CN109541087A - 一种检测黑莓种子中天然维生素e含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法本发明涉及天然产物含量测定领域，具体为一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，本发明采用冷冻干燥的方法收集黑莓种子，采用超声法对天然维生素E的提取条件进行优化，并采用高效液相色谱法，以α‑生育酚，γ‑生育酚，δ‑生育酚作为标准品测定黑莓种子样本中天然维生素E的含量，为植物品质标准提供参考，本发明步骤简单，经济实用，适于推广。

Description

一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法
技术领域
本发明涉及天然产物含量测定领域，具体为一种检测黑莓种子中天然维生素E的测定方法。
背景技术
维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性的维生素，又叫生育酚，作为强抗氧化剂在生物体内发挥重要作用。维生素E是一系列苯并二氢吡喃衍生物的总称，其基本结构为6-羟基芳香杂环和一个饱和的16个碳原子的类异戊二烯侧链。根据侧链的饱和度不同可分为生育酚（Tocopherol）和生育三烯酚或三烯生育酚（Tocotrienol）两大类。生育酚含有饱和的侧链，而三烯生育酚的侧链含有3个不饱和键。天然维生素E包括α-，β-，γ-，δ-生育酚和α-，β-，γ-，δ-生育三烯酚8种异构体，它们在结构上的差异为芳香环上甲基数目和位置的不同。这八种维生素E分子虽然都能被机体吸收，但由于人体肝脏内存在一种α-生育酚转运蛋白，可优先结合并转运α-生育酚，因此人体内以α-生育酚的生物活性为最高。
对于人类的健康来说，维生素E是一种必需的大量营养物质，医学研究表明，维生素E不仅仅与生殖系统有关，而且与中枢神经系统、消化系统、心血管系统和肌肉系统的正常代谢都有密切关系，能有效预防心血管病、动脉粥样硬化、癌症等疾病。维生素E具有抗衰老功能，可以消除细胞色素沉淀，改善皮肤弹性，被广泛使用于保健品和美容用品中。另外，维生素E还参与细胞信号转导和基因调控等生理过程。
各种植物油是人们日常生活红获取天然维生素E的主要来源之一，不同种类的植物中天然维生素E 的含量差异较大，因此天然维生素E的组成和含量可以作为食用植物油脂品质的一个重要评价指标。
黑莓是悬钩子属（Rubus L.）蔷薇科植物，其果实为众多小核果组成的聚合浆果，其种子为浆果加工利用过程中产生的主要副产品，约占果渣的80%左右。研究表明黑莓种子的含油量为11~23%，其中不饱和脂肪酸含量很高，且同时含有其他大量的抗氧化物质。
随着人们对维生素E保健、医疗、美容效用的研究越来越多，市场对于维生素E的需求量也越来越大。虽然维生素E的化学合成技术已趋于成熟，但是由于人工合成维生素E的结构、类型及活性的限制，人们更趋向于选择天然维生素E，因此发掘天然维生素E的新资源，提高天然维生素E的含量十分重要。
天然维生素E主要存在于植物的种子中，以油料植物种子内的含量最为丰富。目前天然维生素E主要是从菜籽油、棉籽油、大豆油和花生油等的脱臭馏出物中提取。黑莓种子的含油量在浆果类果树中较高，其种子油和果渣油具有极佳的天然保健功效和美容功效。
目前，维生素E的分析方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、纸层析法、柱层析法、比色法等，最常用的是高效液相色谱法，我国现行国家标准、行业标准均采用此法，这些标准在液相色谱分析前均采用了皂化方法进行提取，时间长而且步骤复杂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，采用超声法对天然维生素E的提取条件进行优化，并采用高效液相色谱法测定黑莓种子中天然维生素E的含量，为植物品质标准提供参考，本发明步骤简单，经济实用，适于推广。
为实现本发现目的，采用的技术方案为：
一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：
（1） 称取：按重量g计，取种子的冻干粉0.5g，精密称定；
（2） 超声提取：加入30mL正己烷提取剂，30℃超声提取40min，将上清液离心收集；
（3） 重复步骤（2）1~2次；
（4） 浓缩：将上清液收集，在旋转蒸发器中，浓缩至干，去除正己烷，即得样品提取物；
（5） 溶解：将样品提取物加入50mL乙腈溶解，准备测定；
（6） 测定：高效液相色谱测定，采用C18色谱柱：ODS柱（250×4.6 mm, 5 μm），柱温控制在25℃，流动相：甲醇：水=（98:2v/v），等度洗脱15min，流速控制在1mL/min，二级管阵列检测器检查波长300nm，进样量为20µL；
（7） 标准品溶液的制备：选取Simga公司的维生素E标准品，制成浓度为：2.5, 5, 10,20, 40, 80μg/ml的标准品溶液。主要以α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚标准样品的保留时间作为定性依据。各所测样品中与标样保留时间一致的色谱峰被认为是α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚。其中β-生育酚与 γ-生育酚保留时间相同。由于β-生育酚在常温下极其不稳定，所以在实验操作中以 γ-生育酚代替(β+γ)-生育酚测定；
（8） 高效液相色谱测定法：不同浓度的标准品溶液分别以20进样，测定300nm波长下维生素E的峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准品为横坐标分别做标准曲线，得到300nm波长下维生素E的峰面积，根据各自的标准曲线计算样品提取液中维生素E的含量，并结合黑莓种子样品的质量，经计算得到维生素E的含量。
根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（2）中提取剂正己烷质量与体积比为：0.5:30 (m/v）。
根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（6）中流速控制在1 mL/min。
根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（6）中柱温控制在25℃。
根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（7）中标准品的制备中由γ-生育酚代替(β+γ)-生育酚测定。
本发明的有益效果是：
一、本发明采用超声波提取得率高，测定相对偏差小，对维生素E的测定具有良好的准确度和紧密度。
二、本发明步骤较简单，与国际中采用皂化提取相比，大大缩短了检测时间。
三、本发明可以很好的区分不同的维生素E异构体，α-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚，对维生素E的组份分析更加精准。
附图说明
图1 标样色谱图。
图2 α-生育酚标准曲线。
图3 γ-生育酚标准曲线。
图4 δ-生育酚标准曲线。
具体实施方式
下面通过具体的实施例子做进一步的详细描述。
实施例1
一种检测黑莓种子中维生素E含量的测定方法，包括以下步骤：
（1） 材料：选取黑莓宝森品种（'Boysenberry'）种子作为实验材料；
（2） 称取：按重量g计，取种子的冻干粉1g，精密称定；
（3） 超声提取：加入50mL正己烷提取剂，超声提取40min，将上清液离心收集；
（4） 重复步骤（2）1~2次；
（5） 浓缩：将上清液收集，在旋转蒸发器中，浓缩至干，去除正己烷，即得样品提取物；
（6） 溶解：将样品提取物加入50mL乙腈溶解，准备测定；
（7） 测定：高效液相色谱测定，采用C18色谱柱：ODS柱（250×4.6 mm, 5 μm），柱温控制在25℃，流动相：甲醇：水=（98:2v/v），等度洗脱15min，流速控制在1mL/min，二级管阵列检测器检查波长300nm，进样量为20µL；
（8） 对照品溶液的制备：选取Simga公司的维生素E对照品，制成浓度为：2.5, 5, 10,20, 40, 80μg/ml的对照品溶液。主要以α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚标准样品的保留时间作为定性依据。各所测样品中与标样保留时间一致的色谱峰被认为是α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚。其中β-生育酚与 γ-生育酚保留时间相同。由于β-生育酚生育酚在常温下极其不稳定，所以在实验操作中以 γ-生育酚代替(β+γ)-生育酚测定；
（9） 高效液相色谱测定法：不同浓度的对照品溶液分别以20µL进样，测定300nm波长下维生素E的峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准品为横坐标分别做标准曲线，得到300nm波长下维生素E的峰面积，根据各自的标准曲线计算样品提取液中维生素E的含量，并结合黑莓种子样品的质量，经计算得到维生素E的含量。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的 任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本法米昂的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取：按重量g计，取种子的冻干粉0.5g，精密称定；
（2）超声提取：加入30mL正己烷提取剂，30℃超声提取40min，将上清液离心收集；
（3）重复步骤（2）1~2次；
（4）浓缩：将上清液收集，在旋转蒸发器中，浓缩至干，去除正己烷，即得样品提取物；
（5）溶解：将样品提取物加入50mL乙腈溶解，准备测定；
（6）测定：高效液相色谱测定，采用C18色谱柱：ODS柱（250×4.6 mm, 5 μm），柱温控制在25℃，流动相：甲醇：水=（98:2v/v），等度洗脱15min，流速控制在1mL/min，二级管阵列检测器检查波长300nm，进样量为20µL；
（7）标准品溶液的制备：选取Simga公司的维生素E作为标准品，制成浓度为：2.5, 5,10, 20, 40, 80μg/ml的标准品溶液，主要以α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚标准样品的保留时间作为定性依据，各所测样品中与标样保留时间一致的色谱峰被认为是α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚，其中β-生育酚与 γ-生育酚保留时间相同，由于β-生育酚在常温下极其不稳定，所以在实验操作中以 γ-生育酚代替(β+γ)-生育酚测定；
（8）高效液相色谱测定法：不同浓度的标准品溶液分别以20进样，测定300nm波长下维生素E的峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准品为横坐标分别做标准曲线，得到300nm波长下维生素E的峰面积，根据各自的标准曲线计算样品提取液中维生素E的含量，并结合黑莓种子样品的质量，经计算得到维生素E的含量。
2.根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（2）中提取剂正己烷质量与体积比为：0.5:30 (m/v）。
3.根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（6）中流速控制在1 mL/min。
4.根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（6）中柱温控制在25℃。
5.根据权利要求1所述的一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于：所述步骤（7）中标准品的制备中由γ-生育酚代替(β+γ)-生育酚测定。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003292489A (ja) * 2002-04-04 2003-10-15 Mitsubishi Chemicals Corp トコフェロール類及びトコトリエノール類の分離方法
CN101921254A (zh) * 2010-08-12 2010-12-22 江苏省中国科学院植物研究所 一种从黑莓种籽中提取天然维生素e的方法
WO2012099037A1 (ja) * 2011-01-17 2012-07-26 築野食品工業株式会社 ビタミンｅの分析方法
CN103323554A (zh) * 2013-07-03 2013-09-25 大连民族学院 鹿产品中维生素e的分析检测方法
CN104155386A (zh) * 2014-09-01 2014-11-19 上海迪安医学检验所有限公司 超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法
CN105044256A (zh) * 2015-09-08 2015-11-11 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测玉米油中天然维生素e含量的测定方法
CN106153796A (zh) * 2015-04-17 2016-11-23 西藏卫信康医药股份有限公司 注射用12种复合维生素的含量分析检测方法
CN106404947A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 陈大为 半自动样本处理液相色谱技术测定脂溶性维生素的方法
CN108645945A (zh) * 2018-03-22 2018-10-12 北京爱普益医学检验中心有限公司 一种同时检测5种脂溶性维生素的方法及应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003292489A (ja) * 2002-04-04 2003-10-15 Mitsubishi Chemicals Corp トコフェロール類及びトコトリエノール類の分離方法
CN101921254A (zh) * 2010-08-12 2010-12-22 江苏省中国科学院植物研究所 一种从黑莓种籽中提取天然维生素e的方法
WO2012099037A1 (ja) * 2011-01-17 2012-07-26 築野食品工業株式会社 ビタミンｅの分析方法
CN103323554A (zh) * 2013-07-03 2013-09-25 大连民族学院 鹿产品中维生素e的分析检测方法
CN104155386A (zh) * 2014-09-01 2014-11-19 上海迪安医学检验所有限公司 超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法
CN106153796A (zh) * 2015-04-17 2016-11-23 西藏卫信康医药股份有限公司 注射用12种复合维生素的含量分析检测方法
CN105044256A (zh) * 2015-09-08 2015-11-11 成都市新津迎先粮油有限公司 一种检测玉米油中天然维生素e含量的测定方法
CN106404947A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 陈大为 半自动样本处理液相色谱技术测定脂溶性维生素的方法
CN108645945A (zh) * 2018-03-22 2018-10-12 北京爱普益医学检验中心有限公司 一种同时检测5种脂溶性维生素的方法及应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
E.GIMENO 等: "Rapid determination of vitamin E in vegetable oils by reversed-phase high-performance liquid chromatography", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
张东 等: "高效液相色谱法测定玉米中生育酚异构体", 《粮油食品科技》 *
李柰 等: "食用植物油中生育酚含量测定方法优化及分析", 《食品科学技术学报》 *
汤飞云 等: "HPLC法测定黑莓种子中维生素E的含量", 《食品工业》 *
王光亚 等: "高效液相色谱法测定人血浆中视黄醇和生育酚", 《营养学报》 *
陈燕舞 等: "高效液相色谱法测定植物油中维生素E的样品前处理方法比较", 《理化检验（化学分册）》 *

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