WO2011126409A1 - Ингибиторы теломеразы и способ их получения - Google Patents
Ингибиторы теломеразы и способ их получения Download PDFInfo
- Publication number
- WO2011126409A1 WO2011126409A1 PCT/RU2011/000223 RU2011000223W WO2011126409A1 WO 2011126409 A1 WO2011126409 A1 WO 2011126409A1 RU 2011000223 W RU2011000223 W RU 2011000223W WO 2011126409 A1 WO2011126409 A1 WO 2011126409A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- substituents
- group
- substituent
- imidazol
- telomerase
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 11
- 239000003277 telomerase inhibitor Substances 0.000 title description 8
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- JLXZMLLNPNOODV-UHFFFAOYSA-N imidazol-4-one Chemical class O=C1C=NC=N1 JLXZMLLNPNOODV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- -1 3-chloro-4-fluorophenyl Chemical group 0.000 claims description 87
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 33
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 25
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 6
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- CUJPFPXNDSIBPG-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediyl Chemical group [CH2]C[CH2] CUJPFPXNDSIBPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OMIVCRYZSXDGAB-UHFFFAOYSA-N 1,4-butanediyl Chemical group [CH2]CC[CH2] OMIVCRYZSXDGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 claims description 3
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 3
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001805 chlorine compounds Chemical group 0.000 claims 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 abstract description 7
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 abstract description 6
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 19
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 18
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 17
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 16
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 15
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 11
- PAAZPARNPHGIKF-UHFFFAOYSA-N 1,2-dibromoethane Chemical compound BrCCBr PAAZPARNPHGIKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 108010057210 telomerase RNA Proteins 0.000 description 5
- 229940123582 Telomerase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- ULTHEAFYOOPTTB-UHFFFAOYSA-N 1,4-dibromobutane Chemical compound BrCCCCBr ULTHEAFYOOPTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SGRHVVLXEBNBDV-UHFFFAOYSA-N 1,6-dibromohexane Chemical compound BrCCCCCCBr SGRHVVLXEBNBDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical class O=C1CNC(=S)N1 UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N Morin Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000748 anthracen-2-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C3C([H])=C([*])C([H])=C([H])C3=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVZYXEALRXBLJZ-ISQYCPACSA-N f60ne4xb53 Chemical compound N1([C@@H]2O[C@@H]([C@H](C2)NP(O)(=S)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)NP(S)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)N)COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)N[C@H]2C[C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)OCC(O)CNC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)C=CC(N)=NC1=O LVZYXEALRXBLJZ-ISQYCPACSA-N 0.000 description 2
- 229950004291 imetelstat Drugs 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007708 morin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004033 porphyrin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- GUUBJKMBDULZTE-UHFFFAOYSA-M potassium;2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[K+].OCCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 GUUBJKMBDULZTE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- LLBZPESJRQGYMB-UHFFFAOYSA-N 4-one Natural products O1C(C(=O)CC)CC(C)C11C2(C)CCC(C3(C)C(C(C)(CO)C(OC4C(C(O)C(O)C(COC5C(C(O)C(O)CO5)OC5C(C(OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)O)C(O)C(CO)O5)OC5C(C(O)C(O)C(C)O5)O)O4)O)CC3)CC3)=C3C2(C)CC1 LLBZPESJRQGYMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108091081406 G-quadruplex Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N Nickel(2+) Chemical compound [Ni+2] VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTCRPVQWYABJEI-UHFFFAOYSA-N [Pt+] Chemical compound [Pt+] WTCRPVQWYABJEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000005770 chromosome separation Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- MMIPFLVOWGHZQD-UHFFFAOYSA-N manganese(3+) Chemical compound [Mn+3] MMIPFLVOWGHZQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/28—Compounds containing heavy metals
- A61K31/30—Copper compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F1/00—Compounds containing elements of Groups 1 or 11 of the Periodic Table
- C07F1/005—Compounds containing elements of Groups 1 or 11 of the Periodic Table without C-Metal linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F1/00—Compounds containing elements of Groups 1 or 11 of the Periodic Table
- C07F1/08—Copper compounds
Definitions
- the invention relates to the field of organic and medical chemistry, molecular biology, and relates to a method for producing a new class of compounds that inhibit telomerase, which can be used to study telomerases and catalytic subunits of telomerases, reverse transcriptases, for the study and treatment of tumor and viral diseases.
- Telomerase is an enzyme necessary to compensate for the shortening of the telomere length in eukaryotic cells. Telomeres consist of characteristic tandem repeats (eg, human TTAGGG) found at the ends of most eukaryotic chromosomes (Blackburn, "Structure and Function of Telomeres," Nature, 350: 569-573, 1991). The number of repetitions determines the length of the telomeres. The proliferative potential of cells is associated with the length of telomeres, since the stability and integrity of eukaryotic chromosomes depends on the dynamic structural organization of telomeres (Baird DM. "Mechanisms of telomeric instability", Cytogenet Genome Res.
- telomeres play an important role in controlling chromosome separation and are involved in the regulation of the cell cycle. With each cell division in a somatic cell, approximately 60-100 bases from the ends of the chromosomes are lost. The telomeres contract, the cell eventually reaches a crisis, and apoptosis is triggered in the cell. In the body there are cells with unlimited division potential. It is in them (in reproductive, stem cells, as well as in tumor cells) that there is a process for compensating for telomere shortening. The enzyme telomerase is responsible for this process.
- Telomerase is active in such cells and maintains telomere lengths above the crisis level. Telomerase is a specialized reverse transcriptase (for humans, hTERT) that works in combination with its own ribonucleic acid (RNA). This RNA is called telomerase (for humans, hTERC) and contains a site for the synthesis of telomeric DNA repeats (template site). In other words, in order to acquire the ability for unlimited division, the cell must activate a mechanism that maintains the telomere length above a critical level, namely telomerase.
- telomere activity is also present in stem bags of normal tissues, but at a lower level (Morin,” Is Telomerase a Universal Cancer Target? “, J. Natl (Cancer Inst., 87: 859-861, 1995).
- Mosin Is Telomerase a Universal Cancer Target? ", J. Natl (Cancer Inst., 87: 859-861, 1995).
- telomere Inhibition of telomerase has been proposed as a new approach to cancer therapy (Morin's first works, "Is Telomerase a Universal Cancer Target?”, J. Natl. Cancer Inst., 87: 859-861, 1995; Parkinson, "Do Telomerase Antagonis ts Represent a Novel Anti-Cancer Strategy? "Brit. J. Cancer 73: 1-4, 1996; Raymond et al.," Agents that target telomerase and telomeres, "Curr Opinion Biotech., 7: 583-591, 1996 , more current state in review by Shay JW, Wright WE. Telomerase therapeutics for cancer: challenges and new directions. Nat Rev Drug Discov. 5 (7): 577-84, 2006).
- telomere telomerase The tertiary structure of the protein of the catalytic subunit of human telomerase remains unresolved at the moment, but based on the analysis of the primary structure, this protein is shown to be similar to other reverse transcriptases (Lingner et al., "Reverse Transcriptase Motifs in the Catalytic Subunit of Telomerase," Sci., 276: 561-567, 1997), therefore, its activity is suppressed when using reverse transcriptase inhibitors, for example: AZT (Strahl and Blackburn, "Effects of Reverse Transcriptase Inhibitors on Telomere Length and Telomerase Activity in Two Immortalized Human Cell Lines," Mol. Cell .
- 2'-0- were used methyl RNA oligonucleotides.
- the most effective oligonucleotide was GRN163 (Asai et al. A novel telomerase template antagonist (GRN163) as a potential anticancer agent. Cancer Research, 63: 3931-3939, 2003).
- GRN163 inhibited telomerase activity at very low concentrations compared to other oligonucleotides
- GRN163L is the first telomerase inhibitor to enter clinical practice. Preclinical studies have shown the safety and effectiveness of such inhibition. Safety and dose determination for patients immune to other therapy are under study. These studies are not complete (USA, ClinicalTrials.gov, NCT00310895), but efficacy has already been shown. GRN163L is unequivocal evidence that telomerase inhibition is the basis of anti-cancer therapy.
- Inhibitors of oligonucleotide nature of telomerase activity are also known from WO99 / 01560 dated 01/14/1999 (RU2000102361, priority date 01/07/1998).
- coordination compounds of iron (III), zinc (II), nickel (II), manganese (III) and platinum (I) are known (Monchaud et al., "A hitchhiker's guide to G-quadruplex ligands", Org. Biomol. Chem., 6, 627, 2008). Most coordination compounds contain porphyrin derivatives or fused pyridine systems. Inhibition of telomerase is observed at IC 5 o-TRAP values (IC50 is the inhibitor concentration at which enzyme activity is suppressed by 50%) from 0.12 to 30 ⁇ M.
- the closest analogue of the invention is a telomerase inhibitor, which is a coordination compound of copper (II) containing a ligand based on a porphyrin derivative [S. E. Evans, M. A. Mendez, C. B. Turner, L. R. Keating, R. T. Grimes, S. Melchoir and V. A. Szalai, J. Biol. Inorg. Chem., 2007, 12 (8), 1235-1249].
- This compound selectively interacts with the quadruplex of DNA; the ICso-TRAP value in telomerase inhibition experiments is 26 ⁇ M.
- the disadvantages of this telomerase inhibitor include the complexity of the synthesis of the organic ligand and coordination compound, as well as the low value of IC50.
- telomerase inhibitors can be overcome by using coordination compounds of imidazol-4-one derivatives, described in more detail below with reference to the accompanying illustrative materials. Description of illustrative materials
- FIG. 1 Structural formulas of the substituents A in the claimed derivatives of imidazol-4-one.
- FIG. 2 Structural formulas of substituents B in the claimed imidazol-4-one derivatives.
- FIG. 3 Structural formulas of substituents C in the claimed derivatives of imidazol-4-one.
- FIG. 4 The method of amplification of telomeric repeats (TRAP analysis).
- FIG. 5 Testing of telomerase activity for various concentrations of the complex (5Z, 5 ⁇ ) - 2,2 '- (ethane-1,2-diyldisulfanyldiyl) bis (5- (2-pyridylmethylene) -3-allyl-3,5-dihydro 4H-imidazol-4-one) with copper chloride.
- telomerase inhibitors As telomerase inhibitors according to the invention, coordination compounds of imidazol-4-one derivatives of the general formula can be used
- substituent A is selected from the group consisting of aryl substituents, fused aryl substituents, cyclopentyl, cyclohexyl, aliphatic substituents, double bond aliphatic substituents, triple bond aliphatic substituents, methyl amine substituent CH 3 NH-, carbethoxy group C 2 HsO (0) C-, five-membered heterocyclic substituents with one nitrogen atom, five-membered heterocyclic substituents with two nitrogen atoms, six-membered heterocyclic substituents, substituent B is absent or is aliphatic substituent C is a heteroaryl substituent attached to the imidazol-4-one derivative via a carbon atom and is selected from the group consisting of 5-membered unsaturated monocyclic heteroaryl substituents with 1, 2, 3 heteroatoms in the ring selected from the group including N, O and S, 6-membered unsaturated monocyclic heteroaryl substituents with 1, 2, 3 heteroatoms in
- substituent A is an unsubstituted or monosubstituted or disubstituted aryl substituent, wherein the substituents R in the aryl group are selected from the group consisting of halogens and alkyl substituents.
- substituent A is an unsubstituted or monosubstituted or disubstituted fused aryl substituent, wherein the R substituents in the fused aryl group are selected from the group consisting of halogens and alkyl substituents.
- Deputy A is selected from the group consisting of phenyl C 6 Hs-, 3-chloro-4-fluorophenyl 3-Cl-4-FC 6 H3-, 4-carbethoxyphenyl
- Deputy B is selected from the group consisting of 1,2-ethanediyl - (CH 2 ) 2 -, 1,3-propanediyl - (CH 2 ) 3 -, 1, 4-butanediyl - (CH 2 ) 4-, 1, 6-hexanediyl - (CH 2 ) b-, 1, 10-decanediyl - (CH 2 ) y- (Fig. 2).
- Deputy C is selected from the group consisting of 2-quinolyl, 2-pyridyl, 1-methyl-2-imidazolyl, 4-methyl-5-imidazolyl,
- a solution of an imidazol-4-one derivative in dichloromethane is mixed with methonol, a solution of a copper salt in methanol or acetonitrile is slowly added to the mixture, and the reaction mixture is allowed to stand until a precipitate of the coordination compound imidazol-4-one derivative.
- copper salt copper chloride and copper nitrate can be used.
- Compounds of the general formula can be used as imidazol-4-one derivatives.
- Deputy A is selected from the group consisting of aryl substituents, fused aryl substituents, cyclopentyl, cyclohexyl, aliphatic substituents, double bond aliphatic substituents, triple bond aliphatic substituents, methylamine substituent CH 3 NH-, carbethoxy group C 2 H 5 0 ( 0) C-, five-membered heterocyclic substituents with one nitrogen atom, five-membered heterocyclic substituents with two nitrogen atoms, six-membered heterocyclic substituents, substituent B is absent or is aliphatic m substituent, substituent C is a heteroaryl substituent attached to the imidazol-4-one derivative via a carbon atom and is selected from the group consisting of 5-membered unsaturated monocyclic heteroaryl substituents with 1, 2, 3 heteroatoms in the ring selected from the group consisting of N , O and S, 6-membered unsaturated monocyclic heteroaryl substitu
- substituent A is an unsubstituted or monosubstituted or disubstituted aryl substituent, wherein the substituents R in the aryl group are selected from the group consisting of halogens and alkyl substituents.
- substituent A is an unsubstituted or monosubstituted or disubstituted fused aryl substituent, wherein the R substituents in the fused aryl group are selected from the group consisting of halogens and alkyl substituents.
- Deputy B is selected from the group consisting of 1,2-ethanediyl - (CH 2 ) 2 -, 1,3-propanediyl - (CH 2 ) 3 -, 1, 4-butanediyl - (CH 2 ) 4-, 1, 6-hexanediyl - (CH 2 ) 6 -, 1, 10-decanediyl - (CH 2 ) y- (Fig. 2).
- Deputy C is selected from the group consisting of 2-quinolyl, 2-pyridyl, 1-methyl-2-imidazolyl, 4-methyl-5-imidazolyl, 5-imidazolyl, 2-imidazolyl, 1,5-dimethyl-Z -pyrazolinyl, 1, 5-diphenyl-3-pyrazolinyl (Fig. 3).
- the claimed imidazol-4-one derivatives can be obtained by alkylation of the 3-position substituted 2-thiohydantoins with ⁇ , ⁇ -dibromoalkanes.
- ⁇ , ⁇ -dibromoalkane (1 equivalent) is added to a mixture of 2-thiohydantoin derivatives (2 equivalents) and dry K 2 C0 3 (3 equivalents) in dimethylformamide at a temperature of 0 ° C with stirring.
- the reaction mixture is stirred for two hours at a temperature of 0 ° C, and then 2 hours at room temperature. After that, 50 ml of water was added to the mixture.
- the precipitate formed is filtered off and washed with water and then with diethyl ether.
- TRAP analysis is a standard method for determining telomerase activity, which, thanks to some modifications, has gained the potential of a semi-quantitative method.
- the choice of method for detecting telomerase activity was determined by its wide illumination in world literature, almost sensitivity, as well as the availability of equipment and reagents.
- telomere extension protocol The amplification protocol of telomeric repeats can be divided into 3 main steps: primer extension, amplification of the resulting product (s) and detection.
- telomeric repeats are added by the telomerase present in the cell extract to the oligonucleotide that it recognizes as a substrate (TS).
- TS substrate
- telomerase amplification of TS oligonucleotide extension products by telomerase
- false signals can appear from telomeres of chromosomes contained in the cell extract.
- the 5 'end of the TS oligonucleotide has a non-telomeric sequence that prevents it from binding to telomeres, but is recognized by telomerase as a substrate.
- telomere lengthening the oligonucleotide TS with telomerase results in a set of DNA fragments that vary in length. This is followed by the step of increasing the amount of the product using specific primers by PCR with nucleotides containing a radioactive or fluorescent label for detection. Next, detection is carried out (Fig. 4), as a rule, using electrophoretic separation and subsequent scanning.
- the amount of the PCR product weakly depends on how much the initial matrix was in the reaction; therefore, it is impossible to estimate the amount of telomerase product by the intensity of its signal in the photograph.
- telomerase products When a set of telomerase products is introduced into PCR, they are all amplified. Therefore, we can use the number of repeats added by telomerase as a criterion of its activity.
- the first step was the cultivation of human cancer cell lines to isolate the active extracts needed for verification.
- transferable human cervical carcinoma cells of the SiHa, SZZA, CaSki and HeLa lines were grown on standard DMEM medium containing 10% fetal serum (FCS), 4 mM L-glutamine, 1 mM sodium pyruvate, streptomycin / penicillin at a concentration of 100 ⁇ g / ml and 100 units / ml, respectively, at a temperature of 37 ° C in an atmosphere of 5% C0 2 .
- FCS fetal serum
- 4 mM L-glutamine 4 mM L-glutamine
- 1 mM sodium pyruvate 1 mM sodium pyruvate
- streptomycin / penicillin at a concentration of 100 ⁇ g / ml and 100 units / ml, respectively, at a temperature of 37 ° C in an atmosphere of 5% C0 2 .
- the cell monolayer was washed with PBS (10 mM Na 2 HP0 4 , 2 mM KH 2 P0 4 , 137 mM NaCl, 2 mM KO), a standard solution of trypsin: EOTA (Sigma) was added and placed in a C0 2 incubator on 3- 5 minutes, FCS medium was added and suspended by pipetting, the cells were dispersed into the required number of culture vials. After the formation of a monolayer, line cells were washed from the substrate with trypsin solution and precipitated by centrifugation (10 min, 2000g). Washed twice with PBS buffer.
- telomerase activity was carried out using the TRAP test.
- a mixture of N1 was prepared: 49 ⁇ l of a TRAP mixture containing 1x TRAP buffer (1x TRAP buffer: 20 mM HEPES-KOH pH 8.3, 1.5 mM MgCl 2 , 63 mM KC1, 1 mM EGTA, 0, 1 mg / ml BSA, 0.005% v / v Tween-20), 20 ⁇ M dNTP, 1.6 ⁇ M TS oligonucleotide, 1 ⁇ l of a solution of the test drug in DMSO and cell line or tissue cell extract.
- the reaction mixture was incubated for 30 minutes at 30 ° C.
- 2 units were added to the mixture.
- Taq DNA polymerase Helikon
- 0.1 ⁇ g ACX oligonucleotide and PCR was performed as follows: 35 s 94 ° C, 35 s 50 ° C 90 s 72 ° C (30 cycles, Mastercycler amplifier (Eppendorf ' , Germany)).
- RNA-dependent DNA polymerase reverse transcriptase
- DNA polymerase reverse transcriptase
- 1C 50 the concentration of the substance at which telomerase activity is inhibited by 50%
- a separate re-measurement of the inhibition of substances was carried out using additional dilutions.
- An example of such an analysis for the drug with the highest inhibitory activity is shown in FIG. 5.
- the experimental image was analyzed using the Image Qvant program, comparing the intensity of the bands corresponding to the same elongation of a telomere-like TS substrate by telomerase, in tracks T and P for each concentration of the preparation.
- this value corresponds to the inhibitory effect of 15% for a saturated solution (1C 50 is immeasurable due to the low solubility of the starting preparations).
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области органической и медицинской химии, молекулярной биологии и касается способа получения нового класса соединений, ингибирующих теломеразу, которые могут быть использованы для изучения теломераз и каталитических субъединиц теломераз, обратных транскриптаз, для изучения и лечения опухолевых и вирусных заболеваний. Координационные соединения производных имидазол-4-она, ингибирующие теломеразу, характеризуются общей формулой (I).
Description
ИНГИБИТОРЫ ТЕЛОМЕРАЗЫ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
Область техники
Изобретение относится к области органической и медицинской химии, молекулярной биологии и касается способа получения нового класса соединений, ингибирующих теломеразу, которые могут быть использованы для изучения теломераз и каталитических субъединиц теломераз, обратных транскриптаз, для изучения и лечения опухолевых и вирусных заболеваний.
Уровень техники
Теломераза - это фермент, необходимый для компенсации укорочения длины теломер в клетках эукариот. Теломеры состоят из характерных тандемных повторов (например TTAGGG у человека), найденных на концах большинства эукариотических хромосом (Blackburn, "Structure and Function of Telomeres, "Nature, 350:569-573, 1991). Количество повторов определяет длину теломер. Пролиферативный потенциал клетки связывают с длиной теломер, так как стабильность и целостность эукариотических хромосом зависят от динамической структурной организации теломер (Baird DM. "Mechanisms of telomeric instability", Cytogenet Genome Res. 2008; 122(3-4):308-14, 2009), при их укорочении меньше критической длины стабильность нарушается, затем клетка гибнет. Теломеры играют важную роль в контроле разделения хромосом и вовлечены в регулирование клеточного цикла. С каждым клеточным делением у соматической клетки теряются приблизительно 60-100 оснований с концов хромосом. Теломеры сокращаются, клетка, в конечном счете, достигает кризиса, и в клетке запускается апоптоз. В организме существуют клетки с неограниченным потенциалом деления. Именно в них (в половых, стволовых клетках, а так же в клетках опухоли), существует процесс компенсации укорочения теломер. За этот процесс отвечает фермент- теломераза. Теломераза активна в таких клетках и поддерживает длину теломер выше кризисного уровня. Теломераза - это специализированная обратная транскриптаза (для человека hTERT), работающая в комплексе с собственной рибонуклеиновой кислотой (РНК). Эта РНК называется теломеразной (для человека hTERC) и содержит участок для синтеза теломерных повторов ДНК (матричный участок). Другими словами, для приобретения способности к неограниченному делению клетка должна активировать механизм, поддерживающий длину теломер выше критического уровня, а именно теломеразу. Так, существенный уровень теломеразной активности был обнаружен в более чем 85% опухолей (Kim et al., "Specific Association of Human Telomerase Activity
with Immortal Cells and Cancer," Science, 266:201 1-2015, 1994). Теломеразная активность также присутствует в стволовых сумках нормальных тканей, но на более низком уровне (Morin, "Is Telomerase a Universal Cancer Target?", J. Natl. Cancer Inst., 87:859-861, 1995). Таким образом, присутствие активной теломеразы в опухоли обеспечивает наличие мишени, дающей потенциально хорошую селективность к опухолевым клеткам по отношению к здоровой ткани. Ингибирование теломеразы было предложено в качестве нового подхода к терапии рака (первые работы Morin, "Is Telomerase a Universal Cancer Target?", J. Natl. Cancer Inst., 87:859-861, 1995; Parkinson, "Do Telomerase Antagonists Represent a Novel Anti-Cancer Strategy?" Brit. J. Cancer, 73: 1-4, 1996; Raymond et al., "Agents that target telomerase and telomeres," Curr Opinion Biotech.,7:583-591, 1996, более современное состояние в обзоре Shay JW, Wright WE. Telomerase therapeutics for cancer: challenges and new directions. Nat Rev Drug Discov. 5(7):577-84, 2006).
Третичная структура белка каталитической субъединицы теломеразы человека остается на настоящий момент неразрешенной, но на основе анализа первичной структуры показано, что этот белок сходен с другими обратными транскриптазами (Lingner et al., "Reverse Transcriptase Motifs in the Catalytic Subunit of Telomerase," Sci., 276:561-567, 1997), поэтому ее активность подавляется при использовании ингибиторов обратных транскриптаз, например: AZT (Strahl and Blackburn, "Effects of Reverse Transcriptase Inhibitors on Telomere Length and Telomerase Activity in Two Immortalized Human Cell Lines,"Mol. Cell. Biol.,16;53-65, 1996) и других нуклеозидов (Fletcher et al., "Human Telomerase Inhibition by 7-Deaza 2'-deoxypurine Nucleoside Triphosphates," Biochem, 35:1561 1-15617, 1996). Также была показана возможность ингибирования любой теломеразной активности при использования антисмысловой последовательности к матричному участку теломеразной РНК, например нуклеиновых кислот, слитых с пептидом (Norton et al., "Inhibition of Human Telomerase Activity by Peptide Nucleic Acids," Nature Biotechnol., 14:615-619, 1996) и фосфотиоатных олигонуклеотидов (Mata et al., "A Hexameric Phosphorothioate Oligonucleotide Telomerase Inhibitor Arrests Growth of Burkitt's Lymphoma Cells in Vitro and in Vivo, "Toxicol Appl. Pharmacol., 144: 189-197, 1997). Антисмысловый дезоксирибонуклеотид, содержащий 185 нуклеотидов hTERC, был в состоянии сократить теломеры в клетках HeLa за 23-26 клеточных делений до критического уровня и вызвал апоптоз. Другой дезоксирибонуклеотид, содержащий 2'-5'-аденилат (2-5А) с тем, чтобы не только связать, но и расщепить hTERC, вызвал апоптоз в глиоме, раке простаты, раке шейки матки, мочевого пузыря и яичников в течение 4-5 дней. Чтобы увеличить сродство к hTERC-последовательности и стабильность олигонуклеотида были использованы 2'-0-
метил-РНК-олигонуклеотиды. Самым эффективным оказался олигонуклеотид GRN163 (Asai et al. A novel telomerase template antagonist (GRN163) as a potential anticancer agent. Cancer Research, 63:3931-3939, 2003). Клетки, культивируемые с этим соединением, гибли в течение 100 дней, GRN163 ингибировал теломеразную активность при очень низких, по сравнению с другими олигонуклеотидами, концентрациях, GRN163L является первым ингибитором теломеразы, который вошел в клиническую практику. Доклинические исследования показали безопасность и эффективность такого ингибирования. Безопасность и определение дозы для пациентов, невосприимчивых к другой терапии, находятся в стадии изучения. Эти исследования не закончены (США, ClinicalTrials.gov, NCT00310895), однако уже показанная эффективность. GRN163L - однозначное подтверждение того, что ингибирование теломеразы - это основа антираковой терапии.
Из WO99/01560 от 14.01.1999 (RU2000102361, дата приоритета 01.07.1998) также известны ингибиторы теломеразной активности олигонуклеотидной природы.
Известны примеры использования координационных соединений железа (III), цинка (II), никеля (II), марганца (III) и платины (И) (Monchaud et al., "A hitchhiker's guide to G-quadruplex ligands", Org. Biomol. Chem., 6, 627, 2008). Большинство координационных соединений содержит производные порфирина или конденсированные пиридиновые системы. Ингибирование теломеразы наблюдается при значениях IC5o-TRAP (IC50 - концентрация ингибитора, при которой активность фермента подавляется на 50%) от 0,12 до 30 мкМ.
Наиболее близким аналогом изобретения является ингибитор теломеразы, который представляет собой координационное соединение меди (II), содержащее лиганд на основе производного порфирина [S. Е. Evans, М. A. Mendez, К. В. Turner, L. R. Keating, R. Т. Grimes, S. Melchoir and V. A. Szalai, J. Biol. Inorg. Chem., 2007, 12(8), 1235-1249]. Это соединение селективно взаимодействует с квадруплексом ДНК, значение ICso-TRAP в экспериментах по ингибированию теломеразы составляет 26 мкМ. К недостаткам этого ингибитора теломеразы следует отнести сложность синтеза органического лиганда и координационного соединения, а также низкое значение IC50.
Указанные недостатки известных ингибиторов теломеразы могут быть преодолены при использовании координационных соединений производных имидазол- 4-она, более подробно описанных далее со ссылками на прилагаемые иллюстративные материалы.
Описание иллюстративных материалов
Фиг. 1. Структурные формулы заместителей А в заявленных производных имидазол-4-она.
Фиг. 2. Структурные формулы заместителей В в заявленных производных имидазол-4-она.
Фиг. 3. Структурные формулы заместителей С в заявленных производных имидазол-4-она.
Фиг. 4. Метод амплификации теломерных повторов (TRAP-анализ).
Фиг. 5. Тестирование теломеразной активности для различных концентраций комплекса (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3- аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с хлоридом меди.
Раскрытие изобретения
В качестве ингибиторов теломеразы согласно изобретению могут быть использованы координационные соединения производных имидазол-4-она общей формулы
где заместитель А выбран из группы, включающей арильные заместители, конденсированные арильные заместители, циклопентил, циклогексил, алифатические заместители, алифатические заместители с двойной связью, алифатические заместители с тройной связью, метиламиновый заместитель CH3NH-, карбэтокси-группу C2HsO(0)C-, пятичленные гетероциклические заместители с одним атомом азота, пятичленные гетероциклические заместители с двумя атомами азота, шестичленные гетероциклические заместители, заместитель В отсутствует или является алифатическим заместителем, заместитель С представляет собой гетероарильный заместитель, присоединяемый к производному имидазол-4-она через атом углерода и выбран из группы, включающей 5-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы,
включающей N, О и S, 6-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 8-, 9- и 10-членные ненасыщенные бициклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, X представляет собой хлорид С1 или нитрат N03.
В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным арильным заместителем, при этом заместители R в арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным конденсированным арильным заместителем, при этом заместители R в конденсированной арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
В предпочтительном варианте выполнения заместитель А выбран из группы, включающей фенил C6Hs-, З-хлор-4-фторфенил 3-Cl-4-F-C6H3-, 4-карбэтоксифенил
4- С2Н50(0)СС6Н4-, метил СН3-, аллил СН2=СНСН2-, 2-антрил, пропил С3Н7- (фиг. 1).
В предпочтительном варианте выполнения заместитель В выбран из группы, включающей 1,2-этандиил -(СН2)2-, 1,3-пропандиил -(СН2)3-, 1 ,4-бутандиил -(СН2)4-, 1 ,6-гександиил -(СН2)б-, 1 , 10-декандиил -(СН2)ю- (фиг. 2).
В предпочтительном варианте выполнения заместитель С выбран из группы, включающей 2-хинолил, 2-пиридил, 1-метил-2-имидазолил, 4-метил-5-имидазолил,
5- имидазолил, 2-имидазолил, 1,5-диметил-З-пиразолинил, 1,5-дифенил-З-пиразолинил (фиг. 3).
В способе получения координационных соединений производных имидазол-4-она согласно изобретению осуществляют следующие стадии: смешивают раствор производного имидазол-4-она в дихлорметане с метонолом, медленно приливают к смеси раствор соли меди в метаноле или ацетонитриле, реакционную смесь выдерживают до выпадения осадка координационного соединения производного имидазол-4-она.
В качестве соли меди могут быть использованы хлорид меди и нитрат меди. В качестве производных имидазол-4-она могут быть использованы соединения общей формулы
где заместитель А выбран из группы, включающей арильные заместители, конденсированные арильные заместители, циклопентил, циклогексил, алифатические заместители, алифатические заместители с двойной связью, алифатические заместители с тройной связью, метиламиновый заместитель CH3NH-, карбэтокси-группу С2Н50(0)С-, пятичленные гетероциклические заместители с одним атомом азота, пятичленные гетероциклические заместители с двумя атомами азота, шестичленные гетероциклические заместители, заместитель В отсутствует или является алифатическим заместителем, заместитель С представляет собой гетероарильный заместитель, присоединяемый к производному имидазол-4-она через атом углерода и выбран из группы, включающей 5-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 6-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 8-, 9- и 10-членные ненасыщенные бициклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S.
В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным арильным заместителем, при этом заместители R в арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
В предпочтительном варианте выполнения изобретения заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным конденсированным арильным заместителем, при этом заместители R в конденсированной арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
В предпочтительном варианте выполнения заместитель А выбран из группы, включающей фенил СбН5-, З-хлор-4-фторфенил 3-С1-4-Р-СбН3-, 4-карбэтоксифенил 4-С2Н50(0)СС6Н4-, метил СН3-, аллил СН2=СНСН2-, 2-антрил, пропил С3Н7- (фиг. 1).
В предпочтительном варианте выполнения заместитель В выбран из группы, включающей 1,2-этандиил -(СН2)2-, 1,3-пропандиил -(СН2)3-, 1 ,4-бутандиил -(СН2)4-, 1 ,6-гександиил -(СН2)6-, 1 , 10-декандиил -(СН2)ю- (фиг. 2).
В предпочтительном варианте выполнения заместитель С выбран из группы, включающей 2-хинолил, 2-пиридил, 1 -метил-2-имидазолил, 4-метил-5-имидазолил, 5-имидазолил, 2-имидазолил, 1,5-диметил-З-пиразолинил, 1 ,5-дифенил-З-пиразолинил (фиг. 3).
Заявленные производные имидазол-4-она могут быть получены алкилированием замещенных в 3-положении 2-тиогидантоинов α,ω-дибромалканами. Для этого к смеси производных 2-тиогидантоинов (2 эквивалента) и сухого К2С03 (3 эквивалента) в диметилформамиде при температуре 0°С при перемешивании добавляют α,ω-дибромалкан (1 эквивалент). Реакционную смесь перемешивают в течение двух часов при температуре 0°С, а затем 2 часа при комнатной температуре. После этого к смеси добавляют 50 мл воды. Образовавшийся осадок отфильтровывают и промывают водой, а затем диэтиловым эфиром.
Изобретение иллюстрируется примерами альтернативных вариантов его выполнения.
Пример 1. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,0025 моль) 2-тиоксо-3-метил-5(( )-2-пиридилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,21 г (0,0013 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,40 г (76%) (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1 ,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-метил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). Тпл=215°С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,82(д, 1Н, Н„-Ру, .1=7,9Гц), 8,59(д, Ш, Нр-Ру, 1=4,0Гц), 7,71(тд, 1Н, Нр-Ру, 1,=7,ЗГц, ^=2,ЗГц), 7,23(с, 1Н, СН=), 7,13(дд, 1Н, H Py,
3,08(с, ЗН, N-CH3).
ИК-спектр (см 1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C22H2oN602S2 вычислено С 56,88% Н 4,34% N 18,09%; найдено С 56,74% Н 4,27% N 17,82%.
Пример 2. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-пропил-5((г)-2-пиридилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,19 г (0,001 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,43 г (82%) (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-пропил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она).
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,69(д, J=8,0 Гц, 1Н, На-Ру,), 8,65 (д, J=4,7 Гц, Ш, Нр-Ру,), 7,63 (тд, 1,=7,4Гц, т2=2,0Гц, 1Н, Нр-Ру,), 7,19 (да, -Γι=7,5Γα,
12=0,9Гц, 1H, HY-Py,), 7,12 (c, 1H, CH=), 7,12 (c, 1H, CH=), 3,93 (c, 2H, S-CH2), 3,60 (τ, J=7,5 Гц, 2H, CH2N), 1,72 (м, 2H, CH2), 0,96 (т, J=7,5, 3H, CH3).
ИК-спектр (CM-1): 1705(C=O), 1675(C=N), 1640(C=C).
Элементный анализ: C26H2gN602S2 вычислено С 59,98% H 5,42% N 16,14%; найдено С 59,34% Н 5,17% N 15,88%.
Пример 3. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-пропил-5((2)-2-пиридилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,19 г (0,001 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,46 г (92%) (5Z, 5' )-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она).
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,65(м, 2Н, На-Ру + Нр-Ру,), 7,62 (т, 1=7,5Гц, 1Н, Нр-Ру,), 7,19 (м, Ш, Ну-Ру,), 7,14 (с, 1Н, СН=), 7,12 (с, 1Н, СН=), 5,82 (м, 1Н, СН=), 5,23 (м., 2Н, СН2=), 4,23 (м, 2Н, CH2N) 3,89 (с, 2Н, S-CH2).
ИК-спектр (см 1): 1720(С=О), 1680(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C26H26N602S2 вычислено С 60,44% Н 4,68% N 16,27%; найдено С 60,14% Н 4,48% N 16,03%.
Пример 4. Синтез (5Z, 5' )-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((г)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н- имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,23 г (73%) (5Z, 5'Z)- 2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро- 4Н-имидазол-4-она). Тпл=2590С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,75(д, 2Н, На-Ру, 1=7,9Гц), 8,66(д, 2Н, Нр-Ру, 1=4,0Гц), 7,81(тд, 2Н, Нр-Ру, 1,=7,ЗГц, 12=2,ЗГц), 7,42(м, 6Н, H-Ph), 7,29(м, 4Н, H-Ph), 7,1 1(тд, 2Н, Ну-Ру, 1,=7,5Гц, 12=1,0Гц), 7,18(с, 2Н, СН=), 3,1 1(т, 4Н, S-CH2-, 1=7,5Гц).
ИК-спектр (см"1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C32H24N6S202 вычислено С% 65,31, Н% 4,08, N% 14,29; найдено С% 65,28, Н% 4,10, N% 14,11.
Пример 5. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-(1-нафтил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-(1-нафтил)-5((2)-2-пиридилметилен)- тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,19 г
(68%) (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(1- нафтил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). ТПЛ =2670С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 9,12 (д, J=8,8 Гц, 1Н, HetAr), 8,30 (д, J=8,7 Гц, 1Н, HetAr), 8,20 (д, J=8,3 Гц, 1Н, HetAr), 8,15 (д, J=8,3 Гц, 1Н, Аг), 7,95 (м, 1Н, Аг), 7,78 (д, J=8,l Гц, Ш, HetAr), 7,69 (т, J=7,l Гц, Ш, HetAr), 7,61 (м, 1Н, Аг), 7,53(м, 6Н, HetAr + СН= + Аг), 6,91 (с, 2Н, СН=), 3,76 (с, 4Н, CH2-S).
ИК-спектр (см 1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Пример 6. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-(2-антрил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,4 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-(2-антрил)-5((г)-2-пиридилметилен)- тетрагидро-4Н-имидазол-4-она и 0,1 г (0,0005 моль) 1,2-дибромэтана получено 0,21 г (81%) (5Z, 5 'г)-2,2'-(этан- 1 ,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-(2- антрил)-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она). Тпл=249°С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,73 (д, J=7,9 Гц, 2Н, Аг), 8,69 (д, J=5,l Гц, Ш, На-Ру), 8,45 (м, 4Н, Аг), 8,13 (д, J=8,8 Гц, 2Н, Нр-Ру), 8,01 (м, ЗН, Аг), 7,76 (т, J=7,6 Гц, 1Н, Нр -Ру), 7,51 (м, 4Н, Аг), 7,47 (дд, Л=6,8 Гц, J2=l,4 Гц, 2Н, HY-Py)), 7,25 (м, 2Н, Аг), 6,94 (с, 2Н, СН=), 3,83 (с, 4Н, CH2-S).
ИК-спектр (см 1): 1730(С=О), 1680(C=N), 1620(С=С).
Элементный анализ: C48H32N602S2 вычислено С 73,08% Н 4,09% N 10,65%; найдено С 73,35% Н 4,82% N 10,13%.
Пример 7. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((г)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н- имидазол-4-она и 0,22 г (0,001 моль) 1 ,4-дибромбутана получено 0,40 г (76%) (5Z, 5'Z)- 2,2'-(бутан-1 ,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро- 4Н-имидазол-4-она). ТПЛ=1980С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,72(д, 8,1Гц, 2Н, На-Ру), 8,65(д, 1=3,8Гц, 2Н, Нр-Ру), 7,63(тд, Л=8,ЗГц, 12=4,6Гц, 2Н, Н Ру), 7,05(дд, Л=4,7 Гц, J2=l,2 Гц, 2Н, Нр-Ру,), 7,12(с, 2Н, СН=), 5,80 (м, 2Н, =СН-) 5,25 (м, 4Н, СН2=), 4,22 (д, J=7,l Гц, 4Н, -CH2-N), 3,45(т, J=6,7 Гц, 4Н, -CH2-S), 2,07 (м, 4Н, -СН2-).
ИК-спектр (см-1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C28H28N602S2 вычислено С 61,74% Н 5,18% N 15,43%; найдено С 61 ,74% Н 5,18% N 15,43%.
Пример 8. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она
Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((2)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н- имидазол-4-она и 0,12 г (0,0005 моль) 1 ,4-дибромбутана получено 0,18 г (78%) (5Z, 5'2)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). ТПЛ=2490С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,75(д, J=7,9 Гц, 2Н, Н„-Ру), 8,66(д, J=4,0 Гц, 1Н, Нр-Ру), 7,81(тд, J,=7,3 Гц, J2=2,3 Гц, 2Н, Нр-Ру), 7,42(м, 6Н, H-Ph), 7,29(м, 4Н, H-Ph), 7,1 1(тд, J,=7,5 Гц, J2=1 ,0 Гц, 2Н, HrPy), 7,18(с, 2Н, СН=), 3,1 1(т, J=7,5 Гц, 4Н, S-CH2-,) 1,86(кв, 1=7,6Гц, 4Н, -СН2-).
ИК-спектр (см 1): 1720(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C34H28N602S2 вычислено С 66,21% Н 4,58% N 13,63%; найдено С 66,12% Н 4,76% N 13,20%.
Пример 9. Синтез (5Z, 5^)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,002 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5((г)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н- имидазол-4-она и 0,22 г (0,001 моль) 1 ,6-дибромгексана получено 0,40 г (81%) (5Z, 5^)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). Тпл=171 °С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, 5, м.д.): 8,75 (д, 1=8,2Гц, 2Н, Н„-Ру), 8,67(д, J=4,ir , 2Н, Нр-Ру), 7,68(т, J=7,8 Гц, 21Н, НгРу), 7,16(м, 2Н, Нр-Ру), 7,13(с, 2Н, СН=), 5,83(м, 2Н, -СН=), 5,25(м, 4Н, СН2=), 4,15(д, J=5,9, 4Н, -CH2-N), 3,38 (т, J=7,0 Гц, 4Н, CH2-S), 1,91 (м, 4Н, -СН2-), 1,60 (м, 4Н, -СН2-).
ИК-спектр (см 1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C3oH32N602S2 вычислено С 62,91% Н 5,63% N 14,67%; найдено С 62,91% Н 5,63% N 14,67%.
Пример 10. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,3 г (0,001 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((г)-2-пиридилметилен)-тетрагидро-4Н- имидазол-4-она и 0,13 г (0,0005 моль) 1 ,6-дибромгексана получают 0,19г (64%) (5Z, 5'г)-2,2'-(гексан-1,6-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-фенил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). TM=240°C.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,77(д, 1=7,9Гц, 2Н, На-Ру,), 8,66(д, 1=3,9Гц ,1Н, Нр-Ру), 7,75(тд, .ч=7,ЗГц, 12=2,ЗГц, 2Н, Нр-Ру), 7,45(м, 6Н, H-Ph), 7,30(м,
4H, H-Ph), 7,17(c, 2H, CH=), 7,13(дц, 1,=7,5Гц, 12=0,9Гц, 2H, НгРу), 3,32(τ-, 7,5Гц, 4Η, S-CH2), 1,86(м, 4Н, -СН2-), 1,54(м, 4Н, -СН2-).
ИК-спектр (см 1): 1700(С=О), 1670(C=N), 1630(С=С).
Элементный анализ: C36H32N6S202 вычислено С% 67,06, Н% 5,00, N% 13,03; найдено С% 66,71, Н% 5,04, N% 12,65.
Пример 11. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- хинолилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-пропил-5(^)-2-хинолилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,15 г (0,0008 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,75 г (81%) (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-пропил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). Тпл= 140°С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,82 (д, J=9,l Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (м, 4Н, HetAr), 7,72 (м, 4Н, HetAr), 7,53 (м, 2Н, HetAr), 7,29 (с, 2Н, СН=), 4,00(с, 4Н, -СН2- S), 3,64(т, J=7,4 Гц, 4Н, CH2-N), 1,75 (м, 4Н, СН2), 1,01 (т, J=7,3, СН3-).
ИК-спектр (см 1): 1715(С=0), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C38H38N202S2 вычислено С 73,75% Н 6,19% N 4,53%; найдено С 73,13% Н 6,53% N 4,88%.
Пример 12. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- хинолилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-аллил-5(^)-2-хинолилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,15 г (0,0008 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,70 г (78%) (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-аллил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). Тпл=180°С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, δ, м.д.): 8,82 (д, J=9,0 Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (м, 4Н, HetAr), 7,73 (м, 4Н, HetAr), 7,57 (м, 2Н, HetAr), 7,32 (с, 2Н, СН=), 5,88 (м, 2Н, СН=), 5,30 (м, 4Н, СН2=), 4,30 (д, 1=5,6Гц, 4Н, -CH2-N), 3,97(с, 4Н, CH2-S).
ИК-спектр (см 1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C38H34N202S2 вычислено С 74,24% Н 5,57% N 4,56%; найдено С 74,42% Н 5,14% N 4,89%.
Пример 13. Синтез (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- хинолилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она)
Из 0,5 г (0,0015 моль) 2-тиоксо-3-фенил-5((г)-2-хинолилметилен)-тетрагидро- 4Н-имидазол-4-она и 0,14 г (0,0007 моль) 1 ,2-дибромэтана получено 0,41 г (81%) (5Z, 5^)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-хинолилметилен)-3-фенил-3,5- дигидро-4Н-имидазол-4-она). ТПл=2390С.
Спектр ЯМР Ή (400МГц, CDC13, 5, м.д.): 8,84 (д, J=8,6 Гц, 2Н, HetAr), 8,05 (д, J=8,8 Гц, 2Н, HetAr), 7,97 (д, J=8,3 Гц, 2Н, HetAr), 7,73 (м, 4Н, HetAr), 7,45 (м, 14Н, Аг + СН= + HetAr), 3,93 (с, 4Н, -CH2-S).
И -спектр (см 1): 1710(С=О), 1670(C=N), 1640(С=С).
Элементный анализ: C44H34N202S2 вычислено С 76,94% Н 4,99% N 4,08%; найдено С 76,67% Н 4,13% N 3,98%.
Пример 14. Получение координационных соединений производных имидазол-4-она
К раствору 0,0001 моль алкилированных производных 2-тиогидантоина (производных имидазол-4-она) в 2-3 мл хлористого метилена добавляют 2 мл метанола для достижения расслоения. Затем медленно, по каплям, в течение не менее чем 2 минут приливают раствор 0,0002 моль соли меди в 2-3 мл метанола. Реакционную смесь плотно закрывают и оставляют до выпадения осадка.
В случае получения комплекса (5Z, 5'Z)-2,2'-(3TaH-l,2- диилдисульфанилдиил)бис(5-(2-пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4- она) с нитратом меди в качестве растворителя соли используют ацетонитрил, при этом реакционную смесь закрывают от света и оставляют до выпадения осадка.
Получение комплекса (5Z, 5 '2)-2,2 '-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-метш-3,5-дигидро-4Н-1шидазол-4-она) с СиС1г2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5'2)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-метил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12-6Н20 получают 0,04 г (54%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C22H20N6O2S2*CuCl2*CuCl С 37,86% Н 2,89% N 12,04%; найдено С 37,04% Н 2,57% N 12,22%.
Получение комплекса (5Z, 5 '2)-2,2 '-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с СиС1 2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1 ,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-пропил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12-6Н20 получают 0,03 г (45%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C26H28N602S2 *CuCl2*CuCl вычислено С 41 ,41% Н 3,74% N 1 1,14%; найдено С 41,63% Н 3,87% N 1 1,86%.
Получение комплекса (5Z, 5 '2)-2,2 '-(этан-1,2-диилдисулъфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с СиС1 2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5'2)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12-6Н20 получают 0,03 г (40%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C26H24N602S2* CuCl2*CuCl вычислено С 41 ,63% Н 3,23% N 1 1,15%; найдено С 41,36% Н 3,23% N 1 1,85%.
Получение комплекса (5Z, 5 ' )-2,2 '-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с СиС1г2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5'г)-2,2'-(этан-1,2-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12-6Н20 получают 0,03 г (55%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C32H24N602S2*CuCl2*CuCl вычислено С 46,75% Н 2,94% N 10,22%; найдено С 46,67% Н 2,14% N 10,77%.
Получение комплекса (5Z, 5 ' )-2,2 '-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с СиС1г2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5^)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-аллил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12 6Н20 получают 0,04 г (59%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C28H28N602S2*CuCl2*CuCl вычислено С 43,22% Н 3,63% N 10,80%; найдено С 43,45% Н 3,33% N 10,30%.
Получение комплекса (5Z, 5 ' )-2,2 '-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметипен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) с СиС1 2Н20
Из 0,05 г (5Z, 5'г)-2,2'-(бутан-1,4-диилдисульфанилдиил)бис(5-(2- пиридилметилен)-3-фенил-3,5-дигидро-4Н-имидазол-4-она) и 0,03 г СиС12-6Н20 получают 0,03 г (49%) комплекса коричневого цвета.
Элементный анализ: C34H28N602S2*CuCl2*CuCl вычислено С 48,03% Н 3,32% N 9,88% найдено С 48,49% Н 2,60% N 9,10%.
Для тестирования ингибирования теломеразы, полученными соединениями был использован метод амплификации добавленных теломерных повторов (TRAP-анализ). TRAP-анализ является стандартным методом определения активности теломеразы, благодаря некоторым модификациям получивший возможности полуколичественного метода. Выбор метода детекции теломеразной активности определялся его широкой
освещенностью в мировой литературе, практически чувствительностью, а так же доступностью оборудования и реагентов.
Протокол амплификации теломерных повторов можно подразделить на 3 основных шага: удлинение праймера, амплификация получившегося продукта (продуктов) и детекция. На шаге удлинения теломерные повторы прибавляются присутствующей в клеточном экстракте теломеразой к олигонуклеотиду, узнаваемому ею как субстрат (TS). При амплификации продуктов удлинения олигонуклеотида TS теломеразой могут появляться ложные сигналы с теломер хромосом, содержащихся в клеточном экстракте. Чтобы избежать этого, 5 '-конец олигонуклеотида TS имеет нетеломерную последовательность, мешающую ему связываться с теломерами, однако узнается теломеразой как субстрат. Поскольку человеческая теломераза добавляет серию повторов по шесть нуклеотидов, то в результате удлинения олигонуклеотида TS теломеразой получается набор фрагментов ДНК, различающихся по длине. Затем следует шаг увеличения количества продукта с помощью специфических праимеров методом ПЦР с нуклеотидами, содержащими радиоактивную или флуоресцентную метку для детекции. Далее осуществляется детекция (фиг. 4), как правило, с помощью электрофоретического разделения и последующего сканирования.
Праймеры TS и АСХ (таблица 1) были использованы в TRAP-анализе, АСХ имеет на 5'-конце нетеломерный довесок из 6 нуклеотидов, за счет этого не образует димеров с теломеразным субстратом. При использовании этих праймеров количество встроенной метки пропорционально числу добавленных теломеразой повторов.
Таблица 1. Последовательности олигонуклеотидов, используемых при измерении теломеразной активности
Количество ПЦР-продукта слабо зависит от того, сколько в реакции было исходной матрицы, поэтому нельзя оценить количество теломеразного продукта по интенсивности его сигнала на фотографии. При введении в ПЦР набора теломеразных продуктов они все амплифицируются. Поэтому мы можем использовать количество добавленных теломеразой повторов как критерий ее активности.
Первым этапом было культивирование раковых клеточных линий человека для выделения активных экстрактов, необходимых для проверки. Для этого перевиваемые
клетки карциномы шейки матки человека линий SiHa, СЗЗА, CaSki и HeLa выращивали на стандартной среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной сыворотки (FCS), 4мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, стрептомицин/пенициллин в концентрации 100 мкг/мл и 100 ед/мл, соответственно, при температуре 37°С в атмосфере 5% С02. Для пересева клеток клеточный монослой промывали PBS (10 мМ Na2HP04, 2 мМ КН2Р04, 137 мМ NaCl, 2 мМ КО), добавляли стандартный раствор трипсин:ЕОТА (Sigma) и помещали в С02-инкубатор на 3-5 минут, добавляли среду с FCS и суспендировали пипетированием, клетки рассевали в необходимое количество культуральных флаконов. После образования монослоя клетки линий смывали с подложки раствором трипсина и осаждали центрифугированием (10 мин., 2000g). Дважды промывали буфером PBS. Ресуспендировали в лизирующем буфере (10 мМ Tris-HCl или 10 мМ HEPES-KOH, рН 7,5, 1 ,0 мМ MgCl2, 1 мМ EGTA, 5 мМ β-меркаптоэтанола, 5% глицерина, 0,5% CHAPS, 0,1 мМ PMSF), 1 мл на 0,3-10 млн. клеток, в зависимости от необходимой концентрации. Инкубировали 30 минут во льду. Центрифугировали 10 минут при 4°С на 15000 об/мин и отбирали надосадочный раствор. Экстракт делили на аликвоты по 10 мкл и замораживали в жидком азоте. После этого проводили анализ теломеразной активности методом TRAP-теста. На первом шаге готовили смесь N1 : 49 мкл смеси TRAP, содержащей 1х TRAP-буфер (1х TRAP-буфер: 20 мМ HEPES-KOH рН 8,3, 1 ,5 мМ MgCl2, 63 мМ КС1, 1мМ EGTA, 0, 1 мг/мл BSA, 0,005% v/v Tween-20), 20 мкМ dNTP, 1,6 мкМ олигонуклеотида TS, 1 мкл раствора тестируемого препарата в ДМСО и экстракт клеток клеточных линий или тканей. Реакционную смесь инкубировали 30 минут при 30°С. На втором шаге к смеси добавляли 2 ед. Taq-ДНК- полимеразы ("Хеликон"), 0, 1 мкг олигонуклеотида АСХ и проводили ПЦР по следующей схеме: 35 с 94°С, 35 с 50°С 90 с 72°С (30 циклов, амплификатор Mastercycler ("Eppendorf ', Германия)). 15 мкл раствора и 2,5 мкл буфера для нанесения 6xDNA loading dye ("Fermentas", 10 мМ Tris-HCl, рН 7,6, 0,03% бромфенолового голубого, 0,03% ксиленоцианола, 60% глицерина, 60 мМ ЭДТА) наносили на полиакриламидный 20% гель (акриламид: BIS-акриламид 1 : 19 10%, TBElx, TEMED 0, 1%, персульфат аммония 0, 1 %). В качестве электродного буфера использовали ТВЕ lx (0, 1М Tris, 0,1М Н3ВОз, 2 мМ Ыа2ЭДТА). Проводили электрофорез пока ксиленцианол не пройдет 10-20 см. Гель окрашивали раствором SYBR Green (ΙΟΟΟΟχ концентрат в ДМСО фирмы Sigma-Aldrich, разведенный в 10000 раз 0, 1М буфером Tris-HCl с рН 8,5). Окраску детектировали с помощью сканирования флуоресценции в геле.
В качестве контроля действия препарата именно на РНК-зависимую ДНК- полимеразу (обратную транскриптазу) теломеразы, а не на ДНК-полимеразу, которая
используется в данном анализе на втором шаге для амплификации сигнала 1 мкл раствора препарата приливали не к смеси для работы теломеразы, а вместе с олигонуклеотидом АСХ перед ПЦР на втором шаге. Такая контрольная реакция проводилась одновременно с тестом для каждого проверяемого соединения.
Для определения 1С50 (концентрация вещества при которой происходит ингибирование теломеразной активности на 50%) проводили реакции для различных концентраций препаратов. Значение 1С50 приведено в таблице 2.
Для более точного определения IC50 проводилось отдельное повторное измерение ингибирования веществами с использованием дополнительных разведений. Пример такого анализа для препарата с наибольшей ингибирующей активностью представлен на фиг. 5. Экспериментальное изображение анализировали с помощью программы Image Qvant, сравнивая интенсивность полос, соответствующих одинаковому удлинению теломер-подобного субстрата TS теломеразой, в дорожках Т и П для каждой концентрации препарата.
Таблица 2. Тестирование теломеразной активности методом TRAP для серии препаратов
* Для данных препаратов данное значение соответствует ингибирующему эффекту 15% для насыщенного раствора (1С50 неизмеримо в силу низкой растворимости исходных препаратов).
Claims
1. Координационные соединения производных имидазол-4-она, ингибирующие теломеразу, об ей ормулы
где заместитель А выбран из группы, включающей арильные заместители, конденсированные арильные заместители, циклопентил, циклогексил, алифатические заместители, алифатические заместители с двойной связью, алифатические заместители с тройной связью, метиламиновый заместитель CH3NH-, карбэтокси-группу C2HsO(0)C-, пятичленные гетероциклические заместители с одним атомом азота, пятичленные гетероциклические заместители с двумя атомами азота, шестичленные гетероциклические заместители, заместитель В отсутствует или является алифатическим заместителем, заместитель С представляет собой гетероарильный заместитель, присоединяемый к производному имидазол-4-она через атом углерода и выбран из группы, включающей 5-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1, 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 6-членные ненасыщенные моноциклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, 8-, 9- и 10-членные ненасыщенные бициклические гетероарильные заместители с 1 , 2, 3 гетероатомами в цикле, выбранными из группы, включающей N, О и S, X представляет собой хлорид О или нитрат N03.
2. Координационные соединения по п. 1, отличающиеся тем, что заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным арильным заместителем, при этом заместители в арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
3. Координационные соединения по п. 1 , отличающиеся тем, что заместитель А является незамещенным или монозамещенным, или дизамещенным конденсированным арильным заместителем, при этом заместители в конденсированной арильной группе выбраны из группы, включающей галогены и алкильные заместители.
4. Координационные соединения по п. 1, отличающиеся тем, что заместитель А выбран из группы, включающей фенил С6Н5-, З-хлор-4-фторфенил 3-С1-4-Р-С6Нз-, 4- карбэтоксифенил 4-С2Н50(0)ССбН4-, метил СН3-, аллил СН2=СНСН2-, 2-антрил, пропил С3Н7-.
5. Координационные соединения по п. 1, отличающиеся тем, что заместитель В выбран из группы, включающей 1,2-этандиил -(СН2)2-, 1,3-пропандиил -(СН2)з-, 1,4- бутандиил -(СН2)4-, 1 ,6-гександиил -(СН2)6-, 1,10-декандиил -(СН2)ю-.
6. Координационные соединения по п. 1, отличающиеся тем, что заместитель С выбран из группы, включающей 2-хинолил, 2-пиридил, 1-метил-2-имидазолил, 4-метил-5-имидазолил, 5-имидазолил, 2-имидазолил, 1,5-диметил-З-пиразолинил, 1 ,5-дифенил-З-пиразолинил.
7. Способ получения координационных соединений производных имидазол-4- она, ингибирующих теломеразу, по пунктам с 1 по 6, в котором выполняют следующие стадии: смешивают раствор производного имидазол-4-она в дихлорметане с метонолом, медленно приливают к смеси раствор соли меди в метаноле или ацетонитриле, реакционную смесь выдерживают до выпадения осадка координационного соединения производного имидазол-4-она.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что соль меди выбрана из группы, включающей хлорид меди и нитрат меди.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP11766224.7A EP2592086A4 (en) | 2010-04-09 | 2011-04-05 | TELOMERASE INHIBITORS AND PROCESS FOR THEIR PRODUCTION |
US13/647,642 US20130109861A1 (en) | 2010-04-09 | 2012-10-09 | Telomerase inhibitors and a method for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010113946 | 2010-04-09 | ||
RU2010113946/04A RU2468030C2 (ru) | 2010-04-09 | 2010-04-09 | Ингибиторы теломеразы и способ их получения |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
US13/647,642 Continuation US20130109861A1 (en) | 2010-04-09 | 2012-10-09 | Telomerase inhibitors and a method for the preparation thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2011126409A1 true WO2011126409A1 (ru) | 2011-10-13 |
Family
ID=44763147
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/RU2011/000223 WO2011126409A1 (ru) | 2010-04-09 | 2011-04-05 | Ингибиторы теломеразы и способ их получения |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130109861A1 (ru) |
EP (1) | EP2592086A4 (ru) |
RU (1) | RU2468030C2 (ru) |
WO (1) | WO2011126409A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2639819C2 (ru) * | 2014-12-30 | 2017-12-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Композиция, ингибирующая теломеразу |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1059870A1 (ru) * | 1981-09-04 | 1991-04-30 | Институт Неорганической Химии Со Ан Ссср | Комплексное соединение меди (П) с тиосемикарбазоновым производным стабильного нитроксильного радикала имидазолина, про вл ющие противоопухолевую активность |
US5141097A (en) | 1990-09-04 | 1992-08-25 | La Poste | Control device for a flow of objects in continuous file |
WO1999001560A1 (en) | 1997-07-01 | 1999-01-14 | Cambia Biosystems Llc | Vertebrate telomerase genes and proteins and uses thereof |
WO2007128968A1 (en) * | 2006-04-07 | 2007-11-15 | Imperial Innovations Limited | Telomerase inhibitors |
CN101270078A (zh) * | 2008-03-14 | 2008-09-24 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 抑制端粒酶活性的金属超分子化合物及用法和用途 |
-
2010
- 2010-04-09 RU RU2010113946/04A patent/RU2468030C2/ru active IP Right Revival
-
2011
- 2011-04-05 EP EP11766224.7A patent/EP2592086A4/en not_active Withdrawn
- 2011-04-05 WO PCT/RU2011/000223 patent/WO2011126409A1/ru active Application Filing
-
2012
- 2012-10-09 US US13/647,642 patent/US20130109861A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1059870A1 (ru) * | 1981-09-04 | 1991-04-30 | Институт Неорганической Химии Со Ан Ссср | Комплексное соединение меди (П) с тиосемикарбазоновым производным стабильного нитроксильного радикала имидазолина, про вл ющие противоопухолевую активность |
US5141097A (en) | 1990-09-04 | 1992-08-25 | La Poste | Control device for a flow of objects in continuous file |
WO1999001560A1 (en) | 1997-07-01 | 1999-01-14 | Cambia Biosystems Llc | Vertebrate telomerase genes and proteins and uses thereof |
WO2007128968A1 (en) * | 2006-04-07 | 2007-11-15 | Imperial Innovations Limited | Telomerase inhibitors |
CN101270078A (zh) * | 2008-03-14 | 2008-09-24 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 抑制端粒酶活性的金属超分子化合物及用法和用途 |
Non-Patent Citations (17)
Title |
---|
ASAI ET AL.: "A novel telomerase template antagonist (GRN163) as a potential anticancer agent", CANCER RESEARCH, vol. 63, 2003, pages 3931 - 3939 |
BAIRD DM.: "Mechanisms of telomeric instability", CYTOGENET GENOME RES., vol. 122, no. 3-4, 2009, pages 308 - 14 |
BLACKBURN: "Structure and Function of Telomeres", NATURE, vol. 350, 1991, pages 569 - 573, XP002004674, DOI: doi:10.1038/350569a0 |
EVANS, S.E. ET AL.: "End-stacking of copper cationic porphyrins on parallel-stranded guanine quardruplexes.", J. BIOL. INORG. CHEM., vol. 12, 2007, pages 1235 - 1249, XP019565673 * |
FLETCHER ET AL.: "Human Telomerase Inhibition by 7-Deaza 2'-deoxypurine Nucleoside Triphosphates", BIOCHEM, vol. 35, 1996, pages 15611 - 15617, XP002913086, DOI: doi:10.1021/bi961228v |
KIM ET AL.: "Specific Association of Human Telomerase Activity with Immortal Cells and Cancer", SCIENCE, vol. 266, 1994, pages 2011 - 2015, XP002138759, DOI: doi:10.1126/science.7605428 |
LINGNER ET AL.: "Reverse Transcriptase Motifs in the Catalytic Subunit of Telomerase", SCI., vol. 276, 1997, pages 561 - 567, XP002928260, DOI: doi:10.1126/science.276.5312.561 |
MATA ET AL.: "A Hexameric Phosphorothioate Oligonucleotide Telomerase Inhibitor Arrests Growth of Burkitt's Lymphoma Cells in Vitro and in Vivo", TOXICOL APPL. PHARMACOL., vol. 144, 1997, pages 189 - 197, XP002180133, DOI: doi:10.1006/taap.1997.8103 |
MONCHAUD ET AL.: "A hitchhiker's guide to G-quadruplex ligands", ORG. BIOMOL. CHEM., vol. 6, 2008, pages 627 |
MORIN: "Is Telomerase a Universal Cancer Target?", J. NATL. CANCER INST., vol. 87, 1995, pages 859 - 861 |
NORTON ET AL.: "Inhibition of Human Telomerase Activity by Peptide Nucleic Acids", NATURE BIOTECHNOL., vol. 14, 1996, pages 615 - 619, XP001023086, DOI: doi:10.1038/nbt0596-615 |
PARKINSON: "Do Telomerase Antagonists Represent a Novel Anti- Cancer Strategy?", BRIT. J. CANCER, vol. 73, 1996, pages 1 - 4 |
RAYMOND ET AL.: "Agents that target telomerase and telomeres", CURR OPINION BIOTECH., vol. 7, pages 583 - 591, XP002917801, DOI: doi:10.1016/S0958-1669(96)80068-1 |
S. E. EVANS; M. A. MENDEZ; K. B. TURNER; L. R. KEATING; R. T. GRIMES; S. MELCHOIR; V. A. SZALAI, J. BIOL. INORG. CHEM., vol. 12, no. 8, 2007, pages 1235 - 1249 |
See also references of EP2592086A4 |
SHAY JW; WRIGHT WE.: "Telomerase therapeutics for cancer: challenges and new directions", NAT REV DRUG DISCOV., vol. 5, no. 7, 2006, pages 577 - 84, XP002463668, DOI: doi:10.1038/nrd2081 |
STRAHL; BLACKBURN: "Effects of Reverse Transcriptase Inhibitors on Telomere Length and Telomerase Activity in Two Immortalized Human Cell Lines", MOL. CELL. BIOL., vol. 16, 1996, pages 53 - 65 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2592086A4 (en) | 2014-10-22 |
US20130109861A1 (en) | 2013-05-02 |
RU2010113946A (ru) | 2011-10-20 |
EP2592086A1 (en) | 2013-05-15 |
RU2468030C2 (ru) | 2012-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA3070621A1 (en) | Tyk2 inhibitors and uses thereof | |
Ma et al. | 9-N-Substituted berberine derivatives: stabilization of G-quadruplex DNA and down-regulation of oncogene c-myc | |
EP3564239B1 (en) | Aryl hydrocarbon receptor modulator | |
KR20160103986A (ko) | N-벤질 트립탄트린 유도체, 및 이의 제조 방법 및 적용 | |
BR102015027413A2 (pt) | métodos para tratar infecções pelo vírus filoviridae | |
CA2955082A1 (en) | Uses of salt-inducible kinase (sik) inhibitors | |
JP2022518505A (ja) | Tyk2阻害剤およびその使用 | |
JP2023512039A (ja) | 化合物及びその使用 | |
Martínez-Urbina et al. | 6-Substituted 2-(N-trifluoroacetylamino) imidazopyridines induce cell cycle arrest and apoptosis in SK-LU-1 human cancer cell line | |
Zhou et al. | Design, synthesis and pharmacological evaluation of 6, 7-disubstituted-4-phenoxyquinoline derivatives as potential antitumor agents | |
US6528517B1 (en) | Synthesis of quinobenzoxazine analogues with topoisomerase II and quadruplex interactions for use as antineoplastic agents | |
Perry et al. | Design, synthesis and evaluation of human telomerase inhibitors based upon a tetracyclic structural motif | |
Chen et al. | Disubstituted 1, 8-dipyrazolcarbazole derivatives as a new type of c-myc G-quadruplex binding ligands | |
Wang et al. | Discovery of nitropyridine derivatives as potent HIV-1 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors via a structure-based core refining approach | |
Alizadeh et al. | Synthesis of pyrimido [6, 1-a] isoquinolines via a one-pot, four-component reaction | |
Bobba et al. | Synthesis and biological evaluation of selective tubulin inhibitors as anti-trypanosomal agents | |
RU2468030C2 (ru) | Ингибиторы теломеразы и способ их получения | |
CN111732584B (zh) | 二芳基取代稠杂环类化合物及其制备方法和在制药中的用途 | |
Low et al. | Tri-substituted imidazole analogues of SB203580 as inducers for cardiomyogenesis of human embryonic stem cells | |
EP2716639A1 (en) | Inhibitors of viral replication, their process of preparation and their therapeutical uses | |
Rostom et al. | Synthesis and in vitro anti-HIV screening of certain 2-(benzoxazol-2-ylamino)-3H-4-oxopyrimidines | |
RU2639819C2 (ru) | Композиция, ингибирующая теломеразу | |
Tomassi et al. | Synthesis and anti-HIV1 biological activity of novel 5 ″-ATSAO compounds | |
Yang et al. | Synthesis, and in vitro enzymatic and antiviral evaluation of d4t polyphosphate derivatives as chain terminators | |
CN114380728B (zh) | 新型二芳基-β-内酰胺类有机硒化合物及其制备方法和在制药中的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 11766224 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2011766224 Country of ref document: EP |