WO2012099037A1 - ビタミンｅの分析方法 - Google Patents

ビタミンｅの分析方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2012099037A1
WO2012099037A1 PCT/JP2012/050678 JP2012050678W WO2012099037A1 WO 2012099037 A1 WO2012099037 A1 WO 2012099037A1 JP 2012050678 W JP2012050678 W JP 2012050678W WO 2012099037 A1 WO2012099037 A1 WO 2012099037A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vitamin
tocotrienol
column
oil
fats
Prior art date
Application number
PCT/JP2012/050678
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
博之 橋本
拓也 中上
聡子 渡辺
Original Assignee
築野食品工業株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 築野食品工業株式会社 filed Critical 築野食品工業株式会社
Priority to JP2012553695A priority Critical patent/JP5711272B2/ja
Publication of WO2012099037A1 publication Critical patent/WO2012099037A1/ja

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials

Definitions

  • the present invention relates to a method for analyzing vitamin E, and more particularly to a method for analyzing a vitamin E homologue in fats and oils containing tocopherol and tocotrienol.
  • Vitamin E is composed of ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -tocopherol and 8 homologs of ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -tocotrienol.
  • Tocotrienol differs in structure from tocopherol in that it has three double bonds in the side chain. Based on this difference in structure, it has been revealed that tocotrienols have various physiological functions not found in tocopherols.
  • tocotrienol is known to have an antioxidant action 40 to 60 times that of tocopherol, and may have many other functions such as cholesterol lowering action, anticancer action, blood pressure lowering action, and nerve cell protecting action. It has been reported.
  • Known physiological functions of tocopherol include lipid peroxide production-suppressing activity centered on antioxidant activity, blood vessel protection and antithrombotic activity.
  • Vegetable oils and fats include fats and oils containing tocopherol as a main component as vitamin E and oils and fats containing both tocopherol and tocotrienol as main components.
  • soybean oil, rapeseed oil and the like are known, and as the latter, palm oil, rice oil, Anato oil (oil and fat extracted from seeds of cypress), coconut oil, oat bran oil and the like are known.
  • the usefulness of fats and oils containing tocotrienol has attracted attention with the increase in knowledge of physiological functions of tocotrienol as described above.
  • THF: IPA 97.5: 2: 0.5 (v / v) as a mobile phase.
  • dioxane 96: 4 (v / v) as a mobile phase.
  • Intact Co., Ltd. discloses analysis conditions that allow separation of 8 types of vitamin E homologs using an in-house column (see Non-Patent Document 4).
  • Non-Patent Document 4 discloses analysis conditions that allow separation of 8 types of vitamin E homologs using an in-house column.
  • the applicant of the present application analyzed vitamin E in rice oil by the method disclosed in Non-Patent Document 4, it was still impossible to accurately determine tocotrienol.
  • An object of the present invention is to provide an analysis method capable of accurately quantifying vitamin E homologues in fats and oils containing tocopherol and tocotrienol for each homologue.
  • the present invention includes the following inventions in order to solve the above problems.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • vitamin E homologues in fats and oils containing tocopherol and tocotrienol can be accurately quantified for each homologue.
  • FIG. 2 is a diagram showing a fluorescence chromatogram of Example 1.
  • FIG. 4 is a diagram showing a fluorescence chromatogram of Example 2.
  • 6 is a diagram showing a fluorescence chromatogram of Comparative Example 1.
  • the present invention provides a method for analyzing vitamin E, wherein the vitamin E homologue in fats and oils containing tocopherol and tocotrienol is quantified by a high performance liquid chromatography (HPLC) method.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the analysis method of the present invention is characterized in that a normal phase column is used as a separation column.
  • the type of normal phase column is not particularly limited, and examples thereof include a polymer column, a silica column, a graphite carbon column, an amino column having a polymer base and a silica base, an amide column, and a polyamine column. Of these, silica columns and silica-based amino columns are preferred.
  • the shape of the column is not particularly limited.
  • the particle size of the column filler is not particularly limited, but is preferably 5 ⁇ m or less, and more preferably 3 ⁇ m or less.
  • the normal phase column used in the analysis method of the present invention preferably has a theoretical plate number of ⁇ -tocotrienol of 25000 or more.
  • the theoretical plate number is a value indicating the degree of broadening of the substance band in the column, and is defined by the following equation.
  • Theoretical plate number 16 ⁇ (t R / W) 2 t R : Retention time of each peak (minutes) W: Peak width (min) of each peak
  • the column having the theoretical plate number of ⁇ -tocotrienol of 25,000 or more means that the theoretical plate number of ⁇ -tocotrienol shows 25000 or more when analyzed under the optimum conditions, and is included in the analysis method of the present invention. It is not required that the theoretical plate number of ⁇ -tocotrienol be 25,000 or more in all ranges of conditions.
  • the number of theoretical plates of ⁇ -tocotrienol in the normal phase column used in the analysis method of the present invention is preferably 25000 or more, more preferably 30000 or more, under optimum conditions. Examples of the optimum conditions include, but are not limited to, the conditions of Example 1 described later.
  • Columns that can be used in the analysis method of the present invention include, for example, Unison UK-Silica, Unison - UK-Amino (hereinafter, intact), YMC-Pack SIL, YMC-Pack SIL06, YMC-Pack NH2, YMC-Pack Polyamine II.
  • the mobile phase is not particularly limited as long as it is a solvent suitable for use in a normal phase column.
  • hexane, THF, ethyl acetate, dioxane, acetone, chloroform, ethers, alcohols, benzene, toluene, Acetonitrile, dichloromethane, acetic acid, formic acid, trifluoroacetic acid and the like can be mentioned, and these can be used alone or in combination.
  • hexane: ethyl acetate: acetic acid 98.5 to 99.8: 0.1 to 0.5: 0.1 to 1 (v / v).
  • hexane: ethyl acetate: acetic acid 99.1 to 99.6: 0.2 to 0.3: 0.4 to 0.6 (v / v).
  • the organic solvent used in the mobile phase is preferably HPLC grade or higher, and an antioxidant may be added as necessary.
  • the antioxidant to be added include pyrogallol (pyrogallolic acid), 3,5-di-t-butyl-4-hydroxytoluene (BHT), 2- & 3-t-butyl-4-hydroxyanisole (BHA), t -Butyl hydroquinone (TBHQ), ethoxyquin and the like.
  • the column temperature is usually used in the range of about 10-50 ° C, preferably in the range of about 20-40 ° C, more preferably in the range of about 25-35 ° C.
  • the flow rate is not particularly limited as long as it does not cause a problem in column performance.
  • the detector is not particularly limited as long as it can detect vitamin E.
  • fluorescence (FL) detector, ultraviolet visible light (UV-Vis) detector, photodiode array (PDA) detector, evaporative light scattering (ELSD) detector, MS detector, electrochemical (EC) Examples include a detector, a differential refractive index (RI) detector, an electrical conductivity (CD) detector, and a corona CAD detector. Among them, it is preferable to use a fluorescence detector in terms of specificity for vitamin E.
  • the fats and oils containing tocopherol and tocotrienol that are the objects of analysis in the analysis method of the present invention may be oils and fats that can contain tocopherol and tocotrienol.
  • the analysis target fats and oils are not limited to the fats and oils that have already been confirmed to contain tocopherol and tocotrienol, but the fats and oils that may be contained are also not analyzed. It is suitable as.
  • fats and oils in which tocotrienol is added to fats and oils that originally do not contain tocotrienol are also suitable as analysis targets in the analysis method of the present invention.
  • Examples of fats and oils that have been confirmed to contain tocopherol and tocotrienol include palm oil, rice oil, anato oil, wheat bran oil, coconut oil, etc., and the analysis method of the present invention is particularly suitable for the analysis of these fats and oils. It can be applied effectively.
  • the method for preparing the sample solution for analysis is not particularly limited, but it is preferable to dissolve the oil to be analyzed in an organic solvent having high fat solubility and a polarity close to that of the mobile phase.
  • Suitable organic solvents include hexane, THF, ethyl acetate, dioxane, acetone, chloroform, ethers, alcohols, benzene, toluene, acetonitrile, dichloromethane, acetic acid, formic acid, trifluoroacetic acid and the like. Can be used as a mixture.
  • the organic solvent for preparing the sample solution for analysis is preferably HPLC grade or higher, and an antioxidant may be added as necessary.
  • antioxidant to be added examples include pyrogallol (pyrogallolic acid), 3,5-di-t-butyl-4-hydroxytoluene (BHT), 2- & 3-t-butyl-4-hydroxyanisole (BHA), t -Butyl hydroquinone (TBHQ), ethoxyquin and the like.
  • Example 1 1 g of rice salad oil (manufactured by Tsukino Food Industry) was accurately measured in a 10 mL brown volumetric flask, and hexane was added to make 10 mL (0.1 g / mL hexane solution). Analysis was performed by HPLC method with a sample injection amount of 5 ⁇ L (equivalent to 500 ⁇ g of rice salad oil). A Prominence HPLC system (LC-20AB, Shimadzu Corporation) was used as an HPLC analyzer.
  • the column temperature was 30 ° C. and the flow rate was 1 mL / min.
  • Example 1 Chromatogram by fluorescence detector
  • FIG. 2 Chromatogram of Example 1
  • FIG. 2 Chromatogram of Example 2
  • Comparative Example 1 the peaks of ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -tocopherol (T), ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -tocotrienol (T3) were separated and quantifiable. Further, Example 1 was more preferable for separation of each homolog.
  • Table 1 shows the theoretical plate numbers of ⁇ -tocotrienol and ⁇ -tocotrienol in Examples 1 and 2 and Comparative Example 1.
  • the separation column used (“Unison UK-Silica” manufactured by Intact (4.6 ⁇ 250 mm, particle size 3 ⁇ m)) shows that the number of theoretical plates of ⁇ -tocotrienol is 25000 or more under the conditions of Example 1. It was.

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

　トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、同族体ごとに正確に定量可能な分析方法を提供する。分離カラムとして順相カラムを用い、移動相としてヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９８．５～９９．８：０．１～０．５：０．１～１（ｖ／ｖ）を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、同族体ごとに正確に定量することができる。

Description

ビタミンＥの分析方法
　本発明は、ビタミンＥの分析方法に関し、詳細には、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体の分析方法に関する。
　ビタミンＥはα－、β－、γ－、δ－トコフェロールおよびα－、β－、γ－、δ－トコトリエノールの８種類の同族体で構成されている。トコトリエノールは側鎖に３つの二重結合を持つ点でトコフェロールと構造が異なる。この構造の違いに基づいて、トコトリエノールはトコフェロールにはないさまざまな生理機能を持つことが明らかとなっている。例えば、トコトリエノールはトコフェロールの４０～６０倍の抗酸化作用を有することが知られており、他にもコレステロール低下作用、抗ガン作用、血圧低下作用、神経細胞保護作用など多くの機能を有することが報告されている。トコフェロールの生理機能としては、抗酸化作用を中心とした過酸化脂質の生成抑制作用や血管保護・抗血栓作用などが知られている。
　植物油脂には、ビタミンＥとしてトコフェロールを主成分として含有する油脂と、トコフェロールおよびトコトリエノールの両方を主成分として含有する油脂が存在する。前者としては、大豆油、菜種油等が知られており、後者としては、パーム油、米油、アナトー油（ベニノキの種子から抽出される油脂）、ヤシ油、麦ヌカ油などが知られている。トコトリエノールを含有する油脂は、上記のようなトコトリエノールの生理機能の知見増加に伴い、その有用性が注目されている。
　食品中のビタミンＥの分析方法として、非特許文献１には、カラムに順相シリカカラム、移動相にヘキサン：ＴＨＦ：ＩＰＡ＝９７．５：２：０．５（ｖ／ｖ）を用いて、流速１～２ｍＬ／分で分析する方法が開示されている。非特許文献２には、カラムに順相シリカカラム、移動相にヘキサン：ＴＨＦ：酢酸＝１０００：６：５（ｖ／ｖ）を用いて、流速１．２ｍＬ／分で分析する方法が開示されている。非特許文献３には、カラムに順相シリカカラム、移動相にヘキサン：ジオキサン＝９６：４（ｖ／ｖ）を用いて、流速２ｍＬ／分で分析する方法が開示されている。しかしこれらの方法を用いて、米油中のビタミンＥを分析しても、トコトリエノールのピークが他の成分のピークと重なり、トコトリエノールを正確に定量することができないという問題があった。
　インタクト株式会社は、自社製のカラムを用いて８種類のビタミンＥ同族体の標品を分離可能な分析条件を開示している（非特許文献４参照）。しかしながら、本願出願人が非特許文献４に開示の方法で米油中のビタミンＥを分析したところ、やはりトコトリエノールを正確に定量することができなかった。
社団法人日本油化学会編纂「２００３年版基準油脂分析試験法」２．４.１０－２００３（１～４） 厚生労働省監修「食品衛生検査指針理化学編２００５」ｐ１２８－ｐ１３３ 四国地域イノベーション創出協議会「農水産物・加工食品中の健康機能性成分類の分析マニュアル集」平成２２年３月、ｐ１７－ｐ２１、http://s-innovation.jp/support/food-manual.pdf Imtakt Technical Information No.TI559E, Tocopherols and tocotrienols トコフェロール類とトコトリエノール類、http://www.imtaktusa.com/site_media/files/technical_information/TI559E.pdf
　本発明は、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、同族体ごとに正確に定量可能な分析方法を提供することを目的とする。
　本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により定量するビタミンＥの分析方法であって、分離カラムとして順相カラムを用い、移動相としてヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９８．５～９９．８：０．１～０．５：０．１～１（ｖ／ｖ）を用いることを特徴とするビタミンＥの分析方法。
［２］α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示す分離カラムを用いることを特徴とする前記［１］に記載のビタミンＥの分析方法。
　本発明によれば、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、同族体ごとに正確に定量することができる。
実施例１の蛍光クロマトグラムを示す図である。 実施例２の蛍光クロマトグラムを示す図である。 比較例１の蛍光クロマトグラムを示す図である。
　本発明は、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により定量するビタミンＥの分析方法を提供する。ビタミンＥ同族体とは、α－、β－、γ－、δ－トコフェロールおよびα－、β－、γ－、δ－トコトリエノールの８種類である。
　本発明の分析方法は、分離カラムとして順相カラムを用いることを特徴としている。順相カラムの種類は特に限定されないが、ポリマーカラム、シリカカラム、グラファイトカーボンカラム、ポリマーベースとシリカベースのあるアミノカラム、アミドカラム、ポリアミンカラムなどが挙げられる。中でも、シリカカラム、シリカベースのアミノカラムが好ましい。カラムの形状は特に限定されない。カラム充填剤の粒径は特に限定されないが、５μｍ以下であることが好ましく、３μｍ以下であることがより好ましい。
　本発明の分析方法に用いる順相カラムは、α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示すことが好ましい。理論段数とは、カラム中における物質のバンドの広がりの度合いを示す値であり、以下の式で定義される。
　理論段数＝１６×（ｔＲ／Ｗ）２
　ｔＲ：各ピークの保持時間（分）
　Ｗ：各ピークのピーク幅（分）
　α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示すカラムとは、最適条件で分析を行った際に、α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示すことを意味し、本発明の分析方法に含まれる分析条件のすべての範囲でα－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示すことを要求するものではない。本発明の分析方法に用いる順相カラムのα－トコトリエノールの理論段数は、最適条件において２５０００以上を示すことが好ましく、３００００以上であることがより好ましい。最適条件としては、例えば後述する実施例１の条件が挙げられるが、これに限定されるものではない。
　本発明の分析方法で使用できるカラムとしては、例えば、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ｓｉｌｉｃａ、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ａｍｉｎｏ（以上、インタクト株式会社）、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＳＩＬ、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＳＩＬ０６、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＮＨ２、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＰｏｌｙａｍｉｎｅＩＩ（以上、ＹＭＣ株式会社）、Ｓｈｉｍ－Ｐａｃｋ ＨＲＣ ＳｉＬ、Ｓｈｉｍ－Ｐａｃｋ ＨＲＣ ＮＨ２（以上、島津製作所株式会社）、シリカ ５ＳｉＬ ４Ｅ（昭和電工株式会社）、Ｌｕｎａ Ｓｉｌｉｃａ、Ｌｕｎａ ＮＨ２（以上、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ株式会社）、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＳＩＬ－１００Ａ、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＮＨ２（以上、ＧＬサイエンス株式会社）、ＴＳＫｇｅｌ ＮＨ２－１００ ３μｍ（東ソー株式会社）、Ａｓｃｅｎｔｉｓ Ｓｉｌｉｃａ（シグマアルドリッチ株式会社）、Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ Ｓｉ、Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ Ａｍｉｎｏ（以上、アジレントテクノロジー株式会社）、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ３０、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ６０、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ １００、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＮＨ２（以上、野村化学株式会社）、Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（ケムコ株式会社）などの市販カラムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。中でも、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ｓｉｌｉｃａ（インタクト社）、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ａｍｉｎｏ（インタクト社）が好ましい。
　移動相は、順相カラムでの使用に適した溶媒であれば特に限定されず、具体的には、ヘキサン、ＴＨＦ、酢酸エチル、ジオキサン、アセトン、クロロホルム、エーテル類、アルコール類、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、ジクロロメタン、酢酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸などが挙げられ、これらを単独または混合して使用することができる。本発明の分析方法においては、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９８．５～９９．８：０．１～０．５：０．１～１（ｖ／ｖ）を用いることが好ましい。より好ましくは、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９９．１～９９．６：０．２～０．３：０．４～０．６（ｖ／ｖ）である。移動相に用いる有機溶媒は、ＨＰＬＣグレード以上であることが好ましく、必要に応じて酸化防止剤を添加してもよい。添加する酸化防止剤としては、例えばピロガロール（ピロガロール酸）、３，５－ジ－ｔ－ブチル－４－ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、２－＆３－ｔ－ブチル－４－ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ｔ－ブチルハイドロキノン（ＴＢＨＱ）、エトキシキンなどが挙げられる。
　カラム温度は、通常約１０～５０℃の範囲で用いられ、約２０～４０℃の範囲が好ましく、約２５～３５℃の範囲がより好ましい。流速はカラムの性能上問題ない範囲であれば特に限定されない。検出器はビタミンＥを検出できるものであれば特に限定されない。具体的には、蛍光（ＦＬ）検出器、紫外可視光（ＵＶ-Ｖｉｓ）検出器、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器、蒸発光散乱（ＥＬＳＤ）検出器、ＭＳ検出器、電気化学（ＥＣ）検出器、示差屈折率（ＲＩ）検出器、電気電導度（ＣＤ）検出器、コロナＣＡＤ検出器などが挙げられる。中でも、ビタミンＥに対する特異性の点で、蛍光検出器を用いることが好ましい。
　本発明の分析方法における分析対象であるトコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂は、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有し得る油脂であればよい。つまり、分析対象油脂は、トコフェロールおよびトコトリエノールを含有することが既に確認されている油脂に限定されるものではなく、トコトリエノールを含油することが未確認であるが含有する可能性のある油脂も分析対象油脂として好適である。また、本来トコトリエノールを含有しない油脂にトコトリエノールを添加した油脂も、本発明の分析方法における分析対象として好適である。トコフェロールおよびトコトリエノールを含有することが確認されている油脂としては、パーム油、米油、アナトー油、麦ぬか油、ヤシ油などが挙げられ、本発明の分析方法は、これらの油脂の分析に特に有効に適用できる。
　分析用試料溶液の調製方法は、特に限定されないが、油脂の溶解性が高く、かつ移動相に近い極性を持つ有機溶媒にて分析対象油脂を溶解することが好ましい。好適な有機溶媒としては、ヘキサン、ＴＨＦ、酢酸エチル、ジオキサン、アセトン、クロロホルム、エーテル類、アルコール類、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、ジクロロメタン、酢酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸などが挙げられ、これらを単独または混合して使用することができる。分析用試料溶液調製用の有機溶媒は、ＨＰＬＣグレード以上であることが好ましく、必要に応じて酸化防止剤を添加してもよい。添加する酸化防止剤としては、例えばピロガロール（ピロガロール酸）、３，５－ジ－ｔ－ブチル－４－ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、２－＆３－ｔ－ブチル－４－ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ｔ－ブチルハイドロキノン（ＴＢＨＱ）、エトキシキンなどが挙げられる。
　以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔実施例１〕
　１０ｍＬ褐色メスフラスコに米サラダ油（築野食品工業製）１ｇを正確に測りとり、ヘキサンを加えて１０ｍＬとした（０．１ｇ／ｍＬヘキサン溶液）。試料注入量５μＬ（米サラダ油５００μｇ相当）としてＨＰＬＣ法により分析を行った。ＨＰＬＣの分析装置には、ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅＨＰＬＣシステム（ＬＣ－２０ＡＢ、島津製作所）を用いた。検出器には、蛍光検出器ＲＦ－１０ＡｘＬ（励起波長／蛍光波長＝２９８／３２５ｎｍ、島津製作所）を、カラムには、インタクト社製「Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ｓｉｌｉｃａ」（４．６×２５０ｍｍ、粒子径３μｍ）を用いた。移動相は、ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９９．２５：０．２５：０．５（ｖ／ｖ）とした。カラム温度３０℃、流速１ｍＬ／分とした。
　標品としてはビタミンＥ同族体８種類の標準品をそれぞれ１０～１００μｇ／ｍＬのヘキサン溶液として調製し、褐色瓶に保存して使用した。試料中の各ビタミンＥ同族体のピークの保持時間、ピーク面積、ピーク幅を測定し、絶対検量法により定量を行い、各ピークの理論段数を次式により求めた。
　理論段数＝１６×（ｔＲ／Ｗ）２
　ｔＲ：各ビタミンＥ同族体のピークの保持時間（分）
　Ｗ：各ビタミンＥ同族体のピークのピーク幅（分）
〔実施例２〕
　実施例１において、移動相をヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９９：０．５：０．５（ｖ／ｖ）に変更し、カラム温度を４０℃に変更した以外は実施例１と同様に行った。
〔比較例１〕
　実施例１において、移動相を非特許文献４に開示された組成（ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９６．９：３：０．１（ｖ／ｖ））とし、カラム温度を４０℃に変更した以外は実施例１と同様に行った。
〔結果〕
（１）蛍光検出器によるクロマトグラム
　実施例１のクロマトグラムを図１に、実施例２のクロマトグラムを図２に、比較例１のクロマトグラムを図３にそれぞれ示した。実施例１および実施例２では、α－、β－、γ－トコフェロール（Ｔ）、α－、β－、γ－トコトリエノール（Ｔ３）のピークが分離し、定量可能であった。また各同族体の分離は実施例１がより好ましかった。一方、比較例１では、α－トコトリエノールとγ－トコフェロールには不純物のピークが重なっており、また、β－トコフェロールとβ－トコトリエノールは不純物に埋没してピークが確認できず、各ビタミンＥ同族体の定量ができなかった。
　実施例１、２および比較例１におけるα－トコトリエノールおよびγ－トコトリエノールの理論段数を表１に示した。用いた分離カラム（インタクト社製「Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ－Ｓｉｌｉｃａ」（４．６×２５０ｍｍ、粒子径３μｍ））は、実施例１の条件において、α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上であることが示された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　実施例１におけるビタミンＥ同族体８種の定量値を表２に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。

Claims (2)

  1. 　トコフェロールおよびトコトリエノールを含有する油脂中のビタミンＥ同族体を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により定量するビタミンＥの分析方法であって、
    　分離カラムとして順相カラムを用い、移動相としてヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝９８．５～９９．８：０．１～０．５：０．１～１（ｖ／ｖ）を用いることを特徴とするビタミンＥの分析方法。
  2. 　α－トコトリエノールの理論段数が２５０００以上を示す分離カラムを用いることを特徴とする請求項１に記載のビタミンＥの分析方法。
PCT/JP2012/050678 2011-01-17 2012-01-16 ビタミンｅの分析方法 WO2012099037A1 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012553695A JP5711272B2 (ja) 2011-01-17 2012-01-16 ビタミンｅの分析方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011006545 2011-01-17
JP2011-006545 2011-01-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012099037A1 true WO2012099037A1 (ja) 2012-07-26

Family

ID=46515663

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2012/050678 WO2012099037A1 (ja) 2011-01-17 2012-01-16 ビタミンｅの分析方法

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP5711272B2 (ja)
WO (1) WO2012099037A1 (ja)

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014104262A1 (ja) * 2012-12-27 2014-07-03 栗田工業株式会社 蒸気復水系の防食方法、及びその方法に用いる防食剤
CN104062367A (zh) * 2014-03-21 2014-09-24 湘潭大学 一种用正相高效液相色谱法直接分析1,5-萘二异氰酸酯含量的方法
CN105092738A (zh) * 2015-09-08 2015-11-25 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测沙棘油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116072A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测芝麻油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116079A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 中粮（成都）粮油工业有限公司 一种检测花生油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116073A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 崇州市白头甘泉工业油脂厂 一种检测棕榈油中天然维生素e含量的测定方法
CN105241971A (zh) * 2015-09-08 2016-01-13 中粮（成都）粮油工业有限公司 一种检测橄榄油中天然维生素e含量的测定方法
CN106226429A (zh) * 2016-07-29 2016-12-14 中华人民共和国张家港出入境检验检疫局 特级初榨橄榄油中掺杂有棕榈油的判定方法
CN106632210A (zh) * 2015-11-03 2017-05-10 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 从母育酚中分离纯化制备高纯度生育三烯酚的方法
CN107144547A (zh) * 2017-05-11 2017-09-08 湖北国科高新技术有限公司 一种利用近红外光谱快速测定甘蓝型油菜种子中生育酚含量的方法
CN108107133A (zh) * 2018-01-17 2018-06-01 中国医学科学院北京协和医院 液相色谱串联质谱测定血清中维生素a和e的方法
CN109541087A (zh) * 2018-11-27 2019-03-29 江苏省中国科学院植物研究所 一种检测黑莓种子中天然维生素e含量的测定方法
CN110220995A (zh) * 2019-07-05 2019-09-10 浙江艾兰得生物科技有限公司 维生素e含量的高效液相色谱检测方法
US10787469B2 (en) 2014-06-10 2020-09-29 Chemi S.P.A. Process for the purification of L-α-glycerophosphorylcholine

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.K. HEWAVITHARANA ET AL.: "Simultaneous determination of Vitamin E homologs in chicken meat by liquid chromatography with fluorescence detection", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1025, no. 2, 6 February 2004 (2004-02-06), pages 313 - 317, XP004482109, DOI: doi:10.1016/j.chroma.2003.10.052 *
BARRIE TAN ET AL.: "Separation of Tocopherol and Tocotrienol Isomers Using Normal- and Reverse-Phase Liquid Chromatography", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 180, no. 2, 1 August 1989 (1989-08-01), pages 368 - 373, XP029457523, DOI: doi:10.1016/0003-2697(89)90447-8 *
IMTAKT CORP.: "Tocopherols and tocotrienols", IMTAKT TECHNICAL INFORMATION NO.TI559E, Retrieved from the Internet <URL:http://www.imtaktusa.com/site_media/files/technical_information/TI559E.pdf> [retrieved on 20120213] *
LILLIAN BARROS ET AL.: "Optimization of the determination of tocopherols in Agaricus sp. edible mushrooms by a normal phase liquid chromatograpic method", FOOD CHEMISTRY, vol. 110, no. 4, 15 October 2008 (2008-10-15), pages 1046 - 1050, XP022668411, DOI: doi:10.1016/j.foodchem.2008.03.016 *
MINISTRY OF HEALTH, LABOUR AND WELFARE, SHOKUHIN EISEI KENSA SHISHIN RIKAGAKU HEN 2005, 2005, pages 128 - 133 *
N. RODRIGO ET AL.: "High-performance liquid chromatographic determination of tocopherols in infant formulas", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 947, no. 1, 15 February 2002 (2002-02-15), pages 97 - 102, XP004334298, DOI: doi:10.1016/S0021-9673(01)01596-5 *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014104262A1 (ja) * 2012-12-27 2014-07-03 栗田工業株式会社 蒸気復水系の防食方法、及びその方法に用いる防食剤
CN104062367A (zh) * 2014-03-21 2014-09-24 湘潭大学 一种用正相高效液相色谱法直接分析1,5-萘二异氰酸酯含量的方法
US10787469B2 (en) 2014-06-10 2020-09-29 Chemi S.P.A. Process for the purification of L-α-glycerophosphorylcholine
CN105092738A (zh) * 2015-09-08 2015-11-25 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测沙棘油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116072A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测芝麻油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116079A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 中粮（成都）粮油工业有限公司 一种检测花生油中天然维生素e含量的测定方法
CN105116073A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 崇州市白头甘泉工业油脂厂 一种检测棕榈油中天然维生素e含量的测定方法
CN105241971A (zh) * 2015-09-08 2016-01-13 中粮（成都）粮油工业有限公司 一种检测橄榄油中天然维生素e含量的测定方法
CN106632210A (zh) * 2015-11-03 2017-05-10 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 从母育酚中分离纯化制备高纯度生育三烯酚的方法
CN106632210B (zh) * 2015-11-03 2019-05-03 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 从母育酚中分离纯化制备高纯度生育三烯酚的方法
CN106226429A (zh) * 2016-07-29 2016-12-14 中华人民共和国张家港出入境检验检疫局 特级初榨橄榄油中掺杂有棕榈油的判定方法
CN107144547A (zh) * 2017-05-11 2017-09-08 湖北国科高新技术有限公司 一种利用近红外光谱快速测定甘蓝型油菜种子中生育酚含量的方法
CN107144547B (zh) * 2017-05-11 2019-07-16 湖北国科高新技术有限公司 一种利用近红外光谱快速测定甘蓝型油菜种子中生育酚含量的方法
CN108107133A (zh) * 2018-01-17 2018-06-01 中国医学科学院北京协和医院 液相色谱串联质谱测定血清中维生素a和e的方法
CN108107133B (zh) * 2018-01-17 2020-08-21 中国医学科学院北京协和医院 液相色谱串联质谱测定血清中维生素a和e的方法
CN109541087A (zh) * 2018-11-27 2019-03-29 江苏省中国科学院植物研究所 一种检测黑莓种子中天然维生素e含量的测定方法
CN110220995A (zh) * 2019-07-05 2019-09-10 浙江艾兰得生物科技有限公司 维生素e含量的高效液相色谱检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2012099037A1 (ja) 2014-06-30
JP5711272B2 (ja) 2015-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5711272B2 (ja) ビタミンｅの分析方法
Cunha et al. Quantification of tocopherols and tocotrienols in Portuguese olive oils using HPLC with three different detection systems
Irakli et al. Development and validation of an HPLC method for the simultaneous determination of tocopherols, tocotrienols and carotenoids in cereals after solid‐phase extraction
Saini et al. Tocopherols and tocotrienols in plants and their products: A review on methods of extraction, chromatographic separation, and detection
Kamal-Eldin et al. Normal-phase high-performance liquid chromatography of tocopherols and tocotrienols: comparison of different chromatographic columns
Britz et al. Influence of growth temperature on the amounts of tocopherols, tocotrienols, and γ-oryzanol in brown rice
Gruszka et al. RP-LC for determination of plastochromanol, tocotrienols and tocopherols in plant oils
Xu et al. Purification and identification of components of γ-oryzanol in rice bran oil
Dhavamani et al. Total antioxidant activity of selected vegetable oils and their influence on total antioxidant values in vivo: A photochemiluminescence based analysis
Gunaratne et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins
Knecht et al. Tocopherol and tocotrienol analysis in raw and cooked vegetables: A validated method with emphasis on sample preparation
Bakre et al. Rapid determination of alpha tocopherol in olive oil adulterated with sunflower oil by reversed phase high-performance liquid chromatography
Huang et al. An improved high-performance liquid chromatographic method for simultaneous determination of tocopherols, tocotrienols and γ-oryzanol in rice
Ge et al. Extraction of natural vitamin E from wheat germ by supercritical carbon dioxide
Warner Effects on the flavor and oxidative stability of stripped soybean and sunflower oils with added pure tocopherols
Urbánek et al. Optimization and validation of a high performance liquid chromatography method for the simultaneous determination of vitamins A and E in human serum using monolithic column and diode-array detection
Shammugasamy et al. Tocopherol and tocotrienol contents of different varieties of rice in Malaysia
Constantin et al. Tocopherol content in vegetable oils using a rapid HPLC fluorescence detection method
Shammugasamy et al. Combination of saponification and dispersive liquid–liquid microextraction for the determination of tocopherols and tocotrienols in cereals by reversed-phase high-performance liquid chromatography
Simonne et al. Retention of vitamin E and added retinyl palmitate in selected vegetable oils during deep-fat frying and in fried breaded products
Tarasevičienė et al. Effects of germination time on the antioxidant properties of edible seeds
Fazel et al. Determination of main tea seed oil antioxidants and their effects on common kilka oil
Tsochatzis et al. Determination of tocopherol and tocotrienol content of Greek barley varieties under conventional and organic cultivation techniques using validated reverse phase high‐performance liquid chromatography method
San Andrés et al. High performance liquid chromatography method for the simultaneous determination of α-, γ-and δ-tocopherol in vegetable oils in presence of hexadecyltrimethylammonium bromide/n-propanol in mobile phase
Silva et al. Validation of a method for simultaneous quantification of total carotenes and tocols in vegetable oils by HPLC

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12736379

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2012553695

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12736379

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1