WO2012070974A1 - Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof - Google Patents

Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof Download PDF

Info

Publication number
WO2012070974A1
WO2012070974A1 PCT/RU2010/000700 RU2010000700W WO2012070974A1 WO 2012070974 A1 WO2012070974 A1 WO 2012070974A1 RU 2010000700 W RU2010000700 W RU 2010000700W WO 2012070974 A1 WO2012070974 A1 WO 2012070974A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vaccines
increased immunogenicity
vaccine antigen
immunogenicity according
microbial
Prior art date
Application number
PCT/RU2010/000700
Other languages
French (fr)
Russian (ru)
Inventor
Борис Славинович ФАРБЕР
Софья Борисовна ФАРБЕР
Артур Викторович МАРТЫНОВ
Original Assignee
Farber Boris Slavinovich
Farber Sof Ya Borisovna
Martynov Artur Viktorovich
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Farber Boris Slavinovich, Farber Sof Ya Borisovna, Martynov Artur Viktorovich filed Critical Farber Boris Slavinovich
Priority to EA201300488A priority Critical patent/EA025417B1/en
Priority to PCT/RU2010/000700 priority patent/WO2012070974A1/en
Publication of WO2012070974A1 publication Critical patent/WO2012070974A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics

Definitions

  • the invention relates to veterinary medicine and, in particular, to vaccinology and pharmacy and is intended for the prevention and treatment of infectious and other diseases of humans and animals where vaccination is used.
  • vaccination is one of the main methods of preventing epidemics.
  • the first group of infections includes conservative microorganisms and viruses whose antigenic composition is unchanged and the vaccine induces high levels of protective antibodies in the blood. These are infections such as diphtheria, pertussis, measles, rubella, etc.
  • influenza virus is a polymorphic virus (a virus particle does not have a clear structure and shape) with a fragmented variable genome.
  • Influenza virus is very variable and capable of persistence (lifetime in the human body) [ 5 ]. In humans and animals (including birds [ 6 ]), this virus multiplies in several stages - in the acute productive phase, an infected cell releases virus particles that can infect neighboring cells [ 7 ]. In the persistence phase (latent phase), this virus “waits” inside the cell, while losing part of the fragmented genome or capturing pieces
  • a change in the approach to vaccine design should be accompanied by the inclusion of such antigens in the vaccines that have not yet appeared as a result of virus mutations [ 10 ].
  • the so-called predictive inclusion of antigens is possible in two ways: the classical one using the methods of epidemiological prediction of antigenic drift and by partially modifying the antigens to obtain an unlimited number of antigen combinations in one antigen ampoule [ p ].
  • the first direction justified itself only partially: in no case did the prognosis of antigenic drift coincide with real mutational changes in neuraminidase and influenza hemagglutinin [ 12 , 13 ].
  • the antibodies induced by this protein will block all possible combinations of attachment sites. Accordingly, the number of induced monoclones will be an order of magnitude higher, although the protein will remain the same. Moreover, any “future” epitope of the structure of neuraminidase will be blocked by already synthesized antibodies.
  • Non-parenteral vaccination methods are based on the ability of antigens to penetrate the mucous membranes the shell is mainly the intestinal tract.
  • oral vaccines ensures the continuity of the antigenic stimulus, which is a prerequisite for maintaining a high level of collective immunity against infections controlled by specific prophylaxis.
  • this method of immunization is the simplest, physiologically adequate and psychologically attractive.
  • a known method [ 15 ] of increasing immunogenicity by expressing a cholera toxin antigen in a plant chimeric protein A known method of increasing the immunogenicity of hepatitis B virus nucleoproteins by covalent binding of the amino groups of this protein to microbial haptens. Such conjugation made it possible to increase the immunogenicity of the vaccine and induce the titer of antibodies to a level of 1: 128 (when vaccinating animals with a native protein, the titer of antibodies did not exceed 1: 32).
  • This technology cannot be used to increase the immunogenicity of other vaccines (microbial and viral), because it is designed exclusively for the protein that is induced in the cell nucleus by hepatitis B.
  • the oligan peptide was removed from the cell wall of microorganisms of the genus Nocardia, and 30-50% by weight of the peptidoglycan was acylated.
  • the use of this method made it possible to increase the immunogenicity of the microbial antigen by 25-30% against a standard injection vaccine.
  • Specific antibody titers grew to 1: 256-1: 512 two weeks after vaccination.
  • Obtaining pure peptidoglycan is an important procedure, since it is associated with multi-stage purification.
  • the objective of the invention is to develop vaccines with increased immunogenicity and effectiveness, including when administered orally, and a method for their preparation.
  • the problem is solved by developing vaccines with increased immunogenicity and a method for their preparation, characterized in that the vaccine antigen cut into oligomeric fragments, a polysaccharide, a protein, a lipopolysaccharide or a whole antigen, is used as a bacterium, a virus, a mixture of bacteria or virus proteins, and the resulting mixture (ensemble) of oligomeric fragments is modified by reversing the charge by acylation with succinic anhydride or by alkylation with monochlorax tartaric acid; Also, as a specific immunogenic component, a vaccine antigen with a partially reversed molecular charge is used, the charge change of which is carried out by acylation or alkylation to form a mixture (ensemble) of vaccine antigens with different molecular charges.
  • Supramolecular ensemble or ensemble is a term from supramolecular chemistry.
  • the objects of supramolecular chemistry are supramolecular ensembles built spontaneously from complementary, that is, having geometrical and chemical correspondence of fragments, similar to spontaneous assembly of complex spatial structures in a living cell [,]
  • This technology can be used to create other vaccines: for the prevention of infections such as influenza, hepatitis, herpes viruses, measles, rubella, HIV / AIDS, animal viral infections: Newasle disease, infectious bursal disease of the bird, classical swine fever, African swine fever and any other diseases. Due to the partial modification of the structure during the modification reaction, a huge number of various vaccine antigen derivatives with different immunogenicity and structure are formed and, accordingly, the immune system induces the synthesis of a larger number of monoclones in response to these new antigenic determinants. In addition, such a variety of new epitopes (hundreds of thousands or even millions) allows us to predictively protect the body from future nonexistent strains of the flu and mutant HIV / AIDS viruses. Brief Description of the Drawings
  • FIG. 1 - The relationship between the titer of specific antibodies induced and the degree of acylation of the corpuscular Pseudomonas antigen
  • Figure 2 The relationship between the titer of inducible specific antibodies and the degree of acylation of soluble high molecular weight Pseudomonas antigen The best embodiment of the invention
  • Example 1 Obtaining Pseudomonas vaccine based on a composition of vaccine antigens with a modified charge of molecules
  • Pseudomonas aeruginosa was cultured on solid nutrient medium (BCH with the addition of 1% glucose). After three days, the surface of the nutrient medium was completely covered with a pseudomonas aeruginosa. Washings were made from the surface of the medium in a Petri dish with a 0.9% sodium chloride solution, and the resulting suspension was washed three times and centrifuged. After re-suspension, the suspension of microorganisms was heated in a thermostat for 140 minutes at 80 0 C, and then again sown on PMA in order to control inactivation.
  • the resulting suspension corresponded to 10 billion cells / ml; then 0.1 ml of the suspension was diluted 100 times with 0.9% sodium chloride solution and the concentration of surface proteins was established using the Biuret method and in the complexation reaction with the bromophenol blue Flores method [3].
  • the acylation reaction of succinic anhydride was carried out as shown in example 1 [6].
  • Exceeding 15% completely deprives immunogenicity of succinylated proteins; therefore, derivatives with degrees of modification greater than 15% were not considered advisable to receive and use in the future.
  • Corpuscular antigen with varying degrees of acylation was further used to establish its immunogenicity.
  • the other part of the antigen was centrifuged for 40 minutes at 3 thousand rpm. The precipitate was discarded, and the supernatant was passed through a Sephadex G-75 column. The first, heaviest fraction was collected and used further to establish the protein concentration and degree of chemical modification.
  • the resulting antigen was a homogeneous fraction (one polymer substance) and had a molecular weight of 1.5 mDa and a charge of 186000. Received a soluble glycoprotein antigen with such degrees of acylation: 1%, 3%, 5%, 7%, 9%, 11%, 13%, 15%.
  • the molecular mass M of the experimental proteid was determined by comparing the volume of Ve elution with a similar parameter of marker proteins.
  • Anti-Pseudomonas serum for diagnostic purposes with a titer of specific anti-Pseudomonas antibodies (1: 1000) was obtained according to the standard scheme for immunizing mice, according to the scheme [1] of a thermally inactivated corpuscular Pseudomonas vaccine with a particle concentration of 10 billion / ml, which was administered at 3; 5 and 7 days at a dose of 0.2 ml intramuscularly.
  • 20 mice were used.
  • acylated samples of both corpuscular antigen (10 animals per group per sample, 8 groups) and acylated soluble antigen (8 samples, 10 animals per sample) were tested.
  • the first group of animals was injected with 8 samples of antigen (10 animals per oral sample of 0.2 ml) according to the Pasteur scheme (on days 1, 3 and 7), the second group - according to the scheme of Professor Babich E.M. (every other day, 0.2 ml orally for 15 days) [1].
  • the level of antibodies was established by two methods: a hemagglutination reaction and a method of fluorescent antibodies. Three animals from each group were left alive for up to 15 days, killed with ether and serum was obtained, where the level of specific antibodies was also established by the above methods.
  • a test system was prepared for the direct hemagglutination reaction, which was carried out in 96-well round-bottom immunological plates, to which 0.02 ml of a 0.1% suspension of thermostated ram red blood cells and 0.02 ml of a suspension of thermally inactivated Pseudomonas aeruginosa cells were added at a concentration 10 billion cells / ml.
  • Antibody levels were determined by serial ten-fold (but twofold) dilutions of the blood sera of mice, which were added in an amount of 0.02 ml to the wells of the plates. The presence of agglutinates testified to the formation of immune complexes.
  • mice we used normal human immunoglobulin (the titer of anti-pseudomonas antibodies ranged from 0 to (1: 10) according to the AED) and the blood serum of unvaccinated mice (titer from 0 to 1: 10).
  • the first sample was a corpuscular vaccine model based on inactivated pasteurization of Pseudomonas aeruginosa. Only surface antigens were acylated. The degree of acylation ranged from 1% to 15% in increments of 2%. A total of 8 samples of the modified soluble antigen and 8 corpuscular antigens were examined. The results of the immunogenicity study of the obtained samples are illustrated in FIG. one.
  • the average antibody titer in vaccinated animals was (1: 640).
  • oral use of the native corpuscular antigen did not induce the synthesis of specific antibodies.
  • a chemically modified antigen with a degree of modification of 1% of the protein concentration in it induced the synthesis of the same level of antibodies as the native antigen (1: 640).
  • Modification of surface antigens by 3% led to the induction of antibodies at the level of (1: 320) for the oral variant and at the level of (1: 2560) for the injection variant.
  • no induction of the synthesis of specific anti-Pseudomonas antibodies was observed.
  • the injection option was effective even to the derivative with a 15% degree of acylation.
  • a derivative with an acylation degree of 5% induced the synthesis of antibodies at the level of (1: 1280), a derivative with a 7% degree of acylation of the antigen at a level of (1: 320), a derivative of 9% at a level of (1: 40), other variants (with 11% and 15% degree of modification) - at the level of (1: 20).
  • the derivative with an acylation degree of 3% turned out to be the most effective, which induced the synthesis of specific antibodies both when using the classical L. Pasteur vaccination regimen for injectable use and when using the E. Babich vaccination regimen for oral administration of the vaccine.
  • FIG. Figure 2 shows the relationship between the level of specific antibodies induced and the degree of acylation of soluble modified antigen (first fraction).
  • This variant of the candidate antigen is a chemical monocomponent vaccine based on a glycoprotein modified high molecular weight antigen with a mass of 1.5 mDa and a molecular charge of 186,000. It was the largest molecular weight or the first fraction that comes out of the column when the fractions are divided that turned out to be the most immunogenic.
  • a correlation between the change in charge and mass of the antigen was confirmed, which confirms the state of completion of the chemical reaction of the modification of the structure of the antigen. Attention should be paid to an interesting fact discovered during injection vaccination of mice: the introduction of an unmodified vaccine (on the seventh day - the third time) caused an allergic reaction in some animals in the form of tremor, decreased motor activity and refusal to eat during the day.
  • acylated variant of soluble antigen with an acylation degree of 1% (Fig. 14), like the unacylated antigen, induced the synthesis of the same amount of antibodies in the titer (1: 1280). Oral administration of soluble antigen and antigen with an acylation degree of 1% did not lead to a significant induction of the synthesis of specific anti-Pseudomonas antibodies.
  • a soluble antigen derivative with an acylation degree of 3% activated the synthesis of antibodies at the level of (1: 5120) in the injection version and (1: 1280) when taken orally.
  • a 5% acylated derivative induced the synthesis of specific antibodies at the level (1: 640) for the oral form of administration and at the level (1: 2560) for the injectable form.
  • the derivative with an acylation degree of 7% induced the synthesis of specific antibodies at the level of (1: 640) for the oral form and (1: 1280) for the injectable.
  • the corresponding level of specific antibodies induced was (1: 320) for the oral form of the vaccine and (1: 640) for the injectable form.
  • the levels of antibody synthesis were equalized in vaccinated animals when administered orally and injected only when using a vaccine preparation with an acylation level of 13% and equal 1: 40, and when the degree of acylation was 15%, only the injection form of the candidate vaccine was immunogenic, it induced antibody synthesis at the level (1: 20).
  • the characteristic difference between the soluble high molecular weight antigen was the induction of antibody synthesis, not only derivatives with acylation degree of 3%, but derivatives with acylation degrees of 5%, 7%, 1 1%, 13% for oral administration according to the above scheme of Babich E.M.
  • the antibody titer was four times greater when injected with the most effective derivative with an acylation degree of 3% than with oral administration.
  • a 3% acylated derivative of the soluble antigen was twice as effective in immunogenicity when injected and four times as effective in oral administration.
  • a soluble glycoprotein antigen succinylated at 3% by weight of the protein was selected, which, when administered orally for 15 days, induced the synthesis of specific antibodies in the titer (1: 1280) and titer (1: 5120), when it was injected application.
  • Example 2. Obtaining an anti-diphtheria vaccine based on a composition of vaccine antigens with a modified charge of molecules
  • the microbial mass is obtained from the production strain PW - 8 Weissensee variant by cultivating C. diphtheriae bacteria in Linguud broth with the addition of 0.3% glucose or maltose. The cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C for 36 hours, after which the microbial mass is separated from the toxin by centrifugation (6000 rpm for 30 minutes). The resulting precipitate ( ⁇ -gram wet weight) is poured with ethanol (concentration 96 °) in a volume of (2-4) p ml, kept in a refrigerator at 4 ° C for 24 hours and centrifuged in the marked mode.
  • Microbial sediment is poured (2-10) p ml of physical. solution, adjust the pH to 7.2-7.4, cool to 4-6 ° C, leave for 3-4 hours, then centrifuged (BOOOob / min. for 30 minutes).
  • a 0.8% solution of ethylenediaminetetraacetate-disodium salt (EDTA-Ka 2 ) is gradually added to the resulting precipitate, and triturated in a porcelain mortar until a white, viscous mass is obtained. It is kept in the refrigerator at a temperature of 4 ° -6 ° C for 18 hours.
  • the extract is centrifuged at bOOOob / min.
  • the selected antigenic complexes include proteins (75.3 ⁇ 3.4)%, lipids (23.3 ⁇ 4.1)% and carbohydrates (1.4 ⁇ 0.4)%.
  • aqueous suspension of somatic antigens is prepared, focusing on obtaining the necessary concentration for oral vaccination (5.0 mg / l), adjust the pH to 8.5-9.0 with a 1.0% sodium hydroxide solution or 1.0% acetic acid acid, set on a spectrophotometer (wavelength 230nm) the exact contents of the protein substance.
  • the somatic complex is modified with succinic anhydride in relation to the protein content.
  • the immunogenic properties of the obtained complexes are determined on chinchilla rabbits weighing 3.0-3.5 kg.
  • the creation of grossimmunity in animals is carried out according to the scheme: twice the introduction of antigen in a dose of 5.0 mg one hour before feeding with a daily interval for five days. Serological examination is performed 7, 14 and 21 days after the last vaccination using a standard diphtheria erythrocyte diagnosticum with a titer of 1: 3200 (see table 1).
  • modified antigens have different ability to influence humoral immunity.
  • the use of a modifier in an amount of 1.0% or less, as well as 5.0% or more with respect to the weight of the protein component did not lead to the induction of antibody titers in animals, while acylation of 2.0-4.0% by weight of the protein led to the induction of protective titers in the blood of orally vaccinated rabbits to a titer of 1: 2560 with preservation of it up to 21 days.
  • the invention relates to medicine and veterinary medicine, and in particular to vaccinology, and can be used to create means of specific prevention
  • the method allows for the modification of existing vaccine antigens directly at a pharmaceutical enterprise, using affordable equipment, significantly reducing the cost of vaccines, reduce their side effects, create oral forms of vaccines. Unique equipment for carrying out the invention is not required.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

The invention can be used in medicine and veterinary science to create oral, parenteral and transdermal vaccines that are effective in the prevention of human and animal diseases. The vaccines with enhanced immunogenicity and the methods for the production thereof are characterized in that, as the specific immunogenic component, vaccine antigens are used which are whole or have been cleaved into oligomer fragments, and the resultant mixture (ensemble) of oligomer fragments or the whole antigen are modified by changing the charge of the molecules to an opposite charge. As a result of their ability to adapt to an organism, such vaccines can be used to protect that organism even from mutant variants of infectious agents which have not yet come into being. The agent has a broad spectrum of use, low toxicity and is suitable for industrial production; it is highly immunogenic, non-allergenic, rapidly metabolized and does not contain toxic ingredients.

Description

Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения Область техники  Vaccines with increased immunogenicity and methods for their preparation
Изобретение относится к ветеринарии и медицине, а именно, к вакцинологии и фармации и предназначено для профилактики и лечения инфекционных и других заболеваний человека и животных, где применяется вакцинация. The invention relates to veterinary medicine and, in particular, to vaccinology and pharmacy and is intended for the prevention and treatment of infectious and other diseases of humans and animals where vaccination is used.
Предшествующий уровень техники State of the art
В современном мире вакцинация является одним из основных методов предотвращения эпидемий. Существуют две основных группы инфекционных заболеваний: группа инфекций, контролируемых вакцинами (применение которых предотвращает эпидемию) - входящих в схемы обязательной вакцинации и вторая группа инфекции, вакцинопрофилактика которых малоэффективна или неэффективна вовсе [']. К первой группе инфекций относятся консервативные микроорганизмы и вирусы, антигенный состав которых неизменен и вакцина индуцирует высокие уровни защитных антител в крови. Это такие инфекции, как дифтерия, коклюш, корь, краснуха и др. Ко второй группе инфекционных заболеваний, при которых вакцинация неэффективна, относят грипп, герпесвирусные инфекции, ВИЧ/СПИД и некоторые другие [2Д4]- Неэффективность вакцин в профилактике этой группы инфекций обусловлена целым рядом причин. Например, вирус гриппа представляет собой полиморфный (вирусная частица не имеет четкой структуры и формы) вирус с фрагментированным изменчивым геномом. In the modern world, vaccination is one of the main methods of preventing epidemics. There are two main groups of infectious diseases: a group of infections controlled by vaccines (the use of which prevents the epidemic) - included in the compulsory vaccination regimen and a second group of infections whose vaccine prophylaxis is ineffective or ineffective at all [']. The first group of infections includes conservative microorganisms and viruses whose antigenic composition is unchanged and the vaccine induces high levels of protective antibodies in the blood. These are infections such as diphtheria, pertussis, measles, rubella, etc. The second group of infectious diseases in which vaccination is ineffective includes influenza, herpes virus infections, HIV / AIDS and some others [ 2 D 4 ] - Vaccines are ineffective in preventing this group infections are caused by a number of reasons. For example, an influenza virus is a polymorphic virus (a virus particle does not have a clear structure and shape) with a fragmented variable genome.
Вирус гриппа очень изменчив и способен к персистенции (пожизненному нахождению в организме человека) [5]. В организме человека и животных (в т.ч. птицы [6]) этот вирус размножается в несколько стадий - в острую продуктивную фазу инфицированная клетка выделяет вирусные частицы, способные заражать соседние клетки [7]. В фазу персистенции (латентную фазу) этот вирус «пережидает» внутри клетки, при этом утрачивая часть фрагментированного генома или захватывая куски Influenza virus is very variable and capable of persistence (lifetime in the human body) [ 5 ]. In humans and animals (including birds [ 6 ]), this virus multiplies in several stages - in the acute productive phase, an infected cell releases virus particles that can infect neighboring cells [ 7 ]. In the persistence phase (latent phase), this virus “waits” inside the cell, while losing part of the fragmented genome or capturing pieces
о  about
человеческой РНК в цитоплазме [ ]. Согласно статистике, антигенный состав вируса гриппа в месяц меняется на 5% [9]. Соответственно, применение стандартных подходов к разработке антигриппозных вакцин является бесперспективным. Даже применение рекомбинантных белков и новых видов генных вакцин не избавляет такие препараты от быстрого устаревания. Наличие в одной ампуле нескольких консервативных белков (например, гемагглютининов и нейраминидаз для вируса гриппа) не позволяет защитить организм от вирусной агрессии через индукцию выработки специфичных антител. Эти антитела будут иметь совершенно не ту моноклональную специфичность, которая будет необходима при таком уровне мутации вирусов. Изменение подхода к проектированию вакцин должно сопровождаться включением в состав вакцин таких антигенов, которые еще не появились в результате мутации вирусов [10]. Так называемое предиктивное включение антигенов возможно двумя путями: классическим с применением методов эпидемиологического прогнозирования антигенного дрейфа и путем частичной модификации антигенов с получением неограниченного количества комбинаций антигена в одной ампуле антигена [п]. Первое направление себя оправдало лишь частично: ни в одном случае прогноз антигенного дрейфа не совпал с реальными мутационными изменениями нейраминидазы и гемагглютинина гриппа [12,13]. Если использовать технологию частичной модификации белкового компонента вакцинного антигена, например, нейраминидазы 1 типа, в процессе приготовления вакцины, то в одной дозе вакцины вместо одного белка с одним антигенным профилем появится более миллиона белков с одной первичной и вторичной структурой, но разными сайтами замещения и разным антигенным профилем. human RNA in the cytoplasm []. According to statistics, the antigenic composition of the influenza virus per month changes by 5% [ 9 ]. Accordingly, the application of standard approaches to the development of influenza vaccines is unpromising. Even the use of recombinant proteins and new types of gene vaccines does not relieve such drugs from rapid obsolescence. The presence of several conservative proteins in one ampoule (for example, hemagglutinins and neuraminidases for the influenza virus) does not protect the body from viral aggression by inducing the production of specific antibodies. These antibodies will have completely the wrong monoclonal specificity, which will be necessary at this level of virus mutation. A change in the approach to vaccine design should be accompanied by the inclusion of such antigens in the vaccines that have not yet appeared as a result of virus mutations [ 10 ]. The so-called predictive inclusion of antigens is possible in two ways: the classical one using the methods of epidemiological prediction of antigenic drift and by partially modifying the antigens to obtain an unlimited number of antigen combinations in one antigen ampoule [ p ]. The first direction justified itself only partially: in no case did the prognosis of antigenic drift coincide with real mutational changes in neuraminidase and influenza hemagglutinin [ 12 , 13 ]. If we use the technology of partial modification of the protein component of the vaccine antigen, for example, type 1 neuraminidase, during the preparation of the vaccine, then in a single dose of the vaccine instead of a single protein with one antigenic profile, more than a million proteins with one primary and secondary structure, but different substitution sites and different antigenic profile.
Индуцированные этим белком антитела будут перекрывать все возможные комбинации сайтов присоединения. Соответственно, количество индуцированных моноклонов будет на порядок выше, хотя белок останется тот же самый. При этом любой «будущий» эпитоп структуры нейраминидазы будет перекрыт уже синтезированными антителами.  The antibodies induced by this protein will block all possible combinations of attachment sites. Accordingly, the number of induced monoclones will be an order of magnitude higher, although the protein will remain the same. Moreover, any “future” epitope of the structure of neuraminidase will be blocked by already synthesized antibodies.
Такой подход позволяет: резко сократить количество антигена для вакцинации, защищать организм от вирусов с фрагментированным геномом и высокоизменчивых микроорганизмов небольшим количеством антител, но со значительно большим спектром моноклональной специфичности. Грубо говоря, вакцина будет содержать набор даже тех антигенов нейраминидазы, которые еще не существуют. При этом в крови вакцинированных ранее животных уже будет находиться необходимый пулл антител к «будущему» штамму вируса. Применение такой вакцины позволит успешно защищать организм от высокоизменчивых персистирующих, а также низкоиммуногенных вирусов и микроорганизмов.  This approach allows you to: drastically reduce the amount of antigen for vaccination, protect the body from viruses with a fragmented genome and highly variable microorganisms by a small amount of antibodies, but with a significantly larger spectrum of monoclonal specificity. Roughly speaking, the vaccine will contain a set of even those neuraminidase antigens that do not yet exist. Moreover, the necessary pool of antibodies to the “future” strain of the virus will already be in the blood of previously vaccinated animals. The use of such a vaccine will successfully protect the body from highly variable persistent, as well as low immunogenic viruses and microorganisms.
Всемирная организация здравоохранения определила приоритетным направление исследований по замене парентеральных вакцин на пероральные [14]. Непарентеральные способы вакцинации базируются на способности антигенов проникать через слизистые оболочки главным образом кишечного тракта. Применение пероральных вакцин позволяет обеспечить непрерывность антигенного стимула, который является обязательным условием поддерживания на высоком уровне коллективного иммунитета против инфекций, управляемых средствами специфической профилактики. К тому же такой способ иммунизации является самым простым, физиологически адекватным и психологически привлекательным. The World Health Organization has prioritized research on replacing parenteral vaccines with oral vaccines [ 14 ]. Non-parenteral vaccination methods are based on the ability of antigens to penetrate the mucous membranes the shell is mainly the intestinal tract. The use of oral vaccines ensures the continuity of the antigenic stimulus, which is a prerequisite for maintaining a high level of collective immunity against infections controlled by specific prophylaxis. In addition, this method of immunization is the simplest, physiologically adequate and psychologically attractive.
Известен способ [15] повышения иммуногенности путем экспрессии холерного токсинного антигена в химерный белок растений. Известный способ повышения иммуногенности нуклеопротеинов вируса гепатита В путем ковалентного связывания аминогрупп этого белка с микробным гаптеном. Такая конъюгация позволила поднять иммуногенность вакцины и вызывать индукцию титра антител до уровня 1 :128 (при вакцинации животных нативным белком титр антител не превышал 1 :32). Эта технология не может быть использована для повышения иммуногенности других вакцин (микробных и вирусных), потому что рассчитанная исключительно на белок, который индуктируется в ядре клетки вирусом гепатита В. Кроме того, пероральное использование такой вакцины невозможно, потому что кишечные ферменты разрушают антиген. Недостаточно эффективным представляется и сам метод конъюгации, поскольку титры антител к модифицированному антигену возрастали лишь в 4 раза. Ближайшим к патентуемому средству является способ получения водорастворимого адъюванта [16]. Этот адъювант содержит фрагменты пептидогликана и полисахарида с ацетилглюкозамином, и ацилмурамовой кислотой. Последняя вместо ацетил овой группы была модифицирована антарным или фталевым ангидридом. Пептид огликан изымали из клеточной стенки микроорганизмов рода Nocardia, и ацилировали 30-50% за массой пептидогликана. Применение такого способа дало возможность повысить иммуногенность микробного антигена на 25-30% против стандартной инъекционной вакцины. Титры специфических антител росли до 1 :256-1 :512 через два недели после вакцинации. Получение чистого пептидогликана является важной процедурой, так как она связана с многостадийной очисткой. Кроме того, такие вакцины были полностью неэффективными при пероральном применении, потому что разрушались кишечными ферментами; в связи с тем, что ад'ювант не имел ковал ентных связей с антигеном, наблюдалась значительная разница между титром антител к адъюванту (1 :400) и титром антител к микробному антигену (1 :100). К отличиям обоих изобретений следует отнести, в первую очередь, отнести применение указанного ангидрида для модификации разных за химической природой антигенных комплексов: пептидогликана - в аналоге, белковой субстанции - в предлагаемом изобретении. Кроме того, в известном изобретении ацилированию поддается антигенный комплекс, который применяется в качестве адъюванта, а в заявленной модели остатки органических кислот в структуре модифицированного антигену сами выступают адъювантными соединениями. Раскрытие изобретения A known method [ 15 ] of increasing immunogenicity by expressing a cholera toxin antigen in a plant chimeric protein. A known method of increasing the immunogenicity of hepatitis B virus nucleoproteins by covalent binding of the amino groups of this protein to microbial haptens. Such conjugation made it possible to increase the immunogenicity of the vaccine and induce the titer of antibodies to a level of 1: 128 (when vaccinating animals with a native protein, the titer of antibodies did not exceed 1: 32). This technology cannot be used to increase the immunogenicity of other vaccines (microbial and viral), because it is designed exclusively for the protein that is induced in the cell nucleus by hepatitis B. In addition, oral use of such a vaccine is impossible, because intestinal enzymes destroy the antigen. The conjugation method itself also seems to be insufficiently effective, since the titers of antibodies to the modified antigen increased only 4 times. The closest to the patented tool is a method of obtaining a water-soluble adjuvant [ 16 ]. This adjuvant contains fragments of peptidoglycan and polysaccharide with acetylglucosamine and acylmuramic acid. The latter, instead of the acetyl group, was modified with antaric or phthalic anhydride. The oligan peptide was removed from the cell wall of microorganisms of the genus Nocardia, and 30-50% by weight of the peptidoglycan was acylated. The use of this method made it possible to increase the immunogenicity of the microbial antigen by 25-30% against a standard injection vaccine. Specific antibody titers grew to 1: 256-1: 512 two weeks after vaccination. Obtaining pure peptidoglycan is an important procedure, since it is associated with multi-stage purification. In addition, such vaccines were completely ineffective when taken orally because they were destroyed by intestinal enzymes; due to the fact that the adjuvant had no covalent bonds with the antigen, a significant difference was observed between the titer of antibodies to the adjuvant (1: 400) and the titer of antibodies to the microbial antigen (1: 100). The differences between both inventions should include, first of all, the use of the indicated anhydride for modification of antigenic complexes different in chemical nature: peptidoglycan - in analogue, protein substance - in the present invention. In addition, in the known invention acylation amenable to the antigenic complex, which is used as an adjuvant, and in the claimed model, the residues of organic acids in the structure of the modified antigen themselves act as adjuvant compounds. Disclosure of invention
Задачей изобретения является разработать вакцины с повышенной иммуногенностью и эффективностью, в том числе при пероральном применении, и способ их получения.  The objective of the invention is to develop vaccines with increased immunogenicity and effectiveness, including when administered orally, and a method for their preparation.
Поставленная задача решается путем разработки вакцин с повышенной иммуногенностью и способа их получения, отличающийся тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента используют нарезанный на олигомерные фрагменты вакцинный антиген - полисахарид, белок, липополисахарид либо цельный антиген - бактерию, вирус, смесь белков бактерии или вируса, а полученная смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицирована путем изменения заряда на противоположный путем ацилирования янтарным ангидридом или алкилированием монохлоруксусной кислотой; также в качестве специфического иммуногенного компонента используют вакцинный антиген с частично измененным на противоположный зарядом молекулы, изменение заряда которого проводят ацилированием или алкилированием с образованием смеси (ансамбля) вакцинных антигенов с разным зарядом молекул. Нами использован ансамбль из нарезанных на олигомерные фрагменты вакцинных антигенов, являющихся специфическими иммуногенными компонентами с измененными на противоположные зарядами молекул. Супрамолекулярный ансамбль или ансамбль - термин из супрамолекулярной химии. Объекты супрамолекулярной химии— супрамолекулярные ансамбли, строящиеся самопроизвольно из комплементарных, т. е. имеющих геометрическое и химическое соответствие фрагментов, подобно самопроизвольной сборке сложнейших пространственных структур в живой клетке [ , ]  The problem is solved by developing vaccines with increased immunogenicity and a method for their preparation, characterized in that the vaccine antigen cut into oligomeric fragments, a polysaccharide, a protein, a lipopolysaccharide or a whole antigen, is used as a bacterium, a virus, a mixture of bacteria or virus proteins, and the resulting mixture (ensemble) of oligomeric fragments is modified by reversing the charge by acylation with succinic anhydride or by alkylation with monochlorax tartaric acid; Also, as a specific immunogenic component, a vaccine antigen with a partially reversed molecular charge is used, the charge change of which is carried out by acylation or alkylation to form a mixture (ensemble) of vaccine antigens with different molecular charges. We used an ensemble of vaccine antigens cut into oligomeric fragments, which are specific immunogenic components with molecules reversed to opposite charges. Supramolecular ensemble or ensemble is a term from supramolecular chemistry. The objects of supramolecular chemistry are supramolecular ensembles built spontaneously from complementary, that is, having geometrical and chemical correspondence of fragments, similar to spontaneous assembly of complex spatial structures in a living cell [,]
Эта технология может быть использована для создания других вакцин: для профилактики таких инфекций, как грипп, гепатиты, вирусы герпеса, кори, краснухи, ВИЧ/СПИД, вирусных инфекций животных: болезни Нью- асла, инфекционной бурсальной болезни птицы, классической чумы свиней, африканской чумы свиней и любых других заболеваний. В связи с частичной модификацией структуры в процессе реакции модификации образуется огромное количество разнообразных производных вакцинного антигена с разной иммуногенностью и структурой и соответственно иммунная система индуцирует синтез большего количества моноклонов в ответ на эти новые антигенные детерминанты. Кроме того, такое разнообразие новые эпитопов (сотни тысяч или даже миллионы) позволяет предиктивно защищать организм от еще несуществующих будущих штаммов гриппа и мутантных вирусов ВИЧ/СПИД. Краткое описание чертежей This technology can be used to create other vaccines: for the prevention of infections such as influenza, hepatitis, herpes viruses, measles, rubella, HIV / AIDS, animal viral infections: Newasle disease, infectious bursal disease of the bird, classical swine fever, African swine fever and any other diseases. Due to the partial modification of the structure during the modification reaction, a huge number of various vaccine antigen derivatives with different immunogenicity and structure are formed and, accordingly, the immune system induces the synthesis of a larger number of monoclones in response to these new antigenic determinants. In addition, such a variety of new epitopes (hundreds of thousands or even millions) allows us to predictively protect the body from future nonexistent strains of the flu and mutant HIV / AIDS viruses. Brief Description of the Drawings
Фиг. 1 - Зависимость между титром индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования корпускулярного синегнойного антигену  FIG. 1 - The relationship between the titer of specific antibodies induced and the degree of acylation of the corpuscular Pseudomonas antigen
Фиг.2 - Зависимость между титром индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования растворимого высокомолекулярного синегнойного антигена Лучший вариант осуществления изобретения  Figure 2 - The relationship between the titer of inducible specific antibodies and the degree of acylation of soluble high molecular weight Pseudomonas antigen The best embodiment of the invention
Пример 1 - Получение синегнойной вакцины на основе композиции вакцинных антигенов с измененным зарядом молекул Example 1 - Obtaining Pseudomonas vaccine based on a composition of vaccine antigens with a modified charge of molecules
Синегнойную палочку культивировали на твердой питательной среде (МПБ с добавлением 1% глюкозы). Через трое суток поверхность питательной среды всплошную была покрыта синьогнойной палочкой. Из поверхности среды в чашке Петри делали смыв 0,9 % раствором натрия хлорида, а полученную суспензию трехкратно отмывали и центрифугували. После повторного суспендирования суспензию микроорганизмов прогревали в термостате в течение 140 минут при 80 0 С, а затем опять засевали на ПМА с целью контроля инактивации. По количеству микробных тел полученная суспензия отвечала 10 млрд. клеток /мл; затем 0,1 мл суспензии разводили в 100 раз 0,9% раствором натрия хлорида и устанавливали концентрацию поверхностных белков с помощью Биуретового метода и в реакции комплексообразования с бромфеноловым голубым методом Флореса [3]. В пересчете на белок проводили реакцию ацилирования раствором янтарного ангидрида как было показано в примере 1 [6]. Получили 8 образцов с разными степенями ацилирования: 1%, 3%, 5%, 7%, 9%, 11%, 13 %, 15%. Превышение 15% полностью лишает иммуногенности сукцинилированные белки, потому производные со степенями модификации, большими за 15% не считали целесообразным получать и использовать в дальнейшем. Корпускулярный антиген с разной степенью ацилирования дальше использовали для установления его иммуногенности. Другую часть антигена центрифугировали 40 минут при 3 тыс. об/мин. Осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость пропускали через колонку из сефадексом G-75. Первую, самую тяжелую фракцию собирали и использовали дальше для установления концентрации белка и степени химической модификации. Полученный антиген представлял собой однородную фракцию (одно полимерное вещество) и имел молекулярную массу 1,5 мДа и заряд - 186000 . Получали растворимый гликопротеидный антиген с такими степенями ацилирования: 1%, 3%, 5%, 7%, 9%, 11%, 13 %, 15%. Pseudomonas aeruginosa was cultured on solid nutrient medium (BCH with the addition of 1% glucose). After three days, the surface of the nutrient medium was completely covered with a pseudomonas aeruginosa. Washings were made from the surface of the medium in a Petri dish with a 0.9% sodium chloride solution, and the resulting suspension was washed three times and centrifuged. After re-suspension, the suspension of microorganisms was heated in a thermostat for 140 minutes at 80 0 C, and then again sown on PMA in order to control inactivation. According to the number of microbial bodies, the resulting suspension corresponded to 10 billion cells / ml; then 0.1 ml of the suspension was diluted 100 times with 0.9% sodium chloride solution and the concentration of surface proteins was established using the Biuret method and in the complexation reaction with the bromophenol blue Flores method [3]. In terms of protein, the acylation reaction of succinic anhydride was carried out as shown in example 1 [6]. Received 8 samples with different degrees of acylation: 1%, 3%, 5%, 7%, 9%, 11%, 13%, 15%. Exceeding 15% completely deprives immunogenicity of succinylated proteins; therefore, derivatives with degrees of modification greater than 15% were not considered advisable to receive and use in the future. Corpuscular antigen with varying degrees of acylation was further used to establish its immunogenicity. The other part of the antigen was centrifuged for 40 minutes at 3 thousand rpm. The precipitate was discarded, and the supernatant was passed through a Sephadex G-75 column. The first, heaviest fraction was collected and used further to establish the protein concentration and degree of chemical modification. The resulting antigen was a homogeneous fraction (one polymer substance) and had a molecular weight of 1.5 mDa and a charge of 186000. Received a soluble glycoprotein antigen with such degrees of acylation: 1%, 3%, 5%, 7%, 9%, 11%, 13%, 15%.
Общеизвестно, что при использовании фильтрации геля распределение белков проходить по размерам белковой глобулы. Гель-фильтрацию [7] проводили на колонках, заполненных гелем сефадекс G-75. Общий объем столбика геля определяли Vt. В течение элюирования крупные молекулы, которые не проникают в гранулы геля, двигаются с большой скоростью совместно с межгранульным растворителем и появляются в виде узкой полосы. Объем элюента, который соответствует появлению этой зоны, определяли как V0 (свободный объем). Менее крупные молекулы проходили колонку медленно, проникали в гранулы геля, а выход их из колонки был весьма долговременным. В связи с тем, что степень диффузии в гранулы геля зависит от размера молекул, вещества выделяются из колонки в порядке уменьшения их молекулярной массы. Молекулярная масса М опытного протеида устанавливалась путем сравнения объема элюирования Ve с аналогичным параметром белков-маркеров. It is well known that when using gel filtration, the distribution of proteins proceeds according to the size of the protein globule. Gel filtration [7] was performed on columns filled with Sephadex G-75 gel. The total volume of the gel column was determined by Vt. During elution, large molecules that do not penetrate into the granules of the gel move with high speed together with the intergranular solvent and appear as a narrow strip. The volume of eluent, which corresponds to the appearance of this zone, was determined as V 0 (free volume). Smaller molecules passed the column slowly, penetrated into the gel granules, and their exit from the column was very long-term. Due to the fact that the degree of diffusion into the granules of the gel depends on the size of the molecules, substances are released from the column in order of decreasing molecular weight. The molecular mass M of the experimental proteid was determined by comparing the volume of Ve elution with a similar parameter of marker proteins.
Для выделения антигена использовали колонку диаметром 25 мм и длиной 1000 мм Гель сефадекс G-75 и G-25 предварительно готовили таким образом: к буферному раствору (0,1 М ТРИС -НС1 и 0,1 М NaCl, рН=8,0) медленно добавляли гранулы геля, удерживали в термостате 72 часа при t = 37 ОС. Потом гель диаэрировали (постепенно и осторожно перемешивали в избыточном количестве буферного раствора для удаления газовых пузырей) на шейкере на протяжении часа. На дно колонки клали фильтровальную бумагу. К колонке медленно добавляли немного буферного раствора, потом по стенке переносили небольшое количество (5 г) суспензии набухнувших гранул геля сефадекс G-25. После формирования столбика геля, через колонку пропускали не менее двух объемов рабочего буферного раствора. Затем наносили микропипеткой 100 мкл раствора образца. Постоянную скорость элюирования задавали благодаря установлению над колонкой капельницы с буферным раствором и роликом регулировали скорости элюирования. Элюат собирали в пробирки по 0,5 мл и анализировали на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 280 нм за методикой [4].  A column with a diameter of 25 mm and a length of 1000 mm was used to isolate the antigen. Sephadex G-75 and G-25 gel were preliminarily prepared as follows: to a buffer solution (0.1 M TRIS-HCl and 0.1 M NaCl, pH = 8.0) gel granules were slowly added, kept in a thermostat for 72 hours at t = 37 ° C. Then the gel was diaererified (gradually and carefully mixed in excess buffer solution to remove gas bubbles) on a shaker for an hour. Filter paper was placed at the bottom of the column. A little buffer solution was slowly added to the column, then a small amount (5 g) of a suspension of swollen Sephadex G-25 gel pellets was transferred along the wall. After the gel column was formed, at least two volumes of the working buffer solution were passed through the column. Then, 100 μl of the sample solution was micropipeted. A constant elution rate was set due to the establishment of a dropper with a buffer solution over the column, and the elution rate was controlled by a roller. The eluate was collected in 0.5 ml tubes and analyzed on an SF-56 spectrophotometer at a wavelength of 280 nm following the procedure [4].
Антисинегнойная сыворотка для диагностический целей с титром специфических антисинегнойных антител (1 :1000) была получена по стандартной схеме иммунизации мышей, по схеме [1] термически инактивированной корпускулярной синегнойной вакциной с концентрацией частиц 10 млрд./мл., которую вводили на 3; 5 и 7 сутки в дозе 0,2 мл внутримышечно. Для получения контрольной сыворотки использовали 20 мышей. Для иммунизации животных в опыт взяты ацилированные образцы как корпускулярного антигена (по 10 животных в группе на один образец, 8 групп) так и ацилированного растворимого антигена (8 образцов по 10 животных на образец). Первой группе животных вводили 8 образцов антигена (по 10 животных на каждый образец перорально по 0,2 мл) по схеме Пастера (в 1; 3 и 7 дни), второй группе - по схеме профессора Бабича Е.М. (через день по 0,2 мл перорально в течение 15 дней) [1]. Уровень антител устанавливали двумя методами: реакцией гемаглютинации и методом флуоресцирующих антител. По 3 животных из каждой группы оставляли живыми до 15 суток, убивали эфиром и получали сыворотку, где также устанавливали уровень специфических антител вышеприведенными методами. Для реализации указанного готовили тест-систему для реакции прямой гемагглютинации, которую проводили в 96- луночных круглодонных иммунологических планшетах, куда добавляли по 0,02 мл 0,1% суспензии термостатированных эритроцитов барана и по 0,02 мл суспензии термоинактивированных клеток синегнойной палочки в концентрации 10 млрд. клеток /мл. Уровень антител устанавливали последовательными десятикратными (но двукратными) разведениями сывороток крови мышей, которые добавляли в количестве 0,02 мл к лункам планшетов. Наличие агглютинатов свидетельствовало об образовании иммунных комплексов. Как контрольные использовали нормальный человеческий иммуноглобулин (титр антисинегнойных антител составлял от 0 к (1 :10) согласно АНД) и сыворотку крови невакцинированных мышей (титр от 0 до 1 : 10). Anti-Pseudomonas serum for diagnostic purposes with a titer of specific anti-Pseudomonas antibodies (1: 1000) was obtained according to the standard scheme for immunizing mice, according to the scheme [1] of a thermally inactivated corpuscular Pseudomonas vaccine with a particle concentration of 10 billion / ml, which was administered at 3; 5 and 7 days at a dose of 0.2 ml intramuscularly. To obtain control serum, 20 mice were used. For immunization of animals, acylated samples of both corpuscular antigen (10 animals per group per sample, 8 groups) and acylated soluble antigen (8 samples, 10 animals per sample) were tested. The first group of animals was injected with 8 samples of antigen (10 animals per oral sample of 0.2 ml) according to the Pasteur scheme (on days 1, 3 and 7), the second group - according to the scheme of Professor Babich E.M. (every other day, 0.2 ml orally for 15 days) [1]. The level of antibodies was established by two methods: a hemagglutination reaction and a method of fluorescent antibodies. Three animals from each group were left alive for up to 15 days, killed with ether and serum was obtained, where the level of specific antibodies was also established by the above methods. To implement this, a test system was prepared for the direct hemagglutination reaction, which was carried out in 96-well round-bottom immunological plates, to which 0.02 ml of a 0.1% suspension of thermostated ram red blood cells and 0.02 ml of a suspension of thermally inactivated Pseudomonas aeruginosa cells were added at a concentration 10 billion cells / ml. Antibody levels were determined by serial ten-fold (but twofold) dilutions of the blood sera of mice, which were added in an amount of 0.02 ml to the wells of the plates. The presence of agglutinates testified to the formation of immune complexes. As controls, we used normal human immunoglobulin (the titer of anti-pseudomonas antibodies ranged from 0 to (1: 10) according to the AED) and the blood serum of unvaccinated mice (titer from 0 to 1: 10).
Первым образцом была модель корпускулярной вакцины на основе инактивированной пастеризацией синегнойной палочки. Ацилировали только поверхностные антигены. Степень ацилирования колебалась от 1% до 15 % с шагом в 2 %. Всего исследовано по 8 образцов модифицированного растворимого антигену и по 8 корпускулярного антигену. Результаты исследования иммуногенности полученных образцов иллюстрируют данные Фиг. 1.  The first sample was a corpuscular vaccine model based on inactivated pasteurization of Pseudomonas aeruginosa. Only surface antigens were acylated. The degree of acylation ranged from 1% to 15% in increments of 2%. A total of 8 samples of the modified soluble antigen and 8 corpuscular antigens were examined. The results of the immunogenicity study of the obtained samples are illustrated in FIG. one.
Как видно из Фиг. 1, на 15 сутки после инъекционного введения нативного вакцинного препарата средний титр антител у вакцинированных животных составлял (1 :640). При этом пероральное использование нативного корпускулярного антигену не вызывало индукцию синтеза специфических антител.  As can be seen from FIG. 1, on the 15th day after the injection of the native vaccine, the average antibody titer in vaccinated animals was (1: 640). In this case, oral use of the native corpuscular antigen did not induce the synthesis of specific antibodies.
Химически модифицированный антиген из степенью модификации в 1 % от концентрации в нем белка индуцировал синтез такого же уровня антител, как и нативный антиген (1 :640). Модификация поверхностных антигенов на 3 % приводила к индукции антител на уровне (1 :320) для перорального варианта и на уровне (1 :2560) для инъекционного варианта. Для производных антигенов с другими степенями ацилирования при их пероральнрм применении не наблюдалось индукции синтеза специфических антисинегнойных антител. При этом, инъекционный вариант был эффективным даже к производному с 15% степенью ацилирования. Так, производное со степенью ацилирования 5% индуцировало синтез антител на уровне (1 :1280), производное с 7% степенью ацилирования антигена - на уровне (1: 320), производное из 9% - на уровне (1 :40), другие варианты (с 11% и 15% степенью модификации) - на уровне (1 :20). A chemically modified antigen with a degree of modification of 1% of the protein concentration in it induced the synthesis of the same level of antibodies as the native antigen (1: 640). Modification of surface antigens by 3% led to the induction of antibodies at the level of (1: 320) for the oral variant and at the level of (1: 2560) for the injection variant. For derivatives of antigens with other degrees of acylation during their oral administration, no induction of the synthesis of specific anti-Pseudomonas antibodies was observed. Moreover, the injection option was effective even to the derivative with a 15% degree of acylation. Thus, a derivative with an acylation degree of 5% induced the synthesis of antibodies at the level of (1: 1280), a derivative with a 7% degree of acylation of the antigen at a level of (1: 320), a derivative of 9% at a level of (1: 40), other variants (with 11% and 15% degree of modification) - at the level of (1: 20).
Таким образом, наиболее эффективным оказалось производное со степенью ацилирования 3%, которое индуцировало синтез специфических антител как при использовании классической схемы вакцинации Л. Пастера при инъекционном применении так и при использовании схемы вакцинации Е. Бабича при пероральном применении вакцины.  Thus, the derivative with an acylation degree of 3% turned out to be the most effective, which induced the synthesis of specific antibodies both when using the classical L. Pasteur vaccination regimen for injectable use and when using the E. Babich vaccination regimen for oral administration of the vaccine.
На следующем Фиг. 2 приведенная зависимость между уровнем индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования растворимого модифицированного антигена (первая фракция).  In the following FIG. Figure 2 shows the relationship between the level of specific antibodies induced and the degree of acylation of soluble modified antigen (first fraction).
Этот вариант антигена-кандидата представляет собой химическую монокомпонентную вакцину на основе гликопротеидного модифицированного высокомолекулярного антигена с массой 1,5 мДа и зарядом молекулы 186000. Именно наибольшая молекулярная масса или первая фракция, которая выходит из колонки при разделе фракций, оказывалась наиболее иммуногенной. При исследовании структуры полученного антигена была подтверждена корреляция между изменением заряда и массы антигена, который подтверждает состояние завершения химической реакции модификации структуры антигена. Следует обратить внимание на интересный факт, обнаруженный во время инъекционной вакцинации мышей: введение немодифицированной вакцины (на седьмой день - третий раз) вызывало у части животных проявления аллергической реакции в виде тремора, падения двигательной активности и отказа от употребления пищи на протяжении суток.  This variant of the candidate antigen is a chemical monocomponent vaccine based on a glycoprotein modified high molecular weight antigen with a mass of 1.5 mDa and a molecular charge of 186,000. It was the largest molecular weight or the first fraction that comes out of the column when the fractions are divided that turned out to be the most immunogenic. When studying the structure of the obtained antigen, a correlation between the change in charge and mass of the antigen was confirmed, which confirms the state of completion of the chemical reaction of the modification of the structure of the antigen. Attention should be paid to an interesting fact discovered during injection vaccination of mice: the introduction of an unmodified vaccine (on the seventh day - the third time) caused an allergic reaction in some animals in the form of tremor, decreased motor activity and refusal to eat during the day.
При этом, введение всех модифицированных вариантов вакцины не вызывало побочных явлений у животных. Ацилированный вариант растворимого антигена со степенью ацилирования 1% (рис. 14), как и неацилированный антиген вызывал индукцию синтеза одинакового количества антител в титре (1 :1280). Пероральное применение растворимого антигена и антигена со степенью ацилирования в 1% не приводило к существенной индукции синтеза специфических антисинегнойных антител. Производное растворимого антигена со степенью ацилирования 3% активировало синтез антител на уровне (1:5120) в инъекционном варианте и (1 :1280) при пероральном использовании. Ацилированное на 5% производное индуцировало синтез специфических антител на уровне (1 : 640) для пероральной формы применения и на уровне (1 :2560) - для инъекционной формы. Производное со степенью ацилирования 7% индуктировало синтез специфических антител на уровне (1 :640) - для пероральной формы и (1 : 1280) для инъекционной. Для растворимого антигена со степенью ацилирования 1 1% соответствующий уровень индуцируемых специфических антител составлял (1 :320) для оральной формы вакцины и (1 :640) - для инъекционной формы. Уровни синтеза антител уравнялись у вакцинированных животных при пероральном и инъекционном применении лишь при использовании вакцинного препарата с уровнем ацилирования 13% и равнялись 1 :40, а при степени ацилирования в 15% иммуногенной была только инъекционная форма вакцины - кандидата, она индуктировала синтез антител на уровне (1 :20). Moreover, the introduction of all modified variants of the vaccine did not cause side effects in animals. The acylated variant of soluble antigen with an acylation degree of 1% (Fig. 14), like the unacylated antigen, induced the synthesis of the same amount of antibodies in the titer (1: 1280). Oral administration of soluble antigen and antigen with an acylation degree of 1% did not lead to a significant induction of the synthesis of specific anti-Pseudomonas antibodies. A soluble antigen derivative with an acylation degree of 3% activated the synthesis of antibodies at the level of (1: 5120) in the injection version and (1: 1280) when taken orally. A 5% acylated derivative induced the synthesis of specific antibodies at the level (1: 640) for the oral form of administration and at the level (1: 2560) for the injectable form. The derivative with an acylation degree of 7% induced the synthesis of specific antibodies at the level of (1: 640) for the oral form and (1: 1280) for the injectable. For a soluble antigen with an acylation degree of 1 1%, the corresponding level of specific antibodies induced was (1: 320) for the oral form of the vaccine and (1: 640) for the injectable form. The levels of antibody synthesis were equalized in vaccinated animals when administered orally and injected only when using a vaccine preparation with an acylation level of 13% and equal 1: 40, and when the degree of acylation was 15%, only the injection form of the candidate vaccine was immunogenic, it induced antibody synthesis at the level (1: 20).
Таким образом, характерным отличием растворимого высокомолекулярного антигену оказалась индукция синтеза антител не только производным со степенью ацилювання 3%, но производными со степенями ацилирования 5 %, 7%, 1 1%, 13% при пероральном применение по выше отмеченной схеме Бабича Е.М. В четыре раза большим был титр антител при инъекционном применении самого эффективного производного со степенью ацилирования 3%, чем при его же пероральном применении. В сравнении с корпускулярным модифицированным антигеном, ацилированное на 3% производное растворимого антигену было вдвое эффективнее по иммуногенности при инъекционном и в четыре раза более эффективным - при пероральном его применении. Невзирая на значительно большую антигенную нагрузку, чем при инъекционном использовании, пероральное применение частично ацилированный растворимый антиген оказался эффективным и индуцировал уровень антител, который в перспективе в состоянии долговременно (год и больше) защищать организм от синтегнойной инфекции. Использование пероральной вакцинации, несомненно, является перспективным направлением усовершенствования иммунобиологических средств.  Thus, the characteristic difference between the soluble high molecular weight antigen was the induction of antibody synthesis, not only derivatives with acylation degree of 3%, but derivatives with acylation degrees of 5%, 7%, 1 1%, 13% for oral administration according to the above scheme of Babich E.M. The antibody titer was four times greater when injected with the most effective derivative with an acylation degree of 3% than with oral administration. Compared with the corpuscular modified antigen, a 3% acylated derivative of the soluble antigen was twice as effective in immunogenicity when injected and four times as effective in oral administration. Despite the significantly greater antigenic load than when injected, the oral administration of a partially acylated soluble antigen was effective and induced an antibody level that in the long term is able to protect the body from synth infection for a long time (a year or more). The use of oral vaccination is undoubtedly a promising area for improving immunobiological agents.
Среди полученных вариантов ацилированных антигенов выбрано сукцинилированный на 3 % от массы белка растворимый гликопротеидный антиген, который при пероральном применении на 15 сутки вызывал индукцию синтеза специфических антител в титре (1 :1280) и к титра (1 :5120), - при его же инъекционном применении .  Among the obtained variants of acylated antigens, a soluble glycoprotein antigen succinylated at 3% by weight of the protein was selected, which, when administered orally for 15 days, induced the synthesis of specific antibodies in the titer (1: 1280) and titer (1: 5120), when it was injected application.
Пример 2.- Получение антидифтерийной вакцины на основе композиции вакцинных антигенов с измененным зарядом молекул Микробную массу получают из производственного штамма PW - 8 вариант Вейсензее путем культивирования бактерий С. diphtheriae на бульоне Лингуда с добавлением 0,3% глюкозы или мальтозы. Культивирование проводят при температуре 37°С в течение 36 часов, после чего микробную массу отделяют от токсина с помощью центрифугирования (6000 об/хв. в течение 30 минут). Полученный осадок (η-грам сырой массы) заливают этанолом (концентрация 96°) в объеме (2-4) п мл, выдерживают в холодильнике при температуре 4°С 24 часа и центрифугуют в отмеченном режиме. Микробный осадок заливают (2-10) п мл физ. раствором, доводят рН до 7,2-7,4, охлаждают до 4-6°С, оставляют на 3-4 часа, дальше центрифугуют (бОООоб/мин. в течение 30 минут). К полученному осадку постепенно добавляют 0,8% раствор этилендиаминтетраацетата-динатриевой соли (ЕДТА-Ка2), одновременно растирают в фарфоровой ступке до получения белой, тягучей массы. Выдерживают в холодильнике при температуре 4°-6°С 18 часов. Экстракт центрифугируют при бОООоб/мин. В течение 30 минут, после чего проводят диализ против дистиллированной воды при рН 7,2-7,5 и сгущают полиэтиленгликолем с молекулярной массой 15000 Да или сефадексом G 200 Superfine 1 к объему п мл. Экстракт ЕДТА переосаждают при рН 7,0. В состав выделенных антигенных комплексов входят белки (75,3±3,4)%, липиды (23,3±4,1)% и углеводы (1,4±0,4)%. Готовят водную суспензию соматических антигенов, ориентируясь на получение необходимой их концентрации для проведения пероральной прививки (5,0 мг/л), доводят рН до 8,5-9,0 с помощью 1,0% раствора гидроокиси натрия или 1,0% уксусной кислоты, устанавливают на спектрофотометре (длина волны 230нм) точное содержимое белковой субстанции. Соматический комплекс модифицируют янтарным ангидридом по отношению к содержимому белку. Иммуногенные свойства полученных комплексов определяют на кролях породы шиншилла весом 3,0-3, 5кг. Создание грундиммунитета у животных проводят по схеме: двукратного введения антигена в дозе 5,0 мг через час до кормления с суточным интервалом в течение пяти дней. Серологическое обследование выполняют через 7, 14 и 21 день после последней прививки с помощью стандартного дифтерийного эритроцитарного диагностикума с титром 1 :3200 (см. таблицу 1). Example 2.- Obtaining an anti-diphtheria vaccine based on a composition of vaccine antigens with a modified charge of molecules The microbial mass is obtained from the production strain PW - 8 Weissensee variant by cultivating C. diphtheriae bacteria in Linguud broth with the addition of 0.3% glucose or maltose. The cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C for 36 hours, after which the microbial mass is separated from the toxin by centrifugation (6000 rpm for 30 minutes). The resulting precipitate (η-gram wet weight) is poured with ethanol (concentration 96 °) in a volume of (2-4) p ml, kept in a refrigerator at 4 ° C for 24 hours and centrifuged in the marked mode. Microbial sediment is poured (2-10) p ml of physical. solution, adjust the pH to 7.2-7.4, cool to 4-6 ° C, leave for 3-4 hours, then centrifuged (BOOOob / min. for 30 minutes). A 0.8% solution of ethylenediaminetetraacetate-disodium salt (EDTA-Ka 2 ) is gradually added to the resulting precipitate, and triturated in a porcelain mortar until a white, viscous mass is obtained. It is kept in the refrigerator at a temperature of 4 ° -6 ° C for 18 hours. The extract is centrifuged at bOOOob / min. For 30 minutes, after which dialysis against distilled water is carried out at a pH of 7.2-7.5 and concentrated with polyethylene glycol with a molecular weight of 15,000 Da or Sephadex G 200 Superfine 1 to a volume of p ml. EDTA extract was reprecipitated at pH 7.0. The selected antigenic complexes include proteins (75.3 ± 3.4)%, lipids (23.3 ± 4.1)% and carbohydrates (1.4 ± 0.4)%. An aqueous suspension of somatic antigens is prepared, focusing on obtaining the necessary concentration for oral vaccination (5.0 mg / l), adjust the pH to 8.5-9.0 with a 1.0% sodium hydroxide solution or 1.0% acetic acid acid, set on a spectrophotometer (wavelength 230nm) the exact contents of the protein substance. The somatic complex is modified with succinic anhydride in relation to the protein content. The immunogenic properties of the obtained complexes are determined on chinchilla rabbits weighing 3.0-3.5 kg. The creation of grossimmunity in animals is carried out according to the scheme: twice the introduction of antigen in a dose of 5.0 mg one hour before feeding with a daily interval for five days. Serological examination is performed 7, 14 and 21 days after the last vaccination using a standard diphtheria erythrocyte diagnosticum with a titer of 1: 3200 (see table 1).
Таблица 1- Титры антидифтерийных антител в сыворотках крови кролей после вакцинации Table 1 - Antidiphtheria antibody titers in rabbit serum after vaccination
Процентное Доза День Количество У них получали антитела в соотношение антигена наблюдения животных титрах модификатора к (в мг) 1 : 10- 1 :80- 1 :320- 1 : 1280- антигену 1 :40 1 :160 1 :640 1 :2560Percentage Dose Day Number They received antibodies in the ratio of antigen observation to animal titers modifier k (in mg) 1: 10-1: 80-1: 320-1: 1280 antigen 1: 40 1: 160 1: 640 1: 2560
1,0 % 5,0 7-й 5 2 0 0 0 1.0% 5.0 7th 5 2 0 0 0
14-й 5 2 1 0 0 14th 5 2 1 0 0
21-й 5 2 0 0 021st 5 2 0 0 0
2,0 % 5,0 7-й 5 0 0 1 4 2.0% 5.0 7th 5 0 0 1 4
14-й 5 0 0 3 2 14th 5 0 0 3 2
21-й 5 0 1 4 021st 5 0 1 4 0
3,0 % 5,0 7-й 5 0 0 2 3 3.0% 5.0 7th 5 0 0 2 3
14-й 5 0 0 2 3 14th 5 0 0 2 3
21-й 5 0 0 4 121st 5 0 0 4 1
4,0 % 5,0 7-й 5 0 1 1 3 4.0% 5.0 7th 5 0 1 1 3
14-й 5 0 1 1 3 14th 5 0 1 1 3
21-й 5 0 1 2 221st 5 0 1 2 2
5,0 % 5,0 7-й 5 3 2 0 0 5.0% 5.0 7th 5 3 2 0 0
14-й 5 4 0 0 0 14th 5 4 0 0 0
21-й 5 4 0 0 021st 5 4 0 0 0
Не 15,0 7-й 10 0 0 0 0 модифицирован- 14-й 10 0 0 0 0 ный антиген 21-й 10 0 0 0 0 Not 15.0 7th 10 0 0 0 0 modified 14th 10 0 0 0 0 n antigen 21st 10 0 0 0 0
Полученные результаты свидетельствуют, что модифицированные антигены имеют разную способность влиять на гуморальный иммунитет. Применение модификатора в количестве 1,0% и меньше, а также 5,0% и больше по отношению к массе белкового компонента не приводило к индукции титров антитела у животных, тогда как ацилирование 2,0-4,0% от массы белка приводило к индукции защитных титров в крови перорально вакцинированных кролей к титру 1 :2560 с сохранением его до 21 суток. The results obtained indicate that modified antigens have different ability to influence humoral immunity. The use of a modifier in an amount of 1.0% or less, as well as 5.0% or more with respect to the weight of the protein component did not lead to the induction of antibody titers in animals, while acylation of 2.0-4.0% by weight of the protein led to the induction of protective titers in the blood of orally vaccinated rabbits to a titer of 1: 2560 with preservation of it up to 21 days.
Промышленная применимость Industrial applicability
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а конкретно к вакцинологии, и может быть использовано для создания средств специфической профилактики The invention relates to medicine and veterinary medicine, and in particular to vaccinology, and can be used to create means of specific prevention
инфекционных, онкологических и др. заболеваний. Способ позволяет осуществить модификацию существующих вакцинных антигенов прямо на фармацевтическом предприятии, на доступном оборудовании, значительно сократить стоимость полученных вакцин, уменьшить их побочные эффекты, создавать пероральные формы вакцин. Уникальное оборудование для осуществления изобретения не требуется. infectious, oncological and other diseases. The method allows for the modification of existing vaccine antigens directly at a pharmaceutical enterprise, using affordable equipment, significantly reducing the cost of vaccines, reduce their side effects, create oral forms of vaccines. Unique equipment for carrying out the invention is not required.
Использованные источники информации Information Sources Used
1. Robbins, J. В., R. Schneerson, and S. C. Szu. 1995. Perspective: hypothesis: serum IgG antibody is sufficient to confer protection against infectious disease by inactivating the inoculum. J. Infect. Dis. 171 :1378-1398. 1. Robbins, J. B., R. Schneerson, and S. C. Szu. 1995. Perspective: hypothesis: serum IgG antibody is sufficient to confer protection against infectious disease by inactivating the inoculum. J. Infect. Dis. 171: 1378-1398.
2. Del Val, M., H. J. Schlicht, H. Volkmer, M. Messerle, M. J. Reddehase, and U. H. Koszinowski. 1991. Protection against lethal cytomegalovirus infection by a recombinant vaccine containing a single nonameric T-cell epitope. J. Virol. 65:3641-3646  2. Del Val, M., H. J. Schlicht, H. Volkmer, M. Messerle, M. J. Reddehase, and U. H. Koszinowski. 1991. Protection against lethal cytomegalovirus infection by a recombinant vaccine containing a single nonameric T-cell epitope. J. Virol. 65: 3641-3646
3. Larsen, D. L., A. Karasin, and C. W. Olsen. 2001. Immunization of pigs against influenza virus infection by DNA vaccine priming followed by killed-virus vaccine boosting. Vaccine 19:2842-2853  3. Larsen, D. L., A. Karasin, and C. W. Olsen. 2001. Immunization of pigs against influenza virus infection by DNA vaccine priming followed by killed-virus vaccine boosting. Vaccine 19: 2842-2853
4. Cicin-Sain, L., Brune, W., Bubic, I., Jonjic, S., Koszinowski, U. H. (2003). Vaccination of Mice with Bacteria Carrying a Cloned Herpesvirus Genome Reconstituted In Vivo. J. Virol. 77: 8249-8255  4. Cicin-Sain, L., Brune, W., Bubic, I., Jonjic, S., Koszinowski, U. H. (2003). Vaccination of Mice with Bacteria Carrying a Cloned Herpesvirus Genome Reconstituted In Vivo. J. Virol. 77: 8249-8255
5. Levin SA, Dushoff J, Plotkin JB.Evolution and persistence of influenza A and other diseases. Math Biosci. 2004 Mar-Apr; 188: 17-28.  5. Levin SA, Dushoff J, Plotkin JB. Evolution and persistence of influenza A and other diseases. Math Biosci. 2004 Mar-Apr; 188: 17-28.
6. Terregino C, Toffan A, Beato MS, De Nardi R, Drago A, Capua I. Conventional H5N9 vaccine suppresses shedding in specific-pathogen- free birds challenged with HPAI H5N1 A/chicken/Yamaguchi/7/2004. Avian Dis. 2007 Mar;51(1 Suppl):495-7.  6. Terregino C, Toffan A, Beato MS, De Nardi R, Drago A, Capua I. Conventional H5N9 vaccine suppresses shedding in specific-pathogen-free birds challenged with HPAI H5N1 A / chicken / Yamaguchi / 7/2004. Avian Dis. 2007 Mar; 51 (1 Suppl): 495-7.
7. Medvedeva MN, Petrov NA, Vasilenko SK, Simanovskaia VK, Golubev DB.The characteristics of the hemagglutinin from persistent variants of the influenza virus A/Victoria/35/72 (H3N2). Vopr Virusol. 1990 Sep-Oct;35(5):374-6.  7. Medvedeva MN, Petrov NA, Vasilenko SK, Simanovskaia VK, Golubev DB. The characteristics of the hemagglutinin from persistent variants of the influenza virus A / Victoria / 35/72 (H3N2). Vopr Virusol. 1990 Sep-Oct; 35 (5): 374-6.
8. Aronsson F, Robertson B, Ljunggren HG, Kristensson K. Invasion and persistence of the neuroadapted influenza virus A/WSN/33 in the mouse olfactory system. Viral Immunol. 2003;16(3):415-23.  8. Aronsson F, Robertson B, Ljunggren HG, Kristensson K. Invasion and persistence of the neuroadapted influenza virus A / WSN / 33 in the mouse olfactory system. Viral Immunol. 2003; 16 (3): 415-23.
9. Cox MM. Vaccines in development against avian influenza. Minerva Med. 2007 Apr;98(2): 145-53.  9. Cox MM. Vaccines in development against avian influenza. Minerva Med. 2007 Apr; 98 (2): 145-53.
10. Gronvall GK, Borio LL. Removing barriers to global pandemic influenza vaccination.  10. Gronvall GK, Borio LL. Removing barriers to global pandemic influenza vaccination.
Biosecur Bioterror. 2006;4(2): 168-75.  Biosecur Bioterror. 2006; 4 (2): 168-75.
1 1. Martynov A.V., Babych E.M., Smelyanskaya M.V. Increase of vaccines adjuvanticity by succinylation of vaccine antigen// Rejuvenation Research.- Aug 2005, Vol. 8, No. 1 :P.14-17 (Poster of Confrernce)  1 1. Martynov A.V., Babych E.M., Smelyanskaya M.V. Increase of vaccines adjuvanticity by succinylation of vaccine antigen // Rejuvenation Research.-Aug 2005, Vol. 8, No. 1: P.14-17 (Poster of Confrernce)
12. Taubenberger JK, Morens DM, Fauci AS. The next influenza pandemic: can it be predicted? JAMA. 2007 May 9;297(18):2025-7. 13. Vardavas R, Breban R, Blower S. Can influenza epidemics be prevented by voluntary vaccination? PLoS Comput Biol. 2007 May 4;3(5):e85. 12. Taubenberger JK, Morens DM, Fauci AS. The next influenza pandemic: can it be predicted? JAMA. 2007 May 9; 297 (18): 2025-7. 13. Vardavas R, Breban R, Blower S. Can influenza epidemics be prevented by voluntary vaccination? PLoS Comput Biol. 2007 May 4; 3 (5): e85.
14 Научные исследования и разработки в области вакцин // Материалы 87-й Сессии исполнительного комитета Всемирной организации здравоохранения 21 ноября 1990 г. - 11 с. 14 Research and development in the field of vaccines // Materials of the 87th Session of the Executive Committee of the World Health Organization November 21, 1990 - 11 p.
15 United States Patent 6,395,964, May 28, 2002 C12N 005/04; C12N 015/82; C12N 015/87; A01H 005/00. Oral immunization with transgenic plants/ Arntzen; Charles J.; Mason; Hugh S.; Tariq; Haq A.; Clements; John D. The Texas A&M University System (College Station, TX); The Administrators of the Tulane Fund (New Orleans, LA) Appl No.: 817906, August 4, 1997. 15 United States Patent 6,395,964, May 28, 2002 C12N 005/04; C12N 015/82; C12N 015/87; A01H 005/00. Oral immunization with transgenic plants / Arntzen; Charles J .; Mason Hugh S .; Tariq; Haq A .; Clements John D. The Texas A&M University System (College Station, TX); The Administrators of the Tulane Fund (New Orleans, LA) Appl No .: 817906, August 4, 1997.
16 United States Patent 4,094,971 June 13, 1978. A61K 039/02. Immunological adjuvant agents active in aqueous solution Chedid; Louis A.; Audibert; Francoise Marguerite Agence Nationale de Valorisation de la Recherche Appl. No.: 717509 August 25, 1976. 16 United States Patent 4,094,971 June 13, 1978. A61K 039/02. Immunological adjuvant agents active in aqueous solution Chedid; Louis A .; Audibert Francoise Marguerite Agence Nationale de Valorisation de la Recherche Appl. No .: 717509 August 25, 1976.
17 http://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/79240 17 http://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/79240
18 Jean-Marie Lehn. Supramolecular Chemistry. Concepts and Perspectives.- Weinheim; New York; Basel; Cambridge; Tokyo: VCH Verlagsgesellschaft mbH, 1995.-P. 103 (Chapter 7) 18 Jean-Marie Lehn. Supramolecular Chemistry. Concepts and Perspectives.- Weinheim; New York; Basel; Cambridge Tokyo: VCH Verlagsgesellschaft mbH, 1995.-P. 103 (Chapter 7)

Claims

Формула изобретения: Claim:
1. Вакцины с повышенной иммуногенностью, отличающиеся тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента используют нарезанный на олигомерные фрагменты вакцинный антиген, а полученную смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицирована путем изменения заряда на противоположный.  1. Vaccines with increased immunogenicity, characterized in that the vaccine antigen cut into oligomeric fragments is used as a specific immunogenic component, and the resulting mixture (ensemble) of oligomeric fragments is modified by reversing the charge.
2. Вакцины с повышенной иммуногенностью п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид.  2. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial glycoprotein is used as a vaccine antigen.
3. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных гликопротеидов.  3. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial glycoproteins is used as the vaccine antigen.
4. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид. 4. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial peptide is used as a vaccine antigen.
5. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.  5. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial peptides is used as a vaccine antigen.
6. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид.  6. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial polysaccharide is used as a vaccine antigen.
7. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов.  7. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial polysaccharides is used as a vaccine antigen.
8. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид.  8. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial lipopolysaccharide is used as a vaccine antigen.
9. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов. 9. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial lipopolysaccharides is used as a vaccine antigen.
10. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок.  10. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a viral protein is used as a vaccine antigen.
11. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков.  11. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of viral proteins is used as a vaccine antigen.
12. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью протеаз.  12. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the vaccine antigen is cut into fragments using proteases.
13 Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью синтетических протеаз.  13 Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the vaccine antigen is cut into fragments using synthetic proteases.
14. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что заряды олигомерных фрагментов вакцинного антигена заменяют на противоположный путем ацилирования. 14. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the charges of the oligomeric fragments of the vaccine antigen are replaced by the opposite by acylation.
15. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что заряды олигомерных фрагментов вакцинного антигена заменяют на противоположный путем алкилирования. 15. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the charges of the oligomeric fragments of the vaccine antigen are replaced by the opposite by alkylation.
16. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающиеся тем, что заменяют от 0,5 до 100% заряда молекул олигомерных фрагментов вакцинного антигена на противоположный . 16. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that they replace from 0.5 to 100% of the charge of oligomeric fragments of vaccine antigen molecules with the opposite.
17. Вакцины с повышенной иммуногенностью по по п.1 отличающиеся тем, что в качестве протеазы берут трипсин.  17. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that trypsin is taken as a protease.
18. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.14 отличающиеся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот.  18. Vaccines with increased immunogenicity according to 14, characterized in that the acylation is carried out with anhydrides of carboxylic and polycarboxylic acids.
19. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.16 отличающиеся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот.  19. Vaccines with increased immunogenicity according to clause 16, characterized in that the alkylation is carried out by halogen derivatives of carboxylic and polycarboxylic acids.
20. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью, отличающийся тем, что берут вакцинный антиген, нарезают на олигомерные фрагменты, а полученную смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов антигена модифицируют путем частичной замены заряда молекулы на противоположный знак. 20. A method of producing vaccines with increased immunogenicity, characterized in that they take the vaccine antigen, cut into oligomeric fragments, and the resulting mixture (ensemble) of oligomeric fragments of antigen is modified by partially replacing the charge of the molecule with the opposite sign.
21. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид. 21. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial glycoprotein is used as a vaccine antigen.
22. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют^ смесь микробных гликопротеидов. 22. A method of producing vaccines with enhanced immunogenicity of claim 1 characterized in that a vaccine antigen is used as a mixture ^ microbial glycoproteins.
23. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид.  23. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial peptide is used as a vaccine antigen.
24. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.  24. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial peptides is used as a vaccine antigen.
25. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид.  25. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial polysaccharide is used as a vaccine antigen.
26. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов. 26. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial polysaccharides is used as a vaccine antigen.
27. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид.  27. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a microbial lipopolysaccharide is used as a vaccine antigen.
28. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов. 28. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of microbial lipopolysaccharides is used as a vaccine antigen.
29. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок. 29. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a viral protein is used as a vaccine antigen.
30. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков. 30. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that a mixture of viral proteins is used as a vaccine antigen.
31. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью протеаз. 31. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the vaccine antigen is cut into fragments using proteases.
32. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью синтетических протеаз.  32. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the vaccine antigen is cut into fragments using synthetic proteases.
33. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что заряды олигомерных фрагментов вакцинного антигена заменяют на противоположный путем ацилирования. 33. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the charges of the oligomeric fragments of the vaccine antigen are replaced by the opposite by acylation.
34. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что заряды олигомерных фрагментов вакцинного антигена заменяют на противоположный путем алкилирования.  34. The method of producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that the charges of the oligomeric fragments of the vaccine antigen are replaced by the opposite by alkylation.
35. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что заменяют от 0,5 до 100% заряда молекул олигомерных фрагментов вакцинного антигена на противоположный.  35. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that from 0.5 to 100% of the charge of the molecules of oligomeric fragments of the vaccine antigen is replaced with the opposite.
36. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.1 отличающийся тем, что в качестве протеазы берут трипсин.  36. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 1, characterized in that trypsin is taken as a protease.
37. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.33 отличающийся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот. 37. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 33, characterized in that the acylation is carried out with anhydrides of carboxylic and polycarboxylic acids.
38. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.34 отличающийся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот. 38. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 34, wherein the alkylation is carried out with halogen derivatives of carboxylic and polycarboxylic acids.
39. Вакцины с повышенной иммуногенностью, отличающиеся тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента используют вакцинный антиген с частично измененным на противоположный зарядом молекулы с образованием смеси (ансамбля) вакцинных антигенов с разным зарядом молекул. 39. Vaccines with increased immunogenicity, characterized in that a vaccine antigen with a partially reversed molecule charge is used as a specific immunogenic component to form a mixture (ensemble) of vaccine antigens with different molecular charges.
40. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид.  40. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a microbial glycoprotein is used as a vaccine antigen.
41. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных гликопротеидов.  41. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a mixture of microbial glycoproteins is used as a vaccine antigen.
42. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид. 42. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a microbial peptide is used as a vaccine antigen.
43. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.  43. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a mixture of microbial peptides is used as a vaccine antigen.
44. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид. 44. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a microbial polysaccharide is used as a vaccine antigen.
45. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов. 45. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a mixture of microbial polysaccharides is used as a vaccine antigen.
46. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид.  46. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that microbial lipopolysaccharide is used as a vaccine antigen.
47. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов. 47. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a mixture of microbial lipopolysaccharides is used as a vaccine antigen.
48. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок.  48. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a viral protein is used as a vaccine antigen.
49. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков.  49. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that a mixture of viral proteins is used as a vaccine antigen.
50. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что заряд вакцинного антигена заменяют на противоположный путем ацилирования.  50. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that the charge of the vaccine antigen is replaced by the opposite by acylation.
51. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что заряд вакцинного антигена заменяют на противоположный путем алкилирования.  51. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that the charge of the vaccine antigen is replaced by the opposite by alkylation.
52. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.39 отличающиеся тем, что заменяют от 0,5 до 100% заряда молекул вакцинного антигена на противоположный. 52. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 39, characterized in that they replace from 0.5 to 100% of the charge of vaccine antigen molecules with the opposite.
53. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.50 отличающиеся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот.  53. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 50, characterized in that the acylation is carried out with anhydrides of carboxylic and polycarboxylic acids.
54. Вакцины с повышенной иммуногенностью по п.51 отличающиеся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот.  54. Vaccines with increased immunogenicity according to claim 51, characterized in that the alkylation is carried out with halogen derivatives of carboxylic and polycarboxylic acids.
55. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью, отличающийся тем, что берут вакцинный антиген и модифицируют путем частичной замены заряда молекулы на противоположный знак с образованием смеси (ансамбля) из смеси вакцинных антигенов с разным зарядом молекул. 55. A method of producing vaccines with increased immunogenicity, characterized in that they take the vaccine antigen and modify it by partially replacing the molecule’s charge with the opposite sign to form a mixture (ensemble) of a mixture of vaccine antigens with different molecular charges.
56. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид.  56. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a microbial glycoprotein is used as a vaccine antigen.
57. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных гликопротеидов.  57. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a mixture of microbial glycoproteins is used as the vaccine antigen.
58. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид. 58. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a microbial peptide is used as a vaccine antigen.
59. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.  59. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a mixture of microbial peptides is used as a vaccine antigen.
60. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид. 60. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a microbial polysaccharide is used as a vaccine antigen.
61. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов.61. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a mixture of microbial polysaccharides is used as a vaccine antigen.
62. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид. 62. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that microbial lipopolysaccharide is used as a vaccine antigen.
63. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов . 63. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a mixture of microbial lipopolysaccharides is used as a vaccine antigen.
64. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок.  64. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a viral protein is used as a vaccine antigen.
65. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков. 65. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that a mixture of viral proteins is used as a vaccine antigen.
66. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что заряд вакцинного антигена заменяют на противоположный путем ацилирования. 66. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that the charge of the vaccine antigen is replaced by the opposite by acylation.
67. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что заряд вакцинного антигена заменяют на противоположный путем алкилирования.67. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that the charge of the vaccine antigen is replaced by the opposite by alkylation.
68. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.55 отличающийся тем, что заменяют от 0,5 до 100% заряда молекул вакцинного антигена на противоположный . 68. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 55, characterized in that they replace from 0.5 to 100% of the charge of vaccine antigen molecules with the opposite.
69. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.66 отличающийся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот. 69. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to claim 66, characterized in that the acylation is carried out with anhydrides of carboxylic and polycarboxylic acids.
70. Способ получения вакцин с повышенной иммуногенностью по п.67 отличающийся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот. 70. The method for producing vaccines with increased immunogenicity according to Claim 67, wherein the alkylation is carried out with halogen derivatives of carboxylic and polycarboxylic acids.
V V
PCT/RU2010/000700 2010-11-22 2010-11-22 Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof WO2012070974A1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201300488A EA025417B1 (en) 2010-11-22 2010-11-22 Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof
PCT/RU2010/000700 WO2012070974A1 (en) 2010-11-22 2010-11-22 Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2010/000700 WO2012070974A1 (en) 2010-11-22 2010-11-22 Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012070974A1 true WO2012070974A1 (en) 2012-05-31

Family

ID=46146103

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2010/000700 WO2012070974A1 (en) 2010-11-22 2010-11-22 Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof

Country Status (2)

Country Link
EA (1) EA025417B1 (en)
WO (1) WO2012070974A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11213579B2 (en) 2018-05-04 2022-01-04 Boris Farber Vaccines with enhanced immunogenicity, low allergenicity and reactogenicity

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1557712A (en) * 1975-08-29 1979-12-12 Anvar Immunological agents
WO1997027311A1 (en) * 1996-01-23 1997-07-31 St. Jude Children's Research Hospital Mixture of recombinant vaccinia vectors as polyenv vaccines for hiv
WO2004000351A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Cytos Biotechnology Ag Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1557712A (en) * 1975-08-29 1979-12-12 Anvar Immunological agents
WO1997027311A1 (en) * 1996-01-23 1997-07-31 St. Jude Children's Research Hospital Mixture of recombinant vaccinia vectors as polyenv vaccines for hiv
WO2004000351A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Cytos Biotechnology Ag Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARTYNOV A.V. ET AL.: "New approach to design and synthesis of therapeutic and preventive drugs, taking into account interspecies polymorphism of receptors (method of precision partial modification)", ANNALS OF MECHNIKOV INSTITUTE, vol. 4, 2007, pages 5 - 15 *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201300488A1 (en) 2013-11-29
EA025417B1 (en) 2016-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100642877B1 (en) antigen formulation useful in immunisation
JP5327873B2 (en) Recombinant Helicobacter pylori oral vaccine and preparation method thereof
JP2002531415A (en) Peptide-based vaccine for influenza
CN1062605C (en) Escherichia coli vaccine
ES2446984T3 (en) Enterohemorrhagic Escherichia coli vaccine
JP6877143B2 (en) Influenza vaccine and treatment
JPH10500958A (en) Treatment and prevention of Helicobacter infections
JP2009051859A (en) Purified nontypable haemophilus influenzae p5 protein as vaccine for nontypable haemophilus influenzae strain
KR101600959B1 (en) Recombinant Protein Comprising Epitope of Avian reovirus sigma C Protein and Antibody thereto
CN105749264A (en) Immunogenic active composition
KR101617464B1 (en) Ipv-dpt vaccine
Chen et al. Recombinant PAL/PilE/FlaA DNA vaccine provides protective immunity against Legionella pneumophila in BALB/c mice
CN1059471A (en) Heamophilus paragallinarum vaccine
CN102458460A (en) Method for the purification of protein complexes
CN107970444A (en) Composite adjuvant and the vaccine containing the composite adjuvant
JP4530317B2 (en) Vaccine formulation containing attenuated toxin
CN108884134A (en) Esterified streptococcus pneumoniae antigen composition, preparation method and purposes
WO2012070974A1 (en) Vaccines with enhanced immunogenicity and methods for the production thereof
WO2005014803A1 (en) West nile virus vaccine
US20120195925A1 (en) Vaccines with increased immunogenicity and methods for obtaining them
US20080026008A1 (en) Bacteriophage DNA vaccine vector
US11213579B2 (en) Vaccines with enhanced immunogenicity, low allergenicity and reactogenicity
Milgroom Vaccines, Vaccination, and Immunization
WO2000015257A1 (en) Vaccine preparations containing saponins
Gupta et al. Role of Biotechnology in Human Health Care

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10859971

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE2 Request for preliminary examination filed before expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201300488

Country of ref document: EA

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 10859971

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1