WO2015186956A1 - 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 - Google Patents

반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물 Download PDF

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WO2015186956A1
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nitrate
berberine
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feed
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박민아
이승헌
김성훈
김인배
양시용
지석우
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씨제이제일제당 (주)
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    • Y02P60/22Methane [CH4], e.g. from rice paddies

Definitions

  • the present invention relates to a feed additive composition for reducing methane production in ruminants of ruminants, and in particular, methane production comprising one or more components selected from the group consisting of Alliin and Berberine.
  • the present invention relates to a feed additive composition for abatement, wherein the composition may further include one or more components selected from the group consisting of diallyl disulfide (DADS), nitrate, and eucalyptus oil. .
  • DADS diallyl disulfide
  • the amount of greenhouse gas produced by maintaining the livestock industry is estimated to be about 4.1 billion to 7.1 billion tons per year, which is equivalent to carbon dioxide, which is about 15 to 24% of the total greenhouse gas production (Steinfeld et al. , 2006).
  • the amount of carbon dioxide, methane, and nitrous oxide produced by livestock accounts for 9%, 35-40%, and 65% of human activities, which is a serious level.
  • the addition of antibiotics to feed is a global trend to increasingly regulate the use of chemicals and antibiotics as feed additives, and remains a problem that may be harmful to the human body.
  • Removing the protozoa has a problem that can reduce the fiber, and adding a halogen compound to the feed does not sustain the inhibitory effect of methane gas and may cause safety problems such as residual to livestock products.
  • the method of feeding the probiotic has a problem in that the strain added to the fermentation pattern and the methane gas production experiment of the probiotic is different.
  • Korean Patent Publication No. 10-2006-0019062 discloses a feed composition that suppresses the methane production of ruminants.
  • the patent is characterized in that the feed composition comprising at least one of ginger, leek extract and complex linoleic acid to the ruminant to reduce the amount of methane gas produced in the ruminant.
  • the feed composition comprising at least one of ginger, leek extract and complex linoleic acid to the ruminant to reduce the amount of methane gas produced in the ruminant.
  • the disclosed ginger, leek extract and complex linoleic acid requires a separate process, there is a problem that can not be easily obtained from the surroundings, the manufacturing cost is required a lot, and accordingly the purchase cost There is a problem that increases.
  • ruminant models in which diallyl sulfide, allin, nitrate, berberine and eucalyptus oils or mixtures thereof are developed under the same conditions as in the rumen environment.
  • the present invention was completed by confirming that the result of incubation with a rumen simulation continuous culture system (RSCC) showed a significant methane reduction rate compared to the control.
  • RSCC rumen simulation continuous culture system
  • One object of the present invention is to provide a feed additive composition for reducing methane production having a safe and efficient methane production reducing effect comprising at least one of diallyl sulfide, alline, nitrate, berberine and eucalyptus oil.
  • Another object of the present invention is to provide a method of reducing methane production comprising administering the feed additive composition to a subject.
  • the feed additive composition according to the present invention can be very useful in the ruminant industry because it can reduce the amount of methane generated in the rumen without negatively affecting the productivity of the livestock by adding to the feed without additional treatment process.
  • DADS diallyl sulfide
  • Figure 2 is a graph showing the methane reduction rate according to the addition of Allin (Alliin) according to an embodiment of the present invention.
  • FIG 3 is a graph showing the methane reduction rate according to the nitrate (Nitrate) addition content according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 4 is a graph showing the methane reduction rate according to the addition of eucalyptus oil (Eucalyptus oil) according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 5 is a graph showing the methane reduction rate according to the content of berberine (Berberine) according to an embodiment of the present invention.
  • DADS diallyl sulfide
  • Nirate nitrate
  • Eucalyptus oil eucalyptus oil
  • berberine mixed composition according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 7 is a graph showing the methane reduction rate according to the content of alliin, nitrate, eucalyptus oil and berberine mixed composition according to an embodiment of the present invention.
  • DADS diallyl sulfide
  • Naitrate nitrate
  • Eucalyptus oil eucalyptus oil
  • berberine mixed composition according to an embodiment of the present invention to be.
  • one embodiment of the present invention provides a feed additive composition for reducing methane production comprising at least one component selected from the group consisting of Alliin and Berberine.
  • composition may be added to the feed in an amount such that allin is added to 0.005 wt% to 5 wt% or berberine to 0.005 wt% to 5 wt% relative to the dry feed weight.
  • Alliin refers to a garlic or onion odor component such as garlic, onion, and the like (2R) -2-amino-3-[(S) -prop-2-enylsulfinyl] propanoic acid ((2R) -2-amino-3-[(S) -prop-2-enylsulfinyl] propanoic acid).
  • the feed additive composition may include 1 to 100% by weight, specifically 10 to 90% by weight, more specifically 20 to 80% by weight, but is not limited thereto.
  • berine refers to quaternary ammonium salt belonging to the Protoberberine group of isoquinoline alkaloid, and 5,6-dihydro-9, 10-dimethoxybenzo [g] -1,3-benzodiozolo [5,6-a] quinolinium (5,6-dihydro-9,10-dimethoxybenzo [g] -1,3-benzodioxolo [5, 6-a] quinolizinium).
  • the feed additive composition may include 1 to 100% by weight of berberine, specifically 10 to 90% by weight, more specifically 20 to 80% by weight, but is not limited thereto.
  • methane refers to methane gas (CH 4 ), which is known to be the main culprit of global warming as it occurs in the decomposition of various organic substances.
  • carbohydrates turn into volatile fatty acids and some become methane gas during the fermentation of food by various microorganisms in the rumen, and this methane gas accounts for about one fourth of the global methane gas emissions.
  • Ruminant methane production in the rumen results in about 10% loss of feed energy consumed. In other words, the generation of fermentation gas containing methane produced in the rumen not only contributes to global warming, but also may lower the energy absorption efficiency of livestock and thus affect productivity.
  • the methane reduction rate is 21.9% lower than diallyl sulfide
  • the pH remained similar to the control.
  • allicin had a lower methane reduction effect than diallyl sulfide, it appeared to be more effective in stabilizing the rumen fluid.
  • the methane reduction rate is 6.7 %, 12.4%, 45.5%.
  • the methane reduction effect was high as 45.5%, but the amount of less than 0.5wt% was shown to be an appropriate level because the dry digestion rate was significantly decreased.
  • composition may further include one or more components selected from the group consisting of diallyl disulfide (DADS), nitrate (Nitrate) and eucalyptus oil (Eucalyptus oil).
  • DADS diallyl disulfide
  • Nitrate nitrate
  • Eucalyptus oil eucalyptus oil
  • DADS Diaallyl disulfide
  • the term "Diallyl disulfide (DADS)" of the present invention refers to 4,5-dithia-1,7-octadiene diallyl sulfide (4,5-dithia-1,7-octadiene Diallyldisulfide) It is known to be effective in improving blood circulation, antibacterial and blood circulation. It is known to be effective in preventing adult diseases such as hypertension, arteriosclerosis, angina pectoris, myocardial infarction and stroke.
  • the feed additive composition may include 1 to 90% by weight of diallyl sulfide, specifically 20 to 80% by weight, but is not limited thereto.
  • nitrate (Nitrate) is nitrate ions NO 3 - as a general term for the compounds, such as sodium nitrate (sodium nitrate), nitric acid potassium (potassium nitrate), nitric acid calcium (calcium nitrate), ammonium nitrate ( ammonium nitrate) and the like, but is not limited thereto.
  • the feed additive composition may include 1 to 90% by weight of nitrate, specifically 20 to 80% by weight, but is not limited thereto.
  • Eucalyptus oil refers to essential oils obtained by distilling the leaves of Eucalyptus trees. It is a colorless to pale yellow transparent liquid with a characteristic stinging aroma. The taste is irritating or refreshing.
  • the feed additive composition may include 1 to 90% by weight of eucalyptus oil, specifically 20 to 80% by weight, but is not limited thereto.
  • the composition is 0.005 wt% to 4 wt% of diallyl sulfide based on the weight of dry feed, 0.005 wt% to 5 wt% of allin, 0.01 wt% to 0.5 wt% of nitrate, 0.005 wt% to 5 wt of berberine % Or eucalyptus oil may be added to the feed in an amount such that it is added at 0.01 wt% to 5 wt%, but is not limited thereto. If more than 0.5 wt% of nitrate is added, problems such as nitrite accumulation and nitrate toxicity syndrome may occur.
  • the methane reduction rate is 30.5%, 65.2% and 65.9%.
  • the reduction rate of methane according to the addition content of 0.2 wt% and 0.4 wt% was about 65%, which means that adding 0.2 wt% diallyl sulfide may be economically advantageous. it means.
  • the methane reduction rate was 14.0. %, 31.0%, 8.1%.
  • the methane reduction rate when the eucalyptus oil was added in an amount of 0.5 wt% per 10 g of the substrate using the RSCC system, the methane reduction rate was 20.5%. Methane reduction was lower than that of diallyl sulfide at the same addition level, but more effective in stabilizing the rumen fluid.
  • Feed additive composition of the present invention may include a mixture of each of the above active ingredients, in order to minimize side effects.
  • the mixed composition has a synergistic effect, it can exhibit an effective methane reduction effect with a small amount of addition.
  • the composition may comprise diallyl sulfide, nitrate, berberine and eucalyptus oil.
  • the content of diallyl sulfide, nitrate, berberine and eucalyptus oil is as described above.
  • the composition is 0.005 wt% to 4 wt% of diallyl sulfide, 0.01 wt% to 0.5 wt% of nitrate, 0.005 wt% to 5 wt% of berberine, and 0.01 wt% to eucalyptus oil, based on the dry feed weight. It may be added to the feed in an amount such that it is added at 5 wt%.
  • an effective methane reduction rate of 56.2% is obtained when 0.05 wt% of diallyl sulfide, 0.2 wt% of nitrate, 0.05 wt% of berberine and 0.2 wt% of eucalyptus oil are used as an additive. It was confirmed that there is an effect of showing a good reduction rate in a small amount even when using a different mixed composition as an additive.
  • the effective rate of methane reduction was 23.1% for feeding and 36.6% for 50g / d.
  • the flow rate also increased by more than 1.1% without decreasing compared to the control, it was confirmed that there is no negative effect on the fermentation properties of the methane reduction mixed composition.
  • the composition may include allin, nitrate, berberine and eucalyptus oil.
  • the content of the allicin, nitrate, berberine and eucalyptus oil is as described above.
  • the composition is 0.005 wt% to 5 wt% of allin, 0.01 wt% to 0.5 wt% of nitrate, 0.005 wt% to 5 wt% of berberine, and 0.01 wt% to 5 wt of eucalyptus oil. It may be added to the feed in an amount such that it is added in%.
  • the weight of the dry feed weight of allelin, berberine each 0.05 wt% of the addition of the content of nitrate and eucalyptus oil was measured by varying the 0.1 wt% or 0.2 wt%, as a result, each additive is added alone Methane reduction rate was increased than when the synergistic effect was confirmed.
  • the individual to which the feed additive composition for reducing methane can be applied is not particularly limited, and any form may be applied.
  • any form may be applied.
  • animals such as cows, sheep, giraffes, camels, deer, goats, and the like, and specifically to ruminants having rumens.
  • ruminant is a special digestive tract found in some animals of mammalian joiners, and is divided into four rooms, called hump, honeycomb, folds, and wrinkles, for the purpose of rubbing. Also known as ruminwiwi, once swallowed food into the mouth again to chew well swallow swallowing, this rumen is called the stomach to enable rumination. In the rumen, microbial symbiosis has the ability to decompose and energize the cellulose of plants that cannot be digested by ordinary animals.
  • ruminant refers to an animal having the rumen described above, and includes the animals of the family Camel, Deer, Deer, Giraffe and Bovine. However, the camel family and the baby deer are known to have a rumen consisting of three rooms because the folds and wrinkles are not completely differentiated.
  • the feed additive composition according to the present invention may be used individually, may be used in combination with a conventionally known feed additive, and may be used sequentially or simultaneously with a conventional feed additive.
  • the feed additive composition according to the present invention includes not only the physiologically acceptable salts of allin, berberine or diallyl sulfide, but also all possible solvates and hydrates that may be prepared therefrom, and may include all possible stereoisomers.
  • the solvates, hydrates and stereoisomers of the allin, berberine or diallyl sulfide can be prepared using conventional methods.
  • physiologically acceptable is physiologically acceptable and when administered to an organism, the compound to be administered can exert its desired effect, usually without causing an allergic or similar reaction, such as gastrointestinal disorders, dizziness, and the like. Means commonly used.
  • allin, berberine and diallyl sulfide may be obtained through natural products, chemical synthesis or microbial fermentation, and may be purchased and used commercially.
  • One aspect of the invention provides a method of reducing methane production comprising administering said feed additive composition to a subject.
  • 250 ml of distilled water was added to a 2 L Erlenmeyer flask, 0.12 ml of a micromineral solution was added and stirred, and 250 ml of distilled water was added thereto and stirred for 20 minutes.
  • 250 ml of in vitro buffer solution was added and stirred for 10 minutes, followed by 250 ml of bulk mineral solution, followed by stirring for 15 minutes. Thereafter, 1.25 ml of a resazurin solution was added and stirred.
  • the inlet of the Erlenmeyer flask was blocked with aluminum foil and heated while bubbling anaerobic gas with carbon dioxide gas in a Hergate anaerobic device. When the solution started to boil, it was heated for about 10 minutes more, stopped and cooled. To the cooled solution was added 50 ml of reduction solution to obtain a buffer. The completed buffer was found to change color of the solution to colorless.
  • the collected gastric juice was filtered with 8 layers of gauze and filtered with glass wool.
  • the filtered gastric juice was bubbling with carbon dioxide gas.
  • the buffer prepared in 1) above was added while maintaining an anaerobic state with carbon dioxide gas, and mixed with gastric juice (250 ml of gastric juice and 600 ml of buffer).
  • the buffer prepared in 1) was put into the buffer container while maintaining the anaerobic state.
  • the Tedlar bag filled with carbon dioxide gas was connected to the buffer container and the tube connected to the buffer container was connected to the buffer inlet of the fermenter lid.
  • the tube connected to the gas collection bag was connected to the gas collecting port of the fermenter lid (the connecting tube was a gas tube).
  • the pH and temperature electrodes were put in such a way that the electrodes were sufficiently in contact with the culture solution while being careful not to touch the stirring rod, and the feed tube was inserted into the feed inlet of the fermenter lid so as to be sufficiently immersed in the culture solution.
  • the lid of the fermenter was connected to the fermenter and kept anaerobic using vacuum grease and Teflon tape. Carbon dioxide gas was introduced into the fermenter for about 10 minutes through the gas collecting port of the fermenter lid (the inside of the fermenter was changed to anaerobic state, and carbon dioxide gas was continuously flowed until the incubation started). Sealed with Teflon tape. After all the devices were connected, the peristaltic pump was operated and a buffer was introduced into the fermenter. The anaerobic broth was introduced into the fermenter until it overflowed through the feed inlet, and then the CO2 gas was stopped and all inlets were blocked.
  • the circulating water tank and the fermentation tank were connected, set to a temperature of 39 ° C., and the culture was started with stirring at 99 rpm to 102 rpm with a stirring rod.
  • the culture medium of the fermenter was kept constant at pH 6.8 ⁇ 7.1, temperature 39 °C -40 °C, and maintained a turnover rate of 0.042 h -1 .
  • the turnover rate of the substrate was maintained at 0.017 h ⁇ 1 .
  • the methane generation reduction effect experiment was carried out according to the operation method described above using the rumen model continuous culture system (RSCC system) of Preparation Example 3, the feed additive for methane reduction was added with the substrate at the time of substrate addition. .
  • RSCC system rumen model continuous culture system
  • the rumen model continuous culture system was operated during the adaptation period (5 days), and then the total gas generation, methane generation and pH values of the control were measured for 3 days.
  • diallyl disulfide (DADS) is added at a ratio of 0.1 wt%, 0.2 wt% and 0.4 wt% per 10 g of substrate, and the total amount of gas generated at the same time every day for 3 days as in the control.
  • Methane generation amount and pH value were measured.
  • the methane reduction rate was measured after the adaptation period with the newly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 1 and FIG. 1.
  • the pH of the rumen solution showed a tendency to decrease as the diallyl sulfide addition content was increased, the methane generation was reduced by 30.5%, 65.2% and 65.9% compared to the control.
  • the reduction rate of methane according to the addition content of 0.2 wt% and 0.4 wt% was about 65%, which means that adding 0.2 wt% diallyl sulfide may be economically advantageous. it means.
  • the rumen model continuous culture system was operated during the adaptation period (5 days), and then the total gas generation, methane generation and pH values of the control were measured for 3 days. After the control measurement was completed, Alliin was added at a rate of 0.5 wt% per 10 g of substrate, and the total gas generation amount, methane generation amount, and pH value were measured at the same time every day for three days as in the control. Each time the addition content was verified, the methane reduction rate was measured after the adaptation period with freshly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 2 and FIG. 2.
  • the rumen model continuous culture system was operated during the adaptation period (5 days), and then the total gas generation, methane generation and pH values of the control were measured for 3 days. After the control measurement was completed, nitrate was added at a rate of 0.35 wt%, 0.5 wt% and 1.0 wt% per 10 g of substrate, and the total gas generation, methane generation and pH values were measured at the same time every day for 3 days as in the control. It was. Every time the addition content was verified, the methane reduction rate was measured after a period of adaptation with freshly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 3 and FIG. 3.
  • the rumen model continuous culture system was operated during the adaptation period (5 days), and then the total gas generation, methane generation and pH values of the control were measured for 3 days. After the control measurement was completed, Eucalyptus oil was added at a rate of 0.5 wt% per 10 g of substrate, and the total gas generation, methane generation and pH values were measured at the same time every day for 3 days as in the control. The measurement results are shown in Table 4 and FIG. 4.
  • the rumen model continuous culture system was operated during the adaptation period (5 days), and then the total gas generation, methane generation and pH values of the control were measured for 3 days.
  • berberine is added at a ratio of 0.1 wt%, 0.2 wt% and 0.5 wt% per 10 g of substrate, and the total gas generation, methane generation, pH at the same time every day for 3 days as in the control.
  • the numerical value was measured.
  • the methane reduction rate was measured after the adaptation period with freshly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 5 and FIG. 5.
  • diallyl sulfide, nitrate, berberine and eucalyptus oil blending additives are added at a ratio of 0.3 wt% or 0.5 wt% to 10 g of substrate, and the total amount of gas generated at the same time every day for 3 days, Methane generation amount and pH value were measured. Each time the addition content was verified, the methane reduction rate was measured after a period of adaptation with freshly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 6 and FIG. 6.
  • the methane reduction rate was significantly increased as compared to when the additives were added alone, as the dialyl sulfide, nitrate, berberine and eucalyptus oil were mixed to confirm the methane reduction rate.
  • Diallyl sulfide and berberine inhibit the growth of methanogens, nitrates competitively preoccupy the hydrogen needed for methane production, and eucalyptus oil reduces methane production, respectively, by reducing the number of protozoa.
  • the synergistic effect showed more than 45% of methane reduction rate.
  • allene, nitrate, berberine and eucalyptus oil mixed additives are added at a ratio of 0.3 wt% or 0.5 wt% relative to 10 g of the substrate, and the total gas generation and methane generation at the same time every day for 3 days as in the control. , pH value was measured. Every time the addition content was verified, the methane reduction rate was measured after a period of adaptation with freshly collected rumen liquid, and the measurement results are shown in Table 7 and FIG. 7.
  • the milking cow specification test was carried out in the methane of diallyl sulfide (DADS), nitrate (Nitrate), berberine and eucalyptus oil mixed additive composition (Power-green premix) mentioned in Example 6)
  • DADS diallyl sulfide
  • Nirate nitrate
  • berberine berberine
  • eucalyptus oil mixed additive composition Power-green premix
  • Laser methane detector is a device that detects methane in the air by near infrared absorption spectroscopy using semiconductor laser. Laser methane detector detection distance was 30 m, methane density data was measured for 5 minutes at 1 second intervals.
  • the mixed additive composition Power-green premix was confirmed that there is an effect of reducing the methane generation in the ruminant ruminant of the ruminant in vitro as well as in vivo test.
  • the treatment group fed the mixed additive composition Power-green premix did not reduce the flow rate compared to the control, rather the flow rate increased by more than 1.1%.
  • feeding 25 g / d to 50 g / d or less of the mixed additive composition Power-green premix does not adversely affect the fermentability in the rumen.

Abstract

본 발명은 반추동물의 반추위 내에서 발생하는 메탄 생성을 저감시키기 위한 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 알린(Alliin) 및 베르베린(Berberine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 더 자세하게는 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS), 질산염(Nitrate) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 추가로 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물에 관한 것이다. 이에 따른, 사료 첨가제 조성물은 추가적인 처리 공정 없이 사료에 첨가하여 급여함으로써 가축의 생산성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 반추위 내 메탄발생량을 감소시킬 수 있기 때문에 반추동물산업에 매우 유용하게 사용될 수 있다.

Description

반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물
본 발명은 반추동물의 반추위 내에서 발생하는 메탄 생성을 저감시키기 위한 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 알린(Alliin) 및 베르베린(Berberine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물에 관한 것이며, 상기 조성물은 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS), 질산염(Nitrate) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
최근 인구증가의 결과로써 식량요구량은 2050년도에 70% 이상 증가할 것으로 예상되며(FAO, 2009), 이러한 요구에 부응하기 위하여 축산물, 즉 육류와 유제품의 증가는 현재보다 두 배 이상될 것으로 예상된다. 그러나 축산물, 특히 반추동물산업은 지역적 및 전 세계적으로 지구환경에 부정적인 영향을 미치는 것으로 최근 인식되고 있다. 지역적으로는 집약적인 축산업이 공기, 토양, 수질 등의 오염에 기여하고, 지구환경의 관점에서는 온실가스의 주요한 원인으로 알려져 있다. 특히, 2006년 FAO에서 발표한 Liverstock's shadow(Steinfeld et al., 2006) 보고서는 가축산업이 환경에 미치는 영향을 구체적으로 보고하였다.
가축산업을 유지함으로써 생산되는 온실가스의 양은 이산화탄소에 준하는 계산방법으로 연간 약 41억~71억 톤으로 예상되는데, 이는 온실가스 총 생산량의 약 15~24%에 해당하는 수치이다(Steinfeld et al., 2006). 부분별로 보면 가축이 생산하는 이산화탄소, 메탄, 아산화질소의 양은 비율적으로 인간활동에 의해 생산되는 양의 9%, 35~40%, 65%를 차지하고 있어 심각한 수준에 이르고 있다.
알려진 바와 같이, 메탄과 아산화질소의 대부분은 가축을 키우는 농장에서 생상된다. 즉, 반추동물이 섭취한 사료는 반추위 내에서 서식하는 반추위 내 혐기성 미생물(박테리아, 프로토조아(protozoa), 곰팡이)의 발효작용에 의하여 휘발성 지방산, 수소, 이산화탄소, 암모니아태 질소 등으로 분해되며 이 중 이산화탄소와 수소는 메탄 생성 박테리아에 의해 메탄으로 생성된다. 생성된 메탄은 체내에 흡수되지 못하고 대기로 방출되게 된다. 최근 뉴질랜드의 한 연구진들은, 약 80%의 온실가스가 농장에서 발생되었으며, 단지 3% 정도가 도살 후 고기를 처리하는 과정에서, 5% 정도가 육류를 운반하는 과정에서, 마지막으로 12% 정도가 소비자에 의해 소비되는 과정에서 발생되었다고 보고하였다(Ledgard et al., 2010). 또한, 영양소가 가스 형태의 메탄으로 전환되는 과정에서 사료 에너지 손실(2~15%)이 발생한다. 따라서, 가축의 생산성 향상 및 지구 환경에 유해한 온실가스를 줄이기 위하여 반추동물의 반추위 내에 메탄 발생량을 감소시키기 위한 연구가 시행되고 있다.
현재, 반추동물의 메탄가스 생성을 감소시키기 위한 방법으로는 모넨신과 같은 항생제를 사료에 첨가하거나, 반추위 내의 프로토조아를 제거하거나, 할로겐 화합물을 사료에 첨가하거나, 생균제를 급여하는 등의 방법이 연구되고 있다.
그러나, 항생제를 사료에 첨가하는 것은, 점차 화학물질이나 항생제를 사료 첨가제로 사용하는 것을 규제하는 세계적인 추세 및 잔류되어 인체에 유해할 수 있는 문제가 있어 메탄 생성 억제방법으로 항생제의 사용은 적합하지 않다. 프로토조아를 제거하는 것은 섬유소를 감소시킬 수 있는 문제가 있으며, 할로겐 화합물을 사료에 첨가하는 것을 메탄가스 억제효과가 지속되지 않으며 축산물로의 잔류성 등 안전성에 문제가 발생할 수 있다. 또한, 생균제를 급여하는 방법은 생균제의 발효양상이나 메탄가스 생성 실험마다 첨가한 균주가 상이하게 나타난다는 문제가 있다.
한편, 한국특허 공개번호 제10-2006-0019062에는 반추동물의 메탄 생성량을 억제하는 사료조성물이 개시되어 있다. 상기 특허는 생강, 부추 추출물 및 복합리놀레산 중 적어도 어느 하나를 포함하는 사료조성물을 반추동물에게 급여함으로써, 반추동물에서의 메탄가스 생성량을 감소시키는 것을 특징으로 하고 있다. 그러나, 개시된 생강, 부추 추출물 및 복합리놀레산을 포함하는 사료조성물을 제조하기 위해서는 별도의 공정과정을 필요로 하기 때문에, 주위에서 쉽게 구할 수 없다는 문제가 있으며, 제조비용이 많이 요구되어 그에 따라 구입비용도 높아지는 문제가 있다.
따라서, 가축의 생산성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서, 지구 환경에 유해한 메탄가스를 효율적으로 줄일 수 있는 메탄 발생 저감 기술이 필요한 실정이다.
본 발명자들은 안전하면서 효율적으로 메탄 생성량을 감소시킬 수 있는 사료 첨가제를 연구하던 중, 황화디알릴, 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 각각 또는 이들의 혼합물을 반추위 내 환경과 동일한 조건으로 개발된 반추위 모형 연속배양 시스템(Rumen simulation continuous culture system, RSCC)으로 배양한 결과 대조구와 비교하여 현저한 메탄 저감율을 나타내는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 황화디알릴, 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 중 하나 이상을 포함하는 안전하면서 효율적인 메탄 생성 저감 효과를 갖는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 사료 첨가제 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 메탄 생성 저감 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물은 추가적인 처리 공정 없이 사료에 첨가하여 급여함으로써 가축의 생산성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 반추위 내 메탄발생량을 감소시킬 수 있기 때문에 반추동물산업에 매우 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은, 본 발명의 일 실시예에 따른 황화디알릴(DADS) 첨가 함량에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 2는, 본 발명의 일 실시예에 따른 알린(Alliin) 첨가에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 3은, 본 발명의 일 실시예에 따른 질산염(Nitrate) 첨가 함량에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 4는, 본 발명의 일 실시예에 따른 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 첨가에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 5는, 본 발명의 일 실시예에 따른 베르베린(Berberine) 첨가 함량에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 6은, 본 발명의 일 실시예에 따른 황화디알릴(DADS), 질산염(Nitrate), 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 및 베르베린(Berberine) 혼합 조성물 첨가 함량에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 7은, 본 발명의 일 실시예에 따른 알린(Alliin), 질산염(Nitrate), 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 및 베르베린(Berberine) 혼합 조성물 첨가 함량에 따른 메탄 저감율을 나타낸 그래프이다.
도 8은, 본 발명의 일 실시예에 따른 황화디알릴(DADS), 질산염(Nitrate), 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 및 베르베린(Berberine) 혼합 조성물 첨가 함량에 따른 착유우가 발생시키는 메탄 발생량을 나타낸 그래프이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명의 하나의 양태는 알린(Alliin) 및 베르베린(Berberine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
또한, 상기 조성물은 건조사료 중량 대비 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 또는 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가될 수 있다.
본 발명의 용어 "알린(Alliin)"은 마늘, 양파 등의 마늘 또는 양파 냄새 성분으로 (2R)-2-아미노-3-[(S)-프로프-2-에닐설피닐]프로파노익 에시드((2R)-2-amino-3-[(S)-prop-2-enylsulfinyl]propanoic acid)를 말한다. 상기 사료 첨가제 조성물은 알린을 1 내지 100 중량%, 구체적으로는 10 내지 90 중량%, 보다 구체적으로는 20 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "베르베린(Berberine)"은 이소퀴놀린 알칼로이드(Isoquinoline alkaloid)의 프로토베르베린 그룹(Protoberberine group)에 속하는 4가 암모늄 염(Quaternary ammonium salt)를 의미하며, 5,6-디하이드로-9,10-디메톡시벤조[g]-1,3-벤조디오졸로[5,6-a]퀴놀리지니움(5,6-dihydro-9,10-dimethoxybenzo[g]-1,3-benzodioxolo[5,6-a]quinolizinium)을 말한다. 상기 사료 첨가제 조성물은 베르베린을 1 내지 100 중량%, 구체적으로는 10 내지 90 중량%, 보다 구체적으로는 20 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "메탄"은 메탄가스(CH4)를 의미하며, 각종 유기물질의 분해에서 발생하는 것으로 지구온난화의 주범으로 알려져 있다. 특히, 반추위에 존재하는 여러 종류의 미생물이 먹이를 발효시키는 과정에서 탄수화물이 휘발성 지방산으로 변화하고 일부는 메탄가스가 되는데, 이렇게 발생하는 메탄가스가 전세계 메탄 가스 배출량의 약 4분의 1을 차지한다. 반추동물의 반추위내 메탄 생성은 섭취한 사료 에너지 중에서 약 10% 정도의 손실을 초래한다. 즉, 반추위에서 생성되는 메탄을 포함하는 발효가스의 발생은 지구 온난화에 기여할 뿐만 아니라 가축의 에너지 흡수 효율을 떨어뜨려 생산성 저하에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 알린을 기질 10 g당 0.5 wt%의 비율만큼 첨가한 결과, 메탄 저감율이 21.9%로 황화디알릴보다는 낮은 효과를 보였으나, pH는 대조구와 유사하게 유지되었다. 알린은 황화디알릴보다 메탄 저감 효과는 낮았지만 반추위액 내 안정화 측면에서는 더 효과적인 것으로 보였다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면, 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 베르베린을 기질 10 g당 0.1 wt%, 0.2 wt% 및 0.5 wt%의 비율만큼 첨가한 결과, 메탄 저감율이 6.7%, 12.4%, 45.5%로 확인되었다. 베르베린을 0.5 wt% 첨가하였을 때 메탄 저감 효과가 45.5%으로 높게 나타났으나 건물소화율이 유의적으로 감소하였기 때문에 0.5wt% 미만의 첨가량이 적정 수준으로 보여졌다.
또한, 상기 조성물은 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS), 질산염(Nitrate) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 용어 "황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS)"은 4,5-디티아-1,7-옥타디엔 디알릴설파이드(4,5-dithia-1,7-octadiene Diallyldisulfide)를 말하며, 살균, 항균, 혈액순환 개선에 효과적이며 고혈압, 동맥경화, 협심증, 심근경색, 뇌졸중 등 성인병 예방효과와 항암 효과 등이 뛰어나다고 알려져 있다. 상기 사료 첨가제 조성물은 황화디알릴을 1 내지 90 중량%, 구체적으로는 20 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "질산염(Nitrate)"은 질산이온 NO3 -의 화합물을 총칭하는 것으로, 예를 들어 질산나트륨(sodium nitrate), 질산칼륨(potassium nitrate), 질산칼슘(calcium nitrate), 질산암모늄(ammonium nitrate) 등이 이에 해당하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 사료 첨가제 조성물은 질산염을 1 내지 90 중량%, 구체적으로는 20 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 "유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)"은 유칼립투스(Eucalyptus) 나무의 잎을 증류하여 얻은 정유(精油)를 말한다. 무색에서 담황색을 띠는 투명한 액체로 특유의 쏘는 듯한 향을 지니고 있으며 맛은 자극성이나 청량감을 준다. 상기 사료 첨가제 조성물은 유칼립투스 오일을 1 내지 90 중량%, 구체적으로는 20 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 황화디알릴이 0.005 wt% 내지 4 wt%, 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 또는 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 만약, 질산염을 0.5 wt% 초과하여 첨가할 경우 아질산염 축적, 질산염 독성 증후군 등의 문제가 발생할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 황화디알릴을 기질 10 g당 0.1 wt%, 0.2 wt% 및 0.4 wt%의 비율만큼 첨가한 결과, 메탄 저감율은 30.5%, 65.2% 및 65.9%이었다. 첨가함량에 따른 메탄 저감율을 비교하였을 때, 0.2 wt%와 0.4 wt% 첨가함량에 따른 메탄 저감율은 65%로 비슷하였으며, 이는 0.2 wt% 정도의 황화디알릴을 첨가하는 것이 경제적으로 유리할 수 있음을 의미한다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면, 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 질산염을 기질 10 g당 0.35 wt%, 0.5 wt% 및 1.0 wt%의 비율만큼 첨가한 결과, 메탄 저감율이 14.0%, 31.0%, 8.1%이었다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면, 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 유칼립투스 오일을 기질 10 g당 0.5 wt%의 비율만큼 첨가한 결과, 메탄 저감율이 20.5%이었다. 같은 첨가 수준의 황화디알릴보다 메탄 저감 효과는 낮았지만 반추위액 내 안정화 측면에서는 더 효과적이었다.
본 발명의 사료 첨가제 조성물은 부작용을 최소화하기 위하여, 상기의 각 유효성분들을 혼합하여 포함할 수 있다. 이에, 혼합 조성물이 시너지 효과를 가지므로써, 소량의 첨가로 효과적인 메탄 저감 효과를 나타낼 수 있다.
또한, 일 구체예로서, 상기 조성물은 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 포함할 수 있다. 상기 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일의 함량은 상기에서 설명한 바와 같다.
구체적으로는, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 황화디알릴이 0.005 wt% 내지 4 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 및 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 건조 사료 중량 대비 황화디알릴 0.05 wt%, 질산염 0.2 wt%, 베르베린 0.05 wt% 및 유칼립투스 오일 0.2 wt%를 혼합하여 첨가제로 사용한 경우, 56.2%의 효과적인 메탄 저감율을 나타내었으며, 다른 혼합 조성물을 첨가제로 사용한 경우에도 적은 양으로 우수한 저감율을 나타내는 효과가 있음을 확인하였다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 메탄 저감용 사료 조성물(황화디알릴: 질산염: 베르베린: 유칼립투스 오일 = 0.05 wt%: 0.1 wt%: 0.05 wt%: 0.1 wt%)을 착유우에 25g/d 급여하는 경우 23.1%, 50g/d 급여하는 경우 36.6%의 효과적인 메탄 저감율을 나타냈다. 또한 유량도 대조구 대비 감소하지 않고 1.1% 이상 증가하여 메탄 저감용 혼합 조성물이 반추위내 발효성상에 미치는 부정적인 영향은 없는 것으로 확인되었다.
또한, 다른 구체예로서, 상기 조성물은 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 포함할 수 있다. 상기 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일의 함량은 상기에서 설명한 바와 같다.
구체적으로는, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 및 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 건조 사료 중량 대비 알린, 베르베린 각 0.05 wt% 첨가함량 대비 질산염과 유칼립투스 오일의 첨가함량을 0.1 wt% 또는 0.2 wt%로 달리하여 측정한 결과, 각 첨가제를 단독 첨가하였을 때보다 메탄 저감율이 증가하여 시너지효과를 확인할 수 있었다.
상기 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물을 적용할 수 있는 개체는 특별히 한정되지 않고, 어떠한 형태의 것이든 적용 가능하다. 예를 들면, 소, 양, 기린, 낙타, 사슴, 염소 등과 같은 동물에 제한없이 적용가능하며, 특히 구체적으로는 반추위를 가지는 반추동물에 적용가능하다.
본 발명의 용어, "반추위"란 포유류 소목의 일부 동물에서 볼 수 있는 특수한 소화관으로, 일명 되새김을 하기 위해 혹위, 벌집위, 겹주름위, 및 주름위의 4개의 방으로 나뉘어 있다. 일명 되새김위라고도 하며, 한번 삼킨 음식물을 다시 입안으로 토하여 잘 씹은 후에 삼키는 것을 반추라고 하고, 이런 반추를 가능하게 하는 위를 반추위라고 한다. 반추위에는 미생물이 공생하고 있어서 일반적인 동물들이 소화하지 못하는 식물의 셀룰로스를 분해하여 에너지화할 수 있는 능력을 갖게 된다.
본 발명의 용어, "반추동물"이란 상기 설명한 반추위를 갖는 동물을 의미하며, 이에는 낙타과, 애기사슴과, 사슴과, 기린과 및 소과의 동물들이 포함된다. 다만, 낙타과와 애기사슴과는 겹주름위와 주름위가 완벽하게 분화되지 않아 3개의 방으로 이루어진 반추위를 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물은 개별적으로 사용될 수 있고, 종래 공지된 사료 첨가제와 병용하여 사용될 수 있으며, 종래의 사료 첨가제와 순차적 또는 동시에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물은 알린, 베르베린 또는 황화디알릴의 생리학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물 및 수화물을 모두 포함하고, 가능한 모든 입체이성체도 포함할 수 있다. 또한 상기 알린, 베르베린 또는 황화디알릴의 용매화물, 수화물 및 입체이성체는 통상적인 방법들을 사용하여 제조할 수 있다.
상기 "생리학적으로 허용 가능"은 생리학적으로 허용되고 생물체에게 투여될 때, 통상적으로 위장장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않으면서, 투여되는 화합물이 목적하는 효과를 발휘할 수 있는 통상적으로 사용되는 것을 의미한다.
또한, 상기 알린, 베르베린 및 황화디알릴은 천연물, 화학적 합성 또는 미생물 발효 등을 통해 얻을 수 있으며, 시판되는 것을 구입하여 사용될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태는 상기 사료 첨가제 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 메탄 생성 저감 방법을 제공한다.
이하, 하기 실시예 및 실험예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
제조예: 반추위 모형 연속배양 시스템(Rumen simulation continuous culture system, RSCC)
1) 버퍼 제조(1 L 기준)
2 L의 삼각플라스크에 증류수 250 ㎖를 넣고 미량 광물질 용액(micromineral solution) 0.12 ㎖를 첨가하고 교반한 후 증류수 250 ㎖를 넣고 20분 동안 교반하였다. 버퍼용액(in vitro buffer solution) 250 ㎖를 첨가하고 10분 동안 교반한 후 대량 광물질 용액(Macromineral solution) 250 ㎖ 넣은 후 15분 동안 교반하였다. 그 후 리자주린(resazurin) 용액 1.25 ㎖ 첨가하고 교반하였다. 삼각플라스크의 입구를 알루미늄 호일로 막고 헌게이트 혐기장치에서 이산화탄소 가스로 혐기 상태를 유지(bubbling)하면서 가열하였다. 용액이 끓기 시작하면, 약 10분간 더 가열하고 중지하고 열을 식혔다. 식힌 용액에 정치 용액(reduction solution) 50 ㎖를 첨가하여 버퍼를 수득하였다. 완성된 버퍼는 용액의 색이 무색으로 변하는 것으로 확인하였다.
2) 배양액 제조
채취한 위액을 8겹의 가제로 거른 후 유리솜으로 여과하였다. 여과된 위액은 이산화탄소 가스로 혐기 상태를 유지(bubbling)하였다. 여기에, 상기 1)에서 제조한 버퍼를 이산화탄소 가스로 혐기 상태를 유지하면서 첨가하여 위액과 혼합하였다(위액 250 ㎖, 버퍼 600 ㎖).
3) 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system) 가동방법 및 시험가동
발효조에 10 g의 기질을 투입하였다. 그리고 상기 1)에서 제조한 버퍼는 혐기상태를 유지하면서 버퍼통에 투입하였다. 이산화탄소 가스를 충진시킨 Tedlar bag을 버퍼통과 연결하고 버퍼통과 연결된 튜브는 발효조 뚜껑 중 버퍼 투입구와 연결하였다. 그리고 가스 포집 bag과 연결된 튜브를 발효조 뚜껑 중 가스 포집구와 연결(연결 튜브는 가스용 튜브 사용)하였다. pH 및 온도 전극은 교반봉에 닿지 않도록 주의하면서 전극이 배양액에 충분히 닿을 정도로 넣고, 발효조 뚜껑 중 사료 투입구에 사료투입관을 배양액에 충분히 잠길 정도로 삽입하였다. 발효조의 뚜껑을 발효조와 연결하고 진공용 구리스와 테프론 테이프를 이용하여 혐기상태를 유지하였다. 발효조 뚜껑 중 가스 포집구를 통해 발효조 내부에 이산화탄소 가스를 약 10분간 투입(발효조 내부를 혐기상태로 변화, 이산화탄소 가스는 배양이 시작되기 전까지 계속 흘려보냄)하였으며, 모든 기기의 연결부위는 진공용 구리스와 테프론 테이프로 씰링하였다. 모든 장치를 연결시킨 후, 연동펌프를 작동시키고, 발효조 내부로 버퍼를 투입하였다. 혐기상태의 배양액을 사료투입구를 통해 overflow될 때까지 발효조로 투입한 후 이산화탄소 가스 투입을 중지하고 모든 입구를 막았다. 순환수조와 발효조를 연결하고 39℃ 온도로 세팅하고 교반봉으로 99 rpm 내지 102 rpm으로 교반하면서 배양을 시작하였다. 발효조의 배양액은 pH 6.8~7.1, 온도 39℃~40℃로 일정하게 유지되었으며, 0.042 h-1의 turnover rate를 유지하였다. 기질의 turnover rate은 0.017 h-1로 유지되었다.
실시예 1: 메탄 저감용 사료 첨가제에 따른 메탄 발생 저감 효과
하기, 메탄 발생 저감 효과 실험은 상기 제조예 3)의 반추위 모형 연속배양 시스템(RSCC system)을 이용하여 상기 기재된 가동방법에 따라 진행하였으며, 메탄 저감용 사료 첨가제는 기질 첨가시에 기질과 함께 투입하였다.
1) 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS) 첨가함량별 메탄 발생 저감 효과
반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS)을 기질 10 g당 0.1 wt%, 0.2 wt% 및 0.4 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.
표 1
연속 배양 황화디알릴(DADS) 0.1 wt% 황화디알릴(DADS) 0.2 wt% 황화디알릴(DADS) 0.4 wt%
pH 6.71 6.63 6.58
메탄 저감율(%) 30.5 65.2 65.9
상기 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 황화디알릴 첨가함량을 증가시킬수록 반추위액의 pH는 낮아지는 경향을 보였으며, 메탄 발생량은 대조구에 비해 30.5%, 65.2% 및 65.9% 만큼 감소하였다. 첨가함량에 따른 메탄 저감율을 비교하였을 때, 0.2 wt%와 0.4 wt% 첨가함량에 따른 메탄 저감율은 65%로 비슷하였으며, 이는 0.2 wt% 정도의 황화디알릴을 첨가하는 것이 경제적으로 유리할 수 있음을 의미한다.
2) 알린(Alliin) 첨가에 따른 메탄 발생 저감 효과
반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 알린(Alliin)을 기질 10 g당 0.5 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.
표 2
연속 배양 알린(Alliin) 0.5 wt%
pH 6.84
메탄 저감율(%) 21.9
상기 표 2와 도 2에 나타난 바와 같이, 알린을 첨가하였을 때, 메탄 저감율이 21.9%로 상기 실시예 1)의 황화디알릴보다는 낮은 효과를 보였으나, pH는 대조구와 유사하게 유지되었다. 따라서 알린은 상기 황화디알릴보다 메탄 저감 효과는 낮았지만 반추위액 내 안정화 측면에서는 더 효과적인 것으로 보였다.
3) 질산염(Nitrate)의 첨가함량별 메탄 저감 효과
반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 질산염을 기질 10 g당 0.35 wt%, 0.5 wt% 및 1.0 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 3 및 도 3에 나타내었다.
표 3
연속 배양 질산염(nitrate) 0.35 wt% 질산염(nitrate) 0.5 wt% 질산염(nitrate) 1.0 wt%
pH 6.63 6.65 6.57
메탄 저감율(%) 14.0 31.0 8.1
상기 표 3 및 도 3에 나타난 바와 같이, 질산염을 0.5 wt% 첨가하였을 때 메탄 저감 효과가 가장 높게 나타났다.
4) 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)의 첨가에 따른 메탄 저감 효과
반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)을 기질 10 g당 0.5 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 측정 결과는 하기 표 4 및 도 4에 나타내었다.
표 4
연속 배양 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 0.5 wt%
pH 6.46
메탄 저감율(%) 20.5
상기 표 4 및 도 4에 나타난 바와 같이, 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)을 첨가하였을 때, 메탄 저감율이 20.5%로 상기 2)의 알린 0.5 wt%와 유사한 메탄저감율이 측정되었다. 유칼립투스 오일은 알린과 마찬가지로, 같은 첨가 수준의 황화디알릴보다 메탄 저감 효과는 낮았지만 반추위액 내 안정화 측면에서는 더 효과적이었다.
5) 베르베린(Berberine)의 첨가함량별 메탄 저감 효과
반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 베르베린(Berberine)을 기질 10 g당 0.1 wt%, 0.2 wt% 및 0.5 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 5 및 도 5에 나타내었다.
표 5
연속 배양 베르베린(0.1 wt%) 베르베린(0.2 wt%) 베르베린(0.5 wt%)
pH 6.43 6.44 6.49
메탄 저감율(%) 6.7 12.4 45.5
상기 표 5 및 도 5에 나타난 바와 같이, 베르베린을 0.5 wt% 첨가하였을 때 메탄 저감 효과가 45.5%으로 높게 나타났으나 건물소화율이 유의적으로 감소하였기 때문에 0.5wt% 미만의 첨가량이 적정 수준으로 판단되었다.
6) 황화디알릴(DADS), 질산염(Nitrate), 베르베린(Berberine) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 혼합 첨가제 조성물의 메탄 저감 효과
각기 다른 기작으로 메탄 저감 효과를 보이는 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 혼합 첨가하였을 때, 메탄 저감 효과를 측정하여 네 물질의 시너지 효과를 확인하였다. 황화디알릴과 베르베린 0.05 wt%, 첨가함량 대비 질산염과 유칼립투스 오일의 첨가함량을 0.1 wt% 또는 0.2 wt%로 달리하여 측정하였다. 반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 혼합 첨가제를 기질 10 g 대비 0.3 wt% 또는 0.5 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 6 및 도 6에 나타내었다.
표 6
연속 배양 황화디알릴:질산염:베르베린:유칼립투스 = 0.05 wt%:0.1 wt%:0.05 wt%:0.1 wt% 황화디알릴:질산염:베르베린:유칼립투스 = 0.05 wt%:0.2 wt%:0.05 wt%:0.2 wt%
pH 6.72 6.72
메탄저감율(%) 45.2 56.2
상기 표 6 및 도 6에 나타난 바와 같이, 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 혼합 첨가하여 메탄 저감율을 확인한 결과 각 첨가제를 단독 첨가하였을 때보다 메탄 저감율이 현저히 증가하였다. 황화디알릴과 베르베린은 메탄 생성 미생물(methanogen)의 성장을 저해함으로써, 질산염은 메탄 생성에 필요한 수소를 경쟁적으로 선점함으로써, 또한 유칼립투스 오일은 프로토조아(protozoa) 수를 감소시킴으로써 각각 메탄발생량을 감소시키며, 이러한 기능을 가지는 네 가지 물질을 혼합함으로써 각각 소량으로 첨가했음에도 불구하고 시너지효과를 통해 45%이상의 메탄저감율을 나타내었다.
7) 알린(Alliin), 질산염(Nitrate), 베르베린(Berberine) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 혼합 첨가제 조성물의 메탄 저감 효과
상기 6)에 표기된 네 가지 혼합 첨가제 중 황화디알릴 대신 알린을 첨가했을 때 메탄 저감 효과를 측정하여, 네 물질의 시너지 효과를 확인하였다. 알린, 베르베린 0.05 wt% 첨가함량 대비 질산염과 유칼립투스 오일의 첨가함량을 0.1 wt% 또는 0.2 wt%로 달리하여 측정하였다. 반추위 모형 연속배양 시스템을 적응 기간(5일) 동안 가동시킨 후 3일 동안 대조구의 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 대조구 측정이 완료된 후, 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 혼합 첨가제를 기질 10 g 대비 0.3 wt% 또는 0.5 wt%의 비율만큼 첨가하고, 대조구와 마찬가지로 3일 동안 매일 동일한 시간에 총 가스 발생량, 메탄 발생량, pH 수치를 측정하였다. 한 첨가함량을 검증할 때마다 새로 채취한 반추위액으로 적응기간을 가진 후 메탄 저감율을 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 7 및 도 7에 나타내었다.
표 7
연속 배양 알린:질산염:베르베린:유칼립투스 = 0.05 wt%:0.1 wt%:0.05 wt%:0.1 wt% 알린:질산염:베르베린:유칼립투스 = 0.05 wt%:0.2 wt%:0.05 wt%:0.2 wt%
pH 6.68 6.69
메탄 저감율(%) 22.0 30.2
상기 표 7 및 도 7에 나타난 바와 같이, 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 혼합 첨가제 조성물의 메탄 저감 효과를 측정한 결과, 각 첨가제를 단독 첨가하였을 때보다 메탄 저감율이 증가하여 시너지효과를 확인하였다. 또한 상기 6)과 7)의 혼합 첨가제 간의 메탄 저감율을 비교해볼 때, 알린보다는 황화디알릴의 메탄 저감 효과가 더 우수한 것으로 확인되었다.
실시예 2: 메탄 저감용 사료 첨가제가 착유우의 생산성과 반추위 내 메탄발생량에 미치는 영향 평가
하기, 착유우 사양시험은 상기 실시예 1의 6)에서 언급된 황화디알릴(DADS), 질산염(Nitrate), 베르베린(Berberine) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil) 혼합 첨가제 조성물(Power-green premix)의 메탄 저감 효과를 낙농사양시험을 통해 검증하고자 하였으며 이와 함께 낙농 생산성에 미치는 영향도 함께 평가하였다. 현장 농가에서 착유우가 발생시키는 메탄발생량은 Laser methane detector를 이용하여 실시간으로 모니터링하였다.
1) Power-green premix(황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 혼합 첨가제 조성물)이 착유우의 장내 메탄 발생량에 미치는 효과
상기 실시예 1의 6)에서 언급된 혼합 첨가제 조성물 Power-green premix(황화디알릴: 질산염: 베르베린: 유칼립투스 오일 = 0.05 wt%: 0.1 wt%: 0.05 wt%: 0.1 wt%)의 메탄저감효과를 검증하기 위해 착유우 40두를 대조구(20두)와 처리구(20두)로 배치하였으며, 시험기간 동안 처리구에만 Power-green premix를 topdressing 형태로 급여하였다. 구간별 Power-green premix의 급여량은 표 8에 나타내었다.
표 8
대조구 (20두) 처리구 (20두)
1구간(2주) Power-green premix 0g/d Power-green premix 25g/d
2구간(2주) Power-green premix 0g/d Power-green premix 50g/d
Laser methane detector는 반도체레이저를 이용한 근적외선흡수분광법에 의하여 공기 중의 메탄을 검지하는 기기로, 우군별 착유우가 사료를 섭취할 때 발생시키는 메탄발생량을 측정하였다. Laser methane detector 검지거리는 30 m로, 메탄밀도 데이터는 1초 간격으로 5분 동안 측정되었다.
혼합 첨가제 조성물 Power-green premix를 착유우에 지속적으로 급여한 결과, Power-green premix 첨가량과 메탄 저감 효과가 비례하였다. Power-green premix를 두당 25g/d 급여한 1구간에서는 23.1%의 메탄 저감율을 보였으며, 50g/d씩 급여한 2구간에서는 36.6%의 메탄 저감율을 보였다(표 9).
표 9
처리구 메탄저감효과(%)
1구간(Power-green premix 25g/d) 23.1
2구간(Power-green premix 50g/d) 36.6
상기 표 9와 도 8에 나타난 바와 같이, 혼합 첨가제 조성물 Power-green premix는 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 시험에서도 반추동물의 반추위 내 메탄 발생량 저감 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
2) Power-green premix(황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일 혼합 첨가제 조성물)이 착유우의 생산성에 미치는 효과
상기 실시예 1의 6)에서 언급된 혼합 첨가제 조성물 Power-green premix의 메탄 저감 효과와 더불어 착유우의 생산성에 미치는 영향을 확인하기 위하여 대조구와 처리구 간의 유량 변화를 분석하였다. 착유우의 그룹정보와 유량은 표 10에 나타내었다.
표 10
그룹정보 유량(kg)
그룹 산차 비유일수 1구간 2구간
대조구 2.4 225 30.6 29.4
처리구 2.5 243 31.2 29.8
유량개선율(%) 2.0% 1.1%
상기 표 10에 나타난 바와 같이, 혼합 첨가제 조성물 Power-green premix를 급여한 처리구는 대조구 대비 유량이 감소하는 현상은 없었으며, 오히려 유량이 1.1% 이상 증가하는 결과를 보였다. 이 결과를 통해 혼합 첨가제 조성물 Power-green premix를 25g/d 내지 50g/d 이하 급여할 경우, 반추위 내 발효성상에 부정적인 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 알린(Alliin) 및 베르베린(Berberine)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 건조사료 중량 대비 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 또는 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가되는 것인 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 황화디알릴(Diallyl disulfide, DADS), 질산염(Nitrate) 및 유칼립투스 오일(Eucalyptus oil)로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 추가로 포함하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 황화디알릴이 0.005 wt% 내지 4 wt%, 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 또는 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가되는 것인 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 황화디알릴, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 황화디알릴이 0.005 wt% 내지 4 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 및 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가되는 것인 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  7. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 알린, 질산염, 베르베린 및 유칼립투스 오일을 포함하는 것을 특징으로 하는 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 조성물은 건조 사료 중량 대비 알린이 0.005 wt% 내지 5 wt%, 질산염이 0.01 wt% 내지 0.5 wt%, 베르베린이 0.005 wt% 내지 5 wt% 및 유칼립투스 오일이 0.01 wt% 내지 5 wt%로 첨가되도록 하는 양으로 사료에 첨가되는 것인 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 메탄 생성 저감 방법.
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