WO2016094984A1 - Frasco pipetador multidoses e seu uso - Google Patents

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WO2016094984A1 PCT/BR2015/000183 BR2015000183W WO2016094984A1 WO 2016094984 A1 WO2016094984 A1 WO 2016094984A1 BR 2015000183 W BR2015000183 W BR 2015000183W WO 2016094984 A1 WO2016094984 A1 WO 2016094984A1
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vial
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Anderson Soares da SILVA
Alessandra Aparecida VIREQUE
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Invitra Tecnologia Da Reprodução Assistida Ltda
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
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    • A61M5/28—Syringe ampoules or carpules, i.e. ampoules or carpules provided with a needle
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus

Definitions

  • ART Assisted Reproduction Technology
  • multi-dose containers such as polystyrene plastic bottles in culture media volumes ranging from 20 to 100 mL, or in 0.5 to 3 mL microtubes containing cryoprotective media.
  • These containers feature screw caps and product removal is performed with the aid of a micropipetator tip and involves a number of time-consuming procedures or steps that increase the risk of contamination of the remaining product in the vial and the cells undergoing manipulation. in vitro.
  • Increasing the rate of evaporation of micro-droplets exposed to surfaces heated to 37 ° C and laminar airflow from the laboratory environment may induce significant increases in osmolality in micro-droplets of up to 40 mOsm / kg over as short a period of 5 minutes and have negative impact on embryonic development and may induce apoptosis and alter gene expression patterns of in vitro cultured eggs and embryos.
  • Some recent studies have reported an increased risk of epigenetic changes and future complications such as dyslipidemia, diabetes, cardiovascular disease, etc. in babies conceived by assisted reproduction technique due to the in vitro environment.
  • US2004010242 discloses a multi-dose package of a sterile liquid and has a filtration filter. Importantly, this invention relates to methods for administering therapeutic agents and the filtration device associated with bacteriostatic solution consists of a closed and complex drug dosing system for human use unlike the present invention.
  • WO0050066 (A1), BR0306181 (A) and BRP0806302 (A2) cite pharmaceutical kits for performing in vitro fertilization techniques, however none of the documents report packaging.
  • An object of the present invention is to propose a delineated multi-dose pipettor vial for assisted reproduction (TRA) techniques.
  • Another object of the present invention is to propose the use of the multi-dose pipettor bottle for fluid dispensing in assisted reproduction (TRA) techniques.
  • TRA assisted reproduction
  • the present invention relates to a multi-dose pipettor bottle consisting of a body coupled to an elongated tip and a reuse cap for dispensing fluids useful in the technologies.
  • assisted reproduction (TRA) dispensing with the use of micropipetators and extending the validity of the stored fluid.
  • the invention further relates to the use of the multi-dose pipettor bottle for fluid dispensing in assisted reproduction (TRA) techniques such as in vitro washing, manipulation and cultivation of oocytes and animal embryos, thereby improving quality control. laboratory techniques and the quality of the embryos produced.
  • TRA assisted reproduction
  • the pipettor bottle has been designed to prevent micropipettor tip entry into it and thus potentially ensure aseptic use of its multi-dose content, meeting national and international biosafety standards for
  • the small opening diameter of the bottle nozzle and additionally the use of the protective filter element eliminates the interface of the product with the ambient air, avoiding risks of contamination by the entry of suspended particles or microorganisms, as well as promoted oxidation reactions. by oxygen from the air.
  • Figure 1 shows the front view of the sealed cylindrical shaped multi-dose pipettor vial.
  • FIG. 2 shows the multi-dose pipettor vial with the reuse cap removed.
  • Figure 3 shows the protective filter element
  • Figure 4 shows the ultra filtration cap attached to the multi-dose pipettor vial for use during in vitro procedures.
  • Figure 5 is an example of the use of the multi-dose pipettor vial for producing spherical microtropes (ME) and culture plate (PC) fluids.
  • ME spherical microtropes
  • PC culture plate
  • Figure 6 is an example of using the multi-dose pipettor bottle for rapid fluid dispensing (D).
  • the present invention relates to a multi-dose pipettor vial (1) consisting of a body (2), a nozzle (3) and a reuse cap (4) for dispensing fluids useful in assisted reproductive technologies (TRA). ).
  • the pipettor bottle (1) may contain a protective filter element (5) that prevents tip contouring and contamination (3) during use and prevents the back flow of pipetted solutions through the bottle (1).
  • assisted reproduction technology is any technology involving in vitro manipulation of eggs and embryos of animals belonging to the group consisting of rodent humans, cattle, goats, horses, pigs and other animals.
  • fluids useful in assisted reproduction technologies are liquids used in TRA, such as culture media, mineral oil, solutions and the like.
  • the body (2) has an oval or cylindrical shape and a flat bottom that allows the best handling of the bottle (1) avoiding the spilling of fluids and contamination of the work surface.
  • the body has a fluid volume of between 0.5 and 20 ml; It is made of polymeric material and attaches to the tip (3) in its upper portion.
  • the polymeric material is polyethylene, as this polymeric material has a specific degree of deformation to meet the desired functionality of the vial (1), i.e., to dispense useful fluids in TRA.
  • the ferrule (3) is attached to the body (2) and is shaped like a cylinder elongated with the rounded outlet opening having a diameter between 0.5 to 3 mm. It serves to facilitate dispensing of useful fluid at ⁇ RA, for example within culture plates.
  • the nozzle (3) facilitates the handling of the vial (1) inside the culture plates and enables the making of micro droplets ideally from
  • This nozzle (3) makes it possible to transfer culture media and other culture plate solutions directly without the use of devices such as micropipettes and without intermediate steps.
  • the nozzle 3 favors the generation of micro drops. It should be apparent to those skilled in the art of assisted reproduction that the length of time for the preparation of the micro drops prior to being added to the oil cover is responsible for changes in the characteristics of the culture medium and is therefore
  • the preferred embodiment of the present invention is suitable for the preparation of microtropes by the wash-drop method in which the microtropes are pipetted onto the plate, covered with mineral oil, removed and replaced with fresh culture.
  • the nozzle (3) favors the release of a continuous flow of fluid.
  • the reuse cap (4) has a pipettor bottle sealing rod (4.1).
  • the pipettor bottle (1) is further comprised of a filter element (5) of polymeric material provided with a 0.2 Dm pore membrane (5.1) positioned at the end of the tip (3).
  • the invention further relates to the use of the multi-dose pipettor bottle (1) consisting of a body (2), a nozzle (3) and a reuse cap (4) and optionally a protective filter element (5) for dispensing assisted reproduction techniques (TRA) that prevents contamination of the tip (3) and contents inside the vial (1) that may occur due to reflux of fluid during use.
  • TRA dispensing assisted reproduction techniques
  • this vial is directed to in vitro procedures for culturing and vitrifying mammalian oocytes, embryos and stem cells in a microtest system.

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Abstract

A presente invenção se refere de um frasco pipetàdór multidoses (1) que é consistido dé um corpo (2), uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) e, opcionalmente um elemento filtrante de proteção (5), que serve para a dispensáção de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA) que envolva a manipulação in vitro; e seu uso para procedimentos in vitro de cultivo e vitrificação de células-tronco de mamíferos em sistema de microgotas.

Description

FRASCO P!PETADOR MULTIDOSES E SEU USO
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção pertence ao campo dos recipientes
especialmente adaptados para finalidades médicas, especialmente, ao campo dos recipientes para armazenar e administrar fluidos, mais especificamente ainda, ao campo das ampolas.
ESTADO DA TÉCNICA
Os meios de cultura e soluções crioprotetoras para uso em
Tecnologia da Reprodução Assistida (TRA), em procedimentos dê cultivo e congelamento de óvulos e embriões, são acondicionados e
comercializados em containers para várias doses, como garrâfas plásticas de poliestireno em volumes de meios de cultura que variam de 20 a 100 mL, ou em microtubos com capacidade de 0,5 a 3 ml_ contendo meios crioprótetores. Éstes containers apresentam tampas rosqueadas e a retirada do produto é feita com o auxílio de uma ponteira acoplada a um micropipetador e implica em vários procedimentos ou etapas que demandam tempo e aumentam o risco de contaminação do produto remanescente no frasco e das células que passam por manipulação in vitro.
Durantes estes procedimentos, o contato da ponteira com qualquer objeto não estéril dentro da capela de fluxo lâminar ou com o manipulador pode potencialmente introduzir contaminação no frasco de meio cultura e/ou nas células qué estão sendo manipuladas. Todos os procedimentos in vitro de manipulação de óvulos, embriões, células-tronco e células somáticas de um modo geral implicam em perda de viabilidade celular devido a alterações de temperatura, suscetibilidade à contaminação pelo ar atmosférico, pH e osmõlalidãde de soluções e meios de cultura. Dessa forma, o tempo de exposição da célula, particularmente óvulos e embriões, a estes fatores externos pode potencialmente afetar âs taxas de sucesso do desenvolvimento embrionário e gestação em um serviço de reprodução humana assistida. Em especial, alterações de osmolalidàde (medida da concentração de solutos) nos meios de cultivo que podem ocorrer durante a confecção das microgotas devido à alta relação superfície: volume e são tempo-dependentes.
O aumento da taxa de evaporação das microgotas expostas às superfícies aquecidas a 37°C e ao fluxo laminar de ar do ambiente laborátoriál pode induzir aumentos significativos na osmolalidàde nas microgotas de até 40 mOsm/kg em intervalos de tempo tão curtos quanto 5 minutos e tem impacto negativo no desenvolvimento embrionário, podendo induzir apoptose e alterar os padrões de expressão gênica de óvulos e embriões cultivados in vitro. Alguns estudos recentes têm relatado o aumento de risco de alterações epigenéticas e complicações futuras como dislipidemias, diabetes, doenças cardiovasculares, etc. em bebés concebidos por meio de técnica de reprodução assistida devido ao ambiente in vitro.
Neste cenário, é possível mensurar o quão importante é o controle de qualidade e biossegurança dos procedimentos de reprodução humana assistida. Na reprodução assistida animal, incluindo bovinos, equinos e outros animais domésticos, os óvulos e embriões são manipulados em condições semelhantes à humana e a perda de eficiência das técnicas in vitro e as ocorrências de contaminação são muito comuns, causando grandes prejuízos às empresas prestadoras de serviço em biotecnologia da reprodução e no avanço dos programas de melhoramento genético de rebanho bovino. As gotas de meio de cultura ou meios crioprotetores usados em TRA fornecem um microambiente bem definido e
potencialmente estéril hò qual as células podem ser cultivadas
individualmente òu em pools, de forma controlada. Além disso* permitem que a escala dos procedimentos de cultivo sejam reduzidos
potencialmente de volumes da ordem de mL para μΙ_, com uma redução concomitante na utilização de reagentes e células.
Atualmente, há uma grande variedade de embalagens multidoses para dispensação de fluidos ou líquidos comercialmente disponíveis, em que estas apresentam variados formatos. Entretanto, nenhum dos documentos do estado da técnica descreve embalagens delineadas para aplicação de microgotas em técnicas de fertilização in vitro.
O documento de anterioridade US2004010242 descreve uma embalagem para várias doses de um líquido estéril e a mesma possui um filtro de filtração. É importante ressaltar que este invento se refere a métodos para administração de agentes terapêuticos e o dispositivo de filtração associado com solução bacteriostática consiste em um sistema fechado e complexo para doseamento de fármacos para uso humano diferentemente da invenção presente.
Os documentos WO0050066 (A1), BR0306181 (A) e BRPÍ0806302 (A2) citam kits farmacêuticos para a realização de técnicas de fertilização in vitro, entretanto nenhum dos documentos relata embalagens
multidoses delineadas para técnicas de fertilização in vitro.
Portanto considerando que o ganho de tempo nos procedimentos in vitro, sobretudo durante a confecção de placas contendo microgotas de meios de cultura e de meios crioprotetores, pode potencialmente contribuir para evitar alterações de osmolaridade, pH e contaminação nos líquidos utilizados em TRA e melhorar o desenvolvimento embrionário, o estado da técnica não resolve o problema proposto.
OBJETIVO DA INVENÇÃO
Um objetivo da presente invenção é propor um frasco pipetador multidoses delineado para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA).
Outro objetivo da presente invenção é propor o uso do frasco pipetador multidoses para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção trata de um frasco pipetador multidoses consistido de um corpo acoplado a uma ponteira alongada e, uma tampa de reuso que serve para a dispensação de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA) dispensando o uso de micropipetadores e prolongando a validade do fluido armazenado.
A invenção trata ainda do uso do frasco pipetador multidoses para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA), tais como, procedimentos in vitro de lavagem, manipulação e cultivo de oócitos e embriões de animais, melhorando assim, o controle de qualidade das técnicas laboratoriais e a qualidade dos embriões produzidos.
O frasco pipetador foi delineado para impedir a entrada da ponteira de micropipetadores em seu interior e dessa forma potencialmente garantir o uso asséptico de seu conteúdo multidoses, atendendo às normas de biossegurança nacionais e internacionais quanto á
contaminação dos meios de cultura e outras soluções usadas em TRA humana por partículas suspensas no ar ambiente ou microorganismos, tál como, por exemplo, a norma RDC n°33/2006 da Anvisa. Além disso, o reduzido diâmetro de abertura do bico do frasco e adicionalmente o uso do elemento filtrante de proteção eliminam a interface do produto com o ar ambiente, evitando riscos de contaminação pela entrada de partículas ou microorganismos em suspènsão, bem como reações de oxidação promovidas pelo oxigénio do ar.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Para se obter uma total e completa visualização do objeto desta patente de invenção, são apresentados os desenhos aos quais se faz referências, conforme abaixo.
A Figura 1 mostra a vista frontal do frasco pipetador multidoses com formato cilíndrico vedado.
A Figura 2 mostra o frasco pipetador multidoses com a tampa de reuso removida.
A Figura 3 apresenta o elemento filtrante de proteção.
A Figura 4 mostra a tampa de ultra filtração acoplada ao frasco pipetador multidoses para uso durante os procedimentos in vitro. A Figura 5 representa um exemplo do uso d ò frasco pipetador multidoses para produção de microgotas esféricas (ME) dê fluidos em placas de cultura (PC).
A Figura 6 representa um exemplo do uso do frasco pipetador multidoses para dispensâção (D) rápida de fluidos.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção se refere a um frasco pipetador multidoses (1) consistido de um corpo (2), uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) que serve para a dispensâção de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA). Opcionalmente, o frasco pipetador (1) pode conter um elemento filtrante (5) de proteção que evita o contáto e contaminação da ponteira (3) dufante o uso e impede o fluxo retrógrado de soluções pipetadãs pelo frasco (1).
Para fins desta invenção, tecnologia de reprodução assistida (TRA) é qualquer tecnologia que envolva a manipulação in vitro de óvulos e embriões de animais pertencentes ao grupo consistido de humanos roedores, bovinos, caprinos, equinos, suínos e outros animais
domésticos. Ainda para fins desta invenção, fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida são líquidos utilizados em TRA, tais como, meios de cultura, óleo mineral, soluções e outros.
O corpo (2) tem formato oval ou cilíndrico e um fundo plano que permite o melhor manuseio do frasco (1) evitando o derramamento de fluidos e contaminação da superfície de trabalho.
O corpo comporta um volume de fluídos de entre 0,5 a 20 ml; é feito de material polimérico e, se liga à ponteira (3) em sua porção superior.
Preferencialmente, o material polimérico é o polietileno, pois éste material polimérico possui um grau de deformação específico para atender a funcionalidade desejada do frasco (1), ou seja, favorecer a dispensâção de fluidos úteis em TRA.
A ponteira (3) é unida ao corpo (2) e tem um formato de um cilindro alongado com a abertura de saída arredondada tendo um diâmetro entre 0,5 a 3 mm. A mesma serve para facilitar á dispensação do fluido útil em †RA, por exemplo, dentro de placas de cultura.
A ponteira (3) facilita o manuseio do frasco (1) dentro das placas de cultura e possibilita a confecção de microgotas idealmente de
conformação esférica e sem espalhamento. Estas propriedades são importantes parà a estabilidade da microgota e sua composição química. Assim, como a forma da microgota controla a relação superfície: volume e a taxa de evaporação, estas tem implicação direta nas propriedades osmóticas dos meios dé cultura, em especial, os meios de cultura utilizados em TRA.
Está ponteira (3) torna possível a transferência direta do meio de cultura e outras soluções para placas de cultura sem uso de dispositivos, tal como, micropipetas, e sem etapas intermediárias.
Na modalidade preferida da invenção, a ponteira (3) favorece á geração de microgotas. Deve ser evidente para os especialistas na área da reprodução assistida, que o período de tempo para a preparação das microgotas antes de ser adicionada a cobertura de óleo é responsável por alterações nas características dõ meio de cultura e, portanto, é
considerada uma variável importante.
Assim, a modalidade preferida da presente invenção é adequada para o preparo de microgotas pelo método "wash-drop" no qual as microgotas são pipetâdas na placa, cobertas com óleo mineral, removidas e substituídas por meio de cultura fresco.
Em uma modalidade alternativa da invenção a ponteira (3) favorece a liberação dê um fluxo contínuo do fluido.
A tampa de reuso (4) tem uma haste (4.1) de vedação do frasco pipetador (1). Em uma modalidade opcional da invenção, o frasco pipetador (1) é consistido ainda de um elemento filtrante (5) de material polimérico dotado de uma membrana (5.1) com poros de 0,2 Dm, posicionado na extremidade da ponteira (3). A invenção trata ainda do uso do frasco pipetador multidoses (1) consistido dê um corpo (2), uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) e opcionalmente, um elemento filtrante de proteção (5) para a dispensação de fluidos em técnicas de reprodução assistida (TRA) que impede a contaminação da ponteira (3) e do conteúdo no interior do frasco (1) que pode ocorrer devido a refluxo de fluido durante o uso.
Preferencialmente o uso deste frasco é voltado para procedimentos in vitro de cultivo e vitrificaçãó de oócitos, embriões e células-tronco de mamíferos em sistema de microgótas.
Embora a invenção tenha sido amplamente descrita, é óbvio para aqueles versados na técnica que várias alterações e modificações podem ser feitas sem que as referidas alterações não estejam cobertas pelo escopo da invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES
1 - Frasco pipetador multidoses (1 ) caracterizado por ser consistido de um corpo (2), uma ponteira (3) e, uma tampa de reuso (4) que serve para a dispensação de fluidos úteis nas tecnologias da reprodução assistida (TRA).
2 - Frasco, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizado pelo fato de o corpo (2) ter formato oval e um fundo plano.
3 - Frasco, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizado pelo fato dé ò corpo (2) ter formato cilíndrico e um fundo plano.
4 - Frasco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 ou
3, caracterizado por o corpo comportar um volume de fluidos de entre 0,5 á 20 ml; ser feito de material polimérico e, se ligar à ponteira (3) em sua porção superior.
5 - Frasco, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pêlo fato de o material polimérico ser o polietileno.
6 - Frasco, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizado pelo fato de a ponteira (3) ser unida ao corpo (2) e ter um formato de um Cilindro alongado com a abertura de saída arredondada tendo um diâmetro entre 0,5 a 3 mm.
7 - Frasco, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de a ponteira (3) favorecer a geração de microgõtas.
8 - Frasco, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de a ponteira (3) favorecer a liberação de um fluxo contínuo do fluido.
9 - Frasco, de acordo com a reivindicação , caracterizado pelo fato de a tampa de reuso (4) ter uma haste (4.1) de vedação.
10 - Frasco, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizado por opcionalmente conter um elemento filtrante (5) em polietileno ou polipropileno dotado de uma membrana com poros de 0,2 Dm,
posicionado na extremidade final da ponteira (3).
1 - Uso do frasco pipetador multidoses de acordo com as reivindicações 1 a 10, caracterizado por ser para procedimentos in vitro de cultivo e vitrificação de células-tronco de mamíferos em sistema de microgotas.
PCT/BR2015/000183 2014-12-18 2015-12-14 Frasco pipetador multidoses e seu uso WO2016094984A1 (pt)

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