WO2018063040A2 - Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний - Google Patents
Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний Download PDFInfo
- Publication number
- WO2018063040A2 WO2018063040A2 PCT/RU2017/050098 RU2017050098W WO2018063040A2 WO 2018063040 A2 WO2018063040 A2 WO 2018063040A2 RU 2017050098 W RU2017050098 W RU 2017050098W WO 2018063040 A2 WO2018063040 A2 WO 2018063040A2
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- rats
- compounds
- animals
- compound
- control
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Definitions
- the invention relates to medicine, specifically, to. Pharmacology, and relates to funds that have hemorrhoids, antshgregasha! . antatrombogennoy, firederae Arthur, airway dedrotektoroy ; . her 01 photo-gtory ,. -yargotyvoartm eskoy i proshshoish ich active activity., as well as increase their cerebral blood flow
- this compound represents a mixture of structural, isomers of the meso form and: the racemic mixture [Patent 2502719, Q) 7C 39/17, 20131, however, the relationship between these isomers in the mixture and the relationship between them and the ycheskum akhnyanrsht ".
- the specified tool can be used for the treatment of cardiovascular diseases.
- the claimed mixture of isomers is obtained as a result of the reaction of aerated but Friedelad-Krafteu para-cresol with camphene in the presence of a catalyst & does not require expensive purification methods.
- Example L In a flask with a capacity of 5O0 1, place 65t p-cresod and heat to 1bO- in C, then add scatters and 0.7g aluminum chips, activated with iodine vapor, in portions, when dissolved, the solution is heated to boiling. After complete dissolution, aa tt. in and-crezole, the solution is cooled to 100 ° C f and then ⁇ 3.5 ygamphen (molar ratio i-resole; .camphene 1; 2) is added. The temperature of the solution of the mixture is adjusted from ISCPC to 18 ° C for 3.5 hours. At ⁇ ..80 ⁇ the reaction mixture is kept for 4 hours for full conversion by camphene (control of the vehicle).
- the reaction mixture is cooled, diluted with ice and filtered through actquial coal and alumina, after which the formation of glass fiber: mass which add ethyl alcohol.
- the precipitate formed is filtered and washed with ethyl alcohol.
- the ratio of the mesoform (T il. 207–210 ° C) and the mixture of the mixture (Teel. 166–169 ° C) is 6:40 (mass)
- boiling in a water – err solution removes the ranemic mixture of isomers and changes the ratio isomers d 95: 5 (mass).
- Compound 3 a mixture of 2- ⁇ (1S, 2R, 4K) -1.7 g 7-1r et'ilidakd [2D.1] tp: -2 ⁇ u ⁇ , 6 - ⁇ (Sh, 2S, 48) - 1.7 ! : 7-three egaya: bwdi ⁇ (hereinafter isomer 1) and racemic mixture 2,6-di
- Example 2 the Experiment was carried out: on 100 male rats: Wistar lines weighing 200-220 g. The animals were divided into 4 groups. On the model of total transient cerebral ischemia by the method of W, A. Piilsmeili,, In ⁇ Brierley [19791, the neuro-protective effect was evaluated. For this to 1 day before ischemia simulations .narshhshnrovashshh schts (tioyaektayaon-NSH Ia 'in a dose of 60 mg / g ,. vnutribrk> shinno) at the level of first cervical vertebra was performed both thermo aguladi aertebralmyh arteries.
- Example 3 The study of the zyxenoscopic properties of Mediamii 1, 2 and 3 was carried out on models of pathological conditions (non-native cerebral ischemia of diabetes mellitus a).
- a model of incomplete brain nsmein in cottaineananmx (ether, anesthesia) rye-samnes of the istar line was reproduced by: complete occlusion of the left carotid artery and limiting blood flow of the right carotid artery: arteries 50% of the legs of the 0 FL of the electromagnetic flow .
- a similar intervention was carried out, but without ligation of the vessels, Paradise was treated with antiseptics and stitches were put on them.
- MAP systemic arterial pressure
- the functional state of the endothelium was assessed using the coefficient of endothelial dysfunction (QED), calculated as the ratio of the areas under the blood pressure lowering curves in response to the intravenous administration of sodium and in response to the intravenous administration of acetylcholine [Tk ren and ZO., Voronov A. AT. , 20081.
- QED coefficient of endothelial dysfunction
- the first administration was performed via I hour after creating a model of incomplete ischemia 'brain at 6 -e sushi I through tea after the last administration of the compounds' 1, 2 and 3 or krahshl minutes gash cr s were anesthetized (-sodium tnopentalo 60 mg / kg, vnutribr vdnnno ⁇ and held tsenka vascular endothelial function.
- the Wisiar dishwax was intraperitoneally administered with a single dose of 60 mg / kg of strentozotdozdo in nitrate buffer.
- An experiment was used to draw blood with blood levels from 18 to 28 mm / i.
- the level of lung lump in whole form is from the church with the help of the blood glucose meter (Indian part of preclinical studies of medicinal aids. Part One. - M: Grif. - K, 2012. - 944 s).
- Example 4 In the model of diabetic .retinopathy, the ret-protective properties of compounds 1, 2 w were evaluated. Experiments were performed on 4S rats — Wistar male patients weighing 240–270 g. Mastet retentottes in Crsh- reproduced only once in the uterine-abdominal injection. a dose of 60 mg / zhg body weight. The level of hyeremia (more than 3 mmol d), loss of body weight, the severity of nodiuria and polydipsia. I want to test the severity of diabetes mellitus. Two days after the administration, the rat etreptozotosh were divided into 4 groups.
- the rats of the experimental groups with the center glucose 2c, 4 ⁇ 3 (compound 2), 21,2.-i-.2., Q (compound 2) and 20, $ * 2 5 5 (compound 3) were given daily for 28 days injected into the compound: 1, 2 and 3 at a dose of 100 mt / kg of body weight, as a suspension in 3 ml of 1 starch gels.
- PEARL ANIMALS NUJG was in similar conditions. .
- the central sections of the retina of the rats appeared, which were located in Dortmund, which were taken through S 6 days after; after euthanasia, ether anesthesia, live.
- the central areas of the posterior eye were fixed in a 2.5 ⁇ % solution of glutaraldehyde ui (OM.
- yaktbm buffer pH 7.4
- a solution of four os osiums after fixed in 2% a solution of four os osiums and are poured into a mixture of resins of epen-araldite; 11-ugly cuts were painted with odondinic einim * udratratkie contrait aryl eshto and citrate smsha, viewed in. photographed in an electron microscope.
- Example 6 The study of hemorrhoids ches, antittoboshggarnaya and anthrombogennoy activities of compounds L 2 f ' 3 was improvised on ex vivo models of ganervyazetoti blood and thrombosis in rats.
- the viscosity of blood circulation and aggregnants were evaluated in blood samples immediately after, taken "and 1 hour after incubation of blood at a temperature of 20.0 * 0.3 ° ⁇ .
- Blood was taken from the common carotid artery by iodine by ether anesthesia.
- a 3.8% solution of sodium citrate was used as anticoagulant in a ratio of 1: 9 to blood.
- Blood viscosity was measured by a rotational viscometer in the range of shear rates from 5 to 300 s *! before and after incubation of samples at a temperature of 20.0 * 0.3 ° C for 60 minutes.
- connections are. 2 and: 3 are capable of limiting the development of gvservkoet blood and the increase of axperaipH ⁇ erythrocytes ex vivo.
- the efficiency of compounds 2 nd 3 is higher ; What is the effect of compound i and eshdetaviyu with kentoksmfvdliyom.
- Rombonnt aggregation was determined by nephed . etrncheekim method According to the standard method were obtained rich (BTP) and poor (BeTP) platelet plasmas "gschdschshtvalos platelet count * sings determining the number trombonitov in BTP standardization of the number of platelets was carried out, the middle of which BTP bred necessary amount: BeTP to 400 * 27 th Platelets in the I mm * in the sample. For assessing the astronomite and other effects of the vascular wall, BTP and BeTP were used to intact the donor rats. Platelet aggregation was assessed in a standardized plasma n device, aggregatogram. recorded with the help of the recorder.
- Measurement of blood flow in the artery was performed from the moment of application of iron chloride to the left carotid artery until the blood flow stopped in it (the time of formation of a blood clot). The calculation of the decrease in blood flow regarding the initial vep in the blood flow would be expressed in percents. The mass of the thrombus was assessed by the gravimetric method.
- Nentoksyfillina reduces thromyoblasm in the area of stenosis.
- the introduction of compounds of 2 m 3 completely prevented the thrombosis in the carotid artery for 24 hours after ailcadni with Her solution.
- shtrombogennogo activity compounds 2 and 3 were very superior to compound 1,
- Rats were released in 4 uins.
- the rats of onshtkhdkh groups respectively, “drove schschynenvd 1, 2 and 3 at a dose of 100“ g / kg and in the form of eushesia on the% starch gel (3 me) inside the vessel through the probe 1 time per day for 3 days to m 3 days after creating the model .
- the animals of the control group were injected with an equivalent amount of 1% starch gels along the same scheme;
- monitornvrovny electrocardiogram was performed in a standard lead with the power of a computer scanner. Verification of the correctness of the ligature imprint and the adequacy of the model: the number of changes in the height of the ST-c-egmeeta on the ECG, and in any case, animals were performed — analogously-operatively — in the absence of ligatures and the left coronary artery.
- the rats On the 3rd day after renerfusion, the rats would again be drugged with sodium tionental at a dose of 60; mg / kg, intraperitoneally ,. They are laced and connected to an artificial lung ventndodym apparatus and a ligature is applied.
- a ligature is applied to identify the zone, p-shoyerfusnp into the femoral: a baud sio vein was injected with 0.2 ml of a 5% solution of a patent. Patent violet, the heart was removed for 20-30 seconds. The areas of myocardium with preserved perfusion, staining with knowledge of sediments, non-perfused remained unpainted.
- Slices' hearts were prepared on a freezing microtome. Parts of the sections were left in the native form to assess the zone of the gf bierfuse ', and the other half of the cuts were stained with nitrodiamine tetrasol (NST) and targeted to the tissue of dehydrogenase activity. The sections were enclosed in a herioioOg jelly gel and scanned. The size of the hypoderfusion zones and changes in dehydrogenase activity were estimated using the Adobe Photoshop software. Zones with a strong c-dehydrogenase activity were taken as the infarction zone.
- NST nitrodiamine tetrasol
- myocardium showed a significant decrease in the ppt x tooth. About w ECG after an episode ischishda reperfusion. During the period of renerfusions, by the third day, in the group of rats treated with compounds 2 and 3, a distinct significant increase in the amplitude of the R and T teeth was revealed relative to the control and the group of animals with the introduction of joints 1 (Table 18).
- the size of the hypoperfusion zone did not differ significantly from the total area of cross sections of the myocardium.
- animals treated with compounds 2 and 3 compared with the control and grooved rats with the introduction of compound 1, there was a significant decrease in areas of sharply reduced dehydrogenesis activity from the total area of the myocardium and about shushchushch zone of hypoperfusion.
- the introduction of compounds 2 and 3 reduces the mortality of animals after an episode of renalfuste ischemia and significantly reduced the infarction zone both from the total myocardia, and from the area of gastric perfusion compared to the same indicators of the control group n " Groups of animals treated with compound 1 (table 19) ,,
- the investigated compounds 2 to 3 at a dose of 300 mg / kg of body weight, in contrast to shroya. and connections! when it is administered in a model of ischemia and rener myocardium, statistically significantly reducing the frequency of arrhythmias and reducing arrhythmias , reducing the mortality of animals due to fatal arrhythmias.
- the proposed juveniousness expands the areca of means possessing at the same time an ore * regatta ' , or grambogesh. retesting, endotheoprotector, neuroprotection of torky, nrothvarai.tsh-ieykoy and opposing actuality, uveddadaashedih kr otok.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к средству для лечения -сердечно-сосудистых, заболеваний, состоящего кз смеси двух изомеров 4-метил-2,6-диизоборнилфенол, мезо-формы и рацемической смеси, с соотношением следующим изомеров: от 60 до 95%масс. для мезо-формы и от 40 до 5%масс. для рацемической сшей.
Description
Средство для ечения сердечночюеудист.ы.х заболеваний
Изобретение относится к медицине, конкретно, к. фармакологии, и касается средств, обл давших гемореодогиес й, антшгрегаша! . антатромбогенной , огнодрал то ной, эадотелийдротёкториой;. ней 01фоте-гторйой,. -яротгйвоаритм еской я протшоиш ич щй активностью., а также увеличиваю их мозговой кровоток
Известно средство,. обладающее адтирад гшой, гемореодоп«ес. и,: анштро боцитарной и автнтро богевжщ активностью [Патент 2347561, А&1К 31/05, 2008].
Известно средство, проявляющее иротивоише ические свойства [Патент jfe 2499593, А &Мт, 201.3],
Извес но средство, нро.явд»ющее н ойи й й йческ активность р етйний. Γί,ίΐ, Противоаретми ческая активность диборнода в условиях модели острой ищем-ни - ренерфузии даокарда Бюляетеш» сибирской медицины, 2003, том. 12, ХзЗ, с.153-156],,.
Известно средство, обладающее нейродротекторной активностью [Патент 2406488, Ά6Ϊ 31/05, 2010],
Известно средство,, обладающее ретивйиротекториой активностью [Патент 2406487, А61 31/05, 2010],
Известно средство, проявляющее эидотеднинротекторные свойства [Иванов И.С.. Не роиротекторная: и антитромбог на активность 4- ехия-2,6-да| >борш лфевола Автореферат дяссертации авдидата биодогачеашх наш, Томск, 2009, 24 с].
Известно средство, способное увеличивать мозговой кровоток [Патент 2351321,. А6 3.1/05, 2009],
Указанные средства представляют собой 4"метил-256-дй .оборнилфеиол.
Известно, что данное соединений представляет смесь структурных, изомеров мезо- формы и: рацемической смеси [Патент 2502719, Q)7C 39/17, 20131, однако не известно о соотношении данных изомеров в смеси, и владние вх соотношения на проявляемую ими фармако от'йчёскум акхнянршт».
Технической проблемой, на. решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, обла ающих .одновременно геморео ощче кой, антмагрегатнои, антитромбогенной, ретаноиротекторной, эндот нйяротекторной, нейропротекторйой, 'п:рч)тмвоарйтм.ической н протйво.ашемйчёской активностью, увеличивающих мозговой кровоток.
Поставленная задача достигается исвояьзован смеси изомеров, впервые описанных в RU 50271 а именн ;
1) 2 - S^R; 411)4ДЛ-трмме:^ 6~{( IE, 25, 4S>-i ,7,7- тр1 ет1шбнщждо[2.2Д]ген^ (мезо-формз, дадее изомер ί) м
2} радемичес ой смеси 2,6- яи{(Ш, 2Sf 4S}-I? ?, 7-т|жметз1яб*Щ1Т о[2.2,1]гепт-2- йя}-4-жшяфенода) и 2,6- де{(1$, 2К, )-1, -7, 7-трты& п6мтжт2 Л} ж-2-тя)-4- мтшфт&й , (рацемическая смесь, даже изомер 2)
в качестве средства, обладающего гемореояогачееюшй, тиагрегатными;, amm O SorerabiMHj. рбтинохгрт'е гориымн, эндотш^нй1хроте торн.Ш'да, нейронротекториыми, протйвоар*гтичес «вд и противоишемическими свойствами, увеличивающий мозговой кровоток с со ой степенью ажта оети в и следующем соот ношении изомеров :
от 60 до 95%маес. для изомера ! (меш-фор а) и от 40 до $? Масс. ят изомера 2
При следующем содержаний ах смеси:
- изомер 1 (мезо-форма) от 60 до 95 мас. ;
- изомер 2' {рацемическая, смесь) от 40 до 5 а . *
Указанное средстве может применяться для лечения, сердечно-сосудистых забодетаннй.
Заявленная, смесь изомеров получается в результате реакции ажмдщздвания но Фриделад-Крафтеу пара-крезола камфеном в присутствии катализатора & не требует дорогостоящих методов очистки.
Пример L В колбу ёмкостью 5О0 1, помещают 65т п-крезода и нагревают до 1бО-вС,- далее добавляют неб льши и порциями 0.7г алюминиевой стружки,, активированной парами йода, при растворении раство нагревается до кипения. После полного растворения а ю тт. в и -крезоле раствор охл аждают до 100°Cf после чего добавляют ίό3.5 йгамфен (молярное соотношение и- резол;.камфен 1 ;2). Температуру решшданной смеси повшнают с ISCPC до 18в°С в течении 3.5 часов. При Ί..80 · реакционную смес выдерживают в течении 4 часов д полной конверсии по камфену (контроль но ТС ), По окончании реакционную смесь охлаждают, разбавляют л офо ом И фильтруют через актквировайный уголь и окись алюминия, после Чего ударнвада д образования стеклооёразиой: массы которую добавляют этиловый спирт. Образовавшийся осадок, фильтруют и промывают этиловым спиртом. В подученном, продукте- соотношение мезоформы (Т ил. 207-210°С) ш радемнческон смеси (Тил. 166- 169°С) составляет 6 : 40(масс), Кипячение в водно-ениртовом растворе вымывает ранемическую смесь изомеров н изменяет соотношение изомеров д 95 : 5 (масс).
Разделение изомеро»: проводили методом дробной иерекристаллизапна из этанола в результате были получены образны чистых изомеров.
Таким образом, предмето исследования явились следующие соединения,
Соединение 2; смес 2- {(1S2R., 41)-1,7,7-тр1- етидбнцй ло[2,2Л ]гент-2-.{:Ш}, 6~ ( Ш, 2S, )-1,77~трим:ешлбндатг£о[ ;,1^ (далее изомер 1) и. рацемической смеси 2,6- ди{(0 , 2Sy 4S)-1, 7, 7~триметнлбнцикло[2.2Л.Згеит-2-ил}-4- ешлфенода] и 2,6- дм {(IS, 2R, 4-R)-l, 7, 7-трнм:ет-щбйЦ1шл»[2,2 Л |геят-2- л} -4- метидфеиола}- (изомер 2) с содержанием ио еров » смеси: изомер 1 - 9 %масс; и изомер 2 (ранеминескал смесь)- 5%масс. [Тил. смеси !'95-201йС].
Соединение 3: смесь 2- {(1S,2R, 4К)-1,7г7-1рй ет'илйидакд [2Д.1]тп:-2~}щ} , 6-{( Ш, 2S, 48)-1,7!:7-три егая:бвди^ (далее изомер 1) и рацемической смеси 2,6- ди|( , 2-S, 45>}-1, % 7-трмм«ггалбй *кяо[2.2.1 ]ШПТ-2-ЙЙ:} -4- метмлфеиола и 2,6- 3Μ.{(Ι8, 2Е, 4R)-I, 7, 7^риметидбиш1клО2,2Л]геот-2-йл|-4- метняфенояа} (изомер 2) с содержанием изомеров в смеси: изомер 1 - 60% масс и. изомер 2 (рацемическая смесь) 40% [Тол, смеси 1 5-180°С],
Таблица --сравниваемое соединения 1,2, 3.
Tim sC Содержание тао ера, масе.%
изомер 1 , мезо- изомер 2,
фор а рацемическая" смесь
Соединение 1 207-210 100 0
Соединение 2 195-201 95 5
Сое иензе 3 60 0
Ддя подтверждения фармакологической активности были исследованы серии субстанции содержанием изомере» мезо-формы и рацемической смеси в соотношении 95:5 80:2 масс,%,, 75:25 маес.%„ 70:30 масс.%, и 60:40 масс< ,. По всем, сериям субетшщни были, подучены еоиоставимые результаты со значениями в рамжах погрешности- В описании дайной заявки приведены е льт та^ подученные для серий с еотугиощением мзомеров 95:5 % и, 60:40 %,
Эффективность исследуемых соединений 2 и 3 но сравнению с контролем и соединением- I продемонстрирована в модел ных экспе иментах на крысам линии Wistar при .шутрижедудочном введении в дозе 00 г/кг.
Во всех примерах статистическая обработка результатов была осуществлена с помощью : пакетов программ "BioStat" для Windows с применением i-критерня Стьюдента и критерия χ\ Для оценки доетоверноета различий при сравнении средних величин, исноя&з в& и. кепя шричгескйй: ^ите ий Майиа-Уитви,
Сушиость изобретения поясняется ириме и конкретного выполнения.
Пример 2, Опыт проведены: на 100 крысах -самцах: линии Wistar массой 200-220 г. Животные были распределены на 4 группы. На модели тотальной транзиторной ишемии головного мозга по методу W, А. Piilsmeili, ,В< Brierley [19791 оценивали нейроиротекторние эффекты. Для этого за 1 сутки до моделирования ишемии у .наршхшнровашшх щтс (тиояектаяон-нш ия' в дозе 60 мг/ г,. внутрибрк>шинно) на уровне первого шейного позвонка производили термо агулади обеих аертебральмых артерий. Через 24 ч под эфирным наркозом: на обе сонные артерии накладывали кдаоде я я течение 30 мин. Состоятельность модели оценивал» но раси ренню з ачков, развитию гапервеитидянин, ноодеднешп» видимой части сосудистой оболочки глаза* Реперфузв» проводил» снятием, ожклюдеров.. Крыса контрольной г уппы вводили трижелудочно 3 мл 1% крахмального .геля, животным опытных групп -- соединенна 1,. 2 и 3 в дозе 100 мг/кг в 3 мл крахмального геля одни раз в сутки в течение 7 суток. Первое введение осуществляли через i час после созданий, модели ишемии, последнее введение - за 1 час до забора крови. В первые 2-4 ч после воспроизведения модели тотальной транзиторной ишемии головного- мозга у жршс наблюдали наиболее тяжелые симптомы .повреждения нейтральной нервной системы -в виде арефдексии, судорог., снаетического
паралича конечностей, тонического напряжения мышц туловища, бокового положения. Опенку уещиона ьного состояйзш высше нервной деятельности на 1 -е, 3-е и 5-е сутки после создания модели тотальной тршзиторнон ишемией головног мозга проводили по шкале Stroke-index- [MeGraw Ci\5 1977] следующим показателям: спонтанная двнгатаъная активность (нормальная* повышенная, иди сниженная:, отсутствие}* расстройства йоходкм (скованность, шаткость, замедленность движений, нарушение ориентации).*- рефлексы отдергивания хвоста, обеих, передних и задних дат, реаздиа на звук., тремор, судороги, тонус мышц туловища и конечностей (нормальный, повышенный, отсутствие), нр на м птоза (отсутствие, одноеторонщ-вд, двусторонний). Каждый показатель оценивали в баллах; 0 баллов - норма; 1 бал - умеренно выраженные йзмдаенй 2 баша - режо шфаженнме изменения-. Йейро ^гвч скнй де ицит ЖИ ОТМОГО онеинвади су мой баллов но всем показателям, 'Кроме того, в ^к ой крупке крыс оиредедядн додю животных с тяжелыми неврологическими расстройствами (6 б&ддоа к более), -с трушенными средней тяжести (3-5 б&вддав) в с легкими изменениями (до 2 баллов). Выживаемость животных регистрировали на 1-е, 3-е н 5-е сутки после тотальной транзнторной ишемии головного мозга. По завершению опытов проводила эвтаназию •животных,-
Полученные э сиериментальн е данные свидетельствуют* что в ойт оле в течение первых суток' после тотальной трашиторной ишемии головного .мозга погибло 32 % крыс. В то же время у леченных животных ед ижш I, 2 и 3 в нервые су ки соотвешшенно погибл , 12 и 10 % особен s что было примерно в 2 и более раза ниже контрольного показателя (табл.2). Несмотря на то, что средний балл неврологического дефицита у вьшжвших крыс все трута достоверно не хлипшсй (табл. 3), отмечена отчетливая тенденция к уменьшению под .влиянием соединений 1, 2 и 3 количества даюотн ; с тяжелыми невродотаческими нарушениями и соответствующее достоверное увеличение количества животных со средней степенью не&родогичес г дефицита (табл. 3). При лечении соединениями 2 и 3 отменено достоверное снижение уровня смертности рыс и нейрологнчее нх нарушений но сравнению как с контролем ^ так и при применений соединения L Наилучшие результаты были получены при. введении крысам соединения 3.
В контроле смертность крыс к третьим, суткам после тотальной транзиторной ишемии головного мозга достигала максимальных значений (41%), течение последующего периода набдшдейия летадьншжь не уветичИвалась, В опытных группах гибель ж:иаотньж этому срок была существенно ниже и не изменялась к 5 суткам (табл.2). Структура тяжести неврологически расстройств: была сходной у выживших животных, получавших соединение ί и контроля к 3 суткам.. У крыс, леченных, соединениями 2 и 3, было отмечено улучшение неврологических расстройств (табл. 3).
Начиная с 3-х суток, у животных крщ оя фй - йод- н Ои^одй б- - ийеенйф- фжв$Щ неврологической симптоматики. Однако восстановление невродогмческого статусе у крыс, леченных соединениями 1 , 2 и. 3, происходило более высокими 'темпами. Так, к 5-м суткам средний баял неврологи вес ого де шта в группах леченных соедгшенияш Ί, 2 и 3 был соответственно в 1,4, 2 и 2,4 раза ниже контроля, а к 7 суткам сохранялась тенденция »: й яйому воестановяешш фуню и центральной не вной сйстемй.
Таким образом,, применение соединений 2 и 3 в терапий ишемндескоге повреждения головного мозга в наибольшей степени но сравнению с соединением I спишет гибель животных и ускоряет восстанс ие неврол гачсского статуса у .вьмш крыс.
Таблица 2
Влияние исследуемых, соединений' на смертность крыс после тотальной траи.даюрной нше головного мозга, %
римечание: - ρ< , по сравнению с контролем;
- · р< 0,05 т сравненив трудны животных, йвдшавищх соединения 2.и .3 с
группой с-;, получавших соединение 1,
Таблица 3
Ле » (менее 2 баалов) 8,4 17,9 1 26.3 42,6
С еда»ен»е 1 (п==2$). ]
Тяжелая (более о баллов) 43,5 37,5 1 26,1 * 13. ,3*
Средняя (3-5 баллов) 48,1* 39.3 1 1 ,5 35,6
Легкая (менее 2 баллов) 8,4 23,2 : j 42,4" 53 ::
Соединение 2 (Й~27}
Тяжелая (более 6 баллов) .32,0* 30.5* I;
Средняя (3 -5 балдо») 61 ,8* 56,3 I; 29, 35,8
7Л&т& (менее 2, баллов} 6,2 13,2 53,2** 64,
Соединение 3 Й 2 ) ]
Тджелм (более бал ов 30.1 *·' 21,7* Г 13,8** w
Средня» (3-5 баллов) 60,9** 52,8 I 27,0 33,6:
?Дегка,я (менее 2 баллов) 9,0 18,5 59,2** 66, р<0,05 но сравнению с контролем;
~ р< 0,05 при. сравнении группы животных, нодуча ищ
3 с груш н крыс, получавших
Приме 3. Из чение зндоте^нй^ро екторннх свойств срединемий 1, 2 и 3 было проведено на моделях, патологических состояний (неродной ишемий головного мозга й сахарног диабе а} .
Модель неполной ншемин головного мозга у на котнаироааннмх (эфирный, наркоз) рые-самнов линии istar воспроизводили посредством: полной окклюзия левой сонной артерии и огран.йнения кровотока ио правой сонной: артерии т 50 % от ис о ног »0Д ттр д электромагнитного флоу етра. У ло иоопермрованим жавгаш проводмлось аналогичное оиераздвиое вмешательство, но без перевязки сосудов, Рая были обработаны, антисептиками и на них наложены швы.
Для оценки эндотедйиьной. дисфункций исследовали эндотелийзав.иси ую и эндотедийнезависимую реакцию сосудов у крыс, Для этого наркотизированных животных неирерывно решстрировали системное артериальное давлени (САД). Ддя мереймй САД живо ны : в правую ео у артерию и^нлайтнровадй катетер, заполненной смесью шйолопиеекого раствора и гепарнна. Зндотед йзавиСймую вйзоднлйтайня регистрировали ври бо шеш внутривенном введении аиетижояин (5 ш ' г},. эняотеянинезависимую ваэодилатацию - при болюсном 8н>Л"ривенном введении ннтроируссида натрия (30 мкг/ г). А ет яхояин и ннтрс руссид натрия вводили в
бедренную вену. Функциональное состояние эндотелия оценивали с использованием коэффициента эндотейма ьной дисфункции (КЭД), рассчитываемого ак отношени площадей под кривыми снижения артериального давления в ответ на внутривенное «ведение натрия шгтропрус да ж в ответ на внутривенное введение ацетидхолина [Тк рен ов И ЗО., Воронов А .В. , 20081.
Э сщрй щ ы с восйршзведением модели неполной мш ж го внош мозга провеян на. крысах-самцах ЛИНИЙ Wistar массой 240-270 г. Были сформированы 6 групп животных по ] 2 в каждой. Груш . крыс: интактиая, контрольная, ложиоонерированная и. леченные соединения и 1 , 2 и 3. Животным: контрольных, ложнооперировйнн и нн актиых групп вводили вну^рижедудонво 3 мл 1 % крахмальной гели, Крысам, й^ё соединемшУн ! , 2 и 3 вводили дозе 100 мгУкг. Жрй &й&кая. гедь (I %} я суто й соединений 1 , 2 ш 3 в крйх н>иом геле аводдаи крысам :1. раз в сутки в течение 6 суток. Первое введение осуществляли через I час после создания модели неполной ишемии 'головного мозга. На 6-е суши через I чае после последнего введения соединений' 1, 2 и 3 или крахшль й гаш кр ы были наркотизированы (тнопентало -натр в дозе 60 мг/кг, внутрибр вдннно} и проведена ценка функции эндотелия сосудов.
Подученные экспериментальные данные показывают, что в группе дсшнодоерированных. крыс шменекий: :ШД0те.Шй:незавне«мой и дадоте ийзавйеймой вазодила ации по сравнению с ннтажтны и животными не выявлено, при этом КЭД составил 2,0- . (табл.4). Следовательно, все наблюдаемие изменения в контроле и грунтшх. лененньгх соединениями ! , 2 и 3 не связаны с влиянием оперативного вмешательства. В контрольной группе у ншемизнрованн крыс КЭД составил: 3,9±0,3, что на S1 % иревьшгало т& е в группе жноонерированных животных (таол.4). акнм образом, неполная ишемия головною мозга у крыс сопровождалось эндотелиадьной .дисфункцией. Описанные н енеи * функции эндотелия с 'преимущественным нарушением зндотедмйзависимой вазодилатации согласуются с данными о формирований зндотеди ьной дисфункции при и е и еском и реиерфузнонно повреждении тканей л вного мозга крыс. В грунйе крыс с мпгемией головного мозга, леченных соединениями 2 и 3 КЭ составил 1,9±0,.| и 1,8*0,3., соответственно, чт достоверно отличалось от контроля и группы,, получавших соединение I и было близким по значениям к тактным и дожноояерироеанньш животным..
Таким образом, при внутрижедудочно введении соединений 2 а 3 в течение 6 суток но еравненшо с соединением 1 проявляет более высокую эндоте тийнротекторную активность в условиях модели неполной ишемии головного мозга у крыс.
Таблица 4
Влияние исеяедуел х единеш-зй 1, 2 д 3 щ функцию эндотелия сосудов }'' крыс е неполной ишемии головного мозга
Группы животных КЭД, ед
Мнтакшые (п-12)
о>ртоонерй с®да ше (л™ 12}
Контроль (п~ 1.2)
Со шение ! (п-12) 2,& ,2*
.Соединение 2 .(n~i2)
Соед»щ ке З Сп::::1 1 | 1,8*0,3*"
Оримелание - р 0505 но сравнению е шитроде ;
s - р 0$5 йрй сравнении грушш щшотных, колупавших соединенна 2 й 3 с груиной крые, нодулавгнмх соединение 1.
Для соз ания, модели сахарного иабета к ш м-едацам дищга Wisiar однократно внутрибрюшинно вводила стрентозотозд- в дозе 60 мг/кг в нитратном буфере. В опыт отбирали крью с уровнем гаю ы в крови от 18 до 28 ммодь/я. Уровень .гяюкозж в цельной кроаи из ерщзм с иомощьда глюкометра (Р ко ст о по ирше еи о доклинических исследований лекарственных средсте.. Часть первая. - М: Гриф .и- К, 2012.- 944 с ).
Оценка эндотеяиаяьиой дисфункнии сосудов провеян в соответствии с методикой, изложенной в «редь ущш разделе.
Эксперименты, с в0еп|шизведением модели сахарною диабета проведены на крысах-самцах ЯЙЙИЙ Wistar массой 220-250 г, У 48 животных воспроизводили модель сахарного диабета и через 28 суток после инъекции етрегатаотош а были отобраны крщ 8 .группы даленнщ: сэдедв нениями I., 2 в 3 и контроля с близким уровнем глюкозы в крови, нахо ящимс в пределах от 18 до 2S м оль/я. В течение последующих 28 суток ежедневно вт-лрй елудо1шо животным контрольной и иитактао груш вводили 1 % кра -шй гель в количестве 3 мл, крысам опытных труни - соединения 1, 2 и 3 в дозе 100 мг/кг в. крахмальном геле. Через 1 час после последнего введения соединений I, 2 и 3 к ысы были нврко даированы (т.вднент юм-е хр в дозе 60 мг/кг, .внутрнбрюшинно) и. проведена оценка функции эндотелия сосудов.
Эк^ римерт дьн е дайние, пол ченные в результате проведенных исследований, свидетельствуют, что у крыс контрольной группы была выявлена зндотедиадьная дисфункция. Об этом свидетельствовало достоверное увеличение КЭД в 1,76 раза но сравнению с инт&ктнь м животными, Ониеан ле изменений в контрольной группе крыс согласуются с данными о наличии зидотеднадьной дисфункнии у больных сахарным ю
диабетом ш у животных с моделями данного заболевания. ¥ крыс, леченных соедтшениями 2 .и 3, КЭД был достоверно значимо ниже, чем в контроле й: при применении соединения } ш терапий сахарного диабета (табл.. 5).
Таблица 5
Влияние исследуемых соединений 1, 2 и 3 на функцию эндотелия ещудов у крыс с
Ори ечание: - 0.$5 но сравнению с контролем;
3 - р 0,05 при -сравнении груши* животных, получавших соединения: 2 и 3 . удаой крыс, вдщучавших соединение 1.
Таким образом,, применение соединений 2 и по с авнению с соединением ! обесиеян ет более высокую эндотелнйпротееторнук) активность при сахарном: диабете у крыс.
Пример 4, На модели диабетической .ретинопатии оценивали рет оп.ротекторные свойства соединений 1, 2 ш Опыты проведены на 4S крысах -самцах л инии Wistar массой 240-270 г. Маже дтабетнчеекой ретено тни у крш- воспроизводили тоередетвш однократного в утрибрюшниного введения стрентозотсшнна в дозе 60 мг/жг массы тела. Уровень гииергл емии (свыше 3 & ммоль д), потеря массы тела, выраженность нодиурии и полидипсии .я шсь к итериями -тяжести сахарного диабета. Через 2$ суток после введения, етрептозотошша крысы были разделены н 4 группы. Крысам опытных групп с нцентрацней глюкозы 2в,4±З (соединение 1), 21,2.-i-.2.,Q (соединение 2) и 20,$*255 {соединение 3) иы т ежедневно в течение 28 суток вводили вкутрнжеяудонн соединения :1 , 2 и 3 в дозе 100 мт/кг массы тела, в виде суспензии в 3 мл 1 крахмальной гели. Животным контрольной группы, с концентрацией глюкозы 2] -1*2,6 ммодь/д вводили такое же кознчеста крахмальной гели по той же схеме. Груш НЙГЙКТЯМХ ЖИВОТНЫХ, находилась в ан логичных условиях. .Цетраяьные отделы сетчаток крыс явились, атери лом неследошнйД которые были отареотри вйны через S 6 суток после; нас д йяье ии етрептозотоцина) сразу после эвтаназии эфи ны наркозом, живо ных. Центральные участки задней етенщ глаза были фиксированы в 2,5·% растворе глютаральдегида щ (О М .како йяатбм буфере (рН 7,4), после фиксированы в 2%
растворе четырехо си осмия и залиты в смесь смол эпен-аралдит, 11ояугонкие срезы бйди окрашены одундиновы еиним* удьтратонкие контраетированы арил ешто и цитратом свмша, просмотрены в. сфотографированы в электронном микроскопе. На к у онких срезах йрошводен подсчет «ейросенеорн х клеток с шжтоц ядра на 3000 клеток с каждой сетчатки, гаперж.о&шьт н гошном.орфных. ассоциативных нейронов и радйад ых глйоцнтш., гайгд нарньгх нейронов с тотальным,. о* тшым хроматолизом в пнхноморфв на 200 клеток с каждой сетчатки. С использованием окулярной измерительной сетки Автанд ова были высчитаны численная плотность ядер в наружном, ядерно слое . площади 900 мкм2, удельная площадь сосудов- со стазом, еяаджем и тромбозом., гя нейронаяыш индекс,
лученн е Данте о»м ете &с в т4 'что после азвития етрцрт зожнхнв й го диабета в сетчатках крыс меэд ея м о ойческй признакм дегеиера а всех, структурных комцонентов сетчатки. естрта- е изменения нейросенсор х клето
нейросенсорвда клеток в нару ны ядерный слой по отношению к шжжтому контролю (хаба.6). Изменения ассоциатийны нейронов носят реактивный характер. При стр тозртонйновом диабете у крыс контрольной группы наблюдалось увеличение процента гаперхромных нейронов по сравнению с штакгнвш контролем (табл.?):. Дегенерации мудьжподярных нейронов яри длительной пшергликемии на фоне стрентозотоциново диабета характеризуются » основном .разявчной степени выраженности хроматолизом. В контрольной груше в первую очередь отмечены хроматодитические мшенещщ генгаионарных нейронов (табд.8): поввтшещ уровня нейронов с очаговым й тотальным х ома олизо й 6*7 раз но отяо0*ен«ш к. итактному контролю, ври этом количество «{и о о фных нейронов возрастает примерно 4 раза. При длительной гаг. ргд емим у крыс конт|олькой группы были, выявлены деструктивные процессы в радиальных глнондаах, что выражалось повышением электронной плотности цитоплазм и ядра. Количеств птжноморфных р т гляоцитов относительно значений интажтного контроля увеличивается, что сопровождается снижением гднонейронал ого индекс (та6#.9). В контрольной группе отмечались выраженные -расстройства микроваскуляризации, характеризующиеся достоверным увеличение по
соединения 2 и 3 с группой крыс, нодучавгвдх соединение .1.
Таблица 7
лияние исодд ем соединений 1, 2 и 3 на. показатели деструктор аееони^от да широко» внутреннего гаерноге шщ еетнаток к ыс со стренгозотоцмновым сах арным: диабетом
римечание: - р , но сравнению с контролем;
" ~ р< 0,05 при срй ида г утщы животнь , яуч шщ. соединения 2 ж З е. грудной крыс, получавших соединение L
Таблица S
соединения 2.и 3 с группой крыс, получавших соединение 1.
Табдищ 9
Влияние йссдедуемк соей еййй 1 , 2: ш 3 на. нокшатеди деструтаки радйад&ной гдаи .» еет ашах крыс со ет егоххташщ еахарнмм диабете»
О шдаш ие - р<0,05 по е не щ} с контролем;
- р< 0,05 ери сравнении грустны животных, получавших соединения 2 и 1 3 с группой крыс, получавших, соединение 1.
Таблица 10
Вдяшие соединений !, :| ι 3 на потазатеяь удеашой. и щади ( } сосудов рвдндеи со стазом, еладжем и тромбозом сетчаток у : жс со етреттозетоцш-ювьш сахарны м диабетом
Групша животных Показатель удельной ндощйдн
И нтактный койтродь(п"9) 1 ,53*0.12
Контроль (ф
Соединение 1 ( ~ )
Соединение 2 (11=9)
Соединение 3 (п-9)
Примечание: % - р 0,05 по сравнению: с контролем;
* * р 0,05 жрй сравнении грукны животных, нопуадвтанх соединен» 2. и 3 с грушей крыс, изу авших соединение 1.,
Введение соединений 2 и более эффективно йредотврапзает деструкцию нейросенсорных е к, что выражается в е нженни процента пи отичннх ядер нейронов до значений: кш щ ош одя; и оовдадещм количества рядов ядер относитедшо контрольной грунпм и группы крыс,, лененных соединением 1 (та6д,6). Вместе с тем плотность р снредедения яде нейроеенсорных клеток в наружном ядерном сдое остается сниженным, что связано, вероятно, пролиферативно*прогрессивной- еакцией радиальной гдмк в виде пролиферации и гипертрофии склеральных отростков. Введение соединений 2 и 3 в отличие от соединения 1 способствовало водной сохранности нейронов внутреннего ядерного сдоя от яонре дак> его действия: стойкой дднтедьйой гнйерглике ни, что вы а ал сь в отсутствии достоверных ратдичнй но всем показателям деструкции ассошжшвньгх нейронов крыс (та6д,7). Внутрижелудочное введение соедтеен т 2 и 3 омзмвад нодо ж мое м тие ж состояние гангяио рных нейронов сетчатки, -причем процент нейронов с тотальным и очаговым ^ома ш ш ейн адось относительно адачений контрояьво группы и группы шшотн с леченных соедтншнмем 15 оставаясь ври этом все же достоверно шше значений и актйого контроля (табя.>£). Также при введении крысам соединений 2 и 3 отмечалось, полное восстановление всех показателей' деструкции радиальных глиоци ов (табл.9). Так, п оцент гоп Оморфнмх радиааьнъж .гяиоцитов снижался яри этом, гдщщейрондаьньта индекс возрастал по отношению как к контрольным" значениям, так и значениям группы крыс леченных соединением I, При жеденшт животным соединений 2 и 3 отмечалось .значительнее улучшение гемодинамики» что вы ажалось- в* достоверном снижении удельной .площади сосудов со стазом, сладжем и тромбозом по сравнению с аналогичными показателями к ыс контроля и леченных соединением 1 (табл Л 0),
Таким образом, введение соединений 2 и 3 но сравнению с соединением 1 в течение Ж суток: крысам с диабетдаеской ретт онатней., развившейся на- фоне стрентозотощ ового диабета, оказывало более ажеш-шй ретйнойротекториьгй эффект, привода к снижению выраженности деструкции всех структурных компонентов сетчатки.
Соединения 2 и 3 в отличие ох соединения .1. обладают достове но более высокой ретинопротекторной активностью.
соединения 1 , 2 м З в дозе 100 мг. кг в виде раствора в ί мл: кремофора,
У яаркошзяроваш х крыс (тшшенталом-натрия в дозе 6 г/жг, виугрибрюшиино): были от.г1реиарироваиы правая' бедренная, артерия и имплантирован катете для измерения системного артериального давления... Девая общая сонная артерия была отпрепарирована к перевязана наружная сонная артерия. На общую сонную артерию был. наложили, нжехочный датчик, и региехриравали ведй.чнму мозгового кровотока с помощью эдектромагнитного расходомера жровн.
Опыты по изучению влияния трехкратного Бнутрижедудочнога введения срединений L 2 » 3 на мозговой кровоток б ' ыт проведены: на 2S крысах -самцах линии Wistef массой 270-300 г, Бьши. сформированы 3 гру ы животных. Крысам конт ояъной группы :(п=7) вводили внугрйжелудо*шо ежедневно однократно в течение Э»х суток жвиобвемное количество 1 % крахмальной гели. 'Животным- одагшмх групп .вяу ри едудочно ежедневно однократно в течение 3-х суток, были введены соединения 3. (а555?), 2 и .3 (в"7) в дозе 100 г кг в 1 % крахмальном геле. На 3-й сутки эксперимента через 1 чае после последнего введения были проведены измерения мозгового кровотока у крыс
Рез льтату, пррвеяекнмх исследований «оказывают, что в контроле ври однократном парентерадвно (подкожном) введении кремафо а крысам уровень МК. в течение 1 часа был стабильным» в последующие 30 минут намерения выявлена незначительная тенденция снижению мозгового кровотока. При это отменена тенденция к снижению САД в течение проведения измерения, что, очевидно, связано с условиями опыта (наличие онерашадн -травмы и использование наркоза) (табл. М). При ту шту Шом трехдневном введении 1 % крахмального геля у животных контрольной груши значение мозгового кровотока составляло 6,2^0,4 мл/мин (табл.12),
Подкожные введени Масляного раствора соединений 1 , 2 и 3 к ысам способствовали, начиная с 5 мйнут измерения и до конца наблюдения существенному повышению МК, В период: с 45 до 90 мни эксперимента при введении соединений' 2 и 3 з чен МК у рис, достоверно оь и выше этого показа еля « группах контроля и леченных соединением I . При этом по уровню САД в течение всего периода наблюд ая достоверных различий между грушами животных не выявлено (та х.11),
При трехкратном внугрижелудочном введении крысам соединений 2 и 3 значения мозгового кровотока составили 9 Л*0 и 9,4 *05 мл/мни, что было, соответственно, выше, лем шок йдь контрольно» группы и животных леченных соединением 1 (та§л.
Таки образом, иодкйжиое введени масляного раствора соединений и п Бй кз? более существенно до сравнению с контролем, и жщотнв и денеинйми. соединением- 1 мозговой кровоток, не вызывай, снижение системного артериального давления. Трехкратное виутрижед.уд теое введение соединении 2 и 3 въ значи ое увеличение мозгового кровотока и по внрш аюсхж эффекта .превосходя соединение 1. Предлагашое изобретение расширяет арсена средств, способны увеличивать мозговой кровоток.
Таблица 1-2
Влияние нсследуемых гаедннений I.... и 3 на мозговой кровоток
Примечание: - р 0,05 и© сравневдда с кдатроа *
* - < 0,05 »р« сравнении руппы ивотнь , получавших соединения 2 и 3 с группой рздс, полетавших соединение 1.
Пример 6. Изучение гемореояост«чес ой, антйтттобошггарной и антнтромбогенной активностей соединений L 2 ж '3 было нровёден© на моделях ганервяжоети крови ex vivo:, йнугрисосудастогр тромбоза у крыс.
Онй ы по изучению ге ореодош'юекнж свойств соединений 1, 2 и 3 б ш проведены: ма .30 кр еах-самцах т&ат Wistar. массой 250-28D г, $ р м были уящ щю т. на 5 групп д 6 5 даотаь?х в каждой, Крисам контрольно хруипм вводили крахмальный гедь, животные ОНЫШЬЙ груди -· деитоксй иддии (400 г/кг) иди соединени 1, 2 и 3 (100 мг кг). Препараты и эетиобъемное количество 1 % к ахмальн й гедн (3 мл) вводили внут ижедудочно че ез зонд за- один час до забора, крови.
Вязкость кро и » агреганнй зрнтроштев Оценивали в пробах крови сраз после, взята» и через 1. час после инкубаиим крови при температуре 20,0*0,3°С,. Кровь забирали из общей сонной артерии иод эфирным наркозом, В качестве антикоугул нта был иснодьзован 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1 :9. Вязкость крови была измерена ма ротационном вискозиметре в диапазоне скоростей сдвига от 5 до 300 с*! до и после инкубаннв образцов при температуре 20,0*0,3°C в течение 60 минут.
В этой же серии оньгге» еповданнуш агрегацию эритроцитов иссдед вадн с помощью сндяектометрнчеегого метода. Критерием агрега о оЙ: активности
агрегации зр роцитов. Введение неш'Ок.сифиялина Предотвращало ускорение агрегадии. эритроцитов при инкубации, Вн; ршкеДудочное введение крысам соединений 2 и 3 замедляло агрегацию эритроцитов цри инкубации крови, что выразилось в достоверном повышении подунернода агрегации эритроцитов до сравнению с контролем и •'соединением 1 (табл. 14),
Таким образом, соединения. 2 и: 3 способны ограничивать развитие гшервязкоети крови и повышение axperaipH■■эритроцитов ex vivo. Эффективность соединений 2 й 3 по .ад а ениоеТи выше; чем эффект еоединейия I и ешвдетавий с кентоксмфвдлииом.
Влияние однократного внутрижелудо'шого введения нентокеифнлдз з и соединений- 1 , 2 и 3 на подуиериод агрегации эритроцитов до (1) через I ч после инкубации при комнатной температуре (20,0±0,3*'С) (2)
* - p Os05 но еращен о с грунной контроля;
* - р< 0,05 яри орашешш я угаш- животных, получавши соединения 2 и 3 с группой крыс, получавших -соединение I .
(Мы ы не нссде оваййю ктн ромбоедгта свойства соединений 1 , 2 н 3 бьши проведены 30 крьтсах-самцах линии Wistar массой 280-300 г, которые б ли разделены на 5 групп (но 6 особей в к дой). За час до щатиа крови крысам опытных групп вводили пеитоксйфйлянй (400 мг/кг) или соединения: 1, 2 и 3 (100 мг кг). ыс м: контрольно! грушы вводил» эквиоб е ные количества I % ра аданого геля . Кровь бш.а взята да общей сон вон артерии иод эфи ным наркозом:. В качестве аитшоугудянт был и одьзован % > раствор цитрата натрий, в соотношении с кровью 1:9. Агрегаций ромбоннтов определялн нефедометрнчееким методом. По стандартному методу были получены богатая (БТП) и бедная (БеТП) тромбоцитами плазм :« гщдсчштвалось число тромбоцитов* Поете определения числа тромбонитов в БТП была проведена стандартизация числа тромбоцитов, ля чего БТП разводилось необходимым количеством: БеТП до 400*27 тыс. тромбоцитов в I мм* в пробе. Дтя оценки аШтп омбонита иого действия сосудистой, стенки были использованы БТП и БеТП интактиьж крыс-доноров. Агрегацию тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме н приборе, агрегатограмвд. регистрировали с по ощью самописца. После добавления гщдуктора агрегации регистрировалось изменение уровня оптической плотности ΒΤΙΪ. В качестве критерия агрепвдтонной активности тромбоцитов был использован показател степени агрегации (в %}, характеризуемый иженением оптической" плотности БТП п еде добавлен в кювету индуктора агрегаций. ш этом: за 100% принимали величину оятачесжой плотности ВеГО, а з 0% - величину ои иче ой плотности БТП. Б качестве индуктора агрегации использовали АД в конечной концентрации 4 - 10"* М.
Подученные данные свидетельствуют., что у крыс контрольной группы амялнтуда агрегации тро боцитов, индуцированная АДФ в конечном концентрации 4- 10'6 М, составила 28*2 %. А шитуда АД -индуадроэашгой агрегации, тромбоцитов после введения йшт еифмддкна была достоверно ниже аналогичного показателя в контрольной груше. Посяе введения соединений 2 и 3 амплитуда агрегации 1|х мбоцшов также была достоверно ниже показателей в адед 1 (табл. 15)..
Таким образом, исследуемые соединений 2 и 3 но сравнению с соединением 1 обладают выраженным влиянием на соеудисто-тромбоцитарный гемостаз, Антатромбогенная активность соединений 2 ж 3 может быть обу бвд а как анштро бсщмтарн мй, так и эн рте л нйоротек:торнь1ми свойствами ,
Таблица 15
Влияние однократного вн трижеяудочного введения нентоксифидлиш и. ео инеиий I, 2 и 3 на АД -кидудироваин ю агрегацию тромбоцитов
Примечание; N - р<Й,Й5 но сравнению с : группой контроля;
" - < 0505 дрн сратещни грукрм ждаотйь , нолучавщнх вдединения 2 и 3 с группой крыс, получавших, соединение I ,
Эксперимент но изучению антятромбогенкых свойств соединени 1 , 2 и 3 были проведены на 30 крысах-самцах линии Wistar массой- 240-270 г. Были сформированы 5 труни до 6 животиьж в каждой. Животным кош одъной грушш вводили 1 % ра н»ный гель . Крысам рп тнмх груш соответственно вводили кентексйфиллин (400 мг/кг), соединения ί, 2- й 3 ( 0 г/кт). Соединен»» и жвнобъемнее -количество- I % крахмально! гели (3 мл) .вводили внутри едудочн через зонд I раз в день в течение й суток, На. 6-е сутки опыта, -через 1 чае- гэдеде последнего введения крысы были наркотаЗкровйта (тиопевхад натрия в дозе 60 мг/кг, внутрибрюшиино), выделена левая общая сонная артерия и воспроизведен модель ^^йс с йс огр тромбоза. На отп пари ованн ю сонную арте цк> б да наяо енад м и еточйые датчики, и регистрировали ведичнну кровотока до сосуду с номошью здектромагшгшаге расходомера крови. Далее под сонную артерию была подложена полоски фильтровальной бумаги н полиэтиленовой пленки. На Дгу артерию свержу накладывали, подоску
фт ьтров&^ ой бу аги,, ад которую был несена 1 капля 10% раствора FeCb. Измерения величины кровотока в артерии проводили от момента нанесения хлорида железа на левую сонную артерию до полной остановки кровотока в ней (время образования тромба). Расчет снижения кровотока относитея о исходной веп ин кровотока бы выражен в п оцентах. Массу тромб оценивали гравиметрнческим методом.
У животных к нт ольной трупом носяе воздействия на соеулнс у стенку раствором FeCl г происходило полное прекращение кровотока но сосуду. Среднее время полной остановки кровотока до нудя составило 23=fe2 минуты. Масса тромба, определяемая через сутки после аппликации х орида железа, составила 1 ,38^0,2 ж (табл. 16). При вн>ч щедуяонном введении крыса «ентгжшфнядина зарешетрироваяо снижение кровоток на 30 % от исхо ного значения к 90; минуте щеиернмен а. На следующие еут is и ошё сонных артерий у крыс этой грунп ромб в не обнаружено. Применение нентоксйфиллина уменьшае тромйообразоваийе в зоне стеноза. Внутрижеяудочное введение крыс соединений 2 и 3 нредотвра мо прекращение кровотока после анли ащш раствором Fe€i3.,. 90 минуте эксперимента у крыс, леченных, соединениями 2 и 3, §ыяо тштто снижение кровотока на ! 2 и 10 %, соответственно. Введение соединений 2 м 3 полностью препятствовало тромбообразоваиию в сонной артерии на еледуда ие сутки после аиликадни раствором Ее . По шштромбогенной активности соединения 2 и 3 шачительно превосходили соединение 1 ,
Таким образом, соединени 2 и 3 но сравнению с соединением I обладают выраженной антитромбогенной а гавност&кк
Таояи 16-
Влияние иенто фмллйна и соединений 1, 2 и 3 на снижение кровотока в сонной артерии в течение 90 минут и массу тромба через сутки после «пиликаний хлорида железа
римечание: ~ р , но сравнению с группо контроля;
?! - р й$5 п и С авнений, гругош жи ных, «одуча»шнх соединения 2 и 3 с групп й крыс, получавших соединение 1.
Пример 7.. Исследование' вротйвомше ической й протйвоаргг шеской активности соединений 1, 2 и 3 проведено в соответствии с Руководством но проведению доклинически исследований лекарственных средств (Часть первая. - М.; Гриф а К, 2012,- 944 с.) на модели ишемии и реперф з шттрм у крыс
Опыты проведены на 96 крысах-самцах лйний istar массой 240-250 г, Крысы были шдоЩ'Ззмровашй в 4 уйны. Крысам онштшдх групп соответственно «водили щщйненвд 1, 2 и 3 в дозе 100 «г/кг а виде еушешии на \% крахмальном геле (3 мя) вну вижедудочно через зонд 1 раз в день в течение 3 суток до м 3 суток после создания модели. Животным контрольной г шы' вводили эквиооьемное количество 1 % крахмальной гели по аналогичной -схеме;.
Эффективность еоед еш-ш .1 ,. 2 и. 3 §ЬШЙ изучены с помощью элёш окардйогрвфического (ЭКГ) и о олошчбежог методой. Для воепрощ&едения модели крысы. ли йаркотйзированм гттойе гадом. натрия, в дозе 60 кт; виу рйбрюштшио, интубкрованм и подключены к аппарату искусственной веи ия ни леших. После проведения торако- .и г ракардо омин б ла .· осуществлена окклюзия девой коронарной артерии на уровне нижнего края а с«1а sinistra без -нарушения топография сердца в грудной клетке по- методу Когана. [Коган А.Х. Хирургический метод моделирования корстеароокклюзионного инфаркта и аневризма сердца у к.р.мс//Патол6гическая: физиология и жшериментальная терапия. 79. J s3. с, 79-81]. Длительность окклюзии левой коронарной артернн составила 20 мин, после чего лигатуру развязывал» и осуществляли- лоети емическую реперфузию. В течение периода ишемии и 10 минут рш.ерфузни проводили мовиторнроваяне ЭКГ во П стандартном отведении с мощ&ю компьютерного з ектройюдишрафа. Верификацию правильности наложения лигатуры и адекватность модел:н отслежнвалн йО степени изменения высоты ST-c-егмеета на ЭКГ, У лш ноонерйрованнвхх животны проводили -аналогичное- оперативное- в ешателкство без иааожеиия лигатур «а левую коронарную артерию.
На 3-е сутки после ренерфузни крысы бы и вновь наркотнзярованы тионенталом натрия в дозе 60; мг/кг, внутрнбрюшинно,. шнтубнрованы и подключены к аппарату искусственной вентндодим легких и наложена, лигатура. Для выявления зоны, п-шоиерфузнп в бедренную: вену бод сио вводили 0.2 мл 5% раствора краентеяя patent Ыде violet, в течение после ующих 20- 30 секун извлекали сердце. Участки миокарда с сохраненной перфузией окрашив знсь в зедений д е , неперфузнруемые оставались неокрашенными.
Срезы 'сердца были приготовлены на замораживающем микротоме. Часть- срезов оставляли в нативно виде для оценки зоны г бйерфуза'И, Др г ю часть срезов окрашивали нйтросияйм тетразолнем (НСТ) е целью вь влениа в ткани дегидрогеназной активности. Срезы были заключены в г ерииобО^жедатиновый гель и сканированы. Размер зон гиподерфузии и изменения дегидрогеназной активности оценивали с применением программы Adobe Photoshop, За зону инфаркта принимали зон с резким c-нйженвем дегидрогеназной активности.
Для этого срезах миокарда в деляли уч стки, суммарная интенсивность окраски которых бв снижена в 2,5 раза и более относительно интактных одааетей миокарда, что отражало топографи снижения в той же степени дегидрогеназной активности [Коган А.Х. Хир гический метод моделирования коронароош юзнонного инфаркта ш аневризма се дца у крыс/УНатологнческйя физиология и э сп«римея я»н8я « авия. 1979. З. с, 79-81].
В результате проведеших: исследований было установлено, что в контрольной группе в течение первых асов после вееетановдешш кровошабжения миокарда левого желудочка погибло ! крыс из 24 (54%). При введении соединений 2 и 3,. в период, реперфузии нз 24 ЖИЙОТН ногабдо 1 - 2. Смертность в группе крыс леченных соедйиенияма: 2 а 3 составила 4 - 8' %, что достоверно отличалось от показателя в контроле ж группе животных, учавших
У &р онтрол ной грунщы к первым суткам и в течение й сде у^щйх 3 суток после возобновления перфузии миокарда левого желудочка на ЭКГ отмечалось появление патологического зубца Q> свидетедьствуи щего о надмчии некротических изменений в миокарде, и снижение ашхх ям зубца Т относительно исходных значений. После восстановлений кровоснабжения миокарда в течение периода репер уз у крыс контрольной группы сохранялось существенное снижение амплитуды зубца относительно исходник значений,, харакдершутощее нарушение процесса деполяризаций жедудочюв вследствие выключения части миокарда и процессов возбуждения. В группе крыс с; вве ением соединений 2 и 3 сравнению с «ощролем и группой животных леченных соединением I в течение 1-3 суток доеяе реиер уз ? миокарда отмечено достоверное снижение ппту х зубца. О ш ЭКГ после эпизода ищешда реперфузив. В течение периода ренерфузий к третьим суткам в группе крыс, леченных соединениями 2 и 3 бьгао выявлено отчетливое достоверное повышение амплитуды зубцов R и Т относительно контроля и группы животных с введением вдединеншг 1 (табд.18}.
Как видно из таблицы 19 по размеру зоны гипоперфузии от обшей площади поперечных срезов миокард исследуемые группы, существенно не отличались, У животных, леченных соединениями 2 и 3, ио сравнению с контролем и грувной крыс с введением соединения 1 отмечено достоверное уменьшений зон резко сниженной дегидрогенззион активности от общей площади миокарда и о шющщ зоны гипоперфузии. йвдовадагьно, ечебно- профнлакшческое введение соединений 2 и 3 снижает смертность животных после эпизода ашемии ренерфузте и значительно уменьшало зону инфаркта как от общей пдошади миока а, так- и от площади гаш ерфузии но сравнению с аналогичными показателями контрольной группы н "Группы животных леченных соединением 1 (табл.19),,
Таблица 17
Влияние исследуемых соединений 1г 2 ш 3 выживаемость ---животных в течение яервьж суток после ишодии яе!рф зик миокарда
Прнмеч нне; - p<0,G5 по сра енню с труппой контроля;
* - р 0,05 при еравнеини труппы, жкготных., гюлу а щих соеданенйя 2 и 3 с группой к ыс, получ их соединение 1.
Таблица 18
T , мк В 89,2*8, f* I 133,5±8>б"
Примечание: - p<0,O5 но сравнению с исходными значениям»;
* - p<£),Q5 по сравнению с группой контроля;
!? - р 9,05 яри сра ешда группы ивотны , получавших соединения 2 щ 3 С груидой крыс, получавших соединение 1.
с группой крыс, нодучавшш соедииенне I ,
У кр контрольной « опытных групп в шпемический и реиерфузиош й периоды в ра ш. соотношеннжж §нж отмечены все ви ы елудоч овых аритмий высоких адащш по LOWT .нолйтониая желудочковая зке раснегодия^ желудочковые тахда рдйи, фибр п щ желудочков. При этом у крыс контрольной гр га ишемичес Й период основную долю в нарушениях ритма еердна составили желудочковые фибридяяд и и желудопковйя тахикардия (табл. 2§-2!}. Смертность в контрольной груше крыс составила 54 % (табл. 16). Основной причиной гибели животных, явилис фатдаьные аритмии, в частности фибрилляции левого желудочк иослед^жвдей остановкой сердил
У животных опытных групп проф жктннесгае введение соединений 1 , 2 и 3 во время эпизода ишемии существенно не щменядо струк уру и а сердца в сравнении с частотой и аракте ом аритмий у животных контроля (табл. 20). Существенные различия в жличеетве в тяжести аритмий у крыс иадея груш были вв вдены в ренефуз нный период. В группе животных, леченных соединениями 2 и 3, но сравнению с контролем и группой с введением соединения 1. знанитедьно вединядосв число шотных без желудочковых аритадн и
достоверно снизилось количество крыс с фатальными желудочковыми мбрнлляци н (табл. 21}» Снижение патологических изменений ритма сердца и уменьшение чис а крыс с наиболее тяжелым видом аритмии ~ -желудочковыми фибриллящшми - проявились уменьшением летальности жнвотн йс, при введении соедане й т 3 в: яерефузиоякыЙ период.
Исследуемые соединения 2 в З в дозе 300 мг/кг массы тела, в отличие от шрояя. и соединения ! при его яетебяо-профйлзктй еском введении в условиях модели ишемии и ренер узии миокарда статистически значимо снижая частоту вознщщовеннЕ и т есть аритмий» уменьшая смертность животных, обусловленную фатальными аритмиями.
Таким образом, сушествеодое уменьшение зоны инфаркта миокарда, снижение частоты и тяжести аритмии и смертности животных, щт. введении соединений 2 и 3, обусловлено их
|^0ТИ» ИШШН^СКИ Н И И >О Н8 а Й МЙЧ«С И деёс внямв.
я- 3 с грудной крыс, получавших соединение 1.
Таблица 21
Вя шне исщедуемых соединений L 2 и 3 н частоту и характер аритмий во время ре-перфузин миокарда
Соединение 3 14* 4 4 2*"!
Примернее; - р<0,05( ) да сравнению с т опой контроля;
* - р 0,05 (χ2 ) при сравнений: грушш животных» шдучдаш х сойдниеяня 2 и 3 с гругшой крыс, яолу^авщта .соединение 1.
Предлагаемое юобретеше расширяет ареека средств, обладающих одновременно г ореодотечее ой* аш регат.ной', ащ грамбогеш . ретешойротекторкой, эндотеяийпроте торно , нейропроте торкой,, нротвдаари.тш-иеекой и противоншемшес ой актавность ,, уведдадаашэдих мозговой кр оток.
Claims
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016138751A RU2016138751A (ru) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний |
| RU2016138751 | 2016-09-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2018063040A2 true WO2018063040A2 (ru) | 2018-04-05 |
| WO2018063040A3 WO2018063040A3 (ru) | 2018-05-03 |
Family
ID=61762967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2017/050098 WO2018063040A2 (ru) | 2016-09-30 | 2017-09-30 | Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2016138751A (ru) |
| WO (1) | WO2018063040A2 (ru) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8053440B2 (en) * | 2007-02-01 | 2011-11-08 | Resverlogix Corporation | Compounds for the prevention and treatment of cardiovascular diseases |
| RU2502719C2 (ru) * | 2011-07-06 | 2013-12-27 | Учреждение Российской академии наук Институт химии Коми научного центра Уральского отделения РАН | 2,6-диизоборнилфенолы |
| RU2555335C9 (ru) * | 2014-02-06 | 2016-09-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Диборнол Девелопмент" | Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний |
-
2016
- 2016-09-30 RU RU2016138751A patent/RU2016138751A/ru not_active Application Discontinuation
-
2017
- 2017-09-30 WO PCT/RU2017/050098 patent/WO2018063040A2/ru active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2018063040A3 (ru) | 2018-05-03 |
| RU2016138751A (ru) | 2018-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klopfenstein et al. | Postnatal changes in the circulation and responses to volume loading in sheep. | |
| CN101589026B (zh) | 治疗脑神经胶质瘤的方法 | |
| CN105722516A (zh) | 一种用于治疗感染、败血症和损伤的方法 | |
| JPH08511265A (ja) | 血漿様溶液 | |
| Bauer et al. | A vasodilator action of acetates | |
| CN102526065B (zh) | 一种治疗心脑血管疾病的复方注射制剂及其制备方法 | |
| CN101850124B (zh) | 白蛋白纳米-超声微泡载组织型纤溶酶原激活物基因靶向体系及其制备方法 | |
| TWI577379B (zh) | 含有海藻糖之預防肺栓塞用哺乳動物細胞懸浮液 | |
| Amoni et al. | Cardioprotective and anti-arrhythmic effects of magnesium pretreatment against ischaemia/reperfusion injury in isoprenaline-induced hypertrophic rat heart | |
| Fisher et al. | Influence of alkylating agents on kidney erythropoietin production | |
| CN108186571A (zh) | 可逆交联不对称囊泡在制备治疗急性白血病药物中的应用 | |
| CN104857021A (zh) | 冷自体血心脏停搏液及其制备方法和应用 | |
| RU2555335C9 (ru) | Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний | |
| WO2018063040A2 (ru) | Средство для лечения сердечно-сосудистых заболеваний | |
| CN113893242B (zh) | Ash在心肌保护中用途 | |
| CN109045027A (zh) | 防治缺血性心脏病或缺血性脑病或血栓形成的药物及应用 | |
| CN101784193A (zh) | 促红细胞生成素互补或替代 | |
| CN105664174B (zh) | Lf-HA-DOX大分子前药复合物及其构建方法和在治疗神经胶质瘤中的应用 | |
| Zhang et al. | Cyclic RGD functionalized PLGA nanoparticles loaded with noncovalent complex of indocyanine green with urokinase for synergistic thrombolysis | |
| Drabek et al. | Assessment of the delta opioid agonist DADLE in a rat model of lethal hemorrhage treated by emergency preservation and resuscitation | |
| CN108853108A (zh) | 化合物在制备用于治疗脑胶质瘤的药物中的用途 | |
| Gratton et al. | Transport into retina measured by short vascular perfusion in the rat. | |
| Brands et al. | Whole‐body recruitment of glycocalyx volume during intravenous adenosine infusion | |
| McHale et al. | Effect of atrial fibrillation on atrial blood flow in conscious dogs | |
| Preston et al. | Impact of parenteral treprostinil dosing in pulmonary arterial hypertension |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 17856898 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A2 |
|
| NENP | Non-entry into the national phase in: |
Ref country code: DE |
|
| 32PN | Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established |
Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205N DATED 05/08/2019) |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 17856898 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A2 |