WO2015146581A1 - 魚類の防疫方法 - Google Patents

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WO2015146581A1 PCT/JP2015/057087 JP2015057087W WO2015146581A1 WO 2015146581 A1 WO2015146581 A1 WO 2015146581A1 JP 2015057087 W JP2015057087 W JP 2015057087W WO 2015146581 A1 WO2015146581 A1 WO 2015146581A1
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meal
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high protein
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陽平 田▲崎▼
三四郎 齋藤
久 片岡
越塩　俊介
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株式会社Ｊ－オイルミルズ
国立大学法人鹿児島大学
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    • Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production

Definitions

  • the present invention relates to a fish prevention method, and more particularly, to a method for protecting a fish easily and inexpensively.
  • fish farms may suffer from fish diseases such as viral infections, bacterial diseases, and fungal diseases, resulting in mass death.
  • fish diseases such as viral infections, bacterial diseases, and fungal diseases
  • the decrease in catch due to the occurrence of fish diseases is wasteful of the cost and time spent on aquaculture such as fry, feed and labor costs.
  • antibiotics, antibacterial agents, vaccines, chemicals and the like have been administered as a preventive measure.
  • administration of antibiotics and the like is a concern for problems such as induction of antibiotic-resistant bacteria, burden on environmental water, cost, and increased labor during administration.
  • immunostimulatory substances such as ⁇ -glucan, peptidoglycan, lipopolysaccharide, chitin / chitosan, and lactoferrin to fish is practiced.
  • yeast containing astaxanthin (Patent Document 1), inactivated dead cells derived from bacteria belonging to the genus Lactococcus, etc., cell disruptions derived from Gram-positive bacteria (Patent Document 2), polys containing specific basic amino acids Peptide (Patent Document 3), Vitamin, Digestive Enzyme, Combination of Live Bacteria and Immunostimulant (Patent Document 4), Peptide Obtained by Mixed Culture of Bacillus thuringes and Bacillus pumilus (Patent Document 5), Yeast Administration of yeast cells treated with a cell wall lytic enzyme (Patent Document 6), a combination of a specific cytokine and an enteric protective polymer (Patent Document 7), etc. has also been proposed.
  • fish meal is a protein source commonly used in fish feed.
  • fish meal has a problem that its market price is easily influenced by the amount of fish catch, so that search for fish meal substitute raw materials has been conducted, and soybean meal and rapeseed meal are known as alternative protein sources.
  • soybean meal and rapeseed meal are known as alternative protein sources.
  • rapeseed meal has low protein content and digestibility, it has been difficult to use it for fish whose protein requirement is higher than that of cattle, pigs and other livestock.
  • JP 2002-080351 A JP 2001-342140 A JP 2000-325026 A JP 2001-190231 A JP 2000-103740 JP-A-8-280332 JP2012-505193
  • An object of the present invention is to provide a method for enhancing the prevention of fish in a cheap and simple manner. Another object of the present invention is to provide a method for improving rapeseed meal that has not been suitable as a fish meal substitute material for fish feed because of its low nutrient intake.
  • the present invention is a feed containing a high protein rapeseed meal and fish meal having a protein content of 40 to 50%, wherein the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and the fish meal is 10 to 30% by weight.
  • a method for the prevention of fish is provided, comprising administering to the fish the feed that is%, to enhance the prevention of the disease.
  • the above-mentioned epidemic prevention ability is, for example, serum bactericidal activity.
  • the feed further includes blending soybean meal.
  • the ratio of the soybean meal to the total of the soybean meal and the fish meal is preferably 10 to 30% by weight.
  • the present invention also provides a feed containing high protein rapeseed meal and fish meal having a protein content of 40 to 50%, wherein the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and the fish meal is 10 to Provided is a method for regulating fish muscle lipid, comprising administering to a fish the feed that is 30% by weight.
  • the present invention also includes a high protein rapeseed meal and fish meal having a protein content of 40 to 50%, and the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and fish meal is 10 to 30% by weight. Provide feed.
  • the fish feed further contains soybean meal.
  • the ratio of the soybean meal to the total of the soybean meal and the fish meal is preferably 10 to 30% by weight.
  • the present invention also provides a high protein rapeseed meal and fish meal having a protein content of 40 to 50%, such that the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and fish meal is 10 to 30% by weight.
  • a method for producing a feed for fish farming comprising blending.
  • the method for producing fish feed further includes blending soybean meal.
  • the ratio of the soybean meal to the total of the soybean meal and the fish meal is preferably 10 to 30% by weight.
  • serum bactericidal activity and leukocyte phagocytic ability are enhanced as compared with fish meal feed.
  • the amount of protein in the body surface mucus decreases, which means an increase in mucopolysaccharides and an increase in the prevention of epidemics.
  • the bactericidal activity of serum is enhanced more than when a portion of fish meal is replaced with conventional rapeseed meal.
  • this enhancement is exhibited from the time of juvenile or fry, the superiority of the method of the present invention is high.
  • the weight increase rate (growth) of the fish is clearly inferior to the fish meal-based feed with the same protein content. That is, the intake rate of nutrients derived from rapeseed meal is poor.
  • the rate of weight increase of the fish is improved.
  • the protein content of the high protein rapeseed meal used in the method of the present invention is improved to the same level as that of soybean meal, although it is lower than that of fish meal. And the manufacturing cost of the feed used by this invention is cheap compared with a fish meal main body feed.
  • the fish bred by the method of the present invention have a high muscle lipid accumulation action. Thereby, the value of livestock and fishery products can be raised.
  • the method of the present invention has sufficient industrial utility value as an alternative to feed mainly composed of fish meal.
  • Example 2 and Comparative Example 2 The result of having measured the phagocytosis rate of the leukocyte of the fish after 2 weeks (2W) and 4 weeks (4W) when fed for 4 weeks is shown.
  • the phagocytosis rate of leukocytes is enhanced compared to the fish meal-based feed (control).
  • flounder was obtained using a fish meal-based feed (control), a feed replaced with conventional rapeseed meal (Comparative Examples 1 and 2), and a feed replaced with high protein rapeseed meal (Examples 1 and 2).
  • the result of measuring the protein amount in the body surface mucus of the fish after 2 weeks (2W) and 4 weeks (4W) when fed for 4 weeks is shown.
  • Example 2 The results of measuring serum bactericidal activity (E. coli survival rate) after 2 weeks and 4 weeks when fed for 4 weeks are shown.
  • the bactericidal activity of the sera of Comparative Examples 1 and 2 is not much different from the control group.
  • both Examples 1 and 2 have enhanced bactericidal activity at 4 weeks.
  • Example 2 since the bactericidal activity is high from the early stage of the 2nd week, by administering a feed in which a part of the fish meal is replaced with a high protein rapeseed meal from the time of juvenile or fry, it is possible to prevent epidemics. High-quality fish can be raised.
  • the target of the fish epidemic prevention method of the present invention is not particularly limited as long as it is a fish.
  • the method of the present invention is particularly applicable to farmed fish.
  • the feed contains fish meal as a protein source.
  • fish meal conventional ones can be used without particular limitation.
  • the proportion of fish meal in the feed is usually 30 to 70% by weight, preferably 40 to 60% by weight.
  • the feed used in the method of the present invention contains a high protein rapeseed meal having a protein content of 40 to 50% by weight, preferably 40 to 48% by weight, particularly preferably 40 to 46% by weight, based on water content. If the protein content is less than 40%, the effects of the present invention may be reduced, leading to deterioration in growth or a decrease in the survival rate. Conversely, if the protein content exceeds 50%, the burden on the environment due to increased nitrogen excretion (water pollution) Etc.).
  • the crude lipid of the high protein rapeseed meal is usually 5% or less, preferably 1 to 4%, more preferably 1.5 to 3%.
  • the crude fiber content of the high protein rapeseed meal is usually 8% or less, preferably 1 to 7%, more preferably 1 to 6%.
  • NDF neutral detergent fibers
  • ADF acid detergent fiber
  • Lignin is usually 4% or less, preferably 3% or less.
  • the glucosinolate content of the high protein rapeseed meal is usually 30 ⁇ mol / g or less, preferably 20 ⁇ mol / g or less, more preferably 10 ⁇ mol / g or less.
  • High protein rapeseed meal can be produced by rapeseed molting, washing, enzyme treatment, alcohol treatment, sieving treatment, and the like.
  • the sieving classification product when the sieving treatment is performed with a sieve of 32 mesh (aperture 500 ⁇ m) or less, preferably 48 mesh (aperture 300 ⁇ m) or less, the protein content, the crude lipid, and the coarse fiber are within the above preferred ranges. It is preferable in that it can be easily obtained.
  • the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and the fish meal is 10 to 50% by weight, preferably 10 to 30% by weight. If the said ratio is 10 weight% or less, the epidemic prevention ability of fish will not be strengthened effectively. On the other hand, if it exceeds 50% by weight, a large amount of other protein sources are required to secure the amount of protein in the feed, and there is a problem that crude fibers are added more than necessary.
  • the feed is preferably supplemented with other protein sources to supplement the protein content reduced by the use of high protein rapeseed meal.
  • protein sources include soybean meal, molted soybean meal, soybean protein concentrate, isolated soybean protein, rapeseed meal, cottonseed meal, lupine seed meal, corn distilled meal, corn gluten meal, corn gluten feed, alfalfa powder, potato Plant protein sources such as protein, chickpea, pea, kidney bean, lentil and black bean; animal protein sources such as meat and bone meal, blood meal, feather meal, pork meal, chicken meal and skim milk powder.
  • Soybean meal is preferred because it supplements lysine, which is often deficient in high protein rapeseed meal.
  • the ratio of the soybean meal to the total of the soybean meal and the fish meal is usually: It is 10 to 30% by weight, preferably 15 to 26% by weight. If the ratio is less than 10%, the effect is reduced. Conversely, if it exceeds 50%, the growth may be poor or the food intake may be reduced.
  • those commonly used as raw materials for fish feed can be used without particular limitation.
  • Such examples include grains such as rice, brown rice, rye, wheat, barley, corn, milo, soybean; vegetable oils, animal fats, powdered beef tallow, liver oils and other fats; lysine, methionine, taurine, Amino acids such as arginine; vitamins such as vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, vitamin B12, calcium pantothenate, nicotinamide, folic acid, vitamin C, biotin, choline and the like; vitamin-like substances; zinc, calcium, selenium, Minerals such as iron and phosphorus; inorganic salts such as magnesium sulfate, iron sulfate, copper sulfate, zinc sulfate, potassium iodide, cobalt sulfate, calcium carbonate, tricalcium phosphate, sodium chloride, calcium phosphate
  • general-purpose feed additives used for preventing deterioration of feed quality, promoting effective use of nutritional components, and the like may be used as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • examples include antioxidants, fungicides, binders, emulsifiers, pH adjusters, antibacterial agents, flavoring agents, flavoring agents, enzymes, viable bacteria agents, organic acids, food attractants, yeast Etc.
  • the feed used in the method of the present invention can be obtained by blending the above raw materials.
  • the shape of the feed can be an extruded pellet, a dry pellet, a moist pellet, a paste, and the like.
  • the method of the present invention enhances the bactericidal activity of fish serum and the phagocytosis rate of leukocytes compared to fish meal-based feed.
  • Body surface mucus is secreted from epithelial cells and goblet cells and covers the outermost layer of the epidermis.
  • Body surface mucus is mainly composed of mucopolysaccharides, and plays a particularly important role as a bacterial disease defense mechanism.
  • the method of the present invention reduces the amount of protein in the body surface mucus of fish, which means an increase in mucopolysaccharide in the mucus. Mucopolysaccharides protect against bacteria and viruses that invade from the outside, so a decrease in protein content leads to an increase in the prevention of epidemics.
  • the method of the present invention can be expected to improve the resistance of fish to streptococcal disease, nodular disease, nocardiosis, vibrio disease, iridovirus infection, edwardieria disease, parasitic diseases and
  • the present inventors have also found that muscle lipids of fish bred by the above method are remarkably increased, and that this result can be used to regulate, in particular, up-regulate fish muscle fat. Therefore, the present invention also provides a feed comprising high protein rapeseed meal and fish meal having a protein content of 40 to 50%, wherein the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and the fish meal is 15 to A method for regulating muscle lipids in fish is provided, comprising administering to the fish the feed that is 30% by weight.
  • Example 1 and 2 Preparation of feed
  • a control feed mainly composed of fish meal (product name Fishmeal, manufactured by Nihon Suisan Co., Ltd.) was prepared with the composition shown in Table 1.
  • Examples 1 and 2 were prepared by replacing 20% and 30% of the fish meal of the control diet with high protein rapeseed meal and soybean meal, respectively.
  • the ratio of the high protein rapeseed meal to the total of the high protein rapeseed meal and fish meal was 17.2% in Example 1 and 25.0% in Example 2.
  • soybean meal product name: soybean oil meal, manufactured by J-Oil Mills Co., Ltd.
  • the ratio of soybean meal to the total soybean meal and fish meal was 15.8% in Example 1 and 25% in Example 2.
  • feeds in which 20% and 30% of the fish meal of the control feed were replaced with conventional rapeseed meal were prepared as Comparative Examples 1 and 2, respectively.
  • the ratio of rapeseed meal to the total of rapeseed meal and fish meal was 18.6% in Comparative Example 1 and 26.3% in Comparative Example 2.
  • the protein content reduced by replacing fish meal with rapeseed meal was supplemented with the addition of soybean meal.
  • Table 2 shows the components of fish meal and substitute protein.
  • Table 3 shows the contents of crude protein, crude lipid and amino acid in each feed.
  • High protein rapeseed meal rapeseed meal (manufactured by J-Oil Mills Co., Ltd.) 48 mesh (mesh opening 300 ⁇ m) sieve classification vitamin MIX: ⁇ carotene, vitamin D3, vitamin K3, vitamin E, vitamin B1, vitamin A mixture of B6, vitamin B12, ascorbic acid, biotin, inositol, nicotinic acid, pantothenic acid, folic acid, choline chloride, and p-aminobenzoic acid (manufactured by Kokin Chemical Co., Ltd.)
  • Mineral MIX NaCl, MgSO 4 ⁇ 2H 2 O, NaHPO 4 ⁇ 2H 2 O, KH 2 PO 4 , Fe Citrate, Calactate, Al (OH) 3 , ZnSO 4 ⁇ 2H 2 O, CuSO 4 , MnSO 4 ⁇ 5H A mixture of 2 O, Ca (IO 3 ) 2 , and CoSO 4 ⁇ 7H 2 O (manufact
  • Table 5 shows the measurement results of fish weight, food intake and weight gain.
  • the weight increase rate (growth) of Comparative Examples 1 and 2 is clearly inferior to the control. That is, when the fish meal is replaced with the conventional rapeseed meal, the nutrient intake rate deteriorates. On the other hand, in Examples 1 and 2, the weight increase rate is improved as compared with the comparative example by using the high protein rapeseed meal. For this reason, the method of the present invention in which part of the fish meal is replaced with a high protein rapeseed meal can be an alternative to a feed mainly composed of fish meal.
  • both muscle CP and muscle CL are decreased from the control.
  • the muscle CP is lowered and the muscle CL is raised.
  • the muscle CL after 4 weeks is shown in FIG.
  • the method of the present invention can regulate the muscle lipid by the function of increasing the muscle lipid of the fish, and enhances the value of the fish.
  • the liver is generally a lipid accumulating organ, and when a vegetable protein is fed, the lipid tends to accumulate in the liver. When the amount of lipid is excessive, the values of GOT and GPT are increased, resulting in an unhealthy state. In the examples, the specific liver weight decreased or remained constant for 2 weeks (2W) to 4 weeks (4W) after administration, whereas in Comparative Example 2, it increased rapidly.
  • the liver crude lipid is not significantly different at 4 weeks (4 W) after administration, but the comparative example is not preferable because it is excessive in lipid when administered over a longer period together with enlargement of the liver.
  • activity was determined according to the following procedure.
  • the kidney is put into a mesh (100 mesh) (comment: it is said that it can be left as it is) and filtered with 3 mL of RPMI 1640 (manufactured by SIGMA) to prepare a leukocyte suspension.
  • Percoll solutions manufactured by GE Healthcare Japan
  • the lower layer leukocytes were collected by centrifugation.
  • Yeast (Saccharomyces cerevisiae, manufactured by SIGMA) was opsonized and diluted with RPMI1640. 0.5 mL of this mixed solution was mixed with 0.5 mL of flounder serum and incubated at 25 ° C. for 1 hour. After centrifugation (3000 rpm, 4 ° C., 15 min), 0.8 mL of the supernatant was removed. After adding 0.8 mL of RPMI 1640 and pipetting, centrifugation was repeated twice. 200 ⁇ L of this reaction solution was taken and 0.8 mL of RPMI 1640 was added to prepare 1 ⁇ 10 6 cells / mL.
  • This yeast solution and leukocyte suspension were mixed at 200 ⁇ L each and incubated at 25 ° C. for 2 hours. 200 ⁇ L of this mixed solution was smeared on a slide glass and stained with Giemsa. After drying, the phagocytosis rate was measured with a microscope for staining.
  • the leukocyte phagocytosis rate of each example was determined as a relative value when the control was 100. Higher numbers mean better epidemiological performance than controls.
  • the numerical value of each example was calculated as a relative value when the control was 100.
  • a lower numerical value means a higher proportion of polysaccharides and therefore higher epidemiological ability.
  • Serum bactericidal activity is an indicator of the anti-quarantine ability of fish. Therefore, fish were captured 2 weeks (2W) and 4 weeks (4W) after administration of the feed, and the bactericidal activity of the serum (E. coli survival rate) was determined by the method of Yamamoto et al. (Yamamoto, A. et.al., Fish Pathology, vol.30, 1995, p123-124). Specifically, the activity was determined by the following procedure.
  • Escherichia coli is cultured in a TSA medium, 2 to 3 mg is fished in a test tube with a lid, diluted to a concentration of 1 mg / mL with Tris buffer, and further diluted 1000-fold.
  • E. coli suspension 50 ⁇ L of serum in one of the two microtubes and E. After adding 50 ⁇ L of E. coli suspension, 150 ⁇ L of Tris buffer was added to each, and pipetting was performed, and 100 ⁇ L was transferred to another microtube. There are 100 ⁇ L of Tris buffer and E. coli. 200 ⁇ L of E. coli suspension was added and incubated at 24 ° C. for 1 hour.
  • the numerical value of each example was calculated as a relative value when the control was 100. A lower number means higher activity than the control.
  • the leukocyte phagocytosis rate, the amount of protein in the body surface mucus, and the bactericidal activity of serum are shown in Table 7 and FIGS. 2 to 4 as relative values when the control is 100.
  • the phagocytosis rate of leukocytes is stronger than the control.
  • the amount of protein in the body surface mucus is lower than that of the control.
  • the bactericidal activity of serum is not much different or worse than the control group.
  • the phagocytosis rate of leukocytes is enhanced and the bactericidal activity is enhanced in addition to the decrease in the amount of protein in the body surface mucus.
  • the method of the present invention is superior to the method using a normal rapeseed meal in that it comprehensively enhances the prevention of epidemiology in terms of leukocyte phagocytosis rate, protein mass in body surface mucus and bactericidal activity of serum. I can say that.
  • Example 2 in which 30% of the fish meal was replaced with high protein rapeseed meal and soybean meal, the amount of protein in the body surface mucus decreased and the bactericidal activity increased from the early stage of the second week. I understand. From this, it can be said that according to the method of the present invention, it is possible to cultivate fish with high epidemiological ability by administering a feed obtained by substituting a portion of fish meal with high protein rapeseed meal from the time of juvenile or fry.

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Abstract

【課題】魚類の防疫能を安価かつ簡便に高める方法を提供する。 【解決手段】本発明の魚類の防疫方法は、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～５０重量％である前記飼料を魚類に投与して魚類の防疫能を強化することを含む。本発明によれば、特に血清の殺菌活性が幼魚又は稚魚の段階から強化される。

Description

魚類の防疫方法
　本発明は、魚類の防疫方法に関し、より詳細には、魚類を簡易かつ安価に防疫する方法に関する。
　魚類の養殖現場において、養魚がウイルス性感染症、細菌病、真菌病等の魚病に罹患して大量死することがある。魚病発生による漁獲量の減少は、稚魚代、飼料代、人件費等の養殖にかけた費用や時間が無駄になるため、養魚の防疫対策がきわめて重要である。防疫対策として、従来、抗生物質、抗菌剤、ワクチン、化学薬品等の投与が行なわれてきた。しかし、抗生物質等の投与は、抗生物質耐性菌の誘発、環境水への負荷、コスト、投薬時の労傾の増大等の問題が危惧される。
　養魚の免疫活性を高めて疾病の発生を予防することが望まれる。現在、βグルカン、ペプチドグリカン、リポ多糖類、キチン・キトサン、ラクトフェリン等の免疫賦活物質を魚に投与することが実施されている。また、アスタキサンチンを含む酵母（特許文献１）、ラクトコッカス属等に属する細菌に由来する不活化死菌体とグラム陽性細菌由来の細胞破砕物（特許文献２）、特定の塩基性アミノ酸を含むポリペプチド（特許文献３）、ビタミン、消化酵素、生菌剤及び免疫腑活剤の組み合わせ（特許文献４）、バチルス・ツリンゲスとバチルス・プミラスの混合培養によって得られたペプチド（特許文献５）、酵母細胞壁溶解酵素で処理した酵母菌体（特許文献６）、特定のサイトカインと腸溶保護ポリマーとの組み合わせ（特許文献７）等の投与も提案されている。
　養殖現場では、また、飼料の栄養成分としての蛋白源を魚に効率的に摂取させ、成長を促進させることも重要である。従来、養魚用飼料中に一般的に用いられる蛋白源に魚粉がある。しかし、魚粉は、漁獲量によってその相場が左右されやすいという問題を有する点から、魚粉代替原料の探索が行なわれ、代替蛋白源として大豆粕や菜種粕が知られている。しかし、菜種粕は、蛋白含量及び消化利用性が低いことから、蛋白質要求量がウシ、ブタ等の家畜よりも高い魚類に用いることは困難であった。
特開２００２－０８０３５１ 特開２００１－３４２１４０ 特開２０００－３２５０２６ 特開２００１－１９０２３１ 特開２０００－１０３７４０ 特開平８－２８０３３２ 特開２０１２－５０５１９３
　本発明の課題は、魚類の防疫能を安価かつ簡便に高める方法を提供することにある。本発明は、また、従来、栄養分摂取率が低いために養魚用飼料の魚粉代替原料として適さなかった菜種粕の改良方法を提供することにある。
　本発明者らは、上記課題を鋭意研究した結果、特定の蛋白質含量を有する菜種粕を特定量配合した飼料によれば、上記二つの課題を同時に解決できることを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～３０重量％である前記飼料を魚類に投与して魚類の防疫能を強化することを含む、魚類の防疫方法を提供する。
　前記防疫能は、例えば血清の殺菌活性である。
　前記飼料は、さらに大豆粕を配合することを含むことが好ましい。
　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合が、１０～３０重量％であることが好ましい。
　本発明者らは、上記方法により飼養された魚の筋肉脂質が顕著に増大することもまた見出した。したがって、本発明は、また、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～３０重量％である前記飼料を魚類に投与することを含む、魚の筋肉脂質の調節方法を提供する。
　本発明は、また、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含み、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～３０重量％である養魚用飼料を提供する。
　上記養魚用飼料は、さらに、大豆粕を含むことが好ましい。
　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合は１０～３０重量％であることが好ましい。
　本発明は、また、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～３０重量％となるように配合することを含む、養魚用飼料の製造方法を提供する。
　上記養魚用飼料の製造方法は、さらに、大豆粕を配合することを含むことが好ましい。
　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合が、１０～３０重量％であることが好ましい。
　本発明の方法によれば、魚粉飼料と比べて、血清の殺菌活性や白血球貪食能が強化される。また、体表粘液中の蛋白質量が低下し、これは、ムコ多糖の増大と防疫能の強化を意味する。特に、血清の殺菌活性は、魚粉の一部を従来の菜種粕で置換した場合よりも強化される。しかも、この強化は、幼魚又は稚魚の時期から発揮されるので、本発明の方法の優位性が高い。
　魚粉の一部を従来の菜種粕で置換した飼料を用いて魚を飼育すると、蛋白含量をそろえた魚粉主体飼料と比べて、魚の増重率（育ち具合）が明らかに劣る。すなわち、菜種粕由来の栄養分の摂取率が悪い。一方、魚粉の一部を高蛋白菜種粕で置換した飼料を用いる本発明の方法によれば、魚の増重率が改善される。
　本発明の方法で使用する高蛋白菜種粕の蛋白含量は、魚粉より低いものの、大豆粕と同程度まで改善されている。そして、本願発明で使用する飼料の製造コストは、魚粉主体飼料と比べて安い。
　本発明の方法で飼養された魚類は、筋肉脂質の蓄積作用が高い。これにより、畜水産物の価値を高めることができる。
　したがって、本発明の方法は、魚粉を主体とする飼料の代替案として、十分な産業上の利用価値を有する。
魚粉主体飼料（対照）、魚粉の一部を従来の菜種粕で置換した飼料（比較例１及び２）、並びに魚粉の一部を高蛋白菜種粕で置換した飼料（実施例１及び２）を用いてヒラメを４週間飼養した際の、４週間後の筋肉脂質（ＣＬ）を測定した結果を示す。比較例１及び２では、対照より減少している。一方、実施例１及び２では、筋肉脂質が顕著に増大している。 図１と同様に、魚粉主体飼料（対照）、従来の菜種粕で置換した飼料（比較例１及び２）、並びに高蛋白菜種粕で置換した飼料（実施例１及び２）を用いてヒラメを４週間飼養した際の、２週間（２Ｗ）及び４週間（４Ｗ）後の魚の白血球の貪食率を測定した結果を示す。実施例２及び比較例２は、魚粉主体飼料（対照）と比べて白血球の貪食率が強化されている。 図１と同様に、魚粉主体飼料（対照）、従来の菜種粕で置換した飼料（比較例１及び２）、並びに高蛋白菜種粕で置換した飼料（実施例１及び２）を用いてヒラメを４週間飼養した際の、２週間（２Ｗ）及び４週間（４Ｗ）後の魚の体表粘液中の蛋白質量を測定した結果を示す。比較例１及び２並びに実施例１及び２は、体表粘液中の蛋白質量の低下（多糖類の増加）が対照より強化される。特に、実施例２では、２週目の早期から、体表粘液中の蛋白質量が減少している。このことから、本発明の方法に従って、魚粉の一部を高蛋白菜種粕で置換した飼料を幼魚又は稚魚の時期から投与することで、防疫能の高い魚の育養が可能である。 図１と同様に、魚粉主体飼料（対照）、従来の菜種粕で置換した飼料（比較例１及び２）、並びに高蛋白菜種粕で置換した飼料（実施例１及び２）を用いてヒラメを４週間飼養した際の、２週間及び４週間後の血清中殺菌活性（Ｅ．ｃｏｌｉ生残率）を測定した結果を示す。比較例１及び２の血清の殺菌活性は、対照区とあまり変わらない。一方、実施例１及び２の両方とも、４週間目の殺菌活性が強化されている。特に、実施例２では、２週間目という早期から殺菌活性が高くなっていることから、魚粉の一部を高蛋白菜種粕で置換した飼料を幼魚又は稚魚の時期から投与することで、防疫能の高い魚の育養が可能となる。
　以下に、本発明の方法の一実施態様を具体的に説明する。本発明の魚類の防疫方法の対象は、魚類であれば、特に制限されない。本発明の方法は、特に養殖魚に適用される。養殖魚には、ヒラメ、マダイ、クロダイ、チダイ、イシダイ、ブリ・ハマチ、カンパチ、マグロ、トラフグ、シマアジ、マアジ、ヒラマサ、カワハギ、カサゴ、メバル、クロソイ、スズキ、イサキ、マサバ、クエ、ギンザケ、タイセイヨウサケ、ニジマス、コイ、フナ、ウナギ、ナマズ等が含まれる。
　前記飼料は、蛋白源として、魚粉を含む。魚粉は、従来汎用のものを特に制限なく使用可能である。飼料中の魚粉の割合は、通常、３０～７０重量％でよく、好ましくは４０～６０重量％である。
　本発明の方法に使用する飼料は、蛋白質含量が含水基準で、４０～５０重量％、好ましくは４０～４８重量％、特に好ましくは４０～４６重量％の高蛋白菜種粕を含む。蛋白質含量が４０％未満であると、本発明の効果が低下し、成長悪化や生残率低下を招く恐れがあり、逆に５０％を超えると窒素排泄量増加による環境への負荷（水質汚染等）となることがある。
　前記高蛋白菜種粕の粗脂質は、通常、５％以下であり、好ましくは１～４％、より好ましくは１．５～３％である。
　前記高蛋白菜種粕の粗繊維含量は、通常、８％以下であり、好ましくは１～７％、より好ましくは１～６％である。
　前記粗繊維のうち、ＮＤＦ（中性デタージェント繊維）は、通常、２０％以下、好ましくは１８％以下である。ＡＤＦ（酸性デタージェント繊維）は、通常、１５％以下、好ましくは１３．４％以下である。リグニンは、通常、４％以下、好ましくは３％以下である。
　前記高蛋白菜種粕のグルコシノレート含量は、通常、３０μｍｏｌ／ｇ以下であり、好ましくは２０μｍｏｌ／ｇ以下、より好ましくは１０μｍｏｌ／ｇ以下である。
　高蛋白菜種粕は、菜種の脱皮、洗浄や酵素処理、アルコール処理、篩分け処理等により製造可能である。中でも、３２メッシュ（目開き５００μｍ）以下、好ましくは４８メッシュ（目開き３００μｍ）以下の篩で篩分け処理した際の篩下分級物が、蛋白含量、粗脂質及び粗繊維が上記の好ましい範囲に入るものを容易に得られる点で好ましい。
　前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合は、１０～５０重量％であり、好ましくは１０～３０重量％である。上記割合が１０重量％以下では、魚類の防疫能を有効に強化しない。逆に、５０重量％を超えると、飼料の蛋白量を確保するために他の蛋白源が多く必要になり、粗繊維が必要以上に添加されるといった不具合を生じる。
　上記飼料は、高蛋白菜種粕の使用によって減じた蛋白分を補うために、他の蛋白源が添加されることが好ましい。そのような例には、大豆粕、脱皮大豆粕、大豆蛋白濃縮物、分離大豆蛋白、菜種粕、綿実粕、ルピナス種粕、コーン蒸留粕、コーングルテンミール、コーングルテンフィード、アルファルファ粉、ポテトプロテイン、ヒヨコマメ、エンドウマメ、インゲンマメ、レンズマメ、ブラックビーン等の植物性蛋白源；肉骨粉、血粉、フェザーミール、ポークミール、チキンミール、脱脂粉乳等の動物性蛋白源が挙げられる。大豆粕が、高蛋白菜種粕では不足しがちなリジンを補填する点で好ましい。
　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合は、通常、
１０～３０重量％であり、好ましくは１５～２６重量％である。割合が１０％未満であると効果が低下し、逆に５０％を超えると成長不良や摂餌量低下となることがある。
　上記飼料は、魚粉、高蛋白菜種粕、その他の蛋白源の他に、養魚用飼料の原料として汎用されているものを特に制限なく使用可能である。そのような例には、米、玄米、ライ麦、小麦、大麦、トウモロコシ、マイロ、大豆等の穀類；植物性油脂、動物性油脂、粉末精製牛脂、肝油等の油脂類；リジン、メチオニン、タウリン、アルギニン等のアミノ酸類；ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸アミド、葉酸、ビタミンC、ビオチン、コリン等のビタミン類又はビタミン様作用物質；亜鉛、カルシウム、セレン、鉄、リン等のミネラル類；硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸亜鉛、ヨウ化カリウム、硫酸コバルト、炭酸カルシウム、リン酸三カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸カルシウム、塩化コリンなどの無機塩類；色素等が挙げられる。
　上記飼料には、飼料の品質の低下防止、栄養成分の有効利用の促進等に用いられる汎用の飼料添加物を本発明の効果を阻害しない範囲で使用してもよい。そのような例には、抗酸化剤、防カビ剤、粘結剤、乳化剤、ｐH調整剤、抗菌剤、呈味料、着香料、酵素、生菌剤、有機酸、摂餌誘引剤、酵母等が挙げられる。
　本発明の方法に使用する飼料は、上記原料を配合することによって得られる。飼料の形状は、エクストルーデッドペレット、ドライペレット、モイストペレット、練り餌等であり得る。
　本発明の方法は、魚粉主体飼料と比べて、魚類の血清の殺菌活性、白血球の貪食率を強化する。体表粘液は、上皮細胞や杯状細胞から分泌され、表皮の最外層部を覆う。体表粘液は、主としてムコ多糖類よりなり、特に細菌性疾病防御機構として大きな役割を担っている。本発明の方法は、魚類の体表粘液中の蛋白質量を低下させ、これは、粘液中のムコ多糖の増加を意味する。ムコ多糖類は、対外から侵入する細菌やウイルスを防御するので、蛋白質量の低下は防疫能の強化につながる。本発明の方法は、魚類のレンサ球菌症、類結節症、ノカルジア症、ビブリオ病、イリドウイルス感染症、エドワジエラ症、寄生虫病等への耐性向上が期待できる。
　本発明者らは、また、上記方法で飼養された魚類の筋肉脂質が顕著に増大すること、及びこの結果を利用すれば魚類の筋肉脂肪を調節、特に上方調節できることを見出した。したがって、本発明は、また、蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１５～３０重量％である前記飼料を魚類に投与することを含む、魚類の筋肉脂質の調節方法を提供する。
　以下に、実施例及び比較例を用いて、本発明をより詳細に説明する。しかし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
〔実施例１及び２〕
１．飼料の調製
　対照区として、魚粉（製品名フィッシュミール、日本水産株式会社製）を主体とする対照飼料を表１に示す組成で作製した。対照飼料の魚粉の２０％及び３０％を高蛋白菜種粕及び大豆粕で置換した飼料をそれぞれ実施例１及び２として作製した。高蛋白菜種粕及び魚粉の合計に対する高蛋白菜種粕の割合を、実施例１で１７．２％とし、実施例２で２５．０％とした。魚粉を高蛋白菜種粕で置換したことで減じた蛋白分を、大豆粕（製品名：大豆油粕、株式会社J-オイルミルズ製）の添加で補った。大豆粕及び魚粉の合計に対する大豆粕の割合は、実施例１で１５．８％、そして実施例２で２５％であった。
　比較のため、対照飼料の魚粉の２０％及び３０％を従来の菜種粕（製品名：菜種油粕、株式会社J-オイルミルズ製）で置換した飼料をそれぞれ比較例１及び２として作製した。菜種粕及び魚粉の合計に対する菜種粕の割合を、比較例１で１８．６％とし、比較例２で２６．３％とした。なお、魚粉を菜種粕で置換したことで減じた蛋白分を前記大豆粕の添加で補った。
　全例の油分が同じになるように、各例のタラ肝油の添加量を調整した。全例のエネルギーが同じになるように、各例の小麦粉の添加量を調整した。表２に魚粉及び代替蛋白の成分表を示す。表３に各飼料の粗蛋白質、粗脂質及びアミノ酸の含有量を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 高蛋白菜種粕：菜種粕（（株）Ｊ－オイルミルズ製）の４８メッシュ（目開き３００μｍ）篩による篩下分級物
ビタミンＭＩＸ：βカロテン、ビタミンＤ３、ビタミンＫ３、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、アスコルビン酸、ビオチン、イノシトール、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、塩化コリン、及びｐアミノ安息香酸の混合物（コーキン化学株式会社製）
ミネラルＭＩＸ：ＮａＣｌ，ＭｇＳＯ４・２Ｈ２Ｏ，ＮａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ，ＫＨ２ＰＯ４，Ｆｅ　Ｃｉｔｒａｔｅ，Ｃａ　ｌａｃｔａｔｅ，Ａｌ（ＯＨ）３，ＺｎＳＯ４・２Ｈ２Ｏ，ＣｕＳＯ４，ＭｎＳＯ４・５Ｈ２Ｏ，Ｃａ（ＩＯ３）２，及びＣｏＳＯ４・７Ｈ２Ｏの混合物（コーキン化学株式会社製）
Ｓｔａｙ－Ｃ：アスコルビルモノフォスフェイト（ＤＳＭ社製）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
２．飼養条件
　ヒラメの稚魚を表４に示す飼育環境で飼養した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
３．成長指標の測定　
　対照、比較例及び実施例の区において、それぞれ、飼料投与から２週間及び４週間後に、魚体重を測定した。さらに、摂餌量及び増重率を、以下の式により求めた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000006
　魚体重、摂餌量及び増重率の測定結果を表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表５を見ると、比較例１及び２の増重率（育ち具合）が対照よりも明らかに劣る。すなわち、魚粉を従来の菜種粕に置換すると、栄養分の摂取率は悪化する。一方、実施例１及び２では、高蛋白菜種粕を用いることで、増重率が比較例よりも改善される。このことから、魚粉の一部を高蛋白菜種粕に代える本発明の方法は、魚粉を主体とする飼料の代替策となり得る。
４．成長魚の成分測定
　飼料の投与前（Ｉｎｉｔｉａｌ）、投与２週間（２Ｗ）に１尾、４週間（４Ｗ）では全生残個体サンプリングした。魚を解剖して、比肝重量、肝臓粗脂質、筋肉の粗蛋白質（ＣＰ）、粗脂質（ＣＬ）、灰分及び水分をケルダール法、ソックスレー法、直接灰化法及び常圧加熱乾燥法に従って求めた。
　魚の成分測定結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　表６を見ると、従来の菜種粕を用いた比較例１及び２では、筋肉ＣＰと筋肉ＣＬの両方とも、対照より減少している。一方、高蛋白菜種粕を用いた実施例１及び２では、筋肉ＣＰが下がり、筋肉ＣＬが上がっている。４週後の筋肉CLを図１に示す。本発明の方法は、魚の筋肉脂質を増大させる機能により、該筋肉脂質を調節することができ、魚の価値を高める。
　肝臓は一般的に脂質の蓄積器官であり、植物性蛋白を給与すると肝臓に脂質が溜まりやすくなる。脂質過多となるとＧＯＴやＧＰＴの値が高くなり、不健康な状態となる。実施例では比肝重量が投与２週間（２Ｗ）から４週間（４Ｗ）にかけて減少または一定であるのに対して、比較例２では急激に増加している。肝臓粗脂質は投与４週間（４Ｗ）の時点では有意差は見られないが、比較例については肝臓の肥大と共により長期間に渡り投与した場合、脂質過多となり好ましくない。
５．成長魚の防疫能の測定
（１）　白血球の貪食率
　飼料投与２週間（２Ｗ）及び４週間（４Ｗ）後に魚を捕獲し、白血球の貪食率を
白血球単離法（Ｐｅｒｃｏｌｌ不連続密度勾配遠心法）に基づいて、下記式により算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000009
　具体的には、以下の手順で活性を求めた。腎臓をメッシュ（１００mesh）（コメント：このままでよいとのことです。）に入れてＲＰＭＩ１６４０（ＳＩＧＭＡ社製）３ｍLで濾過し、白血球懸濁液を調製する。Ｐｅｒｃｏｌｌ溶液（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）を１．０４０ｇ／ｍＬ及び１．０７０ｇ／ｍＬに調製した。調製した液に白血球懸濁液に加えて、遠心分離により下層の白血球を採取した。
　酵母菌（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ＳＩＧＭＡ社製）をオプソニン化してＲＰＭＩ１６４０で希釈した。この混合液０．５ｍＬをヒラメの血清０．５ｍＬを混合して２５℃条件で１時間インキュベートし、遠心分離（３０００ｒｐｍ、４℃、１５ｍｉｎ）後、上澄み０．８ｍＬを取り除いた。ＲＰＭＩ１６４０を０．８ｍＬ加えてピペッティングした後、遠心分離を２回繰り返した。この反応液２００μＬずつ取り、ＲＰＭＩ１６４０を０．８ｍＬ加えて１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。この酵母液と白血球懸濁液を２００μＬずつ混合して２５℃で２時間インキュベートした。この混合液２００μLをスライドガラスに塗抹してギムザ染色した。乾燥後、染色を顕微鏡で貪食率を測定した。
　さらに、各例の白血球貪食率を、対照を１００としたときの相対値として求めた。数値が高い方が、対照より防疫能が高いことを意味する。
（２）　体表粘液中の蛋白質量
　体表粘液の分泌が増加すると、主成分の多糖類が増加し、その結果、蛋白質量が低下する。多糖類の増加は、魚の防疫に寄与する。したがって、体表粘液中の蛋白質量は、魚の防疫能を示す指標となる。そこで、飼料投与２週（２Ｗ）及び４週（４Ｗ）後に魚を捕獲し、蛋白質量をＬｏｗｒｙ法に基づいて測定した。具体的には、以下の手順で活性を求めた。
　各試験区より５尾をサンプリングし、体表の一定面積に分泌された粘液を滅菌脱脂綿で一定回数かきとった。この脱脂綿を、ＰＢＳを入れたマイクロチューブに回収し、粘液を懸濁させた。室温で３０００ｒｐｍ×１０分間、遠心分離して上清を回収し、上清中の蛋白質をＬｏｗｒｙ法で測定した。
　各例の数値を、対照を１００としたときの相対値として求めた。数値が低い方が、多糖類の割合が高く、よって防疫能が高いことを意味する。
（３）　血清の殺菌活性
　血清の殺菌活性は、魚の防疫能を示す指標となる。そこで、飼料投与２週（２Ｗ）及び４週（４Ｗ）後に魚を捕獲し、血清の殺菌活性（Ｅ．ｃｏｌｉ生存率）をＹａｍａｍｏｔｏらの方法（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ａ．ｅｔ．ａｌ．，Ｆｉｓｈ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３０，１９９５，ｐ１２３－１２４）に基づいて測定した。具体的には、以下の手順で活性を求めた。
　ＴＳＡ培地でＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉを培養して２～３ｍｇを蓋付き試験管に釣菌し、トリス緩衝液で１ｍｇ／ｍＬの濃度にしてさらに１０００倍希釈してＥ．ｃｏｌｉ懸濁液とした。２本のマイクロチューブの一方に血清５０μＬを、他方にＥ．ｃｏｌｉ懸濁液５０μＬを加えた後、それぞれにトリス緩衝液１５０μＬを加えてピペッティングし、１００μＬを別のマイクロチューブに移した。そこにトリス緩衝液１００μＬとＥ．ｃｏｌｉ懸濁液２００μＬを加えて２４℃で１時間インキュベートした。反応液４００μLを生理食塩水で１０２～５倍まで１０倍ごとに段階希釈して、４段階希釈列を作った。その希釈列をＴＳＡ培地に５０μＬずつ接種し、コンラージ棒で広げた。ブランクは、Ｅ．ｃｏｌｉ懸濁液とトリス緩衝液をそれぞれ２００μＬマイクロチューブに加えて混合し、その混合液から１００μＬをサンプルと同様にインキュベート・希釈して、ＴＳＡ培地に塗抹した。２５℃で培養し、コロニーをカウントして生菌数を計算し、接種時に対するＥ．ｃｏｌｉの生残率を求めた。なお、ブランクのＥ．ｃｏｌｉ生残率を１００％とした。
　各例の数値を、対照を１００としたときの相対値として求めた。数値が低い方が、対照より活性が高いことを意味する。
　Ｓｕｐｅｒ　ＡＮＯＶＡを用いて一元配置の分散分析を行い、有意差が認められた場合、Ｔｕｒｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法で平均値の多重比較を行なった。ｐ値＜０．０５で有意差ありと判定した。
　白血球貪食率、体表粘液中の蛋白質量、及び血清の殺菌活性を表７及び図２～４に、対照を１００としたときの相対値で示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　比較例１及び２では、白血球の貪食率が対照より強化される。また、体表粘液中の蛋白質量（多糖類の増加）が対照より低い。しかし、血清の殺菌活性は、対照区と比べてあまり変わらないか悪化する。実施例１及び２では、白血球の貪食率が強化され、体表粘液中の蛋白質量が低下するのに加えて、殺菌活性も強化されている。これから、本発明の方法は、白血球貪食率、体表粘液中の蛋白質量及び血清の殺菌活性の点で防疫能を総合的に強化する点で、通常の菜種粕を使用する方法よりも優れるといえる。
　魚粉の３０％を高蛋白菜種粕及び大豆粕で置換した実施例２では、２週目の早期から、体表粘液中の蛋白質量が減少していること、及び殺菌活性が高くなっていることがわかる。これから、本発明の方法に従って、魚粉の一部を高蛋白菜種粕で置換した飼料を幼魚又は稚魚の時期から投与することで、防疫能の高い魚の育養が可能であるといえる。

Claims (11)

  1. 　蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～５０重量％である前記飼料を魚類に投与して魚類の防疫能を強化することを含む、魚類の防疫方法。
  2. 　前記防疫能が血清の殺菌活性である、請求項１に記載の魚類の防疫方法。
  3. 　前記飼料が、さらに大豆粕を配合することを含む、請求項１に記載の魚類の防疫方法。
  4. 　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合が、１５～３０重量％である、請求項３に記載の魚類の防疫方法。
  5. 　蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含む飼料であって、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～５０重量％である前記飼料を魚類に投与することを含む、魚の筋肉脂質の調節方法。
  6. 　蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を含み、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～５０重量％である養魚用飼料。
  7. 　さらに、大豆粕を含む、請求項６に記載の養魚用飼料。
  8. 　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合が、１５～３０重量％である、請求項７に記載の養魚用飼料。
  9. 　蛋白質含量が４０～５０％の高蛋白菜種粕及び魚粉を、前記高蛋白菜種粕及び前記魚粉の合計に対する前記高蛋白菜種粕の割合が１０～５０重量％となるように配合することを含む、養魚用飼料の製造方法。
  10. 　さらに、大豆粕を配合することを含む、請求項９に記載の養魚用飼料の製造方法。
  11. 　前記大豆粕及び前記魚粉の合計に対する前記大豆粕の割合が、１０～３０重量％である、請求項１０に記載の養魚用飼料の製造方法。
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