WO2014184503A1 - Composés dendritiques comprenant un agent chélatant, fluorochrome ou agent de reconnaissance, compositions les comprenant et leurs utilisations - Google Patents

Composés dendritiques comprenant un agent chélatant, fluorochrome ou agent de reconnaissance, compositions les comprenant et leurs utilisations Download PDF

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Delphine Felder-Flesch
Claire Billotey
Audrey PARAT
Antonio Garofalo
David KRYZA
Marc Janier
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Universite De Strasbourg
Centre National De La Recherche Scientifique - Cnrs -
Universite Claude Bernard Lyon 1
Hospices Civils De Lyon
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Definitions

  • the present invention relates to dendritic compounds comprising a chelant, fluorochrome or recognition agent, compositions comprising them and their uses.
  • references in brackets ([]) refer to the list of references at the end of the text.
  • dendrimers or dendritic compounds for biomedical applications is a flourishing field of research, mainly because of their precisely defined structure and leading to biocompatible, polyfunctional and water-soluble systems (SE Stiriba, H. Frey and R. Haag, Angew Chem, Int.Ed., 2002, 41, 1329-1334; [1] MJ Cloninger, Curr Opin Chem Biol, 2002, 6, 742-748; Duncan and L. Izzo, Adv Drug Delivery Rev., 2005, 57, 2215-2237; [3] CC Lee, JA MacKay, JMJ Frechet and FC Szoka, Nat Biotechnol, 2005, 23, 1517-1526; O. Rolland, CO Turrin, AM Caminade, JP Majorai, New J. Chem., 2009, 33, 1809-1824 [5]).
  • MRI contrast agents as a new class of macromolecular contrast agents for magnetic resonance imaging (MRI).
  • the efficacy of MRI contrast agents is often expressed in terms of longitudinal relaxivity (rl / mM-1 .s-1), relative to their ability to shorten the proton longitudinal relaxation time of water molecules (Tl / s ).
  • Wiener et al. (EC Wiener, MW Brechbiel, H. Brothers, RL Magin, OA Gansow, DA Tomalia and PC Lauterbur, Reson Magn Med, 1994, 31, 1 [6]) have described in precursor work the synthesis of different generations of PAMAM dendrimers bound to Gd (III) -DTPA chelate.
  • Rudovsky et al. have studied the effect on rI of ionic interactions between negatively charged PAMAM-Gd (III) dendrimers and positively charged polyamides (Rudovsky, P. Hermann, M. Botta, S. Aime, and I. Lukes, Chem. Commun., 2005, 2390 [12]). Titration experiments on a second generation dendritic contrast agent in the presence of polyarginine showed an increase in rl of 20 to 28 mM-1. s-1 (0.47 T, 20 ° C).
  • the dendrimers have proved to be suitable synthetic platforms for the incorporation of several groups comprising Gd (III), leading to an improvement of the MRI sensitivity in terms of the value of R1.
  • Dendritic MRI contrast agents are excellent intravascular contrast agents. However, these structures do not have the required specificity for molecular MRI (D. Artemov, J. Cell Biochem., 2003, 90, 518 [21]), due to the lack of accumulation of MRI contrast agents. in regions of interest, for example a tumor.
  • T is a chelating agent, a fluorochrome or a recognition agent, the chelating agent being able to fix:
  • the recognition agent being capable of forming a complex with a specific molecule, optionally linked to another dendrimer, said complex being chosen from the biotin-avidin complex, the biotin-streptavidin complex, an antibody-antigen complex, a ligand-ligand complex; receptor, a double-stranded oligonucleotide, or an adamantane-cyclodextrin complex;
  • D is a PAMAM, gallate or aspartate dendrimer of formula (DD):
  • A is the dendrimer nucleus, of multivalence k, where:
  • k represents the number of dendrons and is an integer ranging from 2 to
  • A is a structure synthon:
  • i is an integer from 0 to g where g is the generation number of the dendrimer
  • BT is the terminal branch, and t is the number of end units from the lower generation monomer
  • t is an integer from 1 to 3, preferably t is 2 or 3;
  • BT is a group selected from the group consisting of hydrogen, a group -NH 2 , a group -OH, a C1-C6 alkyl, a chain pol
  • x is independently an integer of 1 to 10;
  • BT is covalently linked to a targeting agent V;
  • R is 0 (i.e., a covalent bond), or is a radiolabelable molecule or group such as L-thyroxine or dinitrobenzoate;
  • L 2 represents 0 (i.e., a covalent bond), or a heteroalkyl chain of formula:
  • V is a targeting agent
  • n is an integer greater than or equal to 1, and represents the number of targeting agents attached to the compound of formula I; provided that when D is a gallate dendrimer, then V does not include a
  • DOPA structure of formula and T does not include a catechol structure of the following formula:
  • the present invention also provides a compound of Formula I wherein L 2 is O (i.e., a covalent bond), and the compound has the following Formula II:
  • T, Li, D, V and n are as defined above;
  • the present invention also provides a compound of Formula I wherein R and L 2 each represent 0 (i.e., a covalent bond), and the compound has the following Formula III:
  • T, Li, D, V and n are as defined above.
  • the compounds of the invention of formula (I), as well as sub-families (II) and (III), comprise at least one targeting agent V.
  • Chelating agent a fluorochrome or a recognition agent T
  • each occurrence of R is independently H or a protecting group such as t-Bu; preferably all occurrences of R are the same, preferably each R is H;
  • T can represent a chelating agent of formula:
  • V a DOPA targeting agent comprising the formula structure
  • ML T may represent a fluorochrome fluorescein of formula (isomer 5 or 6):
  • Li little! advantageously represent 0 (that is to say a covalent bond), or a triazolyl spacer of formula:
  • p is an integer of 1 to 10; preferably from 1 to 6; preferably from 1 to 4; preferably from 1 to 2; preferably 2; Li as defined in vea a heteroalkyl chain of formula: wherein p is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6.
  • L s as defined in v and vi can advantageously be bound to T via a hcieroalky chain 1 of the formula: H Q H, wherein q is an integer from 1 to 12, preferably 1 to 6, preferably 2, 3 , 4, 5 or 6; preferably 3;
  • Li may represent 0 (i.e., a covalent bond) so that T and D are linked by the chain: wherein q is an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6; preferably 3;
  • L Li as defined at v and vi may advantageously be linked to T via a heteroalkyl chain! of the formula: z H, wherein q is an integer from 1 to 12, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6; preferably 3.
  • T and D are linked by the chain: wherein q is an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6; preferably 3; Dendrimer D
  • D may represent a PAMAM dendrimer of formula (DD) in which
  • A is a structure synthon
  • Mi is a monomer of generation i, where:
  • BT is the terminal branch, and t is the number of end units from the lower generation monomer
  • t is an integer from 1 to 2, preferably t is 2;
  • BT is a radical selected from the group consisting of hydrogen, -NH 2 group, a -COOH group, an -OH group, an alkyl to C 6, a poléthylène glycol chain of formula wherein each occurrence of x is independently an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 4, preferably 3; and at least one occurrence of BT is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably at least one occurrence of BT per monomer Mi is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably each occurrence BT by monomer Mi is covalently bound to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R; non-V-linked occurrences of BT or a radiolabelable molecule R ending in H, or a C 1 to C 6 alkyl such as methyl or ethyl;
  • D can represent a Galate dendrimer of formula (DD) in which:
  • A is a structure synthon
  • Mi is a monomer of generation i, where:
  • t is an integer from 1 to 3, preferably t is 3;
  • BT is a radical selected from the group consisting of hydrogen, -NH 2 group, an -OH group, an alkyl to C 6, a chain poléth
  • x is independently an integer of 1 to 10, preferably 1 to 8, preferably 2 to 8, preferably 7;
  • BT is covalently linked to a targeting agent V, preferably at least one occurrence of BT per monomer Mi is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably each occurrence of BT per monomer Mi is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R; non-V-linked occurrences of BT or a radiolabelable molecule R ending in C1-C6 alkyl such as methyl or ethyl;
  • Iv. D can represent one of Aspartate drimer of formula (DD) in which:
  • A is a
  • Aspartatel Aspartate2 where * indicates the point of attachment to the spacer Li; and y represents an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 4;
  • Mi is a monomer of generation i, where:
  • BT is the terminal branch, and t is the number of end units from the lower generation monomer
  • t is an integer from 1 to 2, preferably t is 2;
  • BT is a radical chosen from the group comprising a hydrogen, a group -NH 2 , a group -OH, a C 1 -C 6 alkyl, a polyethylene glycol chain of formula
  • each occurrence of x is independently an integer of 1 to 10, preferably 1 to 8, preferably 2 to 8, preferably 7; and at least one occurrence of BT is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably at least one occurrence of BT per monomer Mi is covalently linked to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably each occurrence of BT per monomer Mi is covalently bound to a targeting agent V or a radiolabelable molecule R, preferably each occurrence of BT per monomer Mi is covalently bound to a radiolabelable molecule R; non-V-linked occurrences of BT or a radiolabelable molecule R ending in H, or a C1-C6 alkyl such as methyl or ethyl; advantageously, the radiolabelisab molecule
  • xv. R may advantageously represent 0 (that is, a covalent bond);
  • R may advantageously represent a labelable molecule such as L-thyroxine of formula:
  • R may advantageously represent a labelable molecule such as dinitrobenzoate of formula:
  • ML L 2 can advantageously represent 0 (that is to say a covalent bond);
  • L 2 may advantageously represent a heteroalkyl chain of formula:
  • p is an integer of 1 to 10; preferably from 1 to 6;
  • L 2 may advantageously represent a heteroalkyl chain of formula:
  • p is an integer of 1 to 10; preferably from 1 to 6;
  • L 2 may advantageously representroalkyl of formula:
  • q is an integer of 1 to 12; preferably from 1 to 6; preferably from 1 to 4; preferably from 1 to 3; preferably 3;
  • p is an integer of 1 to 10; preferably from 1 to 6;
  • xii. L 2 could advantageously represent a heteroalkyl chain of formula:
  • p is an integer of 1 to 10; preferably from 1 to 6; preferably from 1 to 4; preferably from 1 to 2; preferably 2;
  • L 2 may advantageously represent a heteroalkyl chain of formula:
  • Iv. V may represent a melanoma targeting agent having the formula:
  • V can represent a tripeptide targeting agent of formula
  • V may represent an amino-metronidazolyl targeting agent of formula:
  • the compounds of the invention comprise all possible combinations of the variables T, Li, D, R, L 2 and V, as described in points (i) to (xxvi) above. These variants are applicable to any of the formulas of the compounds described herein, when the variable in question (ie, T, L 1, D, R, L 2 and V) is present in the formula, including the compounds of formula I, II, III, IV and I A to I e. For the sake of sobriety in writing, each variant is not explicitly described herein, however, the reader will readily understand that all of these variants are included within the scope of the invention, as well as how to chemically bind T, Li, D, R, L 2 and V in light of the Examples.
  • the compounds of formula I have one of the following structures:
  • x is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 3,
  • T represents any of the chelating agents i or ii.
  • T represents fluorochrome iii.
  • T represents one of the recognition agents iv.
  • V represents any of the targeting agents xxiv to xxvi.
  • each occurrence of RI is independently C 1 -C 6 alkyl, preferably methyl or t-butyl, preferably each occurrence of R 1 is methyl.
  • each occurrence of x is independently an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 3, of reference, 1, 2 or 3.
  • Li represents: wherein q is an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6; can represent: a heteroaikyl chain of formula in which p is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6.
  • Li may also represent: a spacer of formula
  • T represents any of the chelating agents i or ii.
  • T represents fluorochrome iii.
  • T represents one of the recognition agents iv.
  • V represents any of the targeting agents xxiv to xxvi.
  • R1 is C1-C6alkyl, preferably methyl or t-butyl, preferably R1 is methyl.
  • each occurrence of x is independently an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 3, of reference, 1, 2 or 3.
  • Li may represent: a heteroaikyl chain of formula: HPH 5 in which p is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 2, 3, 4, 5 or 6.
  • T represents any of the chelating agents i or ii.
  • T represents fluorochrome iii.
  • T represents one of the recognition agents iv.
  • V represents any of the targeting agents xxiv to xxvi.
  • T represents any of the chelating agents i or ii.
  • T represents fluorochrome iii.
  • T represents one of the recognition agents iv.
  • V represents any of the targeting agents xxiv to xxvi.
  • x is an integer of 1 to 10, preferably 1 to 6, preferably 1 to 3,
  • T represents any of the chelating agents i or ii.
  • T represents fluorochrome iii.
  • T represents one of the recognition agents iv.
  • V represents any of the targeting agents xxiv to xxvi.
  • the radioelement that can be fixed by the chelating agent can also be any radioelement that can be detected by an imaging system or counting radioactivity or having a radiotoxic effect.
  • V may be an agent targeting the tumor cells.
  • the inventors have noted that the rate of uptake of compounds of the invention by tumors was 5 to 39%, per gram of tumor, at 4 hours.
  • chelating agent is meant a group having the property of binding to a species with which it forms a complex called a chelate, wherein said species is linked to said chelating agent by at least two coordination bonds; said species is in particular an ion, more particularly a metal ion, or a metal, more particularly a metal radioelement.
  • the chelating agent may represent a group that forms a chelate via at least two coordination bonds with a metal ion of gadolinium or manganese, or a radioelement emitting gamma radiation, or emitter of positron, and / or emitter of particulate radiations, beta minus, Auger electron or alpha particles such as gold-33, copper-61, 62cuivre, 64cuivre, 67cuivre, 67gallium, 68gallium, 89zirconium 90yttrium, 99mtechnetium, llindium, 123iode, 124iode, 125iode, 131iode, 166holmium, 1771uttium , 186rhenium,
  • 213bismuth For example, it can be a group of formula:
  • each occurrence of R is independently H or a protecting group such as t-Bu; preferably all occurrences of R are H; or a group of formula:
  • V a DOPA targeting agent comprising the formula structure
  • targeting agent an agent that can be recognized by specific, highly differentiated cells such as cells of the central nervous system, tumor cells and / or in a particular metabolic state, for example cells in hypoxia, in apoptosis, or tumor cells exhibiting a particular phenotype that causes high aggression and significant cellular proliferation, such as the human growth factor receptor 2.
  • Said targeting agent may be an organic or inorganic group allowing a compound of the present invention to be recognized by specific cells in their membrane, their cytoplasm or their nucleus, and interacting with these cells in a preferential manner.
  • Said targeting agent may be a biological molecule produced by a living organism, or a chemically produced molecule, or any other molecule that can be recognized by specific cells, or by an extracellular matrix, in particular a DNA, a RNA or a cellular macromolecule, membrane or intracellularly, particularly a protein.
  • a targeting agent carried by a compound of the present invention may be a biological molecule such as a lipid, phospholipid, glycolipid, sterol, glycerolipid, or a vitamin, a hormone, a neurotransmitter, an amino acid, a peptide, a saccharide, an oligonucleotide, an antibody, an antibody fragment, a nano-antibody, a ligand of a trans-membrane transporter or a membrane receptor, or a nucleic or peptide aptamer.
  • a biological molecule such as a lipid, phospholipid, glycolipid, sterol, glycerolipid, or a vitamin, a hormone, a neurotransmitter, an amino acid, a peptide, a saccharide, an oligonucleotide, an antibody, an antibody fragment, a nano-antibody, a ligand of a trans-membrane transporter or a membrane receptor, or a nucleic
  • antibody means an immunoglobulin capable of recognizing an antigen and neutralizing the function of said antigen.
  • One whole antibody has two light chains and two heavy chains linked together by disulfide bridges.
  • antibody fragment an immunoglobulin consisting only of scFv, divalent scFv, Fab, Fab 'or F (ab') 2 fragments.
  • nano-anti-body means a structure having the same structural and functional properties as an entire antibody, for example consisting solely of two heavy chains of immunoglobulins.
  • the antibody may be a natural antibody, that is, secreted by B lymphocytes, or produced by hybridomas, or a recombinant antibody produced by a cell line. They can be monoclonal or polyclonal, of animal or human origin.
  • An antibody carried by a compound of the present invention may allow said compound to reach a target cell type, for example a type of tumor cells.
  • said antibody may be an antibody directed against an antigen expressed by a type of tumor cells, such as carcinoembryonic antigen, overexpressed by colorectal, medullary thyroid, lung or more specific some types of tumor cells such as those targeting the CA-15.3 antigen overexpressed by breast cancer cells, those targeting the CA125 antigen overexpressed by ovarian cancer cells, those targeting the Ca-19.9 antigen overexpressed by the breast cancer cells, cells of cancers of the gastrointestinal tract, and in particular pancreatic carcinomas, those targeting the epithelial antigen overexpressed by the chondrosarcoma cells, those targeting the overexpressed PSMA antigen by prostate cancer cells, those targeting VEGF overexpressed by tumor neovascular endothelial cells, or those targeting CD20 antigen expressed by normal or tumor cells such as those proliferating in lymphomas, or an antibody directed against an expressed protein in the extracellular matrix.
  • a type of tumor cells such as carcinoembryonic antigen, overexpressed by colorectal,
  • said antibody carried by a compound of the invention may be an anti-ERBB2, anti-CA-15.3, anti-CA-19.9, anti-PSMA, anti-VEGF, anti -CTLA-4, anti-CD20, anti-CD22, anti-CD19, anti-CD33, anti-CEA, anti-MUC 1, or anti-tenascine.
  • the targeting agent may be a peptide, a small chemical molecule, such as a neurotransmitter or a hormone.
  • said ligand carried by a compound of the invention may be the RGD peptide (cyclic or otherwise), the NGR peptide, GM-CSF, transferrin or galactosamine peptide HB-19, a fragment or a multimer of this peptide, a peptide targeting the melanocortin receptor, any other peptide targeting nucleolin, endostatin or angiostatin, or any other ligand of a receptor known to those skilled in the art which is overexpressed on tumor cells.
  • the targeting agent may be an aptamer.
  • a nucleic aptamer may be a DNA or an RNA, produced by an in vitro selection combinatorial method called SELEX (Existent evolution of ligands by exponential enrichment) (Ellington and Szostak, "In vitro selection of RNA molecules that bind specifies ligands.” Nature, 346, 1990, pp. 818-822).
  • a target molecule of an aptamer can be proteins, nucleic acids, small organic molecules or whole cells.
  • An aptamer carried by a compound of the present invention may be an aptamer targeting a receptor or transporter, a transmembrane, intracytoplasmic or intronucleic protein present in normal cells, and overexpressed in tumor cells, such as acute myeloblastic leukemia (Sefah, Kwame, et al., "Molecular Recognition of Acute Myeloid Leukemia Using Aptamers.” Leukemia, 23 (2009): 235-244 [25]), or the extracellular matrix such as, for example, an aptamer -MMP9, targeting metalloproteinase type 9 secreted by certain types of tumor cells, including prostate or melanoma.
  • nucleic or protein aptamer such as AS 141 1 or its derivatives and targeting with high affinity nucleolin, a protein overexpressed in the nucleus, cytoplasm and membrane of many types of tumor cells
  • a Z. Cao, R. Tong, A. Mishra, W. Xu, GCL Wong, J. Cheng, Y. Lu, Angew. Chem. 2009, 121, 6616-6620; Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 6494 - 6498; b) S. Christian, J. Pilch, ME Akerman, K. Porkka, P. Laakkonen, E. Ruoslahti, J. Cell Biol. 2003).
  • the targeting agent may be any other biological molecule, such as 2-oxoglutarate or metronidazole derivatives (MISO), to target cells in hypoxia, or a chemically produced molecule, such as pentavalent DMSA to target overexpressed proteins. involved in the calcium metabolism of tumor cells., such as DOPA, targeting (J Neurooncol DOI 10.1007 / sl 1060-012-0986-1) overexpression of LAT1 transporters in aggressive glial tumors (J Neurooncol 99: 217-225) or neuro-endocrine.
  • MISO metronidazole derivatives
  • the targeting agent may also be chosen from the chemical compounds described in Maisonial et al. J.Med. Chem. 201 1, 54, 2745, [26] Rbah-Vidal et al. Eur. J. Med. Mol. Imaging 2012, 39, 1449, [27] Vivier et al. Eur. J. Med. Chem. 201 1, 46, 5705 [28] and WO2009 / 095872 [29], targeting melanoma cells, as well as their analogues and derivatives.
  • Such a targeting agent has for example for structure:
  • R 1 and R 2 represent, independently of one another, a linear, branched or cyclic (C 1 -C 6) -alkyl chain, in particular a methyl, an ethyl, a propyl, an isopropyl or a butyl, more particularly an ethyl , R1 and R2 may be joined to form a ring, R1 and R2 particularly 2-azanorborn-2-yl, Ar represents a quinoxalinyl group optionally substituted with a heteroalkyl chain.
  • the compounds according to the invention comprise at least two V groups, said V groups have the same structure.
  • n, p and r being for these two formulas respectively between 1 and 10, between 3 and 6, and between 1 and 20.
  • the compounds specifically disclosed in WO 2008/04391 1 are excluded.
  • recognition agent or “specific molecule” is meant a small organic molecule, such as biotin, a single-stranded oligonucleotide, a hormone, or a neurotransmitter; or a macromolecule, such as an antibody, a transmembrane protein that recognizes a protein receptor or antigen.
  • Said recognition agent and said specific molecule may form a complex, in particular the "avidin-biotin” complex, the “streptavidin -biotin” complex, a complex of a double-stranded oligonucleotide, an "antibody and antigen” complex, a complex “Ligand and receptor”, or an “adamandane-cyclodextrin” complex.
  • the T group of the compound of formula I is avidin, streptavidin, or biotin, which enables said compound (click system) to couple with another therapeutic or diagnostic molecule (clac system), in particular another dendrimer, comprising biotin, when the T group of the compound of formula I is avidin or streptavidin, Avidin or streptavidin, when the group T of the compound of formula I is biotin,
  • clac system another therapeutic or diagnostic molecule
  • Cyclodextrin when the group T of the compound of formula I is adamantane.
  • the "click system” may be a compound of formula III
  • p is an integer of 1 to 10; preferably 4 or 6
  • D is a PAMAM dendrimer of formula (DD):
  • A is the dendrimer nucleus, multivalent 2;
  • A is a structure synthon:
  • Mi is a monomer of generation i, where
  • i is an integer from 0 to g where g is the generation number of the dendrimer
  • BT is the terminal branch, and t is the number of end units from the lower generation monomer
  • BT is a radical chosen from the group comprising a polyethylene glycol chain of formula:
  • each occurrence of x is independently an integer of 1 to 10; and at least one occurrence of BT is covalently linked to a targeting agent V; V represents a melanoma targeting agent having the formula:
  • T ' is adamantane, cyclodextrin, biotin, avidin or streptavidin;
  • p is an integer of 1 to 10; preferably 4 or 6;
  • R is a labelable molecule such as L-Thyroxine or dinitrobenzoate:
  • a "click system” compound according to the present invention comprising avidin, streptavidin, biotin or adamantane or a cyclodextrin as a recognition agent T, can have as a "clack system” a compound of formula IV in which the T 'group may be conjugated to a second dendrimer of formula DD A , to form a complex.
  • This system makes it possible to combine the properties provided by different dendrimers.
  • the second dendrimer can be any dendrimer known to those skilled in the art.
  • said second dendrimer has the following formula (DD A ):
  • R 9 represents said specific molecule
  • R6, R7, R8 represent, independently of each other, a dendrimeric group of generation 1 ⁇ n ⁇ 7, said dendrimeric group comprising:
  • R1, R2, R3 and R4 represent I
  • R5 represents -NHBoc
  • - 1 represents a natural integer greater than 0 and less than 7, or
  • Ris, Ris are F or -NO 2 , Cl, Br, CH 2 OMs, CH 2 OTs, CH 2 Br or CH 2 C1; preferably, Ri 5 and Ri 6 are both -NO 2 ;
  • - R 5 represents -NHBoc
  • - 1 represents a natural integer greater than 0 and less than 7;
  • Such a complex whether with a DD A dendrimer or a labelable molecule such as L-Thyroxine, makes it possible to combine the high vectorization power provided by the compound of formula (I) of the present invention with the amplification properties of the signal provided by the compounds of formula DD A or labelable molecules.
  • the present invention provides the following compounds:
  • the Li expeller of formula - NH (CH 2 CH 2 0) 6 CH 2 CH 2 NH- between the chelating agent and the dendrimer may be replaced by the expacer of formula:
  • the invention also relates to a complex as described above, for its use as a tumor detection tool, in particular in the form of micrometastases, and / or cells in a particular metabolic state, in particular cells in hypoxia or in apoptosis.
  • the invention also relates to a complex as described above, for its use as a sentinel lymph node characterization tool.
  • a sentinel lymph node characterization tool for its use as a sentinel lymph node characterization tool.
  • the determination of the tumor status of the sentinel lymph node (GLS) of any type of tumor requires a surgical biopsy for histopathological analysis.
  • melanoma a minimally invasive method guided by lympho-scintigraphy is necessary.
  • melanoma minimally invasive biopsy guided by lymphatic scintigraphy is currently performed to prevent the risk of underestimation of tumor grade by ignoring the existence of clinically occult lymph node metastases, thus compromising the choice of adjuvant treatment such as as chemotherapy or, immunotherapy.
  • Metastatic skin lesions in the elderly are difficult to manage, the use of chemo-, radio-or targeted therapies being contraindicated. Knowing the metastatic tumor status of the sentinel lymph node with high negative predictive value would avoid unnecessary lymphadenectomy. An efficient and specific system for in vivo staining of tumor cells would make it possible to determine the tumor boundaries of Dubreuilh's disease lesion; this determination may be more precise if it is based on Raman spectroscopy. Targeted internal radiotherapy (RTI), especially alphatherapy, could be effective on micro-metastases or metastases in transit.
  • RTI Targeted internal radiotherapy
  • a copose of formula I according to the invention (dendrimeric thermodynamic nanoplateform (NPD)) having very effective targeting properties, and a high efficiency in terms of diagnosis and / or treatment, makes it possible to respond to several challenges: i) through lymphatic drainage, SPECT or PET determination with high negative predictive value, tumor status of lymph nodes, particularly GS, ii) Raman spectroscopy or fluorescent optic delimit the tumor margins; (iii) IV injection of NPD with a high iodine-131 charge and / or astate 21-1 will enhance the therapeutic efficacy of external radiotherapy (ETR) by virtue of the radiosensitizer effect of NPDs due to their high electron density, iii) incorporation on the nanoplate of iodine 131 with high specific activity in a hydrogel, will deliver a cutaneous beta therapy.
  • EMR external radiotherapy
  • the proof of concept was performed on a pre-clinical mouse model and can also be performed on human metastatic tumors on the same principle.
  • Beta-ITR included in a gel forming a patch.
  • micro-metastasis is understood to mean the initial stage of a metastasis, in which only a few tumor cells are present, showing no clinical, physical or systemic signs.
  • micro-metastases thus allows detection at an early stage of a metastatic process.
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), wherein T is a chelating agent, and a metal ion of gadolinium or manganese, for use as a detection tool. of magnesium enhanced magnetic resonance imaging tumors.
  • tumor detection tool in particular a contrast agent, that is to say an agent which makes it possible artificially to increase the contrast between the tissues or cells of different natures, in order to visualize a tumor. which is naturally of little or no contrast and difficult to distinguish from neighboring tissues.
  • a contrast agent that is to say an agent which makes it possible artificially to increase the contrast between the tissues or cells of different natures, in order to visualize a tumor. which is naturally of little or no contrast and difficult to distinguish from neighboring tissues.
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a chelating agent, and a radioelement emitting gamma radiation such as gallium-67, technetium-99m, indium- 1 1 1, iodine-123, iodine-125, iodine-131, or holmium-166, for use as a gamma scintigraphy (GSc) or a single photon emission computed tomography (TEMP) tumor detection tool.
  • GSc gamma scintigraphy
  • TMP single photon emission computed tomography
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a chelating agent, and a positron emitting radioelement such as scandium-44, copper-64, gallium-68 , rubidium-82, zirconium-89, iodine-124 for use as a tumor detection tool by positron emission tomography (PET).
  • T represents a chelating agent
  • a positron emitting radioelement such as scandium-44, copper-64, gallium-68 , rubidium-82, zirconium-89, iodine-124 for use as a tumor detection tool by positron emission tomography (PET).
  • Hypoxia is a metabolic condition responsible, in the case of tumor cells, for the resistance of certain tumors to chemotherapy or external radiotherapy.
  • apoptosis defines a specific state of cell death, called "programmed”. This process may be spontaneous and physiological, but also induced by treatments such as chemotherapy or external or internal radiotherapy.
  • the identification and detection of these metabolic states is therefore important for adapting treatments, for example to increase the intensity of radiation in external radiotherapy (ETR), to have sufficient anti-tumor efficacy, the goal being to irradiate tumor cells in hypoxia compared to tumor cells in normoxia.
  • ETR external radiotherapy
  • the detection of apoptosis of tumor cells after a first course of chemotherapy makes it possible to evaluate very quickly if this chemotherapy is effective. Otherwise, the type of chemotherapy can be changed quickly without waiting several months and to see clinically and morphological imaging criteria lack of efficacy.
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a recognition agent of a specific molecule, and said specific molecule, linked to another dendrimer, of formula (DD A ), for its use as a tool for detecting tumors and / or sentinel lymph node characterization.
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a recognition agent of a specific molecule, and said specific molecule, linked to another dendrimer, of formula (DD A ), wherein the end groups Ra are such that R1, R2, R3 and R4 are non-radioactive iodine and / or R1 and R6 are non-radioactive fluorine, for use as tool for detecting tumors and / or sentinel lymph node characterization.
  • the invention also relates to a complex as described above, for its use as a radiotherapeutic drug in the treatment of tumors, especially in the form of micrometastases.
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a chelating agent, and a radioelement emitting particulate radiation, beta less, Auger electron, or alpha particles, such that copper-67, yttrium-90, indium-11, iodine-125, iodine-131, holmium-166, lutetium-177, rhenium-186, astate-21 1, lead-212, bismuth-212, bismuth- 213, actinium-225, for its use as a radiotherapeutic drug in the treatment of tumors, especially in the form of micrometastases.
  • T represents a chelating agent
  • a radioelement emitting particulate radiation beta less, Auger electron, or alpha particles, such that copper-67, yttrium-90, indium-11, iodine-125, iodine-131, holmium-166, lutetium-177, rhenium-186, astate
  • the invention relates to a complex comprising a compound of formula (I), in which T represents a chelating agent, and a radioelement emitting particulate radiation, beta less, Auger electron, or alpha particles, such as copper-67, yttrium-90, indium-11, iodine-125, iodine 131, holmium-166, lutetium-177, rhenium-186, astate-211, lead-212, bismuth-212, bismuth-213, actinium-225, for use as a drug in brachytherapy or internal radiotherapy or targeted, or vectorized.
  • T represents a chelating agent
  • a radioelement emitting particulate radiation beta less, Auger electron, or alpha particles, such as copper-67, yttrium-90, indium-11, iodine-125, iodine 131, holmium-166, lutetium-177, rhenium-186, astate-211, lead-
  • brachytherapy means a therapy obtained by introducing the radioactive source into or in contact with the area to be treated.
  • Internal or targeted radiotherapy is understood to mean a therapy whose unsealed radioactive source, in liquid or capsule form, is injectable or administered orally and will accumulate preferentially on the target tissues to be treated, whether tumoral or otherwise, such as in inflammatory pathologies or hyperthyroidism.
  • Said complex makes it possible to improve the specificity of the treatment and to reduce the secondary effects, because the complex of the invention is fixed mainly on the tumor target cells, or by vascular structures present in the tumor tissues or proliferative lesions. , and micro-metastases.
  • the tumor and / or the cells in a particular metabolic state belong to the group comprising:
  • Glioblastomas or neuroendocrine tumors V being in particular L-DOPA, or one of its derivatives,
  • V being a Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER2) receptor ligand, in particular a specific antibody; prostate tumors, V being a specific antibody targeting the PSMA receptor:
  • HER2 Human Epidermal Growth Factor Receptor 2
  • V being a aptamer or tripeptide targeting nucleolin, in particular of formula V4:
  • V being a nidazole derivative (misonidazole (MISO) or metronidazole (METRO))
  • the present invention also relates to a product containing:
  • a dendrimer in particular a dendrimer of formula DD A , comprising said specific molecule
  • T ' comprises said specific molecule and R and Li are as described in any one of the above variants, as a combination product, for simultaneous, separate or spread over time use in the diagnosis of cancers, in particular of micro-metastases.
  • the present invention relates to a product containing:
  • a dendrimer in particular a dendrimer of formula DD A , comprising said specific molecule T ',
  • biotin when the group T of the compound of formula I, II or III is avidin or streptavidin, or
  • Lx is a het string
  • p is an integer of 1 to 10;
  • R is a labelable molecule such as L-Thyroxine or dinitrobenzoate:
  • T a first constituent of the compound bearing a reactive group
  • the possible other reactive groups carried by the first constituent being optionally protected by ad hoc protective groups
  • a second constituent Li for example
  • Any other reactive groups carried by the second component may also be optionally protected by ad hoc protective groups.
  • T represents a recognition agent such as adamantane
  • T can have the following structure:
  • T as defined hereinbelow
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a complex as described above, as active substance, and a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the invention also relates to a diagnostic composition
  • a diagnostic composition comprising a complex as described above, as an active substance, and a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • Said pharmaceutically acceptable vehicle may be chosen from pharmaceutically acceptable vehicles known to those skilled in the art for pharmaceutical or diagnostic compositions, comprising in particular a species chosen from:
  • compositions according to the invention can be formulated in liquid form, such as injectable or drinkable solutions, injectable or drinkable suspensions, or solutions that can be absorbed by inhalation. They can also be in solid form, such as tablets, capsules, pills, suppositories or ova, in particular for diagnosing, in the case of diagnostic compositions, digestive or gynecological abnormalities.
  • a pharmaceutical composition or a diagnostic composition according to the present invention can be administered intravenously, intradermally, intraarterially, intralymphatically or orally.
  • the complex comprising a compound of formula (I) also comprises a radioelement, said composition is radioactive.
  • a radioactive pharmaceutical composition of the present invention is capable of being administered at one or more doses depending on the mode of administration of said composition, the mass of tissue to be treated, such as the tumor mass, the volume of distribution and dosimetry previously estimated.
  • a radioactive pharmaceutical composition of the present invention is capable of being administered to a radioactive activity of 1 to 40 MBq / kg, particularly 1 to 20 MBq / kg, more particularly 1 to 15 MBq / kg, especially 1 to 10 MBq / kg body weight for brachytherapy or intratumoral injection.
  • a radioactive pharmaceutical composition of the present invention is capable of being administered to a unit radioactive activity of 50 to 3200 MBq, particularly 50 to 1600 MBq, more particularly 50 to 1200 MBq, especially 50 to 800 MBq in case of brachytherapy or intratumoral injection.
  • a radioactive pharmaceutical composition of the present invention is capable of being administered to a radioactive activity of 1 to 50 MBq / kg, particularly 1 to 20 MBq / kg, more preferably 1 to 15 MBq / kg, more particularly 1 to 10 MBq / kg, in particular 1 to 5 MBq / kg of body weight in the case of targeted radiotherapy or by systemic injection.
  • a radioactive pharmaceutical composition of the present invention is capable of being administered to a unit radioactive activity of 50 to 4000 MBq, particularly 50 to 1600 MBq, more preferably 50 to 1200 MBq, still more particularly 50 to 200 MBq. 800 MBq, especially 50 to 400 MBq in case of targeted radiotherapy or by systemic injection.
  • FIG. 1 shows the Tc99m labeling procedure.
  • Figure 2 shows the purity control of radiolabelled products by paper chromatography.
  • Figure 3 shows planar images made with APAG9-1 immediately post-injection (A) and 2 hours post-injection (B).
  • Figure 4 shows planar images made with APAG22-1 immediately post-injection (A) and 2 hours post-injection (B).
  • FIG. 5 shows planar images made with compound AP045 immediately post-injection (A) and 2 hours post-injection (B).
  • FIG. 6 represents planar images made with compound AP071 2 hours post-injections (A) and 4 hours post-injections (B).
  • FIG. 7 represents planar images made with compound AP070 1 hour post-injections (A) and 2 hours post-injections (B).
  • FIG. 8 represents planar images made with Tc99m-labeled compound XI acquired just after intradermal injection (A) and SPECT acquired 1 h after injection (B) of a mouse injected at the end of the two lower lugs of 10 microliters-5. MBq.
  • FIG. 9 represents a diagram listing the% ratio of radioactivity to the activity injected by organs measured at 24 hours in a mouse injected at the end of the two lower legs with a total volume of 10 microliters and an activity of 2 , 8 MBq of the solute described in Figure 8.
  • Persistent activity in the feet and the entire lower limb shows complete drainage of the lymphatic bed and injection site, and urinary elimination of the very important compound , with very low hepatic activity, secondary to secondary drainage into the bloodstream.
  • FIG. 10 represents a planar image made with the indium 111 SPECT labeled APAG4 generation compound 1, acquired 3 h after intradermal injection at the end of the two lower legs of a 10 MBq mouse of the APAG4 solute labeled with Indium 111. Drainage throughout the lymphatic network to the lumbar aortic stage is clearly visible.
  • FIG. 11 represents a graph illustrating the radiochemical purity control of AP034-Tc99m compound.
  • FIG. 12 represents a SPECT planar image acquired 2 h after intradermal injection at the end of the two lower legs of a 10 microliter-38 MBq mouse of Tc99m labeled AP034 solute.
  • FIG. 13 shows the detection in popliteal ganglio taken 3 weeks after the injection of the tumor cells, of numerous tumor nodules inside the ipsilateral popliteal ganglion (Example 10).
  • FIG. 14 illustrates a clack system according to the invention, for example by using a targeting agent V conjugated to an iodinated and / or fluorinated DD A dendrimer.
  • FIG. 15 schematizes an example of use of a "click-clack" system according to the present invention (two-step protocol).
  • Trifluoroacetic acid TFA (1 ml) was added to a suspension of 1 (0.04 g, 0.04 mmol) in CH 2 Cl 2 (9 ml) at 0 ° C. The solution was cooled to room temperature and stirred for 3h. Then, the solvent was evaporated in vacuo and the resulting residue was purified by size exclusion chromatography (Sephadex LH20, GE Healthcare, 50/50 CH2Cl2 / MeOH) to give the desired compound 2 (50%) as a powder. yellow.
  • a new deprotection solution of the esters of Compound 1 is to use excess TMSBr (30 eq for 1 eq of Compound 1) in CH 2 Cl 2 to obtain the desired compound 2.
  • the amine "R” was prepared according to the method of J. Molieras et al., Nanoscale, 2013, 5, 1603-1615, Development of gadolinium based nanoparticles having an affinity towards melanin. The resulting mixture was stirred at room temperature for 48 hours and then the solvent evaporated in vacuo. The residue was purified by size exclusion chromatography (Sephadex, LH, GE Healthcare, 50/50 CH2Cl2 / MeOH) to give compound 5 (87%) as a brown oil. !
  • Triethylamine (2.3 mL, 16.3 mmol, 10 equiv) was added and the reaction mixture warmed to room temperature.
  • the aldehyde thus obtained was used in the next step without further purification.
  • Acid Sulfamic acid (0.32 g, 3.27 mmol, 2 eq.) and sodium chlorite (0.33 g, 3.27 mmol, 2 eq.) were added with stirring to a solution of said aldehyde (1.9 g, 1.63 mmol) in THF / brine. water (1/1).
  • MALDI calcd for C77H82N5O10: 1236.60, obtained: 1236.60; C77H81NaN5O10: 1258.60, obtained: 1258.58; calcd for C77H81KN5O10: 1274.60, obtained: 1274.56.
  • MALDI calcd for C67H14N6O2626: 1432.77, obtained: 1432.56; calcd for C67H113NaN7O26: 1454.77, obtained: 1454.53; calcd for C 67 H 13KN 7 O 26: 1470.77, obtained: 1470.53.
  • Example 5 Technetium-99m radiolabeling of compounds comprising a following agent:
  • a sterile vial 2-4 mg of the compound is dissolved in 1 mL of water for injection.
  • 300 ⁇ of a stannous chloride solution prepared extemporaneously (1 mg.mL-1, 1.3 ⁇ ) are added to the flask.
  • 500 MBq of freshly eluted sodium pertechnetate (Na99mTcO4) is added to the flask.
  • the mixture is incubated for 20 minutes at room temperature.
  • ⁇ of sodium ascorbate is added to the reaction flask.
  • the purity control of the radiolabeled product is carried out by chromatography on paper according to the diagram presented in FIG.
  • the metronidazole derivative (amino-metronidazole) was obtained following the methods of artic 225-239.
  • MALDI calcd for 0, 9 ⁇ 119 ⁇ 10 ⁇ 3 O: 1569.86, obtained: 1569.97, calcd for C74H131N8O28: 1610.86, obtained: 161 1.06, calculated for C 74 H 129 N 8 O 03: 1640.86, obtained: 1641.05, calculated for 1691.86, obtained: 1692.0.
  • the purity control of the radiolabeled product is carried out by chromatography on paper according to the diagram presented in FIG.
  • Example 8 Results 8.1 Animal model used: Mouse C57B16 carrying murine melanoma xenografts (line B16FO) obtained by subcutaneous injection of 300 000 cells suspended in 100 ⁇ of RPMI culture medium are injected subcutaneously in the back. The experiment is carried out when the tumors are palpable, ie about 10 days post-transplant. All experiments (tumor graft, injection and imaging) are performed under gas anesthesia with isoflurane / oxygen (2.5% / 2.5%).
  • the carcass of the animal is also weighed after separation of the tail; these samples are incinerated and their gamma activity is also measured. Similarly, the activity is measured gamma samples containing all collections of urine and stool.
  • the averages of each data are calculated on all the mice whose data are exploitable, as well as after having eliminated the animals having too rapid urinary elimination (> to 50% at 2h or 75% at 4h, as well as the mice presenting tumors> 2g, because the existence of a necrosis can distort the calculation of the ratio of fixation in the tumor).
  • the biodistribution data of the various dendrimer compounds coupled to the ligand IFC01 102 (also called amine R) and to a chelating agent are compared with those of the ligand alone coupled to the chelating agent DOTA (compound AP045) and radiolabeled with the same radioelement.
  • the radiochemical purity is greater than 95%, according to the chromatographic profile carried out as described previously (Example 5).
  • the average activity injected is 3.5 ⁇ 2.4 MBq.
  • FIG. 1 Examples of a planar image immediately post-injection and 2 hours post-injections are illustrated in FIG.
  • the radiochemical purity is greater than 99%, according to the chromatographic profile carried out as described above (Example 5).
  • the average activity injected is 4.16 ⁇ 1.31 MBq
  • the radiochemical purity is greater than 99%, according to the chromatographic profile carried out as described previously (Example 6).
  • the average activity injected is 2.45 ⁇ 1.5 MBq
  • FIG. 1 Examples of a planar image immediately post-injection and 2 hours post-injection are illustrated in FIG.
  • the maximum tumor uptake is observed 24 hours after the IV injection, with a ratio to the liver greater than 1; on the other hand, activity in the kidneys is still important with an adverse renal tumor ratio.
  • the radiochemical purity is greater than 95%, according to the chromatographic profile carried out as described previously (Example 6).
  • the average activity injected is 3.14 ⁇ 0.45 MBq 2 animals were euthanized at 2h, 3-4h, and 4-24h and 48h post-injection.
  • Tumor uptake 4 hours after IV injection is very high, with high liver, lung and blood ratios.
  • the radiochemical purity is greater than 95%, according to the chromatographic profile carried out as described previously (Example 6).
  • mice 5 animals were injected during a first experiment and euthanized at 2h, 4h or 24h,; 16 animals were injected during a second experiment, under water restriction (no access to the drink 30 minutes before injection and up to 3 hours postinjection) and euthanized at 2h, 4h, 48h.
  • FIG. 7 Quantitative biodistribution data collected in 20 animals with spontaneously low urinary excretion ( ⁇ 50% or 75% respectively at 2 or 4 h) or under experimental conditions of water restriction are recorded in the following table:
  • Tumor uptake 4 hours after IV injection is high, with high liver, lung and blood ratios.
  • Imaging Protocol Scintigraphic imaging is performed using a dedicated micro-imager SPECT-CT small animal (BIOSCAN TM). A scintigraphic planar image is made immediately after the injection to check for the absence of intra-caudal stasis. Static scintigraphic images can be taken at 2h, 4h, 24h and 48h (Micro Imager -SPECT-CT BIOSCAN ⁇ ).
  • Intra-dermal injection into the lower leg pad of a nude mouse of 1 to 20 microliters of a radiolabelled dendrimer suspension with a hypordermic syringe Intra-dermal injection into the lower leg pad of a nude mouse of 1 to 20 microliters of a radiolabelled dendrimer suspension with a hypordermic syringe.
  • a planar scintigraphic image of the whole body mouse is performed 5 minutes after injection to verify the absence of blood passage of the compound.
  • the compound XI is synthesized according to a method similar to the synthesis of the compound below published in WO 2008/04391 1, simply by modifying the length of the PEG chains.
  • PEG-chains and tosylées galiate-PEG-OMe necessary for obtaining compound APO 34 were obtained by following the procedures of Article G.Lamanna et al, Bioinatériaux, 2011, 32, 8562-8573. After saponification ester gallate PEG-OMe, the pale yellow oil was dissolved in dry CH2Cl2 with the catechol amine chèlation- agent (am born 12 obtained in item A.Bertin et al, New j.
  • the compounds XI and AP034 can be radiolabeled according to the protocol detailed in Example 5.
  • the APAG4 compound can be radiolabelled according to the protocol detailed in Example 7. The results after injection for these three compounds are illustrated in Figures 8 to 12.
  • the one-step protocol can be described as consisting of the injection of radioactive solutes, the two-step protocol, such as the first injection of the non-radiolabelled compound but containing a "clack", and in a second step, a compound radiolabeled with a "click".

Abstract

La présente invention se rapporte à des composés dendritiques comprenant un chélatant, fluorochrome ou agent de reconnaissance, répondant à la formule I, des compositions les comprenant et leurs utilisations, formule (I) dans laquelle : T, L1, D, R, L2, V et n sont tels que définis dans la description.

Description

COMPOSÉS DENDRITIQUES COMPRENANT UN AGENT CHÉLATANT, FLUOROCHROME OU AGENT DE RECONNAISSANCE, COMPOSITIONS LES
COMPRENANT ET LEURS UTILISATIONS
DESCRIPTION
Domaine technique
La présente invention concerne des composés dendritiques comprenant un chélatant, fluorochrome ou agent de reconnaissance, des compositions les comprenant et leurs utilisations.
Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte.
Etat de la technique
L'utilisation de dendrimères ou de composés dendritiques pour des applications biomédicales est un domaine florissant de la recherche, principalement en raison de leur structure précisément définie et conduisant à des systèmes biocompatibles, polyfonctionnels et so lubies dans l'eau (S. E. Stiriba, H. Frey et R. Haag, Angew. Chem. Int. Ed. , 2002, 41, 1329-1334; [1] M. J. Cloninger, Curr. Opin. Chem. Biol , 2002, 6, 742-748; [2] R. Duncan et L. Izzo, Adv. Drug Delivery Rev., 2005, 57, 2215-2237; [3] C. C. Lee, J. A. MacKay, J. M. J. Fréchet et F. C. Szoka, Nat. Biotechnol, 2005, 23, 1517-1526; [4] O. Rolland, C-O. Turrin, A-M. Caminade, J-P. Majorai, New J. Chem. , 2009, 33, 1809-1824 [5]).
Ces dernières années, plusieurs groupes de recherche ont exploré l'utilisation de dendrimères en tant que nouvelle classe d'agents de contraste macromoléculaires pour l'imagerie par résonance magnétique (IRM). L'efficacité des agents de contraste IRM est souvent exprimée en termes de relaxivité longitudinale (rl/mM-l .s-1), relative à leur capacité à raccourcir le temps de relaxation longitudinale des protons des molécules d'eau (Tl/s).
Wiener et al. (E. C. Wiener, M. W. Brechbiel, H. Brothers, R. L. Magin, O. A. Gansow, D. A. Tomalia et P. C. Lauterbur, Magn. Reson. Med. , 1994, 31, 1 [6]) ont décrit dans des travaux précurseurs la synthèse de différentes générations de dendrimères PAMAM liés au chélate Gd (III)-DTPA. L'agent de contraste IRM dendritique de sixième génération (MW = 139 kg.mol-1) possède un taux de relaxation rl de 34 mM-1. s-1 (0,6 T, 20 °C), ce qui est six fois plus élevé que le taux de relaxation rl du chélate Gd (III)-DTPA seul (MW = 0,55 kg.mol-1, rl = 5,4 mM-1. s-1). Cette forte augmentation du taux rl a été attribuée à la baisse de la cinétique de renversement du chélate Gd (III)-DTPA à la périphérie du dendrimère, comme le montre l'augmentation des temps de corrélation rotationnelle (E. C. Wiener, F. P. Auteri, J. W. Chen, M. W. Brechbiel, O. A. Gansow, D. S. Schneider, R. L. Belford, R. B. Clarkson et P. C. Lauterbur, J. Am. Chem. Soc, 1996, 118, 7774 [7]). De façon intéressante, aucune augmentation de la valeur de rl n'a été observée pour les polymères macromoléculaires flexibles de poids moléculaire comparable (V. S. Vexler, O. Clément, H. Schmitt-Willich et R. C. Brasch, J. Magn. Reson. Imaging, 1994, 4, 381; [8] T. S. Desser, D. L. Rubin, H. H. Muller, F. Qing, S. Khodor, G. Zanazzi, S. W. Young, D. L. Ladd, J. A. Wellons et K. E. Kellar, J. Magn. Reson. Imaging, 1994, 4, 467 [9]) ce qui implique que la mobilité segmentaire prédomine sur le temps de corrélation rotationnelle. Bryant et al. ont étudié la relation entre rl et la masse moléculaire de différentes générations de dendrimères PAMAM liés au chélate Gd (III)-DOTA (L. H. Bryant, Jr, M. W. Brechbiel, C. Wu, J. W. Bulte, V. Herynek et j. A. Frank, J. Magn. Reson. Imaging, 1999, 9, 348 [10]) : une valeur plateau pour rl de 36 mM-1. s-1 (0,47 T, 20 °C) a été atteinte pour la septième génération de dendrimère (MW = 375 kg.mol-1). En outre, il a été démontré que la valeur de rl relative à cette septième génération de dendrimère augmente lorsque la température augmente, ce qui indique qu'un échange lent de molécules d'eau limite la relaxivité (E. Toth, D. Pubanz, S. Vauthey, L. Helm et A. E. Merbach, Chem. Eur. J, 1996, 2, 1607 [11]). Rudovsky et al. ont étudié l'effet sur rl des interactions ioniques entre des dendrimères PAMAM-Gd(III) chargée négativement et des polyacides aminés chargée positivement (j. Rudovsky, P. Hermann, M. Botta, S. Aime et I. Lukes, Chem. Commun., 2005, 2390 [12]). Des expériences de titrage sur un agent de contraste dendritique de deuxième génération en présence de polyarginine ont montré une augmentation de rl de 20 à 28 mM-1. s-1 (0,47 T, 20 °C). Cet effet a été attribué à une diminution de la mobilité du complexe comprenant Gd (III), induite par les interactions entre le dendrimère anionique et la polyarginine cationique. Une série de dendrimères PPI fonctionnalisés par un chélate de Gd (III)-DTPA a été décrite par Kobayashi et al. (H. Kobayashi, S. Kawamoto, S.-K. Jo, H. L. Bryant, Jr, M. W. Brechbiel, Jr et R. A. Star, Bioconjugate Chem., 2003, 14, 388 [13]). Les auteurs ont démontré que rl augmente presque linéairement avec l'augmentation de la masse moléculaire du dendrimère sans atteindre une valeur plateau, une valeur de rl de 29 mM-1. s-1 (1,5 T, 20 ° C) étant par exemple atteinte pour la cinquième génération d'agent de contraste dendritique. Postérieurement, E. W. Meijer et al. ont fait état d'une nouvelle série de dendrimères PPI fonctionnalisés par un chélate Gd (III)-DTPA en utilisant un espaceur différent entre le complexe Gd (Ill)-chélatant et le dendrimère (S. Langereis, Q. G. de Lussanet, M. H. P. van Genderen, W. H. Backes et E. W. Meijer, Macromolecules, 2004, 37, 3084 [14]). Pour ces derniers dendrimères, une augmentation significative de rl, cependant moins prononcée que pour les agents de contraste IRM dendritiques décrits par Kobayashi et al, a été observée, tandis que les masses moléculaires des deux systèmes étaient comparables (cinquième génération: rl = 20 mM-1. s-1, 1,5 T et 20 °C). Des chercheurs de Schering AG (Berlin, Allemagne) ont développé une classe d'agents de contraste dendritiques construits à partir de lysine: Gadomer-17® (rl = 15,2 mM-1. s-1, 1,5 T et 37 °C) (C. Fink, F. Kiessling, M. Bock, M. P. Lichy, B. Misselwitz, P. Peschke, N. E. Fusenig, R. Grobholz et S. Delorme, J. Magn. Reson. Imaging, 2003, 18, 59;[15] G. M. Nicolle, E. Toth, H. Schmitt-Willich, B. Raduchel et A. E. Merbach, Chem. Eur. J, 2002, 8, 1040; [16] G. Adam, j. Neuerburg, E. Spuntrup, A. Muhler, K. Scherer et R. W. Gunther, J. Magn. Reson. Imaging, 1994, 4, 462; [17] G. Adam, j. Neuerburg, E. Spuntrup, A. Muhler, K. Scherer et R. W. Gunther, Magn. Reson. Med., 1994, 32, 622; [18] H. C. Schwickert, T. P. Roberts, A. Muhler, M. Stiskal, F. Demsar et R. C. Brasch, Eur. J. RadioL, 1995, 20, 144; [19] H. C. Roberts, M. Saeed, T. P. Roberts, A. Muhler, D. M. Shames, J. S. Mann, M. Stiskal, F. Demsar et R. C. Brasch, J. Magn. Reson. Imaging, 1997, 7, 331 [20]). Ces agents de contraste IRM macromoléculaires ont été synthétisés à partir d'un noyau central trimésoyltriamide, sur lequel 18 résidus d'acides aminés lysine ont été introduits.
Dans les exemples qui précèdent, les dendrimères se sont avérés être des plateformes synthétiques appropriées pour l'incorporation de plusieurs groupements comprenant Gd (III), conduisant à une amélioration de la sensibilité en IRM en terme de valeur de rl . Ces conclusions sont basées sur des mesures à des champs magnétiques actuels, de 0,5-1,5 T. Néanmoins, à des champs magnétiques de 10 T, les valeurs rl d'agents de contraste dendritiques sont sensiblement plus faibles, ne dépassant pas les valeurs rl de complexes de bas poids moléculaire à base de Gd (III). Les dendrimères améliorent également la protection du gadolinium et sa stabilité et donc permettent de diminuer les risques de toxicité.
Les agents de contraste IRM dendritiques sont d'excellents agents de contraste intravasculaires. Cependant, ces structures n'ont pas la spécificité requise pour l'IRM moléculaire (D. Artemov, J. Cell. Biochem., 2003, 90, 518 [21]), en raison du manque d'accumulation des agents de contraste IRM dans les régions d'intérêt, par exemple une tumeur.
D'autre part, l'utilisation de dendrimères pour la complexation de 99mTc est à ce jour peu décrite dans la littérature: en 2001, F. Vôgtle et al. (H. Stephan, H. Spies, B. Johannsen, K. Gloe, M. Gorka, F. Vôgtle, Eur. J. Inorg. Chem., 2001, 2957-2963 [22]) ont rapporté les propriétés de type hôte-invité propriétés de dendrimères multi-couronnes de quatre générations différentes vis-à-vis de pertechnétate de sodium. Des études d'extraction ont montré que les molécules hôtes sont essentiellement liées à l'intérieur du squelette de polyamine. La même année, H. Mukhtar et coll. (M. Subbarayan, S. J. Shetty, T. S. Srivastava, O. P. D. Noronha, A. M. Samuel, H. Mukhtar, Biochem. and Biophys. Res. Commun., 2001, 281, 32-36 [23]) ont décrit la synthèse et la distribution in vivo de porphyrinesdendritiques marquées au 99mTc pour l'imagerie des tumeurs et le diagnostic: ces systèmes dendritiques ont été administrés à des rats Wistar portant des tumeurs gliales, et des études d'imagerie scintigraphique ont montré leur potentiel pour la détection précoce de tumeurs. Enfin, A. Adronov, JF Valliant et al (M. C. Parrott, S. R. Benhabbour, C. Saab, J. A. Lemon, S. Parker, J. F. Valliant, A. Adronov, J. Am. Chem. Soc, 2009, 131, 2906-2916 [24]) ont décrit l'utilisation de dendrimères polyester de haute génération pour complexer 99mTc et leur utilisation subséquente pour l'imagerie SPECT: il a été constaté que les trois générations de dendrimère (G5 à G7) ont été rapidement et efficacement éliminées de la circulation sanguine par l'intermédiaire des reins et ont été excrétées par la vessie dans les 15 min après l'injection. Les données SPECT-CT ont été confirmées par une étude de bio distribution quantitative impliquant le prélèvement ex vivo de divers organes et la détermination de la radioactivité dans les organes en fonction du temps.
Cependant, le taux de captation desdits complexes dendrimères-99mTc est trop faible pour permettre une détection fiable des tumeurs en particulier des micrométastases. Les documents mentionnés précédemment ne montrent pas de ciblage de micrométastases par les composés qui y sont décrits.
Il existe donc un réel besoin de fournir des composés permettant de cibler les cellules tumorales, en particulier sous forme de micrométastases.
En outre, il existe un réel besoin de fournir des composés utilisés en tant qu'outils de détection de tumeurs, notamment sous forme de micrométastases.
Par ailleurs, il existe un réel besoin de fournir des composés utilisés en tant que médicaments radiothérapeutiques dans le traitement de tumeurs, notamment sous forme de micrométastases.
En outre, il existe un réel besoin de fournir des compositions pharmaceutiques ou de diagnostic comprenant lesdits composés.
Description de l'invention
La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins en fournissant un composé de Formule I suivante :
Figure imgf000007_0001
(I)
dans laquelle : T est un agent chélatant, un fluorochrome ou un agent de reconnaissance l'agent chélatant pouvant fixer :
• un ion métallique du gadolinium ou du manganèse, ou
• un radioélément émetteur de radiation gamma, ou émetteur de positon, et/ou émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger ou particules alpha tel que or-33, cuivre-61 , 62cuivre, 64cuivre, 67cuivre, 67gallium, 68gallium, 89zirconium 90yttrium, 99mtechnetium, l l lindium, 123iode, 124iode, 125iode, 131iode, 166holmium, 1771utétium,
186rhenium, 21 1astate, 89actinium, 213bismuth ;
l'agent de reconnaissance étant susceptible de former un complexe avec une molécule spécifique, éventuellement liée à un autre dendrimère, ledit complexe étant choisi parmi le complexe biotine-avidine, le complexe biotine-streptavidine, un complexe anticorps-antigène, un complexe ligand- récepteur, un oligonucléotide double-brin, ou un complexe adamantane- cyclodextrine ;
Li représente 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou un espaceur - C(=0)NH-, -NHC(=0)-, -NHC(=S)N - ou triazolyl de formule :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle l'un des points d'attachement est lié à T et l'autre à D directement ou via une
Figure imgf000008_0002
dans lesquels p est un entier de 1 à 10, et q est un entier de 1 à 12 ;
D est un dendrimère PAMAM, gallate ou aspartate de formule (DD):
Figure imgf000009_0001
dans laquelle :
(a) A est le noyau du dendrimère, de multivalence k, où :
k représente le nombre de dendrons et est un nombre entier allant de 2 à
A est un synthon de structure :
Figure imgf000009_0002
PAMAM
Figure imgf000009_0003
Gallatel (si i=0) Gallate2 (si
Figure imgf000009_0004
où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ; et y représente un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 4 ; Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à g, g étant le nombre de génération du dendrimère ;
lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000010_0001
quand D est aspartate où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ; et y représente un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 4 ;
BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 3, de préférence t est 2 ou 3 ; BT est un groupe choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à Ce, une chaîne pol
Figure imgf000011_0001
dans laquelle chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10 ;
Ri représente Ci_6alkyle ou -C(=0)OR2 où R2 représente Ci_6alkyle, de préférence Ri représente -OMe ou -COOtBu ;
et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ;
R représente 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou représente une molécule ou un groupe radiolabélisable tel que la L-thyroxine ou le dinitrobenzoate;
L2 représente 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000011_0002
dans lesquels p est un entier de 1 à 10, et q est un entier de 1 à 12 ;
V est un agent ciblant ; et
n est un entier supérieur ou égal à 1 , et représente le nombre d'agents ciblants attachés au composé de formule I ; sous réserve que lorsque D est un dendrimère gallate, alors V ne comprend pas une
structure DOPA de formule
Figure imgf000012_0001
et T ne comprend pas une structure catéchol de formule suivante :
Figure imgf000012_0002
La présente invention fournit également un composé de Formule I dans laquelle L2 est 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), et le composé a la formule II suivante :
T— L— D— R— (V)
n
(II)
dans laquelle :
T, Li, D, V et n sont tels que définis ci-dessus ; et
R est une structure radiolabélisable choisie parmi :
Figure imgf000012_0003
où X représente O ou NH. La présente invention fournit également un composé de Formule I dans laquelle R et L2 représentent chacun 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), et le composé a la formule III suivante :
T L-i— D— (V)
n
(III)
dans laquelle T, Li, D, V et n sont tels que définis ci-dessus.
Ainsi, les composés de l'invention de formule (I), ainsi que des sous-familles (II) et (III), comprennent au moins un agent ciblant V.
Agent chélatant un fluorochrome ou un agent de reconnaissance T
i, un agent chélatant de formule :
Figure imgf000013_0001
où chaque occurrence de R représente indépendamment H ou un groupe protecteur tel que t-Bu ; de préférence toutes les occurrences de R sont identiques, de préférence chaque R représente H ;
il. T peut représenter un agent chélatant de formule :
Figure imgf000013_0002
sauf dans le cas où D est un dendrimère Gallate et
V un agent ciblant DOPA comprenant la structure de formule
Figure imgf000013_0003
ML T peut représenter un fluorochrome fluorescéine de formule (isomère 5 ou 6):
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000014_0002
I.i peut représenter 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou un espaceur C(=0)NH-, - \ ! !( ( «)K -NHC(=S)NH- , ou triazolyl de formule :
Figure imgf000014_0003
de préférence
Li peu! avantageusement représenter 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou un espaceur triazolyl de formule :
Figure imgf000014_0004
, de préférence ;
Li tel que défini à v e à T via une chaîne hétéroalkyl de iormule :
Figure imgf000014_0005
dans lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ;
Li tel que défini à v et vi peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalkyl de
Figure imgf000014_0006
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 6 ; de préférence de 1 à 4 ; de préférence de 1 à 2 ; de préférence 2 ; Li tel que défini à v e a une chaîne hétéroalky] de formule :
Figure imgf000015_0001
dans lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6. Par
exemple, Li peut représenter un espaceur triazoiyl de iormule
Figure imgf000015_0002
, avantageusement avec p = 6 de sorte que T et D sont liés par la chaîne :
Figure imgf000015_0003
dans lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6, avantageusement p est 6 ; x. Ls tel que défini à v et vi peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalky 1 de formule : H Q H , dans lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de préférence 3 ; Par exemple, Li peut représenter 0 (c'est-à-dire une liaison covalente) de sorte que T et D sont liés par la chaîne :
Figure imgf000015_0004
dans lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de préférence 3 ;
L Li tel que défini à v et vi peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalky! de formule : z H , dans lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de préférence 3. Par exemple, Li peut représenter un espaceur -NHC(=S)NH =3 de
sorte que T et D sont liés par la chaîne :
Figure imgf000015_0005
lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de préférence 3 ; Dendrimère D
xii, D peut représenter un dendrimère PAMAM de formule (DD) dans iaqu
A est un synthon de structure
où * indique le point d'attachement à l'espaceur
Figure imgf000016_0001
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3, de préférence de 0 à 2, de préférence 0 ou 1 ; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ;
BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 2, de préférence t est 2 ;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -COOH, un groupement -OH, un alkyle en Ci à C6, une chaîne poléthylène glycol de formule
Figure imgf000016_0003
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 4, de préférence 3 ; et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence au moins une occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence chaque occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R; les occurrences de BT non liées à V ou une molécule radiolabélisable R se terminant par H, ou un alkyle en C 1 à C6 tel que méthyle ou éthyle ;
xiii, D peut représenter un dendrimère Galîate de formule (DD) dans laquelle :
A est un synthon de structure
Figure imgf000017_0001
Gallatel (si i=0) Gallate2 (si i>0) où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ;
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3, de préférence de 0 à 2, de préférence 0 ou 1 ; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000017_0002
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ; BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 3, de préférence t est 3 ;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à C6, une chaîne poléth
Figure imgf000018_0001
dans laquelle chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 8, de préférence de 2 à 8, de préférence 7 ;
Ri représente Ci_6alkyle ou -C(=0)OR2 où R2 représente Ci_6alkyle, de préférence Ri représente -OMe ou -COOtBu ;
et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V, de préférence au moins une occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence chaque occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R; les occurrences de BT non liées à V ou une molécule radiolabélisable R se terminant par un alkyle en Cl à C6 tel que méthyle ou éthyle ;
;iv. D peut représenter un de drimère Aspartate de formule (DD) dans laquelle :
A est un
Figure imgf000018_0002
Aspartatel Aspartate2 où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ; et y représente un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 4 ;
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3, de préférence de 0 à 2, de préférence 0 ou 1 ; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
Figure imgf000019_0001
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ; et y représente un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 4 ;
BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 2, de préférence t est 2 ;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à Ce, une chaîne poléthylène glycol de formule
Figure imgf000019_0002
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 8, de préférence de 2 à 8, de préférence 7 ; et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence au moins une occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence chaque occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R, de préférence chaque occurrence de BT par monomère Mi est covalemment liée à une molécule radiolabélisable R; les occurrences de BT non liées à V ou une molécule radiolabélisable R se terminant par H, ou un alkyle en Cl à C6 tel que méthyle ou éthyle ; avantageusement, la molécule radiolabélisab
Figure imgf000020_0001
Groupe radiolabélisable R
xv. R peut avantageusement représenter 0 (c'est-à-dire une liaison covalente);
:vi. R peut avantageusement représenter une molécule labélisable telle que la L- thyroxine de formule :
Figure imgf000020_0002
VII. R peut avantageusement représenter une molécule labélisable telle que le dinitrobenzoate de formule :
Figure imgf000020_0003
où X représente O ou NH
Espaceur Lg
ML L2 peut avantageusement représenter 0 (c'est-à-dire une liaison covalente);
>ix. L2 peut avantageusement représenter une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000021_0001
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 6 ;
L2 peut avantageusement représenter une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000021_0002
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 6 ;
L2 peut avantageusement représ éroalkyl de formule :
Figure imgf000021_0003
dans laquelle q est un entier de 1 à 12 ; de préférence de 1 à 6 ; de préférence de 1 à 4 ; de préférence de 1 à 3 ; de préférence 3 ;
:xi. La peut avantageusem lkyl de formule :
Figure imgf000021_0004
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 6 ;
xii. L2 eut avantageusement représenter une chaîne hétéroalkyl de formule :
•A
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 6 ; de préférence de 1 à 4 ; de préférence de 1 à 2 ; de préférence 2 ;
xxiii. L2 peut avantageusement représenter une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000021_0005
avantageusement cette variante de L2 est utilisée dans les composé de formule I où R représente avantageusement une molécule labélisable telle que le dinitrobenzoate de formule :
Figure imgf000021_0006
où X représente NH, pour former une structure de formule :
Figure imgf000022_0001
Agent ciblant V
:iv. V peut représenter un agent ciblant le mélanome répondant à la formule :
Figure imgf000022_0002
V peut représenter un agent ciblant tripeptide de formule
Figure imgf000022_0003
;vi, V peut représenter un agent ciblant amino-métronidazolyle de formule :
Figure imgf000022_0004
Les composés de l'invention comprennent toutes les combinaisons possibles des variables T, Li, D, R, L2 et V, telles que décrites aux points (i) à (xxvi) ci-dessus. Ces variantes sont applicables à l'une quelconque des formules des composés décrites dans le présent document, lorsque la variable en question (i.e., T, L1; D, R, L2 et V) est présente dans la formule, y compris les composés de formule I, II, III, IV et IA à Ie. Par souci de sobriété dans la rédaction, chaque variante n'est pas explicitement décrite dans la présente, cependant, le lecteur comprendra aisément que l'ensemble de ces variantes est compris dans la portée de l'invention, ainsi que comment chimiquement lier T, Li, D, R, L2 et V à la lumière des Exemples.
Avantageusement, les composés de formule I ont l'une des structures suivantes :
Formule IA
Figure imgf000023_0001
Avantageusement, x est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 3,
Figure imgf000023_0002
l p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6, avantageusement p est 6. Avantageusement, T représente l'un quelconque des agents chélatants i ou ii. Avantageusement, T représente le fluorochrome iii. Avantageusement, T représente l'un des agents de reconnaissance iv. Avantageusement, V représente l'un quelconque des agents ciblants xxiv à xxvi.
B
Formule I
Figure imgf000023_0003
Avantageusement, chaque occurrence de RI est indépendamment C l -C6alkyle, de préférence méthyle ou t-butyle, de préférence chaque occurrence de Ri est méthyle. Avantageusement, chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 3, de référence, 1 , 2 ou 3. Avantageusement, Li représente :
Figure imgf000024_0001
dans lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de peut représenter : une chaîne hétéroaikyl de formule
Figure imgf000024_0002
, dans lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6. Avantageusement, Li peut aussi représenter : un espaceur de formule
P -Λ H où p=2. Avantageusement, T représente l'un quelconque des agents chélatants i ou ii. Avantageusement, T représente le fluorochrome iii. Avantageusement, T représente l'un des agents de reconnaissance iv. Avantageusement, V représente l'un quelconque des agents ciblants xxiv à xxvi.
Formule Γ
Figure imgf000024_0003
Avantageusement, RI est Cl-C6alkyle, de préférence méthyle ou t-butyle, de préférence Ri est méthyle. Avantageusement, chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 3, de référence, 1, 2 ou 3.
nte :
Figure imgf000024_0004
lequel q est un entier de 1 à 12, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6 ; de préférence 3. Avantageusement, Li peut représenter : une chaîne hétéroaikyl de formule : H P H 5 dans lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6. Avantageusement, Li peut aussi représenter : un espaceur de formule
Figure imgf000025_0001
où p=2. Avantageusement, T représente l'un quelconque des agents chélatants i ou ii. Avantageusement, T représente le fluorochrome iii. Avantageusement, T représente l'un des agents de reconnaissance iv. Avantageusement, V représente l'un quelconque des agents ciblants xxiv à xxvi.
Formule I
Figure imgf000025_0002
er : une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000025_0003
lequel p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6. Avantageusement, Li peut aussi représenter : un espaceur de formule
Figure imgf000025_0004
OÙ p=2.
Avantageusement, T représente l'un quelconque des agents chélatants i ou ii. Avantageusement, T représente le fluorochrome iii. Avantageusement, T représente l'un des agents de reconnaissance iv. Avantageusement, V représente l'un quelconque des agents ciblants xxiv à xxvi.
Formule IE
Figure imgf000026_0001
Avantageusement, x est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence de 1 à 3,
Figure imgf000026_0002
l p est un entier de 1 à 10, de préférence de 1 à 6, de préférence 2, 3, 4, 5 ou 6, avantageusement p est 6. Avantageusement, T représente l'un quelconque des agents chélatants i ou ii. Avantageusement, T représente le fluorochrome iii. Avantageusement, T représente l'un des agents de reconnaissance iv. Avantageusement, V représente l'un quelconque des agents ciblants xxiv à xxvi.
Le radioélément pouvant être fixé par l'agent chélatant peut également être tout radioélément pouvant être détecté par un système d'imagerie ou de comptage de radioactivité ou ayant un effet radiotoxique.
Avantageusement, V peut être un agent ciblant les cellules tumorales.
Les Inventeurs ont remarqué que le taux de captation de composés de l'invention par des tumeurs était compris de 5 à 39%, par gramme de tumeur, à 4 heures.
Par « agent chélatant », on entend un groupe ayant la propriété de se lier à une espèce avec laquelle il forme un complexe appelé chélate, dans lequel ladite espèce est liée au dit agent chélatant par au moins deux liaisons de coordination ; ladite espèce est en particulier un ion, plus particulièrement un ion métallique, ou un métal, plus particulièrement un radioélément métallique. Par exemple, l'agent chélatant peut représenter un groupe qui forme un chélate via au moins deux liaisons de coordination avec un ion métallique du gadolinium ou du manganèse, ou un radioélément émetteur de radiation gamma, ou émetteur de positon, et/ou émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger ou particules alpha tel que or-33, cuivre-61, 62cuivre, 64cuivre, 67cuivre, 67gallium, 68gallium, 89zirconium 90yttrium, 99mtechnetium, l l lindium, 123iode, 124iode, 125iode, 131iode, 166holmium, 1771utétium, 186rhenium,
213bismuth. Par exemple, il peut s'agir d'un groupe de formule :
Figure imgf000027_0001
où chaque occurrence de R représente indépendamment H ou un groupe protecteur tel que t-Bu ; de préférence toutes les occurrences de R sont résente H ; ou d'un groupe de formule :
Figure imgf000027_0002
sauf dans le cas où D est un dendrimère Gallate et
V un agent ciblant DOPA comprenant la structure de formule
Figure imgf000027_0003
Par « agent ciblant », on entend un agent pouvant être reconnu par des cellules spécifiques, très différenciées comme les cellules du système nerveux central, les cellules tumorales et/ou dans un état métabolique particulier, par exemple des cellules en hypoxie, en apoptose, ou des cellules tumorales présentant un phénotype particulier à l'origine d'une grande agressivité et une prolifération cellulaire importante comme le récepteur 2 du facteur humain de croissance. Ledit agent ciblant peut être un groupement organique ou inorganique permettant à un composé de la présente invention d'être reconnu par des cellules spécifiques au niveau de leur membrane, de leur cytoplasme ou de leur noyau, et interagissant avec ces cellules de manière préférentielle. Ledit agent ciblant peut être une molécule biologique produite par un organisme vivant, ou une molécule produite chimiquement, ou toute autre molécule pouvant être reconnue par des cellules spécifiques, ou par une matrice extracellulaire, notamment un ADN, un ARN ou une macromolécule cellulaire, membranaire ou intracellulaire, en particulier une protéine.
Particulièrement, un agent ciblant porté par un composé de la présente invention peut être une molécule biologique telle qu'un lipide, phospholipide, glycolipide, stérol, glycérolipide, ou une vitamine, une hormone, un neurotransmetteur, un acide aminé, un peptide, un saccharide, un oligonucléotide, un anticorps, un fragment d'anticorps, un nano-anti-corps, un ligand d'un transporteur trans-membranaire ou d'un récepteur membranaire, ou un aptamère nucléique ou peptidique.
On entend par « anticorps » une immunoglobuline capable de reconnaître un antigène et neutraliser la fonction dudit antigène. Un anticorps entier comporte deux chaînes légères et deux chaînes lourdes liées entre elles par des ponts disulfures.
On entend par « fragment d'anticorps » une immunoglobuline constituée seulement de fragments scFv, scFv bivalent, Fab, Fab' ou F(ab')2.
On entend par « nano-anti-corps » une structure ayant les mêmes propriétés structurelles et fonctionnelles qu'un anti-corps entier, par exemple constitué uniquement de deux chaînes lourdes d'immunoglobulines.
Ledit anticorps peut être un anticorps naturel, autrement dit sécrété par les lymphocytes B, ou produit par des hybridomes, ou un anticorps recombinant produit par une lignée cellulaire. Ils peuvent être monoclonaux ou polyclonaux, d'origine animale ou humaine.
Un anticorps porté par un composé de la présente invention peut permettre audit composé d'atteindre un type de cellules cibles, par exemple un type de cellules tumorales.
Plus particulièrement, ledit anticorps peut être un anticorps dirigé contre un antigène exprimé par un type de cellules tumorales, comme l'antigène carcino- embryonnaire, surexprimé par les cellules de cancers colorectaux, médullaire de la thyroïde, du poumon ou des anticorps plus spécifiques de certains types de cellules tumorales comme ceux ciblant l'antigène CA-15.3 surexprimé par les cellules de cancer du sein, ceux ciblant l'antigène CA125 surexprimé par les cellules du cancer de l'ovaire, ceux ciblant l'antigène Ca- 19.9 surexprimé par les cellules des cancers du tractus gastrointestinal, et en particulier des carcinomes pancréatiques, ceux ciblant l'antigène épithélial surexprimé par les cellules de chondrosarcome, ceux ciblant l'antigène PSMA surexprimé par les cellules de cancer de prostate, ceux ciblant le VEGF surexprimé par les cellules endothéliales des néo-vaisseaux tumoraux, ou ceux ciblant antigène CD20 exprimé par les lymphocytes normaux ou tumoraux comme ceux proliférant dans les lymphomes, ou un anticorps dirigé contre une protéine exprimée dans la matrice extracellulaire.
A titre d'exemple et de façon non exhaustive, ledit anticorps porté par un composé de l'invention peut être un anticorps anti-ERBB2, anti-CA- 15.3, anti-CA- 19.9, anti- PSMA, anti-VEGF, anti-CTLA-4, anti-CD20, anti-CD22, anti-CD19, anti-CD33, anti- CEA, anti-MUC 1 , ou anti-tenascine.
L'agent ciblant peut être un peptide, une petite molécule chimique, telle qu'un neurotransmetteur ou une hormone.
A titre d'exemple et de façon non exhaustive, ledit ligand porté par un composé de l'invention peut être le peptide RGD (cyclique ou non), le peptide NGR, GM-CSF, transferrine ou galactosamine, le peptide HB-19, un fragment ou un multimère de ce peptide, un peptide ciblant le récepteur de la mélanocortine, tout autre peptide ciblant la nucléoline, l'endostatine ou l'angiostatine, ou tout autre ligand d'un récepteur connu de l'homme de métier qui est surexprimé sur des cellules tumorales.
L'agent ciblant peut être un aptamère.
Un aptamère nucléique peut être un ADN ou un ARN, produit par une méthode combinatoire de sélection in vitro appelée SELEX (systematic évolution of ligands by exponentiel enrichment) (Ellington et Szostak, « In vitro sélection of RNA molécules that bind spécifie ligands. », Nature, vol. 346, 1990, p. 818-822).
Une molécule cible d'un aptamère peut être des protéines, des acides nucléiques, des petite molécules organiques ou des cellules entières.
Un aptamère porté par un composé de la présente invention peut être un aptamère ciblant un récepteur ou un transporteur, une protéine transmembranaire, intra- cytoplasmique ou intra-nucléique présente dans des cellules normales, et surexprimées dans des cellules tumorales, telle que les cellules de la leucémie aiguë myéloblastique (Sefah, Kwame, et al. "Molecular récognition of acute myeloid leukemia using aptamers." Leukemia, 23 (2009):235-244 [25]), ou la matrice extra-cellulaire comme par exemple un aptamère anti-MMP9, ciblant des métalloprotéinase de type 9 sécrété par certains types de cellules tumorales, notamment prostatique ou de mélanome. Il peut s'agir également d'un aptamère nucléique ou protéique tel que AS 141 1 ou ses dérivés et ciblant avec une forte affinité la nucléoline, une protéine surexprimée dans le noyau, le cytoplasme et la membrane de nombreux types de cellules tumorales ( a) Z. Cao, R. Tong, A. Mishra, W. Xu, G. C. L. Wong, J. Cheng, Y. Lu, Angew. Chem. 2009, 121, 6616 - 6620; Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 6494 - 6498; b) S. Christian, J. Pilch, M. E. Akerman, K. Porkka, P. Laakkonen, E. Ruoslahti, J. Cell Biol. 2003).
Particulièrement, l'agent ciblant peut être toute autre molécule biologique, telle que le 2-oxoglutarate ou des dérivés métronidazolés (MISO), pour cibler les cellules en hypoxie, ou une molécule produite chimiquement, telle que le DMSA pentavalent pour cibler les protéines surexprimées intervenant dans le métabolisme calcique de cellules tumorales., telle que la DOPA, ciblant (J Neurooncol DOI 10.1007/sl 1060-012-0986-1) la surexpression des transporteurs LAT1 dans des tumeurs gliales agressives (J Neurooncol 99:217-225) ou neuro-endocrines.
L'agent ciblant peut également être choisi parmi les composés chimiques décrits dans Maisonial et al. J.Med. Chem. 201 1, 54, 2745, [26] Rbah- Vidal et al. Eur. J. Med. Mol. Imaging 2012, 39, 1449, [27] Vivier et al. Eur. J. Med. Chem. 201 1, 46, 5705[28] et WO2009/095872 [29], ciblant les cellules de mélanome, ainsi que leurs analogues et leurs dérivés. Un tel agent ciblant a par exemple pour structure :
Figure imgf000030_0001
dans lesquelles RI et R2 représentent indépendamment l'un de l'autre une chaîne (Cl- C6)- alkyle linéaire, ramifiée ou cyclique, en particulier un méthyle, un éthyle, un propyle, un isopropyle, un butyle, plus particulièrement un éthyle, RI et R2 pouvant être reliés pour former un cycle, RI et R2 représentant en particulier le 2-azanorborn-2-yl, Ar représente un groupe quinoxalinyl éventuellement substitué avec une chaîne hétéroalkyle. Avantageus
Figure imgf000030_0002
VI .
Avantageusement, lorsque les composés selon l'invention comprennent au moins deux groupes V, lesdits groupes V ont la même structure.
Selon un mode de réalisation, les composés suivants sont exclus de l'invention :
Figure imgf000031_0001
n, p et r étant pour ces deux formules compris respectivement entre 1 et 10, entre 3 et 6, et entre 1 et 20.
Selon un mode de réalisation, les composés spécifiquement divulgués dans WO 2008/04391 1 sont exclus.
On entend par « agent de reconnaissance » ou « molécule spécifique », une petite molécule organique, telle que la biotine, un oligonucléotide simple-brin, une hormone, ou un neurotransmetteur ; ou une macromolécule, telle qu'un anticorps, une protéine transmembranaire qui reconnaît un récepteur ou un antigène protéique.
Ledit agent de reconnaissance et ladite molécule spécifique peuvent former un complexe, notamment le complexe « avidine-biotine », le complexe « streptavidine -biotine », un complexe d'un oligonucléotide double-brin, un complexe « anticorps et antigène », un complexe « ligand et récepteur », ou un complexe « adamandane-cyclodextrine ».
Système clic-clac
Selon une variante, le groupe T du composé de formule I est l'avidine, la streptavidine, ou la biotine, ce qui permet audit composé (système clic) de se coupler à une autre molécule thérapeutique ou diagnostic (système clac), en particulier un autre dendrimère, comportant • la biotine, lorsque le groupe T du composé de formule I est l'avidine ou la streptavidine, • l'avidine ou la streptavidine, lorsque le groupe T du composé de formule I est la biotine,
• l'adamantane, lorsque le groupe T du composé de formule I est la cyclodextrine, ou
• la cyclodextrine, lorsque le groupe T du composé de formule I est l'adamantane. Par exemple, le « système clic » peut être un composé de formule III
T L1— D—V)
n
Figure imgf000032_0001
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence 4 ou 6
Figure imgf000032_0002
dans lesquelles p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 8 ; de préférence 3 ou 7 ; D est un dendrimère PAMAM de formule (DD):
Figure imgf000032_0003
dans laquelle :
(a) A est le noyau du dendrimère, de multivalence 2 ;
A est un synthon de structure :
Figure imgf000033_0001
ou indique le point d'attachement à l'espaceur Li ;
Mi est un monomère de génération i, où
i est un nombre entier allant de 0 à g, g étant le nombre de génération du dendrimère ;
lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000033_0002
Avec i = 0 ou 1 ; de préférence i=l ;
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ;
BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est 2;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant une chaîne poléthylène glycol de formule :
Figure imgf000033_0003
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10 ; et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ; V représente un agent ciblant le mélanome répondant à la formule :
Figure imgf000034_0001
Par exemple, le « sytème clac » peut répondre à la formule IV :
T' L-i— R
IV
dans laquelle
T' est l'adamantane, la cyclodextrine, la biotine, l'avidine ou la streptavidine ;
:
Figure imgf000034_0002
dans laquelle p est un entier de 1 à 10; de préférence 4 ou 6 ;
Figure imgf000034_0003
dans lesquelles p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 8 ; de préférence 3 ou 7 ; R est une molécule labélisable telle que la L-Thyroxine ou le dinitrobenzoate :
Figure imgf000034_0004
Avantageusement, un composé « système clic » selon la présente invention, comportant l'avidine, la streptavidine, la biotine ou l'adamantane ou une cyclodextrine comme agent de reconnaissance T, peut avoir comme « système clac » un composé de formule IV où le groupe T' peut être conjugué à un deuxième dendrimère de formule DDA, pour former un complexe.
Ce système permet de combiner les propriétés apportées par différents dendrimères.
A titre d'exemple mais non exhaustif, le deuxième dendrimère peut être tout dendrimère connu de l'homme du métier.
Avantageusement, ledit deuxième dendrimère est de formule (DDA) suivante :
Figure imgf000035_0001
(DDA)
dans laquelle :
- R9 représente ladite molécule spécifique,
- R6, R7, R8 représentent, indépendamment les uns des autres, un groupement dendrimérique de génération 1< n <7, ledit groupement dendrimérique comprenant :
(a) un coeur présentant un groupe aminé et deux groupes carbonyle, et représenté par la formule A:
Figure imgf000035_0002
(A)
(b) des groupements d'extrémité Ra choisis parmi (i) le groupement d'extrémité de formule Ral
Figure imgf000036_0001
dans laquelle :
- RI, R2, R3 et R4, représentent I,
- R5 représente -NHBoc,
- 1 représente un entier naturel supérieur à 0 et inférieur à 7, ou
(ii) le groupement d'extrémité de formule Ra2
Figure imgf000036_0002
dans laquelle :
- Ris, Ris représentent F ou -N02, Cl, Br, CH2OMs, CH2OTs, CH2Br ou CH2C1 ; de préférence Ri5 et Ri6 représentent tous les deux -N02 ;
- R5 représente -NHBoc,
- 1 représente un entier naturel supérieur à 0 et inférieur à 7;
(c) et lorsque ledit groupement dendrimérique n'est pas un groupement dendrimérique de la génération un, ledit groupement dendrimérique comportant également des dendrons représentés par la formule B :
Figure imgf000037_0001
(B)
ledit groupement dendrimérique de génération n, n>l, comportant n-1 rangs de dendrons,
* le coeur de formule A étant tel que :
- le groupe aminé dudit coeur est lié à la chaîne carbonée de la formule I,
- les deux groupes carbonyle dudit coeur sont liés :
(i) soit au groupe aminé d'un groupement d'extrémité représenté par Ra, lorsque ledit groupement dendrimérique est de la génération un; ou
(ii) soit au groupe aminé d'un dendron du premier rang dudit groupement dendrimérique, lorsque ledit groupement dendrimérique n'est pas de la génération un, ou
(iii) soit à un groupe -OH, à condition que les deux groupes carbonyle dudit coeur ne soient pas liés tous deux à un groupe -OH, et
* le groupement d'extrémité Ra étant tel que :
- le groupe aminé dudit groupement d'extrémité est lié :
(i) soit à un groupe carbonyle du coeur, lorsque ledit groupement dendrimérique est de la génération un ; ou
(ii) soit à un groupe carbonyle d'un dendron du dernier rang (rang n-1) dudit groupement dendrimérique, lorsque ledit groupement dendrimérique n'est pas de la génération un, et
* un dendron de formule B et de rang m, l<m<n-l, étant tel que:
- le groupe aminé dudit dendron de rang m est lié :
- soit à un groupe carbonyle du coeur, lorsque ledit dendron est de premier rang
- soit à un groupe carbonyle d'un dendron de rang précédent m- 1, lorsque ledit dendron est de rang supérieur à 1 ;
- les deux groupes carbonyle dudit dendron sont liés :
- soit au groupe aminé d'un groupement d'extrémité Ra, lorsque ledit dendron est de dernier rang,
- soit au groupe aminé d'un dendron du rang suivant m+1, lorsque ledit dendron n'est pas de dernier rang, - soit à un groupe -OH, à condition que les groupes carbonyle dudit groupement dendrimérique ne soient pas tous liés à un groupe -OH.
Un tel complexe, que ce soit avec un dendrimère DDA ou une molécule labélisable telle que la L-Thyroxine, permet de combiner le pouvoir de vectorisation élevé apporté par le composé de formule (I) de la présente invention aux propriétés d'amplification du signal apportées par les composés de formule DDA ou les molécules labélisables.
Selon un aspect, la présente invention fournis les composés suivants :
Figure imgf000038_0001
AMÎÎ
Figure imgf000038_0002
Figure imgf000038_0003
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0002
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0001
Pour les motifs gallate présentés ci-après, l'expaceur Li de formule - NH(CH2CH20)6CH2CH2NH- entre l'agent chélatant et le dendrimère peut être remplacé par l'expaceur de formule :
Figure imgf000043_0002
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0002
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0001
Figure imgf000048_0002
Figure imgf000049_0001
Pour les motifs gallate présentés ci-après, l'expaceur Li de formule - NH(CH2CH20)6CH2CH2NH- entre l'agent chélatant et le dendrimère peut être remplacé par l'expaceur de formule :
Figure imgf000049_0002
où p=2.
Figure imgf000049_0003
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000051_0001
UTILISATIONS
L'invention concerne également un complexe tel que décrit précédemment, pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs, notamment sous la forme de micrométastases, et/ou de cellules dans un état métabolique particulier, notamment des cellules en hypoxie ou en apoptose.
L'invention concerne également un complexe tel que décrit précédemment, pour son utilisation en tant qu'outil de caractérisation du ganglion sentinelle. Actuellement, la détermination du statut tumoral du ganglion lymphatique sentinelle (GLS) de tout type de tumeurs nécessite une biopsie chirurgicale pour une analyse histo- pathologique. Dans le mélanome, une méthode peu invasive guidée par lympho- scintigraphie est nécessaire. Dans le mélanome, la biopsie par chirurgie mini-invasive, guidée par scintigraphie lymphatique est actuellement effectué afin de prévenir le risque de sous-estimation du grade tumoral en méconnaissant l'existence de métastases ganglionnaires cliniquement occultes, compromettant ainsi le choix du traitement adjuvant tel que la chimiothérapie ou, l'immunothérapie.
Dans le but d'optimiser la qualité carcinologique de l'exérèse dans la mélanose de Dubreuilh, dont les limites sont souvent mal définissables, une plus grande exérèse est requise avec une marge de 5- 10 mm aux prix de séquelles esthétiques et d'une plus grande complexité de la chirurgie réparatrice. La chirurgie micrographique de Mohs, permettant de limiter la zone de résection, est très rarement appliquée en raison du surcoût financier et du temps nécessaire à l'exérèse. L'imagerie optique est déjà évaluée par plusieurs équipes qui réalisent un examen ex-vivo en microscopie confocale, de prélèvements en bande de 2mm cernant la lésion grâce à un marquage fluorescent non spécifique des noyaux.
Malgré le développement de thérapies ciblées et de l'immunothérapie (anti CTLA4), le mélanome de haut grade avec des métastases à distante garde un mauvais pronostic.
Les lésions cutanées métastatiques chez les personnes âgées, sont difficiles à prendre en charge, l'utilisation de la chimio-, radio-ou des thérapies ciblées étant contre-indiquées. La connaissance du statut tumoral métastatique du ganglion sentinelle avec une valeur prédictive négative élevée permettrait d'éviter une lymphadenectomie inutile. Un système efficace et spécifique de marquage in vivo des cellules tumorales permettrait de déterminer les limites tumorales de lésion de maladie de Dubreuilh ; cette détermination pourra être plus précise si elle est basée sur la spectroscopy Raman. La radiothérapie interne ciblée (RTI), notamment l'alphathérapie, pourrait avoir une efficacité sur les micro-métastases ou les métastases en transit.
En combinant alpha et / ou bêta RTI et la radiosensibilisation par radiothérapie externe, une grande efficacité est attendue sur des métastases, notamment les métastases cérébrales. La radiothérapie interne avec des émetteurs beta livrés par application topique pourrait être intéressant comme traitement alternatif et palliatif des lésions cutanées métastatiques chez les personnes âgées. Avantageusement, l'utilisation d'un coposé de formule I selon l'invention (nanoplateforme theragnostique dendrimérique (NPD)) ayant des propriétés de ciblage très efficace, et une haute efficacité en terme de diagnostic et / ou de traitement, permet de répondre à plusieurs défis: i) grâce à un drainage lymphatique, de déterminer par SPECT ou TEP avec une valeur prédictive négative élevée, le statut tumoral des ganglions lymphatiques, en particulier du GS, ii) grâce à la spectroscopie Raman ou l'imagerie optique fluorescente de délimiter les marges tumorales; iii) l'injection IV de NPD fortement chargées en iode 131 et / ou d'astate 21 1 renforcera l'efficacité thérapeutique de la radiothérapie externe (RTE) grâce à l'effet radiosensibilisateur des NPD dues à leur forte densité électronique, iiii) incorporation sur la nanoplateforme d'iode 131 à forte activité spécifique dans un hydrogel, permettra de délivrer une beta thérapie par voie cutanée.
La preuve de concept a été réalisée sur un modèle de souris pré-clinique et peut également être réalisée sur des tumeurs métastatiques humaines sur le même principe.
Avantageusement, l'utilisation des composés et complexes décrits dans la présente, dans le mélanome peuvent avoir un impact sur :
i) la biopsie du ganglion sentinelle (GLS), en limitant le nombre et la morbidité associée au curage lymphatique régional;
ii) Un impact sur la détermination des marges d'exérèse de la mélanose de Dubreuilh iii) l'amélioration de l'efficacité thérapeutique et du pronostic du mélanome de haut grade : a)par l'amélioration du traitement des métastases cérébrales
b) par un impact sur les micro-métastases grâce à l'alpha RTI.
iv) de disposer d'un traitement de lésions cutanées métastatiques chez les personnes âgées grâce à la Beta-ITR incluse dans un gel formant un patch.
Compte-tenu de la composition des composés et complexes selon l'invention purement organique, laissant préjager d'une faibe toxicité, le transfert clinique à court terme semble réaliste. Les impacts décrits ci-dessus sur la prise en charge des mélanomes sont également applicables à de nombreux types de cancer. Cette utilisation préssente donc de nombreux avantages.
Un exemple de l'utilisation du système « clic-clac » selon l'invention est illustré aux Figures 14 et 15. On entend par « micro-métastases », le stade initial d'une métastase, où ne sont présentes que quelques cellules tumorales, ne se manifestant par aucun signe clinique, physique ou biologique systémique.
La détection de micro-métastases permet ainsi une détection à un stade précoce d'un processus métastatique.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent chelatant, et un ion métallique du gadolinium ou du manganèse, pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs par imagerie par résonnance magnétique rehaussée au manganèse.
Par « outil de détection de tumeurs », on entend en particulier un agent de contraste, c'est-à-dire un agent qui permet d'augmenter artificiellement le contraste entre les tissus ou des cellules de différentes natures, afin de visualiser une tumeur, qui est naturellement peu ou pas contrastée, et difficile à distinguer des tissus voisins.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent chélatant, et un radioélément émetteur de radiation gamma tel que gallium-67, technetium-99m, indium-1 1 1, iode-123, iode- 125, iode-131, ou holmium-166, pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs par scintigraphie gamma (GSc) ou par tomographie d'émission monophotonique (TEMP).
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent chélatant, et un radioélément émetteur de positon tel que scandium-44, cuivre-64, gallium-68, rubidium-82, zirconium-89,iode- 124 pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs par tomographie par émission de positons (TEP).
L'hypoxie est un état métabolique responsable, dans le cas de cellules tumorales, de résistance de certaines tumeurs à la chimiothérapie ou à la radiothérapie externe.
Le terme apoptose définit un état de mort cellulaire spécifique, dit « programmée ». Ce processus peut-être spontané et physiologique, mais également induit par les traitements comme la chimiothérapie ou la radiothérapie externe ou interne.
L'identification, la détection de ces états métaboliques est donc importante pour adapter des traitements, par exemple augmenter l'intensité d'un rayonnement en radiothérapie externe (RTE), avoir une efficacité anti-tumorale suffisante, le but étant de « sur-irradier » les cellules tumorales en hypoxie par rapport aux cellules tumorales en normoxie. La détection de apoptose des cellules tumorales après une première cure de chimiothérapique permet d'évaluer très rapidement si cette chimiothérapie est efficace. Dans le cas contraire, le type de chimiothérapie pourra être modifiée rapidement sans attendre plusieurs mois et de constater cliniquement et sur des critères d'imagerie morphologique l'absence d'efficacité.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent de reconnaissance d'une molécule spécifique, et ladite molécule spécifique, liée à un autre dendrimère, de formule (DDA), pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs et/ou de caractérisation du ganglion sentinelle.
Dans un mode de réalisation plus particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent de reconnaissance d'une molécule spécifique, et ladite molécule spécifique, liée à un autre dendrimère, de formule (DDA), dans lequel les groupements d'extrémité Ra sont tels que RI, R2, R3 et R4 sont de l'iode non radioactif et/ou RI 5 et RI 6 sont du fluor non radioactif, pour son utilisation en tant qu'outil de détection de tumeurs et/ou de caractérisation du ganglion sentinelle.
L'invention concerne également un complexe tel que décrit précédemment, pour son utilisation en tant que médicament radiothérapeutique dans le traitement de tumeurs, notamment sous la forme de micrométastases.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent chélatant, et un radioélément émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger, ou de particules alpha, tel que cuivre-67, yttrium-90, indium-1 1 1 , iode- 125, iode- 131 , holmium-166, lutétium-177, rhénium- 186, astate-21 1 , plomb-212,bismuth- 212,bismuth-213,actinium-225, pour son utilisation en tant que médicament radiothérapeutique dans le traitement de tumeurs, notamment sous la forme de micrométastases.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, l'invention concerne un complexe comprenant un composé de formule (I), dans laquelle T représente un agent chélatant, et un radioélément émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger, ou de particules alpha, tel que cuivre-67, yttrium-90, indium-1 1 1, iode- 125, iode- 131, holmium- 166, lutétium- 177, rhénium- 186, astate-21 1, plomb-212,bismuth- 212,bismuth-213,actinium-225, pour son utilisation en tant que médicament dans la curiethérapie ou la radiothérapie interne ou ciblée, ou vectorisée.
On entend par « curiethérapie » une thérapie obtenue par introduction de la source radioactive à l'intérieur ou au contact de la zone à traiter.
On entend par « radiothérapie interne ou ciblée » une thérapie dont la source radioactive non scellée, sous forme liquide ou de gélule, est injectable ou administrée par voie orale et va s'accumuler préférentiellement sur les tissus cibles à traiter, tumoraux ou non, comme dans des pathologies inflammatoires ou l'hyperthyroidie.
Ledit complexe permet d'améliorer la spécificité du traitement et de diminuer les effets secondaires, du fait que le complexe de l'invention est fixé majoritairement sur les cellules cibles tumorales, ou par des structures vasculaires présents dans les des tissus tumoraux ou des lésions prolifératives, et des micro-métastases.
Selon un mode de réalisation avantageux, la tumeur et/ou les cellules dans un état métabolique particulier appartiennent au groupe comprenant :
• les mélanomes, V étant notamment de formule V 1 :
Figure imgf000056_0001
• les chondrosarcomes, Y étant notamment de formule V2 ou V3 :
Figure imgf000056_0002
• les glioblastomes ou des tumeurs neuro-endocrines, V étant notamment la L- DOPA, ou l'un de ses dérivés,
• les glioblastomes ou les tumeurs mammaires, V étant un ligand de récepteur du récepteur tumor Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER2), en particulier un anticorps spécifique ; les tumeurs prostatiques, V étant un anticorps spécifique ciblant le récepteur PSMA :
• les tumeurs de cancer mammaires, V étant un aptamère ou un tripeptide ciblant la nucléoline, en particulier de formule V4 :
Figure imgf000057_0001
• les cellules en hypoxie, V étant un dérivé nidazole (misonidazole (MISO) ou métronidazole (METRO))
• les cellules en apoptose, V comportant des oxygènes réactifs, capables notamment de réagir avec la caspase.
Des exemples de composés comportant des oxygènes réactifs capables de réagir avec la caspase sont décrits par Soundararajan et al. Cancer Res. 2008, 68, 2358. [30]
PRODUITS DE COMBINAISON
La présente invention concerne également un produit contenant:
(i) un composé de formule I, II ou III, tel que décrit dans l'une quelconque des variantes ci-dessus, dans lequel T représente un agent de reconnaissance d'une molécule spécifique, et
(ii) un composé répondant à la formule IV
Τ' 1_<|— R
IV
ou un dendrimère, en particulier un dendrimère de formule DDA, comportant ladite molécule spécifique,
dans laquelle formule IV, T' comporte ladite molécule spécifique et R et Li sont tels que décrit dans l'une quelconque des variantes ci-dessus, comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps dans le diagnostic de cancers, notamment de micro-métastases.
Selon un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un produit contenant:
(i) un composé de formule I, II ou III, tel que décrit dans l'une quelconque des variantes ci-dessus, dans lequel T représente l'avidine, la streptadivine, la biotine, la cyclodextrine ou l'adamantane ; et
(ii) un composé répondant à la formule IV
r— L<I— R
IV
ou un dendrimère, en particulier un dendrimère de formule DDA, comportant ladite molécule spécifique T',
où T' représente :
la biotine, lorsque le groupe T du composé de formule I, II ou III est l'avidine ou la streptavidine, ou
l'avidine ou la streptavidine, lorsque le groupe T du composé de formule I, II ou III est la biotine,
l'adamantane, lorsque le groupe T du composé de formule I, II ou III est une cyclodextrine, ou
une cyclodextrine, lorsque le groupe T du composé de formule I, II ou III est l'adamantane,
Lx est une chaîne hét
Figure imgf000058_0001
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
Figure imgf000058_0002
dans lesquelles p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 8 ; de préférence 3 ou 7 ; R est une molécule labélisable telle que la L-Thyroxine ou le dinitrobenzoate :
Figure imgf000059_0001
comme produit de combinaison, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps dans le diagnostic de cancers, notamment de micro-métastases.
Les composés de Formule I, II, III, et IV décrits dans la présente peuvent être préparés en faisant appel à des transformations chimiques bien connues de l'homme du métier. En effet, les différents éléments constitutifs de ces composé (T, T', Li, D, R, L2 et V) sont liés entre eux part des fonctions chimiques dont la chimie de synthèse est bien connue : amide, éther, hétérocycles (triazole), thiourea (-NHC(=S)NH-).
Le principe général repose sur la réaction d'un premier constituant du composé (T par exemple) portant un groupement réactif, les éventuels autres groupes réactifs portés par le premier constituant étant éventuellement protégés par des groupements protecteurs ad hoc, avec un deuxième constituant (Li par exemple) portant un groupement réactif adéquat permettant la formation de la liaison chimique désirée (e.g., amide, éther, hétérocycles (triazole), thiourea (-NHC(=S)NH-)) par réaction avec le groupement réactif du premier constituant. Les éventuels autres groupes réactifs portés par le deuxième constituant peuvent également être éventuellement protégés par des groupements protecteurs ad hoc. A titre d'exemple, lorsque T représente un agent de reconnaissance tel que l'adamantane, T peut avoir la structure suivante :
Figure imgf000060_0001
qui peut être covalament lié à un espaceur Ll, ou une molécule ou un groupe radiolabélisable R, ou un dendrimère D, etc .. portant une fonction aminé pour former un coposé de formule I selon l'invention où T, tel que défini ci-dessus, est lié au reste de la molécule par une liaison amide. Par exemple, l'homme du métier pourra s'inspirer des méthodes synthétiques décrites dans WO 2008/04391 1. Par exemple, T tel que défini ci-
Figure imgf000060_0002
Les diverses transformations chimiques permettant la préparation de composés illustrés dans les exemples qui suivent apparaîtront à l'homme du métier à la lecture du texte de la demande, et à la lumière de l'ensemble des connaissances qui lui sont disponibles dans le domaine de la chimie organique en général, et plus particulièrement des transformations synthétiques, telles que répertoriées dans de nombreux ouvrages de référence, comme par exemple:
1. "Advanced Organic Chemistry - Reactions, mechanisms and structure", Jerry March, John Wiley & Sons, 5th édition, 2001 ;
2. "Comprehensive Organic Transformations, a guide to functional group préparations", Richard C. Larock, VCH publishers, 2nd édition, 1999 ;
3. « Protective Groups in Organic Synthesis » de T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Wiley- Interscience, New York, 4th édition, 2007
Les exemples donnés ci-après illustrent des modes de realization pour la préparation de composes selon l'invention. L'homme du métier saura sans difficulté adapter ces modes de réalisation à la préparation d'autres composés selon l'invention, à partir de l'enseignement de la présente, des ouvrages de chimie organique de synthèse cités ci- dessus, et ses connaissances générales dans le domaine. L'homme du métier saura également adapter les méthodes de synthèse décrites dans le document WO 2008/04391 1 pour préparer toutes la variantes des composés selon l'invention décrites dans la présente.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant un complexe tel que décrit précédemment, en tant que substance active, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
L'invention concerne également une composition de diagnostic comprenant un complexe tel que décrit précédemment, en tant que substance active, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Ledit véhicule pharmaceutiquement acceptable peut être choisi parmi des véhicules pharmaceutiquements acceptables connus de l'homme de métier pour les compositions pharmaceutiques ou de diagnostic, comprenant en particulier une espèce choisie parmi:
un ion métallique du gadolinium ou du manganèse, ou un radioélément émetteur de radiation gamma, ou émetteur de positon, et/ou émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger ou particules alpha tel que or-33, cuivre-61, 62cuivre, 64cuivre, 67cuivre, 67gallium, 68gallium, 89zirconium 90yttrium, 99mtechnetium, l l lindium, 123iode, 124iode, 125iode, 131iode, 166holmium, 1771utétium, 186rhenium, 21 1astate, 89actinium, 213bismuth, ou autre radioélément pouvant être détecté par un système d'imagerie ou de comptage de radioactivité ou ayant un effet radiotoxique.
Les compositions pharmaceutiques ou de diagnostic selon l'invention peuvent être formulées sous forme liquide, telle que des solutions injectables ou buvables, des suspensions injectables ou buvables, ou des solutions susceptibles d'être absorbées par inhalation. Elles peuvent être également sous forme solide, telle que des comprimés, des gélules, des pilules, des suppositoires ou des ovules, en particulier pour diagnostiquer, dans le cas des compositions de diagnostic, les anormalités digestives ou gynécologique.
Une composition pharmaceutique ou une composition de diagnostic selon la présente invention peut être administrée par voie intraveineuse, intradermique, intra- artérielle, intra-lymphatique ou voie orale. Lorsque dans la composition pharmaceutique ou de diagnostic, le complexe comprenant un composé de formule (I) comprend également un radioélément, ladite composition est radioactive.
Une composition pharmaceutique radioactive de la présente invention est susceptible d'être administrée à une ou plusieurs doses en fonction du mode d'administration de ladite composition, de la masse de tissu à traiter, telles que la masse tumorale, du volume de distribution et de la dosimétrie estimée préalablement.
Dans un mode de réalisation, une composition pharmaceutique radioactive de la présente invention est susceptible d'être administrée à une activité radioactive de 1 à 40 MBq/kg, particulièrement 1 à 20 MBq/kg, plus particulièrement 1 à 15 MBq/kg, notamment 1 à 10 MBq/kg de poids corporel en cas de curiethérapie ou par injection intratumorale.
Dans un mode de réalisation, une composition pharmaceutique radioactive de la présente invention est susceptible d'être administrée à une activité radioactive unitaire de 50 à 3200 MBq, particulièrement 50 à 1600 MBq, plus particulièrement 50 à 1200 MBq, notamment 50 à 800 MBq en cas de curiethérapie ou par injection intratumorale.
Dans un autre mode de réalisation, une composition pharmaceutique radioactive de la présente invention est susceptible d'être administrée à une activité radioactive de 1 à 50 MBq/kg, particulièrement 1 à 20 MBq/kg, plus particulièrement 1 à 15 MBq/kg, encore plus particulièrement 1 à 10 MBq/kg, notamment 1 à 5 MBq/kg de poids corporel en cas de radiothérapie ciblée ou par injection systémique.
Dans un autre mode de réalisation, une composition pharmaceutique radioactive de la présente invention est susceptible d'être administrée à une activité radioactive unitaire de 50 à 4000 MBq, particulièrement 50 à 1600 MBq, plus particulièrement 50 à 1200 MBq, encore plus particulièrement 50 à 800 MBq, notamment 50 à 400 MBq en cas de radiothérapie ciblée ou par injection systémique.
D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif.
Brève description des figures
La figure 1 représente la procédure de marquage au Tc99m.
La figure 2 représente le contrôle de pureté des produits radiomarqués par chromatographie sur papier. La figure 3 représente des images planaires réalisées avec le composé APAG9-1 immédiatement post-injection (A) et 2 heures post- injections (B).
La figure 4 représente des images planaires réalisées avec le composé APAG22-1 immédiatement post-injection (A) et 2 heures post- injections (B).
La figure 5 représente des images planaires réalisées avec le composé AP045 immédiatement post-injection (A) et 2 heures post- injections (B).
La figure 6 représente des images planaires réalisées avec le composé AP071 2 heures post- injections (A) et 4 heures post-injections (B).
La figure 7 représente des images planaires réalisées avec le composé AP070 1 heure post-injections (A) et 2 heures post-injections (B).
La figure 8 représente des images planaires réalisées avec le composé XI marqué au Tc99m acquises juste après injection intradermique (A) et SPECT acquise lh après injection (B) d'une souris injectée à l'extrémité des deux pattes inférieures de 10 microlitres-5 MBq.
La figure 9 représente un diagramme répertoriant le % de ratio de radioactivité par rapport à l'activité injectée par organes mesurée à 24 heures chez une souris injectée à l'extrémité des deux pattes inférieures avec un volume total de 10 microlitres et une activité de 2,8 MBq du soluté décrit à la Figure 8. L'activité persitante dans les pieds et l'ensemble des membres inférieurs témoigne d'un drainage complet du lit lymphatique et du site d'injection, et l'élimination urinaire du composé très importante, avec une activité hépatique très faible, secondaire à un drainage secondaire dans la circulation sanguine.
La figure 10 représente une image planaire réalisée avec le composé de génération 1 APAG4 marqué à l'indium 111 SPECT acquise 3h après injection intra-dermique à l'extrémité des deux pattes inférieures d'un souris de 10 MBq du soluté APAG4 marque à l'indium 111. Le drainage dans l'ensemble du réseau lymphatique jusqu'à l'étage lombo- aortique est bien visible.
La figure 11 représente une graphe illustrant le contrôle de pureté radiochimique du composé AP034-Tc99m.
La figure 12 représente une image planaire SPECT acquise 2h après injection intradermique à l'extrémité des deux pattes inférieures d'une souris de 10 microlitres-38 MBq du soluté AP034 marque au Tc99m. La figure 13 représente la mise en évidence dans le ganglio poplité prélevé 3 semaines après l'injection des cellules tumorales, de nombreux nodules tumoraux à l'intérieur du ganglion poplité ipsi-latéral (Exemple 10).
La figure 14 illustre un système clac selon l'invention, par exemple en uitilisant un agent de ciblage V conjugué à un dendrimère DDAiodé et/ou fluoré.
La figure 15 schématise un exemple d'utilisation d'un système « clic-clac » selon la présente invention (protocole en deux temps).
EXEMPLES
Exemple 1 : Synthèse du témoin (2, APAG0045)
Figure imgf000064_0001
Schéma 1: Schéma de synthèse du témoin 2 (APAG0045)
Réaction de couplage pour donner le composé 1
Figure imgf000064_0002
La synthèse du composé 1 a été réalisée selon la méthode décrite dans Org.Biomol.Chem., 5, 935-944, 2007.
A une suspension de DOTA (0,037 g, 0,06 mmol) et d'amine R (0,03 g, 0,06 mmol) dans du DMF (4 ml) ont été ajoutés du BOP (0,03 g, 0,07 mmol) et de la DIPEA (0,027 ml, 0,15 mmol). Le mélange a été agité à température ambiante pendant 48 h, puis le solvant a été évaporé sous vide. Le produit brut a été dilué avec de l'acétate d'éthyle, lavé avec de la saumure, séché sur MgS04 et évaporé sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie par exclusion de taille (CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé désiré 1 (83%) sous forme de poudre jaune.
lH NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 1.25-1.49 (m, 33H, 2CH3, 3 tBu), 1.70-2.70 (bs, 24H, CH2 DOTA), 2.8-3.55 (m, 20H, CH20, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2), 3.89 (m, 2H, CONHG¾CH2N(CH2CH3)2), 7.27 (m, 1H, NH), 7.87 (d, 1H, J=9.2Hz, Ar-3-H), 8.07 (dd, 1H, J=2.3Hz, J=9.2Hz, Ar-4-H), 8.57 (s, 1H, Ar-6-H), 8.58 (m, 2H, NH), 9.43 (s, 1H, Ar- 8-H), 10.47 (s, 1H, NH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 172.2, 171.8, 164.9, 156.1, 145.7, 144.7, 143.3, 139.7, 136.1, 129.6, 125.5, 120.5, 1 12.6, 81.8, 73.8, 70.6, 70.4, 70.1, 69.3, 56.1, 55.7, 55.5, 51.2, 47.6, 39.8, 39.3, 28.0, 9.7.
Figure imgf000065_0001
De l'acide trifluoroacétique TFA (1 ml) a été ajouté à une suspension de 1 (0,04 g, 0,04 mmol) dans CH2C12 (9 ml) à 0°C. La solution a été ramenée à la température ambiante et agitée pendant 3h. Ensuite, le solvant a été évaporé sous vide et le résidu obtenu a été purifié par chromatographie par exclusion de taille (Sephadex LH20, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé souhaité 2 (50%) sous forme de poudre jaune. Une nouvelle solution de déprotection des esters du composé 1 est d'utiliser TMSBr en excès (30eq. pour 1 éq. Du composé 1) dans CH2C12 pour obtenir le composé souhaité 2.
lH NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 1.34-1.60 (m, 6H, 2CH3), 2.00-3.80 (m, 44H, CH2 DOTA, CH20, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2), 7.95 (d, 1H, J=9.2Hz, Ar-3-H), 8.15 (dd, 1H, J=2.3Hz, J=9.2Hz, Ar-4-H), 8.44 (s, 1H, Ar-6-H), 9.45 (s, 1H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 167.1, 162.3, 161.9, 157.5, 145.2, 144.6, 142.5, 138.1, 131.4, 126.0, 1 19.7, 1 14.0, 71.4, 71.3, 71.2, 71.1, 70.5, 70.3, 55.8, 52.5, 43.7, 40.7, 40.4, 9.7.
Exemple 2 : Synthèse d'un composé (8, AP071) comprenant le DOTA et deux agents ciblants un mélanome
Figure imgf000066_0001
Figure imgf000066_0002
• A une solution du dendron PAMAM dendron (5 g, 22 mmol) dans le dichlorométhane (90 mL) a été ajoutée une solution de triméthylsilanolate de sodium (1 M) dans le dichlorométhane (66 mL, 66 mmol). Le mélange a été agité 16 heures à température ambiante, après quoi un gel a été formé. Le solvant a été évaporé sous vide et le résidu précipité dans de l'acétate d'éthyle. Le solide a été précipité pour donner quantitativement le composé 3, sous la forme d'un solide jaune.
1H NMR (300 MHz, D20) δ 3.41 (s, 2H), 2.83 (t, J = 8.2 Hz, 4H), 2.39 (t, J = 8.2 Hz, 4H).
13C NMR (75 MHz, D20) δ 181.1, 78.0, 74.4, 49.8, 41.1, 34.9.
MS (MALDI-TOF) m/z calculée pour C9H1 lN a204 243.05, obtenue 242.288.
• A une suspension du composé 3 (0.2 g, 0.82 mmol) et d'amino-dPEG®3-C02?Bu (0.58 g, 1.8 mmol) dans de l'acétonitrile (9 mL) ont été ajoutés de l'EDCI (0.38 g, 1.97 mmol), du HOBt (0.05 g, 0.33 mmol) et de la DIPEA (0.31 mL, 1.8 mmol). Le mélange obtenu a été agité à température ambiante pendant 16 heures puis le solvant a été évaporé sous vide. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (CH2C12/MeOH 90/10) pour donner le composé 4 (84%) sous la forme d'une huile jaune.
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 3.70 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 3.66-3.60 (m, 24H), 3.54 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 3.41 (m, 6H), 2.83 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.49 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.36 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 2.23 (t, J= 2.3 Hz, 1H), 1.44 (s, 18H).
13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 171.9, 170.7, 80.3, 73.7, 70.5, 70.45, 70.42, 70.4, 70.2, 70.1, 69.8, 49.4, 41.4, 39.0, 36.2, 33.7, 28.0. MS (MALDI-TOF) m/z calculée pour C39H71N3014 805.49, obtenu [M+H]+ = 806.551.
• Une solution d'acide trifluoroacétique TFA dans CH2C12 (1/4) a été ajoutée goutte-à-goutte à une suspension du composé 4 (0.04 g, 0.05mmol) dans CH2C12 (5mL) à 0°C. La solution obtenue a été agitée 4 heures à température ambiante jusqu'à déprotection totale des esters. Le solvant a été évaporé sous pression réduite et l'excès de TFA a été éliminé par lavage du résidu à l'éther et co-évaporation (3 fois). Puis, le résidu a été dissout dans du DMF (4 mL) en présence de R (0.06 g, 0.12 mmol), BOP (0.07 g, 0.13 mmol) et de DIPEA (0.06 mL, 0.30 mmol). L'amine « R » a été préparée selon la méthode de J. Molieras et al., Nanoscale, 2013, 5, 1603- 1615, Development of gadolinium based nanoparticles having an affmity towards melanin. Le mélange obtenu a été agité à température ambiante pendant 48 heures puis le solvant évaporé sous vide. Le résidu a été purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé 5 (87%) sous la forme d'une huile brune. !H NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 1.1 (dd, 12H, J = 7 Hz, 4 CH3), 2.23 (s, 1H, H alcyne), 2.37 (dd, J = 6.15 and 6.36 Hz, 4H, 2 CH2CONH), 2.53 (dd, J = 5.7 Hz, 4H, 2 CH2CONH PAMAM), 2.64-2.84 (m, 24H, CONHG¾CH20, G¾NHCONH, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2), 3.39-89 (m, 58H, CONHG¾CH2N(CH2CH3)2), CH20, CH2N et NCH2 PAMAM), 6.23 (m, 2H, NH), 7.29 (m, 2H, NH), 7.53 (m, 2H, NH), 7.96 (d, 2H, J=9.2Hz, Ar-3-H), 8.05 (s, 2H, NH), 8.25 (m, 2H, Ar-4-H), 8.40(m, 2H, NH), 9.32 (s, 2H, Ar-6-H), 9.50 (s, 2H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 172.6, 172.4, 164.1, 155.5, 145.1, 143.9, 143.8, 141.0, 136.5, 130.1, 124.5, 113.1, 77.7, 73.8, 70.8, 70.5, 70.4, 70.3, 70.2, 70.1, 70.0, 69.8, 67.1, 51.6, 49.4, 47.3, 41.5, 39.6, 39.5, 39.1, 36.9, 36.8, 33.9, 27.9, 1 1.2.
A une suspension de DOTA (0.1 g, 0.17 mmol) et d'amino-dPEG®8-N3 (0.07 g, 0.19 mmol) dans du DMF (4 mL) ont été ajoutés du BOP (0.1 g, 0.23 mmol) et de la DIPEA (0.12 mL, 0.68 mmol). Le mélange obtenu a été agité à température ambiante pendant 96 heures puis le solvant a été évaporé sous vide. Le résidu a été dissout dans CH2C12, lavé avec de la saumure, séché sur MgS04 et évaporé sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (CH2C12/MeOH 100/0 à 95/5) pour donner le composé 6 (82%) sous la forme d'une huile incolore.
lU NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 1.47 (s, 27H, 3 tBu), 1.90-3.2 (bs, 24H, H DOTA), 3.38 (dd, J = 5.7 Hz, 2H, CH2N3), 3.53 (m, 2H, CONHG¾CH20), 3.57-3.71 (m, 28H, CH20), 7.27 (m, 1H, NH); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 172.5, 171.6, 81.8, 70.6, 70.5, 70.4, 70.2, 69.9, 69.4, 56.0, 55.6, 50.7, 39.1, 28.1.
Figure imgf000068_0001
• Un mélange du précurseur azide 6 (0.033 g, 0.035 mmol) et du dendron PAMAM propargylique 5 (0.05 g, 0.032 mol) dans un mélange THF/H20 (4ml (1/1)) en présence de 5% mol de CuS04.5H20 et de 10% mol d'ascorbate de sodium a été agité à température ambiante pendant 16 h. Après évaporation des solvants sous vide, le résidu a été dissout dans de l'eau (30mL), une spatule de ChelexlOO (Bio-Rad) a été ajoutée à la solution, et le mélange a été agité une heure à température ambiante. La résine a ensuite été filtrée et lavée à l'eau (2x20 mL). Le filtrat a été concentré sous pression réduite et le résidu obtenu purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé 7 (46%).
lU NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 1.0-1.54 (m, 39H, CH3, tBu), 2.3-3.85 (m, 152H, CH2CONH, CH2CONH PAMAM, CONHG¾CH20, G¾NHCONH, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2, CONHG¾CH2N(CH2CH3)2), CH20, CH2N et NCH2 PAMAM, CH2 DOTA), 4.5 (m, 2H, CH2 next to triazole ring), 6.76 (m, 2H, NH), 7.14 (m, 2H, NH), 7.45-8.56 (m, 1 1H, NH, Ar-3-H, Ar-4-H, , H triazole ring), 9.32-9.45 (m, 5H, NH, Ar-6-H and Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 172.9, 172.6, 164.2, 159.9, 155.7, 145.1, 143.9, 143.6, 140.7, 136.4, 130.0, 124.6, 124.4, 112.9, 81.9, 73.6, 70.5, 70.2, 70.0, 69.6, 67.1, 58.1, 51.4, 50.5, 50.0, 49.3, 47.1, 41.2, 39.6, 39.4, 39.0, 37.2, 36.5, 33.6, 29.6, 27.9, 10.8.
TMSBr (0.047 mL, 0.35 mmol) a été ajouté à une suspension de 7 (0.03 g,
0.02mmol) dans un mélange CH3CN/CH2C12 (5 mL, 1/1). Après 4 h d'agitation, les silylesters ont été hydrolysés par ajout de MeOH (5 mL), le mélange étant agité 2 heures à TA. Le solvant a été évaporé sous pression réduite, le résidu obtenu purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, MeOH) pour donner le composé 8 (50%) sous la forme d'une poudre jaune.
lH NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 1.34- 1.54 (m, 12H, CH3), 2.3-3.94 (m, 152H, CH2CONH, CH2CONH PAMAM, CONHG¾CH20, G¾NHCONH, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2, CONHCH2CH2N(CH2CH3)2), CH20, CH2N et NCH2 PAMAM, CH2 DOTA), 4.65 (m, 2H, CH2 next to triazole ring), 7.95 (m, 3H, NH, Ar-3-H, , , H triazole ring), 8.04 (m, 2H, Ar-4-H), 8.38 (m, 2H, Ar-6-H ), 9.42 (m, 2H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 173.1, 172.7, 165.6, 155.9, 144.6, 143.8, 143.2, 141.0, 136.6, 129.9, 124.5, 1 12.5, 70.1, 69.8, 69.7, 69.2, 69.0, 66.8, 66.2, 51.1, 50.7, 50.0, 49.2, 39.3, 39.0, 36.2, 34.3, 33.0, 7.7.
Exemple 2 : Synthèse d'un composé (15, AP070) comprenant le DOTA et quatre agents ciblants un mélanome
Figure imgf000069_0001
Figure imgf000069_0002
Figure imgf000070_0001
A une solution de 3 (5.35g, 23.5 mmol) dans MeOH (30 mL) a été ajoutée goutte- à-goutte une solution d'EDA (76 mL, 113. 1 mmol) dans MeOH (120 mL), en une heure, à 0°C. Le mélange réactionnel a ensuite été agité 144 heures à température ambiante, puis les solvants ont été évaporés sous pression réduite. L'excès d'EDA a été éliminé par concentration du résidu dissout dans un mélange toluène/ MeOH (9/1). Le composé 9 a été obtenu quantitativement sous la forme d'une huile jaune par distillation azéotropique du toluène en présence de MeOH.
lH NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 2.37 (m, 4H, G¾NH2), 2.64 (dd, 1H, J = 2.2 Hz, J = 2.4 Hz, H alcyne), 2.69-2.75 (m, 4H, 2 G¾CONH), 2.81-2.85 (m, 4H, 2 CONHG¾), 3.23-3.35 (m, 4H, NCH2), 3.48 (d, 2H, J = 2.4 Hz, CH2 alcyne); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 173.2, 77.6, 73.8, 57.8, 49.3, 41.7, 40.9, 40.8, 33.6, 33.5.
• Une solution de 9 (5.35g, 23.5 mmol) dans MeOH (22 mL) a été ajoutée goutte-à-goutte sous agitation à une solution of méthylacrylate (13 mL, 141.4 mmol) dans MeOH (90 mL), en une heure, à 0°C. Le mélange réactionnel a alors été agité 1 1 jours à température ambiante, et les composés volatiles ont été évaporés sous pression réduite. Le résidu obtenu purifié par chromatographie d'exclusion stérique (SX-8, BioRad, THF 100%) puis par chromatographie flash (Si02, CH2C12/MeOH 95/5 à 80/20) pour donner le composé 10 (40%) sous la forme d'une huile jaune.
lH NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 2.19 (dd, 1H, J= 2.2 Hz, J= 2.4 Hz, H alcyne),2.36- 2.46 (m, 12H, 4 G¾CONH), 2.55 (dd, 4H, J = 5.9 Hz, J = 5.9 Hz, 2 NHCH2G¾N), 2.76 (dd, 8H, J = 6.8 Hz, J = 6.6 Hz , 4 NCH2), 2.85 (dd, 4H, J = 6.8 Hz, J = 6.6 Hz, 2 NCH2 next to CH2 alcyne), 3.29 (dd, 4H, J= 5.7 Hz, J= 1 1.6 Hz, 2 CONHG¾), 3.48 (d, 2H, J = 2.2 Hz, CH2 alcyne), 3.70 (s, 12H, OMe), 7.09 (m, 2H, NH). • A une solution du composé 10 (1 g, 1.6 mmol) in CH2C12 (1 1 mL) a été ajoutée une solution de triméthylsilanolate de sodium (1 M) dans CH2C12 (10 mL, 9.6 mmol). Le mélange a été agité 16 heures à température ambiante, après quoi un précipité a été formé. Le mélange a été filtré, lavé avec CH2C12 et concentré sous vide. Le composé 11 a été obtenu quantitativment sous la forme d'un solide jaune.
lU NMR (300 MHz, D20) δ (ppm) 2.12-2.36 (m, 17H, H alcyne, 4 G¾CONH, 2 NHCH2G¾N), 2.53-2.75 (m, 12H, 4 NCH2, 2 NCH2 next to CH2 alcyne), 3.20-3.30 (m, 4H, 2 CONHG¾), 3.48 (m, 2H, CH2 alcyne); 13C NMR (75 MHz, D20) δ (ppm) 181.2, 174.6, 77.7, 51.7, 51.0, 49.5, 48.9, 41.3, 36.6, 34.1 , 33.2.
• A une suspension de 11 (0.1 g, 0.15 mmol) et d'amino-CH2CH2-POE4-C02tBu (0.21 g, 0.67 mmol) dans du DMF (6 mL) ont été ajoutés du BOP (0.3 g, 0.73 mmol) et de la DIPEA (0.26 mL, 1.52 mmol). Le mélange réactionnel a été agité 96 heures à température ambiante, et le solvant évaporé sous pression réduite. Le résidu a été dissout dans CH2C12, lavé avec de la saumure, séché sur MgS04 et concentré sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé 12 (88%) sous la forme d'une huile jaune.
lU NMR (300 MHz, CDC13) δ (ppm) 1.45 (s, 36H, 4 tBu), 2.24 (bs, , 1H, H alcyne), 2.30- 3.00 (m, 24H, 4 CH2COOtBu, 6 CH2CONH PAMAM, 2 CONHG¾CH2NHCO), 3.10- 3.71 (m, 88H, CH2N et NCH2 PAMAM, CH20, 4 CONHG¾CH20), 3.79 (m, 2H, CH2 alcyne), 5.30 (m, 2H, NH), 7.20 (m, 4H, NH); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 173.2, 170.9, 170.7, 80.3, 73.9, 70.4, 70.3, 70.2, 70.0, 69.9, 69.2, 52.7, 50.5, 49.0, 39.9, 39.1 , 36.0, 33.1 , 27.9.
Figure imgf000071_0001
Une solution d'acide trifluoroacétique TFA dans CH2C12 (5mL, 1/4) a été ajoutée goutte- à-goutte à une suspension du composé 12 (0.05 g, 0.03 mmol) dans CH2C12 (5mL) à 0°C. La solution obtenue a été agitée 4 heures à température ambiante puis les composés volatiles évaporés sous pression réduite a été évaporé sous pression réduite. L'excès de TFA a été éliminé par lavage du résidu à l'éther et co-évaporation (3 fois). Puis, le résidu a été dissout dans du DMF (4 mL) en présence de R (0.06 g, 0.14 mmol), BOP (0.07 g, 0.15 mmol) et de DIPEA (0.06 mL, 0.32 mmol). Le mélange obtenu a été agité à température ambiante pendant 96 heures puis le solvant évaporé sous vide. Le résidu a été purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé 13 (74%) sous la forme d'une huile brune. lH NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 1.3 (dd, 12H, J = 7 Hz, CH3), 2.41-2.64 (m, 20H, G¾CONHCH2CH20, CONH G¾CH2N, CH2NHCONH), 2.71 (s, 1H, H alcyne), 2.84 (m, 12H, CH2CONH PAMAM),) 3.13-3.81 (m, 162H, CH2 alcyne, CONHG¾CH20, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2, CH20, CH2N et NCH2 PAMAM), 7.90 (m, 4H, Ar-3-H), 8.06 (d, 4H, J = 8.97 Hz , Ar-4-H), 8.35 (s, 4H, Ar-6-H), 9.38 (s, 4H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 177.4, 176.9, 176.6, 168.9, 159.8, 148.4, 147.6, 147.1, 145.1, 140.5, 133.8, 128.4, 1 16.5, 81.5, 77.8, 74.0, 73.9, 73.8, 73.7, 73.1, 70.8, 56.0, 55.0, 53.6, 53.2, 44.8, 43.3, 42.9, 41.1, 40.2, 39.2, 37.5, 37.0, 33.2, 31.0, 30.8, 12.8.
Figure imgf000072_0001
• Un mélange du précurseur azide 6 (0.016 g, 0.016 mmol) et du dendron PAMAM propargylique 13 (0.05 g, 0.015 mol) dans un mélange THF/H20 (4ml (1/1)) en présence de 5% mol de CuS04.5H20 et de 10% mol d'ascorbate de sodium a été agité à température ambiante pendant 16 h. Après évaporation des solvants sous vide, le résidu a été dissout dans de l'eau (30mL), une spatule de ChelexlOO (Bio-Rad) a été ajoutée à la solution, et le mélange a été agité une heure à température ambiante. La résine a ensuite été filtrée et lavée à l'eau (2x20 mL). Le filtrat a été concentré sous pression réduite et le résidu obtenu purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, MeOH) pour donner le composé 14 (40%).
lU NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 1.01- 1.55 (m, 39H, CH3, tBu), 2.4-3.85 (m, 264H, CH2CONH, CH2CONH PAMAM, CONHG¾CH20, G¾NHCONH, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2, CONHCH2CH2N(CH2CH3)2), CH20, CH2N et NCH2 PAMAM, CH2 DOTA), 4.55 (m, 2H, CH2 next to triazole ring), 7.92 (m, 5H, Ar-3-H, H triazole ring), 8.07 (m, 4H,Ar-4-H), 8.37 (m, 4H, Ar-6-H), 9.40 (m, 4H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 173.4, 173.3, 173.2, 173.0, 172.6, 165.1, 161.8, 161.3, 155.9, 144.5, 143.7, 143.2, 141.1, 136.5, 129.9, 124.5, 118.7, 1 14.9, 112.5, 81.3, 77.3, 73.8, 72.2, 70.1, 70.0, 69.9, 69.8, 69.7, 69.2, 69.1, 67.9, 66.8, 62.4, 55.8, 55.3, 51.0, 49.7, 49.1, 40.9, 39.5, 39.3, 39.0, 38.9, 36.5, 34.9, 34.6, 33.8, 33.0, 31.7, 27.1, 8.9.
• TMSBr (0.03 mL, 0.21 mmol) a été ajouté à une suspension de 14 (0.03 g, 0.02mmol) dans CH2C12 (5 mL). Après 3 h d'agitation, les silylesters ont été hydrolysés par ajout de MeOH (3 mL), le mélange étant agité 2 heures à TA. Le solvant a été évaporé sous pression réduite, le résidu obtenu purifié par chromatographie d'exclusion stérique (Sephadex, LH20, GE Healthcare, CH2C12/MeOH 50/50) pour donner le composé 15 (50%) sous la forme d'une poudre jaune.
lU NMR (300 MHz, MeOD) δ (ppm) 1.34- 1.46 (m, 24H, CH3), 2.5-3.95 (m, 264H, CH2CONH, CH2CONH PAMAM, CONHG¾CH20, G¾NHCONH, CONHCH2CH2N(G¾CH3)2, CONHG¾CH2N(CH2CH3)2), CH20, CH2N et NCH2 PAMAM, CH2 DOTA), 4.55 (m, 2H, CH2 next to triazole ring), 7.93 (m, 5H, Ar-3-H, H triazole ring), 8.08 (m, 4H,Ar-4-H), 8.39 (m, 4H, Ar-6-H), 9.43 (m, 4H, Ar-8-H); 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ (ppm) 172.3, 171.1, 165.6, 155.9, 144.6, 143.8, 143.7, 143.2, 141.0, 136.6, 129.9, 124.5, 1 12.5, 72.3, 70.9, 70.1, 69.7, 69.2, 69.0, 68.9, 66.8, 66.4, 66.2, 60.8, 51.0, 50.7, 50.2, 41.2, 39.4, 39.0, 36.2, 34.4, 34.3, 31.6, 29.3.
Exemple 3 : Synthèse du composé 40 (APAG22-1) comprenant un agent chélatant tripode et un agent ciblant un mélanome
Figure imgf000074_0001
S-CÛ.5ÛN I-
Figure imgf000074_0002
• Une solution d'acide 2,3-dihydroxybenzoïque (21) (9.50 g, 61.6 mmol) et de K2C03 (33.20 g, 240.07 mmol) dans de l'acétonitrile (140 mL) a été chauffée à 80°C pendant 1 h. Le mélange réactionnel a ensuite été refroidi à température ambiante et une solution de bromure de benzyle (29.5 mL, 246.8 mmol) dans l'acétonitrile (50 mL) a été ajouté goutte-à-goutte. Le mélange réactionnel obtenu a été agité 16h à 80°C et filtré. Le filtrat (contenant le composé 22) a été concentré sous pression réduite puis dilué dans EtOH (100 mL). Après avoir ajouté une solution de NaOH (7.50 g, 185.0 mmol) dans 20 mL d'eau, le mélange réactionnel a été porté au reflux pendant 4 heures puis concentré sous pression réduite. Le résidu a été versé dans 200 mL d'eau et de l'acide chlorhydrique a été ajouté jusqu'à obtention d'un pH acide. Le précipité formé a été filtré, lavé à l'eau puis à l'éther de pétrole, et séché sous vide. Le composé 23 a été obtenu sous la forme d'un solide blanc (94%) et utilisé sans autre purification. 1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 5.21 (s, 2H, CH2-Benzyl), 5.26 (s, 2Η, CH2- Benzyl), 7.20 (t, 1Η, 3J = 8.0 Hz, Ar-5-H), 7.25 (dd, 1H, J = 1.8 et 8.0 Hz, Ar-4-H), 7.32 à 7.50 (m, 10H, ArHBenzyl), 7.74 (dd, 1Η, J = 2.0 et 8.0 Hz, Ar-6-H), 10.95 (s, 1H, COOH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 165.58, 151.23, 147.02, 135.87, 134.51, 129.28, 128.81 (J= 2.7 Hz), 128.52, 127.74, 125.02, 124.26, 122.94, 1 18.93, 77.12, 71.49. MALDI: calculé pour C21H18Na04: 357.12, obtenu: 357.1 1 ; calculé pour C42H36Na08: 691.24, obtenu: 691.23
• A une solution de l'acide carboxylique 23 (5.0 g, 15.0 mmol) dans 100 mL de CH2C12 à 0°C, a été ajouté du DCC (3.70 g, 18.0 mmol, 1.2 eq.) et du phénol pentafluoride (3.30 g, 18.0 mmol, 1.2 eq.). Le mélange réactionnel a été agité 4h à température ambiante, concentré sous pression réduite pour réduire le volume de solvant, filtré sur Célite, puis concentré sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane / ethyl acétate (90/10)). Le composé 24 a été obtenu sous la forme d'huile jaunâtre qui cristallise sous vide. (72%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 5.18(s, 2H, CH2-Benzyl), 5.21(s, 2Η, CH2- Benzyl), 7.18 (t, 1Η, 3J = 8.0 Hz, Ar-5-H), 7.31 (dd, 1H, J = 1.8 et 8.0 Hz, Ar-4-H), 7.33 à 7.50 (m, 10H, ArHBenzyl), 7.66 (dd, 1Η, J = 1.9 et 8.0 Hz, Ar-6-H) ; 19F (81 MHz, CDC13): δ (ppm) -152.21 (d, 2F, Ar-2,6- ), -158.23 (t, 1F, Ar-3- ), -162.47 (t, 2F, Ar- 3,5-F) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 161.32, 151.03, 149.83, 136.92, 136.17, 128.63 (J= 6.6 Hz), 128.22, 128.05, 127.55, 124.17, 123.82, 122.91, 1 18.92, 75.83, 71.35. MALDI: calculé pour C27H17NaF504: 523.10, obtenu: 523.09.
• A une solution du dérivé triamine 25 (1.08 g, 3.26 mmol) et de N,N- diisopropyléthylamine (2.30 mL, 14.0 mmol, 4.3 eq.) dans du dichlorométhane fraîchement distillé (70 mL) conservé sous azote, a été ajouté goutte-à-goutte une solution du composé 24 (5.22 g, 10.44 mmol) dans du dichlorométhane fraîchement distillé (20 mL). Le mélange réactionnel a été agité une nuit à température ambiante. La phase organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium 1M (2 x 40 mL), une solution HC1 1M (2 x 40 mL), de la saumure (2 x 50 mL) et de l'eau (2 x 50 mL), puis séché sur MgS04, filté et concentré sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 100 à 99/1) pour donner le composé 26 sous la forme d'huile incolore qui cristallise sous vide. (71%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) -0.09 (s, 6H, Si(CH3)2CCH3)3, 0.77 (s, 9H, Si(CH3)2CCH3)3, 0.98 (m, 6Η, CH2CH2CH2NH), 1.1 1 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 3.04 (s, 2H, CH20SÏ), 3.18 (q, 6Η, J = 6.0 Hz, CH2CH2CH2NH), 5.05 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.12 (s, 6H, CH2-Benzyl), 7.10 à 7.15 (m, 6Η, Ar-4-H et Ar-5-H), 7.25 à 7.47 (m, 30Η, ArHBenzyl), 7.73 (dd, 3Η, J = 3.0 et 6.6 Hz, Ar-6-H), 7.18 (t, 3Η, J = 5.3 Hz, CH2CH2CH2NH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 164.96, 151.72, 146.82, 136.23 (J= 6.6 Hz), 128.61, 128.18, 127.58, 127.47, 124.33, 123.21, 1 16.82, 76.08, 71.07, 65.92, 41.25, 39.03, 30.91, 25.80, 22.91, 17.02, -5.83. MALDI: calculé pour C80H89NaN3O10Si: 1302.63, obtenu: 1302.62.
• A une solution du composé 26 (2.3 g, 1.80 mmol) dans 40 mL de THF distillé, à 0°C, a lentement été ajouté 5.4 mL (5.4 mmol, 3 eq.) d'une solution de fluorure de tétra-n- butylammonium 1.0 M in THF. Après 3 heures de reflux, le mélange réactionnel a été concentré sous pression réduite. 50 mL de dichlorométhane ont ensuite été ajoutés, la phase organique a été lavée avec de la saumure puis de l'eau, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. L'huile obtenue a été purifiée par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 98/2 à 97/3) pour donner le composé 27 sous la forme d'huile incolore qui cristallise sous vide (92%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 0.98 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.15 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 3.06 (s, 2H, CH20H), 3.18 (q, 6H, J = 6.0 Hz, CH2CH2CH2NH), 5.04 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.12 (s, 6Η, CH2-Benzyl), 7.05 à 7.12 (m, 6Η, Ar-4-H et Ar-5- H), 7.27 à 7.48 (m, 30Η, ArHBenzyl), 7.73 (dd, 3Η, J = 2.8 et 6.3 Hz, Ar-6-H), 7.18 (t, 3Η, J = 5.3 Hz, CH2CH2CH2NH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 165.08, 151.81, 146.80, 136.21, 128.68, 128.19, 127.61, 127.33, 124.35, 123.12, 1 16.79, 76.24, 71.12, 41.30, 39.02, 30.78, 22.88. MALDI: calculé pour C74H75NaN3O10: 1 188.55, obtenu: 1 188.51.
• A une solution de diméthyle sulfoxide anhydride (0.23 mL, 3.26 mmol) dans 2 mL de dichlorométhane sec à -60°C, a été ajouté lentement 1.65 mL (3.26 mmol) d'une solution de chlorure d'oxalyle 2M dans le dichlorométhane. Le mélange a ensuite été agité pendant 15 minutes à la même température, puis une solution du composé 27 (1.9 g, 1.63 mmol) dans du dichlorométhane sec (10 mL) a été ajouté en dix minutes. La solution obtenue a été agitée pendant une heure supplémentaire et la température du mélange réactionnel a été remontée à -30°C. De la triéthylamine (2.3 mL, 16.3 mmol, 10 equiv.) a été ajoutée et le mélange réactionnel ramené à température ambiante. De l'eau (50 mL) et du dichlorométhane (50 mL) ont été ajoutés et la phase organique a été lavée avec de la saumure, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. L'aldéhyde ainsi obtenu a été utilisé dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. De l'acide sulfamique (0.32 g, 3.27 mmol, 2 eq.) et du chlorite de sodium (0.33 g, 3.27 mmol, 2 eq.) ont été ajoutés sous agitation à une solution dudit aldéhyde (1.9 g, 1.63 mmol) dans un mélange THF/eau (1/1). Le mélange réactionnel a été agité une nuit à température ambiante. De l'eau (50 mL) et du dichlorométhane (50 mL) ont été ajoutés et la phase organique a été lavée avec de la saumure, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. L'huile obtenue a été purifiée par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 99/1 à 98/2) pour donner le composé 28 sous la forme d'huile incolore qui cristallise sous vide (83% sur les deux étapes).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 1.12 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.32 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 3.17 (q, 6H, J= 5.5 Hz, CH2CH2CH2NH), 5.01 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.1 1 (s, 6Η, CH2-Benzyl), 7.06 à 7.12 (m, 6Η, Ar-4-H et Ar-5-H), 7.27 à 7.43 (m, 30Η, ArHBenzyl), 7.73 (dd, 3Η, J = 3.3 et 6.1 Hz, Ar-6-H), 7.18 (t, 3H, J = 5.4 Hz, CH2CH2CH2NH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 165.02, 151.74, 146.61, 136.20 (J= 7.0 Hz), 128.71, 128.18, 127.59, 127.31, 124.12, 123.17, 1 16.79, 76.26, 71.11 , 39.97, 36.96, 31.25, 23.34. MALDI: calculé pour C74H73NaN301 1 : 1202.52, obtenu: 1202.50.
• A une solution de l'acide carboxylique 28 (0.35 g, 0.3 mmol) dans 10 mL de dichlorométhane distillé a été ajouté sous argon du BOP (0.18 g, 0.39 mmol, 1.3 eq.). Après 5 minutes ont été ajoutés de la N-Fmoc- l,3-propanediamine (0.12 g, 0.33 mmol, 1.1 eq.) et de la N,N-diisopropyléthylamine (0.17 mL, 1 mmol, 3 eq. par aminé). Le mélange réactionnel a été agité une nuit à température ambiante. 20 mL de dichlorométhane ont été ajoutés et la phase organique a été lavée avec de la saumure puis de l'eau, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 99/1 à 97/3) pour donner le composé 29 sous la forme d'huile incolore qui cristallise sous vide (90%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 1.18 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.31 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.52 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NHFmoc), 3.06 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NHFmoc), 3.17 (m, 8H, CH2CH2CH2NH et NHCH2CH2CH2NHFmoc), 4.15 (t, 1H, J = 6.8 Hz, COOCH2CH), 4.15 (d, 2H, J = 7.2 Hz, COOCH2CH), 5.03 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.09 (s, 6Η, CH2-Benzyl), 5.71 (t, 1Η, J = 6.0 Hz, NHCH2CH2CH2NHFmoc), 6.08 (t, 1H, J = 5.9 Hz, NHCH2CH2CH2NHFmoc),
7.06 à 7.10 (m, 6H, Ar-4-H et Ar-5-H), 7.21 à 7.48 (m, 34Η, ArHBenzyl), 7.57 (d, 2Η, J =
7.7 Hz, Ar-Fmoc-H), 7.65 à 7.77 (m, 5Η, Ar-Fmoc-H et Ar-6-H), 7.91 (t, 3Η, J = 5.4 Hz, CH2CH2CH2NH) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 165.31, 151.81, 146.72, 144.02, 141.35, 128.75, 128.70, 128.65, 128.60, 127.62, 127.60, 127.45, 127.04, 125.22, 124.31, 123.19, 1 19.82, 116.79, 76.38, 71.20, 66.37, 47.81, 47.23, 39.97, 32.08, 23.88. MALDI: calculé pour C92H91NaN5012: 1480.67, obtenu: 1480.63.
• A une solution du composé 29 (0.35 g, 0.24 mmol) dans 5 mL de dichlorométhane distillé à 0°C a été ajoutée lentement de la pipéridine (0.21 mL, 0.24 mmol, 1 eq.) sous argon. Le mélange réactionnel a été agité 2 heures à température ambiante. 20 mL de dichlorométhane ont ensuite été ajoutés, la phase organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium 1M puis de la saumure, séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 98/2 à 90/10) pour donner le composé 30 sous la forme d'huile incolore qui cristallise sous vide (90%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 1.15 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.41 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 1.95 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NH2), 2.95 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NH2), 3.12 (m, 6H, CH2CH2CH2NH), 3.36 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NH2), 5.04 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.1 1 (s, 6Η, CH2-Benzyl), 7.06 à 7.10 (m, 6Η, Ar-4-H et Ar-5-H), 7.21 à 7.45 (m, 30Η, ArHBenzyl), 7.62 (m, 3Η, Ar-6-H), 8.1 1 (t, 3Η, J = 5.4 Hz, CH2CH2CH2NH), 8.36 à 8.51 (m, 3Η, NHCH2CH2CH2NH2 et NHCH2CH2CH2NH2) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 165.23, 151.62, 146.74, 136.22, 128.81, 128.70, 128.65, 128.31, 127.67, 127.18, 124.46, 123.1 1, 1 17.02, 76.43, 71.17, 47.96, 40.22, 31.71, 23.96. MALDI: calculé pour C77H82N5O10: 1236.60, obtenu: 1236.60; C77H81NaN5O10: 1258.60, obtenu: 1258.58; calculé pour C77H81KN5O10: 1274.60, obtenu: 1274.56.
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32
Une solution de chlorure de para-toluènesulfonyle (22,3 g, 105 mmol) dans le THF (35 mL) a été ajoutée goutte à goutte à une solution de tétraéthylèneglycol méthyle éther (20,0 g, 96 mmol) et de NaOH (6,7 g, 166 mmol) dans un mélange THF/H20 (135 mL/45 ml) à 0°C. Après une heure d'agitation à 0°C, le mélange réactionnel a été laissé se réchauffer à température ambiante puis a été agité pendant 20 heures supplémentaires. La solution a ensuite été versée dans 200 ml de saumure et les matières volatiles ont été évaporés. Le mélange résultant a été extrait plusieurs fois avec du dichlorométhane et les phases organiques combinées ont été lavées avec de la saumure, séchées sur MgS04, filtrées et évaporées sous pression réduite. Le résidu huileux a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane / méthanol (98/2). Le composé 32 est obtenu sous forme d'une huile jaune pâle avec un rendement de 96%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2.39 (s, 3H, ArCH3), 3.31 (s, 3H, OCH3), 3.64 à 3.47 (m, 14H, OCH2CH20), 4.1 1 à 4.08 (m, 2H, ArS020CH2), 7.28 (d, J = 1.5 Hz, 2H, Ar-3,5-H), 7.73 (d, J = 1.5 Hz, 2H, Ar-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 21.78, 59.14, 68.80, 69.45, 70.66, 70.73, 70.86, 72.07, 128.10, 129.99, 133.19, 144.96.
Figure imgf000079_0001
33
A une solution d'hydroxy-dPEG™8-t-butyle ester (1,00 g, 2,0 mmol) dans 20 ml de dichlorométhane à 0°C ont été ajoutés successivement 840 mL (6,0 mmol, 3,0 éq.) de triéthylamine et 570 mg (3,0 mmol, 1,5 éq.) de chlorure de para-toluènesulfonyle. Après 40 h d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel a été dilué avec 70 ml de dichlorométhane. Les phases organiques ont été combinées, lavées avec de la saumure, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle / méthanol 95/5 à 90/10) pour donner 33 sous forme d'une huile incolore, avec un rendement de 70%.
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 1.44 (s, 9H), 2.45 (s, 3H), 2.50 (t, 2H, 3J= 6.6 Hz), 3.58-3.73 (m, 32H), 4.16 (t, 2H, 3J= 4.9 Hz), 7.34 (2H, AA' d'un système AA'BB'), 7.81 (2H, BB' d'un système AA'BB').
13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 21.14, 27.65, 35.84, 66.40, 68.15, 69.00, 70.08, 79.78, 127.46, 129.47, 132.74, 144.32, 170.20. MALDI: calculé pour C10H20LÏO5: 227.15, obtenu: 227.08; calculé pour C26H44LÏ012S: 587.27, obtenu: 587.13.
Figure imgf000079_0002
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Une solution de gallate de méthyle (20,0 g, 109 mmol), BnBr (14,2 mL, 1 19 mmol), KHC03 (32,4 g, 324 mmol) et Kl (0,1 g, 0,60 mmol) dans du DMF (100 ml), a été agitée pendant 4 jours à température ambiante. Le mélange réactionnel a ensuite été versé dans 1 L d'eau et de l'acide sulfurique est ajouté jusqu'à obtention d'un pH neutre. La phase aqueuse a ensuite été extraite 3 fois avec 150 ml de dichlorométhane. Les phases organiques combinées ont été réunies, lavées trois fois avec 50 mL de saumure, séchées sur MgS04, filtrées et les substances volatiles ont été évaporées. Le solvant a été éliminé par évaporation et le résidu a été purifié par chromatographie sur gel de silice en éluant avec un mélange CH2C12/MeOH (98/2) pour donner une huile jaune. Le résidu a été évaporé plusieurs fois avec du dichlorométhane. Le résidu obtenu a été filtré et lavé à l'éther de pétrole pour donner un solide blanc 34 avec un rendement de 70%. 1H NMR (300 MHz, CD30D) δ 3.83 (s, 3Η, COOCH3), 5.18 (s, 2Η, Ar20CH2), 7.13 (s, 2Η, Arl -2,6-H), 7.31 (m, 3Η, Ar2-3,4,5-H), 7.52 (d, J = 7.5 Hz, 2H, Ar2-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CD30D) S 51.2, 73.8, 108.8, 125.0, 127.8, 128.0, 128.5, 137.2, 138.2, 150.5, 167.1.
• Une solution du dérivé diphénol 34 (9,2 g, 33,4 mmol), du composé tosylé 32 (26,9 g, 74,3 mmol, 2,2 éq.), de K2C03 (28,0 g, 200 mmol, 6,0 éq.) et de Kl (0,6 g, 3,3 mmol, 0, 1 éq.) dans de l'acétone (600 ml) a été agitée pendant 30 heures à 65°C. Le mélange réactionnel a été filtré sur célite et le solvant a été évaporé. Le produit brut obtenu a été dissout dans du dichlorométhane (200 mL) et lavé deux fois avec une solution aqueuse saturée de NaHC03 et avec de la saumure. Après séchage sur MgS04, filtration et évaporation du solvant, le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2 à 95/5) pour donner 35 sous forme d'une huile incolore, avec un rendement de 75%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) S 3.35 (s, 6H, OCH2CH20CH3), 3.50 à 3.54 (m, 4Η, OCH2CH20), 3.60 à 3.67 (m, 16H, OCH2CH20), 3.69 à 3.74 (m, 4H, OCH2CH20), 3.85 à 3.88 (t, J = 4.8 Hz, 4H, OCH2CH20), 3.90 (s, 3H, COOCH3), 4.17 à 4.20 (t, J = 4.8 Hz, 4H, Arl OGffi), 5.12 (s, 2H, Ar20CH2), 7.28 (m, 5Η, Ar2-3,4,5-H et Arl -2,6-H), 7.48 (d, J = 7.7 Hz, 2H, Ar2-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) S 52.5, 59.3, 69.2, 70.0, 70.8, 70.9, 71.0, 71.2, 72.3, 74.8, 109.1 , 125.3, 127.8, 128.0, 128.2, 138.2, 142.2, 152.5, 166.9. MALDI: calculé pour C33H50NaO 13 : 677.33, obtenu: 677.03.
• A une solution du composé benzylé 35 (3,0 g, 4,65 mmol) dissout dans l'éthanol absolu (50 ml), a été ajouté du palladium sur charbon activé 10% (0,5 éq.). Le mélange a été agité sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante pendant 16 h. Le produit a été filtré sur célite et le solvant a été évaporé sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2 à 95/5) pour donner 36 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 91%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) S 3.37 (s, 6H, OCH2CH20CH3), 3.50 à 3.56 (m, 4Η, OCH2CH20), 3.60 à 3.70 (m, 16H, OCH2CH20), 3.72 à 3.76 (m, 4H, OCH2CH20), 3.85 à 3.88 (t, J = 4.8 Hz, 4H, OCH2CH20), 3.89 (s, 3H, COOCH3), 4.21 (t, J = 4.8 Hz, 4H, Arl OCH2), 7.26 (s, 2Η, Arl -2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) S 52.41 , 59.35, 69.18, 70.04, 70.82, 70.88, 71.02, 71.17, 72.30, 109.12, 125.08, 142.1 1 , 152.21 , 166.81. MALDI: calculé pour C26H44Na013 : 587.62, obtenu: 587.56.
• À une solution équimolaire du dérivé phénolique 36 (0,3 g, 0,52 mmol) et du dérivé tosylé 33 (0,32 g, 0,52 mmol) dans 10 ml d'acétone, a été ajouté du K2C03 (0,29 g, 2,12 mmol, 4 éq.). Le mélange réactionnel a été agité à 60°C pendant 24 h. Après filtration sur célite, le solvant a été évaporé et le résidu a été dilué dans du dichlorométhane (50 mL). La phase organique a été lavée deux fois avec une solution saturée de NaHC03, puis avec de la saumure, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par hromatographie sur gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2 à 93/7) pour donner 37 sous la forme d'une huile jaune pâle, avec un rendement de 82%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1.47 (s, 9H, CH2COOC(CH3)3), 2.51 (t, 2Η, J = 6.5 Hz, CH2COOC(CH3)3), 3.36 (s, 6H, OCH2CH20CH3), 3.50-3.54 (m, 4Η, OCH2CH20), 3.60 à 3.72 (m, 54H, OCH2CH20), 3.78 (t, J= 5.4 Hz, 2H, OCH2CH20), 3.84 (t, J= 4.8 Hz, 4H, OCH2CH20), 3.88 (s, 3H, COOCH3), 4.15-4.22 (t, J = 4.8 Hz, 6H, ArlOGffi), 7.31 (s, 2H, Arl-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 28.1 1, 39.78, 52.39, 59.37, 69.22, 70.03, 70.80, 70.88, 71.03, 71.24, 72.30, 109.19, 125.21, 142.14, 152.25, 166.89, 172.36. MALDI: calculé pour C49H88Na023: 1067.57, obtenu: 1067.45.
• A une solution du composé 37 (0,2 g, 0,19 mmol) dans 3 mL de dichlorométhane à 0°C a été ajouté goutte à goutte 1 ml (large excès) d'acide trifluoroacétique. Le mélange réactionnel a été agité lh à température ambiante sous argon, puis les composés volatils ont été évaporés à sec. Le produit brut sous forme acide a été obtenu sous forme d'une huile incolore et a été utilisé sans autre purification. A une solution de l'acide carboxylique ainsi obtenu (0,13 g, 0, 13 mmol, 1,1 éq) dans 5 mL de dichlorométhane distillé, est ajouté sous argon l'agent de couplage BOP (76 mg, 0,17 mmol, 1,3 éq. par acide). Après 5 min, ont été ajoutés l'aminé R (55 mg, 0, 12 mmol, 1,0 éq.) et de la N, N- diisopropyléthylamine (60 ul, 0,36 mmol, 3 éq. par aminé). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante. 50 ml de dichlorométhane ont été ajoutéa et la phase organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium IN (3 x 20 ml), de la saumure (2 x 20 ml) et d'eau (2 x 20 mL), séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne d'alumine neutre (dichlorométhane / méthanol 99/1 à 98/2) pour donner 38 sous la forme d'une huile jaune pâle, avec un rendement de 82%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) S 1.1 1 (t, 6H, J = 7.2 Hz, N(CH2CH3)2), 2.51 (t, 2Η, J = 5.6 Hz, CH2CONH), 2.65 (q, 4H, J = 7.2 Hz, N(CH2CH3)2), 2.73 (t, 2H, J = 5.6 Hz, CH2N(CH2CH3)2), 3.33 (s, 6H, OCH2CH20CH3), 3.48 à 3.80 (m, 68Η, CONHCH2 et OCH2CH20), 3.80 à 3.86 (t, J = 4.8 Hz, 6H, OCH2CH20), 3.89 (s, 3H, COOCH3), 4.17 à 4.22 (t, J= 4.8 Hz, 6H, ArlOGffi), 6.12 (t, 1H, J= 4.5 Hz, CH2NHCONH), 7.21 (t, 1H, J = 5.4 Hz, CH2CONH), 7.25 (s, 2H, Arl-2,6-H), 7.92 (d, 1H, J = 9.2 Hz, Ar2-5-H), 8.03 (d, 1H, J = 2.3 Hz, Ar2-8-H), 8.03 (dd, 1H, J = 2.3 et 9.2 Hz, Ar2-6-H), 8.35 (t, 1H, J = 5.3 Hz, CONHCH2), 9.19 (s, 1H, CH2NHCONH), 9.51 (s, 1H, Ar2-2-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 1 1.91, 36.95, 37.03, 39.62, 47.03, 51.71, 52.12, 58.93, 67.01, 68.84, 69.51, 69.60, 69.72, 70.02, 70.08, 70.21, 70.25, 70.45, 70.60, 71.82, 72.21, 109.12, 1 13.18, 124.31, 124.74, 129.97, 136.22, 141.19, 142.23, 143.88 (J = 3.9 Hz), 145.01, 152.04, 155.21, 163.86, 166.21, 172.82. MALDI: calculé pour C67H1 14N7026: 1432.77, obtenu: 1432.56; calculé pour C67H113NaN7026: 1454.77, obtenu: 1454.53; calculé pour C67H1 13KN7026: 1470.77, obtenu: 1470.53.
• A une solution du composé 38 (80 mg, 0,06 mmol) dans un mélange méthanol / eau 4/1 (5 mL) a été ajouté de l'hydroxyde de sodium (15 mg, 0,3 mmol, 5 éq.). Le mélange réactionnel a été agité 2h à 85°C puis a été évaporé à sec et 30 ml de dichlorométhane ont été ajoutés. La phase organique a été séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut (acide carboxylique) a été obtenu sous la forme d'une mousse orange et utilisé sans autre purification. A une solution de l'acide carboxylique ainsi obtenu (70 mg, 0,05 mmol, 1,1 éq) dans 5 mL de dichlorométhane distillé, est ajouté sous argon, l'agent de couplage BOP (28 mg, 0,06 mmol, 1,3 éq. par acide). Après 5 min, ont été ajoutés l'aminé 10 (56 mg, 0,045 mmol, 1,0 éq.) et de la N, N-diisopropyléthylamine (25 ul, 0, 135 mmol, 3 éq. par aminé). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante. 40 ml de dichlorométhane ont été ajouté et la phase organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium IN (3 x 20 ml), de la saumure (2 x 20 ml) et d'eau (2 x 20 mL), séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne d'alumine neutre (dichlorométhane / méthanol 95/5 à 90/10) pour donner 39 sous la forme d'une huile jaune pâle, avec un rendement de 59%.
1H NMR (300 MHz, CDC13) S 1.1 1 (t, 6H, J = 7.1 Hz, N(CH2CH3)2), 1.15 (m, 6Η, CCH2CH2CH2NH), 1.32 (m, 6H, CCH2CH2CH2NH), 1.62 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NHCO), 2.51 (t, 2H, J = 5.6 Hz, CH2CONH), 2.69 (q, 4H, J = 7.1 Hz, N(CH2CH3)2), 2.80 (t, 2H, J = 5.6 Hz, CH2N(CH2CH3)2), 3.17 (m, 6H, CCH2CH2CH2NH), 3.31 (s, 6H, OCH2CH20CH3), 3.34 (m, 2Η, NHCH2CH2CH2NH2), 3.40 à 3.72 (m, 70H, NHCH2CH2CH2NHCO, CONHCH2 et OCH2CH20), 3.73 à 3.78 (m, 6H, OCH2CH20), 4.08 à 4.17 (m, 6H, ArlOGffi), 5.02 (s, 6H, CH2-Benzyl), 5.09 (s, 6Η, CH2-Benzyl), 6.22 (m, 1Η, CH2NHCOC), 6.51 (t, 1Η, J = 4.5 Hz, CH2NHCONH), 7.06 (m, 6H, Artricatechol-4-H et Artricatechol-5-H), 7.12 (s, 2H, Arl -2,6-H), 7.21 à 7.42 (m, 31H, CH2CONH et ArHBenzyl), 7.58 (m, 3Η, Artricatechol-6-H), 7.71 (m, 1Η, Arl CONH), 7.92 (m, 4Η, CH2CH2CH2NH et Ar2-5-H),
8.09 (d, 1Η, J = 2.3 Hz, Ar2-8-H), 8.18 (dd, 1H, J = 2.3 et 9.2 Hz, Ar2-6-H), 8.40 (t, 1H, J = 5.3 Hz, CONHCH2), 9.27 (s, 1H, CH2NHCONH), 9.47 (s, 1H, Ar2-2-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 1 1.48, 24.07, 29.61 , 31.94, 36.95, 37.03, 39.71 , 40.17, 47.1 1 , 47.94, 51.78, 58.95, 67.04, 68.76, 69.52, 69.60, 69.72, 70.01 , 70.09, 70.21 , 70.25, 70.45, 70.60, 71.21 , 71.83, 72.24, 76.28, 106.91 , 1 13.07, 1 16.98, 123.01 , 124.32, 124.39, 127.16, 127.65, 128.30, 128.65, 128.70, 128.82, 129.61 , 130.02, 136.22, 140.86, 141.17, 143.91 (J = 4.1 Hz), 145.03, 146.73, 151.61 , 152.04, 155.33, 163.94, 165.06, 166.46, 167.22, 172.61 , 176.03. MALDI: calculé pour C143H191N12035: 2636.36, obtenu: 2636.29; calculé pour C 143H190NaN12O35: 2658.36, obtenu: 2658.27; calculé pour C 143H 191KN12035: 2674.36, obtenu: 2674.21.
• A une solution du composé benzyle 39 (70 mg, 0,02 mmol) dissout dans de l'éthanol absolu (5 ml), a été ajouté de l'hydroxyde de palladium à 20% sur charbon (44 mg, 0,32 mmol, 12 éq.). Le mélange a été agité sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante pendant 4 h. Le produit a été filtré sur célite et le solvant a été évaporé sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne LH (méthanol) pour donner 40 sous la forme d'une mousse orange, avec un rendement de 30%.
1H NMR (300 MHz, CD30D) S 1.20 à 1.35 (m, 12H, CCH2CH2CH2NH et N(CH2CH3)2), 1.55 (m, 6Η, CCH2CH2CH2NH), 1.71 (m, 6H, CCH2CH2CH2NH), 1.64 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NHCO), 2.48 (m, 2H, CH2CONH), 3.10 à 3.65 (m, 84H, N(CH2CH3)2, CH2N(CH2CH3)2, OCH2CH20CH3, NHCH2CH2CH2NH2, NHCH2CH2CH2NHCO, CONHCH2 et OCH2CH20), 3.73 à 3.78 (m, 6H, OCH2CH20),
4.10 à 4.20 (m, 6H, ArlOGffi), 6.61 (m, 3H, Artricatechol-4-H), 6.92 (m, 3H, Artricatechol-5-H), 7.15 (s, 2Η, Arl -2,6-H), 7.37 (m, 3Η, Artricatechol-6-H), 7.96 (m, 1Η, Ar2-5-H), 8.05 (m, 1Η, Ar2-8-H), 8.37 (m, 1Η, Ar2-6-H), 9.41 (s, 1Η, Ar2-2-H); 13C NMR (75 MHz, CD30D) S 7.92, 23.21 , 26.12, 28.82, 28.93, 31.02, 34.21 , 35.83, 35.91 , 36.52, 38.58, 39.01 , 57.19, 66.23, 68.04, 68.81 , 68.93, 69.43, 69.60, 69.71 , 69.82, 69.89, 71.09, 71.86, 105.88, 1 12.08, 1 14.89, 1 16.82, 1 17.81 , 124.04, 127.18, 127.54, 127.72, 127.85, 128.81 , 129.42, 136.18, 140.22, 140.72, 142.84, 143.23, 144.16, 145.51 , 147.41 , 151.94, 155.36, 165.02, 167.51 , 169.77, 172.26, 177.08. MALDI: calculé pour C 101H 154N12O35: 2095.06, obtenu: 2095.70. Exemple 4 : Synthèse de l'agent chélatant tricatechol greffé directement avec un agent de ciblag
Figure imgf000085_0001
Schéma 1: Synthèse du composé APAG 9-1. j) EDCI, HOBt, Et3N, CH2C12, (température ambiante), 16h, k) H2, Pd 20% sur carbone, EtOH, TA, 4h.
Figure imgf000085_0002
A une solution de dérivé d'acide carboxylique 8 (0,2 g, 0,17 mmol, 1,0 éq.) dans 5 mL de dichlorométhane distillé, a été ajouté sous argon, le réactif de couplage BOP (0,1 g, 0,22 mmol, 1,3 éq. par acide). Après 5 min, on a ajouté l'aminé R (86 mg, 0, 18 mmol, 1,1 éq.) et de la N,N-diisopropyléthylamine (90 μΐ, 0,56 mmol, 3 éq. par aminé). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante. 40 ml de dichlorométhane ont été ajoutés et la phase organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium IN (3 x 20 mL), de la saumure (2 x 20 ml) et de l'eau (2 x 20 mL), séchée sur MgS04, puis filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2-90/10) pour donner 11 sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 89%.
lH NMR (300 MHz, CDC13) S (ppm) 1.07- 1.14 (m, 12H, N(CH2CH3)2) and CCH2CH2CH2NH), 1.31 (m, 6H, CCH2CH2CH2NH), 2.64 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 2.73 (m, 2H, G¾N(CH2CH3)2), 3.17 (m, 6H, CCH2CH2CH2NH), 3.38-3.59 (m, 14H, CONHG¾ CH2N(CH2CH3)2, CONHG¾ and OCH2CH20), 5.05 (s, 6H, G¾-Benzyl), 5.12 (s, 6H, CH2-Benzyl), 6.10 (m, 1Η, NH), 6.47 (m, 1Η, NH), 7.09 (m, 6Η, Ar^^U-H and Artricatechoi_5 ¾ 7 2 l -7.45 (m, 31Η, CH2CONH and ArHBenzyi), 7.66 (m, 3Η, Ar icatec ol-6- H), 7.71 (d, 1Η, 9.2 Hz, Ar2-3-H), 7.97 (m, 4Η, CH2CH2CH2NH and Ar2-4-H), 8.12 (m, 1Η, CONH), 8.32 (m, 1Η, CONH), 9.07 (s, 1Η, Ar2-6-H), 9.47 (s, 1Η, Ar2-8-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ (ppm) 1 1.54, 23.58, 31.82, 39.23, 39.42, 40.03, 47.22, 47.68, 51.35, 69.55, 69.71 , 70.21 , 70.42, 71.04, 1 13.21 , 1 16.91 , 122.91 , 124.47, 124.37, 127.21 , 127.43, 128.1 1 , 128.42, 128.71 , 130.02, 136.33 (J = 3.8 Hz), 143.81 , 145.05, 146.71 , 151.82, 155.42, 164.02, 165.20, 176.02. MALDI: calculée pour CgeHioyNioOw: 1622.79, obtenue: 1622.60.
Figure imgf000086_0001
APAG 9-1
A une suspension du composé 11 (0,24 g, 0, 15 mmol, 1 éq.) dissous dans de l'éthanol (10 mL) a été ajouté du palladium sur charbon actif à 10% (48 mg, 0,45 mmol, 0,5 éq. par benzyle). Le mélange est agité sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante pendant 4 h. Ensuite, la solution a été filtrée à travers un bouchon de célite, concentré sous vide et purifiée par chromatographie par exclusion de taille (GE HealthCare, Sephadex LH20, MeOH) pour donner le composé souhaité A (46%) sous forme d'un solide jaune. lH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.34-1.65 (m, 18H, CCH2CH2CH2NH, CCH2CH2CH2NH and N(CH2CH3)2,), 3.35 to 3.59 (m, 24Η, N(CH2CH3)2, G¾N(CH2CH3)2, CCH2CH2G¾NH and OG¾G¾), 3.91 (m, 2H, CONHG¾CH2N), 6.69 (dd, 3H, J= 7.89 and 7.89 Hz, Ar^^U-H), 6.92 (m, 3H, Arrtca,edml-5-H), 7.19 (m, 3Η, Ar^^-Ô-H), 7.84 (m, 1Η, Ar2-7-H), 7.94 (m, 1Η, Ar2-8-H), 8.33 (m, 1Η, Ar2-5-H), 9.32 (s, 1Η, Ar2-3- H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 7.66, 23.54, 29.32, 31.67, 34.31, 39.09, 39.39, 51.22, 69.28, 69.56, 69.75, 69.91, 1 12.53, 1 15.30, 1 17.25, 1 18.18, 124.48, 128.19, 129.96, 136.58, 140.81, 143.05, 143.69, 144.47, 145.81, 148.77, 155.96, 165.62, 169.97, 177.76. MALDI: calculée pour C54H7oN10Oi4: 1082.51, obtenue: 1083.49 [M+H]+, 1099.49 [M+OH]+ .
Exemple 5 : Radiomarquage au technétium 99m des composés comprenant un agent ule suivante :
Figure imgf000087_0001
en particulier les composés APAG22-1 et APAG9-1.
Dans un flacon stérile, 2-4 mg du composé est dissous dans 1 mL d'eau pour préparation injectable. 300μί d'une solution de chlorure stanneux préparée extemporanément (1 mg.mL-1, 1.3μζ) sont ajouté dans le flacon. 500 MBq de pertechnétate de sodium (Na99mTc04) fraîchement éluée sont ajouté dans le flacon. Le mélange est incubé pendant 20 minutes à température ambiante. Ensuite, ΙΟΟμΜ d'ascorbate de sodium sont ajouté dans le flacon de réaction. Le pH de la solution radiomarquée est ensuite ajusté à pH=7 avec du NaOH (figure 1).
Le contrôle de pureté du produit radiomarqué se fait par chromatographie sur papier selon le schéma présenté à la figure 2.
Exemple 6 : Synthèse du composé APAG-53.
Méthodes générales Pour la synthèse des produits intermédiaires et finaux, les réactions ont été effectuées sous atmosphère d'argon. Les solvants suivants ont été distillés par les agents de séchage indiqués: CH2C12 (CaH2), du THF (Na), CH3CN (CaH2) ou séchés sur 4 des tamis moléculaires. Tous les réactifs disponibles dans le commerce ont été utilisés sans purification supplémentaire. La chromatographie éclair sur colonne a été réalisée avec un gel de silice (40-63 um) selon une technique standard. La chromatographie de perméation de gel a été réalisée avec Sephadex LH20 ® (GE Healthcare) selon une technique de gravitometry. Les spectres de résonance magnétique nucléaire (1H, 13C) ont été enregistrés sur spectrométre 300 MHz. Les déplacements chimiques pour les spectres 1H et 13C sont enregistrés en parties par million et sont calibrés pour les pics solvants résiduels (CHC13: 1H 7,26 ppm, 13C 77,16 ppm, MeOH:. 1H 3,31 ppm, 13C 49.00 ppm et après l'article de Gottlieb et al, JOC, 62, 7512-7515). Les multiplicités sont indiquées par s (singulet), BS (singulet large), d (doublet), t (triplet), q (quadruplet), quint (quintuplet) et m (multiplet). Les constantes de couplage, J, sont signalés en Hertz. La masse exacte a été mesurée sur spectrométre de masse couplant une source d'ionisation laser assistée par une matrice (MALDI-TOF MS).
Les composés ont été obtenus en suivant les méthodes de l'article G.Lamanna et al, Biomaterials, 2011, 32, 8562-8573.
\0^°^0H / ^O-^-('0~^OTS
11
tBu02C'^('0^^OH tBu02C'^-('0~^OTs
12
Schéma 1: Synthèse des intermédiaire tosylés 12 et 13. I) pTsCl, Et3N, CH2C12, 0°C à TA Composé 12_
Figure imgf000088_0001
12
Une solution de chlorure de para- toluène (22,3 g, 105 mmol) dans le THF (35 mL) a été ajoutée goutte à goutte à une solution d'éther de méthyle tétraéthylèneglycol (20,0 g, 96 mmol) et NaOH (6,7 g, 166 mmol) dans un mélange d'THF/H20 (135 mL/45 mL) à 0 ° C. Après 1 h d'agitation à 0 ° C, on a laissé la réaction se réchauffer à température ambiante et celle-ci a été agitée pendant 20 heures additionnelles. La solution a ensuite été versée dans 200 ml de saumure et les matières volatiles ont été évaporées. Le mélange obtenu a été extrait plusieurs fois avec du dichlorométhane et les couches organiques combinées ont été lavées avec de la saumure, séchées sur MgS04, filtrées et évaporées sous pression réduite. On a purifié l'huile et par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec du dichlorométhane / méthanol (98/2). Le composé 12 est obtenu sous forme d'une huile jaune pâle avec un rendement de 96%.
lH NMR (300 MHz, CDC13) δ 2.39 (s, 3H, ArCH3), 3.31 (s, 3H, OCH3), 3.64 to 3.47 (m, 14H, OCH2CH20), 4.1 1 to 4.08 (m, 2H, ArS02OCH2), 7.28 (d, J = 1.5 Hz, 2H, Ar-3,5-H), 7.73 (d, J = 1.5 Hz, 2H, Ar-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 21.78, 59.14, 68.80, 69.45, 70.66, 70.73, 70.86, 72.07, 128.10, 129.99, 133.19, 144.96.
Composé 13_
Figure imgf000089_0001
A une solution d'hydroxy-ester dPEG™ 8-tert-butyle (1,00 g, 2,0 mmol) dans 20 ml de CH2C12 à 0 ° C sont ajoutés successivement 840 mL (6,0 mmol, 3,0 éq.) de NEt3 et 570 mg (3,0 mmol, 1,5 éq.) de chlorure de paratoluènesulfonyle. Après 40 h d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué avec 70 ml de CH2C12. Les phases organiques sont réunies, lavées avec de la saumure, séchées sur MgS04, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (acétate d'éthyle / méthanol 95/5-90/10 d'éthyle) pour obtenir 13 sous forme d'huile incolore avec un rendement de 70%.
lH NMR (300 MHz, CDC13): δ (ppm) 1.44 (s, 9H), 2.45 (s, 3H), 2.50 (t, 2H, 3J= 6.6 Hz), 3.58-3.73 (m, 32H), 4.16 (t, 2H, 3J= 4.9 Hz), 7.34 (2H, AA' part of an AA'BB' System), 7.81 (2H, BB' part of an AA'BB' System). 13C NMR (75 MHz, CDC13): δ (ppm) 21.14, 27.65, 35.84, 66.40, 68.15, 69.00, 70.08, 79.78, 127.46, 129.47, 132.74, 144.32, 170.20. MALDI: calculée pour C10H20LÏO5: 227.15, obtenue: 227.08; calculée pour C26H44LÏ012S: 587.27, obtenue: 587.13. Amino-metronidazole
Figure imgf000090_0001
M = 171.16 g/mol
Schéma 2 : Voie synthétique pour l'obtention d'amino-métronidazole
Le dérivé métronidazole (amino-métronidazole) a été obtenu en suivant les méthodes de l'artic 225-239.
Figure imgf000090_0002
Schéma 3: Voie synthétique pour APAG-53
Composé 1Â
Figure imgf000091_0001
14
Une solution de gallate de méthyle (20,0 g, 109 mmol), BnBr (14,2 mL, 1 19 mmol), KHC03 (32,4 g, 324 mmol) et Kl (0, 1 g, 0,60 mmol) dans du DMF (100 ml), est agitée pendant 4 jours à température ambiante. Le mélange réactionnel est versé dans 1 L d'eau et de l'acide sulfurique est ajouté, jusqu'à obtention d'un pH neutre. La couche aqueuse est ensuite extraite 3 fois avec 150 ml de CH2C12. Les phases organiques combinées sont réunies, lavées trois fois avec 50 mL de saumure, séchées sur MgS04, filtrées et les volatiles sont évaporés. Le solvant est éliminé par évaporation et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec CH2C12/MeOH (98/2) pour donner une huile jaune. Le matériau brut est évaporé plusieurs fois avec du dichlorométhane. Le résidu obtenu est filtré et lavé avec de l'éther de pétrole pour fournir 14 sous forme de solide blanc avec 70% de rendement.
¾ NMR (300 MHz, CD3OD) δ 3.83 (s, 3H, COOCH), 5.18 (s, 2H, Ar2OCH2), 7.13 (s, 2Η, Arl-2,6-H), 7.31 (m, 3Η, Ar2-3,4,5-H), 7.52 (d, J= 7.5 Hz, 2H, Ar2-2,6-H); 13C NMR (75 MHz, CD3OD) S 51.2, 73.8, 108.8, 125.0, 127.8, 128.0, 128.5, 137.2, 138.2, 150.5, 167.1.
Composé 4J_
Figure imgf000091_0002
41
A une solution de dérivé de diphénol 14 (0,3 g, 1,08 mmol), le composé tosylé 13 (1,5 g, 2,4 mmol, 2,2 éq.), K2C03 (0,9 g, 6,6 mmol, 6,0 éq.) et Kl (17 mg, 0, 1 1 mmol, 0,1 éq.) dans l'acétone (30 mL) a été agité pendant une nuit à 65 0 C. Le mélange réactionnel a été filtré sur célite et le solvant a été évaporé. Le produit brut obtenu a été dilué dans du dichlorométhane (50 ml) et lavé deux fois avec une solution aqueuse saturée de NaHC03 et avec de la saumure. Après séchage sur MgS04, filtration et évaporation du solvant, le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2-97/3) pour donner 41 sous forme d'huile incolore avec un rendement de 63%.
lU NMR (300 MHz, CDC13) S 1.42 (s, 18H, CH2COOC(CH3)3), 2.51 (t, J = 6.5 Hz, 4H, CH2COOC(CH3)3), 3.55 to 3.72 (m, 60H, OCH2CH20), 3.86 (t, J = 5.0 Hz, 4H, OCH2CH20), 3.89 (s, 3H, COOCH3), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 4H, ArOCH2CH2), 5.08 (s, 2H, ArOCH2-Benzyl), 7.27 to 7.35 (m, 5Η, ArBenzyl-3,4,5-H and Ar-2,6-H), 7.49 (d, J= 7.7 Hz, 2H, ArBenzyl-2,6-H) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 28.0, 36.2, 52.1 , 66.8, 68.6, 69.5, 70.3, 70.45, 70.5, 70.55, 70.8, 74.8, 80.4, 108.4, 125.1 , 127.8, 128.1 , 128.35, 137.7, 141.9, 152.25, 166.5, 170.9.
Composé 42_
Figure imgf000092_0001
42
A une solution du composé benzyle 41 (0,85 g, 0,7 mmol) dissous dans de l'éthanol absolu (15 ml), a été ajouté du palladium activé sur charbon à 10% (2 éq.). Le mélange a été agité sous atmosphère d'hydrogène à température ambiante pendant 16 h. Le produit a été filtré à travers un bouchon de célite et le solvant a été évaporé sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2-95/5) pour donner 42 sous forme d'huile incolore avec un rendement de 98%.
¾ NMR (300 MHz, CDC13) 5 1.41 (s, 18H, CH2COOC(CH3)3), 2.49 (t, J = 6.6 Hz, 4H, CH2COOC(CH3)3), 3.55 to 3.70 (m, 60H, OCH2CH20), 3.85 to 3.90 (m, 7H, OCH2CH20 and COOCH3), 4.21 (t, J = 5.2 Hz, 4H, ArOCH2CH2), 7.34 (s, 2H, Ar-2,6-H) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13) S 28.0, 36.2, 52.0, 66.9, 69.4, 70.35, 70.5, 70.55, 70.7, 80.5, 1 10.4, 120.4, 142.1 , 146.2, 166.7, 170.9. Composé 43_
Figure imgf000093_0001
Pour une solution équimolaire de dérivé phénolique (42) (0,75 g, 0,66 mmol) et de dérivé tosylé 12 (0,27 g, 0,66 mmol) dans 10 ml d'acétone, on a ajouté du K2C03 (0,27 g, 2 mmol, 3 éq.). Le mélange réactionnel a été agité à 60 ° C pendant la nuit. Après filtration sur célite, le solvant a été évaporé et le résidu a été dilué dans du dichlorométhane (50 mL). La couche organique a été lavée deux fois avec une solution saturée de NaHC03, puis avec de la saumure, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (dichlorométhane / méthanol 98/2-95/5) pour donner 43 sous forme d'huile jaune pâle avec 75% de rendement.
¾ NMR (300 MHz, CDC13) S 1.42 (s, 18H, CH2COOC(CH3)3), 2.49 (t, J = 6.5 Hz, 4H, CH2COOC(CH3)3), 3.36 (s, 3H, OCH2CH2OCH3), 3.50-3.54 (m, 2Η, OCH2CH20), 3.60 to 3.70 (m, 70H, OCH2CH20), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 2H, OCH2CH20), 3.83 to 3.88 (m, 7H, OCH2CH20 and COOCH3), 4.15 to 4.23 (m, 6Η, ArOCH2CH2), 7.28 (s, 2H, Ar-2,6-H) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ 28.1, 36.2, 52.1, 59.0, 66.9, 68.8, 69.4, 70.35, 70.5, 70.55, 70.65, 70.8, 71.9, 72.4, 80.4, 109.0, 125.0, 142.5, 152.1, 166.6, 170.9. MALDI: calculée pour C63Hn4Na029: 1357.74, obtenue: 1357.80, calculée pour C63H114K029: 1373.74, obtenue: 1373.78.
Composé 4
Figure imgf000094_0001
A une solution de composé 43 (0, 16 g, 0, 12 mmol) dans 4 ml de CH2C12 à 0 ° C a été ajouté goutte à goutte 2 ml (grand excès) d'acide trifluoroacétique. Le mélange réactionnel a été agité lh à température ambiante sous argon, puis les substances volatiles sont évaporées à sec. Le produit brut sous forme d'acide a été obtenu sous la forme d'une huile incolore et utilisé sans autre purification. A une solution de dérivé d'acide carboxylique (0, 14 g, 0, 1 1 mmol, 1 éq) dans 5 mL de dichlorométhane distillé, a été ajoutée sous argon, le réactif de couplage BOP (0, 13 g, 0,3 mmol, 2,6 éq. par acide). Après 30 min, on a ajouté amino-métronidazole (0, 12 g, 0,25 mmol, 2,2 éq.) et de N,N-diisopropyléthylamine (180 pl, 1 mmol, 4 éq. Par aminé). Le mélange réactionnel a été agité 6h à température ambiante. 50 ml de dichlorométhane a été ajouté et la couche organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium IN (3 x 20 ml) et de la saumure (3 x 20 mL), séché sur MgS04, filtré et concentré sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne LH (dichlorométhane) pour donner 44 comme une huile brun pâle avec 75% de rendement.
lU NMR (300 MHz, CDC13) S 2.44 (t, J = 5.5 Hz, 4H, G¾CONH), 2.53 (s, 6H, CH3), 3.32 (s, 3Η, OCH2CH2OCH3), 3.60 to 3.72 (m, 76Η, OCH2CH20 and NHC¾CH2N), 3.78 (t, J = 4.9 Hz, 2H, OCH2CH20), 3.83 to 3.89 (m, 7H, OCH2CH20 and COOCH3), 4.15 to 4.21 (m, 6Η, ArOCH2CH2), 4.46 (t, J = 6.3 Hz, 4H, NHCH2G¾N), 7.18 (m, 2H, NHCH2CH2N), 7.28 (s, 2H, Ar-2,6-H), 7.96 (s, 2H, ArNitro-H) ; 13C NMR (75 MHz, CDCI3) S 14.1 , 36.4, 39.0, 45.2, 52.1 , 59.0, 66.8, 68.8, 69.5, 70.1 (J = 6.6 Hz), 70.35, 70.45, 70.5, 70.55, 70.6, 70.75, 71.9, 72.3, 108.9, 125.0, 132.7, 142.5, 152.1 , 166.5, 172.8. MALDI: calculée pour C67H117N8027 : 1469.66, obtenue: 1469.90, calculée pour C67H115N8029: 1498.66, obtenue: 1498.89, calculée pour C67H113NaN803i : 1549.66, obtenue: 1549.87. Composé 45_
Figure imgf000095_0001
A une solution du composé 44 (0,14 g, 0,09 mmol) dans un mélange méthanol / eau 3/1 (4 ml) a été ajouté de l'hydroxyde de sodium (18 mg, 0,45 mmol, 5 éq.). Le mélange réactionnel a été agité 2h à 85 ° C et arrêté. Le mélange a été évaporé à sec et on a ajouté 30 ml de dichlorométhane. La phase organique a été séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut sous forme d'acide a été obtenu sous la forme d'une mousse rouge et utilisé sans autre purification. A une solution de dérivé d'acide carboxylique (0,1 g, 0,07 mmol, 1 éq) dans 7 ml de dichlorométhane distillé, a été ajouté sous argon, le réactif de couplage BOP (38 mg, 0,09 mmol, 1,3 éq. par acide). Après 30 min, on a ajouté 1,3 mono-NHBoc-propyl-amine (14 mg, 0,08 mmol, 1,2 éq.) et de N, N-diisopropyléthylamine (30 ul, 0,16 mmol, 2 éq. Par aminé). Le mélange réactionnel a été agité 6h à température ambiante. 40 ml de dichlorométhane a été ajouté et la couche organique a été lavée avec une solution d'hydroxyde de sodium IN (3 x 20 mL), de la saumure (3 x 20 ml) et d'eau (20 mL), séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne LH (dichlorométhane) pour donner 45 sous forme d'une huile brun pâle avec 64% de rendement.
lH NMR (300 MHz, CDC13) S 1.41 (s, 9H, NHCOOC(CH3)3), 1.67 (m, J = 5.1 Hz, 2H, NHCH2CH2CH2NH), 2.39 (t, J= 5.6 Hz, 4H, G¾CONH), 2.49 (s, 6H, CH3), 3.18 (m, 2Η, NHCH2CH2CH2NH), 3.32 (s, 3H, OCH2CH2OCH3), 3.41 (m, 2Η, NHCH2CH2CH2NH), 3.60 to 3.72 (m, 76H, OCH2CH20 and NHG¾CH2N), 3.78 (t, J = 4.9 Hz, 2H, OCH2CH20), 3.82 (t, J = 4.7 Hz, 4H, OCH2CH20), 4.12 to 4.20 (m, 6H, ArOCH2CH2), 4.42 (t, J= 6.3 Hz, 4H, NHCH2G¾N), 5.12 (t, J= 5.1 Hz, 1H, NHCH2CH2CH2NH), 7.12 to 7.18 (m, 4H, Ar-2,6-H and NHCH2CH2N), 7.51 (m, 1H, NHCH2CH2CH2NH), 7.91 (s, 2H, Ar -H) ; 1JC NMR (75 MHz, CDC13) δ 14.1 , 28.2, 36.4, 39.1 , 45.1 , 59.0, 66.8, 68.8, 69.65, 70.1 (J = 5.0 Hz), 70.35, 70.45, 70.5, 70.55, 70.6, 70.7, 71.9, 72.2, 79.2, 106.8, 129.7, 133.2, 152.2, 166.6, 172.8. MALDI: calculée pour 0,9Η119Ν10θ3ο: 1569.86, obtenue: 1569.97, calculée pour C74H131N8O28: 1610.86, obtenue: 161 1.06, calculée pour C74H129N803o: 1640.86, obtenue: 1641.05, calculée pour
Figure imgf000096_0001
1691.86, obtenue: 1692.0.
Composé APAG-53
Figure imgf000096_0002
A une solution du composé 45 (70 mg, 0,04 mmol) dans 4 ml de CH2C12 à 0 ° C a été ajouté goutte à goutte d'acide trifluoroacétique (1 10 pl, 1 ,26 mmol, 30 éq.). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante sous argon, puis les substances volatiles sont évaporées à sec. Le produit brut sous forme d'acide a été obtenu sous la forme d'une huile brune et utilisé sans autre purification. A une solution de dérivé d'amine (0,08 g, 0,04 mmol, 1 éq) dans un mélange de dichlorométhane / tétrahydrofurane (3/5), a été ajouté sous argon, de la triéthylamine (30 μί, 0,23 mmol, 6 éq.). Après 30 min, on a ajouté l'isothiocyanate de la fluorescéine FITC (26 mg, 0,04 mmol, 1 , 1 éq.). Le mélange réactionnel a été agité 3h à température ambiante et les volatiles ont été évaporés à sec. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne LH (une fois avec du méthanol et un autre avec du dichlorométhane) pour donner APAG-53 sous forme d' une mousse orange avec 49% des rendements. lH NMR (300 MHz, MeOD) δ 1.98 (m, 2H, NHCH2CH2CH2NH), 2.41 (t, J = 5.8 Hz, 4H, G¾CONH), 2.53 (s, 6H, CH3), 3.38 to 3.42 (m, 5Η, NHCH2CH2CH2NH and OCH2CH2OCH3), 3.50 (m, 2Η, NHCH2CH2CH2NH), 3.58 to 3.85 (m, 78H, OCH2CH20 and NHCH2CH2N), 3.88 (t, J = 4.8 Hz, 4H, OCH2CH20), 4.20 to 4.26 (m, 6H, ArOCH2CH2), 4.51 (t, J = 6.0 Hz, 4H, NHCH2G¾N), 6.52 (dd, J = 2.3 and 8.7 Hz, 2H, ArFITC-H), 6.72 (d, J = 2.3 Hz, 2H, ArFITC-H), 6.79 (d, J = 8.7 Hz, 2H, ArFITC-H), 7.23 (s, 4H, Ar-2,6-H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H, ArFITC-H), 7.79 (m, 1Η, ArFITC-H), 7.98 (s, 2Η, ArNitro-H), 8.18 (m, 1Η, ArFITC-H) ; 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ 28.2, 35.5, 37.9, 44.9, 57.2, 66.0, 68.1 , 68.9, 70.1 , 70.35, 70.45, 70.5, 70.55, 70.6, 70.7, 71.0, 71.8, 79.2, 101.8, 105.9, 109.6, 1 1 1.95, 1 18.8, 124.0, 128.5, 131.2, 137.2, 140.1 , 150.6, 151.8, 152.1 , 159.3, 167.1 , 169.0, 172.6, 180.4. MALDI: calculée pour C9iH135N11S032: 1927.15, obtenue: 1927.0.
Exemple 5 : Dérivés dinitré.
Figure imgf000097_0001
Figure imgf000097_0002
Schéma 1: Synthèse de 4. a) H2S04, MeOH, reflux, 4h ; b) Composé 1, DIPEA, DMF, T.A., 16h ; c) NaOH, MeOH/eau, reflux, 2h; f) Composé 3, BOP, DIPEA, CH2C12, T.A., toute la nuit.
Composé !_
Figure imgf000098_0001
1
A une solution de 4-chloro-3,5-dinitrobenzoïque (2,0 g, 8,13 mmol) dissous dans du méthanol (10 ml) a été ajouté de l'acide sulfurique concentré (1 ml). Le mélange a été agité pendant 4h à reflux et mis dans la glace pendant lh. Le produit brut a été filtré, lavé avec de l'éther de pétrole (3 x 20 ml) et séché sous vide pour obtenir 1 sous forme de solide blanc avec un rendement de 98%.
lU NMR (300 MHz, CDC13) S 4.02 (s, 3H, COOCH3), 8.61 (s, 2Η, ArH) ; 13C NMR (75 MHz, CDCI3) Î5 52.5, 125.3, 132.6, 137.1, 142.1, 163.8.
Composé 2
Figure imgf000098_0002
2
A une solution de mono-Nt-Boc-amido-dPEGTM3 -aminé (1,0 g, 3,12 mmol, 1,1 éq) dans 10 ml de dichlorométhane distillé, a été ajoutée sous argon, N, N-diisopropyléthylamine (0,28 ml, 1,56 mmol, 0,5 eq. par aminé). Après 30 min, on a ajouté le composé 1 (0,74 g, 2,84 mmol, 1,0 éq.). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante. 100 ml de saumure a été ajoutée et la phase aqueuse a été extraite avec de l'éther éthylique (3 x 40 ml). La couche organique a été lavée avec une solution d'acide chlorhydrique IN (2 x 40 ml) et de la saumure (2 x 40 mL), séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (dichlorométhane / méthanol 100 à 98.5/1.5) pour donner 2 sous forme d'une huile jaune pâle avec un rendement de 92%.
lU NMR (300 MHz, CDC13) S 1.42 (s, 9H, NHCOOC(CH3)3), 1.73 (m, J = 6.1 Hz, 2H, CH2CH2CH2NHCOO), 1.94 (m, J = 6.2 Hz, 2H, ArH-NHCH2CH2CH2), 3.10 to 3.18 (m, 4H, NHCH2CH2CH2), 3.50 to 3.70 (m, 12H, OCH2CH20 and OCH2CH2CH2), 3.95 (s, 3H, COOCH3), 4.94 (m, 1Η, NHCOOC(CH3)3), 8.75 (s, 2H, ArH) 9.25 (m, 1H, ArH-NHCH2) ; 13C NMR (75 MHz, CDC13) S 38.5, 46.3, 52.6, 69.6, 70.15, 70.2, 70.4, 70.5, 70.8, 78.8, 1 15.3, 133.0, 136.9, 142.0, 155.9, 163.8.
Composé 4
Figure imgf000099_0001
4
A une solution du composé 2 (0,2 g, 0,36 mmol) dans un mélange méthanol / eau 4/1 (5 ml) a été ajouté de l'hydroxyde de sodium (51 mg, 1,8 mmol, 5 éq.). Le mélange réactionnel a été agité 2h à 85 0 C et arrêté. Le mélange a été évaporé à sec et on ajoute 30 ml de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut sous forme d'acide a été obtenu sous la forme d'une mousse orange et utilisé sans autre purification. A une solution de dérivé d'acide carboxylique (0, 12 g, 0,23 mmol, 1,0 éq) dans 5 mL de dichlorométhane distillé, a été ajouté sous argon, le réactif de couplage BOP (0,13 g, 0,29 mmol, 1,3 éq. par acide). Après 30 min, on a ajouté dérivé d'aniline 3 (WO 2009037229) (76 mg, 0,25 mmol, 1,1 éq.) Dilué dans 0,5 ml de N-N'-diméthylformamide et le N, N-diisopropyléthylamine (90 pi , 0,5 mmol, 2 éq. par aminé). Le mélange réactionnel a été agité pendant une nuit à température ambiante. 40 ml de dichlorométhane a été ajouté et la phase organique a été lavée avec une solution d'chlorhydrique IN d'acide (2 x 20 ml), de la saumure (2 x 20 ml) et de l'eau (1 x 20 mL), séchée sur MgS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur colonne de gel aluminium neutre (dichlorométhane / méthanol 99,5-0,5 à 99/1) pour donner 4 sous forme d'une huile jaune pâle avec un rendement de 62%. Le composé 4 peut être utilisé comme synthon pour former une molécule ou un groupe radiolabélisable R selon l'invention.
lH NMR (300 MHz, DMSO-μ) S 1.33 (s, 9H, NHCOOC(CH3)3), 1.52 (m, J = 6.6 Hz, 2H, CH2CH2CH2NHCOO), 1.84 (m, J = 6.0 Hz, 2H, ArH-NHCH2CH2CH2), 2.91 (q, J = 6.6 Hz, 2H, CH2CH2CH2NHCOO), 3.03 (q, J = 6.0 Hz, 2H, ArH-NHG¾CH2CH2), 3.40 to 3.55 (m, 12H, OCH2CH20 and OCH2CH2CH2), 4.28 (t, J = 6.6 Hz, 2H, CH2CH), 4.47 (d, J = 6.6 Hz, 2H, G¾CH), 6.71 (t, J = 5.2 Hz, 1H, NHCOOC(CH3)3), 7.30 to 7.50 (m, 6H, ArFmocH and Ar2H), 7.62 (d, J= 8.6 Hz, 2H, Ar2H), 7.73 (d, J= 7.4 Hz, 2H, ArFmocH), 7.91 (d, J = 7.4 Hz, 2H, ArFmocH), 8.72 (t, J = 4.8 Hz, 1H, ArH-NHCH2), 8.88 (s, 2H, ArlH), 9.71 (s, 1H, Ar2H-NHCOO), 8.72 (t, J = 4.8 Hz, 1H, A^H-NH-A^H) ; 13C NMR (75 MHz, DMSO- ) S 30.1, 30.8, 31.7, 39.1, 47.4, 48.5, 67.4, 69.8, 70.8, 71.4, 71.45, 71.5, 71.55, 79.1, 120.4, 121.2, 121.9, 122.9, 127.0, 128.9, 129.5, 133.0, 135.2, 136.9, 138.7, 142.7, 145.7, 155.2, 157.3, 163.0.
Exemple 7 : Radiomarquage à l'indium 111 des composés comprenant un agent chélatant DOTA, en particulier les composés AP070 et AP071.
Dans un flacon stérile, 2 mg du composé est dissous dans 1 mL d'eau pour préparation injectable. 0.3 mL de tampon citrate 50 mM(pH=5.5) sont ajouté dans le flacon. Le chlorure d'indium 1 1 1 (185 à 370 MBq dans 0.5 mL) est ensuite additionné au flacon précédent. La solution est incubée pendant 1 heure à température ambiante sur un agitateur. Après incubation, la solution est purifiée sur une colonne sephadex PD- 10 (GE) préalablement conditionnée avec la solution de tampon citrate 50mM puis éluée avec ce même tampon. Les différents éluâts sont récupérés dans des tubes de 5 mL. Une chromatographie sur couche mince (ITLC-SG) est réalisée sur l'ensemble des éluâts obtenus. Les solutions ayant une pureté radiochimique supérieure à 98% sont mélangés, filtrées (0.22μηι) et sont utilisées pour les tests in vivo.
Le contrôle de pureté du produit radiomarqué se fait par chromatographie sur papier selon le schéma présenté à la figure 2.
Exemple 8 : Résultats 8.1 Modèle animal utilisé : Souris C57B16 porteuses de xénogreffes de mélanome murin (lignée B16FO) obtenues par injection sous-cutanée de 300 000 cellules suspendues dans 100 μΐ de millieu de culture RPMI sont injectées en sous cutané au niveau du dos. L'expérimentation est réalisée lorsque les tumeurs sont palpables, soit 10 jours environ post-25 greffe. Toutes les expérimentations (greffe tumorale, injection et imagerie) sont réalisées sous anesthésie gazeuse par isoflurane / oxygène (2,5%/2.5%).
8.2. Injection des solutions radio-marquées : Injection de 50 à 100 micro-litres de la solution radio-marquée, d'une activité maximale de 20 MBQ, par injection intra-veineuse directe (veine caudale). L'activité de la seringue vide après injection + compresse est mesurée également pour calculer l'activité réelle injectée (Ac réelle injectée = Ac seringue pleine normalisée - activité (seringue vide et compresse) normalisée. La normalisation consiste à calculer l'activité théorique à un même temps choisi comme référence (par exemple le temps de l'injection). Les mesures sont faites sur un activimètre à usage médical (Medisystem©) calibré régulièrement.
8.3 Protocole d'imagerie : L'imagerie scintigraphique est réalisée à l'aide d'un micro-5 imageur SPECT-CT dédié petit animal (BIOSCAN™). Une image planaire scintigraphique est réalisée immédiatement après l'injection pour vérifier l'absence de stase intra-caudale. Dans le cas d'une stase, la souris sera sacrifiée à des temps tardifs (24 ou 48 h). Des images statiques scintigraphiques peuvent être réalisées à 2h, 4h, 24h et 48h (Imageur micro- SPECT-CT BIOSCAN©).
8.4 Etude quantitative de la fixation tumorale et de la biodistribution du composé radio-marqué : se fait ex-vivo par comptage gamma des différents prélèvements, à l'aide d'un compteur à puits gamma à usage médical régulièrement calibré pour les isotopes utilisés (Tc-99m et In- 1 11). Les animaux sont euthanasiés selon les protocoles admis par le comité d'éthique animal à 2h, 4h 24h ou 48h. Les organes principaux sont prélevés (cerveau, rate, reins, poumons, coeur, tube digestif, foie) ainsi qu'un fragment de peau, muscle, os et un prélèvement de sang et la tumeur en totalité. Chaque prélèvement est pesé et fait l'objet d'un comptage de son activité gamma dans un compteur à puits passeur d'échantillons dédié à usage médical et calibré pour les radioéléments utilisés. La carcasse de l'animal est également pesée après séparation de la queue ; ces prélèvements sont incinérés et leur activité gamma est également mesurée. De même sont mesurées l'activité gamma des échantillons contenant la totalité des recueils d'urine ainsi que les selles. L'activité de chaque prélèvement est normalisée (par rapport à l'heure de l'injection), et le ratio de l'activité de chaque prélèvement est calculé par rapport à l'activité totale injectée (= la somme de l'ensemble des activités mesurées sauf celle de la queue), exprimée en % par gramme de tissu, permettant le calcul du ration de l'activité présente dans la tumeur par rapport au principaux organes (foie, reins, poumons et sang). Le calcul du % de l'activité éliminée est calculé.
On calcule les moyennes de chaque donnée sur l'ensemble des souris dont les données sont exploitables, ainsi qu'après avoir éliminé les animaux présentant une élimination urinaire trop rapide ( > à 50% à 2h ou 75% à 4h, ainsi que les souris présentant des tumeurs > à 2g, car l'existence d'une nécrose peut fausser le calcul du ratio de fixation dans la tumeur).
Les données de biodistribution des différents composés dendrimères couplés au ligand IFC01 102 (également nommé aminé R) et à un agent chélatant sont comparées à celles du ligand seul couplé à l'agent chélatant DOTA (composé AP045) et radiomarqué par le même radioélément.
5
8.5 Résultats concernant le composé APAG9-1 (radiomarqué au Tc99m)
La pureté radiochimique est supérieure à 95 %, d'après le profil chromatographique réalisé comme décrit précédemment (exemple 5).
12 animaux ont été injectés.
L'activité moyenne injectée est de 3,5 ± 2,4 MBq.
2 animaux ont été euthanasiés à 2h, 4 à 24 h et 48 h post- injection.
Des exemples d'image planaire immédiatement post- injection et 2 heures postinjections sont illustrés à la figure 3.
Les données quantitatives de biodistribution effectuées sur 10 animaux sont consignées dans le tableau suivant :
Figure imgf000103_0001
8.6 Résultats concernant le composé APAG22-1 (radiomarqué au Tc99m)
La pureté radiochimique est supérieure à 99 %, d'après le profil chromatographique réalisé comme décrit précédemment (exemple 5).
16 animaux ont été injectés.
L'activité moyenne injectée est de 4,16 ± 1,31 MBq
3 animaux ont été euthanasiés à 2h, 4 à 4h, 24 h et 48 h post-injection.
Des exemples d'image planaire immédiatement post-injection et 2 heures post-injections sont illustrés à la figure 4.
Les données quantitatives de biodistribution effectuées sur 15 animaux sont consignées dans le tableau suivant :
Figure imgf000103_0003
Une seconde série de données est présentée, en éliminant les résultats concernant les souris ayant présenté une élimination urinaire trop rapide ou une tumeur trop grosse comme décrit précédemment dans la méthode :
Figure imgf000103_0002
Le maximum de captation tumorale est observé 2 heures après l'injection IV, avec les ratio par rapport au foie, poumons, reins et sang les plus élevés.
Par comparaison à la biodistribution du ligand seul (AP045), on voit que l'élimination est beaucoup plus importante à 24 heures et 48 heures, et que le rapport Tumeur sur Foie et beaucoup plus fort, témoignant d'une captation non spécifique dans le foie beaucoup plus faible. A deux heures post-IV, le taux de captation dans la tumeur est plus élevé.
8.7 Résultats concernant le composé AP045 radiomarqué à l'indiumlll
2 séries d'expérimentations ont été faites.
La pureté radiochimique est supérieure à 99 %, d'après le profil chromatographique réalisé comme décrit précédemment (exemple 6).
17 animaux ont été injectés.
L'activité moyenne injectée est de 2,45 ± 1,5 MBq
4 animaux ont été euthanasiés à 4h, 7 à 24h, 6 à 48 h post-injection.
Des exemples d'image planaire immédiatement post-injection et 2 heures post-injections sont illustrés à la figure 5.
Les données quantitatives de biodistribution effectuées sur 17 animaux sont consignées dans le tableau suivant :
Figure imgf000104_0001
Le maximum de captation tumorale est observé 24 heures après l'injection IV, avec un ratio par rapport au foie supérieur à 1 ; par contre, l'activité dans les reins est encore importante avec un ratio tumeur rein défavorable.
8.8 Résultats concernant le composé AP071 (radiomarqué à l'indium 111)
La pureté radiochimique est supérieure à 95 %, d'après le profil chromatographique réalisé comme décrit précédemment (exemple 6).
16 animaux ont été injectés. 1 souris est décédée 30 minutes après l'injection (cause inconnue, mais probablement liée à l'anesthésie).
L'activité moyenne injectée est de 3,14 ± 0,45 MBq 2 animaux ont été euthanasiés à 2h, 3 à 4h, et 4 à 24 h et 48 h post-injection.
Des exemples d'image planaire 2 heures post-injection et 4 heures post-injections sont illustrés à la figure 6.
Les données quantitatives de biodistribution effectuées sur 13 animaux sont consignées dans le tableau suivant :
Figure imgf000105_0001
Une seconde série de données est présentée, en éliminant les résultats concernant deux souris ayant présenté une élimination urinaire trop rapide (>50% à 2h, > à 75 % à 4h):
Figure imgf000105_0002
La captation tumorale 4 heures après l'injection IV est très élevée, avec des ratios par rapport au foie, poumons et sang élevés.
Par comparaison à la biodistribution du ligand seul (AP045), on voit que la captation tumorale est bien plus élevée, tout en conservant des fixations non spécifiques élevées et une élimination rapide.
8.9 Résultats concernant le composé AP070 (radiomarqué à l'indium 111)
La pureté radiochimique est supérieure à 95 %, d'après le profil chromatographique réalisé comme décrit précédemment (exemple 6).
5 animaux ont été injectés lors d'une première expérimentation et euthanasiés à 2h, 4h ou 24h, ; 16 animaux ont été injectés lors d'une seconde expérimentation, sous restriction hydrique (pas d'accès à la boisson 30 minutes avant l'injection et jusqu'à 3 heures postinjection) et euthanasiés à 2h, 4h, 48h.
Des exemples d'image planaire 1 heure post-injection et 2 heures post- injections sont illustrés à la figure 7. Les données quantitatives de biodistribution recueillies chez 20 animaux présentant une élimination urinaire faible spontanément (<50% ou 75% respectivement à 2h ou 4 h) ou sous conditions expérimentales de restriction hydrique sont consignées dans le tableau suivant :
Figure imgf000106_0001
La captation tumorale 4 heures après l'injection IV est élevée, avec des ratios par rapport au foie, poumons et sang élevés.
Par comparaison à la biodistribution du ligand seul (AP045), on voit que la captation tumorale est bien plus élevée, tout en conservant des fixations non spécifiques élevées et une élimination rapide. Mais par rapport au composé AP071, on voit que la captation tumorale est moins élevée, notamment à 4 heures, avec un ratio Tumeur/ foie moins favorable.
Exemple 9 : Caractérisation du ganglion sentinelle
9.1 Protocole d'imagerie : L'imagerie scintigraphique est réalisée à l'aide d'un micro-5 imageur SPECT-CT dédié petit animal (BIOSCAN™). Une image planaire scintigraphique est réalisée immédiatement après l'injection pour vérifier l'absence de stase intra-caudale. Des images statiques scintigraphiques peuvent être réalisées à 2h, 4h, 24h et 48h (Imageur micro -SPECT-CT BIOSCAN©).
9.2 Protocole pre-clinique:
Injection en intra-dermique dans le coussinet de la patte inférieure d'une souris nude de 1 à 20 microlitres d'une suspension de dendrimeres radiomarques avec une seringue hypordermique.
Une image scintigraphique planaire de la souris corps entier est réalisée 5 minutes après injection pour vérifier l'absence de passage sanguin du compose.
Acquisition d'images tomographiques (SPECT) toutes les 30 minutes pour suivre le drainage lymphatique du composé et déterminer le délai de disparition du signal dans le ganglion poplité. 9.3.a Injection du composé XI marqué au Tc99m (molécule de génération 2)
Figure imgf000107_0001
XI
Le composé XI est synthétisé selon une méthode similaire à la synthèse du composé ci- dessous publiée dans WO 2008/04391 1, en modifiant simplement la longueur des chaînes PEG.
Figure imgf000108_0001
Figure imgf000108_0002
Figure imgf000109_0001
»CH OH iv S=COPi i
2¾
Figure imgf000109_0002
La synthèse du composé 30 est détaillée à l'Exemple 3.
9.3.D Injection du composé APAG4 (génération 1) marqué à l'indiumlll
Figure imgf000109_0003
9.3.C Injection intradermique du composé AP034 marqué au Tc-99m
Figure imgf000110_0001
"Les chaînes PEG-tosylées et galiate-PEG-OMe nécessaires pour l'obtention composé APO 34 ont été obtenues en suivant les procédures de l'article G.Lamanna et al, Bioinatériaux, 2011, 32, 8562-8573. Après la saponification de l'ester de gallate-PEG- OMe, l'huile jaune pâle a été dissoute dans du CH2CÎ2 sec avec le Agent de chèlation- catéchol aminé (am né 12 obtenue dans l'article A.Bertin et al, New j. Chem., 2010, 34, 267-275) pour une réaction de couplage peptidique en présence d'EDCT, DMAP et de DIPEA. Après 48h, le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (CH2C12/MeOH 95/5-90/10) pour donner une huile jaune paie (65%). Ensuite, une déaiiylation finale à l'aide de Pd (PPh3) 4 et NaBH4 dans du THF sec permet l'obtention du composé AP034 "Catechoi Agent de chélation-gallate-PEG-OMe" sous forme d"huile jaune avec un rendement de 58%.
Les composés XI et AP034 euvent être radiomarqués selon le protocole détaillé dans l'Exemple 5.
Le composé APAG4 peut être radiomarqué selon le protocole détaillé dans l'Exemple 7. Les résultats après injection pour ces trois composés sont illustrés aux figures 8 à 12.
Exemple 10 : Caractérisation du ganglion sentinelle tumoral
Dans le modèle de ganglion sentinelle tumoral, obtenu par l'injection intra-dermique de 10exp6 cellules tumorales (lignée de melanoma humain A375), les composés Gl ou G2 de l'Exemple 9 fonctionnalisés aux agents ciblants V selon l'invention et en particulier :
Figure imgf000110_0002
- de l'alpha-MSH (HB-19) :
Figure imgf000111_0001
permettront de distinguer des ganglions sentinelles non tumoraux (pas de fixation persistante plusieurs heures après injection au niveau du ganglion poplité) des ganglions tumoraux (persitance d'une fixation), en utilisant ou non un protocole en deux temps. Par exemple, les composés suivants peuvent être utilisés pour un protocole en un temps :
Figure imgf000111_0002
Le protocole en un temps peut être décrit comme consistant en l'injection des solutés radioactifs, le protocole en deux temps, comme l'injection première du composé non radiomarqué mais comportant un « clac », et dans un deuxième temps, d'un composé radiomarqué comportant un « clic ». Listes des références
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Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de Formule I suivante
T— L-i— D— R— L2-fV)
n
(D
dans laquelle :
un agent chélatant, un fluorochrome ou un agent de reconnaissance
l'agent chélatant pouvant fixer :
un ion métallique du gadolinium ou du manganèse, ou
un radioélément émetteur de radiation gamma, ou émetteur de positon, et/ou émetteur de rayonnements particulaires, béta moins, électron Auger ou particules alpha tel que or-33, cuivre-61 , 62cuivre, 64cuivre, 67cuivre, 67gallium, 68gallium, 89zirconium 90yttrium, 99mtechnetium, l l lindium, 123iode, 124iode, 125iode, 131iode, 166holmium, 1771utétium,
186rhenium, 21 1astate, 89actinium, 213bismuth ;
l'agent de reconnaissance étant susceptible de former un complexe avec une molécule spécifique, éventuellement liée à un autre dendrimère, ledit complexe étant choisi parmi le complexe biotine-avidine, le complexe biotine-streptavidine, un complexe anticorps-antigène, un complexe ligand- récepteur, un oligonucléotide double-brin, ou un complexe adamantane- cyclodextrine ;
Li représente 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou un espaceur - C(=0)NH-, -NHC(=0)-, -NHC(=S)N - ou triazolyl de formule :
Figure imgf000114_0001
dans laquelle l'un des points d'attachement est lié à T et l'autre à D directement ou via une chaîne hétéroaikyl de formule :
Figure imgf000115_0001
dans lesquels p est un entier de 1 à 10, et q est un entier de 1 à 12 ;
D est un dendrimère PAMAM, gallaie ou aspartate de formule (DD):
Figure imgf000115_0002
dans laquelle :
(a) A est le noyau du dendrimère, de multivalence k, où :
k représente le nombre de dendrons et est un nombre entier allant de 2 à
A est un synthon de structure :
Figure imgf000115_0003
PAMAM
Figure imgf000115_0004
Gallatel (si i=0) Gallate2 (si
Figure imgf000116_0001
Aspartatel Aspartate2 où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ; et y représente un entier de 1 à 10;
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à g, g étant le nombre de génération du dendrimère ;
lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lors
D est PAMAM ;
Figure imgf000116_0002
quand D est Gallate ;
Figure imgf000116_0003
ou quand D est aspartate où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ; et y représente un entier de 1 à 10;
(c) BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 3;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à C6, une chaîne pol
Figure imgf000117_0001
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10 ;
Ri représente Ci_6alkyle ou -C(=0)OR2 où R2 représente Ci_6alkyle;
et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ;
R est 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou représente une molécule radiolabélisable ou un groupe tel que la L-thyroxine ou le dinitrobenzoate;
L2 représente 0 (c'est-à-dire une liaison covalente), ou une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000117_0002
dans lesquels p est un entier de 1 à 10, et q est un entier de 1 à 12 ; V est un agent ciblant ; et
n est un entier supérieur ou égal à 1, et représente le nombre d'agents ciblants attachés au compsé de formule I ;
Figure imgf000118_0001
2. Composé selon la revendication 1, dans lequel L2 est une liaison, et le
composé a la formule II suivante :
T L— D— R— (V)
n
(II)
dans laquelle :
T, Li, D, V et n sont tels que à la revendication 1; et
R est une structure radiolabélisable choisie parmi :
Figure imgf000118_0002
où X représente O ou NH.
3. Composé selon la revendication 1, dans lequel R et L2 représentent chacun une liaison, et le composé a la formule III suivante : T— L-ι— D— (V)
n
(III)
dans laquelle T, Li, D, V et n sont tels que définis à la revendication 1.
4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel :
T peut représenter un agent chélatant de formule :
Figure imgf000119_0001
où chaque occurrence de R représente indépendamment
H ou un groupe protecteur tel que t-Bu ;
T peut représenter un agent chélatant de formule :
Figure imgf000119_0002
sauf dans le cas où D est un dendrimère Gallate et V un agent ciblant DOPA comprenant la structure de formule
Figure imgf000119_0003
T peut représenter un fluorochrome fluorescéine de formule :
Figure imgf000119_0004
T peut représenter un agent de reconnaissance tel que la cyclodextrine, l'adamantane, la biotine, l'avidine, ou la streptavidine.
5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel :
a) Lj peut représenter une liaison eovaiente, ou un espaceur -C(=0)NH- N! ÎC; O s-. -NI !(.'·; S iN f i- , ou triazolyl de formule :
Figure imgf000120_0001
b) Lj peut avantageusement représenter une liaison eovaiente, ou un espaceur triazolyl de formule :
Figure imgf000120_0002
> c) Li tel que défini à a) ou b) peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalkyl de formule : H P H s dans lequel p est un entier de 1 à 10 ;
d) Li tel que défini à a) ou b) peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalkvi de formule :
Figure imgf000120_0003
dans laquelle p est un entier de 1 à 10;
e) Li tel que défini à a) a une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000120_0004
dans lequel p est un entier de 1 à 10;
f) Lj tel que défini à a) ou b) peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalkyl de formule : H 4 H 5 dans lequel q est un entier de 1 à 12 ; g) Li tel que défini à a) ou b) peut avantageusement être lié à T via une chaîne hétéroalkyi de formule : , dans lequel q est un entier de 1 à 12
6. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel :
D peut représenter un dendrimère PAMAM de formule (DD) dans laquelle : A est un synthon de structure
Figure imgf000121_0001
où * indique le point d'attachement à l'espaceur
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000121_0002
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ;
BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 2;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -COOH, un groupement -OH, un alkyle en Ci à C6, une chaîne poléthylène glycol de formule
Figure imgf000122_0001
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10 ; et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R; les occurrences de BT non liées à V se terminant par H, ou un alkyle en C 1 à C6 tel que méthyle ou éthyle ;
D peut représenter un dendrimère Galiate de formule (DD) dans laquelle :
n synthon de structure
Figure imgf000122_0002
Gallatel (si i=0) Gallate2 (si i>0)
où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ;
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ; lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000122_0003
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ;
(c) BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 3; BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à Ce, une chaîne pol
Figure imgf000123_0001
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10; Ri représente Ci_6alkyle ou -C(=0)OR2 où R2 représente Ci_6alkyle;
et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R; les occurrences de BT non liées à V se terminant par un alkyle en C 1 à C6 tel que méthyle ou éthyle ;
D peut représenter un dendrimère Aspartate de formule (DD) dans laquelle : A est
Figure imgf000123_0002
où * indique le point d'attachement à l'espaceur Li ; et y représente un entier de 1 à 10 ;
Mi est un monomère de génération i, où :
i est un nombre entier allant de 0 à 3 ; et lorsque i=0, Mi est inexistant, la branche terminale BT est alors directement reliée au noyau A ;
lorsque i>0, Mi représente :
Figure imgf000124_0001
où le symbole * désigne le point d'attachement du monomère Mi avec le monomère de génération supérieure ; et y représente un entier de 1 à 10 ; c) BT est la branche terminale, et t le nombre de motifs terminaux issus du monomère de génération inférieure où :
t est un nombre entier allant de 1 à 2 ;
BT est un radical choisi dans le groupe comprenant un hydrogène, un groupement -NH2, un groupement -OH, un alkyle en Ci à Ce, une chaîne poléthylène glycol de formule
Figure imgf000124_0002
dans lequel chaque occurrence de x est indépendamment un entier de 1 à 10 ; et au moins une occurrence de BT est covalemment liée à un agent ciblant V ou une molécule radiolabélisable R ; les occurrences de BT non liées à V se terminant par H, ou un alkyle en C 1 à C6 tel que méthyle ou éthyle.
7. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel :
R représente une liaison covalente ;
R représente une molécule labélisable telle que la L-thyroxine de formule :
Figure imgf000124_0003
R représente une molécule labélisable telle que le dimtrobenzoate de formule
Figure imgf000125_0001
où X représente O ou NH.
8. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel :
L2 représente une liaison covalente ;
L2 représente une
Figure imgf000125_0002
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
L2 représente un
Figure imgf000125_0003
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
L2 représente une chaîne hétéroalkyl de formule :
Figure imgf000125_0004
dans laquelle q est un entier de 1 à 12 ;
I.-2 représente une cb
Figure imgf000125_0005
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
L,2 représente une chaîne hétéroalkyl de formule
Figure imgf000125_0006
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
L2 représ
Figure imgf000125_0007
lorsque R représente une molécule labélisable telle que îe dmirrobenzoate de formule
Figure imgf000126_0001
9. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel : V représente un agent ciblant le mélanome répondant à la formule :
Figure imgf000126_0002
V représente un agent ciblant tripeptide de formule :
Figure imgf000126_0003
V représente un agent ciblant amino-métronidazolyle de formule :
Figure imgf000126_0004
10. Composé selon la revendication 1, répondant à l'une des structures suivantes
Figure imgf000127_0001
;.. · .1...., l. Q ^.-^Î'
Figure imgf000127_0002
Figure imgf000128_0001
Figure imgf000129_0001
Figure imgf000130_0001
Figure imgf000130_0002
Figure imgf000131_0001
Figure imgf000132_0001
Figure imgf000132_0002
Figure imgf000133_0001
Figure imgf000134_0001
Figure imgf000134_0002
Figure imgf000135_0001
Figure imgf000135_0002
Figure imgf000136_0001
Figure imgf000137_0001
Figure imgf000137_0002
Figure imgf000138_0001
Figure imgf000139_0001
Figure imgf000139_0002
Figure imgf000140_0001
ainsi que les composés comprenant des motifs gallate présentés ci-dessus où, l'expaceur de formule -ΝΗ((¾(¾0)6(¾(¾ΝΗ- entre l'agent chélatant et le den
Figure imgf000140_0002
où p=2.
1 1. Produit de combinaison comprenant :
(i) un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ; et
(ii) un composé répondant à la formule IV :
T' L-|— R
IV
dans laquelle
T' représente :
la biotine, lorsque le groupe T du composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 est l'avidine ou la streptavidine, ou l'avidine ou la streptavidine, lorsque le groupe T du composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 est la biotine,
l'adamantane, lorsque le groupe T du composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 est une cyclodextrine, ou
une cyclodextrine, lorsque le groupe T du composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 est l'adamantane,
Li est une chaîne
Figure imgf000141_0001
dans laquelle p est un entier de 1 à 10 ;
Figure imgf000141_0002
dans lesquelles p est un entier de 1 à 10; de préférence de 1 à 8 ; de préférence 3 ou 7 ;
R est une molécule labélisable telle que la L-Thyroxine ou le dinitrobenzoate :
Figure imgf000141_0003
pour son utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps dans le diagnostic de cancers, notamment de micro-métastases.
12. Composition pharmaceutique ou diagnostique comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1, et un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
13. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 pour son utilisation :
• en tant qu'outil de détection de tumeurs, notamment sous la forme de micrométastases, et/ou de cellules dans un état métabolique particulier, notamment des cellules en hypoxie ou en apoptose ;
• en tant qu'outil de détection de tumeurs par imagerie par résonnance magnétique rehaussée au manganèse ;
• en tant qu'outil de détection de tumeurs par scintigraphie gamma (GSc) ou par tomographie d'émission monophotonique (TEMP) ;
• en tant qu'outil de détection de tumeurs par tomographie par émission de positons (TEP) ;
• en tant qu'outil de caractérisation du ganglion sentinelle ;
• en tant que médicament radiothérapeutique dans le traitement de tumeurs, notamment sous la forme de micrométastases ; et/ou
• en tant que médicament dans la curiethérapie ou la radiothérapie interne ou ciblée, ou vectorisée.
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