WO2017043612A1 - Agent for improving dry eye - Google Patents

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WO2017043612A1
WO2017043612A1 PCT/JP2016/076541 JP2016076541W WO2017043612A1 WO 2017043612 A1 WO2017043612 A1 WO 2017043612A1 JP 2016076541 W JP2016076541 W JP 2016076541W WO 2017043612 A1 WO2017043612 A1 WO 2017043612A1
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dry eye
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水島　徹
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株式会社Ｌｔｔバイオファーマ
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Abstract

Provided is an agent for improving dry eye that has a strong effect and few side effects. An agent for improving dry eye or an agent for suppressing MCP-1 expression has as an active ingredient dipivefrin or adrenaline.

Description

ドライアイ改善剤Dry eye improver
　本発明は、ドライアイ改善剤に関する。 The present invention relates to a dry eye improving agent.
　ドライアイは、様々な要因による涙液及び角結膜上皮の慢性疾患であり、眼不快感や視機能異常を伴う疾患であり、日本のドライアイ患者数は約２２００万人とも言われており、増加傾向にある。また加齢によって有病率は上昇する。 Dry eye is a chronic disease of tears and keratoconjunctival epithelium due to various factors, and is a disease accompanied by eye discomfort and abnormal visual function. It is said that there are about 22 million dry eye patients in Japan. It is increasing. The prevalence increases with aging.
　ドライアイは、涙液の分泌減少・蒸発増加によって涙液の高浸透圧化が生じ、角膜、結膜において炎症反応、細胞傷害が起こり、涙液層が不安定化する結果、発症進行すると考えられている（非特許文献１）。 Dry eye is thought to develop as a result of increased tear osmotic pressure due to decreased secretion and increased evaporation of the tear, causing inflammatory reactions and cell damage in the cornea and conjunctiva, and destabilizing the tear film. (Non-Patent Document 1).
　現在のドライアイの治療法としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム（ムチン分泌促進）、レバミピド（ムチン産生促進）等の涙液補充療法や眼鏡やゴーグルの装用、涙点プラグ法等が用いられている。
　また、特許文献１には、アドレナリンβ受容体アゴニスト、特にアドレナリンβ２受容体アゴニスト（Ｒ－サルブタモール）が、ドライアイにより傷害を受けている動物のマイボーム腺分泌を促進することが記載されている。 Current treatments for dry eye include tear fluid replacement therapy such as sodium hyaluronate, diquafosol sodium (promoting mucin secretion), rebamipide (promoting mucin production), wearing glasses and goggles, punctal plug method, etc. It has been.
Patent Document 1 describes that an adrenergic β receptor agonist, particularly an adrenergic β2 receptor agonist (R-salbutamol) promotes meibomian gland secretion in animals damaged by dry eye.
国際公開第２０１１／０６８７８６号International Publication No. 2011/068786
　しかしながら、特許文献１に記載のサルブタモールのドライアイ改善効果は十分なものではなく、さらにドライアイ改善効果が強く、かつ副作用の発生頻度の少ないドライアイ改善剤が望まれていた。
　従って、本発明の課題は、効果が強く、かつ副作用の少ないドライアイ改善剤を提供することにある。 However, the dry eye improving effect of salbutamol described in Patent Document 1 is not sufficient, and a dry eye improving agent having a stronger dry eye improving effect and less frequent side effects has been desired.
Therefore, the subject of this invention is providing the dry eye improving agent with a strong effect and few side effects.
　そこで本発明者は、新たなドライアイ改善剤を開発すべく種々検討したところ、前記の特許文献１の記載によればアドレナリンβ２受容体選択的アゴニストがドライアイ改善剤として有効であるとのことであるが、β２受容体選択的アゴニストではなく、全く意外にもα及びβ受容体の両者を刺激する物質であるアドレナリン及びジピベフリンがサルブタモールに比べて優れたドライアイ改善効果及び炎症性サイトカインＭＣＰ－１発現抑制効果を有し、かつサルブタモールのように眼圧を上昇させないため、安全なドライアイ改善剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。 Therefore, the present inventor has made various studies to develop a new dry eye improving agent. According to the description in Patent Document 1, the adrenergic β2 receptor selective agonist is effective as a dry eye improving agent. However, adrenaline and dipivefrin, which are not β2-receptor selective agonists and are substances that stimulate both α and β receptors, are surprisingly superior to salbutamol in improving dry eye and inflammatory cytokine MCP- 1 It has the effect of suppressing the expression and does not increase the intraocular pressure unlike salbutamol, and thus has been found useful as a safe dry eye improving agent, and has completed the present invention.
　すなわち、本発明は、次の〔１〕～〔８〕を提供するものである。
〔１〕ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするドライアイ改善剤。
〔２〕ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするＭＣＰ－１発現抑制剤。
〔３〕ドライアイ改善剤製造のためのジピベフリン又はアドレナリンの使用。
〔４〕ＭＣＰ－１発現抑制剤製造のためのジピベフリン又はアドレナリンの使用。
〔５〕ドライアイを改善するためのジピベフリン又はアドレナリン。
〔６〕ＭＣＰ－１の発現を抑制するためのジピベフリン又はアドレナリン。
〔７〕ジピベフリン又はアドレナリンの有効量を投与することを特徴とするドライアイ改善方法。
〔８〕ジピベフリン又はアドレナリンの有効量を投与することを特徴とするＭＣＰ－１の発現抑制方法。 That is, the present invention provides the following [1] to [8].
[1] A dry eye improving agent containing dipivefrin or adrenaline as an active ingredient.
[2] An MCP-1 expression inhibitor comprising dipivefrin or adrenaline as an active ingredient.
[3] Use of dipivefrine or adrenaline for the production of a dry eye improving agent.
[4] Use of dipivefrine or adrenaline for the production of an MCP-1 expression inhibitor.
[5] Dipivefrine or adrenaline for improving dry eye.
[6] Dipivefrine or adrenaline for suppressing the expression of MCP-1.
[7] A method for improving dry eye, comprising administering an effective amount of dipivefrine or adrenaline.
[8] A method for suppressing MCP-1 expression, comprising administering an effective amount of dipivefrin or adrenaline.
　本発明のドライアイ改善剤は、ドライアイ改善効果に優れ、かつ眼圧を上昇させず、さらにムチン量を増大させるため副作用の少ないドライアイ改善剤として有用である。 The dry eye improving agent of the present invention is useful as a dry eye improving agent having an excellent dry eye improving effect, does not increase intraocular pressure, and further increases the amount of mucin.
高浸透圧条件（ＮａＣｌ　１５０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。It shows the inhibitory action of adrenaline against cell damage under high osmotic pressure conditions (NaCl 150 mM). 高浸透圧条件（ＮａＣｌ　１５０ｍＭ）における細胞傷害に対するサルブタモールの抑制作用を示す。It shows the inhibitory action of salbutamol against cell damage under high osmotic pressure conditions (NaCl 150 mM). 高浸透圧条件（グルコース　２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。It shows the inhibitory action of adrenaline against cell damage under high osmotic pressure conditions (glucose 280 mM). 高浸透圧条件（ソルビトール　２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。It shows the inhibitory action of adrenaline against cell damage under high osmotic pressure conditions (sorbitol 280 mM). 高浸透圧条件（スクロース　２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。It shows the inhibitory action of adrenaline against cell injury under high osmotic pressure conditions (sucrose 280 mM). 高浸透圧条件下（ＮａＣｌ　１５０ｍＭ）におけるアドレナリンのカスパーゼ－３様活性を示す。It shows the caspase-3-like activity of adrenaline under high osmotic pressure conditions (NaCl 150 mM). 高浸透圧条件下（ＮａＣｌ　１５０ｍＭ）におけるアドレナリンのアポトーシス抑制作用を示す。It shows the apoptosis inhibitory effect of adrenaline under high osmotic pressure conditions (NaCl 150 mM). ラットドライアイモデルのコットン系テストによる涙液量（ｓｃｈｉｍｅｒ　ｓｃｏｒｅ）に対する作用を示す。The effect | action with respect to the tear amount (schimmer score) by the cotton type test of a rat dry eye model is shown. ラットドライアイモデルにおける角膜の画像を示す。The image of the cornea in a rat dry eye model is shown. ラットドライアイモデルのフルオレセインのスコアに対する作用を示す。The effect | action with respect to the score of the fluorescein of a rat dry eye model is shown. ラットドライアイモデルにおける生細胞量（ＴＵＮＥＬ陽性細胞）を示す。The amount of living cells (TUNEL positive cells) in a rat dry eye model is shown. ムチンの発現効果を示す。The expression effect of mucin is shown. ラットの眼圧に対する作用を示す。The effect | action with respect to the intraocular pressure of a rat is shown. 高浸透圧条件（ＮａＣｌ　１００ｍＭ）におけるＭＣＰ－１発現に対するアドレナリンの抑制作用を示す。2 shows the inhibitory action of adrenaline on MCP-1 expression under high osmotic pressure conditions (NaCl 100 mM). ＬＰＳ刺激によるＭＣＰ－１発現に対するアドレナリンの抑制作用を示す。2 shows the inhibitory action of adrenaline on MCP-1 expression by LPS stimulation. 高浸透圧条件（ＮａＣｌ　１００ｍＭ）におけるＭＣＰ－１発現に対するα1アゴニスト（ナファゾリン）の作用を示す。The effect of α 1 agonist (naphazoline) on MCP-1 expression under hyperosmotic conditions (NaCl 100 mM) is shown. 高浸透圧条件（ＮａＣｌ　１００ｍＭ）におけるＭＣＰ－１発現に対するβ2アゴニスト（サルブタモール）の作用を示す。The effect of β 2 agonist (salbutamol) on MCP-1 expression under hyperosmotic conditions (NaCl 100 mM) is shown. スコポラミン持続投与によるＭＣＰ－１発現に対するアドレナリン点眼の作用を示す。ＣＲＬはコントロール、Ｖｅｈｉｃｌｅは生理食塩水、Ａｄｒｅはアドレナリン投与群。The effect of adrenaline eye drops on MCP-1 expression by continuous administration of scopolamine is shown. CRL is control, Vehicle is physiological saline, and Adre is adrenaline administration group.
　本発明のドライアイ改善剤及びＭＣＰ－１発現抑制剤の有効成分は、ジピベフリン又はアドレナリンである。ここでアドレナリンは、α及びβ受容体の両者を刺激することが知られている。アドレナリンは、アナフィラキシーショックや敗血症に対する血管収縮薬、気管支喘息発作時の気管支拡張薬として用いられているが、ドライアイ治療には用いられていない。 The active ingredient of the dry eye improving agent and MCP-1 expression inhibitor of the present invention is dipivefrine or adrenaline. Here, adrenaline is known to stimulate both α and β receptors. Adrenaline is used as a vasoconstrictor for anaphylactic shock and sepsis, and as a bronchodilator during bronchial asthma attacks, but not for dry eye treatment.
　ジピベフリンは、化学名〔２（２，２－ジメチルプロパノイルオキシ）－４－（１－ヒドロキシ－２－メチルアミノ－エチル）フェニル〕２，２－ジメチルプロパノエートの化合物であり、アドレナリンのプロドラッグであるからα及びβ受容体の両者を刺激する作用を有し、開放隅角緑内障の治療薬として用いられている。しかし、ドライアイ治療には用いられていない。 Dipivefrine is a compound having the chemical name [2 (2,2-dimethylpropanoyloxy) -4- (1-hydroxy-2-methylamino-ethyl) phenyl] 2,2-dimethylpropanoate, and is a prodrug of adrenaline. Since it is a drug, it has the effect of stimulating both α and β receptors, and is used as a therapeutic agent for open-angle glaucoma. However, it is not used for dry eye treatment.
　アドレナリン及びジピベフリンには、水酸基が結合した炭素原子が不斉炭素原子であることから、光学異性体があるので、光学活性体も含まれる。アドレナリンの場合は（Ｒ）体が好ましく、ジピベフリンの場合は（±）体が好ましい。 Adrenaline and dipivefrine include optical isomers because the carbon atom to which the hydroxyl group is bonded is an asymmetric carbon atom, and therefore include optically active substances. In the case of adrenaline, the (R) form is preferred, and in the case of dipivefrine, the (±) form is preferred.
　ジピベフリン及びアドレナリンは、後記実施例に示すように、高浸透圧ストレスによる角膜上皮細胞生存率の低下を抑制し、高浸透圧ストレス依存の角膜上皮細胞アポトーシスを抑制し、角膜傷害を抑制し、ムチン量を増大させる作用を有するためドライアイ改善剤として有用である。また、ジピベフリン及びアドレナリンは、眼圧を上昇させないことから、サルブタモールのような副作用を発生しないと考えられる。
　また、ジピベフリン及びアドレナリンは、高浸透圧ストレス及びＬＰＳ刺激によるＭＣＰ－１の発現を強く抑制し、さらにスコポラミン持続投与によるＭＣＰ－１の発現も強く抑制する。従って、ジピベフリン及びアドレナリンは、炎症性サイトカインであるＭＣＰ－１の発現を抑制することにより、ドライアイ改善効果を示しているものと考えられる。なお、β2アゴニストであるサルブタモールは、高浸透圧ストレスによるＭＣＰ－１の発現を抑制しない。 As shown in the Examples below, dipivefrin and adrenaline inhibit corneal epithelial cell viability due to hyperosmotic stress, inhibit corneal epithelial cell apoptosis dependent on hyperosmotic stress, inhibit corneal injury, Since it has the effect of increasing the amount, it is useful as a dry eye improving agent. In addition, dipivefrin and adrenaline do not increase intraocular pressure, and thus are considered not to cause side effects such as salbutamol.
Moreover, dipivefrin and adrenaline strongly suppress the expression of MCP-1 by hyperosmotic stress and LPS stimulation, and also strongly suppress the expression of MCP-1 by continuous administration of scopolamine. Therefore, dipivefrin and adrenaline are considered to have an effect of improving dry eye by suppressing the expression of inflammatory cytokine MCP-1. Note that salbutamol, a β 2 agonist, does not suppress the expression of MCP-1 due to hyperosmotic stress.
　本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ－１発現抑制剤の投与形態としては、点眼剤等が挙げられる。点眼剤の形態とするには、薬学的に許容される担体とともに製剤化することができる。そのような担体としては、例えば、メントール、ボルネオール、カンフル等の清涼化剤、クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリウム、フェネチルアルコール、パラオキシ安息香酸エステル類、ソルビン酸カリウム等の保存剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、プロピレングリコール等の等張化剤、エデト酸ナトリウム、シクロデキストリン、亜硫酸水素ナトリウム等の安定化剤、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等の粘稠剤、塩酸、クエン酸またはその塩、ホウ酸またはその塩、リン酸またはその塩、酢酸またはその塩、酒石酸またはその塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のｐＨ調整剤が挙げられる。本発明のドライアイ改善剤を点眼剤とする場合には、ジピベフリン又はアドレナリンに加えて、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム、レバミピド等を配合することもできる。 Examples of the administration form of the dry eye improving agent or MCP-1 expression inhibitor of the present invention include eye drops and the like. In the case of an eye drop, it can be formulated with a pharmaceutically acceptable carrier. Such carriers include, for example, refreshing agents such as menthol, borneol, camphor, chlorobutanol, sodium dehydroacetate, phenethyl alcohol, paraoxybenzoates, preservatives such as potassium sorbate, sodium chloride, potassium chloride, Isotonic agents such as mannitol, propylene glycol, stabilizers such as sodium edetate, cyclodextrin, sodium bisulfite, thickeners such as polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, hydroxyethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, methylcellulose, Hydrochloric acid, citric acid or its salt, boric acid or its salt, phosphoric acid or its salt, acetic acid or its salt, tartaric acid or its salt, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate Beam, and a pH adjusting agent sodium hydrogen carbonate. When the dry eye improving agent of the present invention is used as an eye drop, sodium hyaluronate, diquafosol sodium, rebamipide or the like can be added in addition to dipivefrine or adrenaline.
　さらに、本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ－１発現抑制剤中における本発明の有効成分の含有量は、特に限定されるものではないが、通常は、点眼剤全量に対して０．０１～１０重量％、好ましくは０．０１～１重量％である。 Further, the content of the active ingredient of the present invention in the dry eye improving agent or MCP-1 expression inhibitor of the present invention is not particularly limited, but usually 0.01 to 0.01% with respect to the total amount of eye drops. It is 10% by weight, preferably 0.01 to 1% by weight.
　本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ－１発現抑制剤の投与量は、投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるがジピベクフン又はアドレナリンとして０．０５～５０μｇ／ｋｇ／日が好ましく、特に０．１～１０μｇ／ｋｇ／日が好ましい。 The dose of the dry eye ameliorating agent or MCP-1 expression inhibitor of the present invention varies depending on the symptom, age, and administration method of the patient to be administered, but it is preferably 0.05 to 50 μg / kg / day as dipivechun or adrenaline, particularly 0 1 to 10 μg / kg / day is preferred.
　次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。 Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
実施例１（高浸透圧条件における細胞傷害の抑制効果）
　ＨＣＥ細胞（ヒト角膜上皮細胞）１×１０6ｃｅｌｌｓ／６０　ｏｒ　１００ｍｍ　ｄｉｓｈ）を、被検化合物を含む高浸透圧培地で２４時間培養した。培地は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２８０ｍＭのグルコース、２８０ｍＭのソルビトール、２８０ｍＭのスクロースにより高浸透圧条件とした。生細胞数をＭＴＴ法により測定し、コントロール（等張圧条件）の吸光度に対する相対値を算出した。結果を図１～図５に示した。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１である。
　図１～図５より、アドレナリンは、高浸透圧条件により生じる角膜上皮細胞生存率の低下を顕著に抑制した。その効果は、β２受容体刺激剤であるサルブタモールよりも強かった。 Example 1 (Inhibition effect of cell damage under high osmotic pressure conditions)
HCE cells (human corneal epithelial cells) 1 × 10 6 cells / 60 or 100 mm dish) were cultured in a hyperosmotic medium containing a test compound for 24 hours. The medium was subjected to high osmotic pressure conditions with 150 mM NaCl, 280 mM glucose, 280 mM sorbitol, 280 mM sucrose. The number of viable cells was measured by the MTT method, and the relative value to the absorbance of the control (isotonic pressure condition) was calculated. The results are shown in FIGS. Numerical values are mean ± SD (n = 3), ** P <0.01.
From FIG. 1 to FIG. 5, adrenaline markedly suppressed the decrease in corneal epithelial cell viability caused by high osmotic pressure conditions. The effect was stronger than salbutamol, a β2 receptor stimulant.
実施例２（高浸透圧条件におけるアポトーシス抑制効果）
　ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び１５０ｍＭのＮａＣｌを含む高浸透圧培地で培養した。２時間培養後のアポトーシスのマーカーであるカスパーゼ－３様活性を、蛍光ペプチド基質を使用して測定し、結果を図６に示した。また、生細胞の核染色剤であるＨｏｅｃｈｓｔ　３３２５８で染色した結果を図７に示した。数値は平均±Ｓ．Ｄ．（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）、＊＊Ｐ＜０．０１である。
　図６及び図７より、アドレナリンは、高浸透圧ストレス依存性の角膜上皮細胞のアポトーシスを顕著に抑制した。 Example 2 (Inhibition of apoptosis under high osmotic pressure conditions)
HCE cells were cultured in a hyperosmotic medium containing a test compound and 150 mM NaCl. Caspase-3-like activity, which is a marker of apoptosis after 2 hours of culture, was measured using a fluorescent peptide substrate, and the results are shown in FIG. Further, the result of staining with Hoechst 33258, which is a nuclear staining agent for living cells, is shown in FIG. Numbers are mean ± S. D. (Triplicate), ** P <0.01.
From FIG. 6 and FIG. 7, adrenaline markedly suppressed the hyperosmotic stress-dependent apoptosis of corneal epithelial cells.
実施例３（ラットの角膜表面傷害治療効果）
　ラットの涙腺を除去し、ドライアイモデルを作製した。涙腺除去後の１～５週間の期間、被検化合物を含む水溶液５μＬを１日３回点眼投与した。涙液量をコットン糸テストにより測定し、結果を図８に示した。フルオレセインで染色された角膜の画像を図９に示した。フルオレセインのスコアを算出し、図１０に示した。ＴＵＮＥＬ陽性細胞量を測定し、図１１に示した。数値は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．、＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１である。
　図８～１１より、アドレナリン及びそのプロドラックであるジピベフリンは、ドライアイモデルラットにおいて涙液量を変化させず、角膜表面の傷害を抑制した。また、その作用はサルブタモールよりも優れていた。 Example 3 (Effects of treating corneal surface injury in rats)
The rat lacrimal gland was removed to prepare a dry eye model. During the period of 1 to 5 weeks after the removal of the lacrimal gland, 5 μL of an aqueous solution containing the test compound was instilled 3 times a day. The amount of tears was measured by a cotton thread test, and the results are shown in FIG. An image of the cornea stained with fluorescein is shown in FIG. The fluorescein score was calculated and shown in FIG. The amount of TUNEL positive cells was measured and shown in FIG. Numbers are mean ± S. E. M.M. , * P <0.05; ** P <0.01.
8 to 11, adrenaline and its prodrug, dipivefrin, did not change tear fluid volume in dry eye model rats and suppressed corneal surface injury. In addition, its action was superior to that of salbutamol.
実施例４（メッセンジャーＲＮＡ発現量の変化（ムチンの発現効果））
　ＨＣＥ細胞を、被検化合物を含む培地で培養した。３時間及び２４時間培養後のｍｕｃ１、ｍｕｃ４メッセンジャーＲＮＡ発現量を、ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ＲＴ－ＰＣＲ法により測定した。ａｃｔｉｎメッセンジャーＲＮＡの発現量に対する相対値を算出し、結果を図１２に示した。数値は平均±Ｓ．Ｄ．（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）、＊Ｐ＜０．０５である。
　図１２より、アドレナリンは、角膜上皮細胞のムチン発現量を増大することが判明した。 Example 4 (Change in expression level of messenger RNA (expression effect of mucin))
HCE cells were cultured in a medium containing a test compound. The expression levels of muc1 and muc4 messenger RNA after 3 hours and 24 hours of culture were measured by the real time RT-PCR method. The relative value with respect to the expression level of actin messenger RNA was calculated, and the results are shown in FIG. Numbers are mean ± S. D. (Triplicate), * P <0.05.
From FIG. 12, it was found that adrenaline increases mucin expression in corneal epithelial cells.
実施例５（眼圧に対する作用）
　ラットに被験化合物を１日１回４日間（Ｄａｙ０～Ｄａｙ４）点眼投与し、ラットにおける眼圧に対する作用を検討した。
　結果を図１３に示す。図１３より、アドレナリン及びジピベフリンは、眼圧を低下させた。一方、サルブタモールは、最初眼圧を低下させたが、４日後では逆に眼圧を上昇させた。 Example 5 (effect on intraocular pressure)
Test compounds were administered to rats by instillation once a day for 4 days (Day 0 to Day 4), and the effect on intraocular pressure in rats was examined.
The results are shown in FIG. From FIG. 13, adrenaline and dipivefrine reduced intraocular pressure. On the other hand, salbutamol initially reduced intraocular pressure, but increased intraocular pressure after 4 days.
実施例６（高浸透圧条件におけるＭＣＰ－１発現に対する効果）
　ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び５０～１００ｍＭのＮａＣｌを含む高浸透圧培地で培養した。６時間培養後の炎症性サイトカインであるＭＣＰ－１遺伝子の発現量を、ＭＣＰ－１遺伝子特異的プライマーを用いたリアルタイムＲＴ－ＰＣＲにより測定した。結果は、等張圧条件におけるアクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。結果を図１４、図１６及び図１７に示す。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５である。
　図１４より、アドレナリンは、高浸透圧条件により生じるＭＣＰ－１の発現を顕著に抑制した。また、図１６及び図１７より、高浸透圧条件により生じるＭＣＰ－１の発現を、β2アゴニストであるサルブタモールは抑制せず、α1アゴニストであるナファゾリンは抑制した。 Example 6 (Effect on MCP-1 expression under high osmotic pressure conditions)
HCE cells were cultured in hyperosmotic medium containing test compounds and 50-100 mM NaCl. The expression level of MCP-1 gene, which is an inflammatory cytokine after 6 hours of culture, was measured by real-time RT-PCR using MCP-1 gene-specific primers. The results are shown as relative values to the action of actin (control) under isotonic pressure conditions. The results are shown in FIG. 14, FIG. 16 and FIG. Numerical values are mean ± SD (n = 3), ** P <0.01, ** P <0.05.
From FIG. 14, adrenaline markedly suppressed the expression of MCP-1 caused by high osmotic pressure conditions. 16 and 17, the expression of MCP-1 caused by the high osmotic pressure condition was not suppressed by salbutamol, a β 2 agonist, but was suppressed by naphazoline, an α 1 agonist.
実施例７（ＬＰＳ刺激によるＭＣＰ－１発現に対する効果）
　ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び１ｎＭ又は１０００ｎＭのＬＰＳ（リポポリサッカライド）を含む培地で培養した。６時間培養後のＭＣＰ－１遺伝子の発現量を実施例６と同様にＲＴ－ＰＣＲにより測定した。結果は、アクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。結果を図１５に示す。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５である。
　図１５より、アドレナリンは、ＬＰＳ刺激により生じるＭＣＰ－１の発現を顕著に抑制した。 Example 7 (Effect of LPS stimulation on MCP-1 expression)
HCE cells were cultured in a medium containing a test compound and 1 nM or 1000 nM LPS (lipopolysaccharide). The expression level of the MCP-1 gene after 6 hours of culture was measured by RT-PCR as in Example 6. The results are shown as relative values to the action of actin (control). The results are shown in FIG. Numerical values are mean ± SD (n = 3), ** P <0.01, ** P <0.05.
From FIG. 15, adrenaline significantly suppressed the expression of MCP-1 caused by LPS stimulation.
実施例８
　スコポラミン（１２．５ｍｇ／ｄａｙ）を皮下に埋め込んだ浸透圧ポンプ（アルゼット（登録商標）２ＭＬ２）でｄａｙ０から持続注入することによりドライアイラットモデルを作製した。被検化合物（アドレナリン）は、ｄａｙ８からｄａｙ１４に局所投与した。アドレナリンの投与は、０．０１％（０．５５ｍＭ）含有液（５μｌ）又は生理食塩水（コントロール）を１日３回点眼した。最終投与（ｄａｙ１４）２時間後、眼科外科用ブレードで角膜上皮を削り取った。角膜上皮中のＭＣＰ－１遺伝子の発現量を実施例６と同様にＲＴ－ＰＣＲで測定した。結果を図１８に示す。結果は、アクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。数値は、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍである。
　図１８より、アドレナリンは、ドライアイモデル動物であるスコポラミン持続注入ラットにおけるＭＣＰ－１発現を顕著に抑制した。 Example 8
A dry eye rat model was prepared by continuous infusion from day 0 with an osmotic pump (Alzette (registered trademark) 2ML2) in which scopolamine (12.5 mg / day) was implanted subcutaneously. The test compound (adrenaline) was locally administered from day 8 to day 14. For administration of adrenaline, a 0.01% (0.55 mM) -containing solution (5 μl) or physiological saline (control) was instilled three times a day. Two hours after the final administration (day 14), the corneal epithelium was scraped off with an ophthalmic surgical blade. The expression level of the MCP-1 gene in the corneal epithelium was measured by RT-PCR as in Example 6. The results are shown in FIG. The results are shown as relative values to the action of actin (control). Numbers are mean ± S. E. M.
As shown in FIG. 18, adrenaline significantly suppressed MCP-1 expression in scopolamine continuous infusion rats, which are dry eye model animals.

Claims (8)

  1. 　ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするドライアイ改善剤。 Dry eye improver containing dipivefrin or adrenaline as an active ingredient.
  2. 　ジピべフリン又はアドレナリンを有効成分とするＭＣＰ－１発現抑制剤。 MCP-1 expression inhibitor containing dipivefrin or adrenaline as an active ingredient.
  3. 　ドライアイ改善剤製造のためのジピベフリン又はアドレナリンの使用。 Use of dipivefrin or adrenaline for the production of dry eye improver.
  4. 　ＭＣＰ－１発現抑制剤製造のためのジピベフリン又はアドレナリンの使用。 Use of dipivefrin or adrenaline for the production of MCP-1 expression inhibitor.
  5. 　ドライアイを改善するためのジピベフリン又はアドレナリン。 Dipivefrin or adrenaline to improve dry eye.
  6. 　ＭＣＰ－１の発現を抑制するためのジピベフリン又はアドレナリン。 Dipivefrin or adrenaline to suppress the expression of MCP-1.
  7. 　ジピベフリン又はアドレナリンの有効量を投与することを特徴とするドライアイ改善方法。 A method for improving dry eye, comprising administering an effective amount of dipivefrin or adrenaline.
  8. 　ジピベフリン又はアドレナリンの有効量を投与することを特徴とするＭＣＰ－１の発現抑制方法。 A method for inhibiting MCP-1 expression, comprising administering an effective amount of dipivefrin or adrenaline.
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