCT/RU2017/050108
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владимир Иосифович ЛОЗИНСКИЙ
Илья Александрович РОДИОНОВ
Арчил Важаевич ЦИСКАРАШВИЛИ
Николай Александрович ЕСЬКИН
Original Assignee
Балабаньян, Вадим Юрьевич
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Балабаньян, Вадим Юрьевич filed Critical Балабаньян, Вадим Юрьевич
Publication of WO2018074951A1 publication Critical patent/WO2018074951A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy

Definitions

  • the invention relates to interdisciplinary technical solutions combining the chemistry of macromolecular compounds, medicine, biotechnology and the development of functional biomaterials based on natural biopolymers - proteins. More specifically, the invention relates to macroporous. Protein lips having antibacterial activity and methods for their preparation.
  • the claimed aitibacter sponge includes go to the main plasma protein - serum albumin, or total serum white or total plasma protein [Peters T. All About Albumin: Biochemistry, Genetics, and Medical Application. ⁇ London: Academic Press; 1995.
  • various polymeric spongy materials are known, including sponges based on protein substances of nature that are: used in the treatment of wounds and: burns [M.I. Shtil.ai ,: Introduction to the technology of medical-biologically beneficial polymers. M ,: yz-in RKhTU * 2000 .. 247 e.]. These sponges: have a common specific property —— pronounced sorption: ability with respect to liquid exudate secreted early or by a burn htt -: w ⁇ eira ⁇
  • Rozekfeld MA Leonova VB, Sorokina OL, Lomakin SM., Kovarskzh..A. Free-radical crosslinking of serum albumin molecules on the surface of magnetite nanoparticles in aqueous dispersion / Coll. 2013.V. 75. 1. S.9-16]. It is proposed to use such protein materials as carriers for the controlled release of drugs, as well. as well as. biaeecific sorbents, sorbcion matrices of extracorneal devices for blood detoxification, etc. [Londblad RL Biotechnology of Plasms Proteins. / CRC Press * Boca Raton ea, 2013. P.83-182].
  • the molecular weight of the materials is characterized by gel microporosity, i.e. if any soluble agents exhibiting a drug effect are included in the volume of the gel matrix, then when such material is placed in excess fluid (in particular, blood, exudate, wound or burn medium) the release of such medicinal agents (for example, painkillers, antibiotics, etc.) into the external liquid will be low, determined by their slow diffusion in the mass of the gel and further from it.When then a similar gel containing in its volume p vysuishvaetsya fouling of aq ble substance and placed in a Zateev '* excess liquid drug release rate still more, the degree is reduced, since additional time is required ua. slow swelling of the dried polymer. These properties such shadow systems containing medicinal agents and called their "depot -forms ”are the disadvantage of microporous protein gels in the case of the use of similar materials in medical systems.
  • the resulting gel protein material has a microporous structure which allows only slow diffusion-limited antibakterilvog ⁇ release agent, in this case - of copper ions, or their transition to the state at rastvorimoe- biodegradation, protein-based material iodo- action of proteinases patient. Therefore, to create high therapeutic concentrations of the aatibacterial agent necessary in the case of severely infected wounds, it is required to use large volumes of gel material, which is often technically more complicated than surgical procedures (surgical intervention, dressings, etc.), as well as expensive from an economic point of view.
  • polymeric, including protein materials obtained by the so-called cryostructure methods such as crotron gel formation, lyophilization, cryoextraction
  • cryostructure methods such as crotron gel formation, lyophilization, cryoextraction
  • cryogels and cryostructures A characteristic feature of all types of cryogels and cryostructures is their macro porosity, formed by polycrystals of a frozen solvent, after either melting, go sublimation, or cryoextraction of which communicating pores of capillary size remain in the sample mass [Lstsky V.K. New family of macroporous and super-macroporous materials - polymer cryogeds. // News. RAS, Ser, chem. 2008.J S 5, S. 996-1013; Okay O., Lozimky, V, I. Synthesis, siracture-property relationships of cryogds. / Adv. Polym. Sci. 2014. V.263. P.103-157].
  • a hemostatic sponge from vative plasma is used, obtained by lyophilization of blood plasma, the main protein component of which, as you know, is Serum .. albumin [Lundbiad RX. Biotechnology of Plasma Proteins. .// CC Press, Boca Raton ea f 2013. P.83-I82],
  • Such a sponge has a pronounced hemostatic effect, but is very fragile and also quickly dissolves in the biological fluid of the wound hap: .// znaiH, ni // art / 40Q23 0600.pIip] . , which is a functional drawback of this and similar materials.
  • a macroporous albumin lyophilized composition is known. It has a sponge texture and has ' activity. To induce an immune response to fdavi mustache. ⁇ D.Kvel m, D.E.W.W.W.T.T. L. Dejorj, P. Charatjaro, Lyophilized composition for inducing an immune response to flavivirus, composition and method for its preparation // Pat. RF Ms 25417S4 (2007); B.I. s 5 (2015)].
  • This protein sponge is obtained from a composition comprising certain concentrations of a lively attenuated virus and a logically active ingredient of the composition.), A stabilizer (serum albumin is used as such in this known invention), components of a buffer solution, lactose and amorphous mannitol .
  • the corresponding liquid composition is frozen in a multi-stage mode and lyophia is dried, but during drying also stepwise changing the parameters (vacuum and temperature) of the process.
  • the result is a macroporous protein product, which is an albumin sponge containing a decarticulate agent (in this case, attenuated viral particles), which has the target biological activity - the ability to induce the body's immune response to infection with flaviviruses.
  • the main advantages of such a protein sponge are transportation stability and good storage of a biologically significant component.
  • One of the main drawbacks is the fast solubility of the albumin sponge in physiological media (this does not allow prolongation of the manifestation of biological aggonosegae).
  • composition of this spongy proteinaceous material does not provide for the use of any agents with antibacterial activity, which increases the risk of microbial contamination of both the material itself and the surgical null, where it is introduced during surgery and the body.
  • the claimed antibacterial protein sponge for chemotherapy of infected wounds contains one or more medicinal agents
  • the protein base of the sponge includes either serum albumin, go total blood serum, or total plasma protein, blood, and the drug agent or agents possess antibiotic activity against pathogenic microorganisms-organisms-vasobuyteley purulent inflammations.
  • the inventive antibacterial protein sponge is formed by freezing a solution containing either serum albumin, or total white blood serum, or total blood plasma protein, holding it in a frozen state, then thawing, washing the formed protein sponge - not.
  • Antibacterial-protein sponge can be made of any geometric shape: in the form of blocks, plates, disks, granules, particles of irregular shape (obtained by grinding the block), tubes, etc. and included in its structure one or more substances having antibiotic activity are not limited to Embodiments vshteperecht- years E, and their range can easily be expanded depending on the type of infection, for which suppression "is meant a specific type antibacterial sponge.
  • the protein base of the sponge consists of either serum albumin, or total blood serum protein, or total blood plasma protein, which are non-toxic absolutely biocompatible components that do not need to be removed from the wound ” can be left where iodine subsequently gradually dissolves the action of proteolytic enzymes of the patient’s body itself.
  • serum albumin or total blood serum protein, or total blood plasma protein, which are non-toxic absolutely biocompatible components that do not need to be removed from the wound ” can be left where iodine subsequently gradually dissolves the action of proteolytic enzymes of the patient’s body itself.
  • Included as part of 'sponge such drugs having antibiotic activity against pathogens causative purulent inflammations, belong to different groups of antibiotics authorized domestic and international armakopeyam-i. for use in medical practice.
  • the concentration of albumin or the sum of plasma proteins and. serum in the initial solution was found experimentally and is in the range of 3-6 wt.%. At a lower than 3 wt.% Content, the resulting protein sponge has low strength, poorly retains its shape and integrity when manipulated in physiological environments .. Great concentration.' the protein in the initial solution exceeds 6 wt.%, the resulting protein sponge, on the contrary, is too hard and brittle in dry form, and poorly absorbs liquid in the aquatic environment due to insufficient porosity.
  • urea and cytéine additives in the amount of May 6-18 are introduced into the composition of the initial solutions. n 0.1.-0.2 wt.%, respectively. These substances are necessary for the cryotropics of gelation of proteins with the formation of intermolecular cystine bridges, which ensures the integrity of the sponge in aqueous media and its rather slow biodegradation when located in the wound space.
  • concentration ranges of these substances were found experimentally: when their content in the initial solution is less than the lower limits, the protein sponge does not retain its own. integrity after thawing of the frozen system, and if the upper limits are exceeded, instead of a spongy cryogel, a viscous turbid colloidal solution is obtained.
  • drugs substances having an antibiotic zcgivmos' in relation to pathogenic microorganisms that cause purulent inflammation are introduced into the protein base after it is formed, washed and squeezed from free fluid, namely, at the stage of swelling sponges in a solution of antibiotics or a mixture of antibiotics, ⁇ concentration - in such a solution was also found experimentally and is determined, firstly, by the solubility of a particular substance or mixture of substances and, secondly, if ETS -antibyotika- or: a mixture of antibiotics, which must be entered into the final product. By varying the concentrations of such a solution, it is easy to regulate the drug content in the resulting antibacterial protein sponge.
  • the concentration of the antibiotic in the solution for swelling is 2 wt.% And, when necessary, higher. At a lower rate than the lower value, the amount of antibiotic in the sponge is insufficient to achieve a positive therapeutic effect.
  • the upper limit of the concentration in the solution for swelling of the spongy protein base depends on the solubility of a particular antibiotic or mix them,
  • the process of obtaining the inventive antibacterial protein sponge includes the following stages:
  • This process flow chart provides for the production of the inventive material, while it is preferable to carry out the indicated steps under sterile conditions.
  • the modes of freezing the initial solutions and keeping them in the frozen state were determined experimentally.
  • the inventive method for producing an antibacterial protein sponge involves the implementation of these processes at -! 0, ..- 30 ° € for 6-36 hours.
  • the upper limit of the tempered temperature range is due to the fact that at a higher subzero temperature due to the effects of supercooling of the composition of the claimed composition often do not freeze, and using a temperature below -30 ° C is impractical, because in this case, the efficiency of crotrosch-south geodeobrazyl in these systems sharply decreases, which is manifested in a decrease in the yield of the cross-linked ' protein cryogel and in the deterioration of its spongy texture.
  • washing of the resulting protein from the sponge were not included in its composition of proteinaceous components, and 't: urea additives and cysteine, preferably carried out by known methods using sterile water. Oglshm free liquid from the washed sponge realize at loads not 'pa resulting davlyv ngyu and destruction of soft spongy protein material.
  • the inventive conditions for the swelling of a washed and squeezed from a free liquid protein sponge in a solution of one or several antibiotics are determined by the needs of a particular technological process. If it is desirable to carry out the process quickly, but not achieve equilibrium of swelling and maximum saturation of the sponge with medicine, swelling can be carried out with moderate heating (i.e., at 30-35 ° C) for 3-5 hours. If the maximum possible saturation of the sponge antibiotic, a longer swelling period (up to 24 hours) and its carrying out at a low (10 ... 5 ° C) positive temperature is preferable.
  • FIG. 1 Results of determining the in vitro activity (sludge-DNFF sultry method) of antibacterial protein sponges obtained in Example 1 (a-c) from bovine serum albumin (BSA) and loaded with vancomycin (B), gentin ncinum (G) and clarithromy (K ) ;, test culture - Staphylococcus aureus MRSA.
  • Phage 2 .. antibacterial protein sponges obtained in example 1 (a-b) from bovine serum albumin (BSA) and non-cohabitated genital mutilation. and Vanko Itsiom:
  • FIG. 3 The results of determining the activity in vitro (disco-diffusion method) of asbacterins of protein sponges obtained according to example 2 (b-d) from total protein blood serum of sheep (CCO) and loaded with vancomycin (B), hectamycin (G) and clarithromshdan (K); test culture - Escherichia coii sp.
  • FIG. 4 The results of determining the activity in vUm (DMS-Diffuse method) of antabactrid protein sponges obtained in Example 3 (c ⁇ d) from the total human blood plasma (OIC) and loaded with vancomycin (B), gentamish (D) and yuritromidine ( TO); test training? Pseusortiortas- mruginosa & s herichia cali sp.
  • protocol KU 1 (a-c) table of examples
  • An aqueous solution containing 4 wt.% Bovine serum albumin (BSA), 12 wt.% Urea and O L wt.% Cysteine is poured into a 0.5 cm high layer in flat-bottomed glass vials with an inner diameter of 1 cm, which are placed in an F- ultracryostat chamber 32 (Juiabo, Germany), where the contents of the vials are frozen at -20 ° ⁇ for 18 h and then thawed at room temperature. Sponge-formed albumin disks formed in this way are washed from soluble components with sterile water.
  • BSA Bovine serum albumin
  • Urea 12 wt.% Urea
  • O L wt.% Cysteine is poured into a 0.5 cm high layer in flat-bottomed glass vials with an inner diameter of 1 cm, which are placed in an F- ultracryostat chamber 32 (Juiabo, Germany), where the contents of the vials are frozen at -20 ° ⁇ for
  • the cups were incubated in a thermostat at a temperature of 35 ° C for 18-24 hours. Reactions were taken into account by measuring (in mm) the zone of growth inhibition of the test culture by a microorganism around the test sample. It was found (Fig. 1) that around the albumin sponge with vaicomidia, growth retardation of St. cells aureus M SA was 27 mm; sponge with Ghent schnu TM 24 mm; sponges with clarshromidine - 0 mm (this was due to the resistance of the culture to this antibiotic),
  • Example ' 2 An antibacterial protein sponge formed according to protocol 2 (bd); example tables .:
  • Freshly irradiated Aries blood serum with a total protein content of May 7.6.% Is diluted with sterile water in such a way that the protein concentration is 4.5 wt. .
  • Urea and cysteine are added to the resulting solution in an amount corresponding to their concentration in the mixture on May 14 and 0.18%, respectively.
  • Such a liquid system is dispensed in portions of 0.4 ml into TO-mm wells of a plastic plate, which are placed in an RL 48RRGSW freezer (Samsung, South Korea), where the contents of the wells are frozen at -18 ° C for 24 hours, a. then thawed at room temperature.
  • the sponge-shaped protein disks formed in this way are washed from soluble components with sterile water.
  • the washed protein disks are squeezed from unbound water on filter paper and placed either in an aqueous solution (3.5 wt.%) Of vancomycin (Teva, Israel), or gentamntsiyiina (Borisov factory of medical equipment, Republic of Belarus), or clarithroschidine (Abbott, France), where they are incubated for 24 hours at 5 ° C with periodic stirring.
  • the spongy disks swollen in an antibiotic solution are transferred to a Petri dish, frozen by known methods and freeze-dried using an ALPHA 1-2 LD plus freeze dryer (Martin Christ, Germany).
  • the resulting dry preparations are stored in a sealed container at -20 * ⁇ .
  • Example 3 An antibacterial protein sponge formed according to the protocol of the Sv-d table of examples.
  • the washed protein sponges are squeezed from unbound water on filter paper and placed either with an aqueous solution of vancomitia (leva, Israel) ( May 5%), or geshamtashimna (Borisov factory of medical drugs. Republic of Belarus) (4 wt.), Or clarithromycin (Abbott , France) (May 6,%), where 18 is incubated at ⁇ * ⁇ with periodic stirring.
  • Protein sponges swollen in an antibiotic solution were labeled on a Petri dish, frozen by known methods, and lyophid was dried using a Fteezone 1L sublimation unit (I.abconco, USA). The resulting dry preparations are stored in a sealed container at -20 C.
  • the inventive spherical antibacterial sponge loaded with antibiotics can quickly achieve high drug concentrations in an infected wound, which creates conditions for intensive destruction of purulent microflora in it and promotes effective wound cleansing.
  • This is ensured by the specific structure of the inventive sponges with a large number of communicating capillary macronores, which makes it possible to achieve high therapeutic concentrations of the antibacterial agent necessary in the case of severely infected wounds, and in this case it is necessary to use large (as in the case of analogues) volumes of material, simplifies ongoing surgical procedures " .: (surgical intervention, dressings, etc.), and also reduces treatment costs,
  • albumin sponges In contrast to medicinal components, rapidly dissolving albumin sponges on. the basis of simply lyophilized-dried albumin as in the type-claimed technical solution allows to obtain protein sponges not only from isolated serum of albumin, but also from more economically available blood serum and whole blood plasma, and also provides slow absorption of the protein sponge in vivo, t .e. It has a prolonged action.
  • the claimed technical solution does not use any special forms of precursors such as exclusively amorphous makiite, as in the prototype method, which simplifies the process of obtaining the target product.
  • the advantages of the claimed antibacterial protein sponges also include: a) simplicity and ease of use for doctors and patients; b) the effectiveness of the application, safety and safety of changing dressings; c) the ability of such drugs to destroy bacterial biopdeics both on imdlants, so and on bmologic tissues; d) the ability to provide a high concentration of antibiotic in areas with low perfusion of blood in tissues; e) due to the high concentration of amyogyashedzids and cyclically gdikopeptidov (for example, " gemetyamycin.
  • the inventive antibacterial protein sponges exhibit a fic effect due to the slow release of active components (antibiotics) as the protein base is biodegradable. Possessing rbtsiyoyany, necrolytic ' sk ' them, antibacterial. stimulating properties, the preparations contribute to a multicomponent directed action on the processes of reparative regeneration of purulent wounds, which allows us to recommend such antibacterial protein sponges for clinical use.
  • the most effectively claimed technical solution and the antibacterial protein sponges obtained according to it can be used in the following field of practical medicine: a) in purulent surgery (treatment of abscesses and phlegmon); b) atopic orthopedics herbs (prophylaxis and treatment of post-trauma!
  • BSA - bovine serum albumin: CCA - pig serum albumin; HSA - human blood serum albumin; C C - common
  • PCT total calf plasma protein PKL - total horse protein; G Ch ⁇ - ⁇ total white blood plasma of a person.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Изобретение относится к макропористом- функциональным.бноматериадам. на основе природных биополимеров, в частности к макропористым белковым губкам, обладающим антибактериальной активностью, которые могут быть использованы для биомедмцишжих целей. Предложенная антибактериальная губка для химиотерапии инфицированных ран включает иди сывороточный альбумин, или суммарный белок сыворотки крови, или суммарный белок плазмы крови, а также один иди несколько агентов с антибиотической активностью в отношении патогенных микроорганизмов - возбудителей гнойных воспалений. Разработан способ получения вышеуказанной белковой губки, включающий замораживание раствора исходных -ингредиентов при -10...-30°С, выдерживание в замороженном состоянии, оттаивание, промывку образовавшейся белковой губки, механический отжим жидкости ш промытой белковой губки, набухание отжатой губки в растворе одного или нескольких агентов, обладающих антибиотической активностью, замораживание набухшей белковой губки и ее высушивание лиофйлизацией. В качестве агентов, обладающих антибиотической активностью, можно использовать такие.препараты, как ванкомиции, линкомицин, кларитромидии, тобрамиции,. гентамицин иди их смеси, концентрация которых в губке составляет 2 мас.% или выше.

Description

.АНТ АКтаР ДЛЬНА . БЕЛКОВАЯ ГУБКА ДЛЯ ХММИОТЕРАОИЖ
ИНФИЦИРОВАННЫХ РАН И СПОСОБ ЕЕ 1ХС УШЫЙЯ
Изобретение относится к междисциплинарным техническим решениям, объединяющим химию высокомолекулярных соединений, медицину, биотехнологию и разработку фуккцион гьмы биоматериалов на основе природных биополимеров- - белков, Более конкретно изобретение касается обладающих антибактериальной активностью макропористых .белковых губо и способов их- получения. В частности, заявляемая аитибактрнаяьная губка включает иди основной белок плазмы крови - сывороточный альбумин, или суммарный бело сыворотки крови, или суммарный белок плазмы крови [Peters Т. All About Albumin: Biochemistry, Genetics, and Medical Application. β London: Academic Press; 1995. 432 ,], а также один иди несколько- агентов с антибиотической активностью, нрожтадащих своё действие в отношении патогенных мйкроорган ов^юзбу дитеяей гнойны воспалений:. Наиболее эффективно заявляемый материал может быть исдадьжадан для биоме ицирских целей, например, в качестве средства для лечений гйойно^некротических ран.
В частности, известны различные полимерные -губчатые материалы, включая и губки на основе, веществ белковой, природы, которые: используются при лечении ран и: ожогов [М.И.Штил.ъ аи,: Введение в технологию полимеров медико-бйодогаческого назначения. М,: йз-во РХТУ* 2000.. 247 е.]. Эти губки: имеют общее специфическое свойство -— выраженну сорбциониуто: способность по отношению к жидком экссудату, выделяемому рано или ожогом htt -: w^^eira ^^
Извес ными примерами белковых материалов такого тина являются г остатичеекие кодлагеиовые губки Ш :/ Ше<аед^^ Как правило, абсорбционна способность подобных покры ий на раны и ожоги обусловлена снстемой капилляров, лронизьшающиХ: хорошо смачиваемую биологической жидкостью полимерную матрицу. При этом растворимые вещества, первоначально входящие в состав таки губок, например, кровоостанавливающие агенты, высвобождаются в жидкую фазу.
Известен ряд материалов биомедицинекого назначения на основе сывороточного альбумина, которые получаю различными способами, наиболее часто - посредством гелеобразования растворов этого белка, например,- вызываемого нагреванием [Gosai W.S., Ross-Murphy S.B, Globular protein gelation //€щт. Opinion. Coll. Interface S . 2000. V.5. s 3- 4, Р. -194; Clark AM ' ,.. Tuffmtl CD, Small-angle X-ray-scattering studies of thermally- RU2017/050108
Induced globular protein gels / Int. J. Peptide Protein Res. 1980. V.16. s 4. P.339-351], воздействием высокого давления [Galazka V,B., Dickinson £., Ledward DA. influence of high pressure processing on protein solutions' and emulsions /' Curr. Opinion Coll Interface Sci. 2000. V.5. 3-4. P.182- 187], денатурацией белка ПАВ'а я или эмульгированием водной фазы в гидрофобных жидкостях [Автуит С.С,, Николаев БМ., Шляхов A.M. Структурирование белков в эмульсиях вода~м'асл.о согласно Ш-5!МР данным // Колл. ж. 1993. Х.5.5. 1. С, 3-5], а также ковалентаь сшиванием белковых макромолекул химическими кросс-агентами или облучением {Hopwo' od В, A comparison of the eross!inkmg abilities of gluiaraidchyde, formaldehyde and alpha-hydroxyadipaldehyde with bovine serum albumin and casein, is Histochemistry 1969, VJ 7. a 2. РЛ 51-16.1; Vermonden T, Censi if., Hennik W.E. HydmgeLs for protein delivery С hem. Revs. 20.12. V.1 12. Ke 5. P.2S53- 2888; Бычкова Α.Β,. Розекфельд M.A., Леонова В. Б., Сорокина О. Л., Ломакин СМ., Коварскж..А Свободно-радикальное сшивание молекул сывороточного альбумина на поверхности наночастиц магнетита в водной дисперсии / Колл, ж. 2013. Т.75. 1. С.9- 16]. Подобные белковые материалы предложено использовать в качестве носителей для контролируемого высвобождения лекарств, а. также как. бяоеиецифические сорбенты, сорбцйонные матрицы экстракорноральных устройств для детокеикацйи крови и др. [Londblad R.L. Biotechnology of Plasms Proteins. / CRC Press* Boca Raton e.a, 2013. P.83- 182].
Структуре такого. "тала белковы материалов свойственна гелевая микропористость, т.е. если в объем гелевой матриц включены какие-либо растворимые агенты, проявляющие лекарственное действие, то при помещении такого материала в избыток жидкости (в частности, кровь, экссудат, раневую иди ожоговую среду) скорость высвобождения таких лекарственных агентов (например, болеутоляющих средств, антибиотиков и др.) во. внешнюю жидкость будет невысокой, определяющейся их медленной диффузией в массе геля и далее из него. Когда же подобный гель, содержащий в своем объеме растворимые вещества высуишвается и лишь зате помещается в' избыток жидкости* интенсивность высвобождений лекарства еще в большей, степени снижается, т.к. требуется дополнительное время иа. медленное набухание сухого полимера. Указанные свойства таких теневых систем, содержащих лекарственные агенты и называемые их «депо-формами», являются недостатком микропористы белковых гелей в случае применения, подобных материалов в оно медицин ких системах.
Например, известна групп белковых материалов на основе сывороточного альбумина, химически сшитого с пектином, и. содержащая ионы меди в качестве антибактериального агента {RJJarris, W.N' asi. Gels tor use in wound management // WO 2008015475], Такого типа обладающий антибактериальной активностью белковый материал получают из содержащего добавки соли меди водного раствора смеси сывороточного альбумина и пектина химическим сшиванием этих биополимеров с по ощью водорастворимого карбодиимида. При определенных соотношения указанных ингредиентов образуются гидрогели, которые предложено использовать для лечения различных, в том числе и инфицированных, рай. Это техническое .решение имеет ряд недостатков. Так, получаемый гелевы белковый материал обладае микропористой структурой,, котора обеспечивает только медленное диффузионно-ограниченное высвобождение антибактерильвог© агента, в данном случае - ионов меди, либо их переход в растворимое- состояние при биодеградации, белковой основ материала иод- действием протеиназ организма пациента. Поэтому для создания высоких терапевтических концентраций аатибактерильного агента, необходимых в случае сильно инфицированных ран, требуется использовать большие объемы гелевог материала, что часто технически осложняе проводимые хирургические процедуры (оперативное вмешательство, перевязки и т.д.), а также дорого с экономической точки зрений. Для гелеобразов&ния через химическо сшивание биополимеров, входящих в 'состав материала, применяется водорастворимый карбодиимид (конкретно, 1-эттш-З- (диме ил иеопропил)-карбодимид), непрореашро-вавшая часть которого та и остается в объеме теля и никак оттуда не удаляетс каким-либо промыванием. Поэтому, при помещении образовавшего геля в рану возникает опасность токсического воздействи такого карбодиимида на организм пациента за сче нежелательной химической модификации собственных белков и пептидов организма. Поскольку данное техническое решение предусматривает получение конечного белкового материала только' во влажно виде, то храмммость подобного изделия невысока, также резке увеличиваютс издержки на т шспортировк материала, т.к. в его составе приходится перевозить просто 80-90% воды.
В свою очередь, в тех случаях, когда необходимо быстро обеспечить высокую терапевтическую дозу лекарственного агента, лучше подходят крупионористые материалы, у которых основная транспортная функция обеспечивается не медленной диффузией, а конвекцией жидкости по системе общающихся пор капиллярного размера.
В частности, такой специфической микроструктурой обладают полимерные, в то числе и белковые, материалы, получаемые методами так называемого крио- структурирования - крмотронным гелеобразоваиием, лиофилизацией, криоэкстракпией [Лощнекий В, И. Криогели на основе природных и синтетических полимеров; получение, свойства и области применения // Успехи химии. 2002, Ί771. 6, C,559-S8S ,. Lozinsky Kl, Okay О, Bask principles of eryotropic. gelation / Adv. Polym, Sci. 20.14. V.263. P ,49-101]. Характерная особенность все типов криогелей и криоструктуратов - их макро- пористость, формируемая поликристаллами замерзшего растворителя, после или плавления, иди сублимации, или криоэкстракции которых в массе образца остаются сообщающиеся поры капиллярной величины [Лсттский В.К Новое семейство макропористых и сверхмакропористых материалов бкотехиологического назначения ·- полимерные криогеди. // Известия. РАН, Сер, хим. 2008. .J s 5, С.996-1013; Okay О., Lozimky, V,I. Synthesis, siracture-property relationships of cryogds. / Adv. Polym. Sci. 2014. V.263. P.103-157].
Например, в медицинской практике применяется гемостатическая губка из вативной плазмы, получаемая лиофилизацией плазмы крови, главным белковым компоненто которой, как известно, является Сывороточный.. альбумин [Lundbiad RX. Biotechnology of Plasma Proteins. .// C C Press, Boca Raton e.a.f 2013. P.83-I82], Такая губка обладает выраженным кровоостанавливающйм действием, но очень хрупкая и к тому же быстро растворяется в биологической жидкости раны hap:.//znaiH,ni//art/40Q23 0600.pIip]., что является функциональным недостатком этого и подобных ему материалов.
Известна макропористая альбуминовая лиофилизовам.ная композиция, имеющая текстуру губки и обладающая 'активностью .к индукции иммунного ответа на фдавиви ус. {Д.КВел м, Д.Е.Втсвт.т Л.Деджорж, П. Чаратжаро, Лиофияизованная композиция для индукции иммунного ответа на флавивирус, композиция и способ ее получения // Пат. РФ Ms 25417S4 (2007); Б.И. s 5 (2015)]. Данную белковую губку получают из композиции, включающей определенные концентрации живог ослабленного ф л а вируса ^«но логически-активный- ингредиент композиции .), стабилизатор (в качестве такового в данном известном изобретении используется сывороточный альбумин), компоненты буферного раствора, лактозу и аморфный манйит. Соответствующую- жидкую композицию замораживают в многоступенчато режиме и высушивают лиофия но, в ходе сушки также ступенчато изменяя параметры (вакуум и температуру) процесса. В результате получают- макропористый белковый продукт, представляющи собой альбуминовую губку, содержащую декарствещ й агент (в данном случае, ослабленные вирусные частицы), обладающий целевой биологической активностью - способностью индуцировать иммунный ответ организма на заражение флавивирусами. Основными преимуществами такой белковой губки являются устойчивость при транспортировке и хорошая хранимость биологически-значимого компонента.
Данное техническое решение, как наиболее близкое к заявляемому изобретению в отношении типа белковой основы губки, т.е. сывороточного альбумина и содержание в ней лекарственного агента, а также способа получения, · предусматривающего лиофйлизацию. исходной жидкой композиции, .принято за прототип.
Однако такая биологически-активная белковая губка и. способ ее получения имеют ряд недостатков;
1. Одним из основны недостатков являетс быстра растворимость альбуминовой губки в физиологических средах (это не позволяет достичь пролонгации проявления биологической агшгоноеги).
2. Сложный состав замораживаемой композиции с особыми требованиями к типу одного компонентов - использование исключительно аморфного маннита существенно удорожают конечный продукт.
3. Многостадийный режим замораживан -якофили^ации исходной композиции сильно усложняет способ в делом и снижает его технологичность,
4. Кроме того, в составе данного губчатого белковог о материала не предусматривает использование каких-либо агентов, обладающих антибактериальной активностью, что усиливает опасность микробной контаминации как самого материала, так и операционного ноля, куд он вносится в время хирургического вмешательства а организм.
В этой' связи, задачами предлагаемого изобретени являются как собственн создание нового эффективного материала медицинского назначения - антибактериальной белковой губки, предназначенной для химиотерапии инфицированных ран. та и разработка более технологичного- по сравнению с аналогами м прототипом способа получения этого материала .
Указанные задачи решаются тем, что заявляемая аншбактериальная белковая губк для химиотерагши инфицированных ран содержит один или несколько лекарственны агентов, причем белковая основа губки включает или альбумин сыворотки крови, иди общий бело сыворотки крови, или общий белок плазмы, кров», а лекарственный агент или агенты обладают антибиотической активностью в отношении патогенных микгк оргаиизмов-вазбудйтелей гнойных- воспалений. Заявляемую антибактериальную белковую губку формируют замораживание раствора, содержащего или альбумин сыворотки крови, или общий бело сыворотки крови, или общий белок плазмы крови, выдерживанием, в замороженном состоянии, затем оттаиванием, промывкой образовавшейся белковой губки- от не. вошедших в ее состав компонентов с последующим механически отжимо свободной жидкости из промытой белковой губки, набуханием промытой й отзкатой белковой губки в растворе одного или нескольких агентов, обладающих антибиотической активностью, далее замораживанием набухшей белковой губки и ее высушивание лиофилизацией. При этом замораживание раствора, содержащего 3-6 мас.% или альбумина еьгаоротки крови, или общего белка сыворотки крови, или общего белка плазмы крови,. 6-1:8 - мас.% мочевины и 0.1-0,2 мас.% цистеина, проводят при ~Г0....~30иС » течение 6-36 ч, а набухание промытой и отжатой белковой губки в растворе одного или нескольких агентов, обладающих, антибиотической активностью и выбранных ,и группы, включающей ванкомяция, линкомицин, кларитромицин, торб иции, гентамнцин или их смеси, при концентрации таких агентов, равной или выше 2 мас.%, осуществляют при 5~35l5C в течение 3-2 ч.
Получаемая указанным способом .антибактериальная- белковая губка может быть изготовлена любой геометрической формы: в виде блоков, пластин, дисков,, гранул, частиц неправильной формы (получаются измельчением блока), трубок и др„. а включаемые в ее состав одно или несколько веществ, обладающих антибиотической активностью, не ограничиваютс вьштеперечт- лет ми .вариантами, и их номенклатура может быть легко расширена в зависимости от вида инфекции, для подавления которой' предназначается конкретный тип такой антибактериальной губки.
Конкретные параметры заявляемою технического решени определяются следующими факторами :
1). Состав жтв е.тщ '■аюпиб ёриаяъц белковой губки и растворов, используемых при. ее получении,
Белковая основа губки состоит или из альбумина сыворотки крови, или общего белка сыворотки крови, или .общего- белка плазмы крови, являющихс нетоксйчйымн абсолютно биосовместамыми компонентами, которые не нуждаются в последующем извлечении из раны» могут быть оставлены там, где впоследствии .постепенно рассасываются иод действием протеолитических ферментов самого организма пациента. Входящие же в состав' такой губки лекарственные вещества, обладающие антибиотической активностью в отношении патогенных микроорганизмов-возбудителей гнойных воспалений, относятся к различным группам антибиотиков, разрешенных отечественной, и международными армакопеям-и. для использования в медицинской практике.
Концентрация альбумина или суммы белков плазмы и. сыворотки в исходно растворе найдена экспериментально и находится в пределах 3-6 мас.%. При меньшем, чем 3 мас.% содержании, получающаяся белковая губка имеет низкую прочность, плохо сохраняет форму и целостность при манипуляция в физиологических средах.. Вели же концентрация.' белка в исходном растворе превышает 6 мас,%, получающаяся белкова губка, напротив, слишком жесткая и хрупкая в сухом виде, а в водной среде плохо впитывает жидкость из-за недостаточной пористости.
Помимо белковых компонентов в состав исходных растворов вводятся добавки мочевин и циетеина в количестве 6-18 мае. н 0.1.-0.2 мас.%, соответственно. Эти вещества необходимы для криотропнот гелеобразования белков с образованием межмолекулярных цистиновых мостиков, что .обеспечивает целостность губки в водных средах и довольно медленную ее биодеградацию при нахождении в раневом пространстве. Указанные концентрационные диапазоны этих веществ найдены экспериментально: при их содержании в исходно растворе, меньшем чем нижние пределы, белковая губка не сохраняет своей . целостности после оттаивания замороженной системы, а при превышении верхних пределов вместо губчатого криогеля получается вязкий мутны коллоидный раствор.
Входящие в состав заявляемой антибактериальной белковой губки -лекарственные: вещества, обладающие антибиотической- зкгивмос' о в отношении, патогенных микроорганизмов-возбудителей гнойных воспалений, вводятся в белковую основу после ее формирования, промывки и отжима от свободной жидкости, а именно, .на стадии набухания губки в растворе антибиотиков или смеси антибиотиков, йх концентрация -в таком растворе также найдена экспериментально и определяется, во-первых, растворимостью конкретного вещества или смеси веществ и, во-вторых, количество -антибйотика- или: смеси антибиотиков, которое нужно ввести в конечное изделие. Варьированием концентраций такого раствора легко регулировать содержание лекарства в получаемой антибактериальной белковой губке. Согласно предлагаемому техническому решению концентрация антибиотик в растворе, для набухания равна 2 мас,% и, когда необходимо, выше. При меньшей коицещращш, чем нижнее значение, в губке оказывается количество антибиотика недостаточное для достижения положительного терапевтического эффекта. Верхний предел концентраций в растворе для набухания губчатой белковой основы зависит от растворимости конкретного антибиотика иди их смеси,
2) Режимы осуществления заявляемого технического решения
Процесс получения заявляемой антибактериальной белковой губки включает следующие стадий:
- приготовление исходного раствора;
- его замораживание, выдерживание в замороженном состоянии в течение определенного времени с последующим оттаиванием; - промывку образовавшейс белковой губки от не вошедших в ее состав компонентов;
~ механический отжим свободном жидкости из промытой губки;
- набухание отжатого материала в растворе одного или нескольких веществ, обдад ощих антибиотической активностью;
- замораживание набухшей губки и ее высушивание лнофилизацией.
Данная технологическая схема обеспечивает получение заявляемого материала, при этом предпочтительнее проведение указанных стади в стерильны условиях.
Режимы замораживания исходных растворов и их выдерживания в замороженном состоянии определены экспериментально. Заявляемый способ получения антибактериальной белковой губки предусматривает осуществление этих процессов при - !0, ..-30°€ в течение 6-36 ч. Верхний предел закаляемого температурного диапазона обусловлен тем, что при более высокой минусовой температуре из-за эффектов переохлаждения композиции заявляемого состава часто не замерзают, а использование температу ниже -30°С нецелесообразно, т.к. при этом резко падает эффективност крнотрош-юго гедеобразоваиил в данны системах, что проявляется в снижении выхода сшитого ' белкового криогеля и в ухудшении его губчатой текстуры.
Промывание полученной белковой губки от не вошедших в ее состав белковых компонентов, а также 'т: добавок мочевины и цистеина, проводят известными приемами предпочтительнее с использованием стерильной воды. Оглшм свободной жидкости из промытой губки осуществляю при нагрузках, не 'приводящи ра давлйв нгю и разрушению мягкого губчатого белкового материала.
Заявляемые условия набухания промытой и отжатой от свободной жидкости белковой губки в растворе одного или сме нескольких антибиотиков обусловлены потребностями конкретного технологического процесса. Если желательно провести процесс быстро,, но не добиваться достижения равновесия набухания и максимального насыщения губки лекарством, можно осуществить набухание при умеренном нагревании (т.е. при 30-35°С) в течение 3-5 ч. Если необходимо максимально возможное насыщение губки антибиотиком, то предпочтителен более продолжительный период набухания (до 24 ч) и его проведение при пониженной (10...5°С) положительной температуре.
Замораживание набухшей в растворе антибиотика белковой губки и ее лиофильное высушивание проводится в известных режимах; основное условие этой стадии заявляемого способа ·- строгое предотвращение размораживания образцов и сохранение их стерильности при сбросе .вакуума по окончании сушки. Заявляема* антибактериальная белковая губка, предназначенная для химиотерапии инфицированных рай; способ получения такого .материала* а также заявляемое сочетание признаков, ранее известны не были, то есть предлагаемое техническое решение отвечает критерию «новизна».
Ниже описываются типичные примеры реализации заявляемого технического решения» которые иллюстрируют, но не ограничивают его объем, остальные примеры суммированы в таблице, а приводимые ниже рисунки содержат следующую информацию:
Фиг. 1. Результаты определения активности in vitro (диею-днфф знойный метод) антибактерилъиых белковых губок, полученных по примеру 1(а-в) из бычьего сывороточного альбумина (БСА) и нагруженных ванкомицином (В), гента нцином (Г) и кларитромищшом (К);, тест-культура - Staphylococcus aureus MRSA.
Фаг. 2..
Figure imgf000011_0001
антибактерильных белковых губок, полученны по примеру 1(а-б) из бычьего сывороточного альбумин (БСА) и нш уженных геншмшшном. и ванко ицииом:
а) Фиксация лабораторного животного на предметно столике и .удаление участка волосяного покрова.
б) Подготовка участка дл введения тефлонового кольца.
в) Внешний вид операционного поля после имплантации тефлонового кольца.
г) Инфицирование: раны патогенной культурой мегйцелжн-т езисген ог кгпамма Staphylococcus aureus MRSA.
д) . Изолирование раны от внешней среды с помощью ватно-мардевого тампона. е) Внешний вид раны через 5 суток и отбор пробы на микробиологический анализ. ж) Внесение в инфицированную рану БСА- убки, нагруженной гентамицином. з) Внесение в инфицированную рану .БСА-губ И, нагруженной ваикомицином. и) Внешний вид операционного- поля с БСА -губкой, нагруженной геятамшхииом, через 10 суток после начала лечения.
к) Отбор пробы на микробиологический, анализ из операционного поля с БСА- губкой, нагружённой . гентамицином, через 10 суток после начала лечени .
л) Внешний вид операционного поля с ЕСА-губкой, нагруженной ванкомицином, через 10 суток после начала лечения.
м) Отбор пробы па микробиологический анализ из операционного поля с БСА- губкой, нагруженно ванкомицином, через 10 суток после начала лечения.
Фиг. 3. Результаты определения активности in vitro (диско-диффузионный метод) ашибактерня ны белковых губок, полученных по примеру 2(б-г) из общего, белка сыворотки крови овцы (ССО) и нагруженных ванкомицином (В), гектамицином (Г) и кларитромшданом (К); тест-культура - Escherichia coii sp.
Фиг. 4. Результаты определения активности in vUm (дмско-дйффу знойный метод) антабактсридьных белковы губок, полученных по примеру 3(в~д) ИЗ общего бедка плазмы крови человека (ОИЧ) и нагруженных ванкомицином (В), гентамишшом (Г) и ююритромидином (К); тест-кудътура ? Pseusortiortas- mruginosa&s herichia cali sp.
щ._ 5. /я-!!гуо-оиоте 'гарованйе антибактерюнд-ида белковых губок, полученных по пример З в-д) из общего бедка плазмы крови человек (1ЖЧ) и нагруженных гентамицкиом и ванкомицином :
а) Фиксация лабораторного животного на предметном столика и удаление участка, волосяного покрова на задней нижней конечности.
б) Внешний вид фиксированного раиораепн ителем продольного разреза после рассечения: мышечной фасции,
в) Инфицирование раны, патогенной: культурой ме^це н-| езйе^шта0Го' штамма Staphylococcus aureus.. M RS А.
г) Внешний вид раны через 3 суток после инфицирования,
Figure imgf000012_0001
е) Внесение в ийфицмрованиую рану ЩСЧ-губки. нагруженной ванкомицином. ж) ВнёшнйЙ. вид ушитой раны с имплантированной ПКЧ-губкой. нагруженной гентамнцйном.
з) Внешний вид ушитой ран с имплантированной ПКЧ-губкой, нагруженной .вайкомидииом.
•и) Внешний вид рубца (без признаков воспаления) в области оперативного вмешательства через .1 е ток после имплантации в рану ПКЧ-губки, нагруженной гента ицино ,
к) Внешний вид рубца, (без признаков воспаления) в области бперахйвнош вмешательства через 12 суток после имплантации в рану П -губки, нагруженной ванкомицином,
л) Декаиитаци рубца для микробиологического контроля модели гнойной раны, подвергнутой лечению имдантированной ЖЧ-губкой, натруженной гентамицином,
ц) Декаиитация рубца для микробиолопшеското контрол модели гнойной раны, подвергнутой лечению ймланшрованиой П Ч-губкой, нагружеиной ванкомицином ,
н) Отбор пробы н микробиологический анализ из декапитацироваиноге рубц после лечения модели гнойной раны с помощью ймлаитироваиной ПКЧ-губки. иагру енной гентамивдгаом, о) Отбо пробы на микробиологический анализ да де атштацированного рубца после лечения модели гнойной раны с помощью имлаигированной П Ч-губки, нагруженной ванкомицином.
Пример 1 , Антибактериальная белковая губка, сформированная согласно
протоколу КУ 1(а-в) таблицы примеров.
A) Получение губчатой белковой основы
Водный раствор, содержащий 4 мас,% бычьего сывороточного альбумина (БСА), 12 мас.% мочевины и О Л мас.% цистеина, наливают слое высотой 0.5 см в плоскодюнные стеклянные флаконы е внутренним диаметром 1 см, которые помещают в камеру ультракриостата F-32 (Juiabo, Германия), где замораживают содержимое флаконов при - 20°С в течение 18 ч, а затем оттаивают при комнатной температуре, Сформированные таким образом губчатые альбуминовые диски промывают от растворимых компонентов стерильной водой.
Б) Н ' асыщение белко т губки ткарсттипым вещесщвм, бладающим
н ибиотичёекой тишшстъю в отношении патогенных- микрооргаттюв- возбудителей .гнойных воспалений
Каждый набухший » воде диск помещают на стеклянный фильтр и отжимают несвязанную жидкость под вакуумом водоструйного насоса в течение 1 мин. Затем диски помещают в или водный раство (4 мас.%) ваикомицни (ЕЩ Lilly, США), иди гентамицинина (Борисовский завод едиренаратов, Республика Беларусь), или: кларитроми на (Abbott, Франций), где инкубируют 6 ч при Ю"С с периодическим перемешиванием. Набухшие в растворе антибиотика губчатые диски переносят на чашжу Петри, замораживают известными приемами и высушивают лиофильно с помощью сублимационной установки ALPHA 1 -2 LD plus (Martin Christ, Германия). Полученные сухие препараты хранят » герметичной таре при -20°С.
B) Биотеапировапие а тибт ргшыфй-'белко'вой губки in v ro
Для оценки антимикробной активности образцов альбуминовых губок, полученных по пр. 1а-в. использовали тест-культуру метицешшн-резистенткого микроорганизма, относящегося к виду; Staphylococcus aureus. Микробную взвесь готовили на физиологическом растворе в концентрации, соответствующий стандарту мутности 0,5 Мак Фарлаид, а затем наносили на поверхность агара лера-Хинтона в чашках Петри. •Равномерно распределяли и подсушивали идентично способу определения антибиотщеорезистентноети микроорганизмов диско-диффузным методом. Исследуемые образцы альбуминовых губок (диаметр 10 мм, толщина 8 мм), нагруженны антибиотиками, наносили на поверхность агара. Чашки инкубировали в термостате при температуре 35°С в течении 18-24 часов. Ре ультаты учитывали путем измерения (в мм) зоны задержки роста тест-культуры микроорганизм вокруг исследуемого образца, Найдено (фиг. 1 ), что вокруг альбуминовой губки с ваикомидиио задержка роста клеток St. aureus M SA составила 27 мм, губки с гента шнном ™ 24 мм; губки с кларшромидином - 0 мм (это было обусловлено резистентностью культуры к данному антибиотику),
Г) Биотестиро ние анптбакт ргшльгтй белковой губки ш vivo
Зкеперимеытальяьте исследования вьгао шсь на нелинейных крысах - самцах породы Wistar, массой 250+10 i .y которых "моделировалась гнойная рана для констатации и объективной оценки раневого процесса.
Под утрймышечным к шпеолов м .наркозом животное фиксировали на предметно стояйке, удаляли "волосяной покров на участке размером 3x3 см. (фиг. 2а и 26), иссекали кожу и подкожно жировую клетчатку диаметром 2: см. (314 мм г) и месту-' кожного дефекта шдшиваян тефлоиовое кольцо с бортиком .1 см -такого .же диаметра (фип 2.в). Посл чего; фашйя и предлежащая мышечная ткань, внутри колпачка, раздавливали кодером. В полость колпачка шприцом вводили около 1 мл раствора с патогенной флорой мешцеллни-резистен ного золотистого стафилококка (Stapky!omccm tweus ММ ) в --количестве 10' клеток (фиг. 2г), после чего кольцо изолировали от внешней среды (фит. 2д). На 5-е -сутки с момента моделирования .гаойной раны все З- вотные были вяяь н, за рможеииьши, со сниженной шреесией внешние раздражители, аппетит понижен. Место, отмечался перифокальный -отёк, -в ерем иредх жтдей кожи . но краю раны. В. области раны выраженное гнойное отделяемое, фибринозный налёт с участками некроза (фиг, 2е), При микробиологическом .ис те рваиий биотатов из Области раневого покрытия- выявлено, что степень, обееменённости Staphylococcus aureus MRS А. на грамм ткани было 109 клеток и соответствовало выраженному гнойному процессу. После этого у животных после обработки поверхности раны физиояогаческнм раствором начато местное лечение гнойных ран губками из альбумина, натуженными гентамицином (фиг. 2ж) и ваикомицино (фиг. 2з).
При днйамическом наблюдении за животными, на 4-е .сутки от начала лечения выявлено, что у животных сохранялась контурная инфильтрация вокруг ран, умеренная гиперемия, незначительный отёк, незначительное гнойное отделяемое, наблюдались участки некроза по периметру раны. Но все эти симптомы были менее выражены по сравнению с периодо до нанесение губки. На 4-е, 10-е и 15-е сутки с момента начала лечения производили наанн етри ран. В эти же сроки забирали биопсийиьхй материал дяй микробиологического исследования. Средние сроки очищения ран от гнойных и некротических масс при использовании раствора трипсина в первой фазе травматического воспаления (контрольная группа) составили 1 0»5 суток, а сроки полного заживления - 17±0.3 суток. В группе животных, при лечении которых использовались альбуминовые губки с гентамидином, раньт очищались на 6±0,3 сутки, а заживление происходило 13±0,4 дню. К 1 1 ±0.6 суткам в группе животных, где для лечения использовались альбуминовые губки с ванкомицином, раны полностью очищались от гнойно- некротнческих масс. На 5±0,4 сутки у животны этой группы на фоне очищения ран имели, место- появление мелкозернистой грануляционной ткани. Животные в эти сроки были более активны, в ответ на агрессию, большинство крыс энергично сопротивлялись, потребление пищи возрастало. К 4,5 ±0,5 суткам наблюдения гиперемия вокруг ран не отмечалась, кожа легко собиралась, т.е. было тмечено, уменьшение диаметра. На 10 сутки стала отмечаться краевая зпителязаимя, при этом было выявлено значительное уменьшение размера губок почти на 70% как с гентамвдшном, (фиг. 2и и 2к), так и с ванкомицином (фиг, 2 н 2м), т.е. и постепенное рассасывание, При исследовании микробиологического материала рост патологической микрофлоры не бы обнаружен. Таким образом, продемонстрирована эффективность применеш альбуминовых губок, нагруженных антибиотиками, для химиотерапии инфицированных ран.
Пример '2. Антибактериальная белковая губка, сформированная согласно протоколу 2(б-г); таблицы примеров.:
A) Получение губчатой белковой основы
Свеж&нрлученную сыворотку крови овны с содержание общего белка 7.6 мае.% разбавляют стерильной водой таки образом, чтобы концентрация белка составляла 4.5 мас. . В полученный раствор вносят мочевину н цистеин в количестве, отвечающе их концентрации в смеси 14 и 0.18 мае.%, соответственно. Такую жидкую систему порциями 0,4 мл дозируют в ТО-мм лунки .пластикового планшета, -которые помещают в морозильную камер RL 48RRGSW (Samsung, Ю.Корея), где замораживают содержимое лунок при -18°С в течение 24 ч, а. затем оттаивают при комнатной температуре. Сформированные таким образо губчатые белковые диски промывают от растворимых компонентов стерильной водой.
) Насыщение белковом губки лекарственным вщестом, облагающим
антибиотической активностью в' отношении патогенных, микроорганизмов- возбудителей гнойных воспалений
Промытые белковые диски отжимают от несвязанной воды на фильтровальной бумаге и помещают или в водный раствор (3.5 мас.%) ванкомицина (Teva, Израиль), или гентамнцйиина (Борисовский завод медирвпаратов, Республика Беларусь), или кларитрошидина (Abbott, Франция), где инкубируют 24 ч при 5°С с периодическим перемешиванием. Набухшие в растворе антибиотика губчатые диски переносят на чашку Петри, замораживают известными приемами и высушивают лиофильно с помощью сублимационной установки ALPHA 1-2 LD plus (Martin Christ, Германия), Полученные сухие препараты хранят в герметичной таре при -20*С.
В) Биотестиравапш антибактериальной белковой губки in vitro
Для оценки антимикробной активности образцов белковы губок» полученных по пр. 26~г, используют -тест-культуру микроорганизма, относящегося к виду Escherichia eoii sp. Дальнейшие манипуляции осуществляют аналогично, методикам,, -изложенным в п. "Ё примера I. Найдено (фиг. 3), что вокруг белковой губки с гентамицином задержка роста клеток Escherichia coll sp. составила 36 мм, а губки с ванкомицином и кларитромищ-шом показали минимальный эффект, это обусловлено с высокой резистентностью кишечной микрофлоры к данным .антибиотикам. Таким образом, показана эффективность 'белковых губок, приготовленных да суммарного белка сыворотки крови и нагруженных антибиотиком, активно в отношении кишечных микроорганизмов, при использовании таких депо-форм в качестве антибактериальных препаратов.
Пример 3. Антибактериальная белковая губка, сформированная согласно протоколу Зв-д таблицы -примеров.
А) -Получение губчато белковой основы
Быстрозамороженную плазм крови человека с содержанием общего белка 7.8 мас.% оттаивают при 30°С и разбавляют стерильной водой таким образом, чтобы общая конпентрация белк еоетавд а 4 м:ас,%, В подученный раствор вносят мочевину и цистеин в количестве, отвечающем их концентрации в смеси 13 и 0.13 мас.%, соответственно. Такую жидкую систему порциями 0.15 д дозируют в конические пластиковые флаконы,, -которые герметизируют и помещают в камеру ультракриосгата Proline R.P 1840 (Lauda, Германия), где замораживают содержимое флаконов при -17.5°С в течение 12 ч, а затем оттаивают ' при 4°С. Сформированные таким образом белковые губки, которые имеют форму конуса, промывают от растворимых компонентов стерильной водой .
Б) Насыщение белковой губки лекарственным -вещестом, обладающим
антибтг йче-скОй активностью в отношен ни патогенных микроорганизмов- возбудителей гнойн ых воспален ий Промытые белковые губки, отжимают от несвязанной воды на фильтровальной бумаге и помещают или а водный раствор ванкомицияа (leva, Израиль) (5 мае.%), или гешамташимна (Борисовский завод медпредаратов. Республика Беларусь) (4 мас. ), или кларитромицина (Abbott, Франция) (6 мае.%), где инкубируют 18 при Ш*С с периодическим перемешиванием. Набухшие в растворе антибиотика белковые губки помечают на чашку Петри, замораживают известными приемами и высушивают лиофидывд с помощью сублимационной установки Fteezone 1L (I.abconco, США). Полученные сухие препараты хранят в герметичной таре при -20 С.
В) Вио естиртан е антибактериальной белковой губки in vitro
Для оценки антимикробной активности образцов белковых губок, полученных по ир, З(в-д), используют тест-культуру еинегиойиой палочки. Psemomoms aeruginosa. Дальнейшие манипуляции осуществляют аналогично методикам, изложенным в п. "В" пример 1. Найдено (фиг, 4), что вокруг белковой губки с гентамищгоом задержка роста клеток Ps. aeruginosa составила 44 мм, губки с кларитромицииом - 23 мм. Препарат •белковой губки, нагруженной ванкомшшном, не оказывал воздействи на тест-культуру, что обусловлено с высокой резистентностью еимегнай палочки ж этом антибиотику. Таким образом, доказана эффективность белковых губок», приготовленных, и*, общего белка плазмы крови и натруженных антибиотиками, активными в отношении гидаюстных микроорганизмов, при использовании таких депо-форм в качестве ангибактериальных препаратов.
Г) Би те тировтше антибактериальной · белктай губки in vivo
Экеперимешздьные исследования выполнялись на нелинейных крысах - самцах породы Wistaf, массой 250+10 г, у которых .моделировалась таойная рана для констатации и объективной оценки раневого процесса.
Под внутримышечным калицеодовым наркозом животное . фиксировали на предметном CTOjtffi e и удаляли волосяной покров на задней нижней конечности (бедро) (фиг. Sa). Далее скальпелем выполняли■'продольный 'разрез кожи данной 1 см. рассекали мышечную фасцию и осуществляли доступ к мышцам. Рану в открыто .виде фиксировали рапорасширйтелем. -(фиг. 56). В полость раны шприцом вводили около 1 мл. раствора патогенной микрофлорой метицелин-резиетенгаого золотистого стафилококка 5ir: aureus MRSA в количестве 107 клеток (фиг. 5в) и вьтолняли перевязку инфицированной конечности . Через 72 ч повязку снимали и отбирали .пробу на. микробиологаческоб исследование, показавшее, -степень обсем ённоети патогенной микрофлорой St. aureus MRSA на уровне 109 клеток на грамм ткани, что соответствовало выраженному гнойному процессу (фиг. 5г). Полость раны промывал» 20 мл. физиологического раствора, после чего осуществляли имплантацию белковых губок с гштамищшом (фит, 5д) и ванкомшщном (фиг. 5е) в .раневую полос ь. Далее рану ушивали послойно хирургическим шовным материалом г шйгл1Тк лид ~я т !., плетенный фиолетовый, USP 1 (4raetrie) (фиг. 5 и 5з),
При динамическом наблюдений за животными со следующего дня от начала лечения выявлено, что .животные были активны, со 2-3 дня почти все животные в ответ на агрессию энергично сопротивлялись, потребление пищи возрастало, К 5±{),5 суткам наблюдения гиперемия вокруг ран не отмечалась; через неделю, признаки воспалени уменьшились, Через 7 дней швы были сняты, поверхность кожи через день после снятия швов стала гладкой. Через 12 суток все животные полностью восстановились, наблюдалась картин -полного заживления, рубцы а области оперативного вмешательства были без признаков воспаления (фиг. 5и и 5к). Далее все животные были выведены из эксперимента, под эфирным наркозом произведена декапитация (фиг. 5л и 5м) для микробиологического контроля подвергнутой лечению модели гнойной раны (фиг. 5н и 5о). После 14 суток при микробиологичееко .исследовании материала рост патологической микрофлоры не обнаружен, а сама губка подверглась биодеградации почти на 95- i 00% .
Проведённые наблюдения за клиникой экспериментальных гнойны ран показали, чт использованные в эксперимента белковые губки, нагруягеиные гента ицином и нан мицином, также другими антибитотиками или их смесями (таблица примеров), обладают больше клинической эффективностью. Таким образом, продемонстрирован применимость таких антибактериальных белковых губок, нагруженных антибиотиками,, для. химиотерапии: инфицированных рай.
Заявляемое техническое решение имеет следующие преимущества .перед аналогами и прототипом:
1. По сравнению с аналогами- антибактериальных депо-форм на основе мелкопористых белковых гелей заявляемые шарокодористые антибактериальные губка, нагруженные антибиотиками, позволяют быстро достичь высоких концентраций лекарства в инфицированной ране, что создает условия для интенсивного уничтожения в ней гнойной микрофлоры и способствует эффективному очищению раны. Это обеспечивается специфической структурой заявляемых губок с большим количеством сообщающихс макронор капиллярного размера, что и позволяет добиваться высоких терапевтических концентраций антибашерильного агента, необходимых в случае сильно инфицированных ран, и при этом ие требуется использовать большие (как в случае аналогов) объемы материала, а это существенно упрощает проводимые хирургические процедуры ".: (оперативное вмешательство, перевязки и т.д.), а также снижает затраты на лечение,
2. В отличие от известных- аналогов, где дл гедеобразоваотя через химическое сшивание биополимеров, входящих в состав материала, применяется водорастворимый карбодиимид, непрореагировавшая часть которого остается в объеме геля и никак оттуда не удаляется, т.е. имеется опасность токсического воздействия такого арбодиимида на организм пациента з счет нежелательной химической модификации собственных белков и пептидов организма» в заявляемом способе применяются только нетоксичные, фактически биогенные, ингредиенты (белок, мочевина, цистеин), растворимая часть которых удаляется промывко губки после ее формирования. Таким образом* исключается опасность привнесения токсических веществ с материалом губки, а ее послед}лощее нагружение разрешенными к биомедицинскому применению антибиотиками определяется только допустимыми концентрациями этих веществ.
3. В нро1 шопо о>к;иость: известному аналогу, предусматривающему получение конечного белкового- материала только во влажном виде, заявляемое техническое решение обеспечивает х игото гение сухой формы антибактериальной белковой губки, что резко улучшает показатели хранимости конечного изделия и снижает' издержки на его транспортировк .
4. В противоположность содержащим лекарственные компоненты быстро растворяющимс альбуминовым губкам на. основе просто лиофильно-высушенного альбумина как в про тотипе -заявляемое техническое решение позволяет получать белковые губки не только из изолированного сывороточиОго альбумина, но и из экономически более доступных сыворотки крови и цельной плазмы крови, также обеспечивает медленное рассасывание белковой губки в условиях in vivo, т.е. обладает .пролонгированным действием.
5. В заявляемом техническом решении не используютс какие-либо особые формы предшественников типа исключительно аморфного макийта, как в способе-прототипе, что упрощает процесс получения целевого продукта.
6. Присутствие в заявляемых белковых губках высоких концентраций .веществ с антибактериальной активностью, в частности антибиотиков, обеспечивает надежную защиту препаратов о микробного заражения.
7. К достоинствам заявляемых антибактериальных белковых губок также относятся: а) простота и удобство в использовании для врачей и пациентов; б) эффективность применения, безопасность и азравматичность смены повязок; в) способность таких препаратов разрушать бактериальну биопдеику как на имдлантах, так и на бмологаческих тканях; г) возможность обеспечивать высокую концентрацию антибиотика в областях с низкой перфузией крови в тканях; д) за сче высокой концентрации амииогяшедзидш и циклически гдикопептидов (например» геитамйцина. ■ванко ицииа или кларитро шщна) не позволять развиваться 8 ранах устойчивым штаммам бактерий; д) наблюдаемое в экспериментах местное гемоетатическое действие; е) поскольку заявляемые белковые губки являются биодеградируемы и материалами, то и применение не требует дальнейших манипуляций по удалению губок из рубца уже подвергнутой лечению раны.
8. Заявляемые антибактериальные белковые губки проявляют дюрантное действие благодаря медленному выход активных компонентов (антибиотиков) по мере биодеградащш белковой основы. Обладая рбциояными, некролитиче'ск'ими, антибактериальными. стимулирующими свойствами, препараты способствуют многокомпонентному направленному действию на процессы репаративной регенерации гнойных ран, что позволяет рекомендовать такие антибактериальные белковые губки для клинического применения.
Технический результат
Новая биосовместимая, нетоксичная, со временем рассасывающаяся в ране и эффективно 'Очищающая, ее от патогенных микроорганизмов антибактериальная белковая губка, а также удобный и экономичный способ получения такого материала.
Наиболее эффективно заявляемое техническое решение и получаемые согласно ему антибактериальные белковые губки могут быть использованы в следующи областя практической медицины: а) в гнойной хирургии (лечение абсцессов и флегмон); б) трав атодошй-ортонедии (профилактика и. лечение посттравма! ичеекого и гематогенного остеомиелита - для заполнений полостей после 1репанациош-юй и резекционной ееквестронекрэктомн» пораженных костей, инфекционное поражение мягки тканей, парапрогезиые инфекции крупных и мелки суставов); в) в медицине катастроф и комбуетологаи; г) в общей хирургии (мастэктомии, при лечение диабетических стон, трофических язв, при гепатзктомии и нанкреотомии с целью профилактики и лечения послеоперационных инфекционны осложнений; при -проведений операций удалении части желудочно-кишечного тракта, гелатэкто ии, нанкреотомии и аппендзктомии); д) в кардиохирургии (профилактика и лечение остеомиелита грудины и медиастенита, а также разны инфекционных осложнений); е) в отоларингологии и стоматологии. ТаБ л и да при еро в
Figure imgf000021_0001
со
>
m
_о
5
Figure imgf000022_0001
__1 * БСА - бычий сывороточный: альбумин: CCA - сывороточный альбумин свиньи; ЧСА - альбумин сшоротки крови человека; С С - общий
__:
о белок сыворотки крови крупного рогатого storm; С О - общий белок сыворот^си крр овцы; С Ч - общий белок сыворотки крови человека:
_1 ПКТ общий белок плазмы крови теленка: ПКЛ - общий белок лошади; Г Ч ·-· общий бело плазмы крови человека.
>
со ** Данные но определению активности in vitro (дис о-да фуз-иойный метод) антибактерильных белковых губок (тест-культура/диаметр __:
__1
О области задержки, роста клеток),
ю
со *** Указано время заживления модели наружной гнойной раны (МЯГР) тн модели .полостной гнойной раны (МПГР), ияфишровадаых
шцелйн-резис'гентйьш -штаммом золотистого схаф юко ка Si. щагет MRSA.
**** Эксперименты не проводились..

Claims

ФОРМУЛА Й БРЕТЕВЖЯ
1 . Антибактериальная белковая губка для химиотерапии йнфтщровавных ран. содержащая один, или нескольк лекарственных агентов, отличающаяся тем, что белковая основа губки включает шш альбумин сыворотки крови, или общий белок сыворотки крови, шш общий бедок плазмы крови, а лекарственный агент или агенты обладают антибиотической активностью в отношении патогенных микроорганизмов- возбудителей гнойных воспалений.
2. Способ получения антибактериальной белковой губки по п.15 включающий •замораживание раствора, содержащего или альбумин сыворотки крови,, или общий белок сыворотки крови, или. общий белок плазмы крови, выдерживание в замороженном состоянии, оттаивание, промывку образовавшейся белковой губки от не вошедших в ее состав компонентов, механический от им свободной жидкости: из промытой белковой губки, набухание отжатой белковой губки в растворе одного или нескольки агентов, обладающих антибиотической активностью, . 'замораживание набухшей белковой, губки и ее высушивание либфиди ацией»..
3. Способ по п.2, оттчт&щийся тем, что замораживани раствора, содержащего 3-6 мае.% или альбумина сыворотки крови, или общего белк сыворотки крови, шш общего белка плазмы: крови, 6-18 мзс. мочевины и 0.1 -0,:2 ма&% йистейна, проводят 'п и - . , .-30°С с Последующим выдерживанием в замороженном состоянии в течение 6-36 * а набухание промытой и отжатой белковой губки в растворе одною или. нескольких агентов,: обладающих антибиотической: активностью и выбранных из группы, включающей ваш мицин. лиш мицин, кларитромиднн, торбамйиин, гентамицин или их смеси, яри -концентрации таких- агентов, равной или выше .2 мас.%, осуществляют при: 5~ 3SeC в течение 3-24 ч.
PCT/RU2017/050108 2016-10-21 2017-10-19 Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения WO2018074951A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016141371 2016-10-21
RU2016141371A RU2637634C1 (ru) 2016-10-21 2016-10-21 Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018074951A1 true WO2018074951A1 (ru) 2018-04-26

Family

ID=60581280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2017/050108 WO2018074951A1 (ru) 2016-10-21 2017-10-19 Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2637634C1 (ru)
WO (1) WO2018074951A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2729025C1 (ru) * 2019-07-19 2020-08-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова" Минздрава России) Способ хирургического лечения гнойно-воспалительных процессов костных и мягкотканых структур опорно-двигательной системы пациента с использованием мягких спейсеров, импрегнированных антибактериальными средствами

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6548729B1 (en) * 1997-09-19 2003-04-15 Baxter Aktiengesellschaft Fibrin sponge
WO2004073794A2 (en) * 2003-02-19 2004-09-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Device, methods and sponges for iontophoretic drug delivery
US7335508B2 (en) * 2004-07-22 2008-02-26 Prochon Biotech Ltd. Porous plasma protein matrices and methods for preparation thereof
US20120318262A1 (en) * 2011-03-21 2012-12-20 Ethan Lee Pyrvinium Wound Treatment Methods and Devices
RU2584348C2 (ru) * 2011-07-28 2016-05-20 Шаньшань ВАНЬ Композиционная коллагеновая губка и способ ее изготовления

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2541784C2 (ru) * 2006-11-07 2015-02-20 Санофи Пастер Байолоджикс Ко. Лиофилизированная композиция для индукции иммунного ответа на флавивирус, композиция и способ для ее получения
CN101279104B (zh) * 2007-04-05 2011-05-11 王珊珊 一种含有生长因子的胶原蛋白海绵的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6548729B1 (en) * 1997-09-19 2003-04-15 Baxter Aktiengesellschaft Fibrin sponge
WO2004073794A2 (en) * 2003-02-19 2004-09-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Device, methods and sponges for iontophoretic drug delivery
US7335508B2 (en) * 2004-07-22 2008-02-26 Prochon Biotech Ltd. Porous plasma protein matrices and methods for preparation thereof
US20120318262A1 (en) * 2011-03-21 2012-12-20 Ethan Lee Pyrvinium Wound Treatment Methods and Devices
RU2584348C2 (ru) * 2011-07-28 2016-05-20 Шаньшань ВАНЬ Композиционная коллагеновая губка и способ ее изготовления

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RODIONOV ILYA ET AL.: "Cryostracturing of polymer systems. Proteinaceous wide- pore cryogels generated by the action of denaturant/reductant mixtures on bovine serum albumin in moderately frozen aqueous media", SOFT MATTER, vol. 11, no. 24, 2015, pages 4921 - 4931, XP055478208 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2637634C1 (ru) 2017-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhu et al. Peptide-functionalized amino acid-derived pseudoprotein-based hydrogel with hemorrhage control and antibacterial activity for wound healing
JP7255787B2 (ja) 組織適合特性を有する抗菌剤の組成物および使用
Thattaruparambil Raveendran et al. Ciprofloxacin-and fluconazole-containing fibrin-nanoparticle-incorporated chitosan bandages for the treatment of polymicrobial wound infections
ES2313445T3 (es) Procedimiento de la preparacion de armazones polimericos bi- y tri-dimensionales.
EP2083749A2 (en) Flexible bioresorbable hemostatic packing and stent
Cao et al. Porous gelatin microspheres for controlled drug delivery with high hemostatic efficacy
Wang et al. An antibacterial and antiadhesion in situ forming hydrogel with sol–spray system for noncompressible hemostasis
Rathinamoorthy et al. In vivo–Wound healing studies of Leptospermum scoparium honey loaded chitosan bioactive wound dressing
Hassani et al. Evaluation of collagen type I and III, TGF-β1, and VEGF gene expression in rat skin wound healing treated by alginate/chitosan hydrogel containing crocetin
WO2018074951A1 (ru) Антибактериальная белковая губка для химиотерапии инфицированных ран и способ ее получения
Wang et al. Development of responsive chitosan-based hydrogels for the treatment of pathogen-induced skin infections
RU2519158C1 (ru) Биодеградируемое раневое покрытие и способ получения биодеградируемого раневого покрытия
CN113045848B (zh) 一种聚乙烯醇纳米复合水凝胶的制备方法
US20060057182A1 (en) Flexible bioresorbable hemostatic packing and stent having a preselectable in-vivo residence time
RU2582220C1 (ru) Повязка для лечения ран на основе хитозана
Carbó-Laso et al. New method for antibiotic release from bone cement (polymethylmethacrylate): Redefining boundaries
RU2732156C2 (ru) Сублимационно-высушенная гемостатическая губка с антимикробным (бактерицидным) эффектом и способ ее получения
RU2789304C1 (ru) Биоразлагаемая ранозаживляющая пленка
RU2195291C2 (ru) Способ лечения гнойных ран
Mushtaq et al. Injectable Chitosan–Methoxy Polyethylene Glycol Hybrid Hydrogel Untangling the Wound Healing Behavior: In Vitro and In Vivo Evaluation
Luo et al. In situ generation of bioadhesives using dry tannic silk particles: a wet-adhesion strategy relying on removal of hydraulic layer over wet tissues for wound care
Bajpai et al. Polymer biomaterials in wound dressing: a review
Sah et al. Natural Polymers in Wound Healing and Repair: From Basic Concepts to Emerging Trends
CA3160689A1 (en) Improved wound care device
BR102017017682A2 (pt) Processo de obtenção de hidrogel com biopolímeros incorporando nanopartículas de prata e produto obtido

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17862284

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205N DATED 29/08/2019)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17862284

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1