WO2013011166A2 - Uso de una composición en la elaboración de una solución de diálisis para el tratamiento de las enfermedades cerebrovasculares mediante diálisis peritoneal. - Google Patents

Uso de una composición en la elaboración de una solución de diálisis para el tratamiento de las enfermedades cerebrovasculares mediante diálisis peritoneal. Download PDF

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Ignacio LIZASOAÍN HERNÁNDEZ
José SÁNCHEZ-PRIETO BORJA
Magdalena TORRES MOLINA
María del Carmen GODINO ALARCON
Monica SOBRADO SANZ
Victor Manuel GONZÁLES ROMERA
José Aurelio VIVANCOS MORA
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    • A61M1/28—Peritoneal dialysis ; Other peritoneal treatment, e.g. oxygenation
    • A61M1/287—Dialysates therefor

Definitions

  • the present invention relates to a composition for the preparation of a peritoneal dialysis solution. More specifically, a peritoneal dialysis solution that can be used in the treatment of cerebrovascular diseases, in particular in the treatment of cerebral stroke.
  • the invention thus falls within the BIOMEDICAL sector and the scope of application is the development of peritoneal dialysis solutions for the treatment of pathologies and cerebrovascular diseases.
  • Cerebrovascular diseases or stroke include a set of disorders of the cerebral vasculature that are characterized by a decrease in blood flow in the brain with the consequent transient or permanent affectation of brain function at the focal or global level.
  • CVD is the third leading cause of death in the developed world, the 2 men and 1 women in Spain; They are considered the leading cause of disability and vascular dementia and affect 50% of the population over 60 years old, so they are currently a health problem and a medical emergency. According to the type of vascular episode, they can be hemorrhagic or ischemic.
  • An ischemic cerebrovascular episode occurs when an artery that supplies blood to the brain is blocked, suddenly reducing or interrupting blood flow and, over time, causing a stroke in the brain. Approximately 80 percent of all cerebrovascular events are ischemic. Thrombi caused by atherosclerosis or emboli due to blood clotting disorders are the most common cause of arterial blockage and cerebral infarction. Thrombosis is due to pathological transformations in the arterial tree that condition the occlusion of the vessel and an interruption of the flow at that level. It is usually plates
  • REPLACEMENT SHEET (Rule 26) atheromatous, which favor platelet aggregation so that intraluminal thrombi can lead to occlusion.
  • embolism is due to materials that come from another point of the bloodstream and is due to unwanted coagulation processes. The coagulation process is necessary and beneficial throughout the body because it stops bleeding and allows repair of damaged areas of the arteries or veins.
  • the coagulation process is necessary and beneficial throughout the body because it stops bleeding and allows repair of damaged areas of the arteries or veins.
  • Coagulation problems become more frequent as people advance in age.
  • hemorrhagic strokes are those that result from the rupture of a blood vessel or an abnormal vascular structure and represent approximately the remaining 20%.
  • ischemic stroke which is not hemorrhagic
  • tissue plasminogen activator t-PA, alteplase
  • Thrombolytics should be administered within 4.5 hours after the stroke (but not later) so that they can have some beneficial effect (Hacke et al., New Eng J Med. 2008. 359: 1317-1329). Unfortunately, most patients with a stroke arrive at the hospital within 4.5 hours after the attack and, therefore, cannot be given treatment.
  • An objective in the treatment of CVD is the limitation of neuronal damage (neuroprotection) through drugs or other therapeutic strategies that intervene in the ischemic cascade and reduce the amount of damaged tissue. In this way
  • REPLACEMENT SHEET (Rule 26) It could obtain a better clinical result, translated not only in survival, but also in the improvement of the quality of life of patients suffering from acute vascular events.
  • agents or groups of agents, whose effects have been tested in recent years is enormous and among them are: calcium antagonists, glutamate antagonists, GABA agonists, antioxidants or radical sequestrants, phospholipid precursors, regulators of nitric oxide-dependent signal transduction, leukocyte inhibitors, hemodilution, and other more recent therapies such as hypothermia, high dose human albumin, magnesium or combination therapies.
  • the present invention relates to the use of an isotonic and buffered composition in the elaboration of a dialysis solution to reduce the volume of cerebral infarction in cerebrovascular diseases, by peritoneal dialysis.
  • the composition of the present invention comprises electrolytes, pH regulating physiological substances and glucose concentrations equal to or lower than the blood plasma physiological. In addition, this composition must not contain a glutamate concentration greater than 200 ⁇ .
  • the use of a peritoneal dialysis solution made with this composition reduces the volume of cerebral infarction after occlusion of the middle cerebral artery (OACM-MCAO) very significantly (43.1 ⁇ 10.0% reduction).
  • the concentration of electrolytes can vary in the physiological range of their plasma concentrations, always maintaining isotonicity with respect to blood plasma.
  • the regulation of blood pressure after a stroke must be very careful to
  • REPLACEMENT SHEET (Rule 26) avoid both hypertension hemorrhages and hypotension hypoperfusion, so it is necessary that the composition of the invention be isotonic.
  • compositions with different concentrations of glucose, glutamate or buffering substances with which it is intended to offer a sample of the possible effective combinations in the treatment of stroke, without these examples limiting the scope of the invention.
  • the examples offered should be understood as models used in representation of the wide variety of liquids that can be used.
  • an appropriate composition for the preparation of a dialysis solution would be one containing 110 to 150 mEq / L of sodium ion, 0 to 5 mEq / L of potassium ion, 0 to 2 mEq / L of magnesium ion , 0 to 6 mEq calcium ion, 80 to 150 mEq / L chloride ion, 0.5-2 g / L glucose, 0 to 200 ⁇ glutamate, respecting isotonicity with respect to blood plasma and maintaining a physiologically acceptable pH.
  • the pH of the composition of the invention must be physiologically acceptable.
  • physiologically acceptable in this specification, means that the pH is in the range of 6 to 7.5.
  • the composition contains a physiological regulatory substance for pH adjustment to keep the dialysis solution buffered.
  • the composition of the present invention could contain up to 3.5 mmol / L of lactate and should contain 10 mmol / L of phosphate.
  • the composition for the preparation of the dialysis solution may contain different concentrations of glucose (0.5-2.0 g / L), the physiological concentration of glucose in the upper limit being plasma to prevent the increase in plasma glucose concentration by diffusion of it from the dialysis fluid to the plasma, since hyperglycemia is a factor of poor prognosis after a stroke.
  • glucose can be partially substituted by a dextrin, which will also contribute to the isotonicity of the dialysis solution.
  • compositions that meets these requirements can be used in the preparation of a sterile peritoneal dialysis solution for
  • REPLACEMENT SHEET (Rule 26) use in the treatment of cerebrovascular diseases by peritoneal dialysis.
  • This descriptive report includes examples of the use of the dialysis solution to which the composition of the invention gives rise, which has been used in peritoneal dialysis applied to rats that had occluded the occlusion of the middle cerebral artery, thus producing a heart attack. cerebral.
  • the infarct volume was significantly lower in the treated animals (12.17 ⁇ 1.75% - average of all the values obtained in the trials in which the composition of TABLE 1-) was used than in the control group without treatment ⁇ 21.42 ⁇ 1.48%), from which it follows that the composition of the invention and its application are effective in reducing brain damage associated with an ischemic stroke.
  • Peritoneal dialysis is one of the treatment options available to remove waste products and excess fluid from the blood when the kidneys do not function properly, as an alternative to renal dialysis.
  • the good results obtained in this invention in the models of cerebrovascular disease could be due to a similar action, removing some waste product that reached the blood after a stroke or other cerebrovascular disease.
  • some studies on the effects produced by these diseases have been able to attribute to the accumulation of glutamate in the extracellular medium of the cerebral parenchyma a fundamental role in the evolution of neuronal damage, hence the most recent investigations have been directed to sequester or eliminate blood glutamate.
  • Patent application WO2007105203 includes the use of agents capable of modulating the activity of stress-related hormones, especially agonists and adrenergic antagonists, whether or not accompanied by enzymes that modify glutamate (transaminases, dehydrogenases, decarboxylases, transferases, etc.) . More recently, oxaloacetate has also been tested.
  • the present invention relates to an isotonic composition, with low glucose concentration, glutamate concentration equal to or less than 200 ⁇ , preferably equal to zero, and pH buffered with a mixture of lactate and phosphate, for use in the treatment of cerebrovascular diseases by peritoneal dialysis.
  • a second aspect of this invention relates to the use of an isotonic composition, with low glucose concentration, glutamate concentration equal to or less than 200 ⁇ , preferably equal to zero, and pH buffered with a mixture of lactate and phosphate, in the preparation of a sterile dialysis solution with application in the treatment of cerebrovascular disease by peritoneal dialysis.
  • Cerebrovascular disease or CVD refers to a set of disorders of the cerebral vasculature that are characterized by a decrease in blood flow in the brain with the consequent involvement of transient or permanent form of brain function at the focal or global level. Among them are transient ischemic attack, head trauma, ischemic stroke and hemorrhagic stroke.
  • the invention relates to a peritoneal dialysis method for treating cerebrovascular diseases by using a sterile dialysis solution made with an isotonic composition, with low glucose concentration, glutamate concentration equal to or less than 200 ⁇ , preferably equal to zero, and pH buffered with a mixture of lactate and phosphate.
  • REPLACEMENT SHEET (Rule 26)
  • the advantages of this invention and its application are: (1) Useful in all types of stroke. (2) Rapid application of the technique, even in the ambulance, as soon as the stroke code is activated. (3) The peritoneal dialysis technique is already successfully applied in other pathologies and peritoneal dialysis solutions are known and used. (4) The application of any drug to the patient is not required. (5) Sophisticated equipment is not required.
  • Figure 1 Effect of peritoneal dialysis with a dialysis solution made from the composition specified in Table 1 in the volume of infarction after occlusion of the middle cerebral artery (MCAO).
  • A) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours (data are means ⁇ SEM, n 8).
  • B) Volume of mean infarction in the group of animals exposed to a permanent MCAO for 24 hours and subjected to two dialysis cycles (Data are means ⁇ SEM, n 4, * p > 0 > n5 with respect to the control).
  • t 0 indicates the start of surgery to occlude the middle cerebral artery.
  • Figure 3 Effect of peritoneal dialysis with a dialysis solution made from the composition specified in Table 3 in the volume of infarction after occlusion of the middle cerebral artery (MCAO).
  • A) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours (data are means ⁇ SEM, n 8).
  • B) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours and undergoing two dialysis cycles (Data are mean ⁇ SEM, n 4, * p > n .05 C with respect to control) .
  • t 0 indicates the start of surgery to occlude the middle cerebral artery.
  • A) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours (data are means ⁇ SEM, n 8).
  • B) Average infarct volume in the group of animals exposed to a permanent MCAO for 24 hours and subjected to two dialysis cycles (Data are means ⁇ SEM, n 4 ' ⁇ ⁇ , ⁇ C on the control).
  • t 0 indicates the start of surgery to occlude the middle cerebral artery.
  • Figure 5 Effect of peritoneal dialysis with a dialysis solution made from the composition specified in Table 5 in the volume of infarction after occlusion of the middle cerebral artery (MCAO).
  • A) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours (data are means ⁇ SEM, n 6).
  • B) Average infarct volume in the group of animals exposed to permanent MCAO for 24 hours and undergoing two dialysis cycles (Data are means ⁇ SEM, n 4, * p ⁇ 0.05 with respect to control).
  • t 0 indicates the start of surgery to occlude the middle cerebral artery.
  • Figure 6 Effect of peritoneal dialysis with a dialysis solution made from the composition specified in Table 1 in plasma glutamate concentration after occlusion of the middle cerebral artery (MCAO).
  • Plasma glutamate values are normalized to their respective baseline values (obtained before surgery).
  • Figure 7 Effect of the addition of glutamate to the dialysis solution made from the composition specified in Table 1 in the volume of infarction after occlusion of the middle cerebral artery (MCAO).
  • the occlusion of the MCA was performed with a 9/0 nylon, just before the bifurcation of the frontal and parietal branches.
  • the common carotid arteries (ACC) were then exposed, and they were permanently occluded with a 6/0 nylon in the case of the ipsilateral and transient in the contralateral, removing the occlusion of the latter after 90 minutes.
  • rats were used in which the MCA was exposed but not occluded.
  • the brain was removed and 2 mm thick coronal cuts were made (Brain Matrix, WPI, UK) that were stained with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (1% TTC in 0.2 M phosphate buffer ).
  • the infarct volumes were calculated by taking images of the samples on each side of the coronal sections with a digital camera (Nikon Coolpix 990), and the images were analyzed using ImageJ 1.33u (National Institutes of Health, Bethesda, MD). The digitized image was projected on a video monitor, having hidden the experimental conditions from the observer.
  • the perimeter of the contralateral hemisphere was superimposed on the ipsilateral hemisphere to exclude edema, and the margins of the infarction were delineated with a cursor.
  • the area of infarction, which was unstained, was determined by counting the pixels contained in the delineated regions.
  • the infarction volumes (in% of infarcted hemisphere -VHI-) were obtained from the integration of the infarct areas along the length of the infarction calculated as an orthogonal projection. All animals exhibited infarction after the occlusion process, which affected only the cerebral cortex
  • Example 2 A procedure similar to that described in Example 1 was performed, using the composition specified in Table 2 to prepare the sterile dialysis solution.
  • Example 2 A procedure similar to that described in Example 1 was performed, using the composition specified in Table 3 to prepare the sterile dialysis solution.
  • Example 2 A procedure similar to that described in Example 1 was performed, using the composition specified in Table 5 to prepare the sterile dialysis solution.
  • a cannula was inserted into the femoral artery for blood sampling. And we proceeded as described in example 1.
  • Plasma samples were obtained by centrifugation at 4 ° C of the blood sample (100 ⁇ ) in the presence of 3.15% citrate buffer (10 ⁇ ) at 3,500 rpm for 5 minutes.
  • the plasma which constitutes the upper layer, was removed with a Pasteur pipette and deposited in a tube stored at -80 ° C until processing.
  • Plasma glutamate was determined by an enzymatic assay described by Nicholls, DG et al. (J. Neurochem. 1987. 49: 50-57) by measuring the increase in fluorescence produced by NADPH in the reaction catalyzed by the enzyme glutamate dehydrogenase (GDH) in the presence of NADP * .
  • Fluorescence variations were recorded in Perkin-Elmer fluorimeters LS-50B and LS-55 at emission and excitation wavelengths of 340 nm and 460 nm, respectively.
  • the excitation and emission slits were set at 3 nm and 9 nm.
  • HBM medium NaCI140 mM, KCI 5 mM, NaHC0 3 May mM NaH 2 P0 4 1.2 mM, MgCl 2 1 mM and 10 mM HEPES, pH 7.4
  • the assay was started by adding 5 ⁇ of plasma. At the end of each determination a standard of 2 nmoles of glutamate was added for the quantification of the sample content.
  • Occlusion of the middle cerebral artery produced an increase of more than twice in the plasma glutamate concentration at 4.5 hours after occlusion, as shown in Fig. 6.
  • rats of the SHAM group as well as no increase in plasma glutamate was observed in the group of dialyzed rats ⁇ Fig. 6).
  • Fig. 6 confirm that plasma glutamate rises after cerebral ischemia and that peritoneal dialysis with a dialysis solution made from the composition of the invention is a very effective method to reduce it.
  • the rats were sacrificed to determine the volume of infarction, as explained in example 1.
  • peritoneal dialysis is performed, all substances that are not present in the dialysate solution can be dialyzed. Therefore, to verify whether the reduction in infarct volume was due to the reduction in plasma glutamate concentration and not to that of another substance, glutamate was introduced into two different concentrations, 200 and 400 ⁇ 400, in the composition of the invention. As shown in Fig. 7, when glutamate was present in the composition at a concentration of 200 ⁇ , the volume of infarction was still significantly reduced relative to that found in control rats (MCAO). When the glutamate concentration was increased to 400 ⁇ in composition, the infarction volume was similar to that of the control ischemic rats (24.40 ⁇ 0.91%).

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Abstract

La presente invención se relaciona con el uso de una composición isotónica, tamponada con lactato/fosfato en un intervalo fisiológicamente aceptable de pH (6-7,5), con bajas concentraciones de glutamato y con una concentración fisiológica, o menor, de glucosa, en la elaboración de una solución de diálisis peritoneal para el tratamiento agudo del ictus y otras enfermedades cerebrovasculares. La aplicación de esta solución de diálisis en la cavidad peritoneal disminuye de forma muy significativa el volumen de infarto cerebral asociado a la oclusión de la arteria cerebral media y, por lo tanto, el daño neurológico asociado. De aplicación en Biomedicina en las patologías cerebrovasculares, incluido el ictus cerebral isquémico o hemorrágico.

Description

TÍTULO
Uso de una composición en la elaboración de una solución de diálisis para el tratamiento de las enfermedades cerebrovasculares mediante diálisis peritoneal.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se relaciona con una composición para la elaboración de una solución de diálisis peritoneal. Más concretamente, una solución de diálisis peritoneal que puede utilizarse en el tratamiento de enfermedades cerebrovasculares, en particular en el tratamiento del ictus cerebral. La invención se encuadra, por tanto, en el sector BIOMÉDICO y el ámbito de aplicación es el de la elaboración de soluciones de diálisis peritoneal para el tratamiento de patologías y enfermedades cerebrovasculares.
ESTADO DE LA TÉCNICA
Las enfermedades cerebrovasculares (ECV) o ictus comprenden un conjunto de trastornos de la vasculatura cerebral que se caracterizan por una disminución del flujo sanguíneo en el cerebro con la consecuente afectación, de forma transitoria o permanente, de la función del cerebro a nivel focal o global. Las ECV son la tercera causa de muerte en el mundo desarrollado, la 2a en hombres y la 1a en mujeres en España; se consideran la primera causa de discapacidad y de demencia vascular y afectan a un 50% de la población mayor de 60 años, por lo que constituyen en la actualidad un problema de salud y una urgencia médica. Atendiendo al tipo de episodio vascular, pueden ser hemorrágicas o isquémicas.
Un episodio cerebrovascular isquémico ocurre cuando una arteria que suministra sangre al cerebro queda bloqueada, reduciendo o interrumpiendo repentinamente el flujo de sangre y, con el tiempo, ocasionando un infarto en el cerebro. Aproximadamente un 80 por ciento de todos los episodios cerebrovasculares son de tipo isquémico. Los trombos originados por aterosclerosis o los émbolos por alteraciones de la coagulación sanguínea son la causa más común de bloqueo arterial y de infarto cerebral. La trombosis se debe a transformaciones patológicas en el árbol arterial que condicionan la oclusión del vaso y una interrupción del flujo a ese nivel. Generalmente se trata de placas
1
HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) ateromatosas, que favorecen la agregación plaquetaria por lo que trombos intraluminales pueden conducir a la oclusión. Por otra parte, el embolismo se debe a materiales que proceden de otro punto del torrente circulatorio y se debe a procesos de coagulación no deseados. El proceso de coagulación es necesario y beneficioso en todo el cuerpo debido a que detiene la hemorragia y permite reparar las áreas dañadas de las arterias o de las venas. Sin embargo, cuando los coágulos de sangre se forman en el lugar incorrecto dentro de una arteria, ocasionan una lesión devastadora al interferir el flujo normal de sangre. Los problemas de coagulación se hacen más frecuentes a medida que las personas avanzan en edad. Por otro lado, los ictus hemorrágicos son los que resultan de la ruptura de un vaso sanguíneo o una estructura vascular anormal y representan aproximadamente el 20% restante. Algunas hemorragias se desarrollan dentro de las zonas de isquemia lo que se denomina "transformación hemorrágica".
A pesar de la alta incidencia del ictus, las intervenciones terapéuticas son extremadamente limitadas y actualmente el único tratamiento eficaz para ei ictus isquémico, que no el hemorrágico, es la administración de una terapia trombolltica con el activador de plasminógeno tisular (t-PA, alteplasa) para restaurar el flujo sanguíneo. Sin embargo, este tratamiento sólo es aplicable en un 3-5% de los pacientes. Los siguientes pasos son clave antes de administrar este compuesto:
• Los trombolíticos deben administrarse dentro de las 4,5 horas después del ictus (pero no más tarde) para que puedan tener algún efecto beneficioso (Hacke et al., New Eng J Med. 2008. 359: 1317-1329). Lamentablemente, la mayoría de pacientes con un ictus llegan al hospital en un plazo mayor de 4,5 horas después del ataque y, por ello, no se les puede administrar el tratamiento.
• Antes de administrar t-PA, debe confirmarse mediante una TAC (tomografía axial computerizada) que el ictus no es hemorrágico debido a que el tratamiento con t- PA conlleva riesgo de sangrado.
• Ciertos pacientes corren un riesgo mayor de hemorragia cuando se les administran estos fármacos. Se incluyen pacientes con las siguientes condiciones: en tratamiento con antiagregantes (ej. Aspirina) y/o anticoagulantes, con alteraciones en la coagulación, historia reciente de úlceras sangrantes o de fibrilación auricular.
Un objetivo en el tratamiento de las ECV es la limitación del daño neuronal (neuroprotección) a través de fármacos u otras estrategias terapéuticas que intervengan en la cascada isquémica y reduzcan la cantidad de tejido dañado. De este modo se
2
HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) podría obtener un mejor resultado clínico, traducido no sólo en supervivencia, sino también en la mejora de la calidad de vida de los pacientes que sufren eventos vasculares agudos.
Los modelos de isquemia cerebral en animales han contribuido al desarrollo del conocimiento de este problema. Se han ensayado muchos agentes neuroprotectores en estos modelos; sin embargo, hasta el momento actual, ninguno supera los criterios de eficacia y seguridad en ensayos clínicos. En la revisión Neuroprotection for ischemic stroke: Past, present and Mure (Ginsberg MD. Neuropharmacology. 2008. 55:363-389), el autor hace una recopilación de los agentes neuroprotectores que se han evaluado, tanto en estudios preclínícos como en ensayos clínicos, para el tratamiento del ictus isquémico. La variedad y cantidad de agentes, o grupos de agentes, cuyos efectos se han probado en los últimos años es enorme y entre ellos figuran: antagonistas del calcio, antagonistas del glutamato, GABA agonistas, antioxidantes o secuestradores de radicales, precursores de fosfolípidos, reguladores de la transducción de señales dependiente de óxido nítrico, inhibidores de leucocitos, hemodilución, y otras terapias más recientes como la hipotermia, la albúmina humana en dosis elevadas, el magnesio o las terapias combinadas.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere al uso de una composición isotónica y tamponada en la elaboración de una solución de diálisis para reducir el volumen de infarto cerebral en las enfermedades cerebrovasculares, mediante la diálisis peritoneal. La composición de la presente invención comprende electrolitos, sustancias fisiológicas reguladoras del pH y concentraciones de glucosa iguales o inferiores a las fisiológicas del plasma sanguíneo. Esta composición, además, no debe contener una concentración de glutamato superior a 200 μΜ. El uso de una solución de diálisis peritoneal elaborada con esta composición reduce de forma muy significativa (43,1±10,0% de reducción) el volumen de infarto cerebral tras la oclusión de la arteria cerebral media (OACM-MCAO).
La concentración de los electrolitos puede variar en el rango fisiológico de sus concentraciones plasmáticas manteniendo siempre la isotonicidad con respecto al plasma sanguíneo. La regulación de la tensión arterial tras un ictus ha de ser muy cuidadosa para
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) evitar tanto hemorragias por hipertensión como hipoperfusión por hipotensión, por lo que es necesario que la composición de la invención sea isotónica.
En esta memoria descriptiva se incluyen varios ejemplos de composiciones con distintas concentraciones de glucosa, de glutamato o de sustancias tamponadoras con los que se pretende ofrecer una muestra de las posibles combinaciones eficaces en el tratamiento del ictus, sin que estos ejemplos limiten el alcance de la invención. Los ejemplos ofrecidos deben entenderse como modelos utilizados en representación de la amplia variedad de líquidos que pueden utilizarse. Como ejemplo, una composición apropiada para la elaboración de una solución de diálisis sería aquella que contuviese de 110 a 150 mEq/L de ión sodio, de 0 a 5 mEq/L de ión potasio, de 0 a 2 mEq/L de ión magnesio, de 0 a 6 mEq de ión calcio, de 80 a 150 mEq/L de ión cloruro, de 0,5-2 g/L de glucosa, de 0 a 200 μΜ de glutamato, respetando la isotonicidad con respecto al plasma sanguíneo y manteniendo un pH fisiológicamente aceptable.
El pH de la composición de la invención debe ser fisiológicamente aceptable. El término "fisiológicamente aceptable", en esta memoria descriptiva, significa que el pH está en el intervalo de 6 a 7,5. Además, la composición contiene una sustancia fisiológica reguladora para el ajuste del pH para mantener tamponada la solución de diálisis. En cuanto a las sustancias fisiológicas reguladoras del pH, la composición de la presente invención podría contener hasta 3,5 mmol/L de lactato y debe contener 10 mmol/L de fosfato.
Puesto que la diálisis peritoneal implica la pérdida de metabolitos, la composición para la elaboración de la solución de diálisis puede contener diferentes concentraciones de glucosa (0,5-2,0 g/L), siendo el limite superior la concentración fisiológica de glucosa en plasma para evitar el aumento de la concentración plasmática de glucosa por una difusión de la misma desde el líquido de diálisis al plasma, dado que la hiperglucemia es un factor de mal pronóstico tras un ictus.
Así mismo, la glucosa puede ser parcialmente sustituida por una dextrina, que también contribuirá a la isotonicidad de la solución de diálisis.
Cualquier composición que cumpla estos requisitos (isotonicidad, baja concentración de glucosa, concentración de glutamato inferior a 200 μΜ, pH tamponado con fosfatos) puede ser utilizada en la elaboración de una solución de diálisis peritoneal estéril para su
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) empleo en el tratamiento de enfermedades cerebrovasculares mediante diálisis peritoneal.
Esta memoria descriptiva recoge ejemplos de utilización de la solución de diálisis a que da lugar la composición de la invención, que se ha empleado en diálisis peritoneal aplicada a ratas a las que se había practicado la oclusión de la arteria cerebral media, produciendo así un infarto cerebral. El volumen del infarto fue significativamente menor en los animales tratados (12,17±1 ,75% -promedio de todos los valores obtenidos en los ensayos en los que se ha utilizado la composición de la TABLA 1-) que en el grupo de control sin tratamiento {21,42±1,48%), de lo que se deduce que la composición de la invención y la aplicación a que da lugar son eficaces en la reducción del daño cerebral asociado a un ictus isquémico.
La diálisis peritoneal es una de las opciones de tratamiento disponible para retirar los productos de desecho y el exceso de líquido de la sangre cuando los ríñones no funcionan adecuadamente, como alternativa a la diálisis renal. Los buenos resultados obtenidos en esta invención en los modelos de enfermedad cerebrovascular podrían deberse a una acción similar, retirando algún producto de desecho que llegara a la sangre después de un ictus u otra enfermedad cerebrovascular. En este sentido, algunos estudios sobre los efectos producidos por estas enfermedades han podido atribuir a la acumulación de glutamato en el medio extracelular del parénquima cerebral un papel fundamental en la evolución del daño neuronal, de ahí que las más recientes investigaciones se hayan dirigido a secuestrar o eliminar el glutamato sanguíneo. En este contexto, se han utilizado la glutamato-oxalacetato transaminasa (GOT) y la glutamato- piruvato transaminasa (GPT) acompañadas en el tratamiento de piruvato o glutamato (WO2004012762). La solicitud de patente WO2007105203 recoge el uso de agentes capaces de modular la actividad de las hormonas relacionadas con el estrés, especialmente agonistas y antagonistas adrenérgicos, acompañados o no de enzimas que modifican el glutamato (transaminasas, deshidrogenases, decarboxilasas, transferasas, etc.). Más recientemente se ha ensayado también el oxalacetato. Se ha comprobado que estimula la glutamato-oxalacetato transaminasa residente, lo que da lugar a la disminución de la concentración del glutamato plasmático por estimulación de la capacidad degradativa del plasma para este aminoácido. Se ha demostrado que este procedimiento proporciona neuroprotección en un modelo animal (rata) de isquemia cerebral focal (Nagy D, et al. Cell Mol Neurobiol. 2009. 29:827-35) y de traumatismo craneal (Zlotnik A, eí al. J Neurosurg Anesthesiol. 2009. 21 :235-41).
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Para comprobar si el mecanismo de acción de la solución de diálisis elaborada con la composición de la invención estaba relacionado con estos hallazgos, se ha analizado la Influencia de la presencia de diferentes concentraciones de glutamato en dicha composición y la presente memoria descriptiva recoge ejemplos en los que se ha comprobado que el efecto beneficioso es mayor cuanto menor es la concentración de glutamato en el mismo, de manera que, preferentemente, esta composición no debe contener concentraciones de glutamato superiores a 200 μΜ y, más preferentemente aún, no debe contener glutamato.
En un primer aspecto, la presente invención se relaciona con una composición isotónica, con baja concentración de glucosa, concentración de glutamato igual o inferior a 200 μΜ, preferentemente igual a cero, y pH tamponado con una mezcla de lactato y fosfato, para su uso en el tratamiento de las enfermedades cerebrovasculares mediante diálisis peritoneal.
Un segundo aspecto de esta invención se refiere al uso de una composición isotónica, con baja concentración de glucosa, concentración de glutamato igual o inferior a 200 μΜ, preferentemente igual a cero, y pH tamponado con una mezcla de lactato y fosfato, en la elaboración de una solución de diálisis estéril con aplicación en el tratamiento de una enfermedad cerebrovascular mediante diálisis peritoneal.
Como se ha mencionado anteriormente, el término "enfermedad cerebrovascular o ECV", tal como aquí se emplea, se refiere a un conjunto de trastornos de la vasculatura cerebral que se caracterizan por una disminución del flujo sanguíneo en el cerebro con la consecuente afectación, de forma transitoria o permanente, de la función del cerebro a nivel focal o global. Entre ellas se encuentran el ataque isquémico transitorio, el traumatismo craneoencefálico, el ictus cerebral isquémico y el ictus cerebral hemorrágico.
Así mismo, la invención se refiere a un método de diálisis peritoneal para tratar las enfermedades cerebrovasculares mediante la utilización de una solución de diálisis estéril elaborada con una composición isotónica, con baja concentración de glucosa, concentración de glutamato igual o inferior a 200 μΜ, preferentemente igual a cero, y pH tamponado con una mezcla de lactato y fosfato.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Para los expertos en ictus las ventajas de este invento y su aplicación son: (1) Utilidad en todos los tipos de ictus. (2) Rápida aplicación de la técnica, incluso en la ambulancia, tan pronto como se activa el código ictus. (3) La técnica de diálisis peritoneal ya se aplica con éxito en otras patologías y las soluciones de diálisis peritoneal son conocidas y utilizadas. (4) No se requiere la aplicación de fármaco alguno al paciente. (5) No se requiere equipamiento sofisticado.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1 : Efecto de la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 1 en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
A) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas (los datos son medias ± SEM, n=8). B) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas y sometidos a dos ciclos de diálisis (Los datos son medias ± SEM, n=12, *ρ< ,ΟΌ1 con respecto al control). t=0 indica el inicio de la cirugía para ocluir la arteria cerebral media. Figura 2: Efecto de la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 2 en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO). A) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas (los datos son medias ± SEM, n=8). B) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas y sometidos a dos ciclos de diálisis (Los datos son medias ± SEM, n=4, *p>0 > n5 con respecto al control). t=0 indica el inicio de la cirugía para ocluir la arteria cerebral media.
Figura 3: Efecto de la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 3 en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
A) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas (los datos son medias ± SEM, n=8). B) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas y sometidos a dos ciclos de diálisis (Los datos son medias ± SEM, n=4, *p>n.05 Con respecto al control). t=0 indica el inicio de la cirugía para ocluir la arteria cerebral media.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Figura 4: Efecto de la diálisis perltoneai con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 4 en el volumen de infarto después de la oclusión de ia arteria cerebral media (MCAO).
A) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas (los datos son medias ± SEM, n=8). B) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas y sometidos a dos ciclos de diálisis (Los datos son medias ± SEM, n=4 'ρ^,Οδ Con respecto al control). t=0 indica el inicio de la cirugía para ocluir la arteria cerebral media.
Figura 5: Efecto de la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 5 en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
A) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas (los datos son medias ± SEM, n=6). B) Volumen de infarto medio en el grupo de animales expuesto a una MCAO permanente durante 24 horas y sometidos a dos ciclos de diálisis (Los datos son medias ± SEM, n=4, *p<0.05 con respecto al control). t=0 indica el inicio de la cirugía para ocluir la arteria cerebral media.
Figura 6: Efecto de la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 1 en la concentración plasmática de glutamato después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
Las muestras se recogieron a diferentes tiempos indicados en la gráfica, según se indica en el esquema. Los valores de glutamato plasmático están normalizados a sus respectivos valores básales (obtenidos antes de la cirugía). (Los datos son medias ± SEM, n=5 para el grupo SHAM; n=6 para el grupo MCAO, *p<0.°5 con respecto al basal; n=5 para MCAO+DP -diálisis peritoneal-; *p<0,05 con respecto ai MCAO).
Figura 7: Efecto de la adición de glutamato a la solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 1 en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
Las ratas se expusieron a una MCAO permanente durante 24 horas (MCAO, n=6) y dos grupos de animales se sometieron a dos ciclos de diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de la composición que se especifica en la Tabla 1 al que se
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) añadió glutamato a 200 μΜ (MCAO+DP 200μΜ; η=6) ó 400 μΜ (MCAO+DP 400μΜ; η=4). *ρ<0.05 con respecto al MCAO.
MODO DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN
A continuación se muestran diferentes ejemplos para ilustrar la presente invención, que no son limitativos de su alcance. Ejemplo 1
Test para evaluar si la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una composición que contiene una concentración fisiológica de glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con fosfato reduce significativamente el volumen de infarto producido por la oclusión de la arteria cerebral media.
Ratas Sprague-Dawley macho de peso 250-300g sanas se anestesiaron con Isofluorano 1.5% en una mezcla de aire atmosférico 80% / oxígeno 20%. La temperatura corporal de los animales se monitorizó durante toda la experimentación mediante una sonda rectal y se mantuvo a 36.5±0.5 °C empleando una manta térmica. La isquemia cerebral focal permanente fue inducida por oclusión de la arteria cerebral media distal (ACM) tal como se ha descrito anteriormente (Sobrado M, et al. Neuroscience 2003. 118:107-13). Para la ligadura de la ACM se realizó una craneotomía para exponer la región del tronco de la misma. La oclusión de la ACM se realizó con un nylon 9/0, justo antes de la bifurcación de las ramas frontal y parietal. A continuación se expusieron las arterias carótidas comunes (ACC), pasando a ocluirlas con un nylon 6/0 de forma permanente en el caso de la ipsilateral y transitoria en la contralateral, quitando la oclusión de esta última pasados 90 minutos. Como controles con intervención simulada (SHAM, n=5) se utilizaron ratas en la cuales la ACM estaba expuesta pero no ocluida. Después de la intervención quirúrgica, un grupo de animales (n=6) fue devuelto a sus jaulas y tuvieron libre acceso a la comida y a la bebida, otro grupo (n=5) fue sometido a dos ciclos de diálisis peritoneal (de una hora de duración cada uno) con 40 mlJKg de la solución de diálisis elaborada a partir de la composición que viene especificada en la TABLA 1 y esterilizada por filtración a través de un filtro de membrana de 0,22 μπι, entre las 2,5 y las 4,5 horas post-cirugía. A las 24 horas de la intervención quirúrgica, las ratas fueron sacrificadas para determinar el volumen de infarto.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26)
Figure imgf000011_0001
Para determinar el volumen de infarto se extrajo el cerebro y se hicieron cortes coronales de 2 mm de grosor (Brain Matrix, WPI, UK) que se tiñeron con cloruro de 2,3,5- trifeniltetrazolio (1% TTC en tampón fosfato 0.2 M). Se calcularon los volúmenes de infarto tomando imágenes de las muestras de cada lado de las secciones coronales con una cámara digital (Nikon Coolpix 990), y se analizaron las imágenes utilizando ImageJ 1.33u (National Institutos of Health, Bethesda, MD). La imagen digitalizada se proyectó en un video monitor, habiendo ocultado las condiciones experimentales al observador. El perímetro del hemisferio contralateral se superpuso al hemisferio ipsilateral para excluir edema, y se delinearon los márgenes del infarto con un cursor. Se determinó el área de infarto, que se encontraba sin teñir, por medio del recuento de plxeles contenidos en las regiones delineadas. Se obtuvieron los volúmenes de infarto (en % de hemisferio infartado -VHI-) a partir de la integración de las áreas de infarto a lo largo de la extensión del infarto calculada como una proyección ortogonal. Todos los animales exhibieron infarto después del proceso de oclusión, el cual afectó sólo a la corteza cerebral
En el grupo de animales en los que no se ocluyó la arteria (SHAM) no se detectó ninguna lesión. La oclusión de la arteria cerebral media produjo un volumen de infarto, determinado a las 24 horas post-cirugía, de 21 ,42±1,48%, n=8 (Fig.1). En el grupo de animales que se sometieron a los dos ciclos de diálisis peritoneal con la solución obtenida a partir de la composición de la tabla 1, el volumen de Infarto fue significativamente menor (Fig.1), siendo de 12,1± 2,1%, n=12 (p<0,001).
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Ejemplo 2
Test para evaluar si la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una composición que contiene una concentración fisiológica de glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con bicarbonato reduce significativamente el volumen de infarto producido por la oclusión de la arteria cerebral media.
Se realizó un procedimiento similar al descrito en el ejemplo 1 , utilizando la composición que se especifica en la tabla 2 para elaborar la solución de diálisis estéril.
Figure imgf000012_0001
La determinación del volumen de infarto, utilizando bicarbonato como tampón de pH, reveló que no hubo diferencia en los volúmenes de infarto entre los animales control (21 ,42±1 ,48%%, n=8) y el grupo dializado (18,95 ± 3,01%, n=4; p>0.05, t-test) (Fig 2). Ejemplo 3
Test para evaluar si la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una composición hipertónica que contiene una concentración muy elevada de glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con fosfato reduce significativamente el volumen de infarto producido por la oclusión de la arteria cerebral media.
Se realizó un procedimiento similar al descrito en el ejemplo 1, utilizando la composición que se especifica en la tabla 3 para elaborar la solución de diálisis estéril.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26)
Figure imgf000013_0001
La determinación del volumen de infarto, utilizando una composición hipertónica con una concentración muy elevada de glucosa, reveló que no hubo diferencias en el volumen de infarto entre animales control (21 ,42±1 ,48%%, n=8) y el grupo de animales dializados (17,61 ±2, 12%, n=4; p>0,05 t-test) (Fig. 3).
Ejemplo 4
Test para evaluar si la diálisis perltoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una concentración isotónica que no contiene glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con fosfato reduce significativamente el volumen de infarto producido por la oclusión de la arteria cerebral media.
Se realizó un procedimiento similar al descrito en el ejemplo , utilizando la composición que se especifica en la tabla 4 para elaborar la solución de diálisis estéril.
Figure imgf000013_0002
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) La determinación del volumen de infarto, utilizando una composición isotónica sin glucosa, reveló que no hubo diferencias en el volumen de infarto entre animales control (21 ,42±1 ,48%%, n=8) y el grupo de animales dializados (21 ,37±2,76%, n=4; p>0,05, t-test) (Fig. 4).
Ejemplo 5
Test para evaluar si la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una composición isotónica que contiene una concentración reducida de glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con fosfato reduce significativamente el volumen de infarto producido por la oclusión de la arteria cerebral media.
Se realizó un procedimiento similar al descrito en el ejemplo 1 , utilizando la composición que se especifica en la tabla 5 para elaborar la solución de diálisis estéril.
Figure imgf000014_0001
La determinación del volumen de infarto, utilizando una composión isotónica con baja concentración de glucosa, reveló que hubo diferencias en el volumen de infarto entre animales control (21,42±1 ,48%%, n=8) y el grupo de animales dializados (15,19 ± 2,2%, n=4; p<0,05; t-test) (Fig. 5).
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Ejemplo 6
Test para evaluar si la oclusión de la arteria cerebral media produce un incremento de los niveles de glutamato plasmático y si la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir de una composición isotónica que contiene una concentración fisiológica de glucosa y que está tamponada a pH 6,5 con fosfato los reduce. Ratas Sprague-Dawley macho de peso 250-300g sanas fueron anestesiadas con Isofluorano 1.5% en una mezcla de aire atmosférico 80%/oxígeno 20%. Se insertó una cánula en la artería femoral para la toma de muestras sanguíneas. Y se procedió tal y como se ha descrito en el ejemplo 1. Las ratas se dividieron en tres grupos, un grupo en las cuales la ACM estaba expuesta pero no ocluida sirvieron como controles con intervención simulada (SHAM, n=5), otro grupo en los que se ocluyó la arteria cerebral media (MCAO, n=6) y otro grupo en los que se ocluyó la arteria cerebral media y se sometieron a dos ciclos de diálisis peritoneal (MCAO+DP, n=5) con la solución de diálisis elaborada a partir de la composición que está indicada en la Tabla 1. Después de la intervención quirúrgica y finalizada la toma de muestras sanguíneas, los animales fueron devueltos a sus jaulas y tuvieron libre acceso a la comida y a la bebida. A las 24 horas tras la intervención quirúrgica, las ratas fueron sacrificadas.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Las muestras de plasma se obtuvieron mediante centrifugación a 4°C de la muestra sanguínea (100μΙ) en presencia de tampón citrato al 3,15% (10μΙ) a 3.500 r.p.m. durante 5 minutos. El plasma, que constituye la capa superior, se retiró con una pipeta Pasteur y se depositó en un tubo almacenándose a -80°C hasta su procesamiento.
El glutamato plasmático se determinó mediante un ensayo enzimático descrito por Nicholls, DG et al. (J. Neurochem. 1987. 49: 50-57) midiendo el incremento de la fluorescencia producido al generarse NADPH en la reacción catalizada por la enzima glutamato deshidrogenasa (GDH) en presencia de NADP*.
Las variaciones de fluorescencia se registraron en fluorímetros Perkin-Elmer LS-50B y LS-55 a unas longitudes de onda de emisión y excitación de 340 nm y 460 nm, respectivamente. Las rendijas de excitación y emisión se fijaron en 3 nm y 9 nm.
Glutamato + NADP+ GDH -cetoglutárico + NADPH + H*
Las determinaciones se realizaron en medio HBM (NaCI140 mM, KCI 5 mM, NaHC03 5 mM, NaH2P04 1,2 mM, MgCI2 1 mM y HEPES 10 mM; pH 7,4) que contenía NADP+ 1 mM, CaCI2 1 ,33 mM y 50 unidades de glutamato deshidrogenasa. El ensayo se inició añadiendo 5 μΙ de plasma. Al final de cada determinación se añadió un patrón de 2 nmoles de glutamato para la cuantificación del contenido de la muestra.
La oclusión de la arteria cerebral media produjo un incremento de más de dos veces en la concentración plasmática de glutamato a las 4,5 horas de la oclusión, tal como se muestra en la Fig. 6. En las ratas del grupo SHAM, asf como en el grupo de ratas dializadas no se observó dicho incremento de glutamato plasmático {Fig. 6).
Los resultados mostrados en la Fig.6 confirman que el glutamato plasmático se eleva tras una isquemia cerebral y que la diálisis peritoneal con una solución de diálisis elaborada a partir la composición de la invención es un método muy eficaz para reducirlo.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26) Ejemplo 7
Test para evaluar el efecto de la presencia de glutamato en la solución de diálisis elaborada a partir de la composición de la invención en el volumen de infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO).
Ratas Sprague-Dawley macho de peso 250-300g sanas fueron anestesiadas con Isofluorano 1.5% en una mezcla de aire atmosférico 80%/oxlgeno 20%. Y se procedió tal y como se ha descrito en el ejemplo 1. Las ratas se dividieron en tres grupos, un grupo control en el que se ocluyó la arteria cerebral media (MCAO, n=6), un grupo en el que se ocluyó la arteria cerebral media y los animales se sometieron a dos ciclos de diálisis peritoneal con la solución de diálisis elaborada a partir de la composición que está indicada en la Tabla 1 a la que se añadió una concentración de glutamato de 200 μΓηοΙ/L (MCAO+DP 200μΜ; n=6), un tercer grupo en el que se ocluyó la arteria cerebral media y los animales se sometieron a dos ciclos de diálisis peritoneal con la solución de diálisis elaborada a partir de la composición que está indicada en la Tabla 1 a la que se añadió una concentración de glutamato de 400 μηηοΙ/L (MCAO+DP 400μΜ; n=4). A las 24 horas, las ratas fueron sacrificadas para determinar el volumen de infarto, según se ha explicado en el ejemplo 1. Cuando se realiza una diálisis peritoneal cabe esperar que se dialicen todas las sustancias que no están presentes en la solución de dializado. Por tanto, para verificar si la reducción del volumen de infarto se debia a la reducción de la concentración plasmática de glutamato y no a la de otra sustancia, en la composición de la invención se introdujo glutamato a dos concentraciones diferentes, 200 y 400 μΜ. Tal como se muestra en la Fig. 7, cuando el glutamato estaba presente en la composición a una concentración de 200 μΜ todavía se redujo de forma significativa el volumen de infarto con relación al encontrado en las ratas control (MCAO). Cuando en composición se aumentó la concentración de glutamato hasta 400 μΜ el volumen de infarto fue similar al de las ratas isquémicas control (24,40±0,91 %).
Según los resultados mostrados en la Fig. 7 cuando la solución de diálisis peritoneal contiene glutamato a una concentración de 200 μιτιοΙ/L disminuye su capacidad para reducir el volumen de infarto, y es totalmente ineficaz cuando la concentración de glutamato es de 400 μιηοΙ/L
HOJA DE REEMPLAZO (Regla26)

Claims

REIVINDICACIONES
1. - Uso de una composición isotónica y tamponada a un pH aceptable fisiológicamente en la elaboración de una solución de diálisis para el tratamiento de una enfermedad cerebrovascular mediante diálisis peritoneal.
2. -Uso según la reivindicación 1 en donde la composición comprende unas concentraciones de electrolitos de 110 a 150 mEq/L de ión sodio, de 0 a 5 mEq/L de ión potasio, de 0 a 2 mEq/L de ión magnesio, de 0 a 6 mEq de ión calcio y de 80 a 150 mEq/L de ión cloruro.
3. -Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el pH está entre 6 y 7,5 y se tampona mediante una mezcla de ácido láctico y fosfato.
A.- Uso según la reivindicación 3 en que la concentración de ácido láctico es de 0 a 3,5 mmol/L.
5. - Uso según la reivindicación 4 en que la concentración de fosfato es de 10 mmol/L.
6. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en que la composición contiene una concentración de glucosa entre 0,5 y 2,0 g/L.
7. - Uso según la reivindicación 6, en que la concentración de glucosa es de 0,75 g/L.
8. - Uso según la reivindicación 6, en que la concentración de glucosa es de 1 ,5 g/L.
9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en que la composición contiene una concentración de glutamato igual o inferior a 200 μΜ.
10. - Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en que la composición contiene dextrina.
11. -Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la enfermedad cerebrovascular es la isquemia cerebral.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26)
12.- Uso según la reivindicación 9, donde la isquemia cerebral es aguda o crónica y es una de las siguientes enfermedades: ataque isquémico transitorio, traumatismo craneoencefállco, ictus cerebral isquémico o ictus cerebral hemorrágico.
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HOJA DE REEMPLAZO (Regla26)
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10973251B1 (en) 2015-09-21 2021-04-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nutritional treatment for cancer
US11241407B2 (en) * 2017-12-11 2022-02-08 Filtricine, Inc. Compositions, methods, kits and systems for cancer treatment and metabolic intervention therapy

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102015015597A1 (de) 2015-12-04 2017-06-08 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Behandlung von Schlaganfall durch Hämofiltration

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004012762A2 (en) 2002-08-01 2004-02-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels
WO2007105203A2 (en) 2006-03-16 2007-09-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2386826C (en) * 1999-10-11 2010-04-20 Arduino Arduini Use of l-carnitine and its alkanoyl derivatives as osmotic agents in solutions for peritoneal dialysis
BRPI0409867A (pt) * 2003-05-01 2006-05-16 Innogene Kalbiotech Pte Ltd composição farmacêutica contendo lactato e usos da mesma
US20070161691A1 (en) * 2003-11-27 2007-07-12 Tokai University Modified-protein formation inhibitor
CN101164530B (zh) * 2006-10-18 2010-10-20 周方强 含稳定的丙酮酸钠的水溶液及其制法和用途
US20090304600A1 (en) * 2008-06-09 2009-12-10 Anupkumar Shetty Intradialytic administration of sodium thiosulfate

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004012762A2 (en) 2002-08-01 2004-02-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels
WO2007105203A2 (en) 2006-03-16 2007-09-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method and composition for protecting neuronal tissue from damage induced by elevated glutamate levels

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GINSBERG MD: "Neuroprotection for ischemic stroke: Past, present and future review", NEUROPHARMACOLOGY, vol. 55, 2008, pages 363 - 389, XP023785825, DOI: doi:10.1016/j.neuropharm.2007.12.007
HACKE ET AL., NEW ENG J MED., vol. 359, 2008, pages 1317 - 1329
NAGY D ET AL., CELL MOL NEUROBIOL., vol. 29, 2009, pages 827 - 35
NICHOLLS, DG ET AL., J. NEUROCHEM., vol. 49, 1987, pages 50 - 57
See also references of EP2759300A4
SOBRADO M ET AL., NEUROSCIENCE, vol. 118, 2003, pages 107 - 13
ZLOTNIK A ET AL., J NEUROSURG ANESTHESIOL., vol. 21, 2009, pages 235 - 41

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10973251B1 (en) 2015-09-21 2021-04-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nutritional treatment for cancer
US11241407B2 (en) * 2017-12-11 2022-02-08 Filtricine, Inc. Compositions, methods, kits and systems for cancer treatment and metabolic intervention therapy

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