WO2013102837A1 - Composição fixadora para citologia, método de fixação de células e suas aplicações - Google Patents
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Classifications
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- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
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- G01N2001/302—Stain compositions
Definitions
- Tissue fixation and treatment techniques include various processing steps, requiring the use of different laboratory steps, are time consuming and not likely to be performed by inexperienced professionals or those unfamiliar with laboratory processing. For example, laboratory techniques cannot be performed by clinicians (doctors or dentists for example).
- Treatment of cells in cytology generally includes harvesting and subsequent shipment to the laboratory for processing. In the laboratory environment, the cells are post-fixed, sometimes centrifuged and then dehydrated and stained (the most commonly used cytology stain is pap smear). At the end the laboratory time is about 108 minutes per sample. In addition, the laboratory conditions for processing cytological samples are demanding.
- Pap smear is considered an international standard for cervicovaginal staining and can also be used for other materials.
- the samples are fixed in ethyl, isopropyl alcohol or polyethylene glycol.
- the slide-fixed material is subjected to a series of ethanol dilutions, followed by a dye and then again to the action of alcohols and cytoplasmic dyes. Finally it is subjected to the action of an alcohol and xylol dehydrator according to the times given below.
- the fixative composition and methodology object of the present invention makes large-scale screening campaigns viable, more precisely in the screening of mucosal neoplasms, such as screening for oral cancer or cervix.
- the described composition is used for the simultaneous fixation, preservation and staining of cells.
- composition object of the present invention is comprised only of an alcoholic base and toluidine blue.
- composition of the present invention may further comprise an acid, preferably a weak acid such as acetic acid and / or distilled water.
- an acid preferably a weak acid such as acetic acid and / or distilled water.
- the fixed cells are mucosal cells, preferably oral cavity cells and uterus exo and endococcus cells.
- the present invention further describes the method of attachment comprising the following steps:
- said cells are mucosal cells, more preferably oral cavity cells and exo and uterine endocells.
- the cytology fixative composition described in this invention performs in one step the fixation and staining of the cells.
- the alcohol base ethyl alcohol
- Acetic acid may also be added to increase the clamping power.
- This composition allows the sample to be obtained for analysis in one minute. It is applied to the slide, which is then rinsed quickly, and the entire procedure achieves a surprisingly short overall time of one minute.
- the present invention describes a fixative and dye composition for described cytology that allows at the same time to stain and fix the cells, i.e. their cellular definition leading to expeditious diagnosis. Therefore, the use of this composition allows a significant simplification of procedures with time shortening and colossal cost reduction.
- the application is innovative from toluidine blue dye to both gynecological and non-gynecological cytology. Until now toluidine blue was used primarily as an intraoral marker to aid in the biopsy technique.
- fixative and dye composition described in the present invention is such that in about 1 minute it is possible to have a sample ready for viewing.
- fixative and dye composition described in the present invention is based on an alcoholic toluidine blue solution.
- the preparation of the composition should comprise the following steps:
- Used ethanol known simply as alcohol, or ethyl alcohol or cereal alcohol, the chemical formula of which is C 2 H 5 OH, is the most common alcohol. It is colorless, miscible in water, it has a density of 0.789 gcm, a melting point of - 114.3 ° c and a boiling point of 78.4 ° c.
- Toluidine blue is a derivative of toluol. It has a solubility of 30g / l (25 ° c), a pH of 2.8 (water at 25 ° c), a molecular mass of 305.82g / mol, is odorless and non-hazardous to transport. It is a metachromatic dye that stains RNA pink and DNA blue.
- toluidine blue powder which is marketed (commonly in 25g flasks) begins with its weighing on a properly calibrated digital scale. After weighing 1 g toluidine blue, it is diluted in 100 ml 70% ethanol, previously measured in a graduated beaker. This mixing happens easily, requiring only a slight stirring. In another graduated cylinder a solution of 0,5% acetic acid diluted in distilled water is prepared. The first beaker is then removed from the first beaker with the toluidine blue 1% alcoholic solution 99,5 ml of the solution to which, in the second beaker, 0,5 ml of the 0,5% acetic acid solution is added. After shaking, we get this new fixative composition ready for use. In this way, taking advantage of miscibility of ethanol, the final solution is able to perform its bivalent fixative and dye function.
- kits which includes the composition and thus ensure their patients are screened for potentially serious conditions, which according to their framework also allow for the aid of distance via email or sms, using a computer or mobile phone.
- the fixative composition thus allows an excellent cellular contour, clearly showing the nucleus of the mucosa cells and their membranes.
- RNA stains pinkish and DNA blue.
- the nuclear and cellular membranes also stain bright blue, which contrasts with the lighter blue cytoplasm.
- 500 cytological specimens were collected, 300 from oral cavity cells, including saliva samples and 200 from exo and uterine tissues. Samples were collected from 200 different people, by 10 professionals, with specific clinical and laboratory training.
- Sample processing can be done by swab or placed in a fixative liquid medium and sent to the laboratory. If it is chosen to be sent to the laboratory, the smeared sample may optionally and in addition be visualized using the technique described below (optional).
Abstract
A presente invenção refere-se a uma composição fixadora para citologia que compreende uma base alcoólica e azul de toluidina, de preferência células mucosas como as células da cavidade oral e células do exo e endocolo do útero. A presente invenção descreve ainda um método para fixação para citologia e a aplicação desta composição e método para uso médico nomeadamente na detecção de neoplasias, de preferência cancro no colo do útero e na cavidade oral.
Description
DESCRIÇÃO
"COMPOSIÇÃO FIXADORA PARA CITOLOGIA, MÉTODO DE FIXAÇÃO DE
CÉLULAS E SUAS APLICAÇÕES"
Domínio técnico da invenção
A composição fixadora para citologia descrita na presente invenção é um meio liquido desenvolvido para células colhidas por esfregaço ou zaragatoa. Destina-se ao uso clinico e laboratorial, no âmbito das ciências da vida, tendo como objectivo a preservação de células e a sua coloração.
É uma composição destinada ao diagnóstico clinico e laboratorial, com elevada aplicabilidade em campanhas de rastreio, destinando-se ao uso por profissionais de saúde com diferentes tipos de formação.
Antecedentes da invenção
As técnicas de fixação e tratamento de tecidos, até agora desenvolvidas, incluem várias etapas de processamento, obrigando à utilização de diferentes passos laboratoriais, são demoradas e não são passíveis de serem executadas por profissionais pouco experientes ou que não estejam familiarizados com o processamento laboratorial. Por exemplo, as técnicas laboratoriais não são passíveis de serem executadas por clínicos (médicos ou médicos-dentistas por exemplo) .
Em geral o tratamento de células em citologia inclui a sua colheita e posterior envio ao laboratório para processamento. Em ambiente laboratorial, as células são pós-fixadas, às vezes centrifugadas e de seguida são desidratadas e coradas (a coloração mais usada em citologia é a de papanicolau) .No final o tempo usado em laboratório é de cerca de 108 minutos por amostra. Acresce ainda o facto de serem exigentes as condições laboratoriais para processamento de amostras citológicas . Para o processamento convencional em citologia ginecológica ou não ginecológica são necessários diversos equipamentos como estufas, centrífugas, hotes, frigoríficos, bancas adaptadas, para além muito equipamento mais pequeno como cuvetes, pipetas várias, provetas, tinas de coloração, entre outros .
Actualmente, em citologia cervicovaginal ou em citologia não ginecológica são usados fixadores à base de álcool (metanol, etanol ou propanol) , num meio líquido ou sob a forma de spray. Estes fixadores fazem apenas preservação celular, não apresentam características tinturiais . Por defeito, um fixador faz apenas preservação celular. Não há registo do uso de fixadores que ao mesmo tempo acrescentem características tinturiais às células e possam por isso diferenciar os vários tipos de organelos celulares, sejam eles basófilos ou acidófilos .
A composição desenvolvida, possui uma base alcoólica de tipo etanol associada ao azul de toluidina, que é um corante metacromático, ou seja, cora de forma diferenciada as estruturas basófilas e acidófilas. Assim, surge pela primeira
vez, uma solução para citologia que é ao mesmo tempo um corante e um fixador. Vulgarmente, a fixação e a coloração são passos diferentes na histoquimica de rotina, apresentam diferentes aplicações, são feitos por produtos diferentes e inclusivé, têm diferentes tempos de processamento. Os fixadores escolhidos podem ser muito diferentes (formol, metanol, etanol, propanol, bouin, gelo, ar) e os corantes apresentam um espectro muito alargado, sendo os mais usados a hematoxilina, a eosina ou o Orange . Por serem até agora considerados incompatíveis, os corantes e os fixadores não se misturam na histoquimica convencional. A composição agora proposta, rompe de forma inequívoca com estes conceitos e torna real pela primeira vez a associação numa mesma composição um fixador (etanol) e um corante (azul de toluidina) . Uma associação como aquela que agora se propõe, nunca foi tentada com sucesso até agora.
No âmbito da química de laboratório aplicada ao diagnóstico em geral e à citologia em particular, nunca se entendeu possível que um corante e um fixador, associados, fossem capazes de produzir a sua acção de forma complementar e sinérgica. De facto, as variáveis em jogo são muitas e difíceis de conciliar (pH, solubilidade, temperatura, tipo de célula, organelos, objectivos de diagnóstico, tempo, entre outras) . Talvez por isso, fosse tida como uma tarefa até agora impossível. Por tudo isto, a solução agora desenvolvida é inovadora desde logo no seu conceito. Concilia e potencia as características químicas dos principais produtos envolvidos sem perder o sentido prático da sua aplicação. Permite o diagnóstico de diversos tipos celulares, com
elevada qualidade, diferenciação das estruturas e com um tempo de execução rápido. Desta forma, a composição descrita na presente invenção permite simultaneamente fixar e corar uma amostra citológica.
Esta composição é totalmente nova uma vez que o azul de toluidina nunca foi usado em soluções fixadoras, nem é usado habitualmente em soluções de tipo alcoólico e muito menos em adição ao ácido acético.
Comparação da técnica clássica usada e a agora proposta com uma nova composição fixadora:
Técnica clássica (coloração de papanicolau) :
A coloração de papanicolau é considerada como padrão internacional de coloração cérvico-vaginal , podendo ser usada igualmente em outros materiais. As amostras são fixadas em álcool etílico, isopropílico ou polietilenoglicol . O material fixado em lâmina é submetido á acção de uma série de diluições de etanol, seguido de um corante e posteriormente novamente sobre a acção de álcoois e corantes citoplasmáticos . Finalmente é submetido á acção de um desidratante de álcool e xilol, de acordo com os tempos apresentados de seguida.
Materiais necessários: fixador citológico, ácido clorídrico, hidróxido de amónio, cubas para coloração, pipetas graduadas, álcool absoluto, xilol, cronometro, tinas de coloração.
Coloração :
• Álcool absoluto - 5'
• Álcool a 95% - 5'
• Álcool a 70% - 5'
• Água destilada - 5'
• Hematoxilina - 2'
• Água destilada - 10'
• Álcool amoniacal - 5'
• Água corrente - 10'
• Álcool a 70% - 5'
• Álcool a 95% - 5'
• Álcool absoluto - 5'
• OG-06 - 1'
• Álcool absoluto - 10'
• Álcool absoluto - 10'
• EA-36 - 2'
• Álcool absoluto - 10'
• Álcool absoluto - 10'
• Xilol - 1'
• Xilol - 1'
• Xilol - 1'
• Tempo total: 108 minutos
De forma a aferir a sensibilidade e especificidade da composição fixadora proposta, foi realizado um estudo piloto que envolveu 200 casos de esfregaços da cavidade oral. Quando relacionados os resultados da composição fixadora e corante
com os da coloração de papanicolau, verifica-se que a nova solução tem sensibilidade de 95% e uma especificidade de 83%. Com estes dados é possível concluir que a composição fixadora proposta constitui uma mais-valia no diagnóstico de lesões da cavidade oral, passível de ser realizada por profissionais menos qualificados na área laboratorial e com tempos mais reduzidos .
Sumário da invenção
A composição fixadora descrita na presente invenção pretende desenvolver uma composição e método inovadores para fixação e coloração de uma citologia tornando este processo mais expedito permitindo de forma mais eficaz a detecção de anomalias células, preferencialmente neoplasias.
Esta composição permite:
• diminuir drasticamente o tempo de fixação e coloração de citologias, permitindo um rastreio fácil e rápido;
• permite diminuir o número de produtos e passos envolvidos no processo, fazendo com que o método de detecção de citologias possa ser utilizado perto dos pacientes ;
• a composição e metodologia objecto da presente invenção não obriga a ter equipamentos muito diferenciados, técnicos qualificados e muitos recursos logísticos e materiais ;
• a composição fixadora e metodologia objecto da presente invenção torna viáveis as campanhas de rastreio em grande escala, mais precisamente no rastreio de
neoplasias nas mucosas, como por exemplo no rastreio cancro oral ou colo do útero.
Assim, consegue-se em pelo menos 1 minuto (de preferência 1- 20 min, ainda mais de preferência 2-15 min, ainda mais de preferência 3-10 min, nomeadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9 min) ter uma amostra pronta a ser visualizada por contraponto com os 60 minutos até agora necessários. Este processamento rápido, pode ser realizado por qualquer profissional não treinado desde que siga as instruções que se anexam ao produto (ao contrário do processamento clássico) . A composição agora desenvolvida, ao contrário da técnica já existente é bastante económica, é universal, não exige equipamento sofisticado, é rápida e não precisa de ser usada em ambiente laboratorial, não necessita de técnicos diferenciados e permite o seu uso em locais inóspitos, com poucos recursos técnicos e humanos. Acresce ainda que possui boas qualidades fisico-quimicas . Não se altera facilmente com as variações térmicas, é pouco sensível à luz, o seu pH é estável, permitindo um transporte fácil e sem riscos, um armazenamento pouco exigente e uma preservação por períodos prolongados de tempo.
Pelos seus componentes, este fixador torna-se bastante competitivo uma vez que é barato e de fácil preparação. Pelas suas características de preservação celular o álcool escolhido é o álcool etílico ou etanol, cuja fórmula química é C2H5OH. Este álcool é bastante miscível em água.
A combinação numa só composição com características de fixação e coloração é totalmente inovadora e nunca até agora
foi tentada com sucesso. Trata-se de uma mais-valia para o mercado, revolucionando definitivamente a forma de tratamento de células com vista à triagem ou ao diagnóstico. É aplicável a todos os tipos celulares, a qualquer ser vivo animal à escala planetária.
A presente invenção descreve uma composição fixadora para citologia que compreende:
a) uma base alcoólica;
b) corante azul de toluidina.
A composição descrita é usada para a fixação, preservação e coloração simultânea de células.
Numa realização preferencial da presente invenção a composição objecto da presente invenção, é apenas constituída por uma base alcoólica e azul de toluidina.
Numa outra realização preferencial da composição objecto da presente invenção, poderá compreender ainda um ácido, de preferência um ácido fraco tal como acético e/ou água destilada .
Numa realização ainda mais preferencial a base alcoólica da composição objecto da presente invenção, poderá ser etanol a 70% (v/v) .
Numa realização mais preferencial da composição objecto da presente invenção a qual compreende
• 80-99,5% p/v base alcoólica e
• 0,5-20 % p/v azul de toluidina.
Ainda mais de preferência 98,5% p/v base alcoólica e 1 % p/v azul de toluidina, 0,5 % p/v de ácido acético.
Numa outra realização preferencial da presente invenção as células fixadas são células da mucosa, de preferência células da cavidade oral e células do exo e endocolo do útero.
Numa realização preferencial da presente invenção a composição pode ser usada em medicina, nomeadamente detecção de neoplasias como por exemplo na detecção de cancro no colo do útero e na cavidade oral .
Numa outra realização preferencial a presente invenção descreve um estojo que compreende as composições descritas
A presente invenção descreve ainda o método de fixação caracterizado por compreender os seguintes passos:
• colocação de amostra de células numa lâmina, de preferência esfregaço;
• secagem da lâmina;
• aplicação das composições descritas;
• lavagem da lâmina com água corrente;
• observação das referidas células.
Numa realização mais preferencial as células referidas serem células da mucosa, mais de preferência células da cavidade oral e células do exo e do endocolo do útero.
Numa realização ainda mais preferencial a observação das referidas células efectua-se de imediato.
A presente invenção descreve ainda o método de obtenção da composição fixadora que compreende os seguintes passos:
a) diluição do pó de azul de toluidina com álcool, agitando;
b) diluição do ácido acético;
c) mistura das soluções de ácido acético e do corante com agitação;
d) acondicionamento do fixador.
Descrição Geral da Invenção
A composição fixadora para citologia descrita nesta invenção, faz num mesmo passo a fixação e a coloração das células. A base alcoólica (álcool etílico) permite a fixação celular e a presença do corante azul de toluidina permite a coloração com uma boa definição celular. Pode também ser adicionado ácido acético de forma a aumentar o poder de fixação. Esta composição permite a obtenção da amostra para análise em um minuto. É aplicado sobre a lâmina, que de seguida é passada por água corrente de forma rápida, atingindo todo o procedimento um tempo total surpreendentemente reduzido de um minuto .
Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção descreve uma composição fixadora e corante para citologia descrita que permite ao mesmo tempo a coloração e fixação das células, ou seja, a sua definição celular levando ao diagnóstico expedito. Assim sendo, o uso desta composição permite uma significativa simplificação de procedimentos com encurtamento de tempos e colossal diminuição de custos. Ao mesmo tempo é inovadora a aplicação
do corante azul de toluidina à citologia quer ginecológica quer não ginecológica. Até agora o azul de toluidina era usado essencialmente como marcador intraoral, para auxiliar na técnica de biópsia.
A composição fixadora e corante descrita na presente invenção é de que permite, em cerca de 1 minuto, ter uma amostra pronta a ser visualizada.
Obtenção da composição fixadora:
A composição fixadora e corante descrita na presente invenção é baseada numa solução alcoólica de azul de toluidina.
Numa realização preferencial, a preparação da composição deve compreender os seguintes passos:
• pesagem do azul de toluidina, que é comercializado em pó;
• preparação de álcool etílico a 70% v/v diluindo 30% de água destilada em 70% v/v de álcool absoluto;
• diluição do azul de toluidina a 1% p/v numa solução de álcool etílico a 70% -por exemplo, adiciona-se lg de azul de toluidina a 100 ml de álcool etílico a 70%.
Numa realização ainda mais preferencial, pode também ser adicionado ácido acético, diluindo-o a 0,5% v/v em água destilada .
Etanol ou álcool comum (C2H5OH) :
O etanol usado, conhecido simplesmente por álcool, ou álcool etílico ou álcool dos cereais, cuja fórmula química é C2H5OH, é o mais comum dos alcoóis. É incolor, miscível em água,
apresenta uma densidade de 0,789gcm , um ponto de fusão de - 114, 3°c e um ponto de ebulição de 78,4°c.
Ácido acético ou ácido etanóico (C2H4O2) :
É um ácido fraco (pH de 4,76 a 25°C) , apresenta um ponto de fusão a 16,5°C e ponto de ebulição de 118, 1°C. É um fixador histológico que habitualmente é usado na preparação da solução de Bouin.
O azul de toluidina ou cloreto de tolônio ( C15H16C I 3 S ) :
O azul de toluidina, é um derivado do toluol. Apresenta uma solubilidade de 30g/l (25°c) , um pH de 2,8 (água a 25°c) , uma massa molecular de 305,82g/mol, é inodoro e de transporte não perigoso. É um corante metacromático que cora de róseo o RNA e de azul o DNA.
Preparação :
A preparação do azul de toluidina que é comercializado em pó (vulgarmente em frascos de 25g) , começa com a sua pesagem numa balança digital, devidamente calibrada. Após a pesagem de lg de azul de toluidina, este é diluído em 100 ml de etanol a 70%, previamente medidos numa proveta graduada. Esta mistura acontece de forma fácil, necessitando apenas de uma leve agitação. Numa outra proveta graduada, prepara-se uma solução de ácido acético a 0,5% diluído em água destilada. De seguida, retira-se da primeira proveta com a solução alcoólica a 1% de azul de toluidina 99,5 ml da solução a que se acrescenta, da segunda proveta, 0,5 ml da solução a 0,5% de ácido acético. Após agitar, obtemos esta nova composição fixadora pronto a ser usado. Desta forma, aproveitando a
miscibilidade do etanol, a solução final está apta a exercer a sua função bivalente de fixador e corante.
Como os procedimentos são simplificados, há ao mesmo tempo uma proporcional redução das condições exigidas. Tornam-se desnecessários equipamentos sofisticados ou laboratórios complexos que consomem grandes recursos materiais e humanos. A composição fixadora desenvolvida permite a execução técnica em lugares remotos e por profissionais pouco diferenciados, ao contrário do que acontece até agora. Tornam-se agora viáveis planos de rastreio em grande escala, em locais remotos e sobretudo acessíveis porque são facilmente viabilizados com poucos recursos económicos.
No âmbito da clínica, os profissionais podem eles próprios possuir um kit, (teste portátil) , que inclui a composição e dessa forma, assegurar aos seus pacientes um despiste de patologias potencialmente graves, que de acordo com o seu enquadramento permitem ainda um auxílio à distância via email ou sms, com recurso a um computador ou telemóvel.
A composição fixadora permite assim, um excelente contorno celular, evidencia bem o núcleo das células da mucosa e as suas membranas . No núcleo o RNA cora de róseo e o DNA de azul. As membranas nucleares e celulares coram igualmente de azul intenso, que contrasta com o citoplasma que fica azul mais claro. Assim, é possível observar a célula perfeitamente diferenciada, clarificando os critérios de malignidade e de intervenção clínica.
Até agora, em locais remotos ou longe dos grandes centros, no interior de Portugal ou numa província de África, não era possível fazer planos de rastreio citológico por rotina ou ter acesso à visualização de uma qualquer citologia em apenas 1 minuto. Era preciso enviar amostras de locais distantes, para laboratórios bem equipados o que tornava impraticável muitas vezes o diagnóstico ou pelo menos inibia bastante a sua concretização. Não menos relevante, são seguramente os custos associados a um qualquer simples procedimento para amostras citológicas .
Com esta nova composição, surge uma solução simples, rápida e económica de todo o processo. No fim, a mais-valia está do lado das pessoas, da sua saúde, no seu acesso. Torna-se possível chegar a uma triagem ou diagnóstico em qualquer lugar do mundo, de forma fácil e cómoda, simplificando procedimentos e aproximando a medicina das populações em geral e dos mais frágeis em particular.
Com esta nova composição, foram já ensaiados vários trabalhos científicos tendo por objectivo a demonstração prática da sua utilidade e inovação. Assim, montamos um estudo em amostras citológicas provenientes da cavidade oral ou de esfregaços ginecológicos. Neste trabalho já efectuado, concluímos que em 100% dos casos, as amostras celulares ficaram bem fixadas e coradas com esta nova composição fixadora, demonstrando de forma clara a sua ambivalência para citologia ginecológica e não ginecológica. Foram ainda efectuados processamentos por indivíduos treinados e na sua maioria por indivíduos não
treinados (estudante e voluntários), que aplicaram o protocolo descrito que acompanha a composição fixadora.
Foram recolhidas 500 amostras citológicas, 300 provenientes de células da cavidade oral, incluindo amostras de saliva e 200 de tecidos do exo e endocolo do útero. As amostras foram recolhidas em 200 pessoas diferentes, por 10 profissionais, com treino especifico de âmbito clinico e laboratorial.
Descrição dos procedimentos (esfregaço) :
• Recolha da amostra;
• Aplicação da amostra na lâmina como esfregaço;
• Secagem da lâmina ao ar - 1 minuto;
• Aplicação da composição descrita na lâmina - 1 minuto;
• Lavagem em água corrente - passagem rápida;
• Observação e leitura.
O processamento das amostras pode ser feito em esfregaço ou colocada a amostra em meio liquido fixador e enviado ao laboratório. No caso de se optar pelo envio ao laboratório, poderá opcionalmente e de forma complementar proceder-se também á visualização da amostra em esfregaço com a técnica que abaixo de descreve (opcional) .
Descrição dos procedimentos (esfregaço e meio liquido) :
• Recolha da amostra;
• Aplicação da amostra na lâmina como esfregaço e em meio liquido;
• Rotulagem do meio liquido e envio ao laboratório;
• Secagem da lâmina ao ar - 1 minuto;
• Aplicação da composição descrita na lâmina - 1 minuto;
• Lavagem em água corrente - passagem rápida;
• Observação e leitura.
A presente invenção não é, naturalmente, de modo algum restrita às realizações descritas neste documento e uma pessoa com conhecimentos médios da área poderá prever muitas possibilidades de modificação da mesma sem se afastar da ideia geral da invenção, tal como definido nas reivindicações .
As realizações acima descritas são todas combinadas entre si de forma trivial.
As seguintes reivindicações definem adicionalmente realizações preferenciais da presente invenção.
Claims
1. Composição fixadora para citologia caracterizada por compreender: uma base alcoólica e azul de toluidina.
2. Composição de acordo com a reivindicação anterior caracterizado por consistir numa base alcoólica e em azul de toluidina.
3. Composição de acordo com as reivindicações anteriores caracterizada por a base alcoólica ser de preferência etanol 70% v/v.
Composição fixadora de acordo com as reivindicações anteriores caracterizada por compreender:
• 80-99,5% p/v base alcoólica;
• 0,
5-20 % p/v azul de toluidina.
Composição fixadora de acordo com as reivindicações anteriores caracterizada por compreender adicionalmente um ácido, de preferência um ácido fraco tal como ácido acético .
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores caracterizadas por compreender:
• 98,5% p/v base alcoólica;
• 1 % p/v azul de toluidina;
• 0,5 % p/v de ácido acético.
7. Composição de acordo com as reivindicações anteriores caracterizado por compreender adicionalmente água destilada .
8. Composição descrita nas reivindicações 1-7 caracterizada por ser usada em medicina.
9. Composição de acordo com a reivindicação anterior caracterizada por ser usada na detecção de neoplasias.
10. Composição de acordo com a reivindicação anterior caracterizada por a neoplasia ser cancro do colo do útero ou cancro da cavidade oral.
11. Estojo para a detecção de neoplasias caracterizado por compreender as composições descritas em qualquer uma das reivindicações anteriores.
12. Método para fixação de citologia caracterizado por compreender os seguintes passos:
• colocação da amostra celulares a analisar numa lâmina, de preferência esfregaço;
• secagem da lâmina;
• aplicação das composições descritas nas reivindicações 1-10 nas referida lâmina;
• lavagem da lâmina com água corrente;
• observação das referidas células.
13. Método de acordo com a reivindicação anterior caracterizado por as referidas células serem células da mucosa, de preferência células da cavidade oral e células do exo e do endocolo do útero.
14. Método de acordo com as reivindicações 12-13 caracterizado por a observação das referidas células se efectuar de imediato.
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