WO2012008507A1 - 癌の治療剤 - Google Patents

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WO2012008507A1
WO2012008507A1 PCT/JP2011/066021 JP2011066021W WO2012008507A1 WO 2012008507 A1 WO2012008507 A1 WO 2012008507A1 JP 2011066021 W JP2011066021 W JP 2011066021W WO 2012008507 A1 WO2012008507 A1 WO 2012008507A1
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cancer
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sac
cenp
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紹宏 大橋
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武田薬品工業株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a cancer therapeutic agent containing a CENP-E inhibitor.
  • the invention further relates to a method for stratification of individuals suffering from cancer. More particularly, it relates to a method comprising the step of distinguishing between cancer cells sensitive to CENP-E inhibitors and cancer cells not sensitive to said inhibitors.
  • SAC Spindle assembly checkpoint
  • SAC is a mechanism that checks for equal chromosomal distribution during cell division and is a sister and replicated sister. It has the function of stopping the distribution of sister chromosomes by keeping the cell cycle at metaphase until the centromeres of chromosomes bind. In order to produce an even chromosome distribution during cell division, i) metaphase chromosome alignment, and ii) centrosome separation, bipolar mitotic spindle formation, etc. must be performed normally. If uniform chromosome distribution does not occur during cell division, SAC is activated and induces cell death. SAC function deficiency is considered to be one of the causes of chromosomal instability observed in various human cancer cells (Non-patent Document 1). BubR1 and the like are known as factors constituting SAC (Non-patent Document 2).
  • Centromere-associated protein-E (sometimes referred to herein as “CENP-E”) is one of the motor proteins belonging to the kinesin superfamily (Non-patent Document 3).
  • CENP-E is a factor necessary for normal mitotic chromosome alignment, and it is known that mitotic metaphase misalignment occurs in cells lacking CENP-E function.
  • Non-Patent Document 4 When CENP-E function is inhibited, chromosome alignment does not occur, SAC is activated, and cell death is induced (Non-patent Document 5). Since the anticancer effect is obtained by CENP-E function reduction, it is suggested that inhibition of CENP-E function is one of effective methods for cancer treatment (Non-patent Document 6).
  • Non-patent Document 7 It has been reported that in cells injected with antibodies against both CENP-E and BubR1 molecules, chromosomal misalignment and increased cut phenotype are observed (Non-patent Document 7). In addition, CENP-E and BubR1 have been reported to have the opposite effect on the junction between the kineto core and the microtubule (Non-patent Document 8). Further, compounds described in Patent Documents 1 to 4 and compounds described in Non-Patent Document 9 are known as CENP-E inhibitors.
  • cancers exhibiting SAC dysfunction In cancers with inadequate SAC function (hereinafter sometimes referred to as “cancers exhibiting SAC dysfunction”), no effective therapeutic agent has been found because SAC does not induce cell death.
  • An object of the present invention is to provide an excellent therapeutic agent for cancer exhibiting SAC dysfunction. Another object of the present invention is to provide a method for determining the sensitivity of a cancer to a CENP-E inhibitor.
  • the present invention relates to the following.
  • the cancer expresses at least one mutant gene of a SAC constituent factor, or the expression level of at least one SAC constituent factor in the cancer is lower than that in a normal tissue.
  • the therapeutic agent of description [3] The therapeutic agent according to the above [2], wherein the SAC constituent factor is BubR1.
  • a method for determining the sensitivity of a cancer to a CENP-E inhibitor comprising evaluating whether or not a cancer exhibiting SAC dysfunction expresses functional p53.
  • the sensitivity of the cancer to a CENP-E inhibitor comprising evaluating whether the cancer exhibits an abnormality in SAC function, and evaluating whether the cancer expresses functional p53. How to judge.
  • [7] comprising administering a CENP-E inhibitor to a mammal, and before and after the administration, (i) a cancer cell functional p53 expression level, Comparing one or more expression levels selected from (ii) blood functional p53 expression level and (iii) blood anti-functional p53 antibody expression level and exhibiting SAC dysfunction and functional
  • a method for determining an effective amount of a CENP-E inhibitor in a cancer expressing p53 comprising administering an effective amount of a CENP-E inhibitor to the mammal.
  • the present invention provides an excellent therapeutic agent for cancer exhibiting SAC dysfunction.
  • the present invention also provides an excellent method for determining the sensitivity of cancer to CENP-E inhibitors.
  • an effective amount of a CENP-E inhibitor in cancer exhibiting SAC dysfunction and expressing functional p53 can be determined with high sensitivity.
  • transduction is shown.
  • Cells were collected 1, 2, 3 and 4 days after introduction of each siRNA, and the cell proliferation ability was measured (in the figure, X represents each siRNA against CENP-E and BubR1 (hereinafter referred to as “CENP-E siRNA”, “BubR1”, respectively)
  • the black triangle is the siRNA for Eg5 (hereinafter sometimes referred to as “Eg5 siRNA”) and BubR1 siRNA
  • the white triangle is CENP-E siRNA
  • the white circle is Eg5 siRNA
  • Black squares indicate BubR1 siRNA
  • black diamonds indicate cell proliferation ability when Non silencing siRNA (hereinafter sometimes referred to as "NS siRNA”) is introduced).
  • NS siRNA Non silencing siRNA
  • Cell-Titer-Glo-luminescent cell-viability assay kit (Promega) was used for the measurement, and the amount of intracellular ATP was used as an indicator of viability.
  • the value obtained by standardizing the chemiluminescence amount measured using a microplate reader with the chemiluminescence amount one day after introduction of each siRNA was taken as the relative value of proliferation.
  • the influence of BubR1 with respect to the effect on the growth ability of a CENP-E inhibitor, an Eg5 inhibitor, and a Plk1 inhibitor is shown.
  • NSRNAsiRNA left or BubR1 siRNA (right) Eg5 inhibitor (Ispinesib 10 nM), Plk1 inhibitor (BI2536 3 nM) or CENP-E inhibitor (GSK923295 30 nM)
  • Eg5 inhibitor Ispinesib 10 nM
  • Plk1 inhibitor BI2536 3 nM
  • CENP-E inhibitor GSK923295 30 nM
  • the cell proliferation ability was measured 1, 2, 3 and 4 days after siRNA introduction.
  • Cell-Titer-Glo-luminescent cell-viability assay kit Promega was used for the measurement, and the amount of intracellular ATP was used as an indicator of viability.
  • the value obtained by standardizing the chemiluminescence amount measured using a microplate reader with the chemiluminescence amount one day after introduction of each siRNA was taken as the relative value of proliferation.
  • the expression level of p53 protein after introduction of CENP-E siRNA, Eg5 siRNA and BubR1 siRNA is shown.
  • Three days after the introduction of each siRNA the cells were collected and subjected to Western blotting using antibodies against p53, CENP-E, Eg5, BubR1, and ⁇ -tubulin.
  • CENP-E, Eg5, and BubR1 were each used as a loading control in order to confirm the knockdown effect of siRNA introduction.
  • the influence of p53 on caspase-3 / 7 activity after CENP-E-siRNA and BubR1 siRNA introduction is shown.
  • Three days after the introduction of each siRNA the cells were collected and caspase-3 / 7 activity was measured.
  • Caspase-3 / 7-Glo / 7assay kit (Promega) was used for the measurement.
  • the value obtained by standardizing the chemiluminescence amount measured using a microplate reader with the chemiluminescence amount after NS siRNA introduction was taken as the relative value of caspase-3 / 7 activity.
  • the expression level of BubR1 protein in various cancer cells is shown. Western blotting was performed with antibodies against BubR1 and GAPDH using pancreatic cancer cell line PANC-1, renal cancer cell line Caki-1, ovarian cancer cell line A2780, cervical cancer cell line Hela, and prostate cell line DU145. GAPDH was used as a loading control.
  • Caki-1 cells The expression level of p53 protein after CENP-E inhibitor treatment in Caki-1 cells is shown.
  • Caki-1 cells cultured for 3 days in a cell culture medium supplemented with CENP-E inhibitor (GSK923295 100 nM) or DMSO were collected, and Western blotting was performed using antibodies against PARP, p53, and GAPDH.
  • PARP was used as an indicator of apoptosis (truncated PARP), and GAPDH was used as a loading control.
  • the growth curve of Caki-1 cells after CENP-E inhibitor treatment is shown.
  • DMSO or CENP-E inhibitor (GSK923295 100 nM) was added, and cell proliferation ability was measured 0, 1, 2 and 3 days after compound addition.
  • the Caki-1 cell line was subcutaneously transplanted into nude mice, and the tumor size after administration of CENP-E inhibitor (GSK923295) and vehicle (control) was measured (in the figure, the 100 mg / kg GSK923295 administration group is a black triangle) The vehicle administration group is indicated by a black circle.) In each group, intraperitoneal administration was performed once a day on the 25th, 26th, 27th and 32nd days after transplantation.
  • the present invention provides a therapeutic agent for cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53, including a CENP-E inhibitor.
  • the present invention also provides a therapeutic agent for cancer that expresses functional p53, including a CENP-E inhibitor.
  • spindle assembly checkpoint refers to a mechanism that checks for even chromosome distribution during cell division.
  • SAC is an M-phase abnormality by transiently arresting the cell cycle at metaphase until the centromere of the spindle and replicated sister chromosomes are properly combined and the chromosomes are aligned in a row on the equator plane. , And has the function of avoiding unequal distribution of sister chromosomes.
  • SAC is activated, leading to cell cycle arrest at the mid-phase and subsequent mitotic death.
  • SAC dysfunction means that the function of inducing cell division at the middle cell division and cell death at the division cell is checked by checking chromosome distribution during cell division. Therefore, in cancers with SAC dysfunction, even when unequal chromosome distribution occurs during cell division, the cell cycle does not stop at the middle cell division and cell death (mitotic death) is induced at the cell division It will not be done.
  • cancers that exhibit SAC dysfunction include cancers that express at least one SAC constitutive factor mutant gene (type 1), and cancers in which the expression level of at least one SAC constitutive factor is reduced compared to normal tissues (Type 2), cancers that continue to divide with unequal chromosome distribution (Type 3), and the level of post-translational modification that at least one SAC component undergoes changes (enhanced or reduced) compared to normal tissues Cancer (type 4) and paclitaxel resistant cancer (type 5).
  • type 1 cancers that express at least one SAC constitutive factor mutant gene
  • Type 2 cancers in which the expression level of at least one SAC constitutive factor is reduced compared to normal tissues
  • Type 3 cancers that continue to divide with unequal chromosome distribution
  • Type 5 cancers that continue to divide with unequal chromosome distribution
  • paclitaxel resistant cancer type 5
  • the SAC component is involved in the functional expression of SAC.
  • SAC is a cell.
  • SAC components include BubR1, Bub1, Bub3, MAD1, MAD2, CDC20, CDC27, MPS1, Aurora-B, Borealin, INCENP, Survivin, Chk1, ZW10, Zwilch, ROD (Nature review molecular cell biology, 2007, vol.8, p.379-393).
  • SAC components include MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80, NUF2, SPC24, SPC25, CASC5, and ZWINT.
  • Wild-type human BubR1 SEQ ID NO: 1 (AAC12730.2) Wild-type human Bub1: SEQ ID NO: 2 (AAC12729.1, NP_004327.1) Wild-type human Bub3: SEQ ID NO: 3 (NP_001007794.1) Wild-type human MAD1: SEQ ID NO: 4 (AAC52059.1), SEQ ID NO: 23 (NP_001013858.1) Wild-type human MAD2: SEQ ID NO: 5 (NP_002349.1) Wild-type human CDC20: SEQ ID NO: 6 (AAA19017.1), SEQ ID NO: 24 (NP_001246.2) Wild-type human CDC27: SEQ ID NO: 7 (NP_001107563.1, isoform1), SEQ ID NO: 8 (NP_001247.3, isoform2) Wild-type human MPS1: SEQ ID NO: 7 (NP_001107563.1, isoform1), SEQ ID NO: 8 (NP_001247.3, isoform
  • Wild-type human MIS12 SEQ ID NO: 26 (NP_076944.1) Wild-type human PMF1: SEQ ID NO: 27 (NP_001186582.1, isoform 3), SEQ ID NO: 28 (NP_001186583.1, isoform 1), SEQ ID NO: 29 (NP_009152.2, isoform 2) Wild-type human DSN1: SEQ ID NO: 30 (NP_001138787.1, isoform 1), SEQ ID NO: 31 (NP_001138789.1, isoform 2), SEQ ID NO: 32 (NP_001138790.1, isoform 3) Wild-type human NSL1: SEQ ID NO: 33 (NP_001036014.1, isoform 2), SEQ ID NO: 34 (NP_056286.3, isoform 1) Wild-type human NDC80: SEQ ID NO: 35 (NP_006092.1) Wild-type human NUF2: SEQ ID NO: 36 (NP_113611.2) Wild-type human SPC24: SEQ ID NO: 37
  • the SAC constituent factor mutant gene is a polypeptide encoded by the mutant gene in the amino acid sequence of a wild-type SAC constituent factor.
  • An amino acid sequence in which one or a plurality of amino acids (for example, 2 to 100, preferably 2 to 50) are mutated (deleted, substituted, added or inserted), and the activity of the polypeptide is SAC function It means a gene that is reduced or lost compared to the activity of the wild-type SAC component to the extent that it causes an abnormality.
  • the activity of BubR1 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of BubR1 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of BubR1 are disclosed in Nature, 1998 vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the BubR1 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of BubR1 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type BubR1. is there.
  • the activity of Bub1 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Bub1 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid.
  • An assay for measuring the activity of Bub1 is disclosed in Nature, 1998 vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the Bub1 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of Bub1 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type Bub1. is there.
  • the activity of Bub3 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Bub3 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring Bub3 activity are disclosed in Nature, 1998 vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the Bub3 activity of the polypeptide encoded by the Bub3 mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type Bub3. is there.
  • the activity of MAD1 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of MAD1 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of MAD1 are disclosed in Nature, 1998 vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the MAD1 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of MAD1 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type MAD1. is there.
  • the activity of MAD2 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of MAD2 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of MAD2 are disclosed in the literature Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the MAD2 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of MAD2 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type MAD2. is there.
  • the activity of CDC20 specifically refers to the activity of activating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of CDC20 can be evaluated using cancer cells treated with nocodazole or colcemid, by detecting a decrease in M-phase cells, a decrease in the amount of cyclin B protein, or a decrease in the amount of securin protein.
  • Assays for measuring the activity of CDC20 are disclosed in the literature Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the CDC20 activity of the polypeptide encoded by the CDC20 mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type CDC20. is there.
  • the activity of CDC27 specifically refers to the activity of activating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of CDC27 can be evaluated by detecting a decrease in M-phase cells, a decrease in cyclin B protein amount or a decrease in securin protein amount using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of CDC27 are disclosed in the literature Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol.101, no.13, p.4459-4464.
  • the CDC27 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of CDC27 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type CDC27. is there.
  • the activity of MPS1 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of MPS1 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of MPS1 are disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the MPS1 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of MPS1 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type MPS1. is there.
  • the activity of Aurora-B specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Aurora-B can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of Aurora-B are disclosed in Nature, 1998 vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the Aurora-B activity of the polypeptide encoded by the Aurora-B mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less of the activity of wild-type Aurora-B ( For example, 0%).
  • Borealin specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Borealin can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of Borealin are disclosed in the literature Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol.101, no.13, p.4459-4464.
  • Borealin activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of Borealin is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type Borealin. is there.
  • the activity of INCENP specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of INCENP can be evaluated using nocodazole-treated or colcemid-treated cancer cells by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein.
  • Assays for measuring the activity of INCENP are disclosed in Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol.101, no.13, p.4459-4464.
  • the INCENP activity of the polypeptide encoded by the INCENP mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type INCENP. is there.
  • the activity of Survivin specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • Survivin activity can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid.
  • An assay for measuring the activity of Survivin is disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the Survivin activity of the polypeptide encoded by the Survivin mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the wild-type Survivin activity. is there.
  • the activity of Chk1 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Chk1 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid.
  • An assay for measuring the activity of Chk1 is disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464.
  • the Chk1 activity of the polypeptide encoded by the Chk1 mutant gene is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type Chk1. is there.
  • the activity of ZW10 specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of ZW10 can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring the activity of ZW10 are disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the ZW10 activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of ZW10 is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, and even more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type ZW10. is there.
  • the activity of Zwilch specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of Zwilch can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid.
  • An assay for measuring the activity of Zwilch is disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464.
  • the Zwilch activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of Zwilch is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (eg, 0%) of the activity of wild-type Zwilch. is there.
  • the activity of ROD specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of ROD can be evaluated by detecting an increase in M-phase cells, an increase in the amount of cyclin B protein, or an increase in the amount of securin protein using cancer cells treated with nocodazole or colcemid. Assays for measuring ROD activity are disclosed in Nature, 1998, vol. 392, p. 300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p. 4459-4464.
  • the ROD activity of the polypeptide encoded by the mutant gene of ROD is 50% or less, preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (for example, 0%) of the activity of wild-type ROD. is there.
  • the activity of MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80, NUF2, SPC24, SPC25, CASC5 and ZWINT specifically refers to the activity of inactivating ubiquitin ligase APC / C.
  • the activity of MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80, NUF2, SPC24, SPC25, CASC5 and ZWINT is increased by using nocodazole-treated or colcemid-treated cancer cells. It can be evaluated by detecting an increase in the amount.
  • Assays for measuring the activity of MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80, NUF2, SPC24, SPC25, CASC5 and ZWINT are Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101. , No. 13, p.4459-4464.
  • the activity of the polypeptide encoded by the mutated gene of each factor of MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80, NUF2, SPC24, SPC25, CASC5 and ZWINT is 50% or less, preferably 30% of the activity of each wild-type factor. Hereinafter, it is more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (for example, 0%).
  • mutated genes for SAC components are as follows.
  • BubR1 The position in the base sequence of BubR1 follows AF046079 (SEQ ID NO: 25, coding region is 43-3195 bp).
  • a mutation in which the 130th alanine in the amino acid sequence of Bub1 is substituted with serine (Cancer Res., 62 (2002) p.13-17).
  • the position in the amino acid sequence of Bub1 follows AAC12729.1 (SEQ ID NO: 2).
  • MAD1 Mutation in which 557th arginine in the amino acid sequence of MAD1 is replaced with histidine, and mutation in which 571th arginine in the amino acid sequence of Mad1 is replaced with histidine (however, the position in the amino acid sequence is AAC52059.1 (sequence No. 4)) (Genomics, 58 (1999) p.181-189).
  • MAD2 Mutation in which the 190th isoleucine in the amino acid sequence of MAD2 is substituted with valine (however, the position in the amino acid sequence conforms to NP_002349.1 (SEQ ID NO: 5)) (Int. J. Cancer, 95 (2001) p. 223-227).
  • the amino acid sequence of DSN1 conforms to NP_001138787.1 (SEQ ID NO: 30).
  • the mixed lineage leukemia gene (MLL) and CASC5 fusion gene (de novo acute lymphoblastic leukemia (ALL)) (Oncogene (2003) 22, 1418-1424).
  • the amino acid sequence of CASC5 follows NP_733468.2 (SEQ ID NO: 40).
  • BubR1 is preferred as the SAC component in type 1.
  • the degree of decrease of the expression level of SAC component factor compared to that of a normal tissue depends on the decrease.
  • the expression level (protein expression level) of the SAC component factor in this cancer 50% or less of the expression level (protein expression level) of the said SAC component factor of a normal tissue (Preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (for example, 0%)).
  • tissue in “normal tissue” means a tissue (or cell) from which a cancer (or cancer cell) to be evaluated is derived.
  • cancer type 2 in which the expression level of at least one SAC component factor is decreased compared to normal tissue
  • cancer in which the expression level of BubR1 is decreased compared to normal tissue Cell, 2003, 4, 483-97
  • MAD2 is lower than that in normal tissues
  • BubR1 and MAD2 are preferable, and BubR1 is more preferable.
  • Normal level of post-translational modification received by one SAC component in cancer in which the level of post-translational modification received by at least one SAC component is changed (increased or decreased) compared to normal tissue
  • the degree of change compared to the tissue is not particularly limited as long as the change causes SAC dysfunction.
  • the post-translational modification level of the SAC component in the cancer (the SAC that has undergone the post-translational modification contained in a fixed number of moles of the SAC component)
  • the ratio of the component factor it is 50% or less (preferably 30% or less, more preferably 10% or less, still more preferably 1% or less (eg, 0%) of the post-translational modification level of the SAC component factor in normal tissue. )).
  • the post-translational modification level of the SAC component in the cancer As an example of the ratio of the component factor, 200% or more (preferably 300% or more, more preferably 500% or more, still more preferably 1000% or more) of the post-translational modification level of the SAC component factor in normal tissue can be mentioned.
  • post-translational modifications examples include known post-translational modifications (for example, listed in the public database http://www.phosphosite.org/homeAction.do).
  • Preferred post-translational modifications include, for example, phosphorylation of serine, threonine or tyrosine, acetylation of lysine, methylation of arginine, and ubiquitination of lysine.
  • Specific examples of post-translational modifications that SAC components undergo are detailed below.
  • BubR1 Phosphorylation of the 54th threonine of the amino acid sequence of BubR1 (Anal. Sci., 24 (2008), 161-166), and acetylation of the 250th lysine of the amino acid sequence of BubR1 (EMBO J., 28 (2009), 2077-2089), phosphorylation of the 367th serine of the amino acid sequence of BubR1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105 (2008), 6069-6074), the amino acid sequence of BubR1 Phosphorylation of 368th threonine (J Proteome Res, 7 (2008), 1346-51), phosphorylation of 435th serine of the amino acid sequence of BubR1 (J.
  • BubR1 Phosphorylation of the 676th serine of the amino acid sequence J.Cell Sci., 123 (2010), 84-94
  • phosphorylation of the 720th serine of the amino acid sequence of BubR1 J.Cell Sci. , 123 (2010), 84-94
  • phosphorylation of the 792nd threonine of the amino acid sequence of BubR1 J. Biol. Chem., 282 (2007), 15217-15227
  • 1008 of the amino acid sequence of BubR1 Phosphorylation J. Biol. Chem., 282 (2007), 15217-15227
  • the phosphorylation of the 1043rd serine of the amino acid sequence of BubR1 Naat. Biotechnol., 24 (2006), 1285-1292.
  • Bub1 Phosphorylation of the 375th serine of the amino acid sequence (Mol. Cell, 31 (2008), 438-448), phosphorylation of the 436th serine of the amino acid sequence of Bub1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105 (2008), 10762-10767), phosphorylation of the 445th serine of the amino acid sequence of Bub1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105 (2008), 10762-10767), Bub1 amino acid Phosphorylation by the 461th threonine of the acid sequence (Mol.
  • MAD1 Phosphorylation of the 16th serine of the amino acid sequence of MAD1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105 (2008), 10762-10767), phosphorylation of the 22nd serine of the amino acid sequence of MAD1 ( J. Biol. Chem., 283 (2008), 35834-35844), phosphorylation of the 29th serine in the amino acid sequence of MAD1 (J. Biol.
  • MAD1 Phosphorylation of the 649th tyrosine of the amino acid sequence (Cell, 131 (2007), 1190-1203), phosphorylation of the 680th threonine of the amino acid sequence of MAD1 (J. Biol. Chem., 283 (2008) ), 35834-35844), phosphorylation of the 699th serine of the amino acid sequence of MAD1 (J. Biol. Chem., 283 (2008), 35834-35844), the 708th threonine of the amino acid sequence of MAD1 is Phosphorylation (J. Biol. Chem., 283 (2008), 35834-35844).
  • MAD2 Phosphorylation of the 170th serine of the amino acid sequence of MAD2 (EMBO J., 22 (2003), 797-806), phosphorylation of the 178th serine of the amino acid sequence of MAD2 (EMBO J., 22 ( 2003), 797-806), and phosphorylation of the 195th serine in the amino acid sequence of MAD2 (EMBO J., 22 (2003), 797-806).
  • MPS1 3rd serine of the amino acid sequence of MPS1 is phosphorylated (Mol.Cell.Proteomics, 8 (2009), 1751-1764), 7th serine of the amino acid sequence of MPS1 is phosphorylated (Mol.Cell, 31 (2008), 438-448), phosphorylation of the 12th threonine of the amino acid sequence of MPS1 (Mol. Biol. Cell., 20 (2009), 10-20), 15th of the amino acid sequence of MPS1 Serine-induced phosphorylation (Mol. Biol.
  • MPS1 amino acid sequence 33th threonine-induced phosphorylation (PLoS.ONE, 3 (2008), e2415) , Phosphorylation of the 37th serine of the amino acid sequence of MPS1 (PLoS.ONE, 3 (2008), e2415), phosphorylation of the 49th serine of the amino acid sequence of MPS1 (Mol. Cell, 31 (2008 ), 438-448), phosphorylation of the 80th serine of the amino acid sequence of MPS1 (PLoS.ONE, 3 (2008), e2415), phosphorylation of the 281st serine of the amino acid sequence of MPS1 (Proc .Natl. Acad. Sci.
  • CDC20 The 41st serine of the amino acid sequence of CDC20 is phosphorylated (Mol. Cell, 16 (2004), 387-397), the 70th threonine of the amino acid sequence of CDC20 is phosphorylated (EMBO J., 22 ( 2003), 6598-6609), phosphorylation at the 72nd serine of the amino acid sequence of CDC20 (Mol. Cell, 16 (2004), 387-397), phosphorylation at the 92nd serine of the amino acid sequence of CDC20 Oxidation (Mol.
  • PMF-1 Phosphorylation received by the 6th serine of the amino acid sequence of PMF-1 (J Proteome Res 8 (2008), 4553-63), phosphorylation received by the 86th threonine of the amino acid sequence of PMF-1 (Sci Signal 3 (2010), ra3).
  • NSL1 Phosphorylation received by the 4th serine of the amino acid sequence of NSL1 (Sci Signal 3 (2010), ra3), phosphorylation received by the 24th serine of the amino acid sequence of NSL1 (Science 316 (2007), 1160-6) , Phosphorylation received by the 242nd serine of the amino acid sequence of NSL1 (Proc Natl Acad Sci USA 105 (2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci USA 103, 5391-6).
  • CASC5 Phosphorylation received by the 24th serine of the amino acid sequence of CASC5 (Mol Cell 38 (2010), 383-92), phosphorylation received by the 32nd serine of the amino acid sequence of CASC5 (Sci Signal 3 (2010), ra3 J Proteome Res 8 (2009), 4553-63; Mol Cell 31 (2008), 438-48; Proc Natl Acad Sci USA 103 (2006), 5391-6), the 60th serine of the amino acid sequence of CASC5 is Receiving phosphorylation (Mol Cell 38 (2010), 383-92; J Proteome Res 8 (2009), 4553-63; Cancer Res 69 (2009), 2663-8; Proc Natl Acad Sci USA 105 (2008), 10762- 7; Proc Natl Acad Sci USA 103 (2006), 5391-6), phosphorylation received by the 129th tyrosine of CASC5 amino acid sequence (Blood 110 (2007), 323-33), 513 of CASC5 amino acid sequence
  • ZWINT Phosphorylation received by the 81st serine of the amino acid sequence of ZWINT (J Proteome Res 8 (2009), 4553-63), phosphorylation received by the 84th threonine of the amino acid sequence of ZWINT (J Proteome Res 8 (2009) , 4553-63).
  • Paclitaxel resistance in the paclitaxel resistant cancer means resistance to paclitaxel or other taxane chemotherapeutic drugs. Cancers with SAC dysfunction have been reported to be resistant to paclitaxel (Cancer Research 2004 64 (7) p2502-8; Mol. Cancer Ther. 2004 3 (6) p661-9; Gynecol Oncol. 2007 105 ( 1) p.66-73).
  • classifying cancers that are ineffective as chemotherapy with paclitaxel or other taxane chemotherapeutic drugs eg, no reduction in tumor tissue volume or growth inhibition
  • a cancer having a GI50 value of 0.1 ⁇ M or more for paclitaxel can be said to be resistant to paclitaxel.
  • paclitaxel resistant cancer examples include pancreatic cancer and colon cancer.
  • the cancer corresponds to a cancer (type 1) that expresses a mutant gene of at least one SAC constituent factor, or a cancer in which the expression level of at least one SAC constituent factor is reduced compared to a normal tissue ( Whether it falls under type 2), or whether it falls under cancer (type 4) in which the level of post-translational modification received by at least one SAC component is changed compared to normal tissue is as follows: Judgment can be made.
  • Whether or not the cancer falls into a cancer (type 1) that expresses at least one SAC constitutive mutant gene is determined by evaluating the mutation at the gene level described below or evaluating the mutation at the protein level. can do. As a result of the above evaluation, when it is concluded that the cancer cell expresses at least one mutant gene of SAC constituent factor, it can be determined that the cancer exhibits SAC dysfunction. On the other hand, when it is concluded that the cancer cell does not express the mutant gene of the SAC constituent factor, it can be determined that the cancer is not likely to exhibit SAC dysfunction.
  • genomic DNA or mRNA encoding a target SAC component is recovered from cancer cells, and using this, various methods described in, for example, WO03 / 023063, for example, RFLP method, PCR-SSCP method, ASO hybridization, direct sequencing method, ARMS method, denaturing gradient gel electrophoresis method, RNaseA cleavage method, chemical cleavage method, DOL method, TaqMan PCR method, Invader method, MALDI-TOF / Performed by performing MS method, TDI method, molecular beacon method, dynamic allele specific hybridization method, padlock probe method, UCAN method, nucleic acid hybridization method using DNA chip or DNA microarray, ECA method, etc. (See WO 03/023063, page 17, line 5 to page 28, line 20).
  • the evaluation of the mutation at the protein level is performed by purifying the target SAC constituent factor from cancer cells using a well-known protein purification method such as an antibody column and the obtained SAC constituent factor or Lys-C or the like.
  • the partial peptide obtained by limited digestion with the peptide degrading enzyme is attached to a peptide sequencer or mass spectrometer, and the amino acid sequence is determined.
  • the cancer corresponds to a cancer (type 2) in which the expression level of at least one SAC component factor is lower than that of normal tissue is determined by measuring the protein expression level of the SAC component factor in the cancer cell, This can be done by comparing the expression level in normal tissue.
  • the protein expression level of the SAC component factor is measured using an antibody that specifically recognizes a specific SAC component factor, for example, a well-known immunological method such as flow cytometry analysis, radioisotope immunoassay (RIA method). ), ELISA (Methods inmol Enzymol. 70: 419-439 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ (1980)), Western blotting, immunohistochemical staining, and the like.
  • a well-known immunological method such as flow cytometry analysis, radioisotope immunoassay (RIA method).
  • ELISA Methods inmol Enzymol. 70: 419-439 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ (1980)
  • Western blotting immunohistochemical staining, and the like.
  • the protein expression level of at least one SAC constituent factor in cancer cells is significantly lower than that in normal tissues (for example, the protein expression level of at least one SAC constituent factor in cancer cells is normal tissue) 50% or less, preferably 25% or less, and more preferably 10% or less), it can be determined that the cancer exhibits SAC dysfunction.
  • the expression level of at least one SAC constituent factor in cancer cells is not significantly reduced as compared with normal tissues, it can be determined that the cancer is not likely to exhibit SAC dysfunction. .
  • cancer cells in which the protein expression level of at least one SAC component factor is significantly reduced compared to cancer cells having normal SAC function eg, HeLa cells
  • Whether the cancer falls into a cancer (type 4) in which the level of post-translational modification received by at least one SAC component is changed as compared to normal tissue is a translation that the SAC component in cancer cells receives This can be done by examining post-modification and comparing it with post-translational modifications in normal tissues.
  • the post-translational modification that the SAC component undergoes is examined by performing immunoprecipitation using an antibody that specifically recognizes a specific SAC component, and the post-translationally modified protein or amino acid is added to the immunoprecipitate. It can be measured by performing Western blotting using an antibody that specifically recognizes.
  • the SAC constituent factor is purified using a known protein purification method such as an antibody column using an antibody that specifically recognizes a specific SAC constituent factor, and the obtained SAC constituent factor or Lys-C or the like is obtained.
  • the post-translational modification that the SAC component undergoes can also be examined by analyzing the partial peptide obtained by limited degradation with the peptide degrading enzyme using a peptide sequencer or a mass spectrometer.
  • the cancer may exhibit SAC dysfunction. It can be judged that it is expensive.
  • at least one SAC component in cancer cells has not undergone a significant change in the percentage of post-translational modification, it may be determined that the cancer is not likely to exhibit SAC dysfunction. it can.
  • Whether a cancer belongs to a cancer (type 3) that continues to divide with the uneven distribution of chromosomes is determined by performing a chromosome test on the cancer cells and observing the structure of the chromosomes. Can do. Cancers exhibiting SAC dysfunction due to chromosome examination can be identified according to the method described in Cancer, 2002, vol.94, p.2047-2054, for example.
  • Cancers exhibiting SAC dysfunction include cancers corresponding to one type selected from the above-mentioned types 1 to 5, 2, 3, or 4 types selected from the above-mentioned types 1 to 5 ( For example, cancers corresponding to types 1 and 2, types 1 and 3, types 2 and 3), and cancers corresponding to all of the above types 1 to 5 are included.
  • “functional p53” means a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence of wild-type p53.
  • Wild-type human p53 SEQ ID NO: 21 (NP_000537.3)
  • the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence of wild-type p53 is about 50% or more, preferably about 60% or more, more preferably about 70% or more, more preferably about 80%, with the amino acid sequence of wild-type p53.
  • the amino acid sequences having the identity of about 90% or more, most preferably about 95% or more are particularly preferable.
  • NCBI BLAST National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool
  • Examples of the protein containing substantially the same amino acid sequence as the wild-type p53 amino acid sequence include, for example, the amino acid sequence substantially the same as the wild-type p53 amino acid sequence described above, and substantially the same as the wild-type p53. And proteins having the same quality of activity.
  • “Substantially the same quality” means that these properties are the same in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, it is preferable that the apoptosis-inducing activity is equivalent (eg, about 0.1 to 10 times, preferably 0.5 to 2 times, more preferably 0.8 to 1.25 times), but the amount of these activities, the amount of the protein molecular weight, etc. Target elements may be different.
  • Apoptosis-inducing activity can be measured according to a known method.
  • J. Biol. Chem., Vol. 279, pages 48434-48442, 2004 and Mol. Biol. Cell, vol. 15, pages 5064 -5074 can be measured according to the method described in 2004 or a similar method.
  • the functional p53 includes, for example, (i) one or two or more (for example, about 1 to 200, preferably about 1 to 100, preferably about 1 to 30) in the amino acid sequence of wild-type p53, Preferably, about 1 to 10, more preferably 1 to 5 amino acid sequences are deleted.
  • amino acid sequences in the wild-type p53 amino acid sequence for example, about 1 to 200, preferably About 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10, more preferably 1 to 5 amino acid sequences added, (iii) 1 or 1 in the amino acid sequence of wild-type p53 Amino acids into which two or more (for example, about 1 to 200, preferably about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10, more preferably 1 to 5) amino acids have been inserted 1 or 2 or more (for example, about 1 to 200, preferably about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10) in the amino acid sequence of wild-type p53, More preferably, the amino acid sequence in which 1 to 5 amino acids are substituted with other amino acids, or (v) the amino acid sequence combining them (the total number of mutated amino acids is, for example, about 1 to 200, preferably 1 to A protein having about 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10,
  • the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 includes P47S, P72R, A polypeptide having an amino acid sequence having any amino acid substitution selected from the group consisting of V217M and G360A.
  • the functional p53 is preferably wild-type mammal p53, and most preferably wild-type human p53 (protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21).
  • the expression level (protein expression level) of p53 in “cancer expressing functional p53” is not particularly limited as long as the apoptosis-inducing activity by functional p53 is achieved, but the expression level (protein expression level) of p53 in normal tissues Is usually 10% or more, preferably 25% or more, more preferably 50% or more, and still more preferably 80% or more.
  • the expression level (protein expression level) of p53 in “cancer expressing functional p53” is usually 10 times or less, preferably 8 times or less, more preferably the expression level (protein expression level) of p53 in normal tissues. Is 5 times or less, more preferably 2 times or less.
  • tissue in “normal tissue” means a tissue (or cell) from which a cancer (or cancer cell) to be evaluated is derived.
  • the cancer therapeutic agent of the present invention contains a CENP-E inhibitor.
  • CENP-E (Centromere-associated protein-E) is one of the motor proteins belonging to the kinesin superfamily and has ATPase activity.
  • CENP-E refers to CENP-E, particularly mammalian (eg, human).
  • Representative mammalian CENP-E includes wild-type human CENP-E (polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 (NP_001804.2)).
  • the CENP-E inhibitor used in the present invention means a compound that inhibits the ATPase activity of CENP-E.
  • CENP-E inhibitor that can be used in the present invention is not particularly limited, but the following can be exemplified.
  • R 1 represents optionally substituted aryl or the like;
  • X represents —CO or —SO 2 — or the like;
  • R 2 represents hydrogen or optionally substituted lower alkyl or the like;
  • W represents —CR 4 —, —CH 2 CR 4 —, or N;
  • R 3 represents —CO—R 7 , hydrogen, optionally substituted alkyl, etc .;
  • R 4 is hydrogen or optionally substituted alkyl;
  • R 5 represents hydrogen, hydroxyl, optionally substituted amino, etc .;
  • R 6 represents hydrogen, optionally substituted alkyl, or the like;
  • R 7 represents an optionally substituted lower alkyl or the like.
  • the above compound is preferably the following compound:
  • GSK-923295 is also disclosed in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, p.5839-5844.
  • R 1 represents an optionally substituted cycloalkyl or the like;
  • X represents —CO or —SO 2 —;
  • R 2 represents hydrogen or optionally substituted lower alkyl;
  • W represents —CR 8 —, —CH 2 CR 8 — or N;
  • R 3 represents —CO—R 7 , hydrogen, optionally substituted alkyl, etc .;
  • R 4 represents halo, optionally substituted alkyl or the like;
  • R 5 represents halo, hydroxy, optionally substituted amino and the like;
  • R 6 represents an optionally substituted alkyl or the like;
  • R 7 represents an optionally substituted lower alkyl or the like;
  • R 8 is hydrogen or optionally substituted alkyl; or R 4 and R 5 together with the carbon to which they are attached an oxo group;
  • R 4 and R 8 together with the carbon to which they are attached form a C ⁇ C group, and
  • R 5 represents hydrogen or optionally substituted lower alkyl.
  • R 1 is hydrogen, optionally substituted alkyl, etc .; R 2 represents an optionally substituted alkyl or the like; n is 0, 1, 2, or 3; R 3 is halo, cyano, carboxy, nitro, hydroxy, optionally substituted alkyl, optionally substituted alkoxy, etc .; or R 1 and R 2 are the nitrogen to which they are attached Taken together is an optionally substituted 4-7 membered ring; or R 3 located in the ortho position of the —NR 1 R 2 group is R 1 or R 2 and the atom to which they are attached. Together, they form an optionally substituted 5- to 7-membered ring. )
  • R 1 represents an optionally substituted cycloalkyl or the like
  • X represents — (CR 10 R 11 ) m , — (CR 10 R 11 ) n C (R 13 ) ⁇ C (R 14 ), —O (CR 10 R 11 ) p —, or NR 8 —
  • Y represents a direct bond connecting X and Z, —C (O) —, or —C ( ⁇ N—R 9 ) —
  • R 8 represents —CO—R 7 , hydrogen, alkoxy, optionally substituted alkyl, etc .
  • R 9 represents hydrogen, alkoxy, optionally substituted alkyl or the like
  • R 10 and R 11 are independently hydrogen, hydroxy, optionally substituted alkyl, optionally substitute
  • a therapeutic agent for cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 is a mammal (eg, mouse, Rats, hamsters, rabbits, cats, dogs, cows, sheep, monkeys, humans) cancers that exhibit SAC dysfunction and express functional p53 [eg, colon cancer (eg, familial colon cancer, hereditary) Non-polyposis colorectal cancer, gastrointestinal stromal tumor), lung cancer (eg, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, malignant mesothelioma), mesothelioma, pancreatic cancer (eg, pancreatic duct cancer), gastric cancer (eg, papillary gland) Cancer, mucinous adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma), breast cancer (eg, invasive ductal cancer, non-invasive ductal carcinoma, inflammatory breast cancer), ovarian cancer
  • colon cancer eg, familial colon cancer, hereditary
  • the therapeutic agent of the present invention can be administered orally or parenterally with the CENP-E inhibitor as it is or in combination with a pharmacologically acceptable carrier.
  • dosage form when the therapeutic agent of the present invention is orally administered include, for example, tablets (including sugar-coated tablets, film-coated tablets, sublingual tablets, buccal tablets, intraoral quick-disintegrating tablets), pills, granules, powders, Oral preparations such as capsules (including soft capsules and microcapsules), syrups, emulsions, suspensions, films (eg, oral mucosal adhesive film) and the like can be mentioned.
  • Examples of the dosage form when the therapeutic agent of the present invention is administered parenterally include, for example, injections (eg, intravenous injections, subcutaneous injections, intradermal injections, intramuscular injections, infusions), infusions , Drops, suppositories, and transdermal agents (eg, iontophoretic transdermal agents).
  • the therapeutic agent of the present invention has an appropriate base (eg, butyric acid polymer, glycolic acid polymer, butyric acid-glycolic acid copolymer, butyric acid polymer and glycolic acid polymer mixture, A sustained-release preparation containing a polyglycerol fatty acid ester) may be used.
  • a method for producing the therapeutic agent of the present invention a method generally used in the field of pharmaceutical technology (for example, a method described in Japanese Pharmacopoeia) can be applied.
  • the pharmacologically acceptable carrier include excipients, binders, disintegrants, lubricants, sweeteners, surfactants, suspending agents, emulsifiers, colorants, and preservatives. , Aromatics, flavoring agents, stabilizers, thickeners.
  • excipients include lactose, sucrose, glucose, starch, sucrose, microcrystalline cellulose, licorice powder, mannitol, sodium bicarbonate, calcium phosphate, and calcium sulfate.
  • binder examples include 5 to 10% by weight starch paste solution, 10 to 20% by weight gum arabic solution or gelatin solution, 1 to 5% by weight tragacanth solution, carboxymethyl cellulose solution, sodium alginate solution, and glycerin.
  • disintegrant include starch and calcium carbonate.
  • lubricants include magnesium stearate, stearic acid, calcium stearate, and purified talc.
  • sweeteners include glucose, fructose, invert sugar, sorbitol, xylitol, glycerin, and simple syrup.
  • surfactant include sodium lauryl sulfate, polysorbate 80, sorbitan monofatty acid ester, and polyoxyl 40 stearate.
  • suspending agent include gum arabic, sodium alginate, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, and bentonite.
  • emulsifiers include gum arabic, tragacanth, gelatin, and polysorbate 80.
  • tablets are excipients, binders, disintegrants, lubricants, pills and granules are excipients, binders, disintegrants, powders and capsules are excipients, etc.
  • a syrup can be produced using a sweetener and the like, and an emulsion or suspension can be produced using a suspending agent, a surfactant, an emulsifier and the like.
  • An injection is prepared by a method known per se, that is, by dissolving, suspending or emulsifying a CENP-E inhibitor, which is an active ingredient of the therapeutic agent of the present invention, in a sterile aqueous liquid or oily liquid.
  • aqueous liquid include isotonic solutions (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride) containing physiological saline, glucose and other adjuvants, and suitable solubilizers such as alcohol (eg, Ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), and nonionic surfactant (eg, polysorbate 80, HCO-50).
  • suitable solubilizers such as alcohol (eg, Ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), and nonionic surfactant (eg, polysorbate 80, HCO-50).
  • oily liquid include sesame oil and soybean oil.
  • benzyl benzoate As a solubilizing agent, benzyl benzoate, benzyl alcohol and the like may be used in combination. Buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride), stabilizers (eg, human serum albumin, polyethylene glycol), preservatives (eg, , Benzyl alcohol, phenol) and the like.
  • Buffers eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride
  • stabilizers eg, human serum albumin, polyethylene glycol
  • preservatives eg, , Benzyl alcohol, phenol
  • the content of the CENP-E inhibitor in the therapeutic agent of the present invention (specifically, the various dosage forms described above) varies depending on the form of the preparation, but is usually about 0.01 to about the whole preparation. It is 100% by weight, preferably about 2 to 85% by weight, more preferably about 5 to 70% by weight.
  • the content of a pharmacologically acceptable carrier varies depending on the form of the preparation, but is usually about 1 to 99.9% by weight, preferably about 10%, based on the whole preparation. To 90% by weight.
  • the therapeutic agent of the present invention is stable and has low toxicity, and can be safely administered to mammals (eg, mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, human).
  • the daily dose varies depending on the patient's condition and body weight, the type of compound, the route of administration, etc.
  • the daily dose for an adult (body weight of about 60 kg) Is about 1 to 2000 mg, preferably about 3 to 1000 mg, more preferably about 10 to 250 mg as a CENP-E inhibitor, and these can be administered once or in 2 to 3 divided doses.
  • the therapeutic agent of the present invention When administered parenterally, it is usually administered in the form of a liquid (for example, an injection).
  • a liquid for example, an injection.
  • the single dose varies depending on the administration subject, target organ, symptom, administration method, and the like.
  • it is usually about 0.01 to about 100 mg per kg body weight, preferably about 0.01. It is convenient to administer from about 50 mg, more preferably from about 0.1 to about 5 mg by intravenous injection or infusion.
  • the therapeutic agent of the present invention can be used in combination with a hormonal therapeutic agent, a chemotherapeutic agent, an immunotherapeutic agent, or a drug such as a drug that inhibits the action of cell growth factor and its receptor.
  • a drug that can be used in combination with the therapeutic agent of the present invention is abbreviated as “concomitant drug”.
  • ⁇ hormone therapeutic agent '' examples include phosfestol, diethylstilbestrol, chlorotrianicene, medroxyprogesterone acetate, megestrol acetate, chlormadinone acetate, cyproterone acetate, danazol, allylestrenol, gestrinone, mepartricin, Raloxifene, olmeroxifene, levormeroxifene, antiestrogens (eg, tamoxifen citrate, toremifene citrate), pill formulations, mepithiostan, testrolactone, aminoglutethimide, LH-RH agonists (eg, goserelin acetate, buserelin acetate) Leuprorelin acetate), droloxifene, epithiostanol, ethinyl estradiol sulfonate, aromatase inhibitor (eg, fadrozo
  • chemotherapeutic agent for example, alkylating agents, antimetabolites, anticancer antibiotics, plant-derived anticancer agents are used.
  • alkylating agent examples include nitrogen mustard, nitrogen mustard hydrochloride-N-oxide, chlorambutyl, cyclophosphamide, ifosfamide, thiotepa, carbocon, improsulfan tosylate, busulfan, nimustine hydrochloride, mitoblonitol, Faran, dacarbazine, ranimustine, estramustine phosphate sodium, triethylenemelamine, carmustine, lomustine, streptozocin, piprobroman, etoglucid, carboplatin, cisplatin, miboplatin, nedaplatin, oxaliplatin, altretamine, ambermuthine, dibrospine hydrochloride, fotemustine hydrochloride Predonimustine, pumitepa, ribomustine, temozolomide, treosulphane, trophosphamide Zinostatin Lamar, ado
  • antimetabolite examples include mercaptopurine, 6-mercaptopurine riboside, thioinosine, methotrexate, pemetrexed, enositabine, cytarabine, cytarabine okphosphat, ancitabine hydrochloride, 5-FU drugs (eg, fluorouracil, tegafur, UFT, doxyfluridine, carmofur, galocitabine, emiteful, capecitabine), aminopterin, nerzarabine, leucovorin calcium, tabloid, butosine, folinate calcium, levofolinate calcium, cladribine, emitefur, fludarabine, gemcitabine, hydroxycarbpyramide, pendant Idoxyuridine, mitoguazone, thiazofurin, ambamustine, bendamustine, and their DS formulation is used.
  • 5-FU drugs eg, fluorouracil, tegafur, UFT, doxyfluridine,
  • anticancer antibiotics examples include actinomycin D, actinomycin C, mitomycin C, chromomycin A3, bleomycin hydrochloride, bleomycin sulfate, peplomycin sulfate, daunorubicin hydrochloride, doxorubicin hydrochloride, aclarubicin hydrochloride, pirarubicin hydrochloride, epirubicin hydrochloride , Neocartinostatin, misramycin, sarcomycin, carcinophylline, mitotane, zorubicin hydrochloride, mitoxantrone hydrochloride, idarubicin hydrochloride, and their DDS formulations.
  • plant-derived anticancer agent for example, etoposide, etoposide phosphate, vinblastine sulfate, vincristine sulfate, vindesine sulfate, teniposide, paclitaxel, docetaxel, vinorelbine, and their DDS preparations are used.
  • immunotherapeutic agent examples include picibanil, krestin, schizophyllan, lentinan, ubenimex, interferon, interleukin, macrophage colony stimulating factor, granulocyte colony stimulating factor, erythropoietin, lymphotoxin, BCG vaccine, corynebacterium parvum , Levamisole, polysaccharide K, pronocodazole, and anti-CTLA4 antibody are used.
  • the “cell growth factor” in the “drug that inhibits the action of the cell growth factor and its receptor” may be any substance that promotes cell growth, and usually has a molecular weight of 20,000 or less. Peptides include factors that exert their effects at low concentrations by binding to receptors.
  • EGF epidermal growth factor
  • IGF insulin, IGF (insulin-like growth factor) -1, IGF-2
  • FGF fibroblast growth factor
  • Other cell growth factors eg, CSF (colony stimulating factor), EPO (erythropoietin), IL-2 (interleukin-2), NGF (nerve growth factor), PDGF (platelet-derived growth factor), TGF ⁇ ( transforming growth factor ⁇ ), HGF (hepatocyte growth factor), VEGF (vascular endothelial growth factor), heregulin, angiopoietin); Etc.
  • CSF colony stimulating factor
  • EPO erythropoietin
  • IL-2 interleukin-2
  • NGF nerve growth factor
  • PDGF platelet-derived growth factor
  • TGF ⁇ transforming growth factor ⁇
  • HGF hepatocyte growth factor
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • Etc vascular endothelial growth factor
  • the “cell growth factor receptor” may be any receptor capable of binding to the above-mentioned cell growth factor. Specifically, EGF receptor, heregulin receptor (eg, HER3 ), Insulin receptor, IGF receptor-1, IGF receptor-2, FGF receptor-1 or FGF receptor-2, VEGF receptor, angiopoietin receptor (eg, Tie2), PDGF receptor, TNF ⁇ receptor Etc. are used.
  • EGF receptor heregulin receptor (eg, HER3 )
  • Insulin receptor IGF receptor-1, IGF receptor-2, FGF receptor-1 or FGF receptor-2
  • VEGF receptor eg, angiopoietin receptor (eg, Tie2)
  • PDGF receptor TNF ⁇ receptor Etc.
  • Examples of the “drug that inhibits the action of cell growth factor and its receptor” include, for example, EGF inhibitor, TGF ⁇ inhibitor, harregulin inhibitor, insulin inhibitor, IGF inhibitor, FGF inhibitor, KGF inhibitor, CSF inhibition Agent, EPO inhibitor, IL-2 inhibitor, NGF inhibitor, PDGF inhibitor, TGF ⁇ inhibitor, HGF inhibitor, VEGF inhibitor, angiopoietin inhibitor, EGF receptor inhibitor, HER2 inhibitor, HER4 inhibitor, Insulin receptor inhibitor, IGF-1 receptor inhibitor, IGF-2 receptor inhibitor, FGF receptor-1 inhibitor, FGF receptor-2 inhibitor, FGF receptor-3 inhibitor, FGF receptor- 4 inhibitor, VEGF receptor inhibitor, Tie-2 inhibitor, PDGF receptor inhibitor, Abl inhibitor, Raf inhibitor, FLT3 inhibitor, c-Ki t inhibitor, Src inhibitor, PKC inhibitor, Trk inhibitor, Ret inhibitor, mTOR inhibitor, Aurora inhibitor, PLK inhibitor, MEK (MEK1 / 2) inhibitor, MET inhibitor, CDK inhibitor, Akt Inhibitors, ER
  • agents include anti-VEGF antibodies (eg, Bevacizumab), anti-HER2 antibodies (eg, Trastuzumab, Pertuzumab), anti-EGFR antibodies (eg, Cetuximab, Panitumumab, Matuzumab, Nimotuzumab), anti-VEGFR Antibody, anti-HGF antibody, Imatinib mesylate, Erlotinib, Gefitinib, Sorafenib, Sunitinib, Dasatinib, Lapatinib, Vatalanib, 4- (4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yloxy) -6-methoxy-7- [ 3- (1-Pyrrolidinyl) propoxy] quinazoline (AZD-2171), Lestaurtinib, Pazopanib, Canertinib, Tandutinib, 3- (4-Bromo-2,6-difluorobenzyloxy)
  • topoisomerase I inhibitor eg
  • the dosage can be reduced compared to the case where the therapeutic agent or the concomitant drug of the present invention is administered alone;
  • the drug used in combination with the therapeutic agent of the present invention can be selected according to the patient's symptoms (mild, severe, etc.); (3) The treatment period can be set longer; (4) The therapeutic effect can be sustained; (5) By using the therapeutic agent of the present invention in combination with a concomitant drug, a synergistic effect can be obtained;
  • the combination of the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug is referred to as “the concomitant agent of the present invention”.
  • the administration time of the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug is not limited, and the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug may be administered simultaneously to the administration subject, Administration may be performed with a time difference.
  • an administration form when the therapeutic agent of the present invention and a concomitant drug are used in combination for example, (1) administration of a single preparation obtained by simultaneously formulating the therapeutic agent of the present invention and a concomitant drug; (2) Simultaneous administration of two preparations obtained by separately formulating the therapeutic agent of the present invention and a concomitant drug by the same administration route; (3) Administration of the two preparations obtained by separately formulating the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug with a time difference by the same administration route; (4) Simultaneous administration of two preparations obtained by separately formulating the therapeutic agent of the present invention and a concomitant drug by different administration routes; (5) Administration of two types of preparations obtained by separately formulating the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug at different administration routes with a time difference (for example, the order of the therapeutic agent of the present invention and then the concomitant drug) Administration in reverse order) Is mentioned.
  • a time difference for example, the order of the therapeutic agent of the present
  • the dose of the concomitant drug can be appropriately selected on the basis of the clinically used dose.
  • the mixing ratio between the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, target disease, symptom, combination and the like. For example, when the administration subject is a human, 0.01 to 100 parts by weight of the concomitant drug may be used per 1 part by weight of the therapeutic agent of the present invention.
  • the concomitant drug of the present invention has low toxicity.
  • the therapeutic agent of the present invention and / or the above concomitant drug is mixed with a pharmacologically acceptable carrier according to a method known per se, for example, a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • a pharmaceutical composition such as a tablet.
  • the injection can be administered intravenously, intramuscularly, subcutaneously, or into an organ, or directly to the lesion.
  • Examples of the pharmacologically acceptable carrier described above include the same pharmacologically acceptable carriers that may be used in the production of the therapeutic agent of the present invention.
  • the compounding ratio of the therapeutic agent of the present invention and the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention can be appropriately selected depending on the administration subject, administration route, disease and the like.
  • the content of the compound of the present invention in the combination agent of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 0.01 to 100% by weight, preferably about 0.1 to 50% by weight, based on the whole preparation, More preferably, it is about 0.5 to 20% by weight.
  • the content of the concomitant drug in the concomitant drug of the present invention varies depending on the form of the preparation, but is usually about 0.01 to 90% by weight, preferably about 0.1 to 50% by weight, more preferably about the whole preparation. About 0.5 to 20% by weight.
  • the pharmacologically acceptable carrier content varies depending on the form of the preparation, but is usually about 1 to 99.99% by weight, preferably about 10 to 90% by weight based on the whole preparation. %. Moreover, the same content may be sufficient also when formulating the therapeutic agent and concomitant drug of this invention separately, respectively.
  • the present invention is a method for determining the sensitivity of a cancer to a CENP-E inhibitor (hereinafter referred to as the “method of the present invention”). Provide).
  • the method of the present invention is characterized by evaluating whether or not a cancer isolated from a cancer patient to be examined expresses functional p53.
  • the animals that can be examined by the method of the present invention are mammals (eg, humans, monkeys, cows, pigs, horses, dogs, cats, sheep, goats, rabbits, hamsters, guinea pigs, mice, rats).
  • the mammal is preferably a human.
  • the subject to be examined in the method of the present invention is a cancer patient exhibiting SAC dysfunction.
  • cancer exhibiting SAC dysfunction are as described in detail in the section “1.
  • definitions of other terms in this section shall be in accordance with the above-mentioned section of “1. Cancer therapeutic agent” unless otherwise specified.
  • the method of the present invention comprises evaluating whether or not the cancer of the subject cancer patient exhibits SAC dysfunction.
  • cancer therapeutic agent Whether the cancer corresponds to a cancer exhibiting SAC dysfunction or not can be evaluated by the method described in detail in the above-mentioned section “1. Cancer therapeutic agent”.
  • Whether or not the cancer falls into the above type 1 is determined based on whether the cancer cells contained in the cancer removed from the cancer patient to be tested are SAC components (for example, BubR1, Bub1, Bub3, MAD1, MAD2, CDC20, CDC27 , MPS1, Aurora-B, Borealin, INCENP, Survivin, Chk1, ZW10, Zwilch, ROD).
  • SAC components for example, BubR1, Bub1, Bub3, MAD1, MAD2, CDC20, CDC27 , MPS1, Aurora-B, Borealin, INCENP, Survivin, Chk1, ZW10, Zwilch, ROD.
  • Whether or not the cancer falls into the above-mentioned type 1 depends on whether the cancer cells contained in the cancer removed from the cancer patient to be examined are other SAC components (for example, MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80). , NUF2, SPC24, SPC25, CASC5, ZWINT) can also be determined by evaluating whether or not the mutant gene is expressed.
  • other SAC components for example, MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80.
  • NUF2 SPC24, SPC25, CASC5, ZWINT
  • Whether or not the cancer falls into the above-mentioned type 2 is determined based on whether or not the SAC component in the cancer cell contained in the cancer removed from the subject cancer patient (for example, BubR1, Bub1, Bub3, MAD1, MAD2, CDC20, CDC27 , MPS1, Aurora-B, Borealin, INCENP, Survivin, Chk1, ZW10, Zwilch, ROD) can be determined by evaluating whether or not the protein expression level is lower than that in normal tissues.
  • the SAC component in the cancer cell contained in the cancer removed from the subject cancer patient for example, BubR1, Bub1, Bub3, MAD1, MAD2, CDC20, CDC27 , MPS1, Aurora-B, Borealin, INCENP, Survivin, Chk1, ZW10, Zwilch, ROD
  • Whether or not the cancer falls into the above type 2 is determined based on whether or not the SAC component in other cancer cells contained in the cancer removed from the cancer patient to be examined (for example, MIS12, PMF1, DSN1, NSL1, NDC80). , NUF2, SPC24, SPC25, CASC5, ZWINT) can be determined by evaluating whether or not the protein expression level is lower than that in normal tissues. BubR1 is mentioned as a preferable example of the SAC constituent factor used for the evaluation.
  • whether or not the cancer exhibits SAC dysfunction is determined by performing a chromosomal examination of cancer cells contained in the cancer removed from the cancer patient to be examined, observing the structure of the chromosome, Can be determined by evaluating whether cell division continues with unequal chromosome distribution. Cancers exhibiting SAC dysfunction due to chromosomal examination can be identified, for example, according to the method described in Cancer 2002 vol94 2047-2054. If it is evaluated that the cancer cells continue to divide with unequal chromosome distribution, it can be determined that the cancer exhibits SAC dysfunction. On the other hand, if the cancer does not cause unequal chromosome distribution, it can be determined that the cancer is not likely to exhibit SAC dysfunction.
  • Whether it falls under the above type 4 can be determined by examining post-translational modifications received by SAC components in cancer cells and comparing them with post-translational modifications in normal tissues.
  • Whether or not it falls under the above type 5 can be determined by evaluating the efficacy of chemotherapy with paclitaxel or other taxane chemotherapeutic agents, or the GI50 value for paclitaxel in vitro. it can.
  • Whether or not cancer expresses functional p53 can be determined by evaluation of mutation at the gene level described later or evaluation of mutation at the protein level.
  • genomic DNA or mRNA encoding p53 is recovered from cancer cells and used, for example, in WO03 / 023063 (eg, page 17, line 5 to page 28, line 20).
  • Mutation at the protein level is evaluated by purifying p53 from cancer cells using a well-known protein purification method such as an antibody column, and subjecting the resulting p53 to limited degradation with a peptide-degrading enzyme such as Lys-C.
  • the partial peptide obtained in this manner is subjected to a peptide sequencer or mass spectrometer and the amino acid sequence is determined.
  • the mutant p53 when p53 expressed by cancer cells has a mutation at the amino acid sequence level, the mutant p53 is equivalent to wild-type p53 (eg, about 0.1 to 10 times, preferably 0.5 to 2 times, more preferably It is further evaluated whether or not it has an apoptosis-inducing activity of 0.8 to 1.25 times).
  • Apoptosis-inducing activity can be measured according to the method described in J. Biol. Chem., Vol.279, pages 48434-48442, 2004 or Mol. Biol. Cell, vol.15, pages 5064-5074, 2004. it can.
  • the sensitivity of the cancer to CENP-E inhibitor can be determined from the results of the evaluation and the above measurement. That is, if it is concluded that the cancer exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 (preferably wild-type p53), the cancer is sensitive to CENP-E inhibitors ( (Or high sensitivity). On the other hand, if it is concluded that a cancer with SAC dysfunction does not express functional p53, the cancer is likely not to be sensitive (or less sensitive) to CENP-E inhibitors Can be determined.
  • the CENP-E inhibitor of the cancer is evaluated.
  • the sensitivity of can be predicted. That is, it can be determined that a cancer expressing functional p53 is highly likely to have sensitivity (or high sensitivity) to a CENP-E inhibitor.
  • p53 as a pharmacodynamic (PD) marker
  • PD pharmacodynamic
  • functional p53 is useful as a PD marker for CENP-E inhibitors in cancer patients exhibiting SAC dysfunction, and the expression level of functional p53, blood functional p53 level or blood antifunction in cancer cells
  • the effectiveness and effective amount of a CENP-E inhibitor for cancers that exhibit SAC dysfunction and that express functional p53 can be determined using the level of the p53 antibody as an index.
  • the present invention comprises administering a CENP-E inhibitor to a mammal, and before and after the administration (i) cancer cell functional p53 expression level, Comparing one or more expression levels selected from (ii) blood functional p53 expression level and (iii) blood anti-functional p53 antibody expression level and exhibiting SAC dysfunction and functional
  • a method for determining an effective amount of a CENP-E inhibitor in a cancer expressing p53 hereinafter, sometimes referred to as “determination method of the present invention”.
  • a fixed dose of CENP-E inhibitor is administered to a mammal.
  • mammals examples include humans, monkeys, cows, pigs, horses, dogs, cats, sheep, goats, rabbits, hamsters, guinea pigs, mice, rats and the like.
  • the mammal is preferably a human.
  • the mammal is a cancer patient who exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53.
  • cancer therapeutic agent unless otherwise specified.
  • “Expression level” includes both protein expression level and gene expression level.
  • the expression level of functional p53 protein can be measured by an immunological technique using an antibody that specifically recognizes functional p53 protein.
  • immunological methods include antibody arrays, flow cytometry analysis, radioisotope immunoassay (RIA method), ELISA (MethodsMethodin Enzymol. 70: 419-439 (1980)), Western blotting, immune tissue Dyeing.
  • the expression level of the functional p53 gene is measured by a method known per se using a nucleic acid probe or primer set capable of specifically detecting a functional p53 gene transcript (ie, mRNA encoding the p53 gene) or cDNA. I can do it. Examples of the measuring method include RT-PCR, Northern blotting, in situ hybridization, and cDNA array.
  • the expression level of the anti-functional p53 antibody can be measured by an immunological technique using the isolated or purified functional p53 protein or its partial peptide having antigenicity. Examples of immunological techniques include those described above.
  • the measurement of the functional p53 expression level or anti-functional p53 antibody expression level in blood is preferably performed by measuring the functional p53 protein concentration or anti-functional p53 antibody concentration in serum or plasma.
  • one or more expression levels selected from (i) to (iii) before administration of the CENP-E inhibitor are compared with those after administration.
  • the comparison of the expression level is preferably performed based on the presence or absence of a statistically significant difference.
  • the CENP- when the functional p53 expression level or the anti-functional p53 antibody expression level increased after administration as compared with before administration of the CENP-E inhibitor, the CENP- It can be determined that the E inhibitor is highly likely to be effective in the treatment of cancer that exhibits SAC dysfunction in a mammal to be administered and expresses functional p53. Conversely, if the functional p53 expression level or anti-functional p53 antibody expression level after administration of the CENP-E inhibitor is unchanged or decreased compared to before administration, It can be determined that the CENP-E inhibitor is highly likely to be ineffective in the treatment of cancers that exhibit SAC dysfunction in functional mammals and that express functional p53.
  • the method comprises a group consisting of (i) cancer cell functional p53 expression level, (ii) blood functional p53 expression level, and (iii) blood anti-functional p53 antibody expression level. It is sufficient to measure at least one selected expression level, two of these ((i) and (ii), (i) and (iii), or (ii) and (iii)), or 3 By measuring all the expression levels and comparing before and after administration of the CENP-E inhibitor, a more accurate determination can be made.
  • At least one expression level is increased after administration compared to before administration of the CENP-E inhibitor. If so, it is determined that the CENP-E inhibitor is highly likely to be effective in the treatment of cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 in the mammal to be administered.
  • the CENP-E inhibitor is likely to be ineffective in the treatment of cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 in the mammal to be administered. If determined, the CENP-E inhibitor is administered again to the mammal at a higher dose, and one or more expression levels selected from (i) to (iii) before and after the re-administration And the efficacy of the CENP-E inhibitor at higher doses may be determined. In this way, the CENP-E inhibitor may be effective in the treatment of cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 in the administered mammal while increasing the dose stepwise. By repeating the method of the present invention until it is determined to be high, it is possible to determine the effective amount of the CENP-E inhibitor against cancer that exhibits SAC dysfunction and expresses functional p53 in the target mammal.
  • siRNA small interfering RNA ATP: Adenosine triphosphate
  • SDS Sodium dodecyl sulfate
  • PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis
  • PVDF Polyvinylidene fluoride PCR: Polymerase Chain Reaction
  • cDNA complementary deoxyribonucleic acid
  • RNA Ribonucleic acid ATPase: Adenosine triphosphate degrading enzyme
  • HRP Horseradish Peroxidase
  • GAPDH Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
  • sequence numbers in the sequence listing in the present specification indicate the following sequences.
  • SEQ ID NO: 1 Amino acid sequence of wild type human BubR1 (SEQ ID NO: 2) Amino acid sequence of wild type human Bub1 (SEQ ID NO: 3) Amino acid sequence of wild type human Bub3 (SEQ ID NO: 4) Amino acid sequence (SEQ ID NO: 5) Amino acid sequence of wild type human MAD2 (SEQ ID NO: 6) Amino acid sequence of wild type human CDC20 (SEQ ID NO: 7) Amino acid sequence of wild type human CDC27 isoform 1 (SEQ ID NO: 8) Wild Type human CDC27 isoform 2 amino acid sequence (SEQ ID NO: 9) wild type human MPS1 isoform 1 amino acid sequence (SEQ ID NO: 10) wild type human MPS1 isoform 2 amino acid sequence (SEQ ID NO: 11) wild type human Aurora-B (SEQ ID NO: 12) Amino acid sequence of wild type human Borealin (SEQ ID
  • Example 1 Inhibition of cancer cell growth by suppressing CENP-E expression when BubR1 function declines
  • the function of BubR1 and CENP-E which are SAC components, is reduced.
  • the effect on proliferation was examined using knockdown experiments with siRNA introduction.
  • Eg5 belonging to the same M phase kinesin as CENP-E was used as a control for M phase arrest.
  • Hela cells A human cervical cancer cell line Hela (purchased from American Tissue Culture Collection (ATCC)) (hereinafter sometimes referred to as “Hela cells”) is seeded in a 6-well multiwell plate at a concentration of 4 ⁇ 10 5 cells / well. The cells were cultured overnight in a carbon dioxide incubator (5% CO 2 , 37 ° C.). After leaving a suspension of 500 ⁇ L of OPTI-MEM (Invitrogen), siRNA (final concentration: 50 ⁇ M) and 5 ⁇ L of Dharmafect 1 (Dharmacom) for 20 minutes at room temperature, SiRNA was introduced by adding to the cell culture medium.
  • OPTI-MEM Invitrogen
  • siRNA final concentration: 50 ⁇ M
  • Dharmafect 1 Dharmafect 1
  • siRNA As each siRNA, CENP-E (SMARTpool siRNA, Dharmacon, Lafayette, CO, USA), Eg5 (SMARTpool siRNA, Dharmacon), and BubR1 (SMARTpool siRNA, Dharmacon) were used. Moreover, siTrio negative control (B-Bridge International, Inc.) was used as negative control non-silencing (NS) siRNA. Sixteen hours after the introduction of siRNA, Hela cells into which siRNA had been introduced using trypsin were collected and replated on a 96-well multiwell plate so as to be 2 ⁇ 10 3 cells / 100 ⁇ L / well.
  • siTrio negative control B-Bridge International, Inc.
  • Protein expression analysis by Western blotting analysis was performed as follows. On the second day after siRNA introduction, intracellular proteins were eluted with NETN buffer (0.5% NP-40, 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 10mM EDTA), and insoluble fractions were obtained by centrifugation. After removal of the sample, a 3-fold concentrated SDS sample buffer was added to the supernatant, followed by heat treatment at 100 ° C. for 3 minutes.
  • This cell lysate (15 ⁇ L) was separated by SDS-PAGE (gel concentration: 7.5%), transferred to a PVDF membrane (BioRad), stained with an antibody that recognizes the protein of interest, and chemiluminescence (Super signal West ⁇ ⁇ ⁇ Pico Chemiluminescent Substrate, Thermo Scientific).
  • chemiluminescence Super signal West ⁇ ⁇ ⁇ Pico Chemiluminescent Substrate, Thermo Scientific.
  • CENP-E antibody 1000-fold dilution; Santa Cruz, code number sc22790
  • Eg5 antibody 1000-fold dilution; Abcam, code number Ab37814
  • BubR1 antibody 1000-fold dilution; MD Transduction, Code No. 612503
  • GAPDH 2000-fold dilution; Chemicon, code No. MAB374
  • HRP-linked anti-rabbit antibody or HRP-linked anti-mouse antibody was used for secondary antibody staining.
  • RNA expression analysis by quantitative PCR was performed as follows. Two days after siRNA introduction, RNA was extracted from Hela cells using RNeasy Mini Kit (QIAGEN), and reverse transcription reaction using random primers with 500 ng of RNA as a template (TaqMan Reverse Transcription Reagent Kit; Applied Biosystems) ) To prepare cDNA. Quantify PCR reaction solution with 1 ⁇ L of the above cDNA, 10 ⁇ L of TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), 2 ⁇ L of target gene TaqMan TM Gene Expression Assays (Applied Biosystems) and 7 ⁇ L of distilled water. PCR was performed. The quantitative PCR was performed under the conditions of repeating 50 times at 50 ° C.
  • step A step of maintaining at 95 ° C. for 15 seconds and then maintaining at 60 ° C. for 1 minute 40 times.
  • GAPDH was used as an endogenous control, and the expression value of each gene was corrected with the expression value of GAPDH.
  • CENP-E siRNA, Eg5 siRNA, and BubR1 siRNA induced a decrease in the expression level of each target gene mRNA and protein in Hela cells.
  • the proliferation test of the Hela cells into which each siRNA was introduced was performed by the following method. Specifically, 16 hours after siRNA introduction, siRNA-introduced Hela cells were collected with trypsin and re-seeded in a 96-well multiwell plate so as to be 2 ⁇ 10 3 cells / 100 ⁇ L / well.
  • CELP-E siRNA-introduced Hela cells CENP-E + BubR1 siRNA
  • BubR1 siRNA BubR1 siRNA
  • the growth inhibitory effect on the control Hela cells into which BubR1 siRNA was introduced
  • CENP-E inhibitors are effective for the treatment of cancers with SAC dysfunction.
  • an inhibitor of Eg5 belonging to the same M phase kinesin as CENP-E is not effective for cancers exhibiting SAC dysfunction.
  • Example 2 Inhibition of cancer cell growth by suppressing CENP-E enzyme activity when BubR1 function declines CENP-E ATPase inhibitor GSK923295 (CENP-E inhibitor; Proc Natl Acad Sci US A., vol. 107 (13), pages 5839-5844, 2010) was added to the proliferation test.
  • CENP-E inhibitor Proc Natl Acad Sci US A., vol. 107 (13), pages 5839-5844, 2010
  • a control group a Hela cell group to which Ispinesib (Eg5 inhibitor) or BI2536 (Plk1 inhibitor), which is known to inhibit M phase, was added instead of CENP-E ATPase activity inhibitor was used.
  • the cell culture method and siRNA introduction method followed the method shown in Example 1.
  • Hela cells introduced with BubR1 siRNA or NS siRNA were subjected to a proliferation test using GSK923925, Ispinesib or BI2536 by the method described below.
  • siRNA-introduced Hela cells were collected using trypsin and re-seeded in a 96-well multiwell plate to 2 ⁇ 10 3 cells / 100 ⁇ L / well.
  • GSK923925 (30 nM), Ispinesib (10 nM) or BI2536 (3 nM) was added to the cell culture solution 8 hours after reseeding (24 hours after siRNA introduction), and then Hela cells were cultured for 3 days.
  • NS siRNA-introduced Hela cells have a growth inhibitory effect of 80% or more compared to no treatment in both GSK923925 treatment (30 nM), Ispinesib treatment (10 nM) and BI2536 treatment (3 nM). Observed.
  • GSK923295 treatment (30 nM) showed a growth inhibition of 60% or more compared to no treatment, whereas Ispinesib treatment (10 nM) and BI2536 In the treatment (3 nM), no growth inhibitory effect was observed compared to the no treatment.
  • CENP-E inhibitors are effective for the treatment of cancers with SAC dysfunction.
  • Eg5 inhibitors belonging to the same M phase kinesin as CENP-E and Plk1 inhibitor which is an M phase kinase, could not confirm the therapeutic effect of cancers with SAC dysfunction.
  • Example 3 Increase in the amount of p53 protein due to dysfunction of BubR1 and CENP-E Hela cells co-introduced with BubR1 siRNA and CENP-E siRNA were subjected to Western blotting analysis to examine changes in expression of p53 protein.
  • each Hela cell into which BubR1 siRNA and Eg5 siRNA were co-introduced, BubR1 siRNA alone or NS siRNA was independently introduced was used.
  • Intracellular proteins were eluted from Hela cells 3 days after introduction of each siRNA with NETN (0.5% NP-40, 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA) buffer, and insoluble fractions were removed by centrifugation.
  • Example 1 For primary antibody staining, CENP-E antibody (1000-fold dilution; Santa Cruz), Eg5 antibody (1000-fold dilution; Abcam), BubR1 antibody (1000-fold dilution; MD Transduction), p53 antibody (1000-fold dilution; Santa Cruz code number sc126) and alpha-tubulin antibody (diluted 4000 times; Sigma-Aldrich) were used.
  • Example 4 Activation of p53 pathway by malfunction of BubR1 and CENP-E Hela cells co-introduced with BubR1 siRNA and CENP-E siRNA were subjected to gene expression analysis using oligonucleotide microarray (Human Genome U133 plus 2.0; Affimetrix). As controls, Hela cells into which BubR1 siRNA and Eg5 siRNA were co-introduced, BubR1 siRNA was introduced alone, and NS siRNA was introduced alone were used. The experiment method of oligonucleotide microarray was conducted according to Affimetrix's experiment manual (Expression analysis technical manual), and the obtained experimental data was analyzed using GeneSpring (Agilent Technology). The cell culture method and siRNA introduction method followed the method shown in Example 1.
  • Table 1 shows the number of genes (expression of all genes (left), p53-related genes (right)) whose expression varied in Hela cells into which each siRNA was introduced.
  • the number of genes whose expression was increased compared to Hela cells transfected with NS siRNA was 51 in Hela cells introduced with BubR1 alone, and 149 in Hela cells co-introduced with BubR1 siRNA and Eg5 siRNA. 434 in Hela cells co-introduced with BubR1 siRNA and CENP-E siRNA.
  • the number of p53-related genes was 13 in Hela cells into which BubR1 siRNA was introduced alone and 27 in Hela cells into which BubR1 siRNA and Eg5 siRNA were co-introduced, whereas BubR1 siRNA and CENP It was 52 in Hela cells co-transfected with -E siRNA.
  • the p53 pathway is activated when a CENP-E inhibitor is used for cancer exhibiting SAC dysfunction.
  • Example 5 P53-dependent caspase3 / 7 activation due to dysfunction of BubR1 and CENP-E 1) Hela cells co-introduced with p53 siRNA, BubR1 siRNA and CENP-E siRNA, and 2) p53 co-introduced with BubR1 siRNA and CENP-E siRNA Mutant breast cancer cell line SK-BR3 The activation of caspase3 / 7 was investigated in
  • SK-BR3 human breast cancer cell line SK-BR3 (purchased from American Tissue Culture) Collection (ATCC)) (hereinafter sometimes referred to as “SK-BR3 cells”) are performed as described in Example 1. It was performed under the same conditions as the cervical cancer cell line Hela.
  • AdTC American Tissue Culture) Collection
  • SK-BR3 cells purchased from American Tissue Culture) Collection (ATCC)
  • CENP-E SMARTpool siRNA, Dharmacon
  • BgR1 SMARTpool siRNA, Dharmacon
  • p53 SMARTpool siRNA, Dharmacon
  • Example 6 BubR1 protein expression in various cancer cell lines Four cell lines purchased from American Tissue Culture Collection (ATCC) (human pancreatic cancer cell line PANC-1 (hereinafter sometimes referred to as “PANC-1 cell”) Human kidney cancer cell line Caki-1 (hereinafter sometimes referred to as “Caki-1 cells”), human prostate cancer cell line DU 145 (hereinafter sometimes referred to as “DU 145 cells”) And Hela cells) and a human ovarian cancer cell line A2780 (hereinafter sometimes referred to as “A2780 cells”) purchased from the European Collection of Animal Cell Culture (ECACC) on a 10 cm culture plate, respectively. Culturing was performed in an incubator (5% CO 2 , 37 ° C.).
  • ATCC American Tissue Culture Collection
  • DU 145 cells human prostate cancer cell line
  • A2780 cells human ovarian cancer cell line A2780 (hereinafter sometimes referred to as “A2780 cells”) purchased from the European Collection of Animal Cell Culture (ECACC) on a 10 cm culture plate, respectively. C
  • Example 7 Increase in the amount of functional p53 protein by inhibiting CENP-E enzyme activity in Caki-1 cells It has been reported that Caki-1 cells have the wild-type p53 gene (http://cellbank.nibio.go.jp/cellinfo /p5301.htm). After adding GSK923295 to Caki-1 cells, expression variation of p53 protein was examined. Caki-1 cells were seeded in a 6-well multiwell plate at 2 ⁇ 10 5 cells / 2 mL / well, and then cultured for 8 hours or more until the cells adhered to the bottom of the plate. Thereafter, GSK923925 (100 nM) or DMSO (control) was added to the cell culture medium, and Caki-1 cells were cultured for 3 days after the addition.
  • GSK923925 100 nM
  • DMSO control
  • NETN (0.5% NP-40, 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA) buffer was added to the cultured Caki-1 cells, and the insoluble fraction was removed by centrifugation. Three-fold concentrated SDS sample buffer was added. The obtained sample was heated at 100 ° C. for 3 minutes.
  • Western blotting analysis followed the method shown in Example 1. For primary antibody staining, anti-PARP antibody (1000-fold dilution; Cell Signaling code number 9542), anti-p53 antibody (1000-fold dilution; Santa Cruz code number sc126) and anti-GAPDH antibody (2000-fold dilution; Chemicon, Code number MAB374) was used.
  • Example 8 Inhibition of cancer cell growth by inhibiting CENP-E enzyme activity in Caki-1 cells Proliferation of the cells when GSK923295 was added to Caki-1 cells was examined.
  • the cell culture method and the compound addition method followed the methods shown in Example 1 and Example 2.
  • Caki-1 cells were seeded in a 96-well multiwell plate at 2 ⁇ 10 3 cells / 100 ⁇ L / well, and then cultured for 16 hours or more until the cells adhered to the bottom of the plate. Thereafter, GSK923925 (100 nM) or DMSO was added to the cell culture medium, and Caki-1 cell culture was continued.
  • the day of compound addition was set to Day 0, and then cells were collected every day for 3 days (Day 1-Day 3), and the amount of intracellular ATP was measured using CellTiter-Glo luminescent cell viability kit (Promega Corp.). The value (times) obtained by standardizing each ATP amount with the ATP amount of Day 0 was used as an indicator of proliferation.
  • Example 6 From the examination of Example 6 and Example 8, it was shown that CENP-E inhibitors are effective for the treatment of cancers exhibiting SAC dysfunction and expressing functional p53.
  • Example 9 Antitumor effect of CENP-E inhibitor on Caki-1 cell-bearing mice
  • Caki-1 cells are suspended in 50% Matrigel solution and subcutaneously injected into 6-7 week old BALB / c female nude mice (CLEA Japan) 5.0 X10 6 Caki-1 cells were transplanted.
  • the tumor diameter of the tumor engrafted 25 days after transplantation was measured, and the tumor volume was calculated by the following formula.
  • Tumor volume major axis x minor axis x minor axis x (1/2)
  • Individuals with tumors engrafted with a tumor volume of around 200 mm 3 were selected, and 3 animals per group were used for the study.
  • GSK923295 dissolved in a vehicle solvent (10% DMSO, 9% Cremophor EL, 18% PEG400, 0.09 mol / l citric acid solution) so as to have a concentration of 10 mg / ml was used.
  • the dose of GSK923295 was 100 mg / kg, and intraperitoneal administration was performed once a day on the 25th, 26th, 27th and 32nd days of transplantation.
  • the tumor volume was calculated by measuring the tumor diameter on the 25th, 28th, 32th, 35th and 39th days of transplantation.
  • the results are shown in FIG.
  • the vertical axis of the graph represents the tumor volume calculated from the tumor diameter
  • the horizontal axis represents the number of days after transplantation
  • the graph red line represents the GSK923295 administration group
  • the graph black line represents the vehicle (control) administration group.
  • the present invention provides an excellent therapeutic agent for cancer exhibiting SAC dysfunction.
  • the present invention also provides an excellent method for determining the sensitivity of cancer to CENP-E inhibitors.

Abstract

　癌がSAC機能異常を呈していても、機能的p53を発現していれば、CENP-E阻害剤が当該癌の治療剤として有効である。また、癌がSAC機能に異常を呈するか否か評価し、さらに該癌が機能的p53を発現しているか否か評価することにより、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定することができる。

Description

癌の治療剤
　本発明は、CENP-E阻害剤を含む、癌の治療剤に関する。
　本発明はさらに、癌を患っている個体の層別化の方法に関する。より詳細には、CENP-E阻害剤に感受性である癌細胞と前記阻害剤には感受性がない癌細胞を区別する工程を含む方法に関する。
（発明の背景）
　紡錘体形成チェックポイント（spindle assembly checkpoint ）(本明細書中、「SAC」と称することがある。）は、細胞分裂時の均等な染色体分配をチェックする機構であり、紡錘体と複製された姉妹染色体の動原体が結合するまで細胞周期を分裂中期で留め、姉妹染色体の分配を停止させる機能を有する。細胞分裂時に均等な染色体分配を生じるためには、i)有糸分裂中期の染色体整列、及びii)中心体の分離、双極性有糸分裂紡錘体の形成等が正常に行われる必要がある。細胞分裂時に均等な染色体分配を生じなかった場合には、SACが活性化し、細胞死を誘導する。SACの機能欠損は、種々のヒト癌細胞において観察される染色体の不安定化の原因の一つと考えられている（非特許文献１）。SACを構成する因子としてはBubR1等が知られている（非特許文献２）。
　Centromere-associated protein-E（本明細書中、「CENP-E」と称することがある）は、キネシンスーパーファミリーに属するモータータンパク質の一つである（非特許文献３）。CENP-Eは、有糸分裂中期の染色体整列が正常に行われるために必要な因子であり、CENP-E機能を欠損した細胞においては、有糸分裂中期の染色体不整列が生じることが知られている（非特許文献４）。CENP-E機能を阻害すると染色体整列が生じず、SACが活性化され、細胞死が誘導される（非特許文献５）。CENP-E機能低下により抗癌効果が得られることから、CENP-Eの機能の阻害は癌治療の有効な方法の一つであることが示唆されている（非特許文献６）。
　CENP-EとBubR1の両分子に対する抗体を注入した細胞では、染色体の不整列並びにcut表現型の増加が観察されることが報告されている（非特許文献７）。また、CENP-EとBubR1は、キネトコアと微小管の接合に対して逆の効果を有することが報告されている（非特許文献８）。
　また、CENP-E阻害薬として特許文献１ないし４に記載の化合物、ならびに非特許文献９に記載の化合物が知られている。
国際公開第2005/107762号 国際公開第2007/056056号 国際公開第2007/056078号 国際公開第2007/056143号
Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2002, 3, p.731-741 Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2002, 7, p.644-656 Nature, 1992, 359, p.536-539 J. Cell Biol., 1997, 139, p.1373-1382 Nat. Cell. Biol., 2000, 2, p.484-491 Mol. Cancer Ther., 2009, 8(1), p.36-44 J. Cell. Biol., 1999, 146, p.941-954 Cell cycle, 2007, 6, p.1367-1378 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, p.5839-5844
　SACの機能が不全である癌（以下、「SAC機能異常を呈する癌」と称する場合がある）においては、SACによって細胞死が誘導されないため有効な治療薬が見出されていなかった。
　本発明は、SAC機能異常を呈する癌に対する優れた治療剤を提供することを目的とする。
　また、本発明は、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法を提供することを目的とする。
　上記課題を解決するべく、鋭意検討を行った結果、SAC機能を欠損した癌細胞をCENP-E阻害剤で処理すると、意外にも、アポトーシスが誘導され、細胞増殖が抑制されることが明らかとなった。さらに、SAC機能欠損癌をCENP-E阻害剤で処理するとp53パスウェイが活性化されることによりアポトーシスが誘導され、p53に対するsiRNAを導入するとアポトーシス活性が低下したことから、癌におけるSAC機能が不全であっても、機能的p53が発現していれば、CENP-E阻害剤が有効であり、癌の増殖を抑制することが可能であることが示唆された。本発明者は、これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
　即ち、本発明は以下に関する。
［１］CENP-E阻害剤を含む、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療剤。
［２］癌が、少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現するか、又は癌における少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌である、上記［１］記載の治療剤。
［３］SAC構成因子がBubR1である、上記［２］記載の治療剤。
［４］機能的p53が野生型p53である、上記［１］ないし［３］のいずれかに記載の治療剤。
［５］SAC機能異常を呈する癌が機能的p53を発現しているか否か評価することを含む、該癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法。
［６］癌がSAC機能に異常を呈するか否か評価すること、及び該癌が機能的p53を発現しているか否か評価することを含む、該癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法。
［７］哺乳動物に対しCENP-E阻害剤を投与することを含み、かつ、該投与前後において
（i）癌細胞内機能的p53発現レベル、
（ii）血中機能的p53発現レベル、及び
（iii）血中抗機能的p53抗体発現レベル
から選択される一以上の発現レベルを比較することを特徴とする、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌におけるCENP-E阻害剤の有効量を判定する方法。
［８］哺乳動物に対し、CENP-E阻害剤の有効量を投与することを特徴とする、該哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療方法。
［９］SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の予防または治療のためのCENP-E阻害剤。
　本発明により、SAC機能異常を呈する癌に対する優れた治療剤が提供される。
　また、本発明により、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する優れた方法が提供される。
　また、本発明により、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌におけるCENP-E阻害剤の有効量を高い感度で判定することができる。
siRNA導入後のHela細胞の増殖曲線を示す。各siRNA導入１、２、３及び４日後に細胞を回収し細胞増殖能を測定した（図中、ＸはCENP-E及びBubR1に対する各siRNA（以下では、それぞれ「CENP-E siRNA」、「BubR1 siRNA」と称する場合がある）を、黒三角はEg5に対するsiRNA (以下では、「Eg5 siRNA」と称する場合がある)及びBubR1 siRNA を、白三角はCENP-E siRNAを、白丸はEg5 siRNA を、黒四角はBubR1 siRNA を、黒菱形はNon silencing siRNA (以下では、「NS siRNA」と称する場合がある) をそれぞれ導入した際の細胞増殖能を示す）。測定にはCell Titer-Glo luminescent cell viability assay kit (Promega)を用い、細胞内ATP量を生存能の指標とした。マイクロプレートリーダーを用いて測定した化学発光量を各siRNA導入１日後の化学発光量で標準化した値を増殖の相対値とした。 CENP-E阻害剤、Eg5阻害剤及びPlk1阻害剤の増殖能への効果に対するBubR1の影響を示す。NS siRNA（左図）又はBubR1 siRNA（右図）導入１日後にEg5阻害剤 (Ispinesib 10 nM)、Plk1阻害剤 (BI2536 3 nM)又はCENP-E阻害剤 (GSK923295 30 nM)を細胞培養液に添加し、siRNA導入１、２、３及び４日後に細胞増殖能を測定した。測定にはCell Titer-Glo luminescent cell viability assay kit (Promega)を用い、細胞内ATP量を生存能の指標とした。マイクロプレートリーダーを用いて測定した化学発光量を各siRNA導入１日後の化学発光量で標準化した値を増殖の相対値とした。 CENP-E siRNA、Eg5 siRNA及びBubR1 siRNA導入後のp53タンパク発現量を示す。上記各siRNA導入３日後に細胞を回収し、p53、CENP-E、Eg5、BubR1及びα-tubulinに対する抗体を用いてウェスタンブロッティングを行った。CENP-E 、Eg5及びBubR1はsiRNA導入によるノックダウン効果を確認するために、α-tubulinはローディングコントロールとして、それぞれ用いた。 CENP-E siRNA及びBubR1 siRNA導入後のcaspase-3/7 活性に及ぼすp53の影響を示す。各siRNA導入３日後に細胞を回収しcaspase-3/7 活性を測定した。測定にはcaspase-3/7-Glo assay kit (Promega)を用いた。マイクロプレートリーダーを用いて測定した化学発光量をNS siRNA導入後の化学発光量で標準化した値をcaspase-3/7 活性の相対値とした。 種々の癌細胞におけるBubR1タンパクの発現量を示す。膵臓癌細胞株PANC-1、腎癌細胞株Caki-1、卵巣癌細胞株A2780、子宮頸癌細胞株Hela、前立腺細胞株DU145を用いて、BubR1及びGAPDHに対する抗体でウェスタンブロッティングを行った。GAPDHはローディングコントロールとして用いた。 Caki-1細胞におけるCENP-E阻害剤処理後のp53タンパク発現量を示す。CENP-E阻害剤 （GSK923295 100 nM）またはDMSOを添加した細胞培養液で3日間培養したCaki-1細胞を回収し、PARP、p53、GAPDHに対する抗体を用いてウェスタンブロッティングを行った。PARPはアポトーシスの指標（切断型PARP）、GAPDHはローディングコントロールとして、それぞれ用いた。 CENP-E阻害剤処理後のCaki-1細胞の増殖曲線を示す。DMSOまたはCENP-E阻害剤(GSK923295 100 nM)を添加し、化合物添加0、1、2及び3日後に細胞増殖能を測定した。測定にはCell Titer-Glo luminescent cell viability assay kit (Promega)を用い、細胞内ATP量を生存能の指標とした。マイクロプレートリーダーを用いて測定した化学発光量を化合物添加0日後の化学発光量で標準化した値を増殖の相対値とした。 Caki-1細胞マウス皮下移植モデルにおけるCENP-E阻害剤の抗腫瘍作用を示す。Caki-1細胞株をヌードマウスに皮下移植を行い、CENP-E阻害剤（GSK923295）およびVehicle（コントロール）を投与後の腫瘍サイズを測定した（図中、100 mg/kg GSK923295投与群は黒三角、Vehicle投与群は黒丸で示す。）。各群とも移植後25日、26日、27日、32日に1日1回腹腔内投与を行った。
（発明の詳細な説明）
１．癌の治療剤
　本発明は、CENP-E阻害剤を含む、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療剤を提供する。
　また、本発明は、CENP-E阻害剤を含む、機能的p53を発現する癌の治療剤を提供する。
　本明細書において、紡錘体形成チェックポイント（spindle assembly checkpoint (SAC)）とは、細胞分裂時の均等な染色体分配をチェックする機構をいう。SACは、紡錘体と複製された姉妹染色体の動原体が適切に結合して染色体が赤道面上に一列に整列するまで細胞周期を分裂中期で一過的に停止させることによりM期の異常を事前に感知するとともに、姉妹染色体の不均等分配を回避する働きを持つ。細胞分裂時の染色体分配機構に異常が生じた場合、SACが活性化し、分裂中期での細胞周期の停止、及びその後引き続いて起こる細胞死(mitotic death)が誘導される。SAC機能異常とは、細胞分裂時の染色体分配をチェックし、分裂中期での細胞周期の停止、分裂期での細胞死を誘導する機能が異常であることを意味する。従って、SAC機能異常を呈する癌においては、細胞分裂時に不均等な染色体分配を生じた場合であっても、分裂中期で細胞周期が停止することなく、分裂期で細胞死(mitotic death)が誘導されることがない。
　SAC機能異常を呈する癌の例として、少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現する癌（類型１）、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（類型２）、不均等な染色体分配を生じたまま細胞分裂を続けている癌（類型３）、少なくとも１つのSAC構成因子が受ける翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して変化（亢進又は低下）している癌（類型４）、及びパクリタキセル耐性癌（類型５）が挙げられる。
　ここでSAC構成因子とは、SACの機能発現に関与しており、その因子にアミノ酸変異（欠失、置換、付加又は挿入）、或いは発現の低下又は欠失が生じた場合に、SACが細胞分裂時に有する機能が発揮されなくなる因子をいう。SAC構成因子の例として、BubR1、Bub1、Bub3、MAD1、MAD2、CDC20、CDC27、MPS1、Aurora-B、Borealin、INCENP、Survivin、Chk1、ZW10、Zwilch、RODが挙げられる（Nature review molecular cell biology, 2007, vol.8, p.379-393）。
　SAC構成因子の更なる例として、MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5、ZWINTが挙げられる。
　SAC構成因子の例である野生型のヒトSAC構成因子のアミノ酸配列及びNCBIアクセッション番号は、以下の通りである：
野生型ヒトBubR1：配列番号１（AAC12730.2）
野生型ヒトBub1：配列番号２（AAC12729.1、NP_004327.1）
野生型ヒトBub3：配列番号３（NP_001007794.1）
野生型ヒトMAD1：配列番号４（AAC52059.1）、配列番号２３（NP_001013858.1）
野生型ヒトMAD2：配列番号５（NP_002349.1）
野生型ヒトCDC20：配列番号６（AAA19017.1）、配列番号２４（NP_001246.2）
野生型ヒトCDC27：配列番号７（NP_001107563.1、isoform1）、配列番号８（NP_001247.3、isoform2）
野生型ヒトMPS1：配列番号９（NP_003309.2、isoform1）、配列番号１０（NP_001160163.1、isoform2）
野生型ヒトAurora-B：配列番号１１（NP_004208.2）
野生型ヒトBorealin：配列番号１２（NP_060571.1）
野生型ヒトINCENP：配列番号１３（NP_001035784.1）
野生型ヒトSurvivin：配列番号１４（NP_001159.2、isoform1）、配列番号１５（NP_001012270.1、isoform2）、配列番号１６（NP_001012271.1、isoform3）
野生型ヒトChk1：配列番号１７（NP_001265.2）
野生型ヒトZW10：配列番号１８（NP_004715.1）
野生型ヒトZwilch：配列番号１９（NP_060445.3）
野生型ヒトROD：配列番号２０（NP_055523.1）
野生型ヒトMIS12：配列番号２６（NP_076944.1）
野生型ヒトPMF1：配列番号２７（NP_001186582.1、isoform 3）、配列番号２８（NP_001186583.1、isoform 1）、配列番号２９（NP_009152.2、isoform 2）
野生型ヒトDSN1：配列番号３０（NP_001138787.1、isoform 1）、配列番号３１（NP_001138789.1、isoform 2）、配列番号３２（NP_001138790.1、isoform 3）
野生型ヒトNSL1：配列番号３３（NP_001036014.1、isoform 2）、配列番号３４（NP_056286.3、isoform 1）
野生型ヒトNDC80：配列番号３５（NP_006092.1）
野生型ヒトNUF2：配列番号３６（NP_113611.2）
野生型ヒトSPC24：配列番号３７（NP_872319.1）
野生型ヒトSPC25：配列番号３８（NP_065726.1）
野生型ヒトCASC5：配列番号３９（NP_653091.2、isoform 2）、配列番号４０（NP_733468.2、isoform 1）
野生型ヒトZWINT：配列番号４１（NP_001005413.1、isoform b）、配列番号４２（NP_127490.1、isoform a）
　前記少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現する癌（類型１）における、SAC構成因子の変異遺伝子とは、当該変異遺伝子がコードするポリペプチドが、野生型のSAC構成因子のアミノ酸配列において、１又は複数（例えば、２～１００個、好ましくは、２～５０個）のアミノ酸が変異（欠失、置換、付加又は挿入）されたアミノ酸配列を含み、且つ当該ポリペプチドの活性が、SAC機能異常を生じる程度に、野生型のSAC構成因子の活性と比較して低下又は喪失している、遺伝子を意味する。
　本明細書においてSAC構成因子の例として挙げられた各因子の活性及び各因子の変異遺伝子がコードするポリペプチドについて以下に詳述する。
　BubR1の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　BubR1の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。BubR1の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998 vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。BubR1の変異遺伝子がコードするポリペプチドのBubR1活性は、野生型BubR1の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Bub1の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Bub1の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Bub1の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998 vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Bub1の変異遺伝子がコードするポリペプチドのBub1活性は、野生型Bub1の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Bub3の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Bub3の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Bub3の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998 vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Bub3の変異遺伝子がコードするポリペプチドのBub3活性は、野生型Bub3の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　MAD1の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　MAD1の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。MAD1の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998 vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。MAD1の変異遺伝子がコードするポリペプチドのMAD1活性は、野生型MAD1の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　MAD2の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　MAD2の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。MAD2の活性を測定するためのアッセイは、文献Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。MAD2の変異遺伝子がコードするポリペプチドのMAD2活性は、野生型MAD2の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　CDC20の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを活性化する活性をいう。
　CDC20の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の減少、サイクリンBタンパク量の低下またはセキュリンタンパク量の低下を検出することにより評価することができる。CDC20の活性を測定するためのアッセイは、文献Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。CDC20の変異遺伝子がコードするポリペプチドのCDC20活性は、野生型CDC20の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　CDC27の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを活性化する活性をいう。
　CDC27の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の減少、サイクリンBタンパク量の低下またはセキュリンタンパク量の低下を検出することにより評価することができる。CDC27の活性を測定するためのアッセイは、文献Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。CDC27の変異遺伝子がコードするポリペプチドのCDC27活性は、野生型CDC27の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　MPS1の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　MPS1の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。MPS1の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。MPS1の変異遺伝子がコードするポリペプチドのMPS1活性は、野生型MPS1の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Aurora-Bの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Aurora-Bの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Aurora-Bの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998 vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Aurora-Bの変異遺伝子がコードするポリペプチドのAurora-B活性は、野生型Aurora-Bの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Borealinの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Borealinの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Borealinの活性を測定するためのアッセイは、文献Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Borealinの変異遺伝子がコードするポリペプチドのBorealin活性は、野生型Borealinの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　INCENPの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　INCENPの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。INCENPの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。INCENPの変異遺伝子がコードするポリペプチドのINCENP活性は、野生型INCENPの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Survivinの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Survivinの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Survivinの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Survivinの変異遺伝子がコードするポリペプチドのSurvivin活性は、野生型Survivinの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Chk1の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Chk1の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Chk1の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Chk1の変異遺伝子がコードするポリペプチドのChk1活性は、野生型Chk1の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　ZW10の活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　ZW10の活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。ZW10の活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。ZW10の変異遺伝子がコードするポリペプチドのZW10活性は、野生型ZW10の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　Zwilchの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　Zwilchの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。Zwilchの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。Zwilchの変異遺伝子がコードするポリペプチドのZwilch活性は、野生型Zwilchの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　RODの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　RODの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。RODの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。RODの変異遺伝子がコードするポリペプチドのROD活性は、野生型RODの活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5及びZWINTの活性とは、具体的にはユビキチンリガーゼAPC/Cを不活化する活性をいう。
　MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5及びZWINTの活性はノコダゾール処理またはコルセミド処理の癌細胞を用いて、M期細胞の増加、サイクリンBタンパク量の上昇またはセキュリンタンパク量の上昇を検出することにより評価することができる。MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5及びZWINTの活性を測定するためのアッセイは、Nature, 1998, vol.392, p.300-303; PNAS, 2004, vol. 101, no. 13, p.4459-4464に開示されている。
　MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5及びZWINTの各因子の変異遺伝子がコードするポリペプチドの活性は、野生型の各因子の活性の５０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％）である。
　SAC構成因子の変異遺伝子としては、具体的には以下のものが例示される。
（1） BubR1
　BubR1のアミノ酸配列の第40番のスレオニンがメチオニンに置換される変異、及びアミノ酸配列の第1023番のフェニルアラニンをコードするコドン中のチミジン塩基が欠損する変異（Nature, 392(1998）p.300-303)。
　また、BubR1の遺伝子配列の第1088番のアデニンがグアニンに置換される変異、及び遺伝子配列の第1895番のチミンがシトシンに置換される変異（Genomics, 58(1999) p.181-189）。
　BubR1の塩基配列中の位置はAF046079（配列番号２５、コード領域は43-3195bp）に従う。
（2） Bub1
　Bub1のアミノ酸配列の第492番のセリンがスレオニンに置換される変異、及びBub1のアミノ酸配列の第76番から第141番に対応する遺伝子配列の197塩基対が欠損する変異、及びBub1のアミノ酸配列の第140番をコードする遺伝子の後に存在するイントロン内のスプライスドナー部位がアデニンからチミンに置換される変異（Nature, 392(1998) p.300-303）。
　また、Bub1のアミノ酸配列の第130番のアラニンがセリンに置換される変異（Cancer Res., 62(2002) p.13-17）。
　また、Bub1のアミノ酸配列の第36番のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換される変異、及びBub1のアミノ酸配列の第648番のプロリンがアルギニンに置換される変異（Genomics, 58(1999) p.181-189）。
　Bub1のアミノ酸配列中の位置はAAC12729.1（配列番号２）に従う。
（3） MAD1 
　MAD1のアミノ酸配列の第557番のアルギニンがヒスチジンに置換される変異、及びMad1のアミノ酸配列の第571番のアルギニンがヒスチジンに置換される変異（ただし、アミノ酸配列中の位置はAAC52059.1（配列番号４）に従う。）（Genomics, 58(1999) p.181-189）。
（4） MAD2
　MAD2のアミノ酸配列の第190番のイソロイシンがバリンに置換される変異（ただし、アミノ酸配列中の位置はNP_002349.1（配列番号５）に従う。）（Int.J.Cancer, 95(2001) p.223-227）。
（5） MPS1
　MPS1のアミノ酸配列の第614番のリジンがアルギニンに置換される変異(ただし、アミノ酸配列中の位置はNP_003309.2（配列番号９）に従う。)（Genomics, 58(1999) p.181-189）。
（6） CDC20
　CDC20のアミノ酸配列の第117番のアラニンがスレオニンに置換される変異（Cancer, 94(2002) p.2047-2054）。
　また、CDC20のアミノ酸配列の第361番のバリンがイソロイシンに置換される変異（Genomics, 58(1999) p.181-189）。
　CDC20のアミノ酸配列はAAA19017.1（配列番号６）に従う。
（7） DSN1
　DSN1のアミノ酸配列の第130番のグルタミン酸で翻訳が停止する変異（Mutation ID: 79170）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=79170）。
　DSN1のアミノ酸配列はNP_001138787.1（配列番号３０）に従う。
（8） NUF2
　NUF2のアミノ酸配列の第397番のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換される変異（Mutation ID: 75664）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=75664）。
　NUF2のアミノ酸配列の第86番のセリンがリジンに置換される変異（Mutation ID: 75663）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=75663）。
　NUF2のアミノ酸配列の第223番のロイシンがフェニルアラニンに置換される変異（Mutation ID: 78210）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=78210）。
　NUF2のアミノ酸配列はNP_113611.2（配列番号３６）に従う。
（9） SPC25
　SPC25のアミノ酸配列の第95番のグルタミン酸がリジンに置換される変異（Mutation ID: 40644）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=40644）。
　SPC25のアミノ酸配列はNP_065726.1（配列番号３８）に従う。
（10）CASC5
　CASC5のアミノ酸配列の第865番のプロリンがロイシンに置換される変異（Mutation ID: 26578）（http://www.sanger.ac.uk/perl/genetics/CGP/cosmic?action=mut_summary&id=26578）。
　The mixed lineage leukemia gene (MLL)とCASC5のフュージョン遺伝子（de novo acute lymphoblastic leukemia (ALL)）（Oncogene (2003) 22, 1418-1424）。
　CASC5のアミノ酸配列はNP_733468.2（配列番号４０）に従う。
　類型１におけるSAC構成因子としてはBubR1が好ましい。
　前記、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（類型２）における、SAC構成因子の発現レベルの正常組織と比較した低下の程度は、該低下によりSAC機能異常を生じる程度であれば特に限定されないが、該癌におけるSAC構成因子の発現レベル（タンパク質発現量）の例として、正常組織の当該SAC構成因子の発現レベル（タンパク質発現量）の５０％以下（好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％））が挙げられる。
　ここで、「正常組織」における「組織」は、評価対象の癌（又は癌細胞）が由来する組織（又は細胞）を意味する。
　前記、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（類型２）の具体例として、BubR1の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（Cancer Cell, 2003, 4, 483-97）、MAD2の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（Science, 1996, 274, 246-8）が挙げられる。
　類型２におけるSAC構成因子としてはBubR1及びMAD2が好ましく、さらに好ましくはBubR1である。
　前記、少なくとも１つのSAC構成因子が受ける翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して変化（亢進又は低下）している癌（類型４）における、１つのSAC構成因子が受ける翻訳後修飾レベルの正常組織と比較した変化の程度は、該変化によりSAC機能異常を生じる程度であれば特に限定されない。該翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して低下している癌の場合、該癌における当該SAC構成因子の翻訳後修飾レベル（一定モル数のSAC構成因子に含まれる翻訳後修飾を受けたSAC構成因子の割合）の例として、正常組織における当該SAC構成因子の翻訳後修飾レベルの５０％以下（好ましくは３０％以下、より好ましくは１０％以下、更に好ましくは１％以下（例えば、０％））が挙げられる。該翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して亢進している癌の場合、該癌における当該SAC構成因子の翻訳後修飾レベル（一定モル数のSAC構成因子に含まれる翻訳後修飾を受けたSAC構成因子の割合）の例として、正常組織における当該SAC構成因子の翻訳後修飾レベルの２００％以上（好ましくは３００％以上、より好ましくは５００％以上、更に好ましくは１０００％以上）が挙げられる。
　SAC構成因子が受ける翻訳後修飾の例としては、公知の（例えば、公共データベースhttp://www.phosphosite.org/homeAction.doに収載された）翻訳後修飾が挙げられる。好ましい翻訳後修飾としては、例えば、セリン、スレオニン又はチロシンのリン酸化、リジンのアセチル化、アルギニンのメチル化、リジンのユビキチン化を挙げることができる。SAC構成因子が受ける翻訳後修飾の具体例を以下に詳述する。
（1）BubR1
　BubR1のアミノ酸配列の第54番目のスレオニンがうけるリン酸化（Anal. Sci., 24(2008), 161-166）、BubR1のアミノ酸配列の第250番目のリジンがうけるアセチル化（EMBO J., 28(2009), 2077-2089）、BubR1のアミノ酸配列の第367番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl.Acad.Sci. U S A, 105(2008), 6069-6074）、BubR1のアミノ酸配列の第368番目のスレオニンがうけるリン酸化（J Proteome Res, 7(2008), 1346-51）、BubR1のアミノ酸配列の第435番目のセリンがうけるリン酸化（J.Cell Biol.,183(2008), 667-680）、BubR1のアミノ酸配列の第543番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl.Acad.Sci. U S A, 105(2008), 6069-6074）、BubR1のアミノ酸配列の第574番目のセリンがうけるリン酸化（J. Cell Sci., 123(2010),84-94）、BubR1のアミノ酸配列の第670番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl.Acad.Sci.U S A, 105(2008), 6069-74）、BubR1のアミノ酸配列の第676番目のセリンがうけるリン酸化（J.Cell Sci., 123(2010),84-94）、BubR1のアミノ酸配列の第720番目のセリンがうけるリン酸化（J.Cell Sci., 123(2010), 84-94）、BubR1のアミノ酸配列の第792番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 282(2007), 15217-15227）、BubR1のアミノ酸配列の第1008番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 282(2007), 15217-15227）、BubR1のアミノ酸配列の第1043番目のセリンがうけるリン酸化（Nat.Biotechnol., 24(2006),1285-1292）。
（2） Bub1
　Bub1のアミノ酸配列の第219番目のチロシンがうけるリン酸化（Science, 326(2009), 1502-1509）、Bub1のアミノ酸配列の第306番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 31(2008), 438-448）、Bub1のアミノ酸配列の第307番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl.Acad.Sci.U S A, 105(2008), 10762-7）、Bub1のアミノ酸配列の第314番目のセリンがうけるリン酸化（Science, 316(2007), 1160-1166）、Bub1のアミノ酸配列の第331番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell Proteomics, 8(2009), 1751-1764）、Bub1のアミノ酸配列の第375番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、Bub1のアミノ酸配列の第436番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第445番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第461番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、Bub1のアミノ酸配列の第563番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, Proteomics, 8(2009), 1751-1764）、Bub1のアミノ酸配列の第589番目のスレオニンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第593番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell, 17(2006), 3705-3716）、Bub1のアミノ酸配列の第596番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第602番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第608番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第609番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol. Biol. Cell, 17(2006), 3705-3716）、Bub1のアミノ酸配列の第655番目のセリンがうけるリン酸化（Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第661番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、Bub1のアミノ酸配列の第761番目のチロシンがうけるリン酸化（Cell, 131(2007), 1190-1203）。
（3） MAD1 
　MAD1のアミノ酸配列の第16番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、MAD1のアミノ酸配列の第22番目のセリンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 283(2008), 35834-35844）、MAD1のアミノ酸配列の第29番目のセリンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 283(2008), 35834-35844）、MAD1のアミノ酸配列の第61番目のリジンがうけるユビキチン化（Science, 325(2009), 834-840）、MAD1のアミノ酸配列の第214番目のセリンがうけるリン酸化（Science, 316(2007), 1160-1166）、MAD1のアミノ酸配列の第427番目のチロシンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、MAD1のアミノ酸配列の第428番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 101(2004), 12130-12135）、MAD1のアミノ酸配列の第634番目のチロシンがうけるリン酸化（Cell, 131(2007), 1190-1203）、MAD1のアミノ酸配列の第649番目のチロシンがうけるリン酸化（Cell, 131(2007), 1190-1203）、MAD1のアミノ酸配列の第680番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 283(2008), 35834-35844）、MAD1のアミノ酸配列の第699番目のセリンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 283(2008), 35834-35844）、MAD1のアミノ酸配列の第708番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 283(2008), 35834-35844）。
（4） MAD2
　MAD2のアミノ酸配列の第170番目のセリンがうけるリン酸化（EMBO J., 22(2003), 797-806）、MAD2のアミノ酸配列の第178番目のセリンがうけるリン酸化（EMBO J., 22(2003), 797-806）、MAD2のアミノ酸配列の第195番目のセリンがうけるリン酸化（EMBO J., 22(2003), 797-806）。
（5） MPS1
　MPS1のアミノ酸配列の第3番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell.Proteomics, 8(2009), 1751-1764）、MPS1のアミノ酸配列の第7番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第12番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell.,20(2009),10-20）、MPS1のアミノ酸配列の第15番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell.,20(2009),10-20）、MPS1のアミノ酸配列の第33番目のスレオニンがうけるリン酸化（PLoS.ONE, 3(2008), e2415）、MPS1のアミノ酸配列の第37番目のセリンがうけるリン酸化（PLoS.ONE, 3(2008), e2415）、MPS1のアミノ酸配列の第49番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第80番目のセリンがうけるリン酸化（PLoS.ONE, 3(2008), e2415）、MPS1のアミノ酸配列の第281番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第288番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell.,20(2009),10-20）、MPS1のアミノ酸配列の第317番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第321番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、MPS1のアミノ酸配列の第345番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第351番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第353番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第360番目のスレオニンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第362番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell.,20(2009),10-20）、MPS1のアミノ酸配列の第363番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第371番目のスレオニンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第374番目のチロシンがうけるリン酸化（Science,326(2009), 1502-1509）、MPS1のアミノ酸配列の第382番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第385番目のリジンがうけるメチル化（Anal.Chem., 80(2008), 1721-1729）、MPS1のアミノ酸配列の第393番目のセリンがうけるリン酸化（PLoS.ONE,3(2008), e2415）、MPS1のアミノ酸配列の第431番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell Proteomics, 8(2009), 1751-1764）、MPS1のアミノ酸配列の第433番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell,31(2008), 438-448）、MPS1のアミノ酸配列の第436番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell, 18(2007), 4457-4469）、MPS1のアミノ酸配列の第453番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell, 18(2007), 4457-4469）、MPS1のアミノ酸配列の第455番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、MPS1のアミノ酸配列の第462番目のチロシンがうけるリン酸化（PLoS.ONE,3(2008), e2415）、MPS1のアミノ酸配列の第467番目のアルギニンがうけるメチル化（J.Anal.Chem.,80(2008), 1721-1729）、MPS1のアミノ酸配列の第468番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Biol.Cell, 18(2007), 4457-4469）、MPS1のアミノ酸配列の第564番目のスレオニンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第582番目のセリンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第675番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 282(2007), 30553-30561）、MPS1のアミノ酸配列の第676番目のスレオニンがうけるリン酸化（J.Biol.Chem., 282(2007), 30553-30561）、MPS1のアミノ酸配列の第742番目のセリンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第795番目のスレオニンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第805番目のスレオニンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第806番目のスレオニンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第811番目のチロシンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 692-697）、MPS1のアミノ酸配列の第821番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 104(2007), 20232-20237）、MPS1のアミノ酸配列の第824番目のセリンがうけるリン酸化（Proc.Natl. Acad. Sci. U S A, 105(2008), 10762-10767）、MPS1のアミノ酸配列の第833番目のチロシンがうけるリン酸化（Science,326(2009), 1502-1509）、MPS1のアミノ酸配列の第836番目のチロシンがうけるリン酸化（Science,326(2009), 1502-1509）、MPS1のアミノ酸配列の第845番目のセリンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第847番目のセリンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）、MPS1のアミノ酸配列の第849番目のスレオニンがうけるリン酸化（Biochem.J., 417(2009), 173-181）。
（6） CDC20
　CDC20のアミノ酸配列の第41番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）、CDC20のアミノ酸配列の第70番目のスレオニンがうけるリン酸化（EMBO J., 22(2003), 6598-6609）、CDC20のアミノ酸配列の第72番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）、CDC20のアミノ酸配列の第92番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）、CDC20のアミノ酸配列の第106番目のスレオニンがうけるリン酸化（EMBO J., 22(2003), 6598-6609）、CDC20のアミノ酸配列の第153番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）、CDC20のアミノ酸配列の第157番目のスレオニンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）、CDC20のアミノ酸配列の第161番目のセリンがうけるリン酸化（Mol.Cell, 16(2004), 387-397）。
（7） Bub3
　Bub3のアミノ酸配列の第179番目のリジンがうけるアセチル化（Science, 325(2009), 834-840）、Bub3のアミノ酸配列の第211番目のセリンがうけるリン酸化（Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 101(2004), 12130-12135）、Bub3のアミノ酸配列の第216番目のリジンがうけるユビキチン化（J.Proteome Res., 7(2008), 4566-4576）。
（8） PMF-1
　PMF-1のアミノ酸配列の第６番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2008), 4553-63 ）、PMF-1のアミノ酸配列の第８６番目のスレオニンが受けるリン酸化 (Sci Signal 3(2010), ra3)。
（9） DSN1
　DSN1のアミノ酸配列の第２０番目のスレオニンが受けるリン酸化（Mol Cell 31(2008), 438-48）、DSN1のアミノ酸配列の第２７番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell 31(2008), 438-48）、DSN1のアミノ酸配列の第２８番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）, DSN1のアミノ酸配列の第３０番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; Sci Signal 2(2009), ra46; Mol Cell 31(2008), 438-48 , Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103, 5391-6）、DSN1のアミノ酸配列の第５７番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; Mol Cell 31(2008), 438-48）、DSN1のアミノ酸配列の第７７番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7）、DSN1のアミノ酸配列の第８１番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell Proteomics 9(2010), 2162-72; J Proteome Res 9(2010), 174-8; Sci Signal 3(2010), ra3; Cancer Res 69 (2009), 2663-8; J Proteome Res 8 (2009), 4553-63, Proc Natl Acad Sci U S A 105 (2008), 10762-7; Proteome Res 7(2008), 1346-51 (2008)）、DSN1のアミノ酸配列の第８６番目のセリンが受けるリン酸化（Proteome Res 7(2008), 1346-51）、DSN1のアミノ酸配列の第８８番目のセリンが受けるリン酸化（Cancer Res 69, 2663-8 (2009)）、DSN1のアミノ酸配列の第１００番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell 38(2010), 383-92; J Biol Chem 283, 26726-36）、DSN1のアミノ酸配列の第１０９番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell 38(2010), 383-92; Sci Signal 3(2010), ra3; J Biol Chem 283 (2008), 26726-36）、DSN1のアミノ酸配列の第１２３番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2009), 4553-63）、DSN1のアミノ酸配列の第１２５番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2009), 4553-63）、DSN1のアミノ酸配列の第２４４番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell Proteomics 8(2009), 1751-64）、DSN1のアミノ酸配列の第２４５番目のスレオニンが受けるリン酸化（Mol Cell Proteomics 8(2009), 1751-64）、 DSN1のアミノ酸配列の第３３１番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8 (2009), 4553-63）。
（10） NSL1
　NSL1のアミノ酸配列の第４番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3 (2010), ra3）、NSL1のアミノ酸配列の第２４番目のセリンが受けるリン酸化（Science 316(2007), 1160-6）、NSL1のアミノ酸配列の第２４２番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103, 5391-6）。
（11） NDC80
　NDC80のアミノ酸配列の第５番目のセリンが受けるリン酸化（Cell 127(2006), 969-82）、NDC80のアミノ酸配列の第１５番目のセリンが受けるリン酸化（Cell 127(2006), 969-82 (2006)）、NDC80のアミノ酸配列の第４４番目のセリンが受けるリン酸化（Cell 127(2006), 969-82）、NDC80のアミノ酸配列の第４９番目のスレオニンが受けるリン酸化（Cell 127(2006), 969-82）、NDC80のアミノ酸配列の第５５番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Cell 127 (2006), 969-82; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、NDC80のアミノ酸配列の第６２番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、NDC80のアミノ酸配列の第６９番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8 (2009), 4553-63; Cell Stem Cell 5 (2009), 204-13; Cell 127(2006), 969-82）、NDC80のアミノ酸配列の第７６番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、NDC80のアミノ酸配列の第７７番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3 (2010), ra3; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、NDC80のアミノ酸配列の第１６５番目のセリンが受けるリン酸化（Oncogene 27 (2008), 4107-14; J Biol Chem 277(2002), 49408-16）、NDC80のアミノ酸配列の第４５８番目のスレオニンが受けるリン酸化（Sci Signal 3 (2010), ra64; Proc Natl Acad Sci U S A 105 (2008), 692-7）、NDC80のアミノ酸配列の第５０２番目のスレオニンが受けるリン酸化（J Proteome Res 5 (2006), 1252-60）。
　NDC80のアミノ酸配列の第５２７番目のリジンが受けるアセチル化（Science 327(2010), 1000-4）。
（12） Nuf2
　Nuf2のアミノ酸配列の第２４７番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3 (2010), ra3; J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Proteomics 9(2009), 2861-74; Proc Natl Acad Sci U S A 105 (2008), 10762-7; Cell 127(2006), 635-48; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）。
（13） SPC24
　SPC24のアミノ酸配列の第１１番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 2(2009), ra46）、SPC24のアミノ酸配列の第１０５番目のスレオニンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3）、SPC24のアミノ酸配列の第１３０番目のスレオニンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）。
（14） SPC25
　SPC25のアミノ酸配列の第１２番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3）。
（15） CASC5
　CASC5のアミノ酸配列の第２４番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell 38(2010), 383-92）、CASC5のアミノ酸配列の第３２番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Mol Cell 31(2008), 438-48; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第６０番目のセリンが受けるリン酸化（Mol Cell 38(2010), 383-92; J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Cancer Res 69(2009), 2663-8; Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１２９番目のチロシンが受けるリン酸化（Blood 110(2007), 323-33）、CASC5のアミノ酸配列の第５１３番目のスレオニンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7）、CASC5のアミノ酸配列の第５３９番目のスレオニンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8(2009), 4553-63）、CASC5のアミノ酸配列の第７６５番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第７６７番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第８４７番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteomics 73(2010), 1381-90）、CASC5のアミノ酸配列の第９５６番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１０３９番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１０４２番目のスレオニンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１０７６番目のスレオニンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3; J Proteome Res 8(2009), 4553-63; Cancer Res 69(2009), 2663-8; Sci Signal 2(2009), ra46; Mol Cell 31(2008), 438-48; Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１２６３番目のスレオニンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3）、CASC5のアミノ酸配列の第１４６４番目のチロシンが受けるリン酸化（Blood 110(2007), 323-33）、CASC5のアミノ酸配列の第１７７３番目のチロシンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7; Proc Natl Acad Sci U S A 103(2006), 5391-6）、CASC5のアミノ酸配列の第１８３１番目のセリンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3）、CASC5のアミノ酸配列の第１８４５番目のセリンが受けるリン酸化（Proc Natl Acad Sci U S A 105(2008), 10762-7）、CASC5のアミノ酸配列の第１９９６番目のチロシンが受けるリン酸化（Sci Signal 3(2010), ra3）。
（16） ZWINT
　ZWINTのアミノ酸配列の第８１番目のセリンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2009), 4553-63）、 ZWINTのアミノ酸配列の第８４番目のスレオニンが受けるリン酸化（J Proteome Res 8(2009), 4553-63）。
　前記パクリタキセル耐性癌（類型５）におけるパクリタキセル耐性とは、パクリタキセルまたは他のタキサン系化学療法薬に対する耐性を意味する。SAC機能異常を呈する癌は、パクリタキセル耐性であることが報告されている（Cancer Research 2004 64(7) p2502-8; Mol. Cancer Ther. 2004 3 (6) p661-9; Gynecol Oncol. 2007 105(1) p.66-73）。
　特定の態様では、パクリタキセルまたは他のタキサン系化学療法薬を用いた化学療法による治療が有効でない（例えば、腫瘍組織量の低下や、成長阻害が見られない）癌をパクリタキセル耐性癌として分類することができる。また、別の態様では、パクリタキセルについてのGI50値が0.1μＭ以上である癌はパクリタキセル耐性であるといえる。
　パクリタキセル耐性癌の例として、膵臓癌及び大腸癌が挙げられる。上記膵臓癌及び大腸癌においては、それぞれ約８割、約３割においてBubR1のタンパク質発現量の低下が認められることが報告されている（Cancer Cell 2003;4:483-97；及び公共データベースhuman protein atlas (http://proteinatlas.org/tissue_profile.php?antibody_id=8419&g_no=ENSG00000156970)）。従って、パクリタキセル耐性であり、且つBubR1の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌は、本発明の治療剤の好適な適用対象である。
　癌が、前記少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現する癌（類型１）に該当するか否か、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（類型２）に該当するか否か、若しくは少なくとも１つのSAC構成因子が受ける翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して変化している癌（類型４）に該当するか否かは以下のように判断することができる。
　癌が少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現する癌（類型１）に該当するか否かは、以下に記載する遺伝子レベルでの変異の評価、またはタンパク質レベルでの変異の評価等により決定することができる。
　上記評価の結果、癌細胞が少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現すると結論付けられた場合には、癌がSAC機能異常を呈すると判断することができる。一方、癌細胞がSAC構成因子の変異遺伝子を発現していないと結論付けられた場合には、癌がSAC機能異常を呈していない可能性が高いと判定することができる。
　前記遺伝子レベルでの変異の評価は、癌細胞から目的とするSAC構成因子をコードするゲノムDNA又はmRNAを回収し、これを用いて、例えば、WO03/023063に記載された種々の方法、例えば、RFLP法、PCR-SSCP法、ASOハイブリダイゼーション、ダイレクトシークエンス法、ARMS法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法、RNaseA切断法、化学切断法、DOL法、TaqMan PCR法、インベーダー法、MALDI-TOF/MS法、TDI法、モレキュラー・ビーコン法、ダイナミック・アレルスペシフィック・ハイブリダイゼーション法、パドロック・プローブ法、UCAN法、DNAチップまたはDNAマイクロアレイを用いた核酸ハイブリダイゼーション法及びECA法などを行うことにより実施することができる（WO 03/023063，第17頁第5行～第28頁第20行を参照）。
　前記タンパク質レベルでの変異の評価は、癌細胞から目的とするSAC構成因子を、抗体カラム等の周知のタンパク質精製方法を用いて精製し、得られたSAC構成因子、又はそれをLys-C等のペプチド分解酵素により限定分解して得られる部分ペプチドを、ペプチドシークエンサー又は質量分析装置に付し、アミノ酸配列を決定することにより、実施することができる。
　癌が、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌（類型２）に該当するか否かは、癌細胞におけるSAC構成因子のタンパク質発現量を測定し、これを正常組織における発現レベルと比較することにより行うことができる。
　前記SAC構成因子のタンパク質発現量の測定は、特定のSAC構成因子を特異的に認識する抗体を用いて、周知の免疫学的手法、例えばフローサイトメトリー解析、放射性同位元素免疫測定法（RIA法）、ELISA法（Methods in Enzymol. 70: 419-439 (1980)）、ウェスタンブロッティング、免疫組織染色等により行うことができる。
　解析の結果、癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子のタンパク質発現量が正常組織と比較して有意に低下している場合（例えば、癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子のタンパク質発現量が正常組織の５０％以下、好ましくは２５％以下、より好ましくは１０％以下である場合）には、癌がSAC機能異常を呈すると判断することができる。一方、癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して有意に低下していない場合には、癌がSAC機能異常を呈していない可能性が高いと判定することができる。
　また、解析の結果、SAC機能が正常である癌細胞（例、HeLa細胞）と比較して、少なくとも１つのSAC構成因子のタンパク質発現量が有意に低下している癌細胞（例えば、SAC機能が正常である癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子のタンパク質発現量が、SAC機能が正常である癌細胞の５０％以下、好ましくは２５％以下、より好ましくは１０％以下である癌細胞）は、癌がSAC機能異常を呈すると判断することができる。一方、SAC機能が正常である癌細胞と比較して、少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが有意に低下していない癌細胞は、SAC機能異常を呈していない可能性が高いと判定することができる。
　癌が、少なくとも１つのSAC構成因子が受ける翻訳後修飾レベルが正常組織と比較して変化している癌（類型４）に該当するか否かは、癌細胞におけるSAC構成因子が受けている翻訳後修飾の検討を行ない、これを正常組織における翻訳後修飾と比較することにより行うことができる。
　前記SAC構成因子が受けている翻訳後修飾の検討は、特定のSAC構成因子を特異的に認識する抗体を用いて免疫沈降を行い、免疫沈降物について、翻訳後修飾を受けたタンパク質やアミノ酸を特異的に認識する抗体を用いて、ウェスタンブロッティングを行うことにより測定することができる。また、特定のSAC構成因子を特異的に認識する抗体を用いた抗体カラム等の周知のタンパク質精製方法を用いてSAC構成因子を精製し、得られたSAC構成因子、又はそれをLys-C等のペプチド分解酵素により限定分解して得られる部分ペプチドを、ペプチドシークエンサー又は質量分析装置で分析すること等によってもSAC構成因子が受けている翻訳後修飾を検討することができる。
　解析の結果、癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子について、翻訳後修飾を受けている割合が正常組織と比較して有意に変化している場合には、癌がSAC機能異常を呈する可能性が高いと判断することができる。一方、癌細胞における少なくとも１つのSAC構成因子について、翻訳後修飾を受けている割合が有意に変化していない場合には、癌がSAC機能異常を呈していない可能性が高いと判定することができる。
　癌が、前記不均等な染色体分配を生じたまま細胞分裂を続けている癌（類型３）に属するか否かは、癌細胞について染色体検査を行い、染色体の構造を観察することにより判断することができる。染色体検査によるSAC機能異常を呈する癌は、例えばCancer, 2002, vol.94, p.2047-2054に記載の方法にしたがって判別することができる。
　SAC機能異常を呈する癌には、上述した類型１～５の中から選択される１つの類型に該当する癌、上述した類型１～５の中から選択される２、３又は４個の類型（例えば類型１及び２、類型１及び３、類型２及び３等）に該当する癌、及び上述した類型１～５の全てに該当する癌が包含される。
　本明細書において、「機能的p53」とは、野生型p53のアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を意味する。
　野生型p53のアミノ酸配列としては、例えば以下を挙げることができる。
野生型ヒトp53：配列番号２１（NP_000537．3）
　野生型p53のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、野生型p53のアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
　アミノ酸配列の同一性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝BLOSUM62；フィルタリング＝OFF）にて計算することができる。
　野生型p53のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の野生型p53のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、且つ野生型p53と実質的に同質の活性を有するタンパク質が挙げられる。
　野生型p53と実質的に同質の活性としては、アポトーシス誘導活性が挙げられる。
　実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。したがって、アポトーシス誘導活性が同等（例、約0.1～10倍、好ましくは0.5～2倍、より好ましくは0.8～1.25倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
　アポトーシス誘導活性の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えば、J. Biol. Chem.,vol. 279, pages 48434-48442, 2004やMol. Biol. Cell, vol. 15, pages 5064-5074, 2004に記載の方法またはそれに準じる方法に従って測定することができる。
　また、機能的p53としては、例えば、（i）野生型p53のアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１～２００個程度、好ましくは１～１００個程度、好ましくは１～３０個程度、好ましくは１～１０個程度、さらに好ましくは１～５個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii）野生型p53のアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１～２００個程度、好ましくは１～１００個程度、好ましくは１～３０個程度、好ましくは１～１０個程度、さらに好ましくは１～５個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii）野生型p53のアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１～２００個程度、好ましくは１～１００個程度、好ましくは１～３０個程度、好ましくは１～１０個程度、さらに好ましくは１～５個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（iv）野生型p53のアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１～２００個程度、好ましくは１～１００個程度、好ましくは１～３０個程度、好ましくは１～１０個程度、さらに好ましくは１～５個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（v）それらを組み合わせたアミノ酸配列（変異したアミノ酸の総数が、例えば１～２００個程度、好ましくは１～１００個程度、好ましくは１～３０個程度、好ましくは１～１０個程度、さらに好ましくは１～５個）を含有し、且つ野生型p53と実質的に同質の活性を有するタンパク質も含まれる。上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失、付加または置換を含む場合、その挿入、欠失、付加または置換の位置としては、とくに限定されない。
　機能的p53としては、具体的には、野生型哺乳動物p53（例、配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド）の他、配列番号２１で表されるアミノ酸配列にP47S、P72R、V217M及びG360Aからなる群から選択されるいずれかのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドが挙げられる。
　機能的p53は、好ましくは野生型哺乳動物p53であり、最も好ましくは野生型ヒトp53（配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質）である。
　「機能的p53を発現する癌」におけるp53の発現レベル（タンパク質発現量）は、機能的p53によるアポトーシス誘導活性が達成される限り特に限定されないが、正常組織のp53の発現レベル（タンパク質発現量）の、通常１０％以上、好ましくは２５％以上、より好ましくは５０％以上、更に好ましくは８０％以上である。また、「機能的p53を発現する癌」におけるp53の発現レベル（タンパク質発現量）は、正常組織のp53の発現レベル（タンパク質発現量）の、通常１０倍以下、好ましくは８倍以下、より好ましくは５倍以下、更に好ましくは２倍以下である。ここで、「正常組織」における「組織」は、評価対象の癌（又は癌細胞）が由来する組織（又は細胞）を意味する。
　本発明の癌の治療剤は、CENP-E阻害剤を含む。
　CENP-E（Centromere-associated protein-E）は、キネシンスーパーファミリーに属するモータータンパク質の一つであり、ATPアーゼ活性を有する。本明細書において、CENP-Eは、特に哺乳動物（例、ヒト）のCENP-Eを意味する。代表的な哺乳動物CENP-Eとして、野生型ヒトCENP-E（配列番号２２（NP_001804.2）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド）が挙げられる。本発明において用いられるCENP-E阻害剤は、このCENP-EのATPアーゼ活性を阻害する化合物を意味する。
　本発明に使用することができるCENP-E阻害剤としては、特に限定されないが、以下を例示することができる。
［Ｉ］WO2005/107762に開示された化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
  
（式中、
Ｒ１は置換されていてもよいアリール等を；
Ｘは－ＣＯまたは－ＳＯ２－等を；
Ｒ２は水素または置換されていてもよい低級アルキル等を；
Ｗは－ＣＲ４－、－ＣＨ２ＣＲ４－、またはＮを；
Ｒ３は－ＣＯ－Ｒ７、水素、置換されていてもよいアルキル等を；
Ｒ４は水素または置換されていてもよいアルキルを；
Ｒ５は水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアミノ等を；
Ｒ６は水素、置換されていてもよいアルキル等を；
Ｒ７は置換されていてもよい低級アルキル等を示す。）
で表される化合物。
　上記化合物は、好ましくは以下の化合物である：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
  
　GSK-923295は、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, p.5839-5844にも開示されている。
［ＩＩ］WO2007/056056に開示された化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
  
（式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいシクロアルキル等を；
Ｘは、－ＣＯまたは－ＳＯ２－を；
Ｒ２は、水素または置換されていてもよい低級アルキルを；
Ｗは、－ＣＲ８－、－ＣＨ２ＣＲ８－またはＮを；
Ｒ３は、－ＣＯ－Ｒ７、水素、置換されていてもよいアルキル等を；
Ｒ４は、ハロ、置換されていてもよいアルキル等を；
Ｒ５は、ハロ、ヒドロキシ、置換されていてもよいアミノ等を；
Ｒ６は、置換されていてもよいアルキル等を；
Ｒ７は、置換されていてもよい低級アルキル等を；
Ｒ８は、水素または置換されていてもよいアルキルを；または
Ｒ４およびＲ５は、それらが結合している炭素と一緒になってオキソ基を；
Ｒ４およびＲ８は、それらが結合している炭素と一緒になってＣ＝Ｃ基を形成し、Ｒ５は、水素または置換されていてもよい低級アルキルを示す。）
で表される化合物。
［ＩＩＩ］WO2007/056078に開示された化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
  
（式中、
Ｒ１は、水素、必要に応じて置換されているアルキル等を；
Ｒ２は、必要に応じて置換されているアルキル等を；
ｎは、０、１、２、もしくは３を；
Ｒ３は、ハロ、シアノ、カルボキシ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されているアルキル、必要に応じて置換されているアルコキシ等を；あるいは
Ｒ１とＲ２は、それらが結合する窒素と一緒になって、必要に応じて置換されている４～７員環を；または
－ＮＲ１Ｒ２基のオルト位に位置するＲ３は、Ｒ１またはＲ２と、それらが結合する原子と一緒になって、必要に応じて置換されている５～７員環を形成する。）
で表される化合物。
［ＩＶ］WO2007/056143に開示された化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
  
　[式中
Ｒ１は、場合により置換されているシクロアルキル等を；
Ｘは、－（ＣＲ１０Ｒ１１）ｍ、－（ＣＲ１０Ｒ１１）ｎＣ（Ｒ１３）＝Ｃ（Ｒ１４）、－Ｏ（ＣＲ１０Ｒ１１）ｐ－、またはＮＲ８－を；
Ｙは、ＸとＺを連結する直接結合、－Ｃ（Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｎ－Ｒ９）－を；
Ｚは、－（ＣＲ１０Ｒ１１）ｑ、－（ＣＲ１０Ｒ１１）ｒＣ（Ｒ１３）＝Ｃ（Ｒ１４）、－Ｏ（ＣＲ１０Ｒ１１）ｓ－、またはＮＲ８－を；
Ｒ８は、－ＣＯ－Ｒ７、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル等を；
Ｒ９は、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル等を；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール等を；
Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル等を；
ｍは、０、１、または２を示し；
ｎは０または１を示し；
ｐは、０、１、または２を示し；
ｑは、０、１、または２を示し；
ｒは０または１を示し；
ｓは、０、１、または２を示し；
Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルコキシ等を示し；
Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル等を示し；または
Ｒ２およびＲ４は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている３～７員環を形成し；または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている３～７員環を形成し；および
Ｒ７は、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているアリール、ヒドロキシ、場合により置換されているアミノ等を示す。]
で表される化合物。
［Ｖ］Mol Cancer Ther., vol.8, no.1, pages 36-44, 2009に開示された下記化合物
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
  
　ＵＡ62784はJ. Pharmacol. Exp. Ther. 2009, 331, p.636-647にも開示されている。
　CENP-E阻害剤を含む、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療剤（以下、「本発明の治療剤」と称することがある。）は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒト）に対して、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌［例えば、大腸癌（例、家族性大腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、消化管間質腫瘍）、肺癌（例、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫）、中皮腫、膵臓癌（例、膵管癌）、胃癌（例、乳頭腺癌、粘液性腺癌、腺扁平上皮癌）、乳癌（例、浸潤性乳管癌、非浸潤性乳管癌、炎症性乳癌）、卵巣癌（例、上皮性卵巣癌、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣性胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍）、前立腺癌（例、ホルモン依存性前立腺癌、ホルモン非依存性前立腺癌）、肝臓癌（例、原発性肝癌、肝外胆管癌）、甲状腺癌（例、甲状腺髄様癌）、腎臓癌（例、腎細胞癌、腎盂と尿管の移行上皮癌）、子宮癌、脳腫瘍（例、松果体星細胞腫瘍、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫）、黒色腫（例、メラノーマ）、肉腫、膀胱癌、血液癌（例、多発性骨髄腫）］などの予防または治療剤；SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の増殖阻害剤；SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の転移抑制剤；SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌に対するアポトーシス促進剤; 機能的p53を発現する癌の予防または治療剤；機能的p53を発現する癌の増殖阻害剤; 機能的p53を発現する癌の転移抑制剤; 機能的p53を発現する癌に対するアポトーシス促進剤として有用である。
　特に、本発明の治療剤は、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する乳癌、卵巣癌、膵臓癌、肺癌及び血液癌などに対して有効である。
　本発明の治療剤は、CENP-E阻害剤をそのままあるいは薬理学的に許容される担体を配合して、経口的または非経口的に投与することができる。
　本発明の治療剤を経口投与する場合の剤形としては、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠、舌下錠、バッカル錠、口腔内速崩錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、フィルム剤（例、口腔粘膜貼付フィルム）等の経口剤が挙げられる。また、本発明の治療剤を非経口投与する場合の剤形としては、例えば、注射剤（例、静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤）、注入剤、点滴剤、坐剤、経皮剤（例、イオントフォレシス経皮剤）が挙げられる。また、本発明の治療剤は、適当な基剤（例、酪酸の重合体、グリコール酸の重合体、酪酸－グリコール酸の共重合体、酪酸の重合体とグリコール酸の重合体との混合物、ポリグリセロール脂肪酸エステル）を含む徐放性製剤であってもよい。
　本発明の治療剤を製造する方法としては、製剤技術分野で一般的に用いられている方法（例えば、日本薬局方に記載の方法）を適用することができる。また、上記の薬理学的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤、着色剤、保存剤、芳香剤、矯味剤、安定剤、粘稠剤が挙げられる。
　賦形剤の例としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、蔗糖、微結晶セルロース、カンゾウ末、マンニトール、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムが挙げられる。
　結合剤の例としては、５乃至１０重量％デンプンのり液、１０乃至２０重量％アラビアゴム液またはゼラチン液、１乃至５重量％トラガント液、カルボキシメチルセルロース液、アルギン酸ナトリウム液、グリセリンが挙げられる。
　崩壊剤の例としては、デンプン、炭酸カルシウムが挙げられる。
　滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、精製タルクが挙げられる。
　甘味剤の例としては、ブドウ糖、果糖、転化糖、ソルビトール、キシリトール、グリセリン、単シロップが挙げられる。
　界面活性剤の例としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ソルビタンモノ脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル４０が挙げられる。
　懸濁化剤の例としては、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ベントナイトが挙げられる。
　乳化剤の例としては、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、ポリソルベート８０が挙げられる。
　例えば、錠剤は、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を、丸剤及び顆粒剤は、賦形剤、結合剤、崩壊剤等を、散剤及びカプセル剤は賦形剤等を、シロップ剤は甘味剤等を、乳剤または懸濁剤は懸濁化剤、界面活性剤、乳化剤等を、それぞれ用いて製造することができる。
　注射剤は、本発明の治療剤の有効成分であるCENP-E阻害薬を自体公知の方法、すなわち、無菌の水性液もしくは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製される。水性液としては、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウム）等が挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０）と併用してもよい。油性液としては、ゴマ油、大豆油等が挙げられ、溶解補助剤として、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイン）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコール）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール）等と配合してもよい。調製された注射液は、通常、アンプルに充填される。
　本発明の治療剤（具体的には前記した各種剤形）中のCENP-E阻害剤の含有量は、製剤の形態に応じて相違するが、通常、製剤全体に対して約０．０１乃至１００重量％、好ましくは約２乃至８５重量％、さらに好ましくは約５乃至７０重量％である。
　本発明の治療剤中、薬理学的に許容される担体の含有量は、製剤の形態に応じて相違するが、通常、製剤全体に対して約１乃至９９．９重量％、好ましくは約１０乃至９０重量％である。
　本発明の治療剤は、安定かつ低毒性であり、哺乳動物（例、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒト）に安全に投与することができる。その１日の投与量は患者の状態や体重、化合物の種類、投与経路等によって異なるが、例えば、癌治療目的で患者に経口投与する場合には、成人（体重約６０ｋｇ）１日当りの投与量は、CENP-E阻害剤として約１乃至２０００ｍｇ、好ましくは約３乃至１０００ｍｇ、さらに好ましくは約１０乃至２５０ｍｇであり、これらを１回または２乃至３回に分けて投与することができる。
　本発明の治療剤を非経口的に投与する場合は、通常、液剤（例えば、注射剤）の形で投与する。その１回投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法等によっても異なるが、例えば、注射剤の形にして、通常体重１ｋｇあたり約０．０１乃至約１００ｍｇ、好ましくは約０．０１乃至約５０ｍｇ、より好ましくは約０．１乃至約５ｍｇを静脈注射または点滴により投与するのが好都合である。
　本発明の治療剤は、ホルモン療法剤、化学療法剤、免疫療法剤または細胞増殖因子ならびにその受容体の作用を阻害する薬剤等の薬物と併用して用いることができる。以下、本発明の治療剤と併用し得る薬物を「併用薬物」と略記する。
　「ホルモン療法剤」としては、例えば、ホスフェストロール、ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、ダナゾール、アリルエストレノール、ゲストリノン、メパルトリシン、ラロキシフェン、オルメロキシフェン、レボルメロキシフェン、抗エストロゲン（例、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トレミフェン）、ピル製剤、メピチオスタン、テストロラクトン、アミノグルテチイミド、ＬＨ－ＲＨアゴニスト（例、酢酸ゴセレリン、ブセレリン、酢酸リュープロレリン）、ドロロキシフェン、エピチオスタノール、スルホン酸エチニルエストラジオール、アロマターゼ阻害薬（例、塩酸ファドロゾール、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、フォルメスタン）、抗アンドロゲン（例、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド）、５α－レダクターゼ阻害薬（例、フィナステリド、エプリステリド）、副腎皮質ホルモン系薬剤（例、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン）、アンドロゲン合成阻害薬（例、アビラテロン）、レチノイド及びレチノイドの代謝を遅らせる薬剤（例、リアロゾール）、甲状腺ホルモン、及びそれらのＤＤＳ（Drug Delivery System）製剤が用いられる。
　「化学療法剤」としては、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来抗癌剤が用いられる。
　「アルキル化剤」としては、例えば、ナイトロジェンマスタード、塩酸ナイトロジェンマスタード－Ｎ－オキシド、クロラムブチル、シクロフォスファミド、イホスファミド、チオテパ、カルボコン、トシル酸インプロスルファン、ブスルファン、塩酸ニムスチン、ミトブロニトール、メルファラン、ダカルバジン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、トリエチレンメラミン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ピポブロマン、エトグルシド、カルボプラチン、シスプラチン、ミボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、アルトレタミン、アンバムスチン、塩酸ジブロスピジウム、フォテムスチン、プレドニムスチン、プミテパ、リボムスチン、テモゾロミド、トレオスルファン、トロフォスファミド、ジノスタチンスチマラマー、アドゼレシン、システムスチン、ビゼレシン、及びそれらのＤＤＳ（Drug Delivery System）製剤が用いられる。
　「代謝拮抗剤」としては、例えば、メルカプトプリン、６－メルカプトプリンリボシド、チオイノシン、メトトレキサート、ペメトレキセド、エノシタビン、シタラビン、シタラビンオクフォスファート、塩酸アンシタビン、５－ＦＵ系薬剤（例、フルオロウラシル、テガフール、ＵＦＴ、ドキシフルリジン、カルモフール、ガロシタビン、エミテフール、カペシタビン）、アミノプテリン、ネルザラビン、ロイコボリンカルシウム、タブロイド、ブトシン、フォリネイトカルシウム、レボフォリネイトカルシウム、クラドリビン、エミテフール、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、ペントスタチン、ピリトレキシム、イドキシウリジン、ミトグアゾン、チアゾフリン、アンバムスチン、ベンダムスチン、及びそれらのＤＤＳ製剤が用いられる。
　「抗癌性抗生物質」としては、例えば、アクチノマイシンＤ、アクチノマイシンＣ、マイトマイシンＣ、クロモマイシンＡ３、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ネオカルチノスタチン、ミスラマイシン、ザルコマイシン、カルチノフィリン、ミトタン、塩酸ゾルビシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸イダルビシン、及びそれらのＤＤＳ製剤が用いられる。
　「植物由来抗癌剤」としては、例えば、エトポシド、リン酸エトポシド、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、テニポシド、パクリタキセル、ドセタクセル、ビノレルビン、及びそれらのＤＤＳ製剤が用いられる。
　「免疫療法剤」としては、例えば、ピシバニール、クレスチン、シゾフィラン、レンチナン、ウベニメクス、インターフェロン、インターロイキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポイエチン、リンホトキシン、ＢＣＧワクチン、コリネバクテリウムパルブム、レバミゾール、ポリサッカライドＫ、プロノコダゾール、抗ＣＴＬＡ４抗体が用いられる。
　「細胞増殖因子ならびにその受容体の作用を阻害する薬剤」における「細胞増殖因子」としては、細胞の増殖を促進する物質であればどのようなものでもよく、通常、分子量が２０，０００以下のペプチドで、受容体との結合により低濃度で作用が発揮される因子が挙げられ、具体的には、
(1) ＥＧＦ（epidermal growth factor）またはそれと実質的に同一の活性を有する物質（例、ＴＧＦα）；
(2) インシュリンまたはそれと実質的に同一の活性を有する物質（例、インシュリン、ＩＧＦ(insulin-like growth factor)－１、ＩＧＦ－２）；
(3) ＦＧＦ（fibroblast growth factor）またはそれと実質的に同一の活性を有する物質（例、酸性ＦＧＦ、塩基性ＦＧＦ、ＫＧＦ（keratinocyte growth factor）、ＦＧＦ－１０）；
(4) その他の細胞増殖因子（例、ＣＳＦ（colony stimulating factor）、ＥＰＯ（erythropoietin）、ＩＬ－２（interleukin-2）、ＮＧＦ（nerve growth factor）、ＰＤＧＦ（platelet-derived growth factor）、ＴＧＦβ（transforming growth factor β）、ＨＧＦ（hepatocyte growth factor）、ＶＥＧＦ（vascular endothelial growth factor）、ヘレグリン、アンジオポエチン）；
等が用いられる。
　「細胞増殖因子の受容体」としては、上記の細胞増殖因子と結合能を有する受容体であればいかなるものであってもよく、具体的には、ＥＧＦ受容体、ヘレグリン受容体（例、ＨＥＲ３）、インシュリン受容体、ＩＧＦ受容体－１、ＩＧＦ受容体－２、ＦＧＦ受容体－１またはＦＧＦ受容体－２、ＶＥＧＦ受容体、アンジオポエチン受容体（例、Ｔｉｅ２）、ＰＤＧＦ受容体、ＴＮＦα受容体等が用いられる。
　「細胞増殖因子ならびにその受容体の作用を阻害する薬剤」としては、例えば、ＥＧＦ阻害剤、ＴＧＦα阻害剤、ハーレギュリン阻害剤、インシュリン阻害剤、ＩＧＦ阻害剤、ＦＧＦ阻害剤、ＫＧＦ阻害剤、ＣＳＦ阻害剤、ＥＰＯ阻害剤、ＩＬ－２阻害剤、ＮＧＦ阻害剤、ＰＤＧＦ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＨＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、アンジオポエチン阻害剤、ＥＧＦ受容体阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ４阻害剤、インシュリン受容体阻害剤、ＩＧＦ－１受容体阻害剤、ＩＧＦ－２受容体阻害剤、ＦＧＦ受容体－１阻害剤、ＦＧＦ受容体－２阻害剤、ＦＧＦ受容体－３阻害剤、ＦＧＦ受容体－４阻害剤、ＶＥＧＦ受容体阻害剤、Ｔｉｅ－２阻害剤、ＰＤＧＦ受容体阻害剤、Ａｂｌ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ｃ－Ｋｉｔ阻害剤、Ｓｒｃ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、Ｔｒｋ阻害剤、Ｒｅｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、Ａｕｒｏｒａ阻害剤、ＰＬＫ阻害剤、ＭＥＫ（ＭＥＫ１／２）阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤等が用いられる。このような薬剤としては、より具体的には、抗ＶＥＧＦ抗体（例、Bevacizumab）、抗ＨＥＲ２抗体（例、Trastuzumab、Pertuzumab）、抗ＥＧＦＲ抗体（例、Cetuximab、Panitumumab、Matuzumab、Nimotuzumab）、抗ＶＥＧＦＲ抗体、抗ＨＧＦ抗体、Imatinib mesylate、Erlotinib、Gefitinib、Sorafenib、Sunitinib、Dasatinib、Lapatinib、Vatalanib、4-(4-フルオロ-2-メチル-1H-インドール-5-イルオキシ)-6-メトキシ-7-[3-(1-ピロリジニル)プロポキシ]キナゾリン（AZD-2171）、Lestaurtinib、Pazopanib、Canertinib、Tandutinib、3-(4-ブロモ-2,6-ジフルオロベンジルオキシ)-5-[3-[4-(1-ピロリジニル)ブチル]ウレイド]イソチアゾール-4-カルボキサミド（CP-547632）、Axitinib、N-(3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-6-イル)-2-(ピリジン-4-イルメチルアミノ)ピリジン-3-カルボキサミド（AMG-706）、Nilotinib、6-[4-(4-エチルピペラジン-1-イルメチル)フェニル]-N-[1(R)-フェニルエチル]-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-4-アミン（AEE-788）、Vandetanib、Temsirolimus、Everolimus、Enzastaurin、N-[4-[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)-6-(3-メチル-1H-ピラゾール-5-イルアミノ)ピリミジン-2-イルスルファニル]フェニル]シクロプロパンカルボキサミド（VX-680）、リン酸　2-[N-[3-[4-[5-[N-(3-フルオロフェニル)カルバモイルメチル]-1H-ピラゾール-3-イルアミノ]キナゾリン-7-イルオキシ]プロピル]-N-エチルアミノ]エチル　エステル（AZD-1152）、4-[9-クロロ-7-(2,6-ジフルオロフェニル)-5H-ピリミド[5,4-d][2]ベンズアゼピン-2-イルアミノ]安息香酸（MLN-8054）、N-[2-メトキシ-5-[(E)-2-(2,4,6-トリメトキシフェニル)ビニルスルホニルメチル]フェニル]グリシン　ナトリウム塩（ON-1910Na）、4-[8-シクロペンチル-7(R)-エチル-5-メチル-6-オキソ-5,6,7,8-テトラヒドロプテリジン-2-イルアミノ]-3-メトキシ-N-(1-メチルピペリジン-4-イル)ベンズアミド（BI-2536）、5-(4-ブロモ-2-クロロフェニルアミノ)-4-フルオロ-1-メチル-1H-ベンズイミダゾール-6-カルボヒドロキサム酸　2-ヒドロキシエチルエステル（AZD-6244）、N-[2(R),3-ジヒドロキシプロポキシ]-3,4-ジフルオロ-2-(2-フルオロ-4-ヨードフェニルアミノ)ベンズアミド（PD-0325901）、エベロリムス（RAD001）が用いられる。
　上記の薬剤の他に、Ｌ－アスパラギナーゼ、アセグラトン、塩酸プロカルバジン、プロトポルフィリン・コバルト錯塩、水銀ヘマトポルフィリン・ナトリウム、トポイソメラーゼＩ阻害薬（例、イリノテカン、トポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬（例、ソブゾキサン）、分化誘導剤（例、レチノイド、ビタミンＤ類）、他の血管新生阻害薬（例、フマギリン、さめ抽出物、ＣＯＸ－２阻害薬）、α－ブロッカー（例、塩酸タムスロシン）、ビスホスホン酸（例、パミドロネート、ゾレドロネート）、サリドマイド、５－アザシチジン、デシタビン、プロテアソーム阻害薬（例、ボルテゾミブ）、アポトーシス誘導剤（例、TRAIL受容体作動薬、抗TRAIL抗体、Bcl-2阻害薬）、抗腫瘍性抗体（例、抗ＣＤ２０抗体）、毒素標識抗体等も併用薬物として用いることができる。
　本発明の治療剤と併用薬物とを組み合わせることにより、
(1) 本発明の治療剤または併用薬物を単独で投与する場合に比べて、その投与量を軽減することができる；
(2) 患者の症状（軽症、重症等）に応じて、本発明の治療剤と併用する薬物を選択することができる；
(3) 治療期間を長く設定することができる；
(4) 治療効果の持続を図ることができる；
(5) 本発明の治療剤と併用薬物とを併用することにより、相乗効果が得られる；等の優れた効果を得ることができる。
　以下、本発明の治療剤と併用薬物を併用する場合を「本発明の併用剤」と称する。
　本発明の併用剤の使用に際しては、本発明の治療剤と併用薬物の投与時期は限定されず、本発明の治療剤と併用薬物とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。
　本発明の治療剤と併用薬物を併用する場合の投与形態としては、例えば、
(1) 本発明の治療剤と併用薬物とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与；
(2) 本発明の治療剤と併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与；
(3) 本発明の治療剤と併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与；
(4) 本発明の治療剤と併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与；
(5) 本発明の治療剤と併用薬物とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、本発明の治療剤、次いで併用薬物の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）；
が挙げられる。
　併用薬物の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明の治療剤と併用薬物との配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、投与対象がヒトである場合、本発明の治療剤１重量部に対し、併用薬物を０．０１乃至１００重量部用いればよい。
　本発明の併用剤は、毒性が低く、例えば、本発明の治療剤及び／または上記併用薬物を自体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体と混合して医薬組成物、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放性製剤等とした後に、経口的または非経口的（例、局所、直腸、静脈内投与）に安全に投与することができる。注射剤は、静脈内、筋肉内、皮下または臓器内投与あるいは直接病巣に投与することができる。
　上記した薬理学的に許容される担体としては、前記した本発明の治療剤の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体と同様のものが挙げられる。
　本発明の併用剤における本発明の治療剤と併用薬物との配合比は、投与対象、投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。
　例えば、本発明の併用剤における本発明化合物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約０．０１乃至１００重量％、好ましくは約０．１乃至５０重量％、さらに好ましくは約０．５乃至２０重量％程度である。
　本発明の併用剤における併用薬物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約０．０１乃至９０重量％、好ましくは約０．１乃至５０重量％、さらに好ましくは約０．５乃至２０重量％程度である。
　本発明の併用剤中、薬理学的に許容される担体の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約１乃至９９．９９重量％、好ましくは約１０乃至９０重量％程度である。
　また、本発明の治療剤及び併用薬物をそれぞれ別々に製剤化する場合も同様の含有量でよい。
２．SAC機能異常を呈する癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法
　本発明は、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法（以下では、「本発明の方法」と称することがある）を提供する。本発明の方法は、被検対象である癌患者から分離された癌が機能的p53を発現しているか否か評価することを特徴とする。
　本発明の方法の被検対象となり得る動物は、哺乳動物（例：ヒト、サル、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、モルモット、マウス、ラット）である。哺乳動物は、好ましくはヒトである。
　本発明の方法における被検対象は、SAC機能異常を呈する癌の患者である。
　「SAC機能異常を呈する癌」の定義及びその類型は、上述の「１．癌の治療剤」の項に詳述した通りである。また、本項におけるその他の用語の定義は、特に断りのない限り、上述の「１．癌の治療剤」の項に従うものとする。
　被検対象である患者の癌がSAC機能異常を呈するか否か不明である場合には、癌が機能的p53を発現しているか否か評価する前に、これを予め評価してもよい。従って、別の態様において、本発明の方法は、被検対象である癌患者の癌がSAC機能異常を呈するか否か評価することを含む。
　癌がSAC機能異常を呈する癌に該当するか否かの評価は、上述の「１.癌の治療剤」の項に詳述した方法によって行なうことができる。
　癌が上記類型１に該当するか否かは、被検対象である癌患者から摘出された癌に含まれる癌細胞がSAC構成因子（例えば、BubR1、Bub1、Bub3、MAD1、MAD2、CDC20、CDC27、MPS1、Aurora-B、Borealin、INCENP、Survivin、Chk1、ZW10、Zwilch、ROD）の変異遺伝子を発現するか否か評価することにより判断することができる。
　また、癌が上記類型１に該当するか否かは、被検対象である癌患者から摘出された癌に含まれる癌細胞が他のSAC構成因子（例えば、MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5、ZWINT）の変異遺伝子を発現するか否か評価することにより判断することもできる。
　癌が上記類型２に該当するか否かは、被検対象である癌患者から摘出された癌に含まれる癌細胞におけるSAC構成因子（例えば、BubR1、Bub1、Bub3、MAD1、MAD2、CDC20、CDC27、MPS1、Aurora-B、Borealin、INCENP、Survivin、Chk1、ZW10、Zwilch、ROD）のタンパク質発現量が正常組織と比較して低下しているか否かを評価することにより判断することができる。
　また、癌が上記類型２に該当するか否かは、被検対象である癌患者から摘出された癌に含まれる他の癌細胞におけるSAC構成因子（例えば、MIS12、PMF1、DSN1、NSL1、NDC80、NUF2、SPC24、SPC25、CASC5、ZWINT）のタンパク質発現量が正常組織と比較して低下しているか否かを評価することにより判断することができる。
　上記評価に使用するSAC構成因子の好ましい例としてBubR1が挙げられる。
　上記類型３の場合、癌がSAC機能異常を呈するか否かは、被検対象である癌患者から摘出された癌に含まれる癌細胞について染色体検査を行い、染色体の構造を観察し、癌細胞が不均等な染色体分配を生じたまま細胞分裂を続けているか否かを評価することにより判断することができる。染色体検査によるSAC機能異常を呈する癌は、例えばCancer 2002 vol94 2047-2054に記載の方法にしたがって判別することができる。そして、癌細胞が不均等な染色体分配を生じたまま細胞分裂を続けていると評価された場合には、癌がSAC機能異常を呈すると判断することができる。一方、癌が不均等な染色体分配を生じていない場合には、癌がSAC機能異常を呈していない可能性が高いと判定することができる。
　上記類型４に該当するか否かは、癌細胞におけるSAC構成因子が受けている翻訳後修飾の検討を行ない、これを正常組織における翻訳後修飾と比較することにより判断することができる。
　上記類型５に該当するか否かは、パクリタキセルまたは他のタキサン系化学療法薬を用いた化学療法による治療の有効性、または、インビトロでのパクリタキセルについてのGI50値を評価することにより判断することができる。
　上記評価の結果、癌がSAC機能異常を呈すると判断された場合には、更に、該癌が機能的p53を発現しているか否かが評価される。
　癌が機能的p53を発現しているか否かは、後述の遺伝子レベルでの変異の評価又はタンパク質レベルでの変異の評価により、決定することができる。
　遺伝子レベルでの変異の評価は、癌細胞からp53をコードするゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡを回収し、これを用いて、例えば、WO03/023063（例，第17頁第5行～第28頁第20行）に記載された種々の方法、例えば、RFLP法、PCR-SSCP法、ASOハイブリダイゼーション、ダイレクトシークエンス法、ARMS法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法、RNaseA切断法、化学切断法、DOL法、TaqMan PCR法、インベーダー法、MALDI-TOF/MS法、TDI法、モレキュラー・ビーコン法、ダイナミック・アレルスペシフィック・ハイブリダイゼーション法、パドロック・プローブ法、UCAN法、DNAチップまたはDNAマイクロアレイを用いた核酸ハイブリダイゼーション法及びECA法などを行うことにより実施することができる。
　タンパク質レベルでの変異の評価は、癌細胞からp53を、抗体カラム等の周知のタンパク質精製方法を用いて精製し、得られたp53、又はそれをLys-C等のペプチド分解酵素により限定分解して得られる部分ペプチドを、ペプチドシークエンサー又は質量分析装置に付し、アミノ酸配列を決定することにより、実施することができる。
　上記評価の結果、癌細胞が発現するp53がアミノ酸配列レベルで変異を有する場合には、当該変異p53が野生型p53と同等（例、約0.1～10倍、好ましくは0.5～2倍、より好ましくは0.8～1.25倍）のアポトーシス誘導活性を有するか否かが更に評価される。アポトーシス誘導活性の測定は、J. Biol. Chem., vol.279, pages 48434-48442, 2004又はMol. Biol. Cell, vol.15, pages 5064-5074, 2004に記載の方法に従って測定することができる。
　前記評価及び上記測定の結果により、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定することができる。すなわち、癌がSAC機能異常を呈し、かつ、機能的p53（好ましくは野生型p53）を発現していると結論付けられた場合には、該癌はCENP-E阻害剤への感受性を有する（又は感受性が高い）可能性が高いと判定することができる。一方、SAC機能異常を呈する癌が機能的p53を発現してないと結論付けられた場合には、該癌はCENP-E阻害剤への感受性を有しない（又は感受性が低い）可能性が高いと判定することができる。
　また、別の態様では、癌がSAC機能異常を呈するか否かを評価することなく、癌が機能的p53を発現しているか否かを評価することにより、該癌のCENP-E阻害剤への感受性を予測することができる。すなわち、機能的p53を発現している癌はCENP-E阻害剤への感受性を有する（又は感受性が高い）可能性が高いと判定することができる。
３．薬力学（PD）マーカーとしてのp53の使用
　後述の実施例において示されるように、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌細胞に対して、有効量のCENP-E阻害剤を作用させると、癌細胞における機能的p53の発現レベルが上昇する。また、癌細胞におけるｐ53の発現レベルが、血中p53レベル及び血中抗p53抗体レベルと良好に相関することが知られている。従って、機能的p53は、SAC機能異常を呈する癌患者における、CENP-E阻害剤のPDマーカーとして有用であり、癌細胞における機能的ｐ53の発現レベル、血中機能的p53レベル又は血中抗機能的p53抗体レベルを指標に、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌に対するCENP-E阻害剤の有効性や、有効量を判定することが出来る。よって、本発明は、哺乳動物に対しCENP-E阻害剤を投与することを含み、かつ、該投与前後において
（i）癌細胞内機能的p53発現レベル、
（ii）血中機能的p53発現レベル、及び
（iii）血中抗機能的p53抗体発現レベル
から選択される一以上の発現レベルを比較することを特徴とする、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌におけるCENP-E阻害剤の有効量を判定する方法（以下では、「本発明の判定方法」と称することがある）を提供する。
　該方法においては、一定用量のCENP-E阻害剤を哺乳動物に対して投与する。
　哺乳動物の例としては、ヒト、サル、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ハムスター、モルモット、マウス、ラット等を挙げられる。哺乳動物は、好ましくはヒトである。
　当該哺乳動物は、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の患者である。
　用語「SAC機能異常を呈する癌」及び「機能的p53を発現する癌」の定義及びその類型は、上述の「１．癌の治療剤」の項に詳述した通りである。また、本項におけるその他の用語の定義は、特に断りのない限り、上述の「１．癌の治療剤」の項に従うものとする。
　次に、CENP-E阻害剤の投与前及び投与後における（i）癌細胞内機能的p53発現レベル、（ii）血中機能的p53発現レベル、及び（iii）血中抗機能的p53抗体発現レベルから選択される一以上の発現レベルを測定する。
　「発現レベル」には、タンパク質発現レベルと遺伝子発現レベルの双方が包含される。
　機能的p53タンパク質の発現レベルは、機能的p53タンパク質を特異的に認識する抗体を用いて、免疫学的手法により測定することができる。免疫学的手法としては、例えば、抗体アレイ、フローサイトメトリー解析、放射性同位元素免疫測定法（RIA法）、ELISA法（Methods in Enzymol. 70: 419-439 (1980)）、ウェスタンブロッティング、免疫組織染色が挙げられる。
　機能的p53遺伝子の発現レベルは、機能的p53遺伝子転写産物（即ち、p53遺伝子をコードするmRNA）やcDNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又はプライマーセットを用いて、自体公知の方法により測定することが出来る。該測定方法としては、例えば、RT-PCR、ノザンブロッティング、in situ ハイブリダイゼーション、cDNAアレイを挙げることができる。
　抗機能的p53抗体の発現レベルは、単離又は精製された機能的p53タンパク質または抗原性を有するその部分ペプチドを用いて、免疫学的手法により測定することができる。免疫学的手法としては、上述のものを挙げることが出来る。
　血中の機能的p53発現レベル又は抗機能的p53抗体発現レベルの測定は、好適には、血清又は血漿中における機能的p53タンパク質濃度又は抗機能的p53抗体濃度を測定することにより行われる。
　次に、CENP-E阻害剤投与前における上記（i）～(iii)から選択される一以上の発現レベルが、投与後におけるそれと比較される。発現レベルの比較は、好ましくは、統計学的な有意差の有無に基づいて行われる。
　比較の結果、CENP-E阻害剤の投与前と比較して、投与後において機能的p53発現レベル又は抗機能的p53抗体発現レベルが上昇していた場合には、投与した用量において、当該CENP-E阻害剤が投与対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療に有効である可能性が高いと判定することが出来る。逆に、CENP-E阻害剤投与後の機能的p53発現レベル又は抗機能的p53抗体発現レベルが投与前と比較して不変であるか、あるいは低下している場合には、投与した用量では、当該CENP-E阻害剤は投与対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療に無効である可能性が高いと判定することが出来る。
　尚、本発明の判定方法においては、（i）癌細胞内機能的p53発現レベル、（ii）血中機能的p53発現レベル、及び（iii）血中抗機能的p53抗体発現レベルからなる群から選択される少なくとも１つの発現レベルを測定すれば足りるが、これらのうちの２つ（（i）及び（ii）、（i）及び（iii）、又は（ii）及び（iii））、又は３つ全ての発現レベルを測定し、CENP-E阻害剤の投与前後で比較することにより、より精度の高い判定を行い得る。
　尚、（i）～(iii)から選択される２つ又は３つの発現レベルを測定する場合には、少なくとも１つの発現レベルがCENP-E阻害剤の投与前と比較して、投与後において上昇していた場合には、当該CENP-E阻害剤が投与対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療に有効である可能性が高いと判定する。
　また、本発明の判定方法において、投与した用量では、当該CENP-E阻害剤は投与対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療に無効である可能性が高いと判定された場合には、より高い用量で、当該CENP-E阻害剤を、再度当該哺乳動物へ投与し、再投与の前後における上記（i）～(iii)から選択される一以上の発現レベルを比較し、より高い用量における当該CENP-E阻害剤の有効性を判定してもよい。このように用量を段階的に上げながら、投与した用量において、当該CENP-E阻害剤が投与対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療に有効である可能性が高いと判定されるまで、本発明の方法を繰り返すことにより、対象哺乳動物におけるSAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌に対する当該CENP-E阻害剤の有効量を決定することが出来る。
　刊行物、特許文献等を含む、本明細書に引用されたすべての参考文献は、引用により、それらが個々に具体的に参考として援用されかつその内容全体が具体的に記載されているのと同程度まで、本明細書に援用される。
　以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
　実施例中の略号は、本技術分野で現在通常用いられている用例に従うものであり、例えば、次のような意味である。
siRNA ：small interfering RNA
ATP ：アデノシン三リン酸
SDS ：ドデシル硫酸ナトリウム
PAGE ：ポリアクリルアミドゲル電気泳動
PVDF ：ポリフッ化ビニリデン
PCR ：Polymerase Chain Reaction
cDNA ：相補デオキシリボ核酸
RNA ：リボ核酸
ATPase ：アデノシン三リン酸分解酵素
HRP ：Horseradish Peroxidase
GAPDH ：グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素
　本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
（配列番号：１）野生型ヒトBubR1のアミノ酸配列
（配列番号：２）野生型ヒトBub1のアミノ酸配列
（配列番号：３）野生型ヒトBub3のアミノ酸配列
（配列番号：４）野生型ヒトMAD1のアミノ酸配列
（配列番号：５）野生型ヒトMAD2のアミノ酸配列
（配列番号：６）野生型ヒトCDC20のアミノ酸配列
（配列番号：７）野生型ヒトCDC27 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：８）野生型ヒトCDC27 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：９）野生型ヒトMPS1 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：１０）野生型ヒトMPS1 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：１１）野生型ヒトAurora-Bのアミノ酸配列
（配列番号：１２）野生型ヒトBorealinのアミノ酸配列
（配列番号：１３）野生型ヒトINCENPのアミノ酸配列
（配列番号：１４）野生型ヒトSurvivin isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：１５）野生型ヒトSurvivin isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：１６）野生型ヒトSurvivin isoform 3のアミノ酸配列
（配列番号：１７）野生型ヒトChk1のアミノ酸配列
（配列番号：１８）野生型ヒトZW10のアミノ酸配列
（配列番号：１９）野生型ヒトZwilchのアミノ酸配列
（配列番号：２０）野生型ヒトRODのアミノ酸配列
（配列番号：２１）野生型ヒトp53のアミノ酸配列
（配列番号：２２）野生型ヒトCENPEのアミノ酸配列
（配列番号：２３）野生型ヒトMAD1のアミノ酸配列
（配列番号：２４）野生型ヒトCDC20のアミノ酸配列
（配列番号：２５）野生型ヒトBubR1のcDNA配列
（配列番号：２６）野生型ヒトMIS12のアミノ酸配列
（配列番号：２７）野生型ヒトPMF1 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：２８）野生型ヒトPMF1 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：２９）野生型ヒトPMF1 isoform 3のアミノ酸配列
（配列番号：３０）野生型ヒトDSN1 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：３１）野生型ヒトDSN1 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：３２）野生型ヒトDSN1 isoform 3のアミノ酸配列
（配列番号：３３）野生型ヒトNSL1 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：３４）野生型ヒトNSL1 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：３５）野生型ヒトNDC80のアミノ酸配列
（配列番号：３６）野生型ヒトNUF2のアミノ酸配列
（配列番号：３７）野生型ヒトSPC24のアミノ酸配列
（配列番号：３８）野生型ヒトSPC25のアミノ酸配列
（配列番号：３９）野生型ヒトCASC5 isoform 2のアミノ酸配列
（配列番号：４０）野生型ヒトCASC5 isoform 1のアミノ酸配列
（配列番号：４１）野生型ヒトZWINT isoform bのアミノ酸配列
（配列番号：４２）野生型ヒトCASC5 isoform aのアミノ酸配列
実施例１
BubR1機能低下時のCENP-E発現抑制による癌細胞増殖抑制
　CENP-E阻害による細胞増殖抑制とSACとの関連性を調べることを目的とし、SAC構成因子であるBubR1とCENP-Eの機能低下が増殖に及ぼす影響をsiRNA導入によるノックダウン実験を用いて検討した。また、CENP-Eと同じM期キネシンに属するEg5をM期停止のコントロールとして使用した。
　ヒト子宮頸癌細胞株Hela（American Tissue Culture Collection（ATCC）より購入）（以下、「Hela細胞」と称することがある。）を６穴マルチウェルプレートに4 X105細胞/ウェルの濃度で播種し、炭酸ガスインキュベーター（5% CO2、37℃）中で一晩培養した。500 μLのOPTI-MEM (Invitrogen社)、siRNA (最終濃度：50 μM)及び5 μLのDharmafect 1 (Dharmacom社)を混合した懸濁液を室温で20分間静置した後、該懸濁液を細胞培養液へ添加することでsiRNAの導入を行った。各々のsiRNAは、CENP-E (SMARTpool siRNA, Dharmacon, Lafayette, CO, USA)、Eg5 (SMARTpool siRNA, Dharmacon)、BubR1 (SMARTpool siRNA, Dharmacon)を使用した。また、ネガティブコントロールnon-silencing (NS) siRNAとしてsiTrio negative control (B-Bridge International, Inc.)を使用した。siRNA導入16時間後トリプシンを用いてsiRNA導入したHela細胞を回収し、2X103細胞/100 μL/ウェルになるよう96穴マルチウェルプレートに再播種した。再播種8時間後（siRNA導入24時間後）をDay1とし、その後１日毎に３日間（Day2-Day4）細胞を回収し、CellTiter-Glo luminescent cell viability kit (Promega Corp.)を用いて細胞内ATP量を測定した。各々のATP量をDay1のATP量で標準化した値（倍）を増殖の指標として用いた。
　ウェスタンブロッティング解析によるタンパク質発現解析は以下の通りに行った。siRNA導入後２日目に、NETNバッファー(0.5 % NP-40, 20 mM Tris-HCl (pH8.0), 100 mM NaCl, 10 mM EDTA)で細胞内タンパク質を溶出し、遠心処理で不溶画分を除去した後、上清に３倍濃縮SDSサンプルバッファーを加え、100℃で3分間処理を行ない熱変性させた。この細胞溶解液（15 μL）をSDS-PAGE法（ゲル濃度：7.5 %）にて分離し、PVDF膜（BioRad社）にトランスファー後、目的のタンパク質を認識する抗体で染色し、化学発光（Super signal West Pico Chemiluminescent Substrate, Thermo Scientific）により検出を行った。一次抗体染色には、CENP-E抗体（1000倍希釈；Santa Cruz社、コード番号sc22790）、Eg5抗体（1000倍希釈；Abcam社、コード番号Ab37814）、BubR1抗体（1000倍希釈；MD Transduction社、コード番号612503）及びGAPDH (2000倍希釈；Chemicon社、コード番号MAB374)を用い、二次抗体染色はHRP連結抗ラビット抗体またはHRP連結抗マウス抗体（Amersham社）を用いた。化学発光後、画像解析によりタンパク質量を定量化した。
　定量的PCR法によるmRNA発現解析は以下の通りに行った。siRNA導入後２日目にRNeasy Mini Kit (QIAGEN社)を用いてHela細胞からRNAを抽出し、500 ngのRNAを鋳型としてランダムプライマーを用いた逆転写反応（TaqMan Reverse Transcription Reagent Kit; Applied Biosystems社）でcDNAを作製した。上記cDNAを1 μL、TaqMan Universal PCR Master Mix（Applied Biosystems社）を10 μL、目的遺伝子のTaqManTM Gene Expression Assays （Applied Biosystems社）を2 μL及び蒸留水を7 μL加えたPCR反応液について、定量的PCRを行なった。該定量的PCRは、 50℃を2分、95℃を10分の後、工程Ａ（95℃で15秒維持した後、60℃で１分維持する工程）を40回繰り返す条件で行った。内在性コントロールとしてGAPDHを用い、各々の遺伝子の発現値をGAPDHの発現値で補正した。
　ウェスタンブロッティング解析及び定量的PCR法の結果から、CENP-E siRNA、Eg5 siRNA、BubR1 siRNAの導入により、Hela細胞における各々の標的遺伝子のmRNA及びタンパク質の発現量の低下が誘導された。
　この各siRNAを導入したHela細胞の増殖試験を以下の方法により行った。すなわち、siRNA導入16時間後 siRNA導入Hela細胞をトリプシンにて回収し、2 X103細胞/100 μL/ウェルになるよう96穴マルチウェルプレートに再播種した。再播種8時間後（siRNA導入24時間後）をDay1とし、その後１日毎に３日間（Day2-Day4）細胞を回収し、CellTiter-Glo luminescent cell viability kit (Promega Corp.)を用いて細胞内ATP量を測定した。各々のATP量をDay1のATP量で標準化した値（倍）を増殖の指標として用いた。
　増殖試験の結果を図１に示す。CENP-E siRNA単独導入のHela細胞はEg5 siRNA単独導入のHela細胞と共に、NS siRNA導入のHela細胞と比較して80%以上の増殖抑制が観察された。一方BubR1 siRNA存在下では、CENP-E siRNA導入のHela細胞（CENP-E+BubR1 siRNA）において、BubR1 siRNA単独導入のHela細胞（BubR1 siRNA）と比較して50%以上の増殖抑制が観察されたのに対し、Eg5 siRNAを導入したHela細胞（Eg5+BubR1 siRNA）ではコントロール（BubR1 siRNAを導入したHela細胞）に対する増殖抑制効果は観察されなかった。
　これにより、SAC機能異常を呈する癌の治療にCENP-E阻害剤が有効であることが示された。一方、CENP-Eと同じM期キネシンに属するEg5の阻害剤は、SAC機能異常を呈する癌に有効ではないことが示された。
実施例２
BubR1機能低下時のCENP-E酵素活性抑制による癌細胞増殖抑制
　BubR1 siRNAを導入した細胞に、CENP-EのATPase活性阻害剤　GSK923295 (CENP-E阻害剤; Proc Natl Acad Sci U S A., vol. 107(13), pages 5839-5844, 2010)を添加した場合の増殖試験を行った。
　コントロール群として、CENP-EのATPase活性阻害剤の代わりにM期阻害作用の知られているIspinesib（Eg5阻害剤）若しくはBI2536（Plk1阻害剤）を添加したHela細胞群を用いた。細胞培養法、siRNA導入法は実施例１で示した方法に従った。
　BubR1 siRNA又はNS siRNAを導入したHela細胞を、以下に示す方法により、GSK923925、Ispinesib又はBI2536を用いた増殖試験に供した。siRNA導入16時間後トリプシンを用いてsiRNA導入Hela細胞を回収し、2 X103細胞/100 μL/ウェルになるよう96穴マルチウェルプレートに再播種した。再播種8時間後（siRNA導入24時間後）に、GSK923925（30 nM）、Ispinesib（10 nM）又はBI2536（3 nM）を細胞培養液に添加し、その後３日間Hela細胞を培養した。再播種8時間後（siRNA導入24時間後）をDay1とし、その後１日毎に３日間（Day2-Day4）細胞を回収し、CellTiter-Glo luminescent cell viability kit (Promega Corp.)を用いて細胞内ATP量を測定した。各々のATP量をDay1のATP量で標準化した値（倍）を増殖の指標として用いた。
　結果を図２に示す。NS siRNA導入Hela細胞ではGSK923925処理（30 nM）、Ispinesib処理（10 nM）及びBI2536処理（3 nM）のいずれにおいても、化合物非処理（no treatment）と比較して80%以上の増殖抑制効果が観察された。一方、BubR1 siRNA導入Hela細胞については、GSK923295処理（30 nM）で化合物非処理（no treatment）と比較して60%以上の増殖抑制が観察されたのに対し、Ispinesib処理（10 nM）及びBI2536処理（3 nM）では化合物非処理（no treatment）と比較して増殖抑制効果が観察されなかった。
　これにより、SAC機能異常を呈する癌の治療にCENP-E阻害剤が有効であることが示された。一方、CENP-Eと同じM期キネシンに属するEg5阻害剤、またM期キナーゼであるPlk1阻害剤については、SAC機能異常を呈する癌の治療効果を確認できなかった。
実施例３
BubR1及びCENP-Eの機能不全によるp53タンパク量の増加
　BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞をウェスタンブロッティング解析に供することにより、p53タンパク質の発現変動について検討した。コントロールとして、BubR1 siRNA及びEg5 siRNAの共導入、BubR1 siRNAの単独導入、又はNS siRNAの単独導入を行なった各Hela細胞を用いた。各siRNA導入３日後のHela細胞からNETN (0.5 % NP-40, 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA)バッファーで細胞内タンパク質を溶出し、遠心処理で不溶画分を除去した後、上清に３倍濃縮SDSサンプルバッファーを加え、100℃で3分間処理を行ない熱変性させた。細胞培養法、siRNA導入法、ウェスタンブロッティング解析は実施例１で示した方法に従った。一次抗体染色には、CENP-E抗体（1000倍希釈；Santa Cruz社）、Eg5抗体（1000倍希釈；Abcam社）、BubR1抗体（1000倍希釈；MD Transduction社）、p53抗体（1000倍希釈；Santa Cruz社　コード番号sc126）及びalpha-tubulin抗体 (4000倍希釈；Sigma-Aldrich社)を用いた。
　結果を図３に示す。BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞ではp53タンパク量が顕著に増加したのに対し、BubR1 siRNA及びEg5 siNRAを共導入したHela細胞及びBubR1 siRNAを単独導入したHela細胞ではp53タンパク量の顕著な増加は観察されなかった。
　これにより、SAC機能異常を呈する癌に対しCENP-E阻害剤を使用した場合にはp53経路が活性化することが示された。
実施例４
BubR1、CENP-Eの機能不全によるp53経路の活性化
　BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞をoligonucleotide microarray (Human Genome U133 plus 2.0; Affimetrix社)を用いた遺伝子発現解析に供した。コントロールとして、BubR1 siRNA及びEg5 siRNAを共導入、BubR1 siRNAを単独導入、NS siRNAを単独導入した各Hela細胞を用いた。oligonucleotide microarrayの実験方法はAffimetrix社の実験手引書（Expression analysis technical manual）に従い、得られた実験データについてはGeneSpring（アジレント・テクノロジー社）を用いて解析を行った。また、細胞培養法及びsiRNA導入法は実施例１で示した方法に従った。
　各遺伝子のdetection callが1個以上でPresentと判定された遺伝子を対象とし、NS siRNAを単独導入したHela細胞における遺伝子発現と比較して発現変動が認められる遺伝子を選択した。結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
  
　表１は、各siRNAを導入したHela細胞において発現が変動した遺伝子の数（全遺伝子（左）、p53関連遺伝子（右））を示す。NS siRNAを導入したHela細胞と比較して発現が上昇していた遺伝子の数は、BubR1を単独導入したHela細胞で51、BubR1 siRNA及びEg5 siRNAを共導入したHela細胞で149だったのに対し、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞では434であった。また、発現が上昇した遺伝子の中でp53関連遺伝子数は、BubR1 siRNAを単独導入したHela細胞で13、BubR1 siRNA及びEg5 siRNAを共導入したHela細
胞で27だったのに対し、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNA を共導入したHela細胞では52であった。このことからBubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞ではp53経路が活性化していることが明らかとなった。
　これにより、SAC機能異常を呈する癌に対しCENP-E阻害剤を使用した場合にはp53経路が活性化することが示された。
実施例５
BubR1及びCENP-Eの機能不全によるp53依存的caspase3/7活性化
１）p53 siRNA、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞、及び
２）BubR1siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したp53変異乳癌細胞株SK-BR3
におけるcaspase3/7の活性化を調べた。
　ヒト乳癌細胞株SK-BR3（American Tissue Culture Collection（ATCC）より購入）（以下では、「SK-BR3細胞」と称する場合がある。）についての培養及びsiRNA導入は、実施例１に示すヒト子宮頸癌細胞株Helaと同条件で行なった。各々のsiRNAとしては、CENP-E (SMARTpool siRNA, Dharmacon, Lafayette, CO, USA)、Eg5 (SMARTpool siRNA, Dhramacon)、BubR1 (SMARTpool siRNA, Dharmacon)及びp53 (SMARTpool siRNA, Dharmacon)を使用した。
　siRNA導入16時間後トリプシンを用いてsiRNA導入したHela細胞及びSK-BR3細胞を回収し、2X103細胞/100 μL/ウェルになるよう96穴マルチウェルプレートに再播種した。再播種8時間後（siRNA導入24時間後）をDay1とし、その後１日毎に３日間（Day2-Day4）細胞を回収し、Caspase-Glo 3/7 assay kit (Promega 社)を用いてcaspase3/7活性を測定した。各々のcaspase3/7活性をNS siRNA導入細胞のcaspase3/7活性で標準化した値（倍）をアポトーシスの指標として用いた。
　結果を図４に示す。p53 siRNA、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞におけるcaspase3/7活性が、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したHela細胞のcaspase3/7活性と比較して低いレベルに抑えられていた。また、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAを共導入したSK-BR3細胞ではcaspase3/7活性の上昇は観察されなかった。
　これらの結果から、BubR1 siRNA及びCENP-E siRNAの共導入によって惹起されるアポトーシスはp53経路を介していることが明らかとなった。また、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53が発現する癌にCENP-E阻害剤が有効であることが示された。
実施例６
種々の癌細胞株におけるBubR1タンパク発現
　American Tissue Culture Collection（ATCC）より購入した４種の細胞株（ヒト膵臓癌細胞株PANC-1（以下では、「PANC-1細胞」と称する場合がある。）、ヒト腎臓癌細胞株Caki-1（以下では、「Caki-1細胞」と称する場合がある。）、ヒト前立腺癌細胞株DU 145（以下では、「DU 145細胞」と称する場合がある。）及びHela細胞）、及びEuropean Collection of Animal Cell Culture(ECACC)より購入したヒト卵巣癌細胞株A2780（以下では、「A2780細胞」と称する場合がある。）を10cmカルチャープレートにそれぞれ播種し、炭酸ガスインキュベーター（5% CO2、37℃）中で培養を行なった。培養後の細胞密度が40～95％に到達した段階で細胞を回収し、各細胞におけるBubR1タンパク質の発現量について検討するため、ウェスタンブロッティング解析を行った。ローディングコントロールとしてGAPDHを用いた。各細胞からNETN (0.5 % NP-40, 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA)バッファーで細胞内タンパク質を溶出し、遠心処理で不溶画分を除去した後、上清に3倍濃縮SDSサンプルバッファーを加え、100℃で3分間処理を行ない熱変性させた。細胞培養法、siRNA導入法、ウェスタンブロッティング解析は実施例1で示した方法に従った。一次抗体染色には、抗BubR1抗体（1000倍希釈；MD Transduction社）及び抗GAPDH抗体 (2000倍希釈；Chemicon社、コード番号MAB374)を用いた。
　結果を図5に示す。PANC-1細胞、A2780細胞、Hela細胞、DU 145細胞と比較してCaki-1細胞ではBubR1のタンパク量が少ないことが明らかとなった。上記結果で得られたバンド強度を、TotalLab ver. 2.01 (ULTRA-LUM)にて数値化したところ、Hela細胞に比して、Caki-1細胞のBubR1のタンパク量は22.8%に減少していることが明らかとなった。
　これにより、Caki-1細胞ではBubR1タンパクの発現量が低下しており、Caki-1細胞におけるSAC機能が減弱していることが示された。
実施例７
Caki-1細胞におけるCENP-E酵素活性抑制による機能的p53タンパク量の増加
　Caki-1細胞は野生型p53遺伝子を有することが報告されている（http://cellbank.nibio.go.jp/cellinfo/p5301.htm）。Caki-1細胞にGSK923295を添加した後、p53タンパク質の発現変動について検討した。
　Caki-1細胞を2 X105細胞/2 mL/ウェルになるよう6穴マルチウェルプレートに播種した後、細胞がプレート底面に接着するまで8時間以上培養を行った。その後、細胞培養液中にGSK923925（100 nM）又はDMSO（コントロール）を添加し、Caki-1細胞を該添加から3日間培養した。培養後のCaki-1細胞にNETN (0.5 % NP-40, 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA)バッファーを添加し、遠心処理で不溶画分を除去後に得られた上清に3倍濃縮SDSサンプルバッファーを加えた。得られたサンプルは100℃で3分間加熱した。ウェスタンブロッティング解析は実施例1で示した方法に従った。一次抗体染色には、抗PARP抗体（1000倍希釈；Cell Signaling社　コード番号9542）、抗p53抗体（1000倍希釈；Santa Cruz社　コード番号sc126）及び及び抗GAPDH抗体（2000倍希釈；Chemicon社、コード番号MAB374）を用いた。
　結果を図6に示す。CENP-E阻害剤GSK923295を添加したCaki-1細胞においては、コントロール（DMSO）群と比較して、野性型p53タンパク量が顕著に増加することが明らかになった。
　前記実施例６および実施例７の検討から、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を有する癌に対しCENP-E阻害剤を使用した場合にはp53経路が活性化することが示された。
実施例８
Caki-1細胞におけるCENP-E酵素活性抑制による癌細胞増殖抑制
　Caki-1細胞にGSK923295を添加した場合の該細胞の増殖を調べた。細胞培養法、化合物添加法は実施例1及び実施例2で示した方法に従った。　
　Caki-1細胞を2 X103細胞/100 μL/ウェルになるよう96穴マルチウェルプレートに播種した後、細胞がプレート底面に接着するまで16時間以上培養を行った。その後、細胞培養液中にGSK923925（100 nM）、又はDMSOを添加し、Caki-1細胞の培養を継続した。化合物添加日をDay0とし、その後1日毎に3日間（Day1-Day3）細胞を回収し、CellTiter-Glo luminescent cell viability kit (Promega Corp.)を用いて細胞内ATP量を測定した。各々のATP量をDay0のATP量で標準化した値（倍）を増殖の指標として用いた。
　結果を図7に示す。本検討からGSK923295添加によりCaki-1細胞の増殖が抑制されることが確認できた。
　前記実施例６および実施例８の検討から、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53が発現する癌の治療にCENP-E阻害剤が有効であることが示された。
実施例９
Caki-1細胞担癌マウスに対するCENP-E阻害剤の抗腫瘍作用
　Caki-1細胞を50％マトリゲル溶液に懸濁し、6～7週齢BALB/c系雌ヌードマウス（日本クレア）の皮下に5.0X106個のCaki-1細胞を移植した。移植25日後に生着した腫瘍の腫瘍径を測定し、以下の式で腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積＝長径×短径×短径×（1/2）
　腫瘍体積が200mm3前後の大きさに腫瘍が生着した個体を選び、１群あたり3匹を検討に使用した。
　なお、検討には10 mg/mlの濃度となるようVehicle溶媒（10％ DMSO, 9% Cremophor EL, 18% PEG400, 0.09 mol/l クエン酸溶液）に溶解したGSK923295を用いた。GSK923295の投与量は100 mg/kgとし、移植25日、26日、27日及び32日に1日1回腹腔内投与を行った。CENP-E阻害剤の抗腫瘍作用を検出するため、移植25日、28日、32日、35日及び39日に腫瘍径を測定し腫瘍体積を算出した。
　結果を図8に示す。グラフ縦軸は腫瘍径より算出した腫瘍体積、横軸は移植後日数、グラフ赤線はGSK923295投与群、グラフ黒線はVehicle（コントロール）投与群を示す。本検討から、Caki-1担癌マウスに対しCENP-E阻害剤が強い抗腫瘍作用を有することが明らかとなった。
　前記実施例６および実施例９の検討から、CENP-E阻害剤がSAC機能異常を呈し且つ機能的p53が発現する癌組織に有効であることが示された。
　本発明により、SAC機能異常を呈する癌に対する優れた治療剤が提供される。また、本発明により、癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する優れた方法が提供される。
　本出願は、日本で出願された特願２０１０－１６００９３（出願日：２０１０年７月１４日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (9)

  1. 　CENP-E阻害剤を含む、SAC機能異常を呈し且つ機能的p53を発現する癌の治療剤。
  2. 　癌が、少なくとも１つのSAC構成因子の変異遺伝子を発現するか、又は癌における少なくとも１つのSAC構成因子の発現レベルが正常組織と比較して低下している癌である、請求項１記載の治療剤。
  3. 　SAC構成因子がBubR1である、請求項２記載の治療剤。
  4. 　機能的p53が野生型p53である、請求項１記載の治療剤。
  5. 　SAC機能異常を呈する癌が機能的p53を発現しているか否か評価することを含む、該癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法。
  6. 　癌がSAC機能に異常を呈するか否か評価すること、及び該癌が機能的p53を発現しているか否か評価することを含む、該癌のCENP-E阻害剤への感受性を判定する方法。
  7. 　哺乳動物に対しＣＥＮＰ－Ｅ阻害剤を投与することを含み、かつ、該投与前後において
    （i）癌細胞内機能的ｐ５３発現レベル、
    （ii）血中機能的ｐ５３発現レベル、及び
    （iii）血中抗機能的ｐ５３抗体発現レベル
    から選択される一以上の発現レベルを比較することを特徴とする、ＳＡＣ機能異常を呈し且つ機能的ｐ５３を発現する癌におけるＣＥＮＰ－Ｅ阻害剤の有効量を判定する方法。
  8. 　哺乳動物に対し、ＣＥＮＰ－Ｅ阻害剤の有効量を投与することを特徴とする、該哺乳動物におけるＳＡＣ機能異常を呈し且つ機能的ｐ５３を発現する癌の治療方法。
  9. 　ＳＡＣ機能異常を呈し且つ機能的ｐ５３を発現する癌の予防または治療のためのＣＥＮＰ－Ｅ阻害剤。
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