WO2014171018A1 - 疾患の診断方法、疾患の治療または予防方法、疾患の診断用キット、疾患の治療または予防用医薬 - Google Patents

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WO2014171018A1
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disease
galectin
crohn
enteritis
tumor
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PCT/JP2013/061689
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聖一 鍵本
真一郎 萩原
智久 高木
裕二 内藤
平島　光臣
敏朗 仁木
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株式会社ガルファーマ
京都府公立大学法人
今井　浩三
篠崎 大
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
    • G01N2800/065—Bowel diseases, e.g. Crohn, ulcerative colitis, IBS

Definitions

  • the present invention relates to a disease diagnosis method, a disease treatment or prevention method, a disease diagnosis kit, and a disease treatment or prevention medicine.
  • Inflammatory bowel disease is a refractory, unknown, chronic or recurrent disease characterized by excessive immunity and inflammation in the gastrointestinal tract. This disease includes Crohn's disease and ulcerative colitis, and the pathogens are thought to be different, but the common reaction between them is an abnormal immune system reaction. It is presumed to cause an excessive reaction to the indigenous bacteria and their own digestive tract, causing chronic inflammation of the digestive tract.
  • Crohn's disease can occur anywhere in the gastrointestinal tract, but frequently occurs from the end of the small intestine to the large intestine. Signs include diarrhea and abdominal bloating, sometimes rectal bleeding, loss of appetite and weight loss, anemia, cramping abdominal pain and fever. In addition to the gastrointestinal tract, extra-intestinal lesions may occur in joints, eyes, skin and liver, and fatigue is one of the common medical conditions.
  • ulcerative colitis is a chronic inflammation in which the disease site is limited to the large intestine, and affects the surface layer of the large intestine.
  • Signs of ulcerative colitis are diarrhea and bloody stool, which may be accompanied by convulsive abdominal pain and severe urgency. When moderate to severe, fatigue, loss of appetite and weight loss appear, and anemia can occur if bleeding is severe.
  • skin disorders, joint pain, liver diseases, etc. can occur. Developmental disorders can occur in children with ulcerative colitis.
  • ulcerative colitis Treatment of ulcerative colitis includes aminosalicylate, steroids, immunomodulators (azathiopurine, 6-mercaptopurine) and biological products (TNF- ⁇ inhibitor: inflixamab), blood cell ablation therapy (leukocyte ablation therapy, Granulocyte removal therapy) is used.
  • TNF- ⁇ inhibitor inflixamab
  • blood cell ablation therapy leukocyte ablation therapy, Granulocyte removal therapy
  • 10-15% of patients with ulcerative colitis do not respond to medical treatment and require colectomy by surgery.
  • the standard method of surgery is ileal pouch anal (tube) anastomosis, but ileositis occurs in about 30% of cases.
  • Galectin 9 is one of animal lectins having specificity for ⁇ -galactoside and has various immunoregulatory activities.
  • Galectin 9 suppresses inflammatory cytokines such as TNF- ⁇ , while increasing the anti-inflammatory cytokine IL-10. Further, it suppresses inflammatory Th1 cells and Th17 cells, and increases inflammation-suppressing inhibitory T cells (Non-patent Documents 5 and 6).
  • galectin-9 administration has a therapeutic effect in inflammatory disease models such as rheumatism, multiple sclerosis, and asthma (Non-patent Documents 5-8)
  • galectin 9 identified as an eosinophil migration factor is expressed in the cells of the gastrointestinal tract and immune system and is involved in the inflammatory mechanism, and as described above, it was administered to inflammatory disease models such as experimental rematous. In some cases, anti-inflammatory effects have been reported, and expectations as therapeutic agents are increasing.
  • an object of the present invention is to provide a method for diagnosing diseases such as enteritis by galectin 9, a method for treating or preventing a disease, a kit for diagnosing a disease, and a drug for treating or preventing a disease based on these findings.
  • a method for diagnosing a disease according to the present invention is a method for diagnosing at least one disease of enteritis and tumor, wherein the blood galectin 9 concentration is measured, and the galectin 9 concentration is measured according to the galectin 9 concentration. Diagnosing at least one selected from the group consisting of the presence or absence of a disease, the state of the disease, and the degree of the disease.
  • a method for treating or preventing a disease according to the present invention is a method for treating or preventing at least one disease of enteritis and tumor, which comprises treating or preventing the disease by administering galectin 9 to a patient. .
  • a diagnostic kit for a disease according to the present invention is a diagnostic kit for a disease of at least one of enteritis and tumor, and includes a galectin 9 detection reagent for measuring a blood galectin 9 concentration by an ELISA method. To do.
  • the medicament for treating or preventing a disease according to the present invention is a medicament for treating or preventing at least one disease of enteritis and tumor, which contains galectin 9 as an active ingredient.
  • a method for diagnosing diseases such as enteritis by galectin 9
  • a method for treating or preventing a disease a method for treating or preventing a disease
  • a kit for diagnosing a disease a drug for treating or preventing a disease
  • FIG. 1 shows the measurement results of plasma galectin 9 concentration for each disease.
  • Crohn represents pediatric Crohn's disease
  • Behcet represents intestinal Behcet's disease
  • UC pediatric ulcerative colitis
  • Polyp represents colon polyp
  • NC represents a healthy human sample.
  • FIG. 2 shows a correlation diagram between plasma galectin 9 concentration and CRP (C-reactive protein) concentration of each disease examined in FIG.
  • FIG. 3 shows a correlation diagram between the plasma galectin 9 concentration and the white blood cell (WBC) count examined in FIG.
  • WBC white blood cell
  • FIG. 5 shows the results of taking out the results before and after treatment of Crohn's disease and Behcet's disease from the plasma galectin 9 concentration examined in FIG. 1 and examining the correlation with the corresponding CRP concentration and eosinophil count.
  • FIG. 6 is an excerpt of the results of Crhon, UC and healthy people from FIG.
  • FIG. 7 is a graph showing the correlation between plasma galectin 9 concentration and white blood cells (WBC), eosinophils (Eosino), CRP, and PCDAI scores (Pediatric Crohn disease activity index) in childhood Crohn's disease.
  • 7A is extracted from FIG. 3
  • FIG. 7B is extracted from FIG. 4
  • FIG. 7C is extracted from FIG.
  • FIG. 7A is extracted from FIG. 3
  • FIG. 7B is extracted from FIG. 4
  • FIG. 8 is a graph showing the correlation between plasma galectin 9 concentration and white blood cell (WBC), eosinophil (Eosino), CRP, and PUCAI scores (Pediatric Ulcerative Colitis Activity Index) at the time of measurement in pediatric ulcerative colitis .
  • WBC white blood cell
  • Eosino eosinophil
  • CRP eosinophil
  • PUCAI scores Pediatric Ulcerative Colitis Activity Index
  • FIG. 11 shows the experimental results in adult ulcerative colitis (UC) and adult Crohn's disease (CD).
  • FIG. 11 (A) shows the expression level of galectin-9 mRNA in each of the large intestine mucosa tissue biopsies of healthy individuals, active UC patients, and active CD patients.
  • FIG. 11 (B) shows the measurement result of serum galectin 9 concentration of CD (mixed active and inactive) patients.
  • FIG. 11C is an image obtained by examining the expression of galectin 9 in the large intestine of CD patients by immunohistochemical staining.
  • FIG. 12 shows the effect of recombinant galectin 9 administration in a TNBS-induced mouse CD model.
  • FIG. 12 (A) shows a macroscopic observation image of the large intestine 3 days after TNBS enema.
  • FIG. 12 (B) shows a damage score obtained by scoring mucosal lesions.
  • FIG. 11 (C) is a tissue stained image of the large intestine by hematoxylin / eosin staining.
  • FIG. 11D shows the histological score measurement result.
  • FIG. 13 shows the results of examining neutrophil infiltration into the mucosa of the large intestine and cytokine expression level in the mouse CD model of FIG.
  • FIG. 13 (A) shows neutrophil infiltration (mU / mg ⁇ prt).
  • FIG. 14 shows the effect of recombinant galectin 9 administration in a mouse CD model elicited by transferring naive T cells into immunodeficient mice.
  • (A) shows changes in body weight up to 8 weeks after cell transfer.
  • FIG. 14B shows a damage score obtained by scoring a medical condition.
  • FIG. 14C shows a histological observation result of hematoxylin and eosin staining of the large intestine.
  • FIG. 14D shows a histological score of colon tissue damage.
  • FIG. 15 shows the results of examining cytocan production by CD3 / CD28 stimulation of CD4 positive cells isolated from the colonic mucosa of the mouse CD model of FIG.
  • the present inventors have conducted extensive research and found that galectin 9 in plasma or serum changes in response to disease state in intestinal inflammation. Among the intestinal inflammation, remarkable signs were seen particularly in Crohn's disease (CD) and Behcet's disease (BD). Furthermore, it was shown that recombinant galectin 9 administration improved symptoms in two mouse CD models.
  • a colon tumor, a polyp, etc. are mentioned.
  • the method for measuring the concentration of galectin 9 in the blood (plasma or serum) is not particularly limited, and examples thereof include an ELISA method, an FIA method, an RIA method, an immunochromatography method, and a mass spectrometry method.
  • Galectin 9 is not limited to natural (wild-type) galectin 9 alone, for example, a galectin 9 variant (variant) having substantially the same activity as natural (wild-type) galectin 9 or the like. It may be.
  • the galectin-9 variant has, for example, an activity such as specifically binding to a specific sugar chain possessed by the sugar chain recognition site of galectin 9 or an activity similar thereto (including qualitative activity and / or Or a substance that provides quantitative activity).
  • Galectin 9 (wild-type galectin 9) has, for example, apoptosis-inducing activity against specific cells.
  • the galectin-9 variant has the apoptosis-inducing activity of wild-type galectin 9 or an activity similar thereto.
  • the biological activity of galectin 9 may be altered or modified, and in some cases, it is more preferable.
  • the modified galectin 9 is a biologically active reagent, which is equivalent to or more preferable than the wild type galectin 9 in the field of clinical examination, analysis, or medicine or medicine. It may show properties.
  • enteritis is not particularly limited, but for example, Crohn's disease, intestinal Behcet's disease, ulcerative colitis, simple ulcer, nonspecific small intestinal ulcer, drug enteritis, infectious enteritis, etc. Is mentioned.
  • the Crohn's disease is not particularly limited, and examples thereof include childhood Crohn's disease and adult Crohn's disease.
  • Example 1 Trend of blood galectin 9 in intestinal inflammation in children
  • the experimental method and results relating to the measured value of blood galectin 9 in intestinal inflammation in children will be described below.
  • Diagnosis subjects include Crohn's disease (CD) 3 cases (12-14 years, 2 males), Behcet's disease (BD) 3 cases (9-16 years, 1 male), ulcerative colitis (UC) 13 cases (5 to 16 years old, 4 males), polyp (Pl) 4 cases (1 to 7 years old, 2 males) food / gastrointestinal allergy (FA) 14 cases (0 to 6 years old, 6 males), control ( NC) were selected from 8 cases (2 to 14 years old, 5 men).
  • CD Crohn's disease
  • BD Behcet's disease
  • UC ulcerative colitis
  • Pl polyp
  • FA food / gastrointestinal allergy
  • NC control
  • the main criteria for the diagnosis of Crohn's disease are the following (A) to (C). Furthermore, the following (D) to (F) are sub-findings.
  • A Longitudinal ulcer In the case of the small intestine, it frequently occurs on the side of the intestinal membrane attached.
  • B Paving stone image
  • C Non-drying epithelioid cell granuloma The diagnostic rate is improved by making serial sections.
  • D Irregular to circular ulcer or after observed in a wide range of the digestive tract Typically, it is tandem but may not be tandem.
  • E Characteristic anal lesions Anal fissure, cavitating ulcer, perianal abscess, edematous appendix and the like.
  • F Characteristic stomach, duodenal lesion bamboo nodular appearance, notch-like depression, etc.
  • A Clinical symptoms: persistent or repetitive mucus / blood stool, or a history thereof.
  • B 1. endoscopy (1) The mucous membrane is diffused, the vascular fluoroscopy image disappears and presents a rough or fine granule shape. In addition, it is brittle and easy to bleed (contact bleeding) with mucous purulent secretions attached, (2) Multiple erosions, ulcers or pseudopolyposis is observed. 2.
  • Enema X-ray examination (1) Diffuse change of mucosal surface of coarse or fine granules, (2) Multiple erosions, ulcers (3) Pseudopolyposis is observed. (4) In addition, disappearance of the house tiger (lead tube image) and narrowing / shortening of the intestinal tract are observed. C: Biopsy histological examination: In the active phase, diffuse inflammatory cell infiltration, crypt abscess, and high goblet cell depletion are observed in all layers of the mucosa. Since all are non-specific findings, comprehensive judgment is made. During remission, abnormal glandular arrangement (meandering / branching) atrophy remains. The above changes are usually seen on the oral side from the rectum continuously.
  • FIG. 1 shows the measured value (pg / ml) of plasma galectin 9 concentration for each disease (p ⁇ 0.05).
  • the horizontal axis represents each disease, and the vertical axis represents plasma galectin 9 concentration (pg / ml).
  • the number of specimens used was 5 specimens from 3 CDs, 8 specimens from 3 BDs, 24 specimens from 13 UCs, 4 specimens from 4 PLs, 14 specimens from 13 FAs, and 8 NCs 8 specimens.
  • Table 1 below shows the average plasma galectin 9 concentration for each disease. As shown in FIG. 1 and Table 1, the BD and FA groups were significantly higher than the NC.
  • Both CD and BD constitute pediatric inflammatory bowel disease whose cause is unknown, but have a higher galectin-9 concentration than UC of the same IBD, and are useful for acute differential diagnosis of childhood IBD, which is often difficult.
  • Example 2 Correlation between plasma galectin 9 and CRP, leukocytes (WBC), eosinophils]
  • WBC leukocytes
  • eosinophils the correlation between plasma galectin 9 and CRP, leukocytes, and eosinophils was confirmed as follows. Note that the measurement conditions and the like were the same as in Example 1 unless otherwise described.
  • CRP Correlation between plasma galectin 9 and CRP was measured by Hitachi Labspect 008 latex turbidimetry, and the correlation between plasma galectin 9 and CRP was examined.
  • FIG. 2 shows a correlation diagram between plasma galectin 9 and CRP.
  • the horizontal axis represents the measured value of CRP concentration (mg / dL), and the vertical axis represents the measured value of plasma galectin 9 concentration (pg / mL).
  • WBC White blood cells
  • FIG. 3 shows a correlation diagram between plasma galectin 9 and WBC.
  • the horizontal axis represents the measured value of WBC concentration (pg / mL), and the vertical axis represents the measured value of plasma galectin 9 concentration (pg / mL).
  • FIG. 4 shows a correlation diagram between plasma galectin 9 and eosinophil count.
  • the horizontal axis represents the measured value (/ ⁇ L) of eosinophil number concentration, and the vertical axis represents the measured value (pg / mL) of plasma galectin 9 concentration.
  • Example 3 Transition of plasma galectin-9, CRP, and eosinophil count before and after treatment of Crohn's disease and Behcet's disease
  • changes in plasma galectin-9, CRP, and eosinophil count before and after treatment for Crohn's disease and Behcet's disease will be described.
  • the measurement conditions and the like were the same as in Example 1 or 2 unless otherwise described.
  • FIG. 5 shows the transition results of plasma galectin-9, CRP, and eosinophil count before and after treatment for Crohn's disease and Behcet's disease.
  • the left side shows the transition result of CRP (mg / dL), and the right side shows the transition result of eosinophil count (/ ⁇ L).
  • the galectin 9 concentration decreased with the sedation of the disease, but the number of eosinophils tended to increase.
  • Example 4 Measurement method and measurement result of childhood Crohn's disease and ulcerative colitis with plasma galectin 9
  • data on childhood Crohn's disease and ulcerative colitis were extracted from Example 1, and the difference between both enteritis was examined using plasma galectin 9 concentration as an incision.
  • Example 1 The specimen and data from Example 1 were used. However, one of the patients diagnosed with pediatric ulcerative colitis in Example 1 was determined to have pediatric Crohn's disease in the subsequent course, resulting in 4 pediatric Crohn's disease patients and 12 pediatric ulcerative colitis. The control group was increased by one sample to 9 people.
  • Example 5 Correlation between plasma galectin 9 and various parameters in childhood Crohn's disease and childhood ulcerative colitis
  • childhood Crohn's disease and ulcerative colitis were extracted from the data obtained in Examples 1 to 3, and the correlation between plasma galectin 9 and various parameters was compared.
  • PCDAI scores were compared for pediatric Crohn's disease
  • PUCAI scores were compared for pediatric ulcerative colitis.
  • FIG. 8A shows the correlation with WBC
  • FIG. 8B shows the correlation with Eosino
  • FIG. 8C shows the correlation with CRP
  • FIG. 8D shows the correlation with PUCAI.
  • Example 6 Measurement of plasma galectin 9 in Crohn's disease and ulcerative colitis in active phase
  • the correlation between plasma galectin 9 and PCDAI will be described, limited to the active period, in childhood Crohn's disease and ulcerative colitis.
  • Data are excerpts from Example 5.
  • Statistical analysis was performed using linear regression analysis with STATA11.
  • Galectin 9 measurement results and PCDAI scores are excerpts from Example 5.
  • FIG. 9 shows the measurement results of plasma galectin 9 concentration for each disease. As shown in FIG. 9, it was found that patients with active childhood Crohn's disease had significantly higher plasma galectin 9 as compared with patients with active childhood ulcerative colitis. Statistical analysis was performed by Mann-Whitney test using STATA11.
  • Example 7 Change in plasma galectin 9 after treatment in active childhood Crohn's disease patients
  • FIG. 10 shows the results of the transition of plasma galectin 9 after treatment in active childhood Crohn's disease patients.
  • the horizontal axis shows PCDAI (Pediatric Crohn's Disease Activity Index) value after the start of treatment, and the vertical axis shows plasma galectin 9 concentration (pg / mL).
  • PCDAI Pulsed Crohn's Disease Activity Index
  • Example 8 mRNA expression of galectin 9 in active Crohn's disease in active phase
  • galectin-9 mRNA expression in adult Crohn's disease in the active phase was confirmed.
  • FIG. 11 (A) shows the mRNA expression level of galectin 9 in the healthy subject, active phase UC, and active phase CD as a ratio of the ⁇ actin mRNA expression level from the left of the horizontal axis.
  • the expression of galectin 9 was increased in the active CD colonic mucosa (* p ⁇ 0.05 vs. normal colonic mucosa).
  • Statistical analysis was confirmed by One-way ANOVA using Prism 5 (Graphpad Software) and then examined by Bonferroni multiple analysis.
  • Example 9 Measurement result of serum galectin 9 concentration in adult Crohn's disease patients in active phase and inactive phase
  • measurement results of serum galectin 9 concentration will be described for adult Crohn's disease patients in active and inactive periods.
  • Example 10 Protein expression of galectin 9 in the large intestine of patients with Crohn's disease
  • protein expression of galectin 9 in the large intestine of Crohn's disease patients will be described.
  • [Measurement target] The tissue of the large intestine lesion in an operation example of Crohn's disease patient was used. As a control, a healthy part of the large intestine from a colon cancer surgical case was used. The diagnostic criteria for Crohn's disease were the same as in Example 1.
  • [Measurement target] Measurement Method Paraffin sections prepared from the target tissues were stained by an immunostaining method using an anti-human galectin-9 monoclonal antibody (clone 9M1-3). For detection, a Nichirei kit using a biotinylated secondary antibody and horseradish peroxidase-labeled streptavidin was used to visualize the expression site by pigmentation of the chromogenic substrate DBA.
  • Example 11 Effect of galectin 9 administration
  • the effect of galectin 9 administration will be described.
  • TNBS enteritis which is one of the Crohn's disease models for mice, was prepared by enemalating TNBS enteritis in mice.
  • TNBS enteritis (Creation of TNBS enteritis) The creation of a TNBS enteritis model, which is considered to be a mouse Crohn's disease model, as well as It carried out by the method of description. Briefly, it was prepared by enema administration of TNBS (200 mg / kg) to mice.
  • Galectin 9 (10 ⁇ g) was intraperitoneally administered once immediately after the TNBS enema. Then, lesions were evaluated 3 days after TNBS enema. Galectin 9 used in this experiment is a human-type novel galectin-9 variant protein described in WO2005 / 093064 (Patent Document 1).
  • Damage score is Harusato, A. et al. BTB and CNC Homolog1 (Bach1) Deficiency Ameliorates TNBS Colitis in Mice: Role of M2 Macrophages and Heme Oxygenase-1. Inflamm Bowel Dis, 19, 740-753 (2013) It was digitized according to the criteria described in Reference 1).
  • FIG. 12 (A) shows changes in lesions 3 days after TNBS enema.
  • (a) shows the control which did not administer galectin 9
  • (b) shows what administered galectin 9.
  • FIG. 12 (A) the development of lesions was clearly suppressed in the galectin-9 administration group in the macroscopic image.
  • FIG. 11B shows a damage score obtained by scoring mucosal lesions.
  • FIG. 11C is a colon tissue image stained with hematoxylin and eosin.
  • A is a mouse that is not TNBS enema
  • b is a mouse that is TNBS enema and not administered galectin 9
  • c is a TNBS enema
  • the mice to which galectin 9 was administered are shown.
  • (c) (galectin 9 administration group) alleviated these histological changes. It was.
  • FIG. 11D shows the histological score measurement result.
  • Statistical analysis was performed by Student's t-test using Prism 5.
  • Example 12 Inhibition of neutrophil infiltration and cytokine expression in colonic mucosa by administration of galectin 9]
  • neutrophil infiltration and cytokine expression in the colonic mucosa in TNBS enteritis will be described.
  • TNBS enema and galectin 9 administration were performed in the same manner as in Example 11.
  • Measurement of neutrophil infiltration in the mucosa of the large intestine is Harusato, A. et al. BTB and CNC Homolog1 (Bach1) Deficiency Ameliorates TNBS Colitis in Mice: Role of M2 Macrophages and Heme Oxygenase-1. InflammBowelDis- 7 (2013) (Non-Patent Document 1) and Takagi, Tomohisa et al. Inhalation of Carbon Monoxide Ameliorates TNBS-Induced Colitis in Mice Through the Inhibition of TNF- ⁇ Expression. Dig Dis Sci, 55, 2797-804 (Non-Patent Document 1) According to the method described in Patent Document 2), the measurement was performed indirectly by measuring myeloperoxidase activity.
  • FIG. 13 shows neutrophil infiltration and cytokine expression levels in the mucosa of the large intestine.
  • 13 (A) shows neutrophil infiltration (mU / mg ⁇ prt)
  • FIG. 13 (B) shows TNF- ⁇
  • FIG. 13 (C) shows TNF- ⁇
  • FIG. 13 (D) shows IL- The expression level of 17A mRNA is shown.
  • the Sham group is a TNBS intestinal injection group and is a control of the TNBS intestinal injection group. As shown in FIGS.
  • Example 13 Onset inhibition / lesion progression inhibition effect by galectin 9 administration
  • the onset suppression / lesion progression suppression effect of galectin 9 administration will be described.
  • enteritis model As a model of enteritis with strong involvement of immunocompetent cells, enteritis was induced by transferring naive T cells (CD4 + CD45RB high ) into immunodeficient mice (SCID). Details of the method are described in Totshka, T. et al. Ameliorating Effect of Anti-inducible Costimulator Monoclonal Antibody in a Murine Model of Chronic Colitis. Gastroenterology, 124, 410-421 (2003) (Non-patent Document 3). . This model is also considered as a CD model.
  • Galectin 9 was administered intraperitoneally at 100 ⁇ g / week and observed for 8 weeks after cell transfer. Galectin 9 used in this experiment is It is the described human-type novel galectin-9 variant protein.
  • FIG. 14 shows the results of this example.
  • Statistical analysis was performed using Prism 5, and after confirmation by One-way ANOVA, it was examined by Bonferroni multiple analysis.
  • FIG. 14C shows a hematoxylin-eosin stained image of the large intestine tissue.
  • glandular structure destruction and inflammatory cell infiltration were slight in the galectin 9 administration group.
  • Example 14 Inflammatory cytokine production in naive T cell transfer enteritis model and its suppression by galectin-9 administration
  • lamina propria lymphocytes were collected from the galectin 9 administration group and the non-administration group in the naive T cell transfer enteritis model of Example 13 and examined for inflammatory cytokine production by CD3 / CD28 stimulation.
  • the enteritis model was created in the same manner as in Example 13.
  • LPL Collecting lamina limbal lymphocytes
  • CD3 / CD28 stimulation The method of CD3 / CD28 stimulation is Takagi, Tomohisa et al. Inhalation of Carbon Monoxide Ameliorates TNBS-Induced Colitis in Mice Through the Inhibition of TNF- ⁇ Expression. Dig Dis Sci, 55, 2797-804 (2010) ). .
  • TNF- ⁇ , IFN- ⁇ and IL-17 concentrations were measured using an R & D ELISA kit.
  • diseases such as enteritis can be diagnosed by measuring serum / plasma galectin-9, for example. Diagnosis by galectin-9 measurement may be superior to existing markers in the following respects. That is, the pathology of enteritis has many unknown parts, and there are few effective diagnostic markers.
  • CRP which is a general serum / plasma inflammation marker, tends to increase in active enteritis, but the CRP value may be within the normal range despite symptoms such as bloody stool. In Crohn's disease, there are often cases in which intestinal stenosis progresses and surgery is forced even though the CRP value is normal.

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Abstract

　ガレクチン９による腸炎等の疾患の診断方法を提供する。　本発明による疾患の診断方法は、腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患の診断方法であって、血中のガレクチン９濃度を測定し、前記ガレクチン９濃度に応じて前記疾患の有無、前記疾患の状態および前記疾患の程度からなる群から選択される少なくとも一つを診断することを特徴とする。

Description

疾患の診断方法、疾患の治療または予防方法、疾患の診断用キット、疾患の治療または予防用医薬
　本発明は、疾患の診断方法、疾患の治療または予防方法、疾患の診断用キット、疾患の治療または予防用医薬に関する。
　炎症性腸疾患は難治性で原因不明の慢性または再発性の疾患で消化管における過剰免疫と炎症を特徴とする。この疾患にはクローン病と潰瘍性大腸炎が含まれており、それぞれ病原は異なると考えられているが、両者に共通するのは免疫系の異常反応であり、取り込んだ食物や菌体、腸管の固有菌や自らの消化管に対して過剰な反応を起こし、消化管の慢性的な炎症を引き起こす、と推測されている。
　クローン病は消化管のあらゆる場所で起こり得るが、特に小腸の末端部から大腸に頻発する。徴候は、下痢、腹部膨満感で、時に直腸出血、食欲不振と体重減少、貧血、痙攣腹痛や発熱も起こす。消化管以外にも関節、目、皮膚と肝臓にも腸管外病変が出ることもあり、また疲労も一般的な病状の一つである。
　現在のクローン病の治療薬の選択肢にはアミノサリチル酸塩、ステロイド、免疫調節薬（アザチオプリン、6-メルカプトプリンとメトトレキサート）、栄養療法（成分栄養剤、半消化態栄養剤）、抗生物質、好中球除去療法と生物学的製剤（TNF-α阻害剤：inflixamab,　adalimumab）がある。また薬物でのコントロールが不能になった場合には手術が必要で、クローン病患者の2/3~3/4は生涯の内に手術を受ける必要が生じるといわれている。
　一方、潰瘍性大腸炎は、疾患部位が大腸に限定される慢性炎症で、大腸の表層を主座とした影響を及ぼす。潰瘍性大腸炎の徴候は、下痢と血便で、痙攣腹痛とひどい切迫性を伴う場合もある。中等症から重症になると疲労、食欲不振と体重減少が出現し、出血がひどい場合には貧血も起こり得る。加えて、皮膚障害、関節痛、肝臓疾患等も起こりえる。潰瘍性大腸炎の子供には発育障害が起こり得る。
　潰瘍性大腸炎の治療には、アミノサリチル酸塩、ステロイド、免疫調節薬（アザチオプリン、6-メルカプトプリン）と生物学的製剤（TNF-α阻害剤：inflixamab）、血球成分除去療法（白血球除去療法、顆粒球除去療法）が使われる。また潰瘍性大腸炎患者の10-15%は内科治療に反応せず、手術による結腸切除が必要となる。手術の標準術式は回腸嚢肛門(管)吻合術であるが、３０%程度の症例で回腸嚢炎が生じる。
　ガレクチン９はβガラクトシドに特異性をもつ動物レクチンのひとつであり、様々な免疫制御活性を有する。
　ガレクチン９はＴＮＦ―α等の炎症性サイトカインを抑制し、一方で抗炎症サイトカインＩＬ－１０を上昇させる。また炎症性のＴｈ１細胞やＴｈ１７細胞を抑制し、炎症抑制性の抑制性Ｔ細胞を増加させる（非特許文献５、６）
　したがってガレクチン９投与はリウマチ、多発性硬化症、喘息等の炎症性疾患モデルにおいて治療効果を示す（非特許文献５－８）
ＷＯ２００５／０９３０６４
Harusato,　A.　et　al.　BTB　and　CNC　Homolog1　（Bach1）　Deficiency　Ameliorates　TNBS　Colitis　in　Mice:　Role　of　M2　Macrophages　and　Heme　Oxygenase-1.　Inflamm　Bowel　Dis,　19,　740-753　(2013) Takagi,　Tomohisa　et　al.　Inhalation　of　Carbon　Monoxide　Ameliorates　TNBS-Induced　Colitis　in　Mice　Through　the　Inhibition　of　TNF-α　Expression.　　Dig　Dis　Sci,　55,　2797-804　(2010) Totshka,　T.　et　al.　Ameliorating　Effect　of　Anti-inducible　Costimulator　Monoclonal　Antibody　in　a　Murine　Model　of　Chronic　Colitis.　Gastroenterology,　124,　410-421　(2003) Totsuka,　T.　et　al.　IL-7　Is　Essential　for　the　Development　and　the　Persistence　of　Chronic　Colitis.　The　Journal　of　immunology,178，　4737-4748　(2007) Seki,　M.　et　al.　Galectin-9　suppresses　the　generation　of　Th17,　promotes　the　induction　of　regulatory　T　cells,　and　regulates　experimental　autoimmune　arthritis.　Clinical　Immunology，127,　78-88　(2008) Arikawa，T.　et　al.　　Galectin-9　ameliorates　immune　complex-induced　arthritis　by　regulating　FcγR　expression　on　macrophages.　Clinical　Immunology，133，382-392（2009） Zhu,　C.　et　al.　The　Tim-3　ligand　galectin-9　negatively　regulate　T　helper　type　1　immunity.　Nature　Immunology,　6,　1245-1252　(2005) Katoh,　S.　et　al.　Galectin-9　Inhibits　CD44-Hyaluronan　Interaction　and　Suppresses　a　Murine　Model　of　Allergic　Asthma.　American　Journal　of　Respiratory　and　Critical　Care　Medicine.　176,　27-35　(2007)
　さらに、好酸球遊走因子として同定されたガレクチン９は、消化管と免疫系の細胞に発現し、炎症メカニズムに関与しているほか、前述のように実験リマウチ等の炎症性疾患モデルに投与した場合の抗炎症作用が報告され、治療薬としての期待も増大している。
　そこで、本発明は、これらの知見に基づいて、ガレクチン９による腸炎等の疾患の診断方法、疾患の治療または予防方法、疾患の診断用キット、疾患の治療または予防用医薬を提供することを目的とする。
　前記目的を達成するために、本発明による疾患の診断方法は、腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患の診断方法であって、血中のガレクチン９濃度を測定し、前記ガレクチン９濃度に応じて前記疾患の有無、前記疾患の状態および前記疾患の程度からなる群から選択される少なくとも一つを診断することを特徴とする。
　本発明による疾患の治療または予防方法は、腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患を治療または予防する方法であって、患者にガレクチン９を投与することにより前記疾患を治療または予防することを特徴とする。
　本発明による疾患の診断用キットは、腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患の診断用キットであって、血中のガレクチン９濃度をＥＬＩＳＡ法により測定するためのガレクチン９検出試薬を含むことを特徴とする。
　本発明による疾患の治療または予防用医薬は、ガレクチン９を有効成分として含む、腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患の治療または予防用医薬である。
　本発明によれば、ガレクチン９による腸炎等の疾患の診断方法、疾患の治療または予防方法、疾患の診断用キット、疾患の治療または予防用医薬を提供することができる。
図１は、各疾患の血漿ガレクチン９濃度の測定結果を示す。なお図１で　Crohn　は小児クローン病、Behcet　は腸管ベーチェット病、UC　は小児潰瘍性大腸炎、Polyp　は大腸ポリープ、NC　は健常人検体を表す。 図２は、図１で調べた各疾患の血漿ガレクチン９濃度とＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）濃度との相関図を示す。 図３は、図１で調べた血漿ガレクチン９濃度と白血球（ＷＢＣ）数との相関図を示す。 図４は、図１で調べた血漿ガレクチン９濃度と好酸球数との相関図を示す。 図５は、図１で調べた血漿ガレクチン９濃度より、クローン病およびベーチェット病の治療前後の結果を取り出し、対応するＣＲＰ濃度、好酸球数との相関を調べた結果を示す。 図６は、図１より　Crhon、UC　および健常人の結果を抜粋したものである。 図７は、小児クローン病において、血漿ガレクチン９濃度と測定時の白血球（ＷＢＣ）、好酸球（Ｅｏｓｉｎｏ）、ＣＲＰ、ＰＣＤＡＩスコア（Pediatric　Crohn　disease　activity　index）の相関を示した図である。図７（ａ）は図３より抜粋、図７（ｂ）は図４より抜粋、図７（ｃ）は、図２より抜粋した。 図８は、小児潰瘍性大腸炎において、血漿ガレクチン９濃度と測定時の白血球（ＷＢＣ）、好酸球（Ｅｏｓｉｎｏ）、ＣＲＰ、ＰＵＣＡＩスコア（Pediatric　Ulcerative　Colitis　Activity　Index）の相関を示した図である。図８（ａ）は、図３より抜粋、図８（ｂ）は図４より抜粋、図８（ｃ）は、図２より抜粋した。 図９は、図７より活動期の小児クローン病（ＣＤ）を図８より活動期の小児潰瘍性大腸炎の結果を抜き出して統計解析したものである。 図１０は、図５と図７より治療前後の血漿ガレクチン９濃度とＰＣＤＡＩスコアのデータを抜き出して相関を調べたものである。 図１１は成人潰瘍性大腸炎（ＵＣ）および成人クローン病（ＣＤ）での実験結果を示す。図１１（Ａ）は、健常人、活動期ＵＣ患者、活動期ＣＤ患者の各大腸粘膜組織生検におけるガレクチン９ｍＲＮＡ発現量を示す。図１１（Ｂ）は、ＣＤ（活動期と非活動期が混在）患者の血清ガレクチン９濃度の測定結果を示す。図１１（Ｃ）は、ＣＤ患者の大腸におけるガレクチン９発現を免疫組織染色により調べた像である。 図１２はＴＮＢＳ誘導性のマウスＣＤモデルにおけるリコンビナントガレクチン９投与の効果を示す。図１２（Ａ）は、ＴＮＢＳ注腸後、３日後の大腸の巨視的な観察像を示す。図１２（Ｂ）は、粘膜病変をスコア化したDamage　scoreを示す。図１１（Ｃ）は、大腸のヘマトキシリン・エオシン染色による組織染色像である。図１１（Ｄ）は、組織学的スコア測定結果を示す。 図１３は図１２のマウスＣＤモデルにおける大腸粘膜中の好中球浸潤とサイトカイン発現量を調べた結果を示す。図１３（Ａ）は、好中球浸潤（ｍＵ／ｍｇ・ｐｒｔ）を示す。図１３（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）は、それぞれ、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－γ、ＩＬ－１７Ａの　ｍＲＮＡの発現量を示す。 図１４はナイーブＴ細胞を免疫不全マウスに移入することで惹起するマウスＣＤモデルにおけるリコンビナントガレクチン９投与の効果を示す。（Ａ）では、細胞移入後８週間までの体重変化を示す。図１４（Ｂ）では、病状をスコア化したダメージスコアを示す。図１４（Ｃ）では、大腸のヘマトキシリン・エオシン染色による組織学的観察結果を示す。図１４（Ｄ）では、大腸組織ダメージの組織学的スコアを示す。 図１５は、図１４のマウスＣＤモデルの大腸粘膜より単離したＣＤ４陽性細胞をＣＤ３／ＣＤ２８刺激してサイトカン産生を調べた結果を示す。
　以下、本発明について、例を挙げて詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の説明により限定されない。
　本発明者らは、鋭意研究を行い、腸管炎症において血漿または血清中のガレクチン９は、病勢に応じて変化することを発見した。前記腸管炎症の中でも、特にクローン病（ＣＤ）およびベーチェット病（ＢＤ）で顕著な兆候が見られた。さらに、二種類のマウスＣＤモデルにおいてリコンビナントガレクチン９投与が症状を改善することを示した。なお、前記腫瘍としては、特に限定されないが、例えば、大腸腫瘍、ポリープ等が挙げられる。前記血中（血漿または血清中）のガレクチン９濃度の測定方法も、特に限定されないが、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ＦＩＡ法、ＲＩＡ法、イムノクロマトグラフィー法、質量分析法等が挙げられる。
[ガレクチン９]
　本発明において、「ガレクチン９」とは、天然（野生型）ガレクチン９のみに限定されず、例えば、天然（野生型）ガレクチン９と実質的に同等の活性を有するガレクチン９改変体（バリアント）等であっても良い。ガレクチン９改変体は、例えば、ガレクチン９の糖鎖認識部位が保有する特定の糖鎖に対して特異的に結合するといった活性又はそれと類似した活性（本活性のうちには定性的な活性及び／又は定量的な活性が含まれてよい）を提供する物質であっても良い。ガレクチン９（野生型ガレクチン９）は、例えば、特定の細胞に対してアポトーシス誘導活性を有するが、本発明において、前記ガレクチン９改変体は野生型ガレクチン９が有するアポトーシス誘導活性あるいはそれと類縁の活性を有するものであってよく、ガレクチン９が有する生物活性が改変又は修飾されているものであってよいし、ある場合にはより好ましい。本発明において、ガレクチン９改変体とは、生物活性を有する試薬として、臨床検査の分野、分析の分野、あるいは医学又は医薬などの分野で、野生型ガレクチン９と同等又は野生型ガレクチン９よりは好ましい性質を示すものであっても良い。
[診断対象]
　本発明の診断方法の対象について、腸炎は、特に限定されないが、例えば、クローン病、腸管ベーチェット病、潰瘍性大腸炎、単純性潰瘍、非特異的小腸潰瘍、薬剤性腸炎、および感染性腸炎等が挙げられる。前記クローン病は、特に限定されないが、例えば、小児クローン病および成人クローン病が挙げられる。
　以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説明するが、この実施例は単に本発明の説明のため、その具体的な態様の参考のために提供されているものである。これらの例示は本発明の特定の具体的な態様を説明するためのものであるが、本願で開示する発明の範囲を限定したり、あるいは制限することを表すものではない。本発明では、本明細書の思想に基づく様々な実施形態が可能であることは理解されるべきである。
　以下の実施例は、当業者であれば、当該実施例における詳細な記載及び本願出願時の技術常識に基づいて、過度の試行錯誤を要することなく実施することができる。また、以下の実施例において、観察された現象が起こるメカニズムの考察を示している場合は、そのメカニズムは、可能性の一つを示すものであって、本発明を限定するものではない。
［実施例１：小児の腸管炎症における血中ガレクチン９の動向］
　以下に小児の腸管炎症における血中ガレクチン９の測定値に関する実験方法および結果について説明する。
［対象］
　小児腸管炎症を対象とし、平成２２年１月より平成２３年９月に来院した患者より、一般採血検査の際に得られた血漿を凍結保存し、連結番号化して他のデータと分離して保存した。診断対象として、クローン病（ＣＤ）３例（１２～１４才、男２例）、ベーチェット病病（ＢＤ）３例（９～１６才、男１例）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）１３例（５～１６才、男４例）、ポリープ（Ｐｌ）４例（１～７才、男２例）食物／消化管アレルギー（ＦＡ）１４例（０～６才、男６例）、コントロール（ＮＣ）として８例（２～１４才、男５例）が採用された。
　前記クローン病及び潰瘍性大腸炎は、「難治性炎症性腸管障害に関する調査研究」班（渡辺班）による平成23年度分担研究報告書」で出されている診断基準（後述）をもとに診断した。ベーチェット病は、２００３年厚生労働省研究班によるベーチェット病の診断基準に基づき、臨床症状・内視鏡所見から診断した。ポリーブは、血便精査のため大腸内視鏡をおこない、大腸ポリープと診断した。食物／消化管アレルギーは、臨床経過・症状・特異的ＩｇＥ抗体陽性から診断した。
[クローン病診断基準]
　クローン病診断基準は、以下の（Ａ）～（Ｃ）を主要所見とする。さらに、以下の（Ｄ）～（Ｆ）を副所見とする。
Ａ：縦走潰瘍　
　　小腸の場合は、腸管膜付着側に好発する。
Ｂ：敷石像
Ｃ：非乾酪性類上皮細胞肉芽腫
　　連続切片作成により診断率が向上する。
Ｄ：消化管の広範囲に認める不整形～類円形潰瘍又はアフタ
　　典型的には縦列するが、縦列しない場合もある。
Ｅ：特徴的な肛門病変
　　裂肛、ｃａｖｉｔａｔｉｎｇ　ｕｌｃｅｒ、肛門周囲膿瘍、浮腫状皮垂など。
Ｆ：特徴的な胃、十二指腸病変
　　竹の節状外観、ノッチ様陥凹など。
[潰瘍性大腸炎診断基準]
　以下、Ａのほか、Ｂのうちの１項目、およびＣを満たし、下記の疾患が除外できれば、確診とした。
 
Ａ：臨床症状：持続性又は反復性の粘血・血便、あるいは、その既往があること。
Ｂ：１．内視鏡検査　
　　（１）粘膜はびまん性におかされ、血管透見像は消失し、粗ぞうまたは細顆粒状を呈する。さらに、もろくて易出血性（接触出血）を伴い、粘血膿性の分泌物が付着しているか、
　　（２）多発性のびらん、潰瘍あるいは、偽ポリポーシスを認める。
　　２．注腸Ｘ線検査
　　（１）粗ぞうまたは細顆粒状の粘膜表面のびまん性変化、
　　（２）多発性のびらん、潰瘍
　　（３）偽ポリポーシスを認める。
　　（４）その他、ハウストラの消失（鉛管像）や腸管の狭小・短縮が認められる。
Ｃ：生検組織学的検査：活動期では、粘膜全層にびまん性炎症性細胞浸潤、陰窩膿瘍、高度な杯細胞減少が認められる。いずれも、非特異的所見であるので、総合的に判断する。寛解期では、腺の配列異常（蛇行・分岐）萎縮が残存する。上記変化は、通常直腸から連続性に口側にみられる。
 
　Ｂ、Ｃの検査が不十分、あるいは、施行できなくとも切除手術または剖検により、肉眼的および組織学的に本症に特徴的な所見を認める場合、下記の疾患が除外できれば確診とする。
　除外すべき疾患は、細菌性赤痢、アメーバ性大腸炎、サルモネラ腸炎、キャンピロバクタ腸炎、大腸結核、クラミジア腸炎などの感染性腸炎が主体で、その他にクローン病、放射線照射性大腸炎、薬剤性大腸炎、リンパ濾胞増殖症、虚血性大腸炎、腸型ベーチェット等がある。
[測定方法]
　以下、本実施例の測定方法について説明する。
（ガレクチン９の測定方法）
　ヒトガレクチン９濃度の定量はＥＬＩＳＡ法に従って行った。ＥＬＩＳＡ用９６ウエルプレート（ＮＵＮＣ）に抗ヒトガレクチン９モノクローナル抗体（クローン９Ｓ２－３、ガルファーマ）を添加して固相化し、その後、希釈したウシ胎児血清でブロッキングした。適度に希釈した検体および標準曲線用のリコンビナントヒトガレクチン９希釈系列を添加して抗ヒトガレクチン９抗体と反応させた。その後プレートを洗浄し、ビオチン化した抗ヒトガレクチン９ポリクローナル抗体（ガルファーマ）を添加してプレートに残存するガレクチン９と反応させた。プレートを洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識したストレプトアビジン（サーモバイオ）を添加して反応させた。プレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼの発色基質3,　3',　5,　5'-tetramethylbenzidine（ＫＰＬ）を添加して十分な発色が見られるまで室温・暗所で静置した後、リン酸を添加して反応を停止させ、プレートの発色をプレートリーダーで測定して数値化した。測定は　n=2　で行い、少なくとも２回繰り返しておこなって測定の平均値を血漿ガレクチン９濃度とした。
［測定結果］
　図１は、各疾患の血漿ガレクチン９濃度の測定値（ｐｇ／ｍｌ）結果を示す（ｐ＜０．０５）。横軸には、各疾患を示し、縦軸に血漿ガレクチン９濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。用いた検体数は３例のＣＤより５検体、３例のＢＤより８検体、１３例のＵＣより２４検体、４例のＰＬより４検体、１３例のＦＡより１４検体、そして８例のＮＣより８検体である。また、下記表１では、各疾患の血漿ガレクチン９濃度の平均値を示す。図１および表１に示すように、ＮＣと比較して、ＢＤ及びＦＡ群が有意に高値であった。一方、ＣＤ群、ＢＤ群、ＵＣ群で相対的に有意差は認められなかったが、下記表２に示すように、急性期のみを比較すると、ＵＣに比べ、ＣＤ群及びＢＤ群が、有意に高値であった。統計解析はＥＸＣＥＬをもちいたＦ検定法で行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　以上より、血漿中のガレクチン９は、各病変により上昇することが判明した。特にＢＤと食物アレルギーで顕著に見られた。食物アレルギーの検体は、主として乳児期の検体であるため、ＮＣと年齢構成が異なり、年齢による差異を反映している可能性がある。同じく年齢の若干低いポリーブ例でも有意差は、ないが、ＮＣに比較して高い傾向にある。
　ＣＤとＢＤは、ともに原因不明の小児炎症性腸疾患を構成するが、同じＩＢＤのＵＣと比較し、ガレクチン９濃度が高く、しばしば難渋する小児ＩＢＤの急性期鑑別診断に有用である。
［実施例２：血漿ガレクチン９とＣＲＰ、白血球（ＷＢＣ）、好酸球との相関］
　本実施例では、以下のとおり、血漿ガレクチン９とＣＲＰ、白血球、好酸球との相関について確認した。なお、測定条件等について、特に説明しない場合は、実施例１と同様にして行った。
［血漿ガレクチン９とＣＲＰとの相関］
　ＣＲＰは、日立ラボスペクト008　ラテックス比濁法で測定し、血漿ガレクチン９とＣＲＰとの相関を調べた。
［結果］
　図２は、血漿ガレクチン９とＣＲＰとの相関図を示す。横軸は、ＣＲＰ濃度の測定値（ｍｇ／ｄＬ）であり、縦軸は、血漿ガレクチン９濃度の測定値（ｐｇ／ｍＬ）を示す。
［血漿ガレクチン９と白血球（ＷＢＣ）との相関］
　白血球（ＷＢＣ）は、シスメックス社ＸＥ－２１００を用いて測定し、血漿ガレクチン９とＷＢＣとの相関を調べた。
［結果］
　図３は、血漿ガレクチン９とＷＢＣとの相関図を示す。横軸は、ＷＢＣ濃度の測定値（ｐｇ／ｍＬ）であり、縦軸は、血漿ガレクチン９濃度の測定値（ｐｇ／ｍＬ）を示す。
［血漿ガレクチン９と好酸球数との相関］
　好酸球数はシスメックス社ＸＥ－２１００を用いて測定し、血漿ガレクチン９と好酸球数の相関を調べた。
［結果］
　図４は、血漿ガレクチン９と好酸球数との相関図を示す。横軸は、好酸球数濃度の測定値（／μＬ）であり、縦軸は、血漿ガレクチン９濃度の測定値（ｐｇ／ｍＬ）を示す。
［実施例３：クローン病およびベーチェット病の治療前後による血漿ガレクチン９とＣＲＰ、好酸球数の推移］
　本実施例では、クローン病およびベーチェット病の治療前後による血漿ガレクチン９とＣＲＰ、好酸球数の推移について説明する。なお、測定条件等について、特に説明しない場合は、実施例１または２と同様にして行った。
［実験対象］
　治療前後のガレクチン９濃度の測定が可能であったクローン病２例、ベーチェット病１例を対象とした。
［実験方法］
　実施例２で説明した方法で、血漿ガレクチン濃度とＣＲＰ、好酸球数を測定した。
［実験結果］
　図５は、クローン病およびベーチェット病の治療前後による血漿ガレクチン９とＣＲＰ、好酸球数の推移結果を示す。左側は、ＣＲＰ（ｍｇ／ｄＬ）の推移結果、右側は、好酸球数（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）（／μＬ）の推移結果を示す。図５に示すように、いずれもガレクチン９濃度は病勢の鎮静化に従い低下したが、好酸球数は増加する傾向にあった。
［実施例４：小児クローン病および潰瘍性大腸炎の血漿ガレクチン９による測定方法および測定結果］
　本実施例は、実施例１より小児クローン病および潰瘍性大腸炎のデータを抜粋し、血漿ガレクチン９濃度を切り口として両腸炎の違いを検討した。
［対象］
　実施例１の検体およびデータを使用した。ただし実施例１において小児潰瘍性大腸炎と診断されていた患者の一人が、その後の経過で小児クローン病と判定されたため小児クローン病患者　４名、小児潰瘍性大腸炎　１２名となっている。なおコントロール群は一検体増やして　９名とした。
[測定方法]
　実施例１で測定したデータを使用した。
［測定結果］
　図６に示すように、小児潰瘍性大腸炎、コントロール群と比較して小児クローン病でガレクチン９濃度が高い傾向であることが判った。それぞれのガレクチン９濃度の平均値は、小児クローン病で１１０．５ｐｇ／ｍＬ、小児潰瘍性大腸炎で、３６．０ｐｇ／ｍＬ、コントロール群で３５．４ｐｇ／ｍＬであった。統計解析はSTATA11（Light　Stone）を用いた一元配置分散分析法で行った。
［実施例５：小児クローン病及び小児潰瘍性大腸炎における、血漿ガレクチン９と各種パラメータとの相関関係］
　本実施例では、実施例１～３で得たデータより小児クローン病および潰瘍性大腸炎の部分を抜粋し、血漿ガレクチン９と各種パラメータとの相関関係について比較検討を行った。実施例１～３のパラメーターに加えて、小児クローン病ではＰＣＤＡＩスコアを、小児潰瘍性大腸炎ではＰＵＣＡＩスコアも比較対象とした。
　実施例４の小児クローン病４名において、血漿ガレクチン９測定時の白血球（ＷＢＣ）、好酸球（Ｅｏｓｉｎｏ）、ＣＲＰ、ＰＣＤＡＩスコア（Pediatric　Crohn　disease　activity　index）と血漿ガレクチン９との相関を調べ結果を図７に示す。図７（ａ）は、ＷＢＣとの相関、図７（ｂ）は、Ｅｏｓｉｎｏとの相関、図７（ｃ）は、ＣＲＰとの相関、図７（ｄ）は、ＰＣＤＡＩとの相関を示す。図７（ａ）～（ｄ）に示すように、小児クローン病において、ガレクチン９とＣＲＰに正の相関（Ｒ２＝０．６９７２）を認めた。統計解析はSTATA11を用いた線形回帰分析法を用いて行った。
　実施例４の小児潰瘍性大腸炎１２名において、血漿ガレクチン９測定時の白血球（ＷＢＣ）、好酸球（Ｅｏｓｉｎｏ）、ＣＲＰ、ＰＵＣＡＩスコア（Pediatric　Ulcerative　Colitis　Activity　Index）と血漿ガレクチン９との相関を調べた。その結果を図８に示す。図８（ａ）は、ＷＢＣとの相関、図８（ｂ）は、Ｅｏｓｉｎｏとの相関、図８（ｃ）は、ＣＲＰとの相関、図８（ｄ）は、ＰＵＣＡＩとの相関を示す。
［実施例６：活動期のクローン病と潰瘍性大腸炎の血漿ガレクチン９測定］
　本実施例では、小児クローン病および潰瘍性大腸炎において、活動期に限定し、血漿ガレクチン９とＰＣＤＡＩとの相関関係について説明する。データは実施例５からの抜粋である。統計解析はSTATA11を用いた線形回帰分析法を用いて行った。
［対象］
　活動期にある小児クローン病患者２名（PCDAI＞３０）と活動期にある小児潰瘍性大腸炎６名（PUCAI＞３０）を対象とした。
[測定方法]
　ガレクチン９測定結果およびＰＣＤＡＩスコアは実施例５からの抜粋である。
［測定結果］
　図９は、各疾患の血漿ガレクチン９濃度の測定結果を示したものである。図９に示すように、活動期の小児クローン病患者は、活動期の小児潰瘍性大腸炎患者と比較して有意に血漿ガレクチン９が高いことが判った。統計解析はSTATA11を用いたMann-Whitney検定で行った。
［実施例７：活動期にある小児クローン病患者における治療後の血漿ガレクチン９の推移］
　本実施例では、実施例５および７からデータを抜粋して加工した。
［対象］
　ＰＣＤＡＩ＞３０の小児クローン病患者の治療前後の検体を対象とした。
［測定方法］
　データは実施例５および７から抜粋して加工した。
［測定結果］
　図１０は、活動期にある小児クローン病患者における治療後の血漿ガレクチン９の推移の結果を示す。横軸に治療開始後のPCDAI（Pediatric　Crohn's　Disease　Activity　Index）値、縦軸に血漿ガレクチン９濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。図１０に示すように、小児クローン病では、治療開始後、PCDAI（Pediatric　Crohn's　Disease　Activity　Index）スコアの改善とともに、血漿ガレクチン９は低下することが判った。
［実施例８：活動期にある成人クローン病におけるガレクチン９のｍＲＮＡ発現］
　本実施例では、活動期にある成人クローン病におけるガレクチン９のｍＲＮＡ発現について確認した。
［実験対象］
　健常者（normal　colonic　mucosa）２０名、活動期潰瘍性大腸炎（ＵＣ）１２名、活動期大腸型クローン病(ＣＤ)１０名を対象とした。
［実験方法］
　前記対象者について、大腸内視鏡検査を施行し、大腸粘膜の組織生検検体を用いてｍＲＮＡ発現解析を行った。ＵＣ，ＣＤの診断基準、大腸内視鏡検査および大腸粘膜からの生検採取は、実施例１で説明した方法で行った。
［実験結果］
　図１１（Ａ）は、横軸の左から、健常者、活動期ＵＣ、活動期ＣＤにおけるガレクチン９のｍＲＮＡ発現量をβアクチンのｍＲＮＡ発現量の比で示す。図１１（Ａ）に示すように、活動期ＣＤ大腸粘膜ではガレクチン９の発現が亢進していた（*p<0.05　vs.　normal　colonic　mucosa）。統計解析はＰｒｉｓｍ５（Ｇｒａｐｈｐａｄ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いたＯｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡで確認後、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重解析で検討した。
[実施例９：活動期、非活動期にある成人クローン病患者を対象にした血清ガレクチン９濃度の測定結果]
　本実施例では、活動期、非活動期にある成人クローン病患者を対象に血清ガレクチン９濃度の測定結果について説明する。
［診断対象］
　健常人３５名、クローン病患者２９名（活動期７名＋非活動期２２名）を対象とした。診断基準は、実施例１と同様にした。
［測定方法］
　測定方法は、実施例１と同様に行った。
[測定結果]
　前記対象者について、血清ガレクチン９を測定した。その結果を図１１（Ｂ）に示す。図１１（Ｂ）に示すように、ＣＤ患者血清で有意に高値を示した（*p<0.05　vs.　Healthy　volunteer）。統計解析はＰｒｉｓｍ５を用いたＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で行った。
［実施例１０：クローン病患者の大腸におけるガレクチン９のタンパク質発現]
　本実施例では、クローン病患者の大腸におけるガレクチン９のタンパク質発現について説明する。
[測定対象]
　クローン病患者の手術例の大腸病変部の組織を用た。コントロールには大腸癌手術例の大腸健常部を用いた。クローン病の診断基準は、実施例１と同様にした。
[測定対象]
　測定方法
　対象の組織より作成したパラフィン切片を、抗ヒトガレクチン９モノクローナル抗体（クローン９Ｍ１－３）を用いた免疫染色法で染色した。検出にはビオチン化した二次抗体と西洋ワサビペルオキシダーゼ標識したストレプトアビジンを利用するニチレイのキットを用い、発色基質ＤＢＡの色素沈着で発現部位を可視化した。
[測定結果]
　図１１（Ｃ）に示すように、大腸癌手術例の健常部、クローン病患者の手術例の病変部を用いてガレクチン９のタンパク質発現を検討したところ、クローン病患者では肉芽腫周囲の浸潤炎症細胞に陽性像を認めた。
［実施例１１：ガレクチン９投与の効果］
　本実施例では、ガレクチン９投与の効果について説明する。
［実験対象］
　本実施例では、後述するマウスの腸炎モデルを対象とした。
［実験方法］
　以下、本実施例の実験方法について説明する。
[マウスのＴＮＢＳ腸炎モデルの作成]
　マウスのクローン病モデルのひとつであるＴＮＢＳ腸炎は、後述するように、マウスにＴＮＢＳ腸炎を注腸することにより作製した。
（ＴＮＢＳ腸炎の作成）
　マウスのクローン病モデルとされているＴＮＢＳ腸炎モデルの作成は
及び に記載の方法で行った。簡潔には、マウスにＴＮＢＳ（２００ｍｇ／ｋｇ）を注腸投与することにより作製した。
［ガレクチン９投与］
　ガレクチン９（１０μｇ）は、前記のＴＮＢＳ注腸直後に１回、腹腔内投与した。そして、ＴＮＢＳ注腸後、３日後に病変の評価を行った。なお本実験で用いたガレクチン９はＷＯ２００５／０９３０６４（特許文献１）記載のヒト型新規ガレクチン９改変体タンパク質である。
［粘膜病変のスコア化（Damage　score）］
　ダメージスコアは、Harusato,　A.　et　al.　BTB　and　CNC　Homolog1　（Bach1）　Deficiency　Ameliorates　TNBS　Colitis　in　Mice:　Role　of　M2　Macrophages　and　Heme　Oxygenase-1.　Inflamm　Bowel　Dis,　19,　740-753　(2013)（非特許文献１）記載の基準に従って数値化した。
［組織学的スコア］
　組織学的スコアは、Harusato,　A.　et　al.　BTB　and　CNC　Homolog1　（Bach1）　Deficiency　Ameliorates　TNBS　Colitis　in　Mice:　Role　of　M2　Macrophages　and　Heme　Oxygenase-1.　Inflamm　Bowel　Dis,　19,　740-753　(2013)（非特許文献１）記載の基準に従って数値化した。
［実験結果］
　以下、ガレクチン９投与による実験結果について説明する。
［肉眼像による病変の進展の抑制効果］
　図１２（Ａ）は、ＴＮＢＳ注腸後、３日後の病変の変化を示す。図１２（Ａ）において、（ａ）は、ガレクチン９の投与を行っていないコントロール、（ｂ）は、ガレクチン９の投与を行ったものを示す。図１２（Ａ）に示すように、肉眼像では明らかにガレクチン９投与群で病変の進展は抑制された。
［粘膜病変をスコア化したDamage　score］
　図１１（Ｂ）は、粘膜病変をスコア化したDamage　scoreを示す。横軸は、それぞれ、左から、ＴＮＢＳ注腸されていないマウスのうち、ガレクチン９を投与されていないもの、ＴＮＢＳ注腸されたが、ガレクチン９を投与されていないもの、ＴＮＢＳ注腸され、ガレクチン９を投与されたもの、ＴＮＢＳ注腸されていないが、ガレクチン９投与されたものを示す。この結果においてもガレクチン９投与群で有意に抑制されていた（n=13,　*p<0.05　vs.　sham　+　vehicle,　#p<0.01　vs.　TNBS　colitis　+　vehicle）。統計解析にはＰｒｉｓｍ　５を用い、Ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡで確認後、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重解析で検討した。
［潰瘍形成の軽減］
　図１１（Ｃ）は、ヘマトキシリン・エオシン染色した大腸組織像である。（ａ）は、ＴＮＢＳ注腸されていないマウス、（ｂ）は、ＴＮＢＳ注腸されており、かつ、ガレクチン９が投与されていないマウス、（ｃ）は、ＴＮＢＳ注腸されており、かつ、ガレクチン９が投与されたマウスを示す。（ｂ）では、広範な上皮の脱落を伴う潰瘍形成を来しており、顕著な炎症細胞浸潤が惹起されていたが、（ｃ）（ガレクチン９投与群）ではこれらの組織学変化が軽減されていた。
［組織学的スコア］
　図１１（Ｄ）は、組織学的スコア測定結果を示す。において、組織学的スコアにおいても有意に病変が抑制されていた（n=13,　*p<0.01　vs.　TNBS　colitis　+　vehicle）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いたＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で行った。
［実施例１２：ガレクチン９投与における大腸粘膜中の好中球浸潤、サイトカイン発現の抑制］
　本実施例では、ＴＮＢＳ腸炎における大腸粘膜中の好中球浸潤、サイトカイン発現について説明する。
［実験対象］
　実施例１１のＴＮＢＳ腸炎を対象とした。
［実験方法］
　以下、本実施例の実験方法について説明する。
　ＴＮＢＳ注腸およびガレクチン９投与については、実施例１１と同様に行った。大腸粘膜中の好中球浸潤測定はHarusato,　A.　et　al.　BTB　and　CNC　Homolog1　（Bach1）　Deficiency　Ameliorates　TNBS　Colitis　in　Mice:　Role　of　M2　Macrophages　and　Heme　Oxygenase-1.　Inflamm　Bowel　Dis,　19,　740-753　(2013)（非特許文献１）及びTakagi,　Tomohisa　et　al.　Inhalation　of　Carbon　Monoxide　Ameliorates　TNBS-Induced　Colitis　in　Mice　Through　the　Inhibition　of　TNF-α　Expression.　　Dig　Dis　Sci,　55,　2797-804　(2010)（非特許文献２）に記載の方法に従い、ミエロペルオキシダーゼ活性測定によって間接的に行った。
［結果］
　図１３に大腸粘膜中の好中球浸潤、サイトカイン発現量を示す。図１３（Ａ）は、好中球浸潤（ｍＵ／ｍｇ・ｐｒｔ）、図１３（Ｂ）は、ＴＮＦ－α、図１３（Ｃ）は、ＴＮＦ－γ、図１３（Ｄ）は、ＩＬ－１７Ａ　ｍＲＮＡの発現量を示す。Ｓｈａｍ群はＴＮＢＳ未腸注群で、ＴＮＢＳ腸注群の対照である。図１３（Ａ）～（Ｄ）に示すように、ガレクチン９投与群において、ＴＮＢＳ腸注で誘導される好中球浸潤(Ａ)、ＴＮＦ－α（Ｂ）、ＩＦＮ－γ（Ｃ）、ＩＬ－１７Ａ　ｍＲＮＡ（Ｄ）の発現はいずれにおいても、有意に抑制されていた（n=7,　*p<0.05　vs.　sham　+　vehicle,　#p<0.01　vs.　TNBS　colitis　+　vehicle）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いたＯｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡで行いＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重解析で検討した。
［実施例１３：ガレクチン９投与における発症抑制・病変進展抑制効果］
　本実施例では、ガレクチン９投与における発症抑制・病変進展抑制効果について説明する。
[実験方法]
　以下、本実施例における実験方法について説明する。
[腸炎モデルの作成]
　免疫担当細胞の関与の強い腸炎モデルとして、ナイーブT細胞(CD4+CD45RBhigh)を免疫不全マウス(SCID)に移入することにより惹起される腸炎を作成した。方法の詳細はTotshka,　T.　et　al.　Ameliorating　Effect　of　Anti-inducible　Costimulator　Monoclonal　Antibody　in　a　Murine　Model　of　Chronic　Colitis.　Gastroenterology,　124,　410-421　(2003)（非特許文献３）に記載の通りである。なおこのモデルもＣＤモデルの一つと考えられている。
[ガレクチン９の投与]
　ガレクチン９は100μg/週2回腹腔内投与し、細胞移入後8週間の観察を行った。本実験で用いたガレクチン９は
記載のヒト型新規ガレクチン９改変体タンパク質である。
[実験対象の体重測定]
　体重測定は1週間に一度、細胞移入後８週間にわたって行った。
[ダメージスコア]
　ダメージスコアは、Totshka,　T.　et　al.　Ameliorating　Effect　of　Anti-inducible　Costimulator　Monoclonal　Antibody　in　a　Murine　Model　of　Chronic　Colitis.　Gastroenterology,　124,　410-421　(2003)（非特許文献３）に記載の基準で、体重減少、腸管肥厚および下痢症状を加味してスコア化した。
[組織学的スコア]
　組織学的スコアは、Totsuka,　T.　et　al.　IL-7　Is　Essential　for　the　Development　and　the　Persistence　of　Chronic　Colitis.　The　Journal　of　immunology,178，　4737-4748　(2007)（非特許文献４）に記載の基準で数値化した。
[実験結果]
　図１４に本実施例の結果を示す。図１４（Ａ）では、細胞移入後８週間までの体重変化を示す。図１４（Ａ）に示すように、ナイーブT細胞移入群では細胞移入後5週後より体重減少を認めたが、ガレクチン９投与群ではこの体重減少が有意に抑制された（n=11,　*p<0.05,　#p<0.01　vs.　transfer　colitis）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いて行い、Ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡで確認後、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重解析で検討した。
　図１４（Ｂ）では、ダメージスコアを示す。ガレクチン９投与により有意に抑制された（n=11,　*p<0.05　vs.　transfer　colitis）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いたＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で行った。
　図１４（Ｃ）では、大腸組織のヘマトキシリン・エオシン染色像を示す。大腸組織学的所見でもガレクチン９投与群において腺管構造の破壊、炎症細胞浸潤が軽微であった。
　図１４（Ｄ）では、組織学的スコアを示す。ガレクチン９投与群において有意に腸炎が抑制されていた（n=11,　*p<0.05　vs.　transfer　colitis）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いたＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で行った。
[実施例１４：ナイーブＴ細胞移入腸炎モデルにおける炎症性サイトカイン産生とガレクチン９投与によるその抑制]
　本実施例では、実施例１３のナイーブＴ細胞移入腸炎モデルにおいて、ガレクチン９投与群と非投与群から粘膜固有層リンパ球を採取し、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激による炎症性サイトカイン産生を調べた。
[実験方法]
　以下、本実施例の実験方法について説明する。
　腸炎モデルの作成は、実施例１３と同様に行った。
[粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ）の採取]
　ＬＰＬの調製はTotshka,　T.　et　al.　Ameliorating　Effect　of　Anti-inducible　Costimulator　Monoclonal　Antibody　in　a　Murine　Model　of　Chronic　Colitis.　Gastroenterology,　124,　410-421　(2003)（非特許文献３）に記載の方法で行った。
[ＣＤ３／ＣＤ２８刺激によるサイトカイン回収方法]
　ＣＤ３／ＣＤ２８刺激の方法はTakagi,　Tomohisa　et　al.　Inhalation　of　Carbon　Monoxide　Ameliorates　TNBS-Induced　Colitis　in　Mice　Through　the　Inhibition　of　TNF-α　Expression.　　Dig　Dis　Sci,　55,　2797-804　(2010)（非特許文献２）に記載の方法で行った。。
　ＣＤ４陽性細胞を抗ＣＤ３抗体＋抗ＣＤ２８抗体刺激して得られた培養上清を用い、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γおよびＩＬ－１７濃度をＲ＆ＤのＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。
[結果]
　図１５にCD3/CD28刺激による、（Ａ）ＴＮＦ－α産生量（ｐｇ／ｍＬ）、（Ｂ）ＩＦＮ－γ産生量（ｐｇ／ｍＬ）、（Ｃ）ＩＬ－１７産生量（ｐｇ／ｍＬ）を示す。それぞれのグラフの横軸の左側は、ガレクチン９非投与群、右側はガレクチン９投与群で、それぞれから調製したＬＰＬを用いた結果を示す。図１５に示すように、Galectin-9投与群の大腸粘膜から採取したCD4+細胞におけるTNF-α(A)、IFN-γ(B)、IL-17(C)産生は有意に抑制されていた（n=6,　*p<0.05　vs.　LPL　CD4+(transfer　colitis)）。統計解析はＰｒｉｓｍ　５を用いたＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定で行った。
　以上のとおり、本発明によれば、例えば、血清・血漿ガレクチン９測定により、腸炎等の疾患を診断できる。ガレクチン９測定による診断は、以下の点で既存マーカーに勝る可能性がある。すなわち、腸炎の病理は未知の部分が多く、有効な診断マーカーも乏しい。一般的な血清・血漿炎症マーカーであるＣＲＰは、活動期腸炎において上昇する傾向が認められるが、血便等の症状があるにもかかわらず、ＣＲＰ値が正常範囲内である場合もある。また、クローン病においてはＣＲＰ値が正常で推移しているにもかかわらず、腸管狭窄が進行し手術を余儀なくされる症例もしばしば存在する。したがって、より高感度な腸炎診断マーカーや、ＵＣ、ＣＤ等の腸炎を鑑別できる診断マーカーの有用性は高い。最近、腸炎活動マーカーとして便中カルプロテクチン測定が導入されたが、日常的な診断で得られる血漿・血清マーカーのガレクチン９の方が有用性は高いと考えられる。ただし、これらは、全て、可能性のある効果の例示であって、本発明を何ら限定しない。

Claims (18)

  1. 　腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患の診断方法であって、
    　血中のガレクチン９濃度を測定し、前記ガレクチン９濃度に応じて前記疾患の有無、前記疾患の状態および前記疾患の程度からなる群から選択される少なくとも一つを診断することを特徴とする診断方法。
  2. 　前記血中のガレクチン９濃度の測定方法が、ＥＬＩＳＡ法、ＦＩＡ法、ＲＩＡ法、イムノクロマトグラフィー法、または質量分析法である請求項１記載の診断方法。
  3. 　前記腫瘍が、大腸腫瘍である請求項１または２記載の診断方法。
  4. 　前記腸炎が、クローン病、腸管ベーチェット病、潰瘍性大腸炎、単純性潰瘍、非特異的小腸潰瘍、薬剤性腸炎、および感染性腸炎からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１から３のいずれか一項に記載の診断方法。
  5. 　前記クローン病が、小児クローン病および成人クローン病の少なくとも一方である請求項４記載の診断方法。
  6. 　腸炎および腫瘍の少なくとも一方の疾患を治療または予防する方法であって、患者にガレクチン９を投与することにより前記疾患を治療または予防することを特徴とする治療または予防方法。
  7. 　前記腫瘍が、大腸腫瘍である請求項６記載の治療または予防方法。
  8. 　前記腸炎が、クローン病、腸管ベーチェット病、潰瘍性大腸炎、単純性潰瘍、非特異的小腸潰瘍、薬剤性腸炎、および感染性腸炎からなる群から選択される少なくとも一つである請求項６または７記載の治療または予防方法。
  9. 　前記クローン病が、小児クローン病および成人クローン病の少なくとも一方である請求項８記載の治療または予防方法。
  10. 　請求項１から５のいずれか一項に記載の診断方法により、前記疾患を診断し、
    　前記疾患があると診断された場合に、患者にガレクチン９を投与することにより前記疾患を治療または予防する請求項６から９のいずれか一項に記載の治療または予防方法。
  11. 　腸炎および腫瘍からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の診断用キットであって、
    　血中のガレクチン９濃度をＥＬＩＳＡ法により測定するためのガレクチン９検出試薬を含むことを特徴とする診断用キット。
  12. 　前記腫瘍が、大腸腫瘍である請求項１１記載の診断用キット。
  13. 　前記腸炎が、クローン病、腸管ベーチェット病、潰瘍性大腸炎、単純性潰瘍、非特異的小腸潰瘍、薬剤性腸炎、および感染性腸炎からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１１または１２記載の診断用キット。
  14. 　前記クローン病が、小児クローン病および成人クローン病の少なくとも一方である請求項１３記載の診断用キット。
  15. 　ガレクチン９を有効成分として含む、腸炎および腫瘍からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の治療または予防用医薬。
  16. 　前記腫瘍が、大腸腫瘍である請求項１５記載の医薬。
  17. 　前記腸炎が、クローン病、腸管ベーチェット病、潰瘍性大腸炎、単純性潰瘍、非特異的小腸潰瘍、薬剤性腸炎、および感染性腸炎からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１５または１６記載の医薬。
  18. 　前記クローン病が、小児クローン病および成人クローン病の少なくとも一方である請求項１７記載の医薬。
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