WO2013099332A1 - 病原性微生物の不活性化方法 - Google Patents

病原性微生物の不活性化方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2013099332A1
WO2013099332A1 PCT/JP2012/068023 JP2012068023W WO2013099332A1 WO 2013099332 A1 WO2013099332 A1 WO 2013099332A1 JP 2012068023 W JP2012068023 W JP 2012068023W WO 2013099332 A1 WO2013099332 A1 WO 2013099332A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
aqueous medium
chlorine dioxide
active oxygen
virus
pathogenic microorganisms
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/068023
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
圭一 井手
治男 前田
上田　孝雄
久美子 川村
Original Assignee
エア・ウォーター防災株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by エア・ウォーター防災株式会社 filed Critical エア・ウォーター防災株式会社
Publication of WO2013099332A1 publication Critical patent/WO2013099332A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00—Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/72—Treatment of water, waste water, or sewage by oxidation
    • C02F1/76—Treatment of water, waste water, or sewage by oxidation with halogens or compounds of halogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00—Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/72—Treatment of water, waste water, or sewage by oxidation
    • C02F1/78—Treatment of water, waste water, or sewage by oxidation with ozone

Definitions

  • the present invention relates to a method for inactivating pathogenic microorganisms in an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances.
  • pathogenic microorganisms such as pathogenic bacteria and viruses
  • infectious substances such as secretions and excretions from patients and carriers who have become ill due to pathogenic bacteria or viruses, waste water containing them, or cleaning fluids of medical equipment used for treatment
  • Patent Document 1 a method using hydrogen peroxide and ozone
  • Patent Document 2 a method of treating pathogenic waste with high-concentration ozone
  • Patent Document 3 bactericidal decomposition such as chlorine dioxide
  • pathogenic microorganisms which are infectious substances, have large differences in conditions for losing their infectivity and pathogenicity, and can be inactivated by simple treatment. There are even things that cannot be converted.
  • the waste liquid containing pathogenic microorganisms usually contains various organic substances such as blood and tissues, and these organic substances inhibit the inactivation of pathogenic microorganisms, so that inactivation is more difficult. It becomes.
  • waste liquids from medical institutions contain a large amount of detachment from humans, and many of these are proteins, which are an inhibitory factor in the inactivation of pathogenic microorganisms.
  • the object of the present invention is to inactivate pathogenic microorganisms easily and reliably even in the presence of organic matter, thereby losing infectivity and pathogenicity, and reducing the burden on the environment. It is to provide an activation method.
  • the present invention treats an aqueous medium by sequentially adding an active oxygen donor, chlorine dioxide and an active oxygen donor to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances, and inactivates the pathogenic microorganisms in the aqueous medium. This is a method for inactivating pathogenic microorganisms.
  • the present invention also relates to a method for inactivating a pathogenic microorganism in which an active oxygen donor and chlorine dioxide are sequentially added to an aqueous medium containing a pathogenic microorganism and an organic substance to inactivate the pathogenic microorganism in the aqueous medium.
  • an active oxygen donor and chlorine dioxide are sequentially added to an aqueous medium containing a pathogenic microorganism and an organic substance to inactivate the pathogenic microorganism in the aqueous medium.
  • chlorine dioxide is added, and after the addition of chlorine dioxide, the active oxygen donor is further maintained at the desired concentration for treatment.
  • the active oxygen donor is ozone
  • the chlorine dioxide is stabilized chlorine dioxide
  • the aqueous medium is an infectious waste liquid.
  • the present invention is characterized in that an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances is added with an active oxygen donor and chlorine dioxide to treat the aqueous medium to inactivate pathogenic microorganisms in the aqueous medium.
  • This is a method for inactivating pathogenic microorganisms.
  • pathogenic microorganisms can be inactivated with an active oxygen donor and chlorine dioxide, a large-scale device is not required, and the method can be implemented according to the scale of a facility that handles infectious waste.
  • Patent Document 3 and Embodiments 1 and 2 of the present invention schematically show differences in the state in which ozone and chlorine dioxide exist in an aqueous medium.
  • the present invention treats an aqueous medium by adding an active oxygen donor and chlorine dioxide to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic matter, and inactivates the pathogenic microorganisms in the aqueous medium. It is a conversion method.
  • the active oxygen by the first active oxygen donor destroys or damages the cell wall of the pathogenic microorganism, and chlorine dioxide tends to penetrate deeper into the pathogenic microorganism. It is presumed to be.
  • an active oxygen donor, chlorine dioxide and an active oxygen donor are sequentially added to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances to treat the aqueous medium, and pathogenic microorganisms in the aqueous medium are removed. It is the inactivation method of the pathogenic microorganisms to activate (Embodiment 1).
  • chlorine dioxide is added to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances while maintaining the active oxygen donor at a desired concentration and treating the aqueous medium.
  • the present invention is a pathogenic microorganism inactivation method for inactivating pathogenic microorganisms in the aqueous medium by treating the active oxygen donor at a desired concentration (Embodiment 2).
  • an active oxygen donor is added to a waste liquid containing organic matter and pathogenic microorganisms (S1), chlorine dioxide is added (S2), and an active oxygen donor is further added (S3). it can.
  • Inactivation in the embodiment of the present invention means that the ability of pathogenic microorganisms to self-replicate and / or infectivity is substantially lost.
  • examples thereof include viruses, eubacteria, fungi, and protozoa that have the ability to infect humans, domestic animals, and poultry as hosts, and have the ability to cause diseases.
  • influenza pathogenic microorganisms RNA type with envelope
  • herpes pathogenic microorganisms DNA type with envelope
  • feline calici pathogenic microorganisms RNA type
  • the present invention can be applied to almost all pathogenic microorganisms.
  • viruses include, for example, types 1 and 2 defined in “Act on Prevention of Infectious Diseases and Medical Care for Patients with Infectious Diseases” (Act No. 114 of October 2, 1998).
  • 4 and 5 infectious disease viruses specifically, Ebola virus (pathogenic microorganisms causing Ebola hemorrhagic fever, hereinafter, parentheses indicate diseases caused by pathogenic microorganisms), Crimea Congo virus (Crimea) ⁇ Congo hemorrhagic fever), pressure ulcer virus (smallpox), Junin virus, Sabia virus, Ganarit virus or Machupo virus (South American hemorrhagic fever), Marburg virus (Marburg fever), Lassa virus (Lassa fever), etc.
  • Pathogenic microorganisms 5 types of hepatitis (except E and A) viruses (B, C and other hepatitis viruses), acute encephalitis virus (acute encephalitis), rubella virus (rubella), measles virus (measles), etc. Infectious disease virus.
  • Infectious disease-causing viruses other than the above, for example, human immunodeficiency virus (acquired immune deficiency syndrome), seasonal influenza other than highly pathogenic influenza, chickenpox / herpes virus (varicella, herpes zoster), etc.
  • Viruses such as viruses, herpes simplex virus (HSV) (herpes simplex), herpes simplex virus, enteroviruses that cause aseptic meningitis, echoviruses, Coxsackie viruses can also be inactivated.
  • HSV herpes simplex virus
  • enteroviruses enteroviruses that cause aseptic meningitis
  • echoviruses Coxsackie viruses
  • the embodiment of the present invention may be applied to viruses having envelopes such as human immunodeficiency, hepatitis B, hepatitis C, rubella, HSV, influenza, vaccinia, etc., and rota, adeno, polio. , Coxsackie, Echo, Rhino, Hepatitis A, bovine rota, and other viruses that do not have an envelope can be inactivated, and even if the virus is an RNA virus or a DNA virus, it can be inactivated be able to.
  • envelopes such as human immunodeficiency, hepatitis B, hepatitis C, rubella, HSV, influenza, vaccinia, etc.
  • rota adeno, polio.
  • Coxsackie, Echo, Rhino, Hepatitis A, bovine rota and other viruses that do not have an envelope can be inactivated, and even if the virus is an RNA virus or a DNA virus, it can be inactiv
  • viruses that infect and develop livestock and poultry for example, among the above viruses, those that are transmitted and developed in livestock and poultry, such as avian influenza and swine influenza as well as cattle, horses, etc.
  • bovine pathogenic microbial diarrhea pathogenic microorganisms bovine pathogenic microbial diarrhea / mucosal disease
  • bovine herpes pathogen Microbial organisms bovine infectious rhinotracheitis
  • bovine leukemia pathogenic microorganisms bovine leukemia
  • Newcastle disease pathogenic microorganisms Tri-Newcastle disease
  • the pathogenic bacteria include, for example, Mycobacterium tuberculosis, Vibrio cholerae, Syphilis treponema, Neisseria gonorrhoeae, Shigella, fulminant hemolytic streptococci, Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Rhizobium, Rhizobium , Anthrax, meningococcus, tetanus, streptococci, idiopathic rash, pertussis, pneumococci, pneumococci, staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis, diphtheria, methicillin-resistant Staphylococcus aureus, drug-resistant Pseudomonas aeruginosa, Pathogenic Escherichia coli such as enterotoxinogenic Escherichia coli, enterohemorrhagic Escherichia coli, verotoxin
  • the organic substance is derived from humans or animals, and refers to substances that inhibit inactivation of infectious substances such as bacteria and pathogenic microorganisms. Substances released from livestock, poultry and pets.
  • Examples of the substance removed from humans include human tissues such as bones, hair, nails, skin, organs and muscles, cells or components, human body fluids such as blood and lymph, and human excrement such as feces.
  • examples of the detached material from livestock and poultry include various tissues such as hair, muscles, organs, blood, and excrement such as feces.
  • the aqueous medium in the embodiment of the present invention includes an aqueous solution or infectious waste liquid containing pathogenic microorganisms and organic substances.
  • pathogenic microorganisms used on a laboratory scale or a relatively small scale.
  • waste liquids from microorganism-related facilities and medical institutions particularly medical institutions and facilities targeting infectious diseases, can be mentioned.
  • aqueous media can carry out the present invention even if components or microorganisms other than the pathogenic microorganisms and organic substances targeted by the embodiments of the present invention are contained. Further, as a matter of course, the present invention can be carried out even with an aqueous solution or infectious waste liquid that does not contain organic substances and contains pathogenic microorganisms.
  • an active oxygen donor (hereinafter referred to as first active oxygen) to be added first to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances (hereinafter simply referred to as an aqueous medium) is active in the aqueous medium.
  • first active oxygen an active oxygen donor to be added first to an aqueous medium containing pathogenic microorganisms and organic substances (hereinafter simply referred to as an aqueous medium) is active in the aqueous medium.
  • Any material can be used as long as it generates oxygen, and specific examples thereof include ozone and hydrogen peroxide. Of these, ozone is particularly preferable.
  • These 1st active oxygen can use a commercially available thing suitably.
  • chlorine dioxide (ClO 2 ) used in the embodiment of the present invention can be stored by dissolving chlorine dioxide in an alkaline aqueous solution or aqueous solution in addition to chlorine dioxide produced by dissolving an acid in chloric acid.
  • Stabilized chlorine dioxide can be preferably used.
  • the gelatinized chlorine dioxide which made the chlorine dioxide into the gel form is also known, such chlorine dioxide can also be used conveniently.
  • the active oxygen donor (hereinafter referred to as second active oxygen) used subsequent to chlorine dioxide, those mentioned as the first active oxygen can be used, and ozone is particularly preferable.
  • ozone as the first and second active oxygens and stabilized chlorine dioxide as the chlorine dioxide.
  • first and second active oxygens and chlorine dioxide can be used in appropriate combinations of the respective components.
  • ozone and hydrogen peroxide may be used in combination as the first and second active oxygens.
  • Chlorine dioxide and stabilized chlorine dioxide may be used in combination as chlorine.
  • the first active oxygen may be directly added to the aqueous medium containing the organic matter and the pathogenic microorganism so as to obtain a desired concentration.
  • a concentration of the first active oxygen may be dissolved in the aqueous solution, or when the first active oxygen is a gas such as ozone, ozone is directly added to the aqueous medium so as to obtain a desired concentration. You may add it by blowing.
  • the amount of the first active oxygen added varies depending on the type and content of the organic substance in the aqueous medium and the type and content of the pathogenic microorganism, but in any of the above cases, the medium generally contains the pathogenic microorganism and the organic substance.
  • an amount of 0.5 to 20 ppm contained as active oxygen may be added, preferably 0.5 to 10 ppm, more preferably 1 to 5 ppm, and most preferably 2 to 3 ppm. .
  • the active oxygen may be allowed to stand, but the aqueous medium is stirred or circulated for efficient diffusion. What is necessary is just to mix.
  • the mixing can be carried out at room temperature without requiring heating or cooling.
  • the treatment with the first active oxygen varies depending on the type and content of the organic substance in the aqueous medium and the type and content of the pathogenic microorganism, but is completed from about several minutes to 1 hour.
  • chlorine dioxide may be added directly to the aqueous medium so as to obtain a desired concentration, and an amount of chlorine dioxide to a desired concentration in the aqueous medium. May be dissolved in an aqueous solution, or chlorine dioxide may be directly blown into the aqueous medium so as to obtain a desired concentration in a gaseous state.
  • chlorine dioxide When stabilized chlorine dioxide is used as chlorine dioxide, it is usually stored as an alkaline solution, and can be carried out by adding it to the aqueous medium as it is to obtain a desired concentration.
  • the first active oxygen initially added to the aqueous medium may remain in the aqueous medium or may not be consumed and remain.
  • chlorine dioxide may be added to the aqueous medium so as to have a concentration of 5 to 1000 ppm, preferably 5 to 600 ppm, particularly preferably 5 to 200 ppm. That's fine.
  • the treatment with chlorine dioxide can be performed under the same conditions as those for treating the aqueous medium with the first active oxygen.
  • the treatment time varies depending on the type and content of the organic substance in the aqueous medium and the type and content of the pathogenic microorganism, but the treatment with chlorine dioxide is completed in about 1 minute to 1 hour.
  • the second active oxygen varies depending on the type and content of the organic matter in the aqueous medium and the type and content of the pathogenic microorganism, but the second active oxygen has the same concentration as the first active oxygen with respect to the aqueous medium. What is necessary is just to add. In addition, when the second active oxygen is added, the first active oxygen may or may not remain.
  • the second active oxygen may be added directly into the aqueous medium, or may be added by dissolving, mixing or suspending in a medium such as water so as to have a predetermined concentration.
  • the second active oxygen is ozone, it may be blown into the aqueous medium as a gas.
  • the treatment with the second active oxygen can be performed under the same conditions as the treatment with the first active oxygen.
  • chlorine dioxide is added to the aqueous medium while maintaining the first active oxygen at a desired concentration while treating the aqueous medium, and the second active oxygen is further added after adding chlorine dioxide. Is maintained at a desired concentration, that is, the first and second active oxygens are continuously present in the aqueous medium to inactivate pathogenic microorganisms.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a method according to Patent Document 3 as FIGS. 2 (1) to 2 (3) as shown in Table 1.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a method according to Patent Document 3 as FIGS. 2 (1) to 2 (3) as shown in Table 1.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a method according to Patent Document 3 as FIGS. 2 (1) to 2 (3) as shown in Table 1.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a method according to Patent Document 3 as FIGS. 2 (1) to 2 (3) as shown in Table 1.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a method according to Patent Document 3 as FIGS. 2 (1) to 2 (3) as shown in Table 1.
  • FIG. 2 is a diagram schematically showing Embodiments 1 and 2 of the present invention and a
  • the first active oxygen such as ozone is applied to the aqueous medium from the beginning as indicated by reference numerals 2a and 2b. Is added at a constant concentration, and at an appropriate time during the treatment, as indicated by reference numerals 1a and 1b, chlorine dioxide is added, and further, the second active oxygen is maintained at a constant concentration, thereby treating the pathogenic microorganism. Can be inactivated.
  • the first active oxygen can be preferably used as the second active oxygen, and the chlorine dioxide can be used as described above. can do.
  • Example 1 Three types of viruses, influenza virus, human herpes simplex virus, and feline calicivirus (a rotavirus substitute virus), were used as inactivation target viruses in this example.
  • ozone After aeration of ozone in distilled water containing 1% FBS (fetal bovine serum) as an organic substance so that the concentration is maintained at 2 ppm, stabilized chlorine dioxide is added to 10 ppm, and ozone is further adjusted to 2 ppm. The treated water aerated was added to the virus-containing solution and allowed to stand for 30 minutes, and then the infectivity value of the virus was measured.
  • FBS fetal bovine serum
  • the infectivity titers of the viruses used were 1.1 ⁇ 10 7 PFU / ml for influenza virus, 2.6 ⁇ 10 6 PFU / ml for human herpes simplex virus, and 4.2 ⁇ 10 6 PFU / ml for feline calicivirus. ml.
  • the virus infectivity titer was measured as follows using each cell.
  • influenza virus PR8 strain was inoculated into the chorioallantoic cavity of a chicken fertilized egg (10-day egg), cultured for 2 days, and then chorioallantoic fluid was collected and centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes at 4 ° C. % And 60% sucrose, and centrifuged at 25,000 rpm for 90 minutes to purify the virus.
  • HSV human herpes simplex virus type I strain
  • FCV feline calicivirus F9 strain
  • ⁇ Cell> Human colon cancer-derived CaCo2 cells were used as cells for measuring the infectious titer of influenza virus.
  • Cat kidney-derived CRFK cells were used as cells for measuring the infectious titer of feline calicivirus.
  • Green monkey kidney-derived Vero cells were used as cells for measuring HSV infectivity.
  • a culture solution containing 0.8% agarose gel or methylcellulose was added and cultured for 48 to 96 hours. After culturing for 48 to 96 hours, virus cells were fixed with methanol or 10% formalin, 20% ethanol solution containing 0.1% crystal violet was added, plaque was calculated, and infectivity titer was calculated.
  • a culture solution containing 0.8% agarose gel or methylcellulose was added and cultured for 48 to 96 hours. After culturing for 48 to 96 hours, virus cells were fixed with methanol or 10% formalin, 20% ethanol solution containing 0.1% crystal violet was added, plaque was calculated, and infectivity titer was calculated.
  • Example 1 Using the influenza virus of Example 1, FBS was added to distilled water containing 2 ppm ozone to a final concentration of 1.0%, and stabilized chlorine dioxide was added to 10 ppm to treat the virus for 1 minute. The virus was inactivated.
  • Example 2 Using the influenza virus used in Example 1, FBS was added to distilled water containing 2 ppm of ozone to a final concentration of 1.0%, and the virus was added for treatment for 1 minute to inactivate the virus.
  • test strain Bacterium butyris ATCC 19659 (hereinafter referred to as test strain) was used as the strain used, and Bacttriptycase soy agar (TSA) (manufactured by Difco) and Tipicosoy broth TSB-BP13 (TSB) (manufactured by Mos Laboratories) were used as the medium used. ) was used.
  • TSA Bacttriptycase soy agar
  • TSB-BP13 Tipicosoy broth TSB-BP13
  • test strain was cultured in a TSA medium supplemented with 5 ⁇ g / ml of manganese sulfate for promoting the spore formation of the test strain, and the method of Roth et al. (Roth, S., J. Feichtinger, C., Hertel. 2010, Journal of Applied Microbiology 108,521-532).
  • the bacterial solution was stored at 4 ° C.
  • Stabilized chlorine dioxide made by International Dioxide Ink
  • 10 mM phosphate buffer solution manufactured by Sigma
  • Neutralizer 10% Tween 80, 0.1% histidine, 0.5% sodium thiosulfate / PBS (pH 7.4)
  • Antifoaming agent KM-73E (manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.)
  • ⁇ Judgment> To confirm the presence of the spore bacteria, a 10-fold dilution series (10 ⁇ 1 to 10 ⁇ 4 ) was prepared from the collected bacterial solution with PBS, and 100 ⁇ l of each of the diluted solutions was inoculated into TSA medium. After culturing at 37 ° C. for 48 hours, the number of colonies (CFU) grown on the medium was counted to calculate the number of viable bacteria.
  • enrichment with a liquid medium was also performed to check for the presence of residual bacteria. Specifically, 200 ⁇ l of the collected bacterial solution was inoculated into 2 ml of TSB and cultured at 37 ° C. for 48 hours. When the color change or turbidity of the indicator in the medium occurred, it was determined that the bacteria could not be sterilized, and when neither was observed, the bacteria did not grow.
  • the active oxygen donor, the stabilized chlorine dioxide, and the active oxygen donor are used in this order, so that pathogenic microorganisms in an aqueous medium containing an organic substance can be efficiently converted by the synergistic effect of the above components. Can be inactivated.
  • pathogenic microorganisms in an aqueous medium containing an organic substance having a concentration higher than usual of 0.3% or 1.0% are contained in ozone of 2 to 3 ppm, stabilized chlorine dioxide of 10 ppm, ozone 2
  • the ability to inactivate at a low concentration of ⁇ 3 ppm is extremely effective.
  • the concentration of organic substances in normal hospital effluent is about 0.02%, and the normal concentration when using stabilized chlorine dioxide as a disinfectant. If it is 300-400 ppm, it is clear that it is a very surprising effect.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Treatment Of Water By Oxidation Or Reduction (AREA)
  • Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)

Abstract

　有機物の存在下でも、病原性微生物を、環境への負荷を軽減しつつ、簡単かつ確実に病原性微生物を不活性化する方法を提供する。病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体、二酸化塩素および活性酸素供与体を順次加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体の病原性微生物を不活性化する。

Description

病原性微生物の不活性化方法
　本発明は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体中の病原性微生物を不活性化する方法に関する。
　病原性細菌やウイルスなどの病原性微生物を不活性化することは、医療機関などの感染性物質を取り扱う施設にとって非常に重要なことである。とりわけ、病原性細菌やウイルスなどにより発病した患者や保菌者からの分泌物や排泄物もしくはこれらを含む排水、治療に使用した医療機器の洗浄液などの感染性物質を外部に排出する場合には、当該廃液が感染性をもたない程度にまで病原性微生物などを不活性化処理しなければならないが、この処理には大規模な装置を必要とするうえ、運転コストなどを考慮すると非常に大きな負担を強いられることとなる。
　一方、感染性廃液の処理方法としては、たとえば過酸化水素とオゾンを用いる方法（特許文献１）、高濃度オゾンで病原性廃棄物を処理する方法（特許文献２）、二酸化塩素などの殺菌分解剤で前処理をし、その後オゾン処理をすることを特徴とする感染性廃棄物の処理方法（特許文献３）などが知られている。
特開２００１－０００９８２号公報 特開平０５－２９３１６７号公報 特開２００４－２４９２２号公報
　特許文献１に記載された発明では、実際のＥｍｂａｌｍｉｎｇ廃液（死体保存処理廃液）を用いた処理例が記載されているものの、感染性微生物として記載されているのは、ブドウ球菌に対する効果に過ぎず、病原性微生物の不活性化効果があるかどうかは記載されていない。また、特許文献２に記載された発明では、大腸菌やＢ型肝ウイルスに対して完全に殺菌できるとされているが、具体的データとともに記載されているのは大腸菌のみであるうえ、この発明では高濃度のオゾンを使用するので、そのための大規模な装置が必要となる。
　特許文献３に記載された発明では、ウイルスや病原菌についての不活性化効果がほとんど示されていないので、ウイルス不活性化における実効性が担保されていないという問題がある。
　一方、感染性物質である病原性微生物は、その感染性・病原性を失わせるための条件に大きな差異があり、簡単な処理で不活性化できるものから、厳しい条件で処理しなければ不活性化できないものまで存在する。
　しかも、病原性微生物を含む廃液中には、通常、血液や組織など種々の有機物が含まれており、これらの有機物が病原性微生物の不活性化を阻害するので、よりその不活性化は困難となる。
　とりわけ、医療機関からの廃液には、ヒトからの離脱物が多く含まれており、これらの多くはタンパク質であることにより、病原性微生物の不活性化において阻害要因となる。
　また、有機物が存在する状況では、確実に病原性微生物を不活性化するためとはいえ、塩素を増加させることはトリハロメタンの生成増につながり、新たな環境問題を惹起するという問題があり、簡便で、確実な病原性微生物の不活性化方法が望まれている。
　本発明の目的は、有機物が存在しても病原性微生物を簡単かつ確実に不活性化して、感染性・病原性を失わせることができ、かつ環境への負荷を軽減した病原性微生物の不活性化方法を提供することである。
　本発明は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体、二酸化塩素および活性酸素供与体を順次加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化することを特徴とする病原性微生物不活性化方法である。
　また本発明は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体および二酸化塩素を順次加えて、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化する病原性微生物の不活性化方法であって、活性酸素供与体を所望の濃度に維持して前記水性媒体を処理しつつ、二酸化塩素を加え、二酸化塩素添加後もさらに前記活性酸素供与体を所望濃度に保って処理することを特徴とする病原性微生物の不活性化方法である。
　さらに、本発明において、活性酸素供与体がオゾンであり、二酸化塩素が安定化二酸化塩素であり、水性媒体が感染性廃液である。
　さらに、また本発明は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体および二酸化塩素を加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化することを特徴とする病原性微生物の不活性化方法である。
　本発明によれば、活性酸素供与体と二酸化塩素で病原性微生物を不活性化できるので、大規模な装置が不要であり、感染性廃棄物を取り扱う施設の規模に応じて実施できる。
　本発明によれば、処理後の廃液中に病原性微生物の不活性化のための薬剤またはこれに起因する副生物がなく、トリハロメタンなど環境に対して負荷をかける物質の産生もないため、環境問題がない。
　本発明の目的、特色、および利点は、下記の詳細な説明と図面とからより明確になるであろう。
本発明の実施形態の病原性微生物の不活性化方法の処理工程を示したものである。 先行技術文献のうち特許文献３と本発明の実施形態１および２について、オゾンと二酸化塩素が水性媒体中で存在する状態の相違を模式的に示したものである。
　以下図面を参考にして本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。
　本発明は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体および二酸化塩素を加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化する病原性微生物の不活性化方法である。
　本発明の作用機作については、明らかではないが、まず最初の活性酸素供与体による活性酸素が、病原性微生物の細胞壁を破壊ないし損傷させ、二酸化塩素が病原性微生物の内部により深く浸透しやすくなるためと推測される。
　本発明の実施形態は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体、二酸化塩素および活性酸素供与体を順次加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化する病原性微生物の不活性化方法（実施形態１）である。
　また、本発明の他の実施形態は、病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体を所望の濃度に維持して水性媒体を処理しつつ、二酸化塩素を加え、二酸化塩素添加後もさらに前記活性酸素供与体を所望濃度に保って処理することによって、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化する病原性微生物の不活性化方法（実施形態２）である。
　図１にしたがって本実施形態の方法を説明する。まず、有機物と病原性微生物を含む廃液に活性酸素供与体を添加し（Ｓ１）、二酸化塩素を添加し（Ｓ２）、さらに活性酸素供与体を添加する（Ｓ３）ことによって好適に実施することができる。
　本発明の実施形態において不活性化とは、病原性微生物が有する自己複製能力もしくは感染力またはその両方の能力を実質的に失なわせることを意味し、その対象となる病原性微生物としては、宿主である人、家畜、家禽に感染する能力を有し、かつ疾病を発症させる能力を有するウイルス、真正細菌、菌類および原生動物などがあげられる。
　本発明の実施形態においては、後記、実施例に具体的に示すとおり、インフルエンザ病原性微生物（ＲＮＡ型でエンベロープ有）、ヘルペス病原性微生物（ＤＮＡ型でエンベロープ有）、ネコカリシ病原性微生物（ＲＮＡ型でエンベロープ無）および芽胞菌という病原性微生物構造がそれぞれ異なる病原性微生物に有効であるから、殆どの病原性微生物に対して本発明を適用することができる。
　かかる病原性微生物のうち、ウイルスとしては、たとえば、「感染症の予防及び感染症の患者に対する医療に関する法律」（平成十年十月二日法律第百十四号）に定める１類，２類，４類，５類感染症ウイルスがあげられ、具体的には、エボラウイルス（エボラ出血熱の原因病原性微生物、以下、かっこ内は病原性微生物によって発症する疾病を示す）、クリミア・コンゴウイルス（クリミア・コンゴ出血熱）、痘瘡ウイルス（天然痘）、フニンウイルス、サビアウイルス、ガナリトウイルスまたはマチュポウイルス（南米出血熱）、マールブルグウイルス（マールブルグ熱）、ラッサウイルス（ラッサ熱）などの１類感染症ウイルス、ポリオウイルス（急性灰白髄炎）、ＳＡＲコロナウイルス（重症急性呼吸器症候群）、Ｈ５Ｎ１ウイルス（鳥インフルエンザ）などの２類感染症ウイルス、ＨＥＶウイルス（Ｅ型肝炎）、ウエストナイルウイルス（ウエストナイル熱）、ＨＡＶウイルス（Ａ型肝炎）、黄熱ウイルス（黄熱）、オムスクウイルス（オムスク出血熱）、キャサヌル森林病ウイルス（キャサヌル森林病）、狂犬病ウイルス（狂犬病）、サル痘ウイルス（サル痘）、ハンタウイルス（腎症候群性出血熱）、西部ウマ脳炎ウイルス（西部ウマ脳炎）、ダニ媒介脳炎ウイルス（ダニ媒介脳炎）、デングウイルス（デング熱）、東部ウマ脳炎ウイルス（東部ウマ脳炎）、鳥インフルエンザ（Ｈ５Ｎ１を除く）ウイルス（鳥インフルエンザ）、ニパウイルス（ニパウイルス感染症）、日本脳炎ウイルス（日本脳炎）、ハンタウイルス（ハンタウイルス肺症候群）、Ｂウイルス（Ｂウイルス病）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ベネズエラウマ脳炎）、ヘンドラウイルス（ヘンドラ病原性微生物感染症）、リッサウイルス（リッサ病原性微生物感染症）、リフトバレー熱ウイルス（リフトバレー熱）などの４類感染症病原性微生物、さらには、肝炎（Ｅ，Ａを除く）ウイルス（Ｂ、Ｃその他の肝炎ウイルス）、急性脳炎ウイルス（急性脳炎）、風疹ウイルス（風疹）、麻疹ウイルス（麻疹）などの５類感染症ウイルスがあげられる。
　上記以外の感染症原因ウイルス、たとえば、ヒト免疫不全ウイルス（後天性免疫不全症候群）、高病原性インフルエンザ以外の季節性インフルエンザ、水痘・疱疹ウイルス（水痘、帯状疱疹）、などのほか、サイトロメガウイルス、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）（単純疱疹）、単純ヘルペスウイルスや、無菌性髄膜炎の原因となるエンテロウイルス、エコーウイルス、コクサッキーウイルスなどのウイルスも不活性化することができる。
　また、本発明の実施形態は、対象となるウイルスがヒト免疫不全、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、風疹、ＨＳＶ、インフルエンザ、ワクシニアなどのエンベロープを有するウイルスであっても、またロタ、アデノ、ポリオ、コクサッキー、エコー、ライノ、Ａ型肝炎、牛ロタなどエンベロープを有しないウイルスであっても不活性化でき、さらにはウイルスがＲＮＡ型ウイルスであってもＤＮＡ型ウイルスであっても不活性化することができる。
　さらに、家畜・家禽に感染し、発症させるウイルスとしては、たとえば、上記ウイルスのうち、家畜・家禽に伝染・発症するもの、たとえば典型的なものとしてトリインフルエンザ、ブタインフルエンザなどのほか、ウシ、ウマ、ブタ、トリなどに感染して、呼吸疾患や伝染性下痢をおこさせる各種コロナ病原性微生物のほか、ウシ病原性微生物性下痢病原性微生物（ウシ病原性微生物性下痢・粘膜病）、ウシヘルペス病原性微生物（ウシ伝染性鼻気管炎）、ウシ白血病病原性微生物（ウシ白血病）、ニューカッスル病病原性微生物（トリニューカッスル病）などがあげられる。
　また、病原性微生物のうち、病原性細菌としては、例えば、結核菌、コレラ菌、梅毒トレポネーマ、淋菌、赤痢菌、劇症型溶血性連鎖球菌、チフス菌、パラチフス菌、鼻疽菌、類鼻疽菌、炭疽菌、髄膜炎菌、破傷風菌、レンサ球菌、突発性発しん、百日咳、肺炎球菌、肺炎桿菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、ジフテリア菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、薬剤耐性緑膿菌、腸管毒素原性大腸菌、腸管出血性大腸菌、ベロ毒素産生大腸菌などの病原性大腸菌、ペスト菌、野兎病菌、ブルセラ菌、ボツリヌス菌、レジオネラ菌、回帰熱菌、オウム病クラミジア、ライム病菌などの細菌のほか、Ｑ熱リケッチャ、コクシジオイデス症真菌、マラリア原虫、クリプトスポリジウム原虫などに対しても不活性化効果を有する。
　さらに本発明の実施形態において、有機物とは、ヒトまたは動物由来のものであって、細菌や病原性微生物などの感染性物質の不活性化を阻害するものをいい、具体的には、ヒトまたは家畜、家禽、ペットから離脱した物質をいう。
　ヒトからの離脱物としては、骨、毛髪、爪、皮膚、臓器、筋肉などのヒトを構成する組織、細胞もしくは成分、血液、リンパ液などのヒト体液、糞便などのヒト排せつ物があげられる。
　また家畜・家禽からの離脱物としては、体毛、筋肉、臓器、血液などの諸組織のほか、糞便などの排せつ物があげられる。
　さらに、本発明の実施形態における水性媒体としては、病原性微生物および有機物を含む水溶液または感染性廃液があげられ、具体的には、たとえば実験室規模ないしは比較的小規模で使用された病原性微生物および有機物を含む廃液のほか、微生物関連の施設や医療機関、とりわけ感染症を対象とした医療機関や施設からの廃液があげられる。
　これらの水性媒体には、本発明の実施形態の対象となる病原性微生物および有機物以外の成分や微生物が含まれていても、本発明を実施することができる。また、当然のことながら、有機物を含まず病原性微生物を含む水溶液または感染性廃液であっても本発明を実施することができる。　
　本発明の実施形態において、病原性微生物および有機物を含む水性媒体（以下、単に水性媒体という）に、最初に加える活性酸素供与体（以下、第１活性酸素という）としては、水性媒体中で活性酸素を発生するものであればよく、特に限定されないが、具体的にはたとえばオゾン、過酸化水素などがあげられる。これらのうち、とりわけオゾンが好ましい。これらの第１活性酸素は市販のものを好適に使用することができる。
　さらに、本発明の実施形態において用いられる二酸化塩素（ＣｌＯ２）としては、塩素酸に酸を溶解して製造される二酸化塩素のほか、二酸化塩素をアルカリ性水溶液または水溶液に溶存させて貯蔵を可能にした安定化二酸化塩素を好適に使用することができる。また、二酸化塩素をゲル状にしたゲル化二酸化塩素も知られているが、このような二酸化塩素も好適に使用することができる。
　本発明の実施形態においては、取り扱い容易性や安全性の面で優れている安定化二酸化塩素を用いるのが好ましい。
　また、二酸化塩素に続いて用いられる活性酸素供与体（以下、第２活性酸素という）としては、前記、第１活性酸素としてあげたものを用いることができ、とりわけオゾンが好ましい。
　本実施形態の方法においては、第１および第２活性酸素としてオゾン、二酸化塩素として安定化二酸化塩素を用いることが好ましい。
　また、これら第１および第２活性酸素と二酸化塩素は、各成分を適宜組み合わせて用いることもでき、たとえば、第１、第２活性酸素としてオゾンと過酸化水素を併用してもよく、また二酸化塩素として二酸化塩素と安定化二酸化塩素を併用するなどしてもよい。
　第１活性酸素の前記水性媒体への添加は、有機物および病原性微生物を含む水性媒体に、所望の濃度となるように第１活性酸素を直接加えてもよく、また前記水性媒体中で所望の濃度となる量の第１活性酸素を水溶液に溶解して加えてもよく、または第１活性酸素がオゾンのような気体であるときは、所望の濃度となるよう前記水性媒体中に直接オゾンを吹き込むようにして加えてもよい。
　第１活性酸素の添加量は、水性媒体中の有機物の種類や含有量、病原性微生物の種類や含有量によっても変動するが、上記いずれの場合も、概ね病原性微生物および有機物を含む媒体に対して、活性酸素として０．５～２０ｐｐｍ含まれる量を添加すればよく、好ましくは０．５～１０ｐｐｍ、さらに好ましくは１～５ｐｐｍであり、もっとも好ましくは２～３ｐｐｍとなるよう添加すればよい。
　第１活性酸素を前記水性媒体中に加えたのち、活性酸素を前記水性媒体中に拡散させるには、静置してもよいが、効率的に拡散させるため前記水性媒体を攪拌または循環して混合すればよい。該混合は特に加熱や冷却を必要とせず、常温で実施することができる。第１活性酸素による処理は、水性媒体中の有機物の種類や含有量、病原性微生物の種類や含有量によっても変動するが、概ね数分程度から１時間で完了する。
　第１活性酸素に続く、二酸化塩素の添加は、前記水性媒体に、所望の濃度となるように、二酸化塩素を直接加えてもよく、また前記水性媒体中で所望の濃度となる量の二酸化塩素を水溶液に溶解して加えてもよく、または二酸化塩素を気体のまま所望の濃度となるよう前記水性媒体中に直接吹き込むようにしてもよい。
　二酸化塩素として安定化二酸化塩素を用いるときは、通常アルカリ溶液として保存されているので、そのまま所望の濃度となるよう前記水性媒体に加えることによって実施できる。
　二酸化塩素を前記水性媒体中に加える場合、前記水性媒体に最初に加えた第１活性酸素は、水性媒体中に残存していてもよく、あるいは消費され残存していなくともよい。
　二酸化塩素は、前記いずれの場合であっても、前記水性媒体に対して、濃度が５～１０００ｐｐｍとなるよう添加すればよく、好ましくは５～６００ｐｐｍ、とりわけ好ましくは５～２００ｐｐｍとなるよう添加すればよい。
　二酸化塩素による処理は、前記第１活性酸素で前記水性媒体を処理する条件と同様の条件で実施することができる。処理時間は、前記水性媒体中の有機物の種類や含有量、病原性微生物の種類や含有量によっても変動するが、概ね１分程度から１時間で二酸化塩素による処理は完了する。
　第２活性酸素は、前記水性媒体中の有機物の種類や含有量、病原性微生物の種類や含有量によっても変動するが、前記水性媒体に対して、第１活性酸素と同様の濃度となるよう添加すればよい。また、第２活性酸素の添加時には、第１活性酸素が残存していてもよく、また残存していなくてもよい。
　第２活性酸素は、第１活性酸素と同様、前記水性媒体中に直接加えてもよく、あるいは所定濃度となるように水などの媒体に溶解、混合または懸濁して加えてもよく、さらには第２活性酸素がオゾンのような場合には気体のままで前記水性媒体中に吹き込むようにしてもよい。第２活性酸素による処理は、前記第１活性酸素による処理と同様の条件で実施することができる。
　また、本発明の実施形態においては、前記水性媒体に、第１活性酸素を所望の濃度に維持して前記水性媒体を処理しつつ、二酸化塩素を加え、二酸化塩素添加後もさらに第２活性酸素を所望濃度に保って処理すること、すなわち第１、第２活性酸素が連続して前記水性媒体中に存在させることによって、病原性微生物を不活性化することができる。
　図２は、本発明の実施形態１，２と特許文献３に係る方法とを表１のように図２（１）～図２（３）として模式的に示す図である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　図２（１）および図２（２）に実施形態１，２として模式的に示すように、最初から前記水性媒体に、参照符２ａ，２ｂで示すように、オゾンのような第１活性酸素を一定濃度としておき、処理中の適宜の時点で、参照符１ａ，１ｂで示すように、二酸化塩素を添加し、さらに第２活性酸素を一定濃度に維持して処理することによって、病原性微生物を不活性化することができる。
　この方法によるときは、第１活性酸素は第２活性酸素、および二酸化塩素は前記のものを好適に使用することができ、その使用量や添加方法などは、前記した範囲で適宜選択して実施することができる。
　これに対して図２（３）に示す特許文献３の方法では、参照符１ｃで示すように、先に水性媒体中に二酸化塩素を添加した後、活性酸素を参照符２ｃで示すように溶解させているため、有効に病原性微生物の不活性化を実現することができない。
　（実施例１）
　本実施例の不活性化対象ウイルスとして、インフルエンザウイルス、ヒト単純疱疹ウイルス、ネコカリシウイルス（ロタウイルスの代用ウイルス）の３種類のウイルスを用いた。
　有機物としてＦＢＳ（ウシ胎児血清）１％を含む蒸留水に、オゾンを濃度が２ｐｐｍを維持するよう通気したのち、安定化二酸化塩素を１０ｐｐｍとなるように添加し、さらにオゾンが２ｐｐｍとなるようオゾンを通気した処理水をウイルス含有液に加えて３０分間静置したのち、ウイルスの感染価を測定した。
　このとき、用いたウイルスの感染価は、インフルエンザウイルスが１．１×１０７ＰＦＵ／ｍｌ、ヒト単純疱疹ウイルスが２．６×１０６ＰＦＵ／ｍｌ、ネコカリシウイルス４．２×１０６ＰＦＵ／ｍｌである。
　なお、ウイルス感染価は、それぞれの細胞を用いて以下のとおり、プラック感染価測定を行った。
［プラック感染価測定］
＜ウイルス＞
　インフルエンザウイルスＰＲ８株を、ニワトリ受精卵（１０日卵）の漿尿膜腔に接種し、２日間培養した後、漿尿液を採取し、４℃で３，０００ｒｐｍ１０分間遠心分離した上清を３０％、６０％ショ糖のうえに重層し、２５，０００ｒｐｍ９０分間遠心分離し、ウイルスを精製した。ヒト単純疱疹ウイルスＩ型Ｆ株（ＨＳＶ）は、Ｖｅｒo細胞で増殖させた上清を用いた。また、ネコカリシウイルスＦ９株（ＦＣＶ）は、ＣＲＦＫ細胞で増殖させた上清を用いた。
＜細胞＞
　インフルエンザウイルスの感染価測定用細胞として、ヒト大腸癌由来ＣａＣo２細胞を用いた。ネコカリシウイルスの感染価測定用細胞は、ネコ腎臓由来ＣＲＦＫ細胞を用いた。ＨＳＶの感染価測定用細胞はミドリザル腎臓由来Ｖｅｒo細胞を用いた。
＜二酸化塩素の検定＞
　安定化二酸化塩素（５０，０００ｐｐｍ）を最終希釈濃度１００ｐｐｍとなるように滅菌蒸留水で希釈した。有効塩素濃度１０ｐｐｍの水溶液９９０μＬにウイルス原液１０μＬを加え１～６０分間室温で処理した。処理時間経過後、１０％（Ｗ／Ｖ）チオ硫酸ナトリウム１０μＬを加え反応を停止した後、ウイルスを血清不含のＤＭＥＭで希釈し０．１ｍＬずつ４ウェルのそれぞれの感受性細胞に接種し、３７℃で６０分間吸着させた。吸着後、０．８％アガロースゲルまたはメチルセルロースを含む培養液を加え、４８～９６時間培養した。培養４８～９６時間培養後にメタノール又は１０％ホルマリンでウイルス細胞を固定し、０．１％クリスタルバイオレットを含む２０％エタノール液を加え、プラックを算定し、感染価を算出した。
＜オゾン存在下での安定化二酸化塩素の殺ウイルス効果＞
　ウイルス１０μＬに２００ｐｐｍ安定化二酸化塩素５０μＬを加え、２．２ｐｐｍになるようにオゾンを通気したオゾン水９４０μＬを加え１～５分間処理した。処理時間経過後、１０％（Ｗ／Ｖ）チオ硫酸ナトリウム１０μＬを加え反応を停止した後、ウイルスを血清不含のＤＭＥＭで希釈し０．１ｍＬずつ４ウェルのそれぞれの感受性細胞に接種し、３７℃で６０分間吸着させた。吸着後、０．８％アガロースゲルまたはメチルセルロースを含む培養液を加え、４８～９６時間培養した。培養４８～９６時間培養後にメタノール又は１０％ホルマリンでウイルス細胞を固定し、０．１％クリスタルバイオレットを含む２０％エタノール液を加え、プラックを算定し、感染価を算出した。
＜結果＞
　結果は、表１に示すとおりであり、インフルエンザウイルス、ＨＳＶは、感染価がいずれも５ＰＦＵ／ｍｌ以下で感染価は検出できず、ウイルスを１００％不活性化していることが明らかである。またＦＣＶの感染価は１６ＰＦＵ／ｍｌであり、不活性化前の感染価（４．２×１０６）に比べて９９．９９９％の感染価減衰率を示した。
　（比較例１）
　実施例１のインフルエンザウイルスを用い、オゾン２ｐｐｍを含む蒸留水にＦＢＳを最終濃度１．０％となるよう添加し、安定化二酸化塩素を１０ｐｐｍとなるように添加して、ウイルスを１分間処理してウイルスの不活性化を行った。
＜結果＞
　結果は、表２に示すとおりである。
　（比較例２）
実施例１で使用したインフルエンザウイルスを用い、オゾン２ｐｐｍを含む蒸留水にＦＢＳを最終濃度１．０％となるよう添加し、ウイルスを加え１分間処理してウイルスの不活性化を行った。
＜結果＞
　結果は、表２に示すとおりである。なお、上記実施例１、比較例１および比較例２の実験は、北里大学医療衛生学部にて行われたものである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（実施例２）
＜供試菌株＞
　使用菌株としてバチルスズブチリスＡＴＣＣ１９６５９（以下、供試菌株という）を用い、使用培地としてバクトトリプチカーゼソイアガー（ＴＳＡ）（ディフコ社製）およびティピコソイブロスＴＳＢ－ＢＰ１３（ＴＳＢ）（レーベンラボラトリー社製）を用いた。
＜培養方法＞
　供試菌株の芽胞形成を促進させるための硫酸マンガン５μｇ／ｍｌを添加したＴＳＡ培地に供試菌株を培養し、Ｒｏｔｈらの方法（Ｒｏｔｈ，Ｓ．，Ｊ．Ｆｅｉｃｈｔｉｎｇｅｒ，Ｃ．，Ｈｅｒｔｅｌ．２０１０，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　１０８，５２１－５３２）によって、芽胞菌液を作製した。
菌液は４℃で保存した。
　また、培養に際して、使用した試薬は次のとおりである。
　　安定化二酸化塩素（インターナショナルジオキシドインク社製）
　　１０ｍＭリン酸緩衝溶液（シグマ社製）
　　中和剤：１０％トゥイーン８０、０．１％ヒスチジン、０．５％チオ硫酸ナトリウム／ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（シグマ社製）
　　消泡剤：ＫＭ－７３Ｅ（信越化学社製）
＜試験方法＞
　有機物である０．３％ウシアルブミンを含む滅菌蒸留水２００ｍｌに終濃度１～９×１０６ＣＦＵ／ｍｌとなるよう芽胞菌液２ｍｌを添加した。そこに終濃度３ｐｐｍとなるようにオゾンを供給し、６０分間供給を継続した。ついで、終濃度１０ｐｐｍとなるよう安定化二酸化塩素原液（５００ｐｐｍ）を４ｍｌ添加し、２０℃にて1分間インキュベートし、その後、さらにオゾンを終濃度３ｐｐｍで、６０分間供給した。終了後、処理菌液１に対して中和剤９の割合で混和し、二酸化塩素の中和とオゾンの蒸散を促すために、室温にて処理液を１０分間放置し、その後生存する菌数を算定した。
＜判定＞
　芽胞菌の残存の確認は、採取した菌液からＰＢＳにて１０倍希釈系列（１０－１～１０－４）を作製し、希釈液の各々を１００μｌずつＴＳＡ培地に接種した。３７℃、４８時間培養後、培地上に発育したコロニー数（ＣＦＵ）を数えて生存菌数を算出することによって行った。
　また、同時に液体培地による増菌も行い、残存菌の有無を確認した。具体的には、採取した菌液の２００μｌをＴＳＢ２ｍｌに接種し、３７℃で４８時間培養した。培地の指示薬の色の変化、もしくは濁りが生じた場合を殺菌不可、いずれも認められない場合を菌の発育なしと判定した。
＜結果＞
　ＴＳＡ培地上に発育したコロニーはなく、またＴＳＢ培地における指示薬の色の変化ならびに濁りはみられず、前記有機物を含むオゾン処理液中の芽胞菌を１００％不活性化することができた。なお、上記実施例２の実験は、名古屋大学医学部保健学科にて行われたものである。
　以上のとおり、本発明は、活性酸素供与体、安定化二酸化塩素、活性酸素供与体の順に使用することによって、有機物を含む水性媒体中の病原性微生物を、前記成分の相乗効果によって、効率的に不活性化することができる。
　前記実施例１および２に示すように、０．３％または１．０％という通常より高い濃度の有機物を含む水性媒体中の病原性微生物をオゾン２～３ｐｐｍ、安定化二酸化塩素１０ｐｐｍ、オゾン２～３ｐｐｍといった低濃度で不活性化できることは極めて高い効果であり、通常の病院廃液中の有機物濃度が０．０２％程度であること、安定化二酸化塩素を消毒剤として使用する場合の通常濃度が３００～４００ｐｐｍであることからすれば、極めて驚異的な効果であることが明らかである。
　本発明は、その精神または主要な特徴から逸脱することなく、他のいろいろな形態で実施できる。したがって、前述の実施形態はあらゆる点で単なる例示に過ぎず、本発明の範囲は特許請求の範囲に示すものであって、明細書本文には何ら拘束されない。さらに、特許請求の範囲に属する変形や変更は全て本発明の範囲内のものである。
　１ａ，１ｂ　病原性微生物および有機物を含む水性媒体中の二酸化塩素
　２ａ，２ｂ　病原性微生物および有機物を含む水性媒体中のオゾン

Claims (4)

  1. 　病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体、二酸化塩素および活性酸素供与体を順次加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化することを特徴とする病原性微生物の不活性化方法。
  2. 　病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体および二酸化塩素を順次加えて、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化する病原性微生物の不活性化方法であって、活性酸素供与体を所望の濃度に維持して前記水性媒体を処理しつつ、二酸化塩素を加え、二酸化塩素添加後もさらに前記活性酸素供与体を所望濃度に保って処理することを特徴とする病原性微生物の不活性化方法。
  3. 　活性酸素供与体がオゾンであり、二酸化塩素が安定化二酸化塩素であり、前記水性媒体が感染性廃液であることを特徴とする請求項１または２に記載の病原性微生物の不活性化方法。
  4. 　病原性微生物および有機物を含む水性媒体に、活性酸素供与体および二酸化塩素を加えて水性媒体を処理し、前記水性媒体中の病原性微生物を不活性化することを特徴とする病原性微生物の不活性化方法。
PCT/JP2012/068023 2011-12-27 2012-07-13 病原性微生物の不活性化方法 WO2013099332A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011-286950 2011-12-27
JP2011286950A JP2012161785A (ja) 2011-01-19 2011-12-27 病原性微生物の不活性化方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013099332A1 true WO2013099332A1 (ja) 2013-07-04

Family

ID=48699403

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2012/068023 WO2013099332A1 (ja) 2011-12-27 2012-07-13 病原性微生物の不活性化方法

Country Status (2)

Country Link
JP (2) JP2012161785A (ja)
WO (1) WO2013099332A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8791054B2 (en) * 2012-09-27 2014-07-29 Halliburton Energy Services, Inc. Methods of converting an inactive biocide into an active biocide using a chemical reaction
JP7093564B2 (ja) * 2019-08-27 2022-06-30 株式会社エム・イー・エス 感染性廃棄物の処理装置
CN111186889A (zh) * 2020-02-29 2020-05-22 温州经川科技有限公司 一种实验室感染性废液生物灭活装置

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5990693A (ja) * 1982-11-15 1984-05-25 Kohei Urano 浄水場の薬品注入制御方法
JPS6299394U (ja) * 1985-12-14 1987-06-24
JPH11503995A (ja) * 1995-04-25 1999-04-06 キューケ フリッツ 水処理のための二酸化塩素を含有する消毒液の製造法
JP2002096081A (ja) * 2000-09-26 2002-04-02 Mitsubishi Electric Corp 水の消毒装置およびその制御方法
JP2003190936A (ja) * 2001-12-27 2003-07-08 Ecomath Corporation:Kk 浄水装置
JP2004024922A (ja) * 2002-05-23 2004-01-29 Takao Ueda 感染性廃棄物の処理方法および処理装置

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6299394A (ja) * 1985-10-25 1987-05-08 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 新規なアデノシン誘導体
JPH0669479B2 (ja) * 1992-04-17 1994-09-07 株式会社アクアテクノ研究所 感染性廃棄物の処理方法及びその処理装置
JP2001000982A (ja) * 1999-06-23 2001-01-09 Komutekku:Kk 感染性廃液の処理方法及び装置
JP2008036061A (ja) * 2006-08-04 2008-02-21 San Seal:Kk 遺体処理過程における廃液等排出物質の処理方法及び処理装置

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5990693A (ja) * 1982-11-15 1984-05-25 Kohei Urano 浄水場の薬品注入制御方法
JPS6299394U (ja) * 1985-12-14 1987-06-24
JPH11503995A (ja) * 1995-04-25 1999-04-06 キューケ フリッツ 水処理のための二酸化塩素を含有する消毒液の製造法
JP2002096081A (ja) * 2000-09-26 2002-04-02 Mitsubishi Electric Corp 水の消毒装置およびその制御方法
JP2003190936A (ja) * 2001-12-27 2003-07-08 Ecomath Corporation:Kk 浄水装置
JP2004024922A (ja) * 2002-05-23 2004-01-29 Takao Ueda 感染性廃棄物の処理方法および処理装置

Also Published As

Publication number Publication date
JP6243482B2 (ja) 2017-12-06
JP2016190237A (ja) 2016-11-10
JP2012161785A (ja) 2012-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Su et al. Inactivation efficacy of nonthermal plasma-activated solutions against Newcastle disease virus
Vasickova et al. Issues concerning survival of viruses on surfaces
Emmoth et al. Ammonia disinfection of hatchery waste for elimination of single-stranded RNA viruses
KR100772054B1 (ko) 조류 인플루엔자 소독용 조성물
JP6046342B2 (ja) 感染性廃液の処理装置
JP6243482B2 (ja) 病原性微生物の不活性化方法
Ha et al. Efficacy of chemical disinfectant compounds against human norovirus
Ni et al. Reduction of microbial contamination on the surfaces of layer houses using slightly acidic electrolyzed water
Ou et al. Infectious laryngotracheitis vaccine virus detection in water lines and effectiveness of sanitizers for inactivating the virus
JP6884447B1 (ja) コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ−２）を含む広範な微生物に有用な抗微生物剤
Yousefzadeh et al. Evaluation of disinfection efficacy of performic acid (PFA) catalyzed by sulfuric and ascorbic acids tested on Escherichia coli (ATCC, 8739)
WO2014115860A1 (ja) 殺ウイルス剤
CN109699686A (zh) 一种杀灭禽流感病毒的消毒剂
Ruenphet et al. Bactericidal and virucidal efficacies of food additive grade calcium hydroxide under various concentrations, organic material conditions, exposure duration, and its stability
CN101646340A (zh) 活的、可储存的虫卵悬浮液的制备
Sobhy et al. In vitro virucidal activity of a commercial disinfectant against viruses of domestic animals and poultry
Oral et al. Vaporized H2O2 decontamination against surrogate viruses for the reuse of N95 respirators in the COVID-19 emergency
Brady Evaluating Chlorine Dioxide Gas as an Antiviral Agent: Insights from the Development, Optimization, and Application of a MS2 Bacteriophage Model System
JP2008214297A (ja) 抗ウイルス剤
Rahman et al. Application of Electrolyzed Water on Livestock
Rohaim et al. Efficacy of disinfectants against Egyptian H5N1 avian influenza virus
Zubairov et al. Characterization of chlorine-free biocidal agents based on nontoxic or slightly toxic azaadamantane compounds
RU2561872C1 (ru) Способ обеззараживания животноводческих помещений от возбудителя псевдомоноза
Emmoth et al. Ammonia treatment of hatchery waste for elimination of avian influenza virus
Qi et al. Efficient inactivation of African swine fever virus by a highly complexed iodine combined with compound organic acids

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12861276

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12861276

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12861276

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1