WO2013117692A1 - Composition anti-inflammatoire pour moduler la reponse cellulaire des neutrophiles et des eosinophiles - Google Patents

Composition anti-inflammatoire pour moduler la reponse cellulaire des neutrophiles et des eosinophiles Download PDF

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inflammatory
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eosinophils
neutrophils
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Pascal MELSENS
Jean Louis Charles SAINTE LAUDY
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Ovogenics Sa
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Definitions

  • Anti-inflammatory composition for modulating the cellular response of neutrophils and eosinophils
  • the present invention relates to an anti-inflammatory composition for humans and animals comprising a Corturnix corturnix japonica quail extract of B-Mina strain comprising an ovomucoid and a quail egg ovoinhibitor.
  • Ovomucoid is a protease inhibitory enzyme (anti-protease enzyme) that is present in the egg white of birds and has three disulfide bridges and residues of glucose, mannose, deoxyglucose and sialic acid.
  • This polypeptide comprises three very similar functional domains each capable of binding a protease, for example trypsin (there is then bet anti-tryptic activity).
  • the ovoinhibitor is a glycoprotein whose structure is different from that of the ovomucoid. Like the ovomucoid, the ovoinhibitor is one of the inhibitors of serine proteases. It is a potent inhibitor of bovine trypsin, ⁇ -chymotrypsin, chicken chymotrypsin, elastase, subtilisin (Baciltus subtilis) and bacterial and fungal proteases.
  • Proteases are enzymes with proteolytic pro- inflammatory properties contained in the intracytoplasmic granules of immune cells (mast cells, basophils, neutrophils and eosinophils, for example).
  • proteases including serine proteases, are implicated in humans in various basic physiological processes such as coagulation, complement activation, tissue repair, and immunity.
  • Serine proteases are also involved in the activation cascade of basophils and mast cells.
  • serine proteases are present in pulmonary mast cells in the form of tryptase and chymase that are involved in the activation cascade of basophils and mast cells.
  • anti-proteases can inhibit the activation of mast cells such as diispropylfluorophosphate (DFP) which inhibits the release of histamine by pulmonary mast cells.
  • DFP diispropylfluorophosphate
  • anti-proteases belonging to the group of serpins make it possible to inhibit the aggregation induced by fMLP between neutrophils and platelets.
  • proteinase 3 which is the target antigen of c-ANCAs (cytoplasmic antineutrophil cytoplasmic antibodies) is inhibited by alpha-1 antitrypsin.
  • proteases released by the proinflammatory cells can lead to a worsening of symptoms, as is the case, for example, with asthma or cystic fibrosis.
  • proteases released by pro-inflammatory cells such as neutrophils can induce the production of superoxide ions and pro-inflammatory cytokines such as ILS leading to the recruitment of neutrophils at the site of the inflammatory reaction and thus worsening of symptoms as is the case for asthma and cystic fibrosis.
  • a perfect balance proteases / anti-proteases is sought to mitigate the symptoms and it is therefore sometimes useful to promote this balance by providing protease inhibitor, for example via an ovomucoid.
  • the main blood cells with rapid proinflammatory action are basophils, eosinophils and neutrophils.
  • Basophils are cells that are poorly represented in humans and may infiltrate the tissue site of the inflammatory reaction. Basophils are powerful proinflammatory cells containing, in their granules, many preformed mediators such as histamine and proteases that will be released after activation by basophilic cells. Activation of basophil cells can be triggered by non-dependent mechanisms antibodies or antibody-dependent and is mainly mediated by IgE, IgG and IgA. This activation induces the release of mediators, in particular histamine, which provokes an immune response. These different mechanisms involving basophilic cells are generally observed during allergic inflammatory reactions.
  • Eosinophils are blood cells found in the tissues at sites of inflammatory reactions and play a major regulatory role on the immune system. Eosinophilic cells have membrane receptors for IgG, IgA and IgE as well as for various cytokines (IL2, IL3, IL5, IFNY). The activation of eosinophils results in their degranulation with release of many mediators including proteins (MBP, ECP and EDN) and enzymes (protease, peroxidase, collagenases, ⁇ -glucuronidase, lysophosphatase, phospholipases, histaminases, catalases, esterases, hexosaminidases, .
  • MBP proteins
  • ECP and EDN enzymes
  • Eosinophilic cells are involved in many diseases such as gastritis, esophagitis, eosinophilic proctocolitis, ulcerative colitis, Crohn's disease, Churg-Strauss syndrome, eosinophilic pneumonia and parasitic diseases.
  • diseases such as gastritis, esophagitis, eosinophilic proctocolitis, ulcerative colitis, Crohn's disease, Churg-Strauss syndrome, eosinophilic pneumonia and parasitic diseases.
  • allergic inflammatory diseases such as atopic dermatitis, allergic rhinitis and asthma.
  • Neutrophils are essential pro-inflammatory cells that are the first cells recruited after tissue damage and in response to infectious agents or allergens. These cells are also involved in oxidative stress and are thus capable of releasing highly active oxygen derivatives that are toxic to tissues at the site of the reaction. inflammatory. Neutrophils can be activated by IgA, IgG and even IgE.
  • proteolytic enzymes proteolytic enzymes
  • a protease / anti-protease equilibrium is sought to reduce the symptoms, which can be obtained by the addition of protease inhibitors, for example via an ovomucoid protease inhibitor.
  • egg ovomucoid as a protease inhibitor in inflammatory reactions is known from the state of the art. Previous studies have demonstrated the inhibitory effect of egg ovomucoid on the activation of human basophils stimulated by a bacterial peptide, N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP).
  • fMLP N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine
  • the document FR2901137 describes several pharmaceutical dosage forms intended for human and animal medicine, constituted by one or more natural inhibitors of protease enzymes.
  • This document thus discloses medicinal compositions based on natural protease inhibitors extracted from quail eggs, combined with vitamins and / or minerals and / or amino acids and incorporated into an excipient.
  • These medicinal compositions exhibit a global anti-inflammatory activity targeted to all tissues and organs, a non-specific anti-inflammatory activity based on the inhibition of trypsin or its homologs (elastase, tryptase, etc.) and an anti-inflammatory activity.
  • -specific anti-allergic inflammation based on the inhibition of the release of chemical mediators by mast cells or basophils.
  • These medicinal compositions may be in the form of tablets comprising one or more natural inhibitors of serine proteases, such as ovomucoid and ovoinhibitor extracted from the white of the quail egg. of the species Corturnix corturnix japonica strain B-Mina and various constituents such as for example vitamins and / or amino acids. More particularly, these drug compositions are indicated for the prevention and treatment of inflammations.
  • FR2813531 also relates to medicinal compositions comprising a quail egg homogenate combined with trace elements and having anti-protease and anti-inflammatory activity.
  • These drug compositions exhibit nonspecific anti-allergic activity based on the anti-protease activity of the ovomucoid of the quail egg, anti-inflammatory activity by inhibition of histamine release by mast cells and basophils, and Dermatological activity by action on the proteases of specialized cells of the dermis, for example neutrophils.
  • These medicinal compositions may be in the form of tablets composed of a homogenate of quail eggs (yellow and white) having an anti-protease, anti-inflammatory and anti-infectious activity linked to the ovomucoid fraction contained in the white of the egg. egg and one or more incorporated elements. These medicinal compositions are indicated in particular for the prevention and treatment of allergic diseases, respiratory infections and certain cutaneous affections.
  • the document FR2939044 describes drug compositions consisting of a lyophilisate of donkey milk mixed with one or more natural inhibitors of human protease enzymes such as ovomucoid and ovoinhibitor extracts of the quail egg of the Corturnix species cortorum japonica strain B-Mina.
  • This formulation is indicated in the prevention and treatment of pathologies affecting the immune system but also for the implementation of food supplements or cosmetics. Indeed, this formulation has a high nutritional value, a global anti-inflammatory activity on all the tissues and organs, a non-inflammatory activity.
  • This anti-protease activity therefore acts on proteases after their release by pro-inflammatory cells such as mast cells, basophils, eosinophils and neutrophils.
  • pro-inflammatory cells such as mast cells, basophils, eosinophils and neutrophils.
  • there is a modulatory activity of the response to stimulation by infectious agents or allergens of mast cell and basophilic pro-inflammatory cells which is disclosed in the state of the art.
  • the present invention relates to a particular use of the ovomucoid of the Corturnix corturnix japonica quail egg of B-Mina strain in an anti-inflammatory composition for humans and animals to modulate the cellular response of neutrophils and eosinophils, that is to say, which acts on its pro-inflammatory cells before the release of the mediators of the inflammatory reaction such as proteases.
  • ovomucoid also acts as a modulator of the cellular response of neutrophils and eosinophils prior to the release of proteases.
  • This surprising action of the ovomucoid is particularly advantageous since it allows to act directly on the two main pro-inflammatory cells involved in tissue inflammatory reaction to modulate cellular responses and thus prevent the release of mediators such as proteases. This therefore minimizes the inflammatory reactions by acting before the release of proteases from neutrophils and eosinophils through the mechanism of intracellular inhibition of ovomucoid of the quail egg on neutrophils and eosinophils put forward in the of the present invention, complementary to the anti-protease activity described in the state of the art and to the modulatory response on mast cells and basophils.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention further comprises at least one vitamin selected from the group consisting of vitamin A, B, C, D, E, F, K and P. These vitamins are known for their ability to strengthen the immune system.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention further comprises at least one mineral selected from the group consisting of Al, Bi, Co, Cu, Fe, F, Li, Mg, Ni, P, K, Se, S and Zn. These minerals are also known for their ability to strengthen the immune system.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention further comprises at least one amino acid selected from the group consisting of Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Val, Glu and Gln. These amino acids are also known for their ability to strengthen the immune system.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention further comprises at least one plant extract selected from the group consisting of plant extracts of roots, stems, leaves, flowers and fruits.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention further comprises a pharmaceutically acceptable excipient or an excipient compatible with food.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention is packaged in the form of tablets, globules, capsules, granules, powder, fluids, liquids, creams or sprays.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention comprises Zn in a protected form, for example Zn bisglycinate (Zn protected between two glycines). It has indeed been found that Zn in protected form, in particular Zn bisglycinate, acts both on immunity and chronic inflammation by inducing the synthesis of specific cytokines and by antagonizing oxidative stress. as a fundamental element of the enzymes involved in the metabolism of oxygen radicals.
  • the anti-inflammatory composition according to the invention is administered in the form of a food supplement.
  • Figure 1 illustrates the effect of the ovomucoid of the quail egg
  • Corturnix corturnix japonica strain B-Mina at a concentration of 10 ⁇ g / ml on the activation of eosinophils by the bacterial peptide fMLP.
  • Figure 2 illustrates the effect of the ovomucoid of the Corturnix corturnix japonica quail egg of B-Mina strain at the concentration of 10 g ml on the activation of neutrophils by the bacterial peptide fMLP.
  • hypersensitivity reactions The exaggerated inflammatory reactions that can be pathogenic for humans are called hypersensitivity reactions. Since 2003, and on the recommendation of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology, there are immune hypersensitivities (antibody-dependent or involving immune system cells such as lymphocytes) and non-immune hypersensitivities not involving elements of the immune system and directly generating pro-inflammatory or directly toxic
  • Eosinophil is essentially tissue and particularly at the digestive level.
  • the main causes of hypereosinophils are atopic eczema, allergic rhinitis and asthma, but we now know many digestive diseases in which we observe a very important recruitment of eosinophils.
  • the role of eosinophils in immunomodulation is recognized today. This cell is rapidly present on the site of the inflammatory reaction and is essentially located in the mucous membranes.
  • Eosinophil contains many cytotoxic mediators such as eosinophil peroxidase (EPO) that are released by degranulation, but eosinophil degranulation inhibitors are poorly known. Eosinophils isolated from asthmatic patients contain high chymotrypsin activity, which seems to involve these proteases in degranulation mechanisms. Thus, nafamostat mesilate, a potent inhibitor of serine proteases, not only inhibits proteolytic activity but also increases the number of eosinophils in BAL (bronchoalveolar lavage). Similarly, SLPI (secretory leucocyte protease inhibitor) inhibits, in a conjunctival allergy model, the development of conjunctivitis in the guinea pig.
  • EPO eosinophil peroxidase
  • the allergic inflammation breaks down into two main phases, namely an immediate phase and a late phase.
  • the deleterious effect of eosinophils is mainly involved in the late phase and during the transition to chronicity.
  • the intercellular interactions are multiple and a powerful pro-inflammatory pair is represented by the eosinophil-mastocyte pair.
  • Eosinophil is a blood cell found in the tissues at the site of inflammatory reactions, spontaneously colonizing the mucous membranes and endowed with a characteristic functional duality, participating in the anti-tumor and parasitic defense but also playing a major regulatory role on the system. immune. This cell described for the first time by Paul Ehrilch (1854-1915) is characterized by the red-brick color taken by its eosin-enriched granules, because of the presence of strongly basic proteins.
  • Eosinophil has membrane receptors for IgG (FcvRI and FCYRI I), for IgA (FcaRI) and for IgE (FCERI and Fc RII) as well as for various cytokines (IL2, IL3, IL5, IFNy).
  • mediators including proteins (MBP (major basic protein), ECP (eosinophil cationic protein) and EDN (eosinophil derived neurotoxin) and EPO enzymes (eosinophil peroxidase) , collagenases, pglucuronidase, lysophosphatase, arysulfatase and acid phosphatase, phospholipases, histaminases, catalases, esterases, hexosaminidases Activation of eosinophils also leads to the secretion of oxygenated radicals from oxidative stress, they also release LTC4, PAF and derivatives of the cyclooxygenase pathway.
  • MBP major basic protein
  • ECP eosinophil cationic protein
  • EDN eosinophil derived neurotoxin
  • EPO enzymes eosinophil peroxidase
  • collagenases pglucuronidase
  • cytokines include immunoregulatory cytokines (IFN ⁇ , IL2, PL12, IL4, IL10, IL3), pro-inflammatory cytokines (IL1, IL6, TNF ⁇ ), anti-inflammatory cytokines (TGF ⁇ and ⁇ ). ) and chemokines (RANTES, eotaxine).
  • IFN ⁇ immunoregulatory cytokines
  • IL2 IL2, PL12, IL4, IL10, IL3
  • pro-inflammatory cytokines IL1, IL6, TNF ⁇
  • TGF ⁇ and ⁇ anti-inflammatory cytokines
  • RANTES chemokines
  • the activation of eosinophils can be mediated by IgE, IgG or IgA, the latter may even be, in some situations, more activating than IgE and is often underestimated.
  • the neutrophil occupies a central place as an essential defense and pro-inflammatory cell. This cell is involved in the oxidative stress because susceptible, like the eosinophil, to release oxygenate derivatives extremely active and toxic to the tissues at the site of the inflammatory reaction.
  • Neutrophils can be activated by non-immune and immune pathways and, among these, by the voting of IgA, IgG and even IgE. Indeed, neutrophtles express the high affinity receptor for IgE and are the first cells recruited after tissue damage, infectious agent or allergens. Thus, allergenic bronchial provocation induces a massive recruitment of neutrophils at the pulmonary level in humans and animates you.
  • activated neutrophils synthesize ILS during dependent IgE activation, which induces an additional influx of neutrophils.
  • Neutrophils like eosinophils, may release, after activation, proteolytic enzymes with deleterious effects on tissues.
  • the ovomucoid of the quail egg is capable of inhibiting, in addition to the activation of basophils induced by LP (N-formylmethionyl-leucyylphenylalanine), peptide.
  • basophils induced by LP N-formylmethionyl-leucyylphenylalanine
  • bacterium with membrane-specific receptors on human polynuclear cells activation of eosinophils and neutrophils by fMLP.
  • Example 1 Inhibitory effect of the ovomucoid of the quail egg Corturnix corturnix japonica strain B-Mina on eosinophils.
  • a volume of 0.5 ml of blood is taken and diluted 3 times in the calcium buffer (27 mM NaCl, 5 mM KCl, 20 mM Trizma, 5 mM CaCl 2 21 mM MgCl 2 , 5 IU / ml heparin, pH 7.4 ) under the following conditions:
  • leukocytes are specifically labeled and incubated for 15 min at room temperature and in the dark after addition of a labeled antibody cocktail (anti-IgE, anti-CD63, anti-CD11b, anti-CD49d ).
  • CD49d is a marker for the selection of eosiniphiles and the negative selection of neutrophils.
  • FI fluorescence intensity
  • results obtained by flow cytometry are illustrated in FIG. 1.
  • the results indicate that the addition of the ovomucoid to the solution comprising eosinophils and the bacterial peptide fMLP significantly reduces (P ⁇ 0.001) the expression of the CD11b marker.
  • the average fluorescence intensity measured for the samples containing the ovomucoid is significantly lower than the average fluorescence intensity measured for the positive control. Decreasing the fluorescence intensity of the CD11b marker demonstrates inhibition of fMLP activation.
  • CD11b is an integrin highly involved in the communication with epithelial cells and has a major physiological role in the migration of eosinophilia at the site of the inflammatory reaction.
  • An inhibition of the expression of CD11b therefore corresponds to both an inhibition of cellular activation and therefore potentially to the inhibition of the release of mediators but also to a decrease in the recruitment of these cells to the site of the inflammatory reaction. .
  • Example 2 Inhibitory effect of the ovomucoid of the quail egg Corturnix corturnix japonica strain B-Mina on neutrophils.
  • a volume of 0.5 ml of blood is taken and diluted 3 times in the calcium buffer (127 mM NaCl, 5 mM KCl, 20 mM Trizma, 5 mM CaCl 2 , 5 mM MgCl 2 , 5 IU / ml heparin, pH 7, 4) under the following conditions:
  • Atopic dermatitis is an inflammatory disease of the skin that affects between 10 to 15% of children and whose prevalence is constantly increasing. More than 2/3 of patients begin their disease in the first year of life. Regarding the natural history of the disease, the authors disagree: some say that 90% of atopic dermatitis is in remission before the age of 10 while others say that only 60% of these children will no longer suffer from atopy in adulthood. The truth is probably between these two approaches, knowing that hospital studies are biased, small eczemas do not arrive in hospital services. The criteria for poor prognosis would be the onset at an early age of severe manifestations, association with respiratory allergy such as asthma or allergic rhinitis.
  • Th1 / Th2 balance in favor of type 2 cytokines which is at the origin of the development of atopic dermatitis, is supported by studies showing the existence in infants of a elevated serum IL4 several months before onset of atopic dermatitis.
  • IL5 a cytokine mainly involved in the tissue recruitment of eosinophils, is also closely related to the development of atopic dermatitis.
  • Eosinophils are involved in many pathologies such as gastritis, oesophagitis and eosinophlle proctocolitis and other inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease. Churg-Strauss syndrome, eosinophle pneumonia, and, of course, parasitic infestations are also mentioned.
  • the most common causes of eosinophilia in the Western world are allergic inflammatory diseases such as atopic dermatitis, allergic rhinitis and asthma.
  • teosinophils do not act alone, but many cell interactions are nowadays demonstrated such as eosinophil-mastocyte cooperation.
  • the ovomucoid additionally has an immunomodulatory potential and effects on the production of cell-dependent cytokine T have been described.
  • the deleterious effects of proteases resulting from the activation of neutrophils on the pulmonary mucosa led to the search for specific therapeutic molecules. It has also been shown that the inhibition of neutrophil proteases induces a better efficiency of phagocytosis by increasing the oxygen burst. In this way, an ovomucoid application in the treatment of atopic dermatitis and similar affectio makes it possible to benefit from an intracellular anti-protease action of the ovomucoid of the quail egg which is added to its natural extracellular activity.
  • the ovomucoid of the quail egg showing an inhibitory effect on the activation of human polynuclear (eosinophils, basophils, neutrophils) and is therefore an excellent anti-inflammatory candidate, not only for atopic dermatitis.

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Abstract

La présente invention se rapporte à une composition anti-inflammatoire destinée aux humains et aux animaux pour moduler la réponse cellulaire des neutrophiles et des éosinophiles.

Description

"Composition anti-inflammatoire pour moduler la réponse cellulaire des neutrophiles et des éosinophiles"
La présente invention se rapporte à une composition anti- inflammatoire destinée aux humains et aux animaux comprenant un extrait d'ceuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina comprenant un ovomucoïde et un ovoinhibiteur d'ceuf de caille.
L'ovomucoïde est une enzyme inhibitrice de protéases (enzyme anti-protéases) qui est présente dans le blanc de l'œuf des oiseaux et qui comporte trois ponts disulfures et des résidus glucose, mannose, désoxy-glucose et acide sialique. Ce polypeptide comprend trois domaines fonctionnels très similaires capables chacun de fixer une protéase, par exemple la trypsine (on parie alors d'activité anti-trypsique).
L'ovoinhibiteur est une glycoprotéine dont la structure est différente de celle de l'ovomucoïde. Comme l'ovomucoïde, l'ovoinhibiteur fait partie des inhibiteurs des protéases à sérine. Il s'agit d'un inhibiteur puissant de la trypsine bovine, de Γα-chymotrypsine, de la chymotrypsine de poulet, de l'élastase, de la subtilisine (de Baciltus subtilis) et de protéases bactériennes et fongiques.
Les protéases sont des enzymes dotées de propriétés pro- inflammatoires protéolytiques contenues dans les granulations intra- cytoplasmiques des cellules immunitaires (mastocytes, basophiles, neutrophiles et éosinophiles, par exemple).
D'une part, certaines protéases, parmi lesquelles les sérine- protéases, sont impliquées chez l'homme, dans différents processus physiologiques de base tels que la coagulation, l'activation du complément, la réparation tissulaire et l'immunité. Les sérine-protéases interviennent également dans la cascade d'activation des basophiles et des mastocytes. Par exemple, les sérine-protéases sont présentes dans les mastocytes pulmonaires sous forme de tryptase et de chymase qui sont impliquées dans la cascade d'activation des basophiles et des mastocytes. II a été montré que des anti-protéases peuvent inhiber l'activation des mastocytes comme le diispropylfluorophosphate (DFP) qui inhibe la libération de l'histamine par les mastocytes pulmonaires. Par ailleurs, des anti-protéases appartenant au groupe des serpines (antithrombine III et C1s estérase inhibiteur) permettent d'inhiber l'agrégation induite par le fMLP entre les neutrophiles et les plaquettes. De même, la protéinase 3 (PR3) qui est l'antigène cible des c-ANCA (cytoplasmic antineutrophil cytoplasmic antibodies) est inhibée par l'alpha- 1 antitrypsine.
D'autre part les protéases libérées par les cellules pro- inflammatoires, par exemple lors d'une inflammation, peuvent conduire à une aggravation des symptômes comme c'est par exemple le cas pour l'asthme ou la fibrose kystique. Il a également été montré que des protéases libérées par des cellules pro-inflammatoires tels que les neutrophiles peuvent induire la production d'ions superoxydes et de cytokines pro-inflammatoires telle que ILS conduisant au recrutement de neutrophiles au niveau du site de la réaction inflammatoire et ainsi à une aggravation des symptômes comme c'est le cas pour l'asthme et la fibrose kystique. Dans de tels cas, un parfait équilibre protéases/anti-protéases est recherché pour atténuer les symptômes et il est dès lors parfois utile de favoriser cet équilibre en apportant des inhibiteur de protéases, par exemple par l'intermédiaire d'un ovomucoïde.
Les principales cellules sanguines ayant une action proinflammatoire rapide (inférieure à une heure) sont les basophiles, les éosinophiles et les neutrophiles.
Les basophiles sont des cellules faiblement représentées chez l'homme et susceptibles d'infiltrer le site tissulaire de la réaction inflammatoire. Les basophiles sont de puissantes cellules proinflammatoires contenant, dans leurs granules, de nombreux médiateurs préformés tels que l'histamine et des protéases qui seront libérées après une activation par des cellules basophiles. L'activation des cellules basophiles peut être déclenchée par des mécanismes non dépendants des anticorps ou dépendants des anticorps et est principalement médiée par les IgE, les IgG et les IgA. Cette activation induit la libération de médiateurs, en particulier l'histamine qui provoque une réponse immunitaire. Ces différents mécanismes impliquant les cellules basophiles sont généralement observés lors de réactions inflammatoires allergiques.
Les éosinophiles sont des cellules sanguines retrouvées dans les tissus au niveau des sites de réactions inflammatoires et jouant un rôle régulateur majeur sur le système immunitaire. Les cellules éosinophiles possèdent des récepteurs membranaires pour les IgG, pour les IgA et pour les IgE ainsi que pour diverses cytokines (IL2, IL3, IL5, IFNY). L'activation des éosinophiles aboutit à leur dégranulation avec une libération de nombreux médiateurs parmi lesquels des protéines (MBP, ECP et EDN) et des enzymes (protéase, peroxydase, collagénases, β- glucuronidase, lysophosphatase, phospholipases, histaminases, catalases, estérases, hexosaminidases, ...). L'activation des éosinophiles conduit, en outre, à la sécrétion de radicaux oxygénés impliqués dans le stress oxydatif et à la libération de dérivés de la voie de la cyclo- oxygénase. Les cellules éosinophiles sont impliquées dans de nombreuses pathologies telles que la gastrite, l'oesophagite, la proctocolite à éosinophile, la colite ulcéreuse, la maladie de Crohn, le syndrome de Churg-Strauss, la pneumonie à éosinophiles et les maladies parasitaires. Toutefois, les causes les plus fréquentes d'éosinophilie sont les maladies inflammatoires allergiques comme la dermatite atopique, la rhinite allergique et l'asthme.
Les neutrophiles sont des cellules pro-inflammatoires essentielles qui sont les premières cellules recrutées après des dommages tissulaires et en réponse à des agents infectieux ou à des allergènes. Ces cellules sont également impliquées dans le stress oxydatif et sont ainsi capables de libérer des dérivés oxygénés extrêmement actifs et toxiques pour les tissus sur le site de la réaction inflammatoire. Les neutrophiles peuvent être activés par la voie des IgA, des IgG et même des IgE.
Les cellules neutrophiles et éosinophiles sont susceptibles de libérer, après leur activation, des enzymes protéolytiques (protéases) aux effets parfois délétères sur les tissus, ce qui a notamment été démontré dans le cas de l'asthme. C'est pourquoi un équilibre protéases/anti-protéases est recherché pour atténuer les symptômes, ce qui peut être obtenu par l'apport d'inhibiteurs de protéases, par exemple par l'intermédiaire d'un ovomucoïde inhibiteur des protéases.
L'utilisation de l'ovomucoïde de l'œuf de caille en tant qu'inhibiteur des protéases dans les réactions inflammatoires est connue de l'état de la technique. Des études antérieures ont démontré l'effet inhibiteur de l'ovomucoïde de l'oeuf de caille sur l'activation des basophiles humains stimulés par un peptide bactérien, le N-formyi-methionyl-leucyl- phenylalanine (fMLP).
Par exemple, le document FR2901137 décrit plusieurs formes galéniques médicamenteuses destinées à la médecine humaine et animale, constituées par un ou plusieurs inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques. Ce document divulgue ainsi des compositions médicamenteuses à base d'inhibiteurs naturels de protéase extraits d'œufs de caille, associés à des vitamines et/ou à des minéraux et/ou à des acides aminés et incorporés dans un excipient. Ces compositions médicamenteuses présentent une activité anti-inflammatoire globale ciblée sur tous les tissus et organes, une activité anti-inflammatoire non spécifique basée sur l'inhibition de la trypsine ou de ses homologues (élastase, tryptase, ...) et une activité anti-inflammatoire anti-allergique spécifique basée sur l'inhibition de la libération de médiateurs chimiques par les mastocytes ou les basophiles. Ces compositions médicamenteuses peuvent se présenter sous forme de comprimés comprenant un ou plusieurs inhibiteurs naturels des sérine-protéases, comme l'ovomucoïde et l'ovoinhibiteur extrait du blanc de l'oeuf de caille de l'espèce Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina et divers constituants tels que par exemple des vitamines et/ou des acides aminés. Plus particulièrement, ces compositions médicamenteuses sont indiquées pour la prévention et le traitement des inflammations.
Le document FR2813531 porte également sur des compositions médicamenteuses comprenant un homogénat d'oeuf de caille associé à des oligo-éléments et possédant une activité anti- protéasique et anti-inflammatoire. Ces compositions médicamenteuses présentent une activité anti-allergique non spécifique basée sur l'activité anti-protéasique de l'ovomucoïde de l'œuf de caille, une activité antiinflammatoire par inhibition de la libération de l'histamine par les mastocytes et les basophiles et une activité dermatologique par action sur les protéases des cellules spécialisées du derme, par exemple les neutrophiles. Ces compositions médicamenteuses peuvent se présenter sous formes de comprimés composés d'un homogénat d'oeufs de caille (jaune et blanc) possédant une activité anti-protéasique, anti-inflammatoire et anti-infectieuse liée à la fraction ovomucoïde contenue dans le blanc de l'oeuf et d'un ou plusieurs éléments incorporés. Ces compositions médicamenteuses sont indiquées notamment pour la prévention et ie traitement des maladies allergiques, des infections respiratoires et de certaines affections cutanées.
Le document FR2939044 décrit des compositions médicamenteuses constituées d'un lyophilisât de lait d'ânesse mélangé à un ou plusieurs inhibiteurs naturels d'enzymes protéasiques humaines tels que l'ovomucoïde et l'ovoinhibiteur extraits de l'oeuf de caille de l'espèce Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina. Cette formulation est indiquée dans la prévention et le traitements de pathologies affectant le système immunitaire mais aussi pour la mise en oeuvre de compléments alimentaires ou de produits cosmétiques. En effet, cette formulation présente une forte valeur nutritionnelle, une activité anti-inflammatoire globale sur tous les tissus et organes, une activité anti-inflammatoire non spécifique liée aux inhibiteurs de protéases humaines, une activité antiinflammatoire et anti-allergique spécifique grâce à l'inhibition de la libération de médiateurs chimiques excrétés par les cellules basophiles et les mastocytes et activité anti-inflammatoire dermatologique en exerçant une action inhibitrice sur les enzymes de l'inflammation.
En regard de l'art antérieur, il existe d'une part une activité anti-protéasique des ovomucoïdes et des ovoinhibiteurs de l'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina agissant sur les protéases humaines impliquées dans les mécanismes inflammatoires et allergiques comme par exemple sur la trypsine et ses homologues (élastase, tryptase, ...). Cette activité anti-protéasique agit donc sur les protéases après leur libération par les ceilules pro-inflammatoires telles que les mastocytes, les basophiles, les éosinophiles et les neutrophiîes. Il existe d'autre part une activité moduiatoire de la réponse à une stimulation par des agents infectieux ou des allergènes des cellules pro-infiammatoires mastocytes et basophiles qui est divulguée dans l'état de la technique.
Toutefois, aucune modulation de la réponse inflammatoire des éosinophiles et des neutrophiîes n'est divulguée à ce jour, c'est-à-dire qu'aucune action avant la libération des protéases par ces cellules éosinophiles et neutrophiîes n'est divulguée aujourd'hui. En effet, toutes les études réalisées jusqu'à présent ciblent l'action de I'ovomucoïde après la sécrétion des protéases par les cellules pro-inflammatoires, aucune étude n'envisageant une action de I'ovomucoïde sur les neutrophiîes et les éosinophiles avant la libération des protéases.
La présente invention se rapporte à une utilisation particulière de i'ovomucoïde de l'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina dans une composition anti-inflammatoire destinée aux humains et aux animaux pour moduler la réponse cellulaire des neutrophiîes et des éosinophiles, c'est-à-dire qui agit sur Ses cellules pro- inflammatoires avant la libération des médiateurs de la réaction inflammatoire comme les protéases. Dans le cadre de la présente invention, il a en effet été observé de façon tout à fait surprenante que l'ovomucoïde agit également en tant que modulateur de ia réponse cellulaire des neutrophiles et des éosinophiles avant la libération des protéases. Cette action surprenante de l'ovomucoïde est particulièrement avantageuse puisqu'elle permet d'agir directement sur les deux principales cellules pro-inflammatoires impliquées lors de réaction inflammatoires tissulaires pour en moduler les réponses cellulaires et ainsi empêcher la libération de médiateurs tels que les protéases. Ceci permet donc de minimiser les réactions inflammatoires en agissant avant la libération de protéases au départ des neutrophiles et des éosinophiles grâce au mécanisme d'inhibition intracellulaire de l'ovomucoïde de l'oeuf de caille sur les neutrophiles et les éosinophiles mis en avant dans le cadre de la présente invention, complémentaire à l'activité anti-protéasique décrite dans l'état de la technique et à la réponse modulatoire sur les mastocytes et les basophiles. Cette activité modulatoire est d'autant plus surprenante qu'il n'était pas évident de mettre en évidence un mécanisme se produisant en amont d'un phénomène recherché et attendu qu'il y avait lieu de provoquer pour en observer la libération de protéases pour pouvoir les inhiber. De plus, l'art antérieur est muet au sujet de la modulation de la réponse cellulaire des éosinophiles et des neutrophiles. D'ailleurs, si l'état de la technique divulgue la modulation de la réponse cellulaires des mastocytes et des basophiles, rien ne laisse présager que les mécanismes impliqués dans l'inhibition de la libération des médiateurs chimiques par les mastocytes et les basophiles par les ovomucoïdes serait identique pour l'inhibition de la libération des médiateurs chimiques par les éosinophiles et par les neutrophiles. Si l'état de fa technique divulgue l'inhibition de l'activation des basophiles et que les résultats obtenus sur les mastocytes sont déduits de la littérature et concernent d'autres anti-protéases, il est apparu de manière surprenante qu'une inhibition de l'activation des éosinophiles et des neutrophiles avait lieu alors que ces mécanismes sont inconnus à ce jour. Avantageusement, la composition anti-inflammatoire selon l'invention comprend en outre au moins une vitamine choisie dans le groupe constitué des vitamine A, B, C, D, E, F, K et P. Ces vitamines sont connues pour leur aptitude à renforcer le système immunitaire.
De façon tout aussi avantageuse, la composition antiinflammatoire selon l'invention comprend en outre au moins un minéral choisi dans le groupe constitué de Al, Bi, Co, Cu, Fe, F, Li, Mg, Ni, P, K, Se, S et Zn. Ces minéraux sont également connus pour leur aptitude à renforcer le système immunitaire.
De préférence, la composition anti-inflammatoire selon l'invention comprend en outre au moins un acide aminé choisi dans le groupe constitué de Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Val, Glu et Gin. Ces acides aminés sont également connus pour leur aptitude à renforcer le système immunitaire.
Avantageusement, la composition anti-inflammatoire selon l'invention comprend en outre au moins un extrait végétal choisi dans le groupe constitué des extraits végétaux de racines, de tiges, de feuilles, de fleurs et de fruits.
Préférentiellement, la composition anti-inflammatoire selon l'invention comprend en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable ou un excipient compatible avec l'alimentaire.
De préférence, la composition anti-inflammatoire selon l'invention est conditionnée sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudre, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays.
Avantageusement, la composition anti-inflammatoire selon l'invention comprend du Zn sous une forme protégée, par exemple du bisglycinate de Zn (Zn protégé entre deux glycines). Il est en effet apparu que le Zn sous forme protégée, en particulier le bisglycinate de Zn agit à la fois sur l'immunité et l'inflammation chronique par le biais de l'induction de la synthèse de cytokines spécifiques et par antagonisme du stress oxydant en tant qu'élément fondamental des enzymes impliquées dans le métabolisme des radicaux oxygénés.
Avantageusement, la composition anti-inflammatoire selon l'invention est administrée sous forme d'un complément alimentaire.
D'autres formes de réalisation de la composition antiinflammatoire sont mentionnés dans les revendications annexées.
D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux exemples et aux figures annexés.
La figure 1 illustre l'effet de l'ovomucoïde de l'œuf de caille
Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina à la concentration de 10 pg/ml sur l'activation des éosinophiles par le peptide bactérien fMLP.
La figure 2 illustre l'effet de l'ovomucoïde de l'oeuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina à la concentration de 10 g ml sur l'activation des neutrophiles par le peptide bactérien fMLP.
Les réactions inflammatoires exagérées pouvant être pathogènes pour l'homme sont appelées réactions d'hypersensibilité. Depuis 2003, et sur les recommandations de l'Académie Européenne d'Allergologie et d'Immunologie Clinique, on distingue les hypersensibilités immunes (anticorps dépendantes ou impliquant des cellules du système immunitaire tels que les lymphocytes) et les hypersensibilités non immunes n'impliquant pas les éléments du système immunitaire et générant directement des éléments pro-inflammatoires ou ayant une action toxique directe.
En immuno-allergologie, des allergènes communs comme les moisissures, la blatte ou les acariens montrent une activité protéolytique, cystéine protéases pour les allergènes Der f1 et Der p1 et sérine protéase pour les allergènes Der p3, 6, 9 Ces protéases sont actives par l'intermédiaire de récepteurs PAR (protéase-activated receptors) et sont impliquées dans le recrutement des éosinophiles et dans S' hyperactivité bronchique dans un modèle murin d'inflammation allergique. Les principales cellules sanguines ayant une action proinflammatoire rapide (inférieure à une heure) mais étant également impliquées dans des mécanismes retardés, sont les basophiles, les neutrophiies et les éosinophiles.
L'éosinophile est essentiellement tissulaire et particulièrement au niveau digestif. Les principales causes d'hyperéosinophiles sont l'eczéma atopique, la rhinite allergique et l'asthme mais on connaît aujourd'hui de nombreuses pathologies digestives dans lesquels on observe un recrutement très important des éosinophiles. Le rôle de l'éosinophile dans l'immunomodulation est aujourd'hui reconnu. Cette cellule est rapidement présente sur le site de la réaction inflammatoire et est essentiellement localisée au niveau des muqueuses.
L'éosinophile contient de nombreux médiateurs cytotoxiques tels que l'eosinophil peroxydase (EPO) qui sont libérés par dégranulation mais les inhibiteurs de la dégranulation des éosinophiles sont peu connus. Les éosinophiles isolés de patients asthmatiques contiennent une activité élevée de type chymotrypsine ce qui semble impliquer ces protéases dans les mécanismes de dégranulation. Ainsi, le mésilate de nafamostat, puissant inhibiteur des sérine-protéases, inhibe non seulement l'activité protéolytique mais augmente aussi le nombre d'éosinophiles dans le BAL (lavage broncho-alvéolaire). De même, le SLPI (secretory leucocyte protéase inhibiteur) inhibe, dans un modèle d'allergie conjonctivale, le développement de la conjonctivite chez le cobaye.
L'inflammation allergique se décompose en deux phases principales, à savoir une phase immédiate et une phase tardive. L'effet délétère des éosinophiles est surtout impliqué dans la phase tardive et au cours du passage à la chronicité. Les interactions intercellulaires sont multiples et un couple pro-inflammatoire puissant est représenté par le couple éosinophile-mastocyte. L'éosinophile est une cellule sanguine retrouvée dans les tissus sur le site des réactions inflammatoires, colonisant spontanément les muqueuses et douée d'une dualité fonctionnelle caractéristique, participant à la défense anti-tumorale et parasitaire mais jouant également un rôle régulateur majeur sur le système immunitaire. Cette cellule décrite pour la première fois par Paul Ehrilch (1854-1915) est caractérisée par la couleur rouge brique prise par ses granules coiorés par l'éosine, du fait de la présence de protéines fortement basiques.
L'éosinophile possède des récepteurs membranaires pour les IgG (FcvRI et FCYRI I), pour les IgA (FcaRI) et pour les IgE (FCERI et Fc RII) ainsi que pour diverses cytokines (IL2, IL3, IL5, IFNy). L'activation des éosinophiles aboutit à leur dégranulation avec libération de nombreux médiateurs : des médiateurs parmi lesquels des protéines (MBP (major basic protein), ECP (eosinophil cationic protein) et EDN (eosinophil derived neurotoxin) et des enzymes EPO (eosinophil peroxydase), collagenases, pglucuronidase, lysophosphatase, arysulfatase et phosphatase acide, phospholipases, histaminases, catalases, estérases, hexosaminidases. L'activation des éosinophiles conduit, en outre, à ia sécrétion de radicaux oxygénés du stress oxydatif. Ils libèrent également du LTC4, du PAF et des dérivés de la voie de ia cyclooxygénase.
De plus, ils produisent de nombreuses cytokines et particulièrement des cytokines immuno régulatrices (IFNy, IL2, PL12, IL4, IL10, IL3), des cytokines pro-inflammatoires (IL1 , IL6, TNFa), des cytokines anti- inflammatoires (TGFa et β) et des chemokines (RANTES, éotaxine).
L'activation des éosinophiles peut être médiée par les IgE, les IgG ou les IgA, cette dernière pouvant même être, dans certaines situations, plus activatrice que l'IgE et est souvent sous-estimée.
Le neutrophile occupe une place centrale en tant que cellule essentielle de défense et pro-inflammatoire. Cette ceilule est impliquée dans le stress oxydatif car susceptible, à l'image de l'éosinophile, de libérer des dérivés oxygénés extrêmement actifs et toxiques pour les tissus sur le site de la réaction inflammatoire.
Les neutrophiles peuvent être activés par des voies non immunes et immunes et, parmi celles-ci, par la vote des IgA, des IgG et même des IgE. En effet, les neutrophtles expriment le récepteur de haute affinité pour l'IgE et sont les premières cellules recrutées après dommage tissuiaire, agent infectieux ou allergènes. Ainsi, la provocation ailergénique bronchique induit un recrutement massif de neutrophiles au niveau pulmonaire chez l'homme et t'animai.
De plus, les neutrophiles activés synthétisent de l' ILS au cours d'une activation IgE dépendante laquelle induit un afflux supplémentaire de neutrophiles. Le neutrophile, comme l'éosinophile, est susceptible de libérer, après activation, des enzymes protéoiytiques aux effets délétères sur les tissus.
II a donc été, selon la présente invention, démontré que l'ovomucoïde de l'oeuf de caille était capable d'inhiber, outre l'activation des basophiles induite par le f LP (N-formylmethionyl-leucy!- phenylalanine), peptide bactérien possédant des récepteurs spécifiques membranaires sur les polynucléaires humains, l'activation des éosinophiles et des neutrophiles par le fMLP.
Exemple 1 : effet inhibiteur de l'ovomucoïde de l' uf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina sur les éosinophiles.
Un volume de 0,5 ml de sang est prélevé et dilué 3 fois dans le tampon calcium ( 27 mM NaCl, 5 mM KCI, 20 mM Trizma, 5mM CaCI2l 5 mM MgCI2, 5 ÎU/ml héparine, pH 7,4) selon les conditions suivantes :
- témoin négatif : 60 μΙ de tampon calcium sont ajoutés à 60 pl de la solution précédente (solution n°1 ) ;
- témoin positif : 60 μΙ de la solution de N-Formyl-Methionyl-Leucyl- Phenylalanine (fMLP 10-7M, Sigma, USA) sont ajoutés à 60 μ| de ia solution précédente (solution n°2); - échantiiion test : 60 μΙ de !a solution de la dilution de l'ovomucoïde de l'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina à la concentration de 10 pg/ml sont ajoutés à 60 μΙ de la solution précédente (solution n°3).
Les solutions ainsi obtenues sont pré-incubées durant 30 min à température ambiante. Ensuite, 60 μΙ de tampon calcium sont ajoutés à la solution n°1 (témoin négatif - bloc A à la figure 1 ) tandis que 60μΙ de la solution de N-Formyl- ethionyl-Leucyl-Phenylalanine (fMLP 10- 7M, Sigma, USA) sont ajoutés aux solutions n°2 et n°3 (blocs B et C à la figure 1 ) avant une deuxième incubation de 30 min à 37°C.
Dans chacun des trois échantillons, les leucocytes sont spécifiquement marqués et incubés 15 min à température ambiante et à l'obscurité après ajout d'un cocktail d'anticorps marqués (anti-lgE, anti- CD63, anti-CD11 b, anti-CD49d). Le CD49d est un marqueur permettant la sélection des éosiniphiles ainsi que la sélection négative des neutrophiies. Les suspensions leucocytaires ainsi préparées sont ensuite lysées (tampon chlorure d'ammonium) avant une analyse (n=10) par cytométrie en flux (XL Coulter Beckman) permettant de caractériser et de trier les cellules qui sont entraînées par un flux dans le faisceau d'un laser, la lumière réémise permettant de distinguer les différents types de cellules. Il est ainsi possible de distinguer si les marqueurs s'expriment ou non, c'est- à-dire si les éosinophiles sont activés ou non en mesurant l'intensité de fluorescence (FI).
Les résultats obtenus par cytométrie en flux sont illustrés à la Figure 1. Les résultats indiquent que l'ajout de l'ovomucoïde à ia solution comprenant des éosinophiles et le peptide bactérien fMLP réduit significativement (P<0,001 ) l'expression du marqueur CD11 b, ce qui démontre le rôle immunomodulateur de l'ovomucoïde sur la réponse cellulaire des éosinophiles. En effet, la moyenne d'intensité de fluorescence mesurée pour les échantillons contenant l'ovomucoïde est significativement inférieure à la moyenne d'intensité de fluorescence mesurée pour le témoin positif. La diminution de l'intensité de fluorescence du marqueur CD11b démontre une inhibition de l'activation par le fMLP. Le CD11b est une intégrine très impliquée dans la communication avec les cellules épithéiiales et a un rôle physiologique majeur dans la migration des éosinophiies sur le site de la réaction inflammatoire. Une inhibition de l'expression de CD11b correspond donc à la fois à une inhibition de l'activation cellulaire et donc potentiellement à l'inhibition de la libération de médiateurs mais également à une diminution du recrutement de ces cellules sur le site de la réaction inflammatoire.
Exemple 2 : effet inhibiteur de l'ovomucoïde de i'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina sur les neutrophiles.
Un volume de 0,5 ml de sang est prélevé et dilué 3 fois dans le tampon calcium (127 mM NaCI, 5 mM KCI, 20 mM Trizma, 5mM CaCI2, 5 mM MgCI2, 5 lU/ml héparine, pH 7,4) selon les conditions suivantes :
- témoin positif : 60 pl de la solution de N-Formyl-Methionyl-Leucyl- Phenylalanine (fMLP 10-7M, Sigma, USA) sont ajoutés à 60 μΙ de la solution précédente (solution n°1);
- échantillon test : 60 μΙ de la solution de la dilution de l'ovomucoïde de i'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina à la concentration de 10 pg/mi sont ajoutés à 60 μΐ de la solution précédente (solution n°2).
Les solutions ainsi obtenues sont pré-incubées durant 30 min à température ambiante. Ensuite, 60μΙ de la solution de N-Formyl- Methionyt-Leucyl-Phenylalanine (fMLP 10-7M, Sigma, USA) sont ajoutés aux solutions n°1 (bloc A à la figure 2) et n°2 (bloc B à la figure 2) avant une deuxième incubation de 30 min à 37°C.
Dans chacun des trois échantillons, les leucocytes sont spécifiquement marqués et incubés 15 min à température ambiante et à l'obscurité après ajout d'un cocktail d'anticorps marqués (anti-lgE, anti- CD63, anti-CD11 b, anti-CD49d). Il a ainsi été possible de détecter la réponse spécifique des neutrophiles en mesurant l'index d'activation du marqueur CD11b. Ces résultats sont présentés à la Figure 2. Ces résultats montrent que l'ovomucoïde de l'œuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina permet d'inhiber spécifiquement la réponse cellulaire des neutrophiles en réduisant leur activation par le peptide f LP.
Applications potentielles
La dermatite atopique est une maladie inflammatoire de la peau qui affecte entre 10 à 15% des enfants et dont la prévalence est en constante augmentation. Plus de 2/3 des patients commencent leur affection dans la première année de vie. Pour ce qui concerne l'histoire naturelle de la maladie, les auteurs ne sont pas d'accord : certains affirment que 90% des dermatites atopiques sont en rémission avant l'âge de 10 ans tandis que d'autres affirment que seuls 60% de ces enfants ne souffriront plus d'atopie à l'âge adulte. La vérité se situe probablement entre ces deux approches, sachant que les études hospitalières sont biaisées, les petits eczémas n'arrivant pas dans les services hospitaliers. Les critères de mauvais pronostic seraient le début à un âge précoce de manifestations sévères, l'association à une allergie respiratoire de type asthme ou rhinite allergique. Parmi les différentes hypothèses immunologiques, un déséquilibre de la balance Th1/Th2 au profit des cytokines de type 2, étant à i'origine du développement d'une dermatite atopique, est soutenue par des travaux montrant l'existence chez des nourrissons d'un taux sérique élevé d'IL4 plusieurs mois avant le déclenchement de ia dermatite atopique. L'IL5, cytokine majoritairement impliquée dans le recrutement tissulaire des éosinophiles, serait également intimement liée au développement d'une dermatite atopique.
Le traitement de cette pathologie repose sur l'utilisation associée de topiques, d'un régime adapté et d'une chimiothérapie allant des corticoïdes aux immunosuppresseurs. L'éosinophile est impliqué dans de nombreuses pathologies telles que la gastrite, l'oesophagite et la proctocolite à éosinophlle et d'autres maladies inflammatoires intestinales telles que la colite ulcéreuse et la maladie de Crohn. On doit citer également le syndrome Churg-Strauss, la pneumonie à éosinophlle, et, bien entendu, les infestations parasitaires. Toutefois, les causes les plus fréquentes d'éosinophilie, dans le monde occidental, sont les maladies inflammatoires allergiques comme la dermatite atopique, la rhinite allergique et l'asthme. Dans ces pathologies, Téosinophile n'agit pas seul mais de nombreuses coopérations cellulaires sont aujourd'hui démontrées telle que la coopération éosinophile-mastocyte.
L'ovomucoïde a de plus un potentiel immunomodulateur et des effets sur la production de cytokines T cell dépendante ont été décrits. Les effets délétères des protéases issues de l'activation des neutrophiles sur la muqueuse pulmonaire ont conduit à la recherche de molécules thérapeutiques spécifiques. Il a été également démontré que l'inhibition des protéases du neutrophile induisait une meilleure efficacité de la phagocytose par augmentation du burst oxygénatif. De cette façon, une application d'ovomucoïde dans le traitement de la dermatite atopique et affectio similaire permet de bénéficier d'une action intracellulaire anti-protéasique de l'ovomucoïde de l'oeuf de caille laquelle s'ajoute à son activité extracelluiaire naturelle. Ainsi, l'ovomucoïde de l'oeuf de caille montrant un effet inhibiteur sur l'activation des polynucléaires humains (éosinophiles, basophiles, neutrophiles) et est donc un excellent candidat anti-inflammatoire, pas seulement pour la dermatite atopique.
Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition anti-inflammatoire destinée aux humains et aux animaux pour moduler la réponse cellulaire des neutrophiles et des éosinophiles, comprenant un extrait d'ceuf de caille Corturnix corturnix japonica de souche B-Mina comprenant un ovomucoïde et un ovoinhibiteur d' uf de caille.
2. Composition anti-inflammatoire selon les revendication 1 et 2, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins une vitamine choisie dans le groupe constitué des vitamine A, B, C, D, E, F, K et P.
3. Composition anti-inflammatoire selon l'une des quelconque revendications 1 et 2, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un minéral choisi dans le groupe constitué de Al, Bi, Co, Cu, Fe, F, Li, Mg, Ni, P, K, Se, S et Zn.
4. Composition anti-inflammatoire selon l'une des quelconque revendications 1 à 3, caractérisée en qu'elle comprend en outre au moins un acide aminé choisi dans le groupe constitué de Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Val, Glu et Gin.
5. Composition anti-inflammatoire selon l'une des quelconque revendications 1 à 4, caractérisée en qu'elle comprend en outre au moins un extrait végétal choisi dans le groupe constitué des extraits végétaux de racines, de tiges, de feuilles, de fleurs et de fruits.
6. Composition anti-inflammatoire selon l'une des quelconque revendications 1 à 5, caractérisée en qu'elle comprend en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable ou compatible avec l'alimentaire.
7. Composition anti-inflammatoire selon l'une des quelconque revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée préférentiellement sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudre, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays.
8. Composition anti-infiammatoire selon la revendication 3, caractérisée en ce que ie Zn est du Zn protégé.
9. Composition anti-infiammatoire selon les revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle est administrée sous forme d'un complément alimentaire.
PCT/EP2013/052536 2012-02-10 2013-02-08 Composition anti-inflammatoire pour moduler la reponse cellulaire des neutrophiles et des eosinophiles WO2013117692A1 (fr)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015032302A1 (fr) * 2013-09-09 2015-03-12 华中农业大学 Formulation liquide contenant de l'ovomucine et son procédé de préparation

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109954000B (zh) * 2017-12-22 2021-02-23 中国农业大学 驴乳在制备食品或者药物中的用途、治疗溃疡性结肠炎的食品和药物
CN108158841B (zh) * 2018-01-19 2022-02-01 中国农业大学 鹌鹑蛋活性成分ovoinhibitor糖蛋白在抗过敏中的应用
CN108578675A (zh) * 2018-03-13 2018-09-28 中国农业大学 一种小鼠嗜酸性粒细胞食管炎食物过敏模型的建立方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2813531A1 (fr) 2000-09-06 2002-03-08 Medibrevex Formes galeniques d'oligoelements incorpores dans un excipient biologiquement actif d'homogenat d'oeufs de caille et leur procede de fabrication
FR2901137A1 (fr) 2006-05-19 2007-11-23 Dit Bon Michel Betend Nouvelles formes galeniques d'inhibiteurs naturels des enzymes proteasiques, extraits d'oeuf de caille, associes a des vitamines ou/et a des mineraux, acides amines incorpores dans un excipient.
FR2939044A1 (fr) 2008-11-28 2010-06-04 Dit Bon Michel Betend Nouvelles formulations a base de lyophilisats de lait d'anesse et d'inhibiteurs de proteases humaines,indiquees dans l'intolerance au lait,l'inflammation allergique et infectieuse

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2489690A1 (fr) * 1979-05-07 1982-03-12 Coturnix Procede d'obtention de la fraction ovomucoide et d'un extrait d'ovomucoide de l'oeuf de caille, produits ainsi obtenus et leur application a titre de medicament
FR2621484B1 (fr) * 1987-10-08 1991-03-29 Medibrevex Nouvelles formes galeniques d'oeufs de caille pour administration par voie per- et sublinguale dans le traitement des maladies allergiques et leur procede de preparation
FR2810550B1 (fr) * 2000-06-27 2004-10-08 Medibrevex Nouvelle formes galeiques solubles d'oeufs de caille a usage medicamenteux pour lavage oculaire et nasale et leurs procedes de fabrication
FR2811898B1 (fr) * 2000-07-18 2003-12-12 Medibrevex Formes galeniques medicamenteuses homeopathiques d'allergenes impregnes sur un support biologiquement actif pour desensibilisation specifique par voie sublinguale et leur procede de fabrication
US8337914B2 (en) * 2002-02-27 2012-12-25 Access Business Group International Llc Dietary food supplement containing natural cyclooxygenase inhibitors and methods for inhibiting pain and inflammation
FR2838351B1 (fr) * 2002-04-15 2006-07-14 Dit Bon Michel Betend Nouvelles solutions medicamenteuses associant l'oeuf de caille japonaise aux plantes medicinales administrees par voie orale et sublinguale dans les allergies, la pathologie generale et leur procede de fabrication
BRPI0608796B8 (pt) * 2005-05-09 2021-05-25 Unigen Pharmaceuticals Inc método para a preparação de um extrato de planta compreendendo bacuquiol
KR100761248B1 (ko) * 2006-10-12 2007-10-04 주식회사 유니젠 대나무 및 황금 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성피부염 치료를 위한 조성물
US8247398B2 (en) * 2007-02-17 2012-08-21 Ssv Therapeutics, Inc. Zinc complexes of natural amino acids for treating elevated copper caused toxicities
US8338393B2 (en) * 2008-03-24 2012-12-25 Primus Pharmaceuticals, Inc. Combination dosage forms and therapies for supporting bone health
FR2947454B1 (fr) * 2009-07-02 2011-09-02 Dit Bon Michel Betend Innovation destinee a l'homme et l'animal a base d'inhibiteurs naturels des proteases humaines associes a des plantes medicinales, indiquees dans toutes les pathologies
US20120082720A1 (en) * 2010-10-05 2012-04-05 Sam Poon Ang Compositions For Treating Chronic Viral Infections

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2813531A1 (fr) 2000-09-06 2002-03-08 Medibrevex Formes galeniques d'oligoelements incorpores dans un excipient biologiquement actif d'homogenat d'oeufs de caille et leur procede de fabrication
FR2901137A1 (fr) 2006-05-19 2007-11-23 Dit Bon Michel Betend Nouvelles formes galeniques d'inhibiteurs naturels des enzymes proteasiques, extraits d'oeuf de caille, associes a des vitamines ou/et a des mineraux, acides amines incorpores dans un excipient.
FR2939044A1 (fr) 2008-11-28 2010-06-04 Dit Bon Michel Betend Nouvelles formulations a base de lyophilisats de lait d'anesse et d'inhibiteurs de proteases humaines,indiquees dans l'intolerance au lait,l'inflammation allergique et infectieuse

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GEIGER C ET AL: "MIGRATION INHIBITION FACTOR-LIKE ACTIVITY IN INFLAMMATORY SYNOVIAL FLUIDS MIGHT BE DUE TO PROTEASES", CLINICAL AND EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY, vol. 26, no. 1, 1976, pages 176 - 180, XP009163359, ISSN: 0009-9104 *
JOHN GORTON DAVIS ET AL: "Separation and characterization of the ovoinhibitors from chicken egg white", BIOCHEMISTRY, vol. 8, no. 5, 1 May 1969 (1969-05-01), pages 2044 - 2053, XP055040013, ISSN: 0006-2960, DOI: 10.1021/bi00833a039 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015032302A1 (fr) * 2013-09-09 2015-03-12 华中农业大学 Formulation liquide contenant de l'ovomucine et son procédé de préparation

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