WO2018012683A1 - 항암 보조제 - Google Patents

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WO2018012683A1
WO2018012683A1 PCT/KR2016/013311 KR2016013311W WO2018012683A1 WO 2018012683 A1 WO2018012683 A1 WO 2018012683A1 KR 2016013311 W KR2016013311 W KR 2016013311W WO 2018012683 A1 WO2018012683 A1 WO 2018012683A1
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WO
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tgf
cancer
inhibitor
cell therapy
cells
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PCT/KR2016/013311
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English (en)
French (fr)
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이경미
임선아
김성진
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고려대학교 산학협력단
재단법인차세대융합기술연구원
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Definitions

  • the present invention relates to a supplement agent (supplement agent) that can be used in the treatment of cancer diseases using cell therapy.
  • Adoptive immune cell therapy is a method of activating cells in vitro and injecting them into a patient, and cell therapeutics including dendritic cells, T cells, and NK cells have been developed for clinical application.
  • cell therapeutics including dendritic cells, T cells, and NK cells have been developed for clinical application.
  • NK cells are one of the innate immune cells, which are capable of killing various types of cancer cells and are recognized as anticancer drugs because they recognize cancer cells regardless of the presence or absence of antigen.
  • NK cells In vitro expanded NK cells have excellent killing ability against solid cancer cell lines in vitro , but have not shown a clear cure effect in actual clinical trials. In clinical trials in patients with solid cancer, the main reason why cell therapies do not have a pronounced effect is that severe immunosuppression occurs in the tumor microenvironment.
  • the microenvironment of the tumor has the following characteristics. 1) Collagen or junction protein forms extracellular matrix, which physically prevents the invasion of immune cells, and 2) immune suppressor cells such as regulatory T cells and regulatory B cells. And 3) immunosuppressive cytokines such as IL-10 and TGF-beta are secreted to inhibit the function of T cells and NK cells that actually act as effector cells.
  • the present invention is to solve the above problems.
  • cancer cells including cancer using a cell therapy agent containing NK cells, cancer cell killing ability of natural killer cells, that is, anticancer or cell therapy aids, pharmaceutical combinations and cancer disease treatments that can enhance the therapeutic effect It is related to a kit.
  • the present invention also relates to a method for treating cancer using the therapeutic agent, adjuvant, combination, or kit.
  • the present invention also relates to a method of prescribing or administering the therapeutic agent, adjuvant, combination or kit to a subject for the purpose of treating a cancer disease.
  • the inventors of the present invention while studying a method for improving the therapeutic ability of effector cells in cell therapy, when a combination of the TGF- ⁇ inhibitor in the cell therapy with NK cells, when the conventional cell therapy alone administration, It was confirmed that the ability of the cells showing cancer killing effect is suppressed to solve the problem of low anticancer activity.
  • the present invention was completed by experimentally confirming that the combined administration of the TGF- ⁇ inhibitor shows a significantly better therapeutic effect than the single administration.
  • the present invention provides an anticancer adjuvant for use in the treatment of cancer diseases using a cell therapeutic agent comprising a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor and including natural killer cells (NK cells).
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • NK cells natural killer cells
  • the present invention also includes a TGF- ⁇ inhibitor and natural killer cells, and provides pharmaceutical combinations for individual, sequential or simultaneous use in the treatment of cancer diseases.
  • the present invention also provides kits for treating cancer diseases, including TGF- ⁇ inhibitors and natural killer cells, for individual, sequential or simultaneous use in the treatment of cancer diseases:
  • the present invention also provides a cell therapy adjuvant comprising a TGF- ⁇ inhibitor and for use in cell therapy of cancer using natural killer cells (NK cells).
  • a cell therapy adjuvant comprising a TGF- ⁇ inhibitor and for use in cell therapy of cancer using natural killer cells (NK cells).
  • the present invention also provides an anticancer cell therapy agent to a subject; Oral administration of a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor to the subject; And the cell therapy agent and the TGF- ⁇ inhibitor are provided individually, sequentially or concurrently.
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • the present invention provides a method for separately, sequentially or simultaneously administering a cell therapeutic agent comprising NK cells and a TGF- ⁇ inhibitor to a subject using an adjuvant, pharmaceutical combination, or a kit for treating cancer diseases.
  • the present invention it is possible to prevent the activity of the effector cells having anticancer activity administered for treatment by the immunosuppressive phenomenon appearing in the tumor microenvironment of the subject having cancer, thereby preventing The therapeutic effect can be significantly improved.
  • the formulation comprising the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention can be administered orally, can be administered to the subject at a higher frequency than the cell therapy, it is possible to increase the anticancer activity.
  • oral administration is possible, so that the number of administration can be easily adjusted in consideration of the severity, age, etc. of the individual, thereby having a better therapeutic effect.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing an administration plan of an NK cell therapeutic agent and a TGF- ⁇ inhibitor EW-7197 according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 2 is a graph showing the results of tumor growth inhibitory effect according to the combination treatment of NK cell therapy and TGF- ⁇ inhibitors according to an embodiment of the present invention.
  • 3A and 3B are graphs showing the effect of EW-7197 on proliferation of A375 cell line and PANC-1 cell line.
  • the present invention comprises a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor, and relates to an agent that can be used for anticancer treatment, a composition comprising the agent, and a kit comprising the same.
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • the agent may be an anticancer adjuvant, pharmaceutical combination or cell therapy adjuvant.
  • the anticancer adjuvant or cell therapy adjuvant including a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor and for use in the treatment of cancer diseases using a cell therapy agent comprising natural killer cells (NK cells). It may be about.
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • NK cells natural killer cells
  • the adjuvant containing the transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitors for anticancer adjuvant or cell therapy adjuvant for use in the treatment of cancer diseases using cell therapies including natural killer cells (NK cells) can be.
  • the anticancer adjuvant serves to increase the effect of the agent, substance, etc. having a therapeutic effect
  • the anticancer adjuvant is anticancer activity through the reduction of the anticancer activity or side effects of the active ingredient having a therapeutic activity when the anticancer agent is administered.
  • the cell therapy adjuvant means a preparation that enhances the therapeutic effect by the effector cells by leaving the cell therapeutic agent administered to the subject to increase or decrease the activity of the effector cells.
  • the term "administration" means introducing an effective amount of a pharmaceutically active ingredient into a patient in any suitable manner, and the route of administration of the composition of the present invention may be various oral or parenteral routes as long as it can reach the desired tissue. It can be administered through. Intraperitoneal administration, intravenous administration, intraarterial administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, topical administration, intranasal administration, pulmonary administration, rectal administration, but is not limited thereto. However, the adjuvant of the present invention may be preferably administered orally.
  • an effective amount is meant an amount necessary to delay or entirely stop the onset or progression of the particular disease to be treated, or to achieve a therapeutic effect.
  • the formulations in the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount. It will be apparent to those skilled in the art that a suitable total daily dose may be determined by the practitioner within the correct medical judgment.
  • a specific therapeutically effective amount for a particular patient is determined by the type and severity of the specific disease, including the type and severity of the reactions to be achieved and whether or not other agents are used, if any, of the other components contained in the composition.
  • the transforming growth factor ⁇ is a protein also known as transforming growth factor-beta or transforming growth factor-beta and induces cell suicide in the body and plays a role in inducing lymphocyte function and immune cell function.
  • the TGF- ⁇ inhibitor overexpresses in the tumor tissue in which the tumor cells are present, thereby increasing the extracellular matrix such as collagen, thereby lowering the role of anticancer active cells such as NK cells. To solve this problem.
  • the inhibitor refers to a substance that interferes with the function, expression or secretion of a specific substance and suppresses and lowers such a response.
  • the TGF- ⁇ inhibitor inhibits the activity or secretion of TGF- ⁇ protein in the body. It means a substance.
  • the TGF- ⁇ inhibitor is N-((4-([1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridin-6-yl) -5- (6-methylpyridin -2-yl) -1H-imidazol-2-yl) methyl) -2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197) or derivatives thereof.
  • the TGF- ⁇ inhibitor may be included in the present invention without being limited to the method of administration such as oral administration, intravenous administration, subcutaneous administration.
  • intravenous administration it may be administered simultaneously or sequentially with NK cells, and in the case of oral administration, it may be administered separately from NK cells, which may be determined by therapeutic judgment depending on the target of cancer treatment.
  • the present inventors have found that when a combination of TGF- ⁇ inhibitors is used for cell therapy, immune cells administered to a subject can be inhibited from being deteriorated by the tumor microenvironment, thereby significantly improving anticancer activity. Therefore, when the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention is used as an anticancer adjuvant or a cell therapy adjuvant, the effect of treatment can be improved.
  • the TGF- ⁇ inhibitor may be for oral administration.
  • administered orally such as intravenous administration
  • it is possible to administer only by a specialist such as a doctor there is a limitation that can be administered only in the treatment institution, there is a difficulty that the discomfort of the administration increases as the number of administration increases.
  • the TGF- ⁇ inhibitor can be administered orally, even if the frequency of administration is increased, the individual to be administered can be administered and treated by adjusting the effective dose, frequency, etc. without inconvenience, thereby obtaining excellent therapeutic effect.
  • cell therapy refers to a method of making cells with normal function and injecting them into a subject, and specifically, a cell having cancer that is expected to have immune function against a tumor. It may be an immunotherapy which is expected to be anticancer effect by administering to.
  • the cell therapy may be applied regardless of the type of cell therapy used for anticancer therapy.
  • the preparation including the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention since it directly acts on the microenvironment of the tumor tissue, and prevents the degradation of the effector cell activity in the cell therapy, all types of cell therapy, without any limitation, activity mechanism, etc. Can be used with cell therapies.
  • the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention in the method of treating cancer by administering NK cells cultured in vitro to the subject when administered to the subject in combination with a TGF- ⁇ inhibitor can prevent the decrease in cancer cell killing ability of NK cells, treatment alone It was confirmed experimentally that it shows a significantly higher anticancer effect than one case. Accordingly, the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention may be used as an anticancer adjuvant in treating cancer using cell therapy; Pharmaceutical combinations in the treatment of cancer diseases; Or as cell therapy aids in cell therapy of cancer.
  • Formulations of the present invention may be prepared comprising pharmaceutically suitable and physiologically acceptable ingredients, which may include excipients, disintegrants, sweeteners, binders, coatings, swelling agents, lubricants, glidants or flavors, and the like. Solubilizer may be used, but is not limited thereto.
  • the formulations of the present invention may be formulated as an adjuvant, including one or more pharmaceutically acceptable carriers, in addition to the active ingredient, for administration.
  • Carriers, excipients or diluents that may be included in the adjuvant of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate , Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • the formulations of the present invention may be formulations for oral or parenteral administration.
  • oral formulations may be capsules, tablets, coated tablets, sustained-release tablets, granules, powders, syrups, suspensions, emulsions, juices, aerosols, suppositories
  • parenteral preparations may be sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, It can be an emulsion, lyophilized preparation.
  • Parenteral preparations can be administered in conventional manner via intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, topical, rectal, or intradermal routes.
  • NK cells can be administered intravenously, and the agent can be administered transdermally to improve anticancer activity.
  • the agent can be administered transdermally to improve anticancer activity.
  • the formulations of the present invention may preferably be formulations for oral administration.
  • acceptable pharmaceutical carriers include, but are not limited to, diluents, preservatives, binders, lubricants, disintegrants, swelling agents, fillers, stabilizers, and combinations thereof.
  • the carrier may also include all components of the coating composition, which may include plasticizers, colorants, colorants, stabilizers and glidants.
  • Suitable coating materials include cellulose such as cellulose acetate phthalate, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methylcellulose, hydroxypropyl methylcellulose phthalate and hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate Os polymers; Polyvinyl acetate phthalate, acrylic acid polymers and copolymers, and methacryl resins, zein, shellac, and polysaccharides.
  • the coating material may contain conventional carriers such as plasticizers, colorants, colorants, glidants, stabilizers, pore formers and surfactants. Any pharmaceutically acceptable excipient includes, but is not limited to, diluents, binders, lubricants, disintegrants, colorants, stabilizers, and surfactants.
  • Such diluents are generally required to increase the volume of a solid dosage form, thereby providing a particle size for the compression of tablets or the formation of beads and granules.
  • Suitable diluents are dicalcium phosphate dihydrate, calcium sulfate, lactose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose, microcrystalline cellulose, kaolin, sodium chloride, dry starch, hydrolyzed starch, pregelatinized starch, dioxide Silicon, titanium oxide, magnesium aluminum silicate, and powdered sugars.
  • the binder is used to impart adhesive properties to the solid dosage form to ensure that the tablets or beads or granules remain intact even after being formulated into the dosage form.
  • Suitable binding agents are natural and synthetic such as starch, pregelatinized starch, gelatin, sugars (including sucrose, glucose, dextrose, lactose and sorbitol), polyethylene glycols, waxes, acacia, tragaconth, sodium alginate Cellulose, acrylic and methacrylic acid copolymers, methacrylic acid copolymers, methyl methacrylate, including gums, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose, ethylcellulose, and veegum Synthetic polymers, such as, but not limited to, copolymers, aminoalkyl methacrylate copolymers, polyacrylic acid / polymethacrylic acid, and polyvinylpyrrolidone.
  • the lubricant is used to facilitate tablet manufacture.
  • suitable lubricants include, but are not limited to, magnesium stearate, calcium stearate, stearic acid, glycerol behenate, polyethylene glycols, talc and mineral oils.
  • Such disintegrants are used to facilitate disintegration or breakage of the dosage form after administration, and are generally used for starch, sodium starch glycolate, sodium carboxymethyl starch, sodium carboxymethylcellulose, hydroxypropyl cellulose, Cross-linked polymers such as gelatinized starch, clay, cellulose, arginine, gum or crosslinked PVP.
  • Such stabilizers are used to inhibit or retard drug degradation reactions including, for example, oxidation reactions.
  • Suitable stabilizers include antioxidants, butylated hydroxytoluene (BHT), ascorbic acid, salts and esters thereof; Vitamin E, tocopherol and salts thereof; Sulfites such as sodium metabisulfite; Cysteine and derivatives thereof; Citric acid; Propyl gallate, and butylated hydroxyanisole (BHA), but are not limited to these.
  • Oral dosage forms such as capsules, tablets, solutions and suspensions may be formulated to have controlled release.
  • one or more compounds and optionally one or more additional active ingredients can be formulated into nanoparticles, microparticles, and combinations thereof, encapsulated in soft or hard gelatin or non-gelatin capsules or dispersed in a dispersion medium to oral suspensions or syrups.
  • the particles may be formed of a drug and a controlled release polymer or matrix.
  • the drug particles may be coated with one or more controlled release coatings prior to incorporation into the finished dosage form.
  • Formulations for parenteral administration can be prepared into aqueous compositions using techniques known to those skilled in the art.
  • such compositions are injectable formulations, eg, solutions or suspensions; Solid forms suitable for use to prepare into solution or suspension upon addition of the reconstitution medium prior to injection, such as micro or nanoparticles; Water-in-oil (w / o) emulsions, emulsions such as oil-in-water (o / w) emulsions, and microemulsions, liposomes, or emulsions thereof.
  • the carrier may be, for example, water, ethanol, one or more polyols (such as glycerol, propylene glycol, and liquid polyethylene glycols), oils (such as vegetable oils (such as peanut oil, corn oil, sesame oil, etc.)), and combinations thereof It may be a solvent or a dispersion medium containing, but is not limited thereto. Proper fluidity can be maintained by using a coating such as lecithin or by maintaining the required particle size in the case of dispersions or by using surfactants. It may also include, but is not limited to, tonicity agents of sugars or salts such as sodium chloride.
  • Solutions or dispersions of the active compounds as free acids or free bases or pharmaceutically acceptable salts can be prepared in water or other solvents or dispersion media in proper mixing with one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • Excipients include, but are not limited to, for example, surfactants, dispersants, emulsifiers, pH adjusters, and combinations thereof.
  • Suitable surfactants can be anionic, cationic, amphoteric or nonionic surface active agents.
  • Suitable anionic surfactants include, but are not limited to, those containing carboxylate, sulfonate and sulfate ions.
  • anionic surfactants include sodium, potassium, ammonium of long chain alkyl sulfonates such as sodium dodecylbenzene sulfonate and alkyl aryl sulfonates; Dialkyl sodium sulfosuccinates such as sodium dodecylbenzene sulfonate; Dialkyl sodium sulfosuccinates such as sodium bis- (2-ethylthioxyl) -sulfosuccinate; And alkyl sulfates such as sodium lauryl sulfate.
  • Cationic surfactants include, but are not limited to, quaternary ammonium compounds such as benzalkonium chloride, benzetonium chloride, cetrimonium bromide, stearyl dimethylbenzyl ammonium chloride, polyoxyethylene and coconut amine.
  • nonionic surfactants are ethylene glycol monostearate, propylene glycol myristate, glyceryl monostearate, glyceryl stearate, polyglyceryl-4-oleate, sorbitan acylate, sucrose acylate, PEG- 150 laurate, PEG-400 monolaurate, polyoxyethylene monolaurate, polysorbate, polyoxyethylene octylphenylether, PEG-1000 cetyl ether, polyoxyethylene tridecyl ether, polypropylene glycol butyl ether, poloxamer 401, stearoyl monoisopropanolamide and polyoxyethylene hydrogenated tallow amide.
  • amphoteric surfactants include, but are not limited to, sodium N-dodecyl- -alanine, sodium N-lauryl- -iminodipropionate, myristo ampoacetate, lauryl betaine, and lauryl sulfobebetaine. It is not.
  • the formulation may contain a preservative to inhibit the growth of microorganisms. Suitable preservatives include, but are not limited to, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and thimerosal.
  • the formulation may also contain, but is not limited to, antioxidants that can prevent degradation of the active ingredient (s).
  • the formulations of the invention may be used separately, sequentially or concurrently with or administered with a cell therapy comprising immune cells.
  • a cell therapy comprising immune cells.
  • the above administration includes both oral and parenteral administration of tablets, capsules and the like.
  • a cell therapeutic agent containing natural killer cells there is a restriction in that it can be administered in a therapeutic institution, but the agent of the present invention can be administered orally, so that the individual can be administered by themselves.
  • administration of the agent of the present invention first, followed by sequentially administering a cell therapy agent; Following administration of the cell therapy, the agents of the invention are administered sequentially; Oral administration of the agent of the present invention while simultaneously administering the cell therapy agent; Alternatively, even if the agent of the present invention and the cell therapy are administered separately according to the number of prescriptions, the effect of the agent of the present invention as an anticancer adjuvant and a cell therapy adjuvant can be obtained.
  • oral administration is possible, and the administration method, timing, dosage, administration frequency, etc. can be effectively adjusted in consideration of the severity of the individual's illness, health conditions, and the like.
  • cancer or cancer disease is also referred to as a tumor (tumor), and means to include all irrespective of its kind as a lump abnormally grown by excessive growth of body tissues.
  • tumor tumor
  • One example includes both benign and malignant tumors, and includes both solid and soluble tumors.
  • the cancer disease is breast cancer, lung cancer, stomach cancer, liver cancer, hematological cancer, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head and neck cancer, skin or eye melanoma, uterine sarcoma, ovarian cancer, rectal cancer, anal cancer, colon cancer , Tubal cancer, endometrial cancer, cervical cancer, small intestine cancer, endocrine cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, kidney cancer, soft tissue tumor, urethral cancer, prostate cancer, bronchial cancer, and bone marrow cancer.
  • the pharmaceutical combination comprises a TGF- ⁇ inhibitor and natural killer cells.
  • the pharmaceutical combination is for separately, sequentially or simultaneously administering the TGF- ⁇ inhibitor and the natural killer cells to the subject, and may have different administration characteristics according to the type of the TGF- ⁇ inhibitor used in combination.
  • TGF- ⁇ inhibitor is N-((4-([1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridin-6-yl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol- 2-yl) methyl) -2-fluoroaniline (TEW-7197) or derivatives thereof.
  • natural killer cells are administered intravenously, and EW-7197 is administered orally individually with a TGF- ⁇ inhibitor. Confirmed.
  • the specific dose of EW-7197 and natural killer cells co-administered in the present invention may be determined in consideration of the patient's condition, age, height, lesion size, condition, and the like.
  • anticancer agents anticancer activity, components, and components added for the preparation are the same as described above, and thus will not be redundantly described.
  • the cell therapy adjuvant includes a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor, and for use in cell therapy of cancer using natural killer cells (NK cells).
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • NK cells natural killer cells
  • the TGF- ⁇ inhibitor is N-((4-([1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridin-6-yl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol -2-yl) methyl) -2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197) or derivatives thereof.
  • the cell therapy adjuvant may be for oral administration.
  • intravenous administration is most common.
  • too many administrations cause great inconvenience to the individual, which may be a limit in actual treatment. If the TGF- ⁇ inhibitor can be administered orally, even if the frequency of administration is increased, the individual to be administered can be effectively administered and treated without discomfort, thereby obtaining an excellent therapeutic effect.
  • anticancer agents anticancer activity, components, and components added for the preparation are the same as described above, and thus will not be redundantly described.
  • the present invention provides a kit for treating cancer disease, comprising a TGF- ⁇ inhibitor and natural killer cells.
  • the kit may comprise a TGF- ⁇ inhibitor in the first compartment and natural killer cells in the second compartment, which may be administered individually, sequentially or simultaneously to the subject.
  • TGF- ⁇ inhibitor is N-((4-([1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridin-6-yl) -5- (6-methylpyridin-2-yl) -1H-imidazol- 2-yl) methyl) -2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197) or derivatives thereof.
  • the compartment may be a container for accommodating the pharmaceutical preparation according to the present invention, and may be, for example, a vial, but is not limited thereto.
  • the anticancer agent, anticancer activity, components and components added for the preparation are the same as described above, and thus will not be redundantly described.
  • the present invention provides an individual, a sequential treatment of a TGF- ⁇ inhibitor and a cell therapeutic agent comprising NK cells to a subject using the adjuvant, pharmaceutical combination, cell therapy adjuvant, or kit for treating cancer disease. Or a method of concurrent administration and a method for treating cancer diseases using the same.
  • the method specifically comprises administering to a subject a cell therapy comprising natural killer cells (NK cells) in an effective amount; And administering a transforming growth factor ⁇ (TGF- ⁇ ) inhibitor to the subject.
  • NK cells natural killer cells
  • TGF- ⁇ transforming growth factor ⁇
  • the cell therapy may be applied regardless of the type of cell therapy used for anticancer therapy.
  • the preparation including the TGF- ⁇ inhibitor of the present invention since it directly acts on the microenvironment of the tumor tissue, and prevents the degradation of the effector cell activity in the cell therapy, all types of cell therapy, without any limitation, activity mechanism, etc. Can be used with cell therapies.
  • the cell therapy agent may be administered parenterally.
  • Parenteral administration is meant to include all routes of natural and artificial therapeutic agents into the subject, rather than via the esophagus, stomach, and intestines in the oral cavity.
  • it may be administered in the brain, intratracheal, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, transdermal, subcutaneous or intramuscular.
  • the cell therapy agent and the TGF- ⁇ inhibitor may be administered separately, sequentially or simultaneously.
  • a cell therapeutic agent containing natural killer cells there is a restriction in that it can be administered in a therapeutic institution, but the agent of the present invention can be administered orally, so that the individual can be administered by themselves.
  • administration of the agent of the present invention first, followed by sequentially administering a cell therapy agent; Following administration of the cell therapy, the agents of the invention are administered sequentially; Oral administration of the agent of the present invention while simultaneously administering the cell therapy agent;
  • the agent of the present invention and the cell therapy are administered separately according to the number of prescriptions, the effect of the agent of the present invention as an anticancer adjuvant and a cell therapy adjuvant can be obtained.
  • oral administration is possible, and the administration method, timing, dosage, administration frequency, etc. can be effectively adjusted in consideration of the severity of the individual's illness, health conditions, and the like.
  • the TGF- ⁇ inhibitor may be preferably administered orally to the subject.
  • oral administration can be administered by adjusting the dosage, frequency, etc. without discomfort of the individual, it can be expected excellent treatment effect.
  • the anticancer agent, anticancer activity, components, and components added for the preparation are the same as described above, and thus will not be redundantly described.
  • Natural killer cells were collected from human blood, centrifuged at 2500 rpm for 30 minutes using Ficoll (Ficoll-paqueTM PLUS, GE healthcare), and then peripheral blood mononuclear cells were separated from the buffy coat. Then, hRPMI medium with 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin in RPMI1640 medium at a ratio of 1: 0.5: 0.5 in the presence of IL-2 500 U / ml using Jurkat and EBV-LCL cell lines irradiated with 100 Gy The culture was carried out while co-cultured with an hRPMI medium added with 500 U / ml of IL-2 once every four days.
  • Ficoll Ficoll-paqueTM PLUS, GE healthcare
  • Natural killer cells cultured for about 2 weeks are placed in a solution containing 90% FBS and 10% DMSO, and then placed in an isopropanol container (jar), and then frozen and stored at -80 ° C. Before being used in vivo, the cells were dissolved in a water bath at 37 ° C., and the cells were counted using a hematocytometer to prepare 5 ⁇ 10 7 cells / ml.
  • EW-7197 (medipacto) was prepared as a TGF- ⁇ inhibitor, and dissolved in artificial gastric fluid (2 g / L NaCl, 3.2 g / L Pepsin, 0.06 M HCl) and used at 2.5 mg / kg.
  • Tumors were induced by injecting melanoma cell line A375 subcutaneously into a 2.5 ⁇ 10 6 cell number in 7-8 week old immunodeficient mice (NSG, 25-30 g). After 7 days, when tumors were formed, 2.5 mg / kg of the TGF- ⁇ inhibitor EW-7197 was orally administered five times a week, and NK cells were injected intravenously with a 1 ⁇ 10 7 cell number once every 7 days (FIG. 1). A total of 25 days was administered and tumor size was measured once every 3 days. After 28 days, the mice were killed to isolate tumors and the tumors were weighed. The results are shown in FIG.
  • the control group to which nothing was administered and the group administered with NK cells alone or with TGF- ⁇ inhibitor alone and the combination with NK cells and TGF- ⁇ inhibitor were compared with NK cells or TGF- ⁇ inhibitor alone.
  • the co-administered group administered with the same was confirmed that the tumor volume was reduced by more than 50% compared to the single-administered group. Therefore, the combination of NK cells and TGF- ⁇ inhibitors, it was confirmed that can significantly improve the anticancer activity.

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Abstract

본 발명은 본 발명은 세포치료제를 이용한 암 치료 시 사용할 수 있는 보조제 및 이를 이용한 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 암을 갖는 대상체의 종양 미세환경에서 나타나는 면역 억제 현상에 의하여 치료를 위해 투여된 효력세포의 활성이 저하되는 것을 방지할 수 있어, 세포 치료를 이용한 암의 치료 효과를 현저히 향상시킬 수 있다.

Description

항암 보조제
본 발명은 세포치료제를 이용한 암 질환 치료 시 사용할 수 있는 보조제 (supplement agent)에 관한 것이다.
입양 면역 세포 치료는 세포를 체외에서 활성화 시켜 환자에게 주입하는 방법으로 수지상 세포, T 세포, NK 세포 등을 포함하는 세포 치료제가 임상적용을 위하여 개발되고 있다. 그 중에서도 NK 세포는 선천면역세포 중 하나로, 다양한 종류의 암세포를 살상가능하고 항원 유무에 관계없이 암세포를 인식하기 때문에 항암치료제로서 각광받고 있다.
체외 확장시킨 NK 세포는 in vitro 상에서 고형암 세포주에 대한 살상능이 매우 뛰어나지만, 실제 임상 시험에서 뚜렷한 완치 효과를 보이지 못하고 있다. 실제 고형암 환자의 임상 시험에서 세포 치료제가 뚜렷한 효과를 나타내지 못하는 주된 이유는 종양 미세 환경에서 심각한 면역 억제 현상이 일어나기 때문이다.
종양의 미세 환경은 다음과 같은 특징을 가지고 있다. 1) 콜라겐(collagen)이나 접합 단백질(junction protein)등이 세포외 기질(Extracellular matrix)을 이루고 있어서 면역세포의 침투를 물리적으로 방해하고, 2) 조절 T 세포, 조절 B 세포 등과 같은 면역 억제 기능 세포들이 존재하며, 3) IL-10, TGF-beta와 같은 면역 억제성 사이토카인이 분비가 되어 실제 효력 세포로 작용하는 T 세포, NK 세포의 기능이 억제되는 것으로 알려져 있다.
따라서, 이러한 종양의 미세 환경을 조절하여 항암 치료에 사용하고자 하는 시도가 있었다. 그러나, 개체에 적용되어 실제로 미세 환경 조절 효과가 미미하였고, 투여의 불편함이 존재해 실제로 치료에 사용되는데 어려움이 있었다.
그러므로, 이러한 한계점을 극복하기 위하여 체내 환경을 조절하여 세포 치료제의 치료 효과를 높일 수 있는 방법에 대한 지속적인 연구가 요구되고 있다.
본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위한 것이다. 특히, NK 세포를 포함하는 세포 치료제를 이용한 암을 포함하는 질병의 세포 치료 시, 자연 살해세포의 암세포 살상능, 즉 치료 효과를 높일 수 있는 항암 또는 세포 치료 보조제, 약학적 병용제 및 암 질환 치료용 키트에 관한 것이다.
또한, 상기 치료제, 보조제, 병용제 또는 키트를 이용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또한, 상기 치료제, 보조제, 병용제 또는 키트를 암 질환을 치료하기 위한 목적으로 개체에 처방 또는 투여하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 발명자는 세포 치료 시 효력 세포의 치료능을 높일 수 있는 방법에 대하여 연구하던 중, NK 세포를 이용한 세포 치료 시 TGF-β 억제제를 병용 투여하는 경우, 종래의 세포 치료제의 단독 투여 시, 암 살상 효력을 나타내는 세포의 기능이 억제되어 항암활성이 떨어지는 문제를 해결할 수 있음을 확인 하였다. 또한, TGF-β 억제제의 병용 투여 시, 단독 투여보다 현저하게 우수한 치료 효과를 나타냄을 실험적으로 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 이러한 측면에서 본 발명은, TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하며, 자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포 치료제를 이용한 암 질환의 치료에 사용하기 위한 항암 보조제를 제공한다.
또한, 본 발명은 TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 포함하며, 암 질환 치료에서 개별, 순차 또는 동시 사용을 위한 약학적 병용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 포함하고, 암 질환 치료에서 개별, 순차 또는 동시 사용을 위한 암 질환 치료용 키트를 제공한다:
또한, 본 발명은 TGF-β 억제제를 포함하고, 자연 살해세포(NK cell)를 이용한 암의 세포 치료(cell therapy)에 사용하기 위한 세포 치료(cell therapy) 보조제를 제공한다.
또한, 본 발명은 항암용 세포치료제를 개체에 투여하고; TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 개체에 경구 투여하며; 및 상기 세포치료제와 TGF-β 억제제는 개별, 순차 또는 동시 투여하는 것,을 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명의 보조제, 약학적 병용제 또는 암 질환 치료용 키트를 이용하여 대상체에게 NK 세포를 포함하는 세포 치료제 및 TGF-β 억제제를 개별, 순차 또는 동시 투여하는 방법을 제공한다.
본 발명을 이용하면, 암을 갖는 대상체의 종양 미세환경에서 나타나는 면역 억제 현상에 의하여 치료를 위해 투여된 항암 활성을 갖는 효력세포의 활성이 저하되는 것을 방지할 수 있어, 세포 치료를 이용한 암 질환의 치료 효과를 현저히 향상시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 TGF-β 억제제를 포함하는 제제는 경구 투여가 가능한 것으로, 세포치료제 보다 높은 빈도수로 개체에 투여할 수 있어, 항암 활성을 높일 수 있다. 또한, 경구 투여가 가능하여 개체의 중증도, 나이 등을 고려하여 투여 횟수를 용이하게 조절할 수 있어, 더 우수한 치료 효과를 가질 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 NK 세포 치료제와 TGF-β 억제제인 EW-7197의 투여 계획을 나타내는 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 NK 세포 치료제와 TGF-β 억제제 병용치료에 따른 종양 성장 억제효과의 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3a 및 도 3b는 A375 세포주 및 PANC-1 세포주의 증식에 대한 EW-7197의 영향을 나타내는 그래프이다.
이하에서, 본 발명의 에 대하여 상세히 설명한다.
다만, 본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 형태를 가질 수 있는바, 이하에서 기술하는 특정 실시예 및 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명을 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니다. 본 발명의 범위는 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하며, 항암 치료에 사용할 수 있는 제제, 상기 제제를 포함하는 조성물 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.
상기 제제는 항암 보조제, 약학적 병용제 또는 세포 치료 보조제일 수 있다.
구체적으로, TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하며, 자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포 치료제를 이용한 암 질환의 치료에 사용하기 위한 항암 보조제 또는 세포 치료(cell therapy) 보조제에 관한 것 일 수 있다.
또한, 상기 TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하는 보조제는 자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포 치료제를 이용한 암 질환의 치료에 사용하기 위한 항암 보조용 또는 세포 치료 보조용 약학 조성물 일 수 있다.
본 발명에서 "보조제"란 치료 효과를 갖는 제제, 물질 등의 효과를 증대시켜주는 역할을 하는 것으로, 상기 항암 보조제는 항암제 투여 시 치료 활성을 갖는 유효성분의 항암 활성 또는 부작용 감소 등을 통해 항암활성을 높여주는 제제를 의미하고, 상기 세포 치료 보조제는 대상체에 투여되는 세포 치료제를 효력세포의 활성 등을 높여주거나 저하되는 것을 방치하여 효력세포에 의한 치료효과를 높여주는 제제를 의미한다.
본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 약학적 활성 성분을 유효량으로 환자에게 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 동맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 다만, 본 발명의 보조제의 경우 바람직하게 경구 투여 될 수 있다.
상기 "유효량"은 목적하는 치료되어야 할 특정 질환의 발병 또는 진행을 지연하거나 전적으로 중지, 또는 치료 효과를 이루는데 필요한 양을 의미한다. 본 발명에서의 제제는 약학적 유효량으로 투여될 수 있다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적인 질환의 종류, 중증도, 조성물에 함유된 다른 성분의 종류 및 함량, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
상기 TGF-β(Transforming growth factor β)는 전환성장인자-베타 또는 형질전환증식인자-베타라고도 하는 단백질로 체내에서 세포 자살을 유도하고, 림프구의 기능, 면역세포의 기능에 관여하는 역할을 한다. 본 발명에서는 상기 TGF-β에 의한 종양세포가 존재하는 종양 조직 내에서 과발현되어 콜라겐 등의 세포 외 기질이 현저하게 증가하여, NK세포 등과 같은 항암 활성 세포의 역할을 저하시키는 문제를 TGF-β 억제제를 이용하여 해결하고자 한다.
본 발명에서 억제제란 특정 물질의 기능, 발현 또는 분비 등을 방해하고, 이러한 반응을 억눌러 낮춰주는 작용을 하는 물질을 의미하는 것으로, 상기 TGF-β 억제제는 체내 TGF-β 단백질의 활성 또는 분비를 억제하는 물질을 의미한다.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197)또는 이의 유도체 일 수 있다.
상기 TGF-β 억제제는 경구 투여, 정맥 투여, 피하 내 투여 등 그 투여 방법에 제한되지 않고 본 발명에 포함될 수 있다. 정맥 투여용 제제의 경우 NK 세포와 동시 또는 순차적으로 투여 될 수 있고, 경구 투여제의 경우 NK 세포와 분리되어 투여될 수 있으며, 이는 암의 치료 대상에 따라서 치료적 판단에 의하여 결정될 수 있다.
본 발명자들은 세포 치료 시, TGF-β 억제제를 병용투여 하는 경우 대상체에 투여된 면역세포가 종양 미세환경에 의하여 활성이 저하되는 것을 억제할 수 있어, 항암 활성을 현저하게 향상시킬 수 있음을 밝혔다. 따라서, 본 발명의 TGF-β 억제제를 항암 보조제 또는 세포 치료 보조제로 사용하면, 치료의 효과를 향상 시킬 수 있다.
바람직하게는, 상기 TGF-β 억제제는 경구 투여용 일 수 있다. 정맥 투여 등의 경구 외 투여되는 경우, 의사 등의 전문가에 의한 투여만 가능하므로, 치료 기관에서만 투여가 가능한 제한이 있고, 투여 횟수가 늘어날수록 투여의 불편함이 더 커지는 어려움이 있다. 그러나, TGF-β 억제제가 경구 투여가 가능할 경우, 투여 빈도수를 높여도 투여 받는 개체가 불편함 없이 효과적인 투여량, 횟수 등을 조절하여 투여 및 치료가 가능하므로, 우수한 치료효과를 얻을 수 있다.
본 발명에서 "세포 치료(cell Therapy)"란, 정상 기능을 지닌 세포를 만들어 대상체에 주입하여 치료하는 방법을 의미하는 것으로, 구체적으로 종양에 대하여 면역 기능을 가진 것으로 예상되는 세포를 암을 가진 대상체에 투여하여 항암효과를 기대하는 면역치료요법(immunotherapy) 일 수 있다. 상기 세포치료제는 항암 치료에 이용되는 세포치료제라면 그 종류에 상관없이 적용 될 수 있다. 본 발명의 TGF-β 억제제를 포함하는 제제의 경우, 종양 조직의 미세 환경에 직접적으로 작용하여, 세포치료제 내의 효력 세포의 활성의 저하를 방지하는 것이므로, 세포치료제의 종류, 활성 메커니즘 등에 제한 없이 모든 세포치료제와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 체외 배양된 NK 세포를 대상체에 투여하여 암을 치료하는 방법에서 TGF-β 억제제를 병용하여 대상체에 투여하는 경우 NK 세포의 암세포 살상능의 저하를 예방할 수 있어, 단독 처리한 경우보다 현저하게 높은 항암 효과를 나타냄을 실험적으로 확인 하였다. 따라서, 본 발명의 TGF-β 억제제는 세포치료제응 이용한 암 치료 시 항암 보조제; 암질환 치료에서 약학적 병용제; 또는 암의 세포 치료에서 세포 치료 보조제;로 효과적으로 사용할 수 있다.
본 발명의 제제는 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 성분을 포함하여 제조할 수 있고, 상기 성분으로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등의 가용화제를 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제제는 투여를 위해서 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 보조제로 제제화할 수 있다. 본 발명의 보조제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제제는 경구 또는 비경구 투여를 위한 제제 일 수 있다. 예를 들어, 경구제제는 캡슐제, 정제, 피복정, 서방정, 과립제, 산제, 시럽, 현탁제, 유제, 즙, 에어로졸, 좌제일 수 있고, 비경구제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 일 수 있다. 비경구제제의 경우에는 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 근육 내, 흉골 내, 국소, 직장, 또는 피 내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, NK 세포는 정맥 투여되고, 제제는 경투 투여함으로써 항암 활성을 향상 시킬 수 있음을 확인 하였다. 특히, 정맥 투여 등의 경구 외 투여되는 경우, 의사 등의 전문가에 의한 투여만 가능하므로, 치료 기관에서만 투여가 가능한 제한이 있고, 투여 횟수가 늘어날수록 투여의 불편함이 더 커지는 어려움이 있다. 그러나, TGF-β 억제제가 경구 투여가 가능할 경우, 투여 빈도수를 높여도 투여 받는 개체가 불편함 없이 효과적인 투여량, 횟수 등을 조절하여 투여 및 치료가 가능하므로, 우수한 치료효과를 얻을 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제는 바람직하게는 경구 투여를 위한 제제일 수 있다.
상기 경구 투여를 위한 제제의 경우, 허용 가능한 약제학적 담체는 희석제, 방부제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 팽윤제, 충진제, 안정화제 및 이의 조합을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 담체는 또한 가소제, 색소, 색료, 안정화제 및 유동화제를 포함할 수 있는 코팅 조성물의 모든 성분들을 포함할 수 있다. 적합한 코팅 물질의 예로는 세룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 히드록시프로필 세룰로오스, 히드록시프로필 메틸세룰로오스, 히드록시프로필 메틸세룰로오스 프탈레이트 및 히드록시프로필 메틸세룰로오스 아세테이트 석시네이트와 같은 세룰로오스 중합체; 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 아크릴산 중합체 및 공중합체, 및 메타크릴수지, 제인, 셀락 및 다당류를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추가적으로, 상기 코팅 물질은 가소제, 색소, 색료, 유동화제, 안정화제, 다공 형성제 및 계면활성제와 같은 통상적인 담체를 함유할 수 있다. 임의의 약제학적으로 허용되는 부형제는 희석제, 결합제, 윤활제, 붕괴제, 색료, 안정화제 및 계면활성제를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 희석제는 일반적으로 고체 투여 형태의 부피를 증가시키는 데 필요하며, 이로써 정제의 압축 또는 비드 및 과립의 형성을 위한 입자 크기가 제공된다. 적합한 희석제는, 이칼슘 포스페이트 이수화물, 황산칼슘, 락토스, 수크로스, 만니톨, 소비톨, 세룰로오스, 미결정질 세룰로오스, 카올린, 염화나트륨, 건조 전분, 가수분해된 전분, 전호화 전분, 이산화규소, 산화티탄, 마그네슘 알루미늄 실리케이트 및 분말화된 슈거를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 결합제는 고체 투여 제형에 접착 특성을 부여하여 정제 또는 비드 또는 과립이 투여 형태로 조성된 후에도 손상되지 않은 채로 존재하는 것을 보장하기 위해 사용된다. 적합한 결합 물질은, 전분, 전호화 전분, 젤라틴, 당(수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 락토스 및 소비톨을 포함하는), 폴리에틸렌 글리콜, 왁스, 아카시아, 트래거컨트, 알긴산나트륨과 같은 천연 및 합성 검, 히드록시프로필메틸세룰로오스, 히드록시프로필세룰로오스, 에틸세룰로오스, 및 비검(veegum)을 포함한 세룰로오스, 아크릴산 및 메타크릴산 공중합체, 메트아크릴산 공중합체, 메틸 메타크릴레이트 공중합체, 아미노알킬 메타크릴레이트 공중합체, 폴리아크릴산/폴리메타크릴산 및 폴리비닐피롤리돈과 같은 합성 중합체를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 윤활제는 정제 제조를 용이하게 하기 위해 사용된다. 적합한 윤활제의 예는, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산, 글리세롤 베헤네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 탈크 및 미네랄 오일을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 붕괴제는 투여 후 투여 형태의 붕괴 또는 부서짐을 용이하게 하기 위해 사용되며, 일반적으로, 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카복시메틸 전분, 나트륨 카복시메틸세룰로오스, 히드록시프로필 세룰로오스, 전호화 전분, 점토, 세룰로오스, 알기닌, 검 또는 가교 결합된 PVP와 같은 가교-결합된 중합체를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 안정화제는 예로 산화 반응을 포함한 약물 분해 반응을 억제하거나 지연시키기 위해 사용된다. 적합한 안정화제는, 항산화제, 부틸화된 히드록시톨루렌(BHT), 아스코르브산, 이의 염 및 에스테르; 비타민 E, 토코페롤 및 이의 염; 나트륨 메타바이설파이트와 같은 설파이트; 시스테인 및 이의 유도체; 구연산; 프로필 갈레이트, 및 부틸화된 히드록시아니솔(BHA)를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 캡슐, 정제, 용액 및 현탁액과 같은 경구 투여 제형은 조절된 방출을 갖도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 화합물들 및 임의로 하나 이상의 추가적 활성 성분들이 나노 입자, 마이크로 입자, 및 이의 조합으로 제제화되어, 연질 또는 경질 젤라틴 또는 비-젤라틴 캡슐로 캡슐화되거나 분산 매질 내 분산되어 경구 현탁액 또는 시럽을 형성할 수 있다. 상기 입자들은 약물 및 조절된 방출 중합체 또는 매트릭스로 형성될 수 있다. 또는, 상기 약물 입자들은 완성된 투여 형태로 혼입되기 전에 하나 이상의 조절된 방출 코팅제로 피복될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 수성 조성물로 제조될 수 있다. 일반적으로, 그러한 조성물은 주사 가능한 제형, 예를 들어, 용액 또는 현탁액; 마이크로 또는 나노입자와 같이 주사 전에 재구성 매질의 추가시 용액 또는 현탁액으로 제조되도록 사용하기에 적합한 고체 형태; 유중수(w/o) 에멀젼, 수중유(o/w) 에멀젼과 같은 에멀젼, 및 이의 마이크로에멀젼, 리포좀, 또는 에멀좀으로 제조될 수 있다.
담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 하나 이상의 폴리올(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액상 폴리에틸렌 글리콜), 오일(예: 식물성 오일(예: 땅콩유, 옥수수유, 참기름 등)), 및 이의 조합을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 레시틴과 같은 코팅물을 사용하거나 분산액의 경우 요구되는 입자 크기를 유지함으로써, 또는 계면활성제를 사용함으로써 적합한 유동성이 유지될 수 있다. 또한, 설탕 또는 염(예: 염화나트륨)의 등장화제를 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
활성 화합물들의 유리 산 또는 유리 염기 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서의 용액 또는 분산액은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 적절히 혼합된 물 또는 다른 용매 또는 분산 매질 중에 제조될 수 있다. 부형제는 예를 들어, 계면활성제, 분산제, 유화제, pH 조절제 및 이의 조합을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
적합한 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 양쪽성 또는 비이온성 표면 활성제일 수 있다. 적합한 음이온성 계면활성제는, 카복실레이트, 설포네이트 및 설페이트 이온을 함유하는 것을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 음이온성 계면활성제의 예는 나트륨 도데실벤젠 설포네이트와 같은 장쇄 알킬 설포네이트 및 알킬 아릴 설포네이트의 나트륨, 칼륨, 암모늄; 나트륨 도데실벤젠 설포네이트와 같은 디알킬 나트륨 설포석시네이트; 나트륨 비스-(2-에틸티옥실)-설포석시네이트 와 같은 디알킬 나트륨 설포석시네이트; 및 나트륨 라우릴 설페이트와 같은 알킬 설페이트를 포함한다. 양이온성 계면활성제는 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 브롬화세트리모늄, 스테아릴 디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 폴리옥시에틸렌 및 코코넛 아민과 같은 4차 암모늄 화합물을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비이온성 계면활성제의 예는 에틸렌 글리콜 모노스테아레이트, 프로필렌 글리콜 미리스테이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트, 폴리글리세릴-4-올레에이트, 소비탄 아실레이트, 수크로스 아실레이트, PEG-150 라우레이트, PEG-400 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 모노라우레이트, 폴리소르베이트, 폴리옥시에틸렌 옥틸페닐에테르, PEG-1000 세틸 에테르, 폴리옥시에틸렌 트리데실 에테르, 폴리프로필렌 글리콜 부틸 에테르, 폴록사머 401, 스테아로일 모노이소프로판올아미드 및 폴리옥시에틸렌 수소화된 탈로우 아미드를 포함한다. 양쪽성 계면활성제의 예는 나트륨 N-도데실- -알라닌, 나트륨 N-라우릴- -이미노디프로피오네이트, 미리스토암포아세테이트, 라우릴 베타인 및 라우릴 설포베타인을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 제제는 미생물의 성장을 억제하는 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제로, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 및 티메로살을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 또한 활성 성분(들)의 분해를 방지할 수 있는 항산화제를 함유할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 제제는 면역세포를 포함하는 세포 치료제의 투여와 개별, 순차 또는 동시 사용 또는 투여될 수 있다. 상기 투여랑 정제, 캡슐제 등의 경구 투여 및 비경구 투여를 모두 포함한다. 자연살해세포를 포함하는 세포치료제의 경우 치료 기관에서 투여가 가능한 제한이 있으나, 본 발명의 제제는 경구 투여가 가능하므로, 개체 스스로 투여할 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제를 먼저 투여 후, 세포치료제를 순차적으로 투여하거나; 세포치료제 투여 후, 본 발명의 제제를 순차적으로 투여하거나; 본 발명의 제제를 경구 투여하면서, 세포치료제를 동시에 투여하거나; 또는 본 발명의 제제와 세포치료제를 각각의 처방 횟수에 따라 개별적으로 투여하여도 본 발명의 제제의 항암 보조제, 세포치료 보조제로서의 효과를 얻을 수 있다. 또한, 경구 투여가 가능한바, 상기 투여 방법, 시기, 투여량, 투여 횟수 등을 개체의 병의 중증도, 건강상태 등을 고려하여 효과적으로 조절하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 " 암 또는 암 질환"이란 종양 (tumor)라고도 하며, 신체 조직의 과잉 성장에 의해 비정상적으로 자라난 덩어리로, 그 종류에 상관없이 모두 포함하는 의미이다. 일 예로 양성 종양 및 악성 종양을 모두 포함하고, 고형암 (solid tumor)와 혈액암(soluble tumor)를 모두 포함한다. 본 발명의 한 구체예에서, 암 질환은 유방암, 폐암, 위암, 간암, 혈액암, 뼈암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색종, 자궁육종, 난소암, 직장암, 항문암, 대장암, 난관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 소장암, 내분비암, 갑상선암, 부갑상선암, 신장암, 연조직종양, 요도암, 전립선암, 기관지암, 및 골수암으로 이루어진 군에서 선택된 것 일 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기 약학적 병용제는 TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 포함한다.
상기 약학적 병용제는 TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 대상체에 개별, 순차 또는 동시에 투여하기 위한 것으로, 상기 병용되는 TGF-β 억제제의 종류에 따라서 다른 투여 특성을 가질 수 있다.
TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline (TEW-7197) 또는 이의 유도체 일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 자연 살해세포는 정맥 투여하고, TGF-β 억제제로 EW-7197을 개별적으로 경구 투여하는 방법으로 상기 병용제를 대상체에 투여하면, 현저한 항암효과를 가질 수 있음을 확인하였다.
본 발명에서 병용투여되는 EW-7197와 자연 살해세포의 구체적인 투여량은 환자의 상태, 나이, 키, 병변의 크기, 상태 등을 고려하여 결정 될 수 있다.
그 외 항암제, 항암활성, 구성성분 및 제제를 위해 부가되는 구성 등에 대해서는 상기한 바와 동일하므로 중복적으로 설명하지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 상기 세포치료 보조제는 TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하고, 자연 살해세포(NK cell)를 이용한 암의 세포 치료(cell therapy)에 사용하기 위한 것 일 수 있다.
상기 TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197) 또는 이의 유도체 일 수 있다.
상기 세포 치료 보조제는 경구 투여용 일 수 있다. 세포 치료제의 경우 정맥 투여되는 것이 대부분 인데, 정맥 투여의 경우 그 투여 횟수가 너무 많은 경우 개체에게 큰 불편을 초래하여, 실제 치료에서 한계로 작용하기도 한다. 상기 TGF-β 억제제가 경구 투여가 가능할 경우, 투여 빈도수를 높여도 투여 받는 개체가 불편함 없이 효과적인 투여 및 치료가 가능하므로, 우수한 치료효과를 얻을 수 있다.
그 외 항암제, 항암활성, 구성성분 및 제제를 위해 부가되는 구성 등에 대해서는 상기한 바와 동일하므로 중복적으로 설명하지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 포함하는 암 질환 치료용 키트를 제공한다.
상기 키트는 TGF-β 억제제를 제1구획에 포함하고 및 자연 살해세포가 제2구획에 포함하며, 대상체에 개별, 순차 또는 동시에 투여될 수 있는 것 일 수 있다.
TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline (TEW-7197, EW-7197) 또는 이의 유도체 일 수 있다.
상기 구획은 본 발명에 따른 약제학적 제제를 수용할 수 있는 용기 등 일 수 있고, 일 예로 바이알(vial) 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 키트에서 항암제, 항암활성, 구성성분 및 제제를 위해 부가되는 구성 등에 대해서는 상기한 바와 동일하므로 중복적으로 설명하지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 보조제, 약학적 병용제, 세포 치료 보조제 또는 암 질환 치료용 키트를 이용하여 대상체에게 NK 세포를 포함하는 세포 치료제 및 TGF-β 억제제를 개별, 순차 또는 동시 투여하는 방법 및 이를 이용한 암 질환 치료방법을 제공한다.
상기 방법은 구체적으로, 자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포치료제를 개체에 유효량으로 투여하고; 및 TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 개체에 투여하는 것;을 포함할 수 있다.
상기 세포치료제는 항암 치료에 이용되는 세포치료제라면 그 종류에 상관없이 적용 될 수 있다. 본 발명의 TGF-β 억제제를 포함하는 제제의 경우, 종양 조직의 미세 환경에 직접적으로 작용하여, 세포치료제 내의 효력 세포의 활성의 저하를 방지하는 것이므로, 세포치료제의 종류, 활성 메커니즘 등에 제한 없이 모든 세포치료제와 함께 사용될 수 있다.
상기 세포치료제는 비경구 투여되는 것 일 수 있다. 비경구 투여란 구강에서 식도, 위, 장관을 경유하는 방법이 아니라 자연적, 인위적으로 치료적 제제를 개체 내로 넣는 경로를 모두 포함하는 의미이다. 구체적으로 뇌내, 기관내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 경피, 피하 또는 근육내 투여되는 것 일 수 있다. 바람직하게는 정맥내 투여 되는 것 일 수 있다.
상기 세포치료제와 TGF-β 억제제는 개별, 순차 또는 동시 투여하는 것 일 수 있다. 자연살해세포를 포함하는 세포치료제의 경우 치료 기관에서 투여가 가능한 제한이 있으나, 본 발명의 제제는 경구 투여가 가능하므로, 개체 스스로 투여할 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제를 먼저 투여 후, 세포치료제를 순차적으로 투여하거나; 세포치료제 투여 후, 본 발명의 제제를 순차적으로 투여하거나; 본 발명의 제제를 경구 투여하면서, 세포치료제를 동시에 투여하거나; 또는 본 발명의 제제와 세포치료제를 각각의 처방 횟수에 따라 개별적으로 투여하여도 본 발명의 제제의 항암 보조제, 세포치료 보조제로서의 효과를 얻을 수 있다. 또한, 경구 투여가 가능한바, 상기 투여 방법, 시기, 투여량, 투여 횟수 등을 개체의 병의 중증도, 건강상태 등을 고려하여 효과적으로 조절하여 사용할 수 있다.
상기 TGF-β 억제제의 경우 바람직하게는 개체에 경구 투여하는 것 일 수 있다. 경구 투여에 의하는 경우 개체의 불편함 없이 투여량, 횟수 등을 조절하여 투여할 수 있어, 우수한 치료효과를 기대할 수 있다.
상기 방법에서 항암제, 항암활성, 구성성분 및 제제를 위해 부가되는 구성 등에 대해서는 상기한 바와 동일하므로 중복적으로 설명하지 않는다.
이하, 본 발명을 제조예 및 실험예를 통해 상세히 설명한다. 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들에 한정되는 것은 아니다.
[ 시험예 1] 병용투여에 의한 항암효과 확인
자연 살해세포는 사람의 혈액을 채혈한 후, Ficoll(Ficoll-paqueTM PLUS, GE healthcare)을 이용하여 2500 rpm에서 30분간 원심분리한 후 연막층(buffy coat)에서 말초혈액 단핵세포를 분리하였다. 그 후 100 Gy로 방사선 조사한 Jurkat 세포주와 EBV-LCL 세포주를 사용하여 IL-2 500 U/ml 존재 하에서 1:0.5:0.5의 비율로 RPMI1640 배지에 10% FBS와 1% penicillin/streptomycin을 넣은 hRPMI 배지에 공배양 하여 4일 마다 한번씩 IL-2가 500 U/ml로 첨가된 hRPMI 배지로 교환해 주면서 배양을 하였다. 약 2주간 배양한 자연 살해세포를 90% FBS와 10% DMSO가 섞인 용액에 넣은 후 isopropanol 용기(jar)에 넣은 후 -80℃에서 동결시킨 후 보관한다. in vivo에 사용하기 전에 37℃ 수조(water bath)에 녹인 후 헤마토사이토미터를 이용하여 세포수를 계산해 5X107 cells/ml로 준비하였다.
TGF-β 억제제로는 EW-7197(medipacto)을 준비하였고, Artificial gastric fluid(2g/L NaCl, 3.2g/L Pepsin, 0.06 M HCl)에 녹여서 2.5mg/kg으로 사용하였다.
7~8주령의 면역 결핍 마우스(NSG, 25-30g)에 흑색종 세포주인 A375를 피하 내 2.5X106 세포수로 주사하여 종양을 유도하였다. 7일 후 종양이 형성되면, TGF-β 억제제인 EW-7197 2.5mg/kg을 주 5회로 경구 투여하였고, NK 세포를 7일에 1번 1X107 세포수로 정맥 주사하였다(도 1). 총 25일간 투여하였고, 3일에 1번씩 종양 크기를 측정하였다. 28일 후 마우스를 살상하여 종양을 분리한 후 종양의 무게를 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 아무것도 투여하지 않은 대조군과 NK 세포 단독 또는 TGF-β 억제제 단독 투여와 NK 세포와 TGF-β 억제제를 병용 투여한 그룹을 비교한 결과, NK 세포 또는 TGF-β 억제제 단독에서 항종양 효과가 있었지만, 이를 함께 투여한 병용 투여군의 경우 단독 투여군에 비해 50% 이상 종양의 부피가 감소되었음을 확인할 수 있었다. 따라서 NK 세포와 TGF-β 억제제를 병용투여하는 경우, 항암 활성을 현저하게 향상 시킬 수 있음을 확인하였다.
[ 시험예 2] TGF -β 억제제의 종양세포에 대한 영향 확인
EW-7197 제제가 종양 세포의 증식에 직접적으로 영향을 미치는지 확인하고자 실험을 수행하였다.
흑색종 세포주인 A375, 췌장암 세포주인 PANC-1을 96 well 배양 plate에 1X104 cells씩 시딩(seeding)하고, 16시간 후 EW-7197을 10, 100, 1000nM 처리 한 후 48시간 후에 CCK-8을 처리하여 세포의 생존을 확인하고자 하였고 A375(도3 a), PANC-1(도3 b) 세포주의 cell viability를 그래프로 나타내었다.
도 3a 및 도 3b에 나타낸 바와 같이, 두 암세포주 모두에서 EW-7197의 처리 농도가 올라가는 경우 세포 생존능이 감소되나, 유의적 차이가 없는 것을 확인하여, 병용 투여 효과가 EW-7197 만의 항암 활성에 의한 것이 아님을 확인하였다.

Claims (13)

  1. TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하고,
    자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포치료제를 이용한 암의 치료에 사용하기 위한 항암 보조제.
  2. 제1항에 있어서,
    TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline 또는 이의 유도체인, 항암 보조제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 TGF-β 억제제는 경구 투여용인, 항암 보조제.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 암은 고형암 또는 혈액암 (soluble tumor) 인, 항암 보조제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 항암 보조제는 세포 치료제와 개별, 순차 또는 동시 사용을 위한 것인, 항암 보조제.
  6. TGF-β 억제제 및 자연 살해세포를 포함하고,
    자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포치료제를 이용한 암 치료에서 개별, 순차 또는 동시 사용을 위한 약학적 병용제.
  7. 제6항에 있어서,
    TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline (EW-7197) 또는 이의 유도체인, 약학적 병용제.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 TGF-β 억제제는 경구 투여용인, 약학적 병용제.
  9. TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 포함하고,
    자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포치료제를 이용한 암의 세포 치료(cell therapy)에 사용하기 위한 세포 치료(cell therapy) 보조제.
  10. 제9항에 있어서,
    TGF-β 억제제는 N-((4-([1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)-1H-imidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline 또는 이의 유도체인, 세포 치료 보조제.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 TGF-β 억제제는 경구 투여용인, 세포 치료 보조제.
  12. 자연 살해세포(NK cell)를 포함하는 세포치료제를 약학적 유효량으로 개체에 투여하고;
    TGF-β(Transforming growth factor β) 억제제를 개체에 경구 투여하며; 및
    상기 세포치료제와 TGF-β 억제제는 개별, 순차 또는 동시 투여하는 것,을 포함하는 암을 치료하는 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 세포치료제는 개체에 비경구 투여하고, 및
    상기 TGF-β 억제제는 개체에 경구 투여하는 것인, 암을 치료하는 방법.
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