WO2017109388A1 - Dérivés de nucléotides et leurs utilisations - Google Patents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
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- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
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- A61P31/12—Antivirals
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- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Definitions
- the present invention relates to nucleotide derivatives and their uses, especially as medicaments.
- Nucleoside and nucleotide analogues are a prominent family of antiviral agents. Of the FDA-approved drugs in the treatment of AIDS, seven are nucleoside analogues, one is a nucleotide analogue characterized by a carbon-phosphorus (phosphonate) bond. All of these compounds are usually called: nucleoside reverse transcriptase inhibitors (Nucleotides) [N (t) RTIs].
- nucleoside and nucleotide analogues are known from the state of the art. There may be mentioned in particular application US2007 / 0225249 which discloses R-2'-fluoronucleoside phosphonate compounds which are used in the context of treatment of viral infections such as HIV infections, hepatitis B and C viruses, or in part of an abnormal proliferation of cells.
- the invention proposes to overcome these disadvantages. Increased treatment efficacy is being sought to improve the longevity and quality of life of patients.
- One of the aims of the invention is to propose novel compounds which are effective for treating viral infections and whose efficacy is improved by limiting the side effects.
- the invention relates to a compound of formula I below: or a pro-drug of it,
- R 1 represents a purine or a pyrimidine, or more generally a nitrogen heterocycle
- Y represents an oxygen atom
- X represents a hydrogen atom, a vinyl group, an ethynyl group, a -CF 3 group, a -CH 2 OH group, a monofluoromethyl -CH 2 F group, a methylazide group -CH 2 N 3 , a methyl group;
- Z 1 and Z 2 represent, independently of one another, a hydrogen atom, a phosphate group, a pyrophosphate group, or a temporary protective group of the phosphate or phosphonate function (for example POM, POC or SATE) .
- the invention is based on the surprising finding made by the inventors that nucleotide derivatives, 3 'fluoronucleotides, are effective for the treatment of viral infections.
- the compounds of the invention are nucleotide analogs, or alternatively referred to as phosphonylated analogues. They are characterized in particular by the presence of a carbon-phosphorus bond (phosphonate). This bond confers chemical and enzymatic stability with respect to cellular hydrolases.
- the compounds of the invention exhibit activity over a broad spectrum of viruses. The mode of action of these compounds involves intracellular metabolism in their diphosphorylated forms. These metabolites then interfere with the proliferation of the virus by acting as competitive inhibitors and / or alternative substrates of the viral polymerase. Their incorporation results in a stop of the nucleic acid chain during elongation (chain terminating effect).
- the anionic nature of phosphonylated analogs at physiological pH may be a limitation to their therapeutic use.
- the phosphonate function can be temporarily masked by various groups. These are well known to those skilled in the art.
- the resulting prodrugs are susceptible to hydrolysis, by chemical or enzymatic processes, to regenerate the phosphonyl analogue.
- the protective groups of the phosphate function or phosphonate considered are for example acyloxyalkyl groups such as POM (pivaloyloxymethyl) group, POC (isopropyloxycarbonyloxymethyl), SATE (S-acyl-2-thioethyl), lipid chain monoester, phosphoroamidate monoester, phosphorobisamidate.
- acyloxyalkyl groups such as POM (pivaloyloxymethyl) group, POC (isopropyloxycarbonyloxymethyl), SATE (S-acyl-2-thioethyl), lipid chain monoester, phosphoroamidate monoester, phosphorobisamidate.
- purine is understood to mean a heterocyclic nitrogenous molecule consisting of a pyrimidine ring fused to an imidazole ring.
- nitrogen heterocycle is understood to mean a cyclic carbon chain containing one or more nitrogen atoms.
- nitrogenous heterocycle there may be mentioned for example a purine or imidazo [4,5-d] pyrimidine, a pyrimidine or 1, 3-diazine.
- the purines used in the invention are especially adenine, guanine and their derivatives.
- the pyrimidines used in the invention are cytosine, thymine and uracil and their derivatives.
- the purines used in the invention are adenine and guanine.
- pyrimidine means an aromatic heterocyclic nitrogen compound (C 4 H 4 N 2 ) comprising two nitrogen atoms.
- the pyrimidines used in the invention are cytosine, thymine and uracil.
- All the compounds of the invention may be in the form of salts, and in particular pharmaceutically acceptable salts, which are well known to those skilled in the art, and in particular salts of sodium, ammonium, calcium, magnesium, potassium, of acetate, carbonate, citrate, chlorine, sulphate, salts of amino chlorhydate salts, borhydrate, dihydrogen phosphate salts, succinate, tartrate, lactate, mandelate, methane sulphonate (mesylate), or -toluene sulfonate (tosylate).
- This list is not limiting, and the skilled person will be able to choose the salt of the compound of the invention most suitable for the desired use, depending on the pH used.
- Z1 or Z2 is a pyrophosphate that the other is a hydrogen. This means that if Z1 is a pyrophosphate, Z2 is H and if Z2 is a pyrophosphate, Z1 is H.
- the compound of formula I comprises two asymmetric carbons C * , carbons 1 'and 4' of cyclopentene, carbon 1 'being that connected to the group R1 and carbon 3' that connected to the fluorine atom.
- n C * n asymmetric carbon atoms
- two different provisions of the substituents are possible by C * .
- n C * it will have at most 2 n stereoisomers.
- image molecules 2 to 2 which will constitute 2 n "1 pairs of enantiomers.
- the invention relates to a compound mentioned above, chosen from the following compounds of formula:
- R1, X, Y, Z and Z 2 are as defined above.
- the compounds for which the R1 nitrogen heterocycle and the phosphonyl substituent have a cis configuration below the average cyclopentene plane are advantageous because they are structurally related but different from the nucleotide and nucleosides, natural and synthetic, known from the state of the art.
- compounds Ia or Ib can be separated, purified and used interchangeably.
- the compounds are very advantageous because they are structurally similar but different nucleotide derivatives and nucleosides known from the state of the art, and natural nucleotides. Also, they can be used by cellular machinery during DNA replication or transcription (RNA synthesis), or reverse transcription (DNA synthesis from RNA).
- the invention relates to a compound mentioned above, said compound being chosen by the following compounds:
- the invention relates to a compound chosen from the following:
- the invention relates to a compound as defined above, said compound being chosen from the following compounds:
- the invention relates to a aforementioned compound, said compound being selected from the following compounds, or a salt as defined above thereof:
- the invention further relates to a racemate comprising, essentially consisting of or constituting a mixture of the compounds of formula la and Ib below
- R1 represents a purine or a pyrimidine
- Y represents an oxygen atom
- Z 1 and Z 2 represent, independently of one another, a hydrogen atom, a phosphate group, a pyrophosphate group, or a temporary protective group of the phosphate or phosphonate function, such as the POM (pivaloyloxymethyl) group, POC (isopropyloxycarbonyloxymethyl), SATE (S-acyl-2-thioethyl), lipid chain monoester, phosphoroamidate monoester, phosphorobisamidate.
- POM pivaloyloxymethyl
- POC isopropyloxycarbonyloxymethyl
- SATE S-acyl-2-thioethyl
- lipid chain monoester phosphoroamidate monoester
- phosphoroamidate monoester phosphorobisamidate.
- the mixture of the stereoisomers Ia and Ib is a racemate. It is recalled in the invention that a racemic or racemate is a mixture in equal proportions of enantiomers.
- the mixtures of the invention consist of a mixture equimolar of the stereoisomers of formula Ia and Ib above represented
- the aforementioned racemate is chosen from the following racemates - a mixture of the enantiomeric compounds of the following formulas:
- a “pharmaceutically acceptable carrier” is a non-toxic material or compound that is compatible with a biological system such as a cell, a cell culture, a tissue or an entire organism.
- a pharmaceutical composition comprising at least one compound according to the invention and / or at least one racemate according to the invention is indifferently in a solid form (dry particles) or in a liquid form.
- a pharmaceutical composition in the form of an aqueous suspension or a non-aqueous suspension, or in the form of a water-in-oil or oil-in-water emulsion is preferred.
- compositions according to the invention mention may be made more particularly of those which are suitable for oral, topical, parenteral, nasal, intravenous, percutaneous (transcutaneous), subcutaneous, rectal, perlingual or respiratory administration and in particular simple tablets. or coated tablets, sublingual tablets, capsules, lozenges, suppositories, creams, ointments, skin gels, and oral or injectable ampoules.
- the dosage varies according to the sex, the age and the weight of the patient, according to the route of administration, and according to the type of viral infection, the state of progression of the infection and the symptoms developed by the patient.
- the dosage may also vary depending on the type of antiviral treatment (s) associated.
- the composition as defined in the present invention is used in which said at least one compound and / or at least one racemate is in amounts preferably ranging from 0.001 mg / kg body weight of the patient or from a animal, at 1 g / kg body weight of the patient or animal in 24 hours, in one or more catches.
- said amount is at least 0.01 mg / kg, more preferably 0.05 mg / kg.
- said amount is at most equal to 500 mg / kg, more preferably 100 mg / kg.
- a pharmaceutical composition according to the invention may be in the form of tablets, capsules, capsules, dragees, syrups, suspensions, solutions, powders, granules, emulsions , suspensions of microspheres or nanospheres, suspensions of lipid vesicles or vesicles based on various polymers.
- a pharmaceutical composition according to the invention can be in the form of tablets which can be manufactured from solid compositions comprising at least one compound according to the invention, and / or a racemate according to the invention, in combination with various excipients such as microcrystalline cellulose, sodium citrate, calcium carbonate, dicalcium phosphate, or glycine.
- Various disintegrating agents can be used such as starch (corn, potato, tapioca, etc.), alginic acid or a silicate.
- binding agents such as polyvinylpyrrolidone, sucrose, gelatin, or acacia.
- Lubricants such as magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, or talc can be used.
- Such solid compositions, in the form of a powder can be used for the manufacture of gelatin capsules.
- lactose or else a polyethylene glycol of high molecular weight it is also possible to use lactose or else a polyethylene glycol of high molecular weight.
- a compound according to the invention and / or a racemate according to the invention, can be combined with various sweetening agents, flavoring agents, coloring agents, optionally also with emulsifying agents or suspending agents, in combination with diluents such as water, ethanol, propylene glycol, glycerin or any combination of these excipients.
- a pharmaceutical composition according to the invention may be in the form of solutions or suspensions for infusion or injection.
- a compound according to the invention, and / or a racemate according to the invention can be dispersed in a liquid vehicle such as a physiological saline or a saline solution containing 5% by weight of dextrose, which are conventionally used for the preparation of injectable pharmaceutical formulations.
- controlled-release compositions for example compositions in which a compound according to the invention, and / or a racemate according to the invention, is protected from the external medium by a plurality of layers of coating which degrades in a different manner, eg in contact with a neutral or basic medium (gastroresistant coating layers) or in contact with an aqueous medium (coating layers comprising soluble polymers or which degrade in water) .
- the pharmaceutical composition of the present invention can be used for parenteral, topical or local administration and prophylactically and / or therapeutically.
- said at least one compound according to the invention, and / or at least one racemate according to the invention is prepared in a form adapted to the type of administration chosen, for example in liquid form or in freeze-dried form.
- compositions comprising a compound, a compound according to the invention, and / or a racemate according to the invention may contain an excipient and / or a pharmaceutically acceptable carrier, liquid or solid, for example aqueous.
- pharmaceutically acceptable excipients and / or carriers may be used, for example solvents or diluents; water, optionally mixed with propylene glycol or polyethylene glycol, buffered water, a saline solution, a glycine solution and its derivatives, a non-aqueous solution comprising, in particular, solvents such as ethanol, N-methylpyrrolidone, dimethylacetamide (DMA), dimethylsulfoxide (DMSO) and / or dimethylformamide (DMF), as well as agents necessary to reproduce physiological conditions such as, for example, buffering agents and pH adjusters, surfactants such as Solutol ® HS15, Tween ® 80, sodium acetate, sodium lactate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chlor
- the pharmaceutical composition can be sterilized by sterilization techniques well known to those skilled in the art. It is preferred to use at least one organic solvent and at least one surfactant to solubilize said at least one compound according to the invention, and / or at least one racemate according to the invention, preferably a mixture of ethanol, dimethylacetamide and at least one surfactant.
- non-toxic, pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants or excipients, solubilizing agents other than solvents, preserving agents, wetting agents, emulsifiers, dispersing agents, binders, and the like may also be mentioned by way of nonlimiting indication.
- Such compounds are, for example, magnesium carbonate, magnesium stearate, talc, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, cellulosic materials, cocoa butter, and the like.
- a pharmaceutical composition according to the invention comprises from 0.01% to 99% by weight, and advantageously from 1% to 90% by weight, of at least one compound according to the invention, and / or at least a racemate according to the invention, relative to the total weight of said composition.
- the dose of compound according to the invention, and / or racemate according to the invention, administered daily generally varies from 0.5 to 50 mg / kg, preferably from 1 to 20 mg / kg.
- a pharmaceutical composition according to the invention comprises from 1% to 99.99% by weight, and advantageously from 10% to 99% by weight, of an excipient and / or vehicle (or diluent) or a combination of excipients and / or pharmaceutically acceptable carriers.
- the main active ingredient is mixed with a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
- a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
- the tablets may be coated with sucrose or other suitable raw materials or may be treated so that they have prolonged or delayed activity and continuously release a predetermined amount of active ingredient.
- a preparation in capsules is obtained by mixing the active ingredient with a diluent and pouring the resulting mixture into soft or hard gelatin capsules.
- a pharmaceutical composition in the form of a syrup or elixir may contain the active ingredient together with a sweetener, preferably a calorie-free sweetener, methylparaben and propylparaben as antiseptics, as well as a flavoring agent and a suitable colorant.
- a sweetener preferably a calorie-free sweetener, methylparaben and propylparaben as antiseptics, as well as a flavoring agent and a suitable colorant.
- the water-dispersible powders or granules may contain the active ingredient in admixture with dispersing agents or wetting agents or suspending agents, such as polyvinylpyrrolidone, as well as with sweeteners or scavengers. taste.
- the active ingredient may also be formulated in the form of microcapsules, optionally with one or more supports or additives.
- the skilled person may advantageously refer to the edition of the European Pharmacopoeia, for example at the 5 th edition of the European Pharmacopoeia published in January 2005, or again at the 6th edition of the European Pharmacopoeia, available to the public in June 2007.
- a pharmaceutical composition as defined above is suitable for oral, parenteral or intravenous administration.
- the pharmaceutical composition according to the invention comprises at least one pharmaceutically or physiologically acceptable excipient, it is in particular a suitable excipient for administration of the composition orally or of a suitable excipient for administration of the composition parenterally.
- the invention further relates to a pharmaceutical composition comprising at least one compound as defined above, and / or at least one racemate as defined above, for its use as a medicament.
- the invention furthermore relates to a composition comprising at least one compound as defined above, and / or at least one racemate as defined above, for its use in the treatment of viral infections, especially infections. retroviral drugs, especially for the treatment and / or prevention of infection by the human immunodeficiency virus.
- compositions comprising at least one compound as defined above and / or at least one racemate as defined above for the preparation of a medicinal product intended for treatment and / or the prevention of viral infections, including retroviral infections, particularly HIV infection.
- retroviral infection is meant in the invention the infection by exogenous retroviruses, viruses capable of inducing cancers or diseases associated with an immune deficiency, or "reactivation" of an endogenous retrovirus, this reactivation may induce pathologies such as cancers, autoimmune diseases such as psoriasis, or deficits of the immune system.
- the viral infections covered by the invention particularly concerns, in humans:
- hepatitis viruses including hepatitis B (HBV) or hepatitis C (HCV) viruses,
- the invention relates to a composition for its use as defined above, wherein said viral infection is an infection with the hepatitis B virus (HBV) or hepatitis C virus. (HCV), HTLV-1 or 2 viruses, herpes viruses 1 and 2, viruses of the family Coronaviridae, including Coronaviruses, including SARS-CoV responsible for SARS, viruses of the family Flaviviridae including the yellow fever virus, West Nile virus, and the dengue virus, viruses of the family Picornaviridae, including polioviruses and rhinoviruses and viruses of the family Togaviridae, including the virus of the rubella, Ross River virus, Sindbis virus and Chikungunya virus
- the viral infections are those related to the viruses VI H, Herpes, Dengue, Chikungunya. HBV, HCV and HTLV, as well as each of the subgroups and isotypes of said viruses mentioned above.
- the invention is not limited to the treatment of viral infections in humans, but also in animals, and especially in mammals.
- the invention relates only to a composition comprising at least one compound as defined above, and / or at least one racemate as defined above, for its use as part of the treatment and / or or the prevention of an infection with the human immunodeficiency virus, 1 or 2.
- the invention relates to a composition comprising at least one compound as defined above, and / or less a racemate as defined above, for its use in the context of the treatment and / or prevention of a viral infection in a mammal, in particular a human being, a monkey, a cat or a dog, said viral infection being not being an infection with the human immunodeficiency virus, 1 or 2.
- the invention relates to a composition mentioned above for its above-mentioned use, in combination with at least one antiretroviral compound.
- a retroviral infection in particular by HIV, whether it is HIV1 or HIV2
- NRTI nucleos (t) idic inhibitor
- NRTI nucleos (t) idic inhibitor
- ZDV zidovudine
- AZT zidovudine
- Epivir, 3TC lamivudine
- Emtriva, FTC didanosine
- Videx, ddl stavudine
- Zerit, d4T stavudine
- abacavir Zavudine
- Ziagen Zavudine
- abacavir Zavudine
- Ziagen Zavudine
- abacavir Zavudine
- Ziagen Zavudine
- abacavir Zavudine
- Ziagen Zavudine
- abacavir Zavudine
- Ziagen Zavudine
- abacavir Zavudine
- d4T stavudine
- abacavir Zav
- NRTI non-nucleoside inhibitor
- EFV efavirenz
- Stocrin nevirapine
- NVP etravirine
- DLV delavirdine
- rilpivirine rilpivirine
- nucleotide analog such as fosalvudine
- a protease inhibitor such as amprenavir (Agenerase, APV), tipranavir (Aptivus, TPV), indinavir (Crixivan, IDV), saquinavir (Invirase, SQV), fosamprenavir (Telzir, FPV) , also known as Lexiva, ritonavir (Norvir, RTV), darunavir (Prezista, DRV), atazanavir (Reyataz, ATZ), nelfinavir (Viracept, NFV) or Kaletra (lopinavir + ritonavir, LPV / r), also known as Aluvia,
- an integrase inhibitor such as raltegravir (Isentress, RGV), elvitegravir (EVG / r) or dolutegravir (DTG),
- a fusion inhibitor such as enfuvirtide (Fuzeon, ENF), also known under the name T-20,
- CCR5 antagonist type entry inhibitor such as maraviroc (Celsentri), also known as Selzentry, vicriviroc or TNX-355 or of attachment inhibitor type, such as BMS-626529,
- a ripening inhibitor such as BMS-955176 or GSK2838232
- compositions and said at least one antiretroviral agent mentioned above can be administered simultaneously, separately or spread over time.
- the invention relates to a compound of formula 5, 6, 7, 8 or 9 as described in Scheme 1 below. These compounds are synthesis intermediates of the compounds of formula I of the invention.
- the invention therefore also relates to the use of the compounds of formula 5, 6, 7, 8 or 9, as described in scheme 1 below, for the preparation of a compound as defined above.
- FIG. 1 represents curves showing the amount of ⁇ -galactosidase (in%) as a function of the amount of compound (in ⁇ ). The names of the compounds are indicated next to each curve.
- FIG. 2 represents curves showing cell viability (in%) as a function of the quantity of product (in ⁇ ). The different curves are almost inseparable whatever the concentration of compound used.
- FIG. 3 represents curves showing the amount of ⁇ -galactosidase (in%) as a function of the amount of compound (in ⁇ ). The names of the compounds are indicated next to each curve.
- Figure 4 shows results on the multidroque resistance of reverse transcriptases of HIV-1. These data are derived from testing on 12 resistant reverse transcriptase clones.
- ambient temperature is understood to mean a laboratory temperature that varies from 17 ° C. to 25 ° C. or even up to 30 ° C.
- Example 1 Synthesis of a compound according to the invention, where R 1 is an adenine The synthesis is described in reaction schemes 1 to 3 below.
- the compound ( ⁇ ) -1 is synthesized as described in Tetrahedron, 1997, 53, 1983-2004 and the compound ( ⁇ ) -2 as described in Org. Lett., 2012, 14; 1644-1647.
- steps 1 to 6 are identical to those described in Example 1.
- Rf 0.31 (30% ethyl acetate in petroleum ether).
- EXAMPLE 4 Synthesis of a Compound According to the Invention Where R1 Is a Guanine From Compound (-) - 8 Described in Example 1, and Proceeding with a Synthesis According to Steps 7 to 10 of Example 3 it is possible to synthesize a sodium salt of the compound of formula Ib2G according to the invention wherein Z-1 and Z 2 are H. This product is enantiopure.
- Example 5 Synthesis of a racemate of adenine compounds according to the invention.
- DIAD (1.67 mL, 8.51 mmol, 5 eq) was added dropwise to a solution of compound ( ⁇ ) -35 (361 mg, 1.7 mmol, 1 eq), PPh 3 (2). 23 g, 8.51 mmol, 5 eq) and benzoic acid (1.09 g, 8.51 mmol, 5 eq) in anhydrous THF (37 ml) at 0 ° C.
- the mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1 h, then the solvents were evaporated under reduced pressure.
- the residue was dissolved in MeOH (37 mL), K 2 CO 3 (588 mg, 4.25 mmol, 2.5 eq) was added and the solution was stirred at room temperature for 4h.
- the corresponding phosphate was converted to a tetrabutylammonium salt according to the following procedure:
- the suspension was filtered and the filtrate was added dropwise with Bu 4 NOH (40% in H 2 O) to pH 7 to 8.
- the residue was lyophilized and dried overnight (in a desiccator containing P 2 O 5 ) to give a tetrabutylammonium salt as a white solid.
- NEt 3 (44 ⁇ l, 0.32 mmol, 2 eq) was added to a solution of phosphonate (3xBu 4 N + salt, 175 mg, 0.159 mmol, 1 eq) in anhydrous DMF (0.6 mL). The solution was stirred at room temperature for 30 min until addition of chloromethyl pivalate (115 ⁇ , 0.80 mmol, 5 eq). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 days then stopped by adding water (5 mL) and CH 2 CI 2 (5 mL). The phases were separated and the aqueous phase was extracted with CH2Cl2 (3x5 mL). The combined organic phases were dried (MgSO 4 ), filtered and concentrated.
- NEt3 (72 ⁇ M, 0.52 mmol) was added to a solution of UA2276 compounds (HNEt3 salt, 108 mg, 0.25 mmol) in dehydrated DMF (1 mL). The solution was stirred at room temperature for 30 minutes until addition of chloromethyl pivalate (186 ⁇ l, 1.28 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 days and then the reaction stopped by adding water (5 mL) and CH 2 Cl 2 (5 mL). The phases were separated and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2 (3x5 mL). The combined organic phases were dried (MgSO 4 ), filtered and concentrated. The purification was carried out by flash chromatography on silica gel (CH 2 Cl 2 to CH 2 Cl 2 / MeOH 96/4) to obtain bis-POM-prodrug UA2330 in the form of a colorless oil.
- (+/-) - 6 is obtained from the compound (+/-) - 5 (see scheme 1 above). From (+/-) - 5, the synthesis developed is identical to that of the enantiopure series indicated in Scheme 2 of the patent allowing in this scheme 2 to obtain the compound enantiopur (-) - 12.
- BuLi (2.5M in hexane, 0.97 mL, 2.42 mmol) was added dropwise at -78 ° C under argon to a solution of trimethylsilylacetylene (0.36 mL, 2 mL). 53 mmol) in anhydrous THF (2.5 mL). The solution was stirred at -78 ° C for 30 min and then added to a suspension of anhydrous CeCl 3 in THF (2.5 mL) at -78 ° C under argon atmosphere. The mixture was stirred for 10 min at -78 ° C, to reach room temperature in 10 min, then cooled to -78 ° C and stirred for 30 min.
- reaction mixture was added to a suspension of compound ( ⁇ ) -83 (118 mg, 0.41 mmol) in THF (2.5 mL) at -78 ° C, and the resulting solution was stirred for one hour. (the temperature reaches -40 ° C).
- the reaction was stopped by the addition of saturated aqueous NaHCO 3 (10 mL) and extracted.
- the organic phase was washed with brine (10 mL), dried (MgSO 4 ) and concentrated under reduced pressure. Purification by flash chromatography on a slice gel (CH 2 Cl 2 / MeOH 90/10) results in the production of the compound ( ⁇ ) -84 (62 mg, 46%) as a colorless oil.
- the reaction mixture was heated at 40 ° C for 1 h until diethyl (tosyloxymethyl) phosphonate (209 mg, 0.649 mmol) was added.
- the solution was stirred for 2h at 40 ° C, then the reaction was stopped by addition of acetic acid and concentrated to dryness.
- the residue was dissolved in AcOH / MeOH / H 2 O (9/1/7 v / v / v, 5 mL) and stirred for 22h at room temperature.
- the solution was concentrated to dryness and the residue was partitioned between H 2 O (10 mL) and CHCl 3 (10 mL). The phases were separated and the aqueous phase was extracted with CHCl 3 ( 2 x 10 mL).
- Lawesson's reagent (870 mg, 2.15 mmol) was added to a suspension of compound ( ⁇ ) -76 (340 mg, 1.34 mmol) in freshly diluted 1,2-dichloroethane (65 mL) at room temperature. ambient under an argon atmosphere. The mixture was refluxed (83 ° C) for 20h, cooled to room temperature, concentrated and the residue was filtered through silica gel (CH 2 Cl 2 / MeOH 9/1). The crude material was dissolved in NH3 / MeOH (7N, 25mL) and the solution was heated at 100 ° C in a sealed bomb for 4h. Concentration to dryness and purification by chromatographic column on silica gel (CH 2 Cl 2 / MeOH 9/1) afforded the compound ( ⁇ ) -77 (220 mg, 78%) in the form of a colorless oil.
- the soda compounds may be mono or disodium.
- a cell viability test was performed by measuring the absorbance 560 and 690 nm using the reagent yellow tetrazolium MTS reagent [3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] in the presence of tetrabenzoylated adenosine in Hel_a-CD4 cells.
- Cytotoxicity was measured using a Promega Celititer 96 AQueus cytotoxicity kit according to the manufacturer's recommendations.
- the kit contains tetrazolium MTS (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-carboxy an internal salt and an electron coupling the reagent PES (Phenazine ethosulfate) which will enhance its chemical stability.
- MTS tetrazolium is bioreduced by the cells into a colored formazan product that is soluble in culture medium.This conversion is due to NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase) produced by dehydrogenase enzymes in metabolically active cells. From 1 to 4 hours, the reading of the absorbance at 490 nm is carried out using a 96-well plate reader The amount of the measured formazan product is directly proportional to the number of living cells in culture.
- the cytotoxyd 50% dose necessary for 50% of the cells to die is greater than 50 ⁇ .
- the inventors used the CD4 LTR-LacZ HeLa cells in which the expression of the lacZ gene is induced by the HIV trans-activator protein Tat. This system makes it possible to precisely quantify the infectivity in a replication cycle with wild-type NL4-3 virus (3ng equivalent of p24 antigen).
- the evaluation of efficacy is based on the determination of the 50% inhibitory antiretroviral (Cl 50 ) concentrations of virus replication in culture (halving ⁇ -galactosidase level).
- Exponentially growing HeLa-CD4 cells at a density of 1 x 10 4 / ml were seeded into 96-well plates and infected the following day with the clone.
- HIV-1 pNL-4.3 (at a quantity corresponding to 3 ng of p24GAG antigen), in the presence of increasing doses of different compounds ( ⁇ , 5 ⁇ , 10 ⁇ 25 ⁇ and 50 ⁇ ).
- the measurement of infectivity is measured after 48h by evaluating the cleavage of red chlorophenol- ⁇ -D-galactopyranoside (CPRG).
- UA2277 and UA2276 compounds are the two most effective compounds in that NC50 is less than 10 ⁇ .
- control IC 50 of tenofovir and ⁇ were measured in this system and are respectively 7 ⁇ and 0, 1 ⁇ .
- FIG. 3 represents curves showing the amount of ⁇ -galactosidase (in%) as a function of the amount of compound (in ⁇ ) an evaluation of the antiviral activity (curve with squares) and toxicity (curve with diamonds). This evaluation was carried out under the same conditions as those described for FIGS. 1 and 2. Under these evaluation conditions, the IC 5 o of the compound UA2276 was determined at 1 ⁇ , which makes it approximately 7 times more effective. than tenofovir.
- Example 14 Evaluation of the anti-HIV activity of nucleos (t) ide derivatives
- the anti-HIV activity of the compounds and the two reference compounds, PMPA and ⁇ was tested in vitro using primary cultures of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC), previously activated by a mitogen, phytohaemagglutinin (PHA) -P and then infected with the HIV-1-LAI reference strain (Barré Sinoussi et al., 1983 Science, 1983, 220 (4599), 868-871).
- PBMC peripheral blood mononuclear cells
- these mononuclear cells were isolated from the peripheral blood of healthy donors by a density gradient on a Ficoll cushion and then activated for 3 days with 1 ⁇ g / ml of PHA-P (Sigma) and 5 IU / ml of recombinant human interleukin (IL) -2 (rHulL-2, Roche). These PBMCs were cultured at + 37 ° C.
- the cells were distributed in the wells of 96 well microplates at the rate of 150,000 cells per well. They were pre-treated for 30 minutes by increasing concentrations of the various compounds to be tested and then infected with 100 "tissue culture infectious doses 50% (TCID50)" of the reference strain with lymphocytic tropism, HIV-1-LAI. In the laboratory, this virus has been exclusively amplified using activated cord blood mononuclear cells (CMSC) or activated PBMCs. The viral stock was titrated using the same experimental model, and the calculated TCID50 after dilution-limit of the viral stock using the Spearman-Kàrber formula (Kàrber, 1931). Seven days after infection, the culture supernatants were collected and frozen at -20 ° C until the extent of viral replication was measured by quantifying the enzyme activity of the reverse transcriptase (Tl) using the kit Lenti kit RT (Cavidi).
- Tl reverse transcriptase
- Encrypted data was analyzed using SoftMax®Pro 4.6 software (Molecular Devices). The inhibition percentages of T1 activity and cell viability were calculated to determine the effector concentrations 50, 70 and 90% (EC50, CE70, and CE90) and cytotoxic concentrations (CC50, CC70 and CC90) from a 4-parameter dose-effect curve.
- the selectivity index (SI) was calculated according to the ratio "CC50 / EC50". 2.2.
- the 6 resistant viral strains are from NIH AIDS Research & Reference Reagent Program HIV-1-4755-5, HIV-1-7303-3, HIV-1-56252-1, HIV-1-52534-1, HIV-1- 1-71361-1, and HIV-1-7324-1) carry mutations in Tl (The mutation points of these 6 viruses are specified in Appendix 1). They were selected based on the chemical structure of the most effective compounds with varying degrees of resistance to the different existing L-series nucleosides. These viral strains were amplified and viral stocks titrated using cells of the H9 lineage.
- the cells were distributed in the wells of 96 well microplates at 50,000 cells per well. They were then pretreated for 30 minutes by increasing concentrations of the different compounds to be tested and then infected with 125 TCID50 of the different resistant strains. Seven and 14 days after infection, the culture supernatants were collected and frozen at -20 ° C until the extent of viral replication was measured by quantifying the enzyme activity of Tl. The effective concentrations 50, 70 and 90% and the resistance factors were calculated as previously described. A possible cytotoxicity of the molecules with respect to the cells of the H9 line was assessed by microscopic observation throughout the cell cultures. 2.3. Measurement of anti-HIV activity in primary cultures of macrophages derived from monocytes
- the anti-HIV activity of AZT and PMPA, as reference molecules, as well as the 4 compounds selected during the antiviral screening against VI H-1 -LAI was tested against macrophages derived from monocytes ( MDM) experimentally infected with 4 macrophage tropism strains (HIV-1 / Ba-L, HIV-1-ADA, HIV-1-DAS and HIV-1-SF162 (Gartner et al., 1986, Huang et al. 1993, Boussin et al., 1987; Cheng-Mayer C et al., 1988)).
- the monocytes are separated from the other cellular elements by magnetic sorting by means of CD14 + beads (Miltenyi). Then, at the rate of 250,000 cells in each well of a 48-well plate, the monocytes are left for 7 to 10 days for macrophage differentiation at + 37 ° C. under 5% CO 2 in a humid atmosphere, in RPMI 1640 glutamax culture medium.
- TM supplemented with 10% decomplemented FCS and a solution of 3 antibiotics (PSN, Rogez et al., 2003) and 2 ng / mL GM-CSF and 10 ng / ml M-CSF (Peprotech).
- TCID50 2500 TCID50 of each virus.
- these viral strains were exclusively amplified using CMSC and / or CMSP.
- Viral stocks were titrated using PHA-P activated PBMCs, and TCID50 calculated as previously described by limit dilution and using the Spearman-Karber formula (Kàrber, 1931).
- the supernatants were collected and frozen at -20 ° C to the extent of virus replication and the culture medium renewed.
- Viral replication was measured by quantifying the enzyme activity of Tl in the culture supernatants of the first 21 days, again using the kit Lenti kit RT (Cavidi).
- the effective concentrations 50, 70 and 90% were calculated as previously described and the effects of the molecules on cell viability were evaluated in parallel, throughout the cultures by microscopic observations.
- AZT and PMPA have a broad selectivity index ( ⁇ 255 ⁇ 215 and ⁇ 306 ⁇
- EC50s are about 10 to 100 times lower than those
- the other UA compounds have either efficiencies that are not reproducible from one donor to another (which is also a reflection of the lack of efficacy) between the different donors tested, such as the compounds UA2278, UA2292, UA2293 and UA2294), ie none of them. anti-HIV-1 efficacy.
- UA2331 were retained and their efficacy against viruses resistant to several antiretrovirals used clinically and vis-à-vis monocytes / macrophages infected in vitro with HIV was measured thereafter.
- the 4 compounds UA2276, UA2277, UA2330 and UA2331 retain their anti-HIV-1 efficacy in the model based on the cells of the H9 line and not the PBMCs.
- the decrease in cell viability induced by UA2330 is less on the cells of the H9 line than on the CMSP with a relative toxicity of the order of 18%. For the other compounds tested, no cellular toxicity was observed.
- the 6 selected viral strains (VI H-1 -4755-5, HIV-1-7303-3, HIV-1-52534-2, VI H-1 -56252-1, HIV-1-71361-1, and HIV -1-7324-1) replicated loudly in cells of line H9.
- NIH data (Appendix 1), all viruses except HIV-1 -71361-1 are resistant to ⁇ .
- the results are identical with only HIV-1 -71361 -1 as sou sensitive strain and, the 3 viruses the most resistant (RF ⁇ 60) are VI H-1 -52534-2, HIV-1-4755-5 and HIV-1-7303-3).
- UA compounds if we look at the EC90s of the four compounds for all resistant viruses, we see that UA2276 and UA2277 are ineffective vis-à-vis all these viruses.
- the compounds UA2330 and UA2331 are more effective with respect to some of these viruses. If we are interested in the most effective of the two vis-à-vis HIV-1-LAI but also in this area ie UA2330, this molecule is effective, although to varying degrees and not against the most resistant strains to PMPA , to 4 of the strains tested ie HIV-1 -4755-5, HIV-1 -52534-2, HIV-1 -71361-1, and HIV-1-7324-1. It should be noted that all 4 strains are highly resistant to 3TC, another nucleoside derivative of the L-series.
- UA2330 is able to be effective against viruses carrying the mutation at position 184, mainly responsible for resistance to 3TC.
- the mutation at position 65 KDR, it seems to be the same since this compound is effective against HIV-1 -71361-1, mutated only in position 65.
- UA2330 could be less effective vis-à-vis the strains.
- viral carriers carrying mutations associated with that at position 151 Q - »M ie mutations at positions 75, 77, 116 & 151). These mutations distinguish the strains HIV-1-71361-1 and HIV-1-56252-1, the second bearing these mutations "151" in addition to that at position 65 K-> R ( Figure 1).
- the 4 viruses replicate at different levels in human MDMs. At 100 nM, ⁇ inhibits completely or almost completely ie between 90 and 100% the replication of the 4 retroviral strains in MDM (Tables 4, 5, 6 & 7). At 10 nM, this activity is of the order of 50 or 80% (Tables 4, 5, 6 & 7). PMPA, another reference molecule is slightly less effective than AZT since the inhibition of viral replication is complete up to 1 or 10 ⁇ .
- the UA molecules two compounds are more effective, the compounds UA2276 & UA2330. Even if the efficacy against infected macrophages is less, we note the very special efficacy of UA2330 with respect to certain resistant viruses.
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Abstract
L'invention concerne un composé de formule général I suivante: (I), où: - R1
représente un hétérocycle comprenant au moins un atome d'azote, - X représente un atome d'hydrogène, un groupe vinyle, un groupe éthynyle, un groupe azide –N,3 un groupe -CF3, un groupe cyano –CN, un groupe méthylalcool – CH2OH, un groupe monofluorométhyle –CH2F, un groupe méthylazide −CH2N3 ou un groupe méthyle, ou un –OH, - Y représente un atome d'oxygène, et -Z1 et Z2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un groupe phosphate, un groupe pyrophosphate, ou un- groupement protecteur temporaire de la fonction phosphate ou phosphonate.
Description
Dérivés de nucléotides et leurs utilisations
La présente invention concerne des dérivés de nucléotides et leurs utilisations, notamment en tant que médicaments.
Les analogues de nucléosides et de nucléotides constituent une famille prépondérante d'agents antiviraux. Parmi les médicaments approuvés par la FDA dans le traitement du SIDA, sept sont des analogues de nucléosides, un est un analogue de nucléotide caractérisé par une liaison carbone-phosphore (phosphonate). L'ensemble de ces composés est usuellement dénommé : inhibiteurs de la transcriptase inverse nucléosidiques (nucléotidiques) [N(t)RTIs].
Leur mécanisme d'action implique leur métabolisation intracellulaire, par différentes enzymes, en leurs formes triphosphorylées pour les analogues de nucléosides ou diphosphorylées pour les analogues de nucléotides. Ces métabolites phosphorylés interagissent alors avec la prolifération virale en tant qu'inhibiteurs compétitifs et/ou substrats alternatifs de la polymérase virale (transcriptase inverse), leur incorporation conduisant à l'arrêt de la biosynthèse de l'acide nucléique viral en cours de croissance.
L'utilisation d'une polythérapie dans le traitement du SIDA a permis de réduire de façon significative la mortalité et la morbidité des patients infectés par le VIH. Les traitements initiaux recommandés incluent au moins deux médicaments connus pour appartenir à la classe des inhibiteurs nucléosidiques de transcriptase inverse. Cependant, la plupart des composés utilisés dans le traitement du SIDA posent des problèmes de toxicité. De plus, leur utilisation thérapeutique conduit à l'émergence de souches virales résistantes
On connaît de l'état de la technique de nombreux analogues de nucléosides et de nucléotides. On peut citer notamment la demande US2007/0225249 qui divulgue des composés R-2'-fluoronucléosides phosphonates qui sont utilisés dans le cadre de traitement d'infections virales telles que les infections par le VIH, les virus des hépatites B et C, ou dans le cadre d'une prolifération anormale des cellules.
. Toutefois, au vu des résistances développées par les différents virus, il existe encore une nécessité de fournir de nouveaux composés antirétroviraux.
L'invention se propose de pallier ces inconvénients. On recherche une efficacité accrue du traitement permettant d'améliorer la longévité et la qualité de vie des patients.
L'un des buts de l'invention est de proposer de nouveaux composés qui sont efficaces pour traiter des infections virales, et dont l'efficacité est améliorée, en limitant les effets secondaires.
Aussi, l'invention concerne un composé de formule I suivante :
ou une pro-drogue de celui-ci,
où C* représente un carbone asymétrique, et
où indépendamment les uns des autres :
- Ri représente une purine ou une pyrimidine, ou plus généralement un hétérocycle azoté,
- Y représente un atome d'oxygène,
- X représente un atome d'hydrogène, un groupe vinyle, un groupe éthynyle, un groupe -CF3, un groupe -CH2OH, un groupe monofluorométhyle -CH2F, un groupe méthylazide -CH2N3 , un groupe méthyle, et
- Z-i et Z2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un groupe phosphate, un groupe pyrophosphate, ou un groupement protecteur temporaire de la fonction phosphate ou phosphonate (par exemple POM, POC ou SATE).
L'invention repose sur la constatation surprenante faite par les inventeurs que des dérivés de nucléotides, des 3' fluoronucléotides, sont efficaces pour le traitement des infections virales.
Les composés de l'invention sont des analogues de nucléotides, ou encore dénommés analogues phosphonylés. Ils se caractérisent notamment par la présence d'une liaison carbone-phosphore (phosphonate). Cette liaison confère une stabilité chimique et enzymatique vis-vis d'hydrolases cellulaires. Les composés de l'invention présentent une activité sur un large spectre de virus. Le mode d'action de ces composés implique une métabolisation intracellulaire en leurs formes diphosphorylées. Ces métabolites interfèrent alors avec la prolifération du virus en jouant un rôle d'inhibiteurs compétitifs et/ou de substrats alternatifs de la polymèrase virale. Leur incorporation se traduit par un arrêt de la chaîne d'acide nucléique en cours d'élongation (effet terminateur de chaîne).
La nature anionique d'analogues phosphonylés à pH physiologique peut constituer une limitation à leur utilisation thérapeutique. En conséquence, la fonction phosphonate peut être temporairement masquée par divers groupements. Ces derniers sont bien connus de l'homme de l'art. Les prodrogues qui en résultent sont susceptibles d'être hydrolysées, par des processus chimiques ou enzymatiques, pour régénérer l'analogue phosphonylé. Dans l'invention, les groupements protecteurs de la fonction phosphate
ou phosphonate considérés sont par exemple des groupements acyloxyalkyles esters comme le groupement POM (pivaloyloxyméthyle), POC (isopropyloxycarbonyloxyméthyle), SATE (S-acyl-2-thioéthyle), monoester à chaîne lipidique, phosphoroamidate monoester, phosphorobisamidate. Leur utilisation pour masquer temporairement la fonction phosphonate des analogues nucléotidiques décrits dans l'invention conduit à des prodrogues nucléotidiques (également dénommées pronucléotides).
Dans l'invention on entend par purine une molécule azotée hétérocyclique constituée d'un cycle pyrimidine fusionné à un cycle imidazole. Dans l'invention on entend par hétérocycle azoté une chaîne carbonée, cyclique, comportant un ou plusieurs atomes d'azote. Comme hétérocycle azoté, on peut citer par exemple une purine ou imidazo[4,5-d]pyrimidine, une pyrimidine ou 1 ,3-diazine. L es purines utilisées dans l'invention sont notamment l'adénine, la guanine ainsi que leurs dérivés. Les pyrimidines utilisées dans l'invention sont la cytosine, la thymine et l'uracile ainsi que leurs dérivés. En particulier, les purines utilisées dans l'invention sont l'adénine et la guanine.
Dans l'invention on entend par pyrimidine un composé azoté hétérocyclique aromatique (C4H4N2) comportant deux atomes d'azote. En particulier, les pyrimidines utilisées dans l'invention sont la cytosine, la thymine et l'uracile.
Tous les composés de l'invention peuvent être sous forme de sels, et notamment des sels pharmaceutiquement acceptables, bien connus de l'homme du métier, et notamment des sels de sodium, d'ammonium, de calcium, de magnésium, de potassium, d'acétate, de carbonate, de citrate, de chlore, de sulphate, des sels amino chlorhydate salts, de borhydrate, de dihydrogenophosphate salts, de succinate, de tartrate, de lactate, de mandelate, de méthane sulfonate (mésylate) or de p-toluène sulfonate (tosylate). Cette liste n'est pas limitative, et l'homme du métier saura choisir le sel de composé de l'invention le plus approprié à l'utilisation recherchée, selon le pH utilisé.
Il est particulièrement avantageux lorsque l'un des Z1 ou Z2 est un pyrophosphate que l'autre soit un hydrogène. Cela signifie que si Z1 est un pyrophosphate, Z2 est H et si Z2 est un pyrophosphate, Z1 est H.
Le composé de formule I comporte deux carbones asymétriques C*, les carbones 1 ' et 4' du cyclopentène, le carbone 1 ' étant celui relié au groupe R1 et le carbone 3' celui relié à l'atome de fluor.
D'une manière générale, si une molécule comporte n atomes de carbone asymétriques (C*), deux dispositions différentes des substituants sont possibles par C*. Pour n C*, elle comportera au plus 2n stéréoisomères. Ceux si comportent des
molécules images 2 à 2, qui constitueront 2n"1 couples d'énantiomères.
Avantageusement, l'invention concerne un composé susmentionné, choisi parmi - les composés de formule la suivante :
- les composés de formule Ib suivante :
où R1 , X, Y, Z- et Z2 sont tels que définis précédemment.
Dans l'invention, les composés pour lesquels l'hétérocycle azoté en position R1 et le substituant phosphonylé présentent une configuration cis en dessous par rapport au plan moyen formé par le cyclopentène sont avantageux car ils sont structurellement apparentés mais différent des dérivés de nucléotides et de nucléosides, naturels et synthétiques, connus de l'état de la technique.
Dans l'invention, les composés la ou Ib peuvent être séparés, purifiés et utilisés indifféremment. Les composés la sont très avantageux car ils sont structurellement proches mais différent des dérivés de nucléotides et de nucléosides connus de l'état de la technique, et des nucléotides naturels. Aussi, pourront-ils être utilisés par la machinerie cellulaire lors de la réplication de l'ADN ou la transcription (synthèse d'ARN), ou encore la transcription inverse (synthèse d'ADN à partir d'ARN).
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un composé susmentionné, ledit composé étant choisi par les composés suivants :
où R1 , Zi et Z2 sont tels que définis ci-dessus.
De manière avantageuse l'invention concerne un composé choisi parmi les suivants :
Dans un autre mode de réalisation avantageux, l'invention concerne un composé tel que défini précédemment, ledit composé étant choisi parmi les composés suivants :
ou un sel de ceux-ci,
où Zi et Z2 sont tels que définis ci-dessus.
Dans encore un autre mode de réalisation, l'invention concerne un composé susmentionné, ledit composé étant choisi parmi les composés suivants, ou un sel tel que défini ci-dessus de ceux-ci :
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci,
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
- le composé
ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
, ou les formes mono, di, tri ou tétrasodique de celui-ci,
- le composé N , ou les formes mono ou disodique de celui-ci, ou
- le composé
L'invention concerne en outre un racémate comprenant, essentiellement constitué ou constitu 'un mélan e des com osés de formule la et Ib suivantes
ou d'un sel de ceux-ci,
ou une prodrogue de ceux-ci
où indépendamment les uns des autres :
- R1 représente une purine ou une pyrimidine,
- Y représente un atome d'oxygène,
- X représente un atome d'hydrogène, un groupe vinyle, un groupe éthynyle, un groupe -CF3, un groupe méthylalcool -CH2OH, un groupe monofluoromethyle -CH2F, un groupe methylazide— CH2N3 ou un groupe méthyle, ou un -OH, de sorte que si X=- OH, Y est un -CH2- et
- Z-i et Z2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un groupe phosphate, un groupe pyrophosphate, ou un groupement protecteur temporaire de la fonction phosphate ou phosphonate, commme le groupement POM (pivaloyloxyméthyle), POC (isopropyloxycarbonyloxyméthyle), SATE (S-acyl-2- thioéthyle), monoester à chaîne lipidique, phosphoroamidate monoester, phosphorobisamidate.
Il est précisé que sans autre carbone asymétrique présent dans l'hétérocycle R1 et/ou le substituant X, le mélange des stéréoisomères la et Ib est un racémate. Il est rappelé dans l'invention qu'un racémique ou racémate est un mélange en proportions égales d'énantiomères. Les mélanges de l'invention sont constitués d'un mélange
équimolaire des stéréoisomères de formule la et Ib ci-dessus représentées
Avantageusement, le racémate susmentionné est choisi les racémates suivants - un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique,
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique,
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique, et
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique.
La liste des racémates couverts par l'invention est la suivante :
un composé tel que défini ci-dessus, ou au moins un racémate tel que défini ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans l'invention, un « véhicule pharmaceutiquement acceptable » est un matériel ou un composé non toxique qui est compatible avec un système biologique tel qu'une cellule, une culture cellulaire, un tissu ou un organisme en entier.
Une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon l'invention et/ou au moins un racémate selon l'invention se présente indifféremment sous une forme solide (particules sèches) ou sous une forme liquide. Sous la forme liquide, on préférera une composition pharmaceutique sous la forme d'une suspension aqueuse ou d'une suspension non aqueuse, ou encore sous la forme d'une émulsion eau-dans-huile ou huile-dans-eau.
Parmi les compositions pharmaceutiques selon l'invention, on pourra citer plus particulièrement celles qui conviennent pour l'administration orale, topique, parentérale, nasale, intraveineuse, percutanée (transcutanée), sous-cutanée, rectale, perlinguale ou respiratoire et notamment les comprimés simples ou dragéifiés, les comprimés sublinguaux, les gélules, les tablettes, les suppositoires, les crèmes, les pommades, les gels dermiques, et les ampoules buvables ou injectables.
La posologie varie selon le sexe, l'âge et le poids du patient, selon la voie d'administration, et selon le type d'infection virale, l'état de progression de l'infection et les symptômes développés par le patient. La posologie peut également varier selon le type du ou des traitement(s) antiviral associé(s).
De manière générale, on utilise la composition telle que définie dans la présente invention dans laquelle ledit au moins un composé et/ou au moins un racémate est dans des quantités allant de préférence de 0,001 mg/kg de poids corporel du patient ou d'un animal, à 1 g/kg de poids corporel du patient ou de l'animal par 24 heures, en une ou plusieurs prises. De préférence, ladite quantité est au moins égale à 0,01 mg/kg, mieux 0,05 mg/kg. De préférence, ladite quantité est au plus égale à 500 mg/kg, mieux 100 mg/kg. Pour une administration par voie orale, une composition pharmaceutique selon l'invention peut de présenter sous la forme de comprimés, de gélules, de capsules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granulés, d'émulsions, de suspensions de microsphères ou de nanosphères, de suspensions de vésicules lipidiques ou de vésicules à base de divers polymères.
Pour une administration orale, une composition pharmaceutique selon l'invention peut se présenter sous la forme de comprimés qui peuvent être fabriqués à partir de compositions solides comprenant au moins un composé selon l'invention, et/ou un racémate selon l'invention, en combinaison avec divers excipients tels que la cellulose microcristalline, le citrate de sodium, le carbonate de calcium, le phosphate dicalcique, ou la glycine. On peut utiliser divers agents désintégrants tels que l'amidon (de maïs, de pommes de terre, de tapioca, etc.), de l'acide alginique ou encore un silicate. On
peut utiliser des agents liants tels que la polyvinylpyrrolidone, le saccharose, la gélatine, ou encore l'acacia. On peut utiliser des agents lubrifiants tels que le stéarate de magnésium, le lauryl sulfate de sodium, ou encore le talc. De telles compositions solides, sous forme d'une poudre, peuvent être utilisées pour la fabrication de capsules de gélatine. Pour des compositions solides, on peut aussi utiliser du lactose ou encore un polyéthylène glycol de haut poids moléculaire.
Pour fabriquer des compositions liquides pour administration orale, un composé selon l'invention, et/ou un racémate selon l'invention, peut être combiné avec divers agents édulcorants, agents d'arôme, agents colorants, éventuellement avec également des agents émulsifiants ou des agents de suspension, en combinaison avec des agents diluants tels que l'eau, l'éthanol, un propylène glycol, de la glycérine ou toute combinaison de ces agents excipients.
Pour une administration par voie parentérale, une composition pharmaceutique selon l'invention peut se présenter sous la forme de solutions ou de suspensions pour perfusion ou injection.
Pour une administration par voie parentérale, on peut utiliser en particulier des solutions huileuses ou aqueuses ou encore des suspensions, des émulsions, ou des implants y compris des suppositoires. Par exemple, un composé selon l'invention, et/ou un racémate selon l'invention, peut être dispersé dans un véhicule liquide tel qu'un liquide salin physiologique ou encore une solution saline contenant 5% en poids de dextrose, qui sont classiquement utilisées pour la préparation de formulations pharmaceutiques injectables.
Pour une administration par voie entérale, on peut utiliser des compositions à libération contrôlée, par exemple des compositions dans lesquelles un composé selon l'invention, et/ou un racémate selon l'invention, est protégé du milieu extérieur par une pluralité de couches de revêtement qui se dégradent de manière différente, par exemple au contact d'un milieu neutre ou basique (couches de revêtement gastrorésistantes) ou au contact d'un milieu aqueux (couches de revêtement comprenant des polymères solubles ou qui se dégradent dans l'eau). La composition pharmaceutique de la présente invention peut être utilisée pour une administration parentérale, topique ou locale et de manière prophylactique et/ou thérapeutique. Ainsi ledit au moins un composé selon l'invention, et/ou au moins un racémate selon l'invention, est préparé sous une forme adaptée au type d'administration choisi, par exemple sous forme liquide ou sous forme lyophilisée.
Les compositions pharmaceutiques comprenant un composé un composé selon l'invention, et/ou un racémate selon l'invention, peuvent contenir un excipient et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable, liquide ou solide, par exemple aqueux. De
nombreux excipients et/ou véhicules pharmaceutiquement acceptables peuvent être utilisés, par exemple des solvants ou diluants ; l'eau, le cas échéant en mélange avec du propylène glycol ou du polyéthylène glycol, l'eau tamponnée, une solution saline, une solution de glycine et ses dérivés, une solution non aqueuse comprenant notamment des solvants tels que l'éthanol, la N-méthylpyrrolidone, le diméthylacétamide (DMA), le diméthylsulfoxyde (DMSO) et/ou le diméthyl formamide (DMF), ainsi que des agents nécessaires pour reproduire les conditions physiologiques comme par exemple des agents tampons et ajusteurs de pH, des surfactants comme le Solutol® HS15, le Tween® 80, l'acétate de sodium, le lactate de sodium, le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le chlorure de calcium, ou un véhicule tel que le Cremophor EL®, cette liste n'étant pas limitative. De plus, la composition pharmaceutique peut être stérilisée par des techniques de stérilisation bien connues de l'homme du métier. On préfère utiliser au moins un solvant organique et au moins un surfactant pour solubiliser ledit au moins un composé selon l'invention, et/ou au moins un racémate selon l'invention, de préférence un mélange d'éthanol, de diméthylacétamide et d'au moins un surfactant.
En tant que véhicules, adjuvants ou excipients inertes, non toxiques, pharmaceutiquement acceptables, on peut aussi citer à titre indicatif et non limitatif les agents solubilisants autres que les solvants, les conservateurs, les agents mouillants, les émulsifiants, les agents dispersants, les liants, les agents gonflants, les agents désintégrants, les agents d'encapsulation, les retardants, les lubrifiants, les absorbants, les agents de suspension, les colorants, les arômes, les stabilisants, les agents épaississants etc. De tels composés sont par exemple le carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le talc, le lactose, la pectine, la dextrine, l'amidon, la gélatine, des matériaux cellulosiques, du beurre de cacao, etc.
De manière générale, une composition pharmaceutique selon l'invention comprend de 0,01 % à 99% en poids, et avantageusement de 1 % à 90% en poids, d'au moins un composé selon l'invention, et/ou au moins un racémate selon l'invention, par rapport au poids total de ladite composition. La dose de composé selon l'invention, et/ou de racémate selon l'invention, administrée quotidiennement varie généralement de 0,5 à 50 mg/kg, de préférence de 1 à 20 mg/kg. De manière générale, une composition pharmaceutique selon l'invention comprend de 1 % à 99,99% en poids, et avantageusement de 10% à 99% en poids, d'un excipient et/ou véhicule (ou diluant) ou d'une combinaison d'excipients et/ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues.
On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières premières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une composition pharmaceutique sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, acalorique de préférence, du méthylparaben et du propylparaben comme antiseptiques, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants ou des agents de mise en suspension, comme la polyvinyipyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants ou des correcteurs de goût.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs.
De manière générale, pour fabriquer une composition pharmaceutique conforme à l'invention, l'homme du métier peut avantageusement se référer à l'édition de la Pharmacopée Européenne, par exemple à la 5eme édition de la Pharmacopée Européenne publiée en janvier 2005, ou bien encore à la 6è édition de la Pharmacopée Européenne, disponible au public en juin 2007.
Des techniques de préparation de compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être aisément retrouvées par l'homme du métier, par exemple dans l'ouvrage Remmingston's Pharmaceutical Sciences, Mid. Publishing Co, Easton, PA, USA.
Des véhicules et des excipients (ou adjuvants) physiologiquement acceptables sont aussi décrits dans l'ouvrage intitulé "Handbook of Pharmaceutical Excipients," Seconde édition, American Pharmaceutical Association, 1994.
Pour formuler une composition pharmaceutique selon l'invention, l'homme du métier pourra avantageusement se référer à la dernière édition de la Pharmacopée Européenne ou de la Pharmacopée des Etats-Unis d'Amérique (U.S. Pharmacopeia, notamment l'édition USP 30- NF 25).
Avantageusement, une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus est adaptée pour une administration orale, parentérale ou intraveineuse.
Lorsque la composition pharmaceutique selon l'invention comprend au moins un excipient pharmaceutiquement ou physiologiquement acceptable, il s'agit en particulier d'un excipient approprié pour une administration de la composition par voie orale ou d'un excipient approprié pour une administration de la composition par voie parentérale.
L'invention concerne en outre une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus, et/ou au moins un racémate tel que défini ci- dessus, pour son utilisation en tant que médicament.
L'invention concerne par ailleurs une composition comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus, et/ou au moins un racémate tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le cadre du traitement d'infections virales, notamment des infections rétrovirales, notamment pour le traitement et/ou la prévention d'une infection par le virus de l'immunodéficience humaine.
On peut ainsi concevoir une méthode du traitement et/ou de prévention d'infections virales, notamment d'infections rétrovirales, en particulier d'infection par le VI H, ladite méthode comprenant l'administration, à un individu dans le besoin, d'une dose efficace de composition comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus et/ou d'au moins un racémate tel que défini ci-dessus.
Aussi, on parlera de l'utilisation d'une composition comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus et/ou d'au moins un racémate tel que défini ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention d'infections virales, notamment d'infections rétrovirales, en particulier d'infection par le VIH.
Par infection rétrovirale on entend dans l'invention l'infection par des rétrovirus exogènes, virus capables d'induire des cancers ou des maladies associées à un déficit immunitaire, ou encore une « réactivation » d'un rétrovirus endogène, cette réactivation pouvant induire des pathologies telles que des cancers, des maladies autoimmunes comme le psoriasis, ou des déficits du système immunitaire. Les infections virales couvertes par l'invention concerne notamment, chez l'homme :
- Les infections liées aux virus de l'hépatite, notamment les virus de l'hépatite B (HBV) ou de l'hépatite C (HCV),
- Les infections liées aux virus HTLV-1 ou 2, qui induisent une leucémie ou un lymphome des cellules T,
- Les infections liées aux virus de l'herpès 1 et 2,
- Les infections liées aux virus de la famille des Coronaviridae, dont les Coronavirus, notamment le SARS-CoV responsable du SRAS,
- Les infections liées aux virus de la famille des Flaviviridae, dont le virus de la fièvre jaune, le virus du Nil occidental, et le virus de la dengue,
- Les infections liées aux virus de la famille des Picornaviridae, dont les poliovirus et les rhinovirus,
- Les infections liées aux virus de la famille des Togaviridae, dont le virus de la rubéole, le virus de la Ross River, le virus de Sindbis et le virus du Chikungunya, et
- Les infections liées au virus VIH-1 ou VIH-2, ou ses homologues chez le singe et le chat (SIV et FIV respectivement).
Aussi, dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle ladite infection virale est une infection par les virus de l'hépatite B (HBV) ou de l'hépatite C (HCV), les virus HTLV-1 ou 2, les virus de l'herpès 1 et 2, les virus de la famille des Coronaviridae, dont les Coronavirus, notamment le SARS-CoV responsable du SRAS, les virus de la famille des Flaviviridae, dont le virus de la fièvre jaune, le virus du Nil occidental, et le virus de la dengue, les virus de la famille des Picornaviridae, dont les poliovirus et les rhinovirus et les virus de la famille des Togaviridae, dont le virus de la rubéole, le virus de la Ross River, le virus de Sindbis et le virus du Chikungunya
Avantageusement, les infections virales sont celles liées aux virus VI H, Herpès, Dengue, Chikungunya. HBV, HCV et HTLV, ainsi que chacun des sous-groupes et isotypes desdits virus susmentionnés.
Bien entendu, l'invention n'est pas limitée au traitement des infections virales chez l'homme mais aussi chez les animaux, et notamment chez les mammifères.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention concerne uniquement une composition comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus, et/ou au moins un racémate tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le cadre du traitement et/ou la prévention d'une infection par le virus de l'immunodéficience humaine, 1 ou 2. Dans un autre mode de réalisation avantageux, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé tel que défini ci-dessus, et/ou au moins un racémate tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le cadre du traitement et/ou la prévention d'une infection virale chez un mammifère, notamment l'homme, le singe, le chat ou le chien, ladite infection virale n'étant pas une infection par le virus de l'immunodéficience humaine, 1 ou 2 .
Avantageusement, l'invention concerne une composition susmentionnée pour son utilisation susmentionnée, en association avec au moins un composé antirétroviral. Dans le cas d'une infection rétrovirale, notamment par le VIH, qu'il s'agisse du VIH1 ou VIH2, il est possible d'associer la combinaison selon l'invention avec l'un au moins des anti rétroviraux suivants :
- un Inhibiteur nucléos(t)idique (INTI), tel que la zidovudine (Retrovir, ZDV), molécule également connue sous le nom AZT, la lamivudine (Epivir, 3TC), l'emtricitabine (Emtriva, FTC), la didanosine (Videx, ddl), la stavudine (Zerit, d4T), l'abacavir (Ziagen, ABC), la zalcitabine (Hivid, ddC), le tenofovir (TFV), le racivir, l'amdoxovir, l'apricitabine ou l'elvucitabine,
- un Inhibiteur non nucléosidique (INNTI), tel que l'efavirenz (Sustiva, EFV),
également connue sous le nom Stocrin, la nevirapine (Viramune, NVP), l'étravirine (Intelence), la delavirdine (Rescriptor, DLV) ou la rilpivirine (Edurant, TMC-278)
- un analogue nucléotidique, tel que la fosalvudine,
- un inhibiteur de la protéase, tel que l'amprenavir (Agenerase, APV), le tipranavir (Aptivus, TPV), l'indinavir (Crixivan, IDV), le saquinavir (Invirase, SQV), le fosamprenavir (Telzir, FPV), également connue sous le nom Lexiva, le ritonavir (Norvir, RTV), le darunavir (Prezista, DRV), l'atazanavir (Reyataz, ATZ), le nelfinavir (Viracept, NFV) ou le Kaletra (lopinavir + ritonavir, LPV/r), association également connue sous le nom Aluvia,
- un inhibiteur de l'intégrase, tel que le raltégravir (Isentress, RGV), l'elvitégravir (EVG/r) ou le dolutégravir (DTG),
- un Inhibiteur de la fusion, tel que l'enfuvirtide (Fuzeon, ENF), également connue sous le nom T-20,
- un inhibiteur d'entrée de type antagoniste de CCR5, tel que le maraviroc (Celsentri), également connue sous le nom Selzentry, le vicriviroc ou le TNX-355 ou de type inhibiteur d'attachement, tel que le BMS-626529,
- un inhibiteur de maturation, tel que le BMS-955176 ou le GSK2838232
De manière avantageuse, la composition susmentionnée et ledit au moins un agent antirétroviral susmentionnés peuvent être administrés simultanément, de manière séparée ou étalée dans le temps.
Dans un autre aspect, l'invention concerne un composé de formule 5, 6, 7, 8 ou 9, comme décrit dans le schéma 1 ci-après. Ces composés sont des intermédiaires de synthèse des composés de formule I de l'invention.
L'invention concerne donc en outre l'utilisation des composés de formule 5, 6, 7, 8 ou 9, comme décrit dans le schéma 1 ci-après, pour la préparation d'un composé tel que défini ci-dessus.
L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples et des trois figures suivantes
Légende des figures :
La figure 1 représente des courbes montrant la quantité de β-galactosidase (en %) en fonction de la quantité de composé (en μΜ). Le nom des composés est indiqué à côté de chaque courbe.
La figure 2 représente des courbes montrant la viabilité cellulaire (en %) en fonction de la quantité de produit (en μΜ). Les différentes courbes sont quasiment inséparables quel que soit la concentration de composé utilisée.
La figure 3 représente des courbes montrant la quantité de β-galactosidase (en %) en fonction de la quantité de composé (en μΜ). Le nom des composés est indiqué à côté de chaque courbe.
La figure 4 représente des résultats sur la résistance multidroque de transcriptases inverses de HIV-1. Ces données sont issues de test sur 12 clones de transcriptases inverses résistantes.
Exemples
Dans tous les exemples qui suivent, on entend par « température ambiante » une température de laboratoire qui varie de 17°C à 25°C voire allant jusqu'à 30°C.
Exemple 1 : Synthèse d'un composé selon l'invention, où R1 est une adénine La synthèse est décrite dans les schémas réactionnels 1 à 3 ci-après. Le composé (±)-1 est synthétisé comme décrit dans Tetrahedron, 1997, 53, 1983-2004 et le composé (±)-2 comme décrit dans Org. Lett., 2012, 14; 1644-1647.
1 - Synthèse du (±)-7erf-butvir(-4-{rterf-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-iodo-2-cvclopenten- l -vDoxyldimethylsilane (3)
A une solution agitée de composé (±)-2 (4,01 g, 11 ,8 mmol) et d'imidazole dans du DMF anhydre (43 mL) à 0°C sous une atmosphère d'argon, a été ajouté par portions du ferf-butyldiphenylchlorosilane (TBDPSCI, 4,52 mL, 17,7 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 48 heures et versé dans une solution aqueuse saturée en NH4CI (50 mL) et en DCM (50 mL), à 0°C. La phase aqueuse a été extraite avec du DCM et les extraits organiques combinés ont été lavés au NaHC03, de l'eau et de la saumure, puis séchés, filtrés et concentrés sous pression réduite. La purification avec une colonne de chromatographie avec un gradient progressif de d'éther de pétrole/acétate d'éthyle (99/1 ) conduit au composé (±)-3 (6.745 g, 11 ,6 mmol, 98%) sous la forme d'une huile colorée.
Composé (±)-3 : rapport frontal (Rf)= 0.74 (20% d'acétate d'éthyle dans de l'éther de pétrole).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz): δ 7,80-7,70 (m, 4H, ArH), 7,44-7,35 (m, 6H, ArH), 6,20 (t, J = 1 ,7 Hz, 1 H, H2), 4,49 (t, J = 6,6 Hz, 1 H, H4), 4,40-4,36 (m, 1 H, H1 ), 2, 18 (dt, J = 12,7, 7,0 Hz, 1 H, H5a), 1 ,64 (dt, J = 12,7, 6, 1 Hz, 1 H, H5b), 1 , 12 (s, 9H, f-Bu), 0,85 (s, 9H, f-Bu), -0,01 (s, 3H, CH3), -0,02 (s, 3H, CH3).
RMN 13C (CDCI3, 75 MHz): δ 144,3 (C3), 136,5 (2xCAr), 136,2 (2xCAr), 134,2 (Cq), 133,3 (Cq), 129,8 (CAr), 129,8 (CAr), 127,6 (4xCAr), 105,8 (C2), 79,2 (C1 ), 75,5 (C4), 44,4 (C5), 27,2 (3xCH3), 25,9 (3xCH3), 19,5 (Cq), 18,2 (Cq), -4,6 (CH3), -4,6 (CH3). Spectrométrie de masse (MS) (ESI>0): m/z = 579.2 [M+H]+.
2- Synthèse du (±)-7e/t-butyir(-4-{[te/Î-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2- cyclopenten-1-yl)oxy]dimethylsilane 4
A une solution agitée de composé (±)-3 (5,05 g, 8,7 mmol) et de N- fluorobenzenesulfonimide (NFSI, 4.40 g, 13.9 mmol) dans du THF anhydre (60 mL) à -
78°C sous atmosphère d'argon, a été ajouté goutte à goutte du n-BuLi (2.5 M dans de l'héxane, 14 ml_, 35,0 mmol).
Après agitation à -78°C pendant 2 heures, une solution aqueuse saturée en NH4CI saturé (90 ml_) a été ajouté et le mélange a été laissé revenir à température ambiante. La phase aqueuse a été extraite au DCM et les extraits organiques combinés ont été séchés (MgS04), filtrés et concentrés. Ce composé est utilisé pour les étapes suivantes sans purification supplémentaire, mais une partie du résidu a été purifiée sur une chromatographie avec gel de silice avec un gradient progressif de DCM (10-15%) dans de l'éther de pétrole.
Composé (±)-4 : Rf= 0,53 (30% DCM dans de l'éther de pétrole).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz): δ 7,74-7,69 (m, 4H, ArH), 7,46-7,33 (m, 6H, ArH), 5,20 (d, J = 1 ,4 Hz, 1 H, H2), 4,52-4,42 (m, 2H, H1 +H4), 2,50-2,41 (m, 1 H, H5a), 1 ,79-1 ,71 (m, 1 H, H5b), 1 ,09 (s, 9H, f-Bu), 0,90 (s, 9H, 3*CH3), 0,07 (s, 3H, CH3), 0,06 (s, 3H, CH3).
RMN 13C (CDCI3, 75 MHz): δ 163,5 (d, J = 287,0 Hz, C2), 136,0 (CAr), 136,0 (CAr), 135,9 (CAr), 134,0 (Cq), 133,5 (Cq), 129,8 (3*CAr), 127,7 (4*CAr), 109,2 (d, J = 6,8 Hz, H3), 70,6 (d, J = 20,3 Hz, C1 ), 68,6 (d, J = 11 ,9 Hz, C4), 43,8 (d, J = 4,9 Hz, C5), 26,9 (s, 3*CH3), 26,0 (s, 3*CH3), 19,3 (Cq), 18,2 (Cq), -4,5 (2*CH3).
19F (CDCI3, 282 MHz): 5 -126,52 (d, J = 6.7 Hz).
MS (ESI+): m/z=471 (M+H)+.
Spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) (EST): calculé pour C27H40FO2S12 [M+H]+ : 471 ,2551 ; obtenu : 471 ,2563.
3- Synthèse du (±)-4-{r7erf-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2-cvclopenten-1 -ol 5 A une solution agitée de composé (±)-4 (2,86 g, 6,1 mmol) dans du méthanol (80 mL) à 0°C a été ajouté de l'acide para-toluenesulfonique (p-TsOH, 231 mg, 1 ,2 mmol).
Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 1 heure et les solvants ont été évaporés pour le dessécher. Le résidu a été versé dans une solution de DCM et de NaHC03 saturé à 0°C. Après décantation, les phases organiques ont été combinées, séchées (MgS04) et concentrées in vacuo. La purification sur colonne chromatographique avec un gradient progressif de d'acétate d'éthyle (10-20%) dans de l'éther de pétrole donne le composé (±)-5 (1.5 g, 48% en deux étapes) sous forme d'une huile colorée.
Composé (±)-5 : Rf= 0,29 (20 % d'acétate d'éthyl dans de l'éther de pétrole).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz): δ 7,72-7,67 (m, 4H, ArH), 7,47-7,36 (m, 6H, ArH), 5,31 (d, J = 2,4 Hz, 1 H, H2), 4,54-4,50 (m, 1 H, H4), 4,46-4,40 (m, 1 H, H1 ), 2,51 (dt, J = 14,3, 7,3 Hz, 1 H, H5a), 1 ,72-1 ,64 (m, 1 H, H5b), 1 ,09 (s, 9H, f-Bu).
RMN 13C (CDCI3, 75 MHz): δ 164,8 (d, J = 288,7 Hz, C3), 136,0 (CAr), 135,9
(2xCAr), 133,7 (Cq), 133,2 (Cq), 130,0 (CAr), 129,9 (CAr), 127,8 (2xCAr), 127,7 (2xCAr), 109,0 (d, J = 7,2 Hz, C2), 70,9 (d, 7H, J = 20,8 Hz, C4), 69, 1 (d, J = 10,9 Hz, C1 ), 43,3 (d, J = 5,0 Hz, C5), 26,9 (3xCH3), 19,2 (Cq).
19F (CDCI3, 282 MHz): δ -124,76 (dt, J = 6,6, 1 ,9 Hz).
MS (ESI+): m/z=355 (M-H)\
HRMS (ESI+): calculé pour C2iH24F02Si [M-H]": 355,1530; obtenu: 355, 1549.
4- Synthèse des (+H1 R,4S)-4-frTert-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2-cvclopenten- 1 -yl (2RV(acetyloxy')(phenvnethanoate 7 et (-H1 S.4RV4-fM~ert- butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2-cvclopenten-1-yl (2R)- (acetyloxy)(phenyl)ethanoate 6
A un mélange racémique de 5 (710 mg, 2,0 mmol) dans du DCM anhydre (8 ml_) a température ambiante a été ajouté du Λ/,Λ/'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC, 619 mg, 3,0 mmol) et de la 4-dimethylaminopyridine (DMAP, 24 mg, 0,2 mmol) sous atmosphère d'argon. De l'acide (R)-O-acetylmandelique (585 mg, 3.0 mmol) a été ajouté et le mélangé a été agité à température ambiante pendant 2 heures. Le précipité a été filtré au travers d'une ouate de Célite, le tourteau de filtration a été lavé avec du DCM et le solvant a été concentré in vacuo. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de DCM (20-100%) dans de l'éther de pétrole a donné les composés (+)-7 (465 mg, 44%) et (-)-6 (423 mg, 40%) sous la forme d'une huile colorée.
Composé (-)-6 : Rf= 0,47 (CH2CI2).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz): δ 7,67-7,58 (m, 4H, ArH), 7,46-7,32 (m, 11 H, ArH), 5,90 (s, 1 H, H2), 5,36-5,32 (m, 2H, H1 ' and H2'), 4,47 (ddd, J = 5,2, 3,4, 1 ,2 Hz, 1 H, H4'), 2,44 (dt, J = 14,6, 7,5 Hz, 1 H, H5'a), 2,20 (s, 3H, CH3CO), 1 ,04 (s, 9H, C(CH3)3), H5'b signal sous le pic H20.
MS (ESI+): m/z=555,2 (M+Na)+.
HRMS (ESI+): calculé pour C3iH3305FNaSi [M+Na]+ 555,1979; trouvé: 555, 1977. [a]D = -102,3 (c = 0,55, CHCI3). Composé (+)-7: Rf= 0,51 (CH2CI2).
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 7,68-7,65 (m, 4H, ArH), 7,50-7,37 (m, 11 H, ArH), 5,91 (s, 1 H, H2), 5,36-5,31 (m, 1 H, M '), 5, 16 (d, J = 2,4 Hz, 1 H, H2'), 4,51 (dd, J = 6,8, 3,5 Hz, 1 H, H4'), 2,55 (dt, J = 14,6, 7,4 Hz, 1 H, H5'a), 2,21 (s, 3H, CH3CO), 1 ,85 (br d, J = 13,4 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,09 (s, 9H, f-Bu).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz): δ 170,5 (CO), 168,7 (CO), 166,3 (d, J = 289,7 Hz, C3'), 136,0 (CAT), 136,0 (CAr), 133,7 (Cq), 133,6 (Cq), 133,2 (Cq), 130, 1 (CAr), 130,0 (CAr), 129,4 (CAT), 129,0 (CAr), 127,9 (CAr), 127,8 (CAr), 127,7 (CAr), 105,0 (d, J = 11 ,7 Hz, C2'),
74,7 (C2), 72,9 (d, J = 12,4 Hz, C1 '), 70,5 (d, J = 20,5 Hz, C4'), 39,2 (d, J = 5,2 Hz, C5'), 26,9 (3xCH3), 20,9 (CH3), 19,3 (Cq).
19F NMR (CDCI3, 376.5 MHz): δ -121 ,06.
MS (ESI+): m/z=555.2 (M+Na)+.
HRMS (ESI+): calculé pour C3iH3305FNaSi [M+Na]+ 555,1979; trouvé: 555, 1976. [a]D = +34,5 (c = 0,55, CHCI3).
Les composés (-)-6 et (+)-7 ayant des Rf différents, il est possible de les séparer facilement, éventuellement en réalisant des chromatographies sur gel de silice successives.
5- Synthèse du composé (+)-(1 R,4S)-4-{rTert-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2- cvclopenten-1-ol 9
A une solution agitée de composé (+)-7 (2,48 g, 4,6 mmol) dans du THF (50 mL) et de l'eau (50 mL) a été ajouté de l'hydroxyde de lithium (LiOH, 976 mg, 23,0 mmol). Le mélange a été agité à température ambiante pendant 4 heures, puis une solution aqueuse saturée de NH4CI (50 mL) a été ajoutée et les phases séparées. La phase aqueuse a été extraite avec du DCM (4 x 50 mL) et les fractions organiques ont été lavées avec de la saumure, séchées (MgS04), filtrées et concentrées pour donner un produit brut (1.64 g) qui a été utilisé pour l'étape suivante sans autre purification. Une partie du résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif d'acétate d'éthyle (10-20%) dans de l'éther de pétrole.
Composé 9 : Rf= 0.29 (PE/EtOAc 8:2).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz): δ 7,72-7,67 (m, 4H, ArH), 7,47-7,36 (m, 6H, ArH), 5,31 (d, J = 2,4 Hz, 1 H, H2), 4,54-4,50 (m, 1 H, H4), 4,46-4,40 (m, 1 H, H1 ), 2,51 (dt, J = 14,3, 7,3 Hz, 1 H, H5a), 1 ,72-1 ,64 (m, 1 H, H5b), 1 ,09 (s, 9H, f-Bu).
RMN 13C (CDCI3, 75 MHz): δ 164,8 (d, J = 288,7 Hz, C3), 136,0 (CAr), 135,9 (2*CAr), 133,7 (Cq), 133,2 (Cq), 130,0 (CAr), 129,9 (CAr), 127,8 (2xCAr), 127,7 (2xCAr), 109,0 (d, J = 7,2 Hz, C2), 70,9 (d, 7H, J = 20,8 Hz, C4), 69, 1 (d, J = 10,9 Hz, C1 ), 43,3 (d, J = 5,0 Hz, C5), 26,9 (3*CH3), 19,2 (Cq).
19F (CDCI3, 282 MHz): 5 -124,76 (dt, J = 6,6, 1 ,9 Hz).
MS (ESI+): m/z=355 (M-H)\
HRMS (ESI"): calculé pour C2i H24F02Si [M-H]" 355,1530; trouvé: 355, 1549.
[a]D = +28,3 (c = 1 , 10, CHCI3).
6- Synthèse du composé (-)-(1 S,4R)-4-{[Tert-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2- cvclopenten-1-ol 8
La synthèse est la même que celle décrite à l'étape 5- ci-dessus.
[a]D = -27,3 (c = 1 ,10, CHCI3).
Les composés 8 et 9 servent de précurseurs pour la synthèse des 3'F-nucléotides énantiopurs de l'invention.
Les 6 étapes susmentionnées sont résumées dans le schéma réactionnel 1 ci-après.
TBDPSCI, imidazol DMF, 0°C-t.a.
(±)-4 (±) -3
TsOH, MeOH
0°C, t.a.
(±) -5
AcO
DCC, DMAP
CH2CI2, t.a. Ph COOH
LiOH
LiOH THF/H20, t.a.
THF/H20, t.a.
(+)-9
(-)-8
Schéma 1
Synthèse du (-)-9-((1 S,4S)-4-{rTert-butyl(diphenyl)silylloxy}-3-fluoro-2-cvclopenten-1-yl)-
6-chloro-9H-purine 10
A une solution agitée de triphenylphosphine (PPh3, 4,24 g, 16,2 mmol) et de 6- chloropurine (2,50 g, 16,2 mmol) dans du THF anhydre (110 mL) à 0°C a été ajouté goutte à goutte de l'azodicarboxylate de diisopropyl (DIAD, 3,2 mL, 16,2 mmol) sous une atmosphère d'argon. Le mélange a été agité à température ambiante pendant 1 h. Une solution de composé (+)-9 (1 ,80 g, 5, 1 mmol) dans du THF anhydre a été ajoutée et agitée à température ambiante pendant 1 h. Le précipité a été filtré au travers d'une ouate de Célite, et le tourteau de filtration a été lavé avec du Et20 (20 mL) et le filtrat a été concentré in vacuo. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de DCM/acétate d'éthyle (95/5) donne une mousse blanche de composé (-)-10 (1 ,34 g, 54%).
Composé 10: Rf= 0.30 (5% acétate d'éthyle dans du DCM).
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 8,67 (s, 1 H, H2), 7,96 (s, 1 H, H8), 7,70-7,65 (m, 4H, ArH), 7,48-7,35 (m, 6H, ArH), 5,81-5,76 (m, 1 H, M '), 5,39 (d, 1 H, J = 2,3 Hz, H2'), 5,11 (br d, J = 2,5 Hz, 1 H, H4'), 2,60 (ddd, 1 H, J = 14,4, 8,3, 3,8 Hz, H5'a), 2, 16 (ddd, 1 H, J = 14,4, 7,2, 2,6 Hz, H5'b), 1 , 10 (s, 9H, f-Bu).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz): δ 167,3 (d, J = 291 ,8, C3'), 152,0 (C2), 151 ,4 (Cq), 151 ,3 (Cq), 143, 1 (C8), 135,9 (CAr), 135,9 (CAr), 133,3 (Cq), 132,8 (Cq), 132,2 (Cq), 130,2 (CAr), 130,2 (CAr), 128,0 (CAr), 127,9 (CAr), 104, 1 (d, J = 13,3 Hz, C2'), 72,0 (d, J = 20,3 Hz, C4'), 54,5 (d, J = 12, 1 Hz, C1 '), 40,7 (d, J = 5, 1 Hz, C5'), 26,9 (3*CH3), 19,3 (Cq).
RMN 19F (CDCI3, 376,5 MHz): δ -118, 13.
UV (EtOH 95) Amax=265 nm (emax =8000).
MS (ESI+): m/z=493 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour C26H27CIFN4OS1 [M+H]+ 493, 1627; trouvé : 493, 1618. [a]D = -38,6 (c = 0,47, CHCI3).
7- Synthèse du composé (1 S,4S)-4-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro-2-cvclopenten- 1 -QI 11
Une solution de composé (-)-10 (1 ,2 g, 2,6 mmol) dans de l'amoniaque methanolique (100 mL) a été chauffé à 70°C dans un autoclave en acier inoxydable pendant 30h. Le mélange a été filtré, le solide a été lavé dans du MeOH et le filtrat a été concentré in vacuo. Le résidu a été partiellement purifié par chromatographie sur gel de slice avec un gradient progressif de MeOH (5-10%) dans du DCM. Le résidu de composé 11 a été utilisé dans l'étape suivante sans autre purification.
Composé 11 : Rf= 0, 19 (10% MeOH dans du DCM).
MS (ESI>0): m/z = 236 [M+H]+.
8- Synthèse du composé (-)-N'-{9-r(1 S,4S)-3-fluoro-4-hvdroxy-2-cvclopenten-1 -yll- 9H-purin-6-yl}-N,N-dimethylimidoformamide 12
A une solution agitée de composé 11 (216 mg, 0.9 mmol) dans du DMF anhydre sous une atmosphère d'argon a été ajouté du DMF-dimethylacetal (0.19 ml_, 1 ,34 mmol) à température ambiante. Le mélange a été chauffé à 50°C toute la nuit, puis concentré in vacuo. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de MeOH (0-10%) dans du DCM pour obtenir du composé (-)-12 (214 mg g, 90%) sous la forme d'une mousse blanche.
Composé 12 : Rf= 0.26 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1H (CDCIs, 400 MHz): δ 8,92 (s, 1 H, H2), 8,51 (s, 1 H, H8), 7,84 (s, 1 H, NCH=N), 5,78-5,73 (m, 1 H, M '), 5,41 (d, 1 H, J = 2,5 Hz, H2'), 5, 18 (br s, 1 H, H4'), 4,08 (br s„ 1 H, OH), 3,24 (s, 3H, CH3), 3, 19 (s, 3H, CH3), 2,61 (ddd, 1 H, J = 13,8, 8, 1 , 3,8 Hz, H5'a), 2,45 (ddd, 1 H, J = 14,6, 7,5, 2,9 Hz, H5'b).
RMN 13C NMR (CDCI3, 100 MHz): δ 166,8 (d, J = 289,2 Hz, C3'), 159,7 (Cq), 158,2 (C2), 152,6 (C8), 151 ,4 (Cq), 139,4 (CH=N), 126,4 (Cq), 104,8 (d, J = 12, 1 Hz, C2'), 70,3 (d, J = 2,0 Hz, C4'), 53,6 (d, J = 12, 1 Hz, C1 '), 41 ,3 (CH3), 40,2, (d, J = 5,2 Hz, C5'), 35,2 (CH3).
RMN 19F NMR (CDCI3, 376,5 MHz): 5 -121 ,97.
UV (EtOH 95) Amax=310 nm (emax =15000).
MS (ESI+): m/z=291 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour d3H16FN60 [M+H]+ 291 , 1370; obtenu 291 , 1367.
[a]D = -172,0 (c = 0,5, CHCI3).
9- Synthèse du composé (-)-N'-{9-r(1 S,4R)-3-fluoro-4-hvdroxy-2-cvclopenten-1 -yll- 9H-purin-6-yl}-N,N-dimethylimidoformamide 13
A une solution de triphenylphosphine (PPh3, 2,49 g, 9,5 mmol) et d'acide and benzoique (1 , 16 g, 9,5 mmol) dans du THF anhydre (10 mL) a été ajouté à l'aide d'une canule une solution de composé (-)-12 (553 mg, 1 ,9 mmol) dans du THF anhydre (10 mL). Le mélange réactionnel a été refroidi jusqu'à 0°C et de l'azodicarboxylate de diisopropyle (DIAD, 1 ,87 mL, 9,5 mmol) a été ajouté goutte à goutte. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 3h et les solvents ont été évaporés jusqu'à siccité. Le résidu a été dissous dans du MeOH (38 mL) et du potassium carbonate anhydre (K2C03, 524 mg, 3,8 mmol) a été ajouté. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 2h puis concentrée jusqu'à siccité. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif
de MeOH (0-10%) dans du DCM donne un composé (-)-13 (472 mg, 85%) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 13 : Rf= 0.45 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 8,94 (s, 1 H, H2), 8,47 (s, 1 H, H8), 7,88 (s, 1 H, CH=N), 7,33 (br s, 1 H, OH), 5,27-5,23 (m, 1 H, M '), 5,21 (d, 1 H, J = 2,6 Hz, H2'), 4,62 (d, J =
7.4 Hz, 1 H, H4'), 3,26 (s, 3H, CH3), 3,21 (s, 3H, CH3), 3,13-3,05 (m, 1 H, H5'a), 2,35 (dd, J = 15,6, 2,3 Hz, 1 H, H5'b).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz): δ 167,6 (d, J = 290,2 Hz, C3'), 160,2 (Cq), 158,4 (C2), 151 ,6 (C8), 150,3 (Cq), 141 ,7 (CH=N), 127,7 (Cq), 104,2 (d, J = 12,2 Hz, C2'), 70,4 (d, J = 22,2 Hz, C4'), 55,3 (d, J = 11 ,5 Hz, C1 '), 41 ,5 (CH3), 37,9 (d, J = 5,7 Hz, C5'), 35,4 (CH3).
RMN 19F (CDCI3, 376.5 MHz): 5 -123.25.
UV (EtOH 95) Amax= 312 nm (emax = 23400).
MS (ESI+): m/z=291 ,1 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour C13H16N6OF [M+H]+ 291 , 1370; obtenu: 291 , 1369.
[a]D = -236,4 (c = 0,55, CHCI3).
10- Synthèse du composé (-)-Diethyl {r(1 R,4S)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro-2- cvclopenten-1-ylloxy}methylphosphonate 14
A une solution agitée de composé (-)-13 (0.72 g, 1 .8 mmol) dans du THF anhydre (25 mL) à 0°C a été ajouté goutte à goutte du Lithium ferf-butoxide (LiOtBu, solution 2,2M dans du THF, 2,45 mL, 5,4 mmol) sous atmosphère d'argon. Après agitation pendant 1 h à 0°C, du diéthyle p-toluène sulfonyloxyméthyle phosphonate (2,31 g, 7,2 mmol) a été ajouté et le mélange a été agité pendant 3 jours à température ambiante. Quelques gouttes d'acide acétique ont été ajoutées et le mélange a été concentré in vacuo. Le produit brut a été solubilisé dans une solution d'acide acétique//H20/MeOH (9/1/1 ) (9 mL) puis agité pendant deux jours à température ambiante avant d'être concentré in vacuo. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif d'acétate de méthyle/MeOH (80/20) donne un composé (-)-13 (187 mg, 71 %) sous la forme d'une huile jaune.
Composé 13 ; Rf= 0.46 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1 H NMR (300 MHz, MeOD): δ 8,21 (s, 1 H, H2), 8, 16 (s, 1 H, H8), 5,69 (d, J =
2.5 Hz, 1 H, H3'), 5,57-5,53 (m, 1 H, H4'), 4,87 (s, 2H, NH2), 4,65 (dd, J = 7,0, 1 ,8 Hz, 1 H, M '), 4,21 -4,01 (m, 6H, 2xCH2), 3,06 (dt, J = 15,2, 7,7 Hz, 1 H, H5'a), 2,09 (dd, J = 15,0, 2,2 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,34-1 ,28 (m, 6H, 2xCH3).
RMN 13C NMR (75 MHz, MeOD): δ 166,2 (d, J = 287,2 Hz, C2'), 157,3 (Cq), 153,8 (C2), 150,2 (Cq), 140,7 (C8), 120,2 (Cq), 108,5 (d, J = 12,5 Hz, C3'), 80,7 (dd, J = 21 ,0,
13,7 Hz, C1 '), 64,3 (d, J = 167,8 Hz, OCH2P), 64,2 (d, J = 6,6 Hz, 2xÇ_H2CH3), 53,3 (d, J = 11 ,2 Hz, C4'), 37,8 (d, J = 5,3 Hz, C5'), 16,74 (d, J = 5,7 Hz, 2xCH3), 31P NMR (121 MHz, MeOD): 521 ,41 .
RMN 19F NMR (282 MHz, MeOD): δ -123,24 (d, J = 2,5 Hz).
UV (EtOH 95) Amax=262 nm (emax = 13520).
MS (ESI+): m/z=386 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H22FN504P [M+H]+ 386, 1393; trouvé 386, 1405.
[a]D = -31 ,7 (c = 0,60, CHCI3). 1 1- Synthèse du composé (-)-Disodium-{r(1 R,4S)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro- 2-cvclopenten-1-ylloxy}methylphosphonic acid 15
A une solution agitée d'ester phosphonate de composé (-)-14 (79 mg, 0.2 mmol) dans du DMF anhydre (2 mL) à 0°C sous atmosphère d'argon a été ajouté goutte à goutte du bromure de trimethylsilyle (TMSBr, 0.39 mL, 3 mmol). La solution a été agitée à température ambiante pendant 12 heures puis neutralisée avec une solution de triethylamonium hydrogen carbonate (1 M, pH 7) et concentrée par assèchement sous pression réduite. Une chromatographie sur colonne en phase inverse du résidu marron avec un mélange H20/MeOH (100/0 to 87/13) suivi par un échange d'ions sur DOWEX 50WX2 (forme Na+) et lyophilisation donne le composé donne le composé (-)-14 (32 mg, 42%) sous la forme d'un solide blanc.
Composé 14 Rf= 0, 19 (iPrOH/NH4OH/H20: 7/2/1 );
RMN 1H NMR (400 MHz, D20): δ 8, 12 (s, 1 H, H2), 8,02 (s, 1 H, H8), 5,62 (d, J = 2,5 Hz, 1 H, H3'), 5,34-5,32 (m, 1 H, H4'), 4,67 (dd, J = 7,4, 2,7 Hz, 1 H, M '), 3,74-3,65 (m, 2H, OCH2P), 3,05 (dt, J = 15,5, 7,9 Hz, 1 H, H5'a), 1 ,96 (br d, J = 14,9 Hz, 1 H, H5'b);
RMN 13C NMR (101 MHz, D20): δ 164,6 (d, J = 286,2 Hz, C2'), 155,1 (Cq), 152, 1 (C2), 148, 1 (Cq), 140,6 (C8), 118,4 (Cq), 106,8 (d, J = 13,3 Hz, C3'), 78,7 (dd, J = 20,3, 12,7 Hz, C1 '), 65,8 (d, J = 156,2 Hz, OCH2P), 52,07 (d, J = 11 ,4 Hz, C4'), 36, 1 (C5');
RMN 31 P NMR (162 MHz, D20): δ 15,03;
RMN 19F NMR (D20, 376,5 MHz): 5 -121 ,64;
UV (EtOH 95) Amax=250 nm (emax =10300);
MS (ESI+): m/z=330 (M+H)+;
HRMS (ESI+): calculé pour Cn H14FN504P [M+H]+ 330,0767 obtenu 330,0743;
[a]D = -18,9 (c = 0,53, H20). Le composé obtenu correspond à un sel de sodium du composé de formule la2A selon l'invention où Z-i et Z2 sont H. Ce produit est énantiopur.
Les 6 étapes susmentionnées sont résumées dans le schéma réactionnel 2 ci-après.
Schéma 2
Exemple 2 : Synthèse d'un composé énantiomère de celui obtenu à l'exemple
A partir du composé (-)-8 décrit dans l'exemple 1 , et en procédant à une synthèse selon les étapes 7 à 12 de l'exemple 1 , il est possible de synthétiser un sel de sodium du composé de formule lb2A selon l'invention où Z-ι et Z2 sont H. Ce produit est énantiopur.
Exemple 3 : Synthèse d'un composé selon l'invention, où R1 est une quanine
Dans le cadre de cette synthèse, les étapes 1 à 6 sont identiques à celles décrites dans l'exemple 1.
7- Synthèse du (+)-9-((1 S,4SV4-frTert-butyl(diDhenvnsilylloxy>-3-fluoro-2- cvclopenten-1-yl)-6-chloro-9H-purin-2-amine 16
A une solution agitée de 2-amino-6-chloro-9/-/-purine (553 mg, 3,3 mmol) et de PPh3 (856 mg, 3,3 mmol) et de THF anhydre (240 ml_), à 0°C sous atmosphère d'argon, a été ajouté goutte à goutte de l'azodicarboxylate de diisopropyl (DIAD, 641 μΙ_, 3,3 mmol) pendant 5 min. Après agitation, pendant 1 heure une solution de composé (+)-8 (529 mg, 1 ,5 mmol) dans du THF anhydre a été ajouté et agité à température ambiante pendant 4h. La solution a été concentrée in vacuo et le sirop résultant a été filtré au travers d'une ouate de Célite. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif d'acétate d'éthyle (20-30%) dans de l'éther de pétrole donne une mousse blanche de composé (-)-16 (396 mg, 0,8 mmol, 52%).
Composé 16: Rf= 0.18 (30% acétate d'éthyle dans de l'éther de pétrole).
Rf= 0.31 (30% d'acétate d'éthyle dans de l'éther de pétrole).
RMN 1 H (CDCI3, 400 MHz): δ 7,70-7,65 (m, 4H, ArH), 7,60 (s, 1 H, H8), 7,48-7,36 (m, 6H, ArH), 5,55-5,51 (m, 1 H, M '), 5,31 (d, 1 H, J = 2,3 Hz, H2'), 5, 11 (br s, 1 H, H4'), 4,96 (s, 2H, NH2), 2,53 (ddd, 1 H, J = 14,3, 8,3, 3,9 Hz, H5'a), 2,15 (ddd, 1 H, J = 14,3, 7,2, 2,4 Hz, H5'b), 1 ,10 (s, 9H, f-Bu).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz): δ 166,8 (d, J = 290,9 Hz, C3'), 158,9 (Cq), 153,2 (Cq), 151 ,3 (Cq), 140,3 (C8), 135,9 (2xCAr), 135,8 (2xCAr), 133,3 (Cq), 132,8 (Cq), 130, 1 (2xCAr), 127,9 (2xCAr), 127,8 (2xCAr), 125,6 (Cq), 104,2 (d, J = 12,8 Hz, C2'), 72,1 (d, J = 20,3 Hz, C4'), 53,7 (d, J = 12,0 Hz, C1 '), 40,3 (d, J = 4,9 Hz, C5'), 26,8 (3xCH3), 19,3 (Cq).
19F (CDCI3, 282 MHz): 5 -119, 19.
UV (EtOH 95) Amax=311 nm (emax =6200).
MS (ESI+): m/z=508 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour C26H28CIFN5OSi [M+H]+ 508, 1736; trouvé 508,1731.
[a]D= +7,3 (c = 0,55, CHCI3).
8- Synthèse du (-1-(1 S,4SV4-(2-Amino-6-methoxy-9H-Durin-9-vn-2-fluoro-2- cvclopenten-1-ol 17.
A une solution agitée de composé (+)-16 (96 mg, 0,2 mmol) dans du MeOH (1 ,9 ml_) a été ajouté du carbonate de potassium anhydre (K2C03, 262 mg, 1 ,9 mmol). Le mélange réactionnel a été chauffé à reflux pendant 4h et concentré in vacuo. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de MeOH (0-10%) dans du DCM conduit au composé (-)-17 (40 mg, 80%) sous forme d'un solide blanc.
Composé 17: Rf = 0,22 (5 % MeOH dans du DCM).
RMN 1HNMR (DMSO-d6, 400 MHz): 5 7,83 (s, 1 H, H8), 6,41 (s, 1 H, NH2), 5,59 (d, 1 H, J = 6,3 Hz, OH), 5,49-5,47 (m, 2H, H3' and H4'), 4,99 (m, 1 H, M '), 3,95 (s, 3H, OCH3), 2,37 (ddd, 1 H, J = 14,0, 7,6, 2,7, H5'a), 2,31-2,24 (m, 1 H, H5'b).
RMN 13C (DMSO-d6, 100 MHz): δ 166,5 (d, J = 286,4 Hz, C2'), 160,6 (Cq), 159,7 (Cq), 153,7 (Cq), 137,8 (C8), 114, 1 (Cq), 105,1 (d, J = 12, 1 Hz, C3'), 69,1 (d, J = 21 , 1 Hz, C1 '), 53, 1 (OCH3), 52,4 (d, J = 12,8 Hz, C4'), signal C5' sous le pic DMSO.
RMN 19F NMR (DMSO-d6, 376,5 MHz): δ -123,97.
UV (EtOH 95) Amax= 250 nm (emax =11100), Amax= 282 nm (emax = 11900).
MS (ESI+): m/z=266,1 (M+H+).
HRMS (ESI+): calculé pour Cii H13N502F [M+H]+ 266, 1053; obtenu: 266, 1052.
[a]D = -41 ,3 (c = 0,53, CHCI3).
9- Synthèse du (-H1 R,4SV4-(2-Amino-6-methoxy-9H-purin-9-vn-2-fluoro-2- cvclopenten-1-ol 18
A une solution de triphenylphosphine (PPh3, 1 ,28 g, 4,9 mmol) et d'acide benzoïque (598 mg, 4,9 mmol) dans du THF anhydre (6 mL) sous atmosphère d'argon a été ajouté une solution de composé (260 mg, 1 ,0 mmol) dans du THF anhydre (6 mL) à température ambiante. Le mélange a été refroidi jusqu'à 0°C et de Γ azodicarboxylate de diisopropyl (DIAD, 965 μί, 4,9 mmol) a été ajouté goutte à goutte. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 2,5 h puis concentré par évaporation. Le résidu a été dissous dans du MeOH (18 mL) et du carbonate de potassium anhydre (K2C03, 276 mg, 2,0 mmol) a été ajouté. La solution a été agitée à température ambiante pendant 16h et concentrée in vacuo. La purification par chromatographie flash sur gel de silice avec un gradient progressif de MeOH (0-6%) dans du DCM donne le composé (-)-18 (240 mg, 93%) sous forme d'une mousse blanche.
Composé 18 : Rf= 0,38 (5 % MeOH dans du DCM).
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 7,59 (s, 1 H, H8), 7,28-7,26 (m, 1 H, OH), 5, 19 (d, 1 H, J = 2,6 Hz, H3'), 5, 15-5, 12 (m, 1 H, H4'), 4,97 (s, 2H, NH2), 4,57 (t, J = 8,4 Hz, 1 H, H T), 4,05 (s, 3H, OCH3), 3,07-2,99 (m, 1 H, H5'a), 2,24 (dd, J = 15,5, 2,2 Hz, 1 H, H5'b).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz): δ 167,3 (d, J = 289,8 Hz, C2'), 162, 1 (Cq), 158,6 (Cq), 152,2 (Cq), 139,4 (C8), 117,2 (Cq), 104,3 (d, J = 12, 1 Hz, C3'), 70,3 (d, J = 22,3 Hz, C1 '), 54,8 (d, J = 11 ,6 Hz, C4'), 54, 1 (OCH3), 38,0 (d, J = 5,7 Hz, C5').
RMN 19F (CDCI3, 376,5 MHz): δ -123,56.
UV (EtOH 95) Amax=282 nm (emax =6500).
MS (ESI+): m/z=266 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour Cii H13FN502 [M+H]+ 266, 1053; obtenu 308, 1164.
[a]D = -232,9 (c = 0,57, CHCI3).
10- Synthèse du (+Hr(1 R,4S)-4-(2-amino-6-oxo-1 ,6-dihvdro-9H-purin-9-yl)-2-fluoro- 2-cvclopenten-1-vHoxy}methylphosphonic acid 19
A une solution agitée de (+)-18 (99 mg, 0,4 mmol) dans du THF anhydre (6 mL) à 0°C sous atmosphère d'argon a été ajouté du ferf-butoxide de lithium (LiOtBu, solution 2,2M dans du THF, 0,51 mL, 1 , 1 mmol). La solution a été agitée à 0°C pendant 1 h jusqu'à l'ajout de diethyl p-toluene sulfonyloxymethyl phosphonate (481 mg, 1 ,5 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 3 jours, et arrêtée par l'addition de AcOH (quelques gouttes). Les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient linéaire de MeOH (2-10%) dans de l'acétate d'éthyle pour donner un mélange inséparable de composé 13 et d'acide hydroxymethylphosphonique (239 mg) sous la forme d'une huile jaune. Le mélange est utilisé dans l'étape suivante sans purification.
Rf= 0.23 (10% MeOH in ethyl acétate).
MS (ESI+): m/z=416.1 (M+H)+.
A une solution agitée de matériel brut (239 mg) dans du DMF anhydre (5 mL) à 0°C a été ajouté goutte à goutte du TMSBr (1 ,2 mL, 9,3 mmol) sous atmosphère d'argon. Le mélange réactionnel a été agité à à température ambiante pendant 16 heures puis neutralisé avec une solution de triethylammonium hydrogen carbonate (1 M, pH 7) et concentré par assèchement sous pression réduite. La purification par chromatographie flash sur gel de silice avec un gradient progressif de iPrOH/NH4OH/H20 (7/2/1 à 9/9/1 ) suivi par une chromatographie sur colonne en phase inverse avec un mélange H20/MeOH (100/0 à 80/20), un échange d'ions sur DOWEX 50WX2 (forme Na+) et lyophilisation donne le composé (+)-19 (34 mg, 23% après 2 étapes) sous la forme d'un solide blanc.
Composé 19 : Rf= 0,10 (iPrOH/NH4OH/H20: 7/2/1).
RMN 1H (D20, 400 MHz): 57,76 (s,1H, H8), 5,51 (d, 1H, J = 2,5 Hz, Η3'), 5,18-5,14 (m, 1H, Η4'), 4,62 (dd, 1Η, J = 7,6, 3,3 Hz, Η1'), 3,53-3,43 (m, 2H, OCH2P), 2,99 (dt, J = 15,6, 8,0 Hz, 1H, H5'a), 1,90 (dd, J= 14,7, 1,8, 1H, H5'b).
RMN 13C (D20, 100 MHz): δ 168,3 (Cq), 164,1 (d, J = 285,1, C2'), 161,2 (Cq), 150,9 (Cq), 136,6 (C8), 117,7 (Cq), 107,1 (d, J = 12,2 Hz, C3'), 78,2 (dd, J = 19,9, 12,1, C1'), 67,1 (d, J= 150,1, CH2P), 51,1 (d, J= 11,4 Hz, C4'), 36,3 (d, J = 5,0 Hz, C5').
RMN 31P (D20, 162,0 MHz): δ 13,09.
RMN 19F (D20, 376,5 MHz): 5-122,92.
UV (EtOH 95) Amax =256 nm (emax =9300).
MS (ESI+): m/z=346,2(M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour CnH14FN505P [M+H]+ 346.0717; obtenu: 346,0739.
[a]D = +16,7 (c = 0,54, H20). Le composé obtenu correspond à un sel de sodium du composé de formule la2G selon l'invention où Z-i et Z2 sont H. Ce produit est énantiopur.
Les 4 étapes susmentionnées sont résumées dans le schéma réactionnel 3 ci-après.
(+) -19
Schéma 3
Exemple 4 : Synthèse d'un composé selon l'invention où R1 est une Guanine A partir du composé (-)-8 décrit dans l'exemple 1 , et en procédant à une synthèse selon les étapes 7 à 10 de l'exemple 3, il est possible de synthétiser un sel de sodium du composé de formule lb2G selon l'invention où Z-ι et Z2 sont H. Ce produit est énantiopur. Exemple 5 : synthèse d'un racémate de composés adénine selon l'invention.
1 - Synthèse du (±)-4-(tert-butyldimethylsilyloxy)-2-iodo-1-vinylcvclopent-2-enol (21 ) La synthèse est initiée à partir du compose 20 qui est synthétisé comme décrit dans Journal of American Chemical Society, 11 , (23), 11014-11015.
A une solution agitée de composé (±)-20 (1 ,5 g, 4,4 mmol) dans de Γ Et20 anhydre (10 mL) à 0°C a été ajouté du chlorure de vinylmagnésium (1 M dans du THF, 5,6 mL, 5,6 mmol) sous une atmosphère d'argon. La solution a été réchauffée à température ambiante et agitée pendant 30 min puis versée à 0°C dans dans une solution saturée de NH4CI saturé (10 mL) et extrait avec du Et20. Les extraits organiques combinés ont été lavés avec de la saumure puis séchés (MgS04), filtrés et concentrés in vacuo. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (DCM) pour obtenir le composé (±)-21 (1 ,1 g, 70%) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 21 Rf= 0,46 (DCM).
RMN 1 H (400 MHz, CDCI3): δ 6,28 (d, J = 2, 1 Hz, 1 H, H3), 5,69 (dd, J = 17,2, 10,6 Hz, 1 H, H6), 5,33 (dd, J = 17,2, 0,9 Hz, 1 H, H7trans), 5,21 (dd, J = 10,6, 0,9 Hz, 1 H, H7cis), 4,66 (ddd, J = 6,9, 5,0, 2,0 Hz, 1 H, H4), 2,61 (dd, J = 13,1 , 6,8 Hz, 1 H, H5a), 2,19 (s, 1 H, OH), 1 ,97 (dd, J = 13, 1 , 5,0 Hz, 1 H, H5b), 0,89 (s, 9H, f-Bu), 0,09 (s, 3H, CH3), 0,08 (s, 3H, CH3).
RMN 13C NMR (101 MHz, CDCI3): δ 144,8 (C3), 140,4 (C6), 114,3 (C7), 110,9 (C2), 85,0 (C1 ), 75,6 (C4), 47,9 (C5), 25,9 (3*CH3), 18,2 (Cq), -4,6 (2*CH3).
2- Synthèse du (±)-4-(tert-butyldimethylsilyloxy)-2-iodo-1 -vinyl(allyloxy)cvclopent-2- enyl (22)
A une suspension de NaH (288 mg, 12 mmol) dans du THF anhydre (10 mL) à 0°C sous atmosphère d'argon est ajouté goutte à goutte le composé (±)-21 (1 ,7 g, 4,6 mmol). Le mélange est agité pendant 30 min à température ambiante puis refroidi à 0°C. De l'iodure de tétrabutylammonium (TBAI, 0.5 mmol, 198 mg) et du bromure d'allyle (17,3 mmol, 1 ,5 mL) sont ajoutés à cette température et la solution résultante est agitée toute la nuit à température ambiante puis versée à 0°C dans une solution saturée de NaHC03 saturé (10 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'Et20 et les phases organiques combinées ont été lavées avec de la saumure, séchées (MgS04) filtrées, et concentrées sous pression réduite. Le sirop résultant a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif d'acétate d'éthyle (0-5%) dans de l'éther de pétrole pour obtenir le composé (±)-22 (1.6 g, 85%) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 22 : Rf= 0.20 (éther de pétrole).
RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 5 6,34 (d, J = 2, 1 Hz, 1 H, H3), 5,97 (ddt, J = 17, 1 , 10,4, 5,2 Hz, 1 H, H9), 5,69 (dd, J = 17,3, 10,7 Hz, 1 H, H6), 5,36-5,31 (m, 2H, H7trans, H10trans), 5, 19 (ddd, J = 10,7, 1 ,1 Hz, 1 H, H7cis,), 5, 15 (ddd, J = 10,4, 3, 1 , 1 ,5 Hz, 1 H, H10cis), 4,63 (ddd, J = 7,0, 4,5, 2, 1 Hz, 1 H, H4), 4,06-3,83 (m, 2H, H8), 2,47 (dd, J = 13,8, 7,3 Hz, 1 H, H5a), 2,03 (dd, J = 13,8, 4,6 Hz, 1 H, H5b), 0,89 (s, 9H, f-Bu), 0,09 (s,
3H, CH3), 0,08 (s, 3H, CH3).
RMN 13C (101 MHz, CDCI3): δ 146,0, (C3), 140,3 (C6), 135,3 (C9), 116, 1 (C10), 114,5 (C6), 108,5 (Cq), 89,6 (Cq), 75,5 (C4), 64,3 (C8), 41 ,8 (C5), 25,9 (3*CH3), 18,2 (Cq), -4,6 (CH3), -4,6 (CH3).
3- Synthèse du (±)-4-(tert-butyldimethylsilyloxy)-2-fluoro-1 -vinyl(allyloxy)cvclopent-2- enyl (23)
A une solution de composé (±)-22 (3 g, 7,4 mmol) et de /V-fluorobenzenesulfonimide (NFSI, 5,7 g, 18 mmol) dans du THF anhydre (65 ml_) à -78°C est ajouté goutte à goutte du n-BuLi (2.5 M dans de l'hexane, 13 ml_, 32,5 mmol). Après agitation à -78°C pendant 2h, une solution aqueuse saturée en NH4CI (70 ml_) a été ajoutée et le mélange a été réchauffé à température ambiante. La phase aqueuse est extraite par du DCM et les phases organiques combinées sont séchées (MgS04), filtrées et concentrées sous pression réduite Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (DCM) pour donner le composé 23 (±)-23 (660 mg, 30%) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 23 : Rf= 0,22 (20% DCM dans de l'éther de pétrole).
RMN 1 H (400 MHz, CDCI3) δ 5,99-5,90 (m, 1 H, H9, H6), 5,87 (dd, J = 17,5, 10,8 Hz, 1 H, H9, H6 ), 5,35-5,28 (m, 3H, H10a, H7a, H3), 5, 18-5,13 (m, 2H, H10b, H7b), 4,64- 4,59 (m, 1 H, H4), 4, 13-4,08 (m, 1 H, H8a), 4,00-3,95 (m, 1 H, H8b), 2,50 (dd, J = 14,2, 7,2 Hz, 1 H, H5a), 2,03-1 ,99 (m, 1 H, H5b), 0,89 (s, 9H, f-Bu), 0,07 (s, 6H, 2CH3).
RMN 13C (101 MHz, CDCI3) δ 160, 90 (d, J = 290,0 Hz, C2), 137,59 (d, J = 2,4 Hz, C6), 134,08 (C9), 115, 13 (C7), 113,95 (C10), 110,50 (d, J = 6,3 Hz, C3), 82,48 (d, J = 19,6 Hz, Cq), 66,87 (d, J = 12,5 Hz, C4), 63,98 (C8), 43,56 (d, J = 4,6 Hz, C5), 24,76 (C f-Bu), 17,01 (Cq), -0,01 (CH3), -5,72 (d, J = 3,7 Hz, CH3), 19F NMR (376 MHz, CDCI3) 5 -129, 18.
4- Synthèse di (±)-4-(allyloxy)-3-fluoro-4-vinylcvclopent-2-enol (24)
A une solution agitée de composé (±)-23 (837 mg, 2,8 mmol) dans du THF (15 mL) à 0°C sous une atmosphère d'argon, a été ajouté goutte à goutte une solution de fluoride de tetrabutylammonium (TBAF 1 M dans du THF, 4,2 mL, 3,4 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à 0°C pendant 2 heures et les solvants ont été évaporés jusqu'à siccité. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de méthanol (0-2%) dans du DCM donne le composé (±)-24 (501 mg, 97%) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 24 : Rf= 0,37 (2% MeOH dans du DCM).
RMN 1H (300 MHz, CDCI3) δ 6,03 - 5,80 (m, 2H, H6, H9), 5,46 (d, J = 2,5 Hz, 1 H,
H2), 5,40 - 5,11 (m, 2H, 2H7, 2H10), 4,71 - 4,56 (m, 1 H, H1 ), 4, 16 - 3,90 (m, 2H, 2H8 ), 2,55 (ddd, J = 14,4, 7,1 , 0,7 Hz, 1 H, H5a), 2, 11 - 1 ,95 (m, 1 H, H5b).
5- Synthèse du (±)-4-(allyloxy)-3-fluoro-4-vinylcvclopent-2-enol (25)
A une solution agitée de triphenylphosphine (PPh3, 23 mmol, 6,03 g) et d'acide benzoïque (23 mmol, 2,8 g) dans du THF anhydre (10 mL) à température ambiante sous atmosphère d'argon, a été ajoutée une solution de composé (±)-24 (850 mg, 4,6 mmol) dans du THF anhydre (10 mL). Après agitation pendant 15 min de l'azodicarboxylate de diisoopropyle (DIAD, 23 mmol, 4,5 mL) a été ajouté goutte à goutte. Le mélange a été agité pendant 1 heure, concentré in vacuo et filtré au travers d'une compresse de gel de silice. Le tourteau de filtration a été lavé avec du DCM et le filtrat concentré in vacuo. Ce composé a été utilisé dans l'étape suivante sans autre purification. A une solution agitée de matériel brut (1 g) dans du MeOH (20 mL) a été ajouté du K2C03 anhydre à température ambiante. La réaction a été agitée pendant 3 heures et le solvant retiré in vacuo. La purification par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif d'éther (10-20%) dans du DCM donne le composé I (±)-25 (619 mg, 74% à partir du composé (±)-24) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 25 Rf= 0,55 (20% Et20 dans du DCM).
RMN 1H (400 MHz, CDCI3): δ 6,02 (dd, J = 17,5, 10,8 Hz, 1 H, H6), 5,95-5,86 (ddt, J = 17,2, 10,6, 5,38 Hz, 1 H, H9), 5,46-5,41 (m, 2H, H2 + H7trans ), 5,33-5,26 (m, 2H, H7cis + H10trans), 5, 15 (ddd, J = 10,4, 3, 1 , 1 ,4 Hz, 1 H, H10cis), 4,87 (br s, 1 H, H1 ), 3,92 (ddd, J = 5,3, 2,9, 1 ,4 Hz, 2H, H8), 2,59 (ddd, J = 14,5, 7,0, 0,8 Hz, 1 H, H5a), 2,01 (ddd, J = 14,5, 2,8, 1 ,7 Hz, 1 H, H5b).
RMN 13C (101 MHz, CDCI3): δ 164,0 (d, J = 293,7 Hz, C3), 138,5 (d, J = 2,5 Hz, C6), 134,9 (C9), 116,6 (C7 or C10), 116,6 (C10 or C7), 111 ,3 (d, J = 6,9 Hz, C2), 84,6 (d, J = 19,2 Hz, C4), 69,5 (d, J = 12,2 Hz, C1 ), 65,6 (C8), 45,4 (d, J = 4,3 Hz, C5).
RMN 19F (376 MHz, CDCI3): δ -125,34.
6- Synthèse du (±)-1-(6-chloro-9H-purin-9-yl)-4-(allyloxy)-3-fluoro-4-vinylcvclopent-2- envi) (26)
A une solution de triphenylphosphine (PPh3, 6,3 mmol, 1 ,7 g) et de 6-chloropurine (6,3 mmol, 980 mg) dans du THF anhydre (5 mL) à température ambiante sous atmosphère d'argon, a été ajouté goutte à goutte de l'azodicarboxylate de diisopropyle (DIAD, 6,3 mmol, 1 ,3 mL). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 30 min et une solution de composé (±)-25 (460 mg, 2.5 mmol) dans du THF anhydre (5 mL) a été ajouté à l'aide d'une canule. Après agitation pendant 1 heure le mélange est concentré sous pression réduite et filtré au travers d'un lit de silice. Le
filtrat est récupéré et concentré sous pression réduite. La purification par chromatographie sur gel de silice (20% Et20 dans du DCM) donne le composé (±)-26 (311 mg, 39%) sous la forme d'une mousse blanche.
Composé 26 Rf= 0,51 (éther de diéthyle).
RMN 1H (300 MHz, MeOD): δ 8,75 (s, 1 H, H2), 8,62 (s, 1 H, H8), 6,05 (dd, J = 17,5, 10,8 Hz, 1H, H6'), 5,99-5,86 (m, 1H, H9'), 5,76 (d, J = 2,5 Hz, 1H, H2'), 5,75-5,67 (m, 1H, M'), 5,49 (d, J= 17,6 Hz, 1H, H7'trans), 5,41 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H7'cis), 5,28 (ddd, J = 17,2, 3,5, 1,7 Hz, 1H, H10'trans), 5,13 (ddd, J = 10,5, 3,2, 1,5 Hz, 1H, H10'd8), 4,24- 3,99 (m, 2H, H8'), 2,93 (dd, J= 14,5, 7,8 Hz, 1H, H5'a), 2,53-2,46 (m, 1H, H5'b).
RMN 13C (75 MHz, CDCI3): δ 166,4 (d, J = 268 Hz, C3'), 152,1 (d, J = 9 Hz, C2), 151,2 (Cq), 144,2 (cq), 143,1 (C8), 136,6 (2CAr), 135,6 (Cq), 134,3 (d, J = 16,5 Hz, Cq), 118,3 (d, J = 11,3 Hz, C7'), 117,2 (d, J = 22,5 Hz, C10'), 106,5 (m, C2'), 84,1 (m, C4'), 66,4 (d, J = 26,3 Hz, C8'), 53,0 (d, J = 12,8 Hz, C1'), 43,4 (m, C5').
RMN 19F (282 MHz, MeOD): 5-123,64 (d, J= 5,50 Hz).
MS (ESI>0): m/z = 321,09 [M+H]+.
HRMS (ESI>0): calculé pour C15H15N4OFCI: [M+H]+ 321,0918; obtenu: 321,0921.
7- Synthèse du (±)-1-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-(allyloxy)-3-fluoro-4-vinylcvclopent-2- enyl) (27)
Une solution de composé (±)-26 (311 mg, 0,97 mol) dans de l'amoniac méthanolique (40 mL) a été traitée à 70°C dans un autoclave en acier inoxydable pendant 20 heures. Les solvants ont été évaporés à siccité et le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (10% MeOH dans du DCM) pour donner le composé (±)-27 (204 mg, 70%) sous forme d'un solide jaune.
Composé 27 Rf= 0,52 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1H (400 MHz, MeOD): 58,21 (s, 1H, H2), 8,20 (s, 1H, H8), 6,03 (dd, J= 17,5, 10,8 Hz, 1H, H6'), 5,91 (ddt, J = 17,1, 10,5, 5,3 Hz, 1H, H9'), 5,72 (d, J = 2,6 Hz, 1H, H2'), 5,56-5,51 (m, 1H, H1'),5,48 (d, J= 17,5 Hz, 1H, H7'trans), 5,39 (d, J= 10,8 Hz, 1H, H7'cis), 5,27 (dq, J = 17,1, 1,6 Hz, 1H, H10'trans), 5,11 (dq, J = 10,5, 1,6 Hz, 1H, H10'cis), 4,14-4,01 (m, 2H, H8'), 2,91 (dd, J = 14,4, 7,9 Hz, 1H, H5'a), 2,36 (ddd, J = 14,4, 3,7, 1,4 Hz, 1H, H5'b).
RMN 13C (101 MHz, MeOD): δ 166,7 (d, J = 292,1 Hz, C3'), 157,4 (Cq), 153,8 (C2), 150,4 (Cq), 140,8 (C8), 137,7 (C6'), 136,1 (C9'), 120,3 (Cq), 117,6 (C7'), 116,6 (C10'), 107,9 (C2\ d, J = 12,5 Hz ), 85,1 (C4', d, J = 19,0 Hz), 66,8 (C8', d, J = 19,0 Hz), 52,5 (C1', d, J = 12,2 Hz ), 43,2 (C5', d, J = 4,0 Hz).
RMN 19F (376 MHz, MeOD): 5-124,31.
UV (EtOH 95) Amax= 261 nm (emax = 23200).
MS (ESI+): m/z=302,14 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H17N5FO [M+H]+ 302, 1417; obtenu: 302, 1414.
8- Synthèse du (±)-1-(6-amino-9H-purin-9-yl)-3-fluoro-4-vinylcvclopent-3-enol (28) A une solution agitée de composé (±)-27 (184 mg, 0,61 mmol) dans de l'acide acétique (10 ml_) à température ambiante sous atmosphère d'argon, a été ajouté du (Tetrakistriphenylphosphine) de palladium (Pd(PPh3)4, 208 mg, 0.18 mmol). Le mélange a été chauffé à 80°C pendant 1 h et le solvant a été retiré. Les traces d'acide acétique ont été enlevées par distillation azéotropique avec du toluène. La purification par chromatographie sur gel de silice (5% MeOH in DCM) donne le compose (±)-28 (89 mg, 56%) sous la forme d'une poudre blanche.
Composé 28 Rf= 0,36 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1 H (400 MHz, MeOD): 5 8,20 (s, 1 H, H2), 8, 18 (s, 1 H, H8), 6,00 (dd, J = 17,3, 10,7 Hz, 1 H, H6'), 5,54-5,47 (m, 3H, H1 ' + H2' + H7'trans), 5,28 (d, J = 10,7 Hz, 1 H, H7'cis), 3,01 (dd, J = 14,8, 8,4 Hz, 1 H, H5'a), 2,30 (d, J = 14,8 Hz, 1 H, H5'b).
RMN 13C (101 MHz, MeOD): δ 167,9 (d, J = 290,5 Hz, C3'), 157,5 (Cq), 153,3 (C2), 149,8 (Cq), 141 ,7 (C8), 139,9 (C6'), 120,7 (Cq), 115,7 (C7'), 105,7 (d, J = 12,8 Hz, C2'), 79,5 (d, J = 21 ,4 Hz, C4'), 53,7 (d, J = 12,4 Hz, C1 '), 46,2 (d, J = 3,4 Hz, C5').
RMN 19F (376 MHz, MeOD): 5 -129,86.
UV (EtOH 95): Amax = 261 nm (emax = 14700).
MS (ESI+): m/z=262,11 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour Ci2H13N5FO [M+H]+ 262, 1104; obtenu: 262, 1104.
9- Synthèse du (±VN'(9-(4-hvdroxy-4-vinyl-3-fluoro-2-envn-9H-purin-6-vn-N,N- dimethylformimidamide (29)
A une solution agitée de composé (±)-28 (115 mg, 0,44 mmol) dans du DMF anhydre (2 mL) sous atmosphère d'argon a été ajouté du /V,/V-dimethylformamide dimethyl acetal (170 μί, 1 ,9 mmol) à température ambiante. Le mélange a été chauffé à 50°C pendant 4 heures puis concentré in vacuo. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (5% MeOH in DCM) pour donner le composé (±)-29 (129 mg, 93%) sous la forme d'une mousse blanche.
Composé 29 Rf= 0,22 (10% MeOH dans du DCM).
RMN 1 H (300 MHz, MeOD): δ 8,93 (s, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 8,29 (s, 1 H), 6,01 (dd, J = 17,3, 10,7 Hz, 1 H, H6'), 5,55-5,52 (m, 1 H, H2'), 5,51-5,49 (m, 1 H, M '), 5,49 (d, J = 17,3 Hz, 1 H, H7'trans), 5,29 (dd, J = 10,7, 0,9 Hz, 1 H, H7'cis), 3,25 (s, 3H, CH3), 3,24 (s, 3H, CH3), 3,03 (dd, J = 14,8, 8,4 Hz, 1 H, H5'a), 2,31 (dt, J = 14,8, 2,4 Hz, 1 H, H5'b).
RMN 13C (75 MHz, MeOD): δ 168,0 (d, J = 290,8 Hz, C3'), 161 ,4 (Cq), 160,3 (N=CH-
N), 152,9 (C2), 151 ,8 (Cq), 143,3 (C8), 139,9 (C6'), 127, 1 (Cq), 115,7 (C7'), 105,7 (d, J = 12,8 Hz, C2'), 79,6 (d, J = 21 ,3 Hz, C4'), 53,6 (d, J = 12,5 Hz, C1 '), 46,2 (d, J = 4,2 Hz, C5'), 40,5 (CH3), 33,3 (CH3).
RMN 19F (282 MHz, MeOD): 5 -129,69 (m).
UV (EtOH 95): Amax = 231 nm (emax = 12500), Amax= 312 nm (emax = 29000).
MS (ESI+): m/z=317,15 (M+H)+.
HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H18N6FO [M+H]+ 317, 1526; obtenu: 317, 1528.
10- Synthèse du (±)-diethyl(4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1-vinyl-2-fluorocvclopent-2- enyloxy)methylphosphonate (30)
A une solution agitée de composé (±)-29 (130 mg, 0,41 mmol) dans du THF anhydre (3 ml_) à 0°C sous atmosphère d'argon a été ajoutée goutte à goutte du ferf-butoxyde de lithium (LiOfBU, 0,721 ml_, 1 ,58 mmol). Après agitation pendant 1 heure à 0°C du diethyl p-toluene sulfonyloxymethyl phosphonate (830 mg, 2.6 mmol) a été ajouté et le mélange a été agité à 40°C pendant 2 jours. Quelques gouttes d'acide acétique ont été ajoutées et le mélange a été concentré in vacuo. Le produit brut a été solubilisé dans une solution d'acide acétique/eau/MeOH (9/1/1 ). Une purification partielle par chromatographie sur gel de silice avec un gradient progressif de MeOH (2-10%) dans du DCM donne le composé (±)-30 sous la forme d'une mousse blanche. Ce compose est utilisé dans l'étape suivante sans autre purification.
Composé 30 : Rf= 0,25 (5% MeOH dans du DCM).
RMN 1 H (300 MHz, MeOD): 5 8,23 (s, 1 H, H2), 8,21 (s, 1 H, H8), 6,04 (dd, J = 17,5, 10,9 Hz, 1 H, H6'), 5,78 (s, 1 H, H2), 5,56-5,52 (m, 1 H, H1 ), 5,54 (d, J = 17,5 Hz, 1 H, H7trans), 5,46 (d, J = 10,9 Hz, 1 H, H7cis), 4,19-4,06 (m, 4H, 2*CH2), 4, 12-4,06 (m, 1 H, OCH2P), 3,91-3,85 (m, 1 H, OCH2P), 2,94 (dd, J = 14,6, 8,0 Hz, 1 H, H5'b), 2,48 (dd, J = 14,6, 3,3Hz, 1 H, H5'a), 1 ,31 (t, J = 7,2, 6H, 2*CH3).
RMN 31 P (162 MHz, MeOD): δ 21 ,92.
RMN 19F (282 MHz, MeOD): 5 -125,44. 1 1- Synthèse de l'acide (±)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-vinyl-3-fluorocvclopent-2- enyloxy)methylphosphonique (31 )
A une solution agitée de phosphonate ester (±)-30 (44 mg, 0,11 mmol) dans du DMF anhydre (2 ml_) à 0°C sous une atmosphère d'argon a été ajoutée goutte à goutte du bromure de trimethylsilyle (700 μΙ_, 5,2 mmol).
La solution est agitée à température ambiante pendant 24 heures puis neutralisée avec une solution aqueuse de TEAB (1 M, pH 7) et concentrée sous pression réduite. Une chromatographie sur colonne en phase inverse du résidu avec un mélange
H20/MeOH (100/0 to 95/5), suivie d'un échange d'ions sur DOWEX 50WX2 (forme Na+) et lyophilisation donne le composé 31 (22 mg, 31%) sous la forme d'un solide blanc. Composé 31 : Rf= 0,19 (/PrOH/NH4OH/H20 : 7/2/1).
RMN 1H (400 MHz, D20): δ 8,26 (s, 1H, H2), 8,13 (s, 1H, H8), 6,05 (dd, J = 17,6, 10,9 Hz, 1H, H6'), 5,75 (d, J = 2,5 Hz, 1H, H2'), 5,52 (d, J= 17,6 Hz, 1H, H7'trans), 5,45- 5,41 (m, 1H, M'), 5,45 (d, J= 10,9 Hz, 1H, H7'cis), 3,64-3,52 (m, 2H, CH2), 2,94 (dd, J = 14,6, 8,0 Hz, 1H, H5a), 2,29 (dd, J= 14,6, 3,6 Hz, 1H, H5b).
RMN 13C (101 MHz, D20): δ 166,57 (d, J = 290,4, C3'), 157,10 (Cq), 153,73 (C2), 150,81 (Cq), 143,39 (C8), 137,85 (C6'), 121,00 (Cq), 120,44 (C7'), 109,71 (d, J= 12,4, C3'), 87,57 (dd, J = 18,8, 14,1, C4'), 62,94 (d, J = 159,1, OCH2P), 53,81 (d, J = 12,2, C1'), 43,20 (C5').
RMN 31P (162 MHz, D20 ): δ 18,26.
RMN 19F (376 MHz, D20): δ -120,93.
UV (EtOH 95): Amax= 261 nm (emax= 13600).
MS (ESI+): m/z = 356,09 [M+H]+.
HRMS (ESI+): calculé pour C13H15N504PFNa [M+H]+ 378,0743; obtenu: 378,0746.
L'ensemble des réactions susmentionnées conduit à l'obtention d'un mélange racémique de sel de sodium de composés 1a6Aet 1b6A, où et Z2 sont H.
Les 11 étapes susmentionnées sont résumées dans le schéma réactionnel 4 ci- après.
OTBDMS OTB DM S
-CL JDTBDMS
CH2CHMgBr CH2CHCH2MgBr
Et20, 0°C (±) -21 THF, r.t. ί (±) -22
(±) -20
Schéma 4
Exemple 6 : synthèse d'un racémate de composés uracile selon l'invention.
1 - Synthèse du ((4-azido-2-fluorocvclopent-2-en-1 -yl)oxy)(tert-butyl)diphenylsilane
A un mélange de composé (±)-5 (1 , 147 g, 3,22 mmol, 1 eq) et de PPh3 (2,52 g, 9,61 mmol, 3 eq) dans du THF (30 ml_) et du CH2CI2 (30 ml_) à 0°C a été ajouté du DPPA (2 ml_, 9,31 mmol, 2,9 eq) et du DIAD (1 ,8 ml_, 9, 14 mmol, 2.8 eq). Le mélange réactionnel a été agité à 0°C pendant 30 min puis concentré sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie fash sur gel de silice (PE/CH2CI2 100:0 à 85:15), pour donner le composé (±)-32 (825 mg, 67% de production) sous la forme d'une huile jaunâtre. Du fait de son instabilité, le composé (±)-32 a été très vite engagé dans l'étape suivante.
Composé 32 Rf = 0.75 (PE/EtOAc 7:3).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) : δ 7,69-7,65 (m, 4H, ArH), 7,48-7,37 (m, 6H, ArH), 5,29 (dd, J = 2,5, 0,5 Hz, 1 H,H3), 4,91-4,86 (m, 1 H, H1 ), 4,49-4,42 (m, 1 H, H4), 2,20 (dddd, J = 14,4, 7,6, 3,9, 0,9 Hz, 1 H, H5a), 1 ,97 (dddd, J = 14,4, 7,2, 2,5, 1 , 1 Hz, 1 H, H5b), 1 ,08 (s, 9H, 3xCH3).
2- Synthèse du 4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-3-fluorocvclopent-2-enamine (±)-33
A une solution de composé (±)-32 (825 mg, 2, 16 mmol, 1 eq) dans du THF (70 mL) à 0°C est ajouté goutte à goutte du LiAIH4 en solution dans le THF (1 M in THF, 3,3 mL, 3,3 mmol, 1 ,5 eq). Le mélange réactionnel est laissé revenir à température ambiante et agité pendant 30 min. 15 mL de THF/H20 (9/1 v/v) est ajouté goutte à goutte. Le mélange est filtré sur une petite ouate de célite et de gel de silice, lavée avec du MeOH, et le filtrat a été concentré sous pression réduite pour donner le composé (±)-33 (646 mg, 84% de production) sous la forme d'une huile incolore.
Composé 33 Rf = 0,3 (CH2CI2/MeOH 9:1 ).
RMN 1 H (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,69-7,66 (m, 4H, ArH), 7,43-7,35 (m, 6H, ArH), 5,21 (d, J = 2, 1 Hz, 1 H, H2), 4,86-4,85 (m, 1 H, H4), 4,07-4,04 (m, 1 H, H1 ), 2,25-2, 19 (m, 1 H, H5a), 1 ,69-1 ,61 (m, 3H, H5b and NH2), 1 ,07 (s, 9H, CH3 x3).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : δ 161 ,5 (d, J = 287 Hz, C3), 134,0 (CAr), 133,9 (CAr), 132,0 (Cq), 131 ,5 (Cq), 127,9 (CAr x2), 125,8 (CAr), 125,7 (CAr), 109,3 (d, J = 6,8 Hz, C2), 70,7 (d, J = 21 ,5 Hz, C4), 48,7 (d, J = 9,8 Hz, C1 ), 41 ,7 (d, J = 6,5 Hz, C5), 25,0 (CH3 x3), 17,3 (Cq).
RMN 19F NMR (CDCI3, 376 MHz) : δ -127,2.
3- Synthèse du (E)-N-((4-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)-3-fluorocvclopent-2-en-1- yl)carbamoyl)-3-ethoxyacrylamide (±)-34
Du chlorure de (E)-3-éthoxyacryloyl (280 mg, 2,08 mmol, 4 eq) a été ajouté à une suspension de AgOCN (465 mg, 3, 12 mmol, 6 eq) dans du toluène anhydre (4 mL). Le mélange a été mis au reflux pendant 30 min puis refroidi à température ambiante et filtré sur celite. Le filtrat a été ajouté goutte à goutte à -20°C à une solution d'amine (±)- 33 (184 mg, 0.52 mmol, 1 eq) dans du DMF anhydre (7 mL). Le mélange réactionnel a été laissé revenir à température ambiante et agité pendant 5h. Les solvants ont été évaporés sous pression réduite et le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (PE to PE/EtOAc 60:40) pour donner le composé (±)-34 (252 mg, 98% de production) sous la forme d'une huile incolore.
Rf = 0,24 (PE/EtOAc 7/3).
RMN 1 H (CDCI3, 400 MHz) : δ 9,24 (s, 1 H, NH), 8,53 (d, J = 7,7 Hz, 1 H, NH), 7,68- 7,64 (m, 4H, ArH), 7,58 (d, J = 12,2 Hz, 1 H, H3), 7,45-7,35 (m, 6H, ArH), 5,28-5,25 (m, 2H, H2 and H2'), 4,96-4,94 (m, 1 H, M '), 4,87-4,85 (m, 1 H, H4'), 3,93 (q, J = 7, 1 Hz, 2H, CH2 Et), 2,30 (ddd, J = 14, 7,9, 2,9 Hz, 1 H, H5'a), 1 ,88 (ddd, J = 14, 7,3, 3,3 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,33 (t, J = 7, 1 Hz, 3H, CH3 Et), 1 ,07 (s, 9H, CH3 x3).
RMN 13C (CDCI3, 100 MHz) : δ 168,2 (CO), 164,8 (d, J = 287 Hz, C3'), 163,0 (C3), 154,8 (CO), 139,9 (CAr x2), 133,7 (Cq), 133,3 (Cq), 130,0 (CAr x 2), 127,9 (CAr), 127,8 (CAr), 107,2 (d, J = 10,2 Hz, C2'), 97,7 (C2), 72, 1 (d, J = 21 , 1 Hz, C4'), 67,7 (CH2 Et), 49,0 (d, J = 11 ,5 Hz, C1 '), 41 ,0 (d, J = 5, 1 Hz, H5'), 26,9 (CH3 x3), 19,3 (Cq), 14,6 (CH3 Et).
RMN 19F (CDCI3, 376 MHz) : δ -124,4.
HRMS (ESI-): calculé pour C27H32FN204Si [M-H]- 495,2115; obtenu: 495,2116.
4- trans -1-(3-Fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1-yl)pyrimidine-2,4(1 H,3H)-dione (±)- 35
De l'acide chlorhydrique (solution aqueuse 2N, 3,9 mL, 7,33 mmol, 3 eq) a été ajouté à une solution de composé (±)-34 (1 ,2 g, 2,43 mmol, 1 eq) dans de Γ EtOH (35 mL). Le mélange réactionnel a été mis au reflux toute la nuit, puis refroidi à température ambiante et concentré sous pression réduite. Le matériel brut a été purifié par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 9:1 ) pour donner le composé (±)-35 (401 mg, 78% de production) sous la forme d'une mousse blanche.
Composé 35 : Rf = 0,34 (CH2CI2/MeOH 9:1 ).
RMN 1H (CD3OD, 400 MHz) : δ 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, H6), 5,80-5,55 (m, 2H, H5 and H T), 5,29 (d, J = 2,2 Hz, 1 H, H2'), 4,92-4,88 (m, 1 H, H4'), 2,34 (dddd, J = 14,8, 8,2, 3,2, 1 ,3 Hz, 1 H, H5'a), 2, 19 (ddd, J = 14,8, 7,5, 3,6 Hz, 1 H, H5'b).
RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) : δ 168,5 (d, J = 288 Hz, C3'), 166,4 (CO), 152,7 (CO), 143,2 (C6), 105,8 (d, J = 13,0 Hz, C2'), 102,8 (C5), 71 , 1 (d, J = 21 ,4 Hz, C4'), 57,5 (d, J
= 12,0 Hz, C1 '), 40,1 (d, J = 5,7 Hz, C5').
RMN 19F (CD3OD, 376 MHz) : δ -123,35.
HRMS (ESI"): calculé pour C9H8FN203 [M-H]" 211 ,0519; obtenu: 211 ,0519.
UV (EtOH 95) Amax= 265 nm (emax = 9800).
5- Synthèse du cis -1-(3-Fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1-yl)pyrimidine-2,4(1 H,3H)- dione (±)-36
Du DIAD (1 ,67 ml_, 8,51 mmol, 5 eq) a été ajouté goutte à goutte à une solution de composé (±)-35 (361 mg, 1 ,7 mmol, 1 eq), de PPh3 (2,23 g, 8,51 mmol, 5 eq) et d'acide benzoïque (1 ,09 g, 8,51 mmol, 5 eq) dans du THF anhydre (37 ml_) à 0°C. Le mélange a été laissé revenir à température ambiante et agité pendant 1 h, puis les solvants ont été évaporés sous pression réduite. Le résidu a été dissous dans du MeOH (37 mL), du K2C03 (588 mg, 4,25 mmol, 2,5 eq) a été ajouté et la solution a été agitée à température ambiante pendant 4h. Les solvants ont été évaporés sous pression réduite et le matériel brut a été purifié par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 93/7) pour donner le composé (±)-36 (336 mg, 93%) sous la forme d'un solide blanc.
Composé 36 : Rf = 0,39 (CH2CI2/MeOH 9:1 ).
RMN 1 H (CD3OD, 400 MHz) : δ 7,70 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, H6), 5,89 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, H5), 5,42-5,39 (m, 2H, H2' and M '), 5,78-5,76 (m, 1 H, H4'), 3, 11-3,03 (m, 1 H, H5'a),
I , 67-1 ,61 (m, 1 H, H5'b).
RMN 13C (CD3OD, 100 MHz) : δ 166,5 (CO), 165,2 (d, J = 286 Hz, C3'), 152,2 (CO), 143,3 (C6), 105,0 (d, J = 13, 1 Hz, C2'), 102,1 (C5), 68,6 (d, J = 21 ,4, C4'), 54,0 (d, J =
I I , 5 Hz, C1 '), 37,8 (d, J = 5,6 Hz, C5').
RMN 19F (CD3OD, 376 MHz) : δ -123,05.
HRMS (ESI"): calculé pour C9H8FN203 [M-H]- 211 ,0519; obtenu: 211 ,0520.
UV (EtOH 95) Amax= 264 nm (emax = 8000).
6- Synthèse du ((4-(2,4-dioxo-3,4-dihvdropyrimidin-1 (2H)-yl)-2-fluorocvclopent-2-en- 1 -yl)oxy)methylphosphonic acid (±)-37
A une solution de composé (±)-36 (26 mg, 0,123 mmol, 1 eq) dans du DMF anhydre (0,5 mL) a été ajouté une suspension de NaH (60% dans de l'huile minérale, 25 mg, 0,625 mmol, 5,2 eq) dans du DMF (0,5 mL). Le mélange a été agité à température ambiante pendant 15 minutes puis une solution de diethyl-(tosyloxymethyl)phosphonate (47 mg, 0.146 mmol, 1 .2 eq) a été ajoutée. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 3 jours, puis du AcOH (50 μί) a été ajouté et les solvants ont été évaporés sous pression réduite.
Le résidu obtenu est dissous dans du DMF anhydre (1 ,5 mL) et du TMSBr (80 μί, 0.617 mmol, 5 eq) est ajouté goutte à goutte à 0°C. La solution est agitée à température ambiante pendant 16h jusqu'à l'ajout complémentaire de TMSBr (80 μί, 0,617 mmol, 5 eq). Après 4 h d'agitation supplémentaire, du TMSBr (160 μί, 1 ,3 mmol, 10 eq) est à nouveau ajouté et le mélange est laissé sous agitation 4h à température ambiante avant l'ajout de TEAB (1 M) jusqu'à ajustement du pH à 7. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et la purification par chromatographie en phase inverse sur une colonne RP-18 (H20 à H20/MeOH 80/20) suivi d'une chromatographie sur colonne sur un gel de silice (iPrOH/NH4OH/H20: 7/2/1 ) donne le phosphonate (±)-37 (9mg, 24%).
Composé 37 Rf = 0.15 (iPrOH/NH4OH/H20: 7/2/1 ).
RMN 1 H (D20, 400 MHz) : δ 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, H6), 5,89 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, H5), 5,51 -5,40 (m, 2H, H1 ' and H3'), 4,63 (dd, J = 7,4, 2,8 Hz, 1 H, H4'), 3,71 (d, J = 9,2 Hz, 2H, CH2P), 3,00 (ddd, J = 15,9, 7,9, 7,9 Hz, 1 H, H5'a), 1 ,97-1 ,73 (m, 1 H, H5'b). RMN 13C (D20, 100 MHz) : δ 166,5 (CO), 164,5 (d, J = 286 Hz, C2'), 152,2 (CO), 143,7 (C6), 106,7 (C3'), 102,15 (C5), 78,5 (C1 '), 65,2 (CH2P), 53,8 (C4'), 34,9 (C5'),
RMN 19F (D20, 376 MHz) : 5 -120,7.
RMN 31 P (162 MHz, D20): δ 14,7.
HRMS (ESI"): calculé pour CioHnFN206P [M-H]- 305,03391 ; obtenu: 305,0341 .
L'ensemble des réactions susmentionnées conduit à l'obtention d'un mélange racémique de composés 1 a2U et 1 b2U, où et Z2 sont H.
Les 6 étapes susmentionnées sont résumées dans le schéma réactionnel 5 ci-après.
TBDPSO l
1 ) DIAD, PPh3
BzOH, THF, 0°C
2) MeOH, Κ∞3
(±) -36 (±) -37
Schéma 5
Exemple 7 : synthèse d'une prodroque.
Synthèse du bis-(Pivaloyloxymethyl)-((1 S,4R)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2- fluorocvclopent-2-en-1-yl)oxymethyl-phosphonate i1 'S,4'R)-38
Avant la réaction, le phosphate correspondant a été converti en un sel de tetrabutylammmonium selon la procédure suivante : Le phosphonate a été suspendu dans de l'eau et une résine DOXEW H+ a été ajoutée jusqu'à un pH=2 à 3. La suspension a été filtrée et le filtrat a été additionné goutte à goutte avec du Bu4NOH (40% dans de l'H20) jusqu'à ph 7 à 8. Le résidu a été lyophilisé et séché toute la nuit (dans un dessiccateur contenant du P205), pour donner un sel de tetrabutylammonium sous la forme d'un solide blanc.
Du NEt3 (44 μί, 0,32 mmol, 2 eq) a été ajouté à une solution de phosphonate (sel 3xBu4N+, 175 mg, 0,159 mmol, 1 eq) dans du DMF anhydre (0,6 mL). La solution a été agitée à température ambiante pendant 30 min jusqu'à l'ajout de pivalate de chlorométhyle (115 μί, 0,80 mmol, 5 eq). Le mélange réactionnel a été agité à
température ambiante pendant 5 jours puis arrêtée par l'ajout d'eau (5 mL) et de CH2CI2 (5 mL). Les phases ont été séparées et la phase aqueuse a été extraite avec du CH2CI2 (3x 5 mL). Les phases organiques combinées ont été séchées (MgS04), filtrées et concentrées. La purification par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 96/4) donne la prodrogue bis-POM- (1 'S,4'R)-38 (27 mg, 30% de production) sous la forme d'une huile incolore.
(1'S,4'R)-38 composé 38 : Rf = 0,29 (CH2CI2/MeOH 95/5).
RMN 1H (300 MHz, CDCI3): 5 8,35 (s, 1 H, H2), 8,01 (s, 1 H, H8), 5,75-5,65 (m, 6H, 2x OCH20 and NH2), 5,62-5,56 (m, 1 H, M '), 5,51 (d, J =2,7 Hz, 1 H, H3'), 4,60 (dd, J = 7,4, 2,3 Hz, 1 H, H4'), 4,05 (ddd, J = 37,8, 14, 8,5 Hz, 2H, CH2P), 3,06 (ddd, J = 15,4, 7,8, 7,8 Hz, 1 H, H5'a), 2,05 (ddd, J = 7,3, 5,2, 2,6 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,22 (s, 9H, C(CH3)3), 1 ,21 (s, 9H, C(CH3)3).
Exemple 8 : synthèse d'un composé triphosphate
Synthèse du ((1 S,4R)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluorocvclopent-2- enyloxy)methylphosphonic diphosphoric anhydride (trisodium sait) (+)-39
A une solution de phosphonate (forme HNEt3+, 48 mg, 0,112 mmol, 1 eq) dans du DMF anhydre (3,9 mL) a été ajouté du CDI (123 mg, 0.759 mmol, 6.8 eq). Le mélange a été agité à température ambiante pendant 24h, puis du pyrophosphate (forme Bu3NH+, solution 0,786M dans du DMF, 0,78 mL, 0,613 mmol, 5.5 eq) a été ajouté. Après agitation à température ambiante pendant 20h, la réaction a été arrêtée par addition de 1 M de TEAB (5,6 mL) et diluée dans l'eau (50 mL). La phase aqueuse a été lavée avec de l'EtOAc (3x30mL) et concentrée sous pression réduite. La purification par chromatographie sur colonne DEAE-Sephadex (gradient TEAB 0.001 M à 0.6M) suivi par une chromatographie en phase inverse sur RP-18 (gradient 100% TEAB 0.1 M à 100% H20/CH3CN 80:20) donne l'analogue triphosphate (+)-39 (forme 3xEt3NH+, 62
mg, 70% de production) sous la forme d'un solide blanc.
-39
la2U - 2P
Composé 39 :
RMN 1H (400 MHz, D20): 5 8,30 (s, 1 H, H2), 8,24 (s, 1 H, H8), 5,68 (d, J = 2,6 Hz, 1 H, H3'), 5,58-5,47 (m, 1 H, M '), 3,96 (d, J = 9,2 Hz, 2H, OCH2P), 3,26-3,09 (m, 1 H, H5'a), 2,13 (ddd, J = 8, 1 , 5,5, 3,2 Hz, 1 H, H5'b), (signal H4' sous le pic H20).
RMN 13C (101 MHz, D20): δ 164,3 (d, J = 286,6 Hz, C2'), 155,5 (Cq), 152,3 (C2), 148,6 (Cq), 140,9 (C8), 118,7 (Cq), 107,0 (d, J = 12,0 Hz, C3'), 78,9 (dd, J = 21 ,0, 12,7 Hz, C1 '), 65,6 (d, J = 164,2 Hz, OCH2P), 51 ,9 (d, J = 11 ,5 Hz, C4'), 36,2 (C5').
RMN 31 P (162 MHz, D20): δ 7,98 (d, J = 25,7 Hz), -9,06 (d, J = 20, 1 Hz), -22,68 (dd, J = 23,8, 20,5 Hz).
RMN 19F (D20, 376,5 MHz): 5 -122, 1 .
UV (H20) Amax= 260 nm (emax = 14000)
HRMS (ESI+): calculé pour Cn
[M-H]" 487,9938; obtenu: 487,9937
[a]D = +23,0 (c= 0,48, H20)
Exemple 9 : synthèse d'une prodroque en série L (énantiopur).
Synthèse du bis-(Pivaloyloxymethyl)-((1 'R,4'S)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2- fluorocyclopent-2-en-1-yl)oxymethyl-phosphonate UA2330 (énantiopur)
Du NEt3 (72 μΙ_, 0,52 mmol) a été ajouté à une solution de composés UA2276 (sel de HNEt3, 108 mg, 0.25 mmol) dans du DMF déshydraté (1 mL). La solution a été agitée à température ambiante pendant 30 min jusqu'à l'ajout de pivalate de chlorométhyle (186 μί, 1 ,28 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 5 jours puis la réaction arrêtée par ajout d'eau (5 mL) et de CH2CI2 (5 mL). Les phases ont été séparées et la couche aqueuse a été extraite avec du CH2CI2 (3x5 mL). Les phases organiques combinées ont été séchées (MgS04), filtrées et concentrées. La purification a été réalisée par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 96/4) pour obtenir du bis-POM-prodrogue UA2330 sous la forme d'une huile incolore.
RMN 1H (400 MHz, CDCI3): δ 8,34 (s, 1 H, H2), 8,02 (s, 1 H, H8), 5,86 (br,s, 2H, NH2), 5,78 - 5,64 (m, 4H, 2xOCH20), 5,64 - 5,54 (m, 1 H, H4'), 5,51 (d, J = 2,7 Hz, 1 H, H3'), 4,60 (dd, J = 7,5, 2,3 Hz, 1 H, H T), 4,11 (dd, J = 14,0, 8,4 Hz, 1 H, CHaHbP), 3,99 (dd, J = 14,0, 8,6 Hz, 1 H, CHaHbP), 3,06 (ddd, J = 15,4, 7,8 Hz, 1 H, H5'a), 2,05 (ddd, J = 15, 1 , 4,9, 2,5 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,22 (s, 9H, C(CH3)3), 1 ,20 (s, 9H, C(CH3)3)
RMN 13C (101 MHz, CDCI3): δ 176,8 (C=0), 164,6 (d, J = 289,5 Hz, C2'), 155,4 (Cq), 152,8 (C2), 149,5 (Cq), 139,0 (C8), 119,6 (Cq), 107,5 (d, J = 11 ,6 Hz, C3'), 82,8 (OCH20), 79,3 (dd, J = 20,5, 10,8 Hz, C1 '), 64,4 (d, J = 167,6 Hz, CH2P), 51 , 1 (d, J = 10,6 Hz, C4'), 38,7 (Cq), 37,3 (d, J = 5, 1 Hz, C5'), 26,8 (CH3)
RMN 31P (162 MHz, CDCI3): 520, 16
RMN 19F (376,5 MHz, CDCI3,): 5 -119,94
UV (EtOH) Amax = 260nm (emax = 7000)
HRMS (ESI+): calculé pour C23H34N508FP [M+H]+ 558,2129; obtenu 558,2132 Exemple 10 : Synthèse du triphosphate d'adénine en série L (énantiopur)
UA2290
((1 R,4S)-4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluorocyclopent-2-enyloxy)methylphosphoni diphosphoric anhydride (trisodium sait) UA2290
En utilisant la procédure décrite pour le composé (+/-)-39 (exemple 8), l'analogue triphosphate UA2290 (forme 3xBu4N+, 28 mg, rendement 27%) a été obtenu sous la forme d'un solide blanc.
Un aliquot de ce compose a été converti en sel trisodique par chromatographie Dowex (Na+) pour sa caractérisation et les études biologiques.
RMN 1H (400 MHz, D20): δ 8,29 (s, 1 H, H2), 8,26 (s, 1 H, H8), 5,68 (d, J = 2,6 Hz, 1 H, H3'), 5,50 (m, 1 H, M '), 3,96 (d, J = 9,2 Hz, 2H, OCH2P), 3,24-3,13 (m, 1 H, H5'a), 2,14-2, 10 (m, 1 H, H5'b), (H4' signal sous le pic H20)
RMN 13C (101 MHz, D20): δ 164,2 (d, J= 284 Hz, C2'), 155,5 (Cq), 152,3 (C2), 148,5 (Cq), 140,8 (C8), 118,6 (Cq), 107,0 (d, J = 12 Hz, C3'), 78,8 (dd, J = 21 , 13 Hz, C1 '), 65,6 (d, J = 164 Hz, OCH2P), 51 ,9 (d, J = 12 Hz, C4'), 36,2 (C5'),
31 P NMR (162 MHz, D20): δ 8,00 (d, J = 25,9 Hz), -8,67 (d, J = 19,4 Hz), -22,47 (dd, J = 22,7, 21 , 1 Hz),
RMN 19F (D20, 376,5 MHz): 5 -122, 1 ,
UV (H20) Amax= 260 nm (emax = 14400)
HRMS (ESI+): calculé pour CnHuNsdoPsF [M-H]- 487,9938; obtenu: 487,9940 [a]D = -22,2 (c= 0,45, H20)
Exemple 11 : Synthèse de dérivés racémiques d'adénine 4'-substitués
Le composé (+/-)-6, est obtenu à partir du composé (+/-)-5 (cf schéma 1 ci-dessus). A partir de (+/-)-5, la synthèse développée est identique à celle de la série énantiopure indiquée dans le schéma 2 du brevet permettant dans ce schéma 2 d'obtenir le composé énantiopur (-)-12.
Schéma 6
Af-Q-O-fluoro^-oxocvclopent^-en-l -vD-QH-purin-e-vD-A/.A/- dimethylformimidamide - composé (±)-83
Rf= 0,34 (CH2CI2/MeOH 9/1 )
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 8,95 (s, 1 H, H2), 8,52 (s, 1 H, H8), 7,86 (s, 1 H, CH=N), 7,04 (d, J = 2,9 Hz, 1 H, H2'), 5,95 - 5,68 (m, 1 H, H1 '), 3,36 - 3, 12 (m, 7H, 2xCH3 et H5'a), 2,78 (dd, J = 19, 1 , 1 ,6 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (CDCI3, 101 MHz): δ 194, 1 (d, J = 19,6 Hz, C4'), 160,7 (d, J = 292,0 Hz, C3'), 160,0 (Cq), 158,2 (C2), 153, 1 (C8), 151 ,5 (Cq), 138,8 (CH=N), 131 ,7 (d, J = 8,3 Hz, C2'), 126,4 (Cq), 47,7 (d, J = 8,5 Hz, C1 '), 41 ,5 (CH3), 40,9 (d, J = 3,7 Hz, C5'), 35,5 (CH3)
RMN 19F (CDCI3, 376,5 MHz): δ -131 ,89
UV (EtOH) Amax = 267nm (emax = 7000)
HRMS (ESI+): calculé pour C13H14N6OF [M+H]+ 289, 1213; trouvé 289, 1214
4-i6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro-1 -iitrimethylsilyl)ethvnyl)cvclopent-2-en-1 -ol
- compose i±)-84
(±)-84
Du BuLi (2,5M dans de l'hexane, 0,97 mL, 2,42 mmol) a été ajouté goutte à goutte à -78°C sous atmosphère d'argon à une solution de trimethylsilylacétylène (0,36 mL, 2,53 mmol) dans du THF anhydre (2,5 mL). La solution a été agitée à -78°C pendant 30 min, puis ajoutée à une suspension de CeCI3 anhydre dans du THF (2,5 mL) à -78°C sous atmosphère d'argon. Le mélange a été agité pendant 10 min à -78°C, pour arriver à température ambiante en 10 min, puis refroidi à -78°C et agité pendant 30 min. Le mélange réactionnel a été ajouté à une suspension de composé (±)-83 (118 mg, 0,41 mmol) dans du THF (2,5 mL) à -78°C, et la solution résultante a été agitée pendant une heure (la température arrivant à -40°C). La réaction a été arrêtée par addition de NaHC03 (10 mL) aqueux saturé et extraite. La phase organique a été lavée avec de la saumure (10 mL), séchée (MgS04) et concentrée sous pression réduite.
La purification par chromatographie flash sur gel de slice (CH2Cl2/MeOH 90/10) conduit à l'obtention du composé (±)-84 (62 mg, 46%) sous la forme d'une huile incolore.
Rf= 0,38 (CH2CI2/MeOH 9/1)
RMN 1H (MeOD, 400 MHz): 58,20 (s, 1H, H2), 8,16 (s, 1H, H8), 5,63-5,56 (m, 1H, H1'), 5,54 (d, J = 2,6 Hz, 1H, H2'), 3,26 (dd, J = 14,8, 8,4 Hz, 1H, H5'a), 2,46 (dt, J = 14,9, 2,3 Hz, 1H, H5'b), 0,22 (s, 9H, Si(CH3)3),
RMN 13C (MeOD, 101 MHz): δ 166,3 (d, J = 291,7 Hz, C2'), 157,5 (Cq), 153,4 (C2), 149,9 (Cq), 141,5 (C8), 120,6 (Cq), 105,9 (d, J = 12,4 Hz, C3'), 104,9 (Cq), 90,4 (Cq), 72,6 (d, J = 21,3 Hz, Cq), 53,3 (d, J = 11,8 Hz, C1'), 48,4 (C5), -0,3 (CH3)
RMN 19F (MeOD, 376,5 MHz): δ -130,01
UV (EtOH) Amax = 263nm (emax= 14600)
HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H19N5OFSi [M+H]+ 332,1343; obtenu 332,1345
A/'-(9-(4-ethvnyl-3-fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1-yl)-9H-purin-6-yl)-A,A- dimethylformimidamide - composé (±)-85
Du DMF-diméthylacétal (0,11 mL, 0,828 mmol) a été ajouté à une solution de composé (±)-84 dans du DMF sec (1,5 mL) et la solution a été agitée à température ambiante pendant 2h. Le mélange réactionnel a été concentré jusqu'à dessiccation permettant d'obtenir un mélange d'alcynes protégés et non protégés. Ce résidu a été dissout dans du THF sec (3 mL) et traité avec du TBAF (1M dans du THF, 0,43 mL, 0,43 mmol). La solution a été mélangée à température ambiante pendant 30 minutes et concentrée jusqu'à dessiccation. La purification par chromatographie sur colonne sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 90/10) a permis d'obtenir le composé (±)-85 (125 mg, 93%) sous la forme d'une huile incolore.
Rf= 0,28 (CH2CI2/MeOH 9/1)
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 8,96 (s, 1H, H2), 8,45 (s, 1H, H8), 8,38 (s, 1H, OH), 7,88 (s, 1H, CH=N), 5,36-5,30 (m, 1H, H1'), 5,25 (d, J = 2,7 Hz, 1H, H2'), 3,35 (dd, J = 15,6, 9,1 Hz, 1H, H5'a), 3,28 (s, 3H, NCH3), 3,22 (s, 3H, NCH3), 2,79 (dd, J = 15,6, 2,9 Hz, 1H, H5'b), 2,59 (s, 1H, C≡CH)
RMN 13C (CDC , 101 MHz): δ 165,4 (d, J = 294,6 Hz, C3'), 160,4 (Cq), 158,5 (C2),
151 ,5 (C8), 145,0 (Cq), 141 ,6 (CH=N), 127,7 (Cq), 104,0 (d, J = 11 ,7 Hz, C2'), 82,2 (Cq), 73,0 (C≡CH), 71 ,8 (d, J = 20,9 Hz, C4'), 54,0 (d, J = 11 ,7 Hz, C1 '), 45,8 (d, J = 2,8 Hz, C5'), 41 ,6 (CH3), 35,5 (CH3)
RMN 19F (CDCI3, 376,5 MHz): δ -127,43
UV (EtOH) Amax = 312nm (emax = 9500)
HRMS (ESI+): calculé pour Ci5H16N6OF [M+H]+ 315, 1370; obtenu 315, 1371
Diethyl-iii4-i6-amino-9H-purin-9-yl)-1 -ethvnyl-2-fluorocvclopent-2-en-1 - yl)oxy)methyl) phosphonate - composé ί±)-89
(±)-89
Du LiOtBu (2.2M dans du THF, 0,22 mL, 0,484 mmol) a été ajouté goutte à goutte à une solution de composé (±)-85 (51 mg, 0, 162 mmol) dans du DMF sec (2 mL).
Le mélange réactionnel a été chauffé à 40°C pendant 1 h jusqu'à addition de diéthyl(tosyloxyméthyl)phosphonate (209 mg, 0,649 mmol). La solution a été agitée 2h à 40°C, puis la réaction arrêtée par addition d'acide acétique et concentrée jusqu'à dessiccation. Le résidu a été dissout dans du AcOH/MeOH/H20 (9/1/7 v/v/v, 5 mL) et agité pendant 22h à température ambiante. La solution a été concentrée jusqu'à dessiccation et le résidu a été divisé entre H20 (10 mL) et CHCI3 (10 mL). Les phases ont été séparées et la phase aqueuse a été extraite avec du CHCI3 (2x10 mL). Les phases organiques combinées ont été extraites avec du HCI 2N (3x10 mL). Les phases aqueuses résultantes ont été basifiées par ajout de NaOH 50% jusqu'à un pH = 11. Cette solution basique a été extraite avec du CHCI3 (3x20 mL), les phases organiques combinées ont été séchées (MgS04) et concentrées pour obtenir le composé (±)-89 (40 mg, 56%) sous la forme d'une poudre blanche.
Rf= 0,21 (CH2CI2/MeOH 9/1 )
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,35 (s, 1 H, H2), 8, 14 (s, 1 H, H8), 5,80 (s, 2H, NH2), 5,71 (ddd, J = 8,1 , 5,2, 2,2 Hz, 1 H, H4'), 5,57 (d, J = 2,9 Hz, 1 H, H3'), 4,24 - 4, 13 (m, 4H, 2xOCH2), 4,08 (dd, J = 10,9, 0,8 Hz, 2H, CH2P), 3, 17 (dd, J = 15,0, 8,2 Hz, 1 H, H5'a), 2,80 (s, 1 H, C≡CH), 2,52 - 2,43 (m, 1 H, H5'b), 1 ,35 (td, J = 7,1 , 4,2 Hz, 6H, 2xCH3),
RMN 13C (CDCI3, 101 MHz): δ 163,7 (d, J = 295,3 Hz, C2'), 155,6 (Cq), 153, 1 (C2), 149,8 (Cq), 139,5 (C8), 130,2 (Cq), 119,7 (Cq), 107,8 (d, J = 10,7 Hz, C3'), 78,2
(C≡CH), 62,9 (d, J = 6, 1 Hz, 2xPOCH2), 60,6 (d, J = 170,4 Hz, CH2P), 50,3 (d, J = 10,7 Hz, C4'), 45,4 (C5'), 16,6 (d, J = 5,6 Hz, 2xCH3),
RMN 19F (CDCI3, 376,5 MHz): δ -121 ,73
RMN 31P (CDCI3, 162 MHz): 520,06
UV (EtOH) Amax = 263nm (emax = 13000)
HRMS (ESI+): calculé pour Ci7H22N504FP [M+H]+ 410,1393; trouvé 410, 1400
Sodium-iii4-i6-amino-9H-purin-9-yl)-1 -ethvnyl-2-fluorocvclopent-2-en-1 - yl)oxy)methyl)phosphonate - composé UA2337
Du TMSBr (0,52 mL, 4,0 mmol) a été ajouté goutte à goutte à une solution de composé (±)-89 (80 mg, 0,222 mmol) dans du DMF anhydre (6 mL) à 0°C sous atmosphère d'argon. La solution a été agitée à température ambiante pendant 16h puis traitée avec
1 M TEAB (pH = 7.5) jusqu'à pH = 7. Le mélange résultant a été concentré jusqu'à dessiccation et la purification par chromatographie flash sur RP-18 (H20 à H20/MeOH 60:40) suivie par une chromatographie Dowex (Na+) a permis d'obtenir le composé UA2337(71 mg, 81 %) sous la forme d'un solide blanc.
RMN 1H (D20, 400 MHz): δ 8,34 (s, 1 H, H2), 8,21 (s, 1 H, H8), 5,77 (d, J = 2,7 Hz, 1 H, H3'), 5,67 - 5,56 (m, 1 H, H4'), 3,65 (dt, J = 49,8, 10,9 Hz, 2H, OCH2P), 3,24 (dd, J = 14,7, 8, 1 Hz, 1 H, H5'a), 2,55 (d, J = 16, 1 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (D20, 101 MHz): δ 162,8 (d, J = 290,9 Hz, C2'), 155,5 (Cq), 152,4 (C2) 148,6 (Cq), 141 ,0 (C8), 118,6 (Cq), 107,2 (d, J = 12,0 Hz, C3'), 78,9 (Cq), 78,9 (Cq), 77,5 (dd, J = 19,0, 15,5 Hz, C1 '), 63,2 (d, J = 151 ,4 Hz, CH2P), 51 ,0 (d, J = 11 ,7 Hz, C4'), 43,7 (C5')
RMN 19F (D20, 376,5 MHz): 5 -124,58
RMN 31P (D20, 162 MHz): δ 12,75
UV (H20) Amax = 261 nm (emax = 12800)
HRMS (ESI+): calculé pour Ci3H14N504FP [M+H]+ 354,0767; trouvé 354,0770
Sodium-(((4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1 -ethyl-2-fluorocvclopent-2-en-1 - yl)oxy)methyl)phosphonate - composé UA2338
Du Pd/C (10 mg) a été ajouté à une solution de composé (±)-88 (19 mg, 0,048 mmol) dans du MeOH (1 .5 mL) et de H20 (1 .5 mL) à température ambiante. Le mélange réactionnel a été agité sous une atmosphère d'H2 (2.5 bar) pendant 3h, puis concentré jusqu'à dessiccation. La purification par chromatographie flash sur RP-18 (H20 à H20/MeOH 70:30) suivie d'une chromatographie Dowex (Na+) a permis d'obtenir le composé UA2338 (8 mg, 42%) sous la forme d'un solide blanc.
1H NMR (D20, 400 MHz): δ 8,36 (s, 1 H, H2), 8,26 (s, 1 H, H8), 5,78 (d, J = 2,5 Hz, 1 H, H3'), 5,55 - 5,41 (m, 1 H, H4'), 3,54 - 3,29 (m, 2H, OCH2P), 2,86 (dd, J = 15,0, 8,3 Hz, 1 H, H5'a), 2,23 (dd, J = 14,8, 4,0 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,94 - 1 ,79 (m, 2H, CH2), 1 ,01 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH3)
13C NMR (D20, 101 MHz): δ 164,5 (d, J = 290,4 Hz, C2'), 155,6 (Cq), 152,4 (C2), 148,6 (Cq), 140,6 (C8), 118,8 (Cq), 106,7 (d, J = 12,9 Hz, C3'), 86,0 (dd, J = 19, 1 , 13,5 Hz, C1 '), 61 ,0 (d, J = 153,6 Hz, CH2P), 51 ,3 (d, J = 12,5 Hz, C4'), 38,3 (C5'), 28, 1 (CH2), 7,4 (CH3)
19F NMR (D20, 376,5 MHz): δ -124,39
31P NMR (D20, 162 MHz): δ 13,98
UV (H20) Amax = 262nm (emax = 9300)
HRMS (ESI+): calculé pour Ci3H18N504FP [M+H]+ 358, 1080; obtenu 358, 1073
Diéthyl-(((4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro-1 -(hvdroxyméthyl)cvclopent-2-en- 1 -yl)oxy)methyl)phosphonate - composé (±)-94
Du catalyseur Lindlar (10 mg) a été ajouté à une solution de composé (±)-88 (31 mg, 0,07 mmol) dans du MeOH (5 mL) et le mélange a été agité à température ambiante sous atmosphère d'H2 (2,5 bar) pendant 16h. La suspension a été filtrée sur celite, lavée avec du MeOH et filtrée sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 ) pour obtenir un alcène intermédiaire.
A une solution de cet alcène dans ΙΉ20 (1 mL) et l'acétone (1 mL) a été ajouté du Os04 (4% dans H20, 55 μΙ_, 0,009 mmol) et de l'oxyde de /v-méthylmorpholine (132 mg, 0,768 mmol). La solution a été agitée à température ambiante pendant 5h, puis diluée avec du EtOAc (20 mL) et lavée avec du Na2S203 aqueux saturé (10 mL) et de la saumure (10 mL). Les phases organiques sont séchées (MgS04) et concentrée jusqu'à dessiccation. Le résidu a été dissout dans du EtOH (1 mL) et une solution de Nal04 (14 mg, 0,066 mmol) dans de l'H20 (0,75 mL) a été ajoutée goutte à goutte. Le mélange a été agité à température ambiante pendant 30 minutes, puis du NaBH4 (9 mg, 0,237 mmol) a été ajouté et la solution a été agitée pendant 30 min. Après neutralisation par ajout de AcOH (1 goutte), l'EtOH a été évaporé sous pression réduite. La solution aqueuse restante a été diluée avec de l'H20 (10 mL) et extraite avec de l'EtOAc (8x5 mL). Les phases organiques combinées ont été séchées (MgS04), concentrées et la purification du produit brut par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 9/1 ) a permis d'obtenir le composé (±)-94 (19 mg, 77%) sous la forme d'une huile incolore.
Rf= 0,40 (CH2CI2/MeOH 9/1 )
RMN 1H (CDCI3, 400 MHz): δ 8,33 (s, 1 H, H2), 7,96 (s, 1 H, H8), 5,72 (s, 2H, NH2), 5,59 (d, J = 2,5 Hz, 1 H, H3'), 5,56 - 5,45 (m, 1 H, H4'), 4,23 - 4,04 (m, 5H, 2xPOCH2 and OCIHaHbP), 4,00 - 3,94 (m, 2H, OCHaHbP and CHaHbOH), 3,73 (d, J = 12, 1 Hz, 1 H, CHaHbOH), 3,01 (dd, J = 14,8, 8,2 Hz, 1 H, H5'a), 2,31 (dd, J = 14,7, 3,8 Hz, 1 H, H5'b), 1 ,33 (dd, J = 15,3, 7, 1 Hz, 6H, 2xCH3),
RMN 13C (CDC , 101 MHz): δ 163,8 (d, J = 292,3 Hz, C2'), 155,6 (Cq), 153, 1 (C2), 149,9 (Cq), 139,0 (C8), 120,0 (Cq), 108,9 (d, J = 10,9 Hz, C3'), 85,9 (dd, J = 18,3, 10,2 Hz, C1 '), 63,9 (CH2OH), 63, 1 (m, 2xPOCH2), 59, 1 (d, J = 171 ,5 Hz, OCH2P), 51 , 1 (d, J = 11 ,8 Hz, C4'), 38,9 (d, J = 4,0 Hz, C5'), 16,6 (2xCH3)
RMN 19F (CDCU, 376,5 MHz): δ -123,00
RMN 31P (CDCI3, 162 MHz): 521 ,48
UV (EtOH) Amax = 262nm (emax = 7600)
HRMS (ESI+): calculé pour C16H24N505FP [M+H]+ 416, 1499; trouvé 416, 1496
Sodium-(((4-(6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluoro-1 -(hvdroxymethyl)cvclopent-2-en- 1 -yl)oxy)methyl)phosphonate - composé (±)-95
(±)-95
A une solution de composé (±)-94 (14 mg, 0,031 mmol) dans du DMF anhydre (0,5 mL) a été ajouté du TMSBr (40 μί, 0,31 mmol) à 0°C sous atmosphère d'argon. La solution a été agitée à température ambiante pendant 16h, puis neutralisée par ajout de TEAB (1 M, pH = 7,6) et concentré jusqu'à dessiccation. La purification par chromatographie flash sur RP-18 (H20 to H20/MeOH 50/50) suivie d'une chromatographie Dowex (Na+) a permis d'obtenir le composé (±)-95 (4,2 mg, 31 %) sou la forme d'un solide blanc.
RMN 1H (D20, 400 MHz): δ 8.29 (s, 1 H, H2), 8.21 (s, 1 H, H8), 5.79 (d, J = 2.4 Hz, 1 H, H3'), 5.56 - 5.39 (m, 1 H, H4'), 3.80 (dd, J = 15.9, 11 .3 Hz, 2H, OCH2P), 3.47 - 3.24 (m, 2H, CH2OH), 2.80 (dd, J = 15.1 , 8.4 Hz, 1 H, H5'a), 2.19 (dd, J = 15.1 , 4.3 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (D20, 101 MHz): δ 163.5 (d, J = 290.3 Hz, C2'), 155.6 (Cq), 152.4 (C2), 148.6 (Cq), 140.4 (C8), 118.9 (Cq), 107.9 (d, J = 12.2 Hz, C3'), 85.77 - 83.96 (m, C1 '), 64.6 (CH2OH), 61.2 (d, J = 152.5 Hz, CH2P), 51.1 (d, J = 12.1 Hz, C4'), 36.4 (C5')
RMN 19F (D20, 376.5 MHz): 5 -123.03
RMN 31P (D20, 162 MHz): δ 13.50
UV (H20) Amax = 262nm (emax = 8000)
HRMS (ESI+): calculé pour C12H16N505FP [M+H]+ 360.0873; trouvé 360.0879
Sodium-iii4-i6-amino-9H-purin-9-yl)-2-fluorocvclopent-2-en-1 -yl)oxy)methyl) phosphonate UA2336
Du LiOtBu (2,2M dans du THF, 0,51 mL, 1 , 10 mmol) a été ajouté goutte à goutte à une solution de composé (±)-6 (106 mg, 0,37 mmol) dans du DMF anhydre (4 mL). Le mélange réactionnel a été chauffé à 40°C pendant 1 h jusqu'à l'ajout de diéthyl(tosyloxyméthyl)phosphonate (477 mg, 1 ,46 mmol). La solution a été agitée pendant 2h à 40°C, puis arrêtée par ajout d'acide acétique (quelques gouttes) et
concentrée jusqu'à dessiccation. Le résidu a été dissout dans du AcOH/MeOH/H20 (9/1/7 v/v/v, 5 mL) et agité pendant 18h à 40°C. La solution a été concentrée jusqu'à dessiccation et le résidu a été fractionné en 2 dans l'eau (10 mL) ou dans du CHCI3 (10 mL). Les phases ont été séparées et la phase aqueuse a été extraite avec du (2x10 mL). Les phases organiques combinées ont été extraites avec de Γ HCI 2N (3x10 mL). La phase aqueuse résultante a été basifiée par addition de NaOH 50% jusqu'à pH = 11. Cette solution basique a été extraite avec du CH2CI2 (50 mL), les phases organiques combines ont été séchées (MgS04) et concentrées pour obtenir le phophonate souhaité qui a été utilisé sans plus de purification.
Du TMSBr (0,363 mL, 2,8 mmol) a été ajouté goutte à goutte à la solution de phosphonate obtenue précédemment dans du DMF anhydre (4,5 mL) à 0°C. La solution a été agitée à température ambiante pendant 18h, puis neutralisée par ajout de TEAB (1 M, pH = 7,4) et concentrée jusqu'à dessiccation. La purification par chromatographie flash sur RP-18 (H20 à MeOH) suivie par une chromatographie Dowex (Na+) a permis d'obtenir le composé UA2336 (forme 1 xHNEt3 +, 101 mg, 67%).
Un aliquot de ce composé a été converti den sel disodium par chromatographie Dowex (Na+) pour la caractérisation et les études biologiques.
RMN 1H (D20, 400 MHz): δ 8, 10 (s, 1 H, H2), 8,06 (s, 1 H, H8), 5,74 - 5,58 (m, 2H, H3' and H4'), 5,01 - 4,91 (m, 1 H, H1 '), 3,69 (d, J = 9,5 Hz, 2H, CH2P), 2,67 (ddd, J = 12,2, 7,7, 2,8 Hz, 1 H, H5'a), 2,40 (ddd, J = 15,0, 7,5, 3,5 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (101 MHz, D20): δ 164,4 (d, J = 287,3 Hz, C2'), 155,2 (Cq), 152, 1 (C2), 148,3 (Cq), 140,2 (C8), 118,7 (Cq), 107,2 (d, J = 12,9 Hz, C3'), 79,4 (dd, J = 20, 1 , 12,5 Hz, C1 '), 65,7 (d, J = 154,7 Hz, CH2P), 54,2 (d, J = 12,2 Hz, C4'), 36,2 (d, J = 5,2 Hz, C5')
RMN 19F (D20, 376,5 MHz): 5 -121 , 13
RMN 31P (D20, 162 MHz): δ 14,34
UV (H20) Amax = 261 nm (emax = 15100)
HRMS (ESI+): calculé pour Cn H12N504FP [M+H]+ 328,0611 ; trouvé 328,0613 Exemple 12: Synthèse de dérivés racémiques de cytosine
frans-4-i2^-dioxo-3^-dihvdropyrimidin-1i2H)-yl)-2-fluorocvclopent-2-en-1 -yl acétate (±)-76
(±)-76
A une solution de composé (±)-53 (370 mg, 1 ,75 mmol) dans du THF sec (7 mL) ont été ajoutés du NEt3 (0,37 mL, 2,65 mmol), du DMAP (10 mg, 0,08 mmol) et du Ac20 (0,2 mL, 2, 12 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 1 h, puis concentré jusqu'à dessiccation. Le résidu a été dissout dans l'eau (50 mL) et extrait avec de l'EtOAc (3x25 mL). Les fractions organiques combinées ont été lavées avec de la saumure (50 mL), séchées (MgS04) et concentrées pour obtenir le composé (±)-76 (340 mg, 77%) sous la forme d'une poudre blanche.
Rf = 0.64 (CH2CI2/MeOH 9/1 )
1H NMR (MeOD, 400 MHz) : 5 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1 H, H6), 6.01 - 5.83 (m, 1 H, H4'),
5.80 - 5.62 (m, 2H, H5 and HT), 5.53 (d, J = 2.3 Hz, 1 H, H3'), 2.49 (ddd, J = 15.3, 8.1 , 1 .7 Hz, 1 H, H5'a), 2.36 (ddd, J = 15.4, 7.7, 4.0 Hz, 1 H, H5'b), 2.12 (s, 3H, CH3)
13C NMR (MeOD, 100 MHz) : δ 172.0 (C=0), 166.3 (C=0), 164.3 (d, J = 285.9 Hz, C3'), 152.6 (C=0), 143.4 (C6), 109.5 (d, J = 12.3 Hz, C2'), 102.9 (C5), 74.1 (d, J = 21.5 Hz, C4'), 57.7 (d, J = 11.4 Hz, C1 '), 37.5 (d, J = 4.3 Hz, C5'), 20.7 (CH3)
19F NMR (MeOD, 376 MHz) : 5 -123.33
UV (EtOH) 265 (ε max— 7600)
HRMS (ESI"): calculé pour CiiH12N204F [M+H]+ 255.0781 ; trouvé 255.0780 frans-4-amino-1 -(3-fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1 -yl)pyrimidin-2(1 H)-one composé (±)-77
(±)-77
Du réactif de Lawesson (870 mg, 2,15 mmol) a été ajouté à une suspension de composé (±)-76 (340 mg, 1 ,34 mmol) dans 1 ,2-dichloroéthane fraîchement dilué (65 mL), à température ambiante sous atmosphère d'argon. Le mélange a été reflué (83°C) pendant 20h, et refroidi à température ambiante, concentré et le résidu a été filtré sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 ). Le matériau brut a été dissout dans du NH3/MeOH (7N, 25 mL) et la solution a été chauffée à 100°C dans une bombe scellée pendant 4h. La concentration jusqu'à dessiccation et la purification par colonne chromatographique sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 ) a permis d'obtenir le composé (±)-77 (220 mg, 78%) sous la forme d'une huile incolore.
Rf = 0,33 (CH2CI2/MeOH 8/2)
RMN1H (MeOD, 400 MHz) : δ 7,50 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, H6), 5,89 (d, J = 7,4 Hz, 1 H,
H5), 5,76 - 5,65 (m, 1 H, HT), 5,30 (d, J = 2,4 Hz, 1 H, H2'), 2,39 (dddd, J = 14,6, 8, 1 , 3,2, 1 ,2 Hz, 1 H, H5'a), 2, 14 (ddd, J = 14,7, 7,7, 3,6 Hz, 1 H, H5'b); H4' sous le pic d' H20
RMN 13C (MeOD, 100 MHz) : δ 168,2 (d, J = 287,7 Hz, C3'), 167,5 (CN), 158,9 (CO), 143,2 (C6), 106,2 (d, J = 12,5 Hz, C2'), 96,3 (C5), 71 , 1 (d, J = 21 ,5 Hz, C4'), 58, 1 (d, J = 11 ,7 Hz, C1 '), 40,7 (d, J = 5,6 Hz, C5')
RMN19F (MeOD, 376 MHz) : δ -123,78
UV (EtOH) Amax = 276nm (emax = 6400)
HRMS (ESI"): calculé pour CgHu NaOzF [M+H]+ 212,0835; obtenu 212,0837
c/s-4-amino-1 -(3-fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1 -yl)pyrimidin-2i1 H)-one composé ί±)-79
(±)-79
Du DIAD (0,98 ml_, 5,00 mmol) a été ajouté goutte à goutte à une solution de composé (±)-77 (210 mg, 1 ,00 mmol), PPh3 (1 ,31 g, 5,00 mmol) et d'acide benzoïque (610 mg, 5,00 mmol) dans du THF anhydre (20 mL) à 0°C. Le mélange a été laissé pour atteindre la température ambiante puis, agité pendant 2h, et les solvants ont été évaporés sous pression réduite. Le résidu a été dissout dans du MeOH (20 mL), du K2C03 (276 mg, 2,00 mmol) a été ajouté et la solution a été agitée à température ambiante pendant 2h. Les solvants ont été évaporés sous pression réduite et le matériau brut a été purifié par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 ) produisant le composé (±)-79 (125 mg, 60%) sous la forme d'une huile incolore.
Rf = 0,23 (CH2CI2/MeOH 8/2)
RMN 1H (MeOD, 400 MHz) : 5 7,66 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, H6), 5,92 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, H5), 5,60 - 5,43 (m, 1 H, HT), 5,30 (d, J = 2,6 Hz, 1 H, H2'), 4,65 (dd, J = 7,8, 3,5 Hz, 1 H, H4'), 3,01 (ddd, J = 14,7, 8, 1 , 8, 1 Hz, 1 H, H5'a), 1 ,54 (ddd, J = 14,7, 6,0, 3,5 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (MeOD, 100 MHz) : δ 167,8 (d, J = 286,6 Hz, C3'), 167,5 (CN), 158,9 (CO), 143,6 (C6), 106,2 (d, J = 12,2 Hz, C2'), 96,5 (C5), 70, 1 (d, J = 21 ,7 Hz, C4'), 55,5 (d, J = 10,8 Hz, C1 '), 40,3 (d, J = 5,7 Hz, C5')
RMN 19F (MeOD, 376 MHz) : 5 -124,87
UV (EtOH) Amax = 275nm (emax = 4300)
HRMS (ESI"): calculé pour C9H11 N302F [M+H]+ 212,0835; mesuré 212,0836
N-(1 -(3-fluoro-4-hvdroxycvclopent-2-en-1 -yl)-2-oxo-1 ,2-dihvdropyrimidin-4- vDbenzamide - composé (±)-82
(±)-82
A une solution de composé (±)-79 (125 mg, 0,592 mmol) dans du DMF sec (2.5 mL) a été ajouté du benzoïque anhydride (127 mg, 0,561 mmol). Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante pendant 24h et concentré jusqu'à dessiccation. Le résidu solide a été lavé avec du Et20, puis purifié par chromatographie flash sur gel de silice (CH2CI2 à CH2CI2/MeOH 9/1 ) pour obtenir le composé (±)-82 (81 mg, 44%) sous la forme d'un solide blanc.
Rf = 0,46 (CH2CI2/MeOH 9/1 )
RMN 1H (MeOD, 400 MHz) : δ 8,22 - 8,08 (m, 1 H, CHAr), 8,07 - 7,94 (m, 2H, CHAr and H6), 7,71 - 7,52 (m, 4H, CHAr and H5), 5,66 - 5,54 (m, 1 H, H ), 5,40 (d, J = 2,6 Hz, 1 H, H2'), 4,70 (dd, J = 7,8, 3,3 Hz, 1 H, H4'), 3,11 (ddd, J = 14,8, 8,1 , 8, 1 Hz, 1 H, H5'a), 1 ,65 (ddd, J = 14,9, 5,8, 3,3 Hz, 1 H, H5'b)
RMN 13C (MeOD, 100 MHz) : δ 168,4 (d, J = 287,8 Hz, C3'), 164,4 (CN), 158,5 (CO), 147,5 (C6), 134,6 (CAr), 134, 1 (CHAr), 129,8 (CHAr), 129, 1 (CHAr), 105,6 (d, J = 13,2 Hz, C2'), 99, 1 (C5), 70, 1 (d, J = 21 ,7 Hz, C4'), 56,9 (d, J = 10,8 Hz, C1 '), 40,2 (d, J = 5,8 Hz, C5')
RMN 19F (MeOD, 376 MHz) : 5 -123, 19
UV (EtOH) Amax = 260nm (emax = 16900)
HRMS (ESI-): calculé pour C16H15N303F [M+H]+ 316, 1097; trouvé 316, 1097
Sodium-(((4-(4-amino-2-oxopyrimidin-1(2H)-yl)-2-fluorocvclopent-2-en-1 - yl)oxy)methyl) phosphonate - compose UA2329
UA2329
Du composé (±)-82 (78 mg, 0,25 mmol) et du diéthyl-(tosyloxyméthyl)phosphonate (321 mg, 0,80 mmol) ont été dissouts dans du DMF sec sous atmosphère d'argon et la solution a été chauffée à 40°C pendant 30 minutes. Du LiOtBu (2.2M dans du THF, 0,27 mL, 0,59 mmol) a été ajouté et le mélange réactionnel a été chauffé à 40°C
pendant 30 minutes. La concentration à dessiccation et la purification par chromatographie flash a permis d'obtenir le phosphonate souhaité contaminé avec du tosylate, qui a été utilisé pour l'étape suivante sans purification.
A une solution de ce phosphonate dans du TMF sec (4 mL) à 0°C sous atmosphère d'argon a été ajouté goutte à goutte du TMSBr (0.32 mL, 2.5 mmol). La solution a été agitée à température ambiante pendant 24h, puis neutralisée par ajout de TEAB (1 M, pH = 7.5) et concentrée à dessiccation. Le résidu a été dissout dans du NH3/MeOH (7M) et chauffé dans une bombe scellée à 50°C pendant 4h. Après concentration, purification par chromatographie flash, sur RP18 (H20 to H20/MeOH 50/50) suivie par une chromatographie Dowex (Na+) a permis d'obtenir le composé UA2329 (59 mg, 67%) sous la forme d'une poudre blanche.
RMN 1H (D20, 400 MHz) : δ 7,74 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, H6), 6,06 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, H5), 5,62 - 5,38 (m, 2H, H3' and H4'), 4,72 - 4,57 (m, 1 H, H1 '), 3,68 (d, J = 9,4 Hz, 2H, OCH2P), 3, 11 - 2,83 (m, 1 H, H5'a), 1 ,93 - 1 ,66 (m, 1 H, H5'b)
RMN 13C (D20, 100 MHz) : δ 165,9 (CN), 164,2 (d, J = 286,2 Hz, C2'), 158,2 (CO), 143,3 (C6), 107,2 (d, J = 12, 1 Hz, C3')), 96,4 (C5), 78,3 (d, J = 20,4 Hz, C1 '), 65,8 (d, J = 155,6 Hz, CH2P), 54,3 (d, J = 11 ,0 Hz, C4'), 35,3 (d, J = 5,3 Hz, C5')
RMN 19F (D20, 376 MHz) : 5 -121 ,35
RMN 31P (D20, 162 MHz): δ 14,55
UV (H20) Amax= 274 nm (emax = 6500)
HRMS (ESI"): calculé pour CioH14FN305P [M+H]+ 305,0655; trouvé 306,0656
Exemple 13 : tests biologiques des composés selon l'invention
Dans les tests biologiques suivants, les composés utilisés sont identifiés avec un code UA. Le tableau suivant donne la correspondance entre le code UA et la nomenclature selon l'invention.
Dans le tableau ci-dessus, les composés sodés peuvenl être mono ou disodés.
Afin de tester l'effet anti viral des composés de l'invention, les inventeurs ont réalisés
les tests suivants :
A- Etude la toxicité des composés de l'invention.
Pour mesurer la cytotoxicité des composes de l'invention, un test de viabilité cellulaire a été réalisé en mesurant l'absorbance 560 et 690 nm en utilisant le réactif jaune tetrazolium MTS reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] en présence de tetrabenzoylated adenosine dans des cellules Hel_a-CD4.
Des cellules Hel_a-CD4 en croissance exponentielle à une densité de 1 x 104/ml_ ont été ensemensées dans des plaques 96-et infectées le jour suivant avec le clone HIV-1 pNL-4.3 (à une quantité correspondant à 3 ng d'antigène p24GAG), en présence de doses croissantes de différents composés (ΟμΜ, 5μΜ, 10μΜ 25 μΜ et 50 μΜ).
La cytotoxycité a été mesurée en utilisant un kit de cytotoxicité Promega CelITiter 96 AQueus selon les recommandations du fabriquant. Le kit contient le tetrazolium MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy un sel interne et un électron couplant le réactif PES (Phenazine ethosulfate) qui va renforcer sa stabilité chimique. Le composé MTS de tetrazolium est bioréduit par les cellules en un produit formazan coloré qui est soluble en milieu de culture. Cette conversion est due au NADPH (nicotinamide adénine dinucléotide phosphate-oxydase) produit par les enzymes déshydrogénases dans les cellules métaboliquement actives. Après une incubation de 1 à 4 heures, la lecture de l'absorbance à 490 nm est effectuée à l'aide d'un lecteur de plaque à 96 puits. La quantité du produit formazan mesurée est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes en culture.
Les résultats sont représentés à la figure 2.
On constate que quel que soit le composé utilisé UA2218, UA2219, UA2034, UA2275, UA2276, UA2277 ou UA2278, la cytotoxycité 50% (dose nécessaire pour que 50% des cellules meurent) est supérieure à 50 μΜ.
B- Mesure de l'activité anti virale contre le VIH.
Pour mesurer l'effet anti viral, les inventeurs ont utilisé les cellules HeLa CD4 LTR- LacZ dans lesquelles l'expression du gène lacZ est induite par la protéine transactivatrice Tat du VIH. Ce système permet de permet de quantifier précisément l'infectiosité dans un cycle de réplication avec le virus NL4-3 sauvage (équivalent 3ng d'antigène p24).
L'évaluation de l'efficacité repose sur la détermination des concentrations de l'antirétroviral inhibant de 50% (Cl50) de la réplication du virus en culture (réduction de moitié du niveau de β-galactosidase).
Des cellules HeLa-CD4 en croissance exponentielle à une densité de 1 x 104/mL ont été ensemencées dans des plaques 96 puits et infectées le jour suivant avec le clone
HIV-1 pNL-4.3 (à une quantité correspondant à 3 ng d'antigène p24GAG), en présence de doses croissantes de différents composés (ΟμΜ, 5μΜ, 10μΜ 25 μΜ et 50 μΜ). La mesure de l'infectiosité est mesurée après 48h en évaluant le clivage du chlorophénol rouge -β-D-galactopyranoside (CPRG).
Les résultats sont présentés dans la figure 1 .
On constate que les composés UA2277 et UA2276 sont les deux composés les plus efficaces dans la mesure où NC50 est inférieur à 10μΜ.
En contrôle les IC50 du ténofovir et de ΓΑΖΤ ont été mesurées dans ce système et sont respectivement de 7 μΜ et 0, 1 μΜ.
Afin d'affiner la mesure des doses inférieures à 5 μΜ ont été testées pour le composé UA2276.
Les résultats sont montrés dans la figure 3. La figure 3 représente des courbes montrant la quantité de β-galactosidase (en %) en fonction de la quantité de composé (en μΜ) une évaluation de l'activité antivirale (courbe avec des carrés) et de la toxicité (courbe avec des losanges). Cette évaluation a été réalisée dans les mêmes conditions que celles décrites pour la figure 1 et 2. Dans ces conditions d'évaluation, l'IC5o du composé UA2276 a été déterminé à 1 μΜ, ce qui le rend environ 7 fois plus efficace que le ténofovir. Exemple 14 : évaluation de l'activité anti-VIH de dérivés nucléos(t)idiques
1. Objectifs
Cette étude s'est découpée en deux versants :
1 ) Identifier les meilleurs composés anti-VIH parmi les candidats nucléos(t)idiques en comparaison du PMPA ;
2) Mesurer l'efficacité des candidats identifiés vis-à-vis de la seconde cible cellulaire majeure du VIH, les cellules de la lignée macrophagique, et ;
3) Mesurer l'efficacité des mêmes candidats vis-à-vis de souches du VIH résistantes à la chimiothérapie actuelle car mutées au niveau de la transcriptase inverse (mutations K65R, TAMS, et/ou insertion en position 69) ;
2. Expérimentations
Les expériences ont systématiquement été réalisées en triplicata et à l'aide de cellules isolées de 3 donneurs différents pour les expérimentations en cultures primaires.
2.1. Mesure de l'activité anti-VIH-1 -LAI dans des cultures primaires de CMSP
L'activité anti-VIH des composés et des deux composés de référence, le PMPA et
ΓΑΖΤ, a été testée in vitro au moyen de cultures primaires de cellules mononucléées du sang périphérique humain (CMSP), préalablement activées par un mitogène, la phytohaemagglutinine (PHA)-P puis infectées par la souche de référence VIH-1-LAI (Barré-Sinoussi et al., 1983 Science, 1983, 220(4599), 868-871 ).
Plus précisément, ces cellules mononucléées ont été isolées du sang périphérique de donneurs en bonne santé par un gradient de densité sur coussin de Ficoll puis activées durant 3 jours par 1 μg/mL de PHA-P (Sigma) et 5 UI/mL d'interleukine(IL)-2 humaine recombinante (rHulL-2, Roche). Ces CMSP ont été cultivées à +37°C sous 5 % de C02 en atmosphère humide dans du milieu de culture RPMI 1640 glutamax™ supplémenté par 10 % de sérum de veau fœtal (SVF, préalablement inactivé par la chaleur (+56°C, 45 minutes)), une solution de 3 antibiotiques (pénicilline, streptomycine et, néomycine ; PSN) et 10 UI/mL de rHulL-2.
Au terme de l'activation mitogénique, les cellules ont été réparties dans les puits de microplaques 96 puits à raison de 150 000 cellules par puits. Elles ont été pré-traitées 30 minutes par des concentrations croissantes des différents composés à tester puis infectées par 100 « tissue culture infectious doses 50% (TCID50) » de la souche de référence à tropisme lymphocytaire, VIH-1 -LAI. Au laboratoire, ce virus a été exclusivement amplifié à l'aide de cellules mononucléées du sang de cordon (CMSC) ou de CMSP activées. Le stock viral a été titré à l'aide du même modèle expérimental, et la TCID50 calculée après dilution-limite du stock viral au moyen de la formule de Spearman-Kàrber (Kàrber, 1931 ). Sept jours après l'infection, les surnageants de culture ont été collectés et congelés à -20°C jusqu'à la mesure de la réplication virale via la quantification de l'activité enzymatique de la transcriptase inverse (Tl) à l'aide de la trousse Lenti kit RT (Cavidi).
En parallèle, au jour 7 de la culture, la cytotoxicité des composes a été évaluée vis- à-vis de CMSP activées par la PHA-P mais non-infectées. Ces éventuels effets vis-à- vis de la viabilité cellulaire ont été mesurés à l'aide d'un test colorimétrique au sel de méthyl de tétrazolium (MTS/PMS, Promega).
Les données chiffrées ont été analysées à l'aide du logiciel SoftMax®Pro 4.6 (Molecular Devices). Les pourcentages d'inhibition de l'activité Tl et de la viabilité cellulaire ont été calculés afin de déterminer les concentrations effectrices 50, 70 et 90% (CE50, CE70, et CE90) et concentrations cytotoxiques (CC50, CC70 et CC90) à partir d'une courbe d'effet-dose à 4 paramètres. L'indice de sélectivité (IS) a été calculé selon le rapport « CC50/CE50 ».
2.2. Mesure de l'activité antirétrovirale vis-à-vis de virus résistants aux inhibiteurs nucléos(t)ldiques de la Tl dans les cellules de la lignée lymphoïde T CD4+, H9 L'efficacité de 4 composés sélectionnés lors la première étape de screening vis-à-vis de VIH-1-LAI a été testée vis-à-vis de 6 souches virales résistantes, au moyen de cellules de la lignée lymphoïde T CD4+ H9 expérimentalement infectées. La souche virale de référence VIH-1-LAI a été testée en parallèle pour quantifier les degrés de résistance.
Les 6 souches virales résistantes sont issues du NIH AIDS Research & Référence Reagent Program VIH-1-4755-5, VIH-1-7303-3, VI H-1 -52534-2, VIH-1-56252-1 , VIH-1- 71361 -1 , et VIH-1-7324-1 ) sont porteuses de mutations dans la Tl (Les points de mutations de ces 6 virus sont précisés dans l'Annexe 1 ). Elles ont été retenues en fonction de la structure chimique des composés les plus efficaces avec des degrés de résistance vis-à-vis des nucléosides de la série L existants différents. Ces souches virales ont été amplifiées et les stocks viraux titrés & l'aide des cellules de la lignée H9.
Plus précisément, s'agissant du test antiviral, les cellules ont été réparties dans les puits de microplaques 96 puits à raison de 50 000 cellules par puits. Elles ont ensuite été pré-traitées 30 minutes par des concentrations croissantes des différents composés à tester puis infectées par 125 TCID50 des différentes souches résistantes. Sept et 14 jours après l'infection, les surnageants de culture ont été collectés et congelés à -20°C jusqu'à la mesure de la réplication virale via la quantification de l'activité enzymatique de la Tl. Les concentrations efficaces 50, 70 et 90% et les facteurs de résistance ont été calculées comme précédemment décrit. Une éventuelle cytotoxicité des molécules vis-à-vis des cellules de la lignée H9 a été appréciée par observation microscopique tout au long des cultures cellulaires. 2.3. Mesure de l'activité anti-VIH dans des cultures primaires de macrophages dérivés des monocytes
L'activité anti-VIH de l'AZT et du PMPA, comme molécules de référence, ainsi que des 4 composés sélectionnés lors du screening antivirale contre VI H-1 -LAI a été testée vis-à-vis de macrophages dérivés de monocytes (MDM) humains infectés expérimentalement par 4 souches à tropisme macrophagique (VIH-1/Ba-L, VIH-1-ADA, VIH-1-DAS et VIH-1 -SF162 (Gartner et al., 1986 ; Huang et al., 1993 ; Boussin et al.,
1987 ; Cheng-Mayer C et al., 1988)).
Après isolement des CMSP par un gradient de Ficoll, les monocytes sont séparés des autres éléments cellulaires par tri magnétique au moyen de billes CD14+ (Miltenyi). Ensuite, à raison de 250 000 cellules dans chaque puits d'une plaque 48 puits, les monocytes sont laissés 7 à 10 jours pour différenciation en macrophages à +37°C sous 5 % C02 en atmosphère humide, en milieu de culture RPMI 1640 glutamax™ supplémenté par 10 % de SVF décomplémenté et une solution de 3 antibiotiques (PSN ; Rogez et al., 2003) et de 2 ng/mL de GM-CSF et 10 ng/mL de M-CSF (Peprotech).
Au terme de ces 7 à 10 jours, après une observation microscopique permettant de s'assurer de la différenciation des monocytes en macrophages, les cellules ont été infectées par 2 500 TCID50 de chaque virus. Au laboratoire, ces souches virales ont été exclusivement amplifiées à l'aide de CMSC et/ou CMSP. Les stocks viraux ont été titrés à l'aide de CMSP activées par la PHA-P, et les TCID50 calculées comme préalablement décrit par dilution-limite et au moyen de la formule de Spearman-Karber (Kàrber, 1931 ). Tout au long des 35 jours de culture, les surnageants ont été collectés et congelés à -20°C jusqu'à la mesure de la réplication virale et, le milieu de culture renouvelé. La réplication virale a été mesurée en quantifiant l'activité enzymatique de la Tl dans les surnageants de culture des 21 premiers jours, toujours à l'aide de la trousse Lenti kit RT (Cavidi). Les concentrations efficaces 50, 70 et 90% ont été calculées comme précédemment décrit et les effets des molécules sur la viabilité cellulaire ont été évalués en parallèle, tout au long des cultures par des observations microscopiques.
2.4. Composés utilisés
(L)a : énantiomère L ; (D) : énantiomère D ; (+/-)c : racémique
3. RESULTATS
3.1. Activité anti-VIH-1 -LAI et cytotoxicité vis-à-vis de CMSP
Dans l'ensemble de ces cultures, une réplication de la souche virale VIH-1 -LAI a été détectée à un niveau préalablement observé lors de précédentes expériences. Dans ce modèle expérimental et de manière cohérente pour les 6 donneurs de cellules et avec de précédentes expériences, ΓΑΖΤ inhibe la réplication virale aux concentrations de l'ordre du nanomolaire (CE50 : 6 ± 3 nM, CE70 : 12 ± 5 nM & CE90 : 44 ± 22 nM). De même, le PMPA utilisé comme seconde molécule de référence lors de cette expérimentation est efficace vis-à-vis de la souche VIH-1-LAI avec des concentrations efficaces 50, 70 et 90% respectivement égales à 1076 ± 1112 nM, 2288 ± 2048 nM et 8103 ± 4971 nM (Tableau 1 ).
Concentrations efficaces ou cytotoxiques (nM)
Composés IS
CE50 CE70 CE90 CC50
UA2275 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
UA2276 187 ± 171 479 ± 159 1556 ± 644 ≥10 000 ≥236 ± 381
1845 ± 3949 ±
UA2277 879 ± 513 ≥10 000 ≥15 ± 10
1463 3189
≥7995 ± ≥ 9808 ±
UA2278 ≥10 000 ≥10 000 ≥1.3 ± 0.6
2806 333
4751 ± ≥ 6158 ±
UA2292 ≥10 000 ≥10 000 ≥4.7 ± 4.7
4606 4367
4305 ± ≥ 8348 ±
UA2293 ≥10 000 ≥10 000 ≥6 ± 4.2
4037 2862
UA2328 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
UA2329 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
2070 ±
UA2330 63 ± 43 162 ± 93 5201 ± 5809 70 ± 36
3066
4270 ±
UA2331 515 ± 136 1472 ± 666 ≥10 000 ≥20 ± 5.4
2999
UA2336 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
UA2337 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
UA2338 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 ≥1
AZT 6 ± 3 12 ± 5 44 ± 22 ≥1 000 ≥255 ± 215
1076 ± 2288 ± 8103 ±
PMPA ≥100 000 ≥306 ± 277
1112 2048 4971
Tableau 1. Activité anti-VIH-1-LAI dans des CMSP infectées expérimentalement Les résultats sont issus de 3 ou 6 (pour UA2276, ΙΆΖΤ et le PMPA) expériences indépendantes. Les concentrations efficaces ou cytotoxiques 50, 70 et 90% sont une moyenne des valeurs obtenues pour ces 3 ou 6 donneurs. Les résultats sont exprimés en nM. IS : Indice de sélectivité.
L'AZT et le PMPA disposent d'un large indice de sélectivité (≥ 255 ± 215 et≥ 306 ±
277 respectivement) puisqu'aucune cytotoxicité n'est observée à la concentration maximale testée (i.e. 1 μΜ et 100 μΜ respectivement).
Quatre composés parmi les composés UA testés démontrent une efficacité anti-VIH-
1 avec des index de sélectivité respectivement de 236 pour UA2276, 15 pour UA2277, 70 pour UA2330 et 20 pour UA2331. Les deux composés les plus efficaces sont
UA2276 (dont l'activité a été confirmée dans une seconde expérience) et UA2330 ;
Toutefois, ce dernier (UA2330) présente une faible cytotoxicité à la plus forte concentration testée dans ces conditions expérimentales (i.e. 10 μΜ, 64% en moyenne sur les trois donneurs de CMSP ; CC50 de 5201 ± 5809 nM).
II est à noter que les CE50 sont environ 10 à 100 fois plus faibles que celles du
PMPA, structurellement le plus proche des molécules de référence testée, 187 nM pour
UA2276 et 63 nM pour UA2330 vs. 1 076 nM pour le PMPA.
Les autres composés UA ont soit des efficacités et non reproductibles d'un donneur à un autre (ce qui est aussi un reflet du manque d'efficacité) entre les différents donneurs testés comme les composés UA2278, UA2292, UA2293 et UA2294), soit aucune efficacité anti-VIH-1 .
Les 4 composés les plus fortement efficaces i.e. UA2276, UA2277, UA2330 et
UA2331 ont été retenus et leur efficacité vis-à-vis de virus résistants à plusieurs antirétroviraux usités en clinique et vis-à-vis des monocytes/macrophages infectés in vitro par le VIH a été mesurée par la suite.
3.2. Activité anti-VIH-1 -LAI et cytotoxicité vis-à-vis de cellules de la lignée
lymphoïde T4, Η9
Les 4 composés UA2276, UA2277, UA2330 et UA2331 conservent leur efficacité anti-VIH-1 dans le modèle s'appuyant sur les cellules de la lignée H9 et non les CMSP. La diminution de la viabilité cellulaire induite par UA2330 est moindre sur les cellules de la lignée H9 que sur CMSP avec une toxicité relative de l'ordre de 18%. Pour les autres composés testés, aucune toxicité cellulaire n'a été observée.
Les résultats d'activité anti-VIH-1 -LAI dans le modèle des cellules de la lignée H9 sont présentés dans le tableau 2.
H9 CMSP
UA 2276 CE50 331 187 ± 171
CE70 573 479 ± 159
CE90 1349 1556 ± 644
IS ≥30 ≥236 ± 381
UA 2277 CE50 662 879 ± 513
CE70 936 1845 ± 1463
CE90 1555 3949 ± 3189
IS ≥15 ≥15 ± 10
UA 2330 CE50 113 63 ± 43
CE70 213 162 ± 93
CE90 586 2070 ± 3066
IS ≥89 70 ± 36
UA 2331 CE50 1851 515 ± 136
CE70 4004 1472 ± 666
CE90 ≥10 000 4270 ± 2999
IS ≥5 ≥20 ± 5.4
AZT CE50 17 6 ± 3
CE70 41 12 ± 5
CE90 111 44 ± 22
IS ≥60 ≥255 ± 215
PMPA CE50 134 1076 ± 1112
CE70 315 2288 ± 2048
CE90 734 8103 ± 4971
IS ≥742 ≥306 ± 277 Tableau 2. Comparaison des activités anti-VIH-1-LAI de l'AZT, du PMPA et des composés UA2276, UA2277, UA2330 et UA2331 dans la lignée
cellulaire H9 et les CMSP. Les résultats sont exprimés en nM. IS: index de sélectivité
Hormis le PMPA et le composé UA 2331 (respectivement, 10 fois plus efficace et 10 fois moins efficace dans les cellules H9), les composés présentent des activités comparables entre les deux types cellulaires. La CE50 la plus faible est observée pour le composé UA2330 (CE50 = 113 nM). L'absence de toxicité de ce composé dans la lignée cellulaire H9 fait que ce composé présente un IS supérieur dans ce modèle expérimental que le composé UA2276. Ces deux composés sont donc bien les plus actifs vis-à-vis de la souche VI H-1 -LAI et les plus intéressants.
3.3. Efficacité vis-à-vis de souches virales résistantes aux INTI
Les 6 souches virales sélectionnées (VI H-1 -4755-5, VIH-1-7303-3, VIH-1-52534-2, VI H-1 -56252-1 , VIH-1-71361-1 , et VIH-1-7324-1 ) se sont répliquées à haut bruit dans les cellules de la lignée H9.
Selon les données du NIH (Annexe 1 ), tous les virus sauf VIH-1 -71361 -1 sont résistants à ΓΑΖΤ. Dans nos conditions expérimentales et en s'attachant au RF calculé à partir des EC50 mais aussi à partir des EC70 et/ou EC90, les résultats sont identiques avec seul VIH-1 -71361 -1 comme souche sensible à ΓΑΖΤ et, les 3 virus les plus résistants (RF≥60) sont VI H-1 -52534-2, VIH-1-4755-5 et VIH-1-7303-3).
Pour le PMPA et en s'attachant au RF calculés à partir des EC50, 70 ou 90, tous les virus sont résistants à cette molécule et VI H-1 -56252-1 (RF50 = 12 & RF90 RF≥136) & VIH-1-7303-3 (RF50 = 272 & RF90 RF=127) sont les plus résistants, comme décrit par le NIH (Tableau 3).
UA 2276 UA 2277
Virus
CE50 CE70 CE90 RF CE50 CE70 CE90 RF
LAI 331 573 1 349 662 936 1555
56252-1 687 ≥10 000 ≥10 000 2 1005 ≥10 000 ≥10 000 2
7324-1 420 1 983 9 138 1 176 1 683 ≥10 000 0
52534-2 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 30 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 15
71361 -1 906 2025 10 000 2 3 728 7 325 10 000 6
4755-5 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 30 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 15
7303-3 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 30 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 15
UA 2330 UA 2331
Virus
CE50 CE70 CE90 RF CE50 CE70 CE90 RF
LAI 113 213 586 1 851 4 004 ≥10 000
56252-1 99 ≥10 000 ≥10 000 1 963 ≥10 000 ≥10 000 1
7324-1 16 73 705 0 242 853 3 556 0
52534-2 586 1 589 ≥10 000 5 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 5
71361 -1 110 125 162 1 686 1 299 7 803 0
4755-5 589 785 980 5 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 5
7303-3 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 47 ≥10 000 ≥10 000 ≥10 000 5
AZT PMPA
Virus
CE50 CE70 CE90 RF CE50 CE70 CE90 RF
LAI 17 41 111 134 315 734
≥100
56252-1 28 258 ≥1 000 2 1 649 3 641 12
000
7324-1 29 331 ≥1 000 2 100 533 4 547 1
52534-2 ≥1 000 ≥1 000 ≥1 000 60 6 173 15 575 46 361 46
71361 -1 36 47 ≥1 000 2 96 681 11 122 1
4755-5 ≥1 000 ≥1 000 ≥1 000 60 177 1 547 38 611 1
7303-3 ≥1 000 ≥1 000 ≥1 000 60 36 632 59 418 92 932 272
Tableau 3. Efficacité anti-virus résistants des 4 composés UA2276, UA2277,
UA2330 et UA2331 ainsi que de ΓΑΖΤ et du PMPA dans la lignée H9. Les résultats sont exprimés en nM. RF: facteur de résistance
S'agissant des composés UA, si on s'intéresse aux EC90 des quatre composés pour tous les virus résistants, on s'aperçoit qu'UA2276 et UA2277 sont inefficaces vis-à-vis de tous ces virus. En revanche, les composés UA2330 et UA2331 sont plus efficaces vis-à-vis de certains de ces virus. Si on s'intéresse à la plus efficace des deux vis-à-vis de VIH-1-LAI mais aussi dans ce domaine i.e. UA2330, cette molécule est efficace, certes à des degrés variables et pas contre les souches les plus résistantes au PMPA, vis-à-vis de 4 des souches testées i.e. VIH-1 -4755-5, VI H-1 -52534-2, VIH-1 -71361-1 , et VIH-1-7324-1. Il est à noter que toutes ces 4 souches sont hautement résistantes à la 3TC, un autre dérivé nucléosidique de série L.
Au niveau moléculaire, UA2330 est capable d'être efficace vis-à-vis des virus portant la mutation en position 184, responsable majoritairement de la résistance à la 3TC. Pour la mutation, en position 65 KDR, il semble en être de même puisque ce composé est efficace contre VIH-1 -71361-1 , muté uniquement en position 65. En revanche, UA2330 pourrait être moins efficace vis-à-vis des souches virales porteuses des mutations associées avec celle en position 151 Q -» M (i.e. mutations en positions 75, 77, 116 & 151 ). Ces mutations distinguent les souches VIH-1-71361-1 et VIH-1-56252- 1 , la seconde portant ces mutations « 151 » en plus de celle en position 65 K->R (Figure 1 ). 3.4. Activité anti-VIH dans les cultures primaires de MDM infectés par des souches à tropisme macrophagique
Il est à noter qu'aucune altération de la viabilité cellulaire n'a été observée pour tous les composés testés sauf pour UA2331 pour le premier donneur à la concentration de 100 μΜ.
Les 4 virus se répliquent à des niveaux différents dans les MDM humains. A 100 nM,
ΓΑΖΤ inhibe complètement ou quasi-complètement i.e. entre 90 et 100% la réplication des 4 souches rétrovirales dans les MDM (Tableaux 4, 5, 6 & 7). A 10 nM, cette activité est de l'ordre de 50 ou 80% (Tableaux 4, 5, 6 & 7). Le PMPA, autre molécule de référence est légèrement moins efficace que l'AZT puisque l'inhibition de la réplication virale est complète jusqu'à 1 ou 10 μΜ.
S'agissant des molécules UA, elles sont toutes moins efficaces que ces deux molécules de référence. Des quatre molécules UA2330 & UA2276 restent les plus efficaces des 4 (Tableaux 4, 5, 6 & 7). Elles inhibent la réplication virale à hauteur de 80%, 100%, 85-90% & 100% pour respectivement VIH-1/Ba-L, VIH-1-DAS, VIH-1-ADA & VIH-1-SF162. En terme d'EC50 calculées pour le modèle d'infection par VIH-1/Ba-L, les valeurs sont les suivantes pour les 3 donneurs : UA2330 = 2 855 ± 940 nM & UA2276 = 5276 ± 2538 nM.
/Ba-L % inhibition
Conc.
PMPA AZT UA 2276 UA 2277 UA2330 UA2331 (nM)
100000 98 ± 1 - - - - -
10000 98 ± 1 - 77 ±9 71 ±4 83 ± 5 51 ±6
1000 91 ±6 - 13 ± 16 24 ± 5 26 ± 12 3 ± 18
100 47 ± 16 96 ±2 0 ± 14 11 ± 17 0±27 0 ±22
54 ±
10 0±21 0 ± 10 7 ± 17 0 ± 12 0 ± 16
12
1 3 ± 11 0 ± 5 1 ± 17 0 ± 17 0±30
0,1 0±6 0 ± 19 0±33 0±27
ED50 - 52^6 R ± 2 2855 ± 940 9™ ±
536 538 461 367
Ρητη + 8335 ±2 9822 ± 6839 ± > in nnn
ED70 232 ±95 - ^ ^ 24QQ ≥ 10000
ED90 - ≥ 10000 ≥ 10000 ≥ 10000 ≥ 10000
Tableau 4. Activité anti-VIH-1/Ba-L de l'AZT, du PMPA et des 4 composés UA vis-à- vis de macrophages dérivés des monocytes humains, infectés expérimentalement. Dans nos conditions expérimentales, l'activité antirétrovirale d'une molécule antivirale de référence comme l'AZT (10 nM) est complète (100 ± 0% d'inhibition)
-ADA % inhibition
Conc. (nM) PMPA AZT UA2276 UA2277 UA2330 UA2331
100000 98 ±0 - - - - -
10000 98 ±0 - 91 ±4 82 ± 19 83 ± 17 65 ± 19
1000 - - 34 ±35 64 ±8 11 ± 57 29 ± 22
100 - 100 ±0
10 - 42 ±50
Tableau 5. Activité anti-VIH-1 -ADA de ΙΆΖΤ, du PMPA et des 4 composés UA vis-à-vis de macrophages dérivés des monocytes humains, infectés expérimentalement.
-DAS % inhibition
Conc. (nM) PMPA AZT UA 2276 UA 2277 UA 2330 UA 2331
100 000 98 ± 3 - - - - -
10 000 100 ± 0 - 100 ± 0 96 ± 5 100 ± 0 83 ± 9
1 000 - - 78 ± 6 85 ± 4 24 ± 22 60 ± 8
100 - 100 ± 0
10 - 87 ± 2 - - - - Tableau 6. Activité anti-VIH-1 -DAS de ΙΆΖΤ, du PMPA et des 4 composés UA vis-à-vis de macrophages dérivés des monocytes humains, infectés expérimentalement.
-SF 162 % i nhibition
Conc. (nM) PMPA AZT UA 2276 UA 2277 UA 2330 UA 2331
100 000 100 ± 0
10 000 100 ± 0 97 ± 2 99 ± 1 81 ± 14 100 100 ± 0 Tableau 7. Activité anti-VIH-1 -SF162 de ΙΆΖΤ, du PMPA et des 4 composés
UA vis-à-vis de macrophages dérivés des monocytes humains, infectés expérimentalement.
4. Conclusions
Les efficacités antivirales des deux molécules de référence sont cohérentes avec celles observées au préalable lors d'autres expérimentations.
S'agissant des molécules UA, deux composés sont plus efficaces, les composés UA2276 & UA2330. Même si l'efficacité vis-à-vis des macrophages infectés est moindre, on notera l'efficacité toute particulière de l'UA2330 vis-à-vis de certains virus résistants.
L'invention n'est pas limitée aux modes de réalisations présentés et d'autres modes de réalisation apparaîtront clairement à l'homme du métier.
Claims
1 . Composé de formule I suivante
ou un sel de celui-ci,
ou une pro-drogue de celui-ci,
où C* représente un carbone asymétrique, et
où indépendamment les uns des autres :
- Ri représente une purine ou une pyrimidine, ou plus généralement un hétérocycle azoté,
- Y représente un atome d'oxygène,
- X représente un atome d'hydrogène, un groupe vinyle, un groupe éthynyle, un groupe -CF3, un groupe -CH2OH, un groupe monofluorométhyle -CH2F, un groupe méthylazide -CH2N3 , un groupe méthyle, et
- Z-i et Z2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un groupe phosphate, un groupe pyrophosphate, ou un groupement protecteur temporaire de la fonction phosphate ou phosphonate..
2. Composé selon la revendication 1 , choisi parmi
- les composés de formule la suivante :
- Les composés de formule Ib suivante :
où R1 , X, Y, Z-i et Z2 sont tels que définis dans la revendication 1.
3. Composé selon la revendication 1 ou la revendication 2, ledit composé étant choisi par les composés suivants :
4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3.
ou un sel de ceux-ci.
où Zi et Z2 sont tels que définis dans la revendication 1.
5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ledit composé étant choisi parmi les composés suivants :
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci,
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
- le composé
ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
, ou les formes mono ou disodique de celui-ci
- le composé
, ou les formes mono, di, tri ou tétrasodique de celui-ci,
le composé
, ou les formes mono ou
6. Racémate essentiellement constitué d'un mélange des composés de formule la et Ib suivantes
ou d'un sel de ceux-ci,
ou une prodrogue de ceux-ci
où indépendamment les uns des autres :
- R1 représente une purine ou une pyrimidine,
- Y représente un atome d'oxygène,
- X représente un atome d'hydrogène, un groupe vinyle, un groupe éthynyle, un groupe -CF3, un groupe méthylalcool -CH2OH, un groupe monofluoromethyle -CH2F, un groupe methylazide— CH2N3 ou un groupe méthyle, ou un -OH, de sorte que si X=- OH, Y est un -CH2- et
- Z-i et Z2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène, un groupe phosphate, un groupe pyrophosphate, ou un groupement protecteur temporaire de la fonction phosphate ou phosphonate,
et notamment les racémates suivants, ou des sels de ceux-ci:
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique,
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique,
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
ceux-ci, notamment un sel mono ou disodique et
- un mélange des composés énantiomères de formules suivantes :
7. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 5, ou un racémate selon la revendication 6, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
8. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, ou un racémate selon la revendication 6, pour son utilisation en tant que médicament.
9. Composition comprenant au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, et/ou au moins un racémate selon la revendication 6, pour son utilisation dans le cadre du traitement d'infections virales, notamment des infections rétrovi raies.
10. Composition pour son utilisation selon la revendication 9, dans laquelle ladite infection virale est une infection par les virus de l'hépatite B (HBV) ou de l'hépatite C (HCV), les virus HTLV-1 ou 2, les virus de l'herpès 1 et 2, les virus de la famille des Coronaviridae, dont les Coronavirus, notamment le SARS-CoV responsable du SRAS, les virus de la famille des Flaviviridae, dont le virus de la fièvre jaune, le virus du Nil occidental, et le virus de la dengue, les virus de la famille des Picornaviridae, dont les poliovirus et les rhinovirus et les virus de la famille des Togaviridae, dont le virus de la
rubéole, le virus de la Ross River, le virus de Sindbis et le virus du Chikungunya.
11 . Composition pour son utilisation selon la revendication 9, dans laquelle ladite infection virale est une infection par le virus de l'immunodéficience humaine.
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|---|---|---|---|
| FR1562934A FR3045607A1 (fr) | 2015-12-21 | 2015-12-21 | Derives de nucleotides et leurs utilisations |
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|---|---|---|---|---|
| US20070225249A1 (en) * | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Junxing Shi | 2'-Fluoronucleoside phosphonates as antiviral agents |
-
2015
- 2015-12-21 FR FR1562934A patent/FR3045607A1/fr not_active Withdrawn
-
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- 2016-12-20 WO PCT/FR2016/053580 patent/WO2017109388A1/fr not_active Ceased
Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
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