WO2017131162A1 - 解析装置及び分離装置 - Google Patents

解析装置及び分離装置 Download PDF

Info

Publication number
WO2017131162A1
WO2017131162A1 PCT/JP2017/002943 JP2017002943W WO2017131162A1 WO 2017131162 A1 WO2017131162 A1 WO 2017131162A1 JP 2017002943 W JP2017002943 W JP 2017002943W WO 2017131162 A1 WO2017131162 A1 WO 2017131162A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
electrodes
flow path
cells
unit
analysis
Prior art date
Application number
PCT/JP2017/002943
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
嘉一 脇坂
雅代 高野
隆行 糸井
隆治 円城寺
雅和 戸井
友美 西村
Original Assignee
株式会社Ａｆｉテクノロジー
国立大学法人京都大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 株式会社Ａｆｉテクノロジー, 国立大学法人京都大学 filed Critical 株式会社Ａｆｉテクノロジー
Priority to CN201780008886.6A priority Critical patent/CN108603852B/zh
Priority to US16/073,770 priority patent/US10766040B2/en
Priority to EP17744392.6A priority patent/EP3410107B1/en
Publication of WO2017131162A1 publication Critical patent/WO2017131162A1/ja

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C5/00—Separating dispersed particles from liquids by electrostatic effect
    • B03C5/02—Separators
    • B03C5/022—Non-uniform field separators
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C5/00—Separating dispersed particles from liquids by electrostatic effect
    • B03C5/005—Dielectrophoresis, i.e. dielectric particles migrating towards the region of highest field strength
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C5/00—Separating dispersed particles from liquids by electrostatic effect
    • B03C5/02—Separators
    • B03C5/022—Non-uniform field separators
    • B03C5/026—Non-uniform field separators using open-gradient differential dielectric separation, i.e. using electrodes of special shapes for non-uniform field creation, e.g. Fluid Integrated Circuit [FIC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/1031—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
    • B01L2200/0652—Sorting or classification of particles or molecules
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
    • B01L2300/0645—Electrodes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/0415—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces electrical forces, e.g. electrokinetic
    • B01L2400/0424—Dielectrophoretic forces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C2201/00—Details of magnetic or electrostatic separation
    • B03C2201/26—Details of magnetic or electrostatic separation for use in medical applications
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
    • G01N2015/016—White blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1028—Sorting particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1029—Particle size

Definitions

  • the present invention relates to an analysis device for analyzing a crossover frequency at which a dielectrophoretic force on dielectric particles such as bacteria and cells is switched from repulsive force to attractive force or from attractive force to repulsive force, and a separation device for separating dielectric particles.
  • Separation techniques for separating dielectric particles such as bacteria and cells using dielectrophoresis are known, and for this type of separation of dielectric particles, the dielectrophoretic force on the dielectric particles is changed from repulsive force to attractive force.
  • an analysis method for analyzing a crossover frequency where the attractive force is switched to the repulsive force is known.
  • Patent Document 1 discloses a characteristic analysis method for optimizing an AC voltage frequency to be applied when performing characteristic analysis of a particulate matter using dielectrophoresis.
  • This characteristic analysis method includes a step of selecting at least one particulate matter in a fluid, a step of positioning a particulate matter selected in the vicinity of a pair of electrodes, and an AC voltage frequency-modulated between the pair of electrodes.
  • the time-series data is moving image data obtained by imaging the movement of the particulate matter, and the moving image data includes imaging time data.
  • the step of analyzing the characteristics of the particulate matter includes the step of displaying the imaging time data together with the moving image data on the display, and the selected particulate matter is one of the pair of electrodes based on the moving image data displayed on the display. And a step of calculating a boundary frequency at which the dielectrophoretic force with respect to the selected particulate matter is switched from an attractive force to a repulsive force from the obtained time.
  • An object of the present invention is to provide an analysis device and a separation device that can easily analyze the crossover frequency of dielectric particles and can use the dielectric particles even after the analysis.
  • An analysis apparatus is an analysis apparatus that analyzes a crossover frequency at which a dielectrophoretic force on a dielectric particle switches from repulsive force to attractive force or from attractive force to repulsive force, the first flow path, a pair of first electrodes, , A first power supply unit, a photographing unit, and an analysis unit.
  • the sample liquid containing dielectric particles flows in the dielectrophoresis liquid.
  • the pair of first electrodes is disposed in the first flow path, and the first power supply unit applies the frequency-modulated AC voltage to the pair of first electrodes.
  • the imaging unit images the movement trajectory of the dielectric particles flowing between the pair of first electrodes in the first flow path.
  • An analysis part calculates
  • a separation device is a separation device that separates dielectric particles, and includes the above-described analysis device, a pair of second electrodes, and a control unit.
  • the pair of second electrodes are disposed at the subsequent stage of the pair of first electrodes in the first flow path of the analyzer, and the second power supply unit applies an alternating voltage of a predetermined frequency to the pair of second electrodes.
  • the control unit sets the predetermined frequency so that the dielectric particles cause dielectrophoresis when the dielectric particles analyzed by the analyzer pass through the pair of second electrodes in the first flow path. Control is performed on the body particles based on the crossover frequency obtained by the analyzer.
  • the crossover frequency of dielectric particles can be easily analyzed, and the dielectric particles can be used even after the analysis.
  • Diagram showing an example of frequency characteristics of Clausius-Mossotti factor related to dielectrophoretic force The figure which shows the structure of the separation apparatus and analysis apparatus which concern on Embodiment 1.
  • K ( ⁇ ) ( ⁇ p * - ⁇ m *) / ( ⁇ p * + 2 ⁇ m *) ... (2)
  • FIG. 1 is a diagram illustrating frequency characteristics of the above Re [K ( ⁇ )].
  • FIG. 1 shows Re [K ( ⁇ )] of two different dielectric particles A and B.
  • Re [K ( ⁇ )] has frequency dependence.
  • a positive dielectrophoretic force F DEP attractive force
  • F DEP negative dielectrophoretic force
  • the frequency characteristic of Re [K ( ⁇ )] varies depending on the dielectric particles A and B, and the crossover frequency COF also varies depending on the dielectric particles A and B.
  • FIG. 2 is a diagram illustrating a configuration of the separation device 100 according to the first embodiment.
  • a separation apparatus 100 shown in FIG. 2 includes a flow path (first flow path) 5 through which a sample solution containing circulating cancer cells (CTC) 1 in the blood flows in a predetermined direction (liquid flow direction), a replacement unit 10, and an analysis unit. 20 and a separation unit 30.
  • the replacement unit 10 and the analysis unit 20 constitute an analysis device 200.
  • the replacement unit 10 replaces the small cells 2 such as erythrocytes and the solution in blood (suspension) with a DEP solution (dielectrophoresis solution), and also includes cancer cells 1 and leukocytes contained in the blood. Extract only cells of the desired size.
  • the replacement unit 10 includes a main channel (second channel) 11, a plurality of branch channels 12, and a waste liquid chamber 13, and the channel width, channel height, and channel of the main channel 11 and the branch channel 12. By changing the length, only cells having a desired size or larger can be introduced into the flow path 5.
  • the main channel 11 is arranged in front of the channel 5 and forms a channel continuous to the channel 5.
  • the main channel 11 is introduced with blood containing cancer cells 1 and DEP liquid.
  • the blood is introduced from the liquid flow direction of the main flow path 11, and the DEP liquid is introduced from a direction orthogonal to the liquid flow direction of the main flow path 11.
  • the width of the main channel 11 may be approximately equal to or larger than the diameters of cells such as cancer cells 1 and leukocytes.
  • the width of the main channel 11 may be about 10 ⁇ m or more and about 100 ⁇ m or less, and more preferably 20 ⁇ m or more and 60 ⁇ m or less.
  • the branch flow path 12 is arranged at substantially equal intervals in the liquid flow direction after the DEP liquid introduction portion in the main flow path 11.
  • the branch channel 12 is disposed on the opposite side of the main channel 11 from the inflow portion of the DEP liquid.
  • the width of the branch channel 12 is smaller than the width of the main channel 11.
  • the cells 2 such as erythrocytes and the solution in the blood are diverted to the branch flow path 12, and the cancer cells 1 and cells of a desired size such as leukocytes and the DEP liquid flow through the main flow path 11.
  • the cells 2 such as red blood cells and the solution in the blood are replaced with the DEP liquid, and a sample liquid containing cells of a desired size or more such as cancer cells 1 and white blood cells is generated in the DEP liquid.
  • the main flow channel 11 guides the cells such as cancer cells 1 and white blood cells in the sample solution individually and sequentially from the main flow channel 11 to the flow channel 5 described above.
  • the waste liquid chamber 13 is a chamber for storing cells 2 such as erythrocytes, a solution, and the like that are diverted to the branch flow path 12.
  • the analysis unit 20 analyzes the crossover frequency of the dielectrophoretic force with respect to cells such as cancer cells 1 and white blood cells in the sample liquid flowing through the flow path 5.
  • the analysis unit 20 includes a pair of electrodes (first electrodes) 22 and 23, a power supply unit (first power supply unit) 24, an imaging unit 25, and a control unit (analysis unit) 26.
  • the electrodes 22 and 23 are arranged in the flow path 5 so as to face each other in a direction orthogonal to the liquid flow direction of the flow path 5.
  • the electrode 23 is grounded, and an AC voltage is supplied to the electrode 21 from the power supply unit 24.
  • the power supply unit 24 is composed of a function generator, for example.
  • the power supply unit 24 generates a frequency-modulated AC voltage under the control of the control unit 26 and supplies the AC voltage between the electrodes 22 and 23.
  • FIG. 3 is a diagram illustrating an example of a change in the frequency of the AC voltage. As shown in FIG. 3, the power supply unit 24 generates an alternating voltage whose frequency is periodically changed in a frequency range from fmin to fmax.
  • the dielectrophoretic force acting on cells such as cancer cells 1 and white blood cells passing between the electrodes 22 and 23 periodically changes.
  • the photographing unit 25 includes a camera having an image sensor such as a CCD image sensor or a CMOS image sensor, and an optical microscope module.
  • the optical microscope module may be a phase contrast microscope or an epi-illumination microscope. Further, the optical microscope module may be configured to be switchable between a phase contrast microscope and an episcopic microscope, for example, by exchanging lenses. In addition, when performing fluorescence observation, a fluorescent filter is appropriately used.
  • the imaging unit 25 images cancer cells 1 and cells such as white blood cells that pass between the pair of electrodes 22 and 23, and outputs the captured image to the control unit 26. The imaging operation of the imaging unit 25 may be controlled by the control unit 26.
  • the control unit 26 is constituted by a personal computer, for example.
  • the control unit 26 includes a storage unit such as an HDD and an SSD and a controller such as a CPU, and implements various functions by the controller executing programs stored in the storage unit.
  • the control unit 26 performs image analysis of the captured image of the imaging unit 25 and obtains the movement trajectory of cells such as cancer cells 1 and white blood cells that pass between the pair of electrodes 22 and 23.
  • the control unit 26 may store the captured image of the imaging unit 25 in the storage unit and perform image analysis on the stored captured image.
  • the control unit 26 may include a liquid crystal display or an organic EL display, and may display a captured image of the imaging unit 25 or a movement locus obtained by image analysis.
  • the separation unit 30 is provided in the downstream of the analysis unit 20 in the flow path 5, and extracts the cancer cell 1 based on the crossover frequency of the cancer cell 1 and cells such as leukocytes analyzed by the analysis unit 20. To separate.
  • the separation unit 30 includes a pair of electrodes (second electrodes) 32 and 33, a power supply unit (second power supply unit) 34, and collection units 6 and 7.
  • the electrodes 32 and 33 each have a comb-teeth shape arranged at equal intervals.
  • the plurality of convex portions in the comb-teeth shape of the two electrodes 32 and 33 are alternately arranged at predetermined intervals in the liquid flow direction of the flow path 5.
  • the convex portions of the electrodes 32 and 33 extend in a direction obliquely intersecting the liquid flow direction so as to form an acute angle of, for example, 10 ° to 60 ° with the liquid flow direction.
  • the power supply unit 34 is composed of, for example, a function generator.
  • the power supply unit 34 is larger than the crossover frequency obtained for the cancer cell 1 by the analysis unit 20. Then, an alternating voltage having a frequency near the crossover frequency obtained by the analysis unit 20 is generated for cells such as leukocytes other than the cancer cell 1 and supplied between the electrodes 32 and 33.
  • a positive dielectrophoretic force acts on the cancer cell 1, and the cancer cell 1 flows through the flow path 5 along the extending direction of the electrodes 32 and 33 while being attracted to the electrodes 32 and 33. 6 is collected.
  • the dielectrophoretic force is relatively small. For this reason, cells such as white blood cells are caused to flow by the flow in the flow path 5 and are collected by the collection unit 7.
  • the collection unit 6 is for separating and collecting the cancer cells 1 that have flowed through the flow path 5, and the collection unit 7 is for collecting unnecessary white blood cells and the like.
  • the separation device 100 replaces the cells 2 and the solution such as red blood cells in the blood with the DEP liquid in the replacement unit 10 and at least the desired size of the cancer cells 1 and white blood cells included in the blood. Extract only those cells.
  • the analysis unit 20 analyzes the crossover frequency of the dielectrophoretic force for the extracted cancer cell 1 and cells such as leukocytes.
  • the separation unit 30 separates the cancer cell 1 based on the crossover frequency of the cancer cell 1 and cells such as leukocytes analyzed by the analysis unit 20.
  • the operation of the separation apparatus 100 will be described in detail.
  • the replacement unit 10 performs solution replacement (buffer replacement), generates a sample solution containing cells of a desired size or more such as cancer cells 1 and leukocytes in the DEP solution, and generates a sample solution from the main channel 11 to the channel 5.
  • the replacement unit 10 leads cancer cells 1 and cells such as white blood cells one by one from the main channel 11 to the channel 5.
  • the power supply unit 24 of the analysis unit 20 generates an AC voltage whose frequency is periodically changed in a frequency range from fmin to fmax, as shown in FIG. Supply.
  • an AC voltage whose frequency is periodically modulated is applied between the electrodes 22 and 23 in the flow path 5.
  • the imaging unit 25 images cells such as cancer cells 1 and white blood cells that pass between the electrodes 22 and 23.
  • the control unit 26 performs image analysis of the captured image of the imaging unit 25 and obtains the movement trajectory of cells such as cancer cells 1 and white blood cells that pass between the electrodes 22 and 23.
  • the control unit 26 analyzes the timing at which the dielectrophoretic force is switched from repulsive force to attractive force based on the obtained movement locus, and obtains the frequency of the AC voltage of the power supply unit 24 at the timing from the control information to the power supply unit 24 at the timing.
  • the obtained frequency is obtained as a crossover frequency (COF). Details of this analysis processing will be described later.
  • COF crossover frequency
  • cells such as cancer cells 1 and white blood cells analyzed by the analysis unit 20 flow toward the separation unit 30.
  • the control unit 26 is greater than the crossover frequency obtained by the analysis corresponding to the cancer cell 1
  • the power supply unit 34 is controlled so as to generate an alternating voltage having a frequency near the crossover frequency obtained by analysis corresponding to cells such as leukocytes other than the cancer cell 1.
  • the timing at which the analyzed cancer cell 1 and cells such as white blood cells pass through the electrodes 32 and 33 of the separation unit 30 is, for example, the distance between the electrodes 22 and 23 and the electrodes 32 and 33 and the sample liquid flowing through the flow path 5. It can be estimated from the flow rate.
  • the power supply unit 34 generates an AC voltage having a frequency based on the control of the control unit 26 and supplies the AC voltage to the electrode 32. Thereby, in the flow path 5, an alternating voltage having the frequency is applied between the electrodes 32 and 33. At this time, a positive dielectrophoretic force (attraction) acts on the cancer cell 1, and the cancer cell 1 flows through the flow path 5 along the extending direction of the electrodes 32 and 33 while being attracted to the electrodes 32 and 33, 6 is collected. On the other hand, even if a dielectrophoretic force does not act on cells such as unnecessary white blood cells or a positive or negative dielectrophoretic force (attraction or repulsive force) acts, the dielectrophoretic force is relatively small. For this reason, cells such as white blood cells are caused to flow by the flow in the flow path 5 and are collected by the collection unit 7.
  • FIG. 4 is a diagram showing an example of the movement trajectory of the cancer cell 1 between the pair of electrodes 22 and 23.
  • the crossover frequency analysis processing of the cancer cell 1 will be described, but the crossover frequency analysis processing of cells such as leukocytes other than the cancer cell 1 is the same as the following.
  • trajectories P1, P2, P3, and P4 are positions of the cancer cell 1 at times t1, t2, t3, and t4 in FIG. As shown in FIGS.
  • the control unit 26 obtains positions P2 and P4 of the cancer cell 1 where the dielectrophoretic force switches from repulsive force to attractive force based on a moving trajectory that changes as shown in FIG. 4, and the dielectrophoretic force is determined from the positions P2 and P4. Timings t2 and t4 for switching from repulsive force to attractive force are obtained.
  • the control unit 26 obtains the frequency of the AC voltage of the power supply unit 24 at the timings t2 and t4 as the crossover frequency from the control information to the power supply unit 24 at the timings t2 and t4. As described above, the crossover frequency (COF) of the cancer cell 1 can be obtained.
  • the analysis apparatus 200 is an analysis apparatus that analyzes a crossover frequency at which the dielectrophoretic force on blood circulating cancer cells (dielectric particles) 1 and cells such as leukocytes is switched from repulsive force to attractive force or from attractive force to repulsive force.
  • the flow path (first flow path) 5 the pair of electrodes (first electrodes) 22, 23, the power supply section (first power supply section) 24, the imaging section 25, and the control section (analysis section) 26.
  • a sample solution containing cancer cells 1 and cells such as leukocytes flows in the dielectrophoresis solution.
  • the pair of electrodes 22 and 23 are disposed in the flow path 5, and the power supply unit 24 applies an AC voltage that is frequency-modulated to the pair of electrodes 22 and 23.
  • the imaging unit 25 images the movement trajectory of cancer cells 1 and white blood cells that flow between the pair of electrodes 22 and 23 in the flow path 5.
  • the control unit 26 obtains the crossover frequency of cells such as cancer cells 1 and white blood cells based on an image obtained by photographing the movement trajectory.
  • the separation device 100 is a separation device that separates cancer cells 1 and other cells such as white blood cells, and includes the analysis device 200 and a pair of electrodes (second electrodes) 32 and 33. And a power supply unit (second power supply unit) 34 and a control unit 26.
  • the pair of electrodes 32 and 33 are arranged at the subsequent stage of the pair of electrodes 22 and 23 in the flow path 5 of the analysis device 200, and the power supply unit 34 applies an alternating voltage of a predetermined frequency to the pair of electrodes 32 and 33.
  • the control unit 26 is configured so that when cancer cells 1 and cells such as white blood cells analyzed by the analysis device 200 pass through the pair of electrodes 32 and 33 in the flow path 5, the cancer cells 1 undergo dielectrophoresis. Is controlled based on the crossover frequency obtained by the analyzer 200 for the dielectric particles.
  • the crossover frequency of the cancer cells 1 and the cells such as leukocytes is analyzed in the flow path 5 into which the sample solution containing cells such as the cancer cells 1 and leukocytes is introduced.
  • the crossover frequency of cells such as cancer cells 1 and leukocytes can be easily analyzed without performing an operation of placing dielectric particles between the microelectrodes, and this analysis and separation are used for analysis and separation.
  • Cancer cells 1 can be used (non-destructive analysis).
  • the analysis device 200 is disposed in the front stage of the flow path 5 and a flow path (suspension containing cells such as cancer cells 1 and white blood cells) and a DEP liquid (dielectrophoresis liquid) are introduced ( A second flow path) 11 and a branch flow path 12 branched from the flow path 11, and the solution in the suspension is branched to the branch flow path 12, thereby replacing the solution in the suspension with the DEP liquid.
  • a replacement unit 10 for generating a sample solution The replacement unit 10 sequentially leads cells of a desired size such as cancer cells 1 and white blood cells in the sample liquid from the flow channel 11 to the flow channel 5 individually.
  • the suspension containing the cells such as cancer cells 1 and leukocytes and the DEP liquid are introduced into the channel 11 in which the branch channel 12 is formed, whereby the solution in the suspension is replaced with the DEP solution.
  • the conductivity of the sample solution can be adjusted by adjusting the conductivity with the DEP solution alone.
  • the conductivity adjustment of the sample solution is compared with the conventional solution replacement (buffer replacement) in which the conductivity of the sample solution is adjusted by mixing the suspension and the DEP solution and adjusting the concentration of the sample solution.
  • the time variation of the crossover frequency of cancer cells 1 and cells such as leukocytes due to solution replacement can be reduced.
  • the conductivity of the sample solution can be adjusted easily and with high accuracy, and the analysis variation of the crossover frequency accompanying the variation in the conductivity of the sample solution can be reduced. it can.
  • bacteria and cells are exemplified as inspection targets of the present system.
  • the inspection target of this system is not limited to bacteria and cells, but may be any dielectric particles, such as microorganisms, fungi, spores, and viruses.
  • control unit 26 that analyzes the crossover frequency at the timing (for example, t2 and t4 in FIG. 3) at which the dielectrophoretic force is switched from the repulsive force to the attractive force has been described.
  • an AC voltage having a frequency higher than the crossover frequency analyzed by the analysis unit 20 is applied to the electrodes 32 and 33, and positive dielectric is applied to the cancer cells 1 passing through the electrodes 32 and 33.
  • the separation unit 30 that separates cancer cells 1 by applying an electrophoretic force (attraction) has been described, the separation unit 30 is not limited thereto.
  • the separation unit 30 applies an AC voltage having a frequency lower than the crossover frequency analyzed by the analysis unit 20 to the electrodes 32 and 33, and applies a negative dielectrophoretic force (on the cancer cells 1 passing through the electrodes 32 and 33).
  • the cancer cell 1 may be separated by applying a repulsive force. In this case, in FIG. 2, the cancer cell 1 repels the electrodes 32, 33, flows away from the electrodes 32, 33, flows in the flow path 5 along the extending direction of the electrodes 32, 33, and is collected in the collection unit 6. Is done.
  • the separation unit 30 applies an AC voltage having the same frequency as the crossover frequency analyzed by the analysis unit 20 to the electrodes 32 and 33, and acts a dielectrophoretic force on the cancer cells 1 passing through the electrodes 32 and 33. It may not be allowed to.
  • the cancer cell 1 flows through the flow path 5 without performing dielectrophoresis, and reaches between the collection unit 6 and the collection unit 7.
  • a collecting unit may be provided between the collecting unit 6 and the collecting unit 7.
  • the crossover frequency that is greater than the crossover frequency analyzed by the analysis unit 20 for the cancer cell 1 and is analyzed by the analysis unit 20 for cells such as leukocytes other than the cancer cell 1.
  • Separation unit 30 that separates cancer cells 1 by applying an alternating voltage having a nearby frequency to electrodes 32 and 33 and applying positive dielectrophoretic force (attraction) to cancer cells 1 passing through electrodes 32 and 33 explained.
  • the separation unit 30 is smaller than the crossover frequency analyzed by the analysis unit 20 for cells such as white blood cells other than the cancer cell 1, and the crossover analyzed by the analysis unit 20 for the cancer cell 1.
  • An alternating voltage having a frequency near the frequency is applied to the electrodes 32 and 33, and a negative dielectrophoretic force (repulsive force) is applied to cells such as leukocytes other than the cancer cells 1 that pass through the electrodes 32 and 33, thereby causing the cancer cells 1. And other cells may be separated.
  • the negative dielectrophoretic force acts on cells such as leukocytes other than the cancer cell 1, and the cells such as leukocytes repel the electrodes 32, 33 and move away from the electrodes 32, 33, It flows through the flow path 5 along the extending direction of 33 and is collected by the collecting unit 6.
  • the dielectrophoretic force is relatively small. For this reason, the cancer cells 1 are caused to flow by the flow in the flow path 5 and are collected by the collection unit 7.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Fluid Mechanics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Microelectronics & Electronic Packaging (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Electric Means (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

解析装置（２００）は、誘電体粒子に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析装置であって、流路（５）と、一対の電極（２２、２３）と、電源部（２４）と、撮影部（２５）と、解析部（２６）とを備える。流路（５）は、誘電泳動液中に誘電体粒子を含む試料液が流れる。電極（２２、２３）は流路（５）に配置され、電源部（２４）は、第１電極（２２、２３）に、周波数変調された交流電圧を印加する。撮影部（２５）は、流路（５）における電極（２２、２３）間を流れる誘電体粒子の移動軌跡を撮影する。解析部（２６）は、移動軌跡を撮影した画像に基づいて、誘電体粒子のクロスオーバー周波数を求める。

Description

解析装置及び分離装置
　細菌や細胞等の誘電体粒子に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析装置、及び、誘電体粒子を分離する分離装置に関する。
　細菌や細胞等の誘電体粒子を、誘電泳動を利用して分離する分離手法が知られており、この種の誘電体粒子の分離のために、誘電体粒子に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析手法が知られている。
　特許文献１は、誘電泳動を利用した粒子状物質の特性分析を行うにあたって、印加する交流電圧周波数の最適化を行う特性分析方法を開示する。この特性分析方法は、流体中の粒子状物質を少なくとも一つ選択する工程と、一対の電極近傍に選択された粒子状物質を位置させる工程と、一対の電極間に周波数変調された交流電圧を含むプログラム化電圧シグナルを用いて空間的に不均一な電場を発生させる工程と、プログラム化電圧シグナルを印加している間の粒子状物質の移動動作を検出し、粒子状物質の移動動作に関する時系列データを作成する工程と、時系列データに基づき、粒子状物質の特性を解析する工程とを含む。時系列データは、粒子状物質の移動動作を撮像して得られる動画データであり、動画データは撮像時間のデータを含む。粒子状物質の特性を解析する工程は、動画データとともに撮像時間のデータを、ディスプレイに表示させる段階と、ディスプレイに表示される動画データに基づき、選択された粒子状物質が一対の電極のうち一方の電極の先端近傍に滞在している時間を求める段階と、求められた時間から、選択された粒子状物質に対する誘電泳動力が引力から斥力に切り替わる境界周波数を算出する段階とを含む。
国際公開第２００７／０９１４５０号
　特許文献１に開示の特性分析方法では、微細なマイクロ電極間に誘電体粒子（粒子状物質）を位置させる操作が煩雑である。また、特許文献１に開示の特性分析方法は、クロスオーバー周波数の計測に特化したものであり、計測した誘電体粒子をそのまま分離することはできない。
　本発明の目的は、誘電体粒子のクロスオーバー周波数を簡易に解析することができ、解析後もその誘電体粒子を利用することが可能な解析装置及び分離装置を提供することにある。
　本発明に係る解析装置は、誘電体粒子に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析装置であって、第１流路と、一対の第１電極と、第１電源部と、撮影部と、解析部とを備える。第１流路は、誘電泳動液中に誘電体粒子を含む試料液が流れる。一対の第１電極は第１流路に配置され、第１電源部は、一対の第１電極に、周波数変調された交流電圧を印加する。撮影部は、第１流路における一対の第１電極間を流れる誘電体粒子の移動軌跡を撮影する。解析部は、移動軌跡を撮影した画像に基づいて、誘電体粒子のクロスオーバー周波数を求める。
　本発明に係る分離装置は、誘電体粒子の分離を行う分離装置であって、上記の解析装置と、一対の第２電極と、制御部とを備える。一対の第２電極は、解析装置の第１流路における一対の第１電極の後段に配置され、第２電源部は、一対の第２電極に、所定周波数の交流電圧を印加する。制御部は、解析装置で解析された誘電体粒子が第１流路における一対の第２電極を通過するときに、当該誘電体粒子が誘電泳動を起こすように、上記の所定周波数を、当該誘電体粒子に対して解析装置で求められたクロスオーバー周波数に基づいて制御する。
　本発明によれば、誘電体粒子のクロスオーバー周波数を簡易に解析することができ、解析後もその誘電体粒子を利用することができる。
誘電泳動力に関するClausius-Mossotti因子の周波数特性の一例を示す図 実施形態１に係る分離装置及び解析装置の構成を示す図 解析装置における交流電圧の周波数の変化の一例を示す図 解析装置における周波数変調された誘電体粒子の移動軌跡の一例を示す図
　以下、添付の図面を参照して本発明に係る誘電体粒子に対する誘電泳動力のクロスオーバー周波数を解析する解析装置、及び、解析したクロスオーバー周波数に基づいて当該誘電体粒子を分離する分離装置の実施形態を説明する。
０．誘電泳動の概要
　本実施形態の説明の前に、誘電泳動の概要について説明する。細菌や細胞等の誘電体粒子を含む試料液に対して電極を配置し、電極に周波数ωの交流電圧を供給した場合、試料液中の誘電体粒子に誘電泳動力が作用する。この誘電泳動力ＦＤＥＰは、次式で表される。
ＦＤＥＰ＝２πｒ３εｍＲｅ［Ｋ（ω）］∇Ｅ２　…（１）
　上式（１）において、ｒは誘電体粒子の半径であり、εｍは試料液の媒質（溶液）の誘電率であり、Ｅは電場の強度である。また、Ｒｅ［Ｘ］は複素数Ｘの実部を表す。Ｋ（ω）は、Clausius-Mossotti因子であり、次式で表される。
Ｋ（ω）＝（εｐ ＊－εｍ ＊）／（εｐ ＊＋２εｍ ＊）　…（２）
　上式（２）において、εｐ ＊（＝εｐ＋ρｐ／（ｊω））は、粒子の複素誘電率である（εｐは粒子の誘電率（実部）で、ρｐは粒子の導電率）。また、εｍ ＊（＝εｍ＋ρｍ／（ｊω））は、周囲媒質の複素誘電率である（εｍは周囲媒質の誘電率（実部）で、ρｍは周囲媒質の導電率）。
　図１は、上記のＲｅ［Ｋ（ω）］の周波数特性を示す図である。図１には、異なる２つの誘電体粒子Ａ、ＢのＲｅ［Ｋ（ω）］が示されている。図１に示すように、Ｒｅ［Ｋ（ω）］は周波数依存性を有する。Ｒｅ［Ｋ（ω）］＞０であるとき、上式（１）より、電極の設置方向に対して正の誘電泳動力ＦＤＥＰ（引力）が粒子に作用し、粒子は電極近傍に引きつけられる。一方、Ｒｅ［Ｋ（ω）］＜０であるとき、負の誘電泳動力ＦＤＥＰ（斥力）が粒子に作用し、粒子は電極に対して反発する。この誘電泳動力ＦＤＥＰが正から負又はその逆に変化する境界における周波数、すなわちＲｅ［Ｋ（ω）］＝０のときの周波数を、クロスオーバー周波数（ＣＯＦ）という。
　図１に示すように、Ｒｅ［Ｋ（ω）］の周波数特性は誘電体粒子Ａ、Ｂによって異なり、クロスオーバー周波数ＣＯＦも誘電体粒子Ａ、Ｂによって異なる。
（実施形態１）
１．構成
　以下の説明では、血液中に含まれる癌細胞を分離する装置を説明する。
１－１．分離装置
　以下、実施形態１の分離装置を説明する。図２は、実施形態１に係る分離装置１００の構成を示す図である。図２に示す分離装置１００は、血中循環癌細胞（ＣＴＣ）１を含む試料液が所定方向（液流方向）に流れる流路（第１流路）５と、置換部１０と、解析部２０と、分離部３０とを備える。なお、置換部１０と解析部２０とは、解析装置２００を構成する。
（１）置換部
　置換部１０は、血液（懸濁液）における赤血球等の小型細胞２、及び溶液を、ＤＥＰ液（誘電泳動液）に置換すると共に、血液に含まれる癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞のみを抽出する。置換部１０は、主流路（第２流路）１１と、複数の分岐流路１２と、廃液チャンバ１３とを備え、主流路１１と分岐流路１２の流路幅、流路高、流路長を変えることで所望のサイズ以上の細胞のみを流路５に導入することができる。
　主流路１１は、流路５の前段に配置され、流路５に連続する流路を形成する。主流路１１には、癌細胞１を含む血液と、ＤＥＰ液とが導入される。血液は、主流路１１の液流方向から導入され、ＤＥＰ液は、主流路１１の液流方向に直交する方向から導入される。主流路１１の幅は、癌細胞１および白血球等の細胞の直径と略同等以上であればよい。なお、主流路１１の幅は、約１０μｍ以上約１００μｍ以下であってもよく、より最適には２０μm以上６０μm以下であることが望ましい。
　分岐流路１２は、主流路１１におけるＤＥＰ液の導入部分の後段に、液流方向においてほぼ等間隔に配置される。分岐流路１２は、主流路１１において、ＤＥＰ液の流入部分と反対側に配置される。分岐流路１２の幅は、主流路１１の幅よりも小さい。
　この構成により、血液における赤血球等の細胞２及び溶液は分岐流路１２に分流し、癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞、及びＤＥＰ液は主流路１１を流れる。これにより、主流路１１において、血液における赤血球等の細胞２及び溶液がＤＥＰ液に置換され、ＤＥＰ液中に癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞を含む試料液が生成される。主流路１１は、試料液における癌細胞１および白血球等の細胞を個々に順次に主流路１１から上記した流路５へ導出する。
　廃液チャンバ１３は、分岐流路１２に分流された赤血球等の細胞２、溶液等を溜めるチャンバである。
（２）解析部
　解析部２０は、流路５を流れる試料液中の癌細胞１および白血球等の細胞に対する誘電泳動力のクロスオーバー周波数を解析する。解析部２０は、一対の電極（第１電極）２２、２３と、電源部（第１電源部）２４と、撮影部２５と、制御部（解析部）２６とを備える。
　電極２２、２３は、流路５において、流路５の液流方向に直交する方向に対向して配置される。電極２３は接地され、電極２１には電源部２４から交流電圧が供給される。
　電源部２４は、例えばファンクションジェネレータで構成される。電源部２４は、制御部２６の制御により、周波数変調された交流電圧を発生して、電極２２、２３間に供給する。図３は、交流電圧の周波数の変化の一例を示す図である。図３に示すように、電源部２４は、ｆｍｉｎからｆｍａｘの周波数範囲で周期的に周波数を変化させた交流電圧を生成する。
　このような構成により、電極２２、２３の間を通過する癌細胞１および白血球等の細胞に作用する誘電泳動力が周期的に変化する。
　撮影部２５は、ＣＣＤイメージセンサやＣＭＯＳイメージセンサなどの撮像素子を有するカメラと、光学顕微鏡モジュールとを備える。光学顕微鏡モジュールは、位相差顕微鏡であってもよいし、落射顕微鏡であってもよい。また、光学顕微鏡モジュールは、例えばレンズ交換などにより、位相差顕微鏡と落射顕微鏡とに切替え可能に構成されてもよい。また、蛍光観察を行う場合、適宜、蛍光フィルタを用いる。撮影部２５は、一対の電極２２、２３の間を通過する癌細胞１および白血球等の細胞を撮像し、撮像画像を制御部２６に出力する。撮影部２５の撮像動作は、制御部２６によって制御されてもよい。
　制御部２６は、例えばパーソナルコンピュータで構成される。制御部２６は、ＨＤＤやＳＳＤなどの記憶部やＣＰＵ等のコントローラを備え、コントローラが記憶部に格納されたプログラムを実行することで、各種の機能を実現する。例えば、制御部２６は、撮影部２５の撮像画像の画像解析を行い、一対の電極２２、２３の間を通過する癌細胞１および白血球等の細胞の移動軌跡を求める。なお、制御部２６は、撮影部２５の撮像画像を記憶部に蓄積し、蓄積した撮像画像に対して画像解析を行ってもよい。また、制御部２６は、液晶ディスプレイや有機ＥＬディスプレイを備え、撮影部２５の撮像画像、又は、画像解析によって求められた移動軌跡を表示してもよい。
（３）分離部
　分離部３０は、流路５において解析部２０の後段に設けられ、解析部２０で解析された癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数に基づいて当該癌細胞１を分離する。分離部３０は、一対の電極（第２電極）３２、３３と、電源部（第２電源部）３４と、収集部６、７とを備える。
　電極３２、３３は、それぞれ等間隔に並んだ櫛歯形状を有する。２つの電極３２、３３の櫛歯形状における複数の凸部は、流路５の液流方向において、交互に所定間隔をあけて配列される。電極３２、３３の各凸部は、液流方向と例えば１０°以上６０°以下の鋭角な角度をなすように液流方向と斜めに交差する方向に延在している。
　電源部３４は、例えばファンクションジェネレータで構成される。電源部３４は、解析部２０の制御部２６の制御により、癌細胞１が電極３２、３３を通過するときに、当該癌細胞１に対して解析部２０で求められたクロスオーバー周波数よりも大きく、当該癌細胞１以外の白血球等の細胞に対して解析部２０で求められたクロスオーバー周波数付近の周波数を有する交流電圧を発生して、電極３２、３３間に供給する。
　これにより、正の誘電泳動力（引力）が癌細胞１に作用し、癌細胞１は電極３２、３３に引きつけられながら電極３２、３３の延在方向に沿って流路５を流れ、収集部６に収集される。一方、白血球等の細胞には誘電泳動力が作用しないか、又は、正又は負の誘電泳動力（引力又は斥力）が作用したとしてもその誘電泳動力は比較的小さい。このため、白血球等の細胞は流路５における流れによって流され、収集部７に収集される。
　なお、収集部６は、流路５を流れてきた癌細胞１を分離して収集するためのものであり、収集部７は不要な白血球等を収集するためのものである。
２．動作
　以下、分離装置１００の動作を説明する。図２に示すように、分離装置１００は、置換部１０において、血液における赤血球等の細胞２及び溶液を、ＤＥＰ液に置換すると共に、血液に含まれる癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞のみを抽出する。解析部２０は、抽出された癌細胞１および白血球等の細胞に対する誘電泳動力のクロスオーバー周波数を解析する。分離部３０は、解析部２０で解析された癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数に基づいて当該癌細胞１を分離する。以下、分離装置１００の動作を詳細に説明する。
　まず、置換部１０の主流路１１に、主流路１１の液流方向から癌細胞１および白血球等の細胞を含む血液が導入され、同時に主流路１１の液流方向に直交する方向からＤＥＰ液が導入される。血液における赤血球等の細胞２及び溶液は分岐流路１２に分流し、癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞、及びＤＥＰ液は主流路１１を流れる。このように、置換部１０は、溶液置換（バッファ置換）を行い、ＤＥＰ液中に癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞を含む試料液を生成して主流路１１から流路５へ導出する。このとき、置換部１０は、癌細胞１および白血球等の細胞を一つずつ順に主流路１１から流路５へ導出する。
　解析部２０の電源部２４は、制御部２６の制御に従って、図３に示すように、ｆｍｉｎからｆｍａｘの周波数範囲で周期的に周波数を変化させた交流電圧を生成して電極２２、２３間に供給する。これにより、流路５における電極２２、２３間に、周期的に周波数変調された交流電圧が印加される。これにより、流路５を流れる癌細胞１および白血球等の細胞が電極２２、２３間を通過するときに、癌細胞１および白血球等の細胞は誘電泳動力を受ける。
　このとき、撮影部２５は、電極２２、２３の間を通過する癌細胞１および白血球等の細胞を撮像する。制御部２６は、撮影部２５の撮像画像の画像解析を行い、電極２２、２３の間を通過する癌細胞１および白血球等の細胞の移動軌跡を求める。制御部２６は、求めた移動軌跡に基づいて、誘電泳動力が斥力から引力に切り替わるタイミングを解析し、タイミングにおける電源部２４への制御情報から、タイミングにおける電源部２４の交流電圧の周波数を求め、求めた周波数をクロスオーバー周波数（ＣＯＦ）として求める。この解析処理の詳細は後述する。
　その後、解析部２０で解析された癌細胞１および白血球等の細胞は、分離部３０に向けて流れる。制御部２６は、解析後の癌細胞１および白血球等の細胞が分離部３０の電極３２、３３を通過するときに、当該癌細胞１に対応する解析により求められたクロスオーバー周波数よりも大きく、当該癌細胞１以外の白血球等の細胞に対応する解析により求められたクロスオーバー周波数付近の周波数を有する交流電圧を発生するように、電源部３４を制御する。解析後の癌細胞１および白血球等の細胞が分離部３０の電極３２、３３を通過するタイミングは、例えば、電極２２、２３と電極３２、３３との距離と、流路５を流れる試料液の流量とから概算することができる。電源部３４は、制御部２６の制御に基づく周波数を有する交流電圧を生成して電極３２に供給する。これにより、流路５において、電極３２、３３間に当該周波数を有する交流電圧が印加される。このとき、正の誘電泳動力（引力）が癌細胞１に作用し、癌細胞１は電極３２、３３に引きつけられながら電極３２、３３の延在方向に沿って流路５を流れ、収集部６に収集される。一方、不要な白血球等の細胞には誘電泳動力が作用しないか、又は、正又は負の誘電泳動力（引力又は斥力）が作用したとしてもその誘電泳動力は比較的小さい。このため、白血球等の細胞は流路５における流れによって流され、収集部７に収集される。
２－１．クロスオーバー周波数解析処理
　以下、解析部２０におけるクロスオーバー周波数の解析処理について説明する。図４は、一対の電極２２、２３の間における癌細胞１の移動軌跡の一例を示す図である。以下では、癌細胞１のクロスオーバー周波数解析処理について説明するが、癌細胞１以外の白血球等の細胞のクロスオーバー周波数解析処理も以下と同様である。図４において、軌跡Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４は、図３における時刻ｔ１、ｔ２、ｔ３、ｔ４における癌細胞１の位置である。図３及び図４に示すように、電極２２、２３間に印加される交流電圧の周波数がクロスオーバー周波数ＣＯＦよりも低いとき、負の誘電泳動力（斥力）が癌細胞１に作用し、癌細胞１は電極２２、２３に対して反発して、電極２２、２３から離れながら流路５を流れる（例えば、区間Ｔ１、Ｔ３）。一方、電極２２、２３間に印加される交流電圧の周波数がクロスオーバー周波数ＣＯＦよりも高いとき、正の誘電泳動力（引力）が癌細胞１に作用し、癌細胞１は電極２２、２３に引きつけられながら流路５を流れる（例えば、区間Ｔ２）。
　制御部２６は、例えば図４に示すように変化する移動軌跡に基づいて、誘電泳動力が斥力から引力に切り替わる癌細胞１の位置Ｐ２、Ｐ４を求め、その位置Ｐ２、Ｐ４から誘電泳動力が斥力から引力に切り替わるタイミングｔ２、ｔ４を求める。制御部２６は、タイミングｔ２、ｔ４における電源部２４への制御情報から、タイミングｔ２、ｔ４における電源部２４の交流電圧の周波数をクロスオーバー周波数として求める。以上のようにして、癌細胞１のクロスオーバー周波数（ＣＯＦ）を求めることができる。
３．まとめ
　以上のように、置換部１０と解析部２０は解析装置２００を構成する。本実施形態に係る解析装置２００は、血中循環癌細胞（誘電体粒子）１および白血球等の細胞に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析装置であって、流路（第１流路）５と、一対の電極（第１電極）２２、２３と、電源部（第１電源部）２４と、撮影部２５と、制御部（解析部）２６とを備える。流路５は、誘電泳動液中に癌細胞１および白血球等の細胞を含む試料液が流れる。一対の電極２２、２３は流路５に配置され、電源部２４は、一対の電極２２、２３に、周波数変調された交流電圧を印加する。撮影部２５は、流路５における一対の電極２２、２３間を流れる癌細胞１および白血球等の細胞の移動軌跡を撮影する。制御部２６は、移動軌跡を撮影した画像に基づいて、癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数を求める。
　また、本実施形態に係る分離装置１００は、癌細胞１とその他白血球等の細胞の分離を行う分離装置であって、上記の解析装置２００と、一対の電極（第２電極）３２、３３と、電源部（第２電源部）３４と、制御部２６とを備える。一対の電極３２、３３は、解析装置２００の流路５における一対の電極２２、２３の後段に配置され、電源部３４は、一対の電極３２、３３に、所定周波数の交流電圧を印加する。制御部２６は、解析装置２００で解析された癌細胞１および白血球等の細胞が流路５における一対の電極３２、３３を通過するときに、当該癌細胞１が誘電泳動を起こすように、上記の所定周波数を、当該誘電体粒子に対して解析装置２００で求められたクロスオーバー周波数に基づいて制御する。
　本実施形態によれば、癌細胞１および白血球等の細胞を含む試料液が導入される流路５において癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数の解析を行うので、従来のように微細なマイクロ電極間に誘電体粒子を配置する操作を行うことなく、簡易に癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数を解析することができ、この解析および分離後も解析および分離に用いられた癌細胞１を利用することができる（非破壊解析）。
　また、本実施形態に係る解析装置２００は、流路５の前段に配置され、癌細胞１および白血球等の細胞を含む懸濁液とＤＥＰ液（誘電泳動液）とが導入される流路（第２流路）１１と、流路１１から分岐する分岐流路１２とを有し、懸濁液における溶液を分岐流路１２に分岐させることにより、懸濁液における溶液をＤＥＰ液に置換して試料液を生成する置換部１０をさらに備える。置換部１０は、試料液における癌細胞１および白血球等の所望のサイズ以上の細胞を個々に順次に流路１１から流路５へ導出する。
　これにより、癌細胞１および白血球等の細胞を含む懸濁液とＤＥＰ液とを、分岐流路１２が形成された流路１１に導入することにより、懸濁液における溶液をＤＥＰ液に置換して、ＤＥＰ液中に癌細胞１および白血球等の細胞を含む試料液を生成するので、ＤＥＰ液単独で導電率調整を行うことにより試料液の導電率調整を行うことができる。
　そのため、例えば懸濁液とＤＥＰ液とを混合して試料液の濃度調整を行うことにより試料液の導電率調整を行う従来の溶液置換（バッファ置換）と比較して、試料液の導電率調整の時間を短縮することができ、溶液置換による癌細胞１および白血球等の細胞のクロスオーバー周波数の経時変動を低減することができる。
　また、上記した従来の溶液置換と比較して、容易にかつ高精度に試料液の導電率調整を行うことができ、試料液の導電率ばらつきに伴うクロスオーバー周波数の解析ばらつきを低減することができる。
（他の実施形態）
　上記した実施形態において、本システムの検査対象として細菌や細胞を例示した。本システムの検査対象は、細菌や細胞に限らず、誘電体粒子であればよく、例えば微生物や、真菌、芽胞、ウイルスであってもよい。
　また、上記した実施形態において、誘電泳動力が斥力から引力に切り替わるタイミング（例えば、図３のｔ２、ｔ４）でクロスオーバー周波数を解析する制御部２６について説明したが、制御部２６は、誘電泳動力が引力から斥力に切り替わるタイミング（例えば、図３のｔ１、ｔ３）でクロスオーバー周波数を解析してもよい。
　また、上記した実施形態において、解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数よりも高い周波数を有する交流電圧を電極３２、３３に印加して、電極３２、３３を通過する癌細胞１に正の誘電泳動力（引力）を作用させて癌細胞１を分離する分離部３０について説明したが、分離部３０はこれに限らない。分離部３０は、解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数よりも低い周波数を有する交流電圧を電極３２、３３に印加して、電極３２、３３を通過する癌細胞１に負の誘電泳動力（斥力）を作用させて癌細胞１を分離してもよい。この場合、図２において、癌細胞１は電極３２、３３に対して反発し電極３２、３３から離れつつ、電極３２、３３の延在方向に沿って流路５を流れ、収集部６に収集される。
　また、分離部３０は、解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数と同一周波数を有する交流電圧を電極３２、３３に印加して、電極３２、３３を通過する癌細胞１に誘電泳動力を作用させないようにしてもよい。この場合、図２において、癌細胞１は誘電泳動することなく流路５を流れ、収集部６と収集部７との間に到達する。この場合、収集部６と収集部７との間に収集部が設けられればよい。
　また、上記した実施形態において、癌細胞１に対して解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数よりも大きく、癌細胞１以外の白血球等の細胞に対して解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数付近の周波数を有する交流電圧を電極３２、３３に印加して、電極３２、３３を通過する癌細胞１に正の誘電泳動力（引力）を作用させて癌細胞１を分離する分離部３０について説明した。これに対し、分離部３０は、癌細胞１以外の白血球等の細胞に対して解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数よりも小さく、癌細胞１に対して解析部２０で解析されたクロスオーバー周波数付近の周波数を有する交流電圧を電極３２、３３に印加して、電極３２、３３を通過する癌細胞１以外の白血球等の細胞に負の誘電泳動力（斥力）を作用させて癌細胞１とそれ以外の細胞とを分離してもよい。このとき、負の誘電泳動力（斥力）が癌細胞１以外の白血球等の細胞に作用し、白血球等の細胞は電極３２、３３に対して反発し電極３２、３３から離れつつ、電極３２、３３の延在方向に沿って流路５を流れ、収集部６に収集される。一方、癌細胞１には誘電泳動力が作用しないか、又は、正又は負の誘電泳動力（引力又は斥力）が作用したとしてもその誘電泳動力は比較的小さい。このため、癌細胞１は流路５における流れによって流され、収集部７に収集される。

Claims (3)

  1. 　誘電体粒子に対する誘電泳動力が斥力から引力に又は引力から斥力に切り替わるクロスオーバー周波数を解析する解析装置であって、
    　誘電泳動液中に前記誘電体粒子を含む試料液が流れる第１流路と、
    　前記第１流路に配置された一対の第１電極と、
    　前記一対の第１電極に、周波数変調された交流電圧を印加する第１電源部と、
    　前記第１流路における前記一対の第１電極間を流れる前記誘電体粒子の移動軌跡を撮影する撮影部と、
    　前記移動軌跡を撮影した画像に基づいて、前記誘電体粒子のクロスオーバー周波数を求める解析部と、
    を備える解析装置。
  2. 　前記第１流路の前段に配置され、前記誘電体粒子を含む懸濁液と前記誘電泳動液とが導入される第２流路と、前記第２流路から分岐する分岐流路とを有し、前記懸濁液における溶液を前記分岐流路に分岐させることにより、前記懸濁液における溶液を前記誘電泳動液に置換して前記試料液を生成する置換部をさらに備え、
    　前記置換部は、前記試料液における前記誘電体粒子を個々に順次に前記第２流路から前記第１流路へ導出する、
    請求項１に記載の解析装置。
  3. 　誘電体粒子の分離を行う分離装置であって、
    　前記請求項１又は２に記載の解析装置と、
    　前記解析装置の前記第１流路における前記一対の第１電極の後段に配置された一対の第２電極と、
    　前記一対の第２電極に、所定周波数の交流電圧を印加する第２電源部と、
    　前記解析装置で解析された誘電体粒子が前記第１流路における一対の第２電極を通過するときに、当該誘電体粒子が誘電泳動を起こすように、前記所定周波数を、当該誘電体粒子に対して前記解析装置で求められたクロスオーバー周波数に基づいて制御する制御部と、
    を備える分離装置。
PCT/JP2017/002943 2016-01-29 2017-01-27 解析装置及び分離装置 WO2017131162A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201780008886.6A CN108603852B (zh) 2016-01-29 2017-01-27 解析装置及分离装置
US16/073,770 US10766040B2 (en) 2016-01-29 2017-01-27 Analysis device and separation device
EP17744392.6A EP3410107B1 (en) 2016-01-29 2017-01-27 Analysis device and separation device

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016-016119 2016-01-29
JP2016016119A JP6441838B2 (ja) 2016-01-29 2016-01-29 解析装置及び分離装置

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017131162A1 true WO2017131162A1 (ja) 2017-08-03

Family

ID=59398346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2017/002943 WO2017131162A1 (ja) 2016-01-29 2017-01-27 解析装置及び分離装置

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10766040B2 (ja)
EP (1) EP3410107B1 (ja)
JP (1) JP6441838B2 (ja)
CN (1) CN108603852B (ja)
WO (1) WO2017131162A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020068041A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Particle separation from whole blood
JP7061412B1 (ja) * 2021-06-14 2022-04-28 株式会社Ａｆｉテクノロジー 誘電体粒子推定装置及び誘電体粒子種類推定システム
WO2022113677A1 (ja) * 2020-11-25 2022-06-02 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 検出方法及び検出装置
WO2023276935A1 (ja) * 2021-06-30 2023-01-05 株式会社Ａｆｉテクノロジー 流路チップ、分離システム、及び、分離方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102230602B1 (ko) * 2018-08-31 2021-03-22 연세대학교 원주산학협력단 유전영동힘에 반응하는 세포의 궤적분석을 통한 세포의 cross-over frequency 측정방법
KR102244778B1 (ko) * 2018-08-31 2021-04-27 연세대학교 원주산학협력단 유전영동힘에 반응하는 세포의 위치변화를 이용한 세포의 교차주파수 측정방법
WO2020076327A1 (en) * 2018-10-11 2020-04-16 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Dielectrophoresis separator cross-over frequency measurement systems
DE102020120425A1 (de) * 2020-08-03 2022-02-03 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung eingetragener Verein Verfahren und fluidisches Mikrosystem zur dielektrophoretischen Manipulierung von suspendierten Partikeln
JP2023005958A (ja) 2021-06-30 2023-01-18 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス 流路チップおよび誘電泳動装置
US20230073786A1 (en) * 2021-09-03 2023-03-09 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Particle separation
EP4201526A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-28 Imec VZW Microfluidic device for sorting particles
JP2024013994A (ja) * 2022-07-21 2024-02-01 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス 流路チップ

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013127418A (ja) * 2011-12-19 2013-06-27 Shimadzu Corp 粒子測定装置

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60113287D1 (de) 2000-06-14 2005-10-13 Univ Texas Systeme und verfahren zur zellteilbevölkerungsanalyse
US20040060820A1 (en) 2002-10-01 2004-04-01 Bressler Vincent Edward Characterization of particles by position in an electric field
US7415807B2 (en) 2005-08-05 2008-08-26 Owens Corning Intellectual Capital Llc Structured adhesive system
US7400452B2 (en) 2005-10-18 2008-07-15 Lightmaster Systems, Inc. Method and apparatus for internal frames to improve performance and manufacturability of optical devices including liquid crystal on silicon (LCOS) based kernels
WO2007091450A1 (ja) 2006-02-10 2007-08-16 Kochi University Of Technology 粒子状物質の角度変調波による誘電泳動を利用した特性分析装置並びに方法
EP2042239A1 (en) * 2007-09-10 2009-04-01 Koninklijke Philips Electronics N.V. Dielectrophoretic device and method for cell membrane studies
JP5732816B2 (ja) 2010-10-29 2015-06-10 ソニー株式会社 細胞分取装置及び細胞分取チップ
US20130292247A1 (en) * 2012-05-01 2013-11-07 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Ene Alt Method and microsystem for the determination of clausius-mossotti factors for colloidal particles
JP2014174139A (ja) * 2013-03-13 2014-09-22 Sony Corp 流路デバイス、粒子分取装置、粒子流出方法、及び粒子分取方法
US10518273B2 (en) 2014-04-09 2019-12-31 Apocell, Inc. System and method for determining dielectrophoresis crossover frequencies
CN204162723U (zh) * 2014-10-16 2015-02-18 付琥 一种低频细胞循环分选系统
CN104651315B (zh) * 2015-03-19 2017-08-25 武汉大学 一种在微流控芯片中同时利用抗原抗体特异性识别和细胞尺寸差别分选肿瘤细胞的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013127418A (ja) * 2011-12-19 2013-06-27 Shimadzu Corp 粒子測定装置

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BASHAR YAFOUZ: "Dielectrophoretic Manipulation and Separation of Microparticles Using Microarray Dot Electrodes", SENSORS, vol. 14, no. 4, 3 April 2014 (2014-04-03), pages 6356 - 6369, XP055402433 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020068041A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Particle separation from whole blood
CN112740024A (zh) * 2018-09-24 2021-04-30 惠普发展公司，有限责任合伙企业 从全血进行粒子分离
EP3857215A4 (en) * 2018-09-24 2022-06-22 Hewlett-Packard Development Company, L.P. PARTICLE SEPARATION FROM WHOLE BLOOD
WO2022113677A1 (ja) * 2020-11-25 2022-06-02 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 検出方法及び検出装置
JP7061412B1 (ja) * 2021-06-14 2022-04-28 株式会社Ａｆｉテクノロジー 誘電体粒子推定装置及び誘電体粒子種類推定システム
WO2023276935A1 (ja) * 2021-06-30 2023-01-05 株式会社Ａｆｉテクノロジー 流路チップ、分離システム、及び、分離方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20190032103A1 (en) 2019-01-31
EP3410107A1 (en) 2018-12-05
JP6441838B2 (ja) 2018-12-19
CN108603852A (zh) 2018-09-28
JP2017134020A (ja) 2017-08-03
CN108603852B (zh) 2021-05-28
EP3410107A4 (en) 2019-08-28
US10766040B2 (en) 2020-09-08
EP3410107B1 (en) 2021-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6441838B2 (ja) 解析装置及び分離装置
Chen et al. A simplified microfluidic device for particle separation with two consecutive steps: Induced charge electro-osmotic prefocusing and dielectrophoretic separation
US9109197B2 (en) Device for concentrating and separating cells
Jiang et al. High-throughput continuous dielectrophoretic separation of neural stem cells
US8834698B2 (en) Devices and methods for optoelectronic manipulation of small particles
Yunus et al. Continuous separation of colloidal particles using dielectrophoresis
LaLonde et al. Isolation and enrichment of low abundant particles with insulator-based dielectrophoresis
Parikesit et al. Size-dependent trajectories of DNA macromolecules due to insulative dielectrophoresis in submicrometer-deep fluidic channels
Lannin et al. Automated electrorotation shows electrokinetic separation of pancreatic cancer cells is robust to acquired chemotherapy resistance, serum starvation, and EMT
CN107615041A (zh) 检查装置、检查系统以及检查方法
KR20060085299A (ko) 농도구배발생부가 구비된 유전영동 장치, 그를 이용한물질의 분리방법 및 물질 분리의 최적 조건을 탐색하는 방법
Jaffe et al. Multi-frequency dielectrophoretic characterization of single cells
Ho et al. Charge-based separation of micro-and nanoparticles
Yuan et al. A resettable in-line particle concentrator using AC electrokinetics for distributed monitoring of microalgae in source waters
King et al. Three-dimensional anti-Brownian electrokinetic trapping of a single nanoparticle in solution
Sasanpour et al. Proper measurement of pure dielectrophoresis force acting on a RBC using optical tweezers
Boettcher et al. Filtration at the microfluidic level: enrichment of nanoparticles by tunable filters
US11946902B2 (en) Dielectrophoresis separator cross-over frequency measurement systems
Song et al. Continuous-mode dielectrophoretic gating for highly efficient separation of analytes in surface micromachined microfluidic devices
Kwak et al. Size-selective particle trapping in dielectrophoretic corral traps
CN101430942B (zh) 一种具有微粒抬升装置的光钳装置
WO2023276935A1 (ja) 流路チップ、分離システム、及び、分離方法
US20240181470A1 (en) Systems and methods for non-destructive isolation, concentration, and detection for unbiased characterization of nano- and bioparticles
Chiou Massively parallel optical manipulation of single cells, micro-and nano-particles on optoelectronic devices
JP2006510020A (ja) 静電泳動粒子のプロファイリングシステム及び方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17744392

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2017744392

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017744392

Country of ref document: EP

Effective date: 20180829