WO2013077693A1 - 소고기 월령 판별용 spr 키트 및 이를 이용한 소고기 월령 판별 방법 - Google Patents

소고기 월령 판별용 spr 키트 및 이를 이용한 소고기 월령 판별 방법 Download PDF

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WO2013077693A1
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beef
spr
sample
kit
age
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PCT/KR2012/010046
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장익순
최종순
양경은
이동기
박현규
함철호
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한국기초과학지원연구원
(주)미코바이오메드
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Publication date
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    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7042—Aging, e.g. cellular aging

Definitions

  • 0123858 is claimed as a priority, the entirety of which is incorporated herein by reference.
  • the present invention relates to an SPR kit for determining the monthly age of beef and a method for discriminating the beef using the same. More specifically, the SPR kit for determining the monthly age of beef and the monthly age of beef comprising the anti-P21 antibody and PBS sample buffer This method relates to a method of discriminating beef age by placing the target sample into the PBS buffer, homogenizing the same, and contacting it with a metal thin film to which an anti-p21 antibody is attached, and measuring the concentration of p21 in the sample by the SPR method.
  • ⁇ 6> There are three methods of judging the age of a cow currently in use: 1) a birth certificate of a cow, 2) a method of determining the ossification of the vertebral bones of a slaughtered cow, and 3) a tooth discrimination method.
  • the birth certificate of the cow is the most accurate method for determining the age of the cow, but because the American cattle are mainly grazing and raising, the birth rate of the American cow is very low (20%).
  • the method of judging the ossification state of the spinal canal by dividing the spine of the slaughtered cow that is, the method of judging the degree of aging of the bone, is still the most reliable as the visual identification method. Approximately 15% error occurs.
  • SPR kit for determining the age of beef, characterized in that it comprises an anti-p21 antibody and a PBS sample buffer.
  • Another object of the present invention comprises the steps of (a) homogenizing the sample age determination of beef in PBS buffer; (b) contacting the homogenized sample with a metal thin film to which an anti-p21 antibody is attached; And (c) to provide a method for determining the age of beef comprising the step of measuring the concentration of p21 in the sample by the SPR method.
  • the present invention provides a beef age determination SPR kit comprising an anti-p21 antibody and PBS sample buffer.
  • a homogenization of the sample to be determined for the age of beef in PBS buffer (b) contacting the homogenized sample with a metal thin film to which an anti-p21 antibody is attached; And (c) provides a method for determining the age of beef comprising the step of measuring the concentration of p21 in the sample by the SPR method.
  • the present invention provides an SPR (Surface Plasmon Resonance) kit for beef age determination, comprising an anti-p21 antibody and a Phosphate Buffered Saline (PBS) sample buffer.
  • SPR Surface Plasmon Resonance
  • PBS Phosphate Buffered Saline
  • Surface plasmons refer to the collective vibration of the genes on the surface of precious metal thin films such as gold and silver. (Simple vibration of free electrons) When light having a specific wavelength is incident on the metal thin film from the outside, most of the energy of the light is transmitted to the free electrons on the metal surface, and thus vibration of the surface free electrons occurs. It is called plasmon resonance phenomenon. In this case, the intensity of the reflected light when viewed from the outside is almost zero.
  • Surface plasmon resonance can usually be achieved using prisms.
  • the metal thin film chip By placing the metal thin film chip on a semi-cylindrical prism as shown in FIG. 4, and measuring the reflected light and intensity according to the change of the incident angle, the reflected light segas spectrum of the incident angle can be obtained as shown in FIG. 5.
  • the incident angle when the reflected light intensity is minimum is referred to as surface plasmon resonance angle (reduced resonance angle).
  • the resonance angle increases, and the amount of molecules adsorbed on the surface of the metal thin film can be analyzed.
  • SPR kits generally include buffers for the treatment and / or reaction of antibodies, linker molecules, metal thin films and samples.
  • Antibodies are used to detect target substances, for example antigens, and can be used in various ways depending on the type of target substance.
  • antibody is meant herein specific protein molecules directed against the antigenic site.
  • Antibodies used in the present invention include monoclonal or polyclonal antibodies, immunologically active fragments (eg, Fab or (Fab) 2 fragments), antibody heavy chains, humanized antibodies, antibody light chains, genetically engineered single chain F molecules. It may be a chimeric antibody, and since the SPR kit of the present invention is for detecting p21, it may be preferably an anti-p21 antibody.
  • p21 is an eye 1 in-dependent kinase inhibitor 1 (or CDK-interacting protein)
  • a protein known as 1) binds to the cyclin-CDK2 or CDK4 complex and produces It is a protein that acts as a regulator of cell cycle progression in the G1 phase by inhibiting the activity.
  • p21 is characterized by a large expression change about 30 months in the cow
  • p21 of the present invention is preferably bovine p21 may be that Genbank Accession No. ⁇ ⁇ 001098958.
  • Linker molecules are used to bind antibodies to metal thin films for SPR measurements.
  • the linker molecule may be used without limitation as long as it is for attaching the anti-p21 antibody to the metal thin film.
  • Protein G Cys-Protein G
  • the metal thin film can be used without limitation as long as it can be used for the SPR measurement, but preferably the gold thin film, the silver thin film, the copper thin film, the platinum thin film, and the aluminum thin film.
  • PBS is preferably a buffer for processing or reacting samples, which is necessary for the detection according to the SPR method of p21.
  • PBS (phosphated buffered saline) buffer is a conventional composition known in the art (NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, Na 2 HP0 4
  • biological sample includes solid tissue samples, such as blood and other liquid samples of biological origin, biopsy samples, tissue cultures or cells derived therefrom. More specifically, for example, but not limited to, tissues, extracts, cell lysates, whole blood, plasma, serum, saliva, ocular fluid, cerebrospinal fluid, sweat, urine, milk, ascites fluid, synovial fluid, peritoneal fluid, etc.
  • tissue more preferably muscle tissue.
  • the sample may be obtained from an animal, preferably a mammal, and most preferably from a cow.
  • the sample may be pretreated before being used for detection. For example, it may include homogenization, filtration, distillation, extraction, concentration, inactivation of interference components, addition of reagents, and the like.
  • the kit of the present invention may be provided in a pre-prepared form, for example, may include a metal thin film and PBS sample buffer coated with an anti- P 21 antibody and a linker molecule bound thereto.
  • PBS sample buffer can measure the sample to be measured through homogenization, etc., which is easily measured in the SPR device equipped with a metal thin film coated with the anti-p21 antibody and a linker molecule bound thereto. Can be used to determine the age of beef.
  • the kit of the present invention may include homogenizing microscopic tissues (particularly muscle tissues) of less than 30 months of age by adding PBS for reference. Beef monthly age can be determined by comparing the beef muscle tissue of the reference age and the P 21 content of the sample.
  • the kit of the present invention may further include a washing buffer (washing buffer) used for each SPR measurement step.
  • the wash buffer may be lx PBS.
  • the kit of the present invention may further include an SPR device, the SPR device may be a miniaturized device.
  • the SPR device may include, for example, a measurement unit as shown in FIG. 6, a sample pretreatment and loading unit, a sample transfer unit in which a sample transfer channel is formed, and an SPR sensor unit in which an antibody is immobilized to determine beef age. >
  • Protein G self assembled monolayer (SAM), and gold chips were used as gold thin films.
  • the age of beef can be determined by detecting p21 protein through antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds p21 protein, which is a marker for determining the specific age of beef, in beef muscle tissue. Sample pretreatment is required for application to SPR.
  • Pre-treatment was performed using PBS buffer to apply to the SPR measurement in the present invention.
  • the PBS buffer used in the present invention was added to 8 L NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na 2 HP0 4 , 0.24 g! ⁇ ! ⁇ to lx PBS buffer, and 1 was adjusted to 7.4 with HCl.
  • the addition of a commercial protein inhibitor cocktail was used.
  • Pretreatment was performed by adding 5 to 20 times (w / w) PBS buffer to small tissues, especially those containing muscle tissue, to multiply tissue using a homogenator .
  • centrifugation to extract only the supernatant can be used to normalize each sample (normalized) to have a certain amount of protein content. Incubation may be omitted in the above and the sample may be pretreated by filtering instead of centrifugation.
  • the gold chip was fixed to the SPR kit to determine whether the SPR kit can measure the p21 concentration for each month.
  • Cys3-protein G was immobilized to immobilize the anti-p21 antibody on the gold chip and treated with BSA to eliminate the nonspecific adsorption of the gold surface.
  • anti-p21 antibody was immobilized on Cys3-Protein G, and small samples were injected at 20 months, 35 months, and 47 months to compare RU changes of SPR.
  • a small sample of 28 months and 35 months, which required the most important discrimination was injected and analyzed. As a result, the monthly bovine sample was not discernible. This was because unpurified bovine samples contained various types of proteins.
  • a 27-month and 31-month cow prepared by fixing a gold chip in an SPR kit and prepared with PBS buffer. Samples were injected into each channel and compared and analyzed for RU changes in SPR. As a result, as shown in Figure 3, the small sample less than 30 months confirmed the discrimination ability to increase the concentration of p21.
  • the present invention comprises the steps of (a) homogenizing the sample of the age determination of beef in PBS buffer; (b) contacting the homogenized sample with a metal thin film to which an anti-p21 antibody is attached; And (c) measuring the concentration of p21 in the sample by the SPR method.
  • Step (a) is a step of homogenizing a sample of beef age determination in a PBS buffer.
  • pretreatment was performed using a PBS buffer to apply the SPR measurement.
  • Pretreatment may be used to finely grind the tissue using a homogenator and remove solids by adding 5 to 20 times (w / w) PBS buffer to small tissues, especially tissues containing muscle tissue. More specifically, pretreatment is performed by adding 5 to 20 times (w / w) PBS buffer to small tissues, especially tissues containing muscle tissue, to finely grind the tissue using a homogenator, and from 0 to 5 to 10 to 30 minutes. After incubation, centrifugation can be used to remove the round solids that only the supernatant is removed. Removal of the solids may be performed by other known methods, for example, by filter treatment. .
  • the preparation of the sample may be a standardized (normalized) of each sample having a certain amount of protein well content, but the standardization process by pre-treatment of a sample of almost the same mass for a similar site (tissue) It can be omitted, which makes it possible to easily determine the age in the field by applying the p21 of the present invention to the SPR method.
  • Step (b) is a step of contacting the sample homogenized in step (a) with a metal thin film to which the anti-p21 antibody is attached.
  • the proteins in the sample to be labeled should be bound to the antibody attached to the metal thin film.
  • the metal thin film may be preferably a noble metal thin film such as gold or silver, and more preferably, a gold chip.
  • the attachment of the antibody to the metal thin film is mediated by linker molecules.
  • the reaction between the sample and the antibody is carried out in the reaction buffer.
  • the Tris buffer as in the comparative example of the present invention, there was no discrimination between the samples, whereas the PBS buffer was used as in the embodiment of the present invention. In the case of the use, results with discrimination between samples were obtained.
  • the metal thin film with the anti-p21 antibody contacted by the homogenized sample is placed on the semi-cylindrical prism, and the reflected light intensity spectrum of the incident angle is measured by measuring the reflected light intensity according to the incident angle change. Got.
  • the resonance angle increases. Therefore, the RU (resonance untis) is obtained by using the difference between the resonance angle when no molecules are adsorbed on the surface of the metal thin film and the resonance angle when the molecules are adsorbed. The difference between the reflected light reaching the instrument and the information absorbed by the light on the metal thin film surface when the molecules are adsorbed.
  • the amount of molecules adsorbed on the metal thin film surface that is, the concentration of p21 was measured.
  • the age of the sample was determined by comparing the p21 concentration measurement result of the sample and the p21 concentration measurement result of the reference sample of which the age was known.
  • the reference sample knowing the age of the month is less than 30 months of age and less than 30 months of age of beef, and the reference sample of less than 30 months of age is selected from 15 months to 29 months of beef Beef from 30 months of age to 50 months of age can be selected as a reference sample of 30 months or more.
  • the reference sample of less than 30 months of age can be selected from 29 months of beef within 25 months of age, and the reference sample of more than 30 months of age can be selected from 31 months of age to 35 months of beef.
  • the 27-month-old beef may be selected as the reference sample of less than 30 months old, and the 31-month-old beef may be selected as the reference sample of 30 months or more.
  • the present invention provides a method for determining beef monthly age or SPR kit for beef age determination.
  • SPR kit for determining the monthly age of the beef
  • concentration of p21 can be effectively selected for less than 30 months of beef can be useful for the purpose of determining the age of beef.
  • Figure 1 shows a comparison of the RU change results of the experimental group of Example 1.
  • Figure 2 shows the comparison of the RU change results of the control of Example 1.
  • Figure 3 shows the comparison of the RU change results of Example 2.
  • FIG. 6 shows modulation of a laser light source using a rotating mirror.
  • Figure 7 shows the miniature SPR biooptic analysis system commercialized products.
  • samples are age-specific. Samples were taken and stored at -70 before use. To prepare the sample, 1 ml of 1M Tris-HCKpH 8.0) was added to small tissue O.lg, and the tissue was finely ground using a homogenator and incubated for 20 minutes on ice. After centrifugation at 4, 13,000 rpm for 20 minutes, only the supernatant was extracted and the protein concentration was measured to adjust the final concentration of each sample to ig //.
  • PEG C00H SAMWS- CH ⁇ u- (0CH 2 CH 2) was prepared by dissolving a ImM solution 6 -0CH-C00H] ethanol. After immersing in the SAM solution prepared for the gold chip washed as in Comparative Example 1 for 12 hours or more, the gold chip surface treated with SAM washed with 3 distilled water and dried using nitrogen gas and then using a cartridge using the SPR equipment Fixed on.
  • the present invention provides a method for determining beef age or SPR kit for beef age.
  • SPR kit for determining the age of the beef of the present invention by measuring the concentration of p21, it is possible to effectively screen less than 30 months and beef can be determined because the age of the beef is highly industrially available.

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Abstract

본 발명은 소고기 월령 판별용 SPR 키트 및 이를 이용한 소고기 월령 판별 방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 항 p21 항체 및 PBS 시료 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트 및 소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키고 이를 항 p21항체가 부착된 금속 박막과 접촉 시킨 후 SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정하는 소고기 월령 판별 방법에 관한 것 이다. 따라서， 본 발명은 소고기 월령 판별용 SPR 키트 또는 소고기 월령 판별 방법을 제공한다. 본 발명의 소고기 월령 판별용 SPR 키트를 사용하는 경우， p21의 농도를 측정하여 30개월 미만의 소고기를 효과적으로 선별해낼 수 있어 소고기의 월령을 판별하는 목적으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭 ]
소고기 월령 판별용 SPR 키트 및 이를 이용한 소고기 월령 판별 방법 【기술분야】
<ι> 본 출원은 2011년 11월 24일에 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2011-
0123858호를 우선권으로 주장하고 , 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다 .
<2>
<3> 본 발명은 소고기 월령 판별용 SPR 키트 및 이를 이용한 소고기 월랑 판별 방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 항 P21 항체 및 PBS 시료 버퍼를 포함하는 것 을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트 및 소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키고 이를 항 p21항체가 부착된 금속 박막과 접촉 시 킨 후 SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정하는 소고기 월령 판별 방법에 관한 것 이다 .
<4>
【배경 기술】
<5> 소고기의 수빕 개방에 따라 막대한 양의 수입산 소고기가 캐나다， 미국 등으 로부터 수입되고 있다. 그러나， 캐나다, 미국 등의 북미산 소고기에는 광우병 발병 율이 높은 30개월령 이상의 소고기가 많이 포함되어 있어 국민들의 불안감이 상당 히 크다. 광우병에 걸린 소의 95%가 30개월령 이상인 것으로 알려져 있다 . 따라서 , 30개월령 미만인 소고기를 선별하여 수입하여 야 하는데 , 소의 월령을 판별하기가 쉽지 않다.
<6> 현재 통용되고 있는 소의 월령 판별 방법으로는 1) 소의 출생증명서， 2) 도 축한 소의 척추 뼈의 골화 (骨化) 상태를 판정하는 방법， 3) 치아감별법 등 3가지가 있다 . 상기 방법 중 소의 출생증명서를 보고 소의 월령을 판별 하는 방법 이 가장 정확하지만， 미국의 소는 주로 방목하여 키우기 때문에 미국 소의 출생 월령 확인 율은 20%로 매우 낮다. 또한， 도축한 소의 척추를 이분할하여 척추 뻐 의 골화 상태 를 보고 판정하는 방법， 즉 뼈 의 노화 정도를 보고 추측하는 방법은 육안 식별방법 으로는 아직까지 가장 신빙성 이 있지만， 이 방법도 판정단계에서 대략 15% 정도의 오차가 발생한다 . 또한， 치아감별법은 사육조건에 따라 변이가 커서 정확하지 않다 는 것이 과학적 정설이며， 특히 사료급여 조건이 인간의 통제를 받지 않는 자연 방 목 소의 경우는 더 부정확하다 . 상기한 바와 같이, 소의 출생증명서에 의한 것을 제외하고는 도축된 소고기 상태께서 실제의 월령을 판별할 수 있는 과학적인 방법은 전무한 상태이다. 현재 소고기의 원산지， 등급， 숙성도 등의 판별 방법에 관하여는 다양하게 연구되어 있 어 한우 및 수입 소고기의 원산지， 등급， 숙성도 등의 판별이 가능하지만， 한우 및 수입 소고기 모두에서 월령을 판별하는 방법에 관한 연구는 전무한 상태이다. 또 한， 소고기의 월령을 판정하기에는 수입 물량의 방대한 양에 비해 실제적인 검사 역시 많은 시간과 비용이 소모되는 문제점이 있다.
따라서， 시간과 비용을 줄일 수 있으면서 도축된 이후의 소고기의 월령을 판 별할수 있는 과학적인 방법에 대한 연구의 필요성이 요구되고 있다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제]
이에 본 발명자들은 본 발명자들은 도축된 이후의 소고기의 월령을 필드에서 간편히 판별할 수 있는 방법에 대해 연구하던 중， p21 단백질이 30개월 미만의 소 고기 근육조직에서는 높게 발현됨을 확인하였고, 이를 SPR 키트화 함으로써 본 발 명을 완성하였다. 따라서 본 발명의 목적은 항 p21 항체 및 PBS 시료 버퍼를 포함하는 것을 특 징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 (a)소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키는 단계; (b)상기 균질화된 시료를 항 p21항체가 부착된 금속 .박막과 접촉 시키는 단계; 및 (c)SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정하는 단계를 포함 하는 소고기 월령 판별 방법을 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법]
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 항 p21 항체 및 PBS 시료 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트를 제공한다. 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 (a)소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키는 단계; (b)상기 균질화된 시료를 항 p21항체가 부착 된 금속 박막과 접촉 시키는 단계; 및 (c)SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정 하는 단계를 포함하는 소고기 월령 판별 방법을 제공한다. 18> 이하， 본 발명을 상세히 설명한다.
19>
>0> 본 발명은 항 p21 항체 및 PBS(Phosphate Buffered Saline) 시료 버퍼를 포 함하는 것을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR(Surface Plasmon Resonance) 키트를 제공한다.
12> 표면 플라즈몬이란 주로 금， 은 등과 같은 귀금속 박막 표면에 존재하는 자 유전자의 집단적인 진동을 지칭한다. (간단하게 자유전자의 진동) 외부에서 특정한 파장을 갖는 빛이 금속 박막에 입사되었을 때 빛이 가진 대부분의 에너지가 금속 표면에 존재하는 자유전자로 전달되어， 표면 자유전자의 진동이 발생되는 현상을 플라즈몬 공명 현상이라 한다. 이 경우， 외부에서 볼 때 반사된 빛의 세기가 거의 제로 (零)에 가깝다.
13> 표면 플라즈몬 공명 현상은 일반적으로 프리즘을 사용하여 일으킬 수 있다. 도 4과 같이 금속 박막칩을 반원통 프리즘에 올려놓고， 입사각도 변화에 따른 반사 광.세기를 측정하면 도 5와 같이 입사각도에 대한 반사광 세가스펙트럼을 얻을 수 있다. 도 5에서 반사광세기가 최소가 될 때의 입사각을 표면 플라즈몬 공명각 (줄여 서 공명각)이라 한다. 금속박막 표면에 분자가 흡착되면 이 공명각이 증가하게 되 는데, 이를 이용하여 금속박막표면에 흡착된 분자의 양을 분석할 수 있다.
24> 이를 활용하여 시료에 존재하는 목적 물질의 양을 측정할수 있으며 이는 키 트 (SPR키트)의 형태로 제공될 수.있다.
25> 일반적으로 SPR 키트에는 항체， 링커분자， 금속박막 및 시료의 처리 및 /또는 반웅을 위한 버퍼가 포함된다.
16> 항체는 목적 물질， 예를 들어 항원을 검출하기 위한 목적으로 사용되며， 목 적 물질의 종류에 따라서 다양하게 사용될 수 있다. 본 발명에서 "항체 "란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명에 사용되는 항 체는 단클론 또는 다클론 항체, 면역학적으로 활성인 단편 (예를 들어， Fab 또는 (Fab)2 단편)， 항체 중쇄, 인간화 항체, 항체 경쇄， 유전자 조작된 단일쇄 F분자， 키메릭 항체 둥일 수 있으며， 본 발명의 SPR 키트는 p21을 검출하기 위한 것이므로 바람직하게는 항 -p21항체일 수 있다.
11>
28> p21은 eye 1 in-dependent kinase inhibitor 1 (또는 CDK-interact ing protein
1)으로 알려져 있는 단백질로， cyclin-CDK2 또는 CDK4 복합체에 결합하여 이의 작 용을 저해하는 활성을 가져 G1 단계에서의 cell cycle 진행의 조절자 역할을 하는 단백질이다. 본 발명에서 p21은 소에서 30개월 전후의 발현 변화가 크게 나타나는 특징이 있으며， 본 발명의 p21은 바람직하게는 소 p21로 Genbank Accession No.가 醒ᅳ 001098958인 것일 수 있다. > 링커분자는 SPR 측정을 위하여 금속 박막에 항체를 결합시키기 위한 목적으 로 사용된다. 본 발명에서 링커분자는 항 -p21 항체를 금속박막에 부착시키기 위한 것이라면 제한없이 사용이 가능하여， 예를 들어, Protein G (Cys-Protein G), SAMCself assembled monolayer)이 사용될 수 있다.
>
> 금속박막은 SPR측정에 사용가능한 것이라면 제한없아사용될 수 있으나， 바 람직하게는 금박막， 은박막， 구리박막, 백금박막， 알루미늄 박막일 수 있다.
>
> 시료의 처리 또는 반웅을 위한 버퍼는 PBS가 바람직하며, 이는 p21의 SPR 측정방법에 따른 검출을 위해서 필수적으로 필요하다. PBS(phosphated buffered saline) buffer는 당업계에 공지된 통상의 조성 (NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, Na2HP04
10 mM, K¾P04 2 mM) 또는 이의 용인가능한 오차 (상하오차 각각 5¾ 내) 범위내의 buffer 조성물을 나타낸다.
>
> 본 발명에서 사용된 용어 "생물학적 시료" 또는 "시료"는 혈액 및 생물학적 기원의 기타 액상 시료， 생검 표본， 조직 배양과 같은 고형 조직 시료 또는 이로부 터 유래된 세포가 포함된다. 보다 구체적으로 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 조직， 추출물， 세포 용해물， 전혈， 혈장, 혈청， 침， 안구액， 뇌척수액, 땀， 뇨, 젖 , 복수액， 활액， 복막액 등일 수 있으며， 바람직하게는 조직， 보다 바람직하게는 근육조직일 수 있다. 상기 시료는 동물， 바람직하게는 포유동물로부터 수득될 수 있으며， 가장 바람직하게는 소로부터 수득돨 수 있다. 상기 시료는 검출에 사용하 기 전에 전처리할 수 있다. 예를 들어， 균질화 (homogenization), 여과， 증류， 추 출， 농축， 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가등을 포함할 수 있다.
>
> 한편， 본 발명의 키트는 미리 제조된 형태로 제공될 수 있으며， 예흩 들어, 항 -P21 항체 및 이와 결합된 링커분자가 코팅된 금속박막 및 PBS시료 버파를 포함 할 수 있다. 9> PBS 시료버퍼는 측정의 대상이 되는 시료를균질화 등을 통해 측정가능한 시 료화할 수 있으며， 이를 상기 항 -p21 항체 및 이와 결합된 링커분자가 코팅된 금속 박막이 장착된 SPR기기에서 간편하게 측정하여 소고기 월령 판별을 할 수 있다.0>
1> 아을러， 본 발명의 키트는 참조 (reference)를 위하여 30개월령 미만의 소고 기 조직 (특히 근육조직)을 PBS를 첨가하여 균질화시킨 것을 포함할 수 있다. 기준 월령의 소고기 근육조직과 시료의 P21 함량을 비교하여 소고기 월령 판별을 할 수 있다.
2>
3> 또한， 본 발명의 키트는 각 SPR측정 단계마다 사용되는 세척버퍼 (washing buffer)를 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게 .세척버퍼는 lx PBS일 수 있다.
4>
5> 아울러, 본 발명의 키트는 SPR 기기를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 SPR 기기는 소형화된 기기일 수 있다. SPR 기기는 예를 들어 도 6에서와 같은 측정부를 비롯하여， 시료 전처리 및 로딩부, 시료 이송 채널이 형성되어 있는 시료 이송부， 소고기 월령 판단을 위해 항체가 고정화 되어 있는 SPR센서부를 포함할 수 있다.6>
7> 본 발명의 일실시예에서 항체는 항 p21항체가사용되었고， 링커분자는 Cys3-
Protein G, SAM(self assembled monolayer), 금속박막으로는 금박막으로써 골드 칩 이 사용되었다.
8>
9> 소고기 근육조직에서 소고기 특이적 월령 판별용 마커인 p21 단백질에 특이 적으로 결합하는 항체를 이용한 항원 -항체 결합반웅을 통해 p21 단백질을 검출하여 소고기의 월령을 판별할 수 있는데 (대한민국특허 제 10-1047455호 참조) SPR에 적 용시키기 위해서는 시료의 전처리가 필요하다.
0>
i> 본 발명에서 SPR측정에 적용시키기 위해 PBS 버퍼를 이용해 전처리를 하였 다. 본 발명에서 사용한 PBS 버퍼는 lx PBS 버퍼로 1L 증류수에 8 g NaCl , 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HP04, 0.24 g！^！^를 첨가하고， HCl로 1 를 7.4로 조절한.것을 사 용하였고， 추가로 상용의 단백질 저해제 흔합액 (protease inhibitor cocktail)을 첨가한 것을 사용하였다. 전처리는 소 조직, 특히 근육 조직이 포함된 조직에 5배 내지 20배 (w/w)의 PBS 버퍼를 첨가하여 homogenator를 이용해 조직을 곱게 .갈고， 0 내지 5에서 10분 내지 30분간 incubation 시킨 후 4， 원심분리하여 상층액만 따내 서 일정량의 단백질 함량을 가지도록 각 시료를 표준화 (normalized)한 것을 사용할 수 있다. 상기에서 incubation은 생략될 수 있고 원심분리 대신 필터링 등을 통해 시료를 전처리할 수 있다.
:52>
：53> 즉， 본 발명의 일비교예에서는 상기 SPR키트가 소 개월별 p21농도를 측정할 수 있는지 여부를 알아보기 위하여 골드칩을 SPR 키트에 고정하였다. 골드칩 위에 항 p21항체를 고정하기 위하여 Cys3— Protein G를 고정화 하고 골드표면의 비특이적 흡착을 없애기 위하여 BSA를 이용하여 처리 하였다. 그 후, 항 p21항체를 Cys3- Protein G 위에 고정시키고 20개월， 35개월, 47개월 소 시료를 주입하여 SPR의 RU 변화를 비교하였다. 또한， 가장 중요한 변별력이 필요한 28개월， 35개월 소 시료를 주입하여 비교 분석하였다. 그 결과 개월별 소 시료는 분별력이 없었다. 이유로 정 제되지 않은 소 시료 안에는 다양한 종류의 단백질들을 포함하고 있기 때문이었다.
:54>
：55> 이에 비해서， 본 발명의 일실시예에서는 상기 SPR키트가 소 개월별 p21농도 를 측정할 수 있는지 여부를 알아보기 위하여 골드칩을 SPR 키트에 고정하고 PBS 버퍼로 준비한 27개월, 31개월 소 시료를 각 채널에 주입하고 SPR의 RU 변화를 비 교， 분석 하였다. 그 결과, 도 3에서 보듯이, 30개월이 안되는 소 시료는 p21의 농 도가 증가하는 분별력을 확인 하였다.
:56>
：57> 또한， 본 발명은 (a)소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키는 단계; (b)상기 균질화된 시료를 항 p21항체가 부착된 금속 박막과 접촉 시 키는 단계; 및 (c)SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정하는 단계를 포함하는 소 고기 월령 판별 방법을 제공한다.
:58>
：59> 본 발명의 방법을 단계별로 보다상세하설명하면 다음과 같다.
：60> (a)단계는 소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키는 단 계이다.
：61> 본 발명에서 SPR 측정에 적용시키기 위해 PBS 버퍼를 이용해 전처리를 하였 다. 전처리는 소 조직, 특히 근육 조직이 포함된 조직에 5배 내지 20배 (w/w)의 PBS 버퍼를 첨가하여 homogenator를 이용해 조직을 곱게 갈고， 고형물을 제거한 것을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로 전처리는 소 조직, 특히 근육 조직이 포함된 조직에 5배 내 지 20배 (w/w)의 PBS 버퍼를 첨가하여 homogenator를 이용해 조직을 곱게 갈고， 0 내지 5에서 10분 내지 30분간 incubation 시킨 후 원심분리하여 상층액만 따내는 둥 고형물을 제거한 것을 사용할 수 있다. 고형물의 제거는 공지된 다른 방법， 예 를 들어, 필터처리 등에 의해서 수행될 수도 있다. .
본 발명에서 시료의 준비는 일정량의 단백잘 함량을 가지도톡 각 시료를 표 준화 (normalized)한 것을 사용할 수 있으나， 유사한 부위 (조직)에 대해서 거의 동 일한 질량의 시료를 대상으로 전처리함으로써 표준화 과정을 생략할 수도 있으며, 이는 본 발명의 p21을 SPR 방법에 적용시킴으로써 필드에서 간단하게 월령 판별을 할 수 있게 해 준다.
(b)단계는 (a)단계에서 균질화된 시료를 항 p21항체가 부착된 금속박막과 접 촉 시키는 단계이다. SPR분섞을 위해서， 금속박막에 부착된 항체에 marker가 되는 시료 내 단백질이 결합되도록 해야 한다. 이 때 금속박막은 바람직하게는 금, 은등 과 같은 귀금속 박막일 수 있으며, 더 바람직하게는 골드칩 일 수 있다. 금속박막 에의 항체의 부착은 링커 분자에 의해서 매개된다. 시료와 항체와의 반웅은 반응 버퍼 내에서 이루어지는데 본 발명의 일비교예에서와 같이 Tris 버퍼를 이용한 경 우는 시료간의 분별력이 없는 결과가 나온 반면， 본 발명의 일실시예에서와 같이 PBS버퍼를 이용한 경우는 시료간의 분별력이 있는 결과를 얻었다.
(c)단계는 (b)단계에서 상기 균질화된 시료가 접촉한 항 p21항체가 부착된 금속박막을 반원통 프리즘에 올려놓고, 입사각도 변화에 따른 반사광 세기를 측정 하여 입사각도에 대한 반사광 세기스펙트럼을 얻었다. 금속박막 표면에 분자가 흡 착되면 공명각이 증가하게 된다. 따라서 금속박막 표면에 분자가 흡착되지 않았을 때의 공명각과 분자가 흡착되었을 때의 공명각의 차이를 이용해 RU (resonance untis)를 구하는데， 이 차이는 금속박막 표면에 분자가 흡착되지 않았을 때 계측기 에 도달하는 반사 빛과 분자가 흡착되었을 때 계측기에 도달하는 반사 빛에서 금속 박막 표면에 빛이 흡수된 정보의 차이를 말한다. 이를 이용해 금속박막 표면에 흡 착된 분자의 양， 즉 p21의 농도를 측정하였다. 시료의 p21 농도 측정 결과 및 월령 을 알고 있는 기준 ^플의 p21 농도 측정결과를 비교하여 시료의 월령을 판별하였 다.
상기 월령을 알고 있는 기준 샘플은 30개월령 미만 및 30개월령 이상의 소고 기이며， 30개월령 미만의 기준 샘플로는 15개월령 내지 29개월령의 소고기를 선택 할 수 있고， 30개월령 이상의 기준 샘플로는 30개월령 내지 50개월령의 소고기를 선택할 수 있다. 바람직하게는 30개월령 미만의 기준 샘플로 25개월령 내자 29개월 령의 소고기를 선택할 수 있고， 30개월령 이상의 기준 샘플로는 31개월령 내지 35 개월령의 소고기를 선택할 수 있다. 더욱 바람직하게는 30개월령 미만의 기준 샘플 로 27개월령의 소고기를 선택할 수 있고, 30개월령 이상의 기준 샘플로 31개월령의 소고기를 선택할 수 있다.
【유리한 효과]
따라서, 본 발명은 소고기 월령 판별용 SPR 키트 또는 소고기 월령 판별 방 법을 제공한다. 본 발명의 소고기 월령 판별용 SPR 키트를 사용하는 경우， p21의 농도를 측정하여 30개월 미만의 소고기를 효과적으로 선별해낼 수 있어 소고기의 월령을 판별하는 목적으로 유용하게 사용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 실시예 1의 실험군의 RU변화 결과를 비교하여 나타낸 것이다.
도 2는실시예 1의 대조군의 RU변화 결과를 비교하여 나타낸 것이다.
도 3은 실시예 2의 RU변화 결과를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4 및 도 5는 표면 플라즈몬 공명 현상의 분석원리를 나타낸 것이다.
도 6은 회전거울을 이용한 레이저 광원의 변조를 나타낸 것이다.
도 7은 초소형 SPR바이오첩 분석시스템 상용화 제품을 나타낸 것이다.
【발명의 실시를 위한 형태】
이하， 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단， 하기의 실시예는 본 발명을 실시하기 위하여 제시된 하나의 예시일 뿐이 며， 하기의 실시예에 의하여 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.
<비교예 1>
Tris buffer를 이용한 D21 SPR키트 7fl발 골드칩을 피라나 용액 (황산：과산화수소 =3:1)을 이용하여 깨끗하게 처리 후 3 차 증류수를 이용하여 닦아내고， 질소가스를 이용하여 건조 후 카트리지를 이용하 여 SPR 장비에 고정하였다. IX PBS를 이용하여 장비 안정화를 한 후 Cys3-Protein G를 주입하여 칩 표면에 고정한 후 IX PBS를 이용하여 세척했다. BSA를 이용하여 노출되어 남아있는 골드 칩 표면을 막고， Tris buffer를 이용하여 기준 신호를 잡 았다. Antibody를 이용하여 Cys3-Protein G위에 고정한 후 IX PBS를 이용하여 세척 하였다. 20개월， 35개월， 47개월 소 시료를 각 채널에 주입하고 SPR의 RU 변화를 측정하여 데이터를 비교， 분석 하였다.
:85>
：86> 상기에서 소시료는 연령별로. 시료를 채취하여 -70에서 보관후 사용하였다 . 시료의 준비를 위해서， 소 조직 O.lg에 1M Tris-HCKpH 8.0) lml 넣고 homogenator 를 이용해 조직을 곱게 갈아주고， ice에서 20분간 incubation 시켰다. 이를 4， 13,000rpm에서 20분 동안 원심분리 한 후 상층액만 따내서 단백질 농도를 측정하여 각 샘플의 최종 농도를 ig// 로 맞춘 것을사용하였다.
:87>
：88> 그 결과， 도 1에서 보듯이 35개월이 넘어가는 소 시료와 30개월이 안되는 소 시료의 분별력이 없었다.
:89>
:90> <비교예 2>
：91> Tris buffer를 이용한 D21 SPR키트 7fl발
：92> 골드칩을 피라나 용액 (황산：과산화수소 =3:1)을 이용하여 깨끗하게 처리 후 3 차 증류수를 이용하여 닦아내고， 질소가스를 이용하여 건조 후 카트리지를 이용하 껴 SPR 장비에 고정하였다. IX PBS를 이용하여 장비 안정화를 한 후 Cys3-Protein G를 주입하여 칩 표면에 고정한 후 IX PBS를 이용하여 세척했다. BSA를 이용하여 노출되어 남아있는 골드 칩 표면을 막고， 1X PBS로 세척 하였다 . Antibody를 이용 하여 Cys3-Protein G위에 고정한 후 IX PBS를 이용하여 세척하였다. 28개월, 35개 월 소 시료를 각 채널에 주입하고 SPR의 RU 변화를 측정하여 데이터를 비교， 분석 하였다.
93>
94> 그 결과， 도 2에서 보듯이 28개월 소 시료와 35개월 소 시료의 분별력이 없 었다.
95>
96> 상기 비교예 1, 2에서 분별력이 없는 결과가 나온 원인에는 정제 되지 않은 흔합물에서 한 종에 의한 결합을 확인하고자 한 것， 흔합된 단백질들의 비특이적 반응， 그리고 Buffer 선정의 오류가 있다. J7>
n> <실시예 1>
w> PBS buffer를 이용한 D21 SPR키트 기 I발 ai> 시료의 전처리를 PBS 버퍼로 사용한 것을 제외하고는 상기 비교예 1과 동일 하게 하여 실험을 수행하였다. PBS 버퍼를 이용한 시료의 준비는 다음과 같이 수행 하였다: cow조직 O.lg에 lx PBS 1ml 넣고 homogenator를 이용해 조직을 곱게 갈아 준다음 ice에서 20분간 incubation 시켰다. 이를 4, 13,000rpm에서 20분 동안 원심 분리 한 후 상층액만 따내서 단백질 농도를 측정하여 각 샘플의 최종 농도를 igi ^로 맞추어서 사용하였다.
02>
03> 그 결과， 30개월이 안되는 소 시료는 p21의 농도가 30개월이 경과된 소 시료 에 비해 증가되어 있는 것을 측정할 수 있었다.
04>
05> <실시예 2>
06> PEG C00H SAM로고정한 D21 SPR키트 개발
07>
08> PEG C00H SAMWS- CH^u— (0CH2CH2)6-0CH-C00H]을 에탄올에 녹여 ImM 용액을 준비하였다. 상기 비교예 1에서와 같이 세척한 골드 칩을 준비한 SAM 용액에 12시 간 이상 담근 후 SAM으로 표면 처리 된 골드 칩을 3차 증류수를 이용하여 세척하고 질소가스를 이용하여 건조 후 카트리지를 이용 SPR 장비에 고정하였다. IX PBS를 이용하여 장비 안정화를 한 후 3차 증류수에 각각 녹인 0.4M EDC(N-Ethyl-N'-(3- dimethylaminopropyDcarbodi imide hydrochloride) 용액과 0.1M NHS(N- Hydroxysuccinimide) 용액을 1:1로 흔합하여 주입하였다. IX PBS를 이용하여 세척 후 lOmM sodium acetate (pH 5) 용액을 이용하여 희석한 Antibody용액을 주입하여 고정화 하였다. IX PBS를 이용하여 세척 후 3차 증류수에 녹인 1M ethanol amine 용 액을 이용하여 골드 표면 위에 남아있는 NHS부분을 치환 하였다. IX PBS를 이용하 여 세척한 후 27개월, 31개월 소 시료 (상기 실시예 1과 동일하게 준비)를 각 채널 에 주입하고 SPR의 RU변화를 비교， 분석 하였다.
09>
ιο> 그 결과， 도 3에서 보듯이, 30개월이 안되는 소 시료는 p21의 농도가 증가하 는 분별력을 확인 하였다. 【산업상 이용가능성】 J
이상 살펴본 바와 같이， 본 발명은 소고기 월령 판별용 SPR 키트 또는 소고 기 월령 판별 방법을 제공한다. 본 발명의 소고기 월령 판별용 SPR키트를 사용하 는 경우, p21의 농도를 측정하여 , 30개월 미만와 소고기를 효과적으로 선별해낼 수 있어 소고기의 월령을 판별할 수 있으므로 산업상 이용가능성이 높다.

Claims

【청구의 범위] .
【청구항 1】
SPR 키트에 있어서， 항 -p21 항체 및 PBS 시료 버퍼를 포함하는 것을 특징으 로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트.
【청구항 2】
항 -p21 항체 및 이와 결합된 링커분자가 코팅된 금속박막 및 PBS 시료 버퍼 를 포함하는 것을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트.
[청구항 3】
제 1항 또는 제 2항에 있어서, PBS를 첨가하여 균질화시킨 30개월령 미만의 소 고기 근육조직을 추가로 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 소고기 월령 판별용 SPR 키트.
【청구항 4】
(a)소고기 월령 판별 대상 시료를 PBS 버퍼에 넣고 균질화 시키는 단계;
(b)상기 균질화된 시료를 항 p21항체가 부착된 금속 박막과 접촉 시키는 단 계; 및
(c) SPR법에 의해 시료내 p21의 농도를 측정하는 단계를 포함하는 소고기 월 령 판별 방법 .
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090088225A (ko) * 2008-02-14 2009-08-19 재단법인서울대학교산학협력재단 한우 경제형질 개선을 위한 근육발달시기 관련 바이오 마커단백질
KR100974644B1 (ko) * 2009-12-23 2010-08-06 영남대학교 산학협력단 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우 판별방법
KR20110004961A (ko) * 2009-07-09 2011-01-17 피씨엘 (주) 초상자성나노입자를 이용한 타겟물질의 표지 및 검출방법
KR101047455B1 (ko) * 2009-12-30 2011-07-08 한국기초과학지원연구원 ｐ21 단백질을 함유하는 소고기 특이적 월령 판별용 마커

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100737689B1 (ko) * 2006-08-23 2007-07-09 성균관대학교산학협력단 표면 플라즈몬 공명 센서의 신호 증폭 방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090088225A (ko) * 2008-02-14 2009-08-19 재단법인서울대학교산학협력재단 한우 경제형질 개선을 위한 근육발달시기 관련 바이오 마커단백질
KR20110004961A (ko) * 2009-07-09 2011-01-17 피씨엘 (주) 초상자성나노입자를 이용한 타겟물질의 표지 및 검출방법
KR100974644B1 (ko) * 2009-12-23 2010-08-06 영남대학교 산학협력단 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우 판별방법
KR101047455B1 (ko) * 2009-12-30 2011-07-08 한국기초과학지원연구원 ｐ21 단백질을 함유하는 소고기 특이적 월령 판별용 마커

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