WO2012175774A1 - Utilización de biocápsulas de levadura como agentes fermentativos en la segunda fermentación alcohólica en botella y su aplicación para la elaboración de vino espumoso y bebidas alcohólicas espumosas - Google Patents
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- WO2012175774A1 WO2012175774A1 PCT/ES2012/070452 ES2012070452W WO2012175774A1 WO 2012175774 A1 WO2012175774 A1 WO 2012175774A1 ES 2012070452 W ES2012070452 W ES 2012070452W WO 2012175774 A1 WO2012175774 A1 WO 2012175774A1
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- C12G2200/05—Use of particular microorganisms in the preparation of wine
Definitions
- the present invention falls within the framework of Industrial Microbiology, providing technical optimization and qualitative of an existing manufacturing process.
- the object of the invention is to cause the second fermentation in the bottle for the production of a sparkling alcoholic beverage, in particular for the production of sparkling wine, by the traditional method by means of a yeast system ( Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces bayanus ) co-immobilized naturally with a fungus of the species Penicillium chrysogenum .
- yeast system Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces bayanus
- the small spheres thus formed, biocapsules, present a series of technical advantages over existing immobilization systems and used for a similar purpose.
- the sparkling wine is made from a second alcoholic fermentation of a base wine to which sugar is added and a strain of yeast of the species S. cerevisiae or S. bayanus selected for this purpose.
- the fermentation of sparkling wine made by the traditional method or 'champenoise' is carried out inside commercially available 'champagne' bottles.
- the yeasts When the second fermentation is completed and after a period of aging established by the regulatory body of each country for this type of alcoholic beverages, the yeasts must be completely extracted from the medium where they have been fermented to avoid turbidity of the product before leaving for market. This same procedure can also be used to obtain other sparkling alcoholic drinks fermented in bottles.
- yeast cells are they find immobilized in a calcium alginate gel and concentrate on the Bottle neck quickly without shaking.
- yeast cells for production of sparkling wine are immobilized in alginate spheres and subsequently they cover with a layer of calcium alginate in order to make sure that no cells are released from the fixed assets.
- US5070019 describes a method of immobilization of yeasts in spheres of calcium alginate that improves the system proposed in EP0173915, where it is ensured that there is no calcium release to the environment that can cause precipitation crystalline
- Patent ES2204316 describes the procedure for obtaining a new immobilization procedure for yeasts based on a natural and spontaneous co-immobilization between a yeast of the Saccharomyces cerevisiae species and a filamentous fungus of the Penicillium chrysogenum species without the need for external or compound supports binding chemicals, using appropriate conditions to favor symbiotic binding between the two microorganisms.
- the present invention provides a method for carrying out the second alcoholic fermentation in a suitable container to contain a pressurized liquid, preferably a bottle, using this new system, yeast biocapsules co-immobilized naturally and spontaneously with a filamentous fungus of the species Penicillium chrysogenum , to obtain a sparkling alcoholic beverage, in particular sparkling wine, including champagnes and champagnes.
- a pressurized liquid preferably a bottle
- yeast biocapsules co-immobilized naturally and spontaneously with a filamentous fungus of the species Penicillium chrysogenum , to obtain a sparkling alcoholic beverage, in particular sparkling wine, including champagnes and champagnes.
- This procedure allows, once the fermentation is complete, to remove the yeast used easily and efficiently.
- the procedure avoids the use of external supports that can affect the catalytic activity of the yeast and / or transfer substances outside the product to be prepared.
- the present invention relates to a process of obtaining a sparkling alcoholic beverage, characterized in that said method comprises a fermentation stage in a suitable container to contain a liquid under pressure using biocapsules comprising a yeast immobilized in a filamentous fungus.
- the novelty of the present invention resides in apply a system of foaming alcoholic beverage cellular immobilization that uses an organism as an immobilization substrate alive (the mentioned filamentous fungus) instead of a physical-chemical support artificial that can yield substances outside the product you want to elaborate.
- the present invention takes place in a suitable container to contain a liquid to pressure that allows the elimination of yeast and fungus biocapsules sedimented filamentous.
- the suitable container used in The process of the present invention is a bottle, more preferably a 'champagne' type bottle.
- the procedure of the present invention makes it possible to suppress the stage of removal and thinning of the bottles in the manufacture of sparkling beverages, since fermentation yeast is capable of sedimentation in the neck of the bottle by gravity before the process of disgust. Sedimentation without stirring before disgorgement allows savings considerable labor and time, since the sedimentation of yeasts immobilized in biocapsules is fast.
- the present invention relates to a method of obtaining a sparkling wine, characterized in that said process comprises a fermentation stage in a suitable container for containing a pressurized liquid using biocapsules comprising a yeast immobilized in a filamentous fungus.
- the suitable container used in the process of The present invention is a bottle, more preferably a type bottle 'champagne'
- the yeast comprised in the biocapsules used in the process of the present invention may be a yeast of the genus Saccharomyces, preferably the yeast comprised in the biocapsules is chosen from Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces bayanus.
- the filamentous fungus comprised in the biocapsules used in the process of the present invention may be a fungus of the genus Penicillium, preferably the filamentous fungus comprised in the biocapsules is Penicillium chrysogenum.
- the culture medium used for spontaneous co-immobilization between the filamentous fungus and the yeast is not usable by the yeast, according to another aspect of the present invention, it is preferred that the fungus co-immobilize a minimum 1 x 10 6 yeast cells per ml of alcoholic base drink in the case of obtaining sparkling wine so that the necessary biocapsules are formed. In the particular case of using 750 ml bottles, this minimum number of yeast cells corresponds to 7.5 x 10 8 cells per bottle.
- the fungus co-immobilizes a maximum amount of 2 x 10 6 yeast cells per ml of base wine so that the necessary biocapsules are formed. In the particular case of using 750 ml bottles, this minimum number of yeast cells corresponds to 1.5 x 10 9 cells per bottle.
- Biocapsules once formed, can be collected in a 0.2 mm sieve and wash thoroughly with preferably cold water (between 6oC and 12oC). Water used for washing is partially recommended demineralized or deionized and sterile. The resulting biocapsules are can be submerged in distilled and sterile water at a temperature of 4 ° C for 4 weeks or even more without losing your activity or they can be immediately used for the production of sparkling wine.
- the process according to the present invention can perform the inoculum of the biocapsules in each container, preferably in each bottle, which contains the wine and sugar to ferment by means of a funnel metal.
- Yeasts immobilized in biocapsules can be different size depending on the weather and especially the stirring speed orbital to which your training has been done.
- These biocapsules with larger size may present cracks on the surface due to a greater effect of the pressure inside the bottles due to its greater surface area of exposure, leading to the release of part of the yeast cells in the middle.
- the inventors left the biocapsules more time in the training medium, preferably 14 days. This way you achieves a greater development of hyphae of the fungus, impacting on a greater consistency and resistance of the biocapsule wall.
- biocapsules approximately 0.45 to 0.55 cm in diameter by applying a 150 rpm speed for a time interval between 7 and 14 days.
- the number of biocapsules inoculated in each container depends on the diameter they have acquired. So, according to another preferred aspect of the present invention, the number of biocapsules per 750 ml bottle according to the description of the process of the present invention corresponds to: (a) 5 biocapsules / 750 ml if they have a diameter greater than 0.55 cm; (b) 20 ⁇ 2 biocapsules / 750 ml if the diameter is 0.45-0.55 cm and (c) of 180 to 200 biocapsules / 750 ml if the spheres have a diameter smaller than 0.45 cm
- the biocapsules used in the procedure described in the This patent application has a diameter with a maximum dispersion of 10 mm In this way all the biocapsules of the container, and preferably of the same lot, settle at the same speed in the operation of 'putting in tip 'or clarification.
- the process of the invention has the advantage that no foreign substance belonging to the immobilization support is released to the medium, that is, to the frothy alcoholic beverage produced. On the contrary it happens with the use of immobilized yeasts in calcium alginate beads where it has been detected a release of calcium to the medium, as demonstrated in the studies comparatives detailed in the examples of this invention.
- the invention described herein offers the advantage of rapid settling by severity of yeasts immobilized in biocapsules: less than two minutes, saving the removal phase. This allows considerable economic savings, both in time and in labor.
- the process according to this invention produces a Yeast immobilized in a simple way, which can be used for fermentation of sparkling alcoholic beverages, in particular sparkling wine, during which no clouding of the environment due to precipitations of crystals of tartrate or calcium malate or releases of yeast cells from their immobilization site.
- the resulting foamy beverage has a turbidity value less than 0.7 NTU, equivalent to a transparent sparkling wine, ready for the final stages of disgorgement and labeling, before its release to the market.
- the larger biocapsules settle more quickly by having a higher density. However, they have a lower surface / volume of nutrient exchange, which translates into a lower fermentative kinetics with respect to smaller biocapsules. In However, smaller biocapsules have a larger surface / volume of contact and, consequently, a greater fermentative kinetics.
- the biocapsules used in the process of the present invention have a diameter of less than 10 mm, preferably between 2 and 3 mm.
- the procedure described in this patent application is characterized in that the fermentation stage comprises the addition of yeast and fungus biocapsules filamentous to a fermentation medium comprising at least wine and sugar.
- the product obtained by the process of the present invention is attached to a designation of origin, the characteristics of the base wine, added sugar and characteristics of the final product, must comply with the provisions of said regulation.
- the examples shown in the present invention have been fulfilled the provisions of the regulation of the Cava Designation of Origin and its Regulatory Council (Order 14.11.91 (BOE 20.11.91) and modified by orders from 09.01.92 (BOE 16.02.02), 08.07.92 (BOE 21.07.92), 06.05.93 (BOE 19.05.93), 15.09.95 (BOE 23.09.95), 06.02.98 (BOE 12.02.98) and 23.02.07 (BOE 27.02.07).
- the stage of fermentation comprised in the process of the present invention can take place in a temperature range between 10 oC and 16 oC.
- the fermentation stage included in the process herein invention can take place in a period of 2 months, although the time of aging of the product made before the disgorgement phase is, by regulation, of a minimum of 9 months.
- the fermentation stage included in the process herein invention may comprise sucrose as a source of sugar, preferably in a concentration between 20 and 25 g / l.
- the fermentation stage included in the process herein invention may comprise a base wine with an alcoholic strength between 9.5% vol. and 11.5% vol.
- the fermentation stage included in the process herein invention gives rise to a product with an alcoholic strength acquired between 10.8% vol. and 12.8% vol.
- reaction medium of the fermentation stage comprised in the The process of the present invention is characterized by a pH between 2.8 and 3.3.
- the reaction medium of the fermentation stage comprised in the The process of the present invention is characterized by total acidity minimum in tartaric acid of 5.5 g / l.
- Figure 1 Evolution of the rate of production of CO 2 by immobilized yeast cells in calcium alginate beads, biocapsules and free cells (control) obtained in example 1.
- Figure 2 Evolution of the rate of production of CO 2 by immobilized yeast cells in calcium alginate beads, biocapsules and free cells (control) obtained in Example 2.
- Figure 3 Evolution of the rate of production of CO 2 by the immobilized yeast cells in calcium alginate beads, biocapsules and free cells (control) obtained in example 3.
- Figure 4 Evolution of the rate of production of CO 2 by yeast cells immobilized in biocapsules of different sizes obtained in example 4.
- Figure 5 Evolution of the rate of production of CO 2 by immobilized yeast cells in calcium alginate beads, biocapsules and free cells (control) at two fermentation temperatures obtained in example 5.
- Example 1 Elaboration of sparkling wine 'cava': lot 1 .
- the yeast used was the commercial strain Saccharomyces cerevisiae QA23 marketed by Lallemand BIO.
- the base wine used presented the following characteristics: wine of the Denomination of Origin Cava, mixture of Macabeo (28.3%), Xarel ⁇ lo (29.2%), Parellada (25.8%) and Chardonnay varieties (16.7%); residual sugar: 0.3 g / L; alcoholic strength: 11% vol; pH: 3.06; acidity Total: 5.8 g / L (expressed in g / L of tartaric acid).
- the inoculum concentration of each of the formats was calculated for each of the bottles, at the beginning of the second fermentation, there was a concentration of 1x10 6 cells / ml.
- the sedimentation rate was checked once Once the fermentation is over and after a bottle aging period of one minimum of 9 months, regulatory in the Cava Designation of Origin.
- the yeasts included in alginate spheres had a very sedimentation Fast: between 5 and 15 seconds, depending on the bottle. Those included in biocapsules they were a little slower but they did it in less than 2 minutes compared to the sedimentation of several days of the bottles made with cells free.
- yeasts immobilized in biocapsules makes it possible to dispense with the Removal or thinning stage, being able to perform the disgorgement stage immediately.
- Example 2 Elaboration of sparkling wine 'cava': lot 2 .
- Example 1 was reproduced, but in this case the strain Sacccharomyces cerevisiae P29 (CECT 11770), isolated in the Penedés Designation of Origin, was used.
- Figure 2 shows the evolution of the pressure at over time
- the inoculum formats of yeasts in cells free and immobilized in biocapsules presented kinetics more or less parallel. Fermentation start-up with immobilized calcium alginate It was slower. The total duration of the fermentation, detected from Pressure stabilization time was 27 days for biocapsules, 35 for free cells and 63 days for cavas made with Yeasts included in calcium alginate beads.
- Example 3 Elaboration of sparkling wine 'cava': lot 3 .
- Figure 3 shows the evolution of the pressure in all three test cases.
- the two inoculum formats with immobilized yeasts presented a period of adaptation to the upper environment (between 11 and 14 days) to which they presented free cells (7 days).
- the second fermentation ended at 43 days for case of free yeasts and was delayed up to 52 days for the case of yeasts immobilized in alginate and biocapsules.
- Example 4 Elaboration of sparkling wine 'cava' with biocapsules of different sizes.
- Biocapsules obtained from S. cerevisae strain P29 and Penicillium chrysogenum were used .
- the speed of orbital agitation, according to the procedure for obtaining biocapsules, was varied to achieve spheres of different sizes.
- the base wine for making cava it was the same as in example 1 and 2, to which 22 g / L of sugar was added.
- the number of biocapsules inoculated in each bottle depended on its diameter: (a) 5 biocapsules / 750 ml if they had a diameter greater than 0.5 cm; (b) 20 ⁇ 2 biocapsules / 750 ml if the diameter is approximately 0.5 cm, and (c) 180 to 200 biocapsules / 750 ml if the spheres They have a diameter of less than 0.5 cm.
- the second fermentation took place at a temperature stable at 14 ° C.
- Figure 4 shows the speed of fermentation of some representative bottles of these lots. In it she you can check that the ones that had the best fermentation kinetics were the corresponding to the inoculums with biocapsules less than 0.5 cm in diameter, secondly the bottle with spheres of approximately 0.5 cm in diameter and Finally, the one that was inoculated with larger biocapsules. This behavior can be explained by the surface / volume ratio and the number of spheres in each bottle: the bottles that contained more biocapsules although They were smaller in size and had a larger contact surface (and therefore, for the exchange of nutrients) with the medium to be fermented.
- the present invention refers to different speeds of taking of foam, or of second fermentation, depending of the applied size of immobilized yeasts in biocapsules.
- Example 5 Elaboration of sparkling wine 'cava' with biocapsules at two fermentation temperatures.
- Example 2 S. cerevisiae strain P29, base wine described in Example 1 and three formats yeast inoculation also described in Example 1.
- variable to experience was the influence that could have a second fermentation temperature considered limit: 10 ° C, against a standard temperature: 14oC.
- Figure 5 shows the kinetics fermentative of the 6 cases studied. In both temperatures, yeasts immobilized in biocapsules and free yeasts had a behavior parallel, evolving at the same speed.
- the yeast inoculums in Calcium alginate pearl format presented a delay both at the beginning as at the end of the fermentation with respect to the other two cases both at 10 ° C as at 14 ° C.
- the present invention shows that wine yeasts immobilized in biocapsules can perfectly ferment temperature limits, behaving in the same way as inoculation Traditional yeast in free form.
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Abstract
Utilización de levaduras inmovilizadas en biocápsulas y su aplicación en la producción de vino espumoso elaborado a partir de la segunda fermentación alcohólica en botella realizada por estas levaduras. La invención comprende la obtención de las biocápsulas en una concentración apropiada y su aplicación como biocatalizador en un proceso fermentativo industrial particular.
Description
SECTOR TÉCNICO
La presente invención se encuadra dentro del marco de
la Microbiología Industrial, proporcionando una optimización técnica y
cualitativa de un proceso de elaboración ya existente.
De forma más concreta, el objeto de la invención
consiste en provocar la segunda fermentación en botella para la elaboración de
una bebida alcohólica espumosa, en particular para la elaboración de vino
espumoso, por el método tradicional mediante un sistema de levaduras
(Saccharomyces cerevisiae o Saccharomyces bayanus)
co-inmovilizadas de manera natural con un hongo de la especie Penicillium
chrysogenum. Las pequeñas esferas así formadas, biocápsulas, presentan una
serie de ventajas técnicas respecto a los sistemas de inmovilización existentes
y utilizados para un fin similar.
ESTADO DE LA TÉCNICA
El vino espumoso se elabora a partir de una segunda
fermentación alcohólica de un vino base al cual se le añade azúcar y una cepa
de levadura de la especie S. cerevisiae o S. bayanus seleccionada
para este fin. La fermentación del vino espumoso elaborado por el método
tradicional o 'champenoise' se realiza en el interior de botellas tipo
'champagne' disponibles comercialmente. Cuando la segunda fermentación se
completa y después de un período de crianza que establece el organismo
regulador de cada país para este tipo de bebidas alcohólicas, las levaduras han
de extraerse completamente del medio donde han fermentado para evitar la
turbidez del producto antes de su salida al mercado. Este mismo procedimiento
también se puede utilizar para obtener otras bebidas alcohólicas espumosas
fermentadas en botellas.
La eliminación de la levadura cuando la crianza ha
terminado es complicada. Las botellas se colocan en posición inclinada en
pupitres y se remueven repetitivamente durante un periodo sustancial de tiempo
hasta que se consigue que los sedimentos de las levaduras se depositen en el
cuello de la botella. Posteriormente en la etapa de degüelle, el cuello se
congela, la botella se abre y los sedimentos de las levaduras congelados salen
expulsados por la presión adquirida en el interior del recipiente (6 - 7
atmósferas). El removido es una operación larga que necesita una mano de obra
importante para cada botella ya que tiene que ser manipulada durante muchos
días (alrededor de 24 días).
Aunque se han diseñado sistemas automatizados de
removido como los gyropalettesTM, esta operación conlleva la
ocupación de un espacio físico importante en la bodega: de un 10-15 % en el
caso de la clarificación en pupitres y de un 3-5 % en el caso del uso de un
sistema automatizado.
Según la patente FR2432045 los procesos mencionados
anteriormente pueden simplificarse. En FR2432045 las células de levaduras se
encuentran inmovilizadas en un gel de alginato cálcico y se concentran en el
cuello de la botella rápidamente sin necesidad de agitación. Según la patente
ES8609469 (equivalente a EP0173915) las células de levadura para la producción
de vino espumoso se inmovilizan en esferas de alginato y posteriormente se
recubren con una capa de alginato cálcico con la finalidad de asegurarse de que
no se liberen células desde el inmovilizado. Finalmente, según la patente
US5070019 se describe un método de inmovilización de levaduras en esferas de
alginato cálcico que mejora el sistema propuesto en EP0173915, donde se asegura
que no existe liberación de calcio al medio que pueda provocar precipitaciones
cristalinas.
Los sistemas de inmovilización de levaduras descritos
anteriormente se han obtenido mediante soportes artificiales. La unión no
natural a estos soportes puede afectar a la actividad catalítica de la
levadura. La patente ES2204316 describe el procedimiento de obtención de un
nuevo procedimiento de inmovilización para levaduras basado en una
co-inmovilización natural y espontánea entre una levadura de la especie
Saccharomyces cerevisiae y un hongo filamentoso de la especie
Penicillium chrysogenum sin la necesidad de soportes externos o
compuestos químicos de unión, utilizando condiciones apropiadas para favorecer
la unión simbiótica entre los dos microorganismos.
La presente invención proporciona un procedimiento
para realizar la segunda fermentación alcohólica en un recipiente adecuado para
contener un líquido a presión, preferentemente una botella, utilizando este
nuevo sistema, biocápsulas de levadura co-inmovilizadas de forma natural y
espontánea con un hongo filamentoso de la especie Penicillium
chrysogenum, para obtener una bebida alcohólica espumosa, en particular
vino espumoso, incluidos los cavas y champagnes. Este procedimiento permite,
una vez completada la fermentación, retirar la levadura utilizada de forma
fácil y eficaz. Así mismo, el procedimiento evita la utilización de soportes
externos que puedan afectar la actividad catalítica de la levadura y/o ceder
sustancias ajenas al producto que se desea elaborar.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a un procedimiento
de obtención de una bebida alcohólica espumosa, caracterizado porque dicho
procedimiento comprende una etapa de fermentación en un recipiente adecuado
para contener un líquido a presión utilizando biocápsulas que comprenden una
levadura inmovilizada en un hongo filamentoso.
La novedad de la presente invención reside en
aplicar para la elaboración de una bebida alcohólica espumosa un sistema de
inmovilización celular que utiliza como sustrato de inmovilización un organismo
vivo (el citado hongo filamentoso) en lugar de un soporte físico-químico
artificial que puede ceder sustancias ajenas al producto que se quiere
elaborar.
De acuerdo con un aspecto preferente, la presente
invención tiene lugar en un recipiente adecuado para contener un líquido a
presión que permite la eliminación de las biocápsulas de levadura y hongo
filamentoso sedimentadas. Preferentemente, el recipiente adecuado utilizado en
el procedimiento de la presente invención es una botella, más preferentemente
una botella tipo 'champagne'.
En particular, el procedimiento de la presente
invención permite suprimir la etapa de removido y aclareo de las botellas en la
fabricación de bebidas espumosas, ya que la levadura de fermentación es capaz
de sedimentar en el cuello de la botella por gravedad antes del proceso de
degüelle. La sedimentación sin removido antes del degüelle permite un ahorro
considerable de mano de obra y tiempo, puesto que la sedimentación de levaduras
inmovilizadas en biocápsulas es rápida.
De acuerdo con un aspecto preferente, la presente
invención se refiere a un procedimiento de obtención de un vino espumoso,
caracterizado porque dicho procedimiento comprende una etapa de fermentación en
un recipiente adecuado para contener un líquido a presión utilizando
biocápsulas que comprenden una levadura inmovilizada en un hongo filamentoso.
Preferentemente, el recipiente adecuado utilizado en el procedimiento de la
presente invención es una botella, más preferentemente una botella tipo
'champagne'.
De acuerdo con otro aspecto preferente adicional, la
levadura comprendida en las biocápsulas utilizadas en el procedimiento de la
presente invención puede ser una levadura del género Saccharomyces,
preferentemente la levadura comprendida en las biocápsulas se elige entre
Saccharomyces cerevisiae y Saccharomyces bayanus.
De acuerdo con otro aspecto preferente adicional, el
hongo filamentoso comprendido en las biocápsulas utilizadas en el procedimiento
de la presente invención puede ser un hongo del género Penicillium,
preferentemente el hongo filamentoso comprendido en las biocápsulas es
Penicillium chrysogenum.
El procedimiento de obtención de biocápsulas de
levadura se ha descrito en la patente ES2204316. Sin embargo, la aplicación de
las biocápsulas de levadura y hongo filamentoso al procedimiento de la presente
invención hace necesario controlar el número de levaduras que se van a
inmovilizar con el fin de asegurar un inóculo suficiente para cada recipiente
de bebida alcohólica espumosa, preferentemente vino espumoso, que se va a
producir; es decir, asegurar una conversión completa del azúcar en
CO2 adquiriendo el recipiente en su interior una presión de 6-7
atmósferas.
Debido a que el medio de cultivo que se usa para la
co-inmovilización espontánea entre el hongo filamentoso y la levadura no es
utilizable por la levadura, de acuerdo con otro aspecto de la presente
invención, se prefiere que el hongo co-inmovilice un mínimo de 1 x
106 células de levadura por ml de bebida alcohólica base en el caso
de obtención de vino espumoso para que se formen las biocápsulas necesarias. En
el caso particular de utilizar botellas de 750 ml, este número mínimo de
células de levadura corresponde a 7,5 x 108 células por botella.
De acuerdo con otro aspecto preferente de la
invención, el hongo co-inmoviliza una cantidad máxima de 2 x 106
células de levadura por ml de vino base para que se formen las biocápsulas
necesarias. En el caso particular de utilizar botellas de 750 ml, este número
mínimo de células de levadura corresponde a 1,5 x 109 células por
botella.
Las biocápsulas, una vez formadas, pueden recogerse
en un tamiz de 0,2 mm y lavarse abundantemente con agua preferiblemente fría
(entre 6ºC y 12ºC). El agua empleada para el lavado se recomienda parcialmente
desmineralizada o desionizada y estéril. Las biocápsulas así resultantes se
pueden guardar sumergidas en agua destilada y estéril a una temperatura de 4ºC
durante 4 semanas o incluso más sin perder su actividad o pueden ser
inmediatamente usadas para la elaboración de vino espumoso.
Para proceder a la elaboración del vino espumoso, los
materiales necesarios se encuentran descritos en una amplia bibliografía (ver
ejemplo en: Tratado de enología. J. Hidalgo Togores. Tomo II, pp.:
945-994. Ediciones Mundi-Prensa, Madrid (2003).
El procedimiento según la presente invención puede
realizar el inóculo de las biocápsulas en cada recipiente, preferentemente en
cada botella, que contiene el vino y azúcar a fermentar mediante un embudo
metálico.
Las levaduras inmovilizadas en biocápsulas pueden ser
de distinto tamaño según el tiempo y sobre todo la velocidad de agitación
orbital a la cual se haya realizado su formación.
De acuerdo con otro aspecto preferente, se consiguen
biocápsulas de tamaño superior a 0,55 cm de diámetro a una velocidad de
agitación de 100 rpm, preferentemente manteniéndolas en agitación durante un
tiempo mínimo de 7 días y un tiempo máximo de 14 días. Estas biocápsulas con
tamaño mayor pueden presentar fisuras en la superficie debido a un mayor efecto
de la presión en el interior en las botellas debido a su mayor superficie de
exposición, dando lugar a la liberación de parte de las células de levadura en
el medio. Para solucionar este problema los inventores dejaron las biocápsulas
más tiempo en el medio de formación, preferentemente 14 días. De esta forma se
consigue un mayor desarrollo de las hifas del hongo, repercutiendo en una mayor
consistencia y resistencia de la pared de las biocápsulas.
De acuerdo con otro aspecto preferente, se consiguen
biocápsulas de aproximadamente entre 0,45 y 0,55 cm de diámetro aplicando una
velocidad de 150 rpm durante un intervalo de tiempo entre 7 y 14 días.
De acuerdo con otro aspecto preferente, se consiguen
biocápsulas de tamaño inferior a 0,45 cm de diámetro con una velocidad de
agitación orbital de 200 rpm durante un intervalo de tiempo entre 7 y 14
días.
Aumentar el tiempo de formación de las biocápsulas
entre 10 y 14 días antes de su inóculo en botella mejora la compactación del
entramado de hifas del hongo filamentoso con lo que las esferas de biocápsulas
adquirirán un aspecto liso, evitando la liberación de hifas al medio, es decir
al producto que se desea.
El número de biocápsulas inoculadas en cada
recipiente depende del diámetro que hayan adquirido. Así, de acuerdo con otro
aspecto preferente de la presente invención, el número de biocápsulas por
botella de 750 ml según la descripción del proceso de la presente invención
corresponde a: (a) 5 biocápsulas/750 ml si presentan un diámetro superior a
0,55 cm; (b) 20 ± 2 biocápsulas/750 ml si el diámetro es 0,45-0,55 cm y (c) de
180 a 200 biocápsulas/750 ml si las esferas presentan un diámetro inferior a
0,45 cm.
De acuerdo con otro aspecto preferente de la presente
invención, las biocápsulas utilizadas en el procedimiento descrito en la
presente solicitud de patente tienen un diámetro con una dispersión máxima de
10 mm. De esta forma todas las biocápsulas del recipiente, y preferentemente
del mismo lote, sedimenten a la misma velocidad en la operación de 'puesta en
punta' o clarificación.
Las biocápsulas a lo largo del tiempo resisten el
incremento de presión que se produce en el transcurso de la segunda
fermentación en el interior del recipiente adecuado para contener líquidos a
presión para la toma de espuma. Tanto las biocápsulas con un diámetro igual o
inferior a 0,55 cm, como aquellas con un tamaño superior a 0,55 cm que
permanecen 14 días en el medio de formación, no sufren ningún tipo de
deformación ni rotura. Tampoco existe una liberación de células de levadura al
medio ya que por el efecto de la presión quedan confinadas dentro de su soporte
de inmovilización.
Si la fermentación tuviera lugar en depósitos
abiertos, sin presión, las biocápsulas liberarían las células de levadura al
exterior y se enturbiaría la matriz. Por ese motivo, el procedimiento de la
presente invención tiene lugar en un sistema cerrado como, por ejemplo, son las
botellas.
El proceso de la invención presenta la ventaja de que
ninguna sustancia ajena perteneciente al soporte de inmovilización es liberada
al medio, o sea, a la bebida alcohólica espumosa producida. Al contrario ocurre
con el uso de levaduras inmovilizadas en perlas de alginato cálcico donde se ha
detectado una liberación de calcio al medio, como se demuestra en los estudios
comparativos detallados en los ejemplos de esta invención.
Una vez terminada la fermentación y justo antes de la
fase de degüelle, las botellas se colocan en posición vertical boca abajo. La
invención aquí descrita ofrece la ventaja de una rápida sedimentación por
gravedad de las levaduras inmovilizadas en biocápsulas: menos de dos minutos,
ahorrándose la fase de removido. Ello permite un ahorro económico considerable,
tanto en tiempo como en mano de obra.
El proceso de acuerdo con esta invención produce un
inmovilizado de levadura de una manera simple, que puede utilizarse para la
fermentación de bebidas alcohólicas espumosas, en particular vino espumoso,
durante la cual no se producen enturbiamientos del medio debidos a
precipitaciones de cristales de tartrato o malato de calcio o liberaciones de
las células de levaduras de su emplazamiento de inmovilización. De esta manera,
se asegura que la bebida espumosa resultante presente un valor de turbidez
inferior a los 0,7 NTU, equivalente a un vino espumoso transparente, listo para
las etapas finales de degüelle y etiquetaje, antes de su salida al mercado.
Las biocápsulas de mayor tamaño sedimentan más
rápidamente por tener una mayor densidad. Sin embargo, presentan una menor
superficie/volumen de intercambio de nutrientes, lo que se traduce en una
cinética fermentativa menor respecto a las biocápsulas de menor tamaño. En
cambio, las biocápsulas de menor tamaño presentan una mayor superficie/volumen
de contacto y, en consecuencia, una mayor cinética fermentativa.
De acuerdo con otro modo de realización preferente,
las biocápsulas utilizadas en el procedimiento de la presente invención tienen
un diámetro inferior a 10 mm, preferentemente entre 2 y 3 mm.
De acuerdo con otro aspecto preferente, el
procedimiento descrito en esta solicitud de patente se caracteriza porque la
etapa de fermentación comprende la adición de biocápsulas de levadura y hongo
filamentoso a un medio de fermentación que comprende al menos vino y
azúcar.
De acuerdo con otro aspecto preferente, el producto
obtenido por el procedimiento de la presente invención se adscribe a una
denominación de origen, las características del vino base, azúcar añadido y
características del producto final, deberán cumplir con lo establecido en dicho
reglamento. En los ejemplos mostrados en la presente invención se han cumplido
las disposiciones del reglamento de la Denominación de Origen Cava y de su
Consejo Regulador (Orden 14.11.91 (BOE 20.11.91) y modificado mediante órdenes
de 09.01.92 (BOE 16.02.02), 08.07.92 (BOE 21.07.92), 06.05.93 (BOE 19.05.93),
15.09.95 (BOE 23.09.95), 06.02.98 (BOE 12.02.98) y 23.02.07 (BOE 27.02.07).
De acuerdo con otro aspecto preferente, la etapa de
fermentación comprendida en el procedimiento de la presente invención puede
tener lugar en un intervalo de temperatura de entre 10 ºC y 16 ºC.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
la etapa de fermentación comprendida en el procedimiento de la presente
invención puede tener lugar en un periodo de 2 meses, aunque el tiempo de
crianza del producto elaborado antes de la fase de degüelle es, por reglamento,
de un mínimo de 9 meses.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
la etapa de fermentación comprendida en el procedimiento de la presente
invención puede comprender sacarosa como fuente de azúcar, preferentemente en
una concentración entre 20 y 25 g/l.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
la etapa de fermentación comprendida en el procedimiento de la presente
invención puede comprender un vino base con un grado alcohólico entre 9,5 %
vol. y 11,5 % vol.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
la etapa de fermentación comprendida en el procedimiento de la presente
invención da lugar a un producto con un grado alcohólico adquirido entre 10,8 %
vol. y 12,8 % vol.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
el medio de reacción de la etapa de fermentación comprendida en el
procedimiento de la presente invención se caracteriza por un pH entre 2,8 y
3,3.
De acuerdo con otra realización preferente adicional,
el medio de reacción de la etapa de fermentación comprendida en el
procedimiento de la presente invención se caracteriza por una acidez total
mínima en ácido tartárico de 5,5 g/l.
Breve descripción de las figuras
Figura 1: Evolución de la velocidad de producción de
CO2 por las células de levadura inmovilizadas en perlas de alginato
cálcico, biocápsulas y células libres (testigo) obtenidas en el ejemplo 1.
Figura 2: Evolución de la velocidad de producción de
CO2 por las células de levadura inmovilizadas en perlas de alginato
cálcico, biocápsulas y células libres (testigo) obtenidas en el ejemplo 2.
Figura 3: Evolución de la velocidad de producción de
CO2 por las células de levadura inmovilizadas en perlas de alginato
cálcico, biocápsulas y células libres (testigo) obtenidas en el ejemplo 3.
Figura 4: Evolución de la velocidad de producción de
CO2 por las células de levadura inmovilizadas en biocápsulas de
diferente tamaño obtenidas en el ejemplo 4.
Figura 5: Evolución de la velocidad de producción de
CO2 por las células de levadura inmovilizadas en perlas de alginato
cálcico, biocápsulas y células libres (testigo) a dos temperaturas de
fermentación obtenidas en el ejemplo 5.
EJEMPLOS
La presente invención se ilustra adicionalmente
mediante los siguientes ejemplos, los cuales no deben considerarse, en
absoluto, como limitantes del alcance de la invención.
Ejemplo 1:Elaboración de vino espumoso
'cava': lote 1.
La levadura utilizada fue la cepa comercial
Saccharomyces cerevisiae QA23 comercializada por Lallemand BIO.
El vino base utilizado presentó las siguientes
características: vino de la Denominación de Origen Cava, mezcla de las
variedades Macabeo (28,3%), Xarel·lo (29,2%), Parellada (25,8%) y Chardonnay
(16,7%); azúcar residual: 0,3 g/L; grado alcohólico: 11 % vol; pH: 3,06; acidez
total: 5,8 g/L (expresados en g/L de ácido tartárico).
Al vino base se le adicionó 22 g/l de azúcar.
Para la segunda fermentación, se utilizaron tres
formatos de levadura:
- (1) QA23 en forma de células libres.
- (2) QA23 inmovilizadas en alginato cálcico, preparado comercial con el nombre de Proelif. Se adicionaron 1,2 g/botella.
- (3) QA23 inmovilizadas en forma de biocápsulas, según lo explicado en la presente invención. El diámetro de las esferas utilizadas fue de entre 2 y 4 mm.
La concentración de los inóculos de cada uno de los
formatos se calculó para que en cada una de las botellas, al inicio de la
segunda fermentación, existiera una concentración de 1x106
células/ml.
Las botellas se dispusieron en posición horizontal y
la segunda fermentación tuvo lugar en una cava a una temperatura de 16ºC. Se
siguió la evolución de la presión de CO2 a lo largo del tiempo,
cuyos resultados se muestran en la figura 1 adjunta.
Al comparar el efecto de la inmovilización sobre la
cinética de fermentación, equivalente a la velocidad de producción de
CO2 por las células de levaduras inmovilizadas y libres, se pudo
comprobar que en el caso de las levaduras libres e inmovilizadas en biocápsulas
el comportamiento fue paralelo, observando un incremento de la presión a partir
del día 6. Sin embargo, las levaduras inmovilizadas en perlas de alginato
cálcico fueron más lentas en fermentar: se observó un incremento de la presión
a partir del día 29. El retraso observado puede deberse a un período de
adaptación más largo al medio de fermentación o a fenómenos de difusión. La
duración del proceso en el inóculo con células libres y en los inmovilizados en
biocápsulas fue de unos 37 días, mientras que en alginato cálcico tardó 53
días.
La velocidad de sedimentación se comprobó una vez
terminada la fermentación y transcurrido un periodo de crianza en botella de un
mínimo de 9 meses, reglamentarios en la Denominación de Origen Cava. Las
levaduras incluidas en esferas de alginato tuvieron una sedimentación muy
rápida: entre 5 y 15 segundos, según la botella. Las incluidas en biocápsulas
fueron un poco más lentas pero lo hicieron en menos de 2 minutos en comparación
a la sedimentación de varios días de las botellas elaboradas con células
libres. Así pues, según el ejemplo descrito sobre esta invención se demuestra
que el uso de levaduras inmovilizadas en biocápsulas permite prescindir de la
etapa de removido o aclareo, pudiendo efectuar la etapa de degüelle
inmediatamente.
Los datos analíticos más representativos de los cavas
una vez acabada la segunda fermentación, transcurridos 11 meses desde su inicio
y una vez realizado el degüelle son los que se expresan en la Tabla 1.
Tabla 1. Análisis de los cavas del ejemplo 1
CEPA | FORMATO | Azúcar (g/L) | Grado alcohólico (% vol) | pH | Acidez total (g/L) | Acidez volátil (g/L) | Ca (mg/L) |
QA23 | Libres | 0,4 | 12,4 | 3,00 | 5,8 | 0,15 | 50 |
QA23 | Alginato | 1,5 | 12,25 | 3,05 | 5,8 | 0,19 | 60 |
QA23 | Biocápsulas | 0,5 | 12,35 | 3,02 | 5,4 | 0,15 | 50 |
El análisis enológico del producto resultante de las
tres variantes de inóculo de levaduras mostró que el vino espumoso elaborado
con levaduras inmovilizadas en perlas de alginato presentaba un contenido de
calcio y azúcar superior a los otros dos sistemas de inóculo. Ello sugiere que
los inmovilizados en biocápsulas, además de no liberar ningún tipo de sustancia
al medio presentaban una la capacidad fermentativa superior respecto al otro
formato de inmovilización testado y similar al de las células libres.
Ejemplo 2:Elaboración de vino espumoso 'cava':
lote 2.
Se reprodujo el ejemplo 1, pero en este caso se usó
la cepa Sacccharomyces cerevisiae P29 (CECT 11770), aislada en la
Denominación de Origen Penedés.
Los resultados obtenidos fueron muy parecidos a los
obtenidos con la cepa QA23.
La figura 2 muestra la evolución de la presión a lo
largo del tiempo. De nuevo, los formatos de inóculo de las levaduras en células
libres e inmovilizadas en biocápsulas presentaron cinéticas más o menos
paralelas. El arranque de fermentación con inmovilizados en alginato cálcico
fue más lento. La duración total de la fermentación, detectada a partir del
momento de la estabilización de la presión, fue de 27 días para las
biocápsulas, 35 para las células libres y 63 días para los cavas elaborados con
levaduras incluidas en perlas de alginato cálcico.
La velocidad de sedimentación se repitió respecto al
ejemplo 1.
Los parámetros enológicos más representativos de los
cavas resultantes aparecen en la Tabla 2.
Tabla 2. Análisis de los cavas del ejemplo 2
CEPA | FORMATO | Azúcar (g/L) | Grado alcohólico (% vol) | pH | Acidez total (g/L) | Acidez volátil (g/L) | Ca (mg/L) |
P29 | Libres | 0,6 | 12,4 | 3,03 | 5,4 | 0,17 | 50 |
P29 | Alginato | 2 | 12,3 | 3,05 | 5,6 | 0,18 | 61 |
P29 | Biocápsulas | 0,3 | 12,45 | 3,01 | 5,6 | 0,17 | 49 |
De nuevo, los niveles del ión calcio y de azúcar
presentaban la misma tendencia que en el ejemplo 1: mayor concentración de
calcio y azúcar en los cavas elaborados a partir de levaduras inmovilizadas en
alginato cálcico.
Ejemplo 3: Elaboración de vino espumoso 'cava':
lote 3.
Se estudió el comportamiento de la misma cepa de
levadura del ejemplo 2 pero partiendo de un vino base de distintas
características: vino de la Denominación de Origen Cava, mezcla de las
variedades Macabeo (30%), Xarel·lo (33%) y Parellada (37%); azúcar residual:
0,3 g/L; grado alcohólico: 10,85 % vol; pH: 2,96; acidez total: 6,0 g/L
(expresados en g/L de ácido tartárico). La principal diferencia respecto al
vino base de los ejemplos 1 y 2 era el pH por debajo de 3,00 que presentaba
este vino, factor limitante que podía dificultar el funcionamiento de las
levaduras para realizar la segunda fermentación.
En la figura 3 se puede observar la evolución de la
presión en los tres casos de ensayo. En el vino base de estas características,
los dos formatos de inóculo con levaduras inmovilizadas presentaron un periodo
de adaptación al medio superior (entre 11 y 14 días) al que presentaron las
células libres (7 días). La segunda fermentación terminó a los 43 días para el
caso de las levaduras libres y se retrasó hasta los 52 días para el caso de las
levaduras inmovilizadas en alginato y biocápsulas.
La velocidad de sedimentación se repitió respecto al
ejemplo 1 y 2.
Los parámetros enológicos más representativos de los
cavas resultantes aparecen en la Tabla 3.
Tabla 3. Análisis de los cavas del ejemplo 3
CEPA | FORMATO | Azúcar (g/L) | Grado alcohólico (% vol) | pH | Acidez total (g/L) | Acidez volátil (g/L) | Ca (mg/L) |
P29 | Libres | 0,9 | 12,2 | 2,96 | 5,5 | 0,16 | 43 |
P29 | Alginato | 2,9 | 12,1 | 2,97 | 5,8 | 0,18 | 56 |
P29 | Biocápsulas | 2 | 12,15 | 2,95 | 5,4 | 0,18 | 43 |
Siguiendo la misma tendencia de los otros dos
ejemplos, el cava elaborado con perlas de alginato cálcico presentó
concentraciones de calcio superiores. Respecto al azúcar fermentable, en los
dos formatos de inmovilización se detectaron concentraciones más elevadas que
en las botellas con células libres. Igual que en los ejemplos anteriores, el
formato alginato fue el que contenía mayor cantidad.
Ejemplo 4: Elaboración de vino espumoso 'cava'
con biocápsulas de distinto tamaño.
Se emplearon biocápsulas obtenidas a partir de S.
cerevisae cepa P29 y Penicillium chrysogenum. La velocidad de
agitación orbital, según el procedimiento de obtención de biocápsulas, se varió
para conseguir esferas de distinto tamaño.
- esferas entre 0,6 y 1 cm de diámetro a una velocidad de agitación de 100 rpm
- esferas entre 0,55 y 0,45 cm de diámetro aplicando una velocidad de 150 rpm y
- entre 0,2 y 0,3 cm de diámetro con una velocidad de agitación orbital de 200 rpm.
El vino base de partida para la elaboración de cava
fue el mismo que el del ejemplo 1 y 2, al que se añadió 22 g/L de azúcar.
El número de biocápsulas inoculadas en cada botella
dependió de su diámetro: (a) 5 biocápsulas/750 ml si presentaban un diámetro
superior a 0,5 cm; (b) 20 ± 2 biocápsulas/750 ml si el diámetro es
aproximadamente de 0,5 cm, y (c) de 180 a 200 biocápsulas/750 ml si las esferas
presentan un diámetro inferior a 0,5 cm.
Con este número de biocápsulas se aseguraba un
inóculo de 1x106 células/ml de vino base.
La segunda fermentación tuvo lugar a una temperatura
estable de 14ºC.
En la figura 4 se muestra la velocidad de
fermentación de algunas botellas representativas de estos lotes. En ella se
puede comprobar que las que tuvieron mejor cinética de fermentación fueron las
correspondientes a los inóculos con biocápsulas de menos de 0,5 cm de diámetro,
en segundo lugar la botella con esferas de aproximadamente 0,5 cm de diámetro y
por último la que se inoculó con biocápsulas de mayor tamaño. Este
comportamiento puede explicarse por la relación superficie/volumen y el número
de esferas en cada botella: las botellas que contenían más biocápsulas aunque
de más pequeño tamaño presentaban una mayor superficie de contacto (y por
tanto, de intercambio de nutrientes) con el medio a fermentar.
Así pues, la presente invención hace referencia a
distintas velocidades de toma de espuma, o de segunda fermentación, dependiendo
del tamaño aplicado de inmovilizados de levaduras en biocápsulas.
Las pruebas de sedimentación mostraron que las
biocápsulas con un diámetro superior a 0,5 cm sedimentaban en el cuello de la
botella a los 8 segundos, las botellas que contenían biocápsulas de 0,5 cm de
diámetro sedimentaban totalmente entre 15 y 20 segundos y las de menos de 0,5
cm lo hacían entre 40 y 45 segundos.
Ejemplo 5: Elaboración de vino espumoso 'cava'
con biocápsulas a dos temperaturas de fermentación.
El procedimiento de esta experiencia presenta los
mismos condicionantes que los del ejemplo 2: cepa S. cerevisae P29, vino
base descrito en el ejemplo 1 y tres formatos de inoculación de levaduras
descritos también en el ejemplo 1.
La variable a experimentar fue la influencia que
podía tener una temperatura de segunda fermentación considerada límite: 10ºC,
frente a una temperatura estándar: 14ºC.
En la figura 5 se representan las cinéticas
fermentativas de los 6 casos estudiados. En ambas temperaturas, las levaduras
inmovilizadas en biocápsulas y las levaduras libres tuvieron un comportamiento
paralelo, evolucionando a la misma velocidad. Los inóculos de levadura en
formato de perlas de alginato cálcico presentaron un retraso tanto al inicio
como al final de la fermentación respecto a los otros dos casos tanto a 10ºC
como a 14ºC.
Por lo tanto, la presente invención muestra que las
levaduras vínicas inmovilizadas en biocápsulas pueden fermentar perfectamente a
temperaturas límites, comportándose de igual manera que la inoculación
tradicional de levaduras en forma libre.
Claims (9)
- Procedimiento de obtención de una bebida alcohólica espumosa, caracterizado porque dicho procedimiento comprende una etapa de fermentación en un recipiente adecuado para contener un líquido a presión utilizando biocápsulas que comprenden una levadura inmovilizada en un hongo filamentoso.
- Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el recipiente adecuado para contener un líquido a presión es una botella.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la bebida alcóholica espumosa es un vino espumoso.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la levadura se elige entre Saccharomyces cerevisiae y Saccharomyces bayanus.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el hongo filamentoso es Penicillium chrysogenum.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, caracterizado porque se adiciona una cantidad de biocápsulas adecuada para que número mínimo de células de levadura sea 1 x 106 células/ml de vino base.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las biocápsulas tienen un diámetro con una dispersión máxima de 10 mm.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las biopcápsulas tienen un diámetro inferior a 10 mm.
- Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la etapa de fermentación comprende la adición de biocápsulas de levadura y hongo filamentoso a un medio de fermentación que comprende al menos vino y azúcar y se realiza dentro de una botella herméticamente cerrada.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES201131039A ES2395020B1 (es) | 2011-06-20 | 2011-06-20 | Utilización de biocápsulas de levadura como agentes fermentativos en la segunda fermentación alcohólica en botella y su aplicación para la elaboración de vino espumoso y bebidas alcohólicas espumosas |
ESP201131039 | 2011-06-20 |
Publications (1)
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WO2012175774A1 true WO2012175774A1 (es) | 2012-12-27 |
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PCT/ES2012/070452 WO2012175774A1 (es) | 2011-06-20 | 2012-06-20 | Utilización de biocápsulas de levadura como agentes fermentativos en la segunda fermentación alcohólica en botella y su aplicación para la elaboración de vino espumoso y bebidas alcohólicas espumosas |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
ES (1) | ES2395020B1 (es) |
WO (1) | WO2012175774A1 (es) |
Cited By (1)
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ES2480916R1 (es) * | 2013-01-25 | 2014-10-28 | Marta MARTINEZ BEYA | Procedimiento de preparación de vinos espumosos. |
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US5070019A (en) * | 1989-03-18 | 1991-12-03 | Huels Aktiengesellschaft | Immobilization of yeast in alginate beads for production of alcoholic beverages |
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- 2011-06-20 ES ES201131039A patent/ES2395020B1/es active Active
-
2012
- 2012-06-20 WO PCT/ES2012/070452 patent/WO2012175774A1/es active Application Filing
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ES2480916R1 (es) * | 2013-01-25 | 2014-10-28 | Marta MARTINEZ BEYA | Procedimiento de preparación de vinos espumosos. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2395020B1 (es) | 2013-12-13 |
ES2395020A1 (es) | 2013-02-07 |
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